BRPI0713304A2 - antagonista de receptor il - 8 - Google Patents

Abstract

ANTAGONISTA DE RECEPTOR IL-8. Esta invenção se refere a um novo composto e composições destes, íteis no tratamento dos estados da doença mediada pela quimiocina, Interleucina -8 (IL-8).

Description

"ANTAGONISTA DE RECEPTOR IL-8"

Campo da Invenção

Esta invenção se refere a p-toluenossulfonato N-[4-cloro-2-hidróxi-3- (piperazina-1-sulfonil)fenil]-N'-(2-cloro-3-fluorofenil)uréia, composições farmacêuticas contendo este composto, e seu uso em tratamento de doenças mediadas por IL-8, GROa, GROβ, GROy, NAP-2, e ENA-78.

Antecedentes da Invenção

Muitos nomes diferentes têm sido aplicados à lnterleucina-8 (IL-8), tais como proteína ativadora/ neutrófilo atraente-1 (NAP-1), fator quimiotático de neutrófilo deri- vado de monócito (MDNCF), fator de ativação de neutrófilo (NAF)1 e fator quimiotático de linfócito de célula Τ. A interleucina-8 é um quimioatraente para neutrófilos, basófi- los, e um subgrupo de células T. É produzida por uma maioria de células nucleadas incluindo células macrófagas, fibroblastas, endoteliais e epiteliais expostas a TNF1 IL- 1 a, IL-Iyff ou LPS1 e por neutrófilos próprios quando exposta a LPS ou fatores quimiotá- ticos tal como FMLP.

GROct1 GROy?, GROy e NAP-2 da mesma forma pertencem à família de quimi- ocina a. Tal como IL-8, estas quimiocinas têm, da mesma forma, sido referidas por nomes diferentes. Por exemplo, GROct, β, y têm sido referidas como MGSAct, β e y respectivamente (Melanoma Growth Stimulating Activity). Todas as famílias das quimi- ocinas a as quais possuem o motivo ELR diretamente precedente e ao motivo CXC ligando-se ao receptor IL-8 β (CXCR2).

IL-8, GROct1 GROyff1 GROy1 NAP-2, e ENA-78 estimulam um número de funções in vitro. Todas têm sido mostradas terem propriedades quimioatraente para neutrófilos, ao mesmo tempo em que, IL-8 e GROct têm demonstrado atividade quimiotática basofílica e linfócito T. Além disso, IL-8 pode induzir a liberação de basófilos de ambos os indivíduos atópicos e normais. GRO-ct e IL-8 podem, além disso, induzir a liberação de enzima Iisos- somal e explosão respiratória de neutrófilos. IL-8 tem da mesma forma, sido mostrada au- mentar a expressão da superfície de Mac-I (CD11b/ CD18) em neutrófilos sem a síntese de proteína de novo. Isto pode contribuir para a adesão aumentada dos neutrófilos para células endoteliais vasculares. Muitas doenças conhecidas são caracterizadas por infiltração maci- ça de neutrófilo. Como IL-8, GROα, GROβ, GROy e NAP-2 promovem a acumulação e ati- vação de neutrófilos, estas quimiocinas têm sido implicada em uma faixa de largura de dis- túrbios inflamatórios crônicos e agudos incluindo artrite reumatóide e psoríase. Além disso, as quimiocinas ELR (aquelas contendo o motivo ELR de aminoácidos exatamente antes do motivo CXC) têm da mesma forma, sido implicadas em angiostasia.

In vitro, IL-8, GROct1 GROyff1 GROy e NAP-2 induzem mudança na forma de neutrófilo, quimiotaxia, liberação de grânulo, e explosão respiratória, por ligar-se a e receptores ativadores da sete-transmembrana, família ligada à proteína G1 particular- mente por ligar-se à receptores IL-8, mais notavelmente o receptor IL-8/ß (CXCR2). O desenvolvimento de antagonistas de molécula pequena de não peptídeo para membros desta família de receptor tem precedente. Em conseqüência, o receptor IL-8 representa um alvo promissor para o desenvolvimento de novos agentes anti-inflamatórios.

Resta uma necessidade para tratar, neste campo, dos compostos, os quais são capazes de ligarem-se aos receptores CXCR1 e/ ou CXCR2. Por esse motivo, as condições associadas com um aumento na produção de IL-8 (a qual é responsável pe- la quimiotaxia de neutrófilo e sub-grupos de células T no local inflamatório) benefician- do-se por compostos os quais são inibidores de ligação de receptor IL-8. Tais compos- tos são descritos em WO 2004/039775, Patente dos Estados Unidos número 6.180.675 e Patente dos Estados Unidos número 6.500.863.

Sumário da Invenção

A presente invenção se refere a p-toluenossulfonato N-[4-cloro-2-hidróxi-3- (piperazina-1-sulfonil)fenil]-N'-(2-cloro-3-fluorofenil)uréia (presente composto), e com- posições compreendendo o presente composto e um diluente ou portador farmaceuti- camente aceitável.

A presente invenção, da mesma forma, se refere a combinações compreen- dendo o presente composto e um ou mais ingredientes terapêuticos adicionais.

A presente invenção, além disso, se refere a um método para tratar uma doen- ça mediada por quimiocina na qual a quimiocina é uma a qual se liga a um receptor IL- 8 a ou β, e qualquer método compreende administrar uma quantidade efetiva do pre- sente composto.

A presente invenção da mesma forma se refere a um método inibindo a ligação de IL-8 a seus receptores em um mamífero, particularmente em um humano, com ne- cessidade deste o qual compreende administrar uma quantidade efetiva do presente composto.

Descrição Detalhada da Invenção

A presente invenção se refere a p-toluenossulfonato N-[4-cloro-2-hidróxi-3- (piperazina-1-sulfonil)fenil]-N'-(2-cloro-3-fluorofenil)uréia e composições compreenden- do o presente composto e um diluente ou portador farmaceuticamente aceitável.

A presente invenção da mesma forma se refere às combinações compreen- dendo o presente composto e um ou mais ingredientes terapêuticos adicionais.

A presente invenção, além disso, se refere a um método de tratamento de uma doença mediada por quimiocina no qual a quimiocina é uma a qual se liga a um receptor IL- 8 a ou β, e qualquer método compreende administrar uma quantidade efetiva do presente composto. A presente invenção da mesma forma se refere a um método inibindo a ligação de IL-8 a seus receptores em um mamífero, particularmente em um humano, com ne- cessidade deste o qual compreende administrar uma quantidade efetiva do presente composto.

A presente invenção, além disso, se refere aos métodos de tratamento de as- ma, doença pulmonar obstrutiva crônica e doença respiratória de adulto. Particular- mente, a presente invenção se refere a tratamento de doença pulmonar obstrutiva em- pregando o presente composto.

MÉTODO DE PREPARAÇÃO N-[4-chloro-2-hvdroxy-3-fpipcrazine-1-sulfotiyDphenyl]-N'-(2-chloro-3- fluorophenyl)urea p-toluenesiilfonate

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Preparação do Composto 1

3.4-dicloroanilina (100 g) foi dissolvida em tetrabutilmetilamina (TBME) (660 mL) e resfriada a 10-15 °C. Hidróxido de sódio (94 g de uma solução aquosa a 30%) foi adiciona- do, e a solução agitada vigorosamente por meio de agitador mecânico. Cloreto de trimetila- cetila (84 mL) foi adicionado em uma tal taxa de modo a manter a temperatura interna abaixo de 35 °C. Quando a adição foi completada (10-15 minutos), a mistura foi manti- da a 30-35°C durante cerca de 30 minutos, e em seguida resfriada a 0-5°C durante 30-40 minutos. A mistura de reação foi mantida a 05 0C durante 1 durante, e em segui- da filtrada, primeiro enxaguada com 90:10 de água/ metanol (400 mL) e em seguida água (600 mL.). Secagem a 50-55°C a vácuo produto oferecido como cristais quase bran- co. Uma produção de 127 g foi obtida.

Preparação do Composto 2

Uma solução do Composto 1 (300 mL) foi resfriada a -50--40°C sob uma atmos- fera inerte de nitrogênio. N-Butil lítio (2,5M em hexanos, 179 mL) foi adicionada em uma tal taxa de modo a manter a temperatura interna da solução entre -45 --30°C (adição por cerca de 15 — 30 minutos). A solução foi mantida a cerca de -35 --25°C até que HPLC indicou que a reação inicial foi completada. A solução foi em seguida re- resfriada a -45 --40°C, e dióxido de enxofre (-16,9 g) foi borbulhado através da so- lução, mantendo a temperatura interna abaixo de aproximadamente -14 °C, até que a solução foi acídica. Quando a reação foi completada, a mistura foi aquecida a -10 — 0°C. Começando a -2 — 3°C, cloreto de sulfurila (25.2 mL) foi em seguida adicionada gota a gota à solução de tetraidrofurano durante 5 — 15 minutos, mantendo a tempera- tura abaixo de aproximadamente 22 °C. Após 5 minutos, confirmada a conclusão da reação de HPLC, ao mesmo tempo que, a solução foi mantida em torno de 10 — 15°C.

A mistura foi permutada por solvente e em σ,σ,σ-trifluorotolueno sob pressão reduzida, filtrada, parcialmente concentrada a vácuo (a ~ 100 mL), seguida pela adição de diclo- rometano (350 mL). A esta mistura foi adicionada uma solução de piperazina (61.2 g) em diclorometano (625 mL) a temperatura ambiente gota a gota, mantendo a tempera- tura interna da solução a 15 — 27 0C (adição por 2 horas). A reação foi mantida a 20 — 24°C até que completa. A mistura foi lavada com água deionizada (200 mL), a ca- 25 mada orgânica concentrada, seguida pela adição de heptano (450 mL). O produto (70.5 g) foi isolado por filtragem, lavado com heptano (50-100 mL), e seco a vácuo a 50-55°C.

