BRPI0710538A2 - processo para a sìntese de um estereoisÈmero substancialmente puro, compostos, composição farmacêutica que compreende um composto, processo para a sìntese de um composto e uso do mesmo. - Google Patents

processo para a sìntese de um estereoisÈmero substancialmente puro, compostos, composição farmacêutica que compreende um composto, processo para a sìntese de um composto e uso do mesmo. Download PDF

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Abstract

<UM>PROCESSO PARA A SìNTESE DE UM ESTEREOISÈMERO SUBSTANTCIALMENTE PURO COMPOSTOS, COMPOSIçãO FARMACEUTICA QUE COMPREENDE UM COMPOSTO, PROCESSO PARA A SìNTESE DE UM COMPOSTO E USO DO MESMO<MV> Expõem-se novos derivados de ácido pira- glutâmico (l), em que R~ i~ é -OH, -ORa, em que Ra é alquila, cicloalquila, alquenila, cicloalquenila, arila, aralquila ou heterociclila; R~ 2~, R~ 3~ e R~ 4~ são independentemente H, um grupo de proteção de nitrogênio que hidrolisa sob condições ácidas ou ftalamida; X é um anion farmaceuticamente aceitável; e Y um grupo que contém N; seja na forma de seus estereoisómeros opticamente ativos isolados ou na forma das suas misturas, são compostos de utilidade para aumentar uma imuno-resposta em um paciente e/ou para tratar tumores, bactérias, infecções por fungos ou virus, ou enfermidades autoimunes.

Description

PROCESSO PARA A SÍNTESE DE UM ESTEREOISÔMERO SUBSTANCI- ALMENTE PURO, COMPOSTOS, COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA QUE COMPREENDE UM COMPOSTO, PROCESSO PARA A SÍNTESE DE UM COMPOSTO E USO DO MESMO
CAMPO DA INVENÇÃO
Refere-se a presente invenção a uma nova síntese dos derivados do ácido piroglutâmico, seus es- tereoisômeros isolados opticamente ativos e suas mistu- ras e seus usos, e a novos intermediários no sentido da síntese dos mesmos. A presente invenção também se re- fere ao uso terapêutico dos ditos derivados de ácido piroglutâmico, seus estereoisômeros opticamente ativos e as misturas dos mesmos.
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO
A patente européia EP 0768308 Bl expõe a mistura dos estereoisômeros dos derivados do ácido pi- roglutâmico que tem a seguinte fórmula geral
<formula>formula see original document page 2</formula>
em que R1, R2 e R3 podem ser hidrogenio ou -C(=O) Me e A pode ser Cl-, CH3COO- ou HO- para estimular a resposta imuno biológica. O processo exposto neste contexto pa- ra a síntese dos derivados do ácido piroglutâmico com- prende a reação de L-serina com um excesso molar de a- nidrido acético e piridina sob calor. Portanto, como exposto no documento referido, os diferentes estereoi- sômeros nunca foram isolados e os ensaios in vivo e in vitro expostos no mesmo são realizados com as misturas de todos os quatro possíveis estereoisômeros ópticamen- te ativos em conjunto. Não se encontra exposta qual- quer indicação referente a misturas puras ou enriqueci- das dos estereoisômeros individuais. Além disso, não é dada qualquer indicação referente ao isolamento dos di- ferentes estereoisômeros opticamente ativos provenien- tes da mistura exposta.
É conhecido daqueles versados na técnica que diferentes estereoisômeros opticamente ativos de um composto podem ter efeitos diferentes, ou mesmo opos- tos. Por exemplo, um composto pode ter efeitos tera- pêuticos enquanto que o seu enantiômero pode ser tóxi- co. Exemplos de situações deste tipo são bem conheci- dos daqueles versados na técnica. O dextrometorfano é um descongestionante, ao passo que o levometorfano é um potente narcótico.
<formula>formula see original document page 3</formula> Também é conhecido o comportamento dife- rente in vivo dos enantiômeros de Perexilina.
<formula>formula see original document page 4</formula>
Os dois são moduladores do ritmo cardíaco, no entanto, um dos enantiômeros é metabolisado mais lentamente e acumula-se no corpo, situação na qual cau- sou um número de óbitos durante os anos 80.
Provavelmente, a maior tragédia e exemplo bem conhecido é a Talidomida, que era administrada como uma mistura racêmica às mulheres gestantes a fim de tratar as dores durante a gravidez.
<formula>formula see original document page 4</formula>
Enquanto o enantiômero R-talidomida era efetivo, os efeitos teratogênicos do enantiômero S- talidomida foram descobertos mais tarde.
Portanto, na busca por novos compostos com efeitos terapêuticos benéficos, usualmente é necessário realizar ensaios com os estereoisômeros enantiomerica- mente puros em uma tentativa de selecionar os enantiô- meros mais ativos e/ou descartar aqueles possivelmente tóxicos. Assim, existe uma necessidade em proporcionar estereoisômeros isolados dos derivados do ácido piro- glutâmico.
Restimo da Invenção
A presente invenção proporciona um proces- so para obtenção dos derivados do ácido piroglutâmico, seus estereoisômeros opticamente puros e sus misturas. O processo envolve o uso de um estereoisômero optica- mente ativo de um precursor de um derivado de ácido pi- roglutâmico que pode ser facilmente separado e subse- qüentemente transformado com a finalidade de proporcio- nar o estereoisômero opticamente ativo desejado.
Em particular, os inventores consideraram uma síntese na qual os diferentes intermediários são isolados, se desejado, com a desejada estereoquimica. Estes produtos intermediários podem ser ainda transfor- mados com a finalidade de proporcionarem o desejado de- rivado do ácido piroglutâmico, ou na forma do estereoi- sômero substancialmente puro desejado ou na forma de uma mistura dos estereoisômeros. Os inventores parti- ram de um composto de fórmula IV enantioméricamente pu- ro, gerando então intermediários diastereoméricos e os produtos finais, que podem ser facilmente separados e purificados. Usando-se o composto de fórmula IV com a estereoquimica desejada, é possível obterem-se interme- diários na forma de estereoisômeros substancialmente puros ou na forma de uma mistura de estereoisômeros. O dito composto de fórmula IV pode ser sintetizado usan- do-se ácido piroglutâmico enantiomericamente puro.
Portanto, de acordo com um aspecto, a pre- sente invenção é referente a um processo para obter-se um estereoisômero substancialmente puro de um composto de fórmula I, ou suas misturas, que compreende fazer reagir um compost de fórmula IV com um compost de fór- mula V com a finalidade de obter-se um estereoisômero substancialmente puro de um composto de fórmula III ou suas misturas; transformar o dito estereoisômero subs- tancialmente puro de um composto de fórmula III ou suas misturas em um estereoisômero substancialmente puro de um composto de fórmula II ou suas misturas; e, final- mente, fazer reagir o dito estereoisômero substancial- mente puro de um composto de fórmula II ou suas mistu- ras com um composto de fórmula HX para proporcionar o derivado do ácido piroglutâmico desejado de fórmula I como um estereoisômero substancialmente puro ou suas misturas.
Outro aspecto da presente invenção refere- se a um estereoisômero substancialmente puro de um com- posto de fórmula I (isto é, Ia, Ib, Ic ou Id). Algumas composições que compreendem misturas de estereoisômeros substancialmente puros de um composto de fórmula Ia, Ib, Ic e/ou Id constituem um outro aspecto da presente invenção, tal como uma composição que compreende os es- tereoisômeros de fórmula Ia, Ib, Ic e/ou Id, com a con- dição de que a dita composição não contenha, simultane- amente, misturas de todos os quatro estereoisômeros dos seguintes compostos:
(i)cloridrato de cloreto de 1-(3-amino-5-carboxi- 2-oxopirrolidin-3-ilmetila)piridinio ou
(ii) cloridrato de cloreto de 1-(l-acetil-3- amino-5-carboxi-2-oxopirrolidin-3-ilmetila)piridinio.
Outro aspecto da presente invenção refere- se a um estereoisômero substancialmente puro de um com- posto de fórmula III ou suas misturas. O processo para obtenção do dito composto constitui um aspecto adicio- nal da presente invenção.
Outro aspecto da presente invenção refere- se a um processo para obter-se um estereoisômero subs- tancialmente puro de um composto de fórmula II, ou um estereoisômero substancialmente puro do dito copmposto de fórmula I. Um estereoisômero substancialmente puro de um composto de fórmula II (isto é, IIa, IIb, IIc ou IId) constitui um aspecto adicional da presente inven- ção. Algumas composições que compreendem misturas de estereoisômeros substancialmente puros de fórmula lia, IIb, IIc e/ou IId também constituem um aspecto adicio- nal da presente invenção.
Outro aspecto da presente invenção refere- se a determinadas composições farmacêuticas que compre- endem um composto selecionado a partir do grupo de com- postos de fórmula Ia, Ib, Ic, Id e suas misturas, e um excipiente farmaceuticamente aceitável.
Outro aspecto mais da presente invenção refere-se ao uso de um composto selecionado a partir do grupo de compostos de fórmula Ia, Ib, Ic, Id e algumas de suas misturas, na manufatura de uma composição para prevenção ou tratamento de tumores.
Descrição Breve das Figuras
A Figura 1 é um gráfico mostrando o efeito inibitório dos isômeros (1-4) ensaiados no crescimento da célula tumoral Renca comparados ao placebo (P.S.)[Exemplo 6], expressos como a média das superfí- cies de tumores.
A Figura 2 é um gráfico que mostra o efei- to inibitório dos isômeros (1-4) ensaiados no crecimen- to de células tumorais Renca comparados ao placebo (P.S.) [Exemplo 6], expresso como a média dos volumes de tumores.
A Figura 3 é um gráfico que mostra o efei- to inibitório dos isômeros (1-4) ensaiados no cresci- mento de células tumorais Renca comparados ao placebo (P.S.) [Exemplo 6], expresso como a média das superfí- cies de tumores.
A Figura 4 é um gráfico que mostra o efei- to inibitório dos isômeros (1-4) ensaiados no cresci- mento de células tumorais Renca comparados ao placebo (P.S.) [Exemplo 6], expresso como a média de volumes de tumores. DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
Definições
Com a finalidade de facilitar o entendi- mento da presente invenção, incluem-se neste contexto os significados de alguns termos e expresões como usa- das neste contexto da invenção.
"Alquila" refere-se a um radical de cadeia de hidrocarbonetos normal ou ramificada que contém áto- mos de carbono e hidrogênio, que não contém qualquer insaturação, possuindo de 1-12, preferencialmente, de um a oito átomos de carbono, e que são vinculados ao resto da molécula por uma única ligação, por exemplo, metila, etila, n-propila, i-propila, n-butila, t- butila, n-pentila, e assemelhados. Radicais de alquila podem ser opcionalmente substituídos por um ou mais substituintes, tais como halogênio, hidroxila, alcoxi- la, O-propila, 0-benzila, O-benzoato, carboxila, ciano, carbonila, acila, alcoxicarbonila, amino, imino, nitro, mercapto e tioalquila.
"Alquenila" refere-se a um radical de ca- deia de hidrocarboneto normal ou ramificada que consis- te de átomos de carbono e hidrogênio, que contém pelo menos uma insaturação, possuindo de 1-12, preferencial- mente, de um a oito átomos de carbono, e que está vin- culado ao resto da molécula por uma única ligação, por exemplo, metila, etila, n-propila, i-propila, n-butila, t-butila, n-pentila, e assemelhados. Os radicais de alquila podem ser opcionalmente substituídos por um ou mais substituintes, tais como, halogênio, hidroxila, alcoxila, O-propila, O-benzila, O-benzoato, carboxi, ciano, carbonila, acila, alkoxicarbonila, amino, imino, nitro, mercapto e tioalquila.
"Alcoxila" refere-se a um radical da fór- mula -O-alquila, onde alquila foi definido anteriormen- te, como por exemplo, metoxila, etoxila, propoxila, e outros.
"Arila" refere-se a um radical de hidro- carboneto aromático, tal como fenila, naftila ou antra- cila. O radical arila pode ser opcionalmente substitu- ído por um ou mais substituintes, tais como hidroxila, mercapto, halogênio, alquila, fenila, alcoxila, haloal- quila, nitro, ciano, dialquilamino, aminoalquila, acila e alcoxicarbonila, como definido neste contexto.
"Ariloxila" refere-se a um radical de fór- mula -O-arila, onde arila foi definido anteriormente. Alguns exemplos de compostos de ariloxila compreendem - O-fenila, -O-p-tolila, -0-m-tolila, -O-o-tolila ou -O- 20 naftila.
"Amino" refere-se a um radical da fórmula -NH2, -NHRa, -NRaRb, em que Ra e Rb são, independente- mente, selecionados a partir de alquila substituído ou não-subtituído, cicloalquila substituído ou não- substituído, alquenila substituído ou não-substituído, cicloalquenila substituído ou não-substituído, arila substituído ou não-substituído, arilaquila substituído ou não-substituído ou heterociclila substituído ou não- substituído; ou Ra e Rb formam juntos um heterociclo substituído ou não-substituído, cicloalquila substituí- do ou não-substituído ou cicloalquenila substituído ou não-substituído.
"Arialquila" refere-se a um grupo arila vinculado a um grupo alquila, tal como benzila ou fene- tila.
"Carboxiéster" refere-se a um grupo CO2Ra, em que Ra é selecionado a partir de um alquila substituído ou não-substituído, cicloalquila substituí- do ou não-substituído, alquenila substituído ou não- substituído, cicloalquenila substituído ou não- substituído, arila substituído ou não-substituído, ari- alquila substituído ou não-substituído ou heterociclila substituído ou não-substituído.
"Cicloalquila" refere-se a um anel carbo- cíclico saturado que é dotado de 3 a 8 átomos de carbo- no.
"Cicloalquenila" refere-se a um anel car- bocíclico que é dotado de 3 a 8 átomos de carbono e pe- lo menos uma insaturação.
"Heterociclila" refere-se a um anel está- vel de 3 a 15 elementos que consiste de átomos de car- bon e de um a cinco heteroátomos selecionados a partir de um grupo que consiste de nitrogênio, oxigênio, e en- xofre, preferencialmente um anel de 4 a 8 elementos com um ou mais heteroátomos, mais preferencialmente um anel de 5 ou 6 elementos com um ou mais heteroátomos. Para os propósitos desta invenção, o heterociclo pode ser um sistema de anel monociclico, biciclico ou triciclico, o qual pode incluir sistemas de anéis fundidos; e os áto- mos de nitrogênio, carbono ou enxofre no radical hete- rociclila podem ser opcionalmente oxidados; o átomo de nitrogênio pode ser opcionalmente quaternizado; e o ra- dical heterociclila pode ser parcialmente ou totalmente saturado ou aromático. Exemplos de tais heterociclos incluem, sendo que não se fica limitado aos mesmos, a- zepinas, benzimidazol, benzotiazol, furano, isotiazol, imidazol, indol, piperidina, piperazina, purina, quino- lina, tiadiazol, tetraidrofurano.
"Heteroarila" refere-se a um grupo hetero- ciclico em que pelo menos um dos anéis é um anel aromá- tico.
"Grupo de proteção" refere-se a um grupo que proteje um grupo funcional e pode ser removido sob condições controladas. Grupos de proteção e suas rea- tividades e condições relativas sob as quais eles se mantêm inertes, são conhecidos daqueles versados na técnica. Faz-se referência a Greene and Wuts "Protec- tive Grupos in Orgânico Síntese", John Wiley & Sons, Inc., New Youk, 1999.
As referências neste contexto aos grupos substituídos nos compostos da presente invenção refe- rem-se à metade especificada que pode ser substituída em uma ou mais posições disponíveis, por exemplo, halo- gênio tal como flúor, cloro, bromo e iodo; ciano; hi- droxila; nitro; azida; alcanoila tal como um grupo al- canoíla C1-C6 tal como acila e assemelhados; carboxami- da; grupos de alquila incluindo aqueles grupos que con- têm de 1 até cerca de 12 átomos de carbono ou de 1 a cerca de 6 átomos de carbono, e mais preferencialmente de 1-3 átomos de carbon; grupos de alquenila e alquini- la que são dotados de uma ou mais ligações insaturadas e de 2 até cerca de 12 átomos de carbono ou de 2 até cerca de 6 átomos de carbono; grupos de alcoxila dota- dos de uma ou mais ligações de oxigênio e de 1 a cerca de 12 átomos de carbono ou de 1 até cerca de β átomos de carbono; ariloxila, tais como fenoxila; grupos de tioalquila incluindo àquelas metades que são dotadas de uma ou mais ligações de tioéter e de 1 até cerca de 12 átomos de carbono ou de 1 até cerca de 6 átomos de car- bono; grupos alquissulfinila incluindo àquelas metades que possuem uma ou mais ligações de sulfinila e de 1 até cerca de 12 átomos de carbono ou de 1 até cerca de 6 átomos de carbono; grupos de alquilsulfonilas inclu- indo àquelas metades que são dotadas de uma ou mais li- gações de sulfonila e de 1 até cerca de 12 átomos de carbono ou de cerca de 1 até cerca de 6 átomos de car- bono; grupos de aminoalquilas, tais como grupos que são dotados de um ou mais átomos de N e de 1 ate cerca de 12 átomos de carbono ou de 1 até cerca de 6 átomos de carbono; arila carbociclico dotado de 6 ou mais carbo- nos, particularmente fenila ou naftila ou aralquila, tal como benzila. A não ser que de outro modo indica- do, um grupo opcionalmente substituído pode ter um substituinte em cada posição substituível do grupo, e cada substituição é independente da outra.
O termo "ânion farmaceuticamente aceitá- vel" faz referência a qualquer ânion que é capaz de formar um sal farmaceuticamente aceitável quando na presença de contra cátion apropriado. Exemplos de â- nions farmaceuticamente aceitáveis são Cl-, Br', I", F", SO42-, acetato, maleato, fumarato, citrato, oxalato, succinato, tartarato, malato, mandelato, metanosulfona- to, p-toluenossulfonato, e assemelhados. Outros exem- plos de ânions farmaceuticamente aceitáveis podem ser evidentes para aqueles versados na técnica.
O termo "sais farmaceuticamente aceitá- veis" refere-se a qualquer sal farmacêuticamente acei- tável, que, quando da administração ao receptor é capaz de proporcionar (diretamente ou indiretamente) um com- posto tal como descrito neste contexto. Entretanto, se- rá apreciado que os sais não-farmacêuticamente aceitá- veis também caem dentro do escopo desta invenção, desde que os mesmos possam ser usados na preparação de sais farmacêuticamente aceitáveis. A preparação dos sais po- de ser realizada por meio de métodos conhecidos no es- tado da técnica.
Por exemplo, os sais farmacêuticamente a- ceitáveis dos compostos proporcionados neste contexto podem ser sais de adição ácida, sais de adição básica ou sais metálicos, e eles podem ser sintetizados a par- tir do composto de origem que contém uma metade básica ou ácida por métodos químicos convencionais. Geralmen- te, estes sais são, por exemplo, preparados pela reação de ácido livre ou formas básicas destes compostos com a quantidade estequiométrica apropriada do ácido ou base em água ou em um solvente orgânico ou uma mistura dos dois. De uma maneira geral, são preferidos os meios não aquosos tais como éter, acetato de etila, etanol, isopropanol ou acetonitrila. Exemplos de sais de adi- ção ácida incluem de sais de adição de ácidos minerais, tais como, por exemplo, ácido clorídrico, ácido bromí- drico, ácido iodídrico, sulfato, nitrato, fosfato, e sais de adição de ácidos orgânicos tais como, por exem- plo, acetato, maleato, fumarato, citrato, oxalato, suc- cinato, tartrato, malato, mandelato, metanossulfonato e p-toluenossulfonato. Examplos de sais de adição alca- linos incluem sais inorgânicos tais como, por exemplo, amônio, e sais orgânicos alcalinos, tais como, por e- xemplo, etilenodiamino, etanolamino, N,N- dialquilenetanolamino, trietanolamino, glucamino e sais de aminoácidos básicos. Exemplos de sais metálicos in- cluem, por exemplo, sais de sódio, potássio, cálcio, magnésio, alumínio e lítio.
"Enriquecido enantiomericamente" aplicado a uma mistura de enantiômeros refere-se a uma mistura de enantiômeros de um composto no qual um deles está presente em maior quantidade do que o outro enantiôme- ro. Portanto, misturas enriquecidas enantiomericamente têm um excesso enantiomérico acima de 0% com relação a um destes enantiômeros, preferencialmente 20%, prefe- rencialmente acima de 40%, mais preferencialmente acima de 70%, mais preferencialmente acima de 80%, mais pre- ferencialmente acima de 90% e mais preferencialmente acima de 95%.
Um composto "enantiomericamente puro" pode ser considerado como uma mistura de dois enantiômeros que são dotados de um excesso enantiomérico superior a 95%, preferencialmente superior a 98%, com maior prefe- rência acima de 99%, com maior preferência acima de 99,5%.
Um composto "substancialmente puro" no presente pedido de patente faz referência a um composto que é dotado de pureza superios a 95%, preferencialmen- te superior a 98%, mais preferencialmente superior a 99%, com maior preferência superior a 99,5%.
Um "estereoisômero" no presente pedido de patente faz referência a compostos preparados dos mes- mos átomos ligados pela mesma seqüência de ligações, porém, possuindo diferentes estruturas tridimensionais as quais não são permutáveis.
"Nucleófilo que contém nitrogênio" refere- se a uma molécula que é dotada de pelo menos um nitro- gênio com pelo menos um par de elétrons livre, sendo o dito par de elétrons capaz de formar uma ligação com um eletrófilo (deficiente em elétrons), metade de outra molécula ou dentro da mesma molécula. Exemplos de nu- cleófilos que contêm nitrogênio são aminas primárias, secundárias ou terciárias, átomos de nitrogênio não- substituidos formando parte de um heterociclo, mesmo o átomo de nitrogênio de uma metade de amida pode, sob certas circunstâncias, agir como um nucleófilo.
EP 0768308 Bl produz misturas de estereoisômeros de de- rivados de ácido piroglutâmico
Todas as tentativas para separar as mistu- ras dos estereoisômeros expostas no EP 0768308 BI, den- tro dos compostos substancialmente puros destes, falha- ram. Seguindo-se a seção experimental dos inventores, obtiveram-se 5% do composo identificado como BLAS- 236(Cl) cloreto de cloridrato de (1-(3-amino-5-carboxi- 2-oxopirrolidin-3-ilmetila)piridinio na patente euro- péia citada anteriormente
<formula>formula see original document page 17</formula>
como uma mistura de todos os quatro estereoisômeros possíveis.
Da mesma forma, seu precursor imediato BLAS-320(Ac) (acetato de 1-(1-acetil-3-acetilamino-5- carboxi-2-oxopirrolidin-3-ilmetil)piridinio) <formula>formula see original document page 18</formula>
foi sintetizado utilizando-se diferentes procedimentos. O composto da fórmula BLAS-320(Ac) foi obtido como uma mistura de estereoisômeros impossiveil de purificar, principalmente em decorrência de problemas de solubili- dade (composto BLAS-320(Ac) somente foi solúvel em água e em metanol).
Além disso, tentou-se a substituição de acetate de contraion por outros anions no composto da fórmula BLAS-320(Ac), mas foi mal sucedida. Adicional- mente, tentou-se a transformação (ou a síntese direta) e purificação adicional do composto da fórmula BLAS- 320 (Ac) em seus derivados de éster. As misturas brutas pretas obtidas foram impossíveis de ser purificadas em todos os casos.
Em vista dos fatos expostos anteriormente, percebeu-se que a exposição da EP 0768308 Bl foi insuf- ficiente para obter-se os estereoisômeros substancial- mente puros desejados dos derivados de ácido piroglutâ- mico referidos neste contexto. Portanto, desenvolveu- se uma abordagem totalmente diferente.
Síntese dos estereoisômeros substancialmente puros de um composto da fórmula I e suas misturas De acordo com um aspecto, a invenção refe- re-se a um processo, doravante referido como o processo da invenção, para a síntese de um estereoisômero subs- tancialmente puro de um composto da fórmula I
<formula>formula see original document page 19</formula>
R1 é selecionado a partir de -0H, -ORa, em que Ra é selecionado a partir de alquila substituído ou não-substituído, cicloalquila substituído ou não- substituído, alquenila substituído ou não- substituído, cicloalquenila substituído ou não- substituído, arila substituído ou não-substituído, aralquila substituído ou não-substituído ou hete- rociclila substituído ou não-substituído; R2, R3 e R4 são selecionados independentemente a partir de hidrogênio, um grupo de proteção de ni- trogênio que se hidrolisa sob condições ácidas ou ftalamida;
X é um anion farmaceuticamente aceitável; e
Y é um resíduo orgânico selecionado a partir de
(i) um grupo que contém N- da fórmula VIa
(1)
em que <formula>formula see original document page 20</formula>
em que
a linha tracejada em conjunto com o áto- mo de nitrogênio formam um heteroaril substituído ou não-substituído, e X é como definido anteriormente; ou
(ii) um grupo que contém N de fórmula VIb
<formula>formula see original document page 20</formula>
em que
X é como definido anteriormente; e Ra e Rb são selecionados independentemente a partir de alquila substituído ou não- substituído, cicloalquila substituído ou não- substituído, alquenila substituído ou não- substituído, cicloalquenila substituído ou não-substituído, arila substituído ou não- substituído, aralquila substituído ou não- substituído, ou heterocicloalquila substituí- do ou não-substituído; ou
Ra e Rb em conjunto com o átomo de nitrogênio ao qual eles são vinculados formam um hetero- ciclila substituído ou não-substituído;
<formula>formula see original document page 20</formula> ou suas misturas;
que compreende
a) fazer reagir um composto enantiomericamente puro da fórmula IV
<formula>formula see original document page 21</formula>
em que R1 e R2 são aqueles previamente defi- nidos ;
ou suas misturas;
com um composto da fórmula V
<formula>formula see original document page 21</formula>
em que R4 é como definido anteriormente; para proporcionar um estereoisômero substancial- mente puro de um composto da fórmula III
<formula>formula see original document page 21</formula>
em que R1, R2 e R4 são aqueles definidos ante- riormente;
ou as suas misturas;
b) transformar o dito estereoisômero substancial- mente puro de um composto da fórmula III, ou suas mis- turas, em um estereoisômero substancialmente puro de um composto da fórmula II
em que
R1, R2 e R4 são aqueles definidos anteriormen- te;
Rs é selecionado a partir de uma carga nega- tiva ou R3, em que R3 é como definido anteri- ormente; e
Y é um resíduo orgânico que contém N- sele- cionado a partir de
(i) quando R5 é uma carga negativa, Y é um resíduo orgânico que contém N da fór- mula VIIa
<formula>formula see original document page 22</formula>
em que
a linha tracejada em conjunto com o áto- mo de nitrogênio formam um heteroarila substituído ou não-substituído; ou (ii) quando R5 é R3, Y é um resíduo orgâ- nico que contém N- selecionado a partir de
(ii.a) um grupo que contém N- da fórmula VIIb
<formula>formula see original document page 23</formula>
em que Ra e Rb são tais como definidos anteriormente; ou
(ii.b) um resíduo orgânico que contém N da fórmula VIIc
<formula>formula see original document page 23</formula>
em que
a linha pontilhada em conjunto com o á- tomo de nitrogênio formam um heteroarila substituído ou não-substituído; e
Z é um ânion farmaceuticamente aceitá- vel ;
ou as suas misturas; e
c)contactar o dito estereoisômero substanci- almente puro de um composto da fórmula II, ou as suas misturas, com um meio ácido que compreende um ácido de fórmula HX, em que X é definido como anteriormente, pa- ra proporcionar o dito estereoisômero substancialmente puro de um composto de fórmula I, ou as suas misturas.
