BRPI0713749A2

BRPI0713749A2 - formulações oftálmica e liofilizável de um antagonista do fator de crescimento endotelial vascular, método para produzir uma formulação liofilizada de um antagonista do fator de crescimento endotelial vascular, e, seringa pré-carregada adequada para administração intravìtrea

Info

Publication number: BRPI0713749A2
Application number: BRPI0713749-4A
Authority: BR
Inventors: Eric Furfine; Daniel Dix; Kenneth S Graham; Kelly Frye
Original assignee: Regeneron Pharma
Priority date: 2006-06-16
Filing date: 2007-06-14
Publication date: 2012-11-06
Also published as: AU2007261536A1; US20250042972A1; JP5597271B2; LT2944306T; KR20090018807A; US11732024B2; US20160213608A1; PT2364691E; WO2007149334A3; DK2364691T3; US20130274189A1; BRPI0713749B1; EP2944306A1; EP2364691A1; AU2007261536C1; PT2944306T; ZA200809827B; RU2009101226A; US20160244505A1; IL195788A

Abstract

FORMULAçõES OFTáLMICA E LIOFILIZáVEL DE UM ANTAGONISTA DO FATOR DE CRESCIMENTO ENDOTELIAL VASCULAR, MéTODO PARA PRODUZIR UMA FORMULAçãO LIOFILIZADA DE UM ANTAGONISTA DO FATOR DE CRESCIMENTO ENDOTELIAL VASCULAR, E, SERINGA PRé-CARREGADA ADEQUADA PARA AMINISTRAçãO INTRAVìTREA. As formulações oftálmicas de um antagonista de proteína de fusão específica do fator de crescimento endotelial vascular são preparadas de forma adequada para administração aos olhos. As formulações oftálmicas incluem uma formulação líquida estável e uma formulação liofilizável. Preferivelmente o antagonista protéico tem a sequência de aminoácidos apresenta na SEQ ID NO:4.

Description

"FORMULAÇÕES OFTÁLMICA E LIOFILIZÁVEL DE UM ANTAGONISTA DO FATOR DE CRESCIMENTO ENDOTELIAL VASCULAR, MÉTODO PARA PRODUZIR UMA FORMULAÇÃO LIOFILIZADA DE UM ANTAGONISTA DO FATOR DE CRESCIMENTO ENDOTELIAL VASCULAR, E, SERINGA PRÉ-CARREGADA ADEQUADA PARA ADMINISTRAÇÃO INTRAVÍTREA" FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO

A presente invenção é dirigida a formulações farmacêuticas adequadas para administração intravítrea compreendendo agentes capazes de inibir o fator de crescimento endotelial vascular (VEGF), e a métodos para produzir e usar tais formulações. A invenção inclui formulações farmacêuticas líquidas tendo estabilidade aumentada, bem como formulações que podem ser liofilizadas e reconstituídas para administração intravítrea.

DEMONSTRAÇÃO DA TÉCNICA RELACIONADA

A expressão do fator de crescimento endotelial vascular (VEGF) é quase ubíqua no câncer humano, compatível com seu papel como um mediador chave da neoangiogênese tumoral. O bloqueio da função do VEGF, pela ligação à molécula ou a seu receptor VEGFR-2, inibe o crescimento das células do tumor implantado em múltiplos modelos de xenoenxertos diferentes (ver, por exemplo, Gerber et ai. (2000) Câncer Res. 60: 6253-6258). Um antagonista protéico de fusão específico do VEGF solúvel, denominado um "captador do VEGF" foi descrita (Kim et al. (2002) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 99: 11399-11404; Holash et al. (2002) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 99: 11393-11398).

As formulações oftálmicas são conhecidas. Ver, por exemplo, as U.S. 7.033.604 e 6.777.429. Uma formulação oflálmica de um anticorpo do VEGF é descrita na U.S. 6.676.941.

A liofilização (secagem por congelamento sob condições controladas) é comumente usada para armazenagem de longo prazo das proteínas. A proteína liofilizada é substancialmente resistente à degradação, à agregação, à oxidação e a outros processos degenerativos enquanto no estado seco por congelamento (ver, por exemplo, a U.S. 6.436.897). BREVE SUMÁRIO DA INVENÇÃO

Formulações estáveis de um antagonista de proteínas de fusão específico do VEGF são apresentadas. São fornecidas formulações farmaceuticamente aceitáveis que compreendem um antagonista "captador" do VEGF com um carreador farmaceuticamente aceitável. Nas formas de realização específicas, as formulações líquidas e liofilizadas são apresentadas.

Em um primeiro aspecto, uma formulação oftálmica líquida estável de um antagonista de proteína de fusão específico do VEGF é apresentado, compreendendo uma proteína de fusão que compreende um componente receptor consistindo essencialmente de um domínio 2 semelhante à imunoglobulina (Ig) de um primeiro receptor do VEGF e domínio 3 de Ig de um segundo receptor do VEGF, e um componente multimerizante (também denominado de um "captador do VEGF"). Em uma forma de realização específica do antagonista de proteína de fusão específico do VEGF, o primeiro receptor do VEGF é Fltl e o segundo receptor de VEGF é Flkl ou Flt4. Em uma forma de realização mais específica, a proteína de fusão tem as seqüências de aminoácidos de SEQ ID NO: 2 ou SEQ ID NO: 4. Preferivelmente, o antagonista do VEGF é um dímero compreendendo duas proteínas de fusão da SEQ ID NO: 4.

Em um aspecto, é fornecida uma formulação oftálmica líquida estável que compreende de 1 a 100 mg/ml do antagonista de proteína de fusão específico do VEGF, 0,01 a 5 % de um ou mais co-solventes orgânicos, 30 a 150 mM de um ou mais agentes de tonicidade, 5 a 40 mM de um agente de tamponamento e, opcionalmente, 1,0 a 7,5 % de um agente de estabilização, pH entre cerca de 5,8 a 7,0.

Em uma ou mais formas de realização específicas, o co- solvente orgânico pode ser polissorbato, por exemplo polissorbato 20 ou polissorbato 80, o polietileno glicol (PEG), por exemplo o PEG 3350, ou o propileno glicol, ou uma combinação destes; o agente de tonicidade pode ser, por exemplo, cloreto de sódio ou cloreto de potássio; o agente de estabilização pode ser sacarose, sorbitol, glicerol, trealose ou manitol; e o agente de tamponamento pode ser, por exemplo, o tampão de fosfato. Em uma forma de realização específica, o tampão de fosfato é um tampão de fosfato de sódio.

Em várias formas de realização, o co-solvente orgânico é o polissorbato e/ou o PEG, o agente de estabilização é a sacarose, o agente de tamponamento é o tampão de fosfato, e o agente de tonicidade é o cloreto de sódio.

Mais especificamente, a formulação oftálmica líquida estável compreende cerca de 40 a 50 mg/ml do antagonista de VEGF (SEQ ID NO: 4), cerca de 10 mM de tampão de fosfato, 0,01 a 3 % de polissorbato e/ou PEG, 40 a 135 mM de cloreto de sódio e, opcionalmente, 5,0 % de sacarose, pH de cerca de 6,2 a 6,3.

Em uma forma de realização preferida específica, a formulação oftálmica líquida estável compreende cerca de 50 mg/ml do antagonista de VEGF (SEQ ID NO: 4), 10 mM de tampão de fosfato de sódio 10 mM, 50 mM de cloreto de sódio, 0,1 % de polissorbato e 5 % de sacarose, pH de cerca de 6,2 a 6,3.

Em uma forma de realização preferida específica, a formulação oftálmica líquida estável compreende cerca de 50 mg/ml do antagonista do VEGF (SEQ ID NO: 4), 10 mM de tampão de fosfato de sódio, 50 mM de cloreto de sódio, 3 % de PEG, e 5 % de sacarose, pH de cerca de 6,2 a 6,3.

Em uma forma de realização preferida específica, a formulação oftálmica líquida estável compreende cerca de 40 mg/ml do antagonista do VEGF (SEQ ID NO: 4), 10 mM do tampão de fosfato de sódio, 40 mM de cloreto de sódio, 0,03 % de polissorbato e 5 % de sacarose, pH de cerca de 6,2 a 6,3.

Em outro aspecto, é fornecida uma formulação oftálmica líquida estável que compreende 1 a 100 mg/ml do antagonista de proteína de fusão específica do VEGF, 0,01 a 5 % de um ou mais co-solventes orgânicos; 5 a 40 mM de um agente de tamponamento; e opcionalmente 30 a 150 mM de um ou mais agentes de tonicidade e/ou 1,0 a 7,5 % de um agente de estabilização; tendo um pH entre cerca de 5,8 a 7,0.

Em várias formas de realização, o antagonista do VEGF (SEQ ID NO: 4) se acha presente em uma concentração de cerca de 10 a cerca de 80 mg/ml. Em várias formas de realização, o antagonista do VEGF (SEQ ID NO: 4) se acha presente em uma concentração de cerca de 10, de cerca de 20, de cerca de 30, de cerca de 40, de cerca de 50, de cerca de 60, de cerca de 70 ou de cerca de 80 mg/ml. Em uma forma de realização preferida, o antagonista do VEGF (SEQ ID NO: 4) se acha presente em uma concentração de cerca de 40 mg/ml.

Em outra forma de realização, o agente de estabilização é selecionado de um ou mais dentre sacarose, sorbitol, glicerol, trealose e manitol.

Em outra forma de realização, o co-solvente orgânico é selecionado de um ou mais dentre polissorbato, por exemplo o polissorbato 20 ou o polissorbato 80, o polietileno glicol (PEG), por exemplo o PEG 3350, e o propileno glicol.

Em outra forma de realização, o tampão é um tampão de fosfato, por exemplo o fosfato de sódio.

Em outra forma de realização, o agente de tonicidade é um sal, por exemplo o cloreto de sódio.

Em uma forma de realização, a formulação oftálmica líquida estável compreende 10 mM de tampão de fosfato de sódio, cerca de 0,03 a cerca de 0,1 % de polissorbato e/ou cerca de 3 % de PEG ou de propileno glicol, cerca de 40 mM de cloreto de sódio e cerca de 5 % de sacarose. Em uma forma de realização específica, a formulação oftálmica líquida estável compreende 10 mM de tampão de fosfato de sódio, cerca de 0,03 % de polissorbato, cerca de 40 mM de cloreto de sódio e cerca de 5 % de sacarose. Em outra forma de realização específica, o pH da formulação é de cerca de 6,2 a cerca de 6,3. Em outra forma de realização específica, o pH é obtido pela mistura de fosfato de sódio mono- e dibásico com o pH desejado, sem titulação de ácido/base.

Em uma forma de realização específica, a formulação oftálmica líquida estável consiste essencialmente de um antagonista do VEGF (SEQ ID NO: 4) em 40 mg/ml, 10 mM de tampão de fosfato de sódio, polissorbato a 0,03 %, cloreto de sódio a 40 mM, e sacarose a 5 %, pH 6,2-6,3.

Em outro aspecto, uma formulação oftálmica líquida estável é apresentada, a qual compreende cerca de 10 a cerca de 80 mg/ml de antagonista do VEGF, cerca de 10 mM do tampão de fosfato de sódio, cerca de 0,03 % de polissorbato, e cerca de 135 mM de cloreto de sódio, pH de 6,2 a 6,3.

Em várias formas de realização, o antagonista do VEGF (SEQ ID NO: 4) se acha presente em uma concentração de cerca de 10 a cerca de 80 mg/ml. Em várias formas de realização, o antagonista de VEGF (SEQ ID NO: 4) se acha presente em uma concentração de cerca de 10, de cerca de 20, de cerca de 30, de cerca de 40, de cerca de 50, de cerca de 60, de cerca de 70, de cerca de 80 mg/ml. Em uma forma de realização específica, o antagonista do VEGF (SEQ ID NO: 4) se acha presente em uma concentração de cerca de 40mg/ml.

Em uma forma de realização, a formulação oftálmica líquida estável compreende 40 mg/ml de antagonista do VEGF (SEQ ID NO: 4), 10 mM de tampão de fosfato de sódio, 0,03 % de polissorbato e 135 mM de cloreto se sódio em pH de 6,2 a 6,3. Em uma forma de realização específica, a formulação oftálmica líquida estável consiste essencialmente de 40 mg/ml de antagonista do VEGF (SEQ ID NO: 4), 10 mM de tampão de fosfato de sódio, 0,03 % de polissorbato e 135 mM de cloreto de sódio em pH 6,2 a 6,3.

Em outro aspecto, uma formulação liofilizável de um antagonista do VEGF é apresentada, em que, após a liofilização seguida pela reconstituição, uma formulação oftálmica líquida estável como aqui descrita é obtida.

Em outro aspecto, uma formulação liofilizável de um antagonista de proteína de fusão específica do fator de crescimento endotelial vascular (VEGF) é apresentado, compreendendo de 5 a 50 mg/ml do antagonista do VEGF, 5 a 25 mM de tampão, tal como o tampão de fosfato, 0,01 a 0,15 % de um ou mais co-solventes orgânicos, tais como polissorbato, propileno glicol e/ou PEG e, opcionalmente, 1 a 10 % de um agente de estabilização, tal como a sacarose, o sorbitol, trealose, glicerol ou manitol, pH de cerca de 5,8 a 7,0. Em várias formas de realização, o antagonista do VEGF (SEQ ID NO: 4) se acha presente em cerca de 5, cerca de 10, cerca de 20, cerca de 30 ou cerca de 40 mg/ml. Em uma forma de realização específica, a formulação oftálmica liofilizável da invenção compreende 20 mg/ml do antagonista do VEGF, 10 mM do tampão de fosfato de sódio, 0,03 % do polissorbato, 0,1 % de PEG e 2,5 % de sacarose, pH de cerca de 6,2 a 6,3. Em outras formas de realização, a formulação liofilizável ainda compreende cloreto de sódio. Em uma forma de realização específica o cloreto de sódio se acha presente em uma concentração de cerca de 20 mM. Em outra forma de realização, específica, o cloreto de sódio se acha presente em uma concentração de cerca de 67,5 mM.

Em outra forma de realização específica, a formulação oftálmica liofilizável da invenção compreende 20 mg/ml do antagonista do VEGF, 5 mM de tampão de fosfato de sódio, 0,015 % polissorbato, 20 mM de cloreto de sódio e 2,5 % de sacarose, pH de cerca de 6,2 a 6,3.

Em outra forma de realização, a formulação oftálmica liofilizável compreende 5 mg/ml, 10 mg/ml, ou 40 mg/ml de antagonista do VEGF, 5 mM de tampão de fosfato de sódio, 0,015 % de polissorbato, 20 mM de cloreto de sódio e 2,5 % de sacarose, em pH 6,2 a 6,3. Em uma forma de realização específica, a formulação oftálmica liofilizável consiste essencialmente de 5 mg/ml, 10 mg/ml ou 40 mg/ml de antagonista do VEGF (SEQ ID NO: 4), 5 mM de tampão de fosfato de sódio, 0,015 % de polissorbato, 20 mM de cloreto de sódio e 2,5 % de sacarose, em pH 6,2 a 6,3.

Em outra forma de realização específica, a formulação oftálmica liofilizável compreende 20 mg/ml do antagonista do VEGF, 5 mM de tampão de fosfato de sódio, 0,015 % de polissorbato e 67,5 mM de cloreto de sódio, pH de cerca de 6,2 a 6,3. Em uma forma de realização mais específica, a formulação oftálmica liofilizável consiste essencialmente de 20 mg/ml do antagonista do VEGF (SEQ ID NO: 4), 5 mM de tampão de fosfato de sódio, 0,015 % de polissorbato e 67,5 mM de cloreto de sódio, pH 6,2 a 6,3.

Em outra forma de realização específica, a formulação oftálmica liofilizável compreende 5 mg/ml, 10 mg/ml ou 40 mg/ml de antagonista do VEGF, 5 mM de tampão de fosfato de sódio, 0,015 % de polissorbato e 67,5 mM de cloreto de sódio, pH de cerca de 6,2 a 6,3. Em uma forma de realização mais específica, a formulação oftálmica liofilizável essencialmente consiste de 5 mg/ml, 10 mg/ml ou 40 mg/ml de antagonista do VEGF (SEQ ID NO: 4), 5 mM de tampão de fosfato de sódio, 0,015 % de polissorbato e 67,5 mM de cloreto de sódio, pH de cerca de 6,2 a 6,3.

Geralmente, a formulação reconstituída é cerca de 2 vezes a concentração da formulação pré-liofilizada, por exemplo uma formulação pré- liofilizada de 20 mg de proteína de fusão/ml é reconstituída até uma formulação final de 40 mg de proteína de fusão/ml.

Geralmente, a formulação liofilizada é reconstituída com água estéril adequada para injeção. Em uma forma de realização, o líquido de reconstituição é água bacteriostática.

Em outro aspecto, a invenção retrata um método para produzir uma formulação liofilizada de um antagonista de proteína de fusão específico do VEGF, compreendendo submeter a formulação liofilizável da invenção à liofilização para gerar uma formulação liofilizada. A formulação liofilizável pode ser liofilizada por qualquer método conhecido na técnica para liofilizar um líquido.

Em outro aspecto relacionado, a invenção retrata um método para produzir uma formulação liofilizada reconstituída de um antagonista do VEGF, compreendendo reconstituir a formulação liofilizada da invenção em uma formulação reconstituída. Em uma forma de realização, a formulação reconstituída tem duas vezes a concentração da formulação pré-liofilizada, por exemplo, o método da invenção compreende: (a) produzir uma formulação pré-liofilizada de um antagonista de proteína de fusão específico do VEGF, (b) submeter a formulação pré-liofilizada da etapa (a) à liofilização; e (c) reconstituir a formulação liofilizada da etapa (b).

A invenção ainda retrata formulações oftálmicas providas em uma seringa ou frasco pré-carregados, particularmente adequados para administração intravítrea.

Outros objetos e vantagens se tornarão evidentes de um exame da descrição detalhada resultante.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

A presente invenção não se acha limitada a métodos particulares nem às condições experimentais descritas, já que tais métodos e condições podem variar. Deve também ficar entendido que a terminologia aqui usada se destina a descrever formas de realização específicas apenas, e não significa limitação, a menos que indicado, uma vez que o escopo da presente invenção será limitado apenas pelas reivindicações anexas.

A menos que de outra forma estabelecido, todos os termos e expressões técnicas e científicas usadas neste relatório têm o mesmo significado como comumente entendido por uma pessoa de experiência normal na técnica à qual a invenção pertence. Não obstante quaisquer métodos e materiais semelhantes ou equivalentes àqueles aqui descritos possam ser usados na prática ou nos testes da presente invenção, os métodos e materiais preferidos são agora descritos.

DESCRIÇÃO GERAL

A manipulação e a administração seguras das formulações contendo proteínas representam desafios significativos aos formuladores farmacêuticos. As proteínas possuem propriedades químicas e físicas incomparáveis que apresentam problemas de estabilidade: uma variedade de vias de degradação existem quanto às proteínas, implicando em instabilidade tanto química quanto física. A instabilidade química inclui a desaminação, a agregação, limitação da estrutura peptídica, e oxidação dos resíduos de metionina. A instabilidade física inclui muitos fenômenos, incluindo, por exemplo, a agregação e/ou a precipitação.

A estabilidade química e física pode ser promovida pela remoção de água da proteína. A liofilização (secagem por congelamento sob condições controladas) é comumente usada para armazenagem das proteínas a longo prazