BRPI0712268A2 - composição para diagnóstico de doença relacionada à amilóide - Google Patents

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BRPI0712268A2
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BR
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fluoroethoxy
pyridin
amyloid
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BRPI0712268-3A
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Nakayama Mario
Haratake Mamoru
Ono Masahiro
Original Assignee
Nagasaki University
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Abstract

COMPOSIçãO PARA DIAGNóSTICO DE DOENçA RELACIONADA à AMILóIDE. é fornecida uma composição compreendendo um composto representado pela fórmula geral (l), em que R^ 1^ representa um grupo 5- iodotiofen-2-ila ou os similares, e R^ 2^ representa um grupo 4-dimetilaminofenila ou os similares. Esta composição é útil para diagnóstico de uma doença relacionada à amilóide tal como doença de Alzheimer porque o composto tem elevada especificidade de ligação à proteína amilóide <225>, elevada permeabilidade através da barreira hemato-encefálica, e uma propriedade de ser rapidamente eliminado de sítios exceto placas senis no cérebro.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "COMPOSI- ÇÃO PARA DIAGNÓSTICO DE DOENÇA RELACIONADA À AMILÓIDE"
Campo Técnico
A presente invenção refere-se a uma composição utilizada para diagnóstico de uma doença relacionada à amilóide, tal como doença de Al- zheimer, um método para avaliação de um agente terapêutico ou profilático para uma doença relacionada à amilóide utilizando-se a composição men- cionada acima, e um método para avaliação de um agente terapêutico ou profilático para uma doença relacionada à amilóide utilizando-se a composi- ção mencionada acima.
Técnica Antecedente
Com o rápido envelhecimento da população nos últimos anos, o aumento no número de pacientes com doenças associadas com demência incluindo doença de Alzheimer (AD) tornou-se um dos sérios problemas so- ciais. Atualmente, os Hasegawa Scale, ADAS, e MMSE estão disponíveis como métodos para diagnóstico clínico de AD. Todos os métodos de dose quantitativamente avaliam a função cognitiva diminuída em um indivíduo com suspeita de AD e são comumente utilizados. Além disso, métodos de diagnóstico por imagem (MRI, CT, etc.) são suplementarmente utilizados. Entretanto, estes métodos diagnósticos são inadequados para definir diag- nóstico de AD, e desenvolvimento de placas senis e neurofibrilas nececessi- ta ser confirmado em biópsia do cérebro antes da morte ou exame histopato- lógico do cérebro após a morte para tornar o diagnóstico definitivo. Conse- qüentemente, é difícil diagnosticar AD em um estágio precoce antes da ocor- rência de um dano cerebral extenso pelos métodos diagnósticos atuais. Em- bora alguns relatos tenham mostrado marcadores diagnósticos biológicos para AD até agora, nenhuma técnica clinicamente prática foi ainda desen- volvida. Sob tais circunstâncias, demanda social para diagnóstico precoce de AD é elevada, e desenvolvimento urgente de um método por isso é pre- cocemente antecipado.
Uma placa senil é a lesão cerebral mais característica de AD, e o principal componente desta é a proteína amilóide β tendo uma estrutura de lâmina β. Imageamento de uma placa senil fora do corpo é considerado re- sultar no estabelecimento de um método diagnóstico eficaz de AD, e tal ima- geamento requer um composto sonda que especificamente liga-se à proteí- na amilóide β. Até agora, diversos derivados contendo vermelho congo ou tioflavina T como uma estrutura origem foram relatados como compostos sonda (Documentos de Patente 1 e 2 e Documento de não Patente 1), po- rém estes compostos passam por muitos problemas incluindo baixa especifi- cidade à proteína amilóide β, baixa permeabilidade através da barreira he- mato-encefálica, e depuração lenta devido a sua ligação não específica no cérebro. Portanto, estes compostos relatados não foram ainda colocados em uso prático para diagnóstico de doenças associadas com acúmulo de ami- lóide no momento.
Documento de Patente 1: Japanese Patent Laid-Open NQ. 2004- 250407
Documento de Patente 2: Japanese Patent Laid-Open Ns. 2004- 250411
Documento de não Patente 1: Klunk W.E. e outro, Annals of Neurology Vol. 55, N5. 3, Março de 2004, 306-319
Descrição da invenção
Problemas a serem solucionados pela invenção
A presente invenção foi realizada contra a base técnica descrita acima, e um objetivo desta é fornecer um composto exibindo alta especifici- dade de ligação à proteína amilóide β, alta permeabilidade através da barrei- ra hemato-encefálica, e depuração rápida de sítios exceto placas senis no cérebro em combinação.
Método para solucionar os problemas
Os inventores da presente invenção conduziram várias pesqui- sas para alcançar o objetivo antecedente. Como um resultado, eles desco- briram que um derivado de calcona tendo um anel heterocíclico aromático tem uma excelente propriedade como um composto sonda para imageamen- to de proteína amilóide β, e realizaram a presente invenção com base nesta descoberta. Especificamente, a presente invenção fornece os seguintes (1) a (14).
(1) Uma composição para diagnóstico de uma doença relaciona- da à amilóide, compreendendo um composto representado pela fórmula ge- ral (I):
[Fórmula 1]
<formula>formula see original document page 4</formula>
em que R1 representa um anel heterocíclico aromático que pode ser substi- tuído com um ou mais substituintes selecionados do seguinte grupo substitu- inte A, R2 representa um grupo arila que pode ser substituído com um ou mais substituintes selecionados do seguinte grupo substituinte A, ou um anel heterocíclico aromático que pode ser substituído com um ou mais substituin- tes selecionados do seguinte grupo substituinte A, e o grupo substituinte A é um grupo consistindo em um átomo de halogênio, um grupo hidroxila, um grupo carboxila, um grupo sulfona, um grupo dimetilamino, um grupo meti- lamino, um grupo amino, um grupo nitro, um grupo alquila tendo 1 a 4 áto- mos de carbono que podem ser substituídos com um átomo de halogênio, um grupo alcóxi tendo 1 a 4 átomos de carbono que podem ser substituídos com um átomo de halogênio, um grupo alcóxi tendo 2 a 8 átomos de carbo- no que podem ser substituídos com um átomo de halogênio, um grupo alcóxi tendo 3 a 12 átomos de carbono que podem ser substituídos com um átomo de halogênio, e um grupo representado pela fórmula: -(CH2CH2O)n-F, em que η é um número inteiro de 4 a 10; ou o composto rotulado com um radio- nuclídeo, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.
(2) A composição para diagnóstico de uma doença relacionada à amilóide de acordo com (1), em que R1 na fórmula geral (I) representa um grupo 6-iodopiridin-3-ila, um grupo 6-fluoropiridin-3-ila, um grupo 6- hidroxipiridin-3-ila, um grupo 5-iodopiridin-2-ila, um grupo 5-fluoropiridin-2-ila, um grupo 5-hidroxipiridin-2-ila, um grupo 5-iodopiridin-3-ila, um grupo 5- fluoropiridin-3-ila, um grupo 5-hidroxipiridin-3-ila, um grupo 4-iodopíridin-2-ila, um grupo 4-fluoropiridin-2-ila, um grupo 4-hidroxipiridin-2-ila, um grupo 5- iodotiofen-2-ila, um grupo 5-íluorotiofen-2-ila, um grupo 5-hidroxitiofen-2-ila, um grupo 5-iodofuran-2-ila, um grupo 5-fluorofuran-2-ila, um grupo 5- hidroxifuran-2-ila, um grupo 5-aminotiofen-2-ila, um grupo 5- metilaminotiofen-2-ila, um grupo 5-dimetilaminotiofen-2-ila, um grupo 5- aminofuran-2-ila, um grupo 5-metilaminofuran-2-ila, um grupo 5- dimetilaminofuran-2-ila, um grupo tiazol-2-ila, um grupo 1 H-imidazol-5-ila, um grupo 1H-imidazol-2-ila, um grupo 6-(2-fluoroetil)piridin-3-ila, um grupo 6-(2- fluoroetóxi)piridin-3-ila, um grupo 6-[2-(2-fluoroetóxi)etóxi]piridin-3-ila, um grupo 6-{2-[2-(2-fluoroetóxi)etóxi]etóxi}piridin-3-ila, um grupo 5-(2- fluoroetil)tiofen-2-ila, um grupo 5-(2-fluoroetóxi)tiofen-2-ila, um grupo 5-[2-(2- fluoroetóxi)etóxi]tiofen-2-ila, um grupo 5-{2-[2-(2-fluoroetóxi)etóxi]etóxi}tiofen- 2-ila, um grupo 5-(2-fluoroetil)furan-2-ila, um grupo 5-(2-fluoroetóxi)furan-2- ila, um grupo 5-[2-(2-fluoroetóxi)etóxi]furan-2-ila, um grupo 5-{2-[2-(2- fluoroetóxi)etóxi]etóxi}furan-2-ila, um grupo piridin-4-ila, um grupo-pifidin-3- ila, ou um grupo piridin-2-ila.
(3) A composição para diagnóstico de uma doença relacionada à amilóide de acordo com (1) ou (2), em que R2 na fórmula geral (I) representa um grupo 4-aminofenila, um grupo 4-metilaminofenila, um grupo 4- dimetilaminofenila, um grupo 4-hidroxifenila, um grupo 4-metoxifenila, um grupo 6-iodopiridin-3-ila, um grupo 6-fluoropiridin-3-ila, um grupo 6- hidroxipiridin-3-ila, um grupo 5-iodopiridin-2-ila, um grupo 5-fluoropiridin-2-ila, um grupo 5-hidroxipiridin-2-ila, um grupo 5-iodopiridin-3-ila, um grupo 5- fluoropiridin-3-ila, um grupo 5-hidroxipiridin-3-ila, um grupo 4-iodopiridin-2-ila, um grupo 4-fluoropiridin-2-ila, um grupo 4-hidroxipiridin-2-ila, um grupo 5- iodotiofen-2-ila, um grupo 5-fluorotiofen-2-ila, um grupo 5-hidroxitiofen-2-ila, um grupo 5-iodofuran-2-ila, um grupo 5-fluorofuran-2-ila, um grupo 5- hidroxifuran-2-ila, um grupo 5-aminotiofen-2-ila, um grupo 5- metilaminotiofen-2-ila, um grupo 5-dimetilaminotiofen-2-ila, um grupo 5- aminofuran-2-ila, um grupo 5-metilaminofuran-2-ila, um grupo 5- dimetilaminofuran-2-ila, um grupo tiazol-2-ila, um grupo 1H-imidazol-5-ila, um grupo 1 H-imidazol-2-ila, um grupo 6-(2-fluoroetil)piridin-3-ila, um grupo 6-(2- fluoroetóxi)piridin-3-ila, um grupo 6-[2-(2-fluoroetóxi)etóxi]piridin-3-ila, um grupo 6-{2-[2-(2-fluoroetóxi)etóxi]etóxi}piridin-3-ila, um grupo 5-(2- fluoroetil)tiofen-2-ila, um grupo 5-(2-fluoroetóxi)tiofen-2-ila, um grupo 5-[2-(2- fluoroetóxi)etóxi]tiofen-2-ila, um grupo 5-{2-[2-(2-fluoroetóxi)etóxi]etóxi}tiofen- 2-ila, um grupo 5-(2-fluoroetil)furan-2-ila, um grupo 5-(2-fluoroetóxi)furan-2- ila, um grupo 5-[2-(2-fluoroetóxi)etóxi]furan-2-ila, um grupo 5-{2-[2-(2- fluoroetóxi)etóxi]etóxi}furan-2-ila, um grupo piridin-4-ila, um grupo piridin-3- ila, ou um grupo piridin-2-ila.
(4) A composição para diagnóstico de uma doença relacionada à amilóide de acordo com (1), em que R1 na fórmula geral (I) representa um grupo 6-iodopiridin-3-ila, um grupo 6-fluoropiridin-3-ila, um grupo 6-(2- fluoroetil)piridin-3-ila, um grupo 6-(2-fluoroetóxi)piridin-3-ila, um grupo 6-[2- (2-fluoroetóxi)etóxi]piridin-3-ila, um grupo 6-{2-[2-(2- fluoroetóxi)etóxi]etóxi}piridin-3-ila, um grupo 5-iodotiofen-2-ila, um grupo 5- fluorotiofen-2-ila, um grupo 5-(2-fluoroetil)tiofen-2-ila, um grupo 5-(2- fluoroetóxi)tiofen-2-ila, um grupo 5-[2-(2-fluoroetóxi)etóxi]tiofen-2-ila, um gru- po 5-{2-[2-(2-fluoroetóxi)etóxi]etóxi}tiofen-2-ila, um grupo 5-iodofuran-2-ila, um grupo 5-fluorofuran-2-ila, um grupo 5-(2-fluoroetiI)furan-2-ila, um grupo 5- (2-fluoroetóxi)furan-2-ila, um grupo 5-[2-(2-fluoroetóxi)etóxi]furan-2-ila, ou um grupo 5-{2-[2-(2-fluoroetóxi)etóxi]etóxi}furan-2-ila, e R2 na fórmula geral (I) representa um grupo 5-aminotiofen-2-ila, um grupo 5 metilaminotiofen-2-ila, um grupo 5-dimetilaminotiofen-2-ila, um grupo 5-aminofuran-2-ila, um grupo 5-metilaminofuran-2-ila, um grupo 5-dimetilaminofuran-2-ila, um grupo tiazol- 2-ila, um grupo 1H-imidazol-5-ila, um grupo 1 H-imidazol-2-ila, um grupo A- aminofenila, um grupo 4-metilaminofenila, um grupo 4-dimetilaminofenila, um grupo 4-hidroxifenila, um grupo 4-metoxifenila, um grupo piridin-4-ila, um grupo piridin-3-ila, ou um grupo piridin-2-ila.
(5) A composição para diagnóstico de uma doença relacionada à amilóide de acordo com (1), em que R1 na fórmula geral (I) representa um grupo 5-aminotiofen-2-ila, um grupo 5-metilaminotiofen-2-ila, um grupo 5- dimetilaminotiofen-2-ila, um grupo 5-aminofuran-2-ila, um grupo 5- metilaminofuran-2-ila, um grupo 5-dimetilaminofuran-2-ila, um grupo tiazol-2- ila, um grupo 1 H-imidazol-5-ila, um grupo 1H-imidazol-2-ila, um grupo piridin- 4-ila, um grupo piridin-3-ila, ou um grupo piridin-2-ila, e R2 na fórmula geral (I) representa um grupo 6-iodopiridin-3-ila, um grupo 6-fluoropiridin-3-ila, um grupo 6-(2-fluoroetil)piridin-3-ila, um grupo 6-(2-fluoroetóxi)piridin-3-ila, um grupo 6-[2-(2-fluoroetóxi)etóxi]piridin-3-ila, um grupo 6-{2-[2-(2- fluoroetóxi)etóxi]etóxi}piridin-3-ila, um grupo 5-iodotiofen-2-ila, um grupo 5- fluorotiofen-2-ila, um grupo 5-(2-fluoroetil)tiofen-2-ila, um grupo 5-(2- fluoroetóxi)tiofen-2-ila, um grupo 5-[2-(2-fluoroetóxi)etóxi]tiofen-2-íla, um gru- po 5-{2-[2-(2-fluoroetóxi)etóxi]etóxi}tiofen-2-ila, um grupo 5-iodofuran-2-ila, um grupo 5-fluorofuran-2-ila, um grupo 5-(2-fluoroetil)furan-2-ila, um grupo 5- (2-fluoroetóxi)furan-2-ila, um grupo 5-[2-(2-fluoroetóxi)etóxi]furan-2-ila, ou um grupo 5-{2-[2-(2-fluoroetóxi)etóxi]etóxi}furan-2-ila.
(6) A composição para diagnóstico de uma doença relacionada à amilóide de acordo com (1), em que R1 na fórmula geral (I) representa um grupo 6-hidroxipiridin-3-ila, um grupo 5-hidroxitiofen-2-ila, um grupo 5- hidroxifuran-2-ila, um grupo 6-(2-fluoroetóxi)piridin-3-ila, um grupo 6-[2-(2- fluoroetóxi)etóxi]piridin-3-ila, um grupo 6-{2-[2-(2- fluoroetóxi)etóxi]etóxi}piridin-3-ila, um grupo 5-(2-fluoroetóxi)tiofen-2-ila, um grupo 5-[2-(2-fluoroetóxi)etóxi]tiofen-2-ila, um grupo 5-{2-[2-(2- fluoroetóxi)etóxi]etóxi}tiofen-2-ila, um grupo 5-(2-fluoroetóxi)furan-2-ila, um grupo 5-[2-(2-fluoroetóxi)etóxi]furan-2-ila, ou um grupo 5-{2-[2-(2- fluoroetóxi)etóxi]etóxi}furan-2-ila, e R2 na fórmula geral (I) representa um grupo 5-metilaminotiofen-2-ila, um grupo 5-dimetilaminotiofen-2-ila, um grupo 5-metilaminofuran-2-ila, um grupo 5-dimetilaminofuran-2-ila, um grupo 4- metilaminofenila, ou um grupo 4-dimetilaminofenila.
(7) A composição para diagnóstico de uma doença relacionada à amilóide de acordo com (1), em que R1 na fórmula geral (I) representa um grupo 5-metilaminotiofen-2-ila, um grupo 5-dimetilaminotiofen-2-ila, um grupo 5-metilaminofuran-2-ila, ou um grupo 5-dimetilaminofuran-2-íla, e R2 na fór- mula geral (I) representa um grupo 6-hidroxipiridin-3-ila, um grupo 5- hidroxitiofen-2-ila, ou um grupo 5-hidroxifuran-2-ila.
(8) A composição para diagnóstico de uma doença relacionada à amilóide de acordo com (1), em que R1 na fórmula geral (I) representa um grupo tienila em que um átomo de hidrogênio é substituído com um átomo de halogênio, e R2 na fórmula geral (I) representa um grupo fenila em que um átomo de hidrogênio é substituído com um grupo dimetilamino ou um grupo metilamino.
(9) A composição para diagnóstico de uma doença relacionada à amilóide de acordo com (1), em que R1 na fórmula geral (I) representa um grupo 5-iodotiofen-2-ila, e R2 na fórmula geral (I) representa um grupo 4- dimetilaminofenila ou um grupo 4-metilaminofenila.
(10) A composição para diagnóstico de uma doença relacionada à amilóide de acordo com qualquer uma das (1) a (9), em que o radionuclí- deo é um radionuclídeo de emissão de pósitron.
(11) A composição para diagnóstico de uma doença relacionada à amilóide de acordo com qualquer uma das (1) a (9), em que o radionuclí- deo é um radionuclídeo de emissão de raio □.
(12) A composição para diagnóstico de uma doença relacionada à amilóide de acordo com qualquer uma das (1) a (11), em que a doença relacionada à amilóide é doença de Alzheimer.
(13) Um método para avaliação de um agente terapêutico ou profilático para uma doença relacionada à amilóide, compreendendo as eta- pas de administrar uma substância teste a um animal modelo de doença re- lacionada à amilóide, administrar a composição para diagnóstico de uma doença relacionada à amilóide de acordo com qualquer uma das (1) a (12) ao animal modelo, e examinar uma distribuição ou uma quantidade do com- posto representado pela fórmula geral (I) contida no cérebro do animal mo- delo.
(14) Um método para avaliação de um agente terapêutico ou profilático para uma doença relacionada à amilóide, compreendendo as eta- pas de administrar o agente terapêutico ou profilático para uma doença rela- cionada à amilóide a um animal modelo de doença relacionada à amilóide, administrar a composição para diagnóstico de uma doença relacionada à amilóide de acordo com qualquer uma das (1) a (12) ao animal modelo, e examinar uma distribuição ou uma quantidade do composto representado pela fórmula geral (I) contida no cérebro do animal modelo.
Vantagens da Invenção
O composto representado pela fórmula geral (I) é útil para diag- nóstico de doença de Alzheimer porque o composto tem elevada especifici- dade de ligação à proteína amilóide β, permeabilidade através da barreira hemato-encefálica, e uma propriedade de ser rapidamente eliminado de sí- tios exceto placas senis no cérebro.
Breve Descrição das Figuras
Figura 1 mostra um método para sintetizar derivados de calcona contendo anel heterocíclico aromático utilizado no Exemplo 1 (números na figura correspondem aos números de compostos no Exemplo 1);
Figura 2 mostra propriedades de ligação dos Compostos 1 e 4 no Exemplo 1 ao agregado de Αβ (1 - 42) (·, Composto 1; A1 Composto 4);
Figura 3 mostra um método para sintetizar derivados de calcona utilizados no Exemplo 2 (números na figura correspondem aos números de compostos no Exemplo 2);
Figura 4 mostra um método para sintetizar derivados de calcona utilizados no Exemplo 2 (números na figura correspondem aos números de compostos no Exemplo 2);
Figura 5 mostra um método para sintetizar derivados de calcona utilizados no Exemplo 2 (números na figura correspondem aos números de compostos no Exemplo 2);
Figura 6 mostra um método para sintetizar derivados de calcona utilizados no Exemplo 2 (números na figura correspondem aos números de compostos no Exemplo 2);
Figura 7 mostra um método para sintetizar derivados de calcona utilizados no Exemplo 2 (números na figura correspondem aos números de compostos no Exemplo 2);
Figura 8 mostra um método para sintetizar derivados de calcona utilizados no Exemplo 2 (números na figura correspondem aos números de compostos no Exemplo 2); Figura 9 mostra um método para rotular derivados de calcona utilizados no Exemplo 2 com um iodo radioativo;
Figura 10 mostra curvas de inibição do Composto 14 no Exem- plo 2, vermelho congo, e tioflavina T de ligação de [125l]CL-NMe2 ao agrega- do de Αβ (1 - 42) (·, Composto 14 no Exemplo 2; vermelho congo; A, tioflavina T);
Figura 11 mostra resultados de um experimento de manchamen- to por fluorescência utilizando-se secção de tecidos cerebrais de camundon- gos modelos de doença de Alzheimer (Composto 14 no Exemplo 2, A e B; Composto 23 no Exemplo de Referência 2, C e D; Composto 3 no Exemplo de Referência 2, E e F; Composto 5 no Exemplo de Referência 2, G e H; Composto 7 no Exemplo de Referência 2, I e J; amilóide de placa senil, A, C, E, G1 e I; amilóide vascular, B1 D, F, H, e J);
Figura 12 mostra um método para sintetizar derivados de calco- na utilizados no Exemplo de Referência 1 (números na figura correspondem aos números de compostos no Exemplo de Referência 1);
Figura 13 mostra um método para rotular derivados de calcona utilizados no Exemplo de Referência 1 com um iodo radioativo;
Figura 14 mostra propriedades de ligação do Composto 7 (A) e Composto 12 (B) no Exemplo de Referência 1 ao agregado de Αβ (·, na presença do agregado de Αβ; ·, na ausência do agregado de Αβ);
Figura 15 mostra um método para sintetizar derivados de calco- na contendo flúor utilizados no Exemplo de Referência 2 (números na figura correspondem aos números de compostos no Exemplo de Referência 2);
Figura 16 mostra um método para sintetizar derivados de calco- na contendo flúor utilizados no Exemplo de Referência 2 (números na figura correspondem aos números de compostos no Exemplo de Referência 2);
Figura 17 mostra um método para sintetizar derivados de calco- na contendo flúor utilizados no Exemplo de Referência 2 (números na figura correspondem aos números de compostos no Exemplo de Referência 2); e
Figura 18 mostra um método para rotular derivados de calcona contendo flúor utilizados no Exemplo de Referência 2 com um carbono ra- dioativo.
