BRPI0712074A2 - composição para desativar um vìrus envelopado - Google Patents

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Donald F H Wallach
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Viroblock S A
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Abstract

COMPOSIçãO PARA DESATIVAR UM VìRUS ENVELOPADO. A presente invenção relaciona-se em geral ao campo da prevenção de doenças causadas por vírus envelopados. Mais particularmente, esta invenção diz respeito a uma composição para desativar um vírus envelopado, compreendendo ao menos uma Vesícula Lipídica não Fosfolipídica (nPLV) capaz de interagir com tal vírus envelopado e um agente que realça a troca de lipídios entre a tal nPLV e a membrana de tal vírus envelopado.

Description

COMPOSIÇÃO PARA DESATIVAR UM VÍRUS ENVELOPADO
Campo da Invenção
A presente invenção relaciona-se em geral ao campo da prevenção de doenças causadas por vírus envelopados. Mais particularmente, esta invenção diz respeito a uma composição para desativar um vírus envelopado, compreendendo ao menos uma Vesícula Lipídica não-fosfolipídica (nPLV) capaz de interagir com tal vírus envelopado e um agente que realça a troca de lipídios entre a tal nPLV e a membrana de tal vírus envelopado.
Dados preliminares da invenção
Vírus são pacotes de material genético associado com algumas proteínas. Eles entram em células selecionadas através de receptores específicos, reproduzem-se dentro destas, utilizando o maquinário celular normal, e mais freqüentemente saem ao destruir seus antigos hospedeiros. As estratégias antivirais têm empregado técnicas imunológicas ou drogas, inibindo funções específicas do vírus. Isso tem se mostrado difícil, pois os agentes contra muitos dos vírus também interferem nas funções celulares normais. Visto que os vírus evoluem em direção a um número mínimo de funções virais específicas, apropriando-se de funções celulares normais, os alvos virais específicos são em pequeno número. Já que há uma grande variedade de vírus, um agente voltado para uma atividade específica de certo vírus provavelmente não agirá de maneira equivalente em um vírus diferente. Porque o genoma viral sofre mutações freqüentemente, os vírus comumente desenvolvem resistência contra agentes específicos, anteriormente eficazes, permitindo que escapem das pressões seletivas dos agentes quimioterapêuticos. Assim, dos milhares de antivirais testados, apenas cerca de 40 continuam eficazes, dos quais metade são agentes anti-HIV. Combinações de agentes anti-HIV são comumente necessárias para se obter um benefício significativo. Da mesma forma, mutações de "alteração antigênica" ocorrem com freqüência após uma vacina ter sido empregada, tornando a vacina menos protetora (um ano mais ou menos no caso da gripe) e este é um problema importante em estratégias contra uma possível pandemia de gripe.
Os vírus podem ser agrupados em vírus não envelopados e envelopados. Os vírus envelopados são incluídos dentro de uma membrana de lipoproteína, ou envelope. Esse envelope é obtido da célula hospedeira à medida que o vírus "brota" a partir de sua superfície e consiste na maior parte em lipídeos não codificados pelo genoma viral. Embora ele carregue determinantes moleculares para inserção e entrada nas células alvo e seja essencial para a capacidade de infecção dos vírus envelopados, ele não está sujeito à resistência contra drogas ou alteração antigênica. Embora os lipídeos do envelope do vírus derivem da membrana plasmática da célula hospedeira, eles são depositados nos envelopes em proporções que diferem da membrana. Por exemplo, o envelope de HIV é enriquecido com colesterol (2,5 vezes) e com esfingomielina (3 vezes), ambos localizados principalmente na Iamela externa do envelope (Aloia, et al 1993). As membranas dos vírus da gripe são similarmente enriquecidas (Scheiffele et al, 1999) e o mesmo padrão tem sido relatado para outros vírus envelopados. Vale assinalar que recentemente foi mostrado que a depleção do colesterol interfere na capacidade de infecção dos vírus envelopados (Ono e Freed, 2001; Simons e Ehehalt, 2002). De fato, a evidência indica que os envelopes de vários vírus envelopados contêm "rafts lipídicos" separados em fases e enriquecidos com colesterol, sugerindo assim que os lipídeos do envelope viral podem ser um alvo no arsenal contra os vírus envelopados. Visto que os rafts lipídicos das células infectadas pelo vírus são sintetizados por essas células, o uso de inibidores direcionados às células, tais como as estatinas, exercerão grande toxidade sistêmica para serem aceitáveis como "agentes anti-raft". De fato, as estratégias anti-raft serão eficazes somente contra formas extracelulares do vírus, quando essas formas encontram-se externamente acessíveis, a saber, no trato respiratório, nasal e orofaringeano (p. ex., a gripe), o trato urogenital (p.ex. HIV), a pele (p. ex., herpes simples), ou depositadas em superfícies (fômites).
O fato de que colesterol e outros lipídeos podem ser intercambiados entre as lamelas dos fosfolipídeos das membranas celulares, bem como lipossomas, propicia informações importantes. McLean e Phillips (1981) apontam que o "meio tempo" curto, T1/2, 2-3 min, da transferência de colesterol entre lipossomas indica colisões entre essas partículas. Steck et al (2002) respaldam essa conclusão. Eles mostraram que toda a transferência de colesterol das células vermelhas para um aceptor ocorre com um T"1/2 ~ 1 segundo, dependendo somente da concentração do aceptor. Eles propõem um mecanismo de "ativação-colisão", onde o colesterol é capturado por colisão. O T1/2 para a transferência de um análogo fluorescente da esfingomielina entre membranas é ~21 segundos (Bai e Pagano, 1997) e o T1/2 "off- rate" para a transferência de ácidos graxos Cis do óleo para a água é ~1,3 segundos (Small, 2002). Por outro lado, o T1/2 para a transferência de fosfatidil-colina entre lipossomas foi medido como sendo ~48h a 37°C (McLean e Phillips, 1981).
Esses dados sugerem a possibilidade de que vírus envelopados possam ser desativados por exposição a lipossomas fosfolipídicos. Contudo, os lipossomas fosfolipídicos são extremamente caros, instáveis e provavelmente não estão disponíveis nas quantidades necessárias para as profilaxias. Além disso, os lipossomas fosfolipídicos não podem ser produzidos rapidamente com o baixo teor de colesterol exigido para a extração bruta (ao invés da troca bidirecional) desse lipídeo e sua produção requer o uso de solventes orgânicos que são uma fonte importante de toxidez celular.