Preparação do Composto 3

Composto 2 (30 g) foi adicionado a -16% (peso/peso em água) ácido sulfúrico (300 mL). A mistura resultante foi aquecida ao refluxo a 99-103°C durante - 6 horas. Na conclusão da reação, a solução foi resfriada a 40-50°C, em seguida concentrada a -60 mL sob pressão reduzida. Acetonitrilo (225 mL) foi adicionado e suspensão resul- tante agitada a 20-25 °C durante - 1 hora. O produto foi isolado por filtragem, lavado com acetonitrilo (135 mL) e seco a 45-50 °C sob vácuo. Uma produção de 33,34 g foi obtida.

Preparação do Composto 4

Composto 3 (20g) foi adicionado à água deionizada (200 mL). O pH da solu- ção resultante foi ajustado a 6,5 — 7,0 por adição de 50% hidróxido de sódio aquoso 6,35 mL) ao mesmo tempo em que mantendo a temperatura interna entre 20 — 30 °C. Em seguida uma solução de di-terc-butil dicarbonato (8,9 g) em acetato de etila (enxágüe de 80 mL + 20 mL) foi adicionada. O pH da mistura resultante foi ajustado a 6,8 — 7,0 por adição de 50% de hidróxido de sódio aquoso (2,45 mL) ao mesmo tempo em que mantendo a temperatura interna entre 20 — 30 °C. Na conclusão da reação, a solução da reação é filtrada para remover a pequena quantidade de precipitado. As duas camadas do filtrado foram separadas, e a camada aquosa foi extraída com aceta- to de etila (140 mL). As camadas de acetato de etila combinadas são lavadas com á- gua (40 mL) e concentradas a 100 mL. O heptano (100 mL) foi adicionado e a suspen- são resultante foi concentrada a 60 mL. Este processo foi repetido mais uma vez. O heptano (140 mL) foi em seguida adicionado, e a suspensão resultante foi agitada a 20 - 25 0C durante ~ 1 hora. O produto foi isolado por filtragem, lavado com heptano (80 mL) e seco a 40 — 45 0C sob vácuo. Uma produção de 15,3 g foi obtida.

Preparação do Composto 5

Composto 4 (10 g) foi adicionado à dimetilformamida (20 mL) e acetonitrilo (80 mL) isocianato 2-Cloro-3-fluorofenil (4.77 g) foi adicionado ao mesmo tempo em que mantendo a temperatura interna entre 20 — 30 °C, seguido por enxágüe de 10 mL de acetonitrilo. A mistura resultante foi agitada a 20-25 0C durante ~ 2 horas. Na conclusão da reação, metanol (50 mL) foi adicionado. A suspensão resultante foi agitada a 20-25 0C durante -10 minutos. A água deionizada (150 mL) foi adicionada, e a suspensão resultante agi- tada a 20-25 0C durante ~1 hora. O produto foi isolado por filtragem, lavado com água deionizada (100 mL) e metanol (15-20 mL), e em seguida seco a 40-45 0C sob vácuo. Uma produção de 14.,5g foi obtida.

Preparação do Composto 6 — Procedimento 1

O composto 5 (50 g) foi dissolvido em tetraidrofurano (THF, 200 mL) e aquecido a 33-37 0C e mantido a 33-37 0C. Em outro reator, uma solução de acetonitrilo (250 mL), THF (50 mL) e monoidrato de ácido p-toluenossulfônico (43.9 g) foi preparada. A solu- ção resultante foi aquecida a 33-37 °C e mantida a 33-37 0C. A solução de ácido p- toluenossulfônico foi filtrada e transferida no reator contendo o Composto 5 e THF ao mesmo tempo em que mantendo a temperatura a 33-37 °C. Após, o material de partida foi consumido, sementes micronizadas do produto (0.5 g) foram carregadas em quanti- dade mínima de acetonitrilo (5 mL). A mistura de reação foi em seguida aquecida a 53- 57 °C durante ~ 40 minutos, e mantida nessa temperatura durante pelo menos 4 horas. A reação foi resfriada a 0-5 °C, o produto isolado por filtragem, lavado com acetonitrilo (250 mL), e seco a vácuo a 55-60 °C. Uma produção de 52,24g foi obtida. Preparação do Composto 6 — Procedimento 2 O composto 5 (500 g) foi carregado no reator 1 seguido pelo acetonitrilo (CAN, 3750 mL) e tetraidrofurano (THF, 1250 mL). A solução foi em seguida aquecida a 60-65 °C e uma vez que uma solução clara é observada, uma filtragem por purificação é executada no reator 2. No reator 1, o monoidrato de ácido p-toluenossulfônico (TsOH^H2O, 439 g) é adicionado seguido por ACN (750 mL) e THF (250 mL). A mistura foi aquecida a 40-45 °C e uma vez que uma solução clara foi observada, a filtragem por purificação foi exe- cutada, adicionada a solução no reator (contendo a solução do material de partida) e mantendo a temperatura no reator 2 a 50-60°C. A mistura foi aquecida ao refluxo, e mantida a 70-80°C até que a reação foi completada. ~3500 mL de solvente foram re- movidos por destilação atmosférica. O reator foi em seguida carregado com 2,5 L água seguida por 4 L de ACN, e a temperatura ajustada a 70-80°C. Após dissolução ser observada, a solução resultante foi resfriada a 64-68°C. Após 5- 10 minutos, sementes do produto moído (5 g) foram adicionadas em uma quantidade mínima de acetonitrilo, e mantida a 64-68 °C durante uma hora. A mistura foi resfriada a 0-5 °C durante 2 horas e mantida a 0-5 °C durante -30 minutos antes isolando o pro- duto por filtragem. O produto isolado foi lavado com 2,5 L de acetonitrilo, e seco a vá- cuo a 50-60 °C. Uma produção de 480 g foi obtida.

Métodos de Tratamento

O presente composto é útil na fabricação de um medicamento para o tratamento terapêutico ou profilático de qualquer estado de doença em um humano, ou outro mamífero, o qual é exacerbado ou causado por produção de citocina IL-8 desre- gulada ou excessiva de tal célula do mamífero, tal como, mas não limitada a, monóci- tos e/ ou macrófagos, ou outras quimiocinas as quais se liga ao receptor IL-8 a ou β, da mesma forma referida como o receptor tipo I ou tipo II.

Por conseguinte, a presente invenção fornece um método de tratamento de uma doença mediada por quimiocina, na qual a quimiocina é uma a qual se liga a um receptor IL-8 a ou β e qualquer método compreende administrar uma quantidade efeti- va do presente composto. Particularmente, as quimiocinas são IL-8, GROα, GROβ, GROy, NAP-2 ou ENA-78.

O presente composto é administrado em uma quantidade suficiente para inibir a função de citocina, particularmente IL-8, GROa, GRO0, GROy, NAP-2 ou ENA-78, tal que são biologicamente sub-regulados para níveis normais de função fisiológica, ou em alguns casos para níveis sub-normais, de forma que melhora o estado da doença. Os níveis anormais de IL-8, GROα, GROβ, GROy, NAP-2 ou ENA-78, por exemplo, no contexto da presente invenção, constituem: (i) níveis de IL-8 livre maior do que ou igual a 1 picograma por mL; (ii) qualquer célula a IL-8, GROα, GROβ, GROy, NAP-2 ou ENA-78 acima dos níveis fisiológicos normais; ou (iii) a presença de IL-8, GROα, GROB, GROy1 NAP-2 ou ΕΝΑ-78 acima dos níveis basais em células ou tecidos em que IL-8, GROct, GROyff1 GROy1 NAP-2 ou ENA-78 respectivamente, é produzido.

Existem muitos estados da doença em que a produção de IL-8 desregulada ou excessiva é implicada em exacerbar e/ ou causando a doença. As doenças mediadas por quimiocina incluem psoríase, dermatite atópica, ósteo-artrite, artrite reumatóide, asma, doença pulmonar obstrutiva crônica, síndrome da angústia respiratória de adul- to, doença inflamatória do intestino, doença de Crohn, colite ulcerativa, acidente vascu- lar cerebral, choque séptico, choque endotóxico, sepse gram-negativa, síndrome de choque tóxico, lesão de reperfusão cardíaca e renal, glomerulonefrite, trombose, rea- ção enxerto versus hospedeiro, doença de Alzheimer, rejeições de aloenxertos, malá- ria, restenose, angiogênese, aterosclerose, osteoporose, gengivite, doenças virais tais como liberação de célula-tronco hematopoética indesejada ou rinovírus.

Particularmente, o composto da presente invenção é útil no tratamento de as- ma, doença pulmonar obstrutiva crônica e síndrome da angústia respiratória de adulto. Preferivelmente, o presente composto é útil para tratamento de doença pulmonar obs- trutiva crônica.

As doenças da presente invenção são principalmente caracterizada por infiltra- ção maciça de neutrófilo, infiltragem de célula T, ou crescimento neovascular, e são associadas com produção aumentada de IL-8, GROc1 GROyff1 GROy1 NAP-2 ou ENA-78 que é responsável pela quimiotaxia de neutrófilos no local inflamatório ou o crescimento direcional de células endoteliais. Em contraste com outras citocinas infla- matórias (IL-1, TNF, e IL-6), IL-8, GROct1 GROp, GROy1 NAP-2 ou ENA-78 têm a única propriedade de quimiotaxia de neutrófilo promotor, liberação de enzima incluindo mas não limitada a liberação de elastase assim como ativação e produção de superóxido. As σ-quimiocinas, mas particularmente, GROa, GRO/?, GROy, NAP-2 ou ENA-78, tra- balhando através do receptor IL-8 tipo I ou II, podem promover a neovascularização de tumores por promover o crescimento direcional de células endoteliais. Por esse motivo, a inibição de quimiotaxia induzida por IL-8 ou ativação levaria a uma redução direta na infiltragem de neutrófilo.

A evidência recente, da mesma forma, implica no papel das quimiocinas no tra- tamento de infecções por HIV, Littleman e outros, Nature 381. pp. 661 (1996) e Koup e outros, Natureza 381. pp. 667 (1996).