Melhor Método de realizar a invenção
A seguir, a presente invenção será explicada em detalhes.
Na presente invenção, "átomos de halogênio" significam, por exemplo, um átomo de flúor, um átomo de cloro, um átomo de bromo, ou um átomo de iodo.
Na presente invenção, "um grupo alquila tendo 1 a 4 átomos de carbono" significa, por exemplo, um grupo metila, um grupo etila, um grupo propila, um grupo isopropila, um grupo butila, um grupo isobutila, um grupo sec-butila, um grupo terc-butila, ou os similares.
Na presente invenção, "um grupo alquila tendo 1 a 4 átomos de carbono que podem ser substituídos com um átomo de halogênio" significa, por exemplo, um grupo fluorometila, um grupo 2-fluoroetila, um grupo 3- fluoropropila, um grupo 4-fluorobutila, ou os similares.
Na presente invenção, "um grupo alcóxi tendo 1 a 4 átomos de carbono" significa, por exemplo, um grupo metóxi, um grupo etóxi, um grupo propóxi, um grupo isopropóxi, um grupo butóxi, um grupo isobutóxi, um gru- po sec-butóxi, um grupo terc-butóxi, ou os similares.
Na presente invenção, "um grupo alcóxi tendo 2 a 8 átomos de carbono" significa, por exemplo, um grupo 2-etoxietóxi ou os similares.
Na presente invenção, "um grupo alcóxi tendo 3 a 12 átomos de carbono" significa, por exemplo, um grupo 2-(2-etoxietóxi)etóxi ou os simila- res.
Na presente invenção, "um grupo alcóxi tendo 1 a 4 átomos de carbono que podem ser substituídos com um átomo de halogênio" significa, por exemplo, um grupo fluorometóxi, um grupo 2-fluoroetóxi, um grupo 3- fluoropropóxi, um grupo 4-fluorobutóxi, ou os similares.
Na presente invenção, "um grupo alcóxi tendo 2 a 8 átomos de carbono que podem ser substituídos com um átomo de halogênio" significa, por exemplo, um grupo 2-(2-fluoroetóxi)etóxi ou os similares.
Na presente invenção, "um grupo alcóxi tendo 3 a 12 átomos de carbono que podem ser substituídos com um átomo de halogênio" significa, por exemplo, um grupo 2-[2-(2-fluoroetóxi)etóxi]eíóxi ou os similares.
Na presente invenção, " grupo arila " significa, por exemplo, um grupo fenila, um grupo 1-naftila, um grupo 2-naftila, ou os similares.
Na presente invenção, "um anel heterocíclico aromático" signifi- ca, por exemplo, um grupo piridin-2-ila, um grupo piridin-3-ila, um grupo piri- din-4-ila, um grupo pirimidin-2-ila, um grupo pirimidin-4-ila, um grupo pirimí- din-5-ila, um grupo tiofen-2-ila, um grupo tiofen-3-ila, um grupo furan-2-ila, um grupo furan-3-ila, um grupo tiazol-2-ila, um grupo 1H-imidazol-2-ila, um grupo 1 H-imidazol-5-ila, ou os similares.
Na presente invenção, "um grupo arila que pode ser substituído com um substituinte selecionado do grupo substituinte A" significa, por e- xemplo, um grupo 2- dimetilaminofenila, um grupo 2-metilaminofenila, um grupo 2-aminofenila, um 2- grupo metoxifenila, um grupo 2-hidroxifenila, um grupo 3-dimetilaminofenila, um grupo 3-metilaminofenila, um grupo 3- aminofenila, um grupo 3-metoxifenila, um grupo 3-hidroxifenila, um grupo 4- dimetilaminofenila, um grupo 4-metilaminofenila, um grupo 4-aminofenila, um grupo 4-metoxifenila, um grupo 4-hidroxifenila, um grupo 3-hidróxi-4- dimetilaminofenila, um grupo 3-hidróxí-4-metilaminofenila, um grupo 3- hidróxi-4-metoxifenila, um grupo 3,5-diidróxi-4-dimetilaminofenila, um grupo 3,5-diidróxi-4-metilaminofenila, um grupo 3,5-diidróxi-4-metoxifenila, ou os similares.
Na presente invenção, "um anel heterocíclico aromático que po- de ser substituído com um substituinte selecionado do grupo substituinte A" significa, por exemplo, um grupo 6-iodopiridin-3-ila, um grupo 6-fluoropiridin- 3-ila, um grupo 6-hidroxipiridin-3-ila, um grupo 6-(2-fluoroetil)piridin-3-ila, um grupo 6-(2-fluoroetóxi)piridin-3-ila, um grupo 6-[2-(2-fluoroetóxi)etóxi]piridin- 3-ila, um grupo 6-{2-[2-(2-fluoroetóxi)etóxi]etóxi}piridin-3-ila, um grupo 5- iodopiridin-2-ila, um grupo 5-fluoropiridin-2-ila, um grupo 5-hidroxipiridin-2-ila, um grupo 5-(2-fluoroetil)piridin-2-ila, um grupo 5-(2-fluoroetóxi)piridin-2-ila, um grupo 5-[2-(2-fluoroetóxi)etóxi]piridin-2-ila, um grupo 5-{2-[2-(2- fluoroetóxi)etóxi]etóxi}piridin-2-ila, um grupo 5-iodopiridin-3-ila, um grupo 5- fluoropiridin-3-ila, um grupo 5-hidroxipiridin-3-ila, um grupo 5-(2- fluoroetil)piridin-3-ila, um grupo 5-(2-fluoroetóxi)piridin-3-ila, um grupo 5-[2- (2-fluoroetóxi)etóxi]piridin-3-ila, um grupo 5-{2-[2-(2- fluoroetóxi)etóxi]etóxi}piridin-3-ila, um grupo 4-iodopiridin-2-ila, um grupo A- fluoropiridin-2-ila, um grupo 4-hidroxipiridin-2-ila, um grupo 4-(2- fluoroetil)piridin-2-ila, um grupo 4-(2-fluoroetóxi)piridin-2-ila, um grupo 4-[2- (2-fluoroetóxi)etóxi]piridin-2-ila, um grupo 4-{2-[2-(2- fluoroetóxi)etóxi]etóxi}piridin-2-ila, um grupo 5-iodotiofen-2-ila, um grupo 5- fluorotiofen-2-ila, um grupo 5-hidroxitiofen-2-ila, um grupo 5-iodofuran-2-ila, um grupo 5-fluorofuran-2-ila, um grupo 5-hidroxifuran-2-ila, um grupo 5- aminotiofen-2-ila, um grupo 5-metilaminotiofen-2-ila, um grupo 5- dimetilaminotiofen-2-ila, um grupo 5-aminofuran-2-ila, um grupo 5- metilaminofuran-2-ila, um grupo 5-dimetilaminofuran-2-ila, um grupo tiazol-2- ila, um grupo 1 H-imidazol-5-ila, um grupo IH-imidazol-2-ila, um grupo 5- dimetilaminopiridin-2-ila, um grupo 5-metilaminopiridin-2-ila, um grupo 5- metoxipiridin-2-ila, um grupo 6-dimetilaminopiridin-3-ila, um grupo 6- metilaminopiridin-3-ila, um grupo 6-metoxipiridin-3-ila, um grupo 5-(2- fluoroetóxi)tiofen-2-ila, um grupo 5-[2-(2-fluoroetóxi)etóxi]tiofen-2-ila, um gru- po 5-{2-[2-(2-fluoroetóxi)etóxi]etóxi}tioferi-2-ila, um grupo 5-(2- fluoroetóxi)furan-2-ila, um grupo 5-[2-(2-fluoroetóxi)etóxi]furan-2-ila, um gru- po 5-{2-[2-(2-fluoroetóxi)etóxi]etóxi}furan-2-ila, ou os similares.
Na fórmula geral (I), R1 é preferivelmente um grupo 6-iodopiridin- 3-ila, um grupo 6-fluoropiridin-3-ila, um grupo 6-hidroxipiridin-3-ila, um grupo 5-iodopiridin-2-ila, um grupo 5-fluoropiridin-2-ila, um grupo 5-hidroxipiridin-2- ila, um grupo 5-iodopiridin-3-ila, um grupo 5-fluoropiridin-3-ila, um grupo 5- hidroxipiridin-3-ila, um grupo 4-iodopiridin-2-ila, um grupo 4-fluoropiridin-2-ila, um grupo 4-hidroxipiridin-2-ila, um grupo 5-iodotiofen-2-ila, um grupo 5- fluorotiofen-2-ila, um grupo 5-hidroxitiofen-2-ila, um grupo 5-iodofuran-2-ila, um grupo 5-fluorofuran-2-ila, um grupo 5-hidroxifuran-2-ila, um grupo 5- aminotiofen-2-ila, um grupo 5-metilaminotiofen-2-ila, um grupo 5- dimetilaminotiofen-2-ila, um grupo 5-aminofuran-2-ila, um grupo 5- metilaminofuran-2-ila, um grupo 5-dimetilaminofuran-2-ila, um grupo tiazol-2- ila, um grupo 1 H-imidazol-5-ila, um grupo 1 H-imidazol-2-ila, um grupo 6-(2- fluoroetil)piridin-3-ila, um grupo 6-(2-fluoroetóxi)piridin-3-ila, um grupo 6-[2- (2-fluoroetóxi)etóxi]piridin-3-ila, um grupo 6-{2-[2-(2- fluoroetóxi)etóxi]etóxi}piridin-3-ila, um grupo 5-(2-fluoroetil)tiofen-2-ila, um grupo 5-(2-fluoroetóxi)tiofen-2-ila, um grupo 5-[2-(2-fluoroetóxi)etóxi]tiofen-2- ila, um grupo 5-{2-[2-(2-fluoroetóxi)etóxi]etóxi}tiofen-2-ila, um grupo 5-(2- fluoroetil)furan-2-ila, um grupo 5-(2-fluoroetóxi)furan-2-ila, um grupo 5-[2-(2- fluoroetóxi)etóxi]furan-2-ila, um grupo 5-{2-[2-(2-fluoroetóxi)etóxi]etóxi}furan- 2-ila, um grupo piridin-4-ila, um grupo piridin-3-ila, ou piridin-2-ila grupo, mais preferivelmente, um grupo 6-iodopiridin-3-ila, um grupo 5-iodotiofen-2-ila, um grupo 6-(2-fluoroetóxi)piridin-3-ila, um grupo 6-[2-(2-fluoroetóxi)etóxi]piridin- 3-ila, um grupo 6-{2-[2-(2-fluoroetóxi)etóxi]etóxi}piridin-3-ila, um grupo 5-(2- fluoroetóxi)tiofen-2-ila, um grupo 5-[2-(2-fluoroetóxi)etóxi]tiofen-2-ila, um gru- po 5-{2-[2-(2-fluoroetóxi)etóxi]etóxi}tiofen-2-ila, um grupo 5-(2- fluoroetóxi)furan-2-ila, um grupo 5-[2-(2-fluoroetóxi)etóxi]furan-2-ila, ou um grupo 5-{2-[2-(2-fluoroetóxi)etóxi]etóxi}furan-2-ila.
Na fórmula geral (I), R é preferivelmente um grupo 4- aminofenila, um grupo 4-metilaminofenila, um grupo 4-dimetilaminofenila, um grupo 4-hidroxifenila, um grupo 4-metoxifenila, um grupo 6-iodopiridin-3-ila, um grupo 6-fluoropiridin-3-ila, um grupo 6-hidroxipiridin-3-ila, um grupo 5- iodopiridin-2-ila, um grupo 5-fluoropiridin-2-ila, um grupo 5-hidroxipiridin-2-ila, um grupo 5-iodopiridin-3-ila, um grupo 5-fluoropiridin-3-ila, um grupo 5- hidroxipiridin-3-ila, um grupo 4-iodopiridin-2-ila, um grupo 4-fluoropiridiri-2-ila, um grupo 4-hidroxipiridin-2-ila, um grupo 5-iodotiofen-2-ila, um grupo 5- fluorotiofen-2-ila, um grupo 5-hidroxitiofen-2-ila, um grupo 5-iodofuran-2-ila, um grupo 5-fluorofuran-2-ila, um grupo 5-hidroxifuran-2-ila, um grupo 5- aminotiofen-2-ila, um grupo 5-metilaminotiofen-2-ila, um grupo 5- dimetilaminotiofen-2-ila, um grupo 5-aminofuran-2-ila, um grupo 5- metilaminofuran-2-ila, um grupo 5-dimetilaminofuran-2-ila, um grupo tiazol-2- ila, um grupo 1H-imidazol-5-ila, um grupo 1H-imidazol-2-ila, um grupo 6-(2- fluoroetil)piridin-3-ila, um grupo 6-(2-fluoroetóxi)piridin-3-ila, um grupo 6-[2- (2-fluoroetóxi)etóxi]piridin-3-ila, um grupo 6-{2-[2-(2- fluoroetóxi)etóxi]etóxi}piridin-3-ila, um grupo 5-(2-fluoroetil)tiofen-2-ila, um grupo 5-(2-fluoroetóxi)tiofen-2-ila, um grupo 5-[2-(2-fluoroetóxi)etóxi]tiofen-2- ila, um grupo 5-{2-[2-(2-fluoroetóxi)etóxi]etóxi}tiofen-2-ila, um grupo 5-(2- fluoroetil)íuran-2-ila, um grupo 5-(2-fluoroetóxi)furan-2-ila, um grupo 5-[2-(2- fluoroetóxi)etóxi]furan-2-ila, um grupo 5-{2-[2-(2-fluoroetóxi)etóxi]etóxi}furan- 2-ila, um grupo piridin-4-ila, um grupo piridin-3-ila, ou um grupo piridin-2-ila, mais preferivelmente, um grupo 4-metilaminofenila ou um grupo 4- dimetilaminofenila.
Além disso, exemplos preferidos de combinações de R1 e R2 incluem os seguintes (A) a (F).
(A) R1 é um grupo 6-iodopiridin-3-ila, um grupo 6-fluoropiridin-3- ila, um grupo 6-(2-fluoroetil)piridin-3-ila, um grupo 6-(2-fluoroetóxi)piridin-3- ila, um grupo 6-[2-(2-fluoroetóxi)etóxi]piridin-3-ila, um grupo 6-{2-[2-(2- fluoroetóxi)etóxi]etóxi}piridin-3-ila, um grupo 5-iodotiofen-2-ila, um grupo 5- fluorotiofen-2-ila, um grupo 5-(2-fluoroetil)tiofen-2-ila, um grupo 5-(2- fluoroetóxi)tiofen-2-ila, um grupo 5-[2-(2-fluoroetóxi)etóxi]tiofen-2-ila, um gru- po 5-{2-[2-(2-fluoroetóxi)etóxi]etóxi}tiofen-2-ila, um grupo 5-iodofuran-2-ila, um grupo 5-fluorofuran-2-ila, um grupo 5-(2-fluoroetil)furan-2-ila, um grupo 5- (2-fluoroetóxi)furan-2-ila, um grupo 5-[2-(2-fluoroetóxi)etóxi]furan-2-ila, ou um grupo 5-{2-[2-(2-fluoroetóxi)etóxi]etóxi}furan-2-ila, e R2 é um grupo 5- aminotiofen-2-ila, um grupo 5 metilaminotiofen-2-ila, um grupo 5- dimetilaminotiofen-2-ila, um grupo 5-aminofuran-2-ila, um grupo 5 metilami- nofuran-2-ila, um grupo 5-dimetilaminofuran-2-ila, um grupo tiazol-2-ila, um grupo 1H-imidazol-5-ila, um grupo 1H-imidazol-2-ila, um grupo 4-aminofenila, um grupo 4-metilaminofenila, um grupo 4-dimetilaminofenila, um grupo 4- hidroxifenila, um grupo 4-metoxifenila, um grupo piridin-4-ila, um grupo piri- din-3-ila, ou um grupo piridin-2-ila.
(B) R1 é um grupo 5-aminotiofen-2-ila, um grupo 5- metilaminotiofen-2-ila, um grupo 5-dimetilaminotiofen-2-ila, um grupo 5- aminofuran-2-ila, um grupo 5-metilaminofuran-2-ila, um grupo 5- dimetilaminofuran-2-ila, um grupo tiazol-2-ila, um grupo 1H-imidazol-5-ila, um grupo 1H-imidazol-2-ila, um grupo piridin-4-ila, um grupo piridin-3-ila, ou um grupo piridin-2-ila, e R2 é um grupo 6-iodopiridin-3-ila, um grupo 6- fluoropiridin-3-ila, um grupo 6-(2-fluoroetil)piridin-3-ila, um grupo 6-(2- fluoroetóxi)piridin-3-ila, um grupo 6-[2-(2-fluoroetóxi)etóxi]piridin-3-ila, um grupo 6-{2-[2-(2-fluoroetóxi)etóxi]etóxi}piridin-3-ila, um grupo 5-iodotiofen-2- ila, um grupo 5-fluorotiofen-2-ila, um grupo 5-(2-fluoroetil)tiofen-2-ila, um grupo 5-(2-fluoroetóxi)tiofen-2-ila, um grupo 5-[2-(2-fluoroetóxi)etóxi]tiofen-2- ila, um grupo 5-{2-[2-(2-fluoroetóxi)etóxi]etóxi}tiofen-2-ila, um grupo 5- iodofuran-2-ila, um grupo 5-fluorofuran-2-ila, um grupo 5-(2-fluoroetil)furan-2- ila, um grupo 5-(2-fluoroetóxi)furan-2-ila, um grupo 5-[2-(2- fluoroetóxi)etóxi]furan-2-ila, ou um grupo 5-{2-[2-(2- fluoroetóxi)etóxi]etóxi}furan-2-ila.
(C) R1 é um grupo 6-hidroxipiridin-3-ila, um grupo 5-hidroxitiofen- 2-ila, ou um grupo 5-hidroxifuran-2-ila, e R2 é um grupo 5-metilaminotiofen-2- ila, um grupo 5-dimetilaminotiofen-2-ila, um grupo 5-metilaminofuran-2-ila, um grupo 5-dimetilaminofuran-2-ila, um grupo 4-metilaminofenila, ou um grupo 4-dimetilaminofenila.
(D) R1 é um grupo 5-metilaminotiofen-2-ila, um grupo 5- dimetilaminotiofen-2-ila, um grupo 5-metilaminofuran-2-ila, ou um grupo 5- dimetilaminofuran-2-ila, e R2 é um grupo 6-hidroxipiridin-3-ila, um grupo 5- hidroxitiofen-2-ila, ou um grupo 5-hidroxifuran-2-ila.
(E) R1 é um grupo tienila em que um átomo de hidrogênio é substituído com um átomo de halogênio, e R2 é um grupo fenila em que um átomo de hidrogênio é substituído com um grupo dimetilamino ou um grupo metilamino.
(F) R1 é um grupo 5-iodotiofen-2-ila, e R2 é um grupo 4- dimetilaminofenila ou um grupo 4-metilaminofenila.
Compostos comuns representados pela fórmula geral (I) são lis- tados nas Tabelas 1 a 11. [Tabela 1]
<table>table see original document page 17</column></row><table> <table>table see original document page 18</column></row><table> <table>table see original document page 19</column></row><table> <table>table see original document page 20</column></row><table>
Tabela 3
<table>table see original document page 20</column></row><table> <table>table see original document page 21</column></row><table> <table>table see original document page 22</column></row><table>
[Tabela 4]
<table>table see original document page 22</column></row><table> <table>table see original document page 23</column></row><table> <table>table see original document page 24</column></row><table> <table>table see original document page 25</column></row><table> <table>table see original document page 26</column></row><table> <table>table see original document page 27</column></row><table> <table>table see original document page 28</column></row><table> <table>table see original document page 29</column></row><table> <table>table see original document page 30</column></row><table> <table>table see original document page 31</column></row><table>
[Tabela 9] <table>table see original document page 31</column></row><table> <table>table see original document page 32</column></row><table> <table>table see original document page 33</column></row><table> <table>table see original document page 34</column></row><table> <table>table see original document page 35</column></row><table> Tabela 11
<table>table see original document page 36</column></row><table> <table>table see original document page 37</column></row><table> <table>table see original document page 38</column></row><table>
Entre os os compostos mencionados acima, 1-12 (Composto 4 do Exemplo 1), 1 - 79 (Composto 13 do Exemplo 2), e 1-80 (Composto 1 do Exemplo 1) são preferidos.
O composto representado pela fórmula geral (I) pode ser sinteti- zado de acordo com as descrições nos exemplos descritos posteriormente, Boeck P e outro, Bioorganic & Medicinal Chemistry, 14, 1538-1545, 2006, Robinson PR e outro, Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters1 13, 4007- 4013, 2005, e similares.
O composto representado pela fórmula geral (I) é preferivelmen- te rotulado com uma substância de rotulagem. Como a substância de rotula- gem, substâncias fluorescentes, substâncias de afinidade, e similares podem ser utilizadas, porém radionuclídeos são preferivelmente utilizados. Tipos de radionuclídeos utilizados para rotulagem não são particularmente limitados, e podem ser adequadamente selecionados dependendo do propósito de u- so. Por exemplo, quando o composto representado pela fórmula geral (I) for utilizado para diagnóstico por tomografia computadorizada por emissão de fóton único (SPECT), radionuclídeos de emissão de raio □ tais como 99mTc, 111In, 67Ga, 201TI, 123I, e 133Xe (preferivelmente, 99mTc e 123I) podem ser utili- zados como os radionuclídeos. Além disso, quando o composto representa- do pela fórmula geral (I) for utilizado para diagnóstico por tomografia por e- missão de positron (PET), radionuclídeos de emissão de positron tais como 11C, 13N, 15O, 18F, 62Cu, 68Ga, e 76Br (preferivelmente, 11C, 13N, 15O, e 18F) podem ser utilizados. Além disso, quando o composto representado pela 5 fórmula geral (I) for administrado aos animais exceto humanos, radionuclí- deos tendo uma meia vida maior tal como, por exemplo, 125I podem ser utili- zados. Radionuclídeos podem estar contidos na molécula do composto re- presentado pela fórmula geral (I) ou ligados ao composto representado pela fórmula geral (I).
É suficiente usar um método comumente utilizado para cada ra- dionuclídeo como o método para ligar um radionuclídeo ao composto repre- sentado pela fórmula geral (I). Além disso, quando um radionuclídeo for liga- do ao composto representado pela fórmula geral (I), o radionuclídeo sozinho pode ser ligado, porém um radionuclídeo ligado a outra substância pode ser ligado. Uma vez que o 99mTc mencionado acima é habitualmente ligado a um composto para ser rotulado na forma de um complexo, um complexo con- tendo 99mTc pode também ser ligado ao composto representado pela fórmula geral (I). Exemplos do complexo contendo 99mTc incluem um complexo con- tendo 2-hidrazinopiridina (Liu S e outro, Bioconjug Chem. Janeiro-Fevereiro de 1996; 7(1): 63-71), um complexo contendo N-(2-mercaptoetil)-2-[(2- mercaptoetil)amino]-acetamida (Zhen W e outro, J Med Chem. 29 de julho de 1999; 42(15): 2805-15), um complexo contendo 2,2'-(1,2- etanodiildiimino)bis-etanotiol (Oya S e outro, Nucl Med Biol. Fevereiro de 1998; 25(2): 135-40), um complexo de tricarbonila (Schibli R e outro, Biocon- jug Chem. Maio-Junho de 2000; 11 (3): 345-51), e assim por diante.
No lugar do composto representado pela fórmula geral (I), um sal farmaceuticamente aceitável deste pode ser utilizado. Exemplos do sal farmaceuticamente aceitável deste incluem sais de metal de álcali (sais de sódio, sais de potássio, e sais de lítio), sais de metal alcalino terroso (sais de cálcio e sais de magnésio), sulfatos, cloridratos, nitratos, fosfatos, e assim por diante.
A composição da presente invenção é utilizada para diagnóstico de uma doença relacionada à amilóide. Aqui, a "doença relacionada à ami- lóide" significa uma doença causada por acúmulo de proteína amilóide β, primariamente doença de Alzheimer1 porém exemplos desta também inclu- em doenças tais como síndrome de Down1 hemorragia cerebral hereditária com amiloidose tipo Dutch (HCHWA-D). Além disso, um pródromo de uma doença, que não é geralmente reconhecido como uma "doença," é também incluído na "doença relacionada à amilóide" na presente invenção. Exemplos de um tal pródromo da doença incluem dano cognitivo brando (MCI) obser- vado antes do início de doença de Alzheimer e similares.
Habitualmente, diagnóstico de uma doença relacionada à ami- lóide utilizando-se a composição da presente invenção é feito administrando- se a composição da presente invenção a um paciente para o qual um diag- nóstico deve ser feito, um animal de laboratório, ou os similares, em seguida imageándo-se o cérebro deste, e realizando-se o diagnóstico baseado nas condições do composto representado pela fórmula geral (I) (quantidade, dis- tribuição, etc.) na imagem. O método de administração da composição da presente invenção não é particularmente limitado e pode ser adequadamen- te selecionado dependendo do tipo de um composto, do tipo de uma subs- tância de rotulagem, e similares. Habitualmente, a composição da presente invenção é administrada por uma injeção, uma infusão por gotejamento, ou os similares na pele, na cavidade peritoneal, na veia, na artéria, ou no fluido espinhal. A dose da composição da presente invenção não é particularmente limitada e pode ser adequadamente selecionada dependendo do tipo de um composto, do tipo de uma substância de rotulagem, e similares. Para adul- tos, 10"10 a 10"3 mg, mais preferivelmente 10"8 a 10"5 mg do composto repre- sentado pela fórmula geral (I) é preferivelmente administrado diariamente.
Uma vez que a composição da presente invenção é habitual- mente administrada por uma injeção ou uma infusão por gotejamento como descrito acima, componentes habitualmente contidos em uma solução de injeção ou uma solução de infusão por gotejamento podem estar contidos. Exemplos de tais componentes incluem veículos líquidos (por exemplo, tam- pão de fosfato de potássio, salina fisiológica, solução de Ringer, água desti- lada, polietileno glicol, óleos vegetais e ácidos graxos, etanol, glicerina, sul- fóxido de dimetila, propileno glicol, etc.), agentes antibacterianos, anestési- cos locais (por exemplo, cloridrato de procaína, cloridrato de dibucaína, etc.), tampões (por exemplo, tampões de tris-cloridrato, tampão de HEPES, etc.), e modificadores osmóticos (por exemplo, glicose, sorbitol, cloreto de sódio, etc.).
A composição para diagnóstico de uma doença relacionada à amilóide da presente invenção pode também ser utilizada para avaliação de um agente terapêutico ou profilático para uma doença relacionada à amilói- de. Por exemplo, uma substância teste é administrada a um animal modelo de uma "doença" tal como doença de Alzheimer, a composição para diag- nóstico de uma doença relacionada à amilóide da presente invenção é ad- ministrada ao animal modelo, e em seguida a distribuição ou a quantidade do composto representado pela fórmula geral (I) contida no cérebro do ani- mal modelo é examinada. Como um resultado, quando uma diferença signi- ficante (por exemplo, um sítio de distribuição reduzido, uma quantidade di- minuída, etc.) for detectada quando comparada com um controle (modelo animal não recebendo a substância teste), a substância teste poderá ser um agente terapêutico candidato para uma doença relacionada à amilóide. Além disso, após uma substância teste ser administrada a um animal modelo com um "pródromo de uma doença" tal como dano cognitivo brando, a composi- ção para diagnóstico de uma doença relacionada à amilóide da presente invenção é administrada ao animal modelo, e em seguida a distribuição ou a quantidade do composto representado pela fórmula geral (I) contida no cé- rebro do animal modelo é examinada. Como um resultado, quando uma dife- rença significante (por exemplo, uma redução ou um aumento reduzido de um sítio de distribuição, uma diminuição ou um aumento reduzido em quan- tidade, etc.) for detectada quando comparada com um controle, a substância teste poderá ser um agente profilático candidato para uma doença relacio- nada à amilóide.
Além disso, a composição para diagnóstico de uma doença rela- cionada à amilóide da presente invenção pode também ser utilizada para avaliar um agente terapêutico ou profilático para uma doença relacionada à amilóide cujo efeito já foi confirmado. Especificamente, após o agente tera- pêutico ou profilático para a doença ser administrado a um animal modelo de uma doença relacionada à amilóide, a composição para diagnóstico de uma doença relacionada à amilóide da presente invenção é administrada ao ani- mal modelo, e em seguida a distribuição ou a quantidade do composto re- presentado pela fórmula geral (I) contida no cérebro do animal modelo é e- xaminada. Isto permite o agente terapêutico ou profilático mencionado acima (especificamente, dosagem eficaz, método de administração eficaz etc. des- te) ser avaliado.
Exemplos
A seguir, a presente invenção será explicada mais especifica- mente com referência aos Exemplos e aos Exemplos de Referência.
Exemplo 1
Métodos experimentais
Reaqentes e instrumento
Proteína amilóide β (Humana, 1 - 42) [forma de TFA] foi adquiri- da de Peptide Institute, Inc., e reagentes de grau especial foram utilizados como outros reagentes. 1H-NMR foi medida utilizando-se Varian Gemini 300 e tetrametilsilano como uma substância padrão interna.
(1) Síntese de derivados de calcona contendo anel heterocíclico aromático
Síntese de (E)-3-(4-(dimetilamino)fenil)-1 -(5-iodotiofen-2-iQprop-2-en-1 -ona (1)
256 mg (1 mmol) de 5-acetil-2-iodotiofeno e 149 mg (1 mmol) de 4-dimetilaminobenzaldeído foram dissolvidos em etanol (20 mL), e hidróxido de potássio aquoso a 10% (30 mL) foi adicionado à mistura com resfriamen- to. Uma reação foi deixada em temperatura ambiente durante 6 h, seguida pela adição de 30 mL de água purificada, e os cristais precipitados foram filtrados por sucção. Os cristais foram lavados com etanol aquoso a 50% e secados para obter o composto alvo 1. Produção de 238 mg (taxa de produ- ção de 62,1%). 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 3,06 (s, 6H), 6,69 (d, J = 9,0 Hz, 2Η), 7,11 (d, J = 15,6 Hz, 1H), 7,32 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 7,45 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 7,54 (d, J = 9,0 Hz1 2H), 7,81 (d, J = 15,3 Hz, 2H). Síntese de (E)-1 -(6-bromopiridin-3-in-3-(4-(dimetilamino)fenil)prop-2-en-1 - ona (2)
200 mg (1 mmol) de 5-acetil-2-bromopiridina e 149 mg (1 mmol) de 4-dimetilaminobenzaldeído foram dissolvidos em etanol (15 mL), e a mis- tura foi adicionada a hidróxido de potássio aquoso a 10% (10 mL) com res- friamento. A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 1 h, os cristais de precipitado foram coletados por filtração por sucção, lavados com etanol, e secados para obter o composto alvo 2. Produção de 248 mg (taxa de produção 74,9%). 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 3,06 (s, 6H), 6,78 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 7,46 (d, J = 15,3 Hz, 1H), 7,65 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 7,77 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,82 (d, J = 15,0 Hz, 1H), 8,29 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 8,98 (d, J = 2,7 Hz, 1H).
Síntese de (E)-1 -(6-tributilestanil-3-in-3-(4-(dimetilamino)feninprop-2-en-1 - ona (3)
A uma solução do Composto 2 (100 mg, 0,30 mmol) em dioxano seco (5 mL) foram adicionados bis(tributilestanho) (1 mL), tetra- cis(trifenilfosfina)paládio (100 mg), e trietilamina (5 mL), e a mistura foi aque- cida ao refluxo durante 8 h. O solvente de reação foi evaporado sob pressão reduzida, e o resíduo foi submetido à cromatografia de camada fina prepara- tiva utilizando-se acetato de etila/hexano (1/4) como um solvente de eluição para obter o composto alvo 3. Produção de 22 mg (taxa de produção de 13,5%).
Síntese de (E)-3-(4-(dimetilamino)fenil)-1 -(6-iodopiridin-3-iQprop-2-en-1 -ona (4)
A uma solução do Composto 3 (15 mg, 0,03 mmol) em acetato de etila (5 mL) foi adicionada uma solução de iodo em acetato de etila (1 mL, 10 mg/mL) em temperatura ambiente. Uma reação foi deixada em tempera- tura ambiente durante 30 min, e em seguida sulfeto de hidrogênio de sódio aquoso saturado (15 mL) foi adicionado para terminar a reação. A camada de clorofórmio foi separada e secada com sulfato de sódio, o solvente foi evaporado sob pressão reduzida, e em seguida o resíduo foi submetido à cromatografia de camada fina preparativa utilizando-se acetato de eti- la/hexano (1/3) como um solvente de eluição para obter o composto alvo 4. Produção de 7 mg (taxa de produção de 66,8%).
(2) Experimento de inibição de ligação in-vitro utilizando-se agregado de Αβ (1 - 42)
O agregado de Αβ (1 - 42) foi dissolvido em um tampão conten- do 10 mM de fosfato de sódio e 1 mM de EDTA (pH 7,4) em uma concentra- ção de 0,5 mg/mL, e a mistura foi incubada a 37DC durante 36 a 42 h. O experimento de inibição de ligação foi realizado utilizando-se tubos de vidro de borossilicato de 12 □ 75 mm. 850 μL de solução de etanol a 10%, 50 μΙ_ de uma substância de ligação a Αβ ([125l]4-dimetilamino-4'-iodocalcona) (eta- nol aquoso a 10%), 50 μL (57 nM) de solução de agregado de Αβ (1 - 42), e 50 μL de etanol aquoso a 10% cada qual contendo os Compostos 1 e 4 em várias concentrações (0,003 a 781 nM) foram misturados, e a mistura foi deixada descansar em temperatura ambiente durante 3 h. Além disso, liga- ção- não específica foi determinada utilizando-se 4-dimetilamino-4'- iodocalcona (400 nM), um composto não radioativo. Derivados de calcona ligados e derivados de calcona não ligados ao agregado de Αβ foram sepa- rados com uma colheitadeira de célula Brandel M-24R utilizando-se um filtro de Whatman GF/B. As radioatividades de substâncias restantes no filtro a- pós filtragem foram medidas com uma registradora □. A concentração inibi- tória de 50% foi calculada utilizando-se Graph Pad Prism (graph pad softwa- re), e a constante de inibição (valor de Kl) foi calculada pela equação de Cheng-Prusoff, Ki = IC50/(1+[L]/Kd). Nesta equação, a concentração de [125l]4-dimetilamino-4'-iodocalcona utilizada no experimento foi utilizada co- mo [L], e a constante de dissociação de [125I ]4-dimetilamino-4'-iodocalcona contra o agregado de Αβ (1 - 42) foi utilizada como Kd.
Resultados experimentais
(1) Síntese de derivados de calcona contendo anel heterocíclico aromático
Figura 1 mostra síntese de séries de reação de derivados de calcona contendo um anel heterocíclico aromático. O esqueleto de calcona foi formado por uma reação de condensação de aldol de acetofenona e alde- ído correspondendo a cada composto. Composto 2 foi convertido em um composto de tributilestanho por uma reação com bis(tributilestanho) utilizan- do-se paládio como um catalisador. Composto 3, um composto de tributiles- tanho, foi convertido no Composto 4 por uma reação com iodo.
(2) Experimento de ligação de derivados de calcona contendo anel heterocí- clico aromático ao agregado de Αβ (1 - 42)
Figura 2 mostra curvas de inibição de ligação quando os Com- postos 1 e 4 foram reagidos na presença de [125l]4-dimetilamino-4'- iodocalcona e do agregado de Αβ. Ambos os compostos 1 e 4 mostraram uma atividade de inibição dependente de concentração, e sua propriedade de ligação ao agregado de Αβ foi confirmada. Um experimento similar foi repetido três vezes. A Tabela 12 mostra as concentrações inibitórias de 50% médias e desvios padrões. Ambos os Compostos 1 e 4 mostraram uma pro- priedade de ligação forte a um agregado de amilóide. Em particular, o Com- posto 1 mostrou uma propriedade de ligação muito forte ao agregado de amilóide. Tais resultados sugerem que ambos destes compostos podem su- ficientemente funcionar como uma sonda de imageamento de amilóide β.
Tabela 12
Constantes de inibição (Ki) para ligação dos Compostos 1 e 4 ao agregado de Αβ (1-42);_
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Reaqentes e instrumento
Como um iodo-125 (125I) radioativo, lodo-125 (3,7 GBq/mL) fa- bricado por MP Biomedicals, Inc. foi utilizado. HPLC de fase reversa foi rea- lizada em uma taxa de fluxo de 1,0 mUmin utilizando-se uma coluna Cos- mosil 5C-i8-AR-II (4,6 □ 150 mm) fabricada por Nacalai Tesque Inc. e água ultrapura:acetonitrilo = 3:7 como um solvente de eluição. 1HNMR foi avaliado utilizando-se Varian Gemini 300 e tetrametilsilano como uma substância pa- drão interna. Espectrometria de massa foi realizada utilizando-se JEOL IMS- DX300. TLC preparativa foi realizada utilizando-se 12 placas de PLC de 20E320 cm-Sílica gel 60 F254, 2 mm fabricadas por MERCK. Proteína amilói- de β (Humana, 1-42) foi adquirida de Peptide Institute1 Inc., e reagentes de grau especial foram utilizados como outros reagentes.
(1) Síntese de derivados de calcona
Síntese de 4-bromo-4'-nitrocalcona (1)
4-Nitroacetofenona (1,67 g, 10,1 mmoles) e 4-bromobenzaldeído (1,86 g, 10,0 mmoles) foram dissolvidos em etanol (10 mL), e hidróxido de potássio aquoso a 10% (6 mL) foi adicionado gota a gota com agitação. A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 30 min, em seguida os precipitados foram coletados por filtração e lavados com etanol resfriado pa- ra obter o Composto 1. Produção de 1,98 g (taxa de produção de 59,4%). 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,48 (d, J = 15,6 Hz, 1H), 7,52 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,59 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,79 (d, J = 15,6 Hz, 1H), 8,15 (d, J = 9 Hz, 2H), 8,36 (d, J = 9 Hz, 2H).
Síntese de 4-bromo-4'-aminocalcona (2)
Composto 1 (372 mg, 1,12 mmol) foi suspenso em etanol (5 mL), cloreto de estanho(ll) (1,05 g, 5,55 mmoles) foi lentamente adicionado com agitação, e a mistura foi aquecida ao refluxo durante 1 h. O solvente foi eva- porado sob pressão reduzida, seguida pela adição de 1 N de hidróxido de sódio aquoso, e a mistura foi extraída com acetato de etila. A mistura foi se- cada com sulfato de sódio anidroso, e em seguida o solvente foi evaporado sob pressão reduzida para obter o Composto 2. Produção de 190 mg (taxa de produção de 56,1%). 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 4,19 (s, 2H), 6,70 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,47 - 7,55 (m, 5H), 7,71 (d, J = 15,6 Hz1 1H), 7,93 (d, J = 8,7 Hz, 2H).
Síntese de 4-tributilestanil-4'-aminocalcona (3)
Composto 2 (200 mg, 0,66 mmol) foi dissolvido em 1,4-dioxano (10 mL), seguido pela adição de bis(tributilestanho) (0,4 mL), te- tra(trifenilfosfina)paládio (35 mg, 0,030 mmol), e trietilamina (6 mL), e a mis- tura foi aquecida ao refiuxo durante 8 h. O solvente foi evaporado sob pres- são reduzida, e o resíduo foi submetido à cromatografia de coluna de sílica gel utilizando-se acetato de etila/hexano (2/5) como um solvente de eluição para obter o Composto 3. Produção de 165 mg (taxa de produção de 48,7%). 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 0,87 - 1,52 (m, 27H), 4,23 (s, 2H), 6,68 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,50 - 7,58 (m, 5H), 7,76 (d, 15,3 Hz, 1H), 7,92 (d, J = 8,4 Hz, 2H). MS m/z 513 (MH+).
Síntese de 4-iodo-4'-aminocalcona (4)
Composto 3 (90 mg, 0,18 mmol) foi dissolvido em clorofórmio (5 mL), seguido pela adição de uma solução de iodo em clorofórmio (2 mL, 0,25 M), e a mistura foi agitada em temperatura ambiente. Após 20 min de reação, sulfeto de sódio aquoso saturado foi adicionado para terminar a rea- ção. A camada de clorofórmio foi separada e secada com sulfato de sódio anidroso, em seguida o solvente foi evaporado sob pressão reduzida, e o resíduo foi purificado por TLC preparativa utilizando-se acetato de eti- la/hexano (1/1) como um solvente de desenvolvimento para obter o Compos- to 4. Produção de 39 mg (taxa de produção de 63,6%). 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 4,17 (s, 2H), 6,70 (d, 8,4 Hz, 2H), 7,36 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,54 (d, J = 15,6 Hz, 1H), 7,69 (d, J = 15,6 Hz, 1H), 7,74 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,92 (d, J = 8,4 Hz1 2H). MS m/z 349 (M+).
Síntese de 4-bromo-4'-metilaminocalcona (5)
Composto 2 (230 mg, 0,76 mmol) foi dissolvido em DMSO (5 mL), seguido pela adição de carbonato de potássio (526 mg, 3,81 mmoles) e iodeto de metila (0,2 mL), e a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 5 h. Água purificada (50 mL) foi adicionada, a mistura foi extraída com acetato de etila (50 mL) e secada com sulfato de sódio anidroso, e em seguida o solvente foi evaporado sob pressão reduzida. O resíduo foi sub- metido à cromatografia de coluna de sílica gel utilizando-se acetato de eti- la/hexano (1/3) como um solvente de eluição para obter o Composto 5. Pro- dução de 78 mg (taxa de produção de 32,4%). 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 2,89 - 2,94 (m, 3H), 4,36 (s, 1H), 6,61 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,50 - 7,57 (m, 3H), 7,70 (d, J = 15,6 Hz, 1H), 7,84 (d, J = 8,4 Hz1 2H), 7,96 (d, J = 8,7 Hz, 2Η).
Síntese de 4-tributilestanil-4'-metilaminocalcona (6)
Composto 5 (110 mg, 0,35 mmol) foi dissolvido em 1,4-dioxano (9 mL), seguido pela adição de bis(tributilestanho) (0,2 mL), te- tra(trifenilfosfina)paládio (16 mg, 0,014 mmol), e trietilamina (5 mL), e a mis- tura foi aquecida ao refluxo durante 6 h. O solvente de reação foi evaporado sob pressão reduzida, e o resíduo foi submetido à cromatografia de coluna de sílica gel utilizando-se acetato de etila/hexano (2/7) como um solvente de eluição para obter o Composto 6. Produção de 70 mg (taxa de produção de 38,2%). 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 0,87 - 1,59 (m, 27H), 2,93 (d, J = 5,1 Hz, 3H), 4,31 (s, 1H), 6,61 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,50 - 7,60 (m, 5H), 7,77 (d, J = 15,6 Hz, 1H), 7,97 (d, J = 9 Hz, 2H). MS m/z 527 (MH+).
Síntese de 4-iodo-4'-metilaminocalcona (7)
Composto 6 (50 mg, 0,095 mmol) foi dissolvido em clorofórmio (5 mL), seguido pela adição de uma solução de iodo em clorofórmio (1 mL, 0,25 M), e a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 15 min. Sulfeto de sódio aquoso saturado foi adicionado para terminar a reação, a camada de clorofórmio foi separada e secada com sulfato de sódio anidroso, e em seguida o solvente foi evaporado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por TLC preparativa utilizando-se acetato de etila/hexano (2/3) como um solvente de desenvolvimento para obter o Composto 7. Produção de 16 mg (taxa de produção de 46,7%). 1H NMR (300 MHz1 CDCI3) δ 2,93 (d, J = 4,5 Hz, 3H), 4,35 (s, 1H), 6,61 (d, J = 9 Hz, 2H), 7,36 (d, J = 8,4 Hz1 2H), 7,56 (d, J = 15,6 Hz, 1H), 7,68 (d, J = 16,2 Hz, 1H), 7,74 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,96 (d, J = 9 Hz, 2H). MS m/z 363 (M+).
Síntese de 4-bromo-4'-dimetilaminocalcona (8)
Composto 2 (300 mg, 0,99 mmol) e paraformaldeído (315 mg, 10,5 mmol) foram dissolvidos em ácido acético (15 mL), cianoboroidreto de sódio (300 mg, 4,77 mmoles) foi lentamente adicionado, e a mistura foi agi- tada em temperatura ambiente durante 4 h. 1 N de hidróxido de sódio aquo- so foi adicionado, a mistura foi extraída com clorofórmio e secada com sulfa- to de sódio anidroso, e em seguida o solvente foi evaporado sob pressão reduzida. O resíduo foi submetido à cromatografia de coluna de sílica gel utilizando-se acetato de etila/hexano (1/4) como um solvente de eluição para obter o Composto 8. Produção de 150 mg (taxa de produção de 45,7%). 1H NMR (300 MHz1 CDCI3) δ 3,09 (s, 6H), 6,71 (d, J = 9 Hz, 2H), 7,36 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,59 (d, J = 15,3 Hz, 1H), 7,69 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 7,74 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 8,00 (d, J = 9 Hz, 2H). MS m/z 377 (M+).
Síntese de 4-tributilestanil-4'-dimetilaminocalcona (9)
Composto 8 (70 mg, 0,21 mmol) foi dissolvido em 1,4-dioxano (5 mL), seguido pela adição de bis(tributilestanho) (0,2 mL), te- tra(trifenilfosfina)paládio (10 mg, 0,009 mmol), e trietilamina (2 mL), e a mis- tura foi aquecida ao refluxo durante 10 h. O solvente de reação foi evapora- do sob pressão reduzida, e o resíduo foi purificado por TLC preparativa utili- zando-se acetato de etila/hexano (1/3) como um solvente de desenvolvimen- to para obter o Composto 9. Produção de 36 mg (taxa de produção de 31,4 %). 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 0,87 - 1,66 (m, 27H), 3,09 (s, 6H), 6,71 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,34 - 7,62 (m, 5H), 7,77 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 8,01 (d, J = 9 Hz, 2H). MS m/z 541 (MH+).
Síntese de 4-iodo-4'-dimetilaminocalcona (10)
Composto 9 (48 mg, 0,088 mmol) foi dissolvido em clorofórmio (3 mL), seguido pela adição de uma solução de iodo em clorofórmio (0,8 mL, 0,25 M), e a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 20 min. Sulfeto de sódio aquoso saturado foi adicionado para terminar a reação, a camada de clorofórmio foi separada e secada com sulfato de sódio anidroso, e em seguida o solvente foi evaporado sob pressão reduzida. Além disso, o resíduo foi lavado com hexano para obter o Composto 10. Produção de 11 mg (taxa de produção de 32,8%). 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 3,09 (s, 6H), 6,71 (d, J = 9 Hz, 2H), 7,36 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,56 (d, J = 15,6 Hz, 1H), 7,68 (d, J = 16,2 Hz, 1H), 7,74 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7, 96 (d, J = 9 Hz, 2H). MS m/z 363 (M+).