Os Iipossomas podem ser utilizados para transportar drogas para a distribuição de composições farmacêuticas ou cosméticas. Por exemplo, a Solicitação de Patente Internacional W096/12472 (Chinoin Gyogyszer És Vegyészeti Termékek Gyára RT et al.) revelou uma composição lipossômica contendo como ingrediente ativo (-)-N- alfa-dimetil-N-(2-propinilfeniletilamina) (selegilina) e/ou sal do mesmo. A composição divulgada contém 0,1-40% por peso de selegilina e/ou um sal da mesma, 2 a 40% por peso de lipídeos, preferivelmente fosfolipídeos, 0 a 10% por peso de colesterol, 0 a 20% por peso de um álcool, 0 a 25% por peso de um glicol, 0 a 3% por peso de um antioxidante, 0 a 3% por peso de um agente conservante, 0 a 2% por peso de um agente que influencia a viscosidade, 0 a 50% por peso de ciclodextrina ou um derivado de ciclodextrina, e 30 a 90% por peso de água. Essa solicitação também fornece a administração de tal composição para o tratamento do mal de Alzheimer, mal de Parkinson1 depressão, derrame, cinetose ou mielite.
Também se conhece a partir da W02005030170 (Université Pasteur et al.) um método para iniciar a ruptura controlada da membrana de um lipossoma fosfolipídico biocompatível, com freqüência chamado de Iipossoma furtivo, liberando por meio disso o conteúdo lipossômico para o meio do mesmo. Um agente de liberação, preferivelmente uma alfa-ciclodextrina, é incorporado na forma de uma molécula biocompatível.
Pelos motivos descritos acima, os Solicitantes exploraram as vantagens da utilização de lipossomas tais como a Vesícula Lipídica não fosfolipídica (nPLV) compostos de poli-(etileno glicol)-alquil éteres de cadeia única [(PEG)-alquil éteres] ao invés de lipossomas fosfolipídicos (Wallach, 1996; Varanelli et al. 1996; Wallach e Varanelli, 1997). A patente americana 5,561,062 (Varanelli et al.) já fornece um método in vitro para desativar vírus envelopados utilizando vesículas lipídicas paucilamelares, preferivelmente não fosfolipídicas e preparações úteis na realização dessa desativação. O método é baseado na descoberta de que as vesículas lipídicas paucilamelares, preferivelmente possuindo não-fosfolipídeos como seu material estrutural primário, podem fundir-se com o vírus envelopado e que o ácido nucléico do vírus é desnaturado pouco depois da fusão. Geralmente, a vesícula lipídica paucilamelar é preenchida ou com uma solução de óleo ou com solução aquosa, ambas contendo um agente de degradação do ácido nucléico.
Uma outra solicitação de patente, EP 1 304 103 A1 (D.F.H Wallach), fornece vesículas lipídicas em que todos esses lipídeos são não-fosfolipídeos, bem como seu uso como veículo particularmente em aplicações terapêuticas tais como a prevenção da AIDS. Essas vesículas lipídicas não-fosfolipídicas compreendem ao menos uma bicamada estabilizada externa compreendendo entre outros um lipídeo modulador de bicamada escolhido entre a família do colesterol, um espaço aquoso intravesicular e ao menos uma partícula de micro-emulsão intravesicular cercada por uma monocamada lipídica interna. A desativação do vírus HIV deve-se à fusão da vesícula lipídica não-fosfolipídica com a membrana de tal vírus. Essa propriedade fusogênica provavelmente se deve à presença do colesterol na bicamada lipídica moduladora e não há uma troca de lipídeos entre a dita vesícula lipídica não- fosfolipídica contendo colesterol e a membrana do vírus HIV. A fusão entre a nPLV descrita acima e a membrana de um vírus envelopado não é apropriada para a desativação in vivo de tal vírus envelopado, visto que ela demora para ocorrer. Apesar da divulgação das patentes e solicitações de patentes anteriores, há ainda a necessidade de um novo método para desativar um vírus envelopado que seja rápido e eficiente, in vitro bem como in vivo. Resumo da Invenção
A presente invenção diz respeito a uma composição para desativar um vírus envelopado caracterizada por incluir ao menos uma Vesícula Lipídica não fosfolipídica (nPLV) capaz de interagir com um vírus envelopado e um agente que realce a troca de lipídeos entre a tal nPLV e a membrana de tal vírus envelopado, em que a dita nPLV seja livre de colesterol.
Um outro objetivo da presente invenção é fornecer um método para a desativação de um vírus envelopado compreendendo a interação de tal vírus envelopado com a composição da invenção a fim de intercambiar seus lipídeos.
Outro objetivo ainda da invenção é propiciar uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade farmacêutica da composição da invenção, opcionalmente em combinação com um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis.
Um outro aspecto da invenção proporciona um método para tratar ou prevenir uma doença associada a um vírus envelopado em um sujeito incluindo a etapa de administração em tal sujeito da composição farmacêutica da invenção em um local próximo desse vírus envelopado.
A invenção também contempla o uso da composição da invenção no preparo de um medicamento para o tratamento ou prevenção de uma doença associada a um vírus envelopado.
Um outro objetivo da presente invenção é proporcionar o uso da composição da invenção no preparo de um desinfetante biocompatível em larga escala ou de um agente de revestimento.
Outros objetivos e vantagens tornar-se-ão claros para aqueles habilitados na arte a partir de uma análise da descrição detalhada a seguir, a qual prossegue com referência aos desenhos ilustrativos a seguir e as reivindicações correspondentes. Breve Descrição das Figuras
A Figura 1 mostra o efeito de diferentes composições de nPLVs sobre a desativação de 2 vírus Sendai recombinantes diferentes: A) rSe V-Luc1 expressando o gene da Iuciferase1 e B) rSe V - GFP1 expressando a proteína verde fluorescente. PCE: polioxietileno cetil éter, PA: ácido palmítico, HTAB: brometo de hexadecil trimetilamônio.
A Figura 2A mostra o efeito sinérgico da ciclodextrina sobre a desativação de um vírus envelopado (vírus Sendai) por várias diluições de nPLVs (0,02%, 0,05% e 0,1%).
A Figura 2B mostra o efeito direto das concentrações crescentes de ciclodextrina, na ausência de nPLVs, sobre a desativação de um vírus envelopado (vírus Sendai).
Descrição Detalhada da Invenção
A presente invenção diz respeito a uma composição para desativar um vírus envelopado compreendendo ao menos uma Vesícula Lipídica não-fosfolipídica (nPLV) capaz de interagir com um vírus envelopado e um agente que realça a troca de lipídeos entre a tal nPLV e a membrana desse vírus envelopado, em que tal nPLV é livre de colesterol.
"Um" ou "uma" significa "ao menos um" ou "um ou mais".
