BRPI0713684A2

BRPI0713684A2 - compostos, composição farmaceuticamente aceitável e métodos de inibição da replicação de vìrus da hepatite c, de tratamento de célula e de tratamento ou prevenção da infecção do vìrus da hepatite c em maìfero carecido do mesmo

Info

Publication number: BRPI0713684A2
Application number: BRPI0713684-6A
Authority: BR
Inventors: Frank Ruebsam; Martin T Tran; Stephen E Webber; Peter S Dragovich; Liansheng Li; Douglas E Murphy; David John Kucera; Zhongxiang Sun; Chinn Viet Tran
Original assignee: Anadys Pharmaceuticals Inc
Priority date: 2006-06-22
Filing date: 2007-06-21
Publication date: 2012-10-30
Also published as: JP5306194B2; PA8733401A1; KR20090063203A; IL196106A0; JP5670487B2; TW200817405A; US20090105473A1; CA2656000C; CN101501039A; US20090312570A1; EP2038286B1; US7462611B2; US20080031852A1; CN102584649A; WO2007150001A8; AU2007260827A1; JP2013136599A; JP2009544575A; CA2656000A1; MX2008016519A

Abstract

Compostos, Composição Farmaceuticamente Aceitável e Métodos de Inibição da Replicação de Virus da Hepatite C, de Tratamento de Célula e de Tratamento ou Prevenção da infecção do Vírus da Hepatite C em Mamífero Carecido do Mesmo. A invenção é direcionada para compostos de pirro [1,2-b] piridazinona e composições farmacêuticas contendo esses compostos que são úteis para o tratamento de infecções por vírus da hepatite C.

Description

"Compostos, Composição Farmaceuticamente Aceitável e Métodos de Inibição da Replicação de Vírus da Hepatite C, de Tratamento de Célula e de Tratamento ou Prevenção da Infecção do Vírus da Hepatite C em Mamífero Carecido do Mesmo" Relatório Descritivo Campo da Invenção

A invenção é direcionada para compostos de pirro[l,2-b] piridazinona e composições farmacêuticas que contêm esses compostos que são úteis para o tratamento de infecções por vírus da hepatite C.

Antecedentes da Invenção

A hepatite C é um problema de saúde de monta no mundo inteiro. As Organização Mundial da Saúde estima que 170 milhões pessoas são portadores crônicos do vírus da hepatite C (HCV), com 4 milhões de portadores apenas nos Estados Unidos. Nos Estados Unidos, a infecção de HCV é responsável por 40% da doença crônica do fígado e a doença de HCV é a causa mais comum de transplante de fígado. A infecção de HCV leva a uma infecção crônica e mais ou menos70% das pessoas infetadas desenvolverão mudanças histolôgicas crôni- cas no fígado (hepatite crônica) com um risco de 10-40% de cirrose e um risco estimado de 4% de vida de carcinoma hepatocelular. A CDC estima que todo o ano nos Estados Unidos existem 35,000 novos casos de infecção de HCV e aproximadamente dez mil mortes atribuídas à

doença de HCV.

O padrão atual de cuidado é uma combinação peguilada de interferon/ribavirina a um custo de aproximadamente $31,000/ano. Estas drogas têm problemas difíceis de dosagem e efeitos colaterais que impedem o seu uso em quase metade dos pacientes diagnosticados. O tratamento pelo interferon peguilado é associado a sintomas ameaçado- res semelhantes a influenza, irritabilidade, inabilidade para concentra- çãon, idéias suicidas e leucocitopenia. A ribavirina é associada à anemia hemolítica e defeitos de nascimento.

A resposta global a esta terapia padrão é baixa; aproxi- madamente um terço dos pacientes não responde. Daqueles que respondem, uma grande fração recai dentro de seis meses de completar .6-12 meses de terapia. Como conseqüência, a taxa de resposta a longo prazo para todos os pacientes que entram em tratamento é apenas de mais ou menos 50%. A taxa de resposta relativamente baixa e os efeitos colaterais significativos dos tratamentos de terapia corrente de drogas anti-HCV, acoplada aos efeitos negativos de longo termo da infecção crônico de HCV, resultam numa necessidade médica contínua de melhorar a terapia. Produtos farmacêuticos antivirais para tratar doenças de vírus de RNA tais como HCV são poucos e, como descrito acima, estão freqüentemente associados a múltiplos efeitos adversos.

Várias publicações recentes têm descrito inibidores de NS5B úteis no tratamento da infecção da hepatite C. Ver, por exemplo, a Publicação do Pedido de Patente US 2006/0189602 (revelando certas piridazinonas); E.U. Publicação do Pedido de Patente US 2006/0252785 (revelando heterocíclicos selecionados); e Publicações Internacionais WO .03/059356, WO 2002/098424 e WO 01/85172 (cada uma descrevendo uma classe particular de tiadiazinas substituídas).

Embora existam, em alguns casos, medicamentos dispo- níveis para reduzir os sintomas da doença, existem algumas drogas para inibir eficazmente a replicação do vírus subjacente. O significado e a prevalência de doenças de vírus de RNA, incluindo mas, sem limita- ção, a infecção crônica pelo vírus da hepatite C e acoplado à disponibi- lidade e efetividade limitadas de produtos farmacêuticos antivirais atuais, criaram uma necessidade constrangedora e continuada de novos produtos farmacêuticos para tratar estas doenças.

Sumário da Invenção

A presente invenção descreve novos compostos de pirro [1,2-b] piridazinona e de sais farmaceuticamente aceitáveis dos mes- mos, que são úteis para tratamento ou prevenção de infecção do vírus da hepatite C num paciente carecido do mesmo compreendendo admi- nistrar ao paciente uma quantidade terapeutica ou profilaticamente efetiva de um composto de pirro[l,2-b]piridazinona.

Num aspecto geral, a invenção relaciona-se com compos- tos da Fórmula I

em que

Ri é independentemente 1-3 grupamentos selecionados a partir de hidrogênio, halo, ciano, nitro, hidroxi, -NR8R9, C3-C8 cicloalquil, Ci-C6 alquil, alquenil, alquinil, Ci-C6 haloalquil, hidroxialquil Ci-C6, Ci-C6 alcoxi, -(Ci-C6 alquileno) NR8R9, -C(O)OH, -C(0)0(Ci-C6 alquil, -C(0)NH(Ci-C6 alquil), -C(0)(Ci-C6 alquil), aril ou heterociclil tendo 1, 2, ou 3 átomos de N, O, ou S, em que R8 e R9 são independentemente H, Ci-C6 alquil, C3-C8 cicloalquil, aril ou heterociclil ou R8 e R9 se combi- nam com o átomo de N a que estão ligados para formar um anel hetero- ciclil de 5 ou 6 membros, R2 é hidrogênio, C3-C8 cicloalquil, C1-C7 alquil, alquenil, alquinil, C1-C6 haloalquil, C1-C6 hidroxialquil, C1-C6 alcoxi, aril ou heterociclil tendo 1, 2, ou 3 átomos de N, O, ou S,

R3 é hidrogênio ou C1-C6 alquil,

R4 é selecionado a partir de

<formula>formula see original document page 5</formula>

em que n é 0,1 ou 2,

R5 é hidrogênio ou C1-C6 alquil,

R6 é hidrogênio, halo ou C1-C6 alquil e

o Anel A é de 5 ou 6 membros aril ou heterociclil, opcionalmente substi- tuídos por 1-3 grupamentos R7, em que R7 é H, alquil, alquenil, alquinil, aril, heterociclil, halo, ciano, nitro, OH, -O-alquil, -O-(C1-C6 hidroxial- quil), -O-(C1-C6 alcoxi), -O-(C1-C6 alquileno) ciano, -O-(C1-C6 alquileno)- C(O)R10, -OCHR10C(O)O-R11, -OCHR10C(O)NHOH, -O-(C1-C6 alquil)- C(O)NRnR12, -O-(C1-C6 alquileno)-NR10C(O)Rn, -O-(C1-C6 alquileno)- NR10C(O)OR11, -O-(C1-C6 alquileno)-NR10C(O)NRnR12, -OCHR10C(O)N- R11R12, -O-(C1-C6 alquileno)-S(O)R10, -O-(C1-C6 alquil)-S(O)2R10, -O-(C1- C6 alquileno)-S(O)2NR11R12, -O-(C1-C6 alquileno)-NR10S(O)2N R11R12, -O- (C1-C6 alquileno)-NR10S(O)2R11, -O-(C1-C6 alquileno)-S(O)2R10, -0-(C1-C6 alquileno)-NR11R12, -(C1-C6 alquileno)-S(0)2R10, -(C1-C6 alquileno)- S(O)2NR11R12, -(C1-C6 alquileno)-S(O)R10, -(C1-C6 alquileno)-C(0)R10, - (C1-C6 alquileno) (O)NR11R12, -(C1-C6 alquileno)-NR10C(O)R11, -(C1-C6 alquileno)-NR10S(O)2R11, -(C1-C6 alquileno)-NR10C(O)OR11, -(C1-C6 alquileno)-NR10C(O)NRnR12, -(Ci-C6 alquileno)-NRi°S(0)2NRHR12, -(Ci- C6 alquileno)-C(0)OR10, -(Ci-C6 alquileno)-NR"R12, _N R11R12i -N RiiC(O)R12, -NRi0S(O)2 R11, -NRi0S(O)2N R11R12, -C(O)Ri0, -S(O)Ri0, -S(O)2R10 ou -S(O)2NRiiR12, em que Ri0, R11 e R12 são independentemen- te H, Ci-C6 alquil, C3-C8 cicloalquil, aril ou heterociclil ou R10 e RR11 ou RRii e R12 se combinam com o(s) átomo(s) a que estão ligados para formar um anel heterociclil de 5 ou 6 membros,

em que o alquil, alquenil, alquinil, aril, cicloalquil ou grupamentos de

heterociclil acima proporcionados em R1, R2, R7, R8, R9 > R10> RU e R12 são cada um opcional e independentemente substituídos por substitu-

intes 1-3 selecionados a partir de alquilamina, amino,

aril, cicloalquil, heterociclil,

Ci-C6 alquil, Ci-C6haloalquil, Ci-C6hidroxialquil, Ci-C6 alcoxi, Ci-C6 alquilamina, Ci-C6dialquilamina, C2-C6 alquenil ou C2-C6 alquinil, em que cada um pode ser interrompido por um ou mais hetero

átomos,

carboxil,

ciano,

halo,

hidroxi,

nitro,

oxo, -C(O)OH, -C(0)2-(Ci-C6 alquil), -C(0)2-(C3-C8 cicloalquil), C(0)2-(aril), -C(O)2-(heterociclil), -C(0)2-(Ci-C6 alquileno) aril, -C(0)2-(Ci- C6 alquileno)heterociclil, -C-(0)2-(Ci-C6 alquileno) cicloalquil, -C(0)(Ci- C6 alquil), -C(0)(C3-C8 cicloalquil), -C(0)(aril), -C(O) (heterociclil), -C(0)(Ci-C6 alquileno)aril, -C(0)(Ci-C6 alquileno)heterociclil e -C(0)(Ci- C6 alquil) cicloalquil,

em que cada dos substituintes opcionais acima pode ser ainda opcio- nalmente substituído por 1-5 substituintes selecionados a partir de amino, ciano, halo, hidroxi, nitro, Ci-C6 alquilamina, Ci-C6 dialquilami- na, C1-C6 alquil, Ci-C6 alcoxi, Ci-C6 alquenil e Ci- C6Wdroxialquil, em que cada alquil é opcionalmente substituído por um ou mais substitu- intes de halo ou um sal farmaceuticamente aceitável, hidrato, solvato, tautômero ou éstereoisômero dos mesmos.

Numa modalidade, a invenção relaciona-se com compos- tos da Fórmula I em que Ri é selecionado a partir de hidrogênio, halo, ciano, hidroxil, -NR8R9, C3-C8 cicloalquil, Ci-C6 alquil, alquenil, alquinil, Ci-C6 alcoxi, -(Ci-C6 alquileno) NR8R9, -C(O)OR8, -C(O)NR8R9, -C(O)(O)R8, aril ou heterociclil tendo 1, 2, ou 3 átomos de Ν, O ou S, em que R8 e R9 são independentemente H, Ci-C6 alquil, C3-C8 cicloalquil, aril ou heterociclil ou R8 e R9 combinam-se com o átomo de N a que estão ligados para formar um anel heterociclil de 5 ou 6 membros.

Noutra modalidade, a invenção relaciona-se com compos- tos da Fórmula I em que R1 é selecionado a partir de H 4-CI 4-F -\'Me fcN

o P o

i \ 5 D13 r13

o , N-R, R R13 R14

em que R13, R14 e R15 são independentemente selecionados a partir de hidrogênio,'alquilamina, amino, aril, cicloalquil, heterociclil, C1-C6 alquil, C1-C6 alcoxi, carboxil, ciano, halo e hidroxil ou R" e R" Comb1- nam-se com o átomo de N a que estão ligados para formar um anel

heterociclil de 5 ou 6 membros.

Numa modalidade adicional, Ri é selecionado a partir de hidrogênio, flúor, ciano, e metil.

Numa modalidade, a invenção relaciona-se com compos- tos da Fórmula I em que

R2 é selecionado a partir de C3-C8 cicloalquil, C1-C6 alquil, alquenil, alquinil, aril e heterociclil tendo 1, 2, ou 3 átomos de Ν, O ou S, em que o alquil, alquenil, alquinil, aril, cicloalquil ou os grupamentos de hete- rociclil são cada um opcional e independentemente substituídos por substituintes 1-3 selecionados a partir de aril, cicloalquil, heterociclil, C1-C6 alquil, C1-C6 alcoxi, alquilamina de C1-C6, C2-C6alquenil ou C2-C6 alquinil, em que cada um pode ser interrompido por um ou mais hetero átomos e opcionalmente substituído por ciano ou halo.

Noutra modalidade, a invenção relaciona-se com compos- tos da Fórmula I em que R2 é selecionado a partir de <formula>formula see original document page 9</formula>

em que X é O ou S e η = 0,1 ou 2,

Noutra modalidade adicional, R2 é selecionado a partir de

<formula>formula see original document page 9</formula>

Numa modalidade, a invenção relaciona-se com compos- tos da Fórmula I em que R3 e R5 são independentemente selecionados a partir de hidrogênio, metil e etil.

Numa modalidade, a invenção relaciona-se com compos- tos da Fórmula I em que R6 é selecionado de hidrogênio, flúor, metil e etil.

Numa modalidade, a invenção relaciona-se com compos- tos da Fórmula I em que η é 2, Numa modalidade, a invenção relaciona-se com compos- tos da Fórmula I em que o o Anel A é selecionado a partir de

em que X é S, O, NH ou -N(Ci-C6 alquil).

Noutra modalidade, o Anel A é selecionado a partir de

Numa modalidade adicional, o Anel A é selecionado

partir de <formula>formula see original document page 11</formula> em que R? é hidrogênio, -(Ci-C6 alquileno)-S(0)2NRHR12, -(Ci-C6 alqui- IenoJ-S(O)R10, -(Ci-C6 alquileno)-S(0)2R10, -NRiOS(O)2R11 ou -NRioS(O)2NR11R12'

Numa modalidade adicional, R7 é selecionado a partir de

R16

I-(CH2)Xr- Uh2)X/67 _ (CH2)n-^-R16; hCH^°spR16, h(CH2)^6'SbR17 '

16 R16 R16 R17 S °

í—(CH2)n-^-T—R17 I-(CH2)n-N^-OR17 L(CH2)n-^N [-(CH2)rA-OR-

i O ' 0 ' 5 Ok'

(CH2)n-NR A)-(CH2)m^R16 O-(CH2)m-M /V(CH2)mS-R16 O-(CH2)^S-R16 ^ vp17 , > R ' '

r. ^JsCtj'

R17 '

16 χ"" R16 R17 y R16 ^1C °

^wJ-T^R" Λ-,ΟΗ^Τ-Ν -aO-ICH^-S-R" ^ O o °

-R

,19

P1S hQ Pv" '"TV-" rw>

R , . H

OH

N HN-N rN f0 O ^q

β .r p, |A>. |A>.

IN> Kj-Vnh= KXf-"* K>VNH* KxTnhs h

O

! FwF , NH2

!-Xnh2 Myb kv" kv

Li » Λ ' /™\

o o

ó ' O

R16 R17 (CH2)n-N-S-N

O O R18 em que η é um inteiro desde 0 até 6, m é um inteiro dede 1 até 6, R16, Ri7; e R18 são independentemente selecionados a partir de hidrogênio, Ci-C6 alquil, C3-C8 cicloalquil, aril e heterociclil ou R16 e R17 ou R17 e R18 combinam-se com o(s) átomo(s) a que estão ligados para formar um anel heterociclil de 5 ou 6 membros, R19 é hidrogênio, Ci-C6 alquil, C3- C8 cicloalquil-S(0)2R10 ou -S(O)2N Ri1R12, em que R«>, R11 e R12 são independentemente selecionados a partir de hidrogênio, Ci-C6 alquil, C3-C8 cicloalquil, aril ou heterociclil ou R11 e R12 combinam-se com o átomo de N a que estão ligados para formar um anel heterociclil de 5 ou6 membros.

Noutra modalidade, a invenção relaciona-se com compos- tos selecionados a partir de camente Métodos

A invenção é também direcionada para sais farmaceuti- aceitáveis, hidratos e solvatos dos compostos de Fórmula I. vantajosos de fazer os compostos da Fórmula I são também descritos.

Num aspecto, a invenção compreende um método de tratamento ou prevenção da infecção do vírus da hepatite C num mamí- fero carecido do mesmo, de preferência numa pessoa humana carecida do mesmo, compreendendo administrar ao paciente uma quantidade terapeutica ou profilaticamente efetiva de um composto da Fórmula I.

Numa modalidade, a invenção engloba um método de tratamento ou prevenção de infecção do vírus da hepatite C adminis- trando a um paciente carecido do mesmo uma quantidade terapeutica ou profilaticamente efetiva de um composto da Fórmula I que é um inibidor da polimerase da HCV NS5B.

Noutro aspecto, a invenção engloba um método de trata- mento ou prevenção da infecção do vírus da hepatite C num paciente carecido do mesmo, compreendendo administrar ao paciente uma quantidade terapeutica ou profilaticamente efetiva de um composto da Fórmula I e um excipiente, portador ou veículo farmaceuticamente aceitável.

Noutro aspecto, a invenção engloba um método de trata- mento ou prevenção da infecção do vírus da hepatite C num paciente carecido do mesmo, compreendendo administrar ao paciente uma quantidade terapeutica ou profilaticamente efetiva de um composto da Fórmula I e um agente terapêutico adicional, de preferência um agente antiviral ou um agente imunomodulador adicional.

Descrição Detalhada

da Invenção

Nos casos em que são usados os seguintes termos neste Relatóruio Descritivo, são usados conforme definido abaixo. Os termos "compreendendo", "tendo" e «incluindo" são aqui usados em seus sentidos abertos, não limitativos.

O termo "alquil", conforme aqui usado, a menos que de outra forma indicado, inclui radicais de hidrocarbonetos monovalentes saturados tendo grupamentos retos, ramificados ou cíclicos, (incluindo grupamentos fundidos e bicíclicos com pontes e grupamentos espirocí- clicos) ou uma combinação dos grupamentos precedentes. Para que um grupo alquil tenha grupamentos cíclicos, o grupo deve ter pelo menos

três átomos de carbono.

O termo "alquileno", conforme aqui usado, a menos que de outra forma indicado, inclui um radical divalente derivado de alquil, como exemplificado por -CH2CH2CH2CH2- ·

O termo "alquenil", conforme aqui usado, a menos que de outra forma indicado, inclui grupamentos de alquil tendo pelo menos uma ligação dupla carbono-carbono em que o alquil é conforme definido acima e incluindo isômeros E e Z do referido grupamento de alquenil.

O termo "alquinil", conforme aqui usado, a menos que de outra forma indicado, inclui grupamentos de alquil tendo pelo menos uma ligação tripla carbono-carbono em que o alquil é como definido

acima.

O termo "alcoxi", conforme aqui usado, a menos que de outra forma indicado, inclui grupos O-alquil em que o alquil é como definido acima.

O termo "Me" significa metil, "Et" significa etil e "Ac" significa acetil.

O termo "cicloalquil", conforme aqui usado, a menos que de outra forma indicado, refere-se a um hidrocarboneto não aromático, saturado ou parcialmente saturado, monocíclico ou fundidos, espiro ou bicíclico não fundido ou tricíclico aqui referido como contendo um total de 3 até 10 átomos de carbono, de preferência 5-8 átomos de carbono de anel. Cicloalquis exemplificativos incluem anéis monocíclicos que têm 3-7, de preferência 3-6, átomos de carbono, tais como ciclopropil, ciclobutil, ciclopentil, ciclohexil, cicloheptil e similares.

Exemplos ilustrativos de cicloalquil são derivados a partir, mas sem limnitação, do seguinte:

<image>image see original document page 16</image>

O termo "aril", conforme aqui usado, a menos que de outra forma indicado, inclui um radical orgânico derivado a partir de um hidrocarboneto aromático por remoção de um hidrogênio, tal como fenil ou naftil.

O termo "heterocíclico" ou "heterociclil", conforme aqui usado, a menos que de outra forma indicado, inclui grupos heterocícli- cos aromáticos (por exemplo, heteroaril) e não aromáticos contendo de um a quatro heteroátomos cada um selecionado a partir de S e N, em que cada grupo heterocíclico tem 4-10 átomos em seu sistema de anel e com a condição de que o anel do referido grupo não contenha dois átomos O adjacentes. Os grupos heterocíclicos não aromáticos incluem grupos tendo apenas 3 átomos em seu sistema de anel, mas os grupos heterocíclicos aromáticos devem ter pelo menos 5 átomos em seu sistema de anel. Os grupos heterocíclicos incluem sistemas de anéis benzo-fundidos. Um exemplo de um grupo heterocíclico de 4 membros é o azetidinil (derivado da azetidina). Um exemplo de um grupo hetero- cíclico de 5 membros é o tiazolil e um exemplo de um grupo heterocícli- co de 10 membros é quinolinil. Os exemplos de grupos heterocíclicos não aromáticos são pirrolidinil, tetrahidrofuranoil, dihidrofuranil, tetrahidrotienil, tetrahidropiranil, dihidropiranil, tetrahidrotiopiranil, piperidino, morfolino, tiomorfolino, tioxanil, piperazinil, azetidinil, oxetanil, tietanil, homopiperidinil, oxepanil, tiepanil, oxazepinil, diaze- pinil, tiazepinil, 1,2,3,6-tetrahidropiridinil, 2-pirrolinil, 3-pirrolinil, indolinil, 2H-piranil, 4H-piranil, dioxanil, 1,3dioxolanil, pirazolinil, ditianil, ditiolanil, dihidropiranil, dihidrotienil, dihidrofuranil, pirazoli- dinil, imidazolinil, imidazolidinil, 3-azabiciclo[3,l,0]hexanil, 3- azabiciclo[4,l,0]heptanil, 3H-indolil e quinolizinil. Os exemplos de grupos heterocíclicos aromáticos são piridinil, imidazolil, pirimidinil, pirazolil, triazolil, pirazinil, tetrazolil, furil, tienil, isoxazolil, tiazolil, oxazolil, isotiazolil, pirrolil, quinolinil, isoquinolinil, indolil, benzimida- zolil, benzofuranil, cinolinil, indazolil, indolizinil, ftalazinil, piridazinil, triazinil, isoindolil, pteridinil, purinil, oxadiazolil, tiadiazolil, furazanil, benzofurazanil, benzotiofenil, benzotiazolil, benzoxazolil, quinazolinil, quinoxalinil, naftiridinil e furopiridinil. Os grupos precedentes, confor- me derivados dos grupos listados acima, podem ser ligados ao C ou ligados ao N onde isso for possível. Por exemplo, um grupo derivado do pirrol pode ser pirrol-l-il (ligado ao N) ou pirrol-3-il (ligado ao C). Além disso, um grupo derivado do imidazol pode ser imidazol-l-il (ligado ao N) ou imidazol-3-il (ligado ao C). Os heterocíclicos de 4-10 membros podem ser opcionalmente substituídos em qualquer carbono, enxofre ou átomo(s) de nitrogênio do anel por um a dois oxo, por anel. Um exem- plo de um grupo heterocíclico em que 2 átomos de carbono do anel são substituídos com radicais oxo é 1,1-dioxo-tiomorfolinil. Outros exem- plos ilustrativos de heterocíclicos de 4-10 membros são derivados a partir, mas, sem limitação, do seguinte: A menos que de outra forma definido, "alquil", "alquile- no", "alquenil", "alquinil", "aril", "cicloalquil" ou "heterociclil" são cada um opcional e independentemente substituídos por substituintes 1-3 selecionados a partir de alquilamina, amino, aril, cicloalquil, heteroci- clil, Ci-C6 alquil, Ci-C6 haloalquil, Ci-C6 hidroxialquil, Ci-C6 alcoxi, Ci- C6 alquilamina, Ci-C6 dialquilamina, C2-Cealquenil ou C2-C6 alquinil, em que cada um pode ser interrompido por um ou mais hetero átomos, carboxil, ciano, halo, hidroxi, nitro, C(O)OH, -C(0)2-(Ci-C6 alquil), - C(0)2-(C3-C8 cicloalquil, -C(0)2-(aril, -C(0)2-(heterociclil), -C(0)2-(Ci-C6 alquileno)aril, -C(0)2-(Ci-C6 alquileno) heterociclil, -C(0)2-(Ci-C6 alquile- no) cicloalquil, -C(0)(Ci-C6 alquil, -C(0)(C3-C8 cicloalquil, -C(0)(aril), - C(O) (heterociclil, -C(0)(Ci-C6 alquileno)aril, -C(0)(Ci-C6 alquile- no)heterociclil e -C(O) (Ci-C6 alquileno)cicloalquil, em que cada um destes substituintes opcionais pode ser opcionalmente ainda substituí- do por substituintes 1-5 selecionados a partir de amino, ciano, halo, hidroxi, nitro, Ci-C6 alquilamina, Ci-C6 dialquilamina, Ci-C6 alquil, Ci- C6 alcoxi, Ci-C6 alquenil e Ci-C6 hidroxialquil, em que cada alquil é opcionalmente substituído por um ou mais halo substituintes, por exemplo, CF3,

O termo "imunomodulator" refere-se a produtos naturais ou sintéticos capazes de modificar o sistema imuno normal ou aberran- te através de excitação ou supressão.

O termo "impedindo" refere-se à capacidade de um composto ou composição da invenção de impedir uma doença aui identificada em pacientes diagnosticados como tendo a doença ou que estão em risco de desenvolvimento dessa doença. O termo também engloba impedir a progressão adicional da doença em pacientes que já estão sofrendo ou tendo sintomas dessa doença.

O termo "paciente" ou "sujeito" significa um animal (por exemplo, vaca, cavalo, ovelha, porco, galinha, peru, codorniz, gato, cachorro, rato, rato, coelho, cobaia etc.) ou um mamífero, incluindo animais e mamíferos quiméricos e transgênicos. No tratamento ou prevenção da infecção de HCV, o termo "paciente" ou "sujeito" significa, de preferência, um macaco ou uma pessoa humana, com maior prefe- rência uma pessoa humana. Numa modalidade específica, o paciente ou sujeito é infectado ou exposto ao vírus da hepatite C. Em certas modalidades, o paciente é um paciente criança humana (idade 0-2), criança (idade 2-17), adolescente (idade 12-17), adulto (idade 18 e para cima) ou geriátrico (idade 70 e para cima). Além disso, o paciente inclui pacientes imunocomprometidos tais como pacientes de HIV positivo, pacientes de câncer, pacientes sofrendo de imunoterapia ou de quimio- terapia. Numa modalidade particular, o paciente é um indivíduo sau- dável, isto é, não exibe sintomas de outras infecções virais.

O termo "quantidade terapeuticamente efetiva" refere-se a uma quantidade do composto da invenção suficiente para proporcionar um benefício no tratamento ou prevenção da doença viral, para demorar ou minimizar os sintomas associados a infecção viral ou induzida por vírus ou para curar ou melhorar a doença ou infecção de causa da mesma. Em particular, uma quantidade terapeuticamente efetiva significa uma quantidade suficiente para proporcionar um benefício terapêutico in vivo. Usado com relação com uma quantidade de um composto da invenção, o termo engloba, de preferência, uma quantida- de não tóxica que melhora a terapia global, reduz ou evita sintomas ou causas de doença ou aumenta a eficácia terapêutica ou a sinergia com outro agente terapêutico.

O termo "quantidade profilaticamente efetiva" refere-se a uma quantidade de um composto da invenção ou outro ingrediente ativo suficiente para resultar na prevenção da infecção, repetição ou expansão da infecção viral. Uma quantidade profilaticamente efetiva pode referir-se a uma quantidade suficiente para impedir a infecção inicial ou a repetição ou expansão da infecção ou uma doença associa- da com a infecção. Usado em relação com uma quantidade de um composto da invenção, o termo engloba, de preferência, uma quantida- de não tóxica que melhora a profilaxia global ou aumenta a eficácia profiláctica ou a sinergia com outro agente profiláctico ou terapêutico.

O termo "em combinação" refere-se ao uso de mais de um agente terapêutico e/ou profiláctico simultanea ou seqüencialmente e de uma maneira que os efeitos respectivos sejam aditivos ou sinergéti-

COS. O termo "tratando" refere-se a:

(i) impedindo uma doença, desordem ou condição de acontecer num animal que possa estar predisposto para a doença, condição e/ou de desordem, mas ainda não tenha sido diagnosticado como a tendo;

(ii) inibindo a doença, desordem ou condição, isto é, retendo o seu desenvolvimento; e

(iii) aliviando a doença, desordem ou condição, isto é, ocasionando a regressão da doença, desordem e/ou condição.

Os termos "R" e "S" indicam a configuração específica éstereoquímica de um substituinte num átomo de carbono assimétrico numa estrutura química conforme desenhada.

O termo "rac" indica que um composto é um racemato, que é definido como uma mistura equimolar de um par de enantiôme- ros. Um composto "rac" não exibe atividade óptica. O nome ou fórmula químicos de um racemato é distinguido daqueles dos enantiômeros pelo prefixo (±)- ou rac-(ou racem-) ou pelos símbolos RS e SR.

Os compostos da invenção podem exibir o fenômeno do tautomerismo. Embora a Fórmula I não consiga representar expressa- mente todas as possíveis formas tautoméricas, deve ficar entendido que a Fórmula I pretende representar qualquer forma tautomérica do com- posto representado e não deve ficar somente limitado a uma forma de composto específico representado pelos desenhos da fórmula. Para ilustração e de nenhuma maneira limitando a faixa de tautômeros, os compostos da Fórmula I podem existir como os seguintes: <formula>formula see original document page 22</formula>

Algumas dos compostos inventivos podem existir como éstereoisômeros únicos (isto é, essencialmente isentos de outros éstere- oisômeros), racematos e/ou misturas de enantiômeros e/ou diastereô- meros. Pretende-se que todos esses únicos éstereoisômeros, racematos e misturas dos mesmos estejam dentro do âmbito da presente invenção. De preferência, os compostos inventivos que são oticamente ativos são usados numa forma oticamente pura.

Como geralmente entendido por aquelas pessoas qualifi- cadas na técnica, um composto oticamente puro tendo um centro quiral (isto é, um átomo de carbono assimétrico) é um que consiste essencial- mente num dos dois possíveis enantiômeros (isto é, é enantioméricoa- mente puro) e um composto oticamente puro tendo mais de um centro quiral é um que é tanto diastomericamente puro e enantioméricoamente puro. De preferência, os compostos da presente invenção são usados numa forma que é pelo menos 90% isenta de outros enantiômeros ou diastereômeros dos compostos, isto é, uma forma que contém pelo menos 90% de um único isômero (80% de excesso enantiomérico ("e.e.") ou excesso diastereomérico ("d.e.")), com maior preferência pelo menos 95% (90% e.e. ou d.e.), mesmo com maior preferência pelo menos 97,5% (95% e.e. ou d.e.) e com maior preferência pelo menos 99% (98% e.e. ou d.e.).

Além disso, pretende-se que a Fórmula I cubra formas solvatadas assim como também não solvatadas das estruturas identifi- cadas. Por exemplo, a Fórmula I inclui compostos da estrutura indicada tanto nas formas hidratadas como não hidratadas. Outros exemplos de solvatos incluem as estruturas em combinação com isopropanol, etanol, metanol, DMSO, acetato de etila, ácido acético ou etanolamina.

Além de compostos da Fórmula I, a invenção inclui prodrogas farmaceuticamente aceitáveis, metabolitos farmaceuticamen- te ativos e sais farmaceuticamente aceitáveis desses compostos e meta- bolitos.

Uma "prodroga farmaceuticamente aceitável" é um composto que pode ser convertido sob condições fisiológicas ou por solvólise no composto especificado ou num sal farmaceuticamente aceitável desse composto antes de exibir o(s) seu(s) efeito(s) farmacológi- co(s). Tipicamente, a prodroga é formulada com o(s) objetivo(s) de estabilidade química aperfeiçoada, aceitação e adequação melhoradas para o paciente, biodisponibilidade aperfeiçoada, duração prolongada de ação, seletividade de órgão melhorada, formulação aperfeiçoada (por exemplo, hidrossolubilidade aumentada) e/ou efeitos colaterais diminu- ídos (por exemplo, toxicidade). A prodroga pode ser prontamente preparada a partir dos compostos da Fórmula I usando métodos conhe- cidos na técnica, como aqueles descritos por Burger's Medicianl Chemis- try and Drug Chemistry, 1, 172-178, 949-982 (1995). Ver também Bertolini e colaboradores, J. Med. Chem., 40, 2011-2016(1997); Shan, e colaboradores, J. Farm. ScL, 86 (7), 765-767; Bagshawe, Drug Dev. Res., 34, 220-230 (1995); Bodor, Advances in Drug Res., 13, 224-331(1984); Bundgaard, Design of Prodrugs (Elsevier Press, 1985); Larsen, Design and Application ofProdrugs, Drug design and Development (Krogsgaard- Larsen e colaboradores., eds., Harwood Academic Publishers, 1991); Dear e colaboradores., J. Chromatogr. B, 748, 281-293 (2000); Spraul e colaboradores, J. Farameeutical & Biomedieal Analysis, 10, 601-605 (1992); e Frox e colaboradores, Xenobiol., 3, 103-112 (1992).

Um "metabolito farmaceuticamente ativo" pretende significar um produto farmacologicamente ativo produzido através do metabolismo no corpo de um composto especificado ou sal do mesmo. Depois da entrada no corpo, a maioria das drogas são substratos para reações químicas que podem mudar as suas propriedades físicas e efeitos biológicos. Estas conversões metabólicas, que normalmente afetam a polaridade dos compostos da Fórmula I, alteram a maneira por que drogas são distribuídas e excretadas do corpo. Todavia, em alguns casos, o metabolismo de uma droga é exigido para efeito terapêutico. Por exemplo, as drogas anticancerígenas da classe anti-metabolitos devem ser convertidas em suas formas ativas depois de terem sido transportadas para dentro de uma célula cancerígena.

Visto que a maioria de drogas sofre transformação meta- bólica de algum tipo, as reações bioquímicas que desempenham um papel no metabolismo de droga podem ser numerosas e diversas. O local principal do metabolismo da droga é o fígado, embora outros tecidos possam participar também.

Uma característica típica de muitas destas transforma- ções é que os produtos metabólicos ou "metabolitos" são mais polares do que as drogas pai, embora uma droga polar algumas vezes gere um produto menos polar. As substâncias com altos coeficientes de partição lípido/água, que passem facilmente através de membranas, difundem- se também de volta prontamente a partir da urina tubular através das células tubulares renais para o plasma. Deste modo, essas substâncias tendem a ter uma baixa liberação renal e uma longa persistência no corpo. Se uma droga for metabolizada num composto mais polar, um com um coeficiente de partição mais baixo, a sua reabsorção tubular será muito reduzida. Além disso, os mecanismos de secreção específi- cos para os ânions e cátions nos túbulos renais proximais e nas células parenquimais do fígado atuam sobre substâncias altamente polares.

Como exemplo específico, a fenacetina (acetofenetidina) e a acetanilid são ambos analgésicos suaves e agentes antipiréticos, mas são transformados dentro do corpo num metabolito mais polar e mais efetivo, p-hidroxiacetanilida (acetaminofen), que é extensamente usado hoje. Quando é dada a uma pessoa uma dose de acetanilida, os suces- sivos metabolitos formam seqüencialmente picos e quedas no plasma. Durante a primeira hora, a acetanilida é o principal componente plas- mático. Na segunda hora, à medida que o nível de acetanilida cai, a concentração do metabolito acetaminofen alcança um pico. Finalmente, depois de algumas horas, o principal componente plasmático é um metabolito adicional que é inerte e pode ser excretado do corpo. Deste modo, as concentrações plasmáticas de um ou mais metabolitos, assim como também a droga propriamente, podem ser farmacologicamente importantes.

Um "sal farmaceuticamente aceitável" pretende signifcar um sal que retém a efetividade biológica dos ácidos e bases livres do composto especificado e isto não é biologicamente nem de outra forma indesejável. Um composto da invenção pode possuir um ou ambos os grupos funcionais suficientemente ácidos, suficientemente básicos, e reagir conseqüentemente com alguns de vários ácidos ou bases inorgâ- nicas ou orgânicas e ácidos inorgânicos e orgânicos, para formar um sal farmaceuticamente aceitável. Sais exemplificativos farmaceuticamente aceitáveis incluem aqueles sais preparados por reação dos compostos da presente invenção com um ácido mineral ou orgânico ou uma base inorgânica, tais como sais incluindo sulfatos, pirosulfatos, bissulfatos, sulfitos, bissulfitos, fosfatos, monohidrogeniofosfatos, dihidrogeniofosfa- tos, metafosfatos, pirofosfatos, cloretos, brometos, iodetos, acetatos, proprionatos, decanoatos, caprilatos, acrilatos, formiatos, isobutiratos, caproatos, heptanoatos, propiolatos, oxalatos, malonatos, succinatos, suberatos, sebacatos, fumaratos, maleatos, butino-1,4 dioatos, hexine-1,6-dioatos, benzoatos, clorobenzoatos, metilbenzoatos, dinitrobenzoa- tos, hidroxibenzoatos, metoxibenzoatos, ftalatos, sulfonatos, xilenosul- fonatos, fenilacetatos, fenilproprionatos, fenilbutiratos, citratos, lacta- tos, γ-hidroxibutiratos, glicolatos, tartaratos, metanossulfonatos, pro- pano s sulfonato s, naftaleno-l-sulfonatos, naftaleno-2 -sulfonatos e mandelatos.

Se o composto inventivo é uma base, o sal farmaceutica- mente aceitável desejado pode ser preparado por qualquer método adequado disponível na técnica, por exemplo, tratamento da base livre com um ácido inorgânico, tal como ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico e similares ou com um ácido orgânico, tal como ácido acético, ácido maleico, ácido succínico, ácido mandélico, ácido fumárico, ácido malônico, ácido pirúvico, ácido oxálico, ácido glicólico, ácido salicílico, um ácido piranosidil, tal como o ácido glucurônico ou o ácido galacturônico, um ácido α-hidroxi, tal como o ácido cítrico ou o ácido tartárico, um aminoácido, tal como o ácido aspártico ou o ácido glutâmico, um ácido aromático, tal como o ácido benzóico ou o ácido cinâmico, um ácido sulfônico, tal como o ácido p-toluenossulfônico ou o ácido etanossulfônico ou similares.

Se o composto inventivo for um ácido, o sal desejado farmaceuticamente aceitável pode ser preparado por qualquer método adequado, por exemplo, por tratamento do ácido livre com uma base inorgânica ou orgânica, tal como uma amina (primária, secundária ou terciária), um hidróxido de metal alcalino ou hidróxido de metal alcali- no-terroso ou similares. Os exemplos ilustrativos de sais adequados incluem sais orgânicos derivados a partir de aminoácidos, tais como glicina e arginina, amônia, aminas primárias, secundárias e terciárias, e cíclicos, tais como piperidina, morfolina e piperazina, e sais inorgânicos derivados a partir de sódio, cálcio, potássio, magnésio, manganês, ferro, cobre, zinco, alumínio e lítio.

No caso de agentes que são sólidos, é entendido por aquelas pessoas qualificadas na técnica que os compostos e sais inven- tivos podem existir em diferentes formas de cristal ou polimórficas, todas as quais se pretende que estejam dentro do âmbito da presente invenção e fórmulas especificadas.

Métodos de Tratamento e Prevenção

de Infecções Virais de Hepatite C

A presente invenção proporciona métodos de tratamento ou impedimento de infecção de vírus da hepatite C num paciente care- cido dos mesmos.

A presente invenção proporciona ainda métodos de introdução de uma quantidade terapeuticamente efetiva do composto da Fórmula I ou combinação desses compostos na corrente sangüínea de um paciente na prevenção e/ou de tratamento de infecções virais de hepatite C.

A magnitude de uma dose profiláctica ou terapêutica de um composto da Fórmula I da invenção ou um sal, solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo no tratamento agudo ou crônico ou prevenção de uma infecção variarão, porém, com a natureza e a severidade da infecção e a rota por que o ingrediente ativo é adminis- trado. A dose e, nalguns casos, a freqüência da dose, variarão também de acordo com a infecção a ser tratada, a idade, o peso corpóreo e a resposta do paciente individual. Regimes de dosagens adequados podem ser prontamente selecionados por aquelas pessoas qualificadas na técnica com a consideração devida desses fatores.

Os métodos da presente invenção são particularmente bem adaptados para os pacientes humanos. Em particular, os métodos e doses da presente invenção podem ser úteis para pacientes imuno- comprometidos incluindo, mas, sem limitação, pacientes de câncer, pacientes infectados por HIV e pacientes com uma doença imunodege- nerativa. Além disso, os métodos podem ser úteis para pacientes imunocomprometidos atualmente em estado de remissão. Os métodos e doses da presente invenção são também úteis para pacientes que sofrem outros tratamentos antivirais. Os métodos de prevenção da presente invenção são particularmente úteis para pacientes em risco de infecção viral. Estes pacientes incluem, mas, sem limitação, assistentes de saúde, por exemplo, doutores, enfermeiras, assistentes de hospícios; pessoal militar; professores; asistentes de crianças; pacientes deslocan- do-se ou vivendo em lugares estrangeiros, em particular lugares do terceiro mundo incluindo asistentes sociais, missionários e diplomatas estrangeiros. Finalmente, os métodos e composições incluem o trata- mento de pacientes ou pacientes refratários resistentes ao tratamento tais como resistência a inibidores da transcriptase inversa, inibidores de protease etc.

Dosagens

A toxicidade e eficácia dos compostos da invenção podem ser determinadas por procedimentos farmacêuticos padrão em culturas de células ou animais experimentais, por exemplo, para determinar o LD50 (a dose letal para 50% da população) e o ED50 (a dose terapeutica- mente efetiva em 50% da população). A relação de dose entre efeitos tóxicos e terapêuticos é o índice terapêutico e ele pode ser expresso como a relação LDso/ EDso,

Os dados obtidos a partir dos ensaios de cultura de células e estudos animais podem ser usados para formular uma faixa de dosagem dos compostos para uso nas pessoas humanas. A dosagem desses compostos situa-se, de preferência, dentro de uma faixa de concentrações circulantes que incluem o ED50 com pequena ou nenhu- ma toxicidade. A dosagem pode variar dentro desta faixa dependendo da forma de dosagem empregada e a rota de administração utilizada. Para qualquer composto usado no método da invenção, a dose terapeu- ticamente efetiva pode ser inicialmente estimada a partir de ensaios de cultura de células. Uma dose pode ser formulada em modelos animais para alcançar uma faixa de concentração circulante no plasma que inclui o IC50 (isto é, a concentração do composto de teste que alcança uma inibição máxima de metada dos sintomas) conforme determinada na cultura de células; alternativamente, a dose do composto da Fórmu- la I pode ser formulada em modelos animais para alcançar uma faixa de concentração circulante no plasma do composto que corresponde à concentração exigida para alcançar uma magnitude fixa de resposta. Essas informações podem ser usadas com mais precisão para determi- nar doses úteis em humanos. Os níveis no plasma podem ser medidos, por exemplo, por cromatografia líquida de alto desempenho.

Os protocolos e composições da invenção são, de prefe- rência, testados in vitro e, depois, in vivo, para a atividade terapêutica ou profiláctica desejada, antes do uso em humanos. Por exemplo, ensaios in vitro que podem ser usados para determinar se é indicada a administração de um protocolo terapêutico específico, incluem ensaios in vitro da cultura de células em que as células que respondem aos efeitos dos compostos da Fórmula I são expostos ao ligante e a magni- tude de resposta é medida por uma técnica apropriada. A estimativa do composto da Fórmula I é, então, avaliada com respeito à potência do composto da Fórmula I e o grau de conversão da prodroga do composto da Fórmula I. Os compostos para uso em métodos da invenção podem ser testados em sistemas de modelos animais adequados antes da testagem em humanos, incluindo mas, sem limitação, em ratazanas, camundongos, galinhas, vacas, macacos, coelhos, hamsters etc. Os compostos podem, então, ser usados nas tentativas clínicas apropria- das.

A magnitude de uma dose profiláctica ou terapêutica de uma prodroga de um composto da Fórmula I da invenção ou um sal, solvato ou hidrato do mesmo farmaceuticamente aceitável no tratamen- to agudo ou crônico ou prevenção de uma infecção ou condição variarã.o com a natureza e a severidade da infecção e a rota por que o ingrediente ativo é administrado. A dose e talvez a freqüência da dose variarão também de acordo com a infecção a ser tratada, a idade, o peso corpó- reo e a resposta do paciente individual. Regimes de dosagem adequada podemr ser prontamente selecionados por aquelas pessoas qualificadas na técnica com a devida consideração desses fatores. Numa modalida- de, a dose administrada depende do composto específico a ser usado e o peso e a condição do paciente. Também a dose pode diferir para vários compostos particulares da Fórmula I; as doses adequadas podem ser preditas com base das medições in vitro acima mencionadas e com base em estudos animais, de tal forma que doses menores serão adequadas para aqueles compostos da Fórmula I que mostram efetividade em concentrações mais baixas do que outro composto da Fórmula I, quan- do medidas nos sistemas aqui descritos ou referenciados. Em geral, a dose por dia está na faixa de mais ou menos de 0,001 a 100 mg/kg, de preferência cerca de 1 a 25 mg/kg, com maior preferência aproximada- mente de 5 a 15 mg/kg. Para tratamento de humanos infectados por vírus da hepatite C, cerca de 0,1 mg até mais ou menos 15 g por dia são administrados em aproximadamente de uma a quatro divisões por dia, de preferência 100 mg a 12 g por dia, com maior preferência de 100 mg até 8,000 mg por dia.

Além disso, a dose diária recomendada corrida pode ser administrada em ciclos como agentes únicos ou em combinação com outros agentes terapêuticos. Numa modalidade, a dose diária é admi- nistrada numa dose única ou em doses igualmente divididas. Numa modalidade relacionada, a dose diária recomendada pode ser adminis- trada uma vez por semana, duas vezes por semana, três vezes por semana, quatro vezes por semana ou cinco vezes por semana.

Numa modalidade, os compostos da invenção são admi- nistrados para proporcionar a distribuição sistêmica do composto dentro do paciente. Numa modalidade relacionada, os compostos da invenção são administrados para produzir um efeito sistêmico no corpo.

Noutra modalidade os compostos da invenção são admi- nistrados por via oral, mucosa (incluindo sublingual, bucal, retal, nasal ou vaginal), parenteral (incluindo subcutâne, intramuscular, injeção de bolo, intraarterial ou intravenosa), transdérmica ou por administração tópica. Numa modalidade específica, os compostos da invenção são administrados via mucosa (incluindo sublingual, bucal, retal, nasal ou vaginal), parenteral (incluindo subcutânea, intramuscular, injeção de bolo, intraarterial ou intravenosa), transdérmica ou por administração tópica. Numa modalidade específica adicional, os compostos da inven- ção são administrados por administração por via oral. Numa modalida- de específica adicional, os compostos da invenção não são administra- dos por administração por via oral.

Diferentes quantidades terapeuticamente efetivas podem ser aplicáveis a diferentes infecções, como sera prontamente conhecido por aquelas pessoas de capacidade ordinária na técnica. De modo semelhante, quantidades suficientes para tratar ou impedir essas infecções, mas insuficientes para causar ou suficientes para reduzir efeitos adversos associados a terapias convencionais são também englobadas pelas quantidades de dosagem acima descritas e os horários de freqüência das doses.

Terapia de Combinação

Os métodos específicos da invenção compreendem ainda a administração de um agente terapêutico adicional (isto é, um agente terapêutico diferente de um composto da invenção). Em certas modali- dades da presente invenção, os compostos da invenção podem ser usados em combinação com pelo menos outro agente terapêutico. Os agentes terapêuticos incluem, mas, sem limitação, antibióticos, agentes antieméticos, antidepressivos e agentes antifúngicos, agentes anti- inflamatórios, agentes antivirais, agentes anticâncer, agentes imuno- moduladores, interferons-a, interferons-β, ribavirina, agentes alquilan- tes, hormônios, citocinas ou moduladores semelhantes a receptor de sinal. Numa modalidade, a invenção engloba a administração de um agente terapêutico adicional que é específico do HCV ou demonstra atividade anti-HCV.

Os compostos da Fórmula I da invenção podem ser administrados ou formulados em combinação com antibióticos. Por exemplo, podem ser formulados com um macrólido (por exemplo, tobramicina (Tobi®)), uma cefalosporina (por exemplo, cefalexina (Ke- flex®), cefradina (Velosef®), cefuroxima (Ceftin®), cefprozil (Cefzil®), cefaclor (Ceclor®), cefixima (Suprax®) ou cefadroxil (Duricef®)), uma claritromicina (por exemplo, claritromicina (Biaxin®)), uma eritromicina (por exemplo, eritromicina (EMicina®)), uma penicilina (por exemplo, penicilina V (V-Cilina K® ou Pen Vee K®)) ou uma quinolona (por exem- plo, ofloxacin (Floxin®), ciprofloxacina (Cipro®) ou norfloxacina (Noro- xin®)), antibióticos aminoglicosídios (por exemplo, apramicina, arbeca- cina, bambermicinas, butirosina, dibecacina, neomicina, undecilenato, netilmicina, paromomicina, ribostamicina, sisomicina e espectinomici- na), antibióticos de anfenicol (por exemplo, azidanfenicol, cloranfenicol, florfenicol e tianfenicol), antibióticos de ansamicina (por exemplo, rifamida e rifampina), carbacefens (por exemplo, loracarbef), carbape- nens (por exemplo, biapenem e imipenem), cefalosporinas (por exemplo, cefaclor, cefadroxil, cefamandole, cefatrizina, cefazedona, cefozopran, cefpimizola, cefpiramida e cefiroma), cefamicinas (por exemplo, cefbupe- razona, cefmetazola e cefminox), monobactames (por exemplo, aztreo- nam, carumonam e tigemonam), oxacefens (por exemplo, flomoxef e moxalactama), penicilinas (por exemplo, amdinocilina, amdinocilina pivoxil, amoxicilina, bacampicilina, ácido benzilpenicilínico, benzilpeni- cilina sódio, epicilina, fenbenicilina, floxacilina, penamcilina, penetama- to hidroiodeto, penicilina o-benetamina, penicilina 0, penicilina V, penicilina V benzatina, penicilina V hidrabamina, penimepiciclina e fencihicilina potássio), lincosamidas (por exemplo, clindamicina e lincomicina), amfomicina, bacitracin, capreomicina, colistina, endura- cidin, enviomicina, tetraciclinas (por exemplo, apiciclina, clortetracicli- na, clomociclina, e demeclociclina), de 2,4 diaminopirimidines (por exemplo, brodimoprim), nitrofurans (por exemplo, furaitadona e cloreto de furazólio), quinolonas e analogs do mesmo (por exemplo, cinoxacina, clinafloxacina, flumequina e grepagloxacina), sulfonamidas (por exem- plo, acetil sulfametoxipirazina, benzilsulfamida, noprilsulfamida, ftalil- sulfacetamida, sulfachrysoidina e sulfacitina), sulfonas (por exemplo, diathymosulfona, glucosulfona sódio, e solasulfona), cicloserina, mupi- rocina e tuberina.

Os compostos da Fórmula I da invenção podem ser também administrados ou formulados em combinação com um agente antiemético. Os agentes antieméticos adequados incluem, mas, sem limitação, metoclopromida, domperidona, proclorperazina, prometazina, clorpromazina, trimethobenzamida, ondansetron, granisetron, hidroxi- zina, acetilleucina monoetanolamina, alizapride, azasetron, benzquina- mida, bietanautina, bromoprida, buclizina, clebopride, ciclizina, dime- nhidrinato, difenidol, dolasetron, meclizina, metalatal, metopimazina, nabilone, oxiperndil, pipamazina, escopolamina, sulpiride, tetrahidro- canabinol, tietilperazina, tioproperazina, tropisetron e misturas dos mesmos.

Os compostos da Fórmula I da invenção podem ser administrados ou formulados em combinação com um antidepressivo. Os antidepressivos adequados incluem, mas, sem limitação, binedalina, caroxazona, citalopram, dimetazan, fencamina, indalpina, cloreto de indeloxazina, nefopam, nomifensina, oxitriptan, oxipertina, paroxetina, sertralina, tiazesim, trazodona, benmoxina, iproclozida, iproniazida, isocarboxazida, nialamida, octamoxina, fenelzina, cotinina, roliciprina, rolipram, maprotilina, metralindol, mianserina, mirtazepina, adinazo- lam, amitriptilina, amitriptilinoxide, amoxapina, butriptilina, clomipra- mina, demexiptiline, desipramina, dibenzepina, dimetacrina, dotiepina, doxepina, fluacizina, imipramina, N-óxido de imipramina, iprindol, lofepramina, melitracena, metapramina, nortriptilina, noxiptilina, opipramol, pizotilina, propizepina, protriptilina, quinupramina, tianep- tina, trimipramina, adrafinil, benactizina, bupropion, butacetina, dioxadrol, duloxetina, etoperidona, febarbamato, femoxetina, fenpenta- diol, fluoxetina, fluvoxamina, hematoporfirina, hipericina, levofacetope- rana, medifoxamina, milnacipran, minaprina, moclobemida, nefazodo- na, oxaflozana, piberalina, prolintana, pirisuccideanol, ritanserina, roxindol, cloreto de rubídio, sulpirida, tandospirona, tozalinona, tofena- cina, toloxatona, tranilcypromina, L-triptofano, venlafaxina, viloxazina e zimeldine.

Os compostos da Fórmula I da invenção podem ser administrados ou formulados em combinação com um agente de anti- fúngico. Os agentes antifúngicos adequados incluem, mas, sem limita- ção, amfotericina B, itraconazol, ketoconazol, fluconazol, intratecal, flucitosina, miconazol, butoconazol, clotrimazol, nistatina, terconazol, tioconazol, ciclopirox, econazol, haloprogrina, naftifina, terbinafina, undecilenato, e griseofulvin.

Os compostos da Fórmula I da invenção podem ser administrados ou formulados em combinação com um agente antiin- flamatório. Os agentes antiinflamatórios úteis incluem, mas, sem limitação, drogas de não steroidal antiinflamatório como ácido salicílico, ácido acetllsalicílico, metil salicllato, diflunisal, salsalato, olsalazina, sulfasalazina, acetaminofeno, indometacina, sulindac, etodolac, ácido mefenâmico, meclofenamato de sódio, tolmetina, ketorolac, diclofenac, ibuprofeno, naproxeno, naproxeno sódio, fenoprofeno, cetoprofeno, flurbinprofeno, oxaprozina, piroxicam, meloxicam, ampiroxicam, droxi- cam, pivoxicam, tenoxicam, nabumetoma, fenilbutazona, oxifenbutazo- na, antipirina, aminopirina, apazona e nimesulida; antagonistas de leucotrieno incluindo, mas, sem limitação, zileuton, aurotioglucose, sódio ouro tiomalata e auranofin; ésteróides incluindo, mas, sem limita- ção, derivados de alclometasona diproprionato, ancinonida, beclometa- zona diproprionato, betametasona, betametasona benzoato, betameta- zona dipropionato, fosfato de betametazona sódio, valerato de betame- tazona, clobetasol proprionato, clocortolona pivalato, hidrocortisona, hidrocortisona, desonida, desoximatasona, dexametasona, flunisolida, flucoxinolida, flurandrenolida, halcinocida, medrisona, metilprednisolo- na, acetato de metprednisolona, succinato de metilprednisolona sódio, mometasona furoato, parametazona acetato, prednisolona, prednisolo- na acetato, prednisolona sódio fosfato, prednisolona tebuatato, predni- sona, triamcinolona, triamcinolona acetonida, triancinolona diacetato e triancinolona hexacetonida; e outros agentes anti-inflamatórios incluin- do, mas, sem limitação, metotrexato, colchicina, alopurinol, probeneci- da, sulfinpirazona e benzbromarona.

Os compostos da Fórmula I da invenção podem ser administrados ou formulados em combinação com outro agente antivi- ral. Os agentes antivirais úteis incluem, mas, sem limitação, inibidores da protease, inibidores da transcriptase reversa do nucleosídio, inibido- res da transcriptase reversa do não nucleosídio e análogos de nucleosí- dio. Os agentes antivirais incluem, mas, sem limitação, zidovudina, aciclovir, gangciclovir, vidarabina, idoxuridina, trifluridina, levovirina, viramidina e ribavirina, assim como também foscarnet, amantadina, rimantadina, saquinavir, indinavir, amprenavir, lopinavir, ritonavir, os α-interferons; os β-interferons; adefovir, clevadina, entecavir, pleconaril.

Os compostos da Fórmula I da invenção podem ser administrados ou formulados em combinação com um agente imuno- modulador. Os agentes imunomoduladores incluem, mas, sem limita- ção, metotrexato, leflunomida, ciclofosfamida, ciclosporina A, micofeno- Iato mofetil, rapamicina (sirolimus), mizoribina, deoxispergualina, brequinar, malononitriloamidas (por exemplo, leflunamida), modulado- res do receptor da célula T e moduladores do receptor da citocina, miméticos de peptídios e anticorpos (por exemplo, humano, humaniza- do, quimérico, monoclonal, policlonal, Fvs, ScFvs, fragmentos Fab ou F(ab)2 ou fragmentos de ligação de epitopo), moléculas de ácido nucléi- co (por exemplo, moléculas de ácido nucléico anti-sentido e de hélices triplas), moléculas pequenas, compostos orgânicos e compostos inorgâ- nicos. Os exemplos de moduladores de receptor de célula T incluem, mas, sem limitação, anticorpos de receptor de célula anti-T (por exem- plo, anticorpos anti-cd4s (por exemplo, cm-T412 (Boehringer), IDEC- CE9, 1® (IDEC e SKB), mAB 4162W94, Orthoclone e OKTcdr4a (Jans- sen-Cilag)), anticorpos anti-cd3s (por exemplo, Nuvion (Product Design Labs), OKT3 (Johnson & Johnson) ou Rituxan (IDEC)), anticorpos anti- cd5s (por exemplo, um imunoconjugado anti-CD5 ricin-ligado), anticor- pos anti-cd7s (por exemplo, CHH-380 (Novartis)), anticorpos anti-cd8s, anticorpos monoclonais de ligante anti-cd40s (por exemplo, K)EC-131 (IDEC)), anticorpos anti-CD52 (por exemplo, CAMPATH IH (Ilex)), anticorpos anti-CD2, anticorpos anti-CDlla (por exemplo, Xanelim (Genentech)), anticorpos anti-B7 (por exemplo, IDEC-114 (IDEC)), CTLA4-imunoglobulina e moduladores (TLR) semelhantes a receptor de sinal. Os exemplos de moduladores de receptor de citocina incluem, mas, sem limitação, receptores de citocina solúveis (por exemplo, o domínio extracelular de um receptor TNF-α ou um fragmento do mesmo, o domínio extracelular de um receptor IL-Ιβ ou um fragmento do mesmo e o domínio extracelular de um receptor IL-6 ou um fragmento do mesmo), citocinas ou fragmentos das mesmas (por exemplo, interleuci- na (IL)-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-10, IL-11, IL-12, IL-15, TNF-α, interferon (IFN)-a, IFN-β, IFN-γ e GM-CSF), anticorpos de receptor anti-citocinas (por exemplo, anticorpos de receptor anti-IFN, anticorpos de receptor anti-IL-2 (por exemplo, Zenapax (Protein Design Labs)), anticorpos de receptor anti-IL-4, anticorpos de receptor anti-IL-6, anticorpos de receptor anti-IL-10 e anticorpos de receptor anti-IL-12), anticorpos anti-citocinas (por exemplo, anticorpos anti-IFN, anticorpos anti-TNF-α, anticorpos anti-IL-Ιβ, anticorpos anti-IL-6, anticorpos anti- IL-8 (por exemplo, anticorpos ABX-IL-8 (Abgenix)) e anti-IL-12).

Os compostos da Fórmula I da invenção podem ser administrados ou formulados em combinação com um agente que iniba enzimas virais, incluindo, mas, sem limitação, inibidores da protease do HCV, tal como BILN 2061, SCH-503034, ITMN-191 ou VX-950; e inibi- dores da polimerase de NS5B tal como nml07 (e sua prodroga nm283), R1626, R7078, BILN1941, GSK625433, GILD9128 ou HCV-796,

Os compostos da Fórmula I da invenção podem ser administrados ou formulados em combinação com um agente que iniba a polimerase do HCV como aqueles descritos em Wu, Curr Drug Targets Infect Disord., 3, 207-19 (2003) ou em combinação com compostos que inibam a função helicase do vírus tais como aqueles descritos em Bretner M., e colaboradores, Nucleosides Nueleotides Nucleie Aeids, 22, .1531 (2003) ou com inibidores de outros alvos específicos do HCV tais como aqueles descritos em Zhang X., IDrugs, 5(2), 154-8 (2002).

Os compostos da Fórmula I da invenção podem ser administrados ou formulados em combinação com um agente que iniba a replicação viral.

Os compostos da Fórmula I da invenção podem ser administrados ou formulados em combinação com citocinas. Os exem- plos de citocinas incluem, mas, sem limitação, a interleucina-2 (IL-2), a interleucina-3 (IL-3), a interleucina-4 (IL-4), a interleucina-5 (IL-5), a interleucina-6 (IL-6), a interleucina-7 (IL-7), a interleucina-9 (IL-9), ab interleucina-10 (IL-10), a interleucina-12 (IL-12), a interleucina 15 (IL- .15), a interleucina 18 (IL-18), o fator de crescimento derivado das plaquetas (PDGF), a eritropoietina (Epo), o fator de crescimento epidér- mico (EGF), o fator de crescimento do fibroblasto (FGF), o fator estimu- lante do macrófago do granulócito (GM-CSF), o fator estimulante da colônia do granulócito (G-CSF), o fator estimulante da colônia do ma- crófago (M-CSF), a prolactina e o interferon (IFN), por exemplo, o IFN-α e o IFN- β).

Os compostos da Fórmula I da invenção podem ser administrados ou formulados em combinação com hormônios. Os exemplos de hormônios incluem, mas, sem limitação, hormônio de liberação do hormônio luteinizante (LHRH), o hormônio do crescimento (GH), o hormônio de liberação do hormônio do crescimento, ACTH, somatostatina, somatotropina, somatomedina, hormônio paratiroide, fatores de liberação hipotalámica, insulina, glucagon, encefalinas, vasopressina, calcitonina, heparina, heparinas de baixo peso molecular, heparinoides, opioides sintéticos e naturais, hormônios de insulina estimulantes da tiróide e endorfinas.

Os compostos da Fórmula I da invenção podem ser administrados ou formulados em combinação com interferons-β que incluem, mas sem limitação, interferon-β- Ia, interferon-β-Ib.

Os compostos da Fórmula I da invenção podem ser administrados ou formulados em combinação com interferons-α que incluem, mas sem limitação, interferon a-1, interferon a-2a (roferon), interferon a-2b, intron, Peg-Intro n, Pegasys, interferon de consenso (infergen) e albuferon.

Os compostos da Fórmula I da invenção podem ser administrados ou formulados em combinação com um intensificadro de absorção, particularmente aqueles que visam o sistema linfático, inclu- indo, mas, sem limitação, glicocolato de sódio; caplaca de sódio; N- lauril- β - D - maltopiranosídio; EDTA; micelas misturadas; e aqueles reportados em Muranishi, Crit. Rev. Ther. Drug Carrier Syst., 7-1-33, que é por este meio incorporado por referência na sua totalidade. Outros intensificadores de absorção conhecidos podem ser também usados. Deste modo, a invenção engloba também uma composição farmacêutica que compreende um ou mais compostos da Fórmula I da invenção e um ou mais intensificadores de absorção.

Os compostos da Fórmula I da invenção podem ser administrados ou formulados em combinação com um agente alquilan- te. Os exemplos de agentes alquilantes incluem, mas, sem limitação, mostardas de nitrogênio, etileniminas, metilmelaminas, alquil sulfona- tos, nitrosoureias, triazenos, mecloretamina, ciclofosfamida, ifosfamida, melfalan, clorambucil, hexametilmelaina, tiotepa, bussulfan, carmusti- na, estreptozocina, dacarbazina e temozolomida.

Os compostos da invenção e os outros agentes terapêuti- cos podem agir aditivamente ou, com maior preferência, sinergetica- mente. Numa modalidade, uma composição que compreende um composto da invenção é concorrentemente administrada com a admi- nistração de outro agente terapêutico, que pode ser parte da mesma composição ou numa composição diferente daquela que compreende os compostos da invenção. Noutra modalidade, um composto da invenção é administrado antes ou subseqüente à administração de outro agente terapêutico. Numa modalidade separada, um composto da invenção é administrado a um paciente que não sofreu previamente ou não está fazendo atualmente tratamento com outro agente terapêutico, particu- larmente um agente antiviral.

Numa modalidade, os métodos da invenção compreen- dem a administração de um ou mais compostos da Fórmula I da inven- ção sem um agente terapêutico adicional.

Formas de Composições e Dosagens Farmacêuticas

Composições farmacêuticas e formas de dosagem de unidade única compreendendo um composto da Fórmula I da invenção ou um sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável dos mesmos são também englobados pela invenção. As formas de dosagem individual da invenção podem ser adequadas para administração oral, mucosa (inclu- indo sublingual, bucal, retal, nasal ou vaginal), parenteral (incluindo subcutânea, intramuscular, injeção de bolo, intraarterial ou intraveno- sa), transdérmica ou tópica. As composições farmacêuticas e formas de dosagem da invenção compreendem tipicamente também um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis. As formas de dosagem estéril são também contempladas.

Numa modalidade alternativa, a composição farmacêuti- ca englobada por esta modalidade inclui um composto da Fórmula I da invenção ou um sal ou hidrato farmaceuticamente aceitável dos mes- mos e pelo menos um agente terapêutico adicional. Os exemplos de agentes terapêuticos adicionais incluem, mas, sem limitação, aqueles listados acima.

A composição, forma e tipo de formas de dosagem da invenção variarão dependendo tipicamente de seu uso. Por exemplo, uma forma de dosagem usada no tratamento agudo de uma doença ou uma doença relacionada pode conter quantidades maiores de um ou mais dos ingredientes ativos que ela compreende do que uma forma de dosagem usada no tratamento crônico da mesma doença. De modo semelhante, uma forma de dosagem parenteral pode conter quantidades pequenas de um ou mais dos ingredientes ativos que ela compreende do que uma forma de dosagem oral usada para tratar a mesma doença ou desordem. Estes e outros modos em que a forma de dosagem específica englobada por esta invenção variará de um para a outra serão pronta- mente evidentes para aquelas pessoas qualificadas na técnica. Vee, por exemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18a ed., Mack Publi- shing, Easton PA (1990). Exemplos de formas de dosagem incluem, mas, sem limitação: tabletes; capsuletas; cápsulas, tais como cápsulas de gelatina elástica mole; cachês; troches; pastilhas; dispersões; suposi- tórios; ungüentos; cataplasmas (cataplasmas); pastas; pós; molhos; natas; pastas; soluções; patches; aerossóis (por exemplo, sprays nasais ou inalantes); géis; a forma de dosagem líquida adequada para adminis- tração oral ou mucosa a um paciente, incluindo suspensões (por exem- plo, suspensões líquidas aquosas ou não aquosas, emulsões óleo em água ou emulsões líquidas água em óleo), soluções e elixires; a forma de dosagem líquida adequada para administração parenteral a um pacien- te; e sólidos estéreis (por exemplo, sólidos cristalinos ou amorfos) que podem ser reconstituídos para proporcionar formas de dosagem líquida adequadas para administração parenteral a um paciente.

As composições farmacêuticas e formas de dosagem típicas compreendem um ou mais veículos, excipientes ou diluentes. Os excipientes adequados são bem conhecidos daquelas pessoas quali- ficadas na técnica da farmácia e exemplos não limitativos de excipientes adequados são aqui proporcionados. Se um excipiente particular é adequado para incorporação numa forma de composição ou dosagem farmacêutica depende de uma variedade de fatores bem conhecidos na técnica, incluindo, mas, sem limitação, a maneira por que a forma de dosagem será administrada ao paciente. Por exemplo, as formas de dosagem oral tais como tabletes podem conter excipientes não adapta- dos para uso em formas de dosagem parenteral. A conveniência de um excipiente particular pode depender também dos ingredientes ativos específicos na forma de dosagem.

Esta invenção engloba ainda composições farmacêuticas e formas de dosagem anidras que compreendem ingredientes ativos, visto que a água pode facilitar a degradação de alguns compostos. Por exemplo, a adição de água (por exemplo, 5%) é extensamente aceita nas técnicas farmacêuticas como um meio de simular armazenamento a longo prazo, a fim de determinar características tais como a vida de prateleira ou a estabilidade de formulações com o passar do tempo. Ver, por exemplo, Carstensen, Drug Stability: Principies & Practice, 2a ed.., Mareei Dekker, NY, NY, 1995, pp. 379-80, Na realidade, a água e o calor aceleram a decomposição de alguns compostos. Deste modo, o efeito da água numa formulação pode ser de grande significado, visto que a umidade é comumente encontrada durante o fabrico, a manipu- lação, a embalagem, o armazenamento, a remessa e o uso de formula- ções.

As composições farmacêuticas e formas de dosagem anidras da invenção podem ser preparadas usando ingredientes anidros ou contendo baixa umidade e condições de baixa umidade.

Uma composição farmacêutica anidra deve ser preparada e armazenada de tal modo que seja mantida a sua natureza anidra. Conseqüentemente, as composições anidras são, de preferência, emba- ladas usando materiais conhecidos para impedir a exposição à água de tal modo que podem ser incluídas em kits de formulação adequados. Os exemplos de embalagens adequadas incluem, mas, sem limitação, lâminas, plásticos, recipientes de dosagem unitária hermeticamente fechados, (por exemplo, frascos), embalagens de bolhas e pacotes de tiras.

A invenção engloba ainda composições farmacêuticas e formas de dosagem que compreendem um ou mais compostos que reduzem a taxa a que um ingrediente ativo se decomporá. Esses com- postos, que são aqui referidos como "estabilizadores", incluem, mas, sem limitação, antioxidantes tais como o ácido ascórbico, tampões de pH ou tampões de sal.

Como as quantidades e tipos de excipientes, as quanti- dades e tipos específicos de ingredientes ativos numa forma de dosagem podem diferir dependendo de fatores tais como, mas, sem limitação, a rota por que devem ser administrados aos pacientes. Todavia, as formas de dosagem típicas da invenção compreendem os compostos da Fórmula I da invenção ou um sal ou hidrato farmaceuticamente aceitá- vel dos mesmos, e compreendem de 0,1 mg até 1,500 mg por unidade para proporcionar doses de cerca de 0,01 a 200 mg/kg por dia.

Formas de Dosagem Oral

As composições farmacêuticas da invenção que são adequadas para administração oral podem ser apresentadas como formas de dosagem discreta, tais como, mas, sem limitação, tabletes (por exemplo, tabletes mastigáveis), capsuletas, cápsulas e líquidos (por exemplo, xaropes com sabor). Essas formas de dosagem contêm quan- tidades predeterminadas de ingredientes ativos e podem ser preparadas por métodos de farmácia bem conhecidos daquelas pessoas qualificadas na técnica. Ver, em geral, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18a ed., Mack Publishers, Easton PA (1990).

As formas de dosagem oral típicas da invenção são preparadas combinando o(s) ingrediente(s) ativo(s) numa mistura íntima com pelo menos um excipiente de acordo com as técnicas farmacêuticas de compostagem convencionais. Os excipientes podem assumir uma ampla variedade de formas que dependem da forma da preparação pretendida para administração. Por exemplo, excipientes adequados para uso oral líquido ou formas de dosagem de aerossol incluem, mas sem limitação, água, glicóis, óleos, álcoois, agentes de condimento, preservantes e agentes de coloração. Os exemplos de excipientes adequados para uso em formas de dosagem oral sólida (por exemplo, pós, tabletes, cápsulas e capsuletas) incluem, mas, sem limitação, amidos, açúcares, microcelulose cristalina, diluentes, agentes de granu- lação, lubrificantes, ligantes e agentes de desintegração.

Em razão de sua facilidade de administração, os tabletes e as cápsulas representam as formas unitárias mais vantajosas de dosagem oral, no caso em que são empregados excipientes sólidos. Se pretendido, os tabletes podem ser cobertos por técnicas padrão aquosas ou não aquosas. Essas formas de dosagem podem ser preparadas por qualquer dos métodos de farmácia. Em geral, as composições farma- cêuticas e as formas de dosagem são preparadas misturando uniforme e intimamente os ingredientes ativos com veículos líquidos, veículos sólidos finamente divididos ou ambos e, depois, conformando o produto na apresentação pretendida, se necessário.

Por exemplo, um tablete pode ser preparado por com- pressão ou moldagem. Os tabletes comprimidos podem ser preparados comprimindo numa máquina adequada os ingredientes ativos numa forma de curso livre tal como pó ou grânulos, opcionalmente mistura- dos com um excipiente. Os tabletes moldados podem ser feitos mol- dando numa máquina adequada uma mistura do composto pulverizado umedecida com um diluente líquido inerte.

Exemplos de excipientes que podem ser usados em formas de dosagem oral da invenção incluem, mas, sem limitação, ligantes, cargas, desintegrantes e lubrificantes. Os ligantes adequados para uso em composições farmacêuticas e formas de dosagem incluem, mas, sem limitação, amido de milho, amido da batata ou outros amidos, gelatina, gomas naturais e sintéticas tais como acácia, alginato de sódio, ácido algínico, outros alginatos, tragacante em pó, goma guar, celulose e seus derivados (por exemplo, etil celulose, acetato de celulo- se, cálcio carboximetil celulose, celulose de carboximetil de sódio), pirrolidona de polivinila, celulose de metila, amido pré-gelatinizado, hidroxipropil metil celulose, (por exemplo, números 2208, 2906, 2910), celulose microcristalina e misturas dos mesmos.

Exemplos de cargas adequadas para uso nas composi- ções farmacêuticas e formas de dosagem aqui reveladas incluem, mas, sem limitação, talco, carbonato de cálcio (por exemplo, grânulos ou pó), celulose microcristalina, celulose pulverizada, dextratos, caolim, mani- tol, ácido silícico, sorbitol, amido, amido pré-gelatinizado e misturas dos mesmos. O ligante ou carga em composições farmacêuticas da inven- ção está tipicamente presente em desde mais ou menos 50 até cerca de99 por cento em peso da composição farmacêutica ou forma de dosa- gem.

As formas adequadas de celulose microcristalina inclu- em, mas, sem limitação, os materiais vendidos como AVICEL-PH-101, AVICEL-PH-103 AVICEL RC-581, AVICEL-PH-105 (disponível a partir de FMC Corporation, American Viscose Division, Avicel Sales, Marcus Hook, PA) e misturas dos mesmos. Um ligante específico é uma mistu- ra de celulose microcristalina e celulose de carboximetil de sódio vendi- da como AVICEL RC-581. Excipientes ou aditivos adequados anidros ou de baixa umidade incluem AVICEL-PH-103™ e Starch 1500 LM.

Os desintegrantes são usados nas composições da inven- ção para proporcionar tabletes que se desintegrem, quando expostas a um ambiente aquoso. Os tabletes que contêm desintegrante demasiado podem desintegrar-se em armazenamento, enquanto aqueles que contêm muito pouco não conseguem desintegrar-se a uma velocidade pretendida ou sob as condições desejadas. Deste modo, deve ser usada uma quantidade suficiente de desintegrante que não seja nem demais nem muito pequena para alterar danosamente a liberação dos ingredi- entes ativos para constituir formas de dosagem oral sólidas da inven- ção. A quantidade de desintegrante usado varia com base no tipo de formulação e é prontamente discernível para aquelas pessoas de capa- cidade ordinária na técnica. As composições farmacêuticas típicas compreendem desde mais ou menos 0,5 até cerca de 15 por cento em peso de desintegrante, especificamente desde aproximadamente 1 até mais ou menos 5 por cento em peso de desintegrante.

Os desintegrantes que podem ser usados em composições farmacêuticas e formas de dosagem da invenção incluem, mas, sem limitação, agar-agar, ácido algínico, carbonato de cálcio, celulose micro- cristalina, croscarmelose sódio, crospovidona, polacrilina de potássio, glicolato de sódio amido, amido da batata ou tapioca, amido pré- gelatinizado, outros amidos, argilas, outro alginas, outras celuloses, gomas e misturas dos mesmos.

Os lubrificantes que podem ser usados em composições farmacêuticas e formas de dosagem da invenção incluem, mas, sem limitação, estearato de cálcio, estearato de magnésio, óleo mineral, óleo mineral leve, glicerina, sorbitol, manitol, polietileno glicol, outros glicóis, ácido esteárico, sulfato de lauril sódio, talco, óleo vegetal hidrogenado (por exemplo, óleo de amendoim, óleo de semente de algodão, óleo de girassol, óleo de sésamo, óleo de azeitona, óleo de milho e óleo de soja), estearato de zinco, oleato de etila, laureiado de etila, agar e misturas dos mesmos. Os lubrificantes adicionais incluem, por exemplo, uma sílica gel syloid (AEROSIL 200, fabricada por W.R. Grace, de Baltimore, MD), um aerossol coagulado de sílica sintética (comercializado por Degussa Co, de Plano, TX), CAB-O-SIL (um produto pirogênico do dióxido de silício vendido por Cabot Co., de Boston, MA) e misturas dos mesmos. Se efetivamente usados, os lubrificantes são tipicamente usados numa quantidade de menos do que mais ou menos 1 por cento em peso das composições farmacêuticas ou formas de dosagem em que são incorporados.

Formas de Dosagem de Liberação Retardada

Os ingredientes ativos da invenção podem ser adminis- trados por meios de liberação controlados ou por dispositivos de supri- mento que são bem conhecidos daquelas pessoas de capacidade ordiná- ria na técnica. Os exemplos incluem, mas, sem limitação, aqueles descritos nas patentes US 3,845,770; 3,916,899; 3,536,809; 3,598,123; e 4,008,719, 5,674,533, 5,059,595, 5,591,767, 5,120,548, 5,073,543,5,639,476, 5,354,556 e 5,733,566, cada uma das quais é aqui incorpo- rada por referência. Essas formas de dosagem podem ser usadas para proporcionar a liberação lenta ou controlada de um ou mais ingredien- tes ativos usando, por exemplo, hidropropilmetil celulose, outras matri- zes poliméricas, géis, membranas permeáveis, sistemas osmóticos, revestimentos de camadas múltiplas, micropartículas, lipossomas, microsferas ou uma combinação dos mesmos para proporcionar o perfil de liberação pretendido em proporções variadas. As formulações de liberação controlada adequadas conhecidas daquelas pessoas de capa- cidade ordinária na técnica, incluindo aquelas aqui descritas, podem ser prontamente selecionadas para uso com os ingredientes ativos da invenção. A invenção engloba, deste modo, formas de dosagem unitária únicas adequadas para administração oral tais como, mas, sem limita- ção, tabletes, cápsulas, cápsulas de gel e capsuletas que são adaptados para a liberação controlada.

Todos os produtos farmacêuticos de liberação controlada têm uma meta comum de aperfeiçoar a terapia de droga em relação àquela alcançada por suas contrapartidas não controladas. Idealmente, o uso de uma preparação de liberação controlada otimamemnte proje- tada em tratamento médico é caracterizado por um mínimo de substân- cia de droga que é empregado para curar ou controlar a condição numa quantidade mínima de tempo. As vantagens de formulações de libera- ção controlada incluem atividade alongada da droga, freqüência de dosagem reduzida e tolerância aumentada do paciente. Além disso, formulações de liberação controlada podem ser usadas para afetar o tempo do início da ação ou outras características, tais como níveis sangüíneos da droga e podem, deste modo, afetar a ocorrência de efeitos colaterias (por exemplo, adversos).

A maioria das formulações de liberação controlada é inicialmente projetada para liberar uma quantidade de droga (ingredien- te ativo) que prontamente produz o efeito terapêutico pretendido e gradual e continuamente libera outras quantidades de droga para manter este nível de efeito terapêutico ou profiláctico durante um período alongado de tempo. A fim de manter este nível constante de droga no corpo, a droga deve ser liberada a partir da forma de dosagem a uma velocidade que substituirá a quantidade de droga que está sendo metabolizada e excretada a partir do corpo. A liberação controlada de um ingrediente ativo pode ser estimulada por várias condições incluin- do, mas, sem limitação, o pH, a temperatura, as enzimas, a água ou outras condições ou compostos fisiológicos.

Formas de Dosagem Parenterais

As formas de dosagem parenteral podem ser administra- das aos pacientes por várias rotas incluindo, mas, sem limitação, subcutânea, intravenosa (incluindo injeção de bolo), intramuscular e intra-arterial. Como a sua administração ultrapassa tipicamente as defesas naturais dos pacientes contra contaminantes, as formas de dosagem parenteral são, de preferência, estéreis ou capazes de serem ésterilizados antes da administração ao paciente. Os exemplos de formas de dosagem parenteral incluem, mas, sem limitação, soluções prontas para injeção e/ou produtos secos liofilizados prontos a serem dissolvidos ou suspensos num veículo farmaceuticamente aceitável para injeção (pós reconstituíveis), suspensões prontas para injeção e emulsões.

Os veículos adequados que podem ser usados para proporcionar formas de dosagem parenteral da invenção são bem conhecidos daquelas pessoas qualificadas na técnica. Os exemplos incluem, mas, sem limitação: Água para Injeção USP; veículos aquosos tais como, mas, sem limitação, Injeção de Cloreto de Sódio, Injeção de Ringer, Injeção de Dextrose, Injeção de Dextrose e Cloreto de Sódio, Injeção de Lactato de Ringer; veículos miscíveis com água tais como, mas, sem limitação, álcool etílico, polietileno glicol e polpropileno glicol; e veículos não aquosos tais como, mas, sem limitação, óleo de milho, óleo de semente de algodão, óleo de amendoim, óleo de sésamo, oleato de etila, isopropil miristato e benzoato benzílico.

Os compostos que aumentam a solubilidade de um ou mais dos ingredientes ativos aqui revelados podem ser também incorpo- rados nas formas de dosagem parenteral da invenção.

Formas de Dosagem Transdérmica

As formas de dosagem transdérmica incluem emplastros do "tipo reservatório" ou do "tipo matriz", que podem ser aplicados na pele e portados durante um período específico de tempo para permitir a penetração de uma quantidade desejada de ingredientes ativos.

Os excipientes adequados (por exemplo, veículos e dilu- entes) e outros materiais que podem ser usados para proporcionar formas de dosagem transdérmica e tópica englobadas por esta invenção são bem conhecidas daquelas pessoas qualificadas nas técnicas farma- cêuticas e dependem do tecido particular a que uma forma de composi- ção ou dosagem farmacêutica dada será aplicada. Com aquele fato em mente, os excipientes típicos incluem, mas sem limitação, água, aceto- na, etanol, etileno glicol, propileno glicol, butano-l,3-diol, isopropil miristato, isopropil palmitato, óleo mineral e misturas dos mesmos.

Dependendo do tecido específico a ser tratado, podem ser usados componentes adicionais antes, em conjunção com ou subse- qüentemente ao tratamento com ingredientes ativos da invenção. Por exemplo, podem ser usados intensificadores de penetração para ajudar a liberar os ingredientes ativos para o tecido. Os intensificadores de penetração adequados incluem, mas, sem limitação: acetona; vários álcoóis tais como etanol, oleil e tetrahidrofuril; alquil sulfóxidos tais como dimetil sulfóxido; dimetil acetamida; dimetil formamida; polietile- no glicol; pirrolidonas tais como polivinilpirrolidona; graus de Kollidon (Povidona, Polividona); uréia; e vários ésteres de açúcar solúveis ou insolúveis em água tais como Tween 80 (polissorbato 80) e Palmo 60 (sorbitan monoestearato).

O pH de uma composição farmacêutica ou forma de dosagem ou do tecido a que a composição farmacêutica ou forma de dosagem é aplicada pode ser também ajustado para melhorar a libera- ção de um ou mais ingredientes ativos. De modo semelhante, a polari- dade de um veículo solvente, a sua força iônica ou a tonicidade podem ser ajustadas para melhorar a liberação. Os compostos tais como estearatos podem ser também adicionados às composições farmacêuti- cas ou formas de dosagem para alterar vantajosamente a hidrofilicidade ou lipofilicidade de um ou mais ingredientes ativos para melhorar a liberação. A este respeito, os estearatos podem servir de veículos de lípidos para a formulação, de agente emulsificante ou surfactante e de agente de aumento de entrega ou intensificação da penetração. Podem ser usados diferentes sais, hidratos ou solvatos dos ingredientes ativos para ajustar melhor as propriedades da composição resultante.

Formas de Dosagem Tópicas

Formas de dosagem tópicas da invenção incluem, mas, sem limitação, natas, loções, ungüentos, géis, soluções, emulsões, suspensões ou outras formas conhecidas de uma pessoa de capacidade na técnica. Ver, por exemplo, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18a ed., Mack Publishing, Easton PA (1990); e Introduction to Pharmaceutieal Dosage Forms, 4a ed., Lea & Febiger, Filadélfia (1985).

Excipientes adequados (por exemplo, veículos e diluentes) e outros materiais que podem ser usados para proporcionar formas dosagem transdérmica e tópica englobadas por esta invenção são bem conhecidas daquelas pessoas qualificadas nas técnicas farmacêuticas e dependem do tecido particular a que uma composição farmacêutica ou forma de dosagem dada serão aplicadas. Com aquele fato em mente, os excipientes típicos incluem, mas sem limitação, água, acetona, etanol, etileno glicol, propileno glicol, butano-1,3 diol, isopropil miristato, isopropil palmitato, óleo mineral e misturas dos mesmos.

Dependendo do tecido específico a ser tratado, podem ser usados componentes adicionais antes, em conjuntoou subseqüente- mente ao tratamento com ingredientes ativos da invenção. Por exem- plo, podem ser usados intensificadores de penetração para ajudar a liberar os ingredientes ativos para o tecido. Os intensificadores de penetração adequados incluem, mas, sem limitação: acetona; vários álcoóis tais como etanol, oleil e tetrahidrofuril; alquil sulfóxidos tais como dimetil sulfóxido; dimetil acetamida; dimetil formamida; polietile- no glicol; pirrolidonas tais como polivinilpirrolidona; graus de Kollidon (Povidona, Polividona); uréia; e vários ésteres de açúcar solúveis ou insolúveis em água tais como Tween 80 (polissorbato 80) e Palmo 60 (sorbitan monoestearato).

Formas de Dosagem em Mucosa

As formas de dosagem em mucosa da invenção incluem, mas, sem limitação, soluções oftálmicas, sprays e aerossóis ou outras formas conhecidas de uma pessoa de capacidade na técnica. Ver, por exemplo, Remingtorís Pharmaceutical Sciences, 18a ed., Mack Publish- ing, Easton PA (1990); e Introduction to Pharmaceutieal Dosage Forms, 4a ed., Lea δε Febiger, Filadélfia (1985). As formas de dosagem adequa- da para tratar tecidos da mucosa dentro da cavidade oral podem ser formuladas como líquidos para limpeza bucal ou como géis orais. Numa modalidade, o aerossol compreende um veículo. Noutra modali- dade, o aerossol é veículo livre. Os compostos da Fórmula I da invenção podem ser também diretamente administrados ao pulmão por inalação. Para administração por inalação, um composto da Fórmula I pode ser conve- nientemente liberado para o pulmão por vários dispositivos diferentes. Por exemplo, um Metered Dose Inhaler ("MDI") que utiliza recipientes que contêm um propulsor adequado de baixa ebulição, por exemplo, diclorodifluor metano, triclorofluormetano, diclorotetrafluoretano, gás carbônico ou outro gás adequado podem ser usados para liberar um composto da Fórmula I diretamente para o pulmão. Os dispositivos de MDI estão disponíveis a partir de vários fornecedores tais como 3M Corporation, Aventis, Boehringer Ingleheim, Forest Laboratories, Glaxo- Wellcome, Schering Plough e Vectura.

Alternativamente, pode ser usado um dispositivo Diy Powdwer Inhaler (DPI) para administrar um composto da Fórmula I para o pulmão (ver, por exemplo, Raleigh e colaboradores, Proc. Amer. Assoc.Câncer Reserch Annual Meeting, 1999, 40, 397, que é aqui incor- porado por referência). Os dispositivos DPI usam tipicamente um mecanismo tal como uma explosão de gás para criar uma nuvem de pó seco dentro de um recipiente, que pode, então, ser inalado pelo pacien- te. Os dispositivos DPI são também bem conhecidos na técnica e podem ser adquiridos a partir de vários vendedores que incluem, por exemplo, Fisons, Glaxo-Wellcome, Inhale Therapeutic Systems, ML Laboratories, Qdose e Vectura. Uma variação popular é o sistema de dose múltipla DPI ("MDDPI"), que permite a liberação de mais de uma dose terapêutica. Os dispositivos de MDDPI estão disponíveis a partir de companhias tais como AstraZeneca, Glaxo Wellcome, IVAX, Schering Plough, SkyeFarma e Vectura. Por exemplo, cápsulas e cartuchos de gelatina para uso num inalador ou insuflador podem ser formulados contendo uma mistura de pó do composto e uma base de pó adequada tal como lactose ou amido para estes sistemas.

Outro tipo de dispositivo que pode ser usado para liberar um composto da Formula I para o pulmão é um dispositivo de spray líquido provido, por exemplo, por Aradigm Corporation. Os sistemas de spray líquido usam orifícios de bico extremamente pequenos para aerossolizar formulações de drogas líquidas que podem, então, ser diretamente inaladas no pulmão.

Numa modalidade, é usado um dispositivo de nebulizador para liberar um composto da Fórmula I para o pulmão. Os nebulizado- res criam aerossóis a partir de formulações de drogas líquidas usando, por exemplo, energia ultrassônica para formar partículas finas que podem ser prontamente inaladas (Ver, por exemplo, Verschoyle e cola- boradores, British J. Câncer, 1999, 80, Supl. 2, 96, que é aqui incorpo- rado por referência). Exemplos de nebulizadores incluem dispositivos providos por Sheffield/Systemic Pulmonary Delivery Ltd. (Ver Armer e colaboradores, Patente US 5,954,047; van der Linden e colaboradores, Patente US 5,950,619; van der Linden e colaboradores, Patente US 5,970,974, que são aqui incorporados por referência), Aventis e Batelle Pulmonary Therapeutics.

Numa modalidade, é usado um dispositivo de aerossol eletrohidrodinãmico ("EHD") para liberar compostos da Fórmula I para o pulmão. Os dispositivos de aerossol de EHD usam energia elétrica para aerossolizar soluções ou suspensões de drogas líquidas (ver, por exemplo, Noakes e colaboradores, Patente US 4,765,539; Coffeee, Patente US 4,962,885; Coffee, Pedido PCT, WO 94/12285; Coffeee, Pedido PCT, WO 94/14543; Coffeee, Pedido PCT, WO 95/26234, Coffee- e, Pedido PCT, WO 95/26235, Coffeee, Pedido PCT, WO 95/32807, que são aqui incorporados por referência). As propriedades eletroquímicas formulação de compostos da Fórmula I podem ser parâmetros impor- tantes a otimizar, quando se libera esta droga para o pulmão com um dispositivo de aerossol de EHD e essa otimização é habitualmente executada por uma pessoa de capacidade na técnica. Os dispositivos de aerossol de EHD podem liberar mais eficazmente drogas para o pulmão do que as tecnologias de liberação pulmonar existentes. Outros métodos de liberação intrapulmonar de compostos da Fórmula I serão conhecidos do especialista qualificado e estão dentro do âmbito da invenção.

As formulações de drogas líquidas adequadas para uso com nebulizadores e dispositivos de spray líquido e dispositivos de aerossol de EHD incluirão tipicamente um composto da Fórmula I com um veículo farmaceuticamente aceitável. De preferência, o veículo farmaceuticamente aceitável é um líquido tal como álcool, água, polieti- Ieno glicol ou um perfluorcarbono. Opcionalmente, outro material pode ser adicionado para alterar as propriedades de aerossol da solução ou suspensão do composto da Fórmula I. De preferência, este material é líquido tal como um álcool, glicol, poliglicol ou um ácido graxo. Outros métodos de formular soluções de droga ou suspensão líquida adequa- das para uso em dispositivos de aerossol são conhecidos daquelas pessoas de capacidade na técnica (ver, por exemplo, Biesalski, Patente US 5.112.598; Biesalski, 5.556.611, que são aqui Patente US incorpo- rados por referência). Um composto da Fórmula I pode ser também formulado em composições retais ou vaginais tais como supositórios ou enemas de retenção, contendo, por exemplo, bases de supositório convencionais tais como manteiga de cacau ou outros glicerídeos.

Além das formulações descritas previamente, um com- posto da Fórmula I pode ser também formulado como uma preparação de depot. Essas formulações de longa ação podem ser administradas por implantação (por exemplo, subcutanea ou intramuscularmente) ou por injeção intramuscular. Deste modo, por exemplo, os compostos podem ser formulados com materiais poliméricos ou hidrofóbicos adequados (por exemplo, como uma emulsão em óleo aceitável) ou resinas de permuta iônica ou como derivados escassamente solúveis, por exemplo, como um sal escassamente solúvel. Alternativamente, podem ser empregados outros sistemas farmacêuticos de liberação. Os lipossomas e as emulsões são exemplos bem conhecidos de veículos de liberação que podem ser usados para liberar compostos da Fórmula I. Certos solventes orgânicos tais como dimetilsulfóxido podem ser também empregados, embora normalmente às custas de maior toxicidade. Um composto da Fórmula I pode ser também liberado num sistema de liberação controlada. Numa modali- dade, pode ser usada uma bomba (Sefton, CRC Crit. Ref Biomed Eng., 1987, 14, 201; Buchwald e colaboradores, Surgery, 1980, 88, 507; Saudek e colaboradores., N. Engl. J. Med., 1989, 321, 574). Noutra modalidade, podem ser usados materiais polímeros (ver Medicai Applica- tions of Controlled Release, Langer e Wise (eds.), CRC Pres., Boca Raton, Fia. (1974); Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance, Smolen e Ball (eds.), Wiley, Nova Iorque (1984); Ranger e Peppas, J. Macromol. Sei. Rev. Macromol Chem., 1983, 23, 61; ver também Levy e colaboradores., Science, 1985, 228, 190; During e colaboradores, Ann. Neurol, 1989, 25, 351; Howard e colaboradores, J. Neurosurg., 71, 105 (1989). Ainda noutra modalidade, pode ser coloca- do um sistema de liberação controlada na proximidade do alvo dos compostos da invenção, por exemplo, o pulmão, exigindo, deste modo, apenas uma fração da dose sistêmica (ver, por exemplo, Goodson, em MedicalApplications of Controlled Release, supra, vol. 2, pp. 115 (1984)). Pode ser usado outro sistema de liberação controlada (ver, por exemplo, Langer, Science, 1990, 249, 1527).

Excipientes adequados (por exemplo, veículos e diluentes) e outros materiais que podem ser usados para proporcionar formas de dosagem em mucosa englobadas por esta invenção são bem conhecidos daquelas pessoas qualificadas nas técnicas farmacêuticas e dependam do local ou método particular por que uma composição farmacêutica ou forma de dosagem dada será administrada. Com esse fato em mente, os excipientes típicos inclurm, mas sem limitação, água, etanol, etileno glicol, propileno glicol, butano-l,3-diol, isopropil miristato, isopropil palmitato, óleo mineral e misturas dos mesmos, que sejam não tóxicas e farmaceuticamente aceitáveis. Os exemplos desses ingredientes adicio- nais são bem conhecidos na técnica. Ver, por exemplo, Remington3s Pharmaceutical Sciences, 18a ed., Mack Publishing, Easton PA (1990).

O pH de uma forma de composição ou dosagem farmacêutica ou do tecido a que a composição farmacêutica ou a forma de dosagem é aplicada pode ser também ajustado para melhorar a liberação de um ou mais ingredientes ativos. De modo semelhante, a polaridade de um veículo solvente, a sua força iônica ou tonicidade podem ser ajustadas para aperfeiçoar a liberação. Compostos tais como estearatos podem ser também adicionados às composições farmacêuti- cas ou formas de dosagem para alterar vantajosamente a hidrofilicidade ou lipofilicidade de um ou mais ingredientes ativos para melhorar a liberação. A este respeito, os estearatos podem servir de veículo de lípidos para a formulação, de agente emulsificante ou surfactante e de agente de intensificação da liberação ou intensificação da penetração. Diferentes sais, hidratos ou solvatos dos ingredientes ativos podem ser usados para ajustar melhor as propriedades da composição resultante.

Kits

A invenção proporciona um pacote ou kit farmacêutico que compreende um ou mais recipientes compreendendo um composto da Fórmula I útil para o tratamento ou prevenção de uma infecção de vírus da hepatite C. Em outras modalidades, a invenção proporciona um pacote ou kit farmacêutico que compreende um ou mais recipientes compreendendo um composto da Fórmula I útil para o tratamento ou prevenção de uma infecção de vírus da hepatite C e um ou mais recipi- entes compreendendo um agente terapêutico adicional, incluindo mas, sem limitação, aqueles listados acima, em particular um agente antivi- ral, um interferon, um agente que inibe enzimas virais ou um agente que inibe a replicação viral, de preferência o agente terapêutico adicio- nal é específico do HCV ou demonstra atividade anti-HCV.

A invenção proporciona também um pacote ou kit farma- cêutico que compreende um ou mais recipientes compreendendo um ou mais dos ingredientes das composições farmacêuticas da invenção. Opcionalmente associado a esse(s) recipiente(s) pode estar um anúncio na forma prescrita por uma agência governamental que regula o fabrico, o uso ou a venda de produtos farmacêuticos ou produtos biológicos, anúncio esse que reflete a aprovação pela agência do fabrico, do uso ou da venda para administração humana.

Os agentes inventivos podem ser preparados usando as rotas de reação e esquemas de síntese descritos abaixo, empregando as técnicas gerais conhecidas na técnica usando os materiais de partida que estão prontamente disponíveis. A síntese de compostos não exem- plificados de acordo com a invenção pode ser realizada com sucesso por modificações evidentes para aquelas pessoas qualificadas na técnica, por exemplo, para proteger apropriadamente grupos de interferência, mudando outros reativos adequados conhecidos na técnica ou fazendo modificações rotineiras das condições da reação. Alternativamente, outras reações aqui reveladas ou geralmente conhecidas na técnica serão reconhecidas como tendo aplicabilidade para a preparação de outros compostos da invenção.

Preparação de Compostos

Nos esquemas sintéticos descritos abaixo, a menos que de outra forma indicado, todas as temperaturas são descritas em graus Celsius e todas as partes e porcentagens são em peso.

Os reativos foram adquiridos a partir de fornecedores comerciais tais como Aldrich Chemical Company ou Lancaster Synthe- sis Ltd. e foram usados sem purificação adicional, a menos que de outra forma indicado. Todos os solventes foram adquiridos a partir de forne- cedores comerciais tais como Aldrich, EMD Chemicals ou Fisher e usados conforme recebidos.

As reações descritas abaixo foram geralmente feitas sob pressão positiva de argônio ou nitrogênio à temperatura ambiente (a menos que de outra forma afirmado) em solventes anidros e os frascos de reação foram ajustados com septos de borracha para a introdução de substratos e reativos via seringa. Os artigos de vidro foram secos em forno e/ou secos por calor.

As reações foram analisadas por TLC e/ou analisadas por LC-MS e terminadas conforme julgado pelo consumo do material de partida. Foi realizada cromatografia em camada fina analítica (TLC) em placas de vidro pré-revestidas de placas de sílica gel 60 F254 de 0,25 mm (EMD Chemicals) e visualizadas com luz UV (254 nm) e/ou iodo sobre sílica gel e/ou aquecimento com manchas de TLC tais como ácido fosfomolíbdico etanólico, solução de ninidrina, solução de permangana- to de potássio ou solução de sulfato cérico. Foi realizada cromatografia preparativa em camada fina (prepTLC) em placas de vidro pré-revestidas com placas de sílica gel 60 F254 de 0,5 mm (20 χ 20 cm, da Thomson Instruments Company) e visualizada com luz UV (254 nm).

Os trabalhos foram feito tipicamente duplicando o volu- me de reação com o solvente de reação ou solvente de extração e, então, lavando com as soluções aquosas indicadas usando 25% em volume do volume de extração, a menos que de outra forma indicado. As soluções de produto foram secas sobre Na2SO4 e/ou MgSO4 anidro antes da filtração e evaporação dos solventes sob pressão reduzida num evapo- rador rotativo e notados como solventes removidos a vácuo. A croma- tografia em coluna foi completada sob pressão positiva usando malha de sílica gel 60, 230-400 ou 50-200 alumina neutra de malha da Merck, cromatografia ISCO-Flash usando colunas pré-compactadas de sílica gel RediSep ou cromatografia em coluna flash de Analogix usando colunas pré-compactadas de sílica gel SuperFlash. A hidrogenólise foi feita à pressão indicada nos exemplos ou à pressão ambiente.

Os espectros 1H-NMR e 13C-NMR foram registrados num instrumento Varian Mercuiy-VX400 operando a 400 MHz. Os espectros NMR foram obtidos como soluções CDCl3 (reportada em ppm), usando clorofórmio como padrão de referência (7,27 ppm para o próton e 77,00 ppm para carbono), CD3OD (3,4 e 4,8 ppm para os prótons e 49,3 ppm para o carbono), DMSO-d6 (2,49 ppm para o próton) ou interiormente tetrametilsilano (0,00 ppm), quando apropriado. Outros solventes de NMR foram usados conforme necessário. Quando são reportadas multiplicidades de picos, são usadas as abreviações seguintes: s (single- te), d (duplete), t (triplete), q (quarteto), m (multiplete), br (alargado), bs (singlete largo), dd (dublete de dubletes), dt (dublete de tripletes). As constantes de acoplamento, quando dadas, são reportadas em Hertz (Hz).

Os espectros infravermelhos (IR) foram registrados num Espectrômetro ATR FT-IR como óleos ou sólidos limpos e, quando dados, são reportados em números de onda (cm1). Os espectros de massa reportados são (+)-ES ou APCI(+)LC/MS administrados pelo Analytical Chemistry Departament of Anadys Pharmaceuticals, Inc. As análises elementares foram condzidas pelo Atlântic Microlab, Inc. em Norcross, GA ou por Nu Mega Resonance Labs, Inc. em San Diego, CA. Os pontos de fusão (mp) foramdeterminados num equipamento capilar aberto e não são corrigidos. As rotas sintéticas e procedimentos experimentais descri- tos podem utilizar muitas abreviações químicas comuns, 2,2-DMP (2,2- dimetoxipropano), Ac (acetil), ACN (acetonitrila), Aliquat® 336 (cloreto de trioctilmetilamônio), Bn (benzil), BnOH (álcool benzílico), Boc (tert- butoxicarbonil), BOC2O (di-íerf-butil dicarbonato), Bz (benzoil), CSI (clorosulfonil isocianato), DAST (dietilamino enxofre trifluoreto), DBU (l,8-diazabiciclo[5,4,0]undec-7-eno), DCC (iV,iV"'-diciclohexilcarbodiimi- da), DCE (1,2-dicloroetano), DCM (diclorometano), DEAD (dietilazodi- carboxilato), DIEA (diisopropiletilamina), DMA (N,N-dimetil-acetamida), DMAP (4-(iViV-dimetilamino)piridina), DMF (N,N- dimetilformamida), DMSO (dimetil sulfóxido), EDC cloreto de (l-(3-dimetilaminopropil)-3- etilcarbodiimida), Et (etil), EtOAc (acetato de etila), EtOH (etanol), Et2O (dietil éter), HATU (0-(7-azabenzotriazol-l-il)-l,l,3,3-tetrametilurônium hexafluorfosfato), HBTU (O-benzotriazol-l-il- Ν,Ν,Ν',Ν'-tetrametilurônio hexafluorfosfato), HF (fluoreto de hidrogênio), HOAc (ácido acético), HOBT (hidrato de 1 -hidroxibenzotriazol), HPLC (cromatografia líquida de alta pressão), ÍPrOH (álcool isopropílico), IPA (álcool isopropílico), KHMDS (potássio bis(trimetilsilil)amida), KN(TMS)2 (potássio bis(trimetilsilil)amida), KOBu (potássio íerí-butóxido), KOH (hidróxido de potássio), LDA (lítio diisopropilamina), MCPBA (ácido 3- cloroperben- zoico), Me (metil), MeCN (acetonitrila), MeOH (metanol), MTBE (metil íerí-butil éter), NaCNBH3 (cianoborohidreto de sódio), NaH (hidreto de sódio), NaN(TMS)2 (sódio bis(trimetilsilil)amida), NaOAc (acetato de sódio), NaOEt (etóxido de sódio), NIS (N-iodosuccinimida), Phe (fenilala- nina), PPTS (piridínio p-toluenosulfonato), PS (polímero suportado), Py (piridina), pyBOP (benzotriazol-l-iloxi)tri-pirrolidino-fosfónio hexafluor- fosfato), TEA (trietilamina), TFA (ácido trifluoracético), TFAA (anidrido trifluoracético), THF (tetrahidrofuranoo), TLC (cromato-grafla em cama- da fina), Tol (toluoil), VaI (valina) e similares.

[0148] Esquema 1 proporciona um procedimento geral que foi usado para preparar para 3-(l,l-dioxobenzo[l,2,4]tiadiazina)-pirrolo[l,2- bjpiridazin-2-ona compostos de Fórmula I. Esquema 1

<formula>formula see original document page 61</formula>

O intermediário de anidrido cíclico, que pode ser obtido como descrito abaixo, pode ser condensado com um dialquilmalonato na presença de uma base forte, tal como hidreto de sódio, para produzir o éster mostrado. O éster pode ser fundido em conjunto com um composto de orto-amino sulfonamida para formar a amida, que pode ser ciclizada na presença de uma base (por exemplo, KOH aq.) para dar os desejados compostos de 3-(1,1-dioxobenzo[1,2,4]tiadiazina)-pirrol [1,2-b]piridazin-2-ona.

O Esquema 2 proporciona um procedimento geral que pode ser usado para preparar os intermediários de anidrido cíclico. Esquema2

<formula>formula see original document page 62</formula>

Os ésteres de ácido pirrol-2-carboxílico comercialmente disponíveis (alternativamente, o ácido comercialmente disponível pode ser protegido como um éster adequado usando métodos padrão para a formação de ésteres) podem ser N-aminados usando monocloroamina para produzir o intermediário de hidrazina. Estas entidades podem ser N-alquiladas reagindo-os com aldeídos ou cetonas, onde Rx e Rw são Ci- C5 alquil, C3-C8 cicloalquil, -Ci-C5alquileno(C3-C8 cicloalquil), -C1-C5 alquileno (aril), -C1-C5 alquileno(heterociclil), aril ou heterociclil ou Rw pode combinar com Rx para formar um anel de 3 a 8 membros e um agente redutor, tal como cianoborohidreto de sódio. A desproteção dos ésteres seguida de ciclização usando fosgênio ou equivalentes do fosgê- nio dá os intermediários de anidrido cíclico desejado.

O Esquema 3 proporciona um procedimento que foi usado para preparar para o intermediário 4-(3-metil-butil)-6-oxa-3a,4- diaza-indeno-5,7-diona. Esquema 3

Br"

( 1 _________ _ .

N- CO2H

fj Cs2CO3, DMF78 %

ii \\ 0 -.x

H 0

i) NH2CI

ii) NaH1 DMF84%

>'.v

NH2

I 0

,Uh

NaCNBH3

Me0H,reflux058%

Il Ϊ

,NH

Pd(Ph3P)4

NH2OBn1 CH2CI240 0C86%

OH

N

,NH 0

0

X

Cl ""Ol

K2CO3, H2O59%

O ácido pirrol-2-carboxílico pode ser protegido como éster (por exemplo, éster alílico) usando métodos padrão para a formação de ésteres. O nitrogênio do anel pode ser N-aminado usando monocloroa- mina para produzir o intermediário de hidrazina, que pode ser N- alquilado com um aldeído usando métodos conhecidos de aminação redutiva. A desproteção do éster seguida de ciclização usando o fosgê- nio ou equivalentes do fosgênio pode ser usada para dar o intermediário desejado 4-(3-metil-butil)-6-oxa-3a,4-diaza-indeno-5,7-diona.

[0154] Esquemas 4(uns) e 4(b) proporcionem procedimentos gerais que foram usados para preparar para o 2-amino-5-metanossulfonilamino- benzenossulfonamida intermediário.

Esquema 4(a)

O2N

:r

NH,

MeSO2CI

piridina 64%

O2N"

H /

-ín - N /

o5-

H2, Pd-C

EtOAc/MeOH/DMF 71%

H7N'

H / Jo0

15

i) CISO2NCO, -40 0C

ii) AICI3,11O0C

EtNO2 77%

OwO HN

H

0, ,0

12 M HCI1105 0C ,,^S- H2N

45%

H2N

H ,

íJ 0 1 A 4-nitroanilina [comercialmente disponível pode ser tratada com cloretos de sulfonila, por exemplo, cloretos de metanossul- fonila, para obter as correspondentes sulfonamidas. A redução do grupo nitro usando condições padrão produz as anilinas corresponden- tes, que podem ser tratadas com clorosulfonil isocianato seguido de cloreto de alumínio para dar o correspondente l,l-dioxo-l,4-dihidro- 2H-1λˇ6-benzo[1,2, 4] tiadiazin-3 -onas. A abertura das uréias cíclicos com um ácido forte (por exemplo, ácido clorídrico) dá o desejado inter- mediário de 2-amino-5-sulfonilamino-benzenossulfonamida.

Esquema 4(b)

<formula>formula see original document page 64</formula>

Numa rota preferida, a 4-nitroanilina comercialmente disponível pode ser tratada com cloretos de sulfonila, por exemplo, cloreto de metanossulfonila, para obter as correspondentes sulfonami- das. A redução do grupo nitro usando condições padrão produz as anilinas correspondentes, que podem ser tratadas com clorosulfonil isocianato seguido de cloreto de alumínio para dar o correspondente 1,1 -dioxo-1,4-dihidro-2H- lÂ6-benzo[ 1,2,4]tiadiazina-3- onas. A abertu- ra das uréias cíclicas com um ácido forte (por exemplo, ácido sulfúrico) dá o desejado intermediário de 2-amino-5-sulfonilaminobenzenossulfo- namida em conjunto com algumas 2,5-diaminobenzenossulfonamidas hidrolizadas, que podem ser convertidas de volta por tratamento com cloretos de sulfonila, por exemplo, cloreto de metanossulfonila, para obter o desejado intermediário de 2-amino-5 sulfonilamino-benzenos- sulfonamida.

O Esquema 5 proporciona um procedimento que pode ser usado para preparar o intermediário 2-amino-5-metoxi-benzenossulfo- namida.

Esquema 5

H2N

.OMe

.1) CSI1 EtNO2

-40 0C -1

.2) AICI3l EtNO2110 0C

H2SO4 50% aq. 0Λ ρ

OMe 'st /ν _^ H2N Y130 0C

H2N^

OMe

A 4-metoxianilina comercialmente disponível pode ser

tratadoa com clorosulfonil isocianato seguido de cloreto de alumínio para dar o correspondente 7-metoxi-l,l-dioxo-l,4-dihidro-2H-lÀ6- benzo[l,2,4]tiadiazin-3-ona. A abertura da uréia cíclica com um ácido forte (por exemplo, ácido sulfúrico) dá o desejado intermediário de 2- amino-5-metoxi-benzenossulfonamida.

O Esquema 6 proporciona um procedimento que pode ser usado para preparar o intermediário de 2-amino-5-iodo-benzenossulfo- namida. Esquema 6

V

H2N

NIS

CHCI3 refluxo

%jP

H2N' "V^V^

H2N

NIS

CHCI3 refluxo

A 2-amino-benzensulfonamida comercialmente disponível pode ser tratada com N-iodosuccinimida para dar o desejado intermedi- ário de 2-amino-5-iodo-benzenossulfonamida. O Esquema 7 proporciona um procedimento geral alter- nativo que foi usado para preparar compostos de 3-(l, 1-dioxobenzo [l,2,4]tiadiazina)-pirrolo[l,2-bpiridazin-2-ona da Fórmula I. Esquema 7

<formula>formula see original document page 67</formula>

Os intermediários de éster do ácido 1-substituído 4- hidroxi-2-oxo-1,2-dihidro-pirrolo[ 1,2-b]piridazina-3-carboxílico pode ser fundido em conjunto puro ou num solvente adequado (por exemplo, piridina) com compostos opcionalmente substituídos de orto-amino sulfonamida para formar as amidas correspondentes. O intermediário de amida pode ser ciclizado (sem isolamento anterior) na presença de uma base (por exemplo, DBU) dar os desejados compostos de 3-(l,l- dioxobenzo [1,2,4] tiadiazina) -pirrolo[ 1,2- b] piridazin-2 -ona.

O Esquema 8 proporciona um procedimento geral que pode ser usado para preparar intermediários de éster do ácido 1- substituído 6-fluor-4-hidroxi-2-oxo-1,2-dihidro-pirrolo[ 1,2-b]piridazina-3- carboxílico.

Esquema 8 <formula>formula see original document page 68</formula>

O éster 4-oxo-pirrolidina-l,2-dicarboxílico 1-tert-butil 2 metil comercialmente disponível pode ser tratado com um agente de fluoretação, tal como DAST, para disponibilizar os correspondentes intermediários difluor. A hidrólise do éster dá o ácido, que pode, então, ser transformado num éster adequado (tal como um éster alílico) usan- do condições padrão. A remoção do grupo de proteção sob condições padrão dá a amina livre. A oxidação subseqüente com um agente oxidante (por exemplo, dióxido de manganês) leva ao correspondente intermediário pirrol. A N-aminação com monocloramina produz o intermediário de hidrazina, que pode ser N-alquilado por tratamento com aldeídos ou cetonas, onde Rx e Rw são C1-C5 alquil, C3-C8 cicloal- quil, - C1-C5 alquileno (C3-C8 cicloalquil), -C1-C5 alquileno (aril), -C1-C5 alquileno(heterociclil), aril ou heterociclil ou Rw pode combinar-se com Rx para formar um anel de 3 a 8 membros e um agente de redução, tal como cianoborohidreto de sódio. A acilação do nitrogênio com um cloreto de malonila (por exemplo, cloreto de metil malonila) dá as cor- respondentes hidrazidas, que podem ser ciclizadas na presença de uma base (por exemplo, etóxido de sódio) para dar os desejados intermediá- rios de etil éster do ácido 1-substituído 6-fluor-4-hidroxi-2-oxo-l,2- dihidro-pirrolo[ 1,2 - b] piridazina- 3-carboxílico.

O Esquema 9 proporciona um procedimento geral que pode ser usado para preparar intermediários do etil éster do ácido 1- substituído 6-ciano-4-hidroxi-2-oxo-1,2-dihidro-pirrolo[ 1,2-b piridazina- .3-carboxílico. Esquema 9

<formula>formula see original document page 70</formula>

Um éster do ácido lH-pirrol-2-carboxílico, tal como um éster metílico, pode ser tratado com clorosulfonil isocianato (CSI) segui- do de Ν,Ν-dimetilformamida para introduzir o grupamento de ciano. A N-aminação com monocloramina produz o intermediário de hidrazina, que pode ser N-alquilado por tratamento com aldeídos ou cetonas, em que Rx e Rw são C1-C5 alquil, C3-C8 cicloalquil, -C1-C5 alquileno (C3-C8 cicloalquil), -C1-C5 alquileno (aril), -C1-C5 alquileno(heterociclil), aril ou heterociclil ou o Rw pode combinar-se com o Rx para formar um anel de 3 a 8 membros e um agente de redução, tal como cianoborohidreto de sódio. A acilação do nitrogênio com um monoéster de cloreto de maloni- Ia (tal como metil cloreto de malonila) dá as correspondentes hidrazidas, que podem ser ciclizadas na presença de uma base (por exemplo, etóxido de sódio) para dar o desejado intermediário de éster etilíco do ácido 1-substituído 6-ciano-4-hidroxi-2-oxo-1,2-dihidro-pirrolo[ 1,2- b] piridazina- 3 - carboxílico.

O Esquema 10 proporciona um procedimento geral alter- nativo que foi usado para preparar compostos 3-(l,l-dioxobenzo [1,2,4] tiadiazina)-pirrolo[l,2- b piridazin-2-ona da Fórmula I. Esquema 10

<formula>formula see original document page 71</formula>

R = OMe R1 = H R2 = CH2CH2Pr, CH2CH2tBu, 4-F-Bn, 3-CI-4-F-Bn R7 = I, NHSO2Me, NMeSO2Me X = N, CH

Os ésteres do ácido l-substituído-l-amino-lH-pirrol-2- carboxílico (por exemplo, ésteres de metil), que podem ser preparados conforme descrito nos esquemas 2, 3, 8 e 9, podem ser acoplados a intermediários do ácido usando condições de acoplamento de peptídio padrão, tal como DCC, para produzir o correspondente intermediário de amida. O tratamento destas entidades com uma base (por exemplo, etóxido de sódio) dá os desejados compostos 3-(l, 1-dioxobenzo [1,2,4]tiadiazina)-pirrolo[1,2- b]piridazin-2-ona da Fórmula I.

O Esquema 11 proporciona um procedimento geral que pode ser usados para preparar para 7-substituído-l, l-dioxo-1,4- dihidro-lÀ6-benzo [l,2,4]tiadiazin-3-il-ácido acético intermedeia. Esquema 11 <formula>formula see original document page 72</formula>

O ácido 2-cloro-5-nitro-benzenossulfônico comercialmen- te disponível pode ser tratado com cloreto de tionila para dar o sulfonil- cloreto, que pode ser ainda tratado com amônia para produzir o inter- mediário de sulfonamida. O cloreto pode ser deslocado com amônia por tratamento com hidróxido de amônio e carbonato de amônio na presen- ça de sulfato de cobre(II). A redução do grupo nitro sob condições padrão de hidrogenação produz o intermediário de anilina, que pode ser tratado com um cloreto de sulfonila, tal como metilcloreto de sulfonila, para produzir a correspondente sulfonamida. A acilação do grupamen- to de 2-amino com cloretos de malonila, por exemplo, etil-3-cloro-3-oxo- proprionato, dá a correspondente amida, que pode ser simultaneamente ciclizada para o tiadiazina-dióxido e hidrolisada para o intermediário ácido pretendido.

O Esquema 12 proporciona um procedimento alternativo que pode ser usado para preparar o intermediário de 2-cloro-5-nitro- benzenossulfonamida. Esquema 12

<formula>formula see original document page 73</formula>

O l-cloro-4-nitro-benzeno comercialmente disponível pode ser feito reagir com o ácido clorossulfônico para produzir o correspon- dente sulfonilcloreto. O tratamento com uma solução saturada de amônia em metanol produz o intermediário desejado de 2-cloro-5-nitro- benzenossulfonamida.

O Esquema 13 proporciona um procedimento alternativo que pode ser usado para preparar o intermediário de 2,5-diamino- benzenossulfonamida.

Esquema 13

<formula>formula see original document page 73</formula>

O intermediário 2-cloro-5-nitro-benzenossulfonamida (preparado como descrito nos Esquemas 11 e 12) pode ser tratado com uma amina benzílica, tal como benzil amina, para deslocar o grupamen- to cloro. A hidrogenação sob condições padrão pode ser usada para remover o grupamento benzílico e para reduzir o grupamento nitro ao mesmo tempo em que produz o intermediário desejado 2,5-diamino- benzenossulfonamida.

O Esquema 14 proporciona um procedimento alternativo que pode ser usado para preparar o intermediário 2-amino-5-nitro- benzenossulfonamida. Esquema 14

P 1) POCI3, O OwO

NaO-SY^N°2 120 0C oÃb H^V^0*

.2·) NH3(A) H,N

O sal de sódio comercialmente disponível do ácido 2- amino-5-nitro-benzenossulfônico pode ser convertido no correspondente cloreto de sulfonila com o cloreto de fosforila na presença de um co- solvente adequado, tal como sulfolana. O tratamento com amônia, por exemplo, uma solução de amônia em metanol ou gás de amônia, produz o intermediário desejado de 2-amino-5-nitro-benzenossulfonamida.

O Esquema 15 proporciona um procedimento alternativo que pode ser usado para preparar o intermediário 2-amino-5-nitro- benzenossulfonamida.

Esquema 15

Os ρ 1.) POCI3, Q OwO

Η0"3γ^γΝ°2 120 QÇ oAb t H2N.V

H2N^ 2.) NH3 (g) "

0 ácido 2-amino-5-nitro-benzenossulfônico comercial- mente disponível pode ser convertido no correspondente cloreto de sulfonila com o cloreto de fosforila na presença de um co-solvente adequado, tal como sulfolana. O tratamento com amônia, por exemplo, uma solução aquosa de hidróxido de amônio ou gás de amônia, produz o desejado intermediário de 2 amino-5-nitro-benzenossulfonamida. O Esquema 16 proporciona um procedimento alternativo que pode ser usado para preparar o intermediário de éster etílico do ácido N-(4-metanossulfonilamino-2-sulfamoil-fenil)-malonámico. Esquema 16

H2I

EtO ^O

A 2-amino-5-metanossulfonilamino-benzenossulfonami-

da (preparada como descrito nos Esquemas 4 e 12) pode ser tratada com um dialquil malonato, tal como dietil malonato, para produzir o desejado intermediário de éster etílico do ácido N-(4-metanossulfonil- amino-2 - sulfamoil-fenil) -malonâmico.

pode ser usado para preparar o intermediário de ácido (7-iodo-l,l- dioxo-1,4-dihidro- lÀ6-benzo[ 1,2,4]tiadiazina-3-il)-acético.

um monoéster de haleto de malonila, tal como etil 3-cloro-3-oxo- proprionato ou com um dialquil malonato, tal como dietil malonato, produz a correspondente amida, que pode ser simultaneamente cicliza- da para o dióxido de tiadiazina e hidrolizada para o intermediário ácido pretendido.

O Esquema 18 proporciona um procedimento geral que pode ser usado para preparar os compostos 3-(l, 1-dioxobenzo [1,2,4]

O Esquema 17 proporciona um procedimento geral que

Esquema 17

A acilação de 2-amino-5-iodo-benzenossulfonamida com tiadiazina)-pirrolo [l,2-bpiridazin-2-ona da Fórmula I a partir dos pre- cursores de iodo correspondentes.

Esquema 18

As 4-hidroxi-3-(7-iodo-1,1 -dioxo-1,4-dihidro- lÀ6-benzo

[ 1,2,4]tiadiazin- 3-il)-pirrolo[ 1,2-<b]piridazin-2-onas opcionalmente subs- tituídas podem ser tratadas com sulfonamidas substituídas numa reação de deslocamento mediada por cobre para produzir os compostos desejados de 3-(1,1 -dioxobenzo[1,2,4]tiadiazina)-pirrolo[1,2-b]piridazin- 10 2-ona da Fórmula I.

O Esquema 19 proporciona um procedimento geral que pode ser usado para preparar os compostos 3-( 1,1-dioxobenzo [l,2,4]tiadiazina)-pirrolo[l,2-b]piridazin-2-ona da Fórmula I dos corres- pondentes precursores de iodo. Esquema 19

<formula>formula see original document page 77</formula>

As 4-hidroxi-3-(7-iodo-1,1 -dioxo-1,4-dihidro- 1λ6-benzo[1, 2,4]tiadiazin-3-il)-pirrolo[ 1,2-b]piridazin-2-onas opcionalmente substi- tuídas podem ser tratadas com estananas, tais como a sulfona insatu- rada cíclica mostrado acima, numa reação catalisada por paládio do tipo Stillepara produzir o intermediário insaturado mostrado. A redução do alqueno usando condições padrão de hidrogenação produz os dese- jados compostos 3-( 1,1 -dioxobenzo[ 1,2,4]tiadiazina)-pirrolo[ 1,2- b]piri- dazin-2-ona da Fórmula I.

O Esquema 20 proporciona um procedimento geral que pode ser usado para preparar compostos 3-(1,1-dioxobenzo[1,4]tiazin)- pirrolo[1,2-b]piridazin-2-ona da Fórmula 1, Esquema 20

N 0

° s <P

+ XXO

H

EtO'

NaH1THF

0N P

sS^ ..NHSO2Me

O anidrido cíclico e o éster etílico do ácido (7-metanossul- fonilamino-1,1 -dioxo-1,4-dihidro- lÀ6-benzo[ 1,4]tiazin-3-il)-acético inter- mediário podem ser condensados na presença de uma base (por exem- plo, hidreto de sódio) para produzir o composto desejado de 3-(l,l- dioxobenzo [1,4] tiazin) -pirrolo [ 1,2 - b] piridazin- 2 - ona.

O Esquema 21 proporciona um procedimento que pode ser usado para preparar o éster etílico do ácido (7-metanossulfonil- amino-1,1 -dioxo-1,4-dihidro- lÀ6-benzo[ 1,4]tiazin-3-il)-acético interme- diário. Esquema 21

O2N NH2-NH2-H2O °2N

UV

Λ o O

EtOH, Δ

mcpba

CO2Et

CH2CÍ2

(boc)2o1 dmap i r = h ch2ci2 r = boc

Cl

O O SH Et3N

NH2

OEt

THF

Xr

MeSO2Cl

B CO2Et CH2C'2

Sn(II)CI I EtOH1A Ld.

R = NO2 R = NH2

r

N

°"S° X}CNX/C02Et

1

r

tfa/ch2ci2 pr = b0c 1:1 ur = H

O 6-nitrobenzotiazol comercialmente disponível pode ser tratado com hidrazina para obter o 2-amino-5-nitro-benzenotiol, que pode ser subseqüentemente feito reagir com o cloroacetoacetato para dar o éster etílico do ácido (7-nitro-4H-benzo[l,4]tiazin-3-il-) acético. A redução do grupo nitro no grupo amino pode ser realizada por reação com cloreto de estanho (II). A reação subseqüente com cloreto de metanossulfonila pode ser usada para obter a correspondente sulfona- mida. A proteção de ambos os nitrogênios com um grupo de proteção adequado tal como um grupo de Boc pode ser realizada usando méto- dos padrão para a proteção dos grupos amino. O sulfeto pode ser oxidado usando um reativo de oxidação adequado (por exemplo, MCP- BA) para dar a sulfona. Finalmente, a desproteção dos grupos de amino usando ácido trifluoracético pode ser usada para produzir o desejado intermediário de éster etílico do (7- metanossulfonilamino-l,l-dioxo-1,4-dihidro- lÀ6-benzo[ 1,4]tiazin-3-il)-acético.

O Esquema 22 proporciona um procedimento geral que pode ser usado para preparar o intermediário de ácido (7-substituiu- 1,1 -dioxo-1,4-dihidro- lÀ6-benzo[ 1,4]tiazin-3-il-acético.

Esquema 22

EtO

H

hV

o'o

LiOH aq. MeOH

HO

OwO

O O

A hidrólise do éster do ácido 7-substituído-1,1 -dioxo-1,4- dihidro-lA6-benzo[l,4]tiazin-3-il-acético pode ser realizada usando condições padrão (por exemplo, hidróxido de lítio) para produzir o desejado intermediário do ácido (7-metanossulfonilamino-l,l-dioxo-l,4- dihidro-lÀ6-benzo[l,4]tiazin-3-il-)-acético.

O Esquema 23 proporciona um procedimento geral que pode ser usado para preparar o intermediário do ácido 7-(N-metil)- substituído-1,1 -dioxo-1,4-dihidro- lÀ6-benzo[ 1,4]tiazin-3-il-acético.

Esquema 23

/ ύ y

yM

,NH2 MeSO2CI

Piridina

\\

N

H

NaH1 Mel

0 0 THF1O0C

^ 1 0" o

N

1. H2NNH2-H2O EtOH150 0C1 8,5 h 2.

o o

«vXA,

Et3N THF

MeO

OMe

S, ^s ,N_____

,S 0' nO

N H

1. Boc2O1 DMAP THF

2. mCPBA DCM

MeO

0 .0

N

ι

Boc

V 0 0

LiOH

H2O-MeOH H0

Q, .0

fV 0Λ0

O 6-aminobenzotiazol comercialmente disponível pode ser tratado com um cloreto de sulfonila, tal como cloretos de metanossulfo- nila, para obter as correspondentes sulfonamidas. A reação com iodeto de metila, na presença de uma base, dá a correspondente N metil sulfonamida. A reação com hidrato de hidrazina e tratamento subse- qüentes com metil cloroacetoacetato produz o correspondente éster metílico do ácido 4H-benzo[l,4]tiazin-3-il-)-acético. A proteção do nitrogênio do anel com um adequado grupo de proteção tal como um grupo Boc pode ser realizada usando métodos padrão para proteção dos grupos amino. O sulfeto pode ser oxidado usando um reativo de oxida- ção adequado (por exemplo, MCPBA) para dar a sulfona. Finalmente, a hidrólise do éster produz o desejado intermediário do ácido [7- (metanossulfonil-metil-amino)-1,1 -dioxo-1,4-dihidro- lÀ6-benzo [ 1,4]tia- zin-3-il]-acético.

Exemplo 1

3-( 1,1-dioxo-1,4-dihidro- lA6-benzo[l,2,4]tiadiazin-3-il-)-4-hidroxi-l- (3-metil-butil)-pirrolo[l,2-fa]piridazin-2-ona

<formula>formula see original document page 81</formula>

a) éster alílico do ácido lH-pirrol-2-carboxílico A uma solução de ácido lH-pirrol-2-carboxílico (1,5 g, 14 mmol) em N,N-dimetilformamida (50 mL) a 25°C foi adicionado carbona- to de césio (4,8 g, 14,7 mmol) e brometo de alila (1,34 mL, 15,4 mmol) e agitado por 16 h. A mistura de reação foi tratada com solução aquosa saturada de cloreto de amônio e dietil éter (20 mL). As camadas foram separadas e as camadas aquosas foram extraídas com dietil éter (3 χ100 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de magnésio, filtradas e concentradas a vácuo para produzir o produto desejado no estado bruto, éster alílico do ácido 1H-pirrol-2-carboxílico (1,6 g, 10,6 mmol, 76% de rendimento) na forma de um óleo amarelo, que foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4,77 (1H, m), 5,35 (1H, dd, Ji = 10,4 Hz, J2 = 1,2 Hz), 5,39 (1H, dd, Ji = 16,8 Hz, J2 = 1,6 Hz), 6,26 (1H, m), 5,96 (1H, m),6,94 (2H, m), 9,2 (1H, bs).

b) éster alílico do ácido 1-Amino-lH-pirrol-2-carboxílico

A uma solução de éster alílico de ácido lH-pirrol-2- carboxílico (Exemplo la, 0,75 g, 4,96 mmol) em N,N-dimetilformamida (20 mL) a 25°C foi adicionado hidreto de sódio (0,316 g, 7,29 mmol) e agitado durante lh. Uma solução de monocloroamina (36 mL, 7,19 mmol) em dietil éter (0,2 M) foi adicionada e agitada durante lhe então tratado com solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (50 mL) e água (25 mL). As camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraída com dietil éter (3 χ 50 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de magnésio, filtradas e concentradas a vácuo para produzir o produto desejado no estado bruto, éster alílico do ácido l-amino-lH-pirrol-2-carboxílico (0,90 g) na forma de um óleo amarelo, que foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4,75 (2H, m), 5,28 (1H, dd, Ji = 10,0 Hz, J2 = 1,2 Hz), 5,40 (1H, dd, Ji = 17,2 Hz, J2 = 1,6 Hz), 6,03-5,90 (2H, m), 6,87 (1H, dd, Ji = 4,0 Hz, J2 = 1,6 Hz), 6,97 (1H, t, J= 2,0 Hz).

Alternativamente, o éster alílico do ácido 1-amino-lH- pirrol-2-carboxílico pode ser preparado como se segue: o éster alílico do ácido lH-pirrol-2-carboxílico (Exemplo la, 11,73 g, 78, 12 mmol) foi dissolvido em metil tert-butil éter (150 mL) e foi adicionada uma solução de hidróxido de sódio (37 g, 925 mmol) em água (150 mL). Foram adicionados cloreto de amónio sólido (25,1 g, 469 mmol), cloreto de trioctilmetilamônio ("Aliquat® 336", 1 mL) e solução aquosa de hidróxido de amónio a 28% (50 mL) foi adicionada à mistura bifásica. Sob agita- ção vigorosa, uma solução de lixívia aquosa a 6,15% ("Clorox", 250 mL) foi lentamente adicionada durante um período de 45 minutos via funil de adição em que a cor da solução virou para laranja. Depois de agita- ção durante 1,5 h a 25°C, mistura foi despejada em metil tert-butil éter (150 mL) e as camadas foram separadas. A camada orgânica foi lavada com uma solução de tiossulfato de sódio (10 g) em água (200 mL) e a camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio e filtrada. O solvente foi removido a vácuo para produzir o produto desejado, éster alílico do ácido 1-amino- lH-pirrol-2-carboxílico (8,03 g, 48,32 mmol, 62% de rendimento) na forma de um óleo marrom.

c) éster alílico do ácido l-(3-metil-butilamino)-lH-pirrol-2-carboxílico <formula>formula see original document page 84</formula>

A uma solução de éster alílico do ácido 1-amino-lH- pirrol-2-carboxílico (Exemplo lb, 0,88 g, 5,3 mmol) em metanol (12 mL) foram adicionados a isovaleril aldeído (0,74 mL, 6,9 mmol) e 1 gota de ácido clorídrico aquoso a 10%. A mistura de reação foi agitada a 25°C durante 20 minutos, após o que o cianoborohidreto de sódio (0,201 g, 3,2 mmol) foi adicionado e a solução amarela resultante foi aquecida a refluxo durante 16 h. A reação foi lentamente extinta com ácido clorídrico aquoso a 10% e concentrado a vácuo. A pasta bruta foi redissolvida em dietil éter. As camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraída com dietil éter. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de magnésio, filtradas e concentradas a vácuo. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna (sílica gel Merck 60, 40- 63 Mm, etil acetato/hexano, 20-40%) para produzir o produto desejado, éster alílico do ácido l-(3-metil-butilamino) -lH-pirrol-2-carboxílico (0,70 g, 2,96 mmol, 60% de rendimento) na forma de um óleo amarelo. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 0,92 (6H, d,J = 6,8 Hz), 1,42 (2H, q, Ji = 14,4 Hz, J2 = 7,2 Hz), 1,68 (1H, m), 3,03 (2H, t, J= 7,2 Hz), 4,76 (2H, d, J= 5,6 Hz), 5,28 (1H, d, J= 9,6 Hz), 5,40 (1H, d, J= 17,2 Hz), 6,01-6,04 (2H, m), 6,89-6,90 (1H, m), 6,96-6,97 (1H, m).

d) ácido l-(3-metil-butilamino)-lH-pirrol-2-carboxílico <formula>formula see original document page 85</formula>

A uma solução de éster alílico do ácido l-(3-metil-

butilamino)-1 H-pirrol-2-carboxílico (Exemplo lc, 2,8 g, 16 mmol) em diclorometano (70 mL) foi adicionado cloreto de O-benzilhidroxilamina (2,56 g, 16 mmol). Tetrakis(trifenilfosfino)paládio(0) (3, g, 3, mmol) foi adicionado e a mistura de reação foi aquecida em refluxo durante 16 h. A mistura bruta foi deixada esfriar a 25°C. O solvente foi removido a vácuo e redissolvido em acetato de etila (150 mL) e então lavado com solução aquosa de ácido clorídrico a 10% (3 χ 50 mL) e água (50 mL). A camada orgânica foi seca sobre sulfato de magnésio, filtrada e concen- tradaa vácuo. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna (Merck sílica gel 60, 40-63 μπι, etil acetato/hexano, 20-60%) para produzir o produto desejado, ácido 1-(3-metil-butilamino)-1H- pirrol-2-carboxílico (2,5 g, 13 mmol, 82% de rendimento) na forma de um óleo amarelo. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 0,94 (6H, d,J = 6,4 Hz),1,41-1,47 (2H, q, Ji = 15,2 Hz, J2 = 6,8 Hz), 1,68 (1H, m), 6,18 (1H, dd, Ji = 4,0 Hz, J2 = 2,8 Hz), 6,98-7,02 (2H, m).

(e) 4-(3-metil-butil)-6-oxa-3a,4-diaza-indeno-5,7-diona A uma solução de ácido l-(3-metil-butilamino)-lH-pirrol-2-carboxílico (Exemplo ld, 0,25 g, 1,27 mmol) em água (2 mL) foi adicionado carbonato de potássio (0,175 g, 1,27 mmol). A mistura de reação foi resfriada a 0°C e fosgênio (20% solução em tolueno) (0,95 mL,1,91 mmol) foi lentamente adicionado gota a gota. A solução amarela resultante foi agitada durante 16 h. Foi adicionado acetato de etila (4 mL) e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi extraída com acetato de etila (3x5 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de magnésio, filtradas e concentradas a vácuo. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna (Merck sílica gel 60, 40-63 um, acetato de etila/hexano, 20-50%) para produzir o produto desejado, 4-(3-metil-butil)-6-oxa-3a,4-diaza-indeno-5,7-diona (0,16 g, 0,72 mmol, 57% de rendimento) na forma de um sólido bronze- ado. iH NMR (400 MHz, DMS0-d6) δ 0,93 (6H, d, J= 6,8 Hz), 1,56 (2H, m), 1,65 (1H, m), 4,16 (2H, t,J= 7,2 Hz), 6,50 (1H, m), 7,08 (1H, m),7,70 (1H, m).

(f) éster etílico do ácido 4-hidroxi-l-(3-metil-butil)-2-oxo-l,2-dihidro- pirrolo [ 1,2-b]piridazina-3-carboxílico

A uma solução de 4-(3-metil-butil)-6-oxa-3a,4-diaza- indeno-5,7-diona (Exemplo le, 0,080 g, 0,36 mmol) e dietil malonato (0,58 mL, 3,6 mmol) em Ν,Ν-dimetilacetamida (1 mL) foi adicionado hidreto de sódio (0,017 g, 0,43 mmol) e 1 gota de metanol. A mistura de reação foi aquecida a 120°C e agitada durante 16h. A reação foi deixa- da arrefecer a 25°C e extinta com a solução saturada de cloreto de amônio e acetato de etila aquoso. As camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraída com acetato de etila (3x3 mL). As cama- das orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de magnésio, filtradas e concentradas a vácuo. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna (Merck sílica gel 60, 40-63 Mm acetato de etila/diclorometano, 2-5%) para produzir o produto desejado, éster etílico do ácido 4-hidroxi-l-(3-metil-butil)-2-oxo-1,2-dihidro-pirrolo[l ,2- b]piridazina-3-carboxílico (0,058 g, 0,20 mmol, 55% de rendimento) na forma de um sólido de bronzeado leve. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ0,93 (6H, d, J = 6,4 Hz), 1,30 (3H, t, J = 6,8 Hz), 1,49 (2H, q, Ji = 15,2 Hz, J2 = 7,6 Hz), 1,63 (1H, m), 4,23-4,30 (4H, m), 6,56 (1H, m), 6,87 (1H, m), 7,68 (1H, m); LC-MS (ESI) calculado para C15H20N2O4 292,33,

encontrado 293,30 [M+H+].

(g) 3-( 1,1 -dioxo-1,4-dihidro-lÀ6-benzo[ 1,2,4]tiadiazin-3-

il)- 4-hidroxi-l-(3-metil-butil)-pirrolo[l,2-b]piridazin-2-ona

O éster etílico do ácido 4-hidroxi-l-(3-metil-butil)-2-oxo-1,2-dihidro-pirrolo[ 1,2 - b]piridazina-3-carboxílico (Exemplo lf, 0,040 g,0,14 mmol) foi misturado com 2-amino-benzenossulfonamida (0,0235 g, θ', 14 mmol) e a mistura resultante foi aquecida a 180°C durante 20 minutos. O óleo bruto resultante foi deixado arrefecer a 25°C e foi adicionado etanol (0,5 mL) e sonicado para produzir um precipitado bronzeado, que foi coletado e seco a vácuo. O bruto sólido foi dissolvido em solução aquosa de hidróxido de potássio 1,0 M (0,3 mL) e aquecido a110°C durante 20 h. A mistura de reação foi deixada arrefecer a 25°C e foi adicionada 10% solução aquosa de ácido clorídrico (0,5 mL) e o precipitado branco resultante foi coletado. O sólido foi lavado com metanol e seco a vácuo para produzir o produto desejado, 3-(l,l-dioxo-1,4-dihidro- lA6-benzo[l ,2,4]tiadiazin-3-il)-4-hidroxi-.l-(3-metil-butil)- pirrolo[ 1,2-b/piridazin-2-ona (0,028 g, 0,07 mmol, 52% de rendimento) na forma de um sólido branco. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) d 0,97 (6H, d, J= 6,4 Hz), 1,28 (2H, bs), 1,61 (2H, q, J1 = 15,2 Hz, J2 = 6,8 Hz),1,74 (1H, m), 4,43 (2H, t, J = 8,0 Hz), 6,71 (1H, dd, J1 = 4,4 Hz, J2 = 2,4 Hz), 7,04 (1H, d, J= 4,4 Hz), 7,23 (1H, t,J = 8,0 Hz), 7,50 (1H, t,J = 7,6 Hz), 7,63 (1H, d, J= 8,4 Hz), 7,88 (1H, d, J = 8,0 Hz), 7,90 (1H, m); LC- MS (ESI) calculado para Ci9H20N4O4S 400,45, encontrado 401,28 [M+H+]. Exemplo 2

.4-hidroxi-3-(7-metoxi-1,1-dioxo-1,4-dihidro- lA6-benzo[ 1,2,4]tiadiazin-3-il-)-l-(3-metil-butil)-pirrolo[ 1,2-b]piridazin-2-ona <formula>formula see original document page 88</formula>

a) 7-Metoxi-1,1-dioxo-1,4-dihidro-2H-lA6-benzo [1,2,4] ti- adiazin-3-ona

<formula>formula see original document page 88</formula> O isocianato de clorosulfonila (17 mL, 195 mmol) foi dissolvido em nitroetano (150 mL) e arrefecido a -40°C. Uma solução de 4-metoxianilina (20 g, 162 mmol) em nitroetano (100 mL) foi, então, adicionado gota a gota com agitação. Depois de a adição ser completa- da, a reação foi agitada durante mais 5 minutos e cloreto de alumínio (25 g, 195 mmol) foi adicionado. A mistura foi, então, rapidamente aquecida a 110°C com agitação durante 20 minutos. O material bruto foi, então, despejado sobre o gelo e o precipitado foi coletado por filtra- ção a vácuo, lavado com água fria e seco a vácuo para produzir o produ- to desejado, 7-metoxi-1,1 -dioxo-1,4-dihidro-2H-1λ6-benzo[ 1,2,4]tiadia- zin-3-ona (35 g, 153,5 mmol, 79% de rendimento) na forma de um pó purpúreo. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): d 3,6 (br, 1H), 3,78 (s, 3H), 7,2 (m, 3H), 11,05 (s, 1H).

b) 2-amino-5-metoxi-benzenossulfonamida

Uma solução de 7-metoxi-1,1-dioxo-1,4-dihidro-2H-1λ6- benzo[1,2,4]tiadiazin-3-ona (Exemplo 2a, 15 g, 65,7 mmol) numa solução aquosa de ácido sulfúrico a 50% (140 mL) foi aquecida a 130°C durante 6h. A solução foi, então, despejada sobre gelo e neutralizada a 0°C com a adição de solução aquosa de hidróxido de sódio saturado. A mistura foi, então, extraída com acetato de etila. A fase orgânica foi lavada com salmoura e seca sobre sulfato de magnésio, filtrada e seca a vácuo para produzir o produto desejado, 2-amino-5-metoxibenzenos- sulfonamida (8,1g, 40,1 mmol, 61% de rendimento) na forma de um sólido marrom. Ver procedimento descrito em Girard, Y. e colaborado- res, J. Chem. Soe. Perkin Trans 1, 1043-1047 (1979). 1H NMR (400 MHz, DMSO-ctô): d 3,65 (s, 3H), 5,40 (s, 2H), 6,73 (d, 1H, J = 8,8 Hz),6,90 (dd, 1H, Ji = 8,8 Hz, J2 = 2,8 Hz), 7,07 (d,1H, J = 2,8 Hz), 7,19 (s,2H).

[ 1,2,4]tiadiazin-3-il-)-l-(3-metil-butil)-pirrolo[ 1,2-b]piridazin-2-ona <formula>formula see original document page 90</formula>

l,2-dihidro-pirrolo[l,2-b]piridazina-3-carboxílico (Exemplo lf, 0,040 g,0,14 mmol) foi misturado com 2-amino-5-metoxi-benzenossulfonamida (Exemplo 2b, 0,0235 g, 0,14 mmol) e a mistura resultante foi aquecida a 180°C durante 20 minutos. O óleo bruto resultante foi deixado arrefecer a 25°C e o etanol (0,5 mL) foi adicionado e sonicado para produzir um precipitado bronzeado, que foi coletado e seco a vácuo. O sólido bruto foi dissolvido em solução aquosa de hidróxido de potássio 1,0 M (0,5 mL) e aquecido a IlO0C durante 12 h. A mistura de reação foi deixada arrefecer a 25°C e foi adicionada solução aquosa de ácido clorídrico a 10% (0,5 mL) e foi coletado o precipitado branco resultante. Os sólido bruto foi lavado com metanol e seco a vácuo para produzir o produto desejado, 4-hidroxi-3-(7-metoxi-1,1 -dioxo-1,4-dihidro- 1λ6- benzo[l,2,4]tiadiazin-3-il)-l-(3-metil-butil)-pirrolo[l,2-b]piridazin-2-ona (0,027 g, 0,063 mmol, 47% de rendimento) na forma de um sólido branco. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 1,07 (6H, d, J = 6,4 Hz), 1,69 (1H, m), 1,78 (1H, m), 3,89 (3H, s), 4,39 (2H, t,J = 7,6 Hz), 6,60 (1H, dd, Ji = 4,4 Hz, J2 = 2,8 Hz), 7,04 (1H, d, J= 4,4 Hz), 7,05 (1H, dd, Ji =

c) 4-Hidroxi-3-(7-metoxi-1,1 -dioxo-1,4-dihidro- lÀ6-benzo

Ov ,O

O éster etílico do ácido 4-hidroxi-l-(3-metil-butil)-2-oxo- .4,8 Hz, J2 - 2,0 Hz), 7,25 (1Η, m), 7,17 (1Η, m), 7,39 (IHf d, J = 2,0 Hz); LC-MS (ESI) calculado para Ci9H22N4O5S 430,49, encontrado 431,33 [M+H+].

Exemplo 3

N-{3-[4-hidroxi-l-(3-metil-butil)-2-oxo-l,2-dihidro-pirrolo[l,2- b]piridazin-3-il]-1,1 -dioxo-1,4-dihidro- lX6-benzo[ 1,2,41 tiadiazin-7-il | -

metanossulfonamida

<formula>formula see original document page 91</formula>

a) jv-(4-nitro-fenil)-metanossulfonamida

<formula>formula see original document page 91</formula>

Foi dissolvida 4-nitro-fenilamina (25 g, 181 mmol) em piridina (450 mL). O cloreto de metanossulfonil (14,0 mL, 181 mmol) foi adicionado gota a gota sob agitação. A mistura foi agitada durante 16 h a 25°C. A solução foi concentrada a vácuo durante um volume de -50 mL. A mistura foi diluída com acetato de etila (400 mL), lavada com solução aquosa de ácido clorídrico 1,0 M (5 χ 200 mL). As camadas aquosas combinadas foram extraídas de volta com acetato de etila (200 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de magnésio, filtrado e concentrado a vácuo a um volume de -250 mL. O produto precipitou e foi coletado por filtração a vácuo. O filtrado foi concentrado a vácuo a um volume de -125 mL após o que o produto adicional precipitou. O sólido foi coletado por filtração a vácuo. Os sólidos foram combinados para produzir o produto desejado, N-(4-nitro- fenil)-metanossulfonamida (25 g, 115,62 mmol, 64% de rendimento) na forma de um sólido amarelo pálido. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ .3,17 (3H, s), 7,35 (2H, d, J = 9,4 Hz), 8,20 (2H, d, J = 9,1 Hz), 10,69 (1H, s).

b) N-(4- amino-fenil)-metanossulfonamida

<formula>formula see original document page 92</formula>

N-(4-nitro-fenil)-metanossulfonamida (Exemplo 3a, 25 g,115,62 mmol) foi dissolvido em iV,i\T-dimetilformamida (15 mL) com aquecimento suave a -50°C via pistola térmica. Foram adicionados acetato de etila (100 mL) e metanol (100 mL) seguido de 10% paládio sobre carbono (4 g). A mistura foi desgasificada sob agitação e o frasco foi carregado com gás de hidrogênio via balão. A mistura foi agitada a .25°c durante 4,5 h. A mistura foi filtrada através de Celite (enxaguada com acetato de etila) e concentrada a vácuo a uma solução verde ama- rela com um volume de -10 mL. Adicionou-se diclorometano (-50 mL) e um sólido começou a precipitar. A mistura foi agitada a 25°C durante minutos. O sólido foi coletado por filtração a vácuo e seco a vácuo para produzir o produto desejado, N-(4-aminofenil)-metanossulfonami- da (15,32 g, 82,26 mmol, 71 % de rendimento) na forma de um pó bege. .1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 2,79 (3H, s), 5,00 (2H, s), 6,49 (2H, d, J = 8,5 Hz), 6,87 (2H, d, J= 8,6 Hz), 8,87 (1H, s).

c) N-( 1,1,3-Trioxo-1,2,3,4-tetrahidro-lÀ6benzo[ 1,2,4] tiadi- azin-7-il)-metanossulfonamida <formula>formula see original document page 93</formula>

Cloro-sulfonil-isocianato (1,7 mL, 19,6 mmol) foi dissolvi- do em nitroetano (10 mL) e congelado a -40°C sob nitrogênio. N-(4- aminofenil)-metanossulfonamida (Exemplo 3b, 3 g, 16,1 mmol) foi adicionado gota a gota na forma de solução pré-dissolvida em nitroeta- no (25 mL). A mistura foi agitada a -40°C durante 15 minutos. Foi adicionado cloreto de alumínio (8 g, 60 mmol) e a mistura foi aquecida a .110℃durante 30 minutos sob agitação. A mistura foi vazada sobre gelo (-150 g). Após fusão, o produto foi extraído em acetato de etila (5 χ .250 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de magnésio, filtradas e concentradas a vácuo para produzir o produto desejado, N-( 1,1,3-trioxo-1,2,3,4-tetrahidro- lA6-benzo[ 1,2,4]tiadiazin-7- il)-metanossulfonamida (3,63 g, 12,46 mmol, 77% de rendimento) na forma de um sólido bege. *H NMR (400 MHz, DMSO-d6) d 3,00 (3H, s), .7,22 (1H, d,J = 8,5 Hz), 7,46 (1H, dd, Ji = 8,8 Hz, J2 = 2,7 Hz), 7,51 (1H, d, J= 2,4 Hz), 9,92 (1H, s), 11,20 (1H, s).

d) 2-Amino-5-metanossulfonilamino-benzenossulfonami- da

<formula>formula see original document page 93</formula>

JV-(1,1,3-Trioxo-1,2,3,4-tetrahidro-lA6 benzo[ 1,2,4]tiadia- zin-7-il)-metanossulfonamida (Exemplo 3c, 1 g, 3,4 mmol) foi suspenso em solução aquosa de ácido clorídrico 12 M (60 mL). A mistura foi agitada a 105°C durante 16 h. Todos os sólidos foram dissolvidos neste momento. A mistura foi diluída com água (250 mL). A solução foi concentrada a vácuo a um sólido laranja. O sólido foi dissolvido em água (20 mL) e concentrado a vácuo a um sólido laranja. O sólido foi dissolvido em água (5 mL) e o produto foi extraído em acetato de etila (6 x 20 mL). A fase orgânica combinada foi seca sobre sulfato de magné- sio, filtrada e concentrada a vácuo a um sólido laranja. A purificação por cromatografia por coluna flash (Merck sílica gel 60, 40-63 μπι, 75% acetato de etila em hexano) produziu o produto desejado, 2-amino-5- metanossulfonilamino-benzenossulfonamida (0,41 g, 1,55 mmol, 45% de rendimento), na forma de um sólido bege. >H NMR (400 MHz, DM- SO-d6) δ 2,86 (3H, s), 5,77 (2H, s), 6,76 (1H, d, J = 8,6 Hz), 7,11 (1H, dd, J1 = 8,6 Hz, J2 = 2,4 Hz), 7,25 (2H, bs), 7,43 (1H, d, J = 3,1 Hz), 9,16 (1H, s).

Alternativamente, o intermediário de 2-amino-5-metanos- sulfonilamino-benzenossulfonamida de 3(d) acima foi feito de preferên- cia de acordo com o seguinte procedimento:

(a)': N-(4-Nitro-fenil)-metanossulfonamida

<formula>formula see original document page 94</formula>

Uma solução de metanossulfonilcloreto (47,1 mL, 0,61 mol) em acetonitrila (160 mL) foi adicionada durante 40 minutos a uma solução de de 4-nitroanilina (80,0 g, 0,58 mol) e piridina (70,2 mL, 0,87 mol) em acetonitrila (400 mL) a 25°C. A mistura foi agitada a 25°C durante 19 h e, então, foi adicionada água (800 mL). A suspensão resultante foi agitada a 25°C durante 30 minutos e, então, foi filtrada através de meio de papel usando um funil de Buchner. O sólido coleta- do foi lavado com água (2 χ 150 mL) e seco ao ar durante a noite para produzir o produto desejado, N-(4-nitrofenil)-metanossulfonamida (111,4 g, 0,52 mol, 89% de rendimento) na forma de um sólido amarelo pálido. iH NMR (400 MHz, DMSO-de) δ 3,17 (3H, s), 7,35 (2H, d, J= 9,4 Hz), 8,20 (2H, d, J = 9,1 Hz), 10,69 (1H, s).

(b)': N-(4-aminofenil)-metanossulfonamida

<formula>formula see original document page 95</formula>

.5% de paládio sobre carbono ("úmido", 11,1 g) foi adicio- nado a uma solução de N-(4-nitrofenil)-metanossulfonamida (Exemplo .3a', 111,4 g, 0,52 mol) em tetrahidrofurano (900 mL) a 25°C. A atmos- fera acima da suspensão resultante foi substituída por gás de hidrogê- nio e a mistura de reação foi mantida abaixo de 1 atmosfera de hidro- gênio a 25°C por 4 dias usando vários balões. A mistura foi, então, filtrada através de Celite e a Celite foi lavada com tetrahidrofurano (3 χ .100 mL). O filtrado e as lavagens combinados foram concentrados a vácuo a aproximadamente 300 mL volume e foi adicionado heptano (500 mL) gota a gota via funil de adição durante 45 minutos a 25°C com agitação vigorosa. A suspensão resultante foi agitada por mais 45 minutos a 25°C e, então, foi filtrada através de meio de papel usando um funil de Buchner. O sólido coletado foi lavado com heptano (1 χ 150 mL) e foi seco a ar para produzir o produto desejado, N-{4-aminofenil)- metanossulfonamida (90,7 g, 0,49 mol, 95% de rendimento) na forma de um pó bege. >H NMR (400 MHz, DMSO-d6) d 2,79 (3 H, s), 5,00 (2H, s), 6,49 (2H, d, J= 8,5 Hz), 6,87 (2H, d, J= 8,6 Hz), 8,87 (1H, s).

(c)': N-{ 1,1,3-trioxo-1,2,3,4-tetrahidro- lA6-benzo[l ,2,4]tia- diazin-7-il)-metanossulfonamida <formula>formula see original document page 96</formula>

Uma solução de Ν-(4-aminofenil)-metanossulfonamida (Exemplo 3b', 90,7 g, 0,49 mol) em nitroetano (900 mL) foi adicionada gota a gota durante 1,5 h a uma solução mecanicamente agitada de clorosulfonilisocianato (50,6 mL, 0,54 mol) em nitroetano (150 mL) a -20°C. A suspensão resultante foi agitada a -20°C durante 30 minutos, depois, foi adicionado cloreto de alumínio (77,9 g, 0,58 mol) a uma parte durante 1 minuto. A solução marrom resultante foi aquecida a 25°C e então foi aquecida a IlO0C durante 1 h (foi notada considerável evolução de gás durante este tempo). Depois de arrafecida a -5°C, foi adicionada água (300 mL) gota a gota via funil de adição durante 15 minutos, seguida da rápida adição de mais água (700 mL). A suspen- são resultante foi deixada aquecer a 25°C e agitada vigorosamente durante 30 minutos e, depois, foi filtrada através de meio de papel usando um funil de Buchner. O sólido coletado foi lavado com água (1 x 300 mL) e foi seco ao ar para produzir o produto desejado, N-(l,l,3- trioxo-l,2,3,4-tetrahidro-lA6-benzo[l,2,4]tiadiazin-7-il)- metanossulfonamida (115,2 g, 0,40 mmol, 81% de rendimento) na forma de um sólido bege. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 3,00 (3H, s),7,22 (1H, d, J = 8,5 Hz), 7,46 (1H, dd, Ji = 8,8 Hz, J2 = 2,7 Hz), 7,51 (1H, d, J= 2,4 Hz), 9,92 (1H, s), 11,20 (1H, s).

(d)': 2-Amino-5-metanossulfonilamino-benzenossulfona- mida <formula>formula see original document page 97</formula>

Uma suspensão mecanicamente agitada de N-(l,l,3- trioxo-l,2,3,4-tetrahidro-lÃ6-benzo[l,2,4]tiadiazin-7-il)-metanossulfona- mida (Exemplo 3c', 115,2 g, 0,40 mol) em ácido sulfúrico aquoso 9,0 M (500 mL) foi aquecida a 130°C durante 2,5 h (foi notada considerável evolução de gás durante este tempo). A solução marrom resultante foi resfriada a 0°C e foi adicionada uma solução aquosa de hidróxido de sódio (351 g em 750 mL de água; cerca de 11,7 M) via funil de adição durante 45 minutos. O pH da mistura de reação foi, então, ajustado a aproximadamente 7,0 pela adição gota a gota de solução de carbonato de sódio aquoso3,0 Μ. A suspensão resultante foi deixada aquecer a .25°C e agitada durante 1 h, depois, foi filtrada através de meio de papel usando um funil de Buchner. O sólido coletado foi lavado com água (1 x 300 mL) e foi seco num forno a vácuo a 50°C para produzir uma mistura de 2-amino-5-metanossulfonilamino-benzenossulfonamida e .2,5-diamino-benzenossulfonamida (relação de 1,5:1,0; 70,0 g, 75% de rendimento) na forma de um sólido marrom. >H NMR (400 MHz, DM- SO-d6) d: 2,86 (3H, s), 4,54 (2H, bs), 4,98 (2H, bs), 5,77 (2H, s), 6,55 - .6,60 (2H, m), 6,76 (1H, d, J = 8,6 Hz), 6,87 (1H, d, J = 2,2 Hz), 6,99 (2H, bs), 7,11 (1H, dd, Ji = 8,6 Hz, J2 = 2,4 Hz), 7,25 (2H, bs), 7,43 (1H, d, J = 3,1 Hz), 9,16 (1H, s).

Uma solução de metanossulfonilcloreto (8,2 mL, 0,11 mol) em acetonitrila (100 mL) foi adicionada durante 15 minutos a uma solução da mistura acima de 2-amino-5-metanossulfonilamino- benzenossulfonamida e 2,5-diamino-benzenossulfonamida (relação de .1,5:1,0, 60,0 g) e piridina (12,0 mL, 0,15 mol) em acetonitrila (500 mL) a25°C. A mistura foi agitada a 25°C durante 15 h e então foi concen- trada a vácuo a aproximadamente 300 mL de volume. Adicionou-se acetato de etila (300 mL) e a suspensão resultante foi agitada a 25°C durante 10 minutos e, então, foi filtrada através de meio de papel usando um funil de Buchner. O sólido coletado foi lavado com água (1 χ 200 mL) e foi seco num forno a vácuo a 50°C para produzir o produto desejado, de 2-amino-5-metanossulfonilamino-benzenossulfo-namida (54,0 g, 0,20 mol, 80% de rendimento) na forma de um sólido bege. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) d 2,86 (3H, s), 5,77 (2H, s), 6,76 (1H, d,J = 8,6 Hz), 7,11 (1H, dd, Ji = 8,6 Hz, J2 = 2,4 Hz), 7,25 (2H, bs), 7,43 (1H, d, J= 3,1 Hz), 9,16 (1H, s).

e) N-{3-[4-hidroxi-l-(3-metil-butil)-2-oxo-l,2-dihidro-pir- rolo[ 1,2 -b]piridazin-3-il-]-1,1 -dioxo-1,4-dihidro-l lA^benzol 1,2,4]tiadi- azin-7-il}-metanossulfonamida <formula>formula see original document page 98</formula>

O éster etílico do ácido 4-hidroxi-l-(3-metil-butil)-2-oxo-1,2- dihidro-pirrolo[ 1,2-b]piridazina-3-carboxílico (Exemplo lf, 0,098 g, 0,33 mmol) e 2-amino-5-metanossulfonilamino-benzenossulfonamida (Exemplo 3d ou Exemplo 3d', 0,089 g, 0,33 mmol) foram misturados em piridina (1,5 mL) e a mistura foi agitada sob uma atmosfera de nitrogênio a 120°C durante 3 h. A análise LC-MS confirmou o desapa- recimento do material de partida e a formação do intermediário não ciclizado 4-hidroxi-l-(3-metil-butil)-2-oxo-l,2-dihidro-pirrolo[l,2-b]piri- dazina-3-ácido carboxílico (4-metanossulfonilamino-2-sulfamoil-fenil)- amida. l,8-diazabiciclo[5,4,0]undec-7-eno (DBU) (150 μL 1,0 mmol) foi adicionado e a mistura foi agitada sob atmosfera de nitrogênio a 120°C durante 16 h. A análise LC-MS indicou a conclusão da reação e a mistura foi concentrada a vácuo. O material bruto foi dissolvido em dimetilsulfóxido e purificado por HPLC preparativa (Coluna ODS-A .100A, 5μ. 150 χ 21,2 mm. Fluxo de 22 mL/minuto, 30-100% de aceto- nitrila/água com ácido triüuoracético a 0,01 %) e liofilizada a partir da água e 1,4-dioxano para produzir o produto desejado, N-{3-[4-hidroxi-l- (3-metil-butil)-2-oxo-1,2-dihidro-pirrolo[ 1,2-b]piridazin-3-il]-1,1 -dioxo- .1,4-dihidro- lA6-benzo[l ,2,4]tiadiazin-7-il}-metanossulfonami-da (0,016 g, 0,032 mmol, 9,7% de rendimento) na forma de pó marrom claro. 1H NMR (DMSO-d6) d 0,96 (6H, d,J = 6,3 Hz), 1,55-1,60 (2H, m), 1,67- .1,77 (1H, m), 3,07 (1H, s), 4,40 (2H, t, J = 7,8 Hz), 6,70 (1H, s), 7,02 (1H, s), 7,52-7,67 (3H, m), 7,90 (1H, s), 10,20 (1H, s); LC-MS (ESI) calculado para C20H23N5O6S2 493,1 encontrado 494,3 [M+H+].

N-{3-[l-(3,3-dimetil-butil)-4-hidroxi-2-oxo-l,2-dihidro-pirrolo[l,2-blpiri- dazin-3-il]-1,1 -dioxo-1,4-dihidro- lA6-benzo[l ,2,4]tiadiazin-7-il}-meta- nossulfonamida

<formula>formula see original document page 99</formula>

a)2-amino-5-iodo-benzenossulfonamida

<formula>formula see original document page 99</formula>

.2-amino-benzenossulfonamida (5,15 g, 29,3 mmol) foi dissolvido em clorofórmio (87 mL) e N-iodosuccinimida (7,29 g, 30,77 mmol) foi adicionadasob atmosfera de nitrogênio. A mistura foi aqueci- da em refluxo durante 24 h, deixada arrefecer a 25°C e filtrada através de um funil de sínter. O sólido foi lavado com clorofórmio e 10% meta- nol/clorofórmio (3-8 vezes) para produzir o produto desejado, 2-amino- .5-iodo-benzenossulfonamida (6,78 g, 22,75 mmol, 78% de rendimento) na forma de um sólido cristalino marrom. 1H NMR (400 MHz, DMSO- d6): 5,98 (s, 2H), 6,62 (d, 1H, J= 8,8 Hz), 7,31 (s, 2H), 7,45 (dd, 1H, J = .8,8, 2,4 Hz), 7,73 (d, 1H, J= 2,0 Hz).

b) (7-Iodo-1,1 -dioxo-1,4-dihidro-lÀ6benzo[ 1,2,4]tiadiazin- .3-il-)-ácido acético

<formula>formula see original document page 100</formula>

.2-amino-5-iodo-benzenossulfonamida (Exemplo 4a, 2,0 g, 6,71 mmol) foi dissolvido em JViV-dimetilacetamida (5 mL) e dietil éter (7 mL). Etil-3-cloro-3-oxo-propionato (0,916 g, 6,71 mmol) foi adiciona- do e a mistura de reação foi agitada a 25°C durante 2 h. A mistura de reação foi diluída com dietil éter (10 mL) e água (20 mL). Após mistura vigorosa, formou-se um precipitado. O sólido foi coletado por filtração a vácuo, enxaguado com solução aquosa de ácido clorídrico 1,0 M (2 χ 10 mL) e seco a vácuo durante 2 h. O sólido foi dissolvido em 8% solução aquosa de hidróxido de sódio (50 mL) e agitada a IOO0C durante 15 minutos. Após arrefecimento a 25°C, a solução foi neutralizada com solução aquosa de ácido clorídrico 6,0 M. Adicionou-se mais solução aquosa de ácido clorídrico 1,0 M (20 mL) e o produto desejado precipi- tou. O sólido foi coletado por filtração a vácuo, enxaguado com solução aquosa de ácido clorídrico 1,0 M (2 χ 10 mL) e seco a vácuo durante 16 h para produzir o produto desejado, (7-iodo-l,l-dioxo-l,4-dihidro-1λ6- benzo[l,2,4]tiadiazin-3-il)-ácido acético (2,0 g, 5,46 mmol, 81% de rendimento) na forma de pó de pálido rosa. 1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) 6: 3,58 (3H, s), 7,13 (1H, d, J= 8,5 Hz), 7,98 (1H, dd, Ji = 8,6 Hz, J2 = 1,7 Hz), 8,03 (1H, d, J= 2,5 Hz), 12,33 (1H, bs), 13,05 (1H, bs). LC- MS (ESI) calculado para C9H7IN2O4S 365,92, encontrado 366,95 [M+H+].

c) éster alílico do ácido l-(3,3-dimetil-butilamino)-lH- pirrol-2-carboxílico.

<formula>formula see original document page 101</formula>

Foi adicionado dimetilsulfóxido (6,80 mL, 95,7 mmol) durante 5 minutos a uma solução de oxalilcloreto (23,9 mL, 47,8 mmol) em diclorometano a -78°C. A mistura resultante foi agitada a -78°C durante 5 minutos, depois, foi adicionado 3,3-dimetil-butan-l-ol (5,22 mL, 43,1 mmol). Depois de agitação durante mais 30 minutos a -78°C, foi adicionada trietilamina (23,3 mL, 167 mmol) e a mistura de reação aquecida a 0°C e agitada a essa temperatura durante 45 minutos. A mistura foi, então, transferida para um funil de separação e foi lavada com ácido clorídrico aquoso 0,5 Μ. A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e foi concentrada a vácuo a um volume de cerca de 70 mL (temperatura do banho de água = 0°C). Foi adicionado metanol (100 mL) seguido em seqüência de éster alílico do ácido 1- amino-1 H-pirrol-2-carboxílico (Exemplo lb, 7,16 g, 43,1 mmol), ácido acético (6 mL) e cianoborohidreto de sódio (5,42 g, 86,3 mmol). A mistura de reação foi agitada a 23°C durante 2 h e, então, foi particio- nada entre uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (400 mL) e uma mistura 1:1 de acetato de etila e hexano (2 χ 200 mL). As camadas orgânicas foram secas sobre sulfato de sódio, filtradas e concentradas a vácuo. Purificação do resíduo por cromatografia por coluna flash (Merck sílica gel 60, 40-63 Mm, 5->10% acetato de etila em hexano) produziu o produto desejado, éster alílico do ácido l-(3,3- dimetil-butilamino)-1 íí-pirrol-2-carboxílico (4,04 g, 16,15 mmol, 37% de rendimento) na forma de um líquido claro. 1H NMR (400 MHz, CDCI3) δ: .0,91 (9H, s), 1,42 - 1,46 (2H, m), 2,98 - 3,04 (2H, m), 4,75 - 4,77 (2H, m), 5,26 - 5,28 (1H, m), 5,37 - 5,41 (1H, m), 5,96 - 5,99 (1H, m), 6,01- .6,05 (1H, m), 6,27 - 6,30 (1H, m), 6,89 - 6,91 (1H, m), 6,96 - 6,98 (1H, m).

d) l-(3,3-Dimetil-butil)-4-hidroxi-3-(7-iodo-1,1 -dioxo-1,4- dihidro- lA6-benzo[ 1,2,4]tiadiazin-3-il)-pirrolo[ 1,2-b]piridazin-2-ona

<formula>formula see original document page 102</formula>

(7-Iodo-1,1 -dioxo-1,4-dihidro- lA6-benzo[ 1,2,4]tiadiazin-3- il-)-ácido acético (Exemplo 4b, 0,3 g, 0,819 mmol) foi dissolvido em N,N-dimetilformamida (4,1 mL). O éster alílico do ácido l-(3,3-dimetil- butilamino)-lH-pirrol-2-carboxílico (Exemplo 4c, 0,205 g, 0,819 mmol) foi adicionado seguido de uma solução 1,0 M de N,N-diciclo- hexilcarbodiimida em diclorometano (0,860 mL, 0,86 mmol). A mistura foi agitada a 25°C durante 2 h. A precipitação de NtN-diciclohexilureia era visível neste momento. A mistura foi diluída com diclorometano (5 mL) e filtrada sob pressão reduzida. O filtrado foi lavado com solução de ácido clorídrico aquoso 1,0 M, (2 χ 10 mL), solução saturada de salmoura aquosa (10 mL), seco sobre sulfato de magnésio, filtrado e concentrado a vácuo para dar um óleo dourado. O óleo foi dissolvido em etanol (4,1 mL). Uma solução a 21% de etóxido de sódio em etanol (0,673 mL) foi adicionada e a mistura foi agitada a 80°C durante 4 h. Juntou-se mais etóxido de sódio em etanol (0,673 mL) e a mistura foi agitada a 80°C durante 4 h. Após arrefecimento a 25°C, o pH foi ajus- tado a aproximadamente 6 pela adição de solução aquosa 3,0 M de ácido clorídrico. Foi observada precipitação imediata. Foi adicionado metanol (3 mL) e a mistura foi vigorosamente agitada. O sólido foi coletado por filtração a vácuo, enxaguado com metanol (3x2 mL) e seco a vácuo durante 16 h para produzir o produto desejado, l-(3,3-dimetil- butil)-4-hidroxi-3-(7-iodo-1,1 -dioxo-1,4-dihidro- lÀ6-benzo [ 1,2,4]tiadia- zin-3-il)-pirrolo [l,2-b]piridazin-2-ona (0,268 g, 0,67 mmol, 82% de rendimento) na forma de pó branco. LC-MS (ESI) calculado para C20H21IN4O4S, encontrado 540,03, encontrado 366,95 [M+H+].

e) N-{3-[l-(3,3-dimetil-butil)-4-hidroxi-2-oxo-l,2-dihidro- pirrolo[ 1,2-b]piridazin-3-il-]-1,1 -dioxo-1,4-dihidro- lÀ6-benzo[ 1,2,4]tiadi- azin-7-il}-metanossulfonamida

<formula>formula see original document page 103</formula> l-(3,3-Dimetil-butil)-4-hidroxi-3-(7-iodo-1,1-dioxo-1,4- dihidro- lÀ6-benzo[ 1,2,4]tiadiazin-3-il-)-pirrolo[ 1,2-d]piridazin-2-ona (Exemplo 4d, 0,065 g, 0,120 mmol), trifosfato de potássio (0,128 g, .0,60 mmol), sarcosina (0,006 g, 0,072 mmol), e iodeto de cobre (I) (0,006 g, 0,03 mmol) foram combinados. Adicionou-se NN- dimetilfor- mamida anidra (2 mL) seguida de metanossulfonamida (0,114 g, 1,2 mmol). A solução foi desgasificada enquanto em agitação sob vácuo e o frasco foi purgado com nitrogênio. A mistura foi agitada a IOO0C durante 2 h. Após arrefecimento, a mistura foi diluída com acetato de etila (100 mL), lavada com solução aquosa 1,0 M de ácido clorídrico (3 x 50 mL) e seca sobre sulfato de magnésio. A camada orgânica inteira foi passada através de um plugue de sílica gel. O filtrado foi concentrado a vácuo para dar um sólido. O sólido foi triturado com uma mistura 1: 1 de acetato de etila e hexano, coletada por filtração a vácuo, triturada com metanol e coletada por filtração a vácuo. O sólido foi seco a vácuo durante 16 h para dar o produto desejado, N-{3-[1-(3,3-dimetil-butil)-4- hidroxi-2-oxo-1,2-dihidro-pirrolo[ 1,2-d]piridazin-3-il]-1,1 -dioxo-1,4- dihidro-1λ6-benzo [1,2,4]tia-diazin-7-il}-metanossulfonamida (0,031 g, 0,061 mmol, 51% de rendimento) na forma de pó de pálido amarelo. 1H NMR (400 MHz, DMSO-(Z6) δ: 1,01 (9H, s), 1,57 - 1,62 (2H, m), 3,07 (3 H, s), 4,39 - 4,43 (2H, m), 6,70 - 6,72 (1H, m), 7,03 (1H, d, J = 3,8 Hz), 7,53 (1H, dd, J1 = 8,7 Hz, J2 = 2,8 Hz), 7,60 (1H, d,J = 2,3 Hz), 7,67 (1H, d, J= 8,4 Hz), 7,75 (1H, s), 10,20 (1H, s), 13,72 (1H, bs). LC-MS (ESI) calculado para C21H25N5O6S2, encontrado 507,12, encontrado 508,36 [M+H+].

Exemplo 5

N-{3-[1-(3,3-dimetil-butil)-4-hidroxi-2-oxo-1,2-dihidro-pirrolo[ 1,2-b]piri- dazin-3-il]-1,1-dioxo-1,4-dihidro- lÀ6-benzo[ 1,2,4 ltiadiazin-7-il}-N-metil- metanossulfonamida <formula>formula see original document page 105</formula>

.l-(3,3-Dimetil-butil)-4-hidroxi-3-(7-iodo-1,1-dioxo-1,4- dihidro- lλˇ6-benzo[ 1,2,4]tiadiazin-3-il-)-pirrolo[ 1,2-d]piridazin-2-ona (Exemplo 4d, 0,257 g, 0,476 mmol), trifosfato de potássio (0,505 g, 2,38 mmol), sarcosina (0,025 g, 0,285 mmol) e iodeto de cobre (I) (0,022 g, 0,119 mmol) foram combinados. JVJV-dimetilformamida anidra (9,5 mL) foi adicionada seguida de N-metil-metanossulfonamida (0,519 g, 4,76 mmol). A solução foi desgasificada enquanto agitação sob vácuo e o frasco purgado com nitrogênio. A mistura foi agitada a IOO0C durante 1 h. Juntou-se mais iodeto de cobre (I) (0,1 g, 0,525 mmol). A mistura continuou sob agitação a IOO0C durante 3 h. Após arrefecimento, a mistura foi diluída com acetato de etila (200 mL), lavada com solução aquosa 1,0 M de ácido clorídrico (2 × 100 mL), seca sobre sulfato de magnésio. A camada orgânica inteira foi passada através de um plugue de sílica gel. Após concentração a vácuo a um volume de aproximada- mente 10 mL, o produto desejado precipitou. O sólido foi coletado por filtração a vácuo. O sólido foi recristalizado em acetato de etila, coleta- do por filtração a vácuo e seco a vácuo para dar o produto desejado, N- {3-[l-(3,3-dimetil-butil)-4-hidroxi-2-oxo-l,2-dihidro-pirrolo [l,2-b]pirida- zin-3-il]-1,1-dioxo-1,4-dihidro- lA6-benzo[l ,2,4]tiadiazin-7-il}-N-metil-

metanossulfonamida (0,082 g, 0,157 mmol, 33% de rendimento) na forma de pó de pálido amarelo. 1H NMR (400 MHz, DMSO-(Z6) φ>: 1,02 (9H, s), 1,58 - 1,62 (2H, m), 3,01 (3H, s), 3,31 (3H, s), 4,40 - 4,44 (2H, m), 6,72 - 6,72 (1H, m), 7,04 (1H, d,J= 3,9 Hz), 7,70 - 7,76 (3H, m),7,88 (1H, s), 13,78 (1H, bs). LC- MS (ESI) calculado para C22H27N5O6S2, encontrado 521,14, encontrado 522,6 [M+H+]. Exemplo 6

N-{3-K-hidroxi-1 -(3-metil-butil)-2-oxo-1,2-dihidro-pirrolo[ 1,2- b]piridazin-3-il-]-1,1 -dioxo-1,4-dihidro- lÀ6-benzo[ 1,2,4]tiadiazin-7-il}-N-

metil-metanossulfonamida

<formula>formula see original document page 106</formula>

a) 4-Hidroxi-3-(7-iodo-1, 1-dioxo-1,4-dihidro- lX6-benzo [ 1,2,4]tiadiazin-3-il)-1 -(3-metil-butil)-pirrolo [ 1,2-<á]piridazin-2-ona

<formula>formula see original document page 106</formula>

(7-Iodo-1,1 -dioxo-1,4-dihidro- lÀ6-benzo[ 1,2,4]tiadiazin-3- il-)-ácido acético (Exemplo 4b, 0,2 g, 0,546 mmol) foi dissolvido em NN- dimetilformamida (2,7 mL). O éster alílico do ácido l-(3-metil- butilamino)-lH-pirrol-2-carboxílico (Exemplo lc, 0,129 g, 0,546 mmol) foi adicionado seguido de uma solução 1,0 M de iVW-diciclohexilcarbo- diimida em diclorometano (0,574 mL, 0,574 mmol). A mistura foi agita- da a 25°C durante 2 h. A precipitação de iViV-diciclohexilureia foi visível neste momento. A mistura foi diluída com diclorometano (5 mL) e filtrada sob pressão reduzida. O filtrado foi lavado com solução aquosa .1,0 M de ácido clorídrico (2 χ 10 mL), solução de salmoura aquosa saturada (10 mL), seca sobre sulfato de magnésio, filtrada e concentra- da a vácuo para dar um óleo dourado. O óleo foi dissolvido em etanol (2,7 mL). Uma solução a 21% de etóxido de sódio em etanol (0,448 mL) foi adicionada e a mistura foi agitada a 80°C durante 4 h. Juntou-se mais etóxido de sódio em etanol (0,448 mL) e a mistura foi agitada a .80°C durante 4 h. Após arrefecimento a 25°C, o pH foi ajustado a aproximadamente 6 pela adição de solução aquosa 3,0 M de ácido clorídrico. Foi observada a precipitação imediata. Foi adicionado metanol (3 mL) e a mistura foi vigorosamente agitada. O sólido foi coletado por filtração a vácuo, enxaguado com metanol (3x2 mL) e seco a vácuo durante 16 h para dar o produto desejado, 4-hidroxi-3-(7-iodo-l,l-dioxo-l,4-dihidro-lÀ6-benzo[l,2,4]tiadiazin-3-il)-l-(3-metil-butil)- pirrolo[l,2-d]piridazin-2-ona (0,196 g, 0,372 mmol, 68% de rendimento) na forma de pó branco. LC-MS (ESI) calculado para C19H19IN4O4S, encontrado 526,02, encontrado 527,15 [M+H+].

b) iV-{3-[4-hidroxi-l-(3-metil-butil)-2-oxo-1,2-dihidro-pir- rolo [ 1,2 - b] piridazin- 3 -il] -1,1 -dioxo-1,4-dihidro- lA6-benzo[ 1,2,4]tiadi- azin-7-il}-N-metil-metanossulfonamida

<formula>formula see original document page 107</formula>

.4-Hidroxi-3-(7-iodo-1,1 -dioxo-1,4-dihidro- lÀ6-benzo [1,2,4]tiadiazin-3-il)-l-(3-metil-butil)-pirrolo[ 1,2-b]piridazin-2-ona (Exemplo .6a, 0,188 g, 0,357 mmol), trifosfato de potássio (0,379 g, 1,78 mmol), sarcosina (0,019 g, 0,214 mmol) e iodeto de cobre (!) (0,017 g, 0,089 mmol) foram combinados. Ν, N-dimetilformamida anidra (7 mL) foi adicionada seguida de N-metil-metanossulfonamida (0,39 g, 3,57 mmol). A solução foi desgasificada enquanto agitada sob vácuo e o frasco purgado com nitrogênio. A mistura foi agitada a IOO0C durante 1 h. Foi adicionado mais iodeto de cobre (I) (0,1 g, 0,525 mmol). A mistura continuou sob agitação a 100°C durante 3 h. Após arrefeci- mento, a mistura foi diluída com acetato de etila (200 mL), lavada com solução aquosa 1,0 M de ácido clorídrico (2 x 100 mL), seca sobre sulfato de magnésio, filtrada e concentrada a vácuo a um sólido. Purificação por cromatografia por coluna flash (5% acetato de etila em diclorometano) seguido por trituração de acetato de etila e coleta por filtração a vácuo deram o produto desejado, N-{3-[4-hidroxi-1-(3-metil- butil)-2-oxo-1,2 -dihidro-pirrolo [ 1,2-b]piridazin-3-il]-1,1 -dioxo-1,4-dihi- dro-1λ6-benzo [1,2,4]tiadiazin-7-il} -N-metil-metanossulfonamida (0,057 g, 0,112 mmol, 31% de rendimento) na forma de pó de pálido amarelo. 1H NMR (400 MHz, DMSO-(Cfc) d: 0,97 (6H, d, J= 6,4 Hz), 1,59 (2H, q, J = 7,6 Hz), 1,73 (1H, septet, J = 6,5 Hz), 3,01 (3H, s), 3,31 (3H, s), 4,41 (2H, t,J = 7,9 Hz), 6,70 - 6,72 (1H, m), 7,04 (1H, d, J = 4,5 Hz), 7,69 - 7,76 (2H, m), 7,88 (1H, d, J = 2,3 Hz), 7,91 (1H, s), 13,79 (1H, bs). LC- MS (ESI) calculado para C2IH2SN5O6S2, encontrado 507,12, encontrado 508,4 [M+H+].

Exemplo 7

N-{3-[4-hidroxi-1-(3-metil-butil)-2-oxo-1,2-dihidro-pirrolo[ 1,2- blpiridazin-3-il]-1,1-dioxo- 1,4-dihidro- 1λ6-benzo[1,41tiazin -7-il}-N- metil-metanossulfonamida <formula>formula see original document page 109</formula>

a) N-benzotiazol-6-il-metanossulfonamida

Cloreto de metanossulfonila (4,93 mL, 63,7 mmol) foi adicionado durante 5 minutos a uma solução de benzotiazol-6-ilamina (9,58 g, 63,8 mmol) em piridina (100 mL) a 25°C. A mistura resultante foi agitada a 25°C durante 30 minutos e então foi concentrada a vácuo. O resíduo foi dividido entre uma solução aquosa 1,0 M de ácido clorí- drico (150 mL) e acetato de etila (2 x 150 mL). As camadas orgânicas foram secas sobre sulfato de sódio, filtradas e concentradas a vácuo. A trituração do resíduo com dietil éter deu um sólido que foi coletado por filtração a vácuo e seco a vácuo para produzir o produto desejado, N- benzotiazol-6-il-metanossulfonamida (13,3 g, 58,3 mmol, 91% de rendimento) na forma de um sólido cor de rosa. 1H NMR (400 MHz, DMSO-(de) d: 3,03 (3 H, s), 7,36 (1H, dd, J1 = 2,3 Hz, J2 = 8,6 Hz), 7,94 (1H, d, J = 1,6 Hz), 8,02 (1H, d, J = 9,2 Hz), 9,27 (1H, s), 9,95 (1H, s).

b) N-Benzotiazol-6-il-N-metil-metanossulfonamida

<formula>formula see original document page 109</formula>

Hidreto de sódio (2,56 g de uma dispersão a 60%em óleo mineral, 64,0 mmol) foi adicionado a uma solução de N-benzotiazol-6-il- metanossulfonamida (Exemplo 7a, 13,3 g, 58,2 mmol) em tetrahidrofu- rano a 0°C. Depois de 15 minutos, foi adicionado iodometano (36,2 mL,581 mmol) e a mistura de reação foi aquecida a 25°C, agitada durante 4 h, então foi dividida entre a solução aquosa 1,0 M de ácido clorídrico (300 mL) e acetato de etila (2 χ 250 mL). As camadas orgânicas foram secas sobre sulfato de sódio, filtradas e concentradas a vácuo. A tritu- ração do resíduo com dietil éter deu um sólido que foi coletado por filtração a vácuo e seco a vácuo para produzir o produto desejado, N- benzotiazol-6-il-N-metil-metanossulfonamida (12,1 g, 50 mmol, 86% de

rendimento) na forma de um sólido copr de rosa. 1H NMR (400 MHz, DMSO-(Z6) d: 3,00 (3 H, s), 3,31 (3H, s), 7,57 (1H, dd, Ji = 2,2 Hz, J2 =8,7 Hz), 8,07 (1H, d, J= 8,5 Hz), 8,23 (1H, d, J=1,7 Hz), 9,40 (1H, s).

c) Éster do ácido [7-(metanossulfonil-metil-amino)-4H- benzo[ 1,4]tiazin-3-il-]-metil acético

<formula>formula see original document page 110</formula>

Monohidrato de hidrazina (20,1 mL, 414 mmol) foi adi- cionado a uma solução de N-benzotiazol-6-il-N-metil-metanossulfo- namida (Exemplo 7b, 10,06 g, 41,5 mmol) em etanol (150 mL) a 25°C. A mistura de reação foi aquecida a 50°C durante 13 h e então foi con- centrada a vácuo. O resíduo foi dissolvido em solução aquosa 1,0 M de ácido clorídrico (100 mL) e o pH foi ajustado a 7 pela adição de solução aquosa de ácido clorídrico6,0 Μ. A mistura resultante foi extraída com acetato de etila (2 χ 150 mL) e a camada aquosa foi acidificada a pH 3 pela adição de solução aquosa de ácido clorídrico6,0 M e então neutrali- zada a pH 7 pela adição de bicarbonato de sódio sólido. A mistura foi novamente extraída com acetato de etila (1 χ 150 mL) e todas as cama- das orgânicas foram combinadas, secas sobre sulfato de sódio, filtradas e concentradas a vácuo. O sólido laranja deste modo obtido foi dissol- vido em tetrahidrofurano (150 mL) e foram seqüencialmente adiciona- dos trietilamina (12,3 mL, 88,2 mmol) e éster do ácido 4-cloro-3-oxo- metil butírico (5,10 mL, 44,2 mmol) a 25°C. A mistura de reação foi agitada a 25°C durante 2 h e então foi dividida entre uma solução aquosa de ácido clorídrico 1,0 M (150 mL) e acetato de etila (2 χ 150 mL). As camadas orgânicas foram secas sobre sulfato de sódio, filtra- das e concentradas a vácuo. Purificação do resíduo por cromatograíia por coluna flash (Merck sílica gel 60, 40-63 μπι, 20-» 100% acetato de etila em hexano) deu o produto desejado, éster do ácido [7- (metanossulfonil-metil-amino)-4H-benzo[ 1,4]tiazin-3-il]-metil acético (8,40 g, 25,6 mmol, 64% de rendimento) na forma de um sólido amare- lo. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 2,86 (3H, s), 3,27 (3H, s), 3,43 (2H, s), .3,72 (3H, s), 6,86 (1H, d, J= 8,6 Hz), 7,12 (1H, dd, Ji = 2,3 Hz, J2 = 8,6 Hz), 7,21 (1H, d, J= 2,4 Hz), 10,63 (1H, s).

d) Éster tert-butílico do ácido 7-(metanossulfonil-metil- amino)-3-metoxicarbonil-metil-1,1-dioxo- lH-lA6benzos[ 1,4]tiazina-4-car- boxílico

<formula>formula see original document page 111</formula>

Di-tert-butil carbonato (11,2 g, 51,1 mmol) e 4-dimetil- aminopiridina (0,625 g, 5,11 mmol) foram seqüencialmente adicionados a uma solução de éster metílico do ácido [7-(metanos-sulfonil-metil- amino)-4H-benzo[l,4]tiazin-3-il] acético (Exemplo 7c, 8,40 g, 25,6 mmol) em tetrahidrofurano (100 mL) a 25°C. A mistura de reação foi agitada a 25°C durante 15 h e então foi fracionada entre uma solução aquosa de ácido clorídrico 1,0 M (150 mL) e acetato de etila (2 χ 150 mL). As camadas orgânicas foram secas sobre sulfato de sódio, filtra- das e concentradas a vácuo. O resíduo foi dissolvido em diclorometano (150 mL) a 25°C e foi adicionado ácido m-cloroper-benzoico (17,2 g,77% pureza de máximo, 76,7 mmol). Depois de agitação durante 50 minutos a 25°C, foi adicionado tiossulfato de sódio (15 g, dissolvido em .150 mL água) e a mistura bifásica foi agitada a 25°C durante 30 minu- tos depois despejada num funil de separação contendo uma mistura 1: .1 de acetato de etila e hexano (350 mL). As fases foram separadas e a camada orgânica foi seqüencialmente lavada com solução aquosa de hidróxido de sódio 1,0 M (100 mL), solução aquosa 1,0 M de ácido clorídrico (100 mL) e solução saturada de bicarbonato de sódio aquoso (100 mL). A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e foi concentrada a vácuo. Purificação do resíduo por cromatografia por coluna flash (Merck sílica gel 60, 40-63 μπι, 20-»90% acetato de etila em hexano) deu o produto desejado, éster tert-butil do ácido 7- (metanossulfonil-metil-amino)-3-metoxicarbonilmetil-1, 1-dioxo- IH-A6- benzo [l,4]tiazina-4-carboxílico (4,29 g, 9,32 mmol, 36% de rendimento) na forma de espuma amarela. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) (mistura de vários isômeros/tautômeros) δ: 1,51 (s), 1,54 (s), 1,55 (s), 2,87 (s), 2,88 (s), 3,35 (s), 3,37 (s), 3,71 (s), 3,83 (s), 3,87 (s), 5,88 (s), 6,39 (s), 7,64 -7,68 (m), 7,77 - 7,78 (m), 7,83- 7,85 (m),10,02 (s).

e) Ácido [7-(metanossulfonil-metil-amino)-l, 1-dioxo-1,4- dihidro- lA6-benzo[ 1,4]tiazin-3-il-]-acético.

<formula>formula see original document page 112</formula>

Uma solução aquosa de hidróxido de lítio 2,0 M (7,0 mL,14,0 mmol) foi adicionada a uma solução de éster tert-butil do ácido 7- (metanossulfonil-metil-amino)-3-metoxicarbonilmetil-1,1-dioxo- IH- 1λ6- benzo[l,4]tiazina-4-carboxílico (Exemplo 7d, 1,29 g, 2,80 mmol) em metanol a 25°C. A mistura de reação foi agitada a 25°C durante 5 h e então foi fracionada entre uma solução aquosa de ácido clorídrico 0,5 M (150 mL) e acetato de etila (2 χ 150 mL). As camadas orgânicas foram secas sobre sulfato de sódio, filtradas e concentradas a vácuo. A tritu- ração do resíduo com uma mistura 5: 1 de dietil éter e acetonitrila deu o produto desejado, ácido [7-(metanossulfonil-metil-amino)-l,l-dioxo-l,4- dihidro- lÀ6-benzo[ 1,4]tiazin-3-il]-acético (0,286 g, 0,83 mmol, 30% de rendimento) na forma de um sólido laranja. 1H NMR (400 MHz, DMSO- (Z6) δ: 2,96 (3H, s), 3,26 (3H, s), 3,48 (2H, s), 6,03 (1H, s), 7,29 (1H, d, J = 8,6 Hz), 7,58 (1H, dd, Ji = 2,3 Hz, J2 = 9,5 Hz), 7,79 (1H, d,J = 2,3 Hz), 10,80 (1H, s), 12,79 (1H, s).

f) N-{3-[4-hidroxi-l-(3-metil-butil)-2-oxo-l,2-dihidro-pir- rolo[ 1,2-b] piridazin- 3 - il] -1,1 -dioxo-1,4-dihidro- lA6-benzo[ 1,4]tiazin-7-il}- N-metil- metanossulfonamida

<formula>formula see original document page 113</formula>

O éster alílico do ácido l-(3-metil-butilamino)-lfí-pirrol-2- carboxílico (Exemplo lc, 0,112 g, 0,473 mmol) e o ácido [7-(meta- nossulfonil-metil-amino)-1,1-dioxo-1,4-dihidro- lÀ6-benzo[ 1,4] tiazin-3- il-]-acético (Exemplo 7e, 0,164 g, 0,473 mmol) foram dissolvidos numa mistura 3:1 de diclorometano e N,N-dimetilformamida (4 mL) a 25°C. Uma solução de iViV-diciclohexilcarbodiimida (0,473 mL, 1,0 M em diclorometano, 0,473 mmol) foi adicionada e a mistura de reação foi agitada a 25°C durante 1 h, então filtrada. O filtrado foi concentrado a vácuo e o resíduo foi dissolvido em etanol (4 mL) a 25°C. Uma solução de etóxido de sódio em etanol a 21% (0,368 mL, 1,14 mmol) foi adicio- nada e a mistura de reação foi aquecida a 80°C durante 6 h. Depois de arrefecimento a 25°C, a mistura foi dividida entre uma solução aquosa de ácido clorídrico 0,5 M (150 mL) e acetato de etila (2 χ 150 mL). As camadas orgânicas foram secas sobre sulfato de sódio, filtradas e concentradas a vácuo. Purificação seqüencial do resíduo por cromato- grafia por coluna flash (Merck sílica gel 60, 40-63 μπι, 50—>-100% aceta- to de etila em hexano) e HPLC preparativa [coluna = Luna 5μ C 18(2) .100Á Axia 50 χ 21,2 mm Id; eluente = 0->100% acetonitrila em água (ambos contendo 0,05% de ácido trifluoracético) durante 7,0 minutos, fluxo = 30 mL/min] deu o produto desejado, N-{3-[4-hidroxi-l-(3-metil- butil)-2-oxo-1,2-dihidro-pirrolo[ 1,2-fo]piridazin-3-il]-1,1 -dioxo-1,4-dihi- dro- lÀ6-benzo[ 1,4]tiazin-7-il}-N-metil-metanossulfona-mida (0,060 g, .0,119 mmol, 25% de rendimento) na forma de um sólido amarelo. 1H NMR (400 MHz, DMSOd6) δ: 0,94 (6H, d,J= 6,4 Hz), 1,50 -1,54 (2H, m), 1,64 - 1,70 (1H, m), 2,99 (3H, bs), 3,28 (3H, bs), 4,29 - 4,32 (2H, m), .5,74 (1H, s), 6,12 (1H, bs), 6,49 (1H, bs), 6,90 (1H, bs), 7,30 (1H, bs), .7,60 (1H, bs), 7,82 (1H, bs). LC-MS (ESI) calculado para C22H26N4O6S2 .506,13, encontrado 507,25 [MT-H+].