Síntese de 1-(5-iodo-2-tienil)-3-(4-nitrofenil)-prop-2-en-1-ona (11)
2-Acetil-5-iodotiofeno (486 mg, 1,93 mmol) e 4-nitrobenzaldeído (296 mg, 1,96 mmol) foram dissolvidos em etanol (10 mL), e hidróxido de potássio aquoso a 10% (6 mL) foi adicionado gota a gota com agitação. A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 30 min, e os precipita- dos foram coletados por filtração e lavados com etanol a 50% para obter o Composto 11. Produção de 625 mg (taxa de produção de 84,1%). 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,38 - 7,43 (m, 2H), 7,51 (d, J = 4,2 Hz, 1H), 7,78 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,84 (d, J = 15,6 Hz, 1H), 8,29 (d, J = 9 Hz, 2H).
Síntese de 1-(5-iodo-2-tienil)-3-(4-aminofenil)-prop-2-en-1-ona (12)
Composto 11 (625 mg, 1,62 mmol) foi suspenso em etanol (10 mL), cloreto de estanho(ll) (1,55 g, 8,17 mmoles) foi lentamente adicionado com agitação, e a mistura foi aquecida ao refluxo durante 1 h. O solvente de reação foi evaporado sob pressão reduzida, seguido pela adição de 1 N de hidróxido aquoso de sódio, e a mistura foi extraída com acetato de etila. A mistura foi secada com sulfato de sódio anidroso, e em seguida o solvente foi evaporado sob pressão reduzida para obter o Composto 12. Produção cru de 586 mg. 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 4,03 (s, 2H), 6,68 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,13 (d, J = 15,3 Hz, 1H), 7,33 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 7,44 - 7,49 (m, 3H), 7,78 (d, J = 15,3 Hz, 2H). MS m/z 355 (M+).
Síntese de 1-(5-iodo-2-tienil)-3-(4-metilaminofenil)-prop-2-en-1-ona (13)
Composto 12 (190 mg, 0,54 mmol) foi dissolvido em DMSO (6 mL), seguido pela adição de carbonato de potássio (374 mg, 2,71 mmoles) e iodeto de metila (0,1 mL), e a mistura foi agitada durante 20 min com agita- ção a 50DC. Água purificada (50 mL) foi adicionada, e a mistura foi extraída com acetato de etila (50 mL) e secada com sulfato de sódio anidroso, e em seguida o solvente foi evaporado sob pressão reduzida. O resíduo foi sub- metido à cromatografia de coluna de sílica gel utilizando-se acetato de eti- la/hexano (1/4) como um solvente de eluição para obter o Composto 13. Produção de 45 mg (taxa de produção de 22,8%). 1H NMR (300 MHz1 CD- Cl3) δ 2,90 (s, 3H), 4,22 (s, 1H), 6,59 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,11 (d, J = 15,3 Hz, 1H), 7,32 (d, J = 4,2 Hz, 1H), 7,44 (d, J = 3,9 Hz1 1H), 7,50 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,80 (d, J = 15,3 Hz1 1H). MS m/z 369 (M+).
Síntese de 1-(5-iodo-2-tienil)-3-(4-dimetilaminofenil)-prop-2-en-1-ona (14)
2-Acetil-5-iodotiofeno (260 mg, 1,03 mmol) e 4- dimetilaminobenzaldeído (159 mg, 1,07 mmol) foram dissolvidos em etanol (15 mL), e hidróxido de potássio aquoso a 10% (15 mL) foi adicionado gota a gota com agitação. A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 3 h, e em seguida os precipitados foram coletados por filtração e lavados com etanol a 50% para obter o Composto 14. Produção de 274 mg (taxa de pro- dução de 69,3%). 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 3,05 (s, 6H), 6,79 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,11 (d, J = 15,3 Hz, 1H), 7,32 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 7,45 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 7,54 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,81 (d, J = 15 Hz, 1H). MS m/z 383 (M+).
Síntese de 1-(5-bromo-2-tienil)-3-(4-nitrofenil)-prop-2-en-1-ona (15)
2-Acetil-5-bromotiofeno (623 mg, 3,04 mmoles) e A- nitrobenzaldeído (464 mg, 3,07 mmoles) foram dissolvidos em etanol (25 mL), e hidróxido de potássio aquoso a 10% (3 mL) foi adicionado gota a gota com agitação. A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 30 min, e os precipitados foram coletados por filtração e lavados com etanol a 50% para obter o Composto 15. Produção de 686 mg (taxa de produção de 66,8%). 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,19 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 7,48 (d, J = 15,6 Hz1 1H), 7,63 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 7,78 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,85 (d, J = 15,6 Hz, 1H), 8,29 (d, J = 8,7 Hz, 2H).
Síntese de 1-(5-bromo-2-tienil)-3-(4-aminofenil)-prop-2-en-1-ona (16)
Composto 15 (678 mg, 2,20 mmoles) foi suspenso em etanol (20 mL), cloreto de estanho(ll) (2,04 g, 10,8 mmoles) foi lentamente adicionado com agitação, e a mistura foi aquecida ao refluxo durante 1 h. O solvente de reação foi evaporado sob pressão reduzida, seguido pela adição de 1 N de hidróxido de sódio aquoso, e a mistura foi extraída com acetato de etila. A mistura foi secada com sulfato de sódio anidroso, e em seguida o solvente foi evaporado sob pressão reduzida para obter o Composto 16. Produção cru de 626 mg. 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 4,03 (s, 2H), 6,68 (d, J = 9 Hz, 2H), 7,11 - 7,16 (m, 2H), 7,47 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,56 (d, J = 3,9 Hz1 1H), 7,78 (d, J = 15,3 Hz, 1H). MS m/z 309 (MH+).
Síntese de 1-(5-bromo-2-tieniQ-3-(4-metilaminofenil)-prop-2-en-1-ona (17)
Composto 16 (212 mg, 0,69 mmol) foi dissolvido em DMSO (6 mL), seguido pela adição de carbonato de potássio (483 mg, 3,49 mmoles) e iodeto de metila (0,1 mL), e a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 2 h. Água purificada (100 mL) foi adicionada, a mistura foi extraída com acetato de etila (100 mL) e secada com sulfato de sódio anidroso, e em seguida o solvente foi evaporado sob pressão reduzida. O resíduo foi sub- metido à cromatografia de coluna de sílica gel utilizando-se acetato de eti- la/hexano (1/5) como um solvente de eluição para obter o Composto 17. Produção de 40 mg (taxa de produção de 18,0%). 1H NMR (300 MHz, CD- Cl3) δ 2,91 (s, 3H), 4,19 (s, 1H), 6,60 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,09 - 7,14 (m, 2H), 7,50 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,56 (d, J = 4,2 Hz, 1H), 7,80 (d, J = 15,6 Hz1 1H). MS m/z 323 (MH+).
Síntese de 1 -(5-tributilestanil-2-tienil)-3-(4-metilaminofenil)-prop-2-en-1 -ona (18)
Composto 17 (40 mg, 0,12 mmol) foi dissolvido em 1,4-dioxano (5 mL), seguido pela adição de bis(tributilestanho) (0,1 mL), te- tra(trifenilfosfina)paládio (10 mg, 0,009 mmol), e trietilamina (3 mL), e a mis- tura foi aquecida ao refluxo durante 2 h. O solvente de reação foi evaporado sob pressão reduzida, e o resíduo foi purificado por TLC preparativa utilizan- do-se acetato de etila/hexano (1/5) como um solvente de desenvolvimento para obter o Composto 18. Produção de 10 mg (taxa de produção de 15,1%). 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 0,88 - 1,63 (m, 27H), 2,90 (d, J = 5,1 Hz, 3H), 4,14 (s, 1H), 6,60 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,21 - 7,26 (m, 2H), 7,52 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,80 (d, J = 15,6 Hz, 1H), 7,19 (d, J = 3,6 Hz, 1H). MS m/z 533 (MH+).
Síntese de 1-(5-bromo 2-tienil)-3-(4-dimetilaminofenil)-prop-2-en-1-ona (19)
2-Acetil-5-bromotiofeno (416 mg, 2,03 mmoles) e 4- dimetilaminobenzaldeído (318 mg, 2,13 mmoles) foram dissolvidos em eta- nol (5 mL), e hidróxido de potássio aquoso a 10% (5 mL) foi adicionado gota a gota com agitação. A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 3 h, e em seguida os precipitados foram coletados por filtração e lavados com etanol a 50% para obter o Composto 19. Produção de 565 mg (taxa de produção de 82,8%). 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 3,05 (s, 6H), 6,69 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,12 (d, J = 15,3 Hz, 1H), 7,13 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 7,55 - 7,57 (m, 3Η), 7,18 (d, J = 15,3 Hz, 1 Η). MS m/z 337 (MH+).
Síntese de 1 -(5-tributilestanil-2-tienil)-3-(4-dimetilaminofenil)-prop-2-en-1 -ona (20)
Composto 19 (102 mg, 0,30 mmol) foi dissolvido em 1,4-dioxano (8 mL), seguido pela adição de bis(tributilestanho) (0,2 mL), te- tra(trifenilfosfina)paládio (16 mg, 0,014 mmol), e trietilamina (4 mL), e a mis- tura foi aquecida ao refluxo durante 2 h. O solvente de reação foi evaporado sob pressão reduzida, e o resíduo foi submetido à cromatografia de coluna de sílica gel utilizando-se acetato de etila/hexano (1/9) como um solvente de eluição para obter o Composto 20. Produção de 10 mg (taxa de produção de 15,1%). 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 0,88 - 1,63 (m, 27H), 3,04 (s, 6H), 6,70 (d, J = 9 Hz, 2H), 7,21 - 7,27 (m, 2H), 7,55 (d, J = 9 Hz, 2H), 7,81 (d, J = 15,3 Hz, 1H), 7,92 (d, J = 3,6 Hz, 1H). MS m/z 547 (MH+).
Síntese de 4'-iodocalcona (21)
4-lodoacetofenona (247 mg, 1,00 mmol) e benzaldeído (0,11 mL, 1,08 mmol) foram dissolvidos em etanol (5 mL), e hidróxido de potássio a- quoso a 10% (1 mL) foi adicionado gota a gota com agitação. A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 2 h, e em seguida os precipitados foram coletados por filtração e lavados com etanol a 50% para obter o Com- posto 21. Produção de 293 mg (taxa de produção de 87,4%). 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,42 - 7,44 (m, 3H), 7,47 (d, J = 15,6 Hz, 1H), 7,63 - 7,66 (m, 2H), 7,74 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,82 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 7,88 (d, J = 8,7 Hz, 2H). MS m/z 334 (M+).
Síntese de 3-(2-furanil)-1-(4-iodofenil)-prop-2-en-1-ona (22)
4-lodoacetofenona (246 mg, 1,0 mmol) e 2-furaldeído (96 mg, 1,0 mmol) foram dissolvidos em etanol (5 mL), e hidróxido de potássio aquo- so a 10% (5 mL) foi adicionado gota a gota com agitação. A mistura foi agi- tada em temperatura ambiente durante 30 min, e em seguida os precipitados foram coletados por filtração e lavados com etanol a 50% para obter o Com- posto 22. Produção de 212 mg (taxa de produção de 65,4%). 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 6,52 - 6,54 (m, 1H), 6,74 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 7,39 (d, J = 15,0 Hz, 1 H), 7,54 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 7,60 (d, J = 15,6 Hz, 1H), 7,74 (d, J = 8,4 Hz1 2Η), 7,86 (d, J = 8,4 Hz, 2Η). MS m/z 324 (M+). Síntese de 3-(3-furanil)-1-(4-iodofenil)-prop-2-en-1-ona (23)
4-lodoacetofenona (246 mg, 1,0 mmol) e 3-furaldeído (96 mg, 1,0 mmol) foram dissolvidos em etanol (5 mL), e hidróxido de potássio aquo- so a 10% (1 mL) foi adicionado gota a gota com agitação. A mistura foi agi- tada em temperatura ambiente durante 30 min, e em seguida os precipitados foram coletados por filtração e lavados com etanol a 50% para obter o Com- posto 23. Produção de 279 mg (taxa de produção de 86,1%). 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 6,70 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 7,17 (d, J = 15,3 Hz1 1H), 7,48 (s, 1H), 7,69 - 7,75 (m, 4H), 7,86 (d, J = 9,0 Hz, 2H). MS m/z 324 (M+).
Síntese de 1-(4-iodofenil)-3-(2-tienil)-prop-2-en-1-ona (24)
4-Iodoacetofenona (500 mg, 2,03 mmoles) e 2- tiofenocarboxialdeído (228 mg, 2,03 mmol) foram dissolvidos em etanol (10 mL), e hidróxido de potássio aquoso a 10% (10 mL) foi adicionado gota a gota com agitação. A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 30 min, e em seguida os precipitados foram coletados por filtração e lavados com etanol a 50% para obter o Composto 24. Produção de 546 mg (taxa de produção de 79,1%). 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,09 - 7,12 (m, 1H), 7,26 (d, J = 15,0 Hz, 1H), 7,38 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 7,44 (d, J = 5,4 Hz, 1H), 7,18 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,87 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,95 (d, J = 15,3 Hz, 1H). MS m/z 340 (M+).
Síntese de 1-(4-iodofenil)-3-(3-tienil)-prop-2-en-1-ona (25)
4-lodoacetofenona (246 mg, 1,00 mmol) e tiofeno-3- carboaldeído (0,1 mL, 1,10 mmol) foram dissolvidos em etanol (3 mL), e hi- dróxido de potássio aquoso a 10% (1 mL) foi adicionado gota a gota com agitação. A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 30 min, e em seguida os precipitados foram coletados por filtração e lavados com eta- nol a 50% para obter o Composto 25. Produção de 295 mg (taxa de produ- ção de 86,7%). 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,26 (d, J = 15,6 Hz, 1H), 7,38 - 7,43 (m, 2H), 7,62 - 7,65 (m, 1H), 7,71 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,80 (d, J = 15,6 Hz, 1H), 7,87 (d, J = 8,4 Hz, 1H). MS m/z 340 (M+). Síntese de 1-í4-iodofenil)-3-(1H-imidazol-2-il)-prop-2-en-1-ona (26) 4-lodoacetofenona (246 mg, 1,00 mmol) e 2- imidazolcarboxialdeído (96 mg, 1,00 mmol) foram dissolvidos em etanol (10 mL), e hidróxido de potássio aquoso a 10% (10 mL) foi adicionado gota a gota com agitação. A mistura foi reagida em temperatura ambiente durante 1 h e em seguida extraída com acetato de etila (50 mL). A mistura foi secada com sulfato de sódio anidroso, em seguida o solvente foi evaporado sob pressão reduzida, e o resíduo foi submetido à cromatografia de sílica gel utilizando-se acetato de etila/hexano (1/1) como um solvente de eluição para obter o Composto 26. Produção de 142 mg (taxa de produção de 43,8%). 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,31 - 7,40 (m, 2H), (s,) 7,64 (d, J = 15,6 Hz, 1H), 7,78 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,82 (d, J = 15,6 Hz1 1H), 7,87 (d, J = 8,4 Hz, 2H). MS m/z 324 (M+).
Síntese de 1-(4-iodofenil)-3-(tiazol-2-il)-prop-2-en-1-ona (27)
4-lodoacetofenona (246 mg, 1,00 mmol) e 2-tiazolcarboxialdeído (113 mg, 1,00 mmol) foram dissolvidos em etanol (5 mL), e hidróxido de po- tássio aquoso a 10% (5 mL) foi adicionado gota a gota com agitação. A mis- tura foi agitada em temperatura ambiente durante 30 min, e em seguida os precipitados foram coletados por filtração e lavados com etanol a 50% para obter o Composto 27. Produção de 210 mg (taxa de produção de 61,6%). 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,52 (d, J = 3,0 Hz, 1H), 7,75 - 7,79 (m, 3H), 7,85 - 7,92 (m, 3H), 7,99 (d, J = 3,6 Hz, 1H). MS m/z 341 (M+).
Síntese de 5-dimetilamino-2-furaldeído (28)
5-Bromo-2-furaldeído (3,00 g, 17,1 mmoles) foi dissolvido em água purificada (6 mL), seguido pela adição de dimetilamina (5,3 mL, 50,9 mmoles), e a mistura foi aquecida ao refluxo durante 40 min. Clorofórmio foi adicionado para extrair um composto alvo na camada de clorofórmio, a ca- mada de clorofórmio foi secada com sulfato de sódio anidroso, e o solvente foi evaporado sob pressão reduzida. O resíduo foi submetido à cromatogra- fia de coluna de sílica gel utilizando-se acetato de etila/hexano (3/2) como um solvente de eluição para obter o Composto 28. Produção de 845 mg (ta- xa de produção de 35,4%). 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 3,07 (s, 6H), 5,24 (s, 1H), 7,19 (s, 1H), 8,97 (s, 1H). Síntese de 2-acetil-5-bromofurano (29)
2-Acetilfurano (2,2 g, 20 mmoles) foi dissolvido em DMF (20 mL), seguido pela adição de N-bromossucinimida (3,91 g, 22 mmoles). A mistura foi reagida em temperatura ambiente durante 30 min e em seguida adiciona- da em água destilada (50 mL), e as camadas foram separadas com acetato de etila (50 mL □ 2). A camada de acetato de etila foi secada com sulfato de sódio anidroso, em seguida o solvente foi evaporado sob pressão reduzida, e o resíduo foi submetido à cromatografia preparativa de pressão média utili- zando-se acetato de etila/hexano (1/15) como um solvente de eluição para obter o Composto 29. Produção de 1,68 g (taxa de produção de 44,5%).
Síntese de 5-dimetilamino-2-tiofenocarboxialdeído (30)
5-Bromo-2-tiofenocarboxialdeído (1 g, 5,23 mmoles) e dimetila- mina (1,64 mL, 15,69 mmoles) foram misturados, seguido pela adição de água purificada (3 mL). A mistura foi reagida a 100DC durante 12 h, e em seguida as camadas foram separadas com clorofórmio (50 mL □ 2) e água purificada (50 mL), a camada de clorofórmio foi secada com sulfato de sódio anidroso, e em seguida o solvente foi evaporado sob pressão reduzida. O resíduo foi submetido à cromatografia preparativa de pressão média utilizan- do-se acetato de etila/hexano (1/1) como um solvente de eluição para obter o Composto 30. Produção de 670 mg (taxa de produção de 82,5%). 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 3,10 (s, 6H), 5,96 (s, 1H), 7,45 (s, 1H), 9,44 (s, 1H).
Síntese de 1-(4-iodofenil)-3-(5-dimetilamino-2-furanil)-prop-2-en-1-ona (31)
4-lodoacetofenona (246 mg, 1,00 mmol) e o Composto 28 (139 mg, 1,00 mmol) foram dissolvidos em etanol (5 mL), seguido pela adição de hidróxido de potássio aquoso a 10% (7,5 mL). A mistura foi reagida em tem- peratura ambiente durante 3 h, em seguida as camadas foram separadas com acetato de etila (50 mL □ 2), e a camada de acetato de etila foi secada com sulfato de sódio anidroso. O solvente foi evaporado sob pressão reduzi- da, e o resíduo foi submetido à cromatografia preparativa de pressão média utilizando-se acetato de etila/hexano (1/2) como um solvente de eluição para obter o Composto 31. Produção de 25 mg (taxa de produção de 6,8%). 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 3,04 (s, 6H), 5,22 (d, J = 3,9 Hz1 1H), 6,80 (d, J = 3,6 Hz1 1 Η), 6,89 (d, J = 15,0 Hz, 1 Η), 7,46 (d, J = 14,7 Hz, 1Η), 7,70 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,81 (d, J = 8,7 Hz1 2H). MS m/z 367 (M+).
Síntese de 1-(5-bromo-2-furanil)-3-(4-dimetilaminofenil)-prop-2-en-1-ona (32)
Composto 29 (500 mg, 2,65 mmoles) e 4- dimetilaminobenzaldeído (394 mg, 2,65 mmol) foram dissolvidos em etanol (5 mL), seguido pela adição de hidróxido de potássio aquoso a 10% (10 mL). A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 1 h, e em seguida os cristais precipitados foram coletados por filtração e lavados com etanol a- quoso a 50% para obter o Composto 32. Produção de 470 mg (taxa de pro- dução de 55,4%). 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 3,04 (s, 6H), 5,22 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 6,80 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 6,89 (d, J = 15,0 Hz, 1H), 7,46 (d, J = 14,7 Hz, 1H), 7,70 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,81 (d, J = 8,7 Hz, 2H). MS m/z 321 (MH+).
Síntese de 3-(5-dimetilamino-2-tienil)-1-(4-iodofenil)-prop-2-en-1-ona (33)
4-lodoacetofenona (246 mg, 1,00 mmol) e o Composto 30 (155 mg, 1,00 mmol) foram dissolvidos em etanol (5 mL), seguido pela adição de hidróxido de potássio aquoso a 10% (7,5 mL). A mistura foi reagida em tem- peratura ambiente durante 3 h, as camadas foram separadas com acetato de etila (50 mL □ 2), e a camada de acetato de etila foi secada com sulfato de sódio anidroso. O solvente foi evaporado sob pressão reduzida, e o resí- duo foi submetido à cromatografia preparativa de pressão média utilizando- se acetato de etila/hexano (1/4) como um solvente de eluição para obter o Composto 33. Produção de 18 mg (taxa de produção de 4,7%). 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 3,04 (s, 6H), 5,22 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 6,80 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 6,89 (d, J = 15,0 Hz, 1H), 7,46 (d, J = 14,7 Hz, 1H), 7,70 (d, J = 8,1 Hz, 2H), 7,81 (d, J = 8,7 Hz, 2H). MS m/z 383 (M+).
Síntese de 1-(5-bromo-2-furin-3-(5-dimetilamino-2-furil)-prop-2-en-1-ona (34)
Composto 29 (100 mg, 0,53 mmol) e o Composto 28 (78 mg, 0,56 mmol) foram dissolvidos em etanol (3 mL), e hidróxido de potássio a- quoso a 10% (1 mL) foi adicionado gota a gota com agitação. A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 40 min, o solvente foi evaporado sob pressão reduzida, seguido pela adição de 1 N de hidróxido de sódio a- quoso, e a mistura foi extraída com acetato de etila. A mistura foi secada com sulfato de sódio anidroso, em seguida o solvente foi evaporado sob pressão reduzida, e o resíduo foi submetido à cromatografia de coluna de sílica gel utilizando-se acetato de etila/hexano (1/4) como um solvente de eluição para obter o Composto 34. Produção de 29 mg (taxa de produção de 17,7%). 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 3,05 (s, 6H), 5,25 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 6,48 (d, J = 3,3 Hz, 1H), 6,78 - 6,83 (m, 2H), 7,14 (d, J = 3,3 Hz, 1H), 7,49 (d, J = 14,7 Hz, 1H). MS m/z 311 (MH+).