Conforme utilizados aqui, os termos "lipossoma" e "vesícula lipídica" são utilizados de forma intercambiável para designar uma pequena esfera feita de conchas lipídicas confinando uma cavidade central em grande parte composta de um volume aquoso. Os lipídeos encontram-se na forma de camadas bimoleculares, ou lamelas, em uma estrutura assemelhada a uma cebola. Os termos "unilamelar", "paucilamelar", "multilamelar", conforme aqui utilizados, referem-se ao número de bicamadas periféricas cercando a cavidade central do lipossoma1 em particular a nPLV da invenção. Uma nPLV unilamelar consiste em uma bicamada periférica cercando a cavidade central enquanto que a nPLV multilamelar consiste em mais de 2 bicamadas periféricas.
A nPLV paucilamelar, a qual pode ser considerada uma subclasse da nPLV multilamelar, consiste em 2 a 8 bicamadas periféricas.
As bicamadas moleculares de nPLVs têm uma estrutura física similar às bicamadas fosfoslipídicas tradicionais. Por exemplo, tem-se mostrado que a difração do raio X das vesículas C16 de (PEG)2 éter apresenta um reflexo simples e principal, representando a espessura de uma camada dupla hidratada (5,8-6,1 nanômetros) anfifílica, com um espaçamento menor sob níveis de colesterol mais elevados - plenamente análoga às bicamadas fosfolipídicas. O espaçamento de 6,1 nanômetros corresponde à extensão máxima de duas moléculas anfifílicas e mais uma camada de água coloidal (Mitchell, et al., 1983; Adam et al., 1984). Lantzsch et al. (1996) usaram técnicas de transferência fluorescentes para determinar as superfícies do tipo surfactante C12(PEG)n em Iipossomas de 1-palmitoil-2-oleoil fosfatidilcolina/C^PEG^-s· Para N = 1-3, a expansão da superfície é equivalente a uma fase de hidrocarbono líquida cristalina por molécula de C12(PEG)n. Para N = 4- 8, a área de superfície por molécula de surfactante aumentou gradualmente, sugerindo uma configuração enrolada das moléculas incorporadas, com duas moléculas de água por segmento de etileno glicol. Além disso, as dispersões aquosas de 1,2-tetradecil ou 1,2-hexadecil fosfatidilcolina aceitam grandes proporções de C16(PEG)4 (Mâdler et al., 1998). Conforme utilizados aqui, os termos "interagir" e "interagindo" significam que há um efeito mútuo seja por contato direto ou à distância. Na presente invenção, o agente que realça a troca de lipídeos, conforme descrito, age contatando ou colidindo a nPLV da invenção com o vírus envelopado ou alternando entre a nPLV da invenção e o vírus envelopado.
Exemplos de famílias de vírus envelopados e algumas cepas dentro das famílias incluem, mas não se limitam a, Poxviridae, p. ex., vacínia e varíola, Iridoviridae, Herpesviridae, p. ex., herpes simples, vírus da varicela, citomegalovírus e vírus de Epstein-Barr, Flaviviridae, p.ex., vírus da febre amarela, vírus da encefalite transmitida por carrapato e vírus da hepatite C, Togaviridae, p. ex., vírus da rubéola e vírus Sindbis1 Coronaviridae, p. ex., coronavírus humano (vírus da SARS), Paramixoviridae1 p.ex., vírus da parainfluenza, vírus da caxumba, vírus do sarampo e vírus sincicial respiratório, Rabdoviridae, p.ex., vírus da estomatite vesicular e vírus da raiva, Filoviridae, p. ex., vírus de Marburg e vírus ebola, Ortomixoviridae, p. ex., vírus da gripe AeB, Buniaviridae, p. ex., vírus Bwamba, vírus da encefalite da Califórnia, vírus da febre do mosquito-pólvora e vírus da febre do Vale de Rift, Arenaviridae1 p. ex., vírus LCM, vírus Lassa e vírus Junin, Hepadnaviridae, p. ex., vírus da hepatite B, e Retroviridae, p. ex., HTLV e HIV. Preferivelmente, o vírus da invenção é selecionado a partir da Tabela 1.
Tabela 1
Vírus de RNA
<table>table see original document page 10</column></row><table> <table>table see original document page 11</column></row><table>
Vírus de DNA
<table>table see original document page 11</column></row><table> <table>table see original document page 12</column></row><table>
Mais preferivelmen te, o vírus envelopado é o vírus da gripe, RSV, SARS metapneumovírus, vírus do herpes ou HIV. Mais preferivelmente, o vírus envelopado é o vírus da gripe ou HIV.
A Vesícula Lipídica não-fosfolipídica (nPLV) refere-se a vesículas que são estruturas esféricas feitas de material com alto teor lipídico. Esses lipídeos consistem preferivelmente em não-fosfolipídeos e são selecionados a partir do grupo que inclui os compostos descritos na Tabela 2.
Tabela 2
<table>table see original document page 12</column></row><table> <table>table see original document page 13</column></row><table>
Mais preferivelmente, os não fosfolipídeos da invenção são selecionados a partir do grupo incluindo polioxietileno cetil éter (PCE), ácido palmítico (PA), brometo de hexadecil trimetilamônio (HTAB) e ácido oléico (OA), sozinhos ou combinados.
A nPLV da invenção é caracterizada pelo fato de ser livre de colesterol (ou substancialmente livre de colesterol), i.e., não inclui colesterol (ou, respectivamente, somente traços de colesterol), derivados de colesterol como por exemplo PEG- colesterol, colesterol ionogênico e colesterol estabilizador de superfície, beta- sitosterol, ergosterol e fitosterol. A fim de facilitar a troca de lipídeos entre a membrana de um vírus envelopado e a nPLV é essencial que o colesterol esteja substancialmente ausente da composição do lipossoma.
Tem-se mostrado que os lipídeos das membranas, especialmente o colesterol, podem ser intercambiados entre Iipossomas fosfolipídicos ou entre Iipossomas e membranas celulares. Isso ocorre através de um mecanismo de colisão-ativação com cinética, para o colesterol, em termos de segundos ou minutos (Steck et al., 2002; John et al., 2002). Surpreendentemente, os solicitantes têm demonstrado que as modificações lipídicas ocorrem através da rápida transferência a uma taxa elevada de colesterol e, possivelmente, de esfingolipídeos entre as partículas virais e os Iipossomas da invenção.
Surpreendentemente, os Solicitantes mostraram que a composição da invenção é capaz de desativar vírus envelopados. Essa desativação é mediada pela troca de lipídeos que ocorre entre a nPLV e a membrana do vírus envelopado (VE).
Os lipídeos do VE são sintetizados pela célula hospedeira, mas são depositados nos invólucros em proporções que diferem daquela da membrana plasmática da célula hospedeira. Por exemplo, o invólucro do HIV é enriquecido com colesterol (2,5 vezes) e com esfingomielina (3 vezes), ambos localizados principalmente na Iamela externa do invólucro (Aloia et al. 1993). As membranas dos vírus da gripe são enriquecidas de maneira semelhante (Scheiffele et al., 1999) e o mesmo padrão foi relatado para outros VEs. De fato, fortes evidências indicam que os invólucros de todos os vírus envelopados contêm microdomínios, chamados de "rafts lipídicos", enriquecidos com colesterol e esfingolipídeos incorporados em um continuum da bicamada lipídica. A geração de partículas dos VEs ocorre seletivamente a partir dos rafts lipídicos. Vale notar que a depleção de colesterol bloqueia a capacidade de infecção do VE (Moore et al., 1978, Ono e Freed1 2001; Simons e Ehehalt1 2002), sugerindo que os Iipideos do invólucro viral podem ser um alvo principal para o arsenal contra vírus envelopados.
Sendo unido de forma não co-valente, o colesterol e alguns outros lipídeos podem ser trocados entre as membranas celulares e as membranas dos vírus envelopados e Iipossomas (p.ex., Moore et al., 1978, Nussbaum, Lapidot e Loyter, 1987). McLean e Phillips (1981) apontam que a meia-vida curta, T1/2, 2-3 min, da transferência de colesterol entre os Iipossomas fosfolipídicos indica colisões entre essas partículas. Steck et al (2002) mostraram que toda a transferência de colesterol a partir das membranas de hemácias para uma molécula aceptora ocorre com um T1/2 de -1 segundo, dependendo somente da concentração do aceptor. Eles propõem um mecanismo de "ativação-colisão", onde o colesterol é capturado pela colisão entre a superfície da membrana e os aceptores. O T1/2 para a transferência de um análogo fluorescente de esfingomielina (-21 segundos) entre membranas é também rápido (Bai e Pagano, 1997). Em contraste, o T1/2 para a transferência de fosfatidilcolina entre os Iipossomas foi medida como sendo ~48h a 37°C (McLean e Phillips, 1981). A composição da invenção também é caracterizada pelo fato de incluir, além de ao menos uma nPLV, um agente que realça e/ou catalisa a troca de lipídeos entre essa nPLV e a membrana de um vírus envelopado. Os solicitantes também têm mostrado que tal agente pode extrair seletivamente o colesterol de membranas celulares, realçando a troca de lipídeos entre a nPLV e a membrana do VE. Preferivelmente, esse agente é uma ciclodextrina ou uma proteína reguladora aguda esteroidogênica (StAR). Mais preferivelmente, o agente é uma ciclodextrina ou um derivado da mesma. As ciclodextrinas (CDs) são oligômeros cíclicos de glicose que podem formar complexos de inclusão hidrossolúveis com pequenas moléculas e porções de compostos grandes. Quimicamente1 elas são oligossacarídeos cíclicos contendo ao menos 6 unidades de D-(+) glucopiranose ligadas por uniões glicosídicas alfa-(1,4).
Há 3 CDs naturais, alfa, beta e gama, as quais diferem no tamanho de seu anel e solubilidade. Esses oligossacarídeos cíclicos biocompatíveis não provocam respostas imunes e têm toxidades baixas em animais e humanos. As ciclodextrinas são utilizadas em aplicações farmacêuticas para inúmeros propósitos, incluindo melhorar a biodisponibilidade das drogas. A beta-CD pode extrair seletivamente o colesterol de membranas celulares. Em altas concentrações, ela também esgota o colesterol do invólucro dos vírus e reduz a capacidade de infecção viral. Contudo, altas concentrações de beta-CD mostram toxidez celular e podem induzir a Iise celular ou morte celular (apoptose).
Os derivados da CD são divulgados na patente americana número 5760017 (inventores: Djedaini-Pillard et al.) e a Solicitação Internacional W091/13100 (inventores: Coates et al.), a divulgação da qual também é incorporada aqui por referência. Exemplos de derivados da CD incluem, mas não sem limitam a, dimetil- beta-ciclodextrina, trimetil-beta-ciclodextrina, aleatoriamente beta- ciclodextrina metilada, hidroxietil-beta-ciclodextrina, 2-hidroxipropil-beta-ciclodextrina, 3- hidroxipropil-beta-ciclodextrina, 2,3-diidroxipropil-beta-ciclodextrina, 2-hidroxiisobutil- beta-ciclodextrina, sulfobutileter-beta-ciclodextrina, glicosil-beta-ciclodextrina e maltosil-beta-ciclodextrina.
Geralmente, o agente é adicionado à composição. Para esse fim, uma concentração adequada de CD é preparada em água ou PBS e adicionada à composição a fim de obter a concentração exigida. Preferivelmente, a concentração da ciclodextrina ou dos derivados da ciclodextrina na composição da invenção encontra-se entre 0,01 mM e 50mM. Mais preferivelmente, essa concentração encontra-se entre 0,1 mM e 10mM. Em uma concentração tão baixa, a beta-CD tem um efeito limitado sobre a integridade molecular ou capacidade de infecção viral, ainda assim ela catalisa de forma eficiente a transferência de colesterol a partir da membrana dos vírus para as nPLVs.
Os resultados mostrados na Figura 2A indicam um forte efeito sinérgico da beta- ciclodextrina sobre a desativação de um vírus envelopado, especialmente com concentrações altamente diluídas de nPLVs.
Alternativamente, o agente que realça a troca de lipídeos entre essa nPLV e a membrana de um vírus envelopado pode ser a proteína reguladora aguda esteroidogênica (StAR). A proteína reguladora aguda esteroidogênica (StAR) é um componente essencial na regulação da biossíntese de esteróides nas células adrenais e gonadais através de trajetos AMPc-dependentes. Em muitos casos a indução transcricional por AMPc é mediada pela interação de um membro da família da proteína que se liga a um elemento de resposta ao AMPc (CREB) com um elemento de resposta ao AMPc consensual (CRE; 5'-TGACGTCA-3') encontrado no promotor dos genes-alvo (Pulak R. Manna et al. (2002), Molecular Endocrinology 16 (1): 184-199).
Uma forma truncada da StAR (p. ex., N62 StAR; Tuckey et al., 2002, e Alpy et al., 2005) também é vislumbrada para uso como um agente que realça a troca de lipídeos entre a nPLV e a membrana de um vírus envelopado. Essa forma truncada da StAR tem demonstrado realçar a transferência de colesterol entre os Iipossomas fosfolipídicos por um fator de 5 a 10 vezes. Preferivelmente1 em tal caso a proteína StAR também encontra-se na solução na composição.
A composição poderá estar em estado líquido, sólido (tal como um pó...) ou semi- sólido.
Geralmente, a nPLV da composição tem um diâmetro entre 0,2 μιτι e 10 μιτι.
Geralmente, a troca de lipídeos essencialmente consiste na troca de colesterol e/ou esfingolipídeos.
Os esfingolipídeos são uma classe de lipídeos derivada do aminoálcool alifático esfingosina. A estrutura básica da esfingosina é ligada com oxigênio (geralmente) a um grupo principal carregado, como a etanolamina, serina ou colina. A estrutura básica também é ligada por amido a um grupo acila, como um ácido graxo, por exemplo. Os esfingolipídeos são freqüentemente encontrados no tecido neural e desempenham um papel importante tanto na transmissão de sinais quanto no reconhecimento celular. Há três tipos principais de esfingolipídeos: ceramidas, esfingomielinas e glicoesfingolipídeos, os quais diferem nos substituintes em seu grupo principal. As ceramidas são o tipo mais simples de esfingolipídeo. Elas consistem simplesmente em uma cadeia de ácidos graxos vinculados por meio de uma ligação de amida à esfingosina. As esfingomielinas têm uma molécula de fosforilcolina ou fosforoetanolamina esterificada para o grupo 1-hidróxi de uma ceramida. Os glicoesfingolipídeos são ceramidas com um ou mais resíduos de açúcar unidos em uma ligação beta-glicosídica. As cerebrosidas têm uma única glicose ou galactose na posição 1-hidróxi, enquanto que os gangliosídeos têm ao menos três açúcares, um dos quais deve ser ácido siálico. Comumente se acredita que os esfingolipídeos protegem a superfície celular contra fatores ambientais prejudiciais ao formar uma folha externa quimicamente resistente e mecanicamente estável da bicamada lipídica da membrana plasmática. Certos glicoesfingolipídeos complexos mostraram estar envolvidos em funções específicas, tais como reconhecimento e sinalização celulares. A primeira característica depende principalmente das propriedades físicas dos esfingolipídeos, enquanto a sinalização envolve interações específicas das estruturas de glicano dos glicoesfingolipídeos com lipídeos semelhantes presentes nas células vizinhas ou com proteínas. Preferivelmente, os esfingolipídeos da invenção são esfingomielinas ou derivados das mesmas.
Também no escopo da presente invenção existe um método para desativar um vírus envelopado incluindo a etapa de interação de tal vírus envelopado com a composição da invenção, permitindo que a dita nPLV da composição e tal vírus envelopado intercambiem seus lipídeos.
Os métodos de fabricação dessas vesículas e as próprias vesículas são descritos mais detalhadamente na patente americana número 4,911, 928, patente americana 5,147,723, patente americana 5,032,457, patente americana número 4,895,452 e solicitações de patente americana número de série 761,253, todas as descobertas das mesmas estão incorporadas aqui por referência.
A presente invenção também abrange uma composição farmacêutica caracterizada por incluir uma quantidade farmacêutica da composição da invenção, opcionalmente em combinação com um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis.
A expressão "farmaceuticamente aceitável" refere-se a entidades moleculares e composições que sejam fisiologicamente toleráveis e não costumem produzir uma reação alérgica ou igualmente inadequada, tal como problema gástrico, tontura, etc., quando administrada em um humano.
Os veículos aceitáveis, excipientes ou estabilizadores são não tóxicos para os que os recebem nas dosagens e concentrações empregadas e incluem tampões como fosfato, citrato e outros ácidos orgânicos; antioxidantes, incluindo o ácido ascórbico e metionina; conservantes (como cloreto de octadecildimetilbenzil amônio); baixo peso molecular ( abaixo de 10 resíduos), polipeptídeos, proteínas, como a albumina sérica, gelatina ou imunoglobulinas; polímeros hidrófilos, como polivinilpirrolidona; aminoácidos como glicina, glutamina, asparagina, histidina, arginina ou lisina; monossacarídeos, dissacarídeos e outros carboidratos incluindo glicose, manose ou dextrinas; agentes queladores como o EDTA; açúcares como a sacarose, manitol, trealose ou sorbitol; contra-íons formadores de sal como o sódio; e complexos metálicos.
A forma de administração da composição farmacêutica pode ser sistêmica ou tópica. Por exemplo, a administração de tal composição pode se dar por várias vias parenterais, tal como a subcutânea, intravenosa, intradérmica, intramuscular, intraperitoneal, intranasal, transdérmica, por via oral, preferivelmente por inalação, ou por meio de um dispositivo implantado, também podendo ser aplicada por um meio peristáltico.
A composição farmacêutica, conforme aqui descrita, também pode ser incorporada ou impregnada em uma matriz bioabsorvível, com a matriz sendo administrada na forma de uma suspensão da mesma, um gel ou um suporte sólido. Além disso, a matriz pode ser constituída por um polímero.
No caso, as formulações a serem utilizadas na administração in vivo devem ser estéreis, isso é obtido imediatamente, por exemplo, utilizando-se compostos estéreis para a preparação da composição da invenção.
Entende-se que a dosagem adequada da composição farmacêutica da presente invenção dependerá da idade, sexo, saúde e peso daquele que a receber, tipo de tratamento concomitante, se houver, e da natureza do efeito desejado. A forma de dosagem apropriada dependerá da doença, da nPLV, do agente de reforço e do modo de administração; as possibilidades incluem um spray ou outro meio em aerosol para aplicação nas passagens respiratórias, o que é particularmente eficaz para se lidar com a gripe e outros vírus que infectam essas passagens. Outras maneiras de aplicar topicamente a solução de desativação incluem cremes, enxagüatórios bucais, pastas de dente, colírios, soluções, pomadas, géis tais como géis vaginais e lubrificantes tais como lubrificantes de preservativos. Estas últimas categorias são particularmente eficazes para o uso contra os retrovírus como o HIV.
A presente descoberta também proporciona um método de tratamento ou prevenção de uma doença associada com um vírus envelopado em um sujeito incluindo a etapa de aplicação em tal sujeito da composição farmacêutica conforme descrito aqui, em um local próximo a tal vírus envelopado. Novamente, as possibilidades incluem um spray ou algum outro meio de aplicação em forma de aerosol nas passagens respiratórias, cremes, enxagüatórios bucais, pastas de dente, soluções, pomadas, géis como géis vaginais, colírios e lubrificantes como os lubrificantes de preservativos.