Exemplo 8

N-{3-ri-(3,3-dimetil-butil)-4-hidroxi-2-oxo-l,2-dihidro-pirrolo[l,2-b]piri- dazin-3-il-]-1,1 -dioxo-1,4-dihidro- lA6-benzo[ 1,4]tiazin-7-il}-metanossul-

fonamida

<formula>formula see original document page 114</formula> a) 2-Amino-5-nitro-benzenotiol <formula>formula see original document page 115</formula>

Uma solução de 6-nitrobenzotiazol (5 g, 27,7 mmol) em etanol (50 mL) foi tratada com monohidrato de hidrazina (19 g, 388 mmol). A mistura de reação foi agitada durante 3 h a 25°C e concen- trada a vácuo. O óleo vermelho resultante foi começado a estudar em acetato de etila, acidificado cuidadosamente com solução aquosa de ácido clorídrico 0,1 M até a solução virar amarelo claro. A mistura de reação foi extraída com acetato de etila, seca sobre sulfato de magnésio, filtrada e concentrada a vácuo. O sólido laranja resultante foi triturado com dietil éter e seco a vácuo para dar o produto desejado, 2-amino-5- nitro-benzenotiol (4,1 g, 23,9 mmol, 86% de rendimento) na forma de um sólido amarelo. 1H NMR (400 MHz, Acetona-de) d 6,43 (bs, 2H),6,82 (d, 1H, J= 8,7 Hz), 7,65 (d, 1H, J= 2,2 Hz), 7,88 (dd, 1H, Ji = 8,9 Hz, J2 = 2,7 Hz). LC-MS (ESI) calculado para C6H6N2O2S [M+H+] 171,01, encontrado 193,20 [M+Na+].

b) Ester etílico do ácido (7-Nitro-4f/-benzo[l,4]tiazin-3-il- )-acético <formula>formula see original document page 115</formula>

Uma solução de 2-amino-5-nitro-benzenotiol (Exemplo 8a, 4,1 g, 23,9 mmol) em tetrahidrofurano (60 mL) foi tratada com trietilamina (4,8 g, 47,8 mmol) e etil cloroacetoacetato (4,3 g, 26,3 mmol). A mistura de reação foi agitada a 25°C durante 12 h, concen- trada a vácuo, começada a estudar em acetato de etila e aquecida a 80°C durante 3 h. A mistura de reação foi deixada arrefecer a 25°C, lavada com solução de salmoura, seca sobre sulfato de sódio e concen- trada a vácuo. O sólido marrom resultante foi triturado com dietil éter para dar o produto desejado, éster etílico do ácido (7-nitro-4H- benzo[l,4]tiazin-3-il)-acético (5,8 g, 20,7 mmol, 87% de rendimento) na forma de um sólido amarelo. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1,32 (t, 3H, J =7,1 Hz), 3,49 (s, 2H), 4,21 (q, 2H, J = 7,0 Hz), 4,89 (s, 1H), 6,91 (d, 1H, J = 8,7 Hz), 8,00 (dd, 1H, Ji = 9,5 Hz, J2 = 2,3 Hz), 8,12 (d, 1H, J= 3,1 Hz), 10,95 (bs, 1H). LC-MS (ESI) calculado para Ci2Hi2N2O4S [M+H+] 281,05, encontrado 281,23 [M+H+].

c) Éster etílico do ácido (7-amino-4H-benzo[l,4]tiazin-3-il-)-acético

<formula>formula see original document page 116</formula>

Uma solução de éster etílico do ácido (7-nitro-4H- benzo[ 1,4]tiazin-3-il-)-acético (Exemplo 8b, 5,8 g, 20,7 mmol) em etanol (90 mL) foi tratada com cloreto de estanho (II) e solução de ácido clorí- drico aquoso 1,0 M (3 mL). A mistura de reação foi aquecida a 100°C durante 3 h. A suspensão foi deixada arrefecer e concentrada. O material bruto foi suspenso em acetato de etila (90 mL) e tratado com solução aquosa de hidróxido de sódio 6,0 M (90 mL). O precipitado resultado foi filtrado. O bolo de filtro foi inteiramente lavado com aceta- to de etila, o filtrado foi lavado com solução de salmoura e concentrado a vácuo. O óleo bruto foi purificado por cromatografia flash (Merck sílica gel 60, 40-63 μπι, acetato de etila/hexano) para dar o produto desejado, éster etílico do ácido (7-amino-4H-benzo[l,4]tiazin-3-il-)- acético (2,38 g, 9,51 mmol, 46% de rendimento) na forma de um sólido branco. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1,21 (t, 3 H, J = 7,1 Hz), 3,30 (s,2H), 3,43 (bs, 2H), 4,08 (q, 2H, J = 7,1 Hz), 4,52 (s,1H), 6,39 (dd, 1H, J1 = 8,3 Hz, J2 = 2,7 Hz), 6,46 (d, 1H, J = 2,3 Hz), 6,62 (d, 1H, J = 7,6 Hz),10,38 (bs, 1H). LC-MS (ESI) calculado para C12H14N2O2S [M+H+] 251,08, encontrado 251,23 [M+H+],

d) Éster etílico do ácido (7-metanossulfonilamino-4H- benzo[ 1,4]tiazin-3-il-)-acético

<formula>formula see original document page 117</formula>

Uma solução de éster etílico do ácido (7-amino-4H- benzo[l,4]tiazin-3-il-)-acético (Exemplo 8c, 2,38 g, 9,51 mmol) em diclorometano (80 mL) foi resfriada a 0°C e tratada com trietilamina (3,1 g, 30,4 mmol) seguida da adição gota a gota de cloreto de metanossul- fonila (1,37 g, 9,51 mmol). A mistura de reação foi agitada a 0°C duran- te 0,5 h e deixada aquecer a 25°C. A mistura de reação foi concentrada a vácuo e purificada por cromatografia flash (Merck sílica gel 60, 40-63 μπι, acetato de etila/hexano) para dar o produto desejado, éster etílico do ácido (7-metanossulfonilamino-4fí-benzo[l,4]tiazin-3-il)- acético (2,2 g, 6,7 mmol, 71% de rendimento) na forma de um sólido bronzeado leve. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1,31 (t, 3H, J = 7,0 Hz), 3,00 (s, 3H), 3,43 (s, 2H), 4,19 (quarteto, 2H, J = 7,1 Hz), 4,73 (s, 1H), 6,28 (s, 1H), 6,85 (d, 1H, J= 8,5 Hz), 6,99 (dd, 1H, Ji = 8,5 Hz, J2 = 2,4 Hz), 7,12 (d, 1H, J = 2,3 Hz), 10,64 (bs, 1H). LC-MS (ESI) calculado para C13H16N2O4S [M+H+] 329,06, encontrado 329,10 [M+H+].

e) Éster etílico do ácido [7-(metanossulfonil-íerí-butiloxi- carbonil-amino)-4-íerí-butiloxicarbonil-4H-benzo[l,4]tiazin-3-il-]-acético

<formula>formula see original document page 118</formula>

A mistura de reação foi agitada a 25°C sob atmosfera de nitrogênio durante 3 h. O solvente foi removido a vácuo e o resíduo foi dissolvido em diclorometano. A solução resultante foi lavada com solução aquosa de ácido clorídrico 1,0 M, a camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e concentrada a vácuo. O óleo bruto foi purificado por cromatografia flash (Merck sílica gel 60, 40-63 μπι, acetato de etila/hexano) para dar o produto desejado, éster etílico do ácido [7 - (metanossulfonil- íerí-butiloxicarbonil-amino) -4 - íerf-butiloxicar- bonil-4H-benzo[ 1,4]tiazin-3-il-]-acético (1,59 g, 3,01 mmol, 45% de rendimento) na forma de resina incolor. 1H NMR (400 MHz, CDCI3) δ 1,16 (t, 3H, J= 7,0 Hz), 1,48 (s, 9H), 1,52 (s, 9H), 3,42 (s, 3H), 3,67 (bs, 2H), 4,07 (q, 2H, J = 7,3 Hz), 6,26 (s, 1H), 7,09 (, 1H, Ji = 0,0 Hz, J2 = 0,0 Hz), 7,08 - 7,11 (m, 2H), 7,42 (d, 1H, J = 7,8 Hz). LC-MS (ESI) calculado para C23H32N2O8S2 [M+H+] 529,16, encontrado 429,48 [M- BoC].

f) Éster etílico do ácido [7-(Metanossulfonil-tert-butiloxi- carbonil-amino)-4tert-fautiloxicarbonil-1,1-dioxo-1,4-dihidro- lA6-benzo [l,4]tiazin-3-il]-acético <formula>formula see original document page 119</formula>

Uma solução de éster etílico do ácido [7-(metanossulfonil- tert-butiloxicarbonil-amino)-4 tert-butiloxicarbonil-4H-benzo[ 1,4]tiazin-3-il-] -acético (Exemplo 8e, 1,59 g, 3,01 mmol) em diclorometano (50 mL) foi tratada com ácido 3- cloroperoxibenzoico (2,23 g, 12,9 mmol). A mistura de reação foi agitada durante 12 h a 25°C. Foi adicionada uma solução aquosa de tiossulfato de sódio (2,0 g, 12,9 mmol) e a reação foi agitada durante mais 0,5 h. A camada orgânica foi separada, lavada seqüencialmente com solução aquosa de hidróxido de sódio 1,0 M, solução aquosa de ácido clorídrico 1,0 M, solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio e salmoura, seca sobre sulfato de sódio, filtrada e concentrada a vácuo. O óleo bruto foi purificado por cromatografia flash (Merck sílica gel 60, 40-63 μπι, acetato de etila/hexano) para dar o produto desejado, éster etílico do ácido [7-(metanossulfonil-terí- butiloxicarbonil-amino)-4-terí-butiloxicarbonil-1,1-dioxo-1,4-dihidro-lλˇ6-benzo [ 1,4]tiazin-3-il-]-acético (1,1 g, 1,96 mmol, 64% de rendimen- to) na forma de um sólido branco. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1,23 (t,3H, J= 7,0 Hz), 1,50 (s, 9H), 1,56 (s, 9H), 3,46 (s, 3H), 3,81 (s, 2H), 4,15 (q, 2H, J= 7,4 Hz), 6,40 (s, 1H), 7,45 (dd, 1H, Ji = 9,1 Hz, J2 = 2,7 Hz),7,72 (d, 1H, J= 2,3 Hz), 7,91 (d, 1H, J= 8,6 Hz). LC-MS (ESI) calculado para C2SH32N2O8S2 [M+H+] 560,16, encontrado 361,18 [M-(2xBoc)+].

g) Éster etílico do ácido (7-metanossulfonilamino-l,l-di- oxo-1,4-dihidro- lλˇ6-benzo [ 1,4]tiazin-3-il)-acético <formula>formula see original document page 120</formula>

Uma solução de éster etílico do ácido [7-(metanossulfonil- íerí-butiloxicarbonil-amino)-4-íerí-butiloxicarbonil-1,1 -dioxo-1,4-dihi- dro- lλ6-benzo[ 1,4]tiazin-3-il]-acético (Exemplo 8f, 0,30 g, 0,54 mmol) em diclorometano/ácido trifluoracético 1: 1 foi agitada a 25°C durante 2 h. A mistura de reação foi concentrada a vácuo e o resíduo foi dissolvi- do em acetato de etila. A solução foi lavada com solução saturada de bicarbonato de sódio e solução de salmoura aquosa. A camada orgâni- ca foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e concentrada a vácuo para dar o produto desejado, éster etílico do ácido (7-metanossulfonilamino- 1,1-dioxo-l,4-dihidro-lA6-benzo [l,4]tiazin-3-il)- acético (0,17 g, 0,47 mmol, 86% de rendimento) na forma de um sólido amarelo. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1,32 (t, 3H, J = 6,9 Hz), 3,03 (s, 3H), 4,02 (s, 2H), 4,21 (q, 2H, J = 7,0 Hz), 5,02 (s, 1H), 6,96 (s, 1H), 7,02 (d, 1H, J = 8,4 Hz), 7,53 (dd, 1H, Ji = 8,7 Hz, J2 = 2,4 Hz), 7,65 (d, 1H, J = 2,2 Hz), 10,73 (s, 1H). LC-MS (ESI) calculado para Ci3Hi6N2O6S2 [M+H+] 361,04, encontrado 361,18 [M+H+].

h) Ácido (7-metanossulfonilamino-1,1 -dioxo-1,4-dihidro- lλ6-benzo[ 1,4]tiazin-3-il)-acético

<formula>formula see original document page 120</formula>

Uma solução de éster etílico do ácido (7-metanossulfonil- amino-1,1 -dioxo-1,4-dihidro- lA6-benzo[ 1,4]tiazin-3-il-)-acético (Exem- plo 8g, 0,245 g, 0,680 mmol) em metanol (15 mL) foi resfriada a 0°C em banho de gelo e água e tratada com solução aquosa de hidróxido de lítio 2,0 M (1,7 mL, 3,40 mmol). A mistura de reação foi deixada aquecer a 25°C e agitada durante 1 h. A reação foi vazada em solução aquosa de ácido clorídrico 0,5 M (50 mL) em gelo, extraída com acetato de etila (3 χ 50 mL), seca sobre sulfato de magnésio, filtrada e concentrada a vácuo para dar um sólido laranja. O bruto sólido foi triturado com dietil éter para dar o produto desejado, ácido (7-metanossulfonilamino-l,l-dioxo-1,4-dihidro-lA6-benzo [l,4]tiazin-3-il)- acético (0,175 g, 0,526 mmol,77% de rendimento) na forma de um sólido laranja claro. LC-MS (ESI) calculado para CnHi2N2O6S2 332,4, encontrado 333,3 [M+H+].

i) N-{3-[l-(3,3-Dimetil-butil)-4-hidroxi-2-oxo-l,2 -dihidro- pirrolo [ 1,2-b]piridazin-3-il]-1,1-dioxo-1,4-dihidro- lA6-benzo [ 1,4]tiazin-7-il}-meta-nossulfonamida

iVTV-Diciclohexilcarbodiimida (0,476 mL de uma solução 1,0 M em diclorometano, 0,476 mmol) foi adicionada a uma solução de ácido (7-metanossulfonilamino-1,1-dioxo-1,4-dihidro- lA6-benzo[ 1,4]tia- zin-3-il-)-acético (Exemplo 8h, 0,190 g, 0,572 mmol) e éster alílico do ácido l-(3,3-dimetil-butilamino)-lH-pirrol-2-carboxílico (Exemplo 4c,0,119 g, 0,475 mmol) numa mistura de diclorometano e NN- dimetilfbrmamida 3:1 (6 mL) a 25°C. A mistura de reação foi agitada a 25°C durante 1 h então foi filtrada. O filtrado foi concentrado a vácuo e o resíduo foi dissolvido em etanol (12 mL) a 25°C. Foi adicionada uma solução de etóxido de sódio em etanol a 21% (0,23 mL, 0,71 mmol) e a mistura de reação foi aquecida a 80°C durante 5 h. Depois de arrefeci- mento a 25°C, a mistura foi dividida entre uma solução aquosa de ácido clorídrico 1,0 M (150 mL) e acetato de etila (2 χ 150 mL). As camadas orgânicas foram secas sobre sulfato de sódio, filtradas e concentradas a vácuo. Purificação do resíduo por cromatografia por coluna flash (Merck sílica gel 60, 40-63 μπι, 40-> 100% acetato de etila em hexano) deu um sólido que foi triturado com dietil éter para dar o produto desejado, N-{3-[l-(3,3-dimetil-butil)-4-hidroxi-2-oxo-1,2-dihidro-pirrolo [1,2-b]piridazin-3-il-]-1,1 -dioxo-1,4-dihidro- lA6-benzo[ 1,4]tiazin-7-il}-me -tanossulfonamida (0,101 g, 0,20 mmol, 42% de rendimento) na forma de um sólido amarelo. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 1,07 (9H, s), 1,65 - .1,72 (2H, m), 3,09 (3H, s), 4,25 - 4,29 (2H, m), 5,54 (2H, s), 6,43- 6,45 (1H, m), 7,01- 7,03 (1H, m), 7,08 - 7,09 (1H, m), 7,30 (1H, d,J = 8,5 Hz), 7,39 (1H, bs), 7,61 (1H, dd, Ji = 2,3 Hz, J2 = 8,6 Hz), 7,73 (1H, d, J = 2,4 Hz). LC-MS (ESI) calculado para C22H26N4O6S2 506,13, encontrado .507,27 [M+H+],

Exemplo 9

N-{3-[l-(4-fluor-benzil)-4-hidroxi-2-oxo-1,2-dihidro-pirrolo[ 1,2-b]pirida- zin-3-il]-1,1 -dioxo-L4-dihidro- lA6-benzo[ 1,2,4]tiadiazin-7-il}-

metanossulfonamida

<formula>formula see original document page 122</formula>

a) Éster alílico do ácido l-(4-fluor-benzilamino)-lH-pirrol- .2-carboxílico <formula>formula see original document page 123</formula>

Foi adicionado cianoborohidreto de sódio (2,29 g, 36,4 mmol) a uma solução de éster alílico do ácido l-amino-lH-pirrol-2- carboxílico (Exemplo lb, 3,03 g, 18,2 mmol), 4-fluorbenzaldeído (1,96 mL, 18,3 mmol) e ácido acético (6 mL), em metanol (120 mL) a 25°C. A mistura de reação foi agitadas a 25°C durante 18 h, e então foi concen- trada a vácuo a um volume de cerca de 30 mL. O líquido restante foi dividido entre uma solução aquosa de bicarbonato de sódio semi- saturada (150 mL) e uma mistura 1:1 de acetato de etila e hexano (2 × 200 mL). As camadas orgânicas foram secas sobre sulfato de sódio, filtradas e concentradas a vácuo. Purificação do resíduo por cromato- grafia por coluna flash (Merck sílica gel 60, 40-63 μηι, 0—>40% de acetato de etila em hexano) deu o produto desejado, éster alílico do ácido l-(4-fluor-benzilamino)-lH-pirrol-2-carboxílico (1,87 g, 6,8 mmol,37% de rendimento) na forma de um líquido claro. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 4,08 (2H, d, J= 5,4 Hz), 4,75 - 4,77 (1H, m), 5,27 - 5,30 (1H, m), 5,37 - 5,41 (1H, m), 5,95 - 5,97 (1H, m), 5,98 - 6,05 (1H, m), 6,58 - 6,61 (1H, m), 6,75 - 6,76 (1H, m), 6,89 - 6,91 (1H, m), 6,97 - 7,01 (2H, m), 7,22 - 7,25 (2H, m).

b) l-(4-Fluor-benzil)-4-hidroxi-3-(7-iodo-1,1 -dioxo-1,4- dihidro-lA6-benzo [ 1,2,4]tiadiazin-3-il)-pirrolo [ 1,2-b]piridazin-2-ona <formula>formula see original document page 124</formula>

NN-diciclohexilcarbodiimida (4,33 mL de uma solução 1,0 M em diclorometano, 4,33 mmol) foi adicionada a uma solução de ácido (7-iodo-1,1 -dioxo-1,4-dihidro- lλ6-benzo[ 1,2,4]tiadiazin-3-il-)-acético (Exemplo 4b, 1,58 g, 4,32 mmol) e éster alílico do ácido 1-(4-fluor- benzilamino)-1H-pirrol-2-carboxílico (Exemplo 9a, 1,08 g, 3,94 mmol) numa mistura 4:1 de diclorometano e N,N-dimetilformamida (25 mL) a 25°C. A mistura de reação foi agitada a 25°C durante 2,5 h depois foi filtrada. O filtrado foi concentrado a vácuo e o resíduo foi dissolvido em etanol (20 mL) a 25°C. Foi adicionada uma solução a 21% de etóxido de sódio em etanol (8,0 mL, 24,6 mmol) e a mistura de reação foi aquecida a 80°C durante 8 h. Depois de arrefecimento a 25°C, a mistura foi dividida entre uma solução aquosa de ácido clorídrico 1,0 M (150 mL) e acetato de etila (2 x 150 mL). As camadas orgânicas foram secas sobre sulfato de sódio, filtradas e concentradas a vácuo para dar um sólido escuro. A trituração deste material com metanol deu um sólido cinzen- to que foi coletado por filtração a vácuo para dar o produto desejado, 1- (4-fluor-benzil)-4-hidroxi-3-(7-iodo-1,1-dioxo-1,4-dihidro- 1λ6-benzo [1,2, 4]tiadiazin-3-il-)-pirrolo[1,2-b]piridazin-2-ona (1,42 g, 2,52 mmol, 64% de rendimento). 1H NMR (400 MHz, DMSO-cfe) δ: 5,64 (2H, s), 6,58 - 6,60 (1H, m), 7,01 - 7,02 (1H, m), 7,14 - 7,18 (2H, m), 7,42 - 7,46 (2H, m), 7,70 - 7,70 (1H, m), 8,02 - 8,04 (1H, m), 8,12 - 8,12 (1H, m), 13,70 (1H, s).

c) N-{3-[1-(4-fluor-benzil)-4-hidroxi-2-oxo-1,2-dihidro-pir- rolo[1,2-b]piridazin-3-il-]-1,1-dioxo-1,4-dihidro- lÀ6-benzo[ 1,2,4]tiadiazin -7-il}-metanossulfonamida

<formula>formula see original document page 125</formula>

.1 -(4-fluor-benzil)-4-hidroxi-3-(7-iodo-1,1 -dioxo-1,4-dihi- dro-lA6-benzo[l,2,4]tiadiazin-3-il-)-pirrolo[l,2-d]pirida2;in-2-ona (Exem- pio 9b, 0,257 g, 0,455 mmol), fosfato de potássio (tribásico) (0,483 g,2,28 mmol), iodeto de cobre (I) (0,022 g, 0,11 mmol), sarcosina (0,024 g,0,273 mmol e metanossulfonamida (0,433 g, 4,55 mmol) foram dissol- vidos em N,N-dimetilformamida (9 mL) a 25°C. A mistura foi aquecida a .1OO°C durante 6 h, então foi deixada esfriar a 25°C, diluída com acetato de etila (10 mL) e filtrada através de Celite. O filtrado foi concentrado a vácuo e o resíduo foi purificado por cromatografia por coluna flash (Merck sílica gel 60, 40-63 μπι, 0—»10% metanol em diclorometano) para dar um sólido amarelo. A trituração seqüencial deste material com metanol e dietil éter deu o produto desejado, N-{3-[l-(4-fluor-benzil)-4- hidroxi-2-oxo-1,2-dihidro-pirrolo[ 1,2-b]piridazin-3-il-]-1,1 -dioxo-1,4-di- hidro-lÀ6-benzo[l,2,4]tiadiazin-7-yl}-metanossulfonami-da (0,113 g,0,21 mmol, 47% de rendimento) na forma de um sólido amarelo. 1H NMR (400 MHz, DMSO-(Cfe) δ: 3,08 (3H, s), 5,65 (2H, s), 6,59 - 6,61 (1H, m), 7,01- 7,02 (1H, m), 7,14 - 7,18 (2H, m), 7,42 - 7,46 (2H, m), 7,54 (1H, dd, Ji = 2,3 Hz, J2 = 8,6 Hz), 7,62 (1H, d,J= 2,5 Hz), 7,66 (1H, d, J = 8,9 Hz), 7,71 (1H, s), 10,21 (1H, s), 13,66 (1H, s). LC-MS (ESI) calcu- lado para C22Hi8FN5O6S2 531,07, encontrado 532,10 [M+H+].

Exemplo 10 N-{3-l-(4-fluor-benzil)-4-hidroxi-2-oxo-l,2-dihidro-pirrolo[l,2-b]pirida- zin-3-il-]-1,1 -dioxo-1,4-dihidro- lÀ6-benzo[ 1,2,4]tiadiazin-7-il-N-metil- metanossulfonamida

<formula>formula see original document page 126</formula> l-(4-fluor-benzil)-4-hidroxi-3-(7-iodo-1,1 -dioxo-1,4-dihi- dro- lÀ6-benzo[ 1,2,4]tiadiazin-3-il-)-pirrolo[ 1,2-b]piridazin-2-ona (Exem- plo 9b, 0,269 g, 0,477 mmol), fosfato de potássio (tribásico) (0,506 g, .2,38 mmol), iodeto de cobre (I) (0,023 g, 0,119 mmol), sarcosina (0,026 g, 0,290 mmol e N-metil-metanossulfonamida (0,520 g, 4,77 mmol) foram dissolvidos em TVTV-dimetilformamida (9 mL) a 25°C. A mistura foi aquecida a IOOºC durante 6 h, então foi deixada arrefecer a 25°C, diluída com acetato de etila (10 mL) e filtrada através de Celite. O filtrado foi concentrado a vácuo e o resíduo foi purificado por cromato- grafia por coluna flash (Merck sílica gel 60, 40-63 μm, 0—>10% metanol em diclorometano) para dar um sólido amarelo. A trituração seqüencial deste material com metanol e dietil éter deu o produto desejado, N-{3-[l- (4-fluor-benzil)-4-hidroxi-2-oxo-1,2-dihidro-pirrolo [ 1,2 -b]piridazin-3-il]- .1,1 -dioxo-1,4-dihidro- lÀ6-benzo[ 1,2,4]tiadiazin-7-il}-N-metil- metanossulfonamida (0,169 g, 0,31 mmol, 65% de rendimento) na forma de um sólido amarelo. 1H NMR (400 MHz, DMSO-(de) δ: 3,02 (3 Η, s), 3,31 (3H, s), 5,65 (2H, s), 6,59 - 6,61 (1H, m), 7,01 - 7,03 (1H, m), .7,14 - 7,19 (2H, m), 7,42 - 7,46 (2H, m), 7,68 - 7,71 (2H, m), 7,75 (1H, dd, J1 = 2,4 Hz, J2 = 8,7 Hz), 7,90 (1H, d, J= 2,2 Hz), 13,72 (1H, s). LC- MS (ESI) calculado para C23H20FN5O6S2 545,08, encontrado 546,15 [M+H+]. Exemplo 11

.3-[7-(l, 1 -dioxo-tetrahidro- lÀ6-tiofen-2-il)-1,1 -dioxo-1,4-dihidro- 1λ6- benzo [l,2,4]tiadiazin-3-il]-l-(4-fluor-benzil)-4-hidroxi-pirrolo[l,2-

b]piridazin-2-ona 10,7 mmol) foi adicionada durante 5 minutos a uma solução de 2,3- dihidro-tiofeno-1,1 -dióxido (1,21 g, 10,2 mmol, preparado como descrito em J. Organomet. Chem., 665, 167 (2003)) em tetrahidrofurano (60 mL) a -78°C. A mistura de reação foi agitada a -78°C durante 30 minutos, depois, foi adicionado cloreto tributilestanho (3,04 mL, 11,2 mmol) durante 5 minutos. Depois de agitação a -78°C durante 45 minutos, a mistura foi aquecida a 25°C e agitada por mais 45 minutos depois, foi concentrada a vácuo. O resíduo foi diluído com clorofórmio (50 mL) e filtrado. O filtrado foi dividio entre a água (100 mL) e uma mistura .l:lde acetato de etila e hexano (1 χ 200 mL). A camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e foi concentrada a vácuo. Purifica- ção do resíduo por cromatografia por coluna flash (Merck sílica gel 60, .40-63 μπι, 20—>30% acetato de etila em hexano) deu o produto deseja- do, tributil-( 1,1 -dioxo-4,5-dihidro-1H- lÀ6-tiofeno-2-il)-estanano (1,13 g, .2,77 mmol, 27% de rendimento) na forma de um sólido amarelo. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 0,90 - 0,95 (9 Η, m), 1,15 - 1,21 (6H, m), 1,29 - 1,40 (8H, m), 1,50 -1,67 (6H, m), 2,96 - 3,00 (1H, m), 3,11- 3,14 (1H, m), 6,57 (1H, t, J= 3,1 Hz).

b) 3-[7-( 1, l-dioxo-4,5-dihidro- IH- lÂ6-tiofen-2-il)-1,1 -dio- xo-1,4-dihidro-lA6-benzo[ 1,2,4]tiadiazin-3-il-]-l-(4-fluor-benzil)-4-hidroxi -pirrolo[l,2-b] piridazin-2-ona

<formula>formula see original document page 128</formula>

.l-(4-fluor-benzil)-4-hidroxi-3-(7-iodo-l,l-dioxo-l,4-dihi- dro-lÀ6-benzo[ 1,2,4]tiadiazin-3-il-)-pirrolo[ 1,2-b]piridazin-2-ona (Exem- plo 9b, 0,207 g, 0,371 mmol), tributil-(l,l-dioxo-4,5-dihidro-iH-lÀ6- tiofen-2-il)-estanano (Exemplo 11a, 0,181 g, 0,442 mmol) e tetra- kis(trifenilfosfina)paládio(0) (0,025 g, 0,020 mmol) foram dissolvidos em iViV-dimetilformamida (8 mL) a 25°C. A mistura foi aquecida a 90°C durante 24 h, então foi deixada arrefecer a 25°C e filtrada através de Celite. O filtrado foi concentrado a vácuo e o resíduo foi purificado por cromatografia por coluna flash (Merck sílica gel 60, 40-63 μπι, 0-»7% metanol em diclorometano) para dar um sólido marrom. Este material foi re-cromatografado (Merck sílica gel 60, 40-63 μπι, 40—>100% acetato de etila em hexano, seguido de 100% acetato de etila, seguido de 0—>7% metanol em diclorometano) para dar o produto desejado, 3-[7-(l,l- dioxo-4,5-dihidro-IH-lA6-tiofen-2-il)-1,1-dioxo-1,4-dihidro-lA6-benzo [1, 2,4]tiadiazin-3-il-]-l-(4-fluor-benzil)-4-hidroxi-pirro-lo[l,2-b]piridazin-2- ona (0,100 g, 0,180 mmol, 48,6% de rendimento). LC-MS (ESI) calcula- do para C2SHi9FN4O6S2 554,07, encontrado 555,00 [M+H+].

c) 3-[7-(l,l-Dioxo-tetrahidro-lÂ6-tiofen-2-il)-l, 1-dioxo-1,4- dihidro-lÂ6-benzo[l,2,4]tiadiazin-3-il-]-l-(4-fluor-benzil)-4-hidroxi- pirrolo [1,2 -b] piri-dazin-2 -ona

<formula>formula see original document page 129</formula>

3-[7-( 1, l-Dioxo-4,5-dihidro- IH- lA6-tiofen-2-il)-1,1-dioxo- 1,4-dihidro-lÀ6-benzo[ 1,2,4]tiadiazin-3-il-]-l-(4-fluor-benzil)-4-hidroxi- pirrolo[l,2-b]piridazin-2-ona (Exemplo 11b, 0,100 g, 0,180 mmol) foi dissolvido em N,N-dimetilformamida (15 mL) a 25°C. Foi adicionado paládio em carbono (5%, 0,250 g) e a atmosfera no frasco de reação substituída por hidrogênio a partir de um balão. Depois de agitação durante 1 h sob um balão de hidrogênio, a mistura foi filtrada através de Celite. O filtrado foi concentrado a vácuo e o resíduo foi purificado por cromatografia por coluna flash (Merck sílica gel 60, 40-63 μηι, 0—>3% metanol em diclorometano) para dar um sólido amarelo. A trituração deste material com dietil éter deu o produto desejado, 3-[7- (1,1 -dioxo-tetrahidro- lÀ6-tiofen-2-il)-1,1 -dioxo-1,4-dihidro- lÀ6-benzo [ 1, 2,4] tiadiazin-3-il-]-l-(4-fluor-benzil)-4-hidroxi-pirrolo[ 1,2-b]piridazin-2- ona (0,028 g, 0,050 mmol, 28% de rendimento). 1H NMR (400 MHz, DMSO-(Cfe) δ: 2,08 - 2,18 (1H, m), 2,23 - 2,29 (1H, m), 2,32 - 2,43 (1H, m), 3,20 - 3,28 (1Η, m), 3,31 - 3,37 (1Η, m), 4,56 - 4,61 (1Η, m), 5,65 (2Η, s), 6,60 (2Η, d, J= 7,0 Hz), 6,59 - 6,61 (1H, m), 7,02 - 7,03 (1H, m),7,14 - 7,18 (2H, m), 7,42 - 7,46 (1H, m), 7,67 7,75 (2H, m), 7,87 (1H,bs), 13,73 (1H, s). LC-MS (ESI) calculado para C2SH2IFN4O6S2 556,09, encontrado 557,15 [M+H+].

<formula>formula see original document page 130</formula>

.3-( 1,1 -Dioxo-1,4-dihidro- lÀ6-benzo[ 1,2,4]tiadiazin-3-il-l-(4-íluor-benzil)- (4-fluor-benzil)-4-hidroxi-pirrolo[l,2-b]piridazin-2-ona foi obtido como subproduto a partir da reação descrita no Exemplo 11b. A cromatogra- fia em coluna como descrita acima de deu o produto desejado, 3-(l,l- dioxo-1,4-dihidro- lÀ6-benzo[ 1,2,4]tiadiazin-3-il)-l-(4-fluor-benzil)-4-hi- droxi-pirrolo[l,2-b]piridazin-2-ona (0,020 g, 0,046 mmol, 8,1% de rendimento) na forma de um sólido amarelo. 1H NMR (400 MHz, DM- SO-(cfe) d: 5,65 (2H, s), 6,59 (1H, bs), 7,00 - 7,01 (1H, m), 7,14 - 7,18 (2H, m), 7,42 - 7,46 (2H, m), 7,48 - 7,52 (1H, m), 7,60 - 7,62 (1H, m),7,69 - 7,75 (2H, m), 7,87 - 7,89 (1H, m), 13,69 (1H, s). LC-MS (ESI) calculado para C2IHi5FN4O4S2 438,08, encontrado 439,20 [M+H+].

Exemplo 12

.3-(l, I-Dioxo-1,4-dihidro-lA6-benzo[l,2,4]tiadiazin-3-il-)-l .4 -hidroxi-pirrolo[ 1,2- b]piridazin-2 -ona

<formula>formula see original document page 130</formula>

Exemplo 13

Ácido ciclopropanossulfônico {3-[4-hidroxi-l-(3-metil-butil)-2-oxo-1,2- dihidro-pirrolo[ 1,2-b]piridazin-3-il]-1,1 -dioxo-1,4-dihidro- lA6-benzo [l,2,4]tiadiazin-7 il}-amida <formula>formula see original document page 131</formula>

a) 4-Hidroxi-3-(7-iodo-l,l-dioxo-l,4-dihidro-lÀ6-benzo [1,2,4] tiadiazin-3-il)-l-(3-metil-butil)-pirrolo[ 1,2-d]piridazin-2-ona <formula>formula see original document page 131</formula>

O éster etílico do ácido 4-Hidroxi-l-(3-metil-butil)-2-oxo-l,2- dihidro-pirrolo[l,2-d]piridazina-3-carboxílico (Exemplo lf, 0,218 g,0,75 mmol) foi dissolvido em piridina (1,5 mL) e foi adicionado 2-amino-5-iodo- benzenossulfonamida (Exemplo 4a, 0,222 g, 0,75 mmol). A mistura de reação foi aquecida a 120°C durante 16 h e então foi adicio- nado l,8-diazabiciclo[5,4,0]undec-7-eno (0,12 mL, 0,78 mmol) e aque- cido durante outras 4 h. A piridina foi removida a vácuo para dar o produto desejado no estado bruto. A purificação por cromatografia por coluna flash (Merck sílica gel 60, 40-63 μιη, 5% -10% metanol em diclorometano) deu o produto desejado, 4-hidroxi-3-(7-iodo-l,l-dioxo-1,4- dihidro- lλˇ6-benzo [ 1,2,4]tiadiazin-3-il)-1 -(3-metil-butil)-pirrolo[ 1,2- b]piridazin-2-ona (0,110 g, 0,209 mmol, 28% de rendimento) na forma de um sólido branco. LC-MS (ESI) calculado para Ci9Hi9IN4O4S, encon- trado 526,02, encontrado 527,20 [M+H+].

b) ácido ciclopropanossulfônico, {3-[4-hidroxi-l-(3-metil- butil)-2-oxo-1,2-dihidro-pirrolo[l,2-b]piridazin-3-il]-1,1-dioxo-1,4-dihi- dro-lA6-benzo[ 1,2,4] tiadiazin-7-il}-amida

<formula>formula see original document page 132</formula>

Foram combinados 4-hidroxi-3-(7-iodo-l, 1-dioxo-1,4-di- hidro-lÀ6-benzo[ 1,2, 4] tiadiazin-3-il)-l-(3-metil-butil)-pirrolo[ 1,2-b]piri- dazin-2-ona (Exemplo 13a, 0,105 g, 0,199 mmol), trifosfato de potássio (0,127 g, 0,598 mmol), sarcosina (0,011 g, 0,119 mmol) e iodeto de cobre (I) (0,015 g, 0,080 mmol). Adicionou-se N,N- dimetilformamida anidra (7 mL) seguida de amida do ácido ciclopropanossulfônico (0,12 g, 1 mmol). A solução foi desgasificada enquanto em agitação sob vácuo e o frasco purgado com nitrogênio. A mistura foi agitada a 100°C durante 16 h. Após arrefecimento, a mistura foi diluída com acetato de etila (200 mL), lavada com solução aquosa 1,0 M de ácido clorídrico (2 χ 100 mL), seca sobre sulfato de magnésio, filtrada e concentrada a vácuo num sólido. A purificação por HPLC (Coluna Luna 5u C18 (2) tamanho de 100Â 50 χ 21,2 mm, 5 micra, 40%-95% 0,05% ácido trifluoracético em acetonitrila/ácido trifluoracético a 0,05% em água) deu o produto desejado, ácido ciclopropanossulfônico {3-[4-hidroxi-l-(3-metil-butil)-2- oxo-1,2-dihidro-pirrolo[ 1,2-b]piridazin-3-il-]-1,1 -dioxo-1,4-dihidro- Iλ6- benzo[l,2,4]tia-diazin-7-il} -amida (0,052 g, 0,10 mmol, 50% de rendi- mento) na forma de pó pálido amarelo. 1H NMR (400 MHz, DMSO-(d6) δ: 0,97 (10H, m), 1,51 (2H, q,J = 7,2 Hz), 1,73 (1H, m), 2,71 (1H, m), .4,41(2H, t, J= 7,6 Hz), 6,72 (1Η, m), 7,02 (1Η, d, J= 3,6 Hz), 7,58 (1Η, m), 7,63 (2H, m), 7,88 (1H, s), 10,12 (1H, bs). LC-MS (ESI) calculado para C22H25N5O6S2, encontrado 519,12, encontrado 520,3 [M+H+].

