BRPI0710874A2

BRPI0710874A2 - compostos de tienopirimidina, processos de produção dos referidos compostos, composições farmacêuticas contendo os mesmos, kit, produto, e usos dos compostos

Info

Publication number: BRPI0710874A2
Application number: BRPI0710874-5A
Authority: BR
Inventors: Irina S Chuckowree; Adrian FOLKES; Tim Hancox; Stephen Shuttleworth
Original assignee: Hoffmann La Roche
Priority date: 2006-04-26
Filing date: 2007-04-24
Publication date: 2012-02-14
Also published as: KR101533461B1; ATE471940T1; ES2347187T3; AU2007246793B2; TW200811188A; CR10455A; US20130230585A1; NO342593B1; US20080076768A1; AR060631A1; RU2439074C2; ECSP088913A; CA2650303A1; IL194784A0; NO20084931L; WO2007129161A3; DK2024372T3; US20110065701A1; US20140221367A1; KR20090021156A

Abstract

COMPOSTOS DE TIENOPIRIMIDINA, PROCESSOS DE PRODUçãO DOS REFERIDOS COMPOSTOS, COMPOSIçõES FARMACêUTICAS CONTENDO OS MESMOS, KIT, PRODUTO, E USOS DOS COMPOSTOS. Trata-se de uma tienopirimidina da fórmula (I) e os sais farmaceuticamente aceitáveis dessa possuem atividade como inibidores de PI3K com seletividade para o subtipo P1 10, e podem ser usados para tratar doenças e distúrbios que surgem de crescimento celular, função ou comportamento anormal, particularmente aqueles associados com P13 quinase, tais como, câncer, distúrbios imunes, doença cardiovascular, infecção viral, inflamação, distúrbios metabólicos/endócrinos e distúrbios neurológicos. Trata-se também de processos para sintetizar os compostos.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "COMPOS- TOS FARMACÊUTICOS".

PRIORIDADE DE INVENÇÃO

Esse pedido reivindica a prioridade de Pedido Provisório norte- americano Número 60/794.966 que foi depositado em 26 de abril de 2006. Estando a totalidade de seu conteúdo aqui incorporada, a título de referên- cia.

CAMPO DA INVENÇÃO

A presente invenção refere-se a derivados de pirimidina e seu uso como inibidores de fosfatidilinositol 3-quinase (PBK).

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

Fosfatidilinositol (mais adiante neste documento abreviado como "PI") é um entre inúmeros fosfolipídeos encontrados em membranas celula- res. Nos últimos anos ficou claro que Pl exerce uma função importante em transdução de sinal intracelular. No final de 1980, uma PI3 quinase (PI3K) foi identificada como uma enzima que fosforila a posição 3 do anel inositol de fosfatidilinositol (D. Whitman et ai, 1988, Nature, 332, 664).

PI3K foi originalmente considerada como uma única enzima, porém foi esclarecido agora que uma pluralidade de subtipos está presente em PI3K. Cada subtipo possui seu próprio mecanismo para regular a ativi- dade. Três classes principais de PI3Ks foram identificadas sobre a base de sua especificidade de substrato in vitro (B. Vanhaesebroeck., 1997, Trend in Biol. Sei, 22, 267). Os substratos de PI3Ks da classe I são PI, Pl 4-fosfato (PI4P) e Pl 4,5-bifosfato (PI (4,5)P2). As PBKs da classe I são adicionalmen- te divididas em dois grupos, classe Ia e classe Ib, em termos de seu meca- nismo de ativação. As PI3Ks de classe Ia incluem subtipos de PI3K p110a, p110β e ρ110δ, que transmitem sinais de receptores acoplados à tirosina quinase. A PI3K de classe Ib inclui um subtipo ρ110γ ativado por um recep- tor acoplado à proteína G. PI e PI(4)P são conhecidos como substratos de PBKs de classe II. As PBKs de classe Il incluem os subtipos PI3K C2a, C2p e C2y, que são caracterizados por conter domínios C2 no C-terminal. O substrato de PBKs de classe III é apenas PI. Nos subtipos de PBK, o subtipo de classe Ia foi mais amplamen- te investigado até agora. Os três subtipos de classe Ia são heterodímeros de uma subunidade catalítica 110 kDa e subunidades reguladoras de 85 kDa ou 55 kDa. As subunidades reguladoras contêm domínios SH2 e se ligam aos resíduos de tirosina fosforilados por receptores de fator de crescimento com atividade de tirosina quinase ou produtos de oncogene, que assim induzem a atividade de PBK da subunidade catalítica p110 que fosforila seu substrato lipídico. Assim, os subtipos de classe Ia são considerados como associados com a proliferação celular e carcinogênese.

WO 01/083456 descreve uma série de derivados de heteroaril condensado que possuem atividade como inibidores de PI3 K e que supri- mem o crescimento de célula de câncer.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

Foi descoberto que uma tienopirimidina particular é um inibidor potente de PI3K com propriedades fisicoquímicas e farmacocinéticas como fármaco. O composto apresenta seletividade para PI3Ks de classe Ia sobre a classe Ib, em particular para o subtipo P110a.

Conseqüentemente, a presente invenção proporciona um com- posto que é uma tienopirimidina da fórmula (I):

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ou um sal farmaceuticamente aceitável desse.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

A tienopirimidina da fórmula (I) é 2-(1H-Indazol-4-il)-6-(4- metanossulfonil-piperazin-1-ilmetil)-4-morfolin-4-il-tieno [3,2-d]pirimidina

Uma estratégia sintética adequada para produzir o composto da invenção emprega o carboxaldeído precursor da fórmula (II): <formula>formula see original document page 4</formula>

Partindo-se desse precursor a síntese compreende realizar, em cada ordem, uma reação de acoplamento cruzado mediada por paládio (tipo Suzuki) e uma aminação redutiva. Assim, um composto da invenção pode ser preparado por um processo que compreende:

(a) tratar um composto da fórmula (II):

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com um ácido borônico ou éster desse da fórmula (IV):

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em que cada R15 é H ou C1-C6 alquila ou os dois grupos OR15 formam, jun- tamente com o átomo de boro ao qual esses estão ligados, um grupo pina- colato boronato éster, na presença de um catalisador Pd; e tratam o com- posto resultante da fórmula (III):

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com uma amina da fórmula (V) <formula>formula see original document page 5</formula>

na presença de um agente de redução adequado; ou (b) tratar um composto da fórmula (II)

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com uma amina da fórmula (V)

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na presença de um agente de redução adequado; e tratar o composto resul- tante da fórmula (VI):

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com um ácido borônico ou éster desse da fórmula

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em que cada R15 é H ou C1-C6 alquila ou os dois grupos OR15 formam, jun- tamente com o átomo de boro ao qual esses estão ligados, um grupo pina- colato boronato éster, na presença de um catalisador Pd. Conseqüentemente, a presente invenção proporciona adicional- mente um processo para produzir um composto da invenção como definido acima, esse processe compreende tratar um composto da fórmula (III):

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com uma amina da fórmula (V)

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na presença de um agente de redução adequado.

O processo definido assim pode compreende ainda produzir o composto da fórmula (III) ao tratar um composto da fórmula (II):

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com um ácido borônico ou éster desse da fórmula (IV):

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em que cada R15 é H ou C1-C6 alquila ou os dois grupos OR15 formam, jun- tamente com o átomo de boro ao qual esses estão ligados, um grupo pina- colato boronato éster, na presença de um catalisador Pd.

Ainda adicionalmente, a presente invenção proporciona um pro- cesso para produzir um composto da invenção como definido acima, esse processo compreende tratar um composto da fórmula (VI): <formula>formula see original document page 7</formula>

com um ácido borônico ou éster desse da fórmula (IV):

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O processo definido assim pode compreender ainda produzir o composto da fórmula (VI) ao tratar um composto da fórmula (II)

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com uma amina da fórmula (V)

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na presença de um agente de redução adequado.

Um sal farmaceuticamente aceitável de uma tienopirimidina da fórmula (I) pode ser preparado utilizando técnicas convencionais. Tipicamen- te, o processo compreende tratar a tienopirimidina da fórmula (I) como defi- nido acima com um ácido adequado em um solvente adequado.