A interação da composição da invenção com os vírus envelopados nas vias aéreas desarranja o invólucro da membrana viral e bloqueia a capacidade de infecção viral, por meio do que ocorre a propagação nos pulmões (tratamento de profilaxia individual). Os processos fisiológicos eliminam a composição e os vírus desativados. Além disso, estando parcialmente ou completamente inativos, os vírus têm sua disseminação limitada na população próxima quando expelidos através de tosse ou espirros (profilaxia da população). Os termos "tratando" ou "prevenindo" referem-se tanto ao tratamento terapêutico quanto às medidas profiláticas ou preventivas. Aqueles (sujeitos) necessitando de tratamento incluem aqueles já com a doença bem como aqueles em que a doença deve ser evitada. Por isso, o sujeito a ser tratado aqui pode ter sido diagnosticado com uma doença ou pode estar predisposto ou suscetível à doença. Preferivelmente o sujeito é um animal ou um humano.
Mais preferivelmente, o termo animal refere-se a animais domésticos e rurais (p.ex., aves) e animais de zoológicos, de esportes ou de estimação, como cães, cavalos, porcos, gatos, vacas, macacos, etc.
Também é abarcado pelo escopo da presente invenção o uso da composição farmacêutica, conforme descrito aqui, no preparo de um medicamento para o tratamento ou prevenção de uma doença associada a um vírus envelopado. A presente invenção também abrange o uso da composição da invenção no preparo de um desinfetante biocompatível de larga escala. Assim sendo, a composição da invenção é diluída conforme necessário para preparar suspensões aquosas simples ou dispersões em hidrogéis.
A presente descoberta também proporciona o uso da composição da invenção no preparo de um agente de revestimento. Esse agente de revestimento pode então ser utilizado para cobrir, por exemplo, luvas cirúrgicas, preservativos masculinos e máscaras pessoais.
Um outro tema da presente invenção é o fornecimento de um kit para desativar um vírus envelopado, tal kit compreendendo a composição da invenção, opcionalmente com reagentes e/ou instruções de uso.
O kit da presente invenção também pode compreender uma forma de dosagem farmacêutica em separado incluindo um agente antiviral extra selecionado a partir do grupo que abrange aqueles descritos na Tabela 3 e combinações dos mesmos. Alternativamente, a composição da invenção pode também compreender um agente antiviral extra selecionado a partir do grupo que abrange aqueles descritos na Tabela 3 e combinações dos mesmos. Preferivelmente1 o agente antiviral extra é selecionado a partir do grupo contra o vírus da gripe incluindo amantadina, rimantadina, zanamivir e oseltamivir.
Tabela 3
Drogas antivirais aprovadas (Q4 2004)
Infecções por HIV
Inibidores da transcriptase reversa nucleosídicos (ITRNs):
Zidovudina; didanosina; zalcitabina; estavudina; lamivudina; abacavir; emtricitabina.
Inibidores da transcriptase reversa nucleosídicos (ITRNs):
Tenofovir disoproxil.
Inibidores da transcriptase reversa não-nucleosídicos (ITRNNs):
Nevirapina; delavirdina; efavirenz.
Inibidores da protease (IPs):
Saquinavir; ritonavir; indinavir; nelfinavir; amprenavir; lopinavir; atazanavir.
Inibidores da fusão (IFs):
Enfuvirtide.
Infecções por HBV
Lamivudina; adefovir dipivoxil.
Infecções por HCV
INF-alfa; ribavirin.
Infecções por HSV e VZV
Aciclovir (oral: valaciclovir); penciclovir (oral: famciclovir); idoxuridina; trifluridina; brivudina.
Infecções por CMV
Ganciclovir (oral: valganciclovir); foscarnet; cidofovir; formivrisen.
Infecções por vírus da gripe
Amantadina; rimantadina; zanamivir; oseltamivir.
HIV: vírus da imunodeficiência humana; HBV: vírus da hepatite B humana; HCV: vírus da hepatite C humana; HSV: vírus do herpes simples; VZV: vírus varicela- zoster; CMV: citomegalovírus.
Fonte: De Ciercq1 Nat. Rev. Microbio. (2004) 2: 704-720. Geralmente, o kit inclui um recipiente e um rótulo ou bula sobre ou associado ao recipiente. Os recipientes adequados incluem, por exemplo, vasilhames, frascos, seringas, etc. Os recipientes podem ser feitos de vários materiais como vidro ou plástico. O recipiente possui uma composição que é eficaz para o tratamento do quadro e pode ter uma porta de acesso estéril (por exemplo, o recipiente pode ser um saco com solução intravenosa ou um frasco com uma tampa que pode ser perfurada pela agulha de uma injeção hipodérmica ou spray de aerosol). O rótulo ou bula indica que a composição é utilizada para tratar a doença em questão, como infecções virais, por exemplo.
Alternativamente, ou adicionalmente, o kit pode incluir também um segundo recipiente (ou terceiro) com um tampão farmaceuticamente aceitável, tal como água bacteriostática para a injeção (BWFI), salina tamponada com fosfato, solução de Ringer e solução de dextrose. Também pode incluir outros materiais desejáveis do ponto de vista comercial e do usuário, incluindo outros tampões, diluentes, filtros, agulhas e seringas.
Aqueles habilitados na arte apreciarão o fato de a invenção aqui descrita ser suscetível a variações e modificações além daquelas descritas especificamente. Deve-se compreender que a invenção inclui todas essas variações e modificações sem desviar-se do espírito ou das características essenciais da mesma. A invenção também inclui todas as etapas, características, composições e compostos mencionados ou indicados nesta especificação, de maneira individual ou coletiva, e toda e qualquer combinação ou cada par ou mais dessas etapas ou características. A presente descoberta deverá, portanto, ser considerada em todos os aspectos como ilustrativa e não restritiva, o escopo da invenção sendo indicado pelas Reivindicações anexadas, e todas as alterações que estejam dentro do significado e do limite de equivalência deverão ser ali aceitos.
Várias referências são citadas ao longo desta Especificação, cada uma das quais sendo aqui incorporada por referência em sua integralidade.
A descrição anterior será compreendida mais plenamente diante dos exemplos que virão a seguir. Tais exemplos são, contudo, uma exemplificação dos métodos de execução da presente invenção e não visam a limitar o escopo da invenção.
Exemplos
Exemplo 1
Material e Métodos
Células e vírus
Células MK2 (do macaco) foram cultivadas a 37°C em DMEM contendo 5% de albumina de soro bovino (BSA) até que alcançassem 70% de confluência. Dois vírus Sendai recombinantes foram usados: 1) rSeV-Luc, o qual codifica o gene da Iuciferase do Photinus pyralis como um marcador; e 2) rSeV-GFP, o qual codifica a proteína verde fluorescente da Aequora victora como marcador.