A função dos grupos de proteção de nitro- gênio que hidrolisam sob condições ácidas (R2, R3 e/ou R4) é proteger a funcionalidade de nitrogênio functio até a etapa c) (transformando os compostos da fórmula II em compostos da fórmula I por reação do dito compos- to da fórmula II com um composto da fórmula HX). Qual- quer grupo de proteção de nitrogênio que pode proteger o átomo de nitrogênio até a etapa c) é adequado para a presente invenção. Grupos de proteção de nitrogênio preferidos que são hidrolisados sob condições ácidas são aqueles que podem ser hidolisados durante a etapa c) ao mesmo tempo em que o sal ou di-sal é formado para proporcionar um composto da fórmula I. Desta maneira, durante a etapa c) os átomos de nitrogênio da molécula são desprotegidos e o sal ou di-sal é formado em uma única etapa sintética. Entretanto, de acordo com a presente invenção, não é essencial que o sal ou di-sal sejam formados ao mesmo tempo em que os átomos de ni- trogênio são desprotegidos. Conseqüentemente, de acor- do com uma concretização da invenção, a formação de sal ou di-sal e desproteção dos átomos de nitrogênio podem requerer mais do que uma etapa.
De acordo com uma concretização preferida, os grupos de proteção de nitrogênio que se hidrolisam sob condições ácidas são selecionados a partir de car- bamatos da fórmula -(0=) C-O-Ra, em que Ra tem o mesmo significado que anteriormente, preferentemente em que Ra é benzila, -C(CH3)3 ou -CH2CH3; ou um sulfonato da fórmula -(0=)S(=0)-Ra em que Ra tem o mesmo significado que anteriormente, preferentemente em que Ra é -CH3 ou tosilato.
Outros grupos de proteção que são hidroli- sados sob condições ácidas são conhecidos daqueles ver- sados na técnica; vide publicações de referência tais como Greene and Wuts "Protective Grupos in Organic Sín- tese", John Wiley & Sons, Inc., New York, 1999.
Quando pelo menos um de R2, R3 e R4 é fta- lamida, é necessário realizar uma etapa adicional antes da formação de sal ou di-sal (antes da etapa c) que compreende uma redução ou reação com hidrazina (para maiores detalhes de como remover um grupo de ftalamida, vide Greene and Wuts "Protective Grupos in Orgânico Síntese", John Wiley & Sons, Inc., New York, 1999).
0 composto de partida de fórmula IV do processo da invenção pode estar na forma de um composto enantiomericamente puro (isto é, R ou S) ou na forma de uma mistura de enantiômeros (R e S) , opcionalmente em excesso em um deles. Tal como utilizado neste contex- to, o termo "mistura de enantiômeros" inclui qualquer mistura de dois enantiômeros, seja na fração equimolar ou não, e, deste modo, inclui não somente misturas ra- cêmicas dos dois enantiômeros dito, mas também misturas rnriquecidas em qualquer dos ditos enantiômeros.
Quando o composto de fórmula IV está na forma de um composto enatiomericamente puro, a reação mencionada anteriormente pode resultar em dois produtos (estereoisômeros), um correspondente ao ataque proveni- ente da face β e outro correspondente ao ataque na face α. Neste caso, a reação mostra baixa estéreo-seleti- vidade e uma mistura de dois possíveis compostos (este- reoisômeros) é obtida a partir de cada um dos enantiô- meros de composto de fórmula IV.
Assim, de acordo com uma concretização particular, o composto de fórmula IV está na forma de um composto enantiomericamente puro. Se o isômero S do composto de fórmula IV é utilizado como material de partida, a reação proporciona, em geral, uma mistura de um composto da fórmula IIIa
<formula>formula see original document page 26</formula>
em que R1, R2 e R4 são aqueles definidos anteriormente; e um composto da fórmula IIIb
em que R1, R2 e R4 são aqueles definidos anteriormente.
Então, quando o isômero do composto de fórmula IV utilizado é o estereoisômero S, o composto resultante de fórmula III obtido estará, geralmente, na forma de uma mistura destes estereoisômeros das fórmu- las IIIa e IIIb. Se desejado, o dito composto de fór- mula III, na forma da dita mistura de estereoisômeros, pode ser isolado por métodos convencionais (por exem- plo, silica, recristalização, e outros) a fim de obter- se uma mistura de IIIa e IIIb, seja em uma proporção equimolar ou não. Alternativamente, se desejado, a di- ta mistura dos estereoisômeros IIIa e IIIb pode ser tratada por métodos convencionais (por exemplo, recris- talização, cromatografia, e assemelhados) a fim de se- parar cada estereoisômero e de obterem-se os estereoi- sômeros de fórmula IIIa e IIIb como compostos enantio- mericamente puros.
Da mesma forma, se o isômero R do composto de fórmula IV for utilizado como material de partida, a reação resulta, de uma maneira geral, em uma mistura de um composto de fórmula IIIc,
<formula>formula see original document page 27</formula>
em que R1, R2 e R4 são aqueles definidos ante- riormente;
e um composto de fórmula IIId <formula>formula see original document page 28</formula>
em que R1, R2 e R4 são aqueles definidos anteriormente.
Desta forma, quando o isômero do composto de fórmula IV utilizado é o estereoisômero R, o compos- to resultante de fórmula III obtido estará, geralmente, na forma de uma mistura destes estereoisômeros das fór- mulas IIIc e IIId. Tal como mencionado anteriormente, se desejado, o dito composto da fórmula III, na forma da dita mistura de estereoisômeros, pode ser isolado por meio de métodos convencionais a fim de obter-se uma mistura de IIIc e IIId, seja na proporção equimolar ou não, ou alternativamente, a dita mistura dos estereoi- sômeros pode ser tratada por métodos convencionais a fim de separar cada estereoisômero e de obter os este- reoisômeros da fórmula IIIc e IIId como compostos enan- tiomericamente puros.
Muito embora isto possa parecer uma des- vantagem, os inventores constataram que os compostos da mistura eventualmente obtida a partir da reação do com- posto de fórmula IV com o composto de fórmula V podem ser facilmente separados nos correspondentes estereoi- sômeros substancialmente puros de um composto de fórmu- la III, isto é, IIIa, IIIbf IIIc ou IIId. Isto permite a síntese dos estereoisômeros substancialmente puros de um composto da fórmula I, o que constitui um aspecto da presente invenção.
De acordo com outra concretização particu- lar, o composto de fórmula IV está na forma de uma mis- tura dos dois enantiômeros possíveis (R ou S), opcio- nalmente, enantiomérico enriquecida com relação a um dos ditos enantiômeros. Nesses casos, o composto re- sultante de fórmula III é selecionado a partir de uma mistura de IIIa, IIIb, IIIc e IIId (em razões equimola- res ou não) ; uma mistura de IIIa e IIIc em uma razão equimolar ou não; ou uma mistura de IIIb e IIId em uma razão equimolar ou não.
O composto da fórmula IV pode ser obtido por processos conhecidos na técnica. Por exemplo, uma das abordagens sintéticas usadas pelos inventores en- contra-se descrita no Esquema 1. O ácido glutâmico 1 (neste caso, ácido D-glutâmico) pode ser transformado em um composto da fórmula 2, tal como descrito em Sil- verman, R.B.; Levy, M.A., J. Oug. Chem. 1980, 45, 815.
A segunda etapa consiste na proteção do nitrogênio amí- dico, utilizando-se um método conhecido (Flyn, D.L., et al., J. Oug. Chem., 1983, 48, 2424) para obter-se um composto da fórmula 3. Então, as duas etapas seguintes são: primeira, a substituição da posição 3- do 2- pirrolidona com um grupo de dimetilaminometila, o que proporciona 4 [que é realmente uma mistura de dois di- astereômeros, porque o centro quiral em 3- não é con- trolado no processo] e a quaternização com Mel, e eli- minação proporciona o composto da fórmula 5 (composto da fórmula IV em que R1 é -OEt e R2 é BOC) que já foi descrito em Panday, S. K.; Grif f art-Brunel, D.; Lan- glois, N.; Tetrahedron Lett., 1994, 35, 6673. Neste caso, o composto da fórmula IV obtido tem a configura- ção R. Quando se desejou a configuração S, utilizou-se ácido L-glutâmico como material de partida (como uma vista geral, 5 tem a mesma configuração do ácido glutâ- mico de partida).
Esquema 1
<formula>formula see original document page 30</formula>
Uma primeira variante do método mencionado anteriormente para a síntese do composto 5 compreende a transformação do ácido glutâmico 1 (neste caso, ácido D-glutâmico) no piroácido glutâmico da fórmula 1' tal como descrito em Lennox, J. R.; Turner, S. C.; Rapo- pout, H. J. Oug. Chem. 2001, 66, 7078-7083. 0 dito pi- roácido glutâmico da fórmula 1' é então transformado no composto da fórmula 2 descrita anteriormente na presen- ce de etanol e de SOCl2 (vide o esquema 2). Esquema 2
<formula>formula see original document page 31</formula>
Uma segunda variante do método mencionado anteriormente para a síntese do composto 5 compreende a transformação do composto da fórmula 2 no composto da fórmula 3 utilizando-se DMAP como uma base e acetoni- trila (MeCN) como solvent.
Uma terceira variante do método mencionado anteriormente para a síntese do composto 5 compreende a transformação do composto da fórmula 3 em um composto da fórmula 4' ela reação com tBuOCH(NMe2) 2 (reagente de Bredereck). 0 dito composto da fórmula 4' é transfor- mado no composto da fórmula 5 em uma seqüência de duas etapas. Primeira, por reação do composto da fórmula 4' com HCl diluído. Então, por reação do composto resul- tante com HCHO aquoso (37%) na presença de uma base i- norgânica, tal como se encontra descrito na WO 2004039314 (vide esquema 3).
Esquema 3
<formula>formula see original document page 31</formula>
A fim de se conseguir a formação do anel de aziridina, existe um número de reagents conhecidos daqueles versados na técnica. Entretanto, a escolha do reagente para a síntese de espiro-aziridinas a partir de ligações duplas de carbono-carbono não é fácil. Por exemplo, o uso de cloramina-T na presença de HBr/H2C>2 (L.J. Suman; B.S. Sharma; S. Bir. Tetrahedron Letters 2004, 45, 8731) não produziu a aziridina desejada, mas derivados clorados da seguinte fórmula geral
<formula>formula see original document page 32</formula>
Depois da realizacao de um numero de expe- riências, constatou-se que o reagente mais adequado pa- ra a reação foi a benziliodinana da fórmula V. De a- cordo com uma concretização particular, R4 é seleciona- do a partir de - (0=) C-O-C (CH3) 3, - (0=) C-O-CH2CH3, (0=)S(=0)-tosyl ou ftalamida. Em uma concretização preferida, o composto da fórmula V é N- tosiliminobenziliodinana (Baron E.; 0'Brien P.; Towers T. D. Tetrahedron Lett., 2002, 43, 723), que pode ser sintetizado seguindo-se o método descrito em Gillepia, K., Synthetic Comunn. 2001, 123.
A reação do composto enantiomericamente puro da fórmula IV, ou as suas misturas, com o composto da fórmula V para proporcionar um estereoisômero subs- tancialmente puro de um composto da fórmula III, ou su- as misturas, pode ser realiazada, se desejado, na pre- sence de um catalisador, preferentemente um catalisador baseado em cobre, com maior preferência selecionado a a partir de Cu(ft)2 ou de Cu(acac)2, em que "ft" é ftalo- cianina e "acac" é acetoacetato. Para maiores detalhes referents a catalisadores e condições vide Baron, E.; 0'Brien, P.; Towers, T. D. Tetrahedron Lett., 2002, 43, 723 e S. L. Jain, B. Sain, Journal de molecular cataly- sis A: Chemical 2003, 195, 283. Esta reação é realiza- da, tipicamente, em um solvente orgânico adequado sob uma temperatura apropriada, preferentemente uma tempe- ratura compreendida entre 0 e 100°C. Muito embora pos- sa ser usado praticamente qualquer solvente orgânico adequado na dita reação (por exemplo, acetonitrila, di- metil formamida, e assemelhados), em uma concretização particular, quando o composto da fórmula IV é 1-terc- butil éster 2-etil éster de ácido 4-metileno-5- oxopirrolidina-1,2-dicarboxíIico e o composto da fórmu- la V é N-tosiliminobenziliodinana (PhI=NTs) [Exemplos 3.1 e 4.1], o solvente orgânico é acetonitrila e a rea- ção é realizada sob uma temperatura compreendida entre 0°C e a temperatura ambiente (de cerca de 18°C-24°C).
Além disso, os estereoisômeros substanci- almente puros do composto da fórmula III, ou as suas misturas, podem ser usados para obtenção de estereoisô- meros substancialmente puros dos derivados de piroácido glutâmico da fórmula I, ou as suas misturas, via os es- tereoisômeros substancialmente puros de um composto da fórmula II ou suas misturas.
Assim, um estereoisômero substancialmente puro de um composto da fórmula III ou suas misturas, é ainda transformado em um estereoisômero substancialmen- te puro de um composto da fórmula II ou suas misturas, por meio de uma estratégia que depende da natureza de Rs e Y, desta forma:
(A) a fim de preparar um estereoisômero substancialmente puro de um composto da fórmula II ou suas misturas em que R5 é uma carga negativa e Y é um resíduo orgânico que contém N- da fórmula Vila, o este- reoisômero substancialmente puro de um composto da fór- mula III ou auas misturas, é levado a reagir com um nu- cleófilo que contém nitrogênio da fórmula VIIIa
<formula>formula see original document page 34</formula>
em que
a linha tracejada em conjunto com o áto- mo de nitrogênio formam um heteroarila substituído ou não-substituído, ou (B) a fim de preparar a estereoisômero substanci- almente puro de um composto da fórmula II ou suas mis- turas em que R5 é R3 e Y é um resíduo orgânico que con- tém N- da fórmula VIIb, o estereoisômero substancial- mente puro de um composto da fórmula III ou suas mistu- ras, faz-se reagir com um nucleófilo que contém nitro- gênio da da fórmula VIIIb
<formula>formula see original document page 34</formula> VIIIb
em que Ra e Rb são aqueles anteriormente de- finidos;
e, se desejado, a mistura resultante é esfriado rapida- mente com um composto da fórmula X
<formula>formula see original document page 35</formula>
em que R3 e Z são aqueles definidos anterior- mente; ou
(C) a fim de preparar um estereoisômero substancialmente puro de um composto da fórmula II ou suas misturas em que R5 é R3 e Y é um resíduo orgânico que contém N- da fórmula VIIcy o estereoisômero subs- tancialmente puro de um composto da fórmula III ou suas misturas, faz-se reagir com um nucleófilo que contém N- da fórmula VIIIa, e a mistura resultante é resfriada rapidamente com o dito composto da fórmula X.
Sucintamente, como mencionado anteriormen- te, a síntese de um estereoisômero substancialmente pu- ro de um composto da fórmula II, ou suas misturas, com- preende fazer reagir um estereoisômero substancialmente puro de um composto da fórmula III, ou uma mistura dos mesmos, com
um composto da fórmula VIIIa, ou alternativa- mente com,
um composto da fórmula VIIIb, e, se desejado, com um composto da fórmula X, ou alternativa- mente com,
um composto da fórmula VIIIa e com um composto da fórmula X.
O composto de partida da fórmula III pode estar na forma de um estereoisômero substancialmente puro [isto é, (3R,5R); (3S,5S); (3R,5S); ou (3S,5R)] ou na forma de uma mistura dos ditos estereoisômeros subs- tancialmente puros, por exemplo, como uma mistura de diastereômeros, e outros, na mesma ou em proporções di- ferentes. Tal como usado neste contexto, o termo "mis- tura de estereoisômeros" inclui qualquer mistura de dois ou mais estereoisômeros de um composto, seja em uma relação equimolar ou não. Em geral, a estereoquí- mica do material de partida (composto da fórmula III) é mantida no produto resultante (composto da fórmula II).
Desta forma, de acordo com uma concretiza- ção particular, o composto da fórmula III está na forma de um estereoisômero essencialmente puro do mesmo [isto é, (3R,5R); (3S,5S); (3R,5S); ou (3S,5R)], caso este em que é obtido um composto da fórmula II essencialmente puro que mantém a estereoquimica do composto de partida da fórmula III.
De acordo com outra concretização particu- lar, o composto da fórmula III está na forma de uma mistura dos ditos estereoisômeros (isto é, uma mistura de dois ou mais estereoisômeros selecionados a partir dos compostos da fórmula IIIa, IIIb, IIIc and IIId), em uma relação equimolar ou não. Neste caso, é obtida uma mistura de estereoisômeros do composto da fórmula II que mantém a estereoquimica dos estereoisômeros de par- tida da fórmula III. A mistura de estereoisômeros da fórmula II pode ser separada em seus correspondentes estereoisômeros substancialmente puros seguindo-se mé- todos convencionais, tais como cromatografia de silica gel ou recristalização.
reagir um estereoisômero substancialmente puro de um composto da fórmula III, ou uma mistura do mesmo, com um composto da fórmula VIIIa para proporcionar um este- reoisômero substancialmente puro de um composto da fór- mula II, ou suas misturas, em gue R5 é uma carga nega- tiva e Y é um resíduo orgânico gue contém N- da fórmula VIIa [Opção (A)].
Nesse caso, de acordo com uma concretiza- çao, o nucleófilo gue contém nitrogênio VIIIa é uma pi- ridina da fórmula IX
De acordo com uma concretização, faz-se
<formula>formula see original document page 37</formula>
em que,
n é O, 1, 2, 3, 4 ou 5; e
R6 é selecionado a partir de alquila substituído ou não-substituído, cicloalguila substituído ou não-substituído, alquenila substituído ou não- substituído, aríla substituído ou não-substituído, heterociclila substituído ou não-substituído, al- coxila substituído ou não-substituído, ariloxila substituído ou não-substituído, halogênio, carbo- xiéster substituído ou não-substituído, amino substituído ou não-substituído e/ou as formas de piridinato piridina de um ou mais anéis fundidos substituídos ou não-substituídos.
Outrossim, de acordo com uma concretização particular, a dita piridina da fórmula IX é selecionada a partir de piridina e um ou mais dos seguintes compostos :
De acordo com outra concretização particu- lar, o nucleófilo que contém nitrogênio VIIIa é um composto da fórmula
<formula>formula see original document page 38</formula> De uma maneira geral, a reação do estere- oisômero substancialmente puro de um composto da fórmu- la III, ou uma mistura do mesmo, com o composto da fór- mula VIIIa é realizada sob aquecimento. Com efeito, aquele versado na técnica sabe que reações tais como a transformação do composto da fórmula III em um composto da fórmula II, ou seja, a abertura de anel do anel de aziridina na presença de um nucleófilo, usualmente re- quer calor. Se desejado poder'~ao utilizar-se micoon- das. Em uma concretização particular, aquecimento é conseguido por irradiação da mistura de reação sob mi- croondas que facilmente permitem alcançar a temperatura desejada e manter a mesma durante o período de tempo desejado. De acordo com uma concretização, a reação é executada na presença de um catalisador, tal como mont- morilonita, um catalisador ácido poroso (por exemplo, os Exemplos 3.2.1, 3.2.2, 4.2.1 e 4.2.2).
Em outra concretização, faz-se reagir um estereoisômero substancialmente puro de um composto da fórmula III, ou uma mistura dos mesmos, com um composto da fórmula VIIIb, e, opcionalmente com um composto da fórmula X, para proporcionar um estereoisômero substan- cialmente puro de um composto da fórmula II, ou suas misturas, em que R5 é R3 e Y é um resíduo orgânico que contém N da fórmula VIIb [Opção (B)].
Nesse caso, em uma concretização, o nucle- ófilo que contém nitrogênio VIIIb é um composto sele- cionado a partir dos seguintes compostos:
<formula>formula see original document page 40</formula>
Sob a Opção (B) existem essencialmente dois tipos possíveis de condições dependentes das espé- cies reativas que atacam o anel de aziridina. Por um lado, é possível gerar o ânion de um composto da fórmu- la VIIIb mediante contacto do dito composto da fórmula VIIIb com uma base forte (isto é, Butil lítio, e ou- tros). Uma vez que o ânion do composto da fórmula VII- Ib é formado, o composto da fórmula III pode ser adi- cionado e o anel de aziridina é atacado pelo ânion do composto da fórmula VIIIb. A reação pode continuar a- inda pela adição do composto da fórmula X, por exemplo, um composto de alquilação, tal como iodeto de metila (R3= alquila), ee assemelhados. As condições necessá- rias para formar o ânion de um composto da fórmula VII- Ib são conhecidas daqueles versados na técnica. Algu- mas das ditas espécies são, inclusive, disponíveis co- mercialmente. Alternativamente, é possível esfriar ra- pidamente a reação antes da adição de um composto da fórmula X, caso este em que R3 será hidrogênio no com- posto resultante da fórmula II. Por outro lado, é pos- sível usar diretamente o composto da fórmula VIIIb.
Estas condições usualmente requerem calor ou microondas e proporcionam um composto da fórmula II em que R3 é hidrogênio.
Ainda em outra concretização, faz-se rea- gir um estereoisômero substancialmente puro de um com- posto da fórmula III, ou uma mistura do mesmo, com um composto da fórmula VIIIa e com um composto da fórmula X, para proporcionar um estereoisômero substancialmente puro de um composto da fórmula II, ou suas misturas, em que R5 é R3 e Y é um resíduo orgânico da fórmula VIIc que contém N [Opção (C)]. Os compostos da fórmula VII- Ia e X foram definidos anteriormente.
A pessoa versada na técnica sabe que rea- ções tais como a transformação do composto da fórmula III em um composto da fórmula II, isto é, a abertura de anel do anel de aziridina na presença de um nucleófilo, usualmente requerem calor. Se desejado, podem ser usa- das micro-ondas.
O composto da fórmula II tem dois centros quirais; portanto, ele pode estar na forma de qualquer um dos estereoisômeros essencialmente puros ou suas misturas. Em uma concretização particular, o composto da fórmula II é selecionado a partir do grupo que con- siste de:
a) um composto substancialmente puro da fórmul IIa,
<formula>formula see original document page 42</formula>
em que R1, R2, R4, R5 e Y são aqueles ante riormente definidos;
b) um composto substancialmente puro da fórmul IIb,
<formula>formula see original document page 42</formula>
em que R1, R2, R4, R5 e Y são aqueles ante riormente definidos;
c) um composto substancialmente puro da fórmula IIc,
<formula>formula see original document page 42</formula>
em que R1, R2, R4, R5 e Y are aqueles ante riormente definidos; d) um composto substancialmente puro da fórmula
<formula>formula see original document page 43</formula>
em que R1, R2, R4, R5 e Y são aqueles ante- riormente definidos; e
e) qualquer mistura dos compostos mencio- nados anteriormente da fórmula lia, IIb, IIc e/ou IId (em uma relação equimolar ou não).
Compostos preferidos da fórmula II, inclu- indo seus estereoisômeros substancialmente puros, são mencionados adiante sob o titulo correspondente.
Os compostos resultantes da fórmula II po- dem ser isolados ou usados diretamente para a etapa se- guinte sem qualquer outra purificação.
Quando se obtém uma mistura de estereoisô- meros do composto da fórmula II, é possível isolar o estereoisômero desejado por meio de métodos convencio- nais conhecidos da pessoa versada na técnica.
Desta forma, de acordo com a invenção, um estereoisômero substancialmente puro de um composto da fórmula II, ou suas misturas, precursor imediato do es- tereoisômero substancialmente puro do derivado de piro- ácido glutâmico da fórmula I, ou suas misturas, com a estereoquimica desejada, pode ser obtido seja mediante purificação da mistura resultante dos estereoisômeros do composto da fórmula III e então fazendo-se reagir os estereoisômeros isolados com os correspondentes reagen- tes, ou, alternativamente, por purificação da mistura resultante da reação entre o dito composto da fórmula III e o nucleófilo da fórmula VIIIa ou VIIIb e X (se for necessário).
Assim, de acordo com a etapa c) do proces- so da invenção, a estereoisômero substancialmente puro de um composto da fórmula II, ou suas misturas, é con- vertido para o estereoisômero substancialmente puro do derivado de piroácido glutâmico derivado da fórmula I, ou suas misturas, por meio do contacto do dito estere- oisômero substancialmente puro de um composto da fórmu- Ia II, ou suas misturas, com um meio ácido que compre- ende um ácido da HX, em que X é tal como ficou definido anteriormente.
A pessoa versada na técnica está ciente dos ácidos orgânicos ou inorgânicos da fórmula HX que são adequados para efetuar a reação com o estereoisôme- ro substancialmente puro de um composto da fórmula II ou suas misturas. De acordo com uma concretização par- ticular, o referido ácido HX é um ácido inorgânico, tal como HCl, HBr, e assemelhados. De acordo com uma con- cretização preferida, HX é HBr.
Na dependência da natureza dos compostos da fórmula I e II, a reação requer 1 ou 2 equivalentes de HX. A pessoa versada na técnica está ciente das condições que são necessaries para formar o sal. De acordo com uma concretização da invenção, o estereoisô- mero substancialmente puro de um composto da fórmula II, ou suas misturas, é colocado em contacto com um ex- cesso de um ácido da fórmula HX, em que X é tal como definido como anteriormente. De acordo com uma outra concretização, o estereoisômero substancialmente puro de um composto da fórmula II ou suas misturas é dissol- vido em HBr aquoso e aquecido.
De acordo com o exposto retro, é possível obter-se um estereoisômero substancialmente puro de um composto da fórmula I ou suas misturas, em uma seqüên- cia de maneira escalonada a partir do estereoisômero substancialmente puro de um composto da fórmula III ou de suas misturas. Entretanto, é igualmente possível obter-se o estereoisômero substancialmente puro de um composto da fórmula I ou suas misturas, a partir do composto da fórmula III seguindo-se uma estratégia de um só vaso. Conseqüentemente, constitui um outro as- pecto da invenção, um processo de um só vaso para a síntese de a estereoisômero substancialmente puro de um composto da fórmula I ou suas misturas, o qual compre- ende fazer reagir um estereoisômero substancialmente puro de um composto da fórmula III ou suas misturas, com um nucleófilo que contém nitrogênio da fórmula VII- Ia ou VIIIb; e, subseqüentemente, fazer reagir o com- posto resultante da etapa anterior com um ácido ácido da fórmula HX. O composto da fórmula I é dotado de dois centros quirais; conseqüentemente, ele pode estar na forma de qualquer um dos seus estereoisômeros substan- cialmente puros ou na forma de uma mistura dos mesmos.
Compostos preferidos da fórmula I, incluindo os seus estereoisômeros essencialmente puros são mencionados adiante sob o titulo correspondente.
Composto da fórmula I
Os compostos da fórmula I são dotados de dois centros quirais; consequentemente, eles podem es- tar na forma de qualquer um dos estereoisômeros essen- cialmente puros ou de uma mistura dos mesmos. Em uma concretização particular, o composto da fórmula I é se- lecionado a partir do grupo que consiste de:
a) um estereoisômero substancialmente puro com- posto da fórmula Ia
em que R1, R2, R3, R4, X e Y são aqueles ante- riormente definidos;
b) um estereoisômero substancialmente puro com- posto da fórmula Ib, em que R1, R2, R3, R4, XeY são aqueles anteriormente definidos;
c) um estereoisômero substancialmente puro com- posto da fórmula Ic
<formula>formula see original document page 47</formula>
em que R1, R2, R3, R4, XeY são aqueles anteriormente definidos;
d) um estereoisômero substancialmente puro com- posto da fórmula Id
<formula>formula see original document page 47</formula>
em que R1, R2, R3, R4, XeY são aqueles anteriormente definidos; e
e) qualquer mistura dos compostos substancial- mente puros da fórmula Ia, Ib, Ic e/ou Id mencionados anteriormente, em uma relação e- quimolar ou não, em que a dita mistura não contém simultaneamente todos os quatro este- reoisômeros dos seguintes compostos:
(i) cloridrato de cloreto de 1-(3-amino-5- carboxi-2-oxopirrolidin-3-ilmetil)piri- dinio, ou
(ii) cloridrato de cloreto de 1-(1-acetil-3- amino-5-carboxi-2-oxopirrolidin-3-ilmetil) piridinio.
Muito embora tenham sido descritos alguns compostos da fórmula I, ou seja (i) cloridrato de clo- reto de 1-(3-amino-5-carboxi-2-oxopirrolidin-3-ilmetil) piridinio, e (ii) cloridrato de cloreto de l-(l-acetil- 3-amino-5-carboxi-2-oxopirrolidin-3-ilmetil)piridinio como misturas de todos os seus quatro estereoisômeros possíveis, nenhuma síntese de seus estereoisômeros es- sencialmente puros foi conseguida até agora.
Em uma concretização particular, no com- posto da fórmula I, R1 é -OH ou -OUa, em que Ra é tal como definido anteriormente, preferentemente -0H.
Em outra concretização particular, no com- posto da fórmula I, R2 é hidrogênio, um grupo de prote- ção de nitrogênio que hidrolisa sob condições ácidas ou ftalamida, preferentemente hidrogênio.
Em outra concretização particular, no com- posto da fórmula I, R3 ou R4, independentemente, é hi- drogênio, um grupo de proteção de nitrogênio que se hi- drolisa sob condições ácidas ou ftalamida, preferente- mente os dois são, simultaneamente, hidrogênio.
Em outra concretização particular, no com- posto da fórmula I, X é um ânion farmaceuticamente a- ceitável, preferentemente brometo ou cloreto.
Em outra concretização particular, noo composto da fórmula I, Ri é OH ou OUa, preferentemente OH; R2 é hidrogênio, um grupo de proteção de nitrogênio que se hidrolisa sob condições ácidas ou ftalamida, preferentemente hidrogênio; R3 ou R4, independentemen- te, são hidrogênio, um grupo de proteção de nitrogênio which se hidrolisa sob condições ácidas ou ftalamida, preferentemente R3 ou R4 são, simultaneamente, hidrogê- nio; e/ou X é um ânion farmaceuticamente aceitável, preferentemente brometo ou cloreto.
Em outra concretização particular, no com- posto da fórmula I, Y é um resíduo orgânico selecionado a partir de
<formula>formula see original document page 49</formula> <formula>formula see original document page 50</formula>
Em outra concretização particular, no com- posto da fórmula I, Y é um resíduo orgânico selecionado a partir de
<formula>formula see original document page 50</formula> <formula>formula see original document page 51</formula>
De acordo com uma concretização particu- lar, o composto da fórmula I é um composto substancial- mente puro da fórmula I'a
em que R1, R2, R6 e η são aqueles anteriormente de- finidos .
De acordo com uma concretização particular da invenção, o dito composto da fórmula I é um composto substancialmente puro da fórmula I'b
<formula>formula see original document page 51</formula>
em que R1, R2, R6 e η are aqueles anteriormente definidos.
De acordo com uma concretização particular da invenção, o dito composto da fórmula I é um composto substancialmente puro da fórmula I'c,
<formula>formula see original document page 52</formula>
em que Rx, R2, Rg e η são aqueles anteriormente de- finidos.
De acordo com uma concretização particular da invenção, o dito composto da fórmula I é um composto substancialmente puro da fórmula I'd
em que R1, R2, Rô e η são aqueles anteriormente de- finidos .
De acordo com uma concretização particular da invenção, proporciona-se uma mistura que compreende dois ou mais compostos da fórmula I'a, I'b, I'c e/ou I'd, em relações equimolar ou não; por exemplo, uma mistura que compreende compostos da fórmula 1'a e I'b, ou que compreende compostos da fórmula I'a e I'c, ou que compreende compostos da fórmula I'a e I'd, ou que compreende compostos da fórmula I'b e I'c, ou que com- preende compostos da fórmula I'b e I'd, ou que compre- ende compostos da fórmula I'c e I'd, ou que compreende compostos da fórmula I'a, I'b e I'c, ou que compreende compostos da fórmula I'a, I'b e I'd, ou que compreende compostos da fórmula I'b, I'c e I'd, ou que compreende compostos da fórmula I'a, I'b, I'c e I'd.
De acordo com uma concretização particular da invenção, o composto da fórmula I é selecionado a partir do grupo que consiste de:
bromidrato de brometo de 3S,5S-1-(3-amino-5- carboxi-2-oxopirrolidin-3-ilmetil)piridinio;
bromidrato de brometo de 3R,5S-1-(3-amino-5- carboxi-2-oxopirrolidin-3-ilmetil)piridinio;
bromidrato de brometo de 3R,5R-1-(3-amino-5- carboxi-2-oxopirrolidin-3-ilmetil)piridinio; e
bromidrato de brometo de 3S,5R-1-(3-amino-5- carboxi-2-oxopirrolidin-3-ilmetil)piridinio.
A invenção proporciona ainda uma composção que compreende uma mistura dos ditos compostos da fór- mula Ia, Ib, Ic e/ou Id, em relações equimolares ou não, em que a dita mistura não contém simultaneamente todos os quatro estereoisômeros dos seguintes compostos
(i) cloridrato de cloreto de 1-(3-amino-5- carboxi-2-oxopirrolidin-3-ilmetil)piridinio,
ou
(ii) cloridrato de cloreto de 1-(1-acetil-3-amino- 5-carboxi-2-oxopirrolidin-3-ilmetil) piridi- nio.
Composto da fórmula II
Muito embora alguns compostos da fórmula II, a saber, acetate de 1-(3-amino-5-carboxi-2- oxopirrolidin-3-ilmetil)piridinio, acetato de 1—(1— aceti1-3-amino-5-carboxi-2-oxopirrolidin-3-iImetil)pi- ridinio, acetato de 1-(l-acetil-3-acetilamino-5-carboxi -2-oxo-pirrolidin-3-ilmetil)piridinio acetate ou clori- drato de 1-(l-acetil-3-acetilamino-5-carboxi-2-oxo-pir- rolidin-3-ilmetil)piridinio fossem descritas como mis- turas de todos os seus quatro estereoisômeros possí- veis, nenhuma síntese de seus estereoisômeros substan- cialmente puros foi conseguida até à data.
Assim, em outro aspecto, a invenção refe- re-se a um composto substancialmente puro da fórmula II ou suas misturas.
Em uma concretização particular, a inven- ção refere-se a um composto substancialmente puro da fórmula lia, IIb, IIc e IId.
Em uma concretização particular, a inven- ção refere-se a uma mistura dos compostos da fórmula lia, IIb, IIc and/ou IId mencionados anteriormente, em qualquer relação molar, em que a dita mistura não con- tém simultaneamente todos os quatro estereoisômeros dos seguintes compostos:
acetato de 1-(3-amino-5-carboxi-2-oxopirrolidin-3- ilmetil)piridinio;
acetato de 1-(1-acetil-3-amino-5-carboxi-2- oxopirrolidin-3-ilmetil)piridínio;
acetato de 1-(l-acetil-3-acetilamino-5-carboxi-2- oxo-pirrolidin-3-ilmetil)piridínio; ou cloridrato de 1-(1-acetil-3-acetilamino-5-carboxi- 2-oxo-pirrolidin-3-ilmetil)piridínio.
Em outra concretização particular, o este- reoisômero substancialmente puro de um composto da fór- mula II, ou suas misturas, é um composto em que Ri é - ORa, preferentemente em que Ra é um grupo alquila.
Em outra concretização particular, o este- reoisômero substancialmente puro de um composto da fór- mula II, ou suas misturas, é um composto em que R2 é - (0=)C-O-Ra, preferentemente o grupo BOC.
Em outra concretização particular, o este- reoisômero substancialmente puro de um composto da fór- mula II, ou suas misturas, é um composto em que R4 é - (0=)S(=0)-Ra, preferentemente tosil.
Em outra concretização particular, o este- reoisômero substancialmente puro de um composto da fór- mula II, ou suas misturas, é um composto em que Ri é - ORa, preferentemente em que Ra é um grupo alquila; R2 é -(0=)C-O-Ra, preferentemente o grupo BOC; e R4 é - (0=)S(=0)-Ra, preferentemente tosil.
De acordo com outra concretização da pre- sente invenção, o estereoisômero substancialmente puro de um composto da fórmula II, ou as suas misturas, é um composto em que R2, R4 e R5, são, independentemente, hi- drogênio . De acordo com outra concretização da in- venção, o estereoisômero substancialmente puro de um composto da fórmula II, ou suas misturas, is um compos- to wherein Ri is -0H.
De acordo com outra concretização de a in- venção, o estereoisômero substancialmente puro de um composto da fórmula II, ou suas misturas, é um composto em que R5 é uma carga negativa.
A invenção também se refere a uma composi- ção que compreende um composto selecionado a partir do grupo que consiste dos compostos mencionados anterior- mente da fórmula lia, IIb, IIc, IId e suas misturas, em qualquer relação molar, em que a dita mistura não con- tém simultaneamente todos os quatro estereoisômeros dos seguintes compostos:
acetato de 1-(3-amino-5-carboxi-2-oxopirrolidin-3- ilmetil)piridínio;
acetato de 1-(l-acetil-3-amino-5-carboxi-2-oxopir- rolidin-3-ilmetil)piridínio;
acetato de 1-(1-acetil-3-acetilamino-5-carboxi-2- oxo-pirrolidin-3-ilmetil)piridínio; ou cloridrato de 1-(l-acetil-3-acetilamino-5-carboxi- 2-oxo-pirrolidin-3-ilmetil)piridínio.
O estereoisômero substancialmente puro de um composto da fórmula II ou suas misturas pode ser ob- tido, tal como mencionado anteriormente, por meio de um processo que compreende fazer reagir um estereoisômero substancialmente puro de um composto da fórmula III ou suas misturas, com
um composto da fórmula VIIIa, ou alternativa- mente com,
um composto da fórmula VIIIb, e, se desejado, com um composto da fórmula X, ou alternativa- mente com,
um composto da fórmula VIIIa e com um composto da fórmula X.
0 dito processo constitui um outro aspecto da presente invenção e torna possível a síntese de es- tereoisômeros substancialmente puros do composto da fórmula II ou suas misturas.
Composto da fórmula III
Em outro aspecto, a invenção refere-se a um estereoisômero substancialmente puro de um composto da fórmula III ou suas misturas. O dito composto da fórmula III tem dois centros quirais; portanto, ele po- de estar na forma de qualquer estereoisômero substanci- almente puro ou uma mistura dos mesmos.
Em uma concretização particular, o compos- to da fórmula III é selecionado a partir do grupo que consiste dos compostos da fórmula IIIa, IIIb, IIIc, II- Id e qualquer mistura dos mesmos.
Em outra concretização particular, a in- venção refere-se a uma mistura que compreende dois ou mais compostos da fórmula IIIa, IIIb, IIIc and IIId.
Exemplos ilustrativos, não limitativos das referidas misturas incluem misturas de dois desses compostos (por exemplo, misturas de IIIa e IIIb, IIIa e IIIc, IIIa e IIId, IIIb e IIIc, IIIb e IIId ou IIIc e IIId), ou mis- turas de três dos ditos compostos (por exemplo, mistu- ras de IIIa, IIIb e IIIc, IIIa, IIIb e IIId, ou IIIb, IIIc e IIId), ou misturas dos ditos quatro compostos (por exemplo, uma mistura de IIIa, IIIb, IIIc e IIId). Cada composto particular (IIIa a IIId) pode estar pre- sente na dita mistura em qualquer proporção ou relação, por exemplo, em proporções ou relações equimolares ou em diferentes proporções ou relações em que um ou mais dos ditos compostos estão em excesso com relação ao(s) outro(s).
Em outra concretização particular, o este- reoisômero substancialmente puro de um composto da fór- mula III, ou suas misturas, é um composto em que Rx é - ORa, preferentemente em que Ra é um grupo alquila.
De acordo com outra concretização particu- lar, o estereoisômero substancialmente puro de um com- posto da fórmula III, ou suas misturas, é um composto em que R2 é -(0=)C-O-Ra, preferentemente o grupo BOC.
De acordo com outra concretização particu- lar, o estereoisômero substancialmente puro de um com- posto da fórmula III, ou suas misturas, é um composto em que R4 é -(0=)S(=0)-Ra, preferentemente tosil.
De acordo com another concretização parti- cular, o estereoisômero substancialmente puro de um composto da fórmula III, ou suas misturas, é um compos- to em que R1 é -ORa, pref erentemente em que Ra é um grupo alquila; R2 é -(0=)C-O-Ra, preferentemente o gru- po BOC; e R4 é - (0=)S(=0)-Ra, preferentemente tosil.
De acordo com outra concretização particu- lar, o estereoisômero substancialmente puro de um com- posto da fórmula III, ou suas misturas, é um composto em que R2, R4 e R5 independentemente, compreendem hidro- gênio .
O estereoisômero substancialmente puro de um composto da fórmula III ou suas misturas pode ser obtido, tal como mencionado anteriormente, por meio de um processo que compreende fazer reagir um composto da fórmula IV, seja em uma forma enatiomericamente pura ou na forma de uma mistura de enantiômeros, com um compos- to da fórmula V. 0 referido processo constitui um ou- tro aspecto da presente invenção. Por meio do dito processo, também é possível obterem-se estereoisômeros substancialmente puros de um composto da fórmula III ou suas misturas.
Usos do composto da fórmula I e composições farmacêuti- cas
Os estereoisômeros substancialmente puros de um composto da fórmula I, ou suas misturas, podem ser usados como ingredientes ativos de medicamentos pa- ra o tratamento e/ou profilaxia de algumas condições em um paciente, por exemplo, tumores, imunodeficiências, infecções e outros. Exemplos ilustrativos, não-limitativos, de condições suscetíveis de serem tratadas com o estereoi- sômero substancialmente puro de um composto da fórmula I ou suas misturas, incluem:
A) Câncer ou condições relacionadas com tumores: que compreendem praticamente todos os tipos de câncer e tumores, incluindo Leucemia Linfoblástica Agu- da, Leucemia Linfoblástica Aguda de Adulto, Leucemia Mielóide Aguda Infantil, Leucemia Mielóide Aguda de A- dulto, Carcinoma Adrenocortical, Cânceres relacionados com Sindrome de Imunodeficiência Adquirida (AIDS), Cân- cer Anal, Astrocitoma, Astrocitoma Cerebelar Infan- til, Carcinoma de Cali Basal, Câncer de Duto de Bi- lis, Câncer da Bexiga Extra-hepático, Câncer da Bexi- ga, Câncer Ósseo, Histiocitoma Fibroso Osteossarco- ma/Maligno, Glioma de Ramo Cerebral, Tumor Ceregral, Glioma Maligno, Ependimoma, Meduloblastoma, Tumores Neuroectodérmicos Primitivos Suprassensoriais, Glioma Hipotálmico e de Via Visual, Câncer de Mama, Adeno- mas/Carcinóides Bronquiais Mate, Linfoma de Burkitt Infantil, Tumor Carcinóide, Carcinoma Gastrintestinal de Primário Desconhecido, Linfoma do Sitroncoa Nervoso Central, Astrocitoma Cerebelar Primário, Astrocitoma / Glioma Maligno Cerebral, Câncer Cervical, Cânceres Infantis, Leucemia Linfocitica Crônica, Leucemia Mie- logênica Crônica, Distúrbios Mieloproliferantes Crô- nicos, Câncer de Cólon, Câncer Cólon-retal, Linfoma de Célula T Cutânea, Câncer Endometrial, Câncer Eso- fágico, Tumores da Familia de Ewing Infantis, Tumor de Célula Germinativa Extracraniana, Tumor de Célula Germinativa Extragonadal, Câncer do Conduto de Bile Extra-hepático, Câncer do Olho, Câncer do Olho Mela- noma Intra-ocular, Retinoblastoma, Câncer de Vesicula Biliar, Câncer Gástrico (Estômago) , Tumor Carcinóide Gastrintestinal, Tumor de Células Germinativas, Glio- ma Tumoral Trofoblástico de Gestação Ovariana, Glioma de Adulto, Glioma de Tronco Cerebral, Glioma de As- trocitoma Cerebral, Leucemia de Células Piliformes, Câncer de Cabeça e Pescoço, Câncer Hepatocelular (Fí- gado), Câncer Hepatocelular (Fígado) de Adulto (Pri- mário) , Lifoma de Hodgkin Infantil (Primário), Linfo- ma de Hodgkin de Adulto, Câncer Hipofaríngico, Mela- noma Intraocular, Carcinoma de Células Islet (Pân- creas Endócrino), Sarcoma de Kaposi, Câncer Renal (Célula Renal), Câncer dos Rins, Câncer Laringiano, Leucemia Linfocitica Crônica, Leucemia Mielógena Crô- nica, Câncer das Células Pilosas, Câncer da Cavidade Labial e Bucal, Câncer de Pulmão da Criança (Primá- rio) , Câncer de Pulmão de Células Adultas, Linfoma de Pequenas Células, Linfoma Relacionado com Aids, Linfoma de Burkitt, Célula-T Cutânea, Linfoma Adulto de Hodgkin, Linfoma de Infância de Hodgkin, Linfoma de Adulto Não-de-Hodgkin, Linfoma de Infância Não de Hodgkin, Sitronco Nervoso Central Primário, Macro- globulinemia, Histiocitoma Fibroso Maligno de Wal- denstróm do Osso/Osteossarcoma, Meduloblastoma, Me- lanoma, Carcinoma Celular de Merel Intraocular (0- lho), Mesotelioma, Mesotelioma Maligno de Adulto, Câncer do Pescoço Escamoso Metastático Infantil com Primário Oculto, Sindrome de Neoplasia Endócrina Múltipla, Mieloma Múltiplo Infantil, Sindromes Mielo- displásticas Fungóides de Micose Neoplasma de Células de Plasma, Leucemia Mielógena de Enfermidades Mielo- displásticas/Mieloproliferantes, Leucemia Mielóide Crônica, Leucemia Mielóide Aguda de Adulto, Mieloma Agudo Infantil, Distúrbios Mieloproliferantes Múlti- plos, Câncer do Seio Paranasal e Cavidade Nasal Crô- nico, Câncer Nasofaringico, Neuroblastoma Infantil, Câncer Oral, Câncer da Cavidade Oral Infantil, Cân- cer do Lábio e Orofanringico, Osteosarcoma Histiocitoma Fibroso Maligno de Câncer Ovariano Ós- seo, Câncer Epitelial Ovariano Infantil, Tumor Ger- minativo Da Célula Ovariana, Tumor Potencial de Bai- xa Malignidade Ovariano, Câncer Pancreático, Câncer Pancreático Infantil, Câncer da Cavidade Nasal e Seio Paranasal de Células Islet, Câncer de Paratireóide, Câncer Peniano, Feocromacitoma, Tumores Neuroectodér- micos Primitivos de Pineoblastoma e Supratensoriais, Tumor de Pituitária Infantil, Mieloma Múlti- plo/Neoplasma de Células de Plasma, Blastoma Pleuro- pulmonar, Linfoma do Sitronco Nervoso Central Primá- rio, Câncer de Próstata, Câncer Retal, Câncer das Cé- lulas Renais (Rins), Câncer de Células de Transição de Pélvis e Ureter Renal Infantil, Retinoblastoma, Rabdomiossarcoma, Câncer da Glândula da Salivar In- fantil, Câncer da Glândula Salivar, Sarcoma Infantil, Família de Tumores de Ewing, Sarcoma, Sarcoma de Ka- posi, Sarcoma de Tecido Mole de Adulto, Sarcoma de Tecido Mole Infantil, Sindrome de Sezary Uterina, Câncer de Pele (não-Melanoma), Câncer de Pele Infan- til (Melanoma), Carcinoma de Pele, Câncer de Pulmão de Células Inferiores de Merkel, Câncer do Intestino Delgado, Sarcoma do Tecido Mole, Sarcoma do Tecido Mole de Adulto, Carcinoma das Células Escamosas In- fantis, Câncer de Pescoço Escamoso com Metastático Primário Oculto, Câncer de Estômago (Gástrico), Tumo- res Neuroectodérmicos Primitivos Suprassensoriais In- fantis, Linfoma de Célula-T Infantil, Câncer Testicu- lar, "Timoma", "Timoma" e Câncer de Tireóide Infan- til, Câncer de Tireóide, Câncer de Célula Transitório Infantil do Tumor Trofoblástico de Pélvis Renal e U- reter, Local Primário Desconhecido de Gestação, Cân- cer de Células de Transição, Câncer Uretral, Câncer Uterino, Sarcoma Uterino Endométrio, Câncer Vaginal, Glioma Hipotalâmico e de Percurso Visual, Câncer Vul- var Infantil, Tumor de Wilms de Macroglobulinemia de Waldenstróm, e outras;
B) Infecções: que compreendem praticamen- te todo o tipo de infecções, tais como infecções por cabtérias, fungos e de origem viral; ou
C) Enfermidades auto-imunes: que compreen- de praticamente todas as enfermidades auto-imunes men- cionadas no web site da "American Autoimmune Related Diseases Association" [http://www.aarda.oug], incluindo esclerose múltipla (MS), doença de Crohn, artrite reu- mática, diabetes mellitus do tipo 1, psoriase, lúpus, colite ulcerosa, vitiligo, doença celiaca, vasculite, dermatoses, polimiosite, tireoidite (Hashimoto, Gra- ves), miastenia grave, sindrome de Guillain-Barre, u- veite, liquen lisa, arterite temporal, sarcoidose, sin- drome seca (Sjõegren), asma brônquica, pênfigo, espon- dilite anquilosa, esclerodermia, fibromialgia, febre reumática, e outras.
Assim, de acordo com outro aspecto, a in- venção refere-se a uma composição farmacêutica, dora- vante chamada composição farmacêutica da invenção, que compreende um composto da fórmula I, seus estereoisôme- ros substancialmente puros Ia, Ib, Ic ou Id, ou suas misturas em relações equimolares ou não, em que a dita mistura não contém simultaneamente todos os quatro es- tereoisômeros dos seguintes compostos: (i) cloridrato de cloreto de 1-(3-amino-5-carboxi-2-oxopirrolidin-3- ilmetil)piridinio, ou (ii) cloridrato de cloreto de 1- (l-acetil-3-amino-5-carboxi-2-oxopirrolidin-3-ilmetil) piridinio, e um carreador farmaceuticamente aceitável.
Em uma concretização particular, a compo- sição farmacêutica da invenção compreende, como ingre- diente ativo, pelo menos um estereoisômero substancial- mente puro de um composto da fórmula I, isto é, Ia, Ib, Ic ou Id, ou suas misturas em relações equimolar ou não, em que a dita mistura não contém simultaneamente todos os quatro estereoisômeros dos compostos (i) ou (ii) mencionados anteriormente, em uma quantidade tera- peuticamente efetiva. No sentido que é usado nesta descrição, a expressão "quantidade terapeuticamente e- fetiva" refere-se à quantidade do ingrediente ativo calculada para produzir o efeito desejado e será geral- mente determinada, entre outras razões, pelas caracte- rísticas próprias do ingrediente ativo usado epelo e- feito terapêutico a ser obtido. De acordo comuma con- cretização particular, a dose de ingrediente ativo ad- ministrada ao paciente com necessidade de tratamento e/ou profilaxia das condições mencionadas anteriormente está dentro da faixa de IO"10 a IO10 mg/kg do peso cor- póreo, tipicamente entre IO"3 e IO3 mg/kg de peso corpó- reo.
0 termo "carreador" refere-se a um diluen- te, adjuvante, excipiente, ou veículo com o qual o in- grediente ativo é administrado. Estes carreadores far- macêuticos podem ser líquidos estéreis, tais como água e óleos, incluindo aqueles de origem de petróleo, ani- mal, vegetal ou sintética, tais como óleo de amendoim, óleo de soja, óleo mineral, óleo de gergelim e asseme- lhados. Água ou soluções Salinas aquosas e dextrose aquosa e soluções de glicerol são preferentemente em- pregadas como carreadores, particularmente para as so- luções injetáveis. Carreadores que são adequados en- contram-se descritos em "Remington1S Pharmaceutical Sciences" by E.W. Martin. Além disso, o termo "farma- ceuticamente aceitável" refere-se a entidades molecula- res e composições que são fisiologicamente toleráveis e não produzem tipicamente, uma reação desfavorável alér- gica ou similar, tal como perturbação gástrica, verti- gem ou assemelhada, quando administrada a um ser huma- no. Preferentemente, tal como usado neste contexto, o termo "farmaceuticamente aceitável" significa aprovado por uma entidade reguladora do governo federal ou de estado ou listada na U.S. Pharmacopeia ou outra farma- copéia geralmente reconhecida para o uso em animais e com particularidade em seres humanos.
Para a sua administração a um paciente, tal como um mamífero, por exemplo, um ser humano, com necessidade de tratamento, a composição farmacêutica da invenção pode ser administrada por um caminho (via) a- propriado, tal como, oral (por exemplo, oral, sublin- gual, e assemelhados) , parenteral (por exemplo, subcu- têneo, intramuscular, intravenoso, intramuscular, e ou- tros), vaginal, retal, nasal, tópico, oftálmico e assim por diante.
A composição farmacêutica da invenção, ob- tida pela mistura do(s) ingrediente(s) ativo(s) com o(s) carreador(s) farmaceuticamente aceitável adequado pode ser administrado em uma pluralidade de formas far- macêuticas de administração, por exemplo, sólida, lí- quida e assemelhada. Exemplos ilustrativos, não Iimi- tativos das ditas formas farmacêuticas de administração de uma composição farmacêutica da invenção incluem oral drops (solução, suspensão, emulsão, e outros); formula- ções orais (liquido, solução, suspensão, emulsão, gel, pasta, pó, e outros); liofilsado oral; goma oral; pó para solução oral ou suspensão; grânulos; grânulos gas- tro-resistentes; grânulos de liberação prolongada; grâ- nulos de liberação modificada; grângulos para suspensão oral; pó e solvente para solução ou suspensão oral; xa- rope; pó para xarope; grânulos para xarope; comprimidos (por exemplo, comprimido solúvel, comprimido dispersá- vel, comprimido revestido, comprimido revestido de pe- lícula, comprimido efervescente, comprimido dispersável na boca, comprimido gastro-resistante, comprimido de liberação prolongada, comprimido de liberação modifica- da, comprimido bucal, comprimido mastigável, e outros); chá herbáceo; chá herbáceo instantâneo; pó ou grânulos efervescentes; sachê, cápsulas (por exemplo, cápsulas duras ou macias gastro-resistentes, cápsulas duras ou macias de liberação prolongada, capsulas duras ou maci- as de liberação modificada, e outras); pílulas; dispo- sitivo intra-ruminal de liberação contínua; dispositivo intra-ruminal de liberação pulsada; pastilha; pré- mistura para apoio de alimentação medicada; pílulas, gargarejos; concentrado para gargarejos; gargarejo (pó ou comprimido para solução); solução oromucosal, sus- pensão, drops, spray, gel, pomada, cápsulas, e outros; spray sublingual, comprimido, e outros; dentifrício lí- quido bucal; solução gengival, gel, pomada, e outros; pastilhas; pastilhas comprimidas; tablete; gel dental, bastão, inserto, pó, solução, suspensão, emulsão, e ou- tros; pasta de dentes; cream; gel; unguento; creme, es- puma, spray, solução, suspensão, pó, liquido, solução cutâneos, concentrado para solução, suspensão, emulsão, bastão, esponja, e outros, cutâneos; emplastro; xampu; solução para iontoforese; mecha transdérmica; cataplas- ma; solução, suspensão, emulsão de banho, concentrado para solução, suspensão ou emulsão de banho; solução, suspensão ou emulsão de despejar; solução de aplicar; suspensão de aplicar; emulsão de aplicar; solução de imersão de mamilo; suspensão de imersão de mamilo; e- mulsão de imersão de mamilo; solução de spray de mami- lo; creme para os olhos; gel para os olhos; ungüento para os olhos; colírio (solução, suspensão, pó e sol- vente para solução, pó e solvente para suspensão, sol- vente para reconstituição, loção, solvente para recons- tituição de loção, e outros); inserto oftálmico; creme para o ouvido; gel para o ouvido; ungüento para o ouvi- do; gotas para o ouvido (solução, suspensão, emulsão, pó, e outros); spray para o ouvido (solução, suspensão, e outros); lavagem para o ouvido (solução, emulsão, e outros); tampão para o ouvido; bstão para o ouvido; creme nasal; gel nasal; unguento nasal; gotas nasais (solução, suspensão, emulsão, e outros); pó nasal; s- pray nasal (solução, suspensão, emulsão, e outros); la- vagem nasal, bastão nasal; creme vaginal; gel vaginal; unguento vaginal; espuma vaginal; solução vaginal; sus- pensão vaginal; emulsão vaginal; comprimido para solu- ção vaginal; cápsula dura ou macia vaginal; comprimido vaginal; comprimido efervescente vaginal; sistema de distribuição vaginal; creme retal; gel retal; ungüento retal; espuma retal; solução retal; suspensão retal; emulsão retal; concentrado para solução retal; pó para solução retal; pó para suspensão retal; comprimido para suspensão retal; suppositório; cápsula retal; solução de tampão-nebulizador retal; suspensão nebulisadora; pó para suspensão nebulisadora; pó para solução nebulisa- dora; emulsion nebulisadora; inalação de pressurização (solução, suspensão, emulsão, e outros); pó de inalação (cápsula dura); pó de inalação, pré-distribuido; vapor de inalação (pó, capsule, solução, comprimido, ungüen- to, liquido, e outros); gás de inalação; gel para inje- ção; solução para injeção; suspensão para injeção; e- mulsão para injeção; pó para solução para injeção; pó para suspensão para injeção; pó e solvente para solução para injeção; pó e solvente para suspensão para inje- ção; concentrado para solução para injeção; solução pa- ra infusão; emulsão para infusão; pó para solução para infusão; concentrado para solução para infusão; pó e solvente para solução para infusão; comprimido para im- plantação; solução para diálise peritoneal; solução pa- ra hemofiltragem; solução para hemodiafiltragem; solu- ção para hemodiálise; concentrado para solução de hemo- diálise; solução para uso intravesical; irrigação de bexiga; pó de irrigação de bexiga; gel uretral; bastão uretral; instilação endotraqueopulmonar (solução); ins- tilação endotraqueopulmonar (pó para solução); instila- ção endotraqueopulmonar (suspensão); instilação endo- traqueopulmonar (pó e solvente para solução); gel endo- cervical; pó e solvente para gel endocervical; solução intramamária; suspensão intramária; emulsão intramária; ungüento intramamário; bastão para bico de peito; sis- tema de distribuição intrauterino; e outros.
Os carreadores e as substâncias auxiliari- es necessárias para a manufatura da forma farmacêutica de administração desejada de uma composição farmacêuti- ca da invenção dependerá, entre outros fatores, da for- ma de administração farmacêutica escolhida. As ditas formas de administração farmacêuticas da composição farmacêutica serão manufaturadas de acordo com métodos convencionais conhecidos daquela pessoa versada na téc- nica. Uma revisão de diferentes métodos de administra- ção de ingredientes ativos, excipientes a serem usados e processos para produzir os mesmos podem ser encontra- dos no "Tratado de Farmacia Galénica", C. Fauli i Tril- lo, Luzán 5, S.A. de Ediciones, 1993.
Em outro aspecto, a invenção refere-se ao uso de um estereoisômero substancialmente puro de um composto da fórmula I, isto é, Ia, Ib, Ic ou Id, ou su- as misturas em proporções equimolares ou não, em que a dita mistura não contém simultaneamente todos os quatro estereoisômeros dos seguintes compostos: (i) cloridrato de cloreto de 1-(3-amino-5-carboxi-2-oxopirrolidin-3- ilmetil)piridinio, ou (ii) cloridrato de cloreto de 1- (l-acetil-3-amino-5-carboxi-2-oxopirrolidin-3- ilmetil)piridinio, para a manufatura de uma composição farmacêutica para aumentar a imuno-resposta em um paci- ente, ou para a manufatura de uma composição farmacêu- tica antitumoral, ou para a manufatura de uma composi- ção farmacêutica para tratar uma infecção de origem bacteriana, fúngica ou viral, ou para a manufatura de uma composição farmacêutica para tratamento de uma en- fermidade auto-imune.
De acordo com uma concretização preferida, a presente invenção refere-se ao dito uso para a manu- fatura de uma composição farmacêutica para o tratamento e/ou profilaxia de câncer.
De acordo com outra concretização preferi- da, a presente invenção refere-se ao dito uso para a manufatura de uma composição farmacêutica para o trata- mento e/ou profilaxia da enfermidade ou condição sele- cionada a partir do grupo que consiste de câncer cólon- retal, câncer de mama, câncer de próstata, melanoma, mastocitoraa, câncer de pulmão e câncer renal.
De acordo com uma concretização preferida, a presente invenção refere-se ao dito uso para a manu- fatura de uma composição farmacêutica para o tratamento e/ou profilaxia de AIDS e enfermidades relacionadas.
Exemplos ilustrativos, não limitativos, de condições suscetíveis de serem tratadas com uma compo- sição farmacêutica proporcionada pela presente invenção incluem aqueles mencionados anteriormente.
Os exemplos seguintes podem ser usados pa- ra ilustrar a invenção e não devem ser considerados co- mo sendo limitativos do seu escopo.
EXEMPLOS
Procedimentos Gerais. Todos os pontos de fusão foram medidos em tubos capilares e são não- corrigidos. Os espectros IR foram determinados em dis- cos KBr utilizando-se um espectrômetro Nicolet Impact 410. Os espectros IH NMR foram obtidos a de 300 a 500 MHz em aparelhagem VARIAN UNITY e UNITYPLUS. Desloca- mentos químicos (δ) foram determinados utilizando-se TMS como padrão interno, e multiplicidade (s, único; d, parelha; dd, duplo-parelha; t, trio; q, quarteto; m, múltiplo) é indicada para cada sinal. Realizaram-se análises de HPLC-MS em um aparelho Agilent 1100. Uti- lizou-se uma coluna cromatográfica Luna C18 (150 χ 4,6 mm) 5 pm Phenomenex, com uma fase móvel formada por um gradiente triplo de ácido fórmico a 4% aq. (A) , água (B) e acetonitrila (C) . 0 gradiente foi iniciado como A (2,5%), B (93%) e C (4,5%) e, em 30 minutos alcançou A (2,5%), B (4,5%) e (93%). No detector Mass, o frag- mentador operou a 70eV. Realizou-se análise elementar em um instrumento LECO CHNS-932. Todos os rendimentos são correspondentes aos compostos puros isolados.
O Exemplo 1 refere-se à síntese de (1- tertbutil éster 2-eti éster de ácido 2R-4-metileno-5- oxopirrolidina-1,2-dicarboxílico) , um material de par- tida do processo da invenção (composto da fórmula IV).
O Exemplo 2 refere-se à síntese do compos- to da fórmula V, um material de partida do processo da invenção.
Os Exemplos 3 e 4 referem-se à síntese de (3R,5R), (3S,5S), (3R,5S) e (3S,5R)-1-(3-amino-5- carboxi-2-oxopirrolidin-3-ilmetil)piridinio bromide hi- dro-brometo, que são compostos da fórmula I, utilizan- do-se uma seqüência de um vaso.
O Exemplo 5 refere-se à síntese de um vaso de bromidrato de brometo de 3S,5S-1-(3-amino-5-carboxi- 2-oxopirrolidin-3-ilmetil)piridinio em seguida a uma síntese escalonada.
O Exemplo 6 analisa o efeito dos diferen- tes isômeros de um composto da fórmula I no crescimento de tumores (tumor submetido a ensaio: RENCA).
EXEMPLO 1
Sintese de um composto da fórmula IV: (R)-5-(1-terc- butil éster 2-etil éster de ácido 2R-4-metileno-5- oxopirrolidina-1,2-dicarboxílico)
A síntese do composto do título está ilus- trada no Esquema 1.
1.1 Síntese de composto 2: éster etílico de ácido 2S- 5-oxopirrolidina-2-carboxíIico
Carregou-se um reator de 10 l com ácido D- glutâmico 1 (1 kg, 6,80 mol) em etanol absoluto (5,0 1), refrigerou-se para -10°C e através de um funil de queda adicionou-se lentamente cloreto de tionila (2,0 kg, 14,9 mol) durante 2 h. Depois de concluída a adi- ção, a mistura foi submetida a agitação sob temperatura ambiente durante lhe então aquecida a 80°C durante mais uma hora. A solução resultante foi concentrada para secagem (CARE: desprenderam-se vapores de HCl e SO2). O resíduo foi diluído com etanol (2,5 1) e neu- tralizado para pH=7 com adição de uma solução hidróxido de potássio em etanol (10% peso, cerca de. 2,0 1). O sólido formado foi removido por meio de filtragem e a solução concentrada para proporcionar o éster dietílico de 1 na forma de um sólido ceroso.
O residue foi então destilado in vácuo (90°C, 3,1 mbar) durante 2 h e o restante foi ainda a- quecido a 150°C sob 5,2 mbar durante 2 h. Sob tempera- tura ambiente, o resíduo foi solidificado. Recristali- zação a partir de MTBE/hexano (2:1) proporcionou o pro- duto desejado 2 na forma de um sólido acastanhado (960 g, 90%) . P.f. 4 9-51°C.
1H-NMR (CDC13, 300 MHz) : 6,82 (bs, 1H) ; 4,29-4,23 (m, 1H); 4,21 (q, 2H, J=7,3Hz); 2,48-2,17 (m, 4H); 1,28 (t, 3H, J=7,3Hz) ppm.
1.2 Síntese de 3: 1-terc.-butil éster 2-etil éster de ácido 2R-5-oxopirrolidina-1,2-dicarboxíIico
A uma solução submetida a agitação de pi- roglutamato de etila 2 (900 g, 5,73 mol) em diclorome- tano (8,0 1) em um reator, di-terc-butildicarbonato (2,5 kg, 11,5 mol), trietilamina (800 ml, 5,73 mol) e DMAP (700 g, 5,73 mol), e a reação submetida a agitação durante 2 h. A solução de cor castanho avermelhado foi concentrada para secagem, diluída em acetato de etila (10,0 1) e lavada com HCl 3N aquoso (4x2,5 1). As ca- madas orgânicas combinadas foram lavadas com água (6x2.5 1) e salmoura (1,0 1), e submetidas a secagem sobre sulfato de sódio. A mistura de reação foi con- centrada para secagem, refrigerada em gelo e triturada com MTBE e hexano (1:1) para proporcionar um sólido castanho (390 g) . Concentração dos líquidos mãe pro- porcionou um óleo (600 g) o qual, depois de cromatogra- fia (SiO2, hexano/acetato de etila 3:1) proporcionou um sólido incolor (386 g) 3. Rendimento Total (776g, 54%) . p.f. 4 8-4 9°C.
IH-NMR (CDC13, 300 MHz) : 4,57 (dd, 1H, J=9,5Hz, J=3,3Hz); 4,20 (q, 2H, J=7,3Hz); 2, 72-1, 77 (m, 4H) ; 1,46 (s, 9H); 1,26 (t, 3H, J=7,3Hz) ppm. 1.3 Síntese de 4: Mistura de ácido 1-terc-butil éster 2-etil éster eis- e trans-2R-4-dimetilamino-5-oxopirro- lidina-1,2-dicarboxílico
A uma solução submetida a agitação de LiHMDS em THF (1M, 0,24 1, 0,24 mol) a -78°C adicionou- se letntamente uma solução de 3 (30g, 0,12 mol) em THF seco (1,0 1). Depois de agitação durante 40 min a - 78°C, adicionou-se sal de Eschenmoser (45,5 g, 0,24 mol), e prosseguiu-se com a agitação durante mais 20 minutos. Deixou-se que a mistura de reação dosse aque- cida para a temperatura ambiente e submeteu-se a agita- ção durante mais 16 horas. A mistura foi concentrada e o resíduo dividido entre acetato de etila (300 ml) e água (300 ml). A camada aquosa foi extraída novamente com acetato de etila (2x300 ml). Os extratos orgânicos combinados foram lavados com HCl 1M aquoso (3x150 ml).
A camada ácida foi imediatamente neutralizada com bi- carbonato de sódio e extraída com acetato de etila (3x300 ml). A fase orgânica foi lavada com água (300 ml), salmoura (50 ml), submetida a secagem sobre sulfa- to de sódio e concentrada para secagem para proporcio- nar o produto desejado 4 na forma de um óleo castanho claro (26,9 g, 72%), o qual foi usado diretamente na etapa seguinte.
1H-NMR (CDC13, 300 MHz) : 4,62 (dd, 1H, J=9,4Hz, J=3,3Hz);4,21 (q, 2H, J=7,3Hz); 4,18-4,07 (m, 1H); 2,57-2,20 (m, 3H); 2,22 (s, 3H); 2,17 (s, 3H); 1,47 (s, 9H); 1,24 (t, 3H, J=7,3Hz) ppm.
1.4 Síntese de 1-tertbutil éster 2-etil éster de ácido (R)-5: 2R-4-metileno-5-oxopirrolidina-1,2-dicarboxílico
Carregou-se uma autoclave (4 1) com uma solução de 4 (244,9 g, 0,74 mol) em MeOH (2,5 l) e io- dometano (138,2 ml, 2,22 mol). A mistura de reação foi submetida a agitação sob temperatura ambiente durante 48h. O solvente foi removido e o resíduo dividido en- tre acetato de etila (21) e NaHCO3 10% (11). A fase aquosa foi extraída novamente com acetato de etila (3x500 ml). As camadas orgânicas combinadas foram sub- metidas a secagem sobre sulfato de sódio, filtradas e concentradas para secagem. 0 resíduo foi purifcado por cromatografia instantânea (hexano/acetato de etila 4:1 -> Acetato de etila) para obter-se (R)-5 na forma de um óleo incolor (55,1 g, 27%).
1H-NMR (CDC13, 300 MHz) : 6,23 (t, 1H, J=2,7Hz); 5,51 (t, 1H, J= 2, 2Hz) ; 4,61 (dd, 1H, J=10, 3Hz, J= 3,3Hζ); 4,22 (q, 2H, J=7,lHz); 3,17-3,05 (m, 1H) ; 2, 75-2, 64 (m, 1H) ; 1,47 (s, 9H) ; 1,23 (t, 3H, J=7,lHz) ppm-
EXEMPLO 2
Sintese de um composto da fórmula IV: 1-tercbutil és ter 2-etil éster de ácido (R)-5 (2R-4-metileno-5- oxopirrolidina-1,2-dicarboxilico)
A síntese do composto do título está ilus- trada no Esquema 4 em seguida e inclui as três varian- tes da síntese do composto da fórmula 5 exposta na des- crição .
Esquema 4 <formula>formula see original document page 78</formula>
2.1 Síntese de (2R)-piroácido glutâmico (2') : Método descrito em Lennox, J. R.; Turner, S. C.; Rapo- pout, H. J. Oug. Chem. 2001, 66, 7078-7083
Aqueceu-se ácido D-glutâmico (1) (100 g, 679,7 mmol) em água (400 ml) para refluxo enquanto se submetia a agitação durante 72 horas. Fez-se passar a solução límpida resultante através de uma coluna de re- sina Dowex 50wX8 (resina de permuta iônica na forma á- cida, 135 g) e lavou-se com água até o eluente deixar de ser ácido. Os eluentes aquosos combinados foram concentrados a 50°C até serem coletados 300 ml de des- tilado. Adicionou-se metanol (500 ml) para ajudar na remoção da água remanescente e para evitar aglomeração do sólido. O sólido resultante foi submetido a secagem in vácuo para proporcionar o composto 2' na forma de um sólido branco (74,63 g, 85%).
P.f. 157 °C, [a] D22 +10,5° (c 2,0, H2O).
2.2 Síntese de etil (2R)-piroglutamato (2):
A uma suspensão submetida a agitação de (2R)-piroácido glutâmico 2' (1 equiv., 2,017 g, 15,62 mmol) em EtOH (2 ml/mmol, 8 ml), adicionou-se SOCl2 (0,1 equiv., 115 μΐ, 1,56 mmol). A solução resultante foi submetida a agitação sob temperatura ambiente du- rante 16 horas. A mistura de reação foi neutralizada com IM HCO3Na aquoso. O solvente foi concentrado in vácuo e o resíduo foi extraído com AcOEt (3 χ 25 ml).
A fase orgânica foi submetida a secagem sobre Na2SO4 anídrico e concentrada in vácuo. 0 composto 2 foi ob- tido na forma de um óleo incolor o qual foi usado na etapa seguinte sem qualquer outra purificação (79%).
2.3 Síntese de etila (2.R) -N- (terc-butoxicarbonil) pi- roglutamato (3):
A uma solução fria (5-10°C) submetida a agitação do éster 2 (1 equiv, 78,6 g, 0,50 mol) e A- dimetilaminopiridina (DMAP) (0,1 equiv., 6,10 g, 50 mmol) em MeCN (0,3 ml/mmol, 180 ml), adicionou-se t- Butil Dicarbonato (Boc)2O (1,2 equiv., 131 g, 0,60 mol) por partes (30 minutos). A solução vermelha resultante foi submetida a agitação sob temperatura ambiente du- rante 3 horas. Então, a mistura foi concentrada in vá- cuo e o resíduo foi purificado por cromatografia ins- tantânea (EtOAciCH2Cl2, 1:4) para proporcionar 3 na forma de um sólido amarelado (95%). P.f. 48-49 °C.
2.4 Síntese de enaminona (4'):
Método descrito em Dieterich, P.; Young, D. W. Oug. Bi- omol. Chem. 2006, 4, 1492-1496.
A uma solução de piroglutamato 3 (1 e- quiv., 83,1 g, 0,32 mol) em 1,2-dimetoxietano (2,3 ml/mmol, 736 ml), adicionou-se tBuOCH(NMe2)2 (reagente de Bredereck, 1,5 equiv., 100 ml, 0,48 mol), e a mistu- ra resultante foi aquecida para 85°C durante 15 horas.
A mistura de reação foi refrigerada para a temperatura ambiente e evaporada in vácuo. 0 oleo bruto resultante foi triturado em uma quantidade mínima de MTBE e o só- lido resultante foi filtrado. Obteve-se o composto 4' na forma de um sólido de cor laranja (59, 48 g, 59%) . Líquidos mãe foram concentrados em vácuo novamente e recristalizações sucessivas aumentaram o rendimento to- tal para 84% (84, 26 g) .
2.5 Síntese de alqueno (5):
Método descrito em WO 2004039314.
A uma solução de 4' (59,48 g, 0,19 mol) em THF (1,56 ml/mmol, 300 ml), adicionou-se 1 M HCl aquoso (1,1 equiv., 210 ml). A mistura foi submetida a agita- ção sob temperatura ambiente durante 2 horas. As cama- das aquosa e orgânica foram separadas, a fase aquosa foi descartada, e adicionaram-se K2CO3 (1,4 equiv., 37 g, 0,27 mol) e HCHO aquoso (37%) (1 ml/mmol, 190 ml) à camada orgânica. A mistura resultante foi submetida a agitação sob temperatura ambiente durante 45 minutos. As duas fases separaram-se e a camada orgânica foi co- letada e concentrada in vácuo. 0 produto bruto resul- tante foi dissolvido em (MTBE) metilfcbut iléter (400 ml), lavado com água (200ml) , Na2SO3 (aquoso 20%, 200 ml) e água (200 ml). A camada orgânica foi submetida a secagem sobre Na2SO4 anídrico, filtrada e evaporada in vácuo. O composto 5 foi obtido depois de purificação por uma cromatografia instantânea curta na forma de um óleo incolor (20,8 g, 40%).
1H-NMR (CDCl3, 300 MHz) : 6,23 (t, 1H, J=2,7Hz); 5,51 (t, 1H, J= 2,2Hz); 4,61 (dd, 1H, J=10,3Hz, J=3,3Hz); 4,22 (q, 2H, J=7,lHz); 3,17-3,05 (m, 1H); 2,75-2,64 (m, 1H); 1,47 (s, 9H); 1,23 (t, 3H, J=7,lHz) ppm.
EXEMPLO 3
3.1 Síntese de um composto da fórmula V: N-Tosilimino- benziliodinana
A síntese do composto do título está ilus- trada no Esquema 5.
Esquema 5
<formula>formula see original document page 81</formula>
Submeteram-se a agitação p-Toluenossulfo- namida (5,13 g), hidróxido de potássio (4,20 g) e meta- nol (120 ml) em um balão de vidro cônico em um banho de gelo, assegurando-se que a mistura de reação ficasse abaixo de 10°C. Adicionou-se diacetato de iodobenzeno (9,60 g) à mistura submetida a agitação e a solução de coloração amarela resultante foi submetida a agitação sob temperatura ambiente durante 3,5 horas. A mistura de reação foi vazada em um grande excesso de água gela- da e submetida a agitação durante 1 hora. Ao assentar durante a noite, precipitou-se um sólido de coloração amarela. O sólido amarelo claro foi isolado por meio de filtragem e submetido a secagem com um fluxo de ar através de um funil "buchner". Utilizaram-se diversas partes de éter, em que o produto é insolúvel, para re- mover por lavagem qualquer iodobenzeno presente. 0 só- lido amarelo foi dissolvido na quantidade mínima possí- vel de metanol em ebulição. A solução foi colocada em um congelador durante a noite, depois do que se recupe- rou um sólido incolor por meio de filtragem. (5,1 g, 46%).
3.2 Síntese de um composto da fórmula V: N-Tosilimi- nobenziliodinana
Adicionou-se KOH (2,5 equiv, 393 g, 7,00 mol) a uma solução de p-toluenossulfonamida (1 equiv., 480 g, 2,80 mol) em MeOH (11 1) e a mistura foi subme- tida a agitação sob temperatura ambiente até o dissol- vimento completo. A mistura foi refrigerada para a 0°C e adicionou-se diacetato de iodobenzeno (1 equiv., 903 g, 2,80 mol) e submetida a agitação a 0°C durante 40 minutos. A reação foi aquecida lentamente para 22°C e submetida a agitação durante a noite. O sólido formado foi filtrado, lavado com Et2O (250 ml) e submetido a secagem sob vácuo à temperatura ambiente (285 g). Ob- tiveram-se frações adicionais quando os líquidos de o- rigem foram refrigerados para 0°C e uma mistura de H20/ice (5 1) foi adicionada lentamente. A mistura re- sultante foi armazenada a 5°C durante a noite. Então, o precipitado foi filtrado, lavado com Et2O (250 ml) e submetido a secagem sob vácuo à temperatura ambiente (479 g, 73% de rendimento combinado).
EXEMPLO 4 Sintese de bromidrato de brometo de (3R,5R-1-(3-amino- 5-carboxi-2-oxopirrolidin-3-ilmetil)piridinio) 9c e bromidrato de brometo de (3S,5R-1-(3-amino-5-carboxi-2- oxopirrolidin-3-ilmetil)piridinio) 9d
A síntese dos compostos do título (9c e 9d) encontra-se ilustrada no Esquema 6.
Esquema 6 <formula>formula see original document page 84</formula>
4.1.1 Síntese de 5-terc-butiléster 6-eti éster de ácido 3R, 6R-4-oxo-1-(4-toluenossulfonil)-1,5-diazaspiro[2,4] heptano-5,6-dicarboxilico 7c e 5-terc-butiléster 6-etil éster de ácido 3S, 6R-4-oxo-l-(4-toluenossulfo-nil)- 1,5-diazaspiro[2,4]heptano-5, 6-dicarboxíIico 7d
A uma solução fria (0°C, banho de água ge- lada) de (R)-5 (3,02 g, 11,21 mmol) em acetonitrila se- co (12 ml), adicionou-se PhI=NTs (vide Exemplo 2) (6,27 g, 16,8 mmol) em uma parte, seguido por Cu(acac)2 (293 mg, 1,12 mmol). A mistura heterogênea resultante foi submetida a agitação a 0°C durante 15 minutos, e foi deixada aquecer para a temperatura ambiente e submetida a agitação durante a noite. À mistura resultante adi- cionou-se IM NaOH (50 ml), e a mistura foi extraída com
EtOAc (3x 25 ml). As camadas orgânicas foram então la- vadas com salmoura (25 ml) , submetidas a secagem sobre Na2S04 anídrico e evaporadas para secagem. 0 óleo bru- to foi purificado por cromatografia instantânea (SÍO2, hexanos/EtOAc: 2/1) para proporcionar a aziridina 7c (730 mg) e 7d (287 mg) na forma de sólidos brancos (rendimento combinado: 23%).
7c:
P.f.: 94-95°C
[a] o25°c= +42° (0,032, CHCl3) IR (KBr, cm-1): 2977, 2928, 1808, 1746, 1352, 1298, 1251, 1192, 1161, 988,690.
1H-NMR (CDCI3, 500 MHz) (7c): 7,82 (d, 2H, J=7,3Hz); 7,31 (d, 2H, J=7,7Hz); 4,74 (dd, 1H, J=9,7Hz, J=2,02Hz); 4,25-4, 22 (m, 2H) ; 3,28 (dd, 1H, J=14,4Hz, J= 9, 7Hζ) ; 2,78 (s, 1H) ; 2,57 (s, 1H) ; 2,53 (dd, 1H, J=I4 , 4Hz, J=2, 02Hz) ; 2,42 (s, 3H) ; 1,49 (s, 9H) ; 1,29 (t, 3Η, J= 7,OHz) ppm.
13C (CDCl3, 125 MHz) (7c): 170, 5, 166, 9, 148, 7, 145, 1, 135,2, 129,6, 127, 9, 84, 5, 62, 0, 55, 5, 47, 1, 38,3, 27,7, 25,3, 21,5, 14,0 ppm
MS (ESI+): m/z: 339 (M+1-Boc)
7d:
P.f.: 55-56°C
[ot]D25°c= +11° (0, 036, CHCl3)
IR (KBr, cm"1): 2981, 2936, 1799, 1749, 1371, 1330, 1253, 1203, 1156, 1094, 989, 687.
1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) (7d) : 7,79 (d, 2H, J= 8,0 H ζ); 7,30 (d, 2H, J=7,7Hz); 4,70 (dd, 1H, J= 9, 4Hz, J=4, 3Hz) ; 4, 30-4,22 (m, 2H) ; 3,06 (dd, 1H, J=I5,IHz, J=4,3Hz); 2,92 (dd, 1H, J=15,4Hz, J=9,4Hz); 2, 82 (s, 1H); 2,63 (s, 1H); 2,41 (s, 3H) ; 1,49 (s, 9H) ; 1,28 (t, 3H, J=7,0Hz) ppm.
13C (CDCl3, 125 MHz) (7d) : 169, 5, 167, 1, 148, 9, 145, 0, 135, 7, 129,6, 127, 9, 84, 5, 62,1, 56, 1, 47,0, 37,1, 27,8, 24,5, 21,6, 14,0 ppm.
MS (ESI+): m/z: 339 (M+1-Boc)
4.1.2 Síntese de 5-terc-butiléster 6-etil éster de áci- do 3S, 6R-4-oxo-1-(4-toluenossulfonil)-1,5-diazaspiro [2,4]heptano-5,6-dicarboxilico 7d com desenvolvimento aperfeiçoado
A uma solução fria (0°C, banho de água ge- lada) de (R)-5 (1,84 g, 6,82 mmol) em acetonitrila se- co (7 ml) adicionou-se PhI=NTs (3,82 g, 10,2 mmol) em uma parte, seguida por Cu(acac)2 (178 mg, 0,682 mmol). A mistura resultante foi submetida a agitação a 0°C du- rante 15 minutos, então ela foi deixada aquecer para a temperatura ambiente e submetida a agitação durante a noite. A mistura resultante foi evaporada in vácuo. O óleo bruto foi purificado por cromatografia instantânea (SiO2, CH2Cl2ZEtOAc: 9/1) para proporcionar uma mistura de aziridinas isenta de impureza de p-TsNH2 (determina- da por HPLC-Ms). A mistura foi novamente cromatografa- da (SiO2, hexano/EtOAc: 2/1) até ser obtida cis- aziridina 7d na forma de uma espuma branca pura. (8%).
4.2.1 Síntese de um vaso de bromidrato de brometo 3R,5R-1-(3-amino-5-carboxi-2-oxopirrolidin-3-ilmetil) piridínio 9c
Uma mistura da aziridina 7c (200 mg, 0,46 mmol), montmorilonita MKlO (20% peso, 40 mg) e piridina (37 μl, 0,46 mmol) foi irradiada sob microondas (300 W) a 100°C, e durante 10 minutos. A mistura bruta foi di- luída com acetato de etila [EtOAc] (10 ml), filtrada e evaporada sob vácuo até análise por HPLC não mais mos- trar piridina remanescente. A betaína 8c foi usada na etapa seguinte sem outra purificação mais (93% pureza por HPLC). O óleo castanho bruto foi dissolvido em HBr aquoso a 48% (20 ml) e aquecido sob refluxo durante 18 horas. A mistura foi diluída com água e lavada com E- tOAc (3x10 ml), a fase aquosa foi evaporada para seca- gem. O óleo bruto foi purificado por cromatografia em- pregando pó de celulose:SiO2: pó de celulose: carvão vegetal ativado, (lcm:0,5 cm:0,5cm:2cm) como fase esta- cionária, proporcionando 9c na forma de um sólido (51 mg, 28%). P.f.: > 200°C.
[a] d25°C= +40° (0,041, CH3OH)
IR (KBr, cm"1): 3434, 3051, 1725, 1633, 1488, 1420, 1384, 1280, 1188, 1145, 1083, 683.
1H-NMR (D2O, 500 MHz) 8,82 (d, 2H, J=5,3Hz); 8,59 (t, 1H, J=7,8Hz) ; 8,09 (t, 2H, J=6,8Hz); 5,21 (d, 1H, J=14,3 H ζ) ; 4,93 (d, 1H, J=14,3Hz); 4,24 (t, 1H, J= 9,2 H ζ); 3,01 (dd, 1H, J=13,9Hz, J=9,3Hz); 2,11 (t, 1H, J=7,8Hz) ppm.
13C (D2O, 125 MHz) : 173,2, 173, 1, 147, 1, 145, 6, 128,6, 64,4, 64,2, 49,3, 33,0 ppm.
MS (ESI+): m/z: 236 (M+1-2Br).
4.2.2 Síntese de um vaso de bromidrato brometo de 3S,5R-1-(3-amino-5-carboxi-2-oxopirrolidin-3-ilmetil) piridinio 9d
Uma mistura da aziridina 7d (200 mg, 0,46 mmol), montmorilonita MKlO (20% peso, 40 mg) e piridina (37 μ]1, 0,46 mmol) foi irradiada sob microondas (300 W) a 100°C, e durante 10 minutos. A mistura bruta foi di- luída com EtOAc (10 ml), filtrada e evaporada sob vácuo até análise de HPLC mostrar nenhuma piridina remanes- cente. A betaína 8d foi usada na etapa seguinte sem outra purificação (pureza de 93% por HPLC) . O óleo castanho bruto foi dissolvido em HBr a 48% aquoso (20 ml) e aquecido sob refluxo durante 18 horas. A mistu- ra foi diluída com água e lavada com EtOAc (3x10 ml), a fase aquosa foi evaporada para secagem. O óleo bruto foi purificado por cromatografia empregando-se pó de celulose:Si02: pó de celulose:carvão vegetal ativado, (lcm:0,5cm:0,5cm:2cm) como fase estacionária, propor- cionando 9d na forma de um a sólido (52 mg, 28 %). P.f.> 200°C.
[α] d25°c= +40° (0.038, CH3OH)
IR (KBrf cm"1): 3435, 3051, 1721, 1631, 1509,
1475, 1422, 1384, 1280, 1190, 1144, 683.
1H-NMR (D2O, 500 MHz) 8,76 (d, 2H, J=5,3Hz); 8,59 (t, 1H, J=7,8Hz); 8,07 (t, 2H, J=6,8Hz); 5,19 (d, 1H, J=14,3 Hz); 4,78 (d, 1H, J=14,3Hz); 4,33 (t, 1H, 15 J= 9,2Hz) ; 2,90 (dd, 1H, J=13,9Hz, J=9,3Hz); 2,46 (t, 1H, J=7,8Hz) ppm.
13C (D2O, 125 MHz) : 173,3, 172, 4, 147, 0, 145, 1, 128,5, 65,6, 64,7, 49,3, 33,9 ppm.
MS (ESI+): m/z: 236 (M+1-2Br).
4.2.3 Síntese de um vaso de bromidrato brometo de 3S, 5R-1-(3-amino-5-carboxi-2-oxopirrolidin-3-ilmetil) piridínio 9d com cristalização aperfeiçoada
Uma mistura de aziridina 7d (100 mg, 0,23 mmol), montmorilonita MKlO (20% em peso, 20 mg) e piri- dina (18 μl, 0,23 mmol) foi aquecida a 90°C durante 3 horas. A mistura bruta foi diluída com EtOAc (3ml), filtrada e evaporada sob vácuo. 0 resíduo foi tritura- do em Et2O, filtrado e a betaina 8d foi obtida na forma de um sólido castanho. Este composto foi dissolvido em HBr 48% aquoso (10 ml) e aquecido sob refluxo durante 18-72 horas. A reação foi monitorada por análise de HPLC-Ms. O óleo bruto foi triturado com acetona para proporcionar um sólido castanho. Este sólido foi dis- solvido na quantidade mínima de MeOH (1ml) e Et2O ou acetona foram adicionados até ser observada a precipi- tação. O sólido foi então filtrado filtrado e submeti- do a secagem sob vácuo (CARE: o produto é altamente higroscópico). 0 processo foi repetido duas vezes e a pureza do produto foi determinada por análise de HPLC (80% de rendimento).
EXEMPLO 5
Sintese de brometo bromidrato de (3S,5S-1-(3-amino-5- carboxi-2-oxopirrolidin-3-ilmetil)piridinio) 9a e bro- meto bromidrato de (3R,5S-1-(3-amino-5-carboxi-2- oxopirrolidin-3-ilmetil)piridinio) 9b
A síntese dos compostos dos títulos (9a and 9b) encontra-se exposta no Esquema 7. Esquema 7
<formula>formula see original document page 91</formula> 5.1 Síntese de 5-terc-butiléster 6-etil éster de ácido 3S, 6S-4-oxo-1-(4-toluenossulfonil)-1,5-diazaspiro[2,4] heptano-5,6-dicarboxílico 7a e 5-terc-butiléster 6-etil éster de ácido 3R, 6S-4-oxo-l-(4-toluenossulfonil)-1,5- diazaspiro[2,4]heptano-5,6-dicarboxílico 7b
A uma solução fria (0°C, banho de água ge- lada) de (S)-5 (1,84 g, 6,82 mmol) em acetonitrila seco (7 ml) PhI=NTs (vide Exemplo 2) adicionou-se em uma parte (3,82 g, 10,2 mmol), seguida por Cu(acac)2 (178 mg, 0,682 mmol). A mistura heterogênea resultante foi submetida a agitação a 0°C durante 15 minutos, e dei- xou-se que a mesma fosse aquecida para a temperatura ambiente e submetida a agitação durante a noite. À mistura resultante adicionou-se IM NaOH (20 ml) , e a mistura foi extraída com EtOAc (3x 25 ml) . As camadas orgânicas foram então lavadas com salmoura (25 ml) , submetidas a secagem sobre Na2SO4 anídrico e evaporadas para secagem. 0 óleo bruto foi purificado por cromato- grafia instantânea (SiO2, hexanos/EtOAc: 2/1) para pro- porcionar aziridina 7a (641 mg) e 7b (478 mg) na forma de sólidos brancos (rendimento combinado: 37%). 7a:
P.f.: 95-96°C
[ot] d25°c= -57° (0.029, CHCl3) IR (KBr, cm"1): 2977, 2928, 1808, 1746, 1352, 1298, 1251, 1192, 1161, 988,690.
1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) (7a): 7,77 (d, 2H, J= 7,3 H ζ) ; 7,27 (d, 2H, J=7,7Hz); 4,70 (dd, 1H, J=9,7Hz, J= 2,02Hz); 4,21-4,17 (m, 2H) ; 3,22 (dd, 1H, J=14,4Hz, J= 9,7Hz) ; 2,75 (s, 1H) ; 2,51 (s, 1H) ; 2,49 (dd, 1H, J=14,4Hz, J=2,02Hz) ; 2,37 (s, 3H) ; 1,45 (s, 9H) ; 1,27 (t, 3H, J= 7,0Hz) ppm.
13C (CDCl3, 125 MHz) (7a): 170, 5, 166, 9, 148, 7, 145,1, 135,2, 129,6, 127,9, 84,5, 62,0, 55,5, 47,1, 38,3, 27,7, 25,3, 21,5, 14,0 ppm
MS (ESI+): m/z: 339 (M+l-Boc)
7b:
P.f.: 57-58°C
[ot] d25°c= -13° (0,068, CHCl3)
IR (KBr, cm"1) : 2982, 2936, 1799, 1749, 1371, 1330, 1252, 1203, 1154, 1093, 989, 687.
1H-NMR (CDCl3, 500 MHz) (7b): 7.78 (d, 2H, J= 8.0 Hz); 7.29 (d, 2H, J=7.7Hz); 4,70 (dd, 1H, J=9,4Hz, J= 4, 3 Hz) ; 4, 29-4, 20 (m, 2H) ; 3,04 (dd, 1H, J=15,lHz, J=4,3Hz); 2,91 (dd, 1H, J=15,4Hz, J=9,4Hz); 2,82 (s, 1H); 2,63 (s, 1H); 2,40 (s, 3H); 1,48 (s, 9H) ; 1,29 (t, 3H, J=7,OHz) ppm.
13C (CDCl3, 125 MHz) (7b): 169,5, 167, 1, 148, 9, 145, 0, 135, 7, 129, 6, 127, 9, 84, 5, 62, 1, 56, 1, 47, 0, 37,1, 27,8, 24,5, 21,6, 14,0 ppm.
MS (ESI+): m/z: 339 (M+l-Boc)
5.2.1 Síntese de um vaso de bromidrato brometo de 3S,5S-1-(3-amino-5-carboxi-2-oxopirrolidin-3-ilmetil) piridínio 9a
Uma mistura de aziridina 7a (311 mg, 0,71 mmol), montmorilonita MKlO (20% em peso, 60 mg) e piri- dina (58 μΐ, 0,71 mmol) foi irradiada sob microondas (300 W) a 100°C, e durante 10 minutos. A mistura bruta foi diluída com EtOAc (IOml), filtrada e evaporada sob vácuo até análise por HPLC mostrar não haver piridina remanescente. A betaína 8a foi usada na etapa seguinte sem qualquer outra purificação (93% de pureza por meio de HPLC).
O óleo bruto castanho foi dissolvido em HBr a 48% aquoso (30 ml) e aquecido sob refluxo durante 18 horas. A mistura foi diluída com água e lavada com EtOAc (3x10 ml), a fase aquosa foi evaporada para seca- gem. O óleo bruto foi purificado por cromatografia em- pregando pó de celulose: Si02: pó de celulose: carvão vegetal ativado, (1 cm:0,5cm:0,5cm:2cm) como fase esta- cionária, proporcionando 9a na forma de um sólido (110 mg, 40%) .
P.f.: > 200°C
[a] d25°c= -49o (0.069, CH3OH)
IR (KBr, cm"1): 3433, 3051, 1724, 1633, 1488, 1420, 1384, 1281, 1188, 1144, 1083, 683.
1H-NMR (D2O, 500 MHz) 8,82 (d, 2H, J=5,3Hz); 8,59 (t, 1H, J=7, 8Hz) ; 8,08 (t, 2H, J=6,8Hz); 5,23 (d, 1H, J=14,3Hz); 4,97 (d, 1H, J=14,3Hz); 4,28 (t,1H, J= 9,2 Hz) ; 3,06 (dd, 1H, J=13,9Hz, J=9,3Hz); 2,13 (t, 1H, J=7,8Hz) ppm.
13C (D2O, 125 MHz): 173, 1, 172, 6, 147, 2, 145, 6, 128,6, 63,9, 63,7, 49,2, 32,7 ppm. MS (ESI+): m/z: 236 (M+1-2Br)
5.2.2 Síntese em um vaso de bromidrato brometo de 3R,5S-1- (3-amino-5-carboxi-2-oxopirrolidin-3-ilmetil) piridínio 9b
Uma mistura de aziridina 7b (200 mg, 0,46 mmol), montmorilonita MKlO (20% em peso, 40 mg) e piri- dina (37 μl, 0,46 mmol) foi irradiada sob microondas (300 W) a 100°C, e durante 10 minutos. A mistura bruta foi diluída com EtOAc (IOml), filtrada e evaporada sob vácuo até análise por HPLC não mais mostrar piridina remanescente. A betaína 8b foi usada na etapa seguinte sem qualquer outra purificação (93% de pureza por H- PLC). O óleo castanho bruto foi dissolvido em HBr a- quoso a 48% (20 ml) e aquecido sob refluxo durante 18 horas. A mistura foi diluída com água e lavada com E- tOAc (2x10 ml), a fase aquosa foi evaporada para seca- gem. O óleo bruto foi purificado por cromatografia em- pregando-se pó de celulose: SÍ02: pó de celulose: car- vão vegetal ativado, (1 cm:0,5 cm:0,5 cm:2 cm) como fa- se estacionária, rendimento 9b na forma de um sólido
(44 mg, 24%). P.f.> 200°C.
[cc]d25°c= -09o (0.12, CH3OH)
IR (KBr, cm"1): 3435, 3049, 1724, 1631, 1513, 1475, 1420, 1384, 1280, 1190, 1144, 683.
1H-NMR (D2O, 500 MHz) 8,82 (d, 2H, J=5,3Hz); 8,59 (t, 1H, J=7,8Hz) ; 8,08 (t, 2H, J=6,8Hz); 5,23 (d, 1H, J=14,3 H ζ); 4,97 (d, 1H, J=14,3Hz); 4,28 (t, 1H, J= 9,2 Hz); 3,06 (dd, 1Η, J=13,9Hz, J=9,3Hz); 2,13 (t, 1H, J=7,8Hz) ppm.
13C (D2O, 125 MHz): 173, 4, 172,4, 147, 0, 145, 0, 128,5, 65,7, 64,8, 49,3, 33,9 ppm.
MS (ESI+): m/z: 236 (M+l-2Br)
EXEMPLO 6
Sintese Gradual de bromidrato brometo de 3S,5S-l-(3- amino-5-carboxi-2-oxopirrolidin-3-ilmetil) piridinio
6.1 Síntese de Betaína 8a
Seguindo-se o mesmo procedimento que no exemplo 5, submeteu-se a irradiação uma mistura de azi- ridina 7a (311 mg, 0,71 mmol), montmorilonita MKlO (20% em peso,, 60 mg) e piridina (58 μl, 0,71 mmol) sob mi- croondas (300 W) a 100°C, e durante 10 minutos. A mis- tura bruta foi diluída com EtOAc (10ml), filtrada e e- vaporada sob vácuo até análise por HPLC não mais mos- trar piridina remanescente. A betaína 8a foi purifica- da por tratamento com éter dietílico, sendo o produto isolado na forma de um sólido branco.
P.f.: 127-128 0°C
IR (KBr, cm-1): 3434, 2980, 1786, 1746, 1489, 1370, 1311, 1287, 1199, 1153, 1121, 555.
1H-NMR (CDCl3, 300 MHz) : 9,2 (d, 2H, J=5,6Hz); 8,3 (t, 1H, J= 7,7Hζ) ; 7,89 (t, 2H, J=6,9Hz); 7,69 (d, 2H, J= 8, 0 H ζ) ; 7,10 (d, 2H, J=8,0Hz); 5,07 (d, 1H, J=13,0 H ζ); 4,89 (d, 1H, J=12,6Hz); 4,27 (t, 2H, J= 7 , 1Hz) ; 4,20-4,13 (m, 2Η) ; 2,81 (dd, 1Η, J=12,8Hz, J= 7, 1Hz) ; 2,31 (s, 3Η) ; 2, 04-1, 98 (m, 1Η) ; 1,38 (s, 9H); 1,25 (t, 3H, J=7,lHz) ppm.
MS (ESI+): m/z: 518 (M+l).
Alternativamente, a betaína 8a foi obtida por aquecimento da mesma mistura de reação (aziridina 7a (311 mg, 0,71 mmol), montmorilonita MKlO (20% em pe- so,, 60 mg) e piridina (58 μl, 0,71 mmol)) a 90°C du- rante 7 horas. A mistura bruta foi diluída com EtOAc (10ml), filtrada e evaporada sob vácuo até análise por HPLC não mais mostrar piridina remanescente. O rendi- mento obtido foi similar ao rendimento obtido utilizan- do-se microondas.
6.2 Síntese de bromidrato de brometo de 3S,5S-1-(3- amino-5-carboxi-2-oxopirrolidin-3-ilmetil)piridínio 9a
Dissolveu-se betaína pura 8a obtida na e- tapa anterior em HBr aquoso a 48% (30 ml) e aqueceu-se sob refluxo durante 18 horas. A mistura foi diluída com água e lavada com EtOAc (3x10 ml), a fase aquosa foi evaporada para secagem. O óleo bruto foi purifica- do por cromatografia empregando-se pó de celulose: Si- O2: pó de celulose: carvão vegetal ativado, (1 cm:0,5 cm:0,5 cm: 2 cm) como fase estacionária, proporcionando 9a na forma de um sólido (110 mg, 40%). P.f.: > 200°C.
[a] d25°C= -49° (0,069, CH3OH)
IR (KBr, cm"1): 3433, 3051, 1724, 1633, 1488, 1420, 1384, 1281, 1188, 1144, 1083, 683.
1H-NMR (D2O, 500 MHz) 8,82 (d, 2H, J=5,3Hz); 8,59 (t, 1Η, J= 7.8Hζ) ; 8,08 (t, 2Η, J=6,8Hz); 5,23 (d, 1H, J=14,3Hz); 4,97 (d, 1H, J=14,3Hz); 4,28 (t, 1H, J= 9,2 H ζ); 3,06 (dd, 1H, J=13,9Hz, J=9,3Hz); 2,13 (t, 1H, J=7,8Hz) ppm.
13C (D2O, 125 MHz) : 173, 1, 172, 6, 147, 2, 145, 6, 128,6, 63.9, 63,7, 49,2, 32,7 ppm.
MS (ESI+): m/z: 236 (M+l-2Br).
EXEMPLO 7
Efeito dos diferentes isômeros (9a, 9b, 9c e 9d) no crescimento de tumores.
Tvimor submetido a ensaio: Renca
Este ensaio foi realizado a fim de se ve- rificar o efeito em cada estereoisômero no crescimento de tumor in vivo em camundongos provocados com células Renca. O seu efeito foi comparado com placebo. Os es- tereoisômeros submetidos a ensaio foram:
Isômero 1: Hidrobrometo brometo de 3R,5S-1-(3- amino-5-carboxi-2-oxopirrolidin-3-ilmetil)piridinio (9b)
Isômero 2: Hidrobrometo brometo de 3R,5R-1-(3- amino-5-carboxi-2-oxopirrolidin-3-ilmetil)piridinio (9c)
Isômero 3: Hidrobrometo brometo de 3S,5S-1-(3- amino-5-carboxi-2-oxopirrolidin-3-ilmetil)piridinio (9a)
Isômero 4: Hidrobrometo brometo de 3S,5R-1-(3- amino-5-carboxi-2-oxopirrolidin-3-ilmetil)piridinio Estes ísômeros podem ser obtidos de acordo com o processo exposto nos Exemplos 4, 5 e 6.
MATERIAIS E MÉTODOS
Tumor
O Renca é um carcinoma de célula renal o- riginado na variedade de camundongo Balb/c, e portanto singenético em camundongos com antecedentes genéticos Balb/c [Melder RJ et al., Câncer Immunol. Immunother., 2005, 54:535-547; Felluga B et al., 1969, J. Natl. Cân- cer Inst. 43:319-333]. 0 Renca é considerado um tumor imunogênico moderado e que é usado como modelo adequado durante o teste de abordagens de imunointervenção [Sa- lup RR, et al., 1992, The Journal de Urology, 147:1120-1123].
Mantiveram-se células do Renca (CLS, Eppe- lheim, Germany) in vitro por passagens em série a cada ery 3-4 dias. As culturas foram realizadas com meio RPMI (RPMI, 10% soro de bezerro fetal, 2 mM L- glutamina, aminoácidos não essenciais, piruvato de só- dio 1 mM, 20 mM HEPES, 80 pg/ml gentamicina; todos eles adquiridos a partir da Sigma, St. Louis, MO, USA) por semeadura de 5 χ 10^6 células em frascos de cultura de 75 cm2. Células de tumor coletadas a partir de cultu- ras de 48 horas na tripsinização (Sigma, St. Louis, MO, USA) foram usadas como fonte de células Renca durante os estudos descritos adiante. Drogas no estudo
Ingrediente ativo
Isômero 1 (9b) a 2,815 mg/ml em solução salina fi- siológica estéril.
Isômero 2 (9c) a 2,520 mg/ml em solução salina fi- siológica estéril.
Isômero 3 (9a) a 2,080 mg/ml em solução salina fi- siológica estéril.
Isômero 4 (9d) a 3,040 mg/ml em solução salina fi- siológica estéril.
Placebo
Solução salina fisiológica (Grifols, Barcelona, Spain)
Camundongos
<table>table see original document page 100</column></row><table>
Tamanho da Amostra De acordo com os dados anteriores o tama- nho da amostra necessária para atingir significado foi de 2 6 animais por grupo. Este tamanho de amostra foi calculado utilizando-se Epi-info v6.0 software [Fleiss. Statistical Methods for rates and Proportions. 2nd Ed, Wiley, 1981: 38-45] e foi avaliado para uma potência estatística de 0,8, com um nível de segurança de 0,95 para uma diminuição dupla na superfície de tumor e uma relação de controle-caso 1-1.
Equipamento
Coberta de fluxo laminar, banho, microscó- pio invertido, câmara de contagem, incubadora de CO2, centrífuga, calibrador, balanças, pipetas ajustáveis, recipiente de nitrogênio, refrigerador/congelador e grades para camundongos imunodeficientes.
Reagentes
Trypan blue (Sigma, St. Louis, MO, USA) Sterile PBS (Sigma, St. Louis, MO, USA) Solução salina fisiológica (Grifols, Barcelona, Spain)
Dose, veiculo, via e volume de administração
Dose
Cada isômero foi testado em níveis de dose de 260 ng administradas nos dias 6, 7 e 14 depois da inoculação de tumor. Veículo O veículo em que os isômeros foram diluí- dos foi salino fisiológico.
Via e volume de administração
Os tratamentos foram administrados por via intraperitoneal (i.p.). O volume inoculado foi de 0,2 ml/animal. Escolheu-se esta via porque é a que se en- contra descrita no método original [Pérez S, et al., 2003, Clinicai Câncer Research. 9:5776-5785].
Concepção do estudo
Os tumores foram estabelecidos por inocu- lação subcutânea no flanco traseiro. Camundongos (Balb/c) foram inoculados com 0,2 ml contendo 10^5 célu- las Renca viáveis. O dia de inoculação subcutânea sera considerado o Dia 0 do teste.
Camundongos Balb/c inoculados com células Renca foram distribuídos em 5 grupos experimentais:
<table>table see original document page 102</column></row><table> * Dose por dia e camundongo
Observaram-se os camundongos diariamente e o tamanho do tumor registrado duas vezes por semana. Isto foi realizado pela medição de dois diâmetros per- pendiculares (L/W) com um calibrador. Estas medidas foram usadas para se obterem a superfície e volume do tumor:
Superfície do tumor = LxW (mm2) Volume do tumor = L χ W2 χ 1/2 (mm3)
Os resultados foram expressos como valores simples e/ou como a ± SD média ou mediana a partir de cada grupo experimental.
Estatística
Realizou-se um estudo de controle de caso com camundongos tratados e de controle a fim de deter- minar se estavam presentes diferenças entre isômeros e administração de placebo. Os dados obtidos (superfície e volume de tumor) foram testados para distribuição normal dentro dos grupos -Kolmogorov Smirnov test p<0,05-. Realizou-se um teste de hipóteses não- paramétricas para amostras não emparelhadas a fim de comparar se os isômeros tinham um efeito prejudicial no crescimento dos tumores. Escolheu-se o teste-U de Mann Withney por ser aquele melhor conhecido para os testes não-paramétricos, de qualquer forma, os resultados para este teste são equivalentes tanto para aqueles da soma de faixas de Wilcoxon quanto o teste de dois grupos de Kruskal-Wallis.
Devido à alta dispersão de dados, exlui- ram-se do estudo os periféricos (animais afora do per- centil 25 ou acima do percentil 75 para superfície de tumor no dia 25).
O software estatístico usado foi SPSSvl2.0
RESULTADOS
Efeito inibitório de isômeros no crescimento de células de tumor Renca
Trinta camundongos por grupo (trinta e um a partir do grupo de placebo) foram planejados para se- rem estudados. Dois camundongos provenientes do grupo de isômero 2 morreram por causas desconhecidas na se- gunda semana depois da inoculação de tumor e foram excluídos.
As Tabelas 1 e 2 mostram os resultados de cada grupo experimental expressos como os valores mé- dios. Estas tabelas resumem a media da superfície (Ta- bela 1) ou volume (Tabela 2) em isômeros ou grupo de camundongos P.S. em cada dia marcado. Tabela 1
SUPERFÍCIE (mm2)
Valores globais (Medianos)
<table>table see original document page 105</column></row><table>
Tabela 2
VOLUME (mm3)
Valores globais (Medianos
<table>table see original document page 105</column></row><table>
As Tabelas 3 e 4 mostram os resultados de cada grupo experimental expressos como valores médios. Estas tabelas resumem a média de superfície (Tabela 3) ou volume (Tabela 4) em isômeros ou grupos de camundon- gos P.S. em cada dia marcado.
Tabela 3
SUPERFÍCIE (mm2)
Valores globais (Média)
<table>table see original document page 106</column></row><table>
Tabela 4
VOLUME (mm3)
Valores globais (Média)
<table>table see original document page 106</column></row><table> Ocorreram diferenças na taxa de crescimen- to de tumor Renca entre os camundongos que receberam isômero 3 versus placebo. Estas diferenças, sejam elas na superfície ou volume, foram estatisticamente signi- ficativas (p < 0,05) nos dias 18° e 25° do desenvolvi- mento de tumor quando calculado pelo teste Mann-Whitney U.
Ocorreram diferenças na taxa de crescimen- to de tumor Renca entre camundongos recebendo isômero 4 versus placebo. Estas diferenças, sejam elas na super- fície ou volume, foram estatisticamente significativas (p < 0,01) todos os dias marcados depois do 14° dia de desenvolvimento de tumor quando calculado pelo teste Mann-Whitney U.
A Figura 1 representa o gráfico da media das superfícies de tumores (Grupos A1, C1, C2, C3, C4) enquanto que a Figura 2 representa o gráfico da média dos volumes de tumores (Grupos Al, C1, C2, C3, C4). Tal como pode ser observado nestas figuras, ocorreram diferenças na taxa de crescimento de tumor Renca entre camundongos que receberam isômero 3 e isômero 4 versus placebo.
A Figura 3 representa o gráfico da média de superfícies de tumores (Grupos Al, C1, C2, C3, CA) enquanto que a Figura 4 representa o gráfico da média de volumes de tumores (Grupos Al, C1, C2, C3, C4). Tal como pode ser observado nestas figuras, ocorreram dife- renças na taxa de crescimento de tumores Renca entre camundongos que receberam isômero 3 e isômero 4 versus placebo.
Os resultados mostram que o isômero 3 e o isômero 4 inibem o crescimento in vivo do carcinoma de células renais (Renca), com o isômero 4 mostrando o e- feito inibidor mais elevado no crescimento do tumor Renca.
EXEMPLO 8
Comparação do crescimento de tumores entre isômeros di- ferentes (9a, 9b, 9c e 9d) e a mistura de BLAS.
Tumor stibmetido a ensaio: ASB XIV
Este ensaio foi realizado com a finalidade de comparar o efeito de cada estereoisômero no cresci- mento de tumores in vivo em camundongos com o efeito da mistura de todos eles provocados com tumores ASB XIV.
Os estereoisômeros submetidos a ensaio foram os mesmos que no exemplo 7 anteriormente exposto, mais uma mistu- ra de todos eles (BLAS). O equipamento (quando neces- sário), reagentes, dose, veiculo e via e volume de ad- ministração foram os mesmos usados no exemplo 7.
MATERIAIS E MÉTODOS
Tumor
ASB XIV é um carcinoma de células escamo- sas pulmonares originadas na espécie de camundongo Balb/c e, portanto, singênica em camundongos com ante- cedente genético Balb/c.
Células ASB XIV (CLS, Eppelheim, Germany) foram mantidas in vitro por passagens em série a cada 3-4 dias. Realizaram-se culturas com meio RPMI (RPMIf soro de bezerro fetal a 10%, 2 mM L-glutamina, aminoá- cidos não essenciais, 1 mM piruvato de sódio, 20 mM HE- PES, 80 μg/ml gentamicina (todos eles foram adquiridos a partir da Sigma, St. Louis, MO, USA) por semeadura de 5 χ 10'6 células em frascos de cultura de 75 cm2. No presente exemplo, utilizaram-se células de tumor cole- tadas a partir de culturas de 48 horas na tripsinização (Sigma, St. Louis, MO, USA) como fonte de células ASB XIV.
DROGA NO ESTUDO
Ingrediente ativo
BLAS (mistura de isômeros 1, 2, 3 e 4) sob uma concentração de 65 pg/ml em solução salina fisio- lógica estéril. Isômero 1 (9b) sob uma concentra- ção de 65 μg/ml em solução salina fisiológica es- téril .
Isômero 2 (9c) sob uma concentração de 65 μg/ml em solução salina fisiológica estéril.
Isômero 3 (9a) sob uma concentração de 65 μg/ml em solução salina fisiológica estéril.
Isômero 4 (9d) sob uma concentração de 65 μg/ml em solução salina fisiológica estéril.
Placebo
Solução salina fisiológica (Grifols, Barcelona, Spain) Camundongo s
<table>table see original document page 110</column></row><table>
Tamanho da Amostra
De acordo com os dados anteriores o tama- nho da amostra necessária para atingir significado foi de 26 animais por grupo. Este tamanho de amostra foi calculado utilizando-se software Epi-info v6.0 e foi avaliado para uma potência estatística de 0,8, com um nível de segurança de 0,95 para uma diminuição dupla na superfície de tumor e uma relação de controle-caso 1-1.
Concepção do estudo
Os tumores foram estabelecidos por inocu- lação subcutânea no flanco traseiro. Inocularam-se ca- mundongos (Balb/c) com 0,2 ml contendo 10^5 células ASB XIV viáveis. O dia de inoculação subcutânea será con- siderado como o Dia 0 do teste.
Camundongos Balb/c inoculados com células ASB XIV foram distribuídos em 6 grupos experimentais:
<table>table see original document page 111</column></row><table>
* Dose por dia e camundongo
Observaram-se os camundongos diariamente e o tamanho do tumor registrado duas vezes por semana. Isto foi realizado por meio da medição de dois diâme- tros perpendiculares (d1/d2) com um calibrador. Estas medidas foram usadas para se obter a superfície e o vo- lume do tumor:
Superfície do tumor = d1 χ d2 (mm2)
Volume do tumor = d1 χ d2^2 χ 1/2 (mm3)
Os resultados foram expressos como valores simples e/ou como a ± SD média ou mediana a partir de cada grupo experimental.
Estatística
Realizou-se um estudo de controle de caso com camundongos tratados e de controle a fim de deter- minar se estavam presentes diferenças entre BLAS ou ca- da estereoisômero diferente e administração de placebo.
Os dados obtidos (superfície e volume de tumor) foram testados para distribuição normal dentro dos grupos - Kolmogorov Smirnov teste p<0,05-. Realizou-se um teste de hipóteses não-paramétricas para amostras não empare- lhadas a fim de comparar se BLAS teve um efeito preju- dicial no crescimento dos tumores. Escolheu-se o tes- te-U de Mann Withney por ser aquele melhor conhecido para os testes não-paramétricos, de qualquer forma, os resultados para este teste são equivalentes tanto para aqueles da soma de faixas de Wilcoxon quanto o teste de dois grupos de Kruskal-Wallis.
Devido à alta dispersão de dados, foram excluídos do estudo os periféricos (animais afora do percentual 10 ou acima do percentual 90 para superfície de tumor no dia 33). O software estatístico usado foi SPSSvl2.0
RESULTADOS
Efeito inibitório de BLAS ou cada isômero no crescimen- to de células de tumor ASB XIV
Trinta e um camundongos por grupo (trinta e dois a partir do grupo de placebo) foram planejados para serem estudados. Dois camundongos provenientes do grupo de isômero 4 (9d) morreram por causas desconheci- das na primeira semana depois da inoculação de tumor e foram excluídos.
As Tabelas 5 e 6 mostram os resultados de cada grupo experimental expressos como os valores mé- dios. Estas tabelas resumem a media da superfície ou volume em BLAS, em isômeros ou grupo de camundongos P.S. em cada dia marcado.
Tabela 5
SUPERFÍCIE (mm2)
Valores globais (Medianos)
<table>table see original document page 113</column></row><table> Tabela 6
<table>table see original document page 114</column></row><table>
As Tabelas 7 e 8 mostram os resultados de cada grupo experimental expressos como os valores médios. Estas tabelas resumem a media de superfície ou volume em BLAS, isômeros ou P.S. em grupo camundongos em cada dia marcado.
Tabela 7
SUPERFÍCIE (mm2)
Valores globais (Médios)
<table>table see original document page 114</column></row><table> Tabela 8
VOLUME (mm3)
Valores globais (Médios)
<table>table see original document page 115</column></row><table>
Ocorreram diferenças na taxa de crescimen- to de tumor ASB XIV entre os camundongos que receberam BLAS versus placebo. Estas diferenças, sejam elas na superfície ou no volume, foram estatisticamente signi- ficativas (p < 0,05) todos os dias marcados depois do 26° dia de desenvolvimento de tumor conforme calculado pelo teste Mann-Whitney U.
Ocorreram diferenças na taxa de crescimen- to de tumor ASB XIV entre camundongos que receberam I- sômero 3 versus placebo. Estas diferenças, sejam elas na superfície ou no volume, foram estatisticamente sig- nificativas (p < 0,05) todos os dias marcados depois do 26° dia de desenvolvimento de tumor quando calculado pelo teste Mann-Whitney U.
Ocorreram diferenças na taxa de crescimen- to de tumor ASB XIV entre camundongos que receberam I- sômero 4 versus placebo. Estas diferenças, sejam elas na superfície ou no volume, foram estatisticamente sig- nificativas (ρ < 0,05) todos os dias marcados depois do 26° dia de desenvolvimento de tumor quando calculado pelo teste Mann-Whitney U.
BLAS, Isômero 3 e Isômero 4 inibem o cres- cimento in vivo do carcinoma de pulmão ASB XIV. Não houve diferenças entre o efeito inibitório de cada um no crescimento de tumor ASB XIV.
EXEMPLO 9
Comparação de crescimento de tumores entre diferentes isômeros (9a, 9b, 9c e 9d) e a mistura de BLAS.
Tumor submetido a ensaio: Ehlrich
Este ensaio foi realizado a fim de compa- rar o efeito de cada estereoisômero no crescimento de tumores in vivo em camundongos com o efeito da mistura de todos eles provocados com tumores de Ehlrich. Uti- lizaram-se os mesmos produtos, equipamento, reagentes, doses, veículo e via de administração que foram usados no exemplo 8.
MATERIAIS e MÉTODOS
Tumor
Inocularam-se camundongos com células de tumor de Ehrlich. Ele foi descrito como um adenocarci- noma de mamífero de murídeo. 0 tumor de Ehrlich é um carcinoma de mamífero de murídeo originalmente provoca- do em um camundongo sobrecriado, e conseqüentemente, ele pertence aos chamados tumores não-especificos (Su- biza JL, Vinuela JE, Rodriguez R, Gil J, Figueredo MA, de Ia Concha. EG. O desenvolvimento de células supres- soras naturais esplênicas (NS) em camundongos portado- res de tumor de Ehrlich.. Int J Câncer, 44:307 315; 1989). Ele pode desenvolver-se através de barreiras de histocompatibilidade e, portanto, não é uma espécie de camundongo especifica (Carry PJ, Prescott DM, Ogilvie GK. Resistance to Ehrlich ascites tumour in a strain of dystrophic mice. CancerRes., 39:2139-2140; 1979).
Mantiveram-se células de Ehrlich in vitro por passagens em série a cada 3-4 dias. Culturas foram pré-formadas com meio RPMI (RPMI, soro de bezerro fetal 10%, 2 mM L-glutamina, aminoácidos não-essenciais, 1 mM piruvato de sódio, 20 mM HEPES, 80 μς/πιΐ gentamicina; todos eles adquiridos a partir da Sigma, St. Louis, MO, USA) por semeadura de 5 χ IO6 células em frascos de cultura de 75 cm2. Células de tumor coletadas a partir de culturas de 48 horas foram usadas como a fonte de células para os estudos descritos adiante.
Camundongos <table>table see original document page 118</column></row><table>
Concepção do estudo
Os tumores foram estabelecidos por inocu- lação subcutânea no flanço traseiro. Camundongos (Balb/c) foram inoculados com 0,2 ml contendo IO5 célu- las Ehrlich viáveis. 0 dia de inoculação subcutânea será considerado o Dia 0 do teste.
Camundongos Balb/c inoculados com células Ehrlich foram distribuídos em 6 grupos experimentais: <table>table see original document page 119</column></row><table>
* Dose por dia e camundongo
Observaram-se os camundongos diariamente e o tamanho do tumor registrado duas vezes por semana.
Isto foi realizado pela medição de dois diâmetros per- pendiculares (L/W) com um calibrador. Estas medidas foram usadas para se obterem a superfície e volume do tumor:
Superfície do tumor = LxW (mm ) Volume do tumor = L χ W2 χ 1/2 (mm3)
Os resultados foram expressos como valores simples e/ou como a ± SD média ou mediana a partir de cada grupo experimental.
Estatística
Realizou-se um estudo de controle de caso com camundongos tratados e de controle a fim de deter- minar se estavam presentes diferenças entre BLAS ou ca- da estereoisômero diferente e administração de placebo.
Os dados obtidos (superfície e volume de tumor) foram testados para distribuição normal dentro dos grupos - Kolmogorov Smirnov teste p<0,05-. Realizou-se um teste de hipóteses não-paramétricas para amostras não empare- lhadas a fim de comparar se BLAS teve um efeito preju- dicial no crescimento dos tumores. Escolheu-se o tes- te-U de Mann Withney por ser aquele melhor conhecido para os testes não-paramétricos, de qualquer forma, os resultados para este teste são equivalentes tanto para aqueles da soma de faixas de Wilcoxon quanto o teste de dois grupos de Kruskal-Wallis.
O software estatístico usado foi SPSSvl2.0
RESULTADOS
Efeito inibitório de BLAS no crescimento de células de tumor Ehrlich
Planejou-se a realização do estudo de de- zesseis camundongos por grupo.
As Tabelas 9 e 10 mostram os resultados de cada grupo experimental expressos como os valores mé- dios (n(primeiro dia) é em todos os casos 16 e a dosa- gem é 260 ng/camundongo) . Estas tabelas resumem a mé- dia de superfície ou volume em BLAS, isômeros ou grupo de camundongos P.S. em cada dia marcado.
Tabela 9
SUPERFÍCIE (mm2)
Valores globais (medianos)
<table>table see original document page 121</column></row><table>Tabela 10
VOLUME (mm3)
Valores globais (medianos)
<table>table see original document page 121</column></row><table> As Tabelas 11 e 12 mostram os resultados de cada grupo experimental expressos como os valores médios (n (primeiro dia) é em todos os cases 16 e a do- sagem é 260 ng/camundongo). Estas tabelas resumem a média de superfície ou volume em BLAS, isômeros ou gru- po de camundongos P.S. em cada dia marcado.
Tabela 11
SUPERFÍCIE (mm2)
Valores globais (Média)
<table>table see original document page 122</column></row><table>
Tabela 12
<table>table see original document page 122</column></row><table> Observaram-se diferenças na taxa de cres- cimento de tumor de Ehrlich entre camundongos que rece- beram BLAS versus placebo. Estas diferenças, seja na superfície ou no volume, foram estatisticamente signi- ficativas (p < 0,05) todos os dias marcados depois do 16° dia de desenvolvimento de tumor conforme calculado pelo teste Mann-Whitney U. Nos dias 35° e 38° obser- vou-se uma tendência na superfície (p=0,056 e p=0,08, respectivamente). Nos dias 13°, 16°, 20° e 38° obser- vou-se uma tendência no volume (p=0,08, p=0,056 p=0,051 e p=0,067, respectivamente).
Observaram-se diferenças na taxa de cres- cimento de tumor de Ehrlich entre camundongos que rece- beram isômero 1 versus placebo. Estas diferenças, seja na superfície ou no volume, foram estatisticamente sig- nificativas (p < 0,05) todos os dias marcados depois do 13° dia de desenvolvimento de tumor conforme calculado pelo teste Mann-Whitney U.
Observaram-se diferenças na taxa de cres- cimento de tumor de Ehrlich entre camundongos que rece- beram isômero 2 versus placebo. Estas diferenças, seja na superfície ou no volume, foram estatisticamente sig- nificativas (p < 0,05) todos os dias marcados depois do 13° dia de desenvolvimento de tumor conforme calculado pelo teste Mann-Whitney U.
Observaram-se diferenças na taxa de cres- cimento de tumor de Ehrlich entre camundongos que rece- beram isômero 3 versus placebo. Estas diferenças, seja na superfície ou no volume, foram estatisticamente sig- nificativas (p < 0,05) todos os dias marcados depois do 8o dia de desenvolvimento de tumor conforme calculado pelo teste Mann-Whitney U.
Observaram-se diferenças na taxa de cres- cimento de tumor de Ehrlich entre camundongos que rece- beram isômero 4 versus placebo. Estas diferenças, seja na superfície ou no volume, foram estatisticamente sig- nificativas (p < 0,05) todos os dias marcados depois do 8° dia de desenvolvimento de tumor conforme calculado pelo teste Mann-Whitney U. Observou-se uma tendência no 35° e no 38°, seja na superfície e no volume (p=0,061 e p=0,08, respectivamente; p=0,102, os dois)
Observaram-se diferenças na taxa de cres- cimento de tumor de Ehrlich entre camundongos que rece- beram BLAS versus isômero 3. Estas diferenças, seja na superfície ou no volume, foram estatisticamente signi- ficativas (p < 0,05) nos dias 13°, 16°, 20° e 23° do desenvolvimento do tumor conforme calculado pelo teste
Mann-Whitney U.
BLAS, isômero 1, isômero 2, isômero 3 e isômero 4 inibem o crescimento in vivo das células de tumor de Ehrlich. O Isômero 3 mostra o efeito inibidor mais alto no crescimento de tumor de Ehrlich.
EXEMPLO 10
Efeito do isômero 4 (9d) no crescimento de diferentes tumores
Os ensaios expostos em seguida foram rea- lizados com a finalidade de verificar o efeito do isô- mero 4 (9d) em diferentes tumors seguindo-se métodos e materiais análogos àqueles usados nos exemplos 8 e 9. Em todos os casos utilizou-se como placebo solução sa- lina fisiológica estéril (Grifols, Barcelona, Spain).
O Isômero 4 (9d) foi testado nos niveis de dose indica- dos na Tabela 13 nos dias 6, 7 e 14 depois da inocula- ção do tumor. Em todos os casos o veiculo foi solução salina fisiológica e os tratamentos foram aplicados por via intraperitoneal. 0 volume inoculado foi de 0,2 ml/animal. Os resultados encontram-se ilustrados na Tabela 13.
Tabela 13
<table>table see original document page 125</column></row><table> <table>table see original document page 126</column></row><table>
EXEMPLOS 11, 12 e 13
Efeito do isômero 4 (9d) versus placebo e combinações de 9d + Cisplatin.
Tumores submetidos a ensaio: KLN 205 e célula de pulmão de Lewis
Este ensaio foi realizado a fim de se com- parar o efeito do isômero 4(9d) no crescimento de tumo- res in vivo em camundongos com o efeito da mistura de isômero 4(9d) + Cisplatin provocados com tumores KLN 205 e células de pulmão de Lewis. Utilizou-se o mesmo equipamento, reagentes, veiculo e via e volume de admi- nistração que foram usados no exemplo 7. Drogas no estudo
Nos exemplos 11, 12 e 13 utilizaram-se no estudo as seguintes drogas:
Ingrediente ativo
Cisplatin (Sigma, St. Louis, MO, USA) em solução salina fisiológica estéril.
Isômero (9d) bromidrato brometo de (3S,5R- 1-(3-amino-5-carboxi-2-oxopirrolidin-3-ilmetil) piridí- nio) em solução salina fisiológica estéril.
Placebo
Solução salina fisiológica (Grifols, Bar- celona, Spain)
Nos Exemplos 11, 12 e 13 Observaram-se os camundongos diariamente e o tamanho do tumor foi regis- trado duas vezes por semana. Isto foi realizado por meio da medição de dois diâmetros perpendiculares (dl/d2) com um calibrador. Estas medidas foram usadas para se obter a superfície e o volume do tumor: Superfície do tumor = dl χ d2 (mm2)
Volume do tumor = dl χ d22 χ 1/2 (mm3)
Os resultados foram expressos como valores simples e/ou como a ± SD média ou mediana a partir de cada grupo experimental.
EXEMPLO 11
Efeito de 9d em combinação com Cisplatin no cres- cimento de tumor.
Tvimor submetido a ensaio: KLN 205 Este ensaio foi realizado a fim de verifi- car o efeito no crescimento de tumor in vivo em camun- dongos provocados com células KLN 205. O seu efeito foi comparado com a combinação de Cisplatin mais 9d e/ou placebo.
MATERIAIS e MÉTODOS
Tumor
KLN 205 é um carcinoma de células de pul- mão originada na variedade de camundongo DBA/2, e por- tanto singênico em camundongos com antecedentes genéti- cos DBA/2 (Kaneko T e LePage GA. Growth characteristics e drug responses of a murine Iung carcinoma in vitro e in vivo. Câncer Res. 38: 2084-2090; 1978).
Mantiveram-se células KLN 205 (CLS, Eppe- lheim, Germany) in vitro por passagens em série a cada 3-4 dias. Culturas foram pré-formadas com meio RPMI (RPMI, soro de bezerro fetal 10%, 2 mM L-glutamina, a- minoácidos não-essenciais, 1 mM piruvato de sódio, 20 mM HEPES, 80 pg/ml gentamicina; todos eles adquiridos a partir da Sigma, St. Louis, MO, USA) por semeadura de 5 χ 10^6 células em frascos de cultura de 75 cm . Reali- zaram-se subculturas pela coleta de células destacadas depois de tratamento com tripsin-EDTA (Sigma, St. Louis, MO, USA) . Células de tumor coletadas a partir de culturas de 48 horas foram usadas como a fonte de células KLN 205 para os estudos descritos adiante.
Camundongos <table>table see original document page 129</column></row><table>
Dose
A Cisplatin foi testada sob níveis de dose de 65 pg administrados duas vezes por semana durante três semanas, depois da inoculação de tumor
O Isômero 4(9d) foi testado sob os níveis de dose de 250 ng administrados duas vezes por semana durante três semanas depois da inoculação do tumor.
Concepção do estudo
Os tumores foram estabelecidos por inocu- lação subcutânea no flanço traseiro direito. Camundon- gos (DBA/2) foram inoculados com 0,2 ml contendo IO5 células KLN 205 viáveis. O dia de inoculação subcutâ- nea será considerado o Dia O do teste. Camundongos DBA/2 inoculados com células
KLN 205 foram distribuídos em 6 grupos experimentais:
<table>table see original document page 130</column></row><table>
* Dose por dia e camundongo
Estatística
Realizou-se um estudo de controle de caso com camundongos tratados e de controle, a fim de deter- minar se estavam presentes diferenças entre placebo, 9d, Cisplatin ou 9d + Cisplatin. Os dados obtidos (su- perfície e volume de tumor) foram testados para distri- buição normal dentro dos grupos -Kolmogorov Smirnov test p<0,05-. Realizou-se um teste de hipóteses para- métricas para amostras não emparelhadas, a fim de com- parar se 9d e/ou Cisplatin teve um efeito sinérgico no crescimento dos tumores. Escolheu-se o teste-t por ser o melhor dos testes paramétricos conhecidos.
O software estatístico usado foi SPSSvl2.0
RESULTADOS
Efeito inibitório de 9d e/ou Cisplatin no crescimento de células de tumor KLN 205
Planejou-se o estudo de dezesseis ou de quinze camundongos por grupo.
As Tabelas 14 e 15 mostram os resultados de cada grupo experimental expressos como os valores médios. Estas tabelas resumem a média da superfície ou volume em 9d, Cisplatin, 9d + Cisplatin ou grupo de ca- mundongos P.S. em cada dia marcado.
Tabela 14
SUPERFÍCIE (mm2)
Valores globais (Medianos)
<table>table see original document page 131</column></row><table> Tabela 15
VOLUME (mm3)
Valores globais (Medianos)
<table>table see original document page 132</column></row><table>
As Tabelas 16 e 17 mostram os resultados de cada grupo experimental expresso como valores mé- dios. Estas tabelas resumem a média de superfície ou volume em 9d, Cisplatin, 9d + Cisplatin ou grupo de ca- mundongos P.S. em cada dia marcado. Tabela 16
SUPERFÍCIE (mm2)
<table>table see original document page 133</column></row><table>
Ocorreram diferenças na taxa de crescimen- to de tumor KLN 205 entre camundongos que receberam 9d+Cisplatin versus placebo. Estas diferenças, seja na superfície ou no volume, foram estatisticamente signi- ficativas (p < 0,05) todos os dias marcados depois do 17° dia do desenvolvimento de tumor, conforme calculado pelo teste-t.
Ocorreram diferenças na taxa de crescimen- to de tumor KLN 2 05 entre os camundongos que receberam 9d+Cisplatin versus placebo. Estas diferenças, seja na superfície ou no volume, foram estatisticamente signi- ficativas (p < 0,05) todos os dias marcados depois do 20° dia do desenvolvimento de tumor, conforme calculado pelo teste-t.
Ocorreram diferenças na taxa de crescimen- to de tumor KLN 205 entre os camundongos que receberam 9d versus placebo. Houve uma tendência significativa, seja na superfície ou no volume, todos os dias marcados depois do 31° dia de desenvolvimento de tumor conforme calculado pelo teste-t.
Desta forma, cisplatin e 9d ou Cisplatin inibiram o crescimento ín vivo da célula KLN 205. 9d e Cisplatin são dotados de um efeito sinérgico.
EXEMPLO 12
Efeito do isômero (9d) em combinação com Cisplatin no crescimento de tumor através de inoculagão subcutânea, intradérmica ou intramuscular.
Tumor submetido a ensaio: KLN 205 Este ensaio foi realizado a fim de checar o efeito no crescimento de tumor in vivo em camundongos provocados com células KLN 205. Os tumores foram esta- belecidos por inoculação subcutânea, intradérmica ou intramuscular.
O efeito da combinação de cisplatin e/ou Isômero (9d) foi comparado com placebo em camundongos provocados de forma intradérmica. Além disso, o efeito de 9d no crescimento de tumor in vivo em camundongos provocados por via intramuscular ou subcutânea foi com- parada com placebo.
MATERIAIS e MÉTODOS
Tumor
KLN 205 é um carcinoma de células de pul- mão originada na variedade de camundongo DBA/2, e por- tanto singênico em camundongos com antecedentes genéti- cos DBA/2 (Kaneko T e LePage GA. Growth characteristics e drug responses of a murine Iung carcinoma in vitro e in vivo. Câncer Res. 38: 2084-2090; 1978).
Mantiveram-se células KLN 205 (CLS, Eppe- lheim, Germany) in vitro por passagens em série a cada 3-4 dias. Preformaram-se culturas com meio RPMI (RPMI, soro de bezerro fetal 10%, 2 mM L-glutamina, aminoáci- dos não-essenciais, 1 mM piruvato de sódio, 20 mM HE- PES, 80 μg/ml gentamicina; todos eles adquiridos a par- tir da Sigma, St. Louis, MO, USA) por semeadura de 5 χ 10^6 células em frascos de cultura de 75 cm2. Realiza- ram-se subculturas pela coleta de células destacadas depois de tratamento com tripsin-EDTA (Sigma, St. Louis, MO, USA). Células de tumor coletadas a partir de culturas de 48 horas foram usadas como a fonte de células KLN 205 para os estudos descritos adiante.
Camundongos
<table>table see original document page 136</column></row><table>
Dose
A Cisplatin foi testada sob níveis de dose de 65 pg administradas nos dias 7, 11, 14, 18, 21, 25 e 28, depois da inoculação de tumor
O Isômero 4(9d) foi testado sob os níveis de dose de 250 ng administrados nos dias 7, 11, 14, 18, 21, 25 e 28 depois da inoculação do tumor.
Concepção do estudo Os tumores foram estabelecidos por inocu- lação subcutânea e intradérmica no flanco traseiro di- reito, e intramuscular na perna traseira direita. Ca- mundongos (DBA/2) foram inoculados com 0,05 ml contendo 2 χ 10^5 células KLN 205 viáveis. O dia de inoculação subcutânea, intradérmica e intramuscular será conside- rado o Dia 0 do teste.
Camundongos DBA/2 inoculados com células KLN 205 foram distribuídos em 8 grupos experimentais:
<table>table see original document page 137</column></row><table>
* Dose por dia e camundongo **Sob inoculação intramuscular, bem como naqueles dias, os camundongos foram tratados nos dias 32 e 35.
Estatística
Realizou-se um estudo de controle de caso com camundongos tratados e de controle, a fim de se de- terminar se estavam presentes diferenças entre placebo, 9d, Cisplatin ou 9d + Cisplatin. Os dados obtidos (su- perfície e volume de tumor) foram testados para distri- buição normal dentro dos grupos -Kolmogorov Smirnov test p<0,05-. Realizou-se um teste de hipóteses não- paramétricas para amostras não emparelhadas, a fim de comparar se 9d, Cisplatin ou 9d + Cisplatin teve um e- feito deletério no crescimento dos tumores. Escolheu- se o teste-t por ser o melhor dos testes paramétricos conhecidos. Escolheu-se o teste-U de Mann Withney por ser um dos testes não-paramétricos melhor conhecido, de qualquer forma, os resultados para este teste são equi- valentes tanto para aqueles da soma de faixas de Wilco- xon quanto o teste de dois grupos de Kruskal-Wallis.
Toda a análise estatística foi realizada com SPSS (Statistical Package for Social Sciences) v13.0.
RESULTADOS
Efeito inibitório do isômero 4(9d) no crescimento de células de tumor KLN 205
Planejou-se o estudo com dez camundongos por grupo. As Tabelas 18 e 19 mostram os resultados de cada grupo experimental expressos como os valores médios. Estas tabelas resumem a média da superfície ou volume em cada dia marcado.
Tabela 18
SUPERFÍCIE (mm2)
Valores globais (Medianos)
<table>table see original document page 139</column></row><table>
Tabela 19
VOLUME (mm3)
Valores globais (Medianos)
<table>table see original document page 139</column></row><table> <table>table see original document page 140</column></row><table>
As Tabela 20 e 21 mostram os resultados de cada grupo experimental expressos como valores médios.
Estas tabelas resumem a média de superfície e volume em cada dia marcado.
Tabela 20
SUPERFÍCIE (mm2)
Valores globais (Média)
<table>table see original document page 140</column></row><table> Tabela 21
VOLUME (mm3)
Valores globais (Média)
<table>table see original document page 141</column></row><table>
Ocorreram diferenças na taxa de crescimen- to de tumor KLN 205 subcutâneo entre camundongos que receberam 9d versus placebo. Estas diferenças, seja na superfície ou no volume, foram estatisticamente signi- ficativas (p < 0,05) todos os dias marcados depois do 20° dia do desenvolvimento de tumor, conforme calculado pelo teste Mann-Whitney U.
Ocorreram diferenças na taxa de crescimen- to de tumor KLN 205 intradérmico entre os camundongos que receberam 9d versus placebo. Houve uma tendência significativa, seja na superfície ou no volume, de to- dos os dias marcados depois do 17° dia do desenvolvi- mento de tumor, conforme calculado pelo teste Mann- Whitney U. Ocorreram diferenças na taxa de crescimen- to de tumor KLN 205 intradérmico entre os camundongos que receberam Cisplatin versus placebo. Estas diferen- ças, seja na superfície ou no volume, foram estatisti- camente significativas (p < 0,05) nos dias 17°, 20° e 31° de desenvolvimento de tumor conforme calculado pelo teste Mann-Whitney U.
Ocorreram diferenças na taxa de crescimen- to de tumor KLN 205 intradérmico entre os camundongos que receberam 9d + Cisplatin versus placebo. Estas di- ferenças, seja na superfície ou no volume, foram esta- tisticamente significativas (p < 0,05) em todos os dias marcados depois do 13° dia de desenvolvimento de tumor conforme calculado pelo teste Mann-Whitney U..
Não houve diferenças na taxa de crescimen- to de tumor KLN 205 intramuscular entre os camundongos que receberam 9d versus placebo conforme calculado pelo teste Mann-Whitney.
O isômero 4 (9d) inibe o crescimento in vivo de células KLN 205 subcutâneas. O 9d+Cisplatin ou Cisplatin inibe o crescimento in vivo das células in- tradérmicas KLN 205.
EXEMPLO 13
Efeito de 9d em combinação com Cisplatin no crescimento de tumores
Tumor submetido a ensaio: Lewis
Este ensaio foi realizado com a finalidade de checar o efeito no crescimento de tumores in vivo em camundongos provocado com células de pulmão de Lewis. Este efeito será comparado com a combinação de agentes quimioterapêuticos mais 9d e/ou placebo.
MATERIAIS e MÉTODOS
Tumor
O Lewis Lung é um carcinoma de células de pulmão originado na variedade de camundongos C57BL/6J, e portanto singênico em camundongos com antecedentes genéticos de C57BL/6J (Rodrigo Garzón M, Tirapu Fernán- dez de 1a Cuesta I, Arina Iraeta A, Noel Centelles L- louente M e Zulueta Francês J. Use of Gene Therapy in a Subcutaneous Murine Model of Lung Câncer. Arch Bron- coneumology. 42: 526 - 532; 2006).
Células de pulmão de Lewis (CLS, Eppe- lheim, Germany) foram mantidas in vitro por passagens em série a cada 3-4 dias. Realizaram-se culturas com meio RPMI (RPMI, soro de bezerro fetal a 10%, 2 mM L- glutamina, aminoácidos não essenciais, 1 mM piruvato de sódio, 20 mM HEPES, 80 pg/ml gentamicina (todos eles foram adquiridos a partir da Sigma, St. Louis, MO, USA) por semeadura de 5 χ 10^6 células em frascos de cultura de 75 cm2. Realizaram-se subculturas pela coleta de células destacadas depois de tratamento com tripsina- EDTA (Sigma, St. Louis, MO, USA ). Células de tumor, coletadas a partir de culturas de 48 horas, foram usa- das como fonte de células de Pulmão de Lewis para os estudos descritos adiante. Camundongos
<table>table see original document page 144</column></row><table>
A Cisplatin foi testada sob niveis de dose de 65 yg administradas nos dias 7, 11, 14, 18, 21, 24 e 27, depois da inoculação de tumor
O Isômero 4(9d) foi testado sob os níveis de dose de 250 ng administrados nos dias 7, 11, 14, 18, 21, 24 e 27 depois da inoculação do tumor.
Concepção do estudo
Os tumores foram estabelecidos por inocu- lação subcutânea no flanco traseiro direito. Os camun- dongos foram inoculados com 0,2 ml contendo 2 χ 10^5 cé- lulas viáveis. O dia de inoculação subcutânea será considerado o Dia 0 do teste.
Os camundongos foram distribuídos em 4 grupos experimentais.
<table>table see original document page 145</column></row><table>
* Dose por dia e camundongo
Observaram-se os camundongos diariamente e o tamanho do tumor registrado duas vezes por semana. Isto foi realizado por meio da medição de dois diâme- tros perpendiculares (dl/d2) com um calibrador. Estas medidas foram usadas para se obter a superfície e o vo- lume do tumor:
Superfície do tumor = d1 χ d2 (mm2)
Volume do tumor = d1 χ d2^2 χ 1/2 (mm3)
Os resultados foram expressos como valores simples e/ou como a ± SD média ou mediana a partir de cada grupo experimental. Estatística
Realizou-se um estudo de controle de caso com camundongos tratados e de controle a fim de deter- minar se estavam presentes diferenças entre placebo, 9d, Cisplatin ou 9d+Cisplatin. Os dados obtidos (su- perfície e volume de tumor) foram testados para distri- buição normal dentro dos grupos (Kolmogorov Smirnov teste p<0,05). Realizou-se um teste de hipóteses não- paramétricas para amostras não emparelhadas a fim de comparar se 9d, Cisplatin ou 9d+Cisplatin teve um efei- to prejudicial no crescimento dos tumores. Escolheu-se o teste-U de Mann Withney por ser aquele melhor conhe- cido para os testes não-paramétricos, de qualquer for- ma, os resultados para este teste são equivalentes tan- to para aqueles da soma de faixas de Wilcoxon quanto o teste de dois grupos de Kruskal-Wallis.
Foram exluídos do estudo os animais que tinham tumor não detectável ou não registrado no 31° dia depois de inoculação do tumor. Em decorrência da alta dispersão de dados, foram excluídos do estudo os periféricos.
Todas as análises estatísticas foram rea- lizadas com SPSS (Statistical Package for Social Scien- ces ) vl3.0.
RESULTADOS
Efeito do isômero 4(9d) no crescimento do tumor Lewis Lung
Quinze camundongos por grupo foram plane- jados para serem estudados. Um camundongo proveniente do grupo de placebo morreu por causas desconhecidas na segunda semana depois da inoculação de tumor e foi ex- cluído.
As Tabelas 22 e 23 mostram os resultados de cada grupo experimental expressos como os valores médios. Estas tabelas resumem a media da superfície ou volume em grupo de camundongos com P.S., 9d, Cisplatin ou 9d+Cisplatin em cada dia marcado.
Tabela 22
SUPERFÍCIE (mm2)
Valores globais (Medianos)
<table>table see original document page 147</column></row><table>
Tabela 23
VOLUME (mm3)
Valores globais (Medianos)
<table>table see original document page 147</column></row><table> <table>table see original document page 148</column></row><table>
As Tabelas 24 e 25 mostram os resultados de cada grupo experimental expressos como os valores médios.
Estas tabelas resumem a media da superfície ou volume em grupo de camundongos com P.S, 9d, Cisplatin ou 9d+Cisplatin em cada dia marcado.
Tabela 24
SUPERFÍCIE (mm2)
Valores globais (Média)
<table>table see original document page 148</column></row><table>
Tabela 25
VOLUME (mm3)
Valores globais (Média)
<table>table see original document page 148</column></row><table> <table>table see original document page 149</column></row><table>
Observaram-se diferenças na taxa de cres- cimento de tumor Lewis Lung entre camundongos que rece- beram 9d versus placebo. Estas diferenças, seja na su- perfície ou no volume, foram estatisticamente signifi- cativas (p < 0,05) todos os dias marcados depois do 13° dia de desenvolvimento de tumor conforme calculado pelo teste Mann-Whitney U.
Observaram-se diferenças na taxa de cres- cimento de tumor Lewis Lung entre camundongos que rece- beram Cisplatin versus placebo. Estas diferenças, seja na superfície ou no volume, foram estatisticamente sig- nificativas (p < 0,05) nos dias 10°, 13° e 17° de de- senvolvimento de tumor, conforme calculado pelo teste Mann-Whitney U.
Observaram-se diferenças na taxa de cres- cimento de tumor Lewis Lung entre camundongos que rece- beram 9d+Cisplatin versus placebo. Estas diferenças, seja na superfície ou no volume, foram estatisticamente significativas (p < 0,05) todos os dias marcados depois do 17° dia de desenvolvimento de tumor, conforme calcu- lado pelo teste Mann-Whitney U.
9d, Cisplatin e 9d+Cisplatin inibiram o crescimento in vivo do tumor Lewis Lung desenvolvido em camundongos congênitos.
EXEMPLO 14 TOXICIDADE
Este ensaio foi realizado com a finalidade de checar a tolerância (letalidade/toxicidade) dos tratamentos BLAS e IL-2 em camundongos.
MATERIAIS e MÉTODOS
Drogas no estudo
BLAS (mistura equimolar de isômeros 1, 2, 3 e 4) 1,25 mg/ml em solução salina fisiológica esté- ril .
Recombinante humano IL-2, a 18xl06 IU/ml (Proleukin; Chiron Ibéria, Madrid, Spain)
<table>table see original document page 150</column></row><table>
Dose, veiculo, via e volume de administração Dose
<table>table see original document page 151</column></row><table>
* Dose por camundongo e dia, utilizando-se um volume constante de 0,2 ml
Veiculo
O veiculo em que foram diluídos BLAS e IL- 2 compreendia solução salina fisiológica estéril diluí- da para injeção (Grifols, Barcelona, Spain) e água des- tilada estéril para injeção (Grifols, Barcelona, Spain)
Via de administração
Os tratamentos foram aplicados i.p..
Concepção do estudo
Cada camundongo foi observado diariamente durante 30 dias.
Realizaram-se duas medições:
1. Letalidade. Esta foi expressa como percentagem de sobrevivência. 2. Toxicidade. Esta foi checada nos camundongos vivos para os seguintes parâmetros e critérios de marcação :
<table>table see original document page 152</column></row><table>
RESULTADOS
Letalidade e toxicidade associadas com tratamento de BLAS e IL-2
A Tabela 26 mostra a letalidade observada com um ou outro tratamento. Os resultados estão ex- pressos como percentagem de sobrevivência. Tal como pode ser observado nesta tabela, dois camundongos pro- venientes do Grupo B2, que receberam a dose mais alta de IL-2, morreram no dia 6 e 7 depois da primeira dose. Não se observaram mais mortes em qualquer outro grupo de camundongos, seja tratados com IL-2 (dose mais bai- xa) ou BLAS em qualquer dose usada.
Tabela 26
LETALIDADE
<table>table see original document page 153</column></row><table>
A Tabela 27 mostra a toxicidade observada em camundongos com cada tratamento conforme contado com os critérios descritos anteriormente. Os resultados estão expressos como a contagem tóxica acumulada por grupo de tratamento. Tabela 27
CONTAGEM DE TOXICIDADE
<table>table see original document page 154</column></row><table>
Como pode ser observado nesta tabela, a toxicidade foi observada somente nos camundongos trata- dos com IL-2 (Grupos B1&B2) Grupo B2 (dose de IL-2 mais alta) mostrou os efeitos mais adversos marcados, mas os camundongos provenientes do Grupo Bl (dose mais baixa) também marcaram, muito embora com uma extensão mais baixa. Efeitos adversos foram observados durante e de- pois do tratamento IL2 (do dia 2 ao dia 15). Como era de se esperar, posteriormente estes efeitos desaparece- ram uma vez que se interrompeu o IL-2 seis dias depois da dose inicial. Deve ser observado que o BLAS foi a- parentemente não tóxico de forma alguma, e não foi pos- sivel contar qualquer ponto em qualquer camundongo du- rante o seguimento. Isto é notável, uma vez que a dose usada neste estudo excedeu 1.000 vezes a dose terapêu- tica usada na maior parte dos exemplos expostos anteri- ormente.
BLAS em contraste a IL-2 é bem tolerado pelos camundongos mesmo sob doses que excedem enorme- mente a sua faixa terapêutica.
EXEMPLO 15
TOXICIDADE DO ISÔMERO 4 (9d)
Este ensaio foi realizado a fim de propor- cionar um estudo preliminar visando o efeito tóxico do Isômero 4 (9d) usado sob uma alta dose em camundongos saudáveis. Sua toxicidade eventual será comparada com placebo.
MATERIAIS e MÉTODOS
Droga em estudo
Substância ativa
Isômero 4 (9d) a 0,7 mg/ml em solução sa- lina fisiológica estéril.
Placebo
Solução salina fisiológica estéril para
injeção (Grifols, Barcelona, Spain)
Camundongos
<table>table see original document page 155</column></row><table> <table>table see original document page 156</column></row><table>
Dose, veiculo, via e volume de administração
<table>table see original document page 156</column></row><table>
* Dose por camundongo e dia, utilizando-se um vo- lume constante de 1,8 ml (A1, B1) ou 0,2 ml (C1, D1)
Veículo
O veículo em que o Isômero 4 foi diluído compreendia solução salina fisiológica estéril para in- jeção (Grifols, Barcelona, Spain) e água destilada es- téril para injeção (Grifols, Barcelona, Spain)
Via de administração
Os tratamentos foram aplicados i.p. ou s.c.. Concepção do estudo
Cada camundongo foi observado diariamente durante 10 dias.
Realizaram-se três medições:
3. Peso. Este foi medido e expresso em gramas.
4. Letalidade. Esta foi expressa como percentagem de sobrevivência.
5. Toxicidade. Esta foi checada nos camundongos vivos para os seguintes parâmetros e critérios de marca- ção:
Parâmetro Contagem
<table>table see original document page 157</column></row><table> <table>table see original document page 158</column></row><table>
Parâmetro Toxicidade Local Contagem
<table>table see original document page 158</column></row><table>
Estatística
Realizou-se um estudo de controle de caso com camundongos tratados e de controle a fim de se de- terminar se estavam presentes diferenças entre Isômero 4 e administração de placebo. Escolheu-se o teste "U" de Mann Withney por ser aquele dos testes não-paramé- tricos que é mais bem conhecido; de qualquer forma, os resultados para este teste são equivalentes àqueles da soma de faixas de Wilcoxon e teste de dois grupos de Kruskal-Wallis.
O software estatístico utilizado foi o SPSSv12.0
RESULTADOS
Letalidade e toxicidade associadas com o tratamento de Isômero 4.
As Tabelas 28 e 29 mostram o peso de cada um dos camundongos C57BL/6 para cada dia contado, bem como médio, desvio padrão e mediano. Não foram obser- vadas diferenças no peso entre os grupos quando detec- tados por teste "U" de Mann-Whitney (p>0,05).
Tabela 28
PERDA DE PESO
Grupo Al (Isômero 4)
<table>table see original document page 159</column></row><table>
Tabela 29
PERDA DE PESO
Grupo Bl (Placebo)
<table>table see original document page 159</column></row><table> <table>table see original document page 160</column></row><table>
Não foram observadas mortes nem toxicidade em qualquer de camundongos tratados com Isômero 4 (Gru- po Al) ou solução salina fisiológica (Grupo Bl) . É digno de nota que a dose utilizada para a toxicidade sistêmica excedeu 50.000 vezes a quantidade total da dose terapêutica.
Não foi observada toxicidade local nos ca- mundongos tratados seja com Isômero 4 (Grupo Cl) ou com placebo (Grupo Dl) . É digno de nota que a dose usada para toxicidade local neste estudo excedeu 500 vezes a concentração normal da dose terapêutica.
Desta forma, o isômero 4 é perfeitamente tolerado por camundongos mesmo em doses que excedem e- normemente a sua faixa terapêutica. Não foi observada toxicidade local no local da inoculação em qualquer ca- mundongo provocado.
EXEMPLO 16
ANÁLISE DE LEUCÓCITO FENÓTIPO
Este Exemplo foi realizado com o objetivo de se avaliarem eventuais diferenças na percentagem da população de leucócitos entre os camundongos tratados por citometria de fluxo. As contagens foram realizadas utilizando-se um citômetro de fluxo depois da rotulação de proteínas de membrana (CD11B e Ly6G) com anticorpos específicos para as ditas proteínas. O marcador CDllB (também conhecido como marcador Mac-I) é expresso em populações de monócitos enquanto que Ly6G (também co- nhecido como GR-I) é expresso em populações de granuló- citos. Os dois marcadores (CDllb e Ly6G) são expressos em populações de neutrófilos. Este ensaio mostra que o composto submetido a ensaio aumenta as populações de células brancas, particularmente da linhagem de células mielóides, o que é importante nos casos que requerem o aumento da imuno-resposta em um paciente, tais como, para exemplo, em pacientes que sofrem de AIDS.
MATERIAIS e MÉTODOS
Droga em estudo
Isômero 4 (composto 9d) a 65 μς/ιηΐ em solução salina
fisiológica estéril.
Placebo
Solução salina fisiológica (Grifols, Barcelona, Spain). Camundongos
<table>table see original document page 161</column></row><table> <table>table see original document page 162</column></row><table>
Equipamento
Tampa de fluxo laminar, Citômetro de fluxo, Pipetas a- justáveis, Seringas estéreis, Agulhas estéreis, tubos estéreis de EDTA, Tubos plásticos.
REAGENTES
• Solução anestésiva
• PBS estéril (Sigma, St. Louis, MO, USA)
• Solução salina fisiológica (Grifols, Barcelona, Spain)
• Rat anti-camundongo CDllb-PE (Beckman Coulter, Fullerton, CA, USA)
• Rat anti-camundongo Ly6G-FITC (Beckman Coulter, Fullerton, CA, USA)
Optylise C (Beckman Coulter, Fullerton, CA, USA) Dose, veiculo, via e volume de administração Dose
O Isômero 4 (composto 9d) foi testado sob níveis de do- se de 250 ng administrados nos dias 0, e 7. Veículo
O veículo em que o Isômero 4 foi diluído é solução sa- lina fisiológica. Via de Administração e volume
Os tratamentos foram aplicados por meio de via intrape- ritoneal. O volume inoculado foi de 200 μΐ/animal. Concepção do estudo
Camundongos Balb/c foram distribuídos em 2 grupos expe- rimentais :
<table>table see original document page 163</column></row><table>
* Dose por dia e camundongo
Três dias depois da aplicação da última dose do tratamento, isolou-se sangue de murídeo. Ele foi obtido diretamente a partir de punção intracardía- ca. Previamente, os camundongos foram anestesiados in- tramuscularmente.
Misturou-se sangue com os anticorpos mono- clonais descritos anteriormente.
Depois de 20 minutos de incubação, adicio- nou-se solução Optylise C às amostras para a Iise de população de eritrócitos.
Finalmente, diluiram-se amostras 1/2 com PBS 1 χ estéril e checou-se por citometria de fluxo.
As percentagens de cada população analisa- da foram expressas como valores individuais e como a média ± SD a partir de cada grupo experimental.
RESULTADOS Detalhamento de citometria de fluxo PBL (Sangue Periférico)
<table>table see original document page 164</column></row><table> <table>table see original document page 165</column></row><table>
De acordo com estes resultados, camundon- gos (Balb/C) tratados com duas doses (uma vez por sema- na) do composto 9d mostraram um incremento de células positivas CDllb, Ly6G e CDllb + Ly6G no sangue perifé- rico, em comparação com camundongos de controle (solu- ção salina fisiológica). Estas células foram checadas por citometria de fluxo três dias depois da última dose do tratamento.

Claims (33)

1. Processo para a síntese de um estere- oisômero substancialmente puro de um composto da fórmu- la geral I <formula>formula see original document page 166</formula> em que R1 é selecionado a partir de -0H, -ORa, em que Ra é selecionado a partir de alquila substituído ou não-substituído, cicloalquila substituído ou in- subtituído, alquenil substituído ou não- substituído, cicloalquenila substituído ou insub- tituído, aril substituído ou não-substituído, a- ralquila substituído ou não-substituído ou hetero- ciclil substituído ou não-substituído; R2, R3 e R4 são selecionados independentemente a partir de hidrogênio, um grupo de proteção de ni- trogênio que hidrolisa sob condições ácidas ou ftalamida; X é um anion farmaceuticamente aceitável; e Y é um resíduo orgânico selecionado a partir de (i) um grupo que contém N da fórmula geral VIa <formula>formula see original document page 167</formula> em que a linha tracejada em conjunto com o áto- mo de nitrogênio formam um heteroaril substituído ou não-substituído, e X é como definido anteriormente; ou (ii) um grupo que contém N de fórmula VIb <formula>formula see original document page 167</formula> em que X é como definido anteriormente; e Ra e Rb são selecionados independentemente a partir de alquila substituído ou não- substituído, cicloalquila substituído ou não- substituído, alquenila substituído ou não- substituído, cicloalquenila substituído ou não-substituído, arila substituído ou não- substituído, aralquila substituído ou não- substituído, ou heterocicloalquila substituí- do ou não-substituído; ou Ra e Rb em conjunto com o átomo de nitrogênio ao qual eles são vinculados formam um hetero- ciclo substituído ou não-substituído; ou suas misturas; caracterizado por compreender a) fazer reagir um composto enantiomericamente puro da fórmula IV <formula>formula see original document page 168</formula> em que R1 e R2 são aqueles previamente definidos ; ou suas misturas; com um composto da fórmula V <formula>formula see original document page 168</formula> em que R4 é como definido anteriormente; para proporcionar um estereoisômero substan- cialmente puro de um composto da fórmula III <formula>formula see original document page 168</formula> em que R1, R2 e R4 são aqueles definidos anteriormente; ou as suas misturas; b) transformar o dito estereoisômero substancial- mente puro de um composto da fórmula III, ou suas misturas, em um estereoisômero substan- cialmente puro de um composto da fórmula II <formula>formula see original document page 169</formula> em que R1, R2 e R4 são aqueles definidos anteriormen- te; R5 é selecionado a partir de uma carga nega- tiva ou R3, em que R3 é como definido anteri- ormente; e Y é um resíduo orgânico que contém N selecio- nado a partir de (i) quando R5 é uma carga negativa, Y é um resíduo orgânico que contém N da fór- mula VIIa <formula>formula see original document page 169</formula> em que as linhas tracejadas em conjunto com o átomo de nitrogênio formam um heteroari- la substituído ou não-substituído; ou (ií) quando R5 é R3, Y é um resíduo orgâ- nico que contém N selecionado a partir de (ii.a) um grupo que contém N da fórmula VIIb <formula>formula see original document page 170</formula> em que Ra e Rb são aqueles definidos an- teriormente; ou (ii.b) um resíduo orgânico que contém N da fórmula VIIc <formula>formula see original document page 170</formula> em que a linha pontilhada em conjunto com o á- tomo de nitrogênio formam um heteroarila substituído ou não-substituído; e Z é um ânion farmaceuticamente aceitável ; ou as suas misturas; e c) contactar o dito estereoisômero substancial- mente puro de um composto da fórmula II, ou as suas misturas, com um meio ácido que com- preende um ácido de fórmula HX, em que X é definido como anteriormente, para proporcio- nar o dito estereoisômero substancialmente puro de um composto de fórmula I, ou as suas misturas.
2. Processo, de acordo com a reivindica- ção 1, caracterizado por o composto de fórmula IV estar na forma de um composto enantiomericamente puro sele- cionado a partir do isômero S e do isômero R.
3. Processo, de acordo com a reivindica- ção 1, caracterizado por o composto de fórmula IV ser -1-tercbutil éster 2-etil éster de ácido 5R-4-metileno- -5-oxopirrolidina-l,2-dicarboxíIico ou 1-tercbutil éster -2-etil éster de ácido 5S-4-metileno-5-oxopirrolidina- -1,2-dicarboxilico.
4. Processo, de acordo com a reivindica- ção 1, caracterizado por o composto de fórmula V ser N- tosiliminobenziliodinano.
5. Processo, de acordo com a reivindica- ção 1, caracterizado por a reação do composto enantio- mericamente puro de fórmula IV, ou suas misturas, com o composto de fórmula V, ser realizada na presença de um catalisador, preferencialmente um catalisador baseado em cobre, preferencialmente um catalisador selecionado a partir de um grupo formado por Cu(ft)2, em que "ft" é uma ftalocianina, e Cu(acac)2, em que "acac" é um ace- toacetato.
6. Processo, de acordo com a reivindica- ção 1, caracterizado por a reação do composto enantio- mericamente puro de fórmula III, ou as suas misturas, ser transformada em um estereoisômero substancialmente puro de um composto de fórmula II em que R5 é uma carga negativa e Y é um resíduo orgânico contendo N da fórmu- la Vila, por reação do dito estereoisômero substancial- mente puro de um composto de fórmula III, ou suas mis- turas, com um nucleófilo que contém nitrogênio da fór- mula VIIIa <formula>formula see original document page 172</formula> em que a linha pontilhada em conjunto com o átomo de nitrogênio formam um heteroarila substituído ou não-substituído.
7. Processo, de acordo com a reivindica- ção 1, caracterizado por o dito estereoisômero substan- cialmente puro de um composto de fórmula III, ou as su- as misturas, ser transformado em um estereoisômero substancialmente puro de um composto de fórmula II em que R5 é igual a R3 e Y é um resíduo orgânico que con- tém N de fórmula VIIb, pela reação de dito estereoisô- mero substancialmente puro de um composto de fórmula III, ou suas misturas, com um nucleófilo que contém ni- trogênio de fórmula VIIIb <formula>formula see original document page 172</formula> em que Ra e Rb são aqueles definidos anteri- ormente; e, se desejado, a mistura resultante é moderada com um composto de fórmula X <formula>formula see original document page 173</formula> em que R3 e Z são aqueles definidos anterior- mente .
8. Processo, de acordo com a reivindica- ção 1, caracterizado por o dito estereoisômero substan- cialmente puro de um composto de fórmula III, ou as su- as misturas, ser transformado em um estereoisômero substancialmente puro de um composto de fórmula II em que R5 é R3 e Y é um resíduo orgânico que contém N de fórmula VIIc, pela reação do dito estereoisômero subs- tancialmente puro de um composto de fórmula III, ou as suas misturas, com um nucleófilo que contém um átomo de nitrogênio de fórmula VIIIa <formula>formula see original document page 173</formula> em que a linha pontilhada em conjunto com o átomo de nitrogênio formam um heteroarila substituído ou não-substituído; e com um composto de fórmula X R3Z (X) em que R3 e Z são aqueles definidos anteriormente.
9. Process, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por o dito composto de fórmula III es- tar na forma de um estereoisômero substancialmente puro (3'R, 5R) ; (3S, 5S) ; (3R,5S); ou (3S,5R).
10. Processo, de acordo com a reivindica- ção 6 ou 8, caracterizado por o dito nucleófilo que contém o átomo de nitrogênio de fórmula VIIIa é uma pi- ridina de fórmula IX <formula>formula see original document page 174</formula> em que, η é O, 1, 2, 3, 4 ou 5; e R6 é selecionado a partir de alquila substituído ou não-substituído, cicloalquila substituído ou não-substituído, alquenila substituído ou não- substituído, arila substituído ou não-substituído, heterociclila substituído ou não-substituído, al- coxila substituído ou não-substituído, ariloxila substituído ou não-substituído, halogênio, carbo- xiéster substituído ou não-substituído, amino substituído ou não-substituído e/ou as formas da piridina de um ou mais anéis fundidos substituídos ou não-substituídos.
11. Processo, de acordo com a reivindica- ção 1, caracterizado por a transformação do composto de fórmula III em um composto de fórmula II ser realizada sob aquecimento, preferencialmente com microondas.
12. Processo, de acordo com a reivindica- ção 1, caracterizado por o ácido de fórmula HX ser um ácido inorgânico, preferencialmente, HCl ou HBr.
13. Composto de fórmula I, caracterizado por ser selecionado a partir do grupo que consiste de: a) um composto substancialmente puro de fórmula Ia em que R1 é selecionado a partir de -OH, -ORa, em que Ra é selecionado a partir de alquila substituído ou não-substituido, cicloalquila substituído ou não- substituido, alquenila substituído ou não- substituido, arila substituído ou não-substituído, aralquila substituído ou não-substituído ou hete- rociclila substituído ou não-substituído; R2, R3 e R4 são selecionados, independentemente, a partir de hidrogênio, um grupo de proteção de ni- trogênio que hidrolisa sob condições ácidas ou ftalamida; X é um anion farmaceuticamente aceitável; e Y é um resíduo orgânico selecionado a partir de (i) um grupo que contém N da fórmula VIa <formula>formula see original document page 176</formula> em que a linha pontilhada em conjunto com o á- tomo de nitrogênio formam um heteroarila substituído ou não-substituído, e X é aquele definido anteriormente; ou (ii) um grupo que contém N da fórmula VIb <formula>formula see original document page 176</formula> em que X é como definido anteriormente; e Ra e Rb são selecionados, independentemen- te, a partir de alquila substituído ou não- substituído, cicloalquila substituído ou não-substituído, alquenila substituído ou não-substituído, arila substituído ou não- substituído, aralquila substituído ou não- substituído ou heterociclila substituído ou não-substituído; ou Ra e Rb em conjunto com o átomo de nitrogê- nio ao qual eles estão vinculados na forma de um heterociclila substituído ou não-substituido; b) um composto substancialmente puro de fórmula Ib, <formula>formula see original document page 177</formula> em que R1, R2, R3, R4, X e Y são aqueles definidos anteriormente; c) um composto substancialmente puro de fórmula Ic <formula>formula see original document page 177</formula> em que R1, R2, R3, R4, XeY são aqueles definidos anteriormente; d) um composto substancialmente puro de fórmula Id <formula>formula see original document page 177</formula> em que R1, R2, R3, R4, X e Y são aqueles definidos anteriormente; e e) qualquer mistura dos compostos substancialmente puros mencionados anteriormente de fórmula Ia, Ib, Ic e/ou Id, em qualquer proporção molar, em que a dita mistura não contêm, simultaneamente, todos os quatro estereoisômeros dos seguintes compostos: (i) cloridrato de cloreto de 1-(3-amino-5- carboxi-2-oxopirrolidina-3- ilametila)piridinio, ou (ii) cloridrato de cloreto de 1-(l-acetil-3- amino-5-carboxi-2-oxopirrolidina-3- ilametila) piridinio.
14. Composto, de acordo com a reivindica- ção 13, caracterizado por R1 ser OH ou ORa, preferenci- almente OH; R2 ser hidrogênio, um grupo de proteção de nitrogênio que hidrolisa sob condições ácidas ou ftama- lida, preferencialmente, hidrogênio; R3 ou R4, indepen- dentemente, são hidrogênio, um grupo de proteção de ni- trogênio que hidrolisa sobre condições ácidas ou ftala- mida, preferencialmente R3 ou R4 são, simultaneamente, hidrogênio; e/ou X é um ânion farmaceuticamente aceitá- vel, preferencialmente brometo e cloreto.
15. Composto, de acordo com a reivindica- ção 13, caracterizado por ser um resíduo orgânico sele- cionado a partir de <formula>formula see original document page 179</formula> ou um resíduo orgânico selecionado a partir de <formula>formula see original document page 179</formula>
16. Composto, de acordo com a reivindica- ção 13, caracterizado por ser selecionado a partir do grupo que consiste de: - um composto da fórmula I'a <formula>formula see original document page 180</formula> em que R1, R2, R6 e η são aqueles definidos anteriormente; - um composto da fórmula I'b <formula>formula see original document page 180</formula> em que R1, R2, R6 e η são aqueles definidos anteriormente; - um composto da fórmula I'c <formula>formula see original document page 181</formula> em que R1, R2, R6 e η são aqueles definidos anteriormente; - um composto de fórmula I'd <formula>formula see original document page 181</formula> em que R1, R2, R6 e η são aqueles definidos anteriormente; e as suas misturas.
17. Composto, de acordo com a reivindica- ção 13, caracterizado por ser selecionado a partir do grupo que consiste de: bromidrato de brometo de 3S,5S-1-(3-amino-5- carboxi-2-oxopirrolidina-3-ilametila)piridínio; bromidrato de brometo de 3R,5S-1-(3-amino-5- carboxi-2-oxopirrolidina-3-ilametila)piridínio; bromidrato de brometo de 3R,5R-1-(3-amino-5- carboxi-2-oxopirrolidina-3-ilametila)piridínio; bromidrato de brometo de 3S,5R-1-(3-amino-5- carboxi-2-oxopirrolidina-3-ilametila)piridínio.
18. Composição que compreende um composto selecionado a partir do grupo que consiste de compostos de fórmula Ia, Ib, Ic, Id e suas misturas, de acordo com a reivindicação 13, em qualquer razão molar, carac- terizada por a dita mistura não conter, simultaneamen- te, todos os quatro estereoisômeros dos seguintes compostos: (i) cloridrato de cloreto de 1-(3-amino-5-carboxi -2-oxopirrolidina-3-ilametila) piridínio, ou (ii) cloridrato de cloreto de 1-(l-acetil-3- amino-5-carboxi-2-oxopirrolidina-3-ilametila) piridínio.
19. Composição farmacêutica, caracteriza- da por compreender um composto como definido em qual- quer uma das reivindicações 13 a 17, ou uma composição de acordo com a reivindicação 18, e um carreador farma- ceuticamente aceitável.
20. Composto de fórmula II, caracterizado por ser selecionado a partir do grupo que consiste de: a) um composto substancialmente puro de fórmula IIa, <formula>formula see original document page 183</formula> em que R1 é selecionado a partir de -0H, -ORa, em que Ra é selecionado a partir de alquila substituído ou não-substituído, cicloalquila substituído ou não- substituído, alquenila substituído ou não- substituído, arila substituído ou não-substituído, aralquila substituído ou não-substituído ou hete- rociclila substituído ou não-substituído; R2, R3 e R4 são selecionados, independentemente, a partir de hidrogênio, um grupo de proteção de ni- trogênio que hidrolisa sobre condições ácidas ou ftalamida; e Y é um resíduo orgânico selecionado a partir de (i) um grupo que contém N de fórmula VIa <formula>formula see original document page 183</formula> em que a linha pontilhada em conjunto com o á- tomo de nitrogênio formam um heteroarila substituído ou não-substituído, e X é um ânion farmaceuticamente aceitá- vel; ou (ii) um grupo que contém N de fórmula VIb <formula>formula see original document page 184</formula> em que X que é definido anteriormente; e Ra e Rb são selecionados, independentemente, a partir de alquila substituído ou não- substituído, cicloalquila substituído ou não- substituído, alquenila substituído ou não- substituído, arila substituído ou não- substituído, aralquila substituído ou não- substituído ou heterociclila substituído ou não-substituído; ou Ra e Rb em conjunto com o átomo de nitrogênio ao qual eles estão vinculados formam um hete- rociclo substituído ou não-substituído; b) um composto substancialmente puro de fórmula IIb, <formula>formula see original document page 184</formula> em que R1, R2, R4, R5 e Y são aqueles defi- nidos anteriormente; c) um composto substancialmente puro de fórmula IIc, <formula>formula see original document page 185</formula> em que Ri, R2, R4, R5 e Y são aqueles defi- nidos anteriormente; e d) um composto substancialmente puro de fórmula IId, <formula>formula see original document page 185</formula> em que R1, R2, R4, R5 e Y são aqueles defi- nidos anteriormente; e e) qualquer mistura dos compostos substancialmen- te puros mencionados anteriormente de fórmula Ia, Ib, Ic e/ou Id, em qualquer proporção molar, em que a dita mistura não contêm, simultaneamente, todos os quatro estereoisômeros dos seguintes compostos: acetato de 1-(3-amino-5-carboxi-2-oxopirrolidina- 3-ilametila piridínio; acetato de 1-(1-acetil-3-amino-5-carboxi-2- oxopirrolidina-3-ilametila piridínio; acetato de 1-(1-acetil-3-acetil-amino-5-carboxi-2- oxopirrolidina-3-ilametila piridínio; ou cloridrato de 1-(l-acetil-3-acetil-amino-5- carboxi-2-oxopirrolidina-3-ilametila piridínio.
21. Composto, de acordo com a reivindica- ção 20, caracterizado por R1 ser -ORa, preferencialmen- te em que Ra é um grupo alquila; R2 é -(0=)C-O-Ra, pre- ferencialmente o grupo BOC; e/ou R4 é - (0=) S (=0)-Ra, preferencialmente tosil.
22. Composto, de acordo com a reivindica- ção 20, caracterizado por R2, R4 e R5, serem, indepen- dentemente, hidrogênio.
23. Composto, de acordo com a reivindica- ção 20, caracterizado por R5 ser uma carga negativa.
24. Composição, caracterizada por compre- ender um composto selecionado a partir do grupo que consiste dos compostos da fórmula Ia, Ib, Ic, Id e suas misturas, de acordo com a reivindicação 20, em qualquer proporção molar, em que a dita mistura não contem si- multaneamente, todos os quatro estereoisômeros dos se- guintes compostos acetato de 1-(3-amino-5-carboxi-2-oxopirrolidina- -3-ilametila piridínio; acetato de 1-(l-acetil-3-amino-5-carboxi-2- oxopirrolidina-3-ilametila piridínio; acetato de 1-(l-acetil-3-acetil-amino-5-carboxi-2- oxopirrolidina-3-ilametila piridínio; ou cloridrato de 1-(1-acetil-3-acetil-amino-5- carboxi-2-oxopirrolidina-3-ilametila piridínio.
25. Composto de fórmula III, caracteriza- do por ser selecionado a partir do grupo que consiste de: a) um composto substancialmente puro de fórmula IIIa, <formula>formula see original document page 187</formula> em que R1 é selecionado a partir de -OH, -ORa, em que Ra é selecionado a partir de alquila substituído ou não-substituído, cicloalquila substituído ou não- substituído, alquenila substituído ou não- substituído, arila substituído ou não-substituído, aralquila substituído ou não-substituído ou hete- rociclila substituído ou não-substituído; R2 e R4 são selecionados, independentemente, a partir de hidrogênio, um grupo de proteção de ni- trogênio que hidrolisa sob condições ácidas ou ftalamida; b) um composto de fórmula IIIb <formula>formula see original document page 187</formula> em que R1, R2 e R4 são aqueles definidos ante riormente; c) um composto de fórmula IIIc, em que R1, R2 e R4 são aqueles definidos ante riormente; d) um composto de fórmula IIId IIId em que R1, R2 e R4 são aqueles definidos ante riormente; e e) as suas misturas.
26. Composto, de acordo com a reivindica ção 25, caracterizado por R1 ser -ORa, preferencialmen te em que Ra é um grupo alquila; R2 é -(0=) C-O-Ra, pre ferencialmente o grupo BOC; e/ou R4 é - (0=)S(=0)-Ra preferencialmente tosil.
27. Composto, de acordo com a reivindica ção 25, caracterizado por R2, R4 e R5, erem, independen temente, hidrogênio.
28. Processo para a síntese de um compos- to de fórmula I, de acordo com a reivindicação 13, ca- racterizado por compreender contactar um composto de fórmula II como definido na reivindicação 20, com um meio ácido que compreende um ácido de fórmula HX, em que X é um ânion farmaceuticamente aceitável.
29. Processo, caracterizado por compreen- der fazer reagir um composto enantiomericamente puro da fórmula IV <formula>formula see original document page 189</formula> em que R1 é selecionado a partir de -OH, -ORa, em que Ra é selecionado a partir de alquila substituído ou não-substituído, cicloalquila substituído ou não- substituído, alquenila substituído ou não- substituído, arila substituído ou não- substituído, aralquila substituído ou não- substituído ou heterociclila substituído ou não- substituído; e R2 é hidrogênio, um grupo de proteção de nitrogê- nio que hidrolisa sob condições ácidas ou ftala- mida; ou as suas misturas; com um composto de fórmula V <formula>formula see original document page 190</formula> em que R4 é hidrogênio, um grupo de proteção de nitrogênio que hidrolisa sob condições ácidas ou ftalamida; para proporcionar um composto da fórmula III como definido na reivindicação 25.
30. Uso de um composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 13 a 17, caracterizado por ser para a manufatura de uma composição farmacêuti- ca para aumentar a resposta imuno em um sujeito, ou pa- ra a manufatura de uma composição farmacêutica antitu- moral, ou para a manufatura de uma composição farmacêu- tica para tratamento na infecção bacteriana, fúngica ou de origem viral, ou para a manufatura de uma composição farmacêutica para tratamento de uma enfermidade autoi- mune.
31. Uso, de acordo com a reivindicação 30, caracterizado por ser para a manufatura de uma com- posição farmacêutica para o tratamento e/ou profilaxia do câncer.
32. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 30 e 31, caracterizado por ser para a manufatura de uma composição farmacêutica para o trata- mento e/ou profilaxia de uma enfermidade ou condição selecionada a partir do grupo que consiste de câncer cólon-retal, câncer de mama, câncer de próstata, mela- noma, mastocitoma, câncer de pulmão e câncer renal.
33. Uso, de acordo com a reivindicação -30, caracterizado por ser para a manufatura de uma com- posição farmacêutica para o tratamento e/ou profilaxia da AIDS e enfermidades relacionadas.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1847536A1 (en) * 2006-04-20 2007-10-24 Prodimed, S.A. Synthesis and uses of pyroglutamic acid derivatives
JP5926282B2 (ja) * 2010-12-16 2016-05-25 タフロック テクノロジー プロプライアタリー リミテッド 改良された鉱物系組成物および使用方法
US9260388B2 (en) * 2011-12-15 2016-02-16 Dow Global Technologies Llc Process for preparing alkyl pyroglutamic acids
CA2981444C (en) * 2015-04-09 2023-05-02 Laboratori Baldacci S.P.A. Pyrrolidone carboxylic acid (pca) for ophthalmic use
ES2846833T3 (es) 2016-07-18 2021-07-29 Janssen Pharmaceutica Nv Ligandos de obtención de imágenes de tau por PET
CN111323529B (zh) * 2020-04-23 2023-08-25 广东华南药业集团有限公司 一种液相色谱法分离测定右美沙芬与左美沙芬的方法

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2083930B1 (es) * 1994-12-22 1996-12-16 Totiam S L Nuevos derivados del acido piroglutamico, procedimiento para su preparacion y aplicaciones.
JP3445986B1 (ja) * 2002-09-27 2003-09-16 松下電器産業株式会社 インターネットに接続するサーバ、機器および通信システム
US6977311B2 (en) * 2002-10-25 2005-12-20 Bionumerik Pharmaceuticals, Inc. Process for synthesizing L-γ-methylene glutamic acid and analogs
EP1847536A1 (en) * 2006-04-20 2007-10-24 Prodimed, S.A. Synthesis and uses of pyroglutamic acid derivatives

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