No processo da invenção como definido acima, tanto a etapa de aminação como a etapa de acoplamento cruzado mediado por Pd ocorrem sob condições convencionais. O catalisador de paládio pode ser qualquer um que é tipicamente usado para acoplamentos cruzados tipo Suzuki, tal como, PdCI2(PPh3)2. O agente de redução é tipicamente um boroidreto, por exemplo, NaBH(OAc)3, NaBH4 ou NaCNBH4, em particular NaBH(OAc)3. O pinacolato boronato éster pode ser, por exemplo, preparado por um proces- so como descrito em cada Exemplo de Referência 5 e 6 a seguir.

Um composto da fórmula (II) como definido acima pode ser pre- parado por um processo que compreende tratar um composto da fórmula (VII):

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com um agente de litiação seguido por Ν,Ν'-dimetilformamída (DMF). A rea- ção é tipicamente realizada ao adicionar uma solução do agente de litiação em um solvente orgânico não-polar, por exemplo, um solvente de hidrocar- boneto, tal como, hexano, a uma suspensão do composto da fórmula (IX) em um solvente orgânico, tal como, tetraidrofurano (THF). Se THF for usado a adição ocorre em uma temperatura baixa, de cerca de -78°C. O agente de litiação é tipicamente um alquilítio, por exemplo, n-butilítio.

Um composto da fórmula (VII) como definido acima pode ser produzido por um processo que compreende tratar um composto da fórmula (VIII):

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com morfolina em um solvente orgânico. O solvente é tipicamente um álcool, tal como, metanol. A reação é geralmente realizada em temperatura ambien- te.

O composto da fórmula (VIII) pode ser preparado pelo processo descrito no Exemplo de Referência 1, ou por analogia com tal processo.

Uma tienopirimidina da fórmula (I) pode ser convertida em um sal farmaceuticamente aceitável dessa, e um sal pode ser convertido no composto livre, por métodos convencionais. Exemplos de sais farmaceuti- camente aceitáveis incluem sais com ácidos inorgânicos, tais como, ácido hidroclórico, ácido hidrobrômico, ácido hidroiódico, ácido sulfúrico, ácido ní- trico e ácido fosfórico; e ácidos orgânicos, tais como, ácido metanossulfôni- co, ácido benzenossulfônico, ácido fórmico, ácido acético, ácido trifluoroacé- tico, ácido propiônico, ácido oxálico, ácido malônico, ácido succínico, ácido fumárico, ácido maléico, ácido láctico, ácido málico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido etanossulfônico, ácido aspártico e ácido glutâmico. Tipicamen- te, o sal é um mesilato, um hidrocloreto, um fosfato, um benzenossulfonato ou um sulfato. Mais tipicamente, o sal é um mesilato ou um hidrocloreto.

Os sais, por exemplo, sais com qualquer um dos ácidos inorgâ- nicos ou orgânicos mencionados acima, podem ser mono-sais ou bis-sais. Assim, por exemplo, o sal de mesilato pode ser o mono-mesilato ou o bis- mesilato.

Os compostos da fórmula (I) e seus sais podem se apresentar como hidratos ou solvatos.

Um composto da presente invenção foi encontrado em testes biológicos como um inibidor de PB quinase. O composto é seletivo para PI3 quinases de classe Ia sobre a Ibe e apresenta tipicamente ao menos uma seletividade de 20 dobras* de PB quinases classe Ia sobre classe lb. Em particular, o composto é seletivo para isoforma p110 a.

Um composto da presente invenção pode ser assim usado como um inibidor de PB quinase, em particular de PB quinase de classe Ia. Con- seqüentemente, um composto da presente invenção pode ser usado para tratar uma doença ou distúrbio que surge de crescimento celular, função ou comportamento anormal. Tal crescimento celular, função ou comportamento anormal é tipicamente associado com PB quinase. Exemplos de tais doen- ças e distúrbios são discutidos por Drees et al em Expert Opin. Ther. Patents (2004) 14(5):703 - 732. Esses incluem câncer, distúrbios imunes, doença cardiovascular, infecção viral, inflamação, distúrbios de metabolis- mo/endócrinos e distúrbios neurológicos. Exemplos de distúrbios de metabo- lismo/endócrinos incluem diabetes e obesidade.

Exemplos de cânceres que os presentes compostos podem ser usados para tratar incluem leucemia, tumores cerebrais, câncer renal, cân- cer gástrico e câncer de pele, bexiga*, mama, útero, pulmão, cólon, próstata, ovário e pâncreas. Um paciente humano ou animal que sofre de um distúrbio imune, câncer, doença cardiovascular, infecção viral, inflamação, um distúr- bio de metabolismo/endócrino ou um distúrbio neurológico pode ser assim tratado por um método que compreende a administração de um composto da presente invenção como definido acima. A condição do paciente pode ser assim suavizada ou melhorada.

As doenças e condições tratáveis de acordo com os métodos dessa invenção incluem, porém sem caráter limitativo, câncer, acidente vas- cular cerebral, diabetes, hepatomegalia, doença cardiovascular, doença de Alzheimer, fibrose cística, doença viral, doenças auto-imunes, aterosclerose, restenose, psoríase, distúrbios alérgicos, inflamação, distúrbios neurológi- cos, uma doença relacionada com hormônio, condições associadas com o transplante de órgão, distúrbios de imunodeficiência, distúrbios ósseos des- trutivos*, distúrbios proliferativos, doenças contagiosas, condições associa- das com morte celular, agregação plaquetária induzida por trombina, leuce- mia mielóide crônica (CML), doença do fígado, condições imunes patológi- cas que envolvem ativação de célula T, e distúrbios de CNS em um pacien- te. Em uma modalidade, um paciente humano é tratado com um composto da Fórmula I e um transportador, adjuvante, ou veículo farmaceuticamente aceitável, em que o dito composto da Fórmula I está presente em uma quan- tidade para inibir detectavelmente a atividade de PI3 quinase.

Os cânceres que podem ser tratados de acordo com os métodos dessa invenção incluem, porém sem caráter limitativo, mama, ovário, colo do útero, próstata, testículos, trato geniturinário, esôfago, laringe, glioblastoma, neuroblastoma, estômago, pele, ceratoacantoma, pulmão, carcinoma epi- dermóide, carcinoma de grandes células, carcinoma pulmonar de células não-pequenas (NSCLC), carcinoma de pequenas células, adenocarcinoma pulmonar, osso, cólon, adenoma, pâncreas, adenocarcinoma, tireóide, carci- noma folicular, carcinoma indiferenciado, carcinoma papilar, seminoma, me· lanoma, sarcoma, carcinoma da bexiga, carcinoma do fígado e passagens biliares, carcinoma de rim, distúrbios mielóides, distúrbios linfáticos, células cabeludas, cavidade bucal e faringe (oral), lábio, língua, boca, intestino del- gado, colo-retal, intestino grosso, reto, cérebro e sistema nervoso central, Hodgkin e leucemia.

As doenças cardiovasculares que podem ser tratadas de acordo com os métodos dessa invenção incluem, porém sem caráter limitativo, res- tenose, cardiomegalia, aterosclerose, infarto do miocárdio, e insuficiência cardíaca congestiva. A doença neurodegenerativa que pode ser tratada de acordo com os métodos dessa invenção incluem, porém sem caráter limitati- vo, doença de Alzheimer, doença de Parkinson1 esclerose lateral amiotrófica esclerose, doença de Huntington, e isquemia cerebral, e doença neurodege- nerativa causada por lesão traumática, neurotoxicidade do glutamato e hipo- xia.

As doenças inflamatórias que podem ser tratadas de acordo com os métodos dessa invenção incluem, porém sem caráter limitativo, artrite reumatóide, psoríase, dermatite de contato, e reações de hipersensibilidade atrasadas.