Preparação das nPLVs. O lipídeo primário utilizado foi o polioxietileno cetil éter (PCE)1 sozinho ou combinado com ácido palmítico (AP) ou com brometo de hexadecil trimetilamônio (BHTA) na razão molar indicada.
A mistura lipídica foi aquecida até 50°C e misturada com tampão fosfato-salino também pré-aquecido até 50°C, utilizando o método de duas seringas. Em resumo, uma seringa de 10 ml, contendo 0,5 g da mistura lipídica, foi conectada a uma segunda seringa de 10 ml contendo 10 ml de tampão fosfato-salino (PBS) (concentração final lipídica de 5%). A mistura lipídica foi então injetada na seringa com PBS e a mistura resultante foi rapidamente passada para frente e para trás 20 vezes, até que fosse obtida uma suspensão homogênea. A preparação foi subseqüentemente verificada em relação à qualidade da nPLV por meio de microscopia de contraste de fase. Ensaio de Desativação.
Os preparos de nPLV foram diluídos em PBS até as concentrações indicadas. As nPLVs diluídas foram então misturadas com os vírus em um volume final de 100 μΙ. As misturas de vírus e nPLV foram incubadas sob temperatura-ambiente por 30 minutos com agitação. As concentrações dos vírus variavam de 105 a 2x106 partículas.
Após a incubação, as misturas foram diluídas até 500 ml em DMEM sem BSA e diretamente adicionadas às células. As infecções foram realizadas a 33°C por uma hora e então as misturas infecciosas foram removidas. As células foram lavadas com DMEM sem BSA, 10 ml de DMEM com 1% de BSA foram adicionados e foi efetuada mais uma incubação a 37°C por 36 horas. Os experimentos foram efetuados em triplicata.
Monitoramento Para as infecções com rSeV-Luc, as células passaram por Iise e a atividade da Iuciferase foi determinada utilizando o Sistema de Ensaio da Luciferase da Promega. As medições foram realizadas com o luminômetro TD-20/20 (Turner Designs). Para as infecções com rSeV-GFP, as células foram colhidas por tripsinização e submetidas à análise FACS utilizando uma máquina FACS. Exemplo 2: efeito sinérgico da ciclodextrina Células e vírus.
Células MK2 (de macaco) foram cultivadas a 37°C em DMEM contendo 5% de albumina de soro bovino (BSA) até que alcançassem 70% de confluência. Um vírus Sendai recombinante foi utilizado, rSeV-Luc, o qual codifica o gene da Iuciferase do Photinus pyralis. Preparação das nPLVs.
Conforme descrito anteriormente no exemplol.
Ensaio de desativação.
Os preparos de nPLVs foram diluídos em PBS até as concentrações indicadas. As nPLVs diluídas foram então misturadas com os vírus, sozinhas (sem ciclodextrina) ou em combinação com 0,5 mM (concentração final) de ciclodextrina, em um volume de 100 μl. As misturas de vírus e nPLV foram incubadas sob temperatura-ambiente por 20 minutos com agitação. Cerca de 105 partículas virais foram utilizadas. Após a incubação, as misturas foram diluídas até 500 ml em DMEM sem BSA e diretamente adicionadas às células. As infecções foram realizadas sob 33°C por uma hora e então as misturas infecciosas foram removidas. As células foram lavadas uma vez com DMEM sem BSA1 10 ml de DMEM com 1% de BSA foram adicionados e uma nova incubação foi efetuada a 37°C por 36 horas. O experimento foi realizado em duplicatas. Monitoramento
As células MK2 passaram por Iise e a atividade da Iuciferase foi determinada utilizando o Sistema de Ensaio da Luciferase da Promega. As medições foram realizadas com o luminômetro TD-20/20 (Turner Designs).
Exemplo 3 - Resultados
A fim de explorar a possibilidade de desativação dos vírus envelopados (VEs) através da modificação lipídica de seu invólucro, os Solicitantes utilizaram o vírus Sendai (SeV) como modelo. O SeV é um vírus envelopado da família Paramyxoviridae e tem similaridades genéticas e estruturais com diversos vírus patogênicos humanos. Trata-se de um vírus respiratório cujo hospedeiro natural é o camundongo, mas pode crescer em uma ampla gama de células eucarióticas, incluindo ovos de galinha com embriões em que podem ser obtidos estoques virais de alta titulação. Semelhante a muitos VES, o SeV tem demonstrado ser dependente do colesterol para sua capacidade de infecção, embora o mecanismo preciso não esteja completamente esclarecido ainda. Os solicitantes usaram 2 tipos de SeV recombinante (rSeV) possuindo um gene marcador diferente codificado em seus genomas. Com o rSeV-Luc codificando o gene da luciferase, o nível da infecção pode ser monitorado utilizando um ensaio bioquímico bastante sensível, o rSeV-GFP, por sua vez, codifica o gene da proteína verde fluorescente e a infecção pode ser acompanhada no nível celular utilizando a Separação Celular Associada à Fluorescência (FACS), um ensaio que permite determinar precisamente o número de células infectadas.
Os solicitantes sintetizaram 3 tipos de nPLVs utilizando diferentes compostos lipídicos: 1) nPLVs compostas de um único componente neutro (inalterado), o polioxietileno cetil éter (PCE), 2) nPLVs compostas principalmente de PCE, mas incluindo 0,1% mol de ácido palmítico (AP), um lipídeo de carga negativa, 3) nPLVs compostas de PCE e 0,1% mol de brometo de hexadecil trimetilamônio (BHTA)1Um lipídeo de carga positiva.
Como evidente a partir da figura 1, a eficiência da desativação viral difere bastante dependendo da composição lipídica da nPLV. Essas variações são observadas com ambos os vírus recombinantes em uma amplitude bastante parecida. Fica claro a partir desses resultados que a presença de uma carga elétrica, positiva ou negativa, na superfície das nPLVs melhora drasticamente a desativação viral. Isso pode ser explicado em dois níveis. Primeiro, a repulsão eletrostática entre as nPLVs talvez evite a aglutinação, agregação ou fusão das vesículas, melhorando assim a qualidade e estabilidade do preparo com nPLVs. Segundo, devido à sua composição fosfolipídica e à presença de glicoproteínas de superfície, é provável que a superfície de uma partícula viral seja carregada sob um pH fisiológico. A presença de microdomínios locais com carga sobre a superfície da partícula viral pode favorecer as interações com as nPLVs carregadas através da atração eletrostática.
A beta-ciclodextrina é um agente farmacêutico bem conhecido por sua capacidade de extrair colesterol das membranas fosfolipídicas celulares. Contudo, a amplitude das concentrações utilizadas na maioria dos experimentos in vitro (50-100 mM) é prejudicial para a integridade celular e pode induzir a morte celular.