A presente evidência, da mesma forma, indica o uso de inibidores de IL-8 no tratamento de aterosclerose. A primeira referência, Boisvert e outros, J. Clin. Invest1 1998, 101:353-363 mostra, através de transplante de medula óssea, que a ausência de receptores de IL-8 em células-tronco (e, por conseqüente, nos monócitos/ macrófagos) levam a uma redução no desenvolvimento de placas ateroscleróticas em camundongos com deficiência receptor de LDL.

A presente invenção, da mesma forma, fornece meios de tratamento de lesões do CNS. Tal tratamento é fornecido em uma apresentação aguda, assim como para prevenção de lesão naqueles indivíduos julgado suscetível a lesão.

As lesões no CNS como definidas aqui incluem ambos, trauma aberto ou por penetração da cabeça, tal como por cirurgia, ou uma lesão por trauma fechado da ca- beça, tal como por uma lesão na região da cabeça. Da mesma forma incluída nesta definição está acidente vascular cerebral isquêmico, particularmente na área do cérebro.

O acidente vascular cerebral isquêmico pode ser definido como um distúrbio neuro- lógico focai que resulta de fornecimento sangüíneo insuficiente para uma área particular do cérebro, geralmente como conseqüência de um êmbolo, trombina, ou fechamento ateroma- toso local do vaso sangüíneo. O papel das citocinas inflamatóras nesta área tem sido emer- gente e a presente invenção fornece meios para o tratamento potencial destas lesões. O tratamento relativamente pequeno, para uma lesão aguda tal como estas tem sido disponível.

O TNF-σ é uma citocina com ações pró-inflamatórias, incluindo expressão molecu- lar por adesão de leucócito endotelial. Os leucócitos infiltrados nas lesões cerebrais isquê- micas e em conseqüência os compostos os quais inibem ou diminuem os níveis de TNF seriam úteis para tratamento de lesão cerebral isquêmica. Veja See Liu e outros, Stroke, Vol. 25., No. 7, pp. 1481-88 (1994) cuja descrição é incorporada aqui por refêrencia.

Modelos de lesões fechada da cabeça e tratamento com agentes 5-LO/CO misturados é discutido em Shohami e outros, J. of Vaisc & Clinicai Phvsioloqy and Pharmacoloqy. Vol. 3, No. 2, pp. 99-107 (1992). O tratamento o qual reduz a formação de edema foi encontrado para melhorar o resultado funcional naquelas animais tratados.

O presente composto é administrado em uma quantidade suficiente para inibir IL-8, ligando se à receptores IL-8 alfa ou beta, de ligação a estes receptores, tal como evi- denciado por uma redução em quimiotaxia de neutrófilo e ativação. A descoberta que o pre- sente composto é um inibidor de ligação de IL-8 é com base nos efeitos do presente com- posto nos ensaios.

Como empregado aqui, o termo "doença mediada por IL-8 ou estado da doen- ça" se refere a qualquer e todos os estados da doença no qual IL-8, GROa, GRO/?, GROy, NAP-2 ou ENA-78 desempenham um papel, também por produção de IL-8, GROa, GROP, GROy, NAP-2 ou ENA-78 próprios, ou por IL-8, GROa, GROp, GROy, NAP-2 ou ENA-78 causando outra monocina a ser liberada, tal como, mas não limitada a IL-1, IL- 6 ou TNF. Um estado de doença no qual, por exemplo, IL-1 é um componente principal, e cuja produção ou ação é exacerbada ou secretada em resposta a IL-8, deveria por esse motivo ser considerado um estado de doença mediado por IL-8.

Como empregado aqui, o termo "doença mediada por quimiocina ou estado da do- ença" se refere a qualquer e todos os estados da doença os quais se ligam a um receptor IL-8 a ou β desempenhando um papel, tal como, mas não limitado a IL-8, GRO-σ, GRO-/?, GROy, NAP-2 ou ENA-78. Isto incluiria um estado de doença no qual, IL-8 desempenha um papel, também por produção de IL-8 propriamente dito ou por IL-8 causando outra monocina para ser liberado, tal como, mas não limitado a IL-1, IL-6 ou TNF. Um estado de doença em que, por exemplo, IL-1 é um componente principal, e cuja produção ou ação, é e- xacerbada ou secretada em resposta a IL-8, deveria por esse motivo ser considerado um estado da doença mediado por IL-8.

Como empregado aqui, o termo "citocina" se refere a qualquer polipeptídeo secre- tado que afeta as funções de células e é uma molécula a qual modula interações entre as células na resposta imune, inflamatória ou hematopoética. Uma citocina inclui, mas não é limitada a, monocinas e linfocinas, diferente de quais células as produzem. Por e- xemplo, uma monocina é de modo geral referida como sendo produzida e secretada por uma célula molecular, tal como um macrófago e/ ou monócito. Muitas outras célu- las de algum modo, da mesma forma produzem monocinas, tais como células extermi- nadoras naturais, fibroblastos, basófilos, neutrófilos, células endoteliais, astrócitos no cérebro , células estromais da medúla óssea, ceratinócitos epiderais e B-linfócitos. Os linfocinas são de modo geral referidos como sendo produzidos por células dos linfóci- tos. Os exemplos de citocinas incluem, mas não estão limitados a, lnterleucina-1 (IL-1), lnterleucina-6 (IL-6), lnterleucina-8 (IL-8), Fator de Necrose Tumoral-alfa (TNF-σ) e Fator de Necrose Tumoral beta (TNF-/ß).

Como empregado aqui, o termo "quimiocina" se refere a qualquer polipeptídeo secretado que afeta as funções de células e é uma molécula a qual modula as intera- ções entre as células na resposta imune, inflamatória ou hematopoética, similar ao termo "citocina" acima. A quimiocina é principalmente secretada através de transmem- branas de célula e causa quimiotaxia e ativação de glóbulos brancos específicos e Ieu- cócitos, neutrófilos, monócitos, macrófagos, células T, células B, células endoteliais e células do músculo liso. Os exemplos de quimiocinas incluem, mas não estão limitados a IL-8, GRO-σ, GRO-jff, GRO-y, NAP-2, ENA-78, IP-10, ΜΙΡ-1σ, MIP-0, PF4, e MCP 1, 2, e 3.

A fim de usar o presente composto em terapia, deve normalmente ser formula- do em uma composição farmacêutica de acordo com prática farmacêutica padrão. Esta invenção, por esse motivo, da mesma forma se refere a uma composição farmacêutica compreendendo uma quantidade efetiva, não tóxica do presente composto e um diluen- te ou portador farmaceuticamente aceitável.

O presente composto e as composições farmacêuticas incorporando desta maneira pode convenientemente ser adminsitrado por quais das rotinas convencional- mente empregadas para administração medicamentosa, por exemplo, oralmente, topi- camente, parenteralmente ou por inalação. O presente composto pode ser adminsitra- do em formas de dosagem convencionais preparadas por combinar o presente com- posto com portadores farmacêuticos padrões de acordo com procedures conventionais. O presente composto pode, da mesma forma, ser administrado em dosagem conven- cionais em combinação com um conhecido segundo composto terapeuticamente ativo. Estes procedimentos podem envolvem mistura, granulação e comprimindo ou dissol- vendo os ingredientes como adequado para a preparação desejada. Deve ser observa- do que a forma e caráter do diluente ou caráter farmaceuticamente aceitável é ditada pela quantidade do ingrediente ativo com o qual é para ser combinado, a rotina de ad- ministração e outras variáveis bem conhecidas. O portador (s) deve ser "aceitável" no sentido de estar compatível com outros ingredientes da formulação e não danoso para o recipiente destes.

O portador farmacêutico empregado pode ser, por exemplo, também um sólido ou líquido. Os exemplares de portadores sólidos são lactose, argila branca, sacarose, talco, gelatina, ágar, pectina, acácia, estearato de magnésio, ácido esteárico e outros mais. Os exemplares de portadores líquidos são xarope, óleo de amendoim, azeite de oliva, água e outros mais. Similarmente, o portador ou diluente pode incluir material de retardamento bem conhecido para a técnica, tal como mono-estearato de glicerila ou diestearato de glicerila sozinho ou com uma cera.

Uma variedade de largura de formas farmacêuticas pode ser empregada. Des- te modo, se um portador sólido é empregado, a preparação pode ser tabletada, colo- cada em uma cápsula de gelatina dura em pó ou forma de pélete ou na forma de uma pastilha ou lozango. A quantidade de portador sólido variará amplamente, mas preferi- velmente será de cerca de 25mg a cerca de 1g. Quando um portador líquido é empre- gado, a preparação será na forma de um xarope, emulsão, cápsula de gelatina macia, líquido injetável estéril tal como uma suspensão líquida não aquosa ou ampola.

O presente composto pode ser administrado topicamente, que é por adminis- tração não sistêmica. Isto inclui a aplicação do presente composto externamente a ca- vidade bucal e epiderme e a instilação de um tal composto no ouvido, olho e nariz, tal que o composto não está significantemente entrar na circulação sangüínea. Em con- traste, a administração sistêmica se refere uma administração oral, intravenosa, intra- peritoneal e intramuscular.

As formulações adequadas para administração tópica incluem preparações li- quidas ou semi-líquidas adequadas para penetração através da pele no local da infla- mação tal como Iinimentos1 loções, cremes, ungüentos ou pastas, e gotas adequadas administrar ao olho, ouvido ou nariz. O ingrediente ativo pode compreender, adminis- tração tópica, de 0,001% a 10% de peso/peso, por exemplo de 1% a 2% em peso da formulação. Pode de algum modo compreender tanto 10% de peso/peso, mas preferi- velmente compreenderá menos do que 5% de peso/peso, mais preferivelmente de 0,1% a 1% de peso/peso da formulação.