Além de possuir potência bioquímica o composto da invenção apresenta propriedades fisicoquímicas e farmacocinéticas que o torna parti- cularmente bem adaptado para uso como fármaco. Isso é mostrado, por e- xemplo, nos resultados das análises biológicas descritas no Exemplo 3 a seguir. Em particular o composto possui alta solubilidade aquosa em pH fisi- ológico; a solubilidade é maior que 100 μΜ. A alta solubilidade em pH fisio- lógico é desejada visto que promove a biodisponibilidade.

O composto também possui alta estabilidade metabólica, como mostrado, em particular, pela *anáiise de depuração de hepatócito descrita no Exemplo 3 onde o composto foi mostrado com baixa depuração* de he- patócito. A baixa depuração* de hepatócito se correlaciona com uma taxa baixa de metabolismo do fígado. Pode ser, portanto, observado que o com- posto da presente invenção possui propriedades fisicoquímicas e farmacoci- néticas aprimoradas enquanto mantém a potência bioquímica como um ini- bidor de PI3 quinase.

Um composto da presente invenção pode ser administrado em uma variedade de formas de dosagem, por exemplo, oralmente, tal como na forma de tabletes, cápsulas, tabletes cobertos de açúcar ou película, solu- ções líquidas ou de forma parenteral, por exemplo, intramuscular, intraveno- sa ou subcutânea. O composto pode ser, portanto, administrado por injeção ou infusão.

A dosagem depende de uma variedade de fatores inclusive a idade, peso e condição do paciente e a via de administração. As dosagens diárias podem variar dentro de grandes limites e serão ajustadas às exigên- cias individuais em cada caso particular. Tipicamente, entretanto, a dosagem adotada para cada via de administração quando um composto for adminis- trado sozinho em humanos adultos é 0,0001 a 50 mg/kg, mais comumente na faixa de 0,001 a 10 mg/kg, por peso corporal, por exemplo, 0,01 a 1 mg/kg. Tal dosagem podem ser administrada, por exemplo, de 1 a 5 vezes ao dia. Para injeção intravenosa uma dose diária adequada é de 0,0001 a 1 mg/kg por peso corporal, de preferência, de 0,0001 a 0,1 mg/kg por peso corporal. Uma dosagem diária pode ser administrada como uma dosagem única ou de acordo com um regime posológico dividido.

Tipicamente uma dose para tratar pacientes humanos pode vari- ar de cerca de 10 mg a cerca de 1000 mg de um composto da invenção. Uma dose típica pode ser cerca de 100 mg a cerca de 300 mg do composto. Uma dose pode ser administrada uma vez ao dia (QID), duas vezes ao dia (BID), ou mais freqüentemente, dependendo das propriedades farmacociné- ticas e farmacodinâmicas, inclusive absorção, distribuição, metabolismo, e excreção do composto particular. Ademais, os fatores de toxicidade podem influenciar o regime posológico e de administração. Quando administrada oralmente, o comprimido, cápsula ou tablete pode ser ingerido diariamente ou menos freqüentemente durante um período de tempo especificado. O regime pode ser repetido inúmeros ciclos de terapia.

Um composto é formulado para uso como um produto farmacêu- tico ou composição veterinária que também compreende um veículo ou dilu- ente aceitável de forma farmacêutica ou veterinária. As composições são tipicamente preparadas seguindo métodos convencionais e são administra- das em uma forma adequada de maneira farmacêutica ou veterinária*. O composto pode ser administrado de qualquer forma convencional, por e- xemplo, como se segue:

A) De forma oral, por exemplo, como tabletes, tabletes revesti- dos, drágeas, pasrtilhas, comprimidos, suspensões aquosas ou oleosas, so- luções líquidas, pós ou grânulos dispersíveis, emulsões, cápsulas duras ou macias, ou xaropes ou elixires. As composições destinadas para uso oral podem ser preparadas de acordo com qualquer método conhecido na técni- ca para a fabricação de composições farmacêuticas e tais composições po- dem conter um ou mais agentes selecionados do grupo que consiste em a- gentes adoçantes, agentes flavorizantes, agentes corantes e agentes con- servantes para proporcionar preparações farmaceuticamente refinadas e palatáveis. Os tabletes contêm o ingrediente ativo em mistura com excipien- tes não-tóxicos farmaceuticamente aceitáveis que são adequados para a fabricação de tabletes. Esses excipientes podem ser, por exemplo, diluentes inertes, tais como, carbonato de cálcio, carbonato de sódio, lactose, dextro- se, sacarose, celulose, amido de milho, amido de batata, fosfato de cálcio ou fosfato de sódio; agentes de granulação e desintegrantes, por exemplo, a- mido de milho, ácido algínico, alginatos ou amido glicolato de sódio; agentes de ligação, por exemplo, amido, gelatina ou acácia; agentes lubrificantes, por exemplo, sílica, estearato de magnésio ou cálcio, ácido esteárico ou tal- co; misturas efervescentes; corantes, adoçantes, agentes umectantes, tais como, lecitina, polissorbatos ou Iauril sulfato. Os tabletes podem ser não- revestidos ou podem ser revestidos por técnicas conhecidas para atrasar a desintegração e adsorção no trato gastrointestinal e proporcionar assim uma ação contínua durante um período mais longo. Por exemplo, um material de atraso de tempo*, tal como, monoestearato de glicerila ou diestearato de glicerila pode ser empregado. Tais preparações podem ser fabricadas de maneira conhecida, por exemplo, por meio de processos de mistura, granu- lação, formação de tabletes, aplicação de açúcar ou película.

As formulações para uso oral também podem ser apresentadas como cápsulas de gelatina duras em que o ingrediente ativo é misturado com um diluente sólido inerte, por exemplo, carbonato de cálcio, fosfato de cálcio ou caulim, ou como cápsulas de gelatina macias em que o ingrediente ativo está presente como tal, ou misturado com água ou um meio oleoso, por exemplo, óleo de amendoim, parafina líquida, ou óleo de oliva.

As suspensões aquosas contêm os materiais ativos em mistura com excipientes adequados para a fabricação de suspensões aquosas. Tais excipientes são agentes de suspensão, por exemplo, carboximetilcelulose de sódio, metilcelulose, hidroxipropilmetil-celulose, alginato de sódio, polivi- nilpirrolidona, goma tragacanto e goma acácia; agentes dispersantes ou u- mectantes podem ser fofatídeos naturalmente ocorrentes, por exemplo, Ieci- tina, ou produtos de condensação de um óxido de alquileno com ácidos gra- xos, por exemplo, estearato de polioxietileno, ou produtos de condensação de óxido de etileno com álcoois alifáticos de cadeia longa, por exemplo, hep- tadecaetilenooxicetanol, ou produtos de condensação de óxido de etileno com ésteres parciais derivados de ácidos graxos e um hexitol, tal como, mo- nooleato de polioxietileno sorbitol, ou produtos de condensação de óxido de etileno com ésteres parciais derivados de ácidos graxos e anidridos de hexi- tol, por exemplo, monooleato de polioxietileno sorbitano.

As ditas suspensões aquosas também podem conter um ou mais conservantes, por exemplo, p-hidroxibenzoato de etila ou n-propil, um ou mais agentes corantes, tal como, sucrose ou sacarina. A suspensão ole- osa pode ser formulada ao suspender o ingrediente ativo em um óleo vege- tal, por exemplo, óleo de amendoim, óleo de oliva, óleo de gergelim ou óleo de côco, ou em um óleo mineral, tal como, parafina líquida. As suspensões oleosas podem conter um agente espessante, por exemplo, cera de abelha, parafina dura ou álcool cetílico.

Os agentes adoçantes, tais como aqueles descritos acima, e agentes flavorizantes podem ser adicionados para proporcionar uma prepa- ração oral palatável. Essas composições podem ser conservadas por essa adição de um antioxidante, tal como, ácido ascórbico. Os pós e grânulos dispersíveis adequados para a preparação de uma suspensão aquosa a pe- la adição de água proporcionam o ingrediente ativo em mistura com um a- gente dispersante ou umectante, um agente de suspensão e um ou mais conservantes. Os agentes dispersantes ou umectantes adequados são e- xemplificados por aqueles já mencionados acima. Excipientes adicionais, por exemplo, agentes adoçantes, flavorizantes e corantes, também podem estar presentes.

As composições farmacêuticas da invenção também podem es- tar na forma de emulsões de óleo em água. A fase oleosa pode ser um óleo vegetal, por exemplo, óleo de oliva ou óleo de amendoim, ou um óleo mine- ral, por exemplo, parafina líquida ou misturas desses. Os agentes emulsifi- cantes adequados podem ser gomas naturalmente ocorrentes, por exemplo, goma acácia ou goma tragacanto, fosfatídeos naturalmente ocorrentes, por exemplo, Iecitina de soja, e ésteres ou ésteres parciais derivados de ácidos graxos e anidridos de hexitol, por exemplo, monooleato de sorbitano, e pro- dutos de condensação dos ditos ésteres parciais com óxido de etileno, por 20 exemplo, monooleato de polioxietileno sorbitano. A emulsão também pode conter agentes adoçantes e flavorizantes. Os xaropes e elixires podem ser formulados com agentes adoçantes, por exemplo, glicerol, sorbitol ou sucro- se. Em particular, um xarope para pacientes diabéticos pode conter como veículos apenas produtos, por exemplo, sorbitol, que não se metabolizam 25 em glicose ou que se metabolizam apenas em uma pequena quantidade em glicose. Tais formulações também podem conter um demulcente, um con- servante e agentes flavorizantes e corantes;

B) De forma parenteral, tanto de forma subcutânea, como intra- venosa, ou intramuscular, ou intraesternal, ou por técnicas de infusão, na 30 forma de suspensões aquosas ou oleosas injetáveis estéreis. Essa suspen- são pode ser formulada de acordo com a técnica conhecida utilizando aque- les agentes dispersantes ou umectantes adequados e agentes de suspen- são que foram mencionados acima. A preparação injetável estéril também pode ser uma solução ou suspensão injetável estéril em um diluente ou sol- vente não-tóxico paternalmente aceitável, por exemplo, como uma solução em 1,3-butano diol. Entre os veículos e solventes aceitáveis que podem ser empregados estão água, solução de Ringer e solução isotônica de cloreto de sódio. Ademais, os óleos estéreis, fixos são convencionalmente empre- gados como um solvente ou meio de suspensão. Para esse propósito, qual- quer óleo fixo suave pode ser empregado inclusive mono ou diglicerídeos sintéticos. Além disso, os ácidos graxos, tal como, ácido oléico encontram uso na preparação de injetáveis;

C) Por inalação, na forma de aerossóis ou soluções para nebuli- zadores;

D) De forma retal, na forma de supositórios preparados ao mistu- rar o fármaco com um excipiente não-irritante adequado que é sólido em temperatura comum, porém líquido na temperatura retal e irá, portanto, der- reter no reto para liberar o fármaco. Tais materiais são manteiga de cacau e polietileno glicóis;

E) De forma tópica, na forma de cremes, pomadas, géis, colírios, soluções ou suspensões.

F) De forma vaginal, na forma de pessários, tampões, cremes, géis, pastas, espumas ou formulações em aerossol que contêm além do in- grediente ativo tais veículos são conhecidos na técnica como apropriado.

As preparações de liberação sustentada de um composto da invenção podem ser preparadas. Exemplos adequados de preparações de liberação sustentada incluem matrizes semipermeáveis de polímeros hidro- fóbicos sólidos que contêm um composto da Fórmula I, tais matrizes estão na forma de artigos conformados, por exemplo, películas ou microcápsulas. Exemplos de matrizes de liberação sustentada incluem poliésteres, hidrogéis (por exemplo, poli(2-hidroxietil-metacrilato), ou poli(vinil álcool)), polilactídeos (Patente No. U.S. 3.773.919), copolímeros de ácido L-glutâmico e gama-etil- L-glutamato, etileno-vinil acetato não-degradável, copolímeros de ácido láti- co-ácido-glicólico degradáveis, tais como, LUPRON DEPOT™ (microesferas injetáveis compostas de copolímero de ácido láctico-ácido glicólico e acetato de leuprolida) e ácido poli-D-(-)-3-hidroxibutírico.

Um composto da invenção pode ser empregado separado ou em combinação com outros agentes terapêuticos para o tratamento de uma do- ença ou distúrbio descrito aqui, tal como, um distúrbio hiperproliferativo (por exemplo, câncer). Em certas modalidades, um composto da invenção é combinado em uma formulação de combinação farmacêutica, ou regime de dosagem como terapia de combinação, com um segundo composto que possui propriedades anti-hiperproliferativas ou que é útil para tratar um dis- túrbio hiperproliferativo (por exemplo, câncer). O segundo composto da for- mulação de combinação farmacêutica ou regime de dosagem possui, de preferência, atividades complementares ao composto da invenção de modo que um não afete o outro de modo adverso. Tais compostos estão adequa- damente presentes em combinação em quantidades que são eficazes para o propósito pretendido. Em uma modalidade, uma composição dessa invenção compreende um composto da invenção, em combinação com um agente quimioterapêutico, tal como descrito aqui.

A terapia de combinação pode ser administrada como um regi- me simultâneo ou seqüencial. Quando administrada de forma seqüencial, a combinação pode ser administrada em duas ou mais administrações. A ad- ministração combinada inclui a co-administração, utilizando formulações se- paradas ou uma única formulação farmacêutica, e administração consecuti- va em cada ordem, em que há, de preferência, um período de tempo en- quanto ambos (ou todos) os agentes ativos exercem simultaneamente suas atividades biológicas.

As dosagens adequadas para quaisquer agentes co- administrados acima são aquelas atualmente usadas e podem ser diminuí- das devido à ação combinada (sinergia) do agente recentemente identificado e outros agentes quimioterapêuticos ou tratamentos.

A invenção será adicionalmente descrita nos Exemplos a seguir:

Exemplo de Referência 1: 2,4-Dicloro-tienor3,2-d1pirimidina (VIII) <formula>formula see original document page 18</formula>

Uma mistura de metil 3-amino-2-tiofenocarboxilato (13,48 g, 85,85mmol) e uréia (29,75g, 5eq.) foi aquecida a 190°C durante 2 h. A mistu- ra de reação quente foi então despejada em solução de hidróxido de sódio e qualquer material insolúvel removido por filtração. A mistura foi então acidifi- cada (HCI, 2N) para produzir 1H-tieno [3,2-d]pirimidina-2,4-diona (IX) como um precipitado branco, que foi coletado por filtração e seca ao ar (9,49g, 66%).

1H NMR (400 MHz, cfe-DMSO) 6,90 (1H, d, J=5,2Hz), 8,10 (1H, d, J=5,2Hz), 11,60-11,10 (2H, brs).

Uma mistura de 1H-tieno[3,2-d]pirimidina-2,4-diona (9,49g, 56,49mmol) e oxicloreto fosforoso (150mL) foi aquecida em refluxo durante 6 h. A mistura de reação foi então resfriada e despejada em gelo/água com agitação vigorosa para produzir um precipitado. A mistura foi então filtrada para produzir 2,4-dicloro-tieno[3,2-d]pirimidina (VIII) como um sólido branco (8,68 g, 75%)

Exemplo de Referência 2: 2-Cloro-4-morfolin-4-il-tienof3,2-d1pirimidina (VII) 42,34mmol), morfolina (8,11 mL, 2,2eq.) e MeOH (150mL) foi agitada em temperatura ambiente durante 1 h. A mistura de reação foi então filtrada, lavada com água e MeOH, para produzir o composto de título como um sóli- do branco (11,04 g, 100%).

H NMR (400 MHz, CDCI3) 7,56 (1H, d, J=5,5Hz), 8,13 (1H, d, J=5,5Hz).

<formula>formula see original document page 18</formula>

Uma mistura de 2,4-dicloro-tieno[3,2-d]pirimidina (VIII), (8,68g 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) 3,74 (4Η, t, J=4,9Hz), 3,90 (4Η, t, J=4,9Hz), 7,40 (1 Η, d, J=5,6Hz), 8,30 (1H, d, J=5,6Hz).