Síntese de 1 -(5-bromo-2-furil)-3-(5-dimetilamino-2-tienil)-prop-2-en-1 -ona (35)
Composto 29 (97 mg, 0,51 mmol) e o Composto 30 (75 mg, 0,48 mmol) foram dissolvidos em etanol (1,5 mL), e hidróxido de potássio aquoso a 10% (0,5 mL) foi adicionado gota a gota com agitação. A mistura foi agita- da em temperatura ambiente durante 3 h, em seguida o solvente foi evapo- rado sob pressão reduzida, seguido pela adição de 1 N de hidróxido de só- dio aquoso, e a mistura foi extraída com acetato de etila. A mistura foi seca- da com sulfato de sódio anidroso, em seguida o solvente foi evaporado sob pressão reduzida, e o resíduo foi submetido à cromatografia de coluna de sílica gel utilizando-se acetato de etila/hexano (2/7) como um solvente de eluição para obter o Composto 35. Produção de 18 mg (taxa de produção de 11,4%). 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 3,08 (s, 6H), 5,85 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 6,48 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 6,72 (d, J = 15 Hz1 1H), 7,14 - 7,16 (m, 2H), 7,91 (d, J = 15 Hz, 1H). MS m/z 327 (MH+).
Síntese de 3-(5-dimetilamino-2-furil)-1-(5-iodo-2-tienin-prop-2-en-1-ona (36)
2-Acetil-5-iodotiofeno (123 mg, 0,49 mmol) e o Composto 28 (71 mg, 0,51 mmol) foram dissolvidos em etanol (5 mL), e hidróxido de potássio aquoso a 10% (2 mL) foi adicionado gota a gota com agitação. A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 90 min, em seguida o solvente foi evaporado sob pressão reduzida, seguido pela adição de 1 N de hidróxido de sódio aquoso, e a mistura foi extraída com acetato de etila. A mistura foi secada com sulfato de sódio anidroso, em seguida o solvente foi evaporado sob pressão reduzida, e o resíduo foi submetido à cromatografia de coluna de sílica gel utilizando-se acetato de etila/hexano (1/3) como um solvente de eluição para obter o Composto 36. Produção de 21 mg (taxa de produção de 11,5%). 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 3,04 (s, 6H), 5,22 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 6,73 (d, J = 14,4 Hz, 1H), 6,79 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 7,29 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 7,50 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 7,45 (d, J = 14,7 Hz, 1H). MS m/z 373 (M+).
Síntese de 3-(5-dimetilamino-2-tienil)-1-(5-iodo-2-tienil)-prop-2-en-1-ona (37)
2-Acetil-5-iodotiofeno (123 mg, 0,49 mmol) e o Composto 30 (76 mg, 0,49 mmol) foram dissolvidos em etanol (3 mL), e hidróxido de potássio aquoso a 10% (1 mL) foi adicionado gota a gota com agitação. A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 3 h, em seguida o solvente foi evaporado sob pressão reduzida, seguido pela adição de 1 N de hidróxido de sódio aquoso, e a mistura foi extraída com acetato de etila. A mistura foi secada com sulfato de sódio anidroso, em seguida o solvente foi evaporado sob pressão reduzida, e o resíduo foi submetido à cromatografia de coluna de sílica gel utilizando-se acetato de etila/hexano (1/4) como um solvente de eluição para obter o Composto 37. Produção de 15 mg (taxa de produção de 7,9%). 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 3,07 (s, 6H), 5,85 (d, J = 4,2 Hz, 1H), 6,63 (d, J = 14,7 Hz, 1H), 7,15 (d, J = 4,5 Hz, 1H), 7,29 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 7,38 (d, J = 4,2 Hz, 1H), 7,87 (d, J = 14,7 Hz, 1H). MS m/z 389 (M+).
Síntese de 2,4-dinitro-4'-iodocalcona (38)
4-lodoacetofenona (246 mg, 1,00 mmol) e 2,4-dinitrobenzaldeído (202 mg, 1,03 mmol) foram dissolvidos em etanol (5 mL), e hidróxido de po- tássio aquoso a 10% (1 mL) foi adicionado gota a gota com agitação. A mis- tura foi agitada em temperatura ambiente durante 6 h, e em seguida os pre- cipitados foram coletados por filtração e lavados com etanol resfriado para obter o Composto 38. Produção de 232 mg (taxa de produção de 54,7%). 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,37 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 7,74 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,90 - 7,96 (m, 3H), 8,14 (d, J = 16,2 Hz, 1H), 8,53 (d, d, J1 = 8,4 Hz, J2 = 2,1 Hz, 1H), 8,95 (d, J = 2,4 Hz, 1H).
Síntese de 2.4-diamino-4'-iodocalcona (39)
Composto 38 (132 mg, 0,31 mmol) foi suspenso em etanol (5 mL), cloreto de estanho(ll) (603 mg, 3,18 mmoles) foi lentamente adicionado com agitação, e a mistura foi aquecida ao refluxo durante 3 h. O solvente foi evaporado sob pressão reduzida, seguido pela adição de 1 N de hidróxido de sódio aquoso, e a mistura foi extraída com acetato de etila. A mistura foi secada com sulfato de sódio anidroso, em seguida o solvente foi evaporado sob pressão reduzida, e o resíduo foi submetido à cromatografia de coluna de sílica gel utilizando-se acetato de etila como um solvente de eluição para obter o Composto 39. Produção de 39 mg (taxa de produção de 34,4%). 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 4,36 (s, 4H), 7,03 (d, d, J1 = 8,7 Hz, J2 = 2,4 Hz, 1H), 7,18 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,59 - 7,67 (m, 2H), 7,72 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,85 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,95 (m, 1H).
Síntese de 4-hidróxi-4'-iodo-3-metoxicalcona (40)
4-lodoacetofenona (246 mg, 1,0 mmol) e vanilina (152 mg, 1,0 mmol) foram dissolvidos em etanol (10 mL), e hidróxido de potássio aquoso a 10% (5 mL) foi adicionado gota a gota com agitação. A mistura foi reagida em temperatura ambiente durante 3 h e aquecida ao refluxo durante 2 h, em seguida etanol foi evaporado sob pressão reduzida, e a mistura foi extraída com acetato de etila (30 mL). A mistura foi secada com sulfato de sódio ani- droso, o solvente foi evaporado sob pressão reduzida, e o resíduo foi purifi- cado por TLC preparativa utilizando-se acetato de etila/hexano (1/4) como um solvente de desenvolvimento para obter o Composto 40. Produção de 20 mg (taxa de produção de 5,3%). 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 3,05 (s, 3H), 5,68 (s, 1H), 6,88 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,14 (d, d, J1 = 8,1 Hz, J2 = 2,1 Hz, 1H), 7,28 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,33 (d, J = 15,6 Hz, 1H), 7,72 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,74 (d, J = 15,6 Hz, 1H), 7,86 (d, J = 8,7 Hz, 2H). MS m/z 380 (M+).
Síntese de 3-hidróxi-4'-iodo-4-metoxicalcona (41)
4-lodoacetofenona (251 mg, 1,02 mmol) e isovanilina (160 mg, 1,05 mmol) foram dissolvidos em etanol (5 mL), e hidróxido de potássio a- quoso a 10% (3 mL) foi adicionado gota a gota com agitação. A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 2 dias, em seguida o solvente foi evaporado sob pressão reduzida, seguido pela adição de 1 N de hidróxido de sódio aquoso, e a mistura foi extraída com acetato de etila. A mistura foi secada com sulfato de sódio anidroso, em seguida o solvente foi evaporado sob pressão reduzida, e o resíduo foi carregado em uma coluna preparativa de pressão média utilizando-se acetato de etila/hexano (1/5) como um sol- vente de eluição para obter o Composto 41. Produção de 143 mg (taxa de produção de 36,9%). 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 3,95 (s, 3H), 5,68 (s, 1H), 6,88 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,14 (d, d, Ji = 8,1 Hz1 J2 = 2,1 Hz, 1H), 7,28 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 7,33 (d, J = 15,6 Hz, 1H), 7,72 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,74 (d, J = 15,6 Hz, 1H), 7,86 (d, J = 8,7 Hz, 2H). MS m/z 380 (M+).
Síntese de 3.4-dimetóxi-4'-iodocalcona (42)
4-lodoacetofenona (246 mg, 1,0 mmol) e 3,4- dimetoxibenzaldeído (166 mg, 1,0 mmol) foram dissolvidos em etanol (10 mlL), e hidróxido de potássio aquoso a 10% (5 mL) foi adicionado gota a gota com agitação. A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 1 h, e em seguida os cristais precipitados foram coletados por filtração para obter o Composto 42. Produção de 164 mg (taxa de produção de 47,6%). 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 3,95 (s, 3H), 3,96 (s, 3H), 5,68 (s, 1H), 6,91 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,15 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 7,24 (d, d, J1 = 8,1 Hz1 J2 = 2,1 Hz1 1H), 7,32 (d, J = 15,6 Hz, 1H), 7,73 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,77 (d, J = 15,6 Hz, 1H), 7,87 (d, J = 8,4 Hz, 2H). MS m/z 394 (M+).
Síntese de 3-(5-bromo-2-tienil)-1-(4-nitrofenil)-prop-2-en-1-ona (43)
4-Nitroacetofenona (500 mg, 3,03 mmoles) e 5-bromotiofeno-2- carboaldeído (0,33 mL, 3,06 mmol) foram dissolvidos em etanol (20 mL), e hidróxido de potássio aquoso a 10% (6 mL) foi adicionado gota a gota com agitação. A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 3 h, e em seguida os precipitados foram coletados por filtração e lavados com etanol a 50% para obter o Composto 43. Produção de 422 mg (taxa de produção de 41,2%). 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,09 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 7,14 - 7,20 (m, 2H), 7,86 (d, J = 15,6 Hz, 1H), 8,12 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 8,35 (d, J = 8,7 Hz, 2H).
Síntese de 3-(5-bromo-2-tienil)-1-(4-aminofenil)-prop-2-en-1-ona (44)
Composto 43 (410 mg, 1,21 mmol) foi suspenso em etanol (20 mL), cloreto de estanho(ll) (1,14 g, 6,01 mmoles) foi lentamente adicionado com agitação, e a mistura foi aquecida ao refluxo durante 1 h. O solvente foi evaporado sob pressão reduzida, seguido pela adição de 1 N de hidróxido de sódio aquoso, e a mistura foi extraída com acetato de etila. A mistura foi secada com sulfato de sódio anidroso, e em seguida o solvente foi evapora- do sob pressão reduzida para obter o Composto 44. Produção de 453 mg.
1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 4,16 (s, 2H), 6,80 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,03 - 7,07 (m, 2H), 7,23 (d, J = 15,6 Hz1 1H), 7,78 (d, J = 15 Hz, 1H), 7,89 (d, J = 8,7 Hz, 2H). MS m/z 309 (MH+).
Síntese de 3-(5-bromo-2-tienil)-1-(4-metilaminofenil)-prop-2-en-1-ona (45) e 3-(5-bromo-2-tienil)-1 -(4-dimetilaminofenil)-prop-2-en-1 -ona (46)
Composto 44 (857 mg, 2,78 mmoles) foi dissolvido em DMSO (15 mL), seguido pela adição de carbonato de potássio (1,94 g, 14,0 mmo- les) e iodeto de metila (0,5 mL), e a mistura foi agitada em temperatura am- biente durante 9 h. Água purificada foi adicionada, a mistura foi extraída com acetato de etila e secada com sulfato de sódio anidroso, e em seguida o sol- vente foi evaporado sob pressão reduzida. O resíduo foi submetido à croma- tografia de coluna de sílica gel utilizando-se acetato de etila/hexano (1/4) como um solvente de eluição para obter os Compostos 45 e 46. Composto 45: produção de 228 mg (25,4%). 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 2,92 - 2,94 (m, 3H), 4,33 (s, 1H), 6,61 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,02 - 7,06 (m, 2H), 7,26 (d, J =15,3 Hz, 1H), 7,78 (d, J = 15,6 Hz, 1H), 7,93 (d, J = 9 Hz, 2H). MS m/z 323 (MH+). Composto 46: produção de 53 mg (5,7%). 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 3,09 (s, 6H), 6,70 (d, J = 9 Hz, 2H), 7,02 - 7,06 (m, 2H), 7,28 (d, J = 15,3 Hz, 1H), 7,78 (d, J = 15 Hz, 1H), 7,96 (d, J = 9 Hz, 2H). MS m/z 337 (MH+).
(2) Rotulagem de derivados de calcona com 125I
[125l]Nal (1 a 5 mCi) e 1 N de ácido hidroclórico (50 mL) foram adicionados às soluções de vários compostos de tributilestanho (1 mg/mL) em etanol (50 mL), e peróxido de hidrogênio aquoso a 3% (peso/volume) (50 mL) foi adicionado finalmente (Figura 9). A mistura foi deixada descansar durante 2 min em temperatura ambiente, em seguida hidrogenossulfeto de sódio aquoso saturado (100 mL) foi adicionado para terminar a reação, e hidrogenocarbonato de sódio aquoso saturado (100 mL) foi adicionado para neutralizar a solução de reação. A mistura foi extraída com acetato de etila, desidratada passando-se através de uma Pipeta Pasteur contendo sulfato de sódio, e em seguida purificada por HPLC de fase reversa (água:acetonitrilo = 4:6). Compostos não radioativos foram analisados quanto à absorvência a 254 nm por HPLC1 quando preparações, compostos alvos tendo absorvência semelhante foram separados e extraídos com acetato de etila, e acetato de etila foi evaporado sob um fluxo de gás de nitrogênio.
(3) Preparação de agregado de Αβ (1 - 42)
Αβ (1 - 42) foi dissolvido em 10 mM de tampão de fosfato con- tendo 1 mM de EDTA (pH 7,4) em uma concentração de 0,25 mg/mL, e a mistura foi incubada a 37DC durante 42 h para preparar um agregado de Αβ (1 - 42).
(4) Cálculo da constante de inibição (valores de K,) por experimento de inibi- ção de ligação utilizando-se agregado de Αβ (1 - 42)
850 mL de solução de EtOH a 10%, 50 mL de uma solução de [125l]4-dimetilamino-4'-iodocalcona ([125IjCL-NMe2) em etanol a 10%, e 50 mL de uma solução de amostra em várias concentrações (0 a 20 mM) foram misturados, 50 mL de uma solução de agregado de Αβ (1 - 42) foram final- mente adicionados, e a mistura foi deixada descansar em temperatura ambi- ente durante 3 h. Compostos ligados e compostos não ligados ao agregado de Αβ (1 - 42) foram separados com uma colheitadeira de célula Brandel M- 24R utilizando-se um filtro de Whatman GF/B. Radioatividades restantes no filtro após filtragem foram medidas com uma registradora □, e curvas de ini- bição foram criadas utilizando-se Graph Pad Prism 4,0 para calcular cons- tantes de inibição (valores de K,).
(5) Exame de sítio de ligação por experimento de inibição de ligação utili- zando-se agregado de Αβ (1 - 42)
850 mL de solução de EtOH a 10%, 50 mL de solução de [125IJCL-NMe2, 50 mL de uma solução de vermelho congo, tioflavina T, ou composto 14 em várias concentrações (0 a 20 mM) foram misturados, 50 mL de uma solução de agregado de Αβ (1 - 42) foram finalmente adicionados, e a mistura foi deixada descansar em temperatura ambiente durante 3 h. Compostos ligados e compostos não ligados ao agregado de Αβ (1 - 42) fo- ram separados com uma colheitadeira de célula Brandel M-24R utilizando-se um filtro de Whatman GF/B. Radioatividades restantes no filtro após filtra- gem foram medidas com uma registradora □, e curvas de inibição foram cri- adas utilizando-se Graph Pad Prism 4,0 para calcular constantes de inibição.
(6) Experimento de distribuição de radioatividade in-vivo utilizando-se ca- mundonqos normais
Compostos de rotulagem de iodo radioativo foram diluídos com salina fisiológica contendo EtOH a 10%. A cada de quatro ou cinco camun- dongos ddY machos de 5 semanas de idade (20 a 25 g) por grupo, 100 mL de um composto rotulado, [125l]Composto 7, 10, 13, ou 14 (0,2 a 0,4 mCi), foram administrados pela veia caudal. Os animais foram decaptados em 2, 10, 30, ou 60 min, sangue foi coletado, os órgãos principais foram isolados, e em seguida os pesos e radioatividades destes foram medidos. (7) Experimento de manchamento por fluorescência utilizando-se seccão de tecido cerebral de camundonqo modelo de doença de Alzheimer
Como um camundongo modelo de doença de Alzheimer, ca- mundongo transgênico duplo APPAPP/PS1 foi utilizado. O cérebro foi remo- vido, imobilizado com formaldeído a 10%, desidratado com álcool e xileno, e em seguida embutido em parafina. O tecido cerebral embutido em parafina foi cortado em uma secção de 5 μιτι, e a secção foi tratada com xileno, álco- ol, e água e desparafinizada. A secção foi incubada em PBS durante 30 min e em seguida em soluções de vários derivados de calcona (100 μΜ) em eta- nol aquoso a 50% durante 10 min. A secção foi lavada com etanol a 50% e PBS e em seguida examinada com um microscópio de fluorescência (Leica TCS SP2).
Resultados experimentais
Com um foco em placas senis, que são ditas iniciarem desen- volvimento no estágio precoce entre alterações patológicas características para AD, desenvolvimento de uma sonda de imageamento especificamente ligando-se à Αβ, o principal componente de placa senil, foi planejado. Até agora, foi sugerido que derivados de calcona com iodo introduzido na A- po- sição e vários substituintes na A- posição são úteis como sondas de image- amento de amilóide. Conseqüentemente, neste exemplo, derivados com um substituinte introduzido na A- posição e iodo na 4- posição no esqueleto de calcona, derivados com vários anéis heterocíclicos aromáticos introduzidos nos Anéis A e B, e derivados com dois substituintes introduzidos foram sinte- tizados, e a utilidade como sondas de imageamento de amilóide foi avaliada.
(1) Síntese de derivados de calcona
As Figuras 3 a 8 mostram séries de reação de síntese de deri- vados de calcona. O esqueleto de calcona foi formado por uma reação de condensação de aldol. Um grupo nitro de um derivado de calcona foi reduzi- do com cloreto de estanho(ll). Um grupo amino foi monometilado com iodeto de metila sob uma condição básica. Além disso, um grupo amino foi dimeti- lado de acordo com um método previamente relatado. Cada composto de bromo foi convertido em um composto de tributilestanho por uma reação com bis(tributilestanho) utilizando-se paládio como um catalisador. Estes compostos de tributilestanho foram convertidos nos compostos de iodo por uma reação com iodo.
(2) Experimento de rotulagem de 125I
Figura 9 mostra séries de reação de rotulagem de 125I de deriva- dos de calcona. Rotulagem de 125I foi realizada utilizando-se peróxido de hidrogênio como um agente de oxidação, e um composto rotulado por 125I alvo foi obtido por uma reação de permuta de estanho-iodo. Absorvência de compostos não radioativos em 254 nm foi analisada por HPLC de fase re- versa antecipadamente, e compostos tendo tempo de retenção semelhante foram isolados e purificados para obter compostos rotulados por 125I alvo com pureza radioquímica de 98% ou maior.
(3) Exame de afinidade de ligação de derivados de calcona para agregado de Αβ (1 - 42)
Vários derivados sintetizados de calcona foram submetidos a um experimento de inibição de ligação utilizando-se [125IJCL-NMe2 como um Ii- gando radioativo para calcular constantes de inibição [valores de Ki]. A Tabe- la 13 mostra valores de Ki obtidos como um resultado do experimento.
[Tabela 13] Valores de Ki calculados por experimento de inibição;
<table>table see original document page 66</column></row><table>
a: Os valores foram expressos com média ± erro padrão de 3 experimentos;
b: Os valores foram expressos com média ± erro padrão de 6 experimentos.
Foi demonstrado que a afinidade de ligação de derivados de cal- cona para o agregado de Αβ (1 - 42) melhorou dependendo do tipo do subs- tituinte, especificamente, na ordem de NH2 < NHMe < NMe2. Além disso, foi mostrado que os derivados em que um substituinte foi ligado na A- posição (Compostos 4, 7, e 10) tiveram uma afinidade de ligação diminuída para o agregado de Αβ (1 - 42) quando comparada com os derivados em que um substituinte foi ligado na A- posição (CL-NH2, CL-NHMe, e CL-NMe2). Foi mostrado que, entre os derivados em que o mesmo substituinte (-NMe2) foi ligado, o derivado em que tiofeno foi introduzido no Anel B (Composto 14) teve um valor de Ki inferior do que os derivados em que tiofeno foi introduzi- do no Anel A (Compostos 33 e 46), sugerindo que a afinidade de ligação para o agregado de Αβ (1 - 42) é afetada pelos tipos de anéis heterocíclicos aromáticos introduzidos nos Anéis AeB.
Quando a afinidade de ligação para o agregado de Αβ (1 - 42) foi comparada entre os compostos tendo um grupo dimetilamino na cadeia late- ral deste (CL-NMe2, Compostos 14, 31, 32, 33, 34, 35, 36, e 37), a afinidade de ligação para o agregado de Αβ (1 - 42) foi aumentada na ordem de A- dimetilaminofurano (Compostos 31, 34, e 36) < 4-dimetilaminotiofeno (Com- postos 33, 35, e 37), e < 4-dimetilaminobenzeno (CL-NMe2 e Compostos 14 e 32) no Anel A e na ordem de 2-bromofurano (Compostos 32, 34, e 35) < 2- iodotiofeno (14,36,37) ~ 4-iodobenzeno (CL-NMe2 e Compostos 31 e 33) no Anel B.
Entre os derivados em que dois substituintes foram ligados ao Anel A (Compostos 39, 40, 41, e 42), o composto mostrou uma afinidade de ligação elevada para o agregado de Αβ (1 - 42).
Além disso, para examinar o sítio de ligação de derivados de calcona no agregado de Αβ (1 - 42), um experimento de inibição de ligação foi realizado utilizando-se [125IJCL-NMe2 como um ligando radioativo e ver- melho congo, tioflavina T, ou Composto 14 como um inibidor (Figura 10). Como um resultado, o Composto 14 inibiu a ligação de [125IJCL-NMe2 ao a- gregado de Αβ (1 - 42) com Ki de 4 nM, enquanto vermelho congo ou tiofla- vina T não inibiu ligação de [125IJCL-NMe2 ao agregado de Αβ (1 - 42) em uma grande extensão, sugerindo que sítios de ligação de derivados de cal- cona no agregado de Αβ (1 - 42) não se igualam àqueles de vermelho congo e tioflavina T.
(4) Experimento de distribuição de radioatividade in-vivo de derivados de calcona rotulados por 125I em camundonqos normais
Um experimento de distribuição de radioatividade in-vivo de de- rivados de calcona rotulados por 125I foi realizado utilizando-se camundongos normais de 4 ou 5 semanas de idade. A Tabela 14 mostra os resultados de distribuições de radioatividade in-vivo após injeção intravenosa dos [125I]Compostos 7, 10, 13, e 14 nos rabos de camundongos.
[Tabela 14]
Experimento de distribuição de radioatividade in-vivo em camundongos normais <table>table see original document page 68</column></row><table>
Legendas: Sangue; Fígado; Rim; Intestino; Baço; Pulmão; Estôma- go;Pâncreas; Coração; Cérebro
a: Expresso com um percentual da dose. Cada valor é a média de 3 a 5 ca- mundongos. Outros valores foram expressos com um percentual da dose/g.
Todos os [125l]Compostos 7, 10, 13, e 14 mostraram penetração elevada no cérebro em 2 min após administração (2,5 a 3,1% ID/g). Além disso, uma vez que a radioatividade que permaneceu no cérebro em 30 min após a administração foi apenas 0,3 a 0,7% ID/g, estes quatro tipos de deri- vados de calcona foram descobertos mostrar depuração de radioatividade rápida do cérebro normal.