As loções de acordo com a presente invenção incluem aquelas adequadas pa- ra aplicação na pele ou olho. Um loção para olho pode compreender uma solução a- quosa estéril opcionalmente contendo um bactericida e pode ser preparado por méto- dos similares àquelas para a preparação de gotas. As loções ou Iinimentos para apli- cação na pele podem, da mesma forma, incluir um agente para ativar a secagem e pa- ra refrescar a pele, tal como um álcool ou acetona, e/ ou a umectante tal como glicerol ou um óleo tal como óleo de rícino ou óleo de amendoim.

Cremes, ungüentos ou pastas de acordo com a presente invenção são formu- lações semi-sólidas do ingrediente ativo para aplicação externa. Eles podem ser fabri- cados por misturar o ingrediente ativo em forma pulverizada ou dividido finamente, so- zinho ou em solução ou suspensão em fluído aquoso ou não aquoso, com a adição de maquinario adequado, com uma base oleosa ou não oleosa. A base pode compreender hidrocarbonetos tais como parafina líquida, dura ou macia, glicerol, cera de abelha, um sabão metálico; uma mucilagem; um óleo de origem natural tal como de amêndoa, de milho, de amendoim, de rícino ou azeite de oliva; de Ianolina a ou seus derivados ou um ácido graxo tal como ácido oléico ou estérico junto com um álcool tal como propile- no glicol ou um macrogel. A formulação pode incorporar qualquer agente tensoativo adequado tal como um tensoativo aniônico, catiônico ou não iônico tal como um éster sorbitano ou um polioxietileno derivado destes. Agentes de suspensão tais como go- mas naturais, derivados de celulose ou materiais inorgânicos tais como sílicas salicá- ceas, e outros ingredientes tais como lanolina, podem da mesma forma ser incluídas.

As gotas de acordo com a presente invenção podem compreender soluções oleo- sas ou aquosa estéril ou suspensões e podem ser preparadas por dissolver o ingrediente ativo em uma solução aquosa adequado de um agente bactericida e/ ou fungicida e/ ou qualquer outro preservativo adequado, e preferivelmente incluindo um agente tensoativo. A solução resultante pode em seguida ser purificada por filtragem, transferida para um recipi- ente adequado a qual é seguida selada e esterilizada por autoclavar ou manter a 98-100°C durante metade de uma hora. Alternativamente, a solução pode ser esterilizada por filtragem e transferida para o recipiente por uma técnica asséptica. Os exemplos de agentes bacteri- cidas e fungicidas adequados para inclusão nas gotas são nitrato fenilmercúrico ou a- cetato (0,002%), cloreto de benzalcônio (0,01%) e acetato de cloroexidina (0,01%). Os solventes adequados para a preparação de uma solução oleosa incluem glicerol, álcool diluído e propileno glicol.

O presente composto pode ser administrado parenteralmente, que é por adminis- tração intravenos, intramuscular, subcutânea, intranasal, intrarretal, intravaginal ou in- traperitoneal. As formas de dosagem adequadas para tal administração pode ser pre- parada por técnicas convencionais. O presente composto pode da mesma forma se administrado por inalação, que é por administração inalação oral ou intranasal. As for- mas de dosagem adequadas para tal administração, tal como uma formulação de aero- sol ou inalador com dosímetro, pode ser preparado por técnicas convencionais.

Para todos os métodos do uso descrito aqui para o presente composto, o regime de dosagem oral por dia será preferivelmente de cerca de 0,01 a cerca de 80 mg/ kg do peso corporal total. O regime de dosagem parenteral por dia de cerca de 0,001 a cerca de 80 mg/ kg do peso corporal total. O regime de dosagem tópica por dia será preferivelmente de 0,1 mg a 150 mg, administrado de uma a quatro, preferivelmente de duas a três vezes por dia. O regime de dosagem por inalação por dia será preferivelmente de cerca de 0,01 mg/ kg a cerca de 1 mg/ kg por dia. Deve, da mesma forma, ser reconhecido por al- guém de versatilidade na técnica que a ótima quantidade e espaçamento de dosagens individuais do presente composto serão determinados pela natureza e extensão da condição sendo tratada, a forma, a rotina e o local da administração, e o paciente par- ticular sendo tratado, e que tais ótimas podem ser determinadas por técnicas conven- cionais. Deve, da mesma forma, ser observado por alguém de versatilidade na técnica que o curso ótimo de tratamento, isto é, o número de doses do presente composto da- da por dia durante um número definido de dias, pode ser verificado por aqueles versa- dos na técnica empregando o curso convencional de testes determinados no tratamento.

Combinações:

O presente composto e formulações farmacêuticas de acordo com a invenção podem ser empregados em combinação com ou inclui um ou mais outros agentes tera- pêuticos, por exemplo, selecionado de agentes anti-inflamatórios, agentes anticolinér- gicos (particularmente um antagonista de receptor de M1/ M2/ M3), agonistas adrenoreceptores, agentes anti-infecciosos, tais como antibióticos, antivirais, ou anti- histaminas. A invenção deste modo fornece, em um outro aspecto, uma combinação compreendendo o presente composto ou derivado fisiologicamente funcional do pre- sente composto junto com um ou mais outros agentes terapeuticamente ativos, por exemplo, selecionados de um agente anti-inflamatório, tal como um corticosteróide ou um NSAID, um agente anticolinérgico, um agonista β2-adrenoreceptor, um agente anti- infeccioso, tal como um antibiótico ou um antiviral, ou uma anti-histamina. Uma modali- dade da invenção abrange as combinações compreendendo o presente composto ou derivado fisiologicamente funcional destes junto com um agonista B2-adrenoreceptor, e/ ou um anticolinérgico, e/ ou um inibidor PDE-4, e/ ou uma anti-histamina.

Deve ser claro para uma pessoa versada na técnica que, como adequado, o outro ingrediente(s) terapêutico pode ser empregado na forma de sais, por exemplo como metal de álcali ou sais de amina ou como sais de adição de ácido, ou pró- fármacos, ou como ésteres, por exemplo ésteres de alquila mais baixo, ou como solva- tos, por exemplo hidratos para otimizar a atividade e/ ou estabilidade e/ ou característi- cas físicas, tal como solubilidade, do ingrediente terapêutico. Deve ser claro, da mesma forma que, como adequado, os ingredientes terapêuticos podem ser empregados na forma opticamente pura.

Em uma modalidade, a invenção abrange uma combinação compreendendo o presente composto junto com agonistas B2-adrenoreceptores. Os exemplos de agonistas B2-adrenoreceptores incluem salmeterol (o qual pode ser um racemato ou um enantiômero único tal como o enantiômero-R), salbutamol (o qual pode ser um racemato ou um enan- tiômero único tal como o enantiômero-R), formoterol (o qual pode ser um racemato ou um diastereômero único tal como o diastereômero R,R), salmefamol, fenoterol, carmoterol, etanterol, naminterol, clenbuterol, pirbuterol, flerbuterol, reproterol, bambuterol, indaca- terol, terbutalina e sais destes, por exemplo o sal de xinafoato (1 -hidróxi-2- naftalenocarboxilato) de salmeterol, o sal de sulfato ou base livre de salbutamol ou o sal de fumarato de formoterol. Em uma modalidade os agonistas B2-adrenoreceptores são agonistas B2-adrenoreceptores de ação longa, por exemplo, compostos os quais fornecem broncodila- tação efetiva durante cerca de 12 horas ou por mais tempo. Outros agonistas β2- adrenoreceptores incluem aqueles descritos em W02002/066422, W02002/070490, W02002/076933, W02003/024439, W02003/072539, W02003/091204, W02004/016578, W02004/022547, W02004/037807, W02004/037773, W02004/037768, W02004/039762, W02004/039766, W02001/42193 e W02003/042160.

Outros exemplos de agonista B2-adrenoreceptor incluem:

3-(4-{[6-({(2R)-2-hidróxi-2-[4-hidróxi-3- hidroximetil)fenil]etil}amino)hexil]oxi}butil)benzenosulfonamida;

3-(3-{[7-({(2R)-2-hidróxi-2-[4-hidróxi-3-hidroximetil)fenil]etil}- amino)heptil]oxi}propril)benzenosulfonamida;

4-{(1R)-2-[(6-{2-[(2,6-diclorobenzil)oxi]etóxi}hexil)amino]-1-hidroxietil}-2- (hidroximetil)fenol;

4-{(1 R)-2-[(6-{4-[3-(ciclopentilsulfonil)fenil]butóxi}hexil)amino]-1-hidroxietil}-2- (hidroximetil)fenol;

N-{2-hidroxil-5-[(1 R)-1-hidróxi-2-[[2-4-[[(2R)-2-hidróxi-2- feniletil]amino]fenil]etil]amino]etil]fenil]formamida;

N-2{2-[4-(3-fenil-4-metoxifenil)aminofenil]etil}-2-hidróxi-2-(8-hidróxi-2(1H)- quinolinona-5-il)etilamina; e

5-[(R)-2-(2-{4-[4-(2-amino-2-metil-propóxi)-fenilamino] -fenil} -etilamino)-1 - hidróxi-etil]-8-hidróxi-1H-quinolina-2-ona.

O agonista β2-adrenoreceptor pode ser na forma de sal formado com um ácido far- maceuticamente aceitável selecionado de ácido fenilbenzóico 4 e sulfúrico, hidroclórico, fumárico, hidroxinaftóico (por exemplo, 1- ou 3-hidróxi-2-naftóico), cinâmico, cinâmico substituído, trifenilacético, sulfâmico, sulfanílico, naftalenoacrílico, benzóico, 4- metoxibenzóico, 2- ou 4-hidroxibenzóico, 4-clorobenzóico.

Agentes anti-inflamatórios adequados incluem corticosteróides. Os exemplos de corticosteróides os quais podem ser empregados em combinação com os compos- tos da invenção são aqueles corticosteróides inalados e orais e suas pró-drogas as quais têm atividade anti-inflamatória.

Os exemplos incluem metil prednisolona, prednisolona, dexametasona, propionato de fluticasona, éster de S fluorometila de 6ff,9a-difluoro-11β-hidróxi-16a-metil-17a-[(4-metil- 1,3-tiazol-5-carbonil)oxi]-3-oxo-androsta-1,4-dieno-17β-ácido carbotióico, éster de S fluoro- metila de 6a,9a-difluoro-17a-[(2-furanilcarbonil)oxi]-11βhidróxi-16a-metil-17a-[(4-metil-3- oxo-androsta-1,4-dieno-17β-ácido carbotióico (furoate de fluticasona), éster de S-(2-oxo- tetraidro-furano-3S-il) de 6a,9a-difluoro-11β-hidróxi-16β-metil-3-oxo-17a- propionilóxi- androsta-1,4-dieno-17β-ácido carbotióico, éster de S cianometila de 6a,9a-difluoro-11β- hidróxi-16o-metil-3-oxo-17a-(2,2,3,3-tetrameticiclopropilcarbonil)oxi-androsta-1,4-dieno- 17β-ácido carbotióico e éster de S fluorometila de 6a,9a-difluoro-11β-hidróxi-16a-metil- 17a-(1-meticiclopropilcarbonil)oxi-3-oxo-androsta-1,4-dieno-17β-ácido carbotióico, be- clometasona ésteres (por exemplo, éster de 17-propionato ou o éster de 17,21- dipropionato), ésteres de budesonida, flunisolida, mometasona (por exemplo, furoato de mometasona), acetonido de triancinolona, rofleponida, ciclesonida(16 ,17-[[(R)- cicloexilmetileno]bis(oxi)]-11 ,21-diidróxi-pregna-1,4-dieno-3,20-diona), butixocortpro- pionato, RPR-106541, e ST-126. Em outra modalidade corticosteróides incluem propio- nato de fluticasona, éster de S fluorometila de 6β,9a-difluoro-11β-hidróxi-16a-metil- 17a-[(4-metil-1,3-tiazol-5-carbonil)oxi]-3-oxo-androsta-1,4-dieno-17β-ácido carbotióico, éster de S fluorometila de 6a,9o-difluoro-17a-[(2-furanilcarbonil)oxi]-11β-hidróxi-16a- metil-3-oxo-androsta-1,4-dieno-17β-ácido carbotióico, éster de S cianometila de 6σ,9σ- difluoro-11β-hidróxi-16a-metil-3-oxo-17a-(2,2,3,3-tetrameticiclopropilcarbonil)oxi- androsta-1,4-dieno-17β-ácído carbotióico e éster de S fluorometila de 6a,9a-difluoro- 11β-hidróxi-16a-metil-17a-(1-meticiclopropilcarbonil)oxi-3-oxo-androsta-1,4-dieno-17β- ácido carbotióico. Em outra modalidade o corticosteróide é éster de S fluorometila de 6ff,9a-difluoro-17a-[(2-furanilcarbonil)oxi]-11β-hidróxi-16CT-metil-3-oxo-androsta-1,4- dieno-17β-ácido carbotióico.

Os exemplos de corticosteróides, da mesma forma, incluem aqueles descritos em W02002/088167, W02002/100879, W02002/12265, W02002/12266, W02005/005451, W02005/005452, W02006/072599 e W02006/072600.

Compostos não esteroidais tem agonista glicocorticóide que podem possuir se- letividade para transrepressão durante a transativação e que pode ser útil em terapia de combinação, incluem aquelas abrangidos nas seguintes patentes e pedidos de pa- tentes publicadas: W02003/082827, W01998/54159, W02004/005229, W02004/009017, W02004/018429, W02003/104195, W02003/082787, W02003/082280, W02003/059899, W02003/101932, W02002/02565, W02001/16128, W02000/66590, W02003/086294, W02004/026248, W02003/061651, W02003/08277, W02006/000401, W02006/000398 e W02006/015870.

Compostos não esteroidais tem agonista glicocorticóide que podem possuir se- letividade para transrepressão durante a transativação e que pode ser útil em terapia de combinação, incluem aquelas abrangidas nas seguintes patentes: W02003/082827, WO1998/54159, W02004/005229, W02004/009017, W02004/018429, W02003/104195, W02003/082787, W02003/082280, W02003/059899, W02003/101932, W02002/02565, W02001/16128, W02000/66590, W02003/086294, W02004/026248, W02003/061651 e W02003/08277.

Os exemplos de agentes anti-inflamatórios incluem fármacos anti-inflamatórios não esteroidais (NSAID's).

Os exemplos de NSAID's incluem cromoglicato de sódio, nedocromil de sódio, inibidores de fosfodiesterase (PDE) (por exemplo, teofilina, inibidores de PDE4 ou ini- bidores de PDE3/ PDE4 misturados), antagonistas de leucotrieno, inibidores de síntese de leucotrieno (por exemplo, montelucaste), inibidores iNOS, inibidores de triptase e de elastase, antagonistas de integrina beta-2 e agonistas de receptor de adenosina ou antagonistas (por exemplo, agonistas de 2a adenosina), antagonistas de citocina (por exemplo, antagonistas de quimiocina, tal como um antagonista CCR3) ou inibidores de síntese de citocina, ou inibidores de 5-lipoxigenase. Em uma modalidade, a invenção abrange inibidores de iNOS (óxido nítrico síntese induzível) para administração oral. Os exemplos de inibidores iNOS incluem aqueles descritos em W01993/13055, WO1998/30537, W02002/50021, W01995/34534 e W01999/62875. Os exemplos de inibidores CCR3 incluem aqueles descritos em W02002/26722.

Em uma modalidade a invenção fornece o uso do presente composto em com- binação com um inibidor de fosfodiesterase 4 (PDE4), por exemplo, no caso de uma formulação adaptada para inalação. O inibidor de PDE4 útil neste aspecto da invenção pode ser qualquer composto que é conhecido para o qual é descoberta para atuar co- mo um inibidor de PDE4, por exemplo, como um inibidor de PDE4B e/ ou PDE4D.

Os compostos inibidores de PDE4 incluem cis-4-ciano-4-(3-ciclopentilóxi-4- methoxifenil)cicloexan-1 -ácido carboxílico, 2-carbometóxi-4-ciano-4-(3- ciclopropilmetóxi-4-difluorometoxifenil)cicloexan-1 -ona e cis-[4-ciano-4-(3- ciclopropilmetóxi-4-difluorometoxifenil)cicloexan-1-ol]. Também, cis-4-ciano-4-[3- (ciclopentilóxi)-4-metoxifenil]cicloexano-1 -ácido carboxílico (da mesma forma conheci- do como cilomilaste) e seus sais, ésteres, pró-drogas ou formas físicas, que é descrita em Patente dos Estados Unidos 5.552.438.

Outros compostos inibidores de PDE4 incluem AWD-12-281 (N-(3,5-dicloro-4- piridinil)-1-[4-fluorofenil)metal]-5-hidróxi- -oxo-1 H-indol-3-acetamida) de Elbion (Hofgen, N. e outros. 15th EFMC Int Symp Med Chem (6-10 de setembro, Edinburgh) 1998, Abst P.98; CAS referência No. 247584020-9); um derivado de 9-benziladenina nominada NCS-613 (INSERM); D-4418 de Chiroscience and Schering-Plough; um ini- bidor de benzodiazepina de PDE4 identificado como CI-1018 (PD-168787) e atribuído como Pfizer; um derivado de benzodioxole descrito por Kyowa Hakko em W099/16766; K-34 de Kyowa Hakko; V- 11294A de Napp (Landells, L.J. e outros, Eur Resp J [Annu Cong Eur Resp Soc (19-23 de setembro, Geneva) 1998] 1998, 12 (Suplemento 28): Abst P2393); roflumilaste (3-(ciclopropilmetóxi)-N-(3,5-dicloro-4-piridinil)-4- (difluorometóxi)benzamida) (veja, EP 0 706 513 B1 para Byk Gulden Lomberg, por e- xemplo, veja, Exemplo 5 destes); uma ftalazinona (W01999/47505) de Byk-Gulden; Pumafentrine, (-)-p-[(4aR*, 10bS*)-9-etóxi- 1,2,3,4,4a, 10b-hexaidro-8-metóxi-2-metilbenzo[c][1,6]naftiridin-6-il]-N,N- diisopropilbenzamido que é um inibidor de PDE3/ PDE4 misturado o qual tem sido pre- parado e publicado pelo Byk-Gulden, agora Altana; arofilina sob desenvolvimento por Almirall-Prodesfarma; VM554/UM565 de Vernalis; ou T-440 (Tanabe Seiyaku; Fuji, K. e outros. J Pharmacol Exp Ther1 1998, 284(1): 162), e T2585.

Além disso, os compostos inibidores de PDE4 são descritos nos pedidos de patente internacionais publicados W02004/024728, W02004/056823, W02004/103998 (por exemplo, Exemplo 399 ou 544 descritos nestes), W02005/058892, W02005/090348, W02005/090353, e W02005/090354, todos no nome de Glaxo Group Limited.

Os exemplos de agentes anticolinérgicos são aqueles compostos que atuam como antagonistas nos receptores muscarínicos, particularmente aqueles compostos os quais são antagonistas dos receptores M1 ou M3, antagonistas dual dos receptores M1/ M3 ou M2 /M3, receptores ou pan-antagonistas dos receptores M1/ M2/ M3. Os exemplares de compostos para administração por meio de inalação incluem ipratrópio (por exemplo, como o brometo, CAS 22254-24-6, vendido sob o nome de Atrovent), oxitrópio (por exemplo, como o brometo, CAS 30286-75-0) e tiotrópio (por exemplo, como o brometo, CAS 136310-93-5, vendido sob o nome de Spiriva). Da mesma forma de interesse são reva- tropate (por exemplo, como o hidrobrometo, CAS 262586-79-8) e LAS-34273 que é descrito em W02001/04118. Os exemplares compostos para administração oral inclu- em pirenzepina (CAS 28797-61-7), darifenacina (CAS 133099-04-4, ou CAS 133099- 07-7 para o hidrobrometo vendido sob o nome de Enablex), oxibutinina (CAS 5633-20- 5, vendido sob o nome de Ditropan), terodilina (CAS 15793-40-5), tolterodina (CAS 124937-51-5, ou CAS 124937-52-6 para o tartarato, vendido sob o nome de Detrol), otilônio (por exemplo, como o brometo, CAS 26095-59-0, vendido sob o nome de Spasmomen), cloreto de tróspio (CAS 10405-02-4) e solifenacina (CAS 242478-37-1, ou CAS 242478-38-2 para o sucinato da mesma forma conhecido como YM-905 e ven- dido sob o nome de Vesicare).

Os compostos adicionais são descritos em WO 2005/037280, WO 2005/046586 e WO 2005/104745. As presentes combinações incluem, mas não estão limitadas a:

iodeto de (3-e/7do)-3-(2,2-di-2-tieniletenil)-8,8-dimetil-8- azoniabiciclo[3.2.1]octano;

brometo de (3-e/7c/o)-3-(2-ciano-2,2-difeniletil)-8,8-dimetil-8- azoniabiciclo[3.2.1]octano;

brometo de A- [hidróxi(difenil)metil]-1- {2-[(fenilmetil)oxi]etil}-1-azoniabici- clo[2.2.2]octano; e

brometo de (1f?,5S)-3-(2-ciano-2,2-difeniletil)-8-metil-8-{2-[(fenilmetil)oxi]etil}-8- azoniabiciclo[3.2.1]octano.

Outros agentes anticolinérgicos incluem compostos os quais são descritos em pedido de patente dos Estados Unidos 60/487981, incorporados aqui por referência para a extensão requerida para praticar a presente invenção. Estes incluem, por exem- pio:

iodeto de (endo)-3-(2-metóxi-2,2-di-tiofen-2-il-etil)-8,8-dimetil-8-azonia- biciclo[3.2.1]octano;

3-((endo)-8-metil-8-aza-biciclo[3.2.1]oct-3-il)-2,2-difenil-propionitrilo; (endo)-8-metil-3-(2,2,2-trifenil-etil)-8-aza-biciclo[3.2.1]octano;

3-((endo)-8-metil-8-aza-biciclo[3.2.1]oct-3-i1)-2,2-difenil-propionamida;

3-((endo)-8-metil-8-aza-biciclo[3.2.1 ]oct-3-il)-2,2-difenil-ácido propiônico; iodeto de (endo)-3-(2-ciano-2,2-difenil-etil)-8,8-dimetil-8-azonia- biciclo[3.2.1 Joctano;

brometo de (endo)-3-(2-ciano-2,2-difenil-etil)-8,8-dimetil-8-azonia- biciclo[3.2.1]octano;

3- ((endo)-8-metil-8-aza-biciclo [3.2.1]oct-3-il)-2,2-difenil-propan-1-oi;

N-benzil-3-((endo)-8-metil-8-aza-biciclo[3.2.1]oct-3-il)-2,2-difenil-propionamida; iodeto de (endo)-3-(2-carbamoil-2,2-difenil-etil)-8,8-dimetil-8-azonia- biciclo[3.2.1]octano;

1 -benzil-3-[3-((endo)-8-metil-8-aza-biciclo[3.2.1 ]oct-3-il)-2,2-difenil-propil]- uréia;

1 -etil-3-[3-((endo)-8-metil-8-aza-biciclo[3.2.1 ]oct-3-il)-2,2-difenil-propil]-uréia;

N-[3-((endo)-8-metil-8-aza-biciclo[3.2.1]oct-3-il)-2,2-difenil-propil]-acetamida;

N-[3-((endo)-8-metil-8-aza-biciclo[3.2.1]oct-3-il)-2,2-difenil-propil]-benzamida;

3-((endo)-8-metil-8-aza-biciclo[3.2.1]oct-3-il)-2,2-di-tiofen-2-il-propionitrilo;

iodeto de (endo)-3-(2-ciano-2,2-di-tiofen-2-il-etil)-8,8-dimetil-8-azonia- biciclo[3.2.1]octano;

N-[3-((endo)-8-metil-8-aza-biciclo[3.2.1]oct-3-il)-2,2-difenil- propil]-benzenosulfonamida;

[3-((endo)-8-metil-8-aza-biciclo[3.2.1]oct-3-il)-2,2-difenil-propil]-uréia;

N-[3-((endo)-8-metil-8-aza-biciclo[3.2.1]oct-3-il)-2,2-difenil-propil]- metanesulfonamida; e/ ou

brometo de (endo)-3-{2,2-difenil-3-[(1-fenil-metanoil)-amino]-propil]-8,8-dimetil- 8-azonia-biciclo[3.2.1]octano.

Além disso, os compostos incluem:

iodeto de (endo)-3-(2-metóxi-2,2-di-tiofen-2-il-etil)-8,8-dimetil-8-azonia- biciclo[3.2.1]octano;

iodeto de (endo)-3-(2-ciano-2,2-difenil-etil)-8,8-dimetil-8-azonia- biciclo[3.2.1]octano;

brometo de (endo)-3-(2-ciano-2,2-difenil-etill)-8,8-dimetil-8-azonia- biciclo[3.2.1]octano;

iodeto de (endo)-3-(2-carbamoil-2,2-difenil-ethil)-8,8-dimetil-8-azonia- biciclo[3.2.1]octano;

iodeto de (endo)-3-(2-ciano-2,2-di-tiofen-2-il-etil)-8,8-dimetil-8-azonia- biciclo[3.2.1]octano; e/ ou

brometo de (endo)-3-{2,2-difenil-3-[(1-fenil-metanoil)-amino]-propil]-8,8-dimetil- 8-azoniabiciclo[3.2.1]octano.

Em uma modalidade a invenção fornece uma combinação compreendendo o presente composto junto com um antagonista H1. Os exemplos de antagonistas H1 incluem, sem limitação, amlexanox, astemizol, azatadina, azelastina, acrivastina, brom- feniramina, cetirizina, levocetirizina, efletirizina, clorfeniramina, clemastina, ciclizina, carebastina, ciproeptadina, carbinoxamina, descarboetoxiloratadina, doxilamina, dime- tindeno, ebastina, epinastina, efletirizina, fexofenadina, hidroxizina, cetotifeno, Ioratadi- na, levocabastina, mizolastina, mequitazina, mianserino, noberastina, meclizina, noras- temizol, olopatadina, picumaste, pirilamina, prometazina, terfenadina, tripelenamina, temelastina, trimeprazina e triprolidina, particularmente cetirizina, levocetirizina, efletiri- zina e fexofenadina. Em uma outra modalidade a invenção fornece uma combinação compreendendo o presente composto junto com um antagonista H3 (e/ ou agonista inverso). Os exemplos de antagonistas H3 incluem, por exemplo, aqueles compostos descritos em W02004/035556 e em W02006/045416. Outro antagonista de receptor de histamina o qual pode ser empregado em combinação com os compostos da pre- sente invenção incluem antagonistas (e/ ou agonistas inversos) do receptor H4, por exemplo, os compostos descritos em Jablonowski e outros, J. Med. Chem. 46:3957- 3960 (2003).

Em outra modalidade, a invenção fornece uma combinação compreendendo o presente composto junto com um antagonista de receptor de CCR5, tal como 4,4- difluoro-N-((1S)-3-{3-13-metil-5-(1-metiletil)-4H-1,2,4-triazol-4-il]-8-azabiciclo[3.2.1]oct- 8-il}-1-fenilpropil)cicloexanecarboxamida:

<formula>formula see original document page 21</formula>

Em uma modalidade, a invenção fornece uma combinação compreendendo o pre- sente composto junto com um antagonista de receptor de CXCR3 tal como N-((1R)-1-{3-[4- (etilóxi)fenil]-4-oxo-3,4-diidropirido[2,3-d]pirimidin-2-il}etil)-N-(3-piridinilmetil)-2-{4- [(trifluorometil)oxi]fenil]acetamida: A invenção, deste modo, fornece, em um outro aspecto, uma combinação compreendendo o presente composto junto com um, inibidor PDE4.

A invenção, deste modo, fornece, em um outro aspecto, uma combinação compreendendo o presente composto junto com agonista β2-adrenoreceptor.

A invenção, deste modo, fornece, em um outro aspecto, uma combinação compreendendo o presente composto junto com um corticosteróide.

A invenção, deste modo, fornece, em um outro aspecto, uma combinação compreendendo o presente composto junto com um agonista GR não esteroidal.

A invenção, deste modo, fornece, em um outro aspecto, uma combinação compreendendo o presente composto junto com um agente anticolinérgico.

A invenção, deste modo, fornece, em um outro aspecto, uma combinação compreendendo o presente composto junto com um anti-histamina.

A invenção, deste modo, fornece, em um outro aspecto, uma combinação compreendendo o presente composto junto com um inibidor PDE4 e um agonista β2- adrenoreceptor.

A invenção, deste modo, fornece, em um outro aspecto, uma combinação compreendendo o presente composto junto com um anticolinérgico e um inibidor PDE-4.

As combinações referidas acima podem convenientemente ser apresentadas para uso na forma de uma formulação farmacêutica e deste modo as formulações far- macêuticas compreendem uma combinação como definida acima junto com um portador ou diluente farmaceuticamente aceitável representa outro aspecto da invenção.

Os compostos individuais de tais combinações podem ser administrados tam- bém seqüencialmente ou simultaneamente em formulação farmacêutica separada ou combinada. Em uma modalidade, os compostos individuais serão administrados simul- taneamente em uma formulação farmacêutica combinada. Doses adequadas de agentes terapêuticos conhecidos serão facilmente observadas por aqueles versados na técnica.

A invenção, deste modo, fornece, em um outro aspecto, uma composição far- macêutica compreendendo uma combinação do presente composto junto com outro agente terapeuticamente ativo.

A invenção, deste modo, fornece em um outro aspecto, uma composição far- macêutica compreendendo uma combinação do presente composto junto com um inibi- dor PDE4.

A invenção, deste modo, fornece, em um outro aspecto, uma composição far- macêutica compreendendo uma combinação do presente composto junto com um ago- nista B2-adrenoreceptor.