Exemplo de Referência 3: 2-Cloro-4-morfolin-4-il-tieno[3.2-d]pirimidina-6- carbaldeído (II)

<formula>formula see original document page 19</formula>

A uma suspensão de 2-cloro-4-morfolin-4-il-tieno[3,2-d]pirimidina (VII) (1,75g, 6,85mmol) em THF seco (40mL) a -78°C foram adicionados 2,5M de solução de nBuLi em hexano (3,3mL, 1,2 eq.). Após agitação duran- te 1 h, DMF seco (796μL, 1,5eq.) foi adicionado. A mistura de reação foi agi- tada durante 1 h a -78°C e então lentamente aquecida em temperatura am- biente. Após mais 2 h em temperatura ambiente a mistura de reação é des- pejada em gelo/água para produzir um precipitado amarelo. Esse foi coleta- do por filtração e seco ao ar para produzir o composto de título (1,50 g, 77%) 1H NMR (400 MHz, d6-DMSO) 3,76 (4H, t,J = 4,9), 3,95 (4H, t, J=4,9), 8,28 (1H, s), 10,20 (1H, s).

Exemplo de Referência 4 2-Cloro-6-(4-metanossulfonil-piperazin-1-ilmetil)-4- morfolin-4-il-tieno [3,2-d]pirimidina (VI)

<formula>formula see original document page 19</formula>

N-BOC-piperazina e cloreto de metanossulfonil foram reagidos juntamente em diclorometano e trietilamina para produzir terc-butil éster do ácido 4-metanossulfonil-piperazina-1-carboxílico. A clivagem do grupo de proteção BOC que utiliza HCI (2M) em diclorometano produziu 1- metanossulfonil-piperazina. Sal HCl. Uma mistura de 2-cloro-4-morfolin-4-il- tieno[3,2-d]pirimidina-6-carbaldeído (II) (1,00g), 1-metanossulfonil-piperazina (750mg) e trimetilortoformato (3,80mL) foi agitada em 1,2-dicloroetano (30mL) durante 6 h em temperatura ambiente. A essa foi adicionado triace- toxiboroidreto de sódio (900mg) e a mistura de reação foi agitada durante 24 horas em temperatura ambiente. A mistura foi então extinguida com salmou- ra, extraída com diclorometano, seca (MgSCU) e o solvente removido a vá- cuo. O resíduo foi triturado com acetato de etila quente para produzir o com- posto de título (VI) como um sólido branco (1.01g).

Exemplo de Referência 5 4-(4.5.5-Tetrametil-[1.3.21dioxaborolan-2-il)-1H- indazol (IVa) - rota 1

<formula>formula see original document page 20</formula>

A uma solução de 3-bromo-2-metilanilina (5,0 g, 26,9mmol) em clorofórmio (50mL) foi adicionado acetato de potássio (1,05eq., 28,2mmol, 2,77g). Anidrido acético (2,Oeq., 53,7mmol, 5,07mL) foi adicionado com res- friamento simultâneo em água congelada. A mistura foi então agitada em temperatura ambiente durante 10 minutos após cada vez que um sólido ge- latinoso branco é formado. 18-Crown-6 (0,2eq., 5,37mmol, 1,42g) foi então adicionada seguida por iso-amil nitrito (2,2eq., 59,1mmol, 7,94mL) e a mistu- ra foi aquecida sob refluxo durante 18 h. A mistura de reação foi permitida para se resfriar, e foi dividida entre clorofórmio (3 χ 100mL) e carbonato de hidrogênio de sódio aquoso saturado (100mL). Os extratos orgânicos com- binados foram lavados com salmoura (100mL), separados e secos (MgSO4).

O produto cru foi evaporado em sílica e purificado por eluição de cromatografia com 20% a 40% de EtO Ac-petrol para obter 1-(4-bromo- indazol-1-il)-etanona (A) (3,14g, 49%) como um sólido laranja, e 4-bromo- 1H-indazol (B)(2,13g, 40%) como um sólido laranja claro.

A 1H NMR (400 MHz, CDCI3) 2,80 (3H, s), 7,41 (1H, t, J=7,8Hz), 7,50 (1H1 d, J=7,8Hz), 8,15 (1H, s), 8,40 (1H, d, J=7,8Hz).

B: 1H NMR (400 MHz, CDCI3) 7,25 (1H, t, J=7,3Hz), 7,33 (1H, d, J=7,3Hz), 7,46 (1H, d, J=7,3Hz), 8,11 (1H, s), 10,20 (1H, br s).

A uma solução de 1-(4-bromo-indazol-1-il)-etanona (3,09g, 12,9mmol) em MeOH (50mL) foram adicionados 6N de HCI aquoso (30mL) e a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 7 h. O MeOH foi e- vaporado e a mistura dividida entre EtOAc (2 χ 50mL) e água (50mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (50mL), sepa- radas e secas (MgSO^. O solvente foi removido por evaporação sob pres- são reduzida para obter 4-bromo-1 H-indazol (2,36 g, 93%).

A uma solução de 4-bromo-1 H-indazol (500 mg, 2,54mmol) e bis(pinacolato)diboro (1,5 eq., 3,81 mmol) em DMSO (20mL) foi adicionado acetato de potássio (3,0 eq., 7,61 mmol, 747 mg; seco em uma pistola de secagem) e PdCI2(dppf)2 (3 mol%, 0,076mmol, 62 mg). A mistura foi desga- seificada com argônio e aquecida a 80°C durante 40 h. A mistura de reação foi permitida para se resfriar e dividida entre água (50mL) e éter (3 χ 50mL).

As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (50mL), separadas e secas (MgS04). O material cru foi purificado por eluição de cromatografia com 30%->40% de EtO Ac-petrol para obter uma mistura in- separável 3:1 de 4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-1 H-indazol (369 mg, 60%) e indazol (60 mg, 20%); o composto de título (IVa) foi isolado como uma goma amarela que se solidifica até se tornar* uma massa como um sólido branco sujo.

1H NMR (400 MHz, cfe-DMSO) 1,41 (12H, s), 7,40 (1H, dd, J=8,4Hz, 6,9Hz), 7,59 (1H, d, J=8,4Hz), 7,67 (1H, d, J=6,9Hz), 10,00 (1H, br s), 8,45 (1H, s), e indazol: 7,40 (1H, t), 7,18 (1H, t, J= 7,9Hz), 7,50 (1H, d, J=9,1Hz), 7,77 (1H, d, J=7,9Hz), 8,09 (1H, s). Impureza a 1,25.

Exemplo de Referência 6: 4-(4,4.5,5-Tetrametil-[1.3,2]dioxaborolan-2-il)-1 H- indazol (IVa) - rota 2 <formula>formula see original document page 22</formula>

A uma solução de 2-metil-3-nitroanilina (2,27g, 14,91mmol) em ácido acético (60mL) foi adicionada uma solução de nitrito de sódio (1,13g, 1,1 eq.) em água (5mL). Após 2 h, a solução vermelha escura foi despejada em gelo/água e o precipitado resultante coletado por filtração para produzir 4-nitro-1 H-indazol (67) (1,98g, 81%). Uma mistura de 4-nitro-1H-indazol (760mg, 4,68mmol), paládio em carvão vegetal (10%, cat.) e etanol (30mL) foi agitada sob um balão de hidrogênio durante 4 h. A mistura de reação foi filtrada através de celite, e o solvente removido a vácuo para produzir 1 H- indazol-4-ilamina (68) (631 mg, 100%).

Uma solução aquosa de nitrito de sódio (337mg, 4,89mmol) em água (2mL) foi adicionada gota-a-gota a uma suspensão de 1 H-indazol-4- ilamina (631 mg, 4,74mmol) em 6M de ácido hidroclórico (7,2 mL) abaixo de 0°C. Após agitação durante 30 minutos, tetrafluoroborato de sódio (724mg) foi adicionado à mistura de reação. Resulta-se em uma solução viscosa, que foi filtrada e lavada rapidamente com água para produzir sal tetrafluorobora- to 1 H-indazol-4-diazônio (69) (218mg, 20%) como um sólido vermelho escuro.