Exemplo 14

JV-{3-[6-fluor-4-hidroxi-l-(3-metil-butil)-2-oxo-1,2-dihidro-pirrolo[ 1,2- b]piridazin-3-il]-1,1-dioxo-1,4-dihidro- lÀ6-benzo[ 1,2,4]tiadiazin-7-il}-

metanossulfonamida

<formula>formula see original document page 133</formula>

a) éster 2-metílico do éster 1-íerí-butílico do ácido 4,4- difluor-pirrolidina-1,2-dicarboxílico

<formula>formula see original document page 133</formula>

O éster 1-íerí-butílico do ácido 4,4-difluor-pirrolidina-l,2- dicarboxílico foi preparado como descrito em TetrahBdron Lett., 44, .7809-12 (2003). O éster 2 metil éster 1-tert-butil do ácido 4-oxo- pirrolidina-1,2-dicarboxílico (7,12 g, 29,287 mmol) foi dissolvido em diclorometano (150 mL) e arrefecido a -78°C. O trifluoreto de NN- dietilaminoenxofre (23,58 g, 146,436 mmol) foi lentamente adicionado à solução agitada durante um período de 5 minutos. A reação foi deixada aquecer a 25°C durante 16 h. A mistura de reação foi vazada em gelo (200 mL) e as camadas foram separadas. A camada orgânica foi lavada com água e solução saturada de bicarbonato de sódio aquoso, seca sobre sulfato de sódio e filtrada. O solvente foi removido a vácuo para dar o produto desejado no estado bruto, éster 2-metil éster 1-tert-butil do ácido 4,4-difluor-pirrolidina-1,2-dicarboxílico (1,90 g, 7,167 mmol, .58,1% de rendimento), na forma de um óleo amarelo, que foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: .1,44 (9H, s), 2,47 (1H, qd, Ji = 13,3 Hz, J2 = 4,9 Hz), 2,63- 2,78 (1H, m), .3,75 - 3,96 (5H, m), 4,50 (5H, dM, Ji = 40,4 Hz, J2 = 0,0 Hz), 4,43- 4,57 (1H, m).

b) Éster 1-tert-butil do ácido 4,4-difluor-pirrolidina-1,2-

dicarboxílico

<formula>formula see original document page 134</formula>

O éster 2-metil do éster 1-tert-butil do ácido 4,4-difluor- pirrolidina-1,2-dicarboxílico (Exemplo 14a, 7,53 g, 28, 403 mmol) foi dissolvido em acetonitrila (330 mL) e foi adicionada uma solução de hidróxido de lítio (1,36 g, 56,807 mmol) em água (110 mL). Depois de agitação durante 16 h a 25°C, a acetonitrila foi removida a vácuo e a fase aquosa foi lentamente acidificada com solução aquosa 1,0 M de ácido clorídrico até que se formasse um precipitado. O produto foi extraído em acetato de etila (3 χ 50 mL) e as camadas orgânicas combi- nadas foram secas sobre sulfato de sódio e filtradas. O solvente foi removido a vácuo para dar o produto desejado, éster 1-tert-butílico do ácido 4,4-difluor-pirrolidina-1,2-dicarboxílico (1,54 g, 6,13 mmol, 95,6% de rendimento) na forma de um sólido friável bronzeado, que foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional. 1H NMR (400 MHz, CDCI3) δ: 1,51 (9H, s), 2,50 - 2,84 (2H, m), 3,71- 3,90 (2H, m), 6,73 (1H, bs).

c) éster 1-tert-butil do éster 2-alil do ácido 4,4-difluor- pirrolidina- 1,2-dicarboxílico

<formula>formula see original document page 135</formula>

O éster 1-tert-butil do ácido 4,4-difluor-pirrolidina-l,2-di- carboxílico (Exemplo 14b, 6,77 g, 26,96 mmol) foi dissolvido numa 5% solução de bicarbonato de sódio aquoso (50 mL). brometo de alila (3,26 g, 26,96 mmol) e trioctilmetilamônio cloreto ("Aliquat® 336", 10,90 g, 26,97 mmol) foi dissolvido em diclorometano (50 mL) e foi adicionado à solução aquosa. A mistura de reação bifásica foi vigorosamente agitada durante 48 h a 25°C. As camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraída com diclorometano (3 χ 70 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio e filtradas. O solvente foi removido a vácuo para dar o produto desejado no estado bruto, que foi purificado por cromatografia em coluna flash (Merck sílica gel 60, 40-63 μπι, 20% acetato de etila em hexano) para dar o produto deseja- do, éster 1-tert-butil do éster 2-alil do ácido 4,4-difluor-pirrolidina-l,2- dicarboxílico (5,85 g, 20,09 mmol, 74,5% de rendimento) na forma de um óleo claro, ligeiramente amarelado. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 1,44 (9H, s), 2,43- 2,54 (1H, m), 2,64 - 2,80 (1H, m), 3,78 - 3,94 (2H, m)> 4>46 - 4,73 (3H, m), 5,24 - 5,37 (2H, m), 5,87 - 5,96 (1H, m).

d) Sal do ácido trifluoracético do éster alílico do ácido 4,4-difluor-pirrolidina-2-carboxílico <formula>formula see original document page 136</formula>

O éster 1-íerí-butil do éster 2-alil do ácido 4,4-difluor- pirrolidina-1,2-dicarboxílico (Exemplo 14c, 5,85 g, 20,09 mmol) foi dissolvido numa solução a 5% de ácido trifluoracético em dicloro meta- no e agitado a 25°C durante 16 h. O solvente foi removido a vácuo e o éster alílico bruto do ácido 4,4-difluor-pirrolidina-2-carboxílico (6,14 g, .20,09 mmol, 100% de rendimento) foi obtido como o sal do ácido trifluo- racético, que foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 2,75 - 2,86 (1H, m), 2,90 - 3,02 (1H, m), 3,76 - 3,93 (2H, m), 4,68 - 4,78 (3H, m), 5,33- 5,39 (2H, m), 5,84 - 5,94 (1H, m).

e) Éster alílico do ácido 4-fluor-lH-pirrol-2-carboxílico

<formula>formula see original document page 136</formula>

A uma solução de sal do ácido trifluoracético do éster alílico do ácido 4,4-difluor-pirrolidina-2-carboxílico (Exemplo 14d, 6,13 g, 20,08 mmol) em tetrahidrofurano anidro (300 mL) foi adicionado dióxido de manganês (IV) e a mistura de reação foi aquecida a 80°C durante 4 h. A mistura foi filtrada sobre Celite e foi lavada com tetrahi- drofurano quente e, depois, frio. O filtrado foi concentrado a vácuo para dar um óleo laranja escuro. O óleo foi dissolvido em acetato de etila e a camada orgânica foi lavada com solução saturada de bicarbo- nato de sódio aquoso. O solvente foi removido a vácuo para dar um óleo laranja, que foi purificado por cromatografia por coluna flash (Merck sílica gel 60, 40-63 μιη, 30% acetato de etila em hexano) para

dar o produto desejado, éster alílico do ácido 4-fluor- lH-pirrol-2- carboxílico (3,01 g, 17,80 mmol, 88,7% de rendimento) na forma de um óleo amarelo. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 4,77 (2H, d,J = 5,7 Hz),5,29 (1H, d, J= 10,2 Hz), 5,38 (1H, d, J= 15,9 Hz), 5,946,04 (1H, m),6,64 - 6,65 (1H, m), 6,72 - 6,74 (1H, m), 8,91 (1H, bs).

f) éster alílico do ácido l-amino-4-fluor-lH-pirrol-2-car- boxílico

<formula>formula see original document page 137</formula>

Foi preparado o éster alílico do ácido l-amino-4-fluor-lH- pirrol-2-carboxílico seguindo o procedimento de JV-aminação descrito em Tetrahedron Lettt 47, 5341-43 (2006). Misturou-se o éster alílico do ácido 4-fluor-lH-pirrol-2-carboxílico (Exemplo 14e, 2,49 g, 14,74 mmol) com cloreto de amônio sólido (4,81 g, 90,75 mmol), 30% de solução aquosa de hidróxido de sódio (42,4 mL), 29,56% de solução aquosa de hidróxido de amônio (13,71 mL) e trioctilmetilamônio cloreto ("Aliquat® 336", 0,166 g, 0,411 mmol) em metil tert-butil éter (50 mL). Sob vigorosa agitação, foi lentamente adicionada uma solução aquosa a .6,15% de lixívia ("Clorox", 146 mL) via funil de adição em que a cor da solução virou laranja. Depois de agitação durante 2 h a 25°C, as tert-butil éter (2 χ 10 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com uma solução saturada de tiossulfato de sódio (50 mL) e a camada orgânica foi seca sobre sulfato de sódio e filtrada. O solvente foi removido a vácuo e o produto bruto foi purificado por cromatografia por coluna flash (Merck sílica gel 60, 40-63 μιη, 20% acetato de etila em hexano) para dar o produto desejado, o éster alílico do ácido l-amino-4- fluor-lH-pirrol-2-carboxílico (2,02 g, 10,99 mmol, 62,1% de rendimen- to). 1H NMR (400 MHz, CDCl3) d: 4,73 (2H, d,J = 5,5 Hz), 5,26 - 5,29 (1H, m), 5,34 - 5,40 (1H, m), 5,52 (2H, bs), 5,93- 6,02 (1H, m), 6,49 -6,53 (1H, m), 6,78 - 6,80 (1H, m).

g) Éster alílico do ácido 4-fluor-l-(3-metil-butilamino)-lH- pirrol-2-carboxílico <formula>formula see original document page 138</formula>

A uma solução do éster alílico do ácido l-amino-4-fluor-lH- pirrol-2-carboxílico (Exemplo 14f, 0,5 g, 2,717 mmol) em metanol (20 mL) foi adicionado isovaleraldeído (0,257 g, 2,988 mmol) e cianobo- rohidreto de sódio (0,256 g, 4,075 mmol). A mistura foi agitada durante 20 h a 25°C. O solvente foi removido a vácuo e o produto bruto foi purificado por cromatografia por coluna flash (Merck sílica gel 60, 40-63 μm, 20% acetato de etila em hexano) para dar o produto desejado, éster alílico do ácido 4-fluor-l-(3-metil-butilamino)-lH-pirrol-2-carbo- xílico (0,264 g, 1,039 mmol, 38,2% de rendimento) na forma de um óleo amarelo. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 0,91 (3 Η, s), 0,93 (3H, s), 1,38 -1,45 (2H, m), 1,63-1,80 (1H, m), 3,00 - 3,05 (2H, m), 4,74 - 4,76 (1H, m), 5,29 (1H, d, J= 10,4 Hz), 5,38 (1H, d, J = 18,8 Hz), 5,94 - 6,03 (1H, m), 6,52 - 6,56 (1H, m), 6,79 - 6,81 (1H, m). h) Ester alílico do ácido l-[(2-acetil de metoxicarbonil)-(3- metil-butil)-amino]-4-fluor-lH-pirrol-2-carboxílico

<formula>formula see original document page 139</formula>

O éster alílico do ácido 4-fluor-l-(3-metil-butilamino)-lH- pirrol-2-carboxílico (Exemplo 14g, 0,24 g, 0,944 mmol) foi dissolvido em 1,4-dioxano anidro (10 mL) e foi adicionado cloreto de metil malonila sob atmosfera de nitrogênio. A mistura de reação foi aquecida a IOO0C durante 1 h. Após arrefecimento a 25°C, foi adicionada a solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio e o produto foi extraído com acetato de etila/hexano a 50%. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio, filtradas e concentradas a vácuo para dar o produto desejado no estado bruto, éster alílico do ácido l-[(2- etoxicarbonil-acetil)-(3-metil-butil)-amino]-4-fluor-lH-pirrol-2-carboxíli- co (0,335 g, 0,944 mmol, 100% de rendimento) na forma de um óleo amarelo pálido, que foi usado na etapa seguinte sem purificação adicio- nal. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 0,90 (3H, d,J = 4,6 Hz), 0,92 (3H, d, J = 5,2 Hz), 1,37 -1,46 (1H, m), 1,54 -1,64 (1H, m), 1,69 -1,78 (1H, m), .3,13 (2H, d, J= 3,1 Hz), 3,70 (3H, s), 4,16 - 4,26 (2H, m), 4,73 (2H, d, J = 5,5 Hz), 5,28 - 5,31 (1H, m), 5,37 (1H, dd, Ji = 17,2 Hz, J2 = 1,6 Hz), .5,91- 6,01 (1H, m), 6,69 - 6,76 (2H, m).

i) Éster etílico do ácido 6-fluor-4-hidroxi-l-(3-metil-butil)- .2-oxo-1,2 -dihidro-pirrolo [ 1,2-b]piridazina-3-carboxílico <formula>formula see original document page 140</formula>

A uma solução de éster alílico do ácido l-[(2-etoxi- carbonil-acetil)-(3-metil-butil)-amino]-4-fluor-lH-pirrol-2-carboxílico (Exemplo 14h, 0,318 g, 0,898 mmol) em etanol (10 mL) foi adicionada uma 21% solução de etóxido de sódio em etanol (0,728 g, 2,245 mmol) e a mistura foi aquecida a 40°C durante 16 h. O solvente foi removido a vácuo e o resíduo foi purificado por cromatografia por coluna flash (Merck sílica gel 60, 40-63 μτη, 20% acetato de etila em hexano, então .10% metanol em diclorometano) para produzir o produto desejado, éster etílico de ácido 6-fluor-4-hidroxi-l-(3metil-butil)-2-oxo-l,2-dihidro-pirro- lo[l,2-b]piridazina-3-carboxílico (0,137 g, 0,441 mmol, 49,1% de rendi- mento) na forma de um óleo amarelo. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: .0,99 (3H, s), 1,00 (3H, s), 1,44 (3H, t, J= 7,0 Hz), 1,58 -1,63 (2H, m),1,67 -1,75 (1H, m), 4,18 - 4,22 (2H, m), 4,44 (2H, quarteto, J = 7,1 Hz), 6,55 (1H, m), 7,04 (1H, m).

j) 6-Fluor-4-hidroxi-3-(7-iodo-1,1 -dioxo-1,4-dihidro- IA6- benzo[l,2,4]tiadiazin-3-il-)-l-(3-metil-butil)-pirrolo[l,2-b]piridazin-2-ona Misturou-se éster etílico do ácido 6-fluor-4-hidroxi-l-(3- metil-butil)-2-oxo-1,2-dihidro-pirrolo[ 1,2 -b] piridazina-3-carboxílico (Exemplo 14i, 136,7 mg, 0,441 mmol) e 2-amino-5-iodo-benzenos- sulfonamida (Exemplo 4a, 131,3 mg, 0,441 mmol) em (2 mL) e aqueci- dos a 120°C durante 3 h. 1,8- Diazabiciclo[5,4,0]undec-de 7 eno (200 μΐ,) foi adicionado e a mistura foi aquecida a 120°C durante 16 h. Purificação por cromatografia por coluna flash (Merck sílica gel 60, 40- .63 μπι, 20% acetato de etila em hexano) produziu o produto desejado, .6-fluor-4-hidroxi-3-(7-iodo-1,1-dioxo-1,4-dihidro- lA6-benzo[ 1,2,4]tiadia- zin-3-il-)-l-(3- metil-butil)-pirrolo[ 1,2-fo]piridazin-2-ona (0,047 g, 0,086 mmol, 19,5% de rendimento) na forma de um sólido purpúreo escuro. LC-MS (ESI) calculado para Ci9Hi8FIN4O4S 544,01, encontrado 544,97 [M+H+].

k) iV-{3-[6-fluor-4-hidroxi-l-(3-metil-butil)-2-oxo-1,2-dihi- dro-pirrolo [ 1,2-b]piridazin-3-il-]-1,1 -dioxo-1,4-dihidro-lA6-benzo [ 1,2,4] tiadiazin-7-il}-metanossulfonamida

<formula>formula see original document page 141</formula>

Combinaram-se 6-fluor-4-hidroxi-3-(7-iodo-1,1 -dioxo- .1,4-dihidro-lA6-benzo[l,2,4]tiadiazin-3-il-)-l-(3-metil-butil)-pirrolo[l,2-b] piridazin-2-ona (Exemplo 14j, 0,047 g, 0,086 mmol), trifosfato de potássio (0,055 g, 0,258 mmol), sarcosina (0,0046 g, 0,0516 mmol) e iodeto de cobre (I) (0,0066 g, 0,0344 mmol). Adicionou-se JVjJV- dimetilformamida anidra (3 mL) seguida de metanossulfonamida (0,0245 g, 0,258 mmol). O frasco foi purgado com nitrogênio e a mistu- ra foi agitada a IOO0C durante 16 h. Após arrefecimento, a mistura foi filtrada sobre Celite, lavada com acetato de etila e o solvente foi removi- do a vácuo. Purificação por HPLC preparativa (Coluna Luna 5μ Ci8 (2) tamanho de 100Á 150 χ 21,2 mm, 5 micra, 40%-95% em 11 minutos @ 25 mL/min de velocidade de fluxo, ácido trifluoracético 0,05% em acetonitrila/ ácido trifluoracético 0,05% na água) produziu o produto desejado, N- {3-[6-fluor-4-hidroxi- l-(3-metil-butil)-2-oxo-1,2-dihidro- pirrolo [ 1,2-b]piridazin-3-il-]-1,1-dioxo-1,4-dihidro- lA6-benzo[ 1,2,4]tia- diazin-7-il}- metanossulfonamida (0,0068 g, 0,0133 mmol, 15,4% de rendimento) na forma de um sólido. 1H NMR (400 MHz, DMSO-de) δ:0,96 (3H, s), 0,97 (3H, s), 1,53-1,59 (2H, m), 1,66 -1,76 (1H, m), 3,07 (3H, s), 4,32 (2H, t, J= 7,5 Hz), 6,83 (1H, bs), 7,51-7,63 (3H, m), 8,06 (1H, bs), 10,17 (1H, bs). LC-MS (ESI) calculado para C20H22FN5O6S2 511,10, encontrado 512,3 [M+H+].

i\T-{3-{6-ciano-4-hidroxi-l-(3-metil-butil)-2-oxo-1,2-dihidro-pirrolo [ 1,2- b] piridazin- 3 - il] -1,1 -dioxo-1,4-dihidro- lA6-benzo[l ,2,4]tiadiazin-7-il}-me-

Bxemplo 15

tanossulfonamida

a) Éster metílico do ácido 4-ciano-lH-pirrol-2-carboxílico <formula>formula see original document page 143</formula>

Foi preparado o éster metílico do ácido 4-ciano-lH-pirrol-2- carboxílico conforme descrito em Can. J. Chem., 59, 2673-76 (1981). O éster metílico do ácido lH-pirrol-metil-2-carboxílico (2,00 g, 16,00 mmol) foi dissolvido em acetonitrila (5 mL) e a solução foi arrefecida a -20°C. Dissolveu-se clorossulfonilisocianato (3,40 g, 24,00 mmol) em acetonitrila (5 mL) e adicionado gota a gota via seringa num período de 5 minutos à solução acima. A solução foi deixada aquecer a 25°C e foi agitada durante 20 h. A solução foi arrefecida de volta para 0°C, foi adicionada JVJV-dimetilformamida (2 mL) e a solução foi aquecida a 50°C durante 15 minutos. A mistura de reação foi vazada em gelo e foi extraída com clorofórmio, lavada com solução saturada de bicarbonato de sódio aquoso, seca sobre sulfato de sódio, filtrada e concentrada a vácuo. Purificação por cromatografia por coluna flash (Merck sílica gel 60, 40-63 μm, 40% acetato de etila em hexano) gerou o produto deseja- do, éster metílico do ácido 4-ciano-lH-pirrol-2-carboxílico (1,09 g, 7,265 mmol, 45,4% de rendimento) na forma de um sólido amarelado. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 3,91 (3H, s), 7,12 (1H, t,J = 2,0 Hz), 7,40 -7,41 (1H, m), 9,60 (1H, bs). FT-IR (ATR) vmax (limpo): 2228,1691 cm1.

b) Éster metílico do ácido l-amino-4-ciano-l/í-pirrol-2- carboxílico Suspendeu-se cloreto de amônio sólido (5,8 g, 109,4 mmol) em dietil éter (300 mL) e a suspensão foi arrefecida a -5°C. Para isto foi adicionada solução aquosa de hidróxido de amônio a 29,56% (16 mL) e solução aquosa de lixívia a 6,15% ("Clorox", 240 mL) durante um período de 15 minutos. A mistura foi agitada durante 30 minutos a -5°C e, depois, as camadas foram separadas. A camada orgânica foi lavada com salmoura, filtrada sobre sulfato de sódio e armazenada sobre cloreto de cálcio sólido a -5°C. O éster metílico do ácido 4-ciano-1 H-pirrol-2-carboxílico (Exemplo 15a, 1,09 g, 7,265 mmol) foi dissolvi- do em iV,iV-dimetilformamida (30 mL) e foi adicionada uma dispersão de hidreto de sódio a 60% em óleo mineral (0,378 g, 9,445 mmol). Depois de agitação durante 1 h a 25°C, a solução acima de monocloramina .0,36 M em éter (26 mL, 9,445 mmol) foi adicionada e agitada durante 2 h a 25°C. A reação foi extinta com solução aquosa saturada de tiossul- fato de sódio seguida de água. As camadas foram separadas e a cama- da aquosa foi extraída com dietil éter. As camadas orgânicas combina- das foram secas sobre sulfato de sódio, filtradas e concentradas a vácuo para produzir o produto desejado no estado bruto, éster metílico do ácido l-amino-4-ciano-lH-pirrol-2-carboxílico, que foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 3,88(3H, s), 5,67 (2H, bs), 7,07 (1H, d, J = 1,7 Hz), 7,37 (1H, d, J = 1,7 Hz).

c) éster metílico do ácido 4-ciano-l-(3-metil-butilamino)-1 H-pirrol-metil-2-carboxílico

<formula>formula see original document page 144</formula>

O produto bruto éster metílico do ácido l-amino-4-ciano- .1 H-pirrol-2-carboxílico (Exemplo 15b, 0,60 g, 3,635 mmol) e isovaleral- deído (0,313 g, 3,635 mmol) foram dissolvidos em isopropanol (15 mL) e aquecidos a 50°C durante 72 h. O solvente foi removido a vácuo para produzir a imina na forma de um óleo amarelado. O intermediário foi dissolvido em metanol (20 mL) e foi adicionado borohidreto de sódio (0,206 g, 5,453 mmol). Depois de agitação a 25°C durante 30 minutos, a reação foi extinta com solução de hidróxido de sódio 1,0 M. A camada aquosa foi extraída com acetato de etila e as camadas orgânicas combi- nadas foram secas sobre sulfato de sódio, filtradas e concentradas a vácuo. Purificação por cromatografia por coluna flash (Merck sílica gel .60, 40-63 μηι, acetato de etila a 40% em hexano) produziu o produto desejado, éster metílico do ácido 4-ciano-l-(3-metil-butilamino)-lH- pirrol-2-carboxílico (0,604 g, 2,591 mmol, 71,3% de rendimento) na forma de um óleo amarelado. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 0,92 (3H, s), .0,94 (3H, s), 1,37 -1,43 (2H, m), 1,64 -1,74 (1H, m), 2,99 - 3,04 (2H, m), .3,88 (3H, s), 6,40 (1H, t,J = 6,3 Hz), 7,09 (1H, d, J = 1,5 Hz), 7,36 (1H, d,J = 2,2 Hz). LC-MS (ESI) calculado para C12H17N3O2 235,13, encon- trado 236,3 [M+H+].

d) éster metílico do ácido 4-ciano-l-[(2-etoxicarbonil- acetil)-(3-metil-butil)-amino]- lH-pirrol-2-carboxílico

<formula>formula see original document page 145</formula>

A uma solução de éster metílico do ácido 4-ciano-l-(3- metil-butilamino)-1 H-pirrol-2-carboxílico (Exemplo 15c, 0,600 g, 2,552 mmol) em 1,4-dioxano anidro (25 mL) foi adicionado cloreto de metil malonila (0,383 g, 2,807 mmol) e a mistura de reação foi aquecida a 100°C durante 3 h. Após arrefecimento, a reação foi extinta com solu- ção saturada de bicarbonato de sódio aquoso e foi extraído com 50% acetato de etila/hexano (3 χ 30 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio, filtradas e concentradas a vácuo para produzir o produto desejado no estado bruto, éster metílico do ácido 4-ciano-l-[(2-etoxicarbonil-acetil)-(3-metil-butil)-amino]-1 H-pirrol- 2-carboxílico na forma de um óleo amarelado, que foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional. LC-MS (ESI) calculado para C16H2IN3O5 335,15, encontrado 336,4 [M+H+].

e) Éster etílico do ácido 6-ciano-4-hidroxi-l-(3-metil- butil)-2-oxo-l,2-dihidro-pirrolo[l,2-b]piridazina-3-carboxílico

<formula>formula see original document page 146</formula>

A uma solução de produto bruto de éster metílico do ácido 4-ciano-l-[(2-etoxicarbonil-acetil)-(3-metil-butil)-amino]-lH-pirrol- 2-carboxílico (Exemplo 15d, 2,552 mmol) em etanol (30 mL) foi adicio- nada uma solução de etóxido de sódio a 21% em etanol (2,07 g, 6,380 mmol) e a mistura foi aquecida a 40°C durante 16 h. Após arrefecimen- to, a mistura foi extinta com solução aquosa de ácido clorídrico 1,0 M e salmoura. A mistura aquosa foi extraída com acetato de etila e as camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio, filtradas e concentradas a vácuo para dar origem ao produto bruto desejado, éster etílico do ácido 6-ciano-4-hidroxi-l-(3-metil-butil)-2-oxo- 1,2-dihidro-pirrolo[l,2-b]piridazina-3-carboxílico na forma de um sólido amarelo, que foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional. LC-MS (ESI) calculado para Ci6Hi9N3O4 317,14, encontrado 318,3 [M+H+]. FT-IR (ATR) v_max (seco): 2231, 1642, 1610 cm"1,

f) N- {3-[6-Ciano-4-hidroxi-1 -(3-metil-butil)-2-oxo-1,2-di- hidro-pirrolo[ 1,2-b]piridazin-3-il-]-1,1-dioxo-1,4-dihidro- lÀ6-benzo [1,2,4] tiadiazin-7-il}-metanossulfonamida

Uma solução de éster etílico do ácido 6-ciano-4-hidroxi-l- (3-metil-butil)-2-oxo-1,2-dihidro-pirrolo[ 1,2-b]piridazina-3-carboxílico (Exemplo 15e, 0,25 g, 0,788 mmol) e 2-amino-5-metanossulfonilamino- benzenossulfonamida (Exemplo 3d, 0,209 g, 0,788 mmol) em piridina (4 mL) foi aquecida a 120°C durante 3 h. Adicionou-se 1,8- diazabiciclo[5,4,0]undec-7-eno (200 μ^ e a mistura foi aquecida a 120°C durante 16 h. A mistura de reação foi passada através de um plugue de sílica gel e eluída com acetato de etila 50%-» 100% em hexa- no. Os solventes foram removidos a vácuo e purificação por HPLC preparativa (Coluna Luna 5μ Cl 8 (2) tamanho de 100A 150 χ 21,2 mm, 5 micra, 40%-95% em 11 minutos @ 25 mL/min velocidade de fluxo, ácido trifluoracético a 0,05% em acetonitrila/ácido trifluoracético a 0,05% na água) gerou o produto desejado, 7V-{3-[6-ciano-4-hidroxi-l-(3- metil-butil)-2-oxo-1,2-dihidro-pirrolo[ 1,2-b]piridazin-3-il-]-1,1 -dioxo-1,4 -dihidro- lA6-benzo[ 1,2,4]tiadiazin-7-il} -metanossulfonamida (0,0275 g, 0,0531 mmol, 6,7% de rendimento). 1H NMR (400 MHz, DMSO-dó) δ: 0,94 (3H, s), 0,96 (3H, s), 1,17 -1,23 (2H, m), 1,51-1,57 (2H, m), 1,65 - 1,75 (1H, m), 5,74 (1H, s), 3,05 (3H, s), 7,40 (1H, s), 7,49 - 7,57 (3H, m), 8,51 (1H, s), 10,12 (1H, s), 13,75 (1H, s). LC-MS (ESI) calculado para C21H22N6O6S2 518,10, encontrado 519,4 [M+H+].

Exemplo 16

N-{3-r4-Hydroxi-l-(3-metil-butil)-2-oxo-l,2-dihidro-pirrolo[l,2-b]pirida- zin-3-il-]-1,1 -dioxo-1,4-dihidro- lλ6-benzo[ 1,4]tiazin-7-il}- metanossulfonamida

<formula>formula see original document page 148</formula>

a) Ester alílico do ácido l-[[2-(7-Metanossulfonilamino- 1,1-dioxo-l,4-dihidro-lA6-benzo[l,4]tiazin-3-il-)-acetil]-(3-metil-butil)- amino]-lH-pirrol -2-carboxílico

<formula>formula see original document page 148</formula>

O ácido (7-metanossulfonilamino-1,1-dioxo-1,4-dihidro- lλ6-benzo[ 1,4]tiazin-3-il)-acético (Exemplo 8i, 0,1 g, 0,3 mmol) foi dissolvido em N,N-dimetilformamida anidra (3 mL). Foi adicionado o éster alílico do ácido l-(3-metil-butilamino)-lH-pirrol-2-carboxílico (Exemplo lc, 0,07 g, 0,3 mmol) seguido de cloreto de l-(3- dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (0,06 g, 0,315 mmol). Então, foi adicionada N-metilmorfolina (0,07 mL, 0,63 mmol) à mistura de reação acima. A mistura foi agitada a 25°C durante 4 h. A solução foi vazada em solução aquosa de ácido clorídrico 1,0 M (50 mL). A camada aquosa foi extraída com acetato de etila (2 χ 50 mL). A fase orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e concentrada a vácuo para gerar o produto desejado no estado bruto, éster alílico do ácido l-[[2-(7- metanossulfonilamino-1,1-dioxo-1,4-dihidro- lÀ6-benzo[ 1,4]tiazin-3-il)- acetil] - (3 -metil-butil) -amino] -1 H-pirrol-2-carboxílico (0,3 mmol) na forma de um óleo amarelo, que foi usado na etapa seguinte sem purifi- cação adicional. LC-MS (ESI) calculado para C24H30N4O7S2 550,16, encontrado 551,6 [M+H+].

rolo[ 1,2 -b] piridazin- 3 -il] -1,1-dioxo-1,4-dihidro- lÀ6-benzo[ 1,4]tiazin-7-il}- metanossulfonamida

dioxo-1,4-dihidro-lÂ6-benzo[l,4]tiazin-3-il-)-acetil]-(3-metil-butil)-ami-

no]- lH-pirrol-2-carboxílico bruto (Exemplo 16a, 0,3 mmol) foi dissolvi- do em etanol (3 mL). Uma solução de etóxido de sódio a 21% em etanol (0,448 mL, 1,2 mmol) foi adicionada à solução acima. A mistura foi agitada a 60°C durante 4 h. Após arrefecimento a 25°C, a mistura foi vazada em solução aquosa de ácido clorídrico 1,0 M (50 mL). A camada aquosa foi extraída com acetato de etila (2 χ 50 mL). A fase orgânica foi seca sobre sulfato de sódio, filtrada e concentrada a vácuo para gerar um sólido amarelo. Purificação por cromatografia por coluna flash 25 (Teledyne Isco RediSep; acetato de etila a 20% em hexano para acetato

b) iV-{3-[4-hidroxi-l-(3-metil-butil)-2-oxo-1,2-dihidro-pir-

15

O éster alílico do ácido l-[[2-(7-metanossulfonilamino-l,l- de etila a 100% em hexano) deu o produto desejado, N-{3-[4-hidroxi-l- (3-metil-butil)-2-oxo-1,2 -dihidro-pirrolo [l,2-b]piridazin-3-il]-l, 1-dioxo- .1,4-dihidro- lÀ6-benzo[ 1,4]tiazin-7-il}-metanossulfonamida (20 mg, 0,04 mmol, 13% de rendimento em duas etapas) na forma de um sólido amarelo. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 1,05 (6H, d,J = 6,6 Hz), 1,64 -1,81 (3H, m), 3,11 (3H, s), 4,24 - 4,31 (2H, m), 5,53 (1H, s), 6,41- 6,46 (1H, m), 6,97 - 7,10 (3H, m), 7,30 - 7,33 (1H, m), 7,60 - 7,64 (1H, m),7,70 - 7,72 (1H, m). LC-MS (ESI) calculado para C21H24N4O6S2 492,11, encontrado 493,3 [M+H+].

Exemplo 17

N-{3-[l-(3-Cloro-4-fluor-benzil)-4-hidroxi-2-oxo-l,2-dihidro-pirrolo[l,2- blpiridazin-3-il]-1,1-dioxo-l/ d6-dihidro- lÀ6-benzo[ 1,2,4]tiadiazin-7-il}- metanossulfonamida

<formula>formula see original document page 150</formula> a) 2-Cloro-5-nitrobenzenossulfonamida

<formula>formula see original document page 150</formula> A uma solução de cloreto de tionila (11 mL) e ácido 2- cloro-5-nitro-benzenossulfônico (4,78 g, 20,1 mmol) foi adicionada Ν, N- dimetilformamida (0,92 μί) e a mistura de reação foi aquecida a refluxo durante 4 h. Após arrefecimento, a mistura de reação foi azeotropada com tolueno (2-3 χ). O cloreto de sulfonila foi dissolvido numa quanti- dade mínima de tolueno e então adicionada a uma mistura de solução concentrada de hidróxido de amônio aquoso (25 mL) e tetrahidrofurano (25 mL) a -10°C. Depois de agitação durante 2 h, a reação foi extinta adicionando uma solução aquosa de ácido clorídrico 6,0 M até que fosse atingido o pH 4. As camadas foram separadas e a camada orgânica foi concentrada a vácuo a uma pasta. Foi adicionado pentano e o produto foi isolado por filtração a vácuo para dar o produto desejado, 2-cloro-5- nitrobenzenossulfonamida (2,0 g, 8,48 mmol, 42,4% de rendimento) na forma de um sólido.

Alternativamente, a 2-cloro-5-nitrobenzenossulfonamida pode ser preparada como se segue:

.4-cloro nitrobenzeno (10 g, 63,5 mmol) foi carregado num frasco, segui- do de adição de ácido clorossulfônico (21,1 mL, 317 mmol) e aquecido a .120°C durante 100 h. A mistura de reação foi extinta despejando isto em gelo (300 mL) contendo solução aquosa de hidróxido de amônio 8,0 N (200 mL) e a mistura foi deixada em agitação a 25°C durante 18 Η. O produto desejado foi extraído com acetato de etila (400 mL) e filtrado através de sílica gel Merck 60, 40-63 μπι e concentrado a vácuo. O produto bruto foi transformado em pasta em tolueno (70 mL) a 70°C durante 2 h antes de filtrar para dar o produto desejado, 2-cloro-5- nitro-benzenossulfonamida (4,75 g, 20,1 mmol, 29% de rendimento) na forma de um sólido marrom escuro. 1H NMR (400 MHz, DMSO-de) δ:7,94 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 7,97 (bs, 2H), 8,40 (dd, 1H, Ji = 8,6 Hz, J2 =3,1 Hz), 8,64 (d, 1H, J= 3,1 Hz).

b) 2-Amino-5-nitrobenzenossulfonamida Uma mistura de 2-cloro-5-nitrobenzenossulfonamida (Exemplo 17a, 0,88 g, 3,72 mmol), carbonato de amônio (0,88 g, 9,16 mmol) e sulfato de cobre (II) (0,175 g, 1,10 mmol) em solução aquosa concentrada de hidróxido de amônio (4,4 mL) foi aquecida durante 4 h a 120°C num vaso de reação de pressão. A mistura foi deixada arrefecer a 25°C e o sólido resultante foi coletado por filtração a vácuo, lavado com água e seco para dar o produto desejado, 2-amino-5-nitrobenze- nossulfonamida (0,295 g, 1,36 mmol, 36,5% de rendimento) na forma de um sólido bronzeado.

Alternativamente, 2-amino-5-nitrobenzenossulfonamida pode ser preparado como se segue: a uma suspensão de sal de sódio de ácido 4-nitroanilina-2-sulfônico (20,00 g, 83,27 mmol) em sulfolana (83 mL) foi adicionado lentamente oxicloreto fosforoso (23 mL, 249,82 mmol) a 25°C. A mistura foi aquecida a 120°C durante 3,5 h, deixada arrefecer a 25°C e diluída com diclorometano (300 mL). A mistura foi filtrada e o precipitado foi lavado com diclorometano (200 mL). O filtrado foi tratado com gás de amônia por 10 minutos, ao mesmo tempo que arrefecia num banho de gelo, e depois agitado a 25°C durante 5 minutos. O sólido amarelo foi coletado por filtração a vácuo e o precipi- tado foi ainda lavado com diclorometano (300 mL, depois, 200 mL), água fria (2 χ 150 mL) e seco a vácuo durante 16 h a 60°C para dar o produto desejado, 2-amino-5-nitrobenzenossulfonamida (8,06 g, 37,14 mmol, 44% de rendimento) na forma de um sólido amarelo. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 6,89 (d, J = 9,3 Hz, 1H), 7,12 (bs, 2H), 7,57 (bs, 2H), 8,07 (dd, Ji = 9,0 Hz, J2 = 2,6 Hz, 1H), 8,43 (d, J= 3,0 Hz, 1H). Alternativamente, a 2-amino-5-nitrobenzenossulfonamida pode ser preparada como se segue: a uma suspensão de sal de sódio de ácido 4-nitroanilina-2-sulfônico (20,00 g, 83,27 mmol) em sulfolana (83 mL) foi lentamente adicionado oxicloreto fosforoso (23 mL, 249,82 mmol) a 25°C. A mistura foi aquecida a 120°C durante 3,5 h, deixada arrefecer a 25°C e diluído com tolueno (300 mL). A mistura foi filtrada e o precipitado foi lavado com tolueno (200 mL). O filtrado foi tratado com gás de amônia por 10 minutos ao mesmo tempo em que arrefecia num banho de gelo e depois, agitada a 25°C durante 5 minutos. O sólido amarelo foi coletado por filtração a vácuo e o precipitado foi ainda lavado com tolueno (300 mL, depois, 200 mL), água fria (2 χ 150 mL) e seco a vácuo durante 16 h a 60°C para dar o produto desejado, 2- amino-5-nitrobenzenossulfonamida (7,39 g, 34,05 mmol, 41% de ren- dimento) na forma de um sólido amarelo. 1H NMR (400 MHz, DMSO-de) δ: 6,89 (d, J = 9,3 Hz, 1H), 7,12 (bs, 2H), 7,57 (bs, 2H), 8,07 (dd, Ji =9,0 Hz, J2 = 2,6 Hz, 1H), 8,43 (d, J= 3,0 Hz, 1H). [0291].