Sendo assim, os solicitantes decidiram investigar se concentrações muito baixas de beta-ciclodextrina poderiam ser usadas para melhorar a transferência de colesterol das partículas virais para as nPLVs. O fundamento por trás desses experimentos é o seguinte: em concentrações muito baixas (0,5-2 mM) a beta-ciclodextrina não exercerá seu efeito de toxidez celular, ainda assim ela será capaz de extrair colesterol dos domínios virais rafts lipídicos. Uma vez carregada com colesterol, a beta-ciclodextrina fará viagens de ida e volta até as nPLVs e distribuirá o colesterol nas membranas não-fosfolipídicas. A beta-ciclodextrina vazia irá então continuar o ciclo de extração até que um equilíbrio da concentração de colesterol seja alcançado entre as nPLVs e as partículas virais. Assim, em uma concentração tão baixa, a beta-ciclodextrina servirá como um catalisador da transferência de colesterol entre os invólucros virais e as nPLVs. A figura 2A claramente mostra que a beta- ciclodextrina em uma concentração de 0,5 mM amplia bastante a desativação viral pelas nPLVs compostas de PCE com 0,1% mol de ácido oléico (AO), um lipídeo de carga negativa. Como mostrado na figura 2B, essa atividade ampliadora deve-se à atividade catalisadora porque um efeito direto exclusivamente da beta-ciclodextrina sobre as partículas virais é observado somente em uma concentração superior a 5 mM.

Claims (19)

1. COMPOSIÇÃO PARA DESATIVAR UM VÍRUS ENVELOPADO, caracterizado por compreender ao menos uma Vesícula Lipídica não-fosfolipídica (nPLV) capaz de interagir com esses vírus envelopado e um agente que amplia a troca lipídica entre essa nPLV e a membrana de tal vírus envelopado, em que a nPLV é livre de colesterol.
2. COMPOSIÇÃO PARA DESATIVAR UM VÍRUS ENVELOPADO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pela Vesícula Lipídica não-fosfolipídica ser unilamelar, paucilamelar ou multilamelar.
3. COMPOSIÇÃO PARA DESATIVAR UM VÍRUS ENVELOPADO, de acordo com as reivindicações 1-2, caracterizada por o agente ser uma ciclodextrina ou derivados da mesma.
4. COMPOSIÇÃO PARA DESATIVAR UM VÍRUS ENVELOPADO, de acordo com a reivindicação 3, caracterizada por a ciclodextrina ser selecionada a partir do grupo que inclui a alfa-ciclodextrina, beta-ciclodextrina e gama-ciclodextrina ou uma combinação destas.
5. COMPOSIÇÃO PARA DESATIVAR UM VÍRUS ENVELOPADO, de acordo com a reivindicação 3, caracterizada por os derivados da ciclodextrina serem selecionados a partir do grupo que inclui dimetil-beta-ciclodextrina, trimetil-beta-ciclodextrina, beta- ciclodextrina aleatoriamente metilada, hidroxietil-beta-ciclodextrina, 2-hidroxipropil- beta-ciclodextrina, 3-hidroxipropil-beta-ciclodextrina, 2,3-diidroxipropil-beta- ciclodextrina, 2-hidroxiisobutil-beta-ciclodextrina, sulfobutileter-beta-ciclodextrina, glicosil-beta-ciclodextrina e maltosil-beta-ciclodextrina, ou uma combinação das mesmas.
6. COMPOSIÇÃO PARA DESATIVAR UM VÍRUS ENVELOPADO, de acordo com as reivindicações 4 ou 5, caracterizada por a concentração da ciclodextrina ou derivados da ciclodextrina na composição ser entre 0,01 mM e 50 mM.
7. COMPOSIÇÃO PARA DESATIVAR UM VÍRUS ENVELOPADO, de acordo com a reivindicação 6, caracterizada por a concentração da ciclodextrina ou derivados da ciclodextrina na composição ser entre 0,1 mM e 10 mM.
8. COMPOSIÇÃO PARA DESATIVAR UM VÍRUS ENVELOPADO, de acordo com a reivindicação 1-2, caracterizada por o agente ser a proteína reguladora aguda esteroidogênica (StAR).
9. COMPOSIÇÃO PARA DESATIVAR UM VÍRUS ENVELOPADO, de acordo com as reivindicações 1-8, caracterizado pela troca de lipídeos consiste essencialmente na troca de colesterol e/ou esfingolipídeos.
10. MÉTODO PARA DESATIVAR UM VÍRUS ENVELOPADO, caracterizado por incluir a interação de tal vírus envelopado com a composição de qualquer uma das reivindicações de 1 a 9 a fim de intercambiar seus lipídeos.
11. COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, caracterizada por incluir uma quantidade farmacêutica da composição de qualquer uma das reivindicações de 1 a 9, opcionalmente em combinação com um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis.
12. MÉTODO PARA TRATAR OU PREVENIR UMA DOENÇA ASSOCIADA COM UM VÍRUS ENVELOPADO EM UM SUJEITO, caracterizado por incluir a etapa de aplicação nesse sujeito da composição farmacêutica da reivindicação 10 em um local próximo a esse vírus envelopado.
13. MÉTODO PARA TRATAR OU PREVENIR UMA DOENÇA ASSOCIADA COM UM VÍRUS ENVELOPADO EM UM SUJEITO, da reivindicação 12, em que o sujeito é um animal ou um humano.
14. USO DA COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo preparo de um medicamento para tratar ou prevenir uma enfermidade associada a um vírus envelopado.
15. USO DA COMPOSIÇÃO, de acordo com as reivindicações 1-9, caracterizado pelo preparo de um desinfetante biocompatível de larga escala.
16. USO DA COMPOSIÇÃO, de acordo com as reivindicações 1-9 caracterizado pelo preparo de um agente de revestimento.
17. COMPOSIÇÃO PARA DESATIVAR UM VÍRUS ENVELOPADO, de acordo com as reivindicações 1 a 9, caracterizado por incluir um agente antiviral extra selecionado a partir do grupo que inclui agentes anti-HIV, anti-HBV, anti-HSV, anti- VZB, anti-CMV, antivírus da gripe, e combinações dos mesmos.
18. COMPOSIÇÃO PARA DESATIVAR UM VÍRUS ENVELOPADO, de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo vírus da gripe ser selecionado a partir do grupo que inclui amantadina, rimantadina, zanamivire oseltamivir.
19. KIT PARA DESATIVAR UM VÍRUS ENVELOPADO, caracterizado por incluir a composição das reivindicações 1a9ou17a18, opcionalmente com reagentes e/ou instruções de uso.
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