MeOH seco (4mL) foi purgado com argônio durante 5 minutos. À essa foi adicionado sal tetrafluoroborato 1H-indazol-4-diazônio (218mg, 0,94mmol), bis-pinacolato diboro (239mg, 1,0 eq.) e cloreto de [1,1'- bis(difenilfosfino)ferroceno]paládio (II) (20mg). A mistura de reação foi agita- da durante 5 h e então filtrada através de celite. O resíduo foi purificado utili- zando cromatografia flash para produzir o composto de título desejado (IVa), (117mg).

Exemplo de Referência 7: 2-(1H-lndazol-4-il)-4-morfolin-4-il-tienor3.2- d]pirimidina-6-carbaldeiro (III)

<formula>formula see original document page 23</formula>

Uma mistura de 2-cloro-4-morfolin-4-il-tieno[3,2-d]pirimidina-6- carbaldeído (II) (100 mg, 0,35mmol), 4-(4,4,5,5-tetrametil- [1,3,2]dioxaborolan-2-il)-1H-indazol (70) (95mg, 0,39mmol) e carbonato de sódio (112mg) foi suspensa em tolueno (2,5mL), etanol (1,5mL) e água (0,7mL). À essa foi adicionado cloreto de bis(trifenilfosfina)paládio (II) (13,5mg) e o recipiente de reação foi lavado com argônio. A mistura de rea- ção foi submetida à microonda a 120°C durante 1 e então dividida entre DCM e água, a camada orgânica foi lavada com salmoura, seca com sulfato de magnésio, filtrada e evaporada a vácuo. O resíduo resultante foi purifica- do utilizando cromatografia flash para produzir o composto de título (III) (97mg).

Exemplo 1: 2-(1H-lndazol-4-il)-6-(4-metanossulfonil-piperazin-1-ilmetil)-4- morfolin-4-il-tieno [3,2-dl-pirimidina (I)

Uma mistura de 2-cloro-6-(4-metanossulfonil-piperazin-1-ilmetil)- 4-morfolin-4-il-tieno[3,2-d]pirimidina (2,00 g), 4-(4,4,5,5-tetrametil- [1,3,2]dioxaborolan-2-il)-1 H-indazol (2,26g), tolueno (24 mL), etanol (12 mL), água (6 mL), carbonato de sódio (1,72g) e PdCI2(PPh3)2 (325mg) foi aqueci- da a 130°C na microonda durante 90 minutos.

A mistura de reação foi resfriada, diluída com clorofórmio, lavada com salmoura, seca (MgSCXt) e o solvente removido a vácuo. O resíduo foi purificado utilizando cromatografia flash (acetato de etila, então 5% de ace- tato de etila/metanol) e então a trituração com éter produziu o composto de título desejado (1,4g)

dados MS: (ESI+): MH+514

dados NMR: (CDCI3): 2,67-2,71 (4H, m), 2,81 (3H, s), 3,29-3,33 (4H, m), 3,89 (2H, s), 3,89-3,93 (4H, m), 4,08-4,12 (4H, m), 7,41 (1H, s), 7,51 (1H, t, J=7,2), 7,60 (1H, d, J=8,3), 8,28 (1H, d, J=7,5), 9,02 (1H, s), 10,10 (1H, br)

Exemplo 2: bismesilato de 2-(1H-indazol-4-il)-6-(4-metanosulfonil-piperazin-1- ilmetil)-morfolin-4-il-tieno í3,2-d1 pirimidina

A 2-(1 H-indazol-4-il)-6-(4-metanossulfonil-piperazin-1 -ilmetil)-4- morfolin-4-il-tieno[3,2-d]pirimidina (2,00 g, 3,89mmol) em diclorometano (50ml) e metanol (20ml) foi adicionado ácido metanossulfônico (2 equiv., 505ul). A mistura de reação foi agitada durante 3 horas em temperatura am- biente a cada momento que o precipitado branco é gradualmente triturado*.

Os voláteis foram removidos a vácuo, o resíduo foi triturado com dietil éter, o solvente decantado e o sólido seco sob vácuo para obter o composto de títu- lo (2,70g).

NMR (400MHz, DMSO). Inclui os seguintes sinais

2,32 (s, 6H), 3,00 (s,3H), 3,84-3,86(4H,m). 4,09-4,11 (4H,m), 8,8)(1H,s).

Exemplo 3: Teste Biológico

Um composto da invenção, preparado como descrito acima, foi submetido à seguinte série de análises biológicas:

(i) Análise Bioquímica de PI3K

A inibição do composto de PI3K foi determinada em uma análise radiométrica utilizando enzima purificada, recombinante e ATP em uma con- centração de 1uM. O composto foi diluído em série em 100% de DMSO. A reação de quinase foi incubada durante 1 h em temperatura ambiente, e a reação foi concluída pela adição de PBS. Os valores de IC50 foram subse- qüentemente determinados utilizando ajuste de curva dose-resposta sigmói- de (gradiente variável). O composto possui um IC50 contra PI3K menor que 0,1 μΜ.

(ii) Inibição de Proliferação Celular As células foram semeadas em densidade ótima em uma placa de 96 poços e incubadas durante 4 dias na presença de composto de teste. Alamar Blue™ foi subseqüentemente adicionado ao meio de análise, e as células foram incubadas durante 6 h antes da leitura a 544nm de excitação, 590nm de emissão. Os valores EC50 foram calculados utilizando um ajuste de curva dose-resposta sigmóide. O composto possui um EC50 de 50 uM ou menos na faixa de linhagens celulares utilizada.

(iii) Permeabilidade a Caco-2

As células Caco-2 foram semeadas em placas Millipore Multis- creen em 1 χ 105 células/cm2, e foram cultivadas durante 20 dias. A avalia- ção da permeabilidade de composto foi subseqüentemente acompanhada. Os compostos foram aplicados à superfície apical (A) de monocamadas de células e a permeação do composto no compartimento basolateral (B) foi medida. Isso foi realizado na direção oposta (B-A) para investigar o transpor- te ativo. Um valor de coeficiente de permeabilidade, Papp, para cada compos- to, uma medida da taxa de permeação do composto ao longo da membrana, foi calculado. Os compostos foram agrupados em baixo (Papp </= 1,0 χ 10^6cm/s) ou alto (Papp >/= 1,0 χ 10^6cm/s) potencial de absorção com base na comparação com compostos de controle com absorção humana estabelecida.

Para avaliação da capacidade de um composto se submeter a efluxo ativo, a razão de basolateral (B) para transporte apical (A) comparada com A para B foi determinada. Os valores de B-A/A-B >/= 1,0 indicaram a ocorrência de efluxo celular ativo. Valores Papp >/= 1,0 χ 10^6cm/s.

(iv) Depuração de Hepatócito

As suspensões de hepatócitos humanos criopreservados foram usadas. As incubações foram realizadas em concentração de composto de 1mM ou 3 μΜ em uma densidade celular de 0,5 χ 10 células viáveis/mL. A concentração de DMSO final na incubação foi 0,25%. As incubações de con- trole também foram realizadas na ausência de células para revelar qualquer degradação não-enzimática. As amostras duplicadas (50pL) foram removi- das da mistura de incubação em 0, 5, 10, 20, 40 e 60 minutos (amostra de controle em apenas 60 minutos) e adicionadas a MeOH - contendo padrão interno (100 μL) - para concluir a reação. Tolbutamida1 7-hidroxicumarina, e testosterona foram usados como compostos de controle. As amostras foram centrifugadas e os sobrenadantes em cada ponto de tempo agrupados para análise por LC-MSMS. A partir de um plano de razão de área pico In (área pico de composto de origem/área pico de padrão interno) contra tempo, a depuração intrínseca (CLim) foi calculada como se segue: CLint (células μl/min/milhão) = Vxk1 onde k é a constante de taxa de eliminação, obtida do gradiente de concentração de In representada contra tempo; V é um termo de volume derivado do volume de incubação e é expresso como uL 106 células"1.