As relações de radioatividade no cérebro em 2 min após admi- nistração para aquela em 30 min após administração foram 17,9% para [125l]CL-NHMe, 13,6% para [125l]CL-NMe2, 22,5% para [125l]Composto 7, 22,7% para [125l]Composto 10, 10,9% para [125l]Composto 13, e 12,6% para [125l]Composto 14, sugerindo que os [125l]Compostos 7 e 10 tiveram depura- ção de radioatividade retardada do cérebro quando comparada com [125IJCL- NHMe e [125l]CL-NMe2. Por outro lado, os [125l]Compostos 13 e 14 mostra- ram depuração de radioatividade rápida quando comparada com CL-NHMe e CL-NMe2 bem como [125l]Compostos 7 e 10. De todos acima, o [125l]Composto 13 mostrou a depuração de radioatividade mais rápida entre os derivados de calcona sintetizados até agora. Entretanto, os [125l]Compostos 13 e 14 mostraram instabilidade no organismo tal como a- cúmulo de radioatividade no estômago, retenção no sangue, e desiodinação no organismo. (5) Experimento de manchamento por fluorescência utilizando-se secção de tecidos cerebrais de camundonqos modelos de doença de Alzheimer
Todos os derivados de calcona mostraram uma propriedade de ligação à amilóide de placa senil e amilóide vascular na secção de tecidos cerebrais de camundongos modelos de doença de Alzheimer (Figura 11).
Ligação do Composto 14 à amilóide é mais forte do que aquela de derivados de calcona contendo flúor, que refletiu os resultados do experimento de ini- bição in-vitro (Tabelas 13 e 17).
[Exemplo de Referência 11
Métodos experimentais
Reaqentes e instrumento
Como um iodo 125 radioativo (125I)1 IODO-125 (74 MBq) fabrica- do por Amersham Biosciences foi utilizado. HPLC de fase reversa foi reali- zada em uma taxa de fluxo de 1,0 mUmin utilizando-se Coluna Cosmosil 5C18-AR (4,6 □ 150 mm) fabricada por Nacalai Tesque Inc. e água ultrapura (A) e acetonitrilo (B) (A:B = 40:60) como um solvente de eluição. 1H-NMR foi medida utilizando-se Varian Gemini 300 e tetrametilsilano como uma subs- tância padrão interna. Espectrometria de massa foi realizada utilizando-se JEOL IMS-DX300. Proteína amilóide β (Humana, 1 - 40) [forma de HCI] e proteína amilóide β (Humana, 1 - 42) [forma de TFA] foram adquiridas de Peptide Institute, Inc., e reagentes de grau especial foram utilizados como outros reagentes.
(1) Síntese de derivados de calcona
Síntese de (E)-1 -(3-bromofenil)-3-(4-hidróxi-3-metoxifenil)prop-2-en-1 -ona
1,99 g (10 mmoles) de 3-bromoacetofenona foi dissolvido em etanol (10 mL), e a mistura foi adicionada ao hidróxido de potássio aquoso a 10% (30 mL) com resfriamento. A mistura foi agitada durante 15 min, 1,52 g (10 mmoles) de o-vanilina foi adicionado como um sólido, e a mistura foi também agitada durante 15 min com resfriamento. A temperatura foi retor- nada para a temperatura ambiente, a mistura foi agitada durante 4 h, em seguida os cristais precipitados foram filtrados por sucção, o filtrado foi eva- porado sob pressão reduzida, e o resíduo foi submetido à cromatografia de sílica gel utilizando-se acetato de etila/hexano (1/4) como um solvente de eluição para obter o composto alvo 5. Produção de 470 mg (taxa de produ- ção de 14,1%). 1H NMR (300 MHz1 CDCI3) δ 8,14 (s, 1H), 8,04 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 7,90 - 7,98 (m, 1H), 7,66 - 7,71 (m, 2H), 7,32 - 7,40 (m, 1H), 7,15 - 7,20 (m, 1H), 6,89 - 6,91 (m, 2H), 6,31 (s, 1H), 3,94 (s, 3H).
Síntese de (E)-1 -(3-(tributilestanil)fenil)-3-(4-hidróxi-3-metoxifenil)prop-2-en- 1-ona
A uma solução do Composto 5 (370 mg, 1,11 mmol) em dioxano (10 mL) foram adicionados bis(tributilestanho) (1 mL), tetra- cis(trifenilfosfina)paládio (75 mg), e trietilamina (5 mL), e a mistura foi aque- cida ao refluxo durante 12 h. O solvente de reação foi evaporado sob pres- são reduzida, e o resíduo foi submetido à cromatografia de coluna de sílica gel utilizando-se acetato de etila/hexano (1/9) como um solvente de eluição para obter o composto alvo 6. Produção de 161 mg (taxa de produção de 26,7%). 1H NMR (300 MHz, CDCI3) 5 8,10 (s, 1H), 8,03 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 7,90 - 7,95 (m, 1H), 7,73 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 7,62 - 7,68 (m, 1H), 7,41 - 7,49 (m, 1H), 7,15 - 7,20 (m, 1H), 6,87 - 6,89 (m, 2H), 6,24 (s, 1H), 3,94 (s, 3H), 0,86- 1,65 (m, 27H).
Síntese de (E)-3-(4-hidróxi-3-metoxifenil)-1 -(3-iodofenil)prop-2-en-1 -ona
Uma solução de iodo em clorofórmio (2 mL, 1,1 mM de solução) foi adicionada a uma solução do Composto 6 (150 mg, 0,28 mmol) em cloro- fórmio (15 mL) em temperatura ambiente. A mistura foi reagida em tempera- tura ambiente durante 30 min, e em seguida sulfeto de hidrogênio de sódio aquoso saturado (20 mL) foi adicionado para terminar a reação. A camada de clorofórmio foi separada e secada com sulfato de sódio, o solvente foi evaporado sob pressão reduzida, e em seguida o resíduo foi submetido à cromatografia de sílica gel utilizando-se acetato de etila/hexano (1/5) como um solvente de eluição para obter o composto alvo 7. Produção de 47 mg (taxa de produção de 44,8%).
Síntese de (E)-1-(4-bromofenil)-3-(4-nitrofenil)prop-2-en-1-ona
1,99 g (10 mmoles) de 4-bromoacetofenona foi dissolvido em etanol (10 mL), e a mistura foi adicionada ao hidróxido de potássio aquoso a 10% (30 mL) com resfriamento. A mistura foi agitada durante 15 min, em seguida 1,51 g (10 mmoles) de 4-nitrobenzaldeído foi adicionado como um sólido, e a mistura foi também agitada durante 15 min com resfriamento. A temperatura foi retornada para a temperatura ambiente, a mistura foi agitada durante 4 h, seguido pela adição de acetato de etila (50 mL), os cristais pre- cipitados foram filtrados por sucção e cuidadosamente lavados com acetato de etila para obter o composto alvo 8. Produção de 1,27 g (taxa de produção de 38,2%).
Síntese de (E)-3-(4-aminofenil)-1-(4-bromofenil)prop-2-en-1-ona
Cloreto de estanho(ll) (5,0 g, 26,4 mmoles) foi lentamente adi- cionado a uma solução do Composto 8 (1,0 g, 3,01 mmoles) em etanol (15 mL) com agitação, e a mistura foi aquecida ao refluxo durante 2 h. Após o término da reação, 1 N de hidróxido de sódio aquoso (150 mL) foi adicionado à solução de reação, e a mistura foi extraída com 50 mL (150 mL) de acetato de etila. A mistura foi secada com sulfato de sódio anidroso, em seguida o solvente foi evaporado sob pressão reduzida, e o resíduo foi submetido à cromatografia de sílica gel utilizando-se acetato de etila/hexano (1/3) como um solvente de eluição para obter o composto alvo 9. Produção de 556 mg (taxa de produção de 61,1%).
Síntese de (E)-1 -(4-bromofeniQ-3-(4-(dimetilamino)fenil)prop-2-en-1 -ona
Cianoboroidreto de sódio (250 mg, 3,98 mmol) foi lentamente adicionado a uma solução do Composto 9 (250 mg, 0,83 mmoles) e para- formaldeído (400 mg, 13,4 mmoles) em ácido acético (15 mL) com agitação, e a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 3 h. Após o término da reação, 50 mL de 1 N de hidróxido de sódio aquoso foi adicionado à solu- ção de reação, e a mistura foi extraída com 50 mL (25 mL □ 2) de clorofór- mio. A mistura foi secada com sulfato de sódio anidroso, em seguida o sol- vente foi evaporado sob pressão reduzida, e o resíduo foi submetido à cro- matografia de sílica gel utilizando-se acetato de etila/hexano (1/12) como um solvente de eluição para obter o composto alvo 10. Produção de 236 mg (ta- xa de produção de 86,1%).
Síntese de (E)-1 -(4-(tributilestanil)fenil)-3-(4-(dimetilamino)fenil)prop-2-en-1 - ona
A uma solução do Composto 10 (220 mg, 0,67 mmol) em dioxa- no (10 mL) foram adicionados bis(tributilestanho) (1 mL), tetra- cis(trifeni!fosfina)paládio (84 mg), e trietilamina (5 mL), e a mistura foi aque- cída ao refluxo durante 2 h. O solvente de reação foi evaporado sob pressão reduzida, e o resíduo foi submetido à cromatografia de coluna de sílica gel utilizando-se acetato de etila/hexano (1/18) como um solvente de eluição para obter o composto alvo 11. Produção de 43 mg (taxa de produção de 11,9%). 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,91 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 7,80 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 7,51 - 7,65 (m, 3H), 7,35 (d, J = 15,9 Hz1 1H), 6,69 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 3,05 (s, 6H), 0,88 - 1,59 (m, 27H).
Síntese de (E)-3-(4-dimetilamino)fenil)-1 -(4-iodofenil)prop-2-en-1 -ona
Uma solução de iodo em clorofórmio (2 mL, 1,1 mM de solução) foi adicionado a uma solução do Composto 11 (4 mg, 0,07 mmol) em cloro- fórmio (5 mL) em temperatura ambiente. A mistura foi reagida em temperatu- ra ambiente durante 30 min, e sulfeto de hidrogênio de sódio aquoso satura- do (20 mL) foi adicionado para terminar a reação. A camada de clorofórmio foi separada e secada com sulfato de sódio, o solvente foi evaporado sob pressão reduzida, e em seguida o resíduo foi submetido à cromatografia de sílica gel utilizando-se acetato de etila/hexano (1/9) como um solvente de eluição para obter o composto alvo 12. Produção de 13 mg (taxa de produ- ção de 46,6%). 1H NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,82 - 7,88 (m, 3H), 7,71 - 7,78 (m, 2H), 7,53 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 7,20 - 7,30 (m, 2H), 6,68 (d, J = 9,0 Hz1 2H), 3,05 (s, 6H).
(2) Experimento de rotulagem de iodo
50 mL de uma solução de um precursor de tributilestanho (1 mg/mL) em etanol, 50 mL de 1 N de ácido hidroclórico, e Na[125l] Composto 1 (1 a 5 μCί) foram colocados em um frasconete de vidro, e 50 μl. (3% (pe- so/volume)) de peróxido de hidrogênio aquoso foram adicionados finalmente.
A mistura foi deixada descansar em temperatura ambiente durante 10 min, e em seguida 100 mL de sulfeto de hidrogênio de sódio aquoso saturado foi adicionado para terminar a reação. A mistura foi neutralizada com hidroge- nocarbonato de sódio aquoso saturado e em seguida extraída com acetato de etila (1 mL □ 2). A mistura foi desidratada passando-se através de uma pipeta Pasteur contendo sulfato de sódio, acetato de etila foi evaporado com nitrogênio, e em seguida o resíduo foi dissolvido em etanol e purificado por HPLC de fase reversa (água:acetonitrilo = 40:60). Compostos não radioati- vos como preparações foram analizados por HPLC quanto à absorvência a 254 nm, compostos alvos tendo absorvência semelhante foram separados, e acetonitrilo foi evaporado. Radioatividades foram medidas, radioatividades específicas dos compostos alvos foram calculadas a partir da radioatividade específica (2200 Ci/mmol) de 125I.
(3) Experimento de ligação in-vitro de derivados de calcona utilizando-se agregado de Αβ
O agregado de Αβ foi dissolvido em um tampão contendo 10 mM de fosfato de sódio e 1 mM de EDTA (pH 7,4) em uma concentração de 0,5 mg/mL, e a mistura foi incubada a 37DC durante 36 a 42 h. O experimento de ligação foi realizado utilizando-se tubos de vidro de borossilicato de 12 □ 75 mm. 900 μl de solução de etanol a 10%, 50 μl (57 nM) de uma solução de agregado de Αβ (1 - 40), e 50 mL de [125l]Composto 7 ou 12 tendo várias concentrações foram misturados, e a mistura foi deixada descansar em tem- peratura ambiente durante 3 h. Derivados de calcona ligados e derivados de calcona não ligados ao agregado de Αβ foram separados com uma colheita- deira de célula Brandel M-24R utilizando-se filtros de Whatman GF/B. As radioatividades de substâncias restantes no filtro utilizadas para filtração fo- ram medidas com uma registradora □.
(4) Experimento de distribuição de radioatividade in-vivo em camundongos
Um composto rotulado por iodo radioativo (Composto 7) foi diluí- do com salina fisiológica contendo etanol a 5 a 10%. Três a cinco camun- dongos ddY machos de 5 semanas de idade (25 a 30 g) por grupo foram decaptados a 2, 10, 30, ou 60 min após administração intravenosa de 100 μl (0,5 a 1 μΟ) do composto rotulado, sangue foi coletado, órgãos foram removidos, e pesos e radioatividades destes foram medidos.
Resultados experimentais (1) Síntese de derivados de calcona
A Figura 12 mostra séries de reação de síntese de derivados de calcona. Para derivados de calcona, o esqueleto de calcona básico foi for- mado por uma reação de condensação de um composto de acetofenona e um composto de aldeído na presença de potássio. O grupo nitro do Compos- to 8 foi reduzido utilizando-se cloreto de estanho(ll) como um agente de re- dução. O grupo amino gerado foi dimetilado por um método usual. Compos- tos de bromo (Compostos 5 e 10) foram convertidos nos compostos de tribu- tilestanho por uma reação com bis(tributilestanho) utilizando-se paládio co- mo um catalisador. Estes compostos de tributilestanho foram convertidos nos Compostos 7 e 12 por uma reação com iodo. É observado que os Com- postos 7 e 12 não são incluídos nos compostos representados pela fórmula geral (I) porque o grupo correspondente ao R1 é um grupo fenila, não um anel heterocíclico aromático.
(2) Experimento de rotulagem de iodo
Como mostrado na Figura 13, rotulagem de iodo radioativo foi realizada por uma reação de permuta de estanho-iodo utilizando-se peróxido de hidrogênio como um agente de oxidação, e um composto rotulado por iodo-125 radioativo alvo foi obtido em uma produção radioquímica de 50 - 80%. Após a reação de rotulagem, o composto foi separado e purificado por HPLC de fase reversa para obter um composto rotulado livre de veículo com uma produção radioquímica de 98% ou maior.
(3) Experimento de ligação in-vitro utilizando-se agregado de AB
Figura 14 mostra os resultados obtidos quando os [125l]Compostos 7 e 12 tendo várias concentrações forem reagidos na pre- sença de ou na ausência do agregado de Αβ, a mistura reacional foi filtrada através de uma colheitora celular, e a radioatividade restante no papel de filtro foi avaliada. Na ausência do agregado de Αβ, a radioatividade restante no papel de filtro foi baixa, porém, após a reação na presença do agregado de Αβ, os [125l]Compostos 7 e 12 mostraram valores expressivamente eleva- dos. Estes resultados revelaram que ambos os [125l]Compostos 7 e 12, deri- vados de calcona, tiveram uma propriedade de ligação ao agregado de Αβ. (4) Experimento de distribuição in-vivo de radioatividade em camundonqos
Tabela 15 mostra os resultados de distribuições de radioativida- de in-vivo após administração de derivados de calcona aos camundongos normais.
[Tabela 15]
Distribuições in-vivo de radioatividade de [125l]Composto 7 após administra- ção intravenosa(a)
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Legenda:Tempo após administração (min); Tecido; Sangue; Fígado; Rins; Intestinos; Baço; Coração; Cérebro;
(a) Expressa com porcentagens da dose/g; Cada valor é o valor médio de 3 a 5 camundongos; O valor em parênteses é o desvio padrão.
Como mostrado na Tabela 15, a penetração do derivado de cal- cona ([125l]Composto 7) no cérebro após a administração foi confirmada, e foi mostrado que o derivado de calcona foi lavado imediatamente a seguir.
Os resultados de exemplo de referência acima sugerem que os Compostos 7 e 12 podem ser utilizados como uma sonda de imageamento de amilóide β. Um composto em que um anel de benzeno uni-se ao grupo carbonila no Composto 7 ou 12 é substituído com um anel de piridina é inclu- ído no composto representado pela fórmula geral (I). Ono e outro relataram que, quando um anel de benzeno em uma ligação de derivado de estilbeno à proteína amilóide β for substituído com um anel de piridina, a solubilidade de lipídio será diminuída, e a depuração do cérebro será melhorada com a pro- priedade de ligação à proteína amilóide β sendo mantida (M. Ono e outro, Nuclear Medicine and Biology 32 (2005) 329-335). Este relato de Ono e ou- tro sugere que os compostos substituídos por piridina mencionados acima derivados dos Compostos 7 e 12 similarmente têm uma propriedade de liga- ção à proteína amilóide β como com os Compostos 7 e 12, e depuração do cérebro mais rápida do que estes compostos.
[Exemplo de Referência 2]
Métodos experimentais
Reaqentes e instrumento
Proteína Amilóide β (Humana, 1 - 42) [forma de TFA] foi adquiri- da de Peptide Institute, Inc., e reagentes de grau especial foram utilizados como outros reagentes. 1H-NMR foi avaliado utilizando-se Varian Gemini 300 e tetrametilsilano como uma substância padrão interna.
(1) Síntese de derivados de calcona contendo flúor
Síntese de (E)-3-(4-(dimetilamino)fenil)-1-(4-hidroxifenil)prop-2-en-1-ona (1)
4-Hidroxiacetofenona (1,36 g, 10 mmoles) e 4- dimetilaminobenzaldeído (1,0 g, 6,7 mmoles) foram dissolvidos em 15 mLde etanol. KOH a 10% (30 mL) foi adicionado, e a mistura foi reagida a 100DC durante 24 h. A mistura foi extraída com acetato de etila, e em seguida o solvente foi evaporado sob pressão reduzida. O resíduo foi lavado com ace- tato de etila:n-hexano = 1:2 e filtrado, e o filtrado resultante foi evaporado sob pressão reduzida para obter 1,50 g (taxa de produção de 84%) do Com- posto 1. 1H-NMR (CD3OD) δ: 3,04 (s, 6H), 6,76 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 6,88 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,50 (d, J = 15,3 Hz, 1H), 7,59 (d, J = 9 Hz, 2H), 7,72 (d, J = 15,3 Hz1 1H), 7,98 (d, J = 8,7 Hz, 2H), (DMSO-d6) δ: 2,99 (s, 6H), 6,74 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 6,88 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,62 (s, 2H), 7,68 (d, J = 8,7 Hz1 2H), 8,03 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 10,30 (s, 1H). ΕΙ-MS: m/z 267 (M+)
Síntese de (E-)1-(4-(2-hidroxietóxi)fenil)-3-(4-(dimetilamino)fenil)Drop-2-en-1- ona (2)
Composto 1 (500 mg, 1,87 mmol) e cloroidrina de etileno (124,6 μL, 1,87 mmol) foram dissolvidos em Ν,Ν-dimetilformamida (DMF) (5 mL), seguido pela adição de K2CO3 (775,3 mg, 5,61 mmoles), e a mistura foi rea- gida a 100DC durante 18 h. Água purificada foi adicionada, a mistura foi ex- traída com clorofórmio e desidratada adicionando-se Na2SO4, e em seguida o solvente foi evaporado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna de sílica gel utilizando-se acetato de etila.n-hexano = 1:1 como um solvente de desenvolvimento para obter 422 mg (taxa de produção de 73%) do Composto 2. 1H-NMR (CDCI3) δ: 3,04 (s, 6H), 4,00 - 4,01 (m, 2H), 4,17 (t, J = 4,8 Hz, 2H), 6,69 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 6,99 (d, J = 6,9 Hz, 2H), 7,35 (d, J = 15,3 Hz, 1H), 7,55 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 7,79 (d, J = 15,3 Hz, 1H), 8,02 (d, J = 9,3 Hz1 2H).
Síntese de (E)-1 -(4-(2-fluoroetóxi)fenil)-3-(4-(dimetilamino)fenil)prop-2-en-1-ona (3)
Composto 2 (100 mg, 0,32 mmol) foi dissolvido em éter dimetíli- co de etileno glicol (5 mL), e a mistura foi agitada no banho de acetona com resfriamento. Trifluoreto de dietilaminossúlfor (DAST) (84,55 μL, 0,64 mmol) foi lentamente adicionado ao mesmo tempo que agitando-se com resfria- mento. Carbonato de potássio aquoso foi lentamente adicionado para termi- nar a reação, a mistura foi extraída com clorofórmio e desidratada adicio- nando-se Na2SO4, e em seguida o solvente foi evaporado sob pressão redu- zida. O resíduo foi purificado por TLC preparativa utilizando-se acetato de etila:n-hexano = 1:3 como um solvente de desenvolvimento para obter 39 mg (taxa de produção de 39%) do Composto 3. 1H-NMR (CDCI3) δ: 3,09 (s, 6H), 4,30 (d, t, J1 = 27,6 Hz, J2 = 4,2 Hz, 2H), 4,79 (d, t, Ji = 47,4 Hz1 J2 = 4,2 Hz, 2H), 6,70 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,00 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 7,35 (d, J = 15,6 Hz, 1H), 7,55 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 7,79 (d, J = 15,3 Hz, 1H), 8,03 (d, J = 9,0 Hz, 2H). ΕΙ-MS: m/z 313 (M+)
Síntese de (E)-1-(4-(2-(2-hidroxietóxi)etóxi)fenil)-3-(4- (dimetilamino)fenil)prop-2-en-1 -ona (4)
Composto 1 (500 mg, 1,87 mmol) e éter mono-2-cloroetílico de etileno glicol (237 μL, 2,24 mmoles) foram dissolvidos em DMF (5 ml), segui- do pela adição de K2CO3 (775,3 mg, 5,61 mmoles), e a mistura foi reagida a 100DC durante 18 h. Água purificada foi adicionada, a mistura foi extraída com clorofórmio e desidratada adicionando-se Na2SO4, e em seguida o sol- vente foi evaporado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cro- matografia de coluna de sílica gel utilizando-se acetato de etila:n-hexano = 2:1 como um solvente de eluição para obter o Composto 4. 1H-NMR (CDCI3) δ: 3,05 (s, 6Η), 3,69 (t, J = 4,8 Hz, 2Η), 3,78 (s, 2Η), 3,91 (t, J = 4,8 Hz, 2Η), 4,23 (t, J = 4,8 Hz, 2Η), 6,70 (d, J = 9,0 Hz, 2Η), 6,99 (d, J = 9,0 Hz1 2H), 7,35 (d, J = 15,3 Hz, 1H), 7,55 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,79 (d, J = 15,6 Hz, 1H), 8,02 (d, J = 9,0 Hz, 2H).
Síntese de (E)-1-(4-(2-(2-fluoroetóxi)etóxi)fenin-3-(4-(dimetilamino)fenil)prop- 2-en-1-ona (5)
Composto 4 (100 mg, 0,28 mmol) foi dissolvido em éter dimetíli- co de etileno glicol (4 mL), e a mistura foi agitada com resfriamento. DAST (74,6 μL, 0,56 mmol) foi lentamente adicionado ao mesmo tempo que agi- tando-se com resfriamento, e a temperatura foi retornada para temperatura ambiente após 10 min. Carbonato de potássio aquoso foi lentamente adicio- nado para terminar a reação, a mistura foi extraída com clorofórmio e desi- dratada adicionando-se Na2SO4, e em seguida o solvente foi evaporado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por TLC preparativa utilizando-se acetato de etila:n-hexano = 1:1 como um solvente de desenvolvimento para obter 28 mg (taxa de produção de 28%) do Composto 5. 1H-NMR (CDCI3) δ: 3,04 (s, 6H), 3,77 - 3,94 (m, 4H) 4,21 - 4,24 (m, 3H) 4,61 (d, t, J1 = 47,4 Hz, J2 = 4,2 Hz, 1H), 6,69 (d, J = 9,3 Hz, 2H), 6,99 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,35 (d, J = 15,3 Hz, 2H), 7,55 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 7,78 (d, J = 15,6 Hz, 2H), 8,02 (d, J = 9,0 Hz, 2H). ΕΙ-MS: m/z 357 (M+)
Síntese de (E)-1-(4-(2-(2-(2-hidroxietóxi)etóxi)etóxi)fenil)-3-(4- dimetilamino)fenil)prop-2-en-1 -ona (6)
Composto 1 (355 mg, 1,33 mmol) e 2-[2-(2- cloroetóxi)etóxi]etanol (232 μL, 1,60 mmol) foram dissolvidos em DMF (4 mL), seguido pela adição de K2CO3 (551,4 mg, 3,99 mmoles), e a mistura foi reagida a 100DC durante 6 h. Água purificada foi adicionada, a mistura foi extraída com clorofórmio e desidratada com Na2SO4, e em seguida o solven- te foi evaporado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromato- grafia de coluna de sílica gel utilizando-se acetato de etila:n-hexano = 6:1 como um solvente de eluição para obter 429 mg (taxa de produção de 82,6%) do Composto 6. 1H-NMR (CDCI3) δ: 3,04 (s, 6H), 3,62 (t, J = 5,1 Hz, 2H), 3,73 - 3,75 (m, 6H), 3,90 (t, J = 4,8 Hz, 2H), 4,22 (t, J = 4,8 Hz, 2H), 6,70 (d, J = 9,0 Hz1 2H), 6,99 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,35 (d, J = 15,3 Hz, 1H), 7,55 (d, J = 9,0 Hz1 2H), 7,78 (d, J = 15,3 Hz, 1H), 8,02 (d, J = 9,0 Hz, 2H).
Síntese de (E)-1-(4-(2-(2-(2-fluoroetóxi)etóxi)etóxi)fenil)-3-(4- (dimetilamino)fenil)prop-2-en-1-ona (7)
Composto 6 (200 mg, 0,50 mmol) foi dissolvido em éter dimetíli- co de etileno glicol (4 mL), e a mistura foi agitada em um banho de acetona com resfriamento. DAST (133 μL, 1,0 mmol) foi lentamente adicionado ao mesmo tempo que agitando-se com resfriamento, a temperatura foi retorna- da para temperatura ambiente após 10 min, carbonato de potássio aquoso foi lentamente adicionado para terminar a reação, a mistura foi extraída com clorofórmio e desidratada adicionando-se Na2SO4, e em seguida o solvente foi evaporado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por TLC prepa- rativa utilizando-se acetato de etila:n-hexano = 1:1 como um solvente de de- senvolvimento para obter 29 mg (taxa de produção de 14,4%) do Composto 7. 1H-NMR (CDCI3) δ: 3,04 (s, 6H), 3,73 - 3,81 (m, 6H), 3,90 (t, J = 5,1 Hz, 2H), 4,21 (t, J = 5,1 Hz, 2H), 4,49 (t, J = 4,5 Hz, 1H), 4,65 (t, J = 4,5 Hz, 1H), 6,70 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 6,98 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 7,35 (d, J = 15,3 Hz, 1H), 7,55 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,78 (d, J = 15,3 Hz, 1H), 8,02 (d, J = 9,0 Hz, 2H). ΕΙ-MS: m/z 401 (M+)
Síntese de 1-(4-(2-hidroxietóxi)fenil)etanona (8)
4-Hidroxiacetofenona (1,36 g, 10 mmoles) e cloroidrina de etile- no (660 μL, 10 mmoles) foram dissolvidos em DMF (5 mL), seguido pela adi- ção de K2CO3 (4,14 g, 30 mmoles), e a mistura foi reagida a 100DC durante 50 h. Após 12 h, cloroidrina de etileno (333 μL, 5 mmoles) foi também adi- cionada. Água purificada foi adicionada, a mistura foi extraída com clorofór- mio e desidratada adicionando-se N2S04, e em seguida o solvente foi eva- porado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna de sílica gel utilizando-se acetato de etila:n-hexano = 3:2 como um solvente de eluição para obter 1,79 g (taxa de produção de 99,4%) do Com- posto 8. 1H-NMR (CDCI3) δ: 2,75 (s, 3H), 4,20 (s, 2H), 4,35 (t, J = 5,1 Hz, 2H), 7,15 (d, J = 9 Hz, 2H), 8,13 (d, J = 9 Hz, 2H).
Síntese de 1-(4-(2-fluoroetóxi)feni0etanona (9) Composto 8 (1,62 g, 8,9 mmoles) foi dissolvido em éter dimetíli- co de etileno glicol (4 mL), e a mistura foi agitada em um banho de acetona com resfriamento. DAST (2,3 mL, 17,8 mmoles) foi lentamente adicionado ao mesmo tempo que agitando-se com resfriamento. Carbonato de potássio aquoso foi lentamente adicionado para terminar a reação, a mistura foi extra- ída com clorofórmio e desidratada adicionando-se Na2S04, e em seguida o solvente foi evaporado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna de sílica gel utilizando-se acetato de etila:n-hexano = 1:1 como um solvente de desenvolvimento para obter 1,02 g (taxa de pro- dução de 63,3%) do Composto 9. 1H-NMR (CDCI3) δ: 4,24 (d, t, Ji = 28,2 Hz, J2 = 4,2 Hz, 2H), 4,75 (d, t, Ji = 47,1 Hz, J2 = 3,9 Hz, 2H), 6,92 (d, J = 9 Hz, 2H), 7,89 (d, J = 9,3 Hz, 2H).
Síntese de (E)-1-(4-(2-fluoroetóxi)fenil)-3-(4-nitrofenil)prop-2-en-1-ona (10)
Composto 9 (860 mg, 4,8 mmoles) e 4-nitrobenzaldeído (720 mg, 4,8 mmoles) foram dissolvidos em etanol (7 mL). Uma quantidade pe- quena de KOH a 10% foi gradualmente adicionada com agitação, e a mistu- ra foi agitada em temperatura ambiente durante 1 h. Os cristais precipitados foram coletados por filtração por sucção para obter 856 mg (taxa de produ- ção de 56,6%) do Composto 1.
1H-NMR (CDCI3) δ: 4,32 (d, t, J1 = 27,6 Hz, J2 = 4,2 Hz, 2H), 4,81 (d, t, Ji = 47,4 Hz, J2 = 4,2 Hz, 2H), 7,04 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,65 (d, J = 15,6 Hz, 1H), 7,79 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,82 (d, J = 12,6 Hz, 1H), 8,06 (d, J = 9,0 Hz1 2H), 8,28 (d, J = 8,7 Hz, 2H).
Síntese de (E)-1-(4-(2-fluoroetóxi)fenil)-3-(4-aminofenil)prop-2-en-1-ona (11)
Composto 10 (856 mg, 2,7 mmoles) e SnCI2 (2,55 g, 13,5 mmo- les) foram dissolvidos em etanol (10 mL), e a mistura foi agitada a 100DC durante 2,5 h. 1 N de NaOH foi adicionado, a mistura foi extraída com aceta- to de etila e desidratada adicionando-se Na2SO4, e em seguida o solvente foi evaporado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna de sílica gel utilizando-se clorofórmio como um solvente de eluição para obter 333 mg (taxa de produção de 43,0%) do Composto 11. 1H-NMR (CDCI3) δ: 4,02 (s, amplo, 2H), 4,30 (d, t, J1 = 27,6 Hz, J2 = 4,2 Hz, 2H), 4,79 (d, t, J1 = 47,4 Hz1 J2 = 4,2 Hz1 2H), 6,68 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,00, (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,36 (d, J = 15,3 Hz, 1H), 7,48 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,75 (d, J = 15,3 Hz, 1H), 8,03 (d, J = 6,9 Hz, 2H). ΕΙ-MS: m/z 285 (M+) Síntese de (E)-1-(4-(2-fluoroetóxi)fenil)-3-(4-aminofenil)prop-2-en-1-ona (12)
Composto 11 (290 mg, 1,02 mmol) foi dissolvido em DMSO (6 mL). K2CO3 (691 mg, 5,08 mmoles) foi adicionado, a mistura foi agitada, e CH3I (0,18 mL, 3,05 mmoles) foi lentamente adicionado gota a gota. A mistu- ra foi agitada em temperatura ambiente durante 3 h, seguido pela adição de água purificada, e a mistura foi extraída com acetato de etila. A mistura foi desidratada adicionando-se Na2SO4, em seguida o solvente foi evaporado sob pressão reduzida, e o resíduo foi purificado por cromatografia de coluna de sílica gel utilizando-se acetato de etila:n-hexano = 1:2 como um solvente de eluição para obter 90 mg (taxa de produção de 29,5%) do Composto 12. 1H-NMR (CDCI3) δ: 2,89 (s, 3H), 4,23 (d, t, J1 = 27,9 Hz, J2 = 4,2 Hz, 2H), 4,79 (d, t, J1 = 47,4 Hz, J2 = 4,2 Hz, 2H), 6,59 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 6,99 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 7,34 (d, J = 15,3 Hz, 1H), 7,51 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,78 (d, J = 15,3 Hz,-1H), 8,02 (d, J = 9,3 Hz, 2H). ΕΙ-MS: m/z 299 (M+)
Síntese de 1-(4-(2-(2-hidroxietóxi)etóxi)feni0etanona (13)
4-Hidroxiacetofenona (1,36 g, 10 mmoles) e éter mono-2- cloroetílico de etileno glicol (1,06 mL, 10 mmoles) foram dissolvidos em DMF (5 mL), seguido pela adição de K2CO3 (4,14 g, 30 mmoles), e a mistura foi reagida a 100DC durante 18 h. Água purificada foi adicionada, a mistura foi extraída com clorofórmio e desidratada adicionando-se Na2SO4, e em segui- da o solvente foi evaporado sob pressão reduzida para obter o Composto 13. 1H-NMR (CDCI3) δ: 2,56 (s, 3H), 3,68 (t, J = 4,8 Hz, 2H), 3,75 - 3,79 (m, 2H) 3,90 (t, J = 5,1 Hz, 2H), 4,21 (t, J = 4,8 Hz, 2H), 6,96 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,94 (d, J = 8,7 Hz).
Síntese de 1-(4-(2-(2-fluoroetóx0etóxi)feni0etanona (14)
A quantidade total do Composto 13 obtido acima foi dissolvida em éter dimetílico de etileno glicol (2 mL), e a mistura foi agitada com resfri- amento. DAST (1 mL, 7,5 mmol) foi lentamente adicionado ao mesmo tempo que agitando-se com resfriamento. DAST (1 mL, 7,5 mmol) foi também adi- cionado, carbonato de potássio aquoso foi lentamente adicionado para ter- minar a reação após 18 h, a mistura foi extraída com clorofórmio e desidra- tada adicionando-se Na2SO4, e em seguida o solvente foi evaporado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna de sílica gel utilizando-se acetato de etila:n-hexano = 1:1 como um solvente de eluição para obter 568 mg (taxa de produção de 25%) do Composto 14. 1H- NMR (CDCI3) δ: 2,56 (s, 3H), 3,78 (t, J = 3,3 Hz, 1H), 3,86-3,94 (m, 3H), 4,22 (t, J = 5,1 Hz, 2H), 4,51 (t, J = 3,0 Hz, 1H), 4,67 (t, J = 3,0. Hz, 1H), 6,96 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,93 (d, J = 8,7 Hz1 2H). ΕΙ-MS: m/z 226 (M+)
Síntese de (E)-1 -(4-(2-(2-fluoroetóxi)etóxi)fenin-3-(4-nitrofenil)prop-2-en-1 - ona (15)
Composto 14 (568 mg, 2,5 mmol) e 4-nitrobenzaldeído (380 mg, 2,5 mmol) foram dissolvidos em etanol (5 mL). Uma quantidade pequena de KOH a 10% foi gradualmente adicionada com agitação, e a mistura foi agita- da em temperatura ambiente durante 1 h. Os cristais precipitados foram co- letados por filtração por sucção para obter 128 mg (taxa de produção de 14,2%) do Composto 15. 1H-NMR (CDCI3) δ: 3,79 (t, J = 4,2 Hz, 1H), 3,88- 4,27 (m, 3H), 4,8 (t, J = 4,8 Hz, 2H), 4,53 (t, J = 4,2 Hz, 1H), 4,69 (t, J = 4,2 Hz, 1H), 7,03 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,66 (d, J = 15,6 Hz, 1H), 7,79 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 7,81 (d, J = 15,6 Hz, 1H), 8,05 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 8,28 (d, J = 9,0 Hz, 2H).
Síntese de (E)-1 -(4-(2-(2-fluoroetóxi)etóxi)fenil)-3-(4-aminofenil)prop-2-en-1 - ona (16)
Composto 15 (128 mg, 0,36 mmol) e SnCI2 (0,3 g, 1,78 mmol) foram dissolvidos em etanol (5 mL), e a mistura foi agitada a 100DC durante 30 min. 1 N de NaOH foi adicionado, a mistura foi extraída com acetato de etila e desidratada adicionando-se Na2S04, e em seguida o solvente foi eva- porado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna de sílica gel utilizando-se clorofórmio como um solvente de eluição para obter 85 mg (taxa de produção de 72,4%) do Composto 16. 1H-NMR (CDCI3) δ: 3,77 - 3,94 (m, 4H), 4,00 (s, amplo, 2H), 4,23 (t, J = 4,5 Hz, 2H), 4,53 (t, J = 4,2 Hz, 1H), 4,69 (t, J = 4,2 Hz, 1H), 6,68 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 6,99 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,74 (d, J = 15,6 Hz, 1H), 7,48 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,36 (d, J = 15,3 Hz, 1H), 8,01 (d, J = 9,0 Hz, 2H). ΕΙ-MS: m/z 329 (M+) Síntese de (E)-1 -(4-(2-(2-fluoroetóxi)etóxi)fenil)-3-(4-(metilamino)fenil)prop-2- en-1-ona (17)
Composto 16 (73 mg, 0,22 mmol) foi dissolvido em DMSO (4 mL). K2CO3 (152,0 mg, 1,1 mmol) foi adicionado, a mistura foi agitada, e CH3I (0,04 mL, 0,66 mmol) foi lentamente adicionado gota a gota. A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 3,5 h, seguido pela adição de água purificada, e a mistura foi extraída com acetato de etila. A mistura foi desidratada adicionando-se Na2SO4, em seguida o solvente foi evaporado sob pressão reduzida, e o resíduo foi purificado por TLC preparativa utilizan- do-se acetato de etila:n-hexano = 1:1 como um solvente de desenvolvimento para obter 22 mg (taxa de produção de 29,1%) do Composto 17. 1H-NMR (CDCI3) δ: 2,90 (s, 3H), 3,78-3,95 (m, 4H), 3,99 (s, amplo, 1H), 4,23 (t, J = 4,5 Hz, 2H), 4,53 (t, J = 4,5 Hz, 2H), 4,53 (t, J = 4,2 Hz, 1H), 4,69 (t, J = 4,2 Hz, 1H), 6,60 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 6,99 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,35 (d, J = 15,3 Hz, 1H), 7,51 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,77 (d, J = 15,3 Hz, 1H), 8,02 (d, J = 8,7 Hz, 2H). ΕΙ-MS: m/z 343 (M+)
Síntese de 1-(4-(2-(2-(2-hidroxietóxi)etóxi)etóxi)fenil)etanona (18)
4-Hidroxiacetofenona (1,36 g, 10 mmoles) e 2-[2-(2- cloroetóxi)etóxi]etanol (1,45 mL, 10 mmoles) foram dissolvidos em DMF (3 mL), seguido pela adição de K2CO3 (4,14 g, 30 mmol), e a mistura foi agita- da a 100DC durante 18 h. Após 12 h, 2-[2-(2-cloroetóxi)etóxi]etanol (500 μί, 3,45 mmol) foi também adicionado, seguido pela adição de água purificada, a mistura foi extraída com clorofórmio e desidratada adicionando-se Na2SO4, e em seguida o solvente foi evaporado sob pressão reduzida para obter o Composto 18.
Síntese de 1-(4-(2-(2-(2-fluoroetóxi)etóxi)etóxi)fenil)etanona (19)
A quantidade total do Composto 18 obtido acima foi dissolvida em éter dimetílico de etileno glicol (4 mL), e a mistura foi agitada com resfri- amento. DAST (1 mL, 7,5 mmol) foi lentamente adicionado ao mesmo tempo que agitando-se com resfriamento. DAST (1,5 mL, 11,3 mmol) foi também adicionado, carbonato de potássio aquoso foi lentamente adicionado para terminar a reação após 12 h, a mistura foi extraída com clorofórmio e desi- dratada adicionando-se NaaSO4, e em seguida o solvente foi evaporado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna de sílica gel utilizando-se acetato de etila:n-hexano = 1:1 como um solvente de eluição para obter 543 mg (taxa de produção de 20%) do Composto 19. 1H- NMR (CDCI3) δ: 2,56 (s, 3H), 3,69-3,81 (m, 6H), 3,90 (t, J = 4,5 Hz, 2H), 4,21 (t, J = 5,1 Hz, 2H), 4,49 (t, J = 4,2 Hz, 1H), 4,65 (t, J = 4,2 Hz1 1H), 6,95 (d, J = 9,3 Hz, 2H), 7,92 (d, J = 9,0 Hz, 2H). EI-MS = m/z 270 (M+)
Síntese de (E)-1 -(4-(2-(2-(2-fluoroetóxi)etóxi)etóxi)fenil)-3-(4-nitrofenil)prop- 2-en- 1-ona (20)
Composto 19 (543 mg, 2,0 mmol) e 4-nitrobenzaldeído (302 mg, 2,0 mmol) foram dissolvidos em etanol (5 mL). Uma quantidade pequena de KOH a 10% foi adicionado em 5 gotas com agitação, e a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 1 h. Os cristais precipitados foram coleta- dos por filtração por sucção para obter 649 mg (taxa de produção de 80,0%) do Composto 20. 1H-NMR (CDCI3) δ: 3,71-3,82 (m, 6H), 3,92 (t, J = 4,5 Hz, 2H), 4,24 (t, J = 4,8 Hz, 2H), 4,50 (t, J = 4,2 Hz, 1H), 4,66 (t, J = 4,5 Hz, 1H), 7,03 (d, J = 9,3 Hz, 2H), 7,66 (d, J = 15,6 Hz, 1H), 7,79 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 20 7,81 (d, J =15,6 Hz, 1H), 8,05 (d, J = 9,3 Hz1 2H), 8,28 (d, J = 8,7 Hz, 2H).
Síntese de (E)-1 -(4-(2-(2-(2-fluoroetóxi)etóxi)etóxi)fenil)-3-(4-aminofeninprop- 2-en-1-ona (21)
Composto 20 (649 mg, 1,60 mmol) e SnCI2 (0,94 g, 8 mmol) fo- ram dissolvidos em etanol (5 mL), e a mistura foi agitada a 100DC durante 30 min. 1 N de NaOH foi adicionado, a mistura foi extraída com acetato de etila e desidratada adicionando-se Na2SO4, e em seguida o solvente foi eva- porado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna de sílica gel utilizando-se acetato de etila:n-hexano = 2:1 como um solvente de eluição para obter 206 mg (taxa de produção de 34,5%) do 30 Composto 21. 1H-NMR (CDCI3) δ: 3,70-3,83 (m, 6H), 3,89 (t, J = 4,5 Hz, 2H), 4,12 (s, amplo, 2H), 4,21 (t, J = 4,8 Hz, 2H), 4,49 (t, J = 4,0 Hz, 1H), 4,65 (t, J = 3,9 Hz, 1H), 6,67 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 6,98 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,36 (d, J = 15,3 Hz1 1 Η), 7,47 (d, J = 8,4 Hz1 2Η), 7,74 (d, J = 15,9 Hz1 1H), 8,01 (d, J = 9.0 Hz1 2H). ΕΙ-MS: m/z 373 (M+)
Síntese de (E)-1-(4-(2-(2-(2-fluoroetóxi)etóxi)etóxi)fenil)-3-(4- metilamino)fenil)prop-2-en-1 -ona (22)
Composto 21 (206 mg, 0,55 mmol) foi dissolvido em DMSO (6 mL). K2CO3 (380 mg, 2,75 mmol) foi adicionado, a mistura foi agitada, e CH3I (0,10 mL, 1,65 mmol) foi lentamente adicionado gota a gota. A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 2 h, seguido pela adição de água purificada, e a mistura foi extraída com acetato de etila. A mistura foi desi- dratada adicionando-se Na2SO4, em seguida o solvente foi evaporado sob pressão reduzida, e o resíduo foi purificado por cromatografia de coluna de sílica gel utilizando-se acetato de etila:n-hexano = 2:3 como um solvente de eluição para obter 53 mg (taxa de produção de 24,9%) do Composto 22. 1H- NMR (CDCI3) δ: 2,89 (s, 3H), 3,69-3,83 (m, 6H), 3,90 (t, J = 4,8 Hz, 2H), 4,12 (S, amplo, 1H), 4,22 (t, J = 5,1 Hz, 2H), 4,49 (t, J = 4,2 Hz, 1H), 4,65 (t, J = 4.1 Hz, 1H), 6,60 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 6,98 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 7,35 (d, J = 15,3 Hz, 1H), 7,51 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,76 (d, J = 15,3 Hz, 1H), 8,01 (d, J = 8,7 Hz, 2H). ΕΙ-MS: m/z 387 (M+)
Síntese de (E)-3-(4-(dimetilamino)fenil)-1-(4-fluorofenil)prop-2-en-1-ona (23)
4-Fluoroacetofenona (283 mg, 2,1 mmol) e 4- dimetilaminobenzaldeído (278 mg, 1,9 mmol) foram dissolvidos em etanol (10 mL). KOH a 10% (5 mL) foi gradualmente adicionado com agitação, e a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 11 h. Os cristais preci- pitados foram lavados com etanol aquoso a 50% para obter 209 mg (taxa de produção de 41,6%) do Composto 23. 1H-NMR (CDCI3) δ: 3,02 (s, 6H), 6,68 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,15 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 7,30 (d, J = 15,3 Hz, 1H), 7,54 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 7,78 (d, J = 15,3 Hz, 1H), 8,02 (d, J = 8,7 Hz, 2H).
Síntese de (E)-1-(4-fluorofenil)-3-(4-nitrofeniQprop-2-en-1-ona (24)
4-Fluoroacetofenona (305 mg, 2,2 mmol) e 4-nitrobenzaldeído (301 mg, 2,0 mmol) foram dissolvidos em etanol (5 mL). KOH a 10% (5 mL) foi gradualmente adicionado com agitação, e a mistura foi agitada em tempe- ratura ambiente durante 13 h. Os cristais precipitados foram lavados com etanol aquoso a 50% para obter 490 mg (taxa de produção de 90,7%) do Composto 24.
Síntese de (E)-3-(4-aminofenil)-1-(4-fluorofenil)prop-2-en-1-ona (25)
Composto 24 (420 mg, 1,55 mmol) e SnCI2 (863 mg) foram dis- solvidos em etanol (5 mL), e a mistura foi aquecida ao refluxo durante 1 h. 1 N de NaOH foi adicionado, a mistura foi extraída com acetato de etila e desi- dratada adicionando-se Na2SO4, e em seguida o solvente foi evaporado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna de sílica gel utilizando-se acetato de etila:n-hexano = 1:2 como um solvente de eluição para obter 150 mg (taxa de produção de 40,0%) do Composto 25. 1H-NMR (CDCI3) δ: 4,07 (s, 2H), 6,67 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 6,98 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,31 (d, J = 15,6 Hz, 1H), 7,47 (d, J = 8,4 Hz, 2H), 7,76 (d, J = 15,9 Hz, 1H), 8,03 (d, J = 9,0 Hz, 2H).
Síntese de (E)-1-(4-fluorofenil)-3-(4-metilamino)fenil)prop-2-en-1-ona (26)
Composto 25 (70 mg) foi dissolvido em DMSO (2 mL). K2CO3 (120 mg) foi adicionado, a mistura foi agitada, e CH3I (140 mg) foi lentamen- te adicionado gota a gota. A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 3 h, seguido pela adição de água purificada, e a mistura foi extraída com acetato de etila. A mistura foi desidratada adicionando-se Na2SO4, em seguida o solvente foi evaporado sob pressão reduzida, e o resíduo foi sol- vente purificado por cromatografia de coluna de sílica gel utilizando-se ace- tato de etila:n-hexano = 1:1 como uma eluição para obter 14 mg (taxa de produção de 19%) do Composto 26. 1H-NMR (CDCI3) δ: 2,90 (s, 3H), 4, 20 (s, 1H), 6,59 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 6,98 (d, J = 9,0 Hz, 2H), 7,35 (d, J = 15,3 Hz, 1H), 7,51 (d, J = 8,7 Hz, 2H), 7,77 (d, J = 15,3 Hz, 1H), 8,02 (d, J = 8,7 Hz1 2H).
(2) Análises de derivados de calcona contendo flúor por HPLC
Os derivados de calcona sintetizados contendo flúor foram anali- zados por HPLC de fase reversa (coluna: COSMOSIL 5C18-AR-II (4,6 □ 150 mm) fabricada por Nacalai Tesque Inc.; taxa de fluxo, 1,0 mL/min; fase mó- vel, uma solução mista de água e acetonitrilo (1/1); detecção por absorção de UV em 254 nm). (3) Rotulagem de derivados de calcona contendo flúor com C-11 0,5 mg do Composto 26 ou 22 foi dissolvido em metil etil cetona (500 μl), e a mistura foi reagida com triflato de [11C]metila durante 3 min. Em seguida, a mistura foi separada e purificada por HPLC de fase reversa para 5 obter o compostos alvos, [11C]Compostos 23 e 7. As produções radioquími- cas destes foram 35 e 28%, respectivamente, e foi confirmado que a pureza radioquímica foi 95% ou maior para ambos os compostos.
(4) Experimento de inibição de ligação in-vitro utilizando-se agregado de Αβ (1 - 42)
O agregado de Αβ (1 - 42) foi dissolvido em um tampão conten- do 10 mM de fosfato de sódio e 1 mM de EDTA (pH 7,4) em uma concentra- ção de 0,5 mg/mL, e a mistura foi incubada a 37DC durante 36 a 42 h. O experimento de inibição de ligação foi realizado utilizando-se 12 □ 75 mm de tubos de vidro de borossilicato. 850 μL de solução de etanol a 10%, 50 mL de [125l]4-dimetilamino-4'-iodocalcona (em etanol aquoso a 10%), 50 μΙ_ (29 nM) de uma solução de agregado de Αβ (1 - 42), e 50 mL de uma solução de derivados de calcona contendo flúor em etanol aquoso a 10% preparada em várias concentrações foram misturados, e a mistura foi deixada descansar em temperatura ambiente durante 3 h. Além disso, ligação não específica foi calculada utilizando-se 4-dimetilamino-4'-iodocalcona (400 nM), um compos- to não radioativo. Derivados de calcona ligados e derivados de calcona não ligados ao agregado de Αβ foram separados com uma colheitadeira de célu- la Brandel M-24R utilizando-se filtros de Whatman GF/B. Radioatividades de substâncias restantes no filtro foram medidas com uma registradora □. As concentrações inibitórias de 50% foram calculadas utilizando-se Graph Pad Prism (graph pad software), e constantes de inibição (valores de Ki) foram calculadas por equação de Cheng-Prusoff, Ki = IC50/(1+[L]/Kd). Nesta equa- ção, a concentração de [125l]4-dimetilamino-4'-iodocalcona utilizada no expe- rimento foi utilizada para [L], e a constante de dissociação de [125l]4- dimetilamino-4'-iodocalcona contra o agregado de Αβ (1 - 42) foi utilizada para Kd.
(5) Experimento de distribuição de radioatividade in-vivo em camundonqos normais
Compostos rotulados, [11C]Compostos 23 e 7, foram diluídos com salina fisiológica contendo etanol a 10%. 100 mL de cada um dos com- postos rotulados foram intravenosamente infundidos em cinco camundongos ddY machos de 5 semanas de idade por grupo, os animais foram decapta- dos em 2, 10, 30, ou 60 min, sangue foi coletado, e em seguida pesos e ra- dioatividades destes foram medidos.
Resultados experimentais
Como mostrado na Figuras 15, 16, e 17, derivados de calcona contendo flúor foram sintetizados por uma reação Aldol. Os Compostos 26 e 22 foram convertidos nos [11C]Compostos 23 e 7 por uma reação com triflato de [11C]metila (Figura 18). Os resultados de análises dos derivados de cal- cona sintetizados contendo flúor por HPLC de fase reversa são mostrados na Tabela 16. Uma vez que o tempo de eluição foi encurtado por introdução de um grupo fluoroetóxi no esqueleto de calcona, foi sugerido que a solubili- dade de lipídeo dos compostos foi diminuída. Além disso, foi demonstrado que a solubilidade de lipídeo dos compostos foi diminuída com o aumento no número de grupos etileno óxi.
Para examinar a propriedade de ligação de derivados de calcona contendo flúor à amilóide, experimento de inibição in-vitro foi realizado utili- zando-se o agregado Ab42 (Tabela 17). Os resultados sugeriram que todos os derivados de calcona têm uma propriedade de ligação à Αβ uma vez que eles inibiram a ligação de [125I]DAC à Αβ. Nenhuma diferença expressiva na propriedade de ligação à Αβ foi observada que é dependente do número de grupos etileno óxi introduzidos no Anel de fenila B. Entretanto, diferenças da propriedade de ligação dependendo dos tipos de substituintes introduzidos no Anel de fenila A foram observadas, e a propriedade de ligação melhorou na ordem de NH2 < NH(CH3) < N(CH3)2 independente do número de grupos etileno óxi.
Para avaliar penetração cerebral e depuração do derivados de calcona contendo flúor, experimento de distribuição de radioatividade in-vivo foi realizado em camundongos normais (Tabela 18). Como um resultado, os [11C]Compostos 23 e 7 mostraram penetração no cérebro elevada em um estágio precoce após administração (3,68, 4,31% ID/g em 2 min após admi- nistração) e depuração de radioatividade rápida (1,04, 0,35% ID/g em 60 min após administração). Uma vez que a relação da radioatividade restante no cérebro em 30 min após administração para aquela em 2 min após adminis- tração foi 28,3% para [11C]Composto 23 e 14,8% para [11C]Composto 7, e a relação da radioatividade restante no cérebro em 60 min após administração para aquela em 60 min após administração foi 28,3% para [11C]Composto 23 e 8,1% para [11C]Composto 7, foi revelado que o [11C]Composto 7, no qual três grupos etileno óxi foram introduzidos, mostrou um comportamento ra- dioativo favorável no cérebro de camundongos normais quando comparado com o [11C]Composto 23.
Tabela 16
<table>table see original document page 89</column></row><table>
Tabela 17
<table>table see original document page 89</column></row><table> <table>table see original document page 90</column></row><table>
[Tabela 18]
<table>table see original document page 90</column></row><table>
Os conteúdos nas especificações e/ou os esboços de pedidos de patente Japonesa (Pedido de Patente Japonesa Nos. 2006 - 144024 e 2007-081637) nos quais a prioridade convencional do presente pedido é ba- seada, são incluídos no escopo da presente especificação. Além disso, to- das as publicações, patentes, e pedidos de patente citados na presente in- venção são incorporados na presente especificação.

Claims (14)

1. Composição para diagnóstico de uma doença relacionada à amilóide, compreendendo um composto representado pela fórmula geral (I): [Fórmula 1] <formula>formula see original document page 91</formula> em que R1 representa um anel heterocíclico aromático que pode ser substi- tuído com um ou mais substituintes selecionados do seguinte grupo substitu- inte A, R2 representa um grupo arila que pode ser substituído com um ou mais substituintes selecionados do seguinte grupo substituinte A, ou um anel heterocíclico aromático que pode ser substituído com um ou mais substituin- tes selecionados do seguinte grupo substituinte A, e o grupo substituinte A é um grupo consistindo em um átomo de halogênio, um grupo hidroxila, um grupo carboxila, um grupo sulfona, um grupo dimetilamino, um grupo meti- lamino, um grupo amino, um grupo nitro, um grupo alquila tendo 1 a 4 áto- mos de carbono que podem ser substituídos com um átomo de halogênio, um grupo alcóxi tendo 1 a 4 átomos de carbono que podem ser substituídos com um átomo de halogênio, um grupo alcóxi tendo 2 a 8 átomos de carbo- no que podem ser substituídos com um átomo de halogênio, um grupo alcóxi tendo 3 a 12 átomos de carbono que podem ser substituídos com um átomo de halogênio, e um grupo representado pela fórmula: -(CHaCH2O)n-F, em que η é um número inteiro de 4 a 10; ou o composto rotulado com um radio- nuclídeo, ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.
2. Composição para diagnóstico de uma doença relacionada à amilóide de acordo com a reivindicação 1, em que R1 na fórmula geral (I) representa um grupo 6-iodopiridin-3-ila, um grupo 6-fluoropiridin-3-ila, um grupo 6-hidroxipiridin-3-ila, um grupo 5-iodopiridin-2-ila, um grupo 5- fluoropiridin-2-ila, um grupo 5-hidroxipiridin-2-ila, um grupo 5-iodopiridin-3-ila, um grupo 5-fluoropiridin-3-ila, um grupo 5-hidroxipiridin-3-ila, um grupo 4- iodopiridin-2-ila, um grupo 4-fluoropiridin-2-ila, um grupo 4-hidroxipiridin-2-ila, um grupo 5-iodotiofen-2-ila, um grupo 5-fluorotiofen-2-ila, um grupo 5- hidroxitiofen-2-ila, um grupo 5-iodofuran-2-ila, um grupo 5-fluorofuran-2-ila, um grupo 5-hidroxifuran-2-ila, um grupo 5-aminotiofen-2-ila, um grupo 5- metilaminotiofen-2-ila, um grupo 5-dimetilaminotiofen-2-ila, um grupo 5- aminofuran-2-ila, um grupo 5-metilaminofuran-2-ila, um grupo 5- dimetilaminofuran-2-ila, um grupo tiazol-2-ila, um grupo 1H-imidazol-5-ila, um grupo 1 H-imidazol-2-ila, um grupo 6-(2-fluoroetil)piridin-3-ila, um grupo 6-(2- fluoroetóxi)piridin-3-ila, um grupo 6-[2-(2-fluoroetóxi)etóxi]piridin-3-ila, um grupo 6-{2-[2-(2-fluoroetóxi)etóxi]etóxi}piridin-3-ila, um grupo 5-(2- fluoroetil)tiofen-2-ila, um grupo 5-(2-fluoroetóxi)tiofen-2-ila, um grupo 5-[2-(2- fluoroetóxi)etóxi]tiofen-2-ila, um grupo 5-{2-[2-(2-fluoroetóxi)etóxi]etóxi}tiofen- - 2-ila, um grupo 5-(2-fluoroetil)furan-2-ila, um grupo 5-(2-fluoroetóxi)furan-2- ila, um grupo 5-[2-(2-fluoroetóxi)etóxi]furan-2-ila, um grupo 5-{2-[2-(2- fluoroetóxi)etóxi]etóxi}furan-2-ila, um grupo piridin-4-ila, um grupo piridin-3- ila, ou um grupo piridin-2-ila.
3. Composição para diagnóstico de uma doença relacionada à amilóide de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que R2 na fórmula geral (I) representa um grupo 4-aminofenila, um grupo 4-metilaminofenila, um gru- po 4-dimetilaminofenila, um grupo 4-hidroxifenila, um grupo 4-metoxifenila, um grupo 6-iodopiridin-3-ila, um grupo 6-fluoropiridin-3-ila, um grupo 6- hidroxipiridin-3-ila, um grupo 5-iodopiridin-2-ila, um grupo 5-fluoropiridin-2-ila, um grupo 5-hidroxipiridin-2-ila, um grupo 5-iodopiridin-3-ila, um grupo 5- fluoropiridin-3-ila, um grupo 5-hidroxipiridin-3-ila, um grupo 4-iodopiridin-2-ila, um grupo 4-fluoropiridin-2-ila, um grupo 4-hidroxipiridin-2-ila, um grupo 5- iodotiofen-2-ila, um grupo 5-fluorotiofen-2-ila, um grupo 5-hidroxitiofen-2-ila, um grupo 5-iodofuran-2-ila, um grupo 5-fluorofuran-2-ila, um grupo 5- hidroxifuran-2-ila, um grupo 5-aminotiofen-2-ila, um grupo 5 metilaminotio- fen-2-ila, um grupo 5-dimetilaminotiofen-2-ila, um grupo 5-aminofuran-2-ila, um grupo 5-metilaminofuran-2-ila, um grupo 5-dimetilaminofuran-2-ila, um grupo tiazol-2-ila, um grupo 1H-imidazol-5-ila, um grupo 1H-imidazol-2-ila, um grupo 6-(2-fluoroetil)piridin-3-ila, um grupo 6-(2-fluoroetóxi)piridin-3-ila, um grupo 6-[2-(2-fluoroetóxi)etóxi]piridin-3-ila, um grupo 6-{2-[2-(2- fluoroetóxi)etóxi]etóxi}piridin-3-ila, um grupo 5-(2-fluoroetil)tiofen-2-ila, um grupo 5-(2-fluoroetóxi)tiofen-2-ila, um grupo 5-[2-(2-fluoroetóxi)etóxi]tiofen-2- ila, um grupo 5-{2-[2-(2-fluoroetóxi)etóxi]etóxi}tiofen-2-ila, um grupo 5-(2- fluoroetil)furan-2-ila, um grupo 5-(2-fluoroetóxi)furan-2-ila, um grupo 5-[2-(2- fluoroetóxi)etóxi]furan-2-ila, um grupo 5-{2-[2-(2-fluoroetóxi)etóxi]etóxi}furan- -2-ila, um grupo piridin-4-ila, um grupo piridin-3-ila, ou um grupo piridin-2-ila.
4. Composição para diagnóstico de uma doença relacionada à amilóide de acordo com a reivindicação 1, em que R1 na fórmula geral (I) representa um grupo 6-iodopiridin-3-ila, um grupo 6-fluoropiridin-3-ila, um grupo 6-(2-fluoroetil)piridin-3-ila, um grupo 6-(2-fluoroetóxi)piridin-3-ila, um grupo 6-[2-(2-fluoroetóxi)etóxi]piridin-3-ila, um grupo 6-{2-[2-(2- fluoroetóxi)etóxi]etóxi}piridín-3-ila, um grupo 5-iodotiofen-2-ila, um grupo 5- fluorotiofen-2-ila, um grupo 5-(2-fluoroetil)tiofen-2-ila, um grupo 5-(2- fluoroetóxi)tiofen-2-ila, um grupo 5-[2-(2-fluoroetóxi)etóxi]tiofen-2-ila, um gru- po 5-{2-[2-(2-fluoroetóxi)etóxi]etóxi}tiofen-2-ila, um grupo 5-iodofuran-2-ila, um grupo 5-fluorofuran-2-ila, um grupo 5-(2-fluoroetil)furan-2-ila, um grupo 5- (2-fluoroetóxi)furan-2-ila, um grupo 5-[2-(2-fluoroetóxi)etóxi]furan-2-ila, ou um grupo 5-{2-[2-(2-fluoroetóxi)etóxi]etóxi}furan-2-ila, e R2 na fórmula geral (I) representa um grupo 5-aminotiofen-2-ila, um grupo 5-metilaminotiofen-2-ila, um grupo 5-dimetilaminotiofen-2-ila, um grupo 5-aminofuran-2-ila, um grupo -5-metilaminofuran-2-ila, um grupo 5-dimetilaminofuran-2-ila, um grupo tiazol- -2-ila, um grupo 1H-imidazol-5-ila, um grupo 1H-imidazol-2-ila, um grupo 4- aminofenila, um grupo 4-metilaminofenila, um grupo 4-dimetilaminofenila, um grupo 4-hidroxifenila, um grupo 4-metoxifenila, um grupo piridin-4-ila, um grupo piridin-3-ila, ou um grupo piridin-2-ila.
5. Composição para diagnóstico de uma doença relacionada à amilóide de acordo com a reivindicação 1, em que R1 na fórmula geral (I) representa um grupo 5-aminotiofen-2-ila, um grupo 5-metilaminotiofen-2-ila, um grupo 5-dimetilaminotiofen-2-ila, um grupo 5-aminofuran-2-ila, um grupo -5-metilaminofuran-2-ila, um grupo 5-dimetilaminofuran-2-ila, um grupo tiazol- -2-ila, um grupo 1 H-imidazol-5-ila, um grupo 1 H-imidazol-2-ila, um grupo piri- din-4-ila, um grupo piridin-3-ila, ou um grupo piridin-2-ila, e R2 na fórmula geral (I) representa um grupo 6-iodopiridin-3-ila, um grupo 6-fluoropiridin-3- ila, um grupo 6-(2-fluoroetil)piridin-3-ila, um grupo 6-(2-fluoroetóxi)piridin-3- ila, um grupo 6-[2-(2-fluoroetóxi)etóxi]piridin-3-ila, um grupo 6-{2-[2-(2- fluoroetóxi)etóxi]etóxi}piridin-3-ila, um grupo 5-iodotiofen-2-ila, um grupo 5- fluorotiofen-2-ila, um grupo 5-(2-fiuoroetil)tiofen-2-ila, um grupo 5-(2- fluoroetóxi)tiofen-2-ila, um grupo 5-[2-(2-fluoroetóxi)etóxi]tiofen-2-ila, um gru- po 5-{2-[2-(2-fluoroetóxi)etóxi]etóxi}tiofen-2-ila, um grupo 5-iodofuran-2-ila, um grupo 5-fluorofuran-2-ila, um grupo 5-(2-fluoroetil)furan-2-ila, um grupo 5- (2-fluoroetóxi)furan-2-ila, um grupo 5-[2-(2-fluoroetóxi)etóxi]furan-2-ila, ou um grupo 5-{2-[2-(2-fluoroetóxi)etóxi]etóxi}furan-2-ila.
6. Composição para diagnóstico de uma doença relacionada à amilóide de acordo com a reivindicação 1, em que R1 na fórmula geral (I) representa um grupo 6-hidroxipiridin-3-ila, um grupo 5-hidroxitiofen-2-ila, um grupo 5-hidroxifuran-2-ila, um grupo 6-(2-fluoroetóxi)piridin-3-ila, um grupo 6- [2-(2-fluoroetóxi)etóxi]piridin-3-ila, um grupo 6-{2-[2-(2- fluoroetóxi)etóxi]etóxi}piridin-3-ila, um grupo 5-(2-fluoroetóxi)tiofen-2-ila, um grupo 5-[2-(2-fluoroetóxi)etóxi]tiofen-2-ila, um grupo 5-{2-[2-(2- fluoroetóxi)etóxi]etóxi}tiofen-2-ila, um grupo 5-(2-fluoroetóxi)furan-2-ila, um grupo 5-[2-(2-fluoroetóxi)etóxi]furan-2-ila, ou um grupo 5-{2-[2-(2- fluoroetóxi)etóxi]etóxi}furan-2-ila, e R2 na fórmula geral (I) representa um grupo 5-metilaminotiofen-2-ila, um grupo 5-dimetilaminotiofen-2-ila, um grupo -5-metilaminofuran-2-ila, um grupo 5-dimetilaminofuran-2-ila, um grupo 4- metilaminofenila, ou um grupo 4-dimetilaminofenila.
7. Composição para diagnóstico de uma doença relacionada à amilóide de acordo com a reivindicação 1, em que R1 na fórmula geral (I) representa um grupo 5-metilaminotiofen-2-ila, um grupo 5- dimetilaminotiofen-2-ila, um grupo 5-metilaminofuran-2-ila, ou um grupo 5- dimetilaminofuran-2-ila, e R2 na fórmula geral (I) representa um grupo 6- hidroxipiridin-3-ila, um grupo 5-hidroxitiofen-2-ila, ou um grupo 5- hidroxifuran-2-ila.
8. Composição para diagnóstico de uma doença relacionada à amilóide de acordo com a reivindicação 1, em que R1 na fórmula geral (I) representa um grupo tienila em que um átomo de hidrogênio é substituído com um átomo de halogênio, e R2 na fórmula geral (I) representa um grupo fenila em que um átomo de hidrogênio é substituído com um grupo dimetila- mino ou um grupo metilamino.
9. Composição para diagnóstico de uma doença relacionada à amilóide de acordo com a reivindicação 1, em que R1 na fórmula geral (I) representa um grupo 5-iodotiofen-2-ila, e R2 na fórmula geral (I) representa um grupo 4-dimetilaminofenila ou um grupo 4-metilaminofenila.
10. Composição para diagnóstico de uma doença relacionada à amilóide de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, em que o radionuclídeo é um radionuclídeo de emissão de positron.
11. Composição para diagnóstico de uma doença relacionada à amilóide de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, em que o radionuclídeo é um radionuclídeo de emissão de raio □.
12. Composição para diagnóstico de uma doença relacionada à amilóide de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, em que a doença relacionada à amilóide é doença de Alzheimer.
13. Método para avaliação de um agente terapêutico ou profilático para uma doença relacionada à amilóide, compreendendo as etapas de admi- nistrar uma substância teste a um animal modelo de doença relacionada à ami- lóide, administrar a composição para diagnóstico de uma doença relacionada à amilóide de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12 ao animal mo- delo, e examinar uma distribuição ou uma quantidade do composto representa- do pela fórmula geral (I) contida no cérebro do animal modelo.
14. Método para avaliação de um agente terapêutico ou profiláti- co para uma doença relacionada à amilóide, compreendendo as etapas de administrar o agente terapêutico ou profilático para uma doença relacionada à amilóide a um animal modelo de doença relacionada à amilóide, adminis- trar a composição para diagnóstico de uma doença relacionada à amilóide de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12 ao animal modelo, e examinar uma distribuição ou uma quantidade do composto representado pela fórmula geral (I) contida no cérebro do animal modelo.
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