Alternativamente, a 2-amino-5-nitrobenzenossulfonamida pode ser preparada como se segue: a uma suspensão de ácido 2-amino-5-nitro- benzenossulfônico (3,00 g, 13,75 mmol) em sulfolana (10 mL) foi lentamente adicionado oxicloreto fosforoso (3,43 mL, 37,47 mmol) a 25°C. A mistura foi aquecida a 120°C durante 3,5 h, deixada arrefecer a 25°C e diluída com diclorometano (50 mL). A mistura foi filtrada e o precipitado foi lavado com diclorometano (50 mL). O filtrado foi tratado com gás de amônia por 10 minutos ao mesmo tempo em que arrefecia num banho de gelo e depois, agitado a 25°C por 5 minutos. O sólido amarelo foi coletado por filtração a vácuo e o precipitado foi ainda lavado com diclorometano (2 χ 50 mL), água fria (2 χ 50 mL) e seco a vácuo durante 16 h a 60°C para dar o produto desejado, 2-amino-5- nitrobenzenossulfonamida (1,46 g, 6,73 mmol, 49% de rendimento) na forma de um sólido marrom. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 6,89 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 7,19 (bs, 2H), 7,37 (bs, 2H), 8,07 (dd, Ji = 8,9 Hz, J2 = .2,3 Hz, 1Η), 8,43 (d, J= 3,0 Hz, 1H).

Alternativamente, 2-amino-5-nitrobenzenossulfonamida

pode ser preparado como se segue: a uma suspensão de ácido 2-amino-5- nitro-benzenossulfônico (3,00 g, 13,75 mmol) em sulfolana (10 mL) foi lentamente adicionado oxicloreto fosforoso (3,43 mL, 37,47 mmol) a 25°C. A mistura foi aquecida a 120°C durante 3,5 h, deixada arrefecer a 25°C e lentamente despejada em solução aquosa de hidróxido de amônio (30 mL) a 25°C. O pH da solução foi ajustado para cerca de 6-7 em que um sólido precipitou. O sólido foi coletado por filtração a vácuo e o precipitado foi lavado em água (100 mL) e seco a vácuo durante 16 h a 60°C para dar o produto desejado, 2-amino-5-nitrobenzenossulfona- mida (1,87 g, 8,62 mmol, 63% de rendimento) na forma de um sólido marrom amarelo. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 6,89 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 7,19 (bs, 2H), 7,37 (bs, 2H), 8,07 (dd, Ji = 8,9 Hz, J2 = 2,3 Hz, 1H),8,43 (d, J= 3,0 Hz, 1H).

c) 2,5-diaminobenzenossulfonamida

<formula>formula see original document page 154</formula>

Uma mistura de 2-amino-5-nitrobezenesulfonamida (Exemplo 17b, 10 g, 46,08 mmol), 10% de paládio sobre carvão (~1 g) em tetrahidrofurano (250 mL) foi hidrogenada durante 26 h a 25°C sob 1 atmosfera de gás de hidrogênio via balão. A mistura foi, então, filtra- da através de Celite, lavada com tetrahidrofurano e o solvente removido a vácuo para dar o produto desejado. A mistura de catalisador/Celite foi transformada em pasta em metanol (400 mL) durante 16 h, filtrada e o solvente foi removido a vácuo para dar um segundo lote do produto desejado, 2,5-diaminobenzenossulfonamida (combinado: 7,79 g, 41,65 mmol, 90,4% de rendimento) na forma de um sólido marrom claro. 1H NMR (400 MHz, DMSO-de) δ: 4,54 (2H, bs), 4,98 (2H, bs), 6,55 - 6,60 (2H, m), 6,87 (1H, d, J = 2,2 Hz), 6,99 (2H, bs). LC-MS (ESI) calculado para C6H9N3O2S 187,04, encontrado 188,3 [M+H+].

Alternativamente, a 2,5-diaminobenzenossulfonamida pode ser preparada como se segue:

i) 2-Benzilamino-5-nitro-benzenossulfonamida

<formula>formula see original document page 155</formula>

Uma solução de 2-cloro-5-nitro-benzenossulfonamida (20 g, 84,52 mmol) em acetonitrila (169 mL) foi tratada com benzilamina (13,85 mL, 126,78 mmol), diisopropil etilamina (29,44 mL, 169,04 mmol) e agitada durante 16 h a 55°C. A reação foi arrefecida a 25°C, despejada em água (1,0 L) depois, colocada num banho de gelo, com agitação. Depois de 4 h um precipitado foi filtrado e lavado com a o licor-mãe para dar o produto desejado, 2-benzilamino-5-nitro-benzenos- sulfonamida (21,65 g, 70,45 mmol, 83,3 % de rendimento) na forma de um sólido amarelo. 1H NMR (400 MHz, DMSO-de) d: 4,64 (2H, d,J = 4,6 Hz), 6,81 (1H, d, J= 9,4 Hz), 7,23- 7,44 (6H, m), 7,77 (2H, bs), 8,11 (1H, dd, Ji = 9,4 Hz, J2 = 2,3 Hz), 8,49 (1H, d, J = 3,1 Hz). LC-MS (ESI) calculado para C13H13N3O4S 307,06, encontrado 308,2 [M+H+] (100%), 615,2 [2M+H+] (81%). ii) 2,5-Diamino-benzenossulfonamida

<formula>formula see original document page 156</formula>

Uma mistura de 2-benzilamino-5-nitro-benzenossulfona- mida (Exemplo 17ci, 15 g, 48,81 mmol) e 5% paládio em pó de carbono ativado (molhado, nominalmente 50% água, 6 g) em metanol (500 mL) foi aquecida a 55°C. A mistura foi desgasificada enquanto sob agitação e o frasco foi carregado com gás de hidrogênio via balão. Depois de agitação durante 16 h sob 1 atmosfera de gás de hidrogênio, a reação foi filtrada através de Celite e concentrada a vácuo para dar o produto desejado, 2,5-diamino-benzenossulfonamida (8,55 g, 45,67 mmol, 93,6% de rendimento) na forma de um sólido bronzeado. 1H NMR (400 MHz, DMSO-de) d: 4,56 (2H, bs), 4,98 (2H, bs), 6,58 - 6,59 (2H, m), 6,87 (1H, d, J= 1,6 Hz), 7,00 (2H, s). LC-MS (ESI) calculado para C6H9N3O2S 187,04, encontrado 188,2 [M+H+] (100%).

d) 2-amino-5-metanossulfonilamino-benzenossulfonami-

<formula>formula see original document page 156</formula>

-2,5-diaminobenzenossulfonamida (Exemplo 17c, 11,16 g, 59,61 mmol) foi dissolvido em acetonitrila (300 mL) e foi adicionada piridina (7,07 g, 89,41 mmol). Foi adicionado cloreto de metanossulfo- nila (7,17 g, 62,59 mmol) gota a gota durante um período de 10 minutos e a mistura de reação foi agitada durante 16 h a 25°C depois do que se formou um precipitado. A maioria da acetonitrila foi removida a vácuo e foi adicionada água (200 mL) para dar uma solução clara. O produto começou a precipitar lentamente e a mistura foi colocada num banho de gelo durante 3 h. O precipitado foi coletado por filtração a vácuo e seco sob alto vácuo para dar o produto desejado, 2-amino-5- metanossulfonilamino-benzenossulfonamida (também feito nos Exem- plos 3d e 3d') (11,1 g, 41,84 mmol, 70,2% de rendimento) na forma de um sólido marrom. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 2,89 (3H, s), 6,82 (1H, d, J= 8,5 Hz), 7,20 (1H, dd, Ji = 8,5 Hz, J2 = 2,5 Hz), 7,58 (1H, d, J = 2,5 Hz). LC-MS (ESI) calculado para C7HnN3O4S2 265,02, encontrado 266,0 [M+H+].

e) Ester etílico do ácido iV-(4-Metanossulfonilamino-2- sulfamoil-fenil) -malonâmico <formula>formula see original document page 157</formula> .2-Amino-5-metanossulfonilamino-benzenossulfonamida

(Exemplo 17d, 23,27 g, 87,81 mmol) foi dissolvido em N,N- dimetilacetamida (100 mL) e dietil éter (100 mL). Foi adicionado etil-3- cloro-3-oxo-proprionato (13,88 g, 92,20 mmol) e a mistura de reação foi agitada a 25°C durante 1 h. A mistura de reação foi diluída com aceta- to de etila (400 mL) e foi extraída com a água (400 mL). A camada aquosa extraída de volta com acetato de etila (2 χ 200 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de sódio, filtradas e a maioria do solvente foi removida a vácuo até um volume de -100 mL. À solução agitada foi adicionado hexano (-100 mL) após o que se formou um precipitado. O precipitado foi coletado por filtração a vácuo, lavado com hexano e seco sob alto vácuo para dar o produto analiticamente puro, éster etílico do ácido iV-(4-metanossulfonilamino-2-sulfamoil- fenil)-malonâmico (31,22 g, 85,53 mmol, 97,4% de rendimento) na forma de um sólido marrom claro. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) 6: 1,31 (3H, t, J= 7,0 Hz), 3,00 (3H, s), 3,59 (2H, s), 4,25 (2H, quarteto, J = 6,9 Hz), 7,42 - 7,45 (1H, m), 7,86 (1H, m), 7,92 (1H, d, J= 8,8 Hz).

Alternativamente, o éster etílico do ácido N-(4-metanos- sulfonilamino-2 - sulfamoil-fenil) -malonâmico pode ser preparado como se segue:

a 2-amino-5-metanossulfonilamino-benzenossulfonamida (Exemplo 17d, 175 mg, 0,66 mmol) foi adicionado dietil malonato (297 mg, 1,66 mmol) e aquecido a 160°C durante 60 minutos. Depois de arrefecimen- to a 25°C, foi adicionada uma mistura 1: 1 de acetato de etila/hexano (5 mL), após o que como precipitou um branco sólido. O sólido foi coletado por filtração a vácuo, lavado duas vezes com uma mistura 1: 1 de acetato de etila/hexano e seco sob vácuo alto para dar o produto desejado, éster etílico do ácido i\T-(4-metanossulfonilamino-2-sulfamoil- fenil)-malonâmico (179 mg, 0,47 mmol, 72% de rendimento) na forma de um sólido amarelado. 1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ: 1,32 (t, 3H, J = 7,0 Hz), 3,00 (s, 3H), 3,60 (s, 2H), 4,25 (quarteto, 2H, J= 6,8 Hz), 7,44 (dd, 1H, Ji = 3,2 Hz, J2 = 8,4 Hz), 7,87 (d, 1H, J= 5,6 Hz), 7,92 (d, 1H, J = 8,4 Hz). LC-MS (ESI+) calculado para Ci2Hi7N3O7S 2379,05, encon- trado 380,1 [M+H+].

f) Éster metílico do ácido iV-(4-Metanossulfonilamino-2- sulfamoilfenil) malonâmico <formula>formula see original document page 159</formula>

Adicionou-se cloreto de metil malonila (9,05 mL, 84,4 mmol) gota a gota durante 10 minutos a uma solução de 2-amino-5- metanossulfonilaminobenzenossulfonamida (Exemplo 17d, 20,35 g, 76,7 mmol) em NiN-dimetilacetamida (90 mL) a 0°C. A mistura foi deixada aquecer a 25°C e agitada a essa temperatura durante 1 h. Uma solução de bicarbonato de sódio (7,09 g, 84,4 mmol) em água (200 mL) foi, então, adicionada via funil de adição durante 15 minutos (foram notados evolução de gás e uma exotermia suave) seguida da rápida adição de um volume adicional de água (200 mL). A solução resultante foi, então, semeada com uma pequena quantidade de éster metílico do ácido N-(4-metanossulfonilamino-2-sulfamoilfenil)malonámi- co (cerca de 15 mg). A mistura foi agitada durante 21 h a 25°C tempo durante o qual se formou um precipitado bronzeado. Este material foi coletado por filtração, lavado com água (150 mL) e foi seco num forno a vácuo a 50°C para dar o produto desejado, éster metílico do ácido N-(4- metanossulfonilamino-2-sulfamoilfenil)-malonâmico (24,33 g, 66,6 mmol, 87% de rendimento) na forma de um sólido bronzeado. 1H NMR (400 MHz, DMSO-de) δ: 3,02 (3H, s), 3,60 (2H, s), 3,66 (3H, s), 7,38 (1H, dd, J1 = 2,3 Hz, J2 = 8,6 Hz), 7,53 (2H, bs), 7,73 (1H, d, J = 2,4 Hz), 7,83 (1H, d, J = 8,7 Hz), 9,43 (1H, s), 9,99 (1H, s).

g) Ácido (7-metanossulfonilamino-l,l-dioxo-l,4-dihidro-1λ6- benzo [l,2,4]tiadiazin-3-il-)-acético <formula>formula see original document page 160</formula> Dissolveu-se éster etílico do ácido N-(4-metanossulfonil- amino-2-sulfamoil-fenil)-malonâmico (Exemplo 17e, 9,55 g, 26,16 mmol) em solução aquosa de hidróxido de sódio a 8% (262 mL) e aqueceu-se a IOO0C durante 1,5 h. A mistura de reação foi arrefecida a O0C e a solução foi acidificada adicionando lentamente solução aquosa de ácido clorídrico 12,0 M até que fosse alcançado o pH 1-2. Começou a formar-se um precipitado e a suspensão foi deixada sob agitação durante 30 minutos a 0°C. O precipitado foi coletado por filtração a vácuo, lavado com água fria e seco sob vácuo elevado para dar ácido (7- metanossulfonilamino-1,1 -dioxo-1,4-dihidro- lÀ6-benzo[ 1,2,4]tiadiazin-3-il)- acético (7,20 g, 21,621 mmol, 82,6% de rendimento) na forma de um sólido rosado. 1H NMR (400 MHz, DMSO-de) δ: 3,03 (3H, s), 3,56 (2H, s), 7,33 (1H, d,J = 9,1 Hz), 7,52 - 7,54 (2H, m), 10,09 (1H, s), 12,24 (1H, s), 13,02 (1H, bs). LC-MS (ESI) calculado para CioHiiN3O6S2 333,01, encontrado 334,1 [M+H+].

Alternativamente, pode ser preparado ácido (7-metanos- sulfonilamino-1,1 -dioxo-1,4-dihidro- lÀ6-benzo[ 1,2,4]tiadiazin-3-il-)-acé- tico a partir de 17f como se segue: dissolveu-se éster metílico do ácido N-(4-metanossulfonilamino-2-sulfamoilfenil)-malonãmico (Exemplo 17f,21,75 g, 59,53 mmol) numa solução aquosa de hidróxido de sódio (7,14 g, 178,5 mmol; dissolvido em 180 mL de água) a 25°C. A mistura de reação foi aquecida a IOO0C durante 1 h, DEPOIS, foi gradualmente arrefecida durante 30 minutos a 0°C. Foi adicionada 12,0 M solução aquosa de ácido clorídrico (20 mL, 240 mmol) gota a gota durante 10 minutos via funil de adição, resultando na formação de um precipitado bronzeado. A mistura foi deixada aquecer a 25°C e foi agitada a essa temperatura durante 21 h. O precipitado foi coletado por filtração, lavado com água (150 mL) e foi seco num forno a vácuo a 45°C durante .22 h para dar ácido (7-metanossulfonilamino-l,l-dioxo-l,4-dihidro-lÀ6- benzo[l,2,4]tiadiazin-3-il-)-acético (18,36 g, 55,1 mmol, 93% de rendi- mento) na forma de um sólido bronzeado. 1H NMR (400 MHz, DMSO- d6) δ: 3,03 (3H, s), 3,56 (2H, s), 7,32 - 7,34 (1H, m), 7,51- 7,54 (2H, m), .10,09 (1H, s), 12,26 (1H, s), 13,01 (1H, bs). LC-MS (ESI) calculado para CioHiiN3O6S2 333,01, encontrado 334,1 [M+H+].

h) Éster alílico do ácido l-(3-Cloro-4-fluor-benzilamino)- líí-pirrol-2-carboxílico

<formula>formula see original document page 161</formula>

Adicionou-se cianoborohidreto de sódio (1,11 g, 16,8 mmol) a uma solução de éster alílico do ácido l-amino-lH-pirrol-2- carboxílico (Exemplo lb, 1,12 g, 6,74 mmol), 3-cloro-4-fluorbenzaldeído (1,32 g, 8,08 mmol) e ácido acético (1,2 mL) em metanol (50 mL) a 25°C. A mistura de reação foi agitada a 25°C durante 18 h, extinta com solução saturada de bicarbonato de sódio aquoso e foi extraída com acetato de etila (2 χ 50 mL). As camadas orgânicas foram secas sobre sulfato de magnésio, filtradas e concentradas a vácuo. Purificação do resíduo por cromatografia por coluna flash (Teledyne Isco RediSep 40 g, .0—>40% de acetato de etila em hexano) deu o produto desejado, éster alílico do ácido l-(3-cloro-4-íluor-benzilamino)-lH-pirrol-2-carboxílico (1,36 g, 4,41 mmol, 65% de rendimento) na forma de um óleo amarela- do. 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4,06 (2H, d,J= 5,5 Hz), 4,76 (2H, d, J = 5,3 Hz), 5,29 (1Η, d, J = 11,0 Hz), 5,40 (1Η, d, J= 16,4 Hz), 5,96-6,05 (2H, m), 6,58 (1H, t, J= 5,5 Hz), 6,76 1H, (t, J= 1,9 Hz), 6,91 (1H, dd, Ji = 4,3 Hz, J2 = 1,8 Hz), 7,06 (1H, t,J = 8,6 Hz), 7,10-7,14 (1H, m), 7,33 (1H, dd, Ji = 7,1 Hz, J2 = 1,4 Hz).

i) Éster alílico do ácido l-{(3-cIoro-4-fluor-benzil)-[2-(7- metanossulfonil-1,1 -dioxo-1,4-dihidro- lλ6-benzo[ 1,2,4]tiadiazin-3-il)- acetil]-amino}-lH-pirrol-2-carboxílico

<formula>formula see original document page 162</formula>

A uma solução de éster alílico do ácido l-(3-cloro-4-fluor- benzilamino)-lH-pirrol-2-carboxílico (Exemplo 17h, 150,7 mg, 0,488 mmol) em N,iV-dimetilformamida (3,0 mL) foi adicionado ácido (7- metanossulfonilamino-1,1 -dioxo-1,4-dihidro- lÀ6-benzo[ 1,2,4]tiadiazin- 3-il-)-acético (Exemplo 17f, 195,2 mg, 0,586 mmol), 4-dimetilaminopi- ridina (18,1 mg, 0,147 mmol) e cloreto de l-[3-(dimetilamino)propil]-3- etilcarbodiimida (114,5 mg, 0,586 mmol). Depois de agitação a 25°C durante 12 h, a mistura foi diluída com acetato de etila e acidificada com solução aquosa de ácido clorídrico 1,0 M a pH 1. A camada orgâ- nica foi separada e a camada aquosa foi extraída com acetato de etila (2 χ 20 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de magnésio anidro, filtradas, concentradas e secas sob vácuo para dar o produto desejado no estado bruto, éster alílico do ácido l-{(3-cloro-4- fluor-benzil) - [2 - (7-metanossulfonilmetil-1,1-dioxo-1,4-dihidro-À6-benzo [ 1,2,4]tiadiazin-3-il)-acetil]-amino}-lH-pirrol-2-carboxílico na forma de um óleo um pouco amarelo. O produto bruto desejado foi usado na etapa seguinte sem purificação adicional. LC-MS (ESI) calculado para C25H23ClFN5O7S2 623,07, encontrado 624,2 [M+H+].

j) N-{3-[l-(3-cloro-4-fluor-benzil)-4-hidroxi-2-oxo-1,2- dihidro-pirrolof 1,2-fa]piridazin-3-il-]-1,1 -dioxo-1,4-dihidro- lÀ6-benzo [ 1,2,4]tiadiazin-7-il}-metanossulfonamida

<formula>formula see original document page 163</formula>

A uma solução de éster alílico do ácido l-{(3-cloro-4- fluor-benzil) - [2 - (7 -metanossulfonilmetil-1,1 -dioxo-1,4-dihidro- lÀ6-benzo [l,2,4]tiadiazin-acetil]-amino-3-il}-lH-pirrol-2-carboxílico (Exemplo 17i, 304,5 mg, 0,488 mmol) em etanol absoluto (5 mL) foi adicionada uma solução de etóxido de sódio a 21% em etanol (1,1 mL, 2,95 mmol). Depois de agitação a 60°C durante 12 h, a mistura foi diluída com acetato de etila e acidificada com solução aquosa 1,0 M de ácido clorí- drico em que se formou um precipitado. O sólido foi coletado por filtração a vácuo para dar o produto desejado, iV-{3-[l-(3-cloro-4-fluor- benzil)-4-hidroxi-2-oxo-1,2-dihidro-pirrolo[ 1,2-b]piridazin-3-il-]-1,1 -di- oxo-1,4-dihidro- lÀ6-benzo[ 1,2,4]tiadiazin-7-il}-metanossulfonamida (88,5 mg, 0,156 mmol, 32% de rendimento) na forma de um sólido amarelado. O filtrado foi extraído com acetato de etila (2 χ 20 mL). As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de magnésio anidro, filtradas e concentradas a vácuo. A mistura bruta foi purificada por purificação de HPLC (Coluna Luna 5μ Cl 8 (2) 100Â AXIA 150 χ 21,2 mm, 5 micra, 25%-100% em 12 minutos @ 30 mL/min de velocidade de fluxo, ácido trifluoracético a 0,05% em acetonitrila/ ácido trifluoracético a 0,05% em água) para dar mais do produto desejado, N-{3-[l-(3-cloro- .4-fluor-benzil)-4-hidroxi-2-oxo-l,2-dihidro-pirrolo[l,2-b]piridazin-3-il-]- .1,1 -dioxo-1,4-dihidro- lÀ6-benzo[ 1,2,4]tiadiazin-7-il}-metanossulfonami- da (18,4 mg, 0,033 mmol, 7% de rendimento; rendimento total de 39%) na forma de um sólido amarelado. 1H NMR (400 MHz, DMSOd6) d 3,06 (3H, s), 5,61 (2H, s), 6,57 (1H, s), 6,98 (1H, s), 7,37 (2H, d, J = 7,6 Hz), .7,52 (1H, dd, Ji = 8,5 Hz, J2 = 2,4 Hz), 7,59-7,68 (4H, m), 10,17 (1H, s). LC-MS (ESI) calculado para C22Hi7ClFN5O6S2 565,03, encontrado 566,2 [M+H+].

Testes Biológicos

A capacidade de os compostos da Fórmula I inibirem a replicação de HCV pode ser demonstrada nos seguintes ensaios in vitro.

Os compostos foram testados quanto à inibição da polimerase de HCV. Os ensaios foram realizados num FlashPlate de 96 poços revestidos de estreptavidina usando 20 nM de enzima, 0,5 μΟΐ de [(a-33P]GTP, 0,6 μΜ GTP e 250 nM 5' biotinilado oligo (rG13)/poli rC em .20 mM Tris-HCl, pH 7,5, 5 mm MgCl2, 5 mm ditiotreitol, 0,1 g/L de soro de albumina bovina e 100 U/mL de inibidor de RNAse. A reação foi parada por aspiração depois de 75 minutos a 28°C e a placa foi lavada várias vezes. Depois de lavar e secar a placa, a radioatividade incorpo- rada foi contada usando um contador de cintilação de Microbeta. Os valores de IC50 foram calçculados em relação aos dados de controle sem inibição e os dados de inibição foram ajustados a uma equação de IC50 de 4 parâmetros. Para inibidores muito potentes, os dados foram ajustados a uma equação quadrática de ligação forte para obter valores de IC50.

Os resultados de teste (valores de IC50) para compostos da Fórmula I estão resumidos na Tabela 1, em que ++ significa inibição 164/166

da polimerase NS5B com valores de IC50 menores do que 0,10 μΜ e + significa valores de IC50 entre 0,10 μΜ e 3 μΜ.

Tabela 1

<table>table see original document page 165</column></row><table> Ensaio do Réplicon HCV (BC5O Réplicon (μΜ))

O componente da cultura de célula do ensaio é essenci- almente executado como descrito por Bartenschlager e colaboradores, Hepatology, 35, 694-703 (2002), em que células de réplicon HCV Huh 7/C24 exponencialmente crescentes são semeadas a 4,5 χ IO3 célu- las/poço em placas de 96 poços e 24 horas mais tarde são tratadas com concentração de composto de logaritmo seis ponto meio. Depois de 72 horas de exposição, a mídia é descartada da placa de ensaio de compos- to e as monocamadas de células são lisadas por adição de 150 μΐ de mistura de Iise (Genospectra) com incubação a 53°C durante 45 minu- tos. A seguir à Incubação, cada lisatro é misturado completamente e 5 μl (sonda de NS3) ou 10 μΐ (sonda de GAPDH) de cada lisato são, então, transferidos para a placa de captura e analisados por ensaio de bDNA.

Ensaio do DNA Ramificado (bDNA)

Com base nas seqüências providas para NS3 [AJ242652], Genospectra (Fremont, CA, EUA) projetou e sintetizou sondas para estes produtos de análise (junto com GAPDH). A análise celular bDNA é essencialmente executada como descrito no protocolo de Genospectra (detalhes em Shyamala, V. e colaboradores, Biochem Anal, 266, 140-7 (1999)), em que extensores de captura de alvos específicos, extensores de etiqueta e sondas de bloqueio são adicionados à placa de captura depois da adição de 5 ou 10 μΐ de lisato de células. Depois de anelação durante a noite, tempo durante o qual o RNA alvo é capturado para a placa via interação com os extensores de captura, a placa é lavada e então o amplificador (que se liga via os extensores de etiqueta) e a sonda de etiqueta são seqüencialmente adicionados.

Depois da subseqüente adição do substrato quimiolumi- gênico (dioxetano), cada placa é lida pelo luminômetro (Contador Wallac .1420 Multilabel HTS Victor 2). O sinal de luminescência é proporcional à quantidade de mRNA presente em cada lisato. Além das amostras, os controle de fundo (nenhuma sonda) apenas do lisato de células são também incluídos em cada placa de ensaio de bDNA e o sinal médio destes poços de controle é subtraído da leitura da amostra antes da análise. O porcentual de nenhum controle de droga é determinado para ambos os sinais de NS3 e GAPDH para cada composto também. O percentual de inibição é determinado para cada concentração de com- posto em relação ao controle de nenhuma droga para calcular o EC50.

Deve ficar entendido que a descrição precedente é de natureza exemplificativa e explicativa e pretende ilustrar a invenção e suas modalidades preferidas. Através de experimentação rotineira, o especialista reconhecerá modificações e variações evidentes que podem ser feitas sem sair do espírito da invenção.

Claims

''Compostos, Composição Farmaceuticamente Aceitável e Métodos de Inibição da Replicação de Vírus da Hepatite C, de Tratamento de Célula e de Tratamento ou Prevenção da Infecção do Vírus da Hepatite C em Mamífero Carecido do Mesmo"

1 .Composto, caracterizado por que é de acordo com a Fórmula I: <formula>formula see original document page 168</formula> em que R1 é independentemente de 1-3 grupamentos selecionados a partir de hidrogênio, halo, ciano, nitro, hidroxi, -NR8R9, C3-C8 cicloalquil, C1-C6 alquil, alquenil, alquinil, C1-C6haloalquil, C1-6Chidroxialquil, C1-C6 alcoxi, -(C1-C6alquileno)NR8R9, -C(O)OH, -C(0)0(C1-C6 alquil), -C(O)NH (alquil C1-C6), -C(O)(C1-C6alquil), aril ou heterociclil tendo 1, 2, ou 3 átomos de Ν, O ou S, em que R8 e R9 são independentemente H, C1-C6 alquil, C3-C8 cicloalquil, aril ou heterociclil ou R8 e R9 combinam-se com o átomo N a que eles estão ligados para formar um anel heterociclil de 5 ou 6 membros, R2 é hidrogênio, C3-C8 cicloalquil, alquil de C1-C7, alquenil, alquinil, C1- C6haloalquil, C1-C6 hidroxialquil, C1-C6alcoxi, aril ou heterociclil tendo .1, 2, ou 3 Ν, O ou S átomos, R3 é hidrogênio ou C1-C6alquil, R4 é selecionado a partir de <formula>formula see original document page 169</formula> em que n é 0, 1, ou 2, R5 é hidrogênio ou C1-C6alquil, R6 é hidrogênio, halo ou C1-C6alquil e o Anel A é aril ou heterociclil de 5 ou 6 membros, opcionalmente substi- tuído por de 1-3 grupamentos de R7 radicais, em que R7 é H, alquil, alquenil, alquinil, aril, heterociclil, halo, ciano, nitro, OH, -O-alquil, -O- (C1-C6 hidroxialquil), -O-(alcoxi C1-C6), -O-(C1-C6 alquileno)-ciano, -O- (C1-C6 alquileno)-C(O)R10, -OCHR10C(O)O-R11, -OCHR10C(O)NHOH, -O- (C1-Cealquil(O)NR11R12, -O-(C1-C6 alquileno)-NR10C(O)R11, -O-(C1-C6 al- quileno)-NR10C(O)OR10, -O-(C1-C6 alquilenoJ-NR10C(O)NR11R12, -OCHR10 C(O)NR11R12, -0-(C1-C6 alquileno)-S(O)R10, -O-(C1-C6 alquil)-S(O)2R10, -0-(C1-C6 alquileno)-S(O)2NR10R12, -O-(C1-C6 alquileno)-NR10S(O)2NR11 R12, -O-(C1-C6 alquileno)-NR10S(O)2R10, -0-(C1-C6 alquileno)-S(0)2R10, -O -(C1-C6 alquileno)-NR11R12, -(C1-C6 alquileno)-S(O)2R10, -(C1-C6 alquile -O-S(O)2NR11R12, -(C1-C6alquileno)-S(O)R10, -(C1-C6alquile-no)-C(O)R10, -(C1-C6alquileno)-C(O)NR11R12, -(C1-C6alquileno)-NR10C(O)R11, -(C1-C6 alquileno)- NR10S(O)2R11, -(C1-C6alquileno)-NR10C(O)OR11, -(C1-C6alqui leno)- NR10C(O)NR11R12, -(1C1-C6alquileno)-NR10S(O)2NR11 R12, -(C1- C6alquileno)-C(O)OR10, -(C1-C6alquileno)-NR11R12, -NR11R12, -NR11C(O) R12, -NR10S(0)2R11, -NRioS(O)2NR11R12, -C(O)R10, -S(O)R10, -S(O)2R10 ou -S(O)2NR11R12, em que R10, R11 e R12 são independentemente H, C1- C6alquil, C3-C8cicloalquil, aril ou heterociclil ou R10 e R11 ou R11 e R12 combinam-se com o(s) átomo(s) a que estão ligados para formar um anel heterociclil de 5 ou de 6 membros, em que o alquil, alquenil, alquinil, aril, cicloalquil ou grupamentos de heterociclil acima propor- cionados em R1, R2, R7, R8, R9, R10, R11 e R12 são cada um opcional- mente e independentemente substituídos por 1-3 substituintes selecio- nados a partir de alquilamina, amino, aril, cicloalquil, heterociclil, C1-C6 alquil, C1-C6haloalquil, C1-C6hidroxialquil, C1-C6 alcoxi, C1-C6 alquilamina, C1-C6 dialquilamina, C2-C6alquenil ou C2-C6 alquinil, em que cada um dos quais pode ser interrompido por um ou mais hetero átomos, carboxil, ciano, halo, hidroxi, nitro, oxo, -C(O)OH, -C(O)2-(C1-C6 alquil), -C(0)2-(C3-C8 cicloalquil, -C(0)2-(aril), -C(0)2-(heterociclil), C(0)2-(C1-C6 alquileno)aril, -C(0)2-(C1-C6 alquileno)heterociclil, -C(0)2-(Ci-C6alquileno)cicloalquil(0), -(C1-C6 alquil, -C(O)(lC3-C8cicloalquil), -C(0)(aril), -C(O)(heterociclil, -C(0)(C1-C6alquile- no)aril, -C(0)(C1-C6 alquileno)heterociclil e -C(O)(lC1-C6alquil)cicloalquil, em que cada dos substituintes opcionais acima pode ser opcionalmente ainda substituído por 1-5 substituintes selecionados a partir de amino, ciano, halo, hidroxi, nitro, Ci-Cõalquilamina, Ci-Côdialquilamina, Ci-Cõ alquil, Ci-Cõalcoxi, Ci-Cealquenil e Ci-Cehidroxialquil, em que cada alquil é opcionalmente substituído por um ou mais substituintes de halo ou um sal, hidrato, tautômero estereoisômero farmaceu- ticamente aceitável dos mesmos.

2.Composto, de acordo com a Reivindicação 1, caracterizado por que R1 é selecionado a partir de hidrogênio, halo, ciano, hidroxil, -NR8R9, C3-C8 cicloalquil, C1-C6 alquil, alquenil, alquinil, C1-C6 alcoxi, -(C1-C6 alquileno)NR8R9, -C(O)OR8, -C(O)NR8R9, -C(O)R8, aril ou heterociclil tendo 1, 2 ou 3 átomos de Ν, O ou S, em que R8 e R9 são independen- temente H, C1-C6 alquil, C3-C8 cicloalquil, aril ou heterociclil ou R8 e R9 combinam-se com o átomo de N a que estão ligados para formar um anel heterociclil de 5 ou 6 membros.

3. Composto, de acordo com a Reivindicação 1, caracterizado por que R1 é selecionado a partir de <formula>formula see original document page 171</formula> em que R13, R14 e R15 são independentemente selecionados a partir de hidrogênio, alquilamina, amino, aril, cicloalquil, heterociclil, C1-C6 alquil, C1-C6 alcoxi, carboxil, ciano, halo e hidroxil ou R13 e R14 combi- nam-se com o átomo de N a que estão ligados para formar um anel heterociclil de 5 ou 6 membros.

4.Composto, de acordo com a Reivindicação 1, caracterizado por que R1 é selecionado a partir de hidrogênio, flúor, ciano e metil.

5. Composto, de acordo com a Reivindicação 1, caracterizado por que R2 é selecionado a partir de C3-C8 cicloalquil, Ci-Cõ alquil, alquenil, alquinil, aril e heterociclil tendo 1, 2 ou 3 átomos de Ν, O ou S, em que os grupamentos alquil, alquenil, alquinil, aril, cicloalquil ou heterociclil são cada um opcional e independentemente substituídos por 1-3 subs- tituintes selecionados a partir de aril, cicloalquil, heterociclil, C1-C0 alquil, C1-C0 alcoxi, Ci-Cõ alquilamina, C2-C6 alquenil ou C2-C6 alquinil, em que cada um pode ser interrompido por um ou mais hetero átomos e opcionalmente substituído por ciano ou halo.

6. Composto, de acordo com a Reivindicação 1, caracterizado por que R2 é selecionado a partir de em que X é O ou S e η = 0, 1 ou 2.

7. Composto, de acordo com a Reivindicação 6, caracterizado por que R2 é selecionado a partir de <formula>formula see original document page 174</formula>

8. Composto, de acordo com a Reivindicação 6, caracterizado por que R2 é selecionado a partir de <formula>formula see original document page 174</formula>

9. Composto, de acordo com a Reivindicação 1, caracterizado por que R3 e R5 são independentemente selecionados a partir de hidrogênio, metil e etil.

10.Composto, de acordo com a Reivindicação 1, caracterizado por que R6 é selecionado a partir de hidrogênio, flúor, metil e etil.

11. Composto, de acordo com a Reivindicação 1, caracterizado por que n é 2.

12. Composto, de acordo com a Reivindicação 1, caracterizado por que o Anel A é selecionado a partir de <formula>formula see original document page 175</formula> em que X é S, O, NH ou -N(Ci-C6 alquil).

13. Composto, de acordo com a Reivindicação 12, caracterizado por que o Anel A é selecionado a partir de <formula>formula see original document page 175</formula>

14. Composto, de acordo com a Reivindicação 13, caracterizado por que o Anel A é <formula>formula see original document page 175</formula> em que R7 é hidrogênio, -(Ci-C6 alquileno)-S(0)2NR11R12, -(Ci-C6 alqui- IenoJ-S(O)R10, -(Cl-C6alquileno)-S(0)2R10, -NRiOS(O)2R11 ou -NR1OS(O)2N RllRl2

15. Composto, de acordo com a Reivindicação 1, caracterizado por que R7 é selecionado a partir de <formula>formula see original document page 176</formula> em que η é um inteiro desde 0 até 6, m é um inteiro desde 1 até 6, R16, R17, e R18 são independentemente selecionados a partir de hidrogênio, C1-C6 alquil, C3-C8 cicloalquil, aril e heterociclil, ou R16 e R17 ou R17 e R18 combinam-se com o(s) átomo(s) a que estão ligados para formar um anel heterociclil de 5 ou 6 membros, R19 é hidrogênio, C1-C6 alquil, C3- C8 cicloalquil-S(0)2R10 ou -S(O)2NR11R12, em que R10, R11 e R12 são independentemente selecionados a partir de hidrogênio, C1-C6 alquil C3- C8, cicloalquil, aril ou heterociclil, ou R11 e R12 combinam-se com o átomo de N a que estão ligados para formar um anel heterociclil de 5 ou 6 membros.

16. Composto, de acordo com a Reivindicação 1, caracterizado por que é selecionado a partir de <formula>formula see original document page 178</formula>

17. Composto, caracterizado por que selecionado a partir de <formula>formula see original document page 179</formula>

18. Composição Farmaceuticamente Aceitável, caracterizada por que compreende um composto da Reivindicação 1 e um veículo farma- ceuticamente aceitável.

19. Método de Inibição da Replicação de Vírus da hepatite C, caracterizado por que compreende expor os vírus da hepatite C a uma concentração terapeuticamente efetiva de um composto da Reivindica- ção 1.

20. Método de Tratamento de Célula, tendo pelo menos alguns elementos de vírus da hepatite C, caracterizado por que compreende incubar a referida célula com um composto da Reivindicação 1.

21. Método de Tratamento ou Prevenção da Infecção do Vírus da Hepatite C em Mamífero Carecido do Mesmo, caracterizado por que compreende administrar ao mamífero uma quantidade terapeutica ou profilaticamente efetiva de um composto da Reivindicação 1.

22. Método de Tratamento ou Prevenção da Infecção do Vírus da Hepatite C em Mamífero Carecido do Mesmo, de acordo com a Reivindicação 21, caracterizado por que o mamífero é uma pessoa humana.

23. Método de Tratamento ou Prevenção da Infecção do Vírus da Hepatite C em Mamífero Carecido do Mesmo, de acordo com a Reivindicação 21, caracterizado por que compreende ainda administrar um agente terapêutico adicional ao mamífero.

24. Método de Tratamento ou Prevenção da Infecção do Vírus da Hepatite C em Mamífero Carecido do Mesmo, de acordo com a Reivindicação 23, caracterizado por que o agente terapêutico adicional é selecionado do grupo que consiste num antibiótico, um agente antie- mético, um antidepressivo, um agente antifúngico, um agente anti- inflamatório, um agente antiviral, um agente anticâncer, um agente imunomodulador, um interferon A, um interferon β, uma ribavirina, um agente alquilante, um hormônio, uma citocina e um modulador seme- lhante a receptor de sinal.

25. Método de Tratamento ou Prevenção da Infecção do Vírus da Hepatite C em Mamífero Carecido do Mesmo, de acordo com a Reivindicação 23, caracterizado por que o agente terapêutico adicional é um modulador semelhante a receptor de sinal.