Sobre a base de depuração baixa (CL</= 4,6 pUmin/106 célu- las), média (CL >/= 4,6; </= 25,2 μl/min/10^6 células) e alta (>/= 25,2pl/min/106 células), o composto da invenção foi determinado possuindo baixa depuração de hepatócito.

(v) Inibição de Citocromo P450

O composto da invenção foi classificado contra cinco alvos CYP450 (1 A2, 2C9, 2C19, 2D6, 3A4) em 10 concentrações em duplicata, utilizando uma concentração superior de 100 uM. Os inibidores padrão (fura- filina, sulfafenazol, tranilcipromina, quinidina, cetoconazol) foram usados como controles. As placas foram lidas utilizando um BMG LabTechnoIogies PoIarStar em modo de fluorescência. O composto apresentou fraca atividade (IC50 >/-5vM) contra todas as isoformas de CYP450.

(vi) Indução de Citocromo P450

Os hepatócitos humanos recentemente isolados de um único doador foram cultivados durante 48 h antes da adição do composto de teste em três concentrações e foram incubados durante 72 h. Os substratos de sonda para CYP3A4 e CYP1A2 foram adicionados durante 30 minutos e 1 h antes do término da incubação. Em 72 h, as células e o meio foram removi- dos e o nível de metabolismo de cada substrato de sonda quantificado por LC-MS/MS. O experimento foi controlado utilizando indutores de P450s indi- viduais incubados em uma concentração em triplicata. O composto da in- venção mostrou efeitos insignificantes sobre a indução de enzimas de cito- cromo P450.

(vii) Ligação à Proteína Plasmática

As soluções de composto de teste (5um, 0,5% de concentração de DMSO final) foram preparadas em tampão e 10% de plasma (v/v em tampão). Uma placa de separação HT de 96 poços foi montada de modo que cada poço seja dividido em dois por uma membrana de celulose semi- permeável. A solução tampão foi adicionada a um lado da membrana e a solução plasmática ao outro lado; as incubações foram então realizadas a 37°C durante 2 h em triplicata. As células foram subseqüentemente esvazia- das, e as soluções de cada lote de compostos foram combinadas em dois grupos (isento de plasma e contendo plasma) então analisadas por LC- MSMS utilizando dois conjuntos de padrões de calibração para soluções i- sentas de plasma (6 pontos) e contendo plasma (7 pontos). O valor não- ligado à fração do composto foi calculado: compostos com elevada ligação a proteínas (>/=90% de ligação) possuem Fu </=0,1. O composto da invenção possui um valor Fu >/= 0,1.

(viii) bloqueio de canal hERG

O composto da invenção foi avaliado em termos de sua capaci- dade de modular o efluxo de rubídio de células HEK-294 que expressam de maneira estável canais de potássio hERG utilizando a metodologia de fluxo estabelecida. As células foram preparadas em meio contendo RbCI e foram semeadas em placas de 96 poços e desenvolvidas durante a noite para for- mar monocamadas. O experimento de efluxo foi iniciado ao aspirar o meio e lavar cada poço com 3 χ 100 pL do tampão de pré-incubação (contendo bai- xo [K+]) em temperatura ambiente.

Após a aspiração final, 50 pL de composto de estoque de servi- ço (2x) foram adicionados a cada poço e incubados em temperatura ambien- te durante 10 minutos. 50 pL de tampão de estímulo (contendo alto [K+]) foram então adicionados a cada poço obtendo as concentrações de compos- to de teste finais. As placas de células foram então incubadas em temperatu- ra ambiente durante mais 10 minutos. 80 pL de sobrenadante de cada poço foram então transferidos para poços equivalentes de uma placa de 96 poços e analisados através de espectroscopia de emissão atômica. O composto foi classificado como curvas IC50 de 10 concentrações e 2 réplicas por concen- tração (1 Opt duplicate curves), n=2, a partir de uma concentração superior de 100 μΜ.

Exemplo 4: Composição de tablete

Os tabletes, que pesam 0,15 g cada e contêm 25 mg de um composto da invenção são fabricados da seguinte maneira:

Composição para 10.000 tabletes

Composto ativo (250 g)

Lactose (800 g)

Amido de milho (415g)

Pó de talco (30 g)

Estearato de magnésio (5 g)

O composto ativo, Iactose e metade do amido de milho são mis- turados. A mistura é então levada para uma peneira com tamanho de malha de 0,5 mm. O amido de milho (10 g) é suspenso em água quente (90 mL). A pasta resultante é usada para granular o pó. O granulado é seco e dividido em pequenos fragmentos sobre uma peneira com tamanho de malha 1,4 mm. A quantidade restante de amido, talco e magnésio é adicionada, cuida- dosamente misturada e processada em tabletes.

Exemplo 5: Formulação Injetável

Formulação A

Composto ativo 200 mg

Solução de Ácido Hidroclórico 0,1 M ou

Solução de Hidróxido de Sódio 0,1 M q.s. a pH 4,0 a 7,0

Água Estéril q.s. a 10mL

A maior parte do composto da invenção é dissolvido em água (35° 40°C) e o pH ajustado entre 4,0 e 7,0 com o ácido hidroclórico ou o hi- dróxido de sódio como apropriado. Completa-se o volume com água e filtra- se através de um filtro microporoso estéril em um frasco de vidro âmbar de 10 mL (tipo 1) e vedado com fechamentos estéreis e sobrevedações. Formulação B

CompostoAtivo 125 mg

Fosfato Estéril, isento de Pirogênio, pH 7

Tampão, q.s. a 25mL

Composto ativo 200 mg

Álcool Benzílico 0,10 g

Glicofurol 75 1,45 g

Água para injeção q.s a 3,00 mL

O composto ativo é dissolvido no glicofurol. O álcool benzílico é então adicionado e dissolvido, e água adicionada a 3mL. A mistura é então filtrada através de um filtro microporoso estéril e vedado em frascos de vidro estéreis de 3mL (tipo 1).

Exemplo 6: Formulação de Xarope

Composto ativo 250 mg

Solução de Sorbitol 1,50 g

Glicerol 2,00 g

Benzoato de sódio 0,005 g

Aroma 0,0125mL

Água Purificada q.s. a 5,00 mL

O composto da invenção é dissolvido em uma mistura do glicerol e a maior parte da água purificada. Uma solução aquosa do benzoato de sódio é adicionada à solução, seguida pela adição da solução de sorbitol e por fim o aroma. O volume é completado com água purificada e bem misturado.

Claims

1. Composto que é uma tienopirimidina da fórmula (I): <formula>formula see original document page 30</formula> ou um sal farmaceuticamente aceitável desse.

2. Composto, de acordo com a reivindicação 1, em que o sal farmaceuticamente aceitável é selecionado entre sais com ácido hidroclóri- co, ácido hidrobrômico, ácido hidroiódico, ácido sulfúrico, ácido nítrico e áci- do fosfórico, ácido metanossulfônico, ácido benzenossulfônico, ácido fórmi- co, ácido acético, ácido trifluoroacético, ácido propiônico, ácido oxálico, áci- do malônico, ácido succínico, ácido fumárico, ácido maléico, ácido láctico, ácido málico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido etanossulfônico, ácido as- pártico e ácido glutâmico

3. Composto, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que o sal farmaceuticamente aceitável é um mono-sal ou um bis-sal.

4. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, que é um mono-sal ou um bis-sal com ácido metanossulfônico, ácido benzenossulfônico, ácido hidroclórico, ácido fosfórico e ácido sulfúrico.

5. Composto, de acordo com a reivindicação 1 que é bismesilato de 2-(1 H-indazol-4-il)-6-(4- metanossulfonil-piperazin-1 -ilmetil)-4-morfolin-4- il-tieno[3,2-d]pirimidina.

6. Processo para produzir um composto, de acordo com a rei- vindicação 1, tal processo compreende tratar um composto da fórmula (III): <formula>formula see original document page 30</formula> com uma amina da fórmula (V) <formula>formula see original document page 31</formula> na presença de um agente de redução adequado.