A invenção, deste modo, fornece, em um outro aspecto, uma composição far- macêutica compreendendo uma combinação do presente composto junto com um corti- costeróide.

A invenção, deste modo, fornece, em um outro aspecto, uma composição far- macêutica compreendendo uma combinação do presente composto junto com um ago- nista GR não esteroidal.

A invenção, deste modo, fornece, em um outro aspecto, uma composição far- macêutica compreendendo uma combinação do presente composto junto com um anti- colinérgico.

A invenção, deste modo, fornece, em um outro aspecto, uma composição far- macêutica compreendendo uma combinação do presente composto junto com um anti- histamina.

A invenção, deste modo, fornece, em um outro aspecto, uma composição far- macêutica compreendendo uma combinação do presente composto junto com antago- nista de receptor de CXCR3.

A invenção, deste modo, fornece, em um outro aspecto, a combinação farma- cêutica da invenção junto com um antagonista de receptor de CCR5.

A invenção será agora descrita por referência para os seguintes exemplos bio- lógicos os quais são meramente ilustrativos e não serão interpretados como uma limi- tação do escopo da presente invenção.

Exemplos Biológicos

A IL-8, e os efeitos inibidores da quimiocina GRO-σ dos compostos da presen- te invenção são determinados pelos seguintes ensaios in vitro:

Ensaio por Ligação de Receptor:

[125I] IL-8 (recombinante humano) é obtida de GE Healthcare, com atividade específica de 2000 Ci/mol. Todos os outros químicos são de grau analítico. Elevados níveis de receptores CXCR2 (IL-8 tipo β) e CXCR1 de humano recombinante (IL-8 tipo a) são individualmente expressados em células do Ovário de Hamster Chinês (CHO) não aderente como descritos previamente (Holmes, e outros, Science. 1991, 253, 1278). As membranas são preparadas de acordo com um protocolo previamente des- crito, Haour, e outros, J. Biol. Chem.. 249 pp 2195-2205 (1974)), incorporadas aqui por referência para a extensão requerida para preparar as presentes membranas, exceto aquela que o tampão de homogeneização é modificado para 40 mM de Tris-HCL (pH 7,5), 1 mM de MgSO4, 0,5 mM de EGTA (etileno-glicol-bis(2-aminoetiléter)- N,N,N',N'tetra-ácido acético), 1 mM de PMSF (fluoreto de σ-toluenesulfonil), 2,5 mg/L de Ieupeptina e 0,1 mg/ml de aprotinin. As células são homogeneizadas e centrifuga- das a 2.000 rpm durante 10 minutos.

O sobrenadante é centrifugado a 100.000 χ g durante 1 hora. O sobrenadante é descartado e as membranas armazenadas a -80 °C. A concentração de proteína na membrana é determinada empregando regente BioRad de acordo com o protocolo de fabricação empregando albumina de soro bovino (BSA) como um padrão.

Toda a ligação de IL-8 é conduzida empregando Scintillation Proximity Assays (SPA) empregando contas de aglutinina de germe de trigo em um formato de placa de 96 cavidades. As membranas CHO-CXCR1 ou CHO-CXCR2 são pré-incubadas com as contas no tampão de ligação durante 30 minutos a 4°C. O tampão contem 20 mM de tampão de Bis-Trispropane, pH 8,0, contendo 1 mM de MgSO4, 0,1 mM de EDTA e 25 mM de NaCl. Os compostos são diluídos em DMSO a 20X da diluição final (concentra- ção do composto final entre 1 nM e 30 μΜ e concentração final de DMSO de 5%). O ensaio é executado em placas de 96 cavidades (optiplate 96, Packard) em temperatura ambiente, em 0,1 ml de tampão de ligação com membranas e 0,04% de CHAPS (3[(3- colamidopropil)dimetilamonio]-1-propanesulfonato), 0,0025% de BSA e 0,23 nM [125I] IL-8. As placas são agitadas em uma plataforma durante 1 hora, ao término da incuba- ção as placas são giradas a 2.000 rpm durante 5 minutos e contadas em um contador Top Count. O receptor Rct de IL-8 recombinante, CXCR1 ou Tipo I, é da mesma forma referido aqui como o receptor não permissivo e o receptor Rfi de IL-8 recombinante, CXCR2 ou Tipo II, é referido como o receptor permissivo.

Um composto é considerado ativo neste ensaio se exibe seu valor IC50 < 30 μΜ. O presente composto é esperado para ativar o teste em um valor IC50 de cerca de 13 μΜ no presente ensaio.

Ensaio de Quimiotaxia:

Um ensaio de quimiotaxia de neutrófilo é executado. Neutrófilos primários hu- manos são isolados do sangue total periférico empregando centrifugação por gradiente descontínuo de percoll, sedimentação por dextrana e dissolução hipotônica. As IL-8 quimioatraentes (CXCL8) ou GRO-σ (CXCL1) são colocadas no fundo da câmara de uma câmara de 96 multi-cavidades (ChemoTx System, Neuro Probe, Gaithersburg, MD). A concentração de agonista empregada é uma concentração de EC80. As duas câmaras são separadas por uma membrana policarbonato de 5 μm. Um composto tes- tado é pré-incubado com as células antes de colocada no topo do filtro. A quimiotaxia é permitida prosseguir durante 45 minutos em um incubador umedecido a 37 °C com 5% de CO2. Ao término do período de incubação, a membrana é removida e as células mi- gradas no fundo da câmara são transferidas para uma placa de 96 cavidades. Estas células são medidas empregando um ensaio de viabilidade celular Iuminescente (Cellti- ter-GIo, Promega1 Madison1 Wl). Cada amostra é testada em duplicata e cada compos- to repetido pelo menos três vezes. As células do controle positivo são células sem composto adicionado e representam a resposta quimiotática máxima. O controle ne- gativo (não estimulado) não é com quimiocina adicionada ao fundo da câmara. A dife- rença entre o controle positivo e o controle negativo representa a atividade quimiotática das células.

Um composto é considerado ativo se exibir um valor IC50 < 5 μΜ.

Ensaio de Sangue Total Humano CD11b:

Um composto é testado para sua habilidade para inibir a expressão induzida por GRO-σ da integrina CD11b em neutrófilos no sangue total humano.

O sangue é extraído (9 ml) empregando uma linha de borboleta e uma seringa de 10 ml contendo 0,2 ml de preparação de Sódio de Heparina. O sangue é mantido a 37°C até que colocado no gelo na etapa 5 abaixo. As soluções de composto de matéria- prima são em seguida diluídas 12 vezes na concentração máxima final, 120 μΜ. A metade de Log de diluições em série são em seguida executadas no veiculo. Dez microlitros das diluições do composto ou veiculo são em seguida adicionados aos tubos de polipropileno de .12x75 mm adequados. Cem microlitros de sangue total são adicionados ao tubo e incuba- dos durante 10 minutos, em um banho de água a 37 °C com agitação inicial (suave) e mais uma vez por 5 minutos. A matéria-prima de GROct é diluída a 1:166.66 em 0,1% de BSA- DPBS a concentração de "12x" de 120 nM e 10 μl da diluição de GROct ou 0,1% de BSA- DPBS é adicionada aos tubos adequados a fim de que a concentração final de GROct iguala a 10 nM. Os tubos são incubados durante 10 minutos a 37°C com agitação manual suave e mais uma vez a 5 minutos. As amostras são em seguida colocadas no gelo e 250 μΙ de dilui- ção de preparação gelada de CeIIFix são adicionadas seguidas por um minuto de incubação no gelo. Os tubos de Eppendorf de 1,5 ml são preparados durante incubação de GROct por adição dos anticorpos adequados. Cada tubo recebe 10 μl de CDHb-FITC e 5 μl de CD16-PE, exceto para o controle de isótipo que recebe 10 μl de lgG2a-FITC ao invés de CD11b. A adição de 50 μl do sangue fixado de cada tubo é adicionada ao tubo de Eppendorf adequado. As amostras são permitidas para em seguida incubar durante 20 minutos a 4°C às escuras. A adição das misturas de sangue/ anticorpo a 500 μΙ de DPBS frio são adicionadas a tubo de poliestireno 12x75 mm adequadamente rotulado. A mistura resultante é mantida no gelo. A matéria-prima LDS (10 μΙ) é adicionada e a mistura incubada durante 10 minutos a 4°C antes da analise de fluxo. As amostras são mantidas em um ambiente escurecido. A adição de LDS é alternada como as amostras são coletadas no citômetro de fluxo a fim de que todas as amostras sejam executadas ~ 10-20 minutos pós-adição de LDS.

A taxa média de fluxo é empregada para coletar fluxo e FL3 inicial aumentada para eliminar células vermelhas do sangue da analise empregando o sinal de LDS. A com- pensação da cor é adequadamente fixada empregando amostras não rotuladas e a- mostras de uma cor para derramamento de substrato de LDS em PE e o derramamento de PE em FITC e FITC em PE. Para o citômetro LSR BD1 LDS = FL3, PE = FL2, FITC = FL1. Um mínino de 2000-3000 eventos que satisfazem uma porta de granulócito por SSC versus FSC e são CD16 positivos pelo sinal FL2 são coletados.

Um composto é considerado ativo neste ensaio se exibir seu valor IC50 < 5μΜ.

Mobilização de Cálcio em células CHO-K1 estavelmente expressando CXCR2 e Ga16:

As células CHO-K1 estavelmente expressando CXCR2 e Ga16 são cultivadas a 80% confluência em DMEM/ F12 (HAM's) 1:1, FCS a peso/10% (inativado por calor), peso/ 2 mM de L-glutamina, peso/ 0,4 mg/ ml de G418 ao mesmo tempo em que mantidas a 37°C em um incubador de 5% de CO2. Vinte e quatro horas anteriormente ao ensaio, as células são colhidas e semeadas, 40.000 células por cavidade, em 96 cavidades, pare- de preta, placa de fundo claro (Packard View) e restituída ao incubador de CO2. No dia do ensaio, os compostos são consecutivamente diluídos em 100% de DMSO a 300X na concentração do ensaio desejado. O meio de crescimento é aspirado das células e re- colocado com 100 μl do meio de carga (EMEM com sais de Earl peso/ L-Glutamina, 0,1% de BSA, (Bovuminar Cohen Fraction V from Seriologicals Corp.), 4 μΜ de tintura indicadora fluorescente de éster de Fluo-4-acetoximetil (Fluo-4 AM, de Molecular Pro- bes), e 2,5 mM de probenecida) e incubado durante 1 hora a 37 cC em incubador de CO2. O meio de carga é aspirado e recolocado com 100 pL de EMEM com sais de Earl peso/ L-Glutamina, 0,1% de gelatina, e 2,5 mM de probenecida e incubado durante um adicional de 10 minutos. O composto consecutivamente diluído (3 μl) em DMSO a 300X é transferido para uma placa de 96 cavidades contendo 297 microlitros de KRH (120 mM de NaCI, 4,6mM de KCI, 1,03 mM de KH2PO4, 25 mM de NaHCO3, 1,0mM de Ca- Cl2, 1,1mM de MgCI2, 11mM de Glucose, 20 mM de HEPES (pH 7.4)) peso/2,5 mM de probenecida e 0,1% de gelatina (composto agora a 3X). O meio é aspirado das células, e as células lavadas 3 vezes com KRH de peso/ 2,5 mM de probenecida, peso/ 0,1% de gelatina. KRH (100 μΙ) de peso/ 2,5 mM de probenecida com 0,1% de gelatina é adicionada as cavidades em seguida, 50 μ de 3X composto em KRH de peso/ 2,5 mM de probenecida e 0,1% de gelatina é adicionada as cavidades (composto agora a 1X) e incubado a 37°C em incubador de CO2 durante 10 minutos. As placas são colocadas em FLIPR (Fluorometric Imaging Plate Reader, Molecular Devices, Sunnyvale CA) Du- rante análise como descrito previamente (Sarau e outros, 1999). A porcentagem da IOL-8 humana máxima induzida por mobilização de Ca2+ induzida por 1,0 nM de IL-8, um concentrado de EC8O por CXCR2, é determinada para cada concentração do com- posto e o IC5O calculado como a concentração de composto de teste que inibe 50% da resposta máxima induzida por 1,0 nM de IL-8. Um composto é considerado ativo neste ensaio se exibe seu valor IC50 <10 μΜ.

Estimulacão de Neutrófilo CD11b Seguida pela Dosagem Oral para Ratos

Ratos de Lewis (250-300 gm) foram dosados oralmente com o presente composto ou veiculo e uma hora mais tarde foram eutanizados por sufocamento por CO2. O sangue total de rato, 3 ml, foi extraído por punção cardíaca em uma seringa contendo 100 μΙ de 0,25 M de EDTA (GIBCO, Grand Island, NY). A matéria-prima de rato CXCL2 (PeproTech, Rocky Hill, NJ) foi fabricada por reconstituição em Kreb's/ 0,1% de BSA (KBSA) e 10 μΜ. A maté- ria-prima foi diluída a concentração máxima de "11x" empregada em DPBS (GIBCO) e consecutivamente diluída em veículo de KBSA/ DPBS. Dez μl de concentração ade- quada do presente composto (1,2 — 100 nM) ou veiculo foi adicionado a tubos de poli- propileno de 12x75 mm seguido por 100 μl de sangue total. Os tubos foram incubados durante 30 minutos em um banho a 37 °C, com agitação manual suave a cada 10 mi- nutos. As amostras foram, em seguida, colocadas no gelo durante 10 minutos seguidas pela adição de 10 μl de controle de isótipo de lgG2a de camundongo de FITC-rotulado ou anti-rato-CD11b-FITC (ambos de Antigenix America, Huntington Station, NY) e in- cubados durante 30 minutos no gelo. FACS Lysing Solution (Becton Dickinson, San Jose, CA), 1 ml de 1X, foi adicionado com turbilhonamento vigoroso imediato, seguido por vórtice adicional após, a solução foi adicionada à ultima amostra. As amostras fo- ram incubadas durante 10 minutos em temperatura ambiente e os leucócitos foram pe- letizados a ~ 300 χ g e lavadas com DPBS. As células foram re-suspensas em 650 μl de 1% de paraformaldeído. A solução FACS Lyse não faz completamente células ver- melhas do sangue de rato causando a lise. Por esse motivo, para analise de fluxo ci- tométrico, 3,5 μl de uma solução de 1,67 mg/ ml de etanol (super-saturado; purificado por centrifugação) de LDS-751 (Exciton, Dayton, OH) foi adicionada para cada amostra em 1-2 minutos de analise de fluxo para portão aberto, quaisquer células vermelhas restantes do sangue. Os dados da amostra foram coletados empregando CellQuest Software e um citômetro de fluxo LSR (Becton- Dickinson), em colocação de taxa de baixo fluxo, por aumentar a FL3 inicial para eliminar LDS-751 de células vermelhas negativas do sangue e em seguida entrando na população de neutrófilo na dispersão lateral versus dispersão dianteira plot. FL1 (FITC fluorescente verde, diretamente rela- cionado ao conteúdo de CD11b) desta população foi, em seguida, medidas como meio de canal fluorescente por analise com software CellQuest.

No presente ensaio, o presente composto ativo testado para inibição de ex- pressão de neutrófilo CD11b de sangue total seguido por dosagem oral para ratos de Lewis a 10 mg/ kg. O presente composto significantemente desloca o EC50 da curva da resposta da concentração de CXCL2 de 4,7 nM (1,9 - 7,4; 95% de C.l.) em ratos tratados pelo veiculo para 12,3 nM (10,0 - 14,7), (p<0,001, n=6 por grupo).

A descrição acima descreve totalmente a invenção incluindo modalidades pre- feridas destes. As modificações e melhoramentos das modalidades especificamente descritas aqui estão no escopo das seguintes reivindicações. Ainda sem elaboração, acredita-se que alguém versado na técnica pode, empregar o a descrição precedente, utilizando a presente invenção para sua extensão completa. Por esse motivo os Exem- plos aqui são para serem interpretados como meramente ilustrativos e não uma limita- ção do escopo da presente invenção em qualquer caminho.

As modalidades da invenção em que uma propriedade exclusiva ou privilégio é reivindicado como definido como segue.

Claims (11)

1. Composto, CARACTERIZADO pelo fato de que é p-toluenessulfonato N-[4- cloro-2-hidróxi-3-(piperazina-1-sulfonil)fenil]-N'-(2-cloro-3-fluorofenil)uréia.

2. Composição farmacêutica, CARACTERIZADA pelo fato de que compreende p-toluenossulfonato N-[4-cloro-2-hidróxi-3-(piperazina-1-sulfonil)fenil]-N'-(2-cloro-3- fluorofenil)uréia e um diluente ou portador farmaceuticamente aceitável.

3. Método, CARACTERIZADO pelo fato de que trata uma doença mediada por quimiocina, no qual a quimiocina se liga a um receptor IL-8 a ou β em um mamífero, cujo método compreende administrar uma quantidade efetiva de p-toluenessulfonato N- [4-cloro-2-hidróxi-3-(piperazina-1 -sulfonil)fenil]-N'- (2-cloro-3-fluorofenil)uréia.

4. Método de tratamento asma, doença pulmonar obstrutiva crônica ou síndro- me da angústia respiratória de adulto, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende administrar a um mamífero com necessidade destes uma quantidade efetiva de p- toluenessulfonato N-[4-cloro-2-hidróxi-3-(piperazina-1 -sulfonil]-N'-(2- cloro-3- fluorofenil)uréia.

5. Método de tratamento de doença pulmonar obstrutiva crônica, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende administrar a um mamífero com ne- cessidade deste uma quantidade efetiva de p-toluenessulfonato N-[4-cloro-2-hidróxi-3- (piperazina-1-sulfonil)fenil]-N'-(2-cloro-3-fluorofenil)uréia.

6. Emprego de p-toluenossulfonato N-[4-cloro-2-hidróxi-3-(piperazina-1- sulfonil)fenil] -N'-(2-cloro-3-fluorofenil)uréia na fabricação de um medicamento, CARACTERIZADO pelo fato de tratar de uma a doença mediada por quimiocina.

7. Emprego de p-toluenossulfonato N-[4-cloro-2-hidróxi-3-(piperazina-1- sulfonil)fenil]-N'-(2-cloro-3-fluorofenil)uréia na fabricação de um medicamento, CARACTERIZADO pelo fato de ser empregado em tratamento asma, doença pulmonar obstrutiva crônica ou síndrome da angústia respiratória de adulto.

8. Emprego de p-toluenossulfonato N-[4-cloro-2-hidróxi-3-(piperazina-1- sulfonil)fenil]-N'-(2-cloro-3-fluorofenil)uréia na fabricação de um medicamento, CARACTERIZADO pelo fato de ser empregado no tratamento de doença pulmonar obstrutiva crônica.

9. Composição farmacêutica, CARACTERIZADA pelo fato de que compreende p-toluenossulfonato N-[4-cloro-2-hidróxi-3-(piperazina-1-sulfonil)fenil]-N'-(2-cloro-3- fluorofenil)uréia e um ou mais ingredientes terapêuticos adicionais.

10. Composição de acordo com reivindicação 10, CARACTERIZADA pelo fato de que o ingrediente terapêutico adicional é um antagonista de receptor CXCR3 ou um antagonista de receptor CCR5.

11. Método de preparação de p-toluenossulfonato N-[4-cloro-2-hidróxi-3-(4- metil-piperazina-1-sulfonil)-fenil]-N'-(2-cloro-3-fluorofenil)uréia, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende as estapas de: a) combinar acetonitrilo e monidratod e ácido p-toluenesulfônico; b) adicionar o produto na etapa a) para <formula>formula see original document page 30</formula> dissolver-se em tetraihidrofurano; e c) tratar o produto obtido no etapa b) com acetonitrilo.