7. Processo, de acordo com a reivindicação 6, que compreende adicionalmente produzir o composto da fórmula (III) ao tratar um composto da fórmula (II): <formula>formula see original document page 31</formula> em que cada R15 é H ou C1-C6 alquila ou os dois grupos OR15 formam, jun- tamente com o átomo de boro ao qual esses estão ligados, um grupo pina- colato boronato éster, na presença de um catalisador Pd.

8. Processo para produzir um composto, de acordo com a rei- vindicação 1, tal processo compreende tratar um composto da fórmula (VI) <formula>formula see original document page 31</formula> com um ácido borônico ou éster desse da fórmula (IV): <formula>formula see original document page 31</formula> com um ácido borônico ou éster desse da fórmula (IV): <formula>formula see original document page 32</formula> em que cada R15 é H ou C1-C6 alquila ou os dois grupos OR15 formam, jun- tamente com o átomo de boro ao qual esses estão ligados, um grupo pina- colato boronato éster, na presença de um catalisador Pd.

9. Processo, de acordo com a reivindicação 8, que compreende adicionalmente produzir o composto da fórmula (VI) ao tratar um composto da fórmula (II) <formula>formula see original document page 32</formula> com uma amina da fórmula (V) <formula>formula see original document page 32</formula> na presença de um agente de redução adequado.

10. Processo para produzir um sal farmaceuticamente aceitável, de acordo com a reivindicação 1, tal processo compreende tratar uma tieno- pirimidina da fórmula (I): <formula>formula see original document page 32</formula> com um ácido adequado em um solvente adequado.

11. Processo, de acordo com a reivindicação 10, em que o ácido é selecionado entre ácido hidroclórico, ácido hidrobrômico, ácido hidroiódico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico, ácido metanossulfônico, ácido benzenossulfônico, ácido fórmico, ácido acético, ácido trifluoroacético, ácido propiônico, ácido oxálico, ácido malônico, ácido succínico, ácido fumárico, ácido maléico, ácido láctico, ácido málico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido etanossulfônico, ácido aspártico e ácido glutâmico

12. Processo, de acordo com a reivindicação 10 ou 11, em que o ácido é selecionado entre ácido metanossulfônico, ácido benzenossulfônico, ácido hidroclórico, ácido fosfórico e ácido sulfúrico.

13. Composição farmacêutica que compreende um veículo ou diluente farmaceuticamente aceitável, como um ingrediente ativo, um com- posto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5.

14. Composição, de acordo com a reivindicação 13, que é for- mulada para administração oral.

15. Composto, de acordo com a reivindicação 1, para uso em um método de tratamento do corpo humano ou animal por terapia.

16. Uso de um composto, de acordo com a reivindicação 1, na fabricação de um medicamento para tratar uma doença ou distúrbio que surge de crescimento celular, função ou comportamento anormal.

17. Uso, de acordo com a reivindicação 16, em que o crescimen- to celular, função ou comportamento anormal está associado com PI3 quinase.

18. Uso, de acordo com a reivindicação 16 ou 17, em que a do- ença ou distúrbio é selecionado entre câncer, distúrbios imunes, doença cardiovascular, infecção viral, inflamação, distúrbios de metabolis- mo/endócrinos e distúrbios neurológicos.

19. Uso, de acordo com a reivindicação 18, em que o câncer é selecionado entre tumores sólidos do cólon, mama, cérebro, fígado, ovário, estômago, pulmão, e cabeça e pescoço.

20. Uso, de acordo com a reivindicação 18, em que o câncer é selecionado entre glioblastoma, melanoma, próstata, endometrial, ovário, mama, pulmão, cabeça e pescoço, hepatocelular, e cânceres de tireóide.

21. Uso, de acordo com a reivindicação 18, em que o câncer é selecionado entre mama, ovário, colo do útero, próstata, testículos, trato ge- niturinário, esôfago, laringe, glioblastoma, neuroblastoma, estômago, pele, ceratoacantoma, pulmão, carcinoma epidermóide, carcinoma de grandes células, carcinoma pulmonar de células não-pequenas (NSCLC), carcinoma de pequenas células, adenocarcinoma pulmonar, osso, cólon, adenoma, pâncreas, adenocarcinoma, tireóide, carcinoma folicular, carcinoma indife- renciado, carcinoma papilar, seminoma, melanoma, sarcoma, carcinoma da bexiga, carcinoma do fígado e passagens biliares, carcinoma de rim, distúr- bios mielóides, distúrbios linfáticos, células cabeludas, cavidade bucal e fa- ringe (oral), lábio, língua, boca, faringe, intestino delgado, colo-retal, intestino grosso, reto, cérebro e sistema nervoso central, Hodgkin e leucemia.

22. Método para tratar uma doença ou distúrbio que surge de crescimento celular, função ou comportamento anormal, tal método compre- ende administrar em um paciente necessitado desse um composto, de acor- do com a reivindicação 1.

23. Método, de acordo com a reivindicação 22, em que o cres- cimento celular, função ou comportamento anormal está associado com P 13 quinase.

24. Método, de acordo com a reivindicação 22 ou 23, em que a doença ou distúrbio é selecionado do grupo que consiste em câncer, distúr- bios imunes, doença cardiovascular, infecção viral, inflamação, distúrbios de metabolismo/endócrinos e distúrbios neurológicos.

25. Método, de acordo com a reivindicação 24, em que a doença ou distúrbio é selecionado entre câncer, distúrbios imunes, doença cardio- vascular, infecção viral, inflamação, distúrbios de metabolismo/endócrinos e distúrbios neurológicos.

26. Método, de acordo com a reivindicação 24, em que o câncer é selecionado entre glioblastoma, melanoma, próstata, endometrial, ovário, mama, pulmão, cabeça e pescoço, hepatocelular, e cânceres de tireóide.

27. Método, de acordo com a reivindicação 24, em que o câncer é selecionado entre mama, ovário, colo do útero, próstata, testículos, trato geniturinário, esôfago, laringe, glioblastoma, neuroblastoma, estômago, pele, ceratoacantoma, pulmão, carcinoma epidermóide, carcinoma de grandes células, carcinoma pulmonar de células não-pequenas (NSCLC), carcinoma de pequenas células, adenocarcinoma pulmonar, osso, cólon, adenoma, pâncreas, adenocarcinoma, tireóide, carcinoma folicular, carcinoma indife- renciado, carcinoma papilar, seminoma, melanoma, sarcoma, carcinoma da bexiga, carcinoma do fígado e passagens biliares, carcinoma de rim, distúr- bios mielóides, distúrbios linfáticos, células cabeludas, cavidade bucal e fa- ringe (oral), lábio, língua, boca, faringe, intestino delgado, colo-retal, intestino grosso, reto, cérebro e sistema nervoso central, Hodgkin e leucemia.

28. Processo para produzir uma composição farmacêutica, tal processo compreende combinar um composto, de acordo com a reivindica- ção 1, com um veículo farmaceuticamente aceitável.

29. Kit para tratar uma condição medida por P 13K, que compreende: (a) uma primeira composição farmacêutica que compreende um composto, de acordo com a reivindicação 1; e (b) instruções para uso.

30. Kit, de acordo com a reivindicação 29, que compreende adi- cionalmente (c) uma segunda composição farmacêutica, em que a segunda composição farmacêutica compreende um segundo composto que possui atividade anti-hiperproliferativa.

31. Kit, de acordo com a reivindicação 30, que compreende adi- cionalmente instruções para a administração simultânea, seqüencial ou se- parada de ditas primeira e segunda composições farmacêuticas em um pa- ciente necessitado desse.

32. Kit, de acordo com a reivindicação 30, em que as ditas pri- meira e segunda composições farmacêuticas estão contidas em recipientes separados.

33. Kit, de acordo com a reivindicação 30, em que as ditas pri- meira e segunda composições farmacêuticas estão contidas no mesmo recipiente.

34. Produto, que compreende (a) um composto, de acordo com a reivindicação 1; e (b) um composto que possui atividade anti-hiperproliferativa; para administração separada, simultânea ou seqüencial no tra- tamento profilático ou terapêutico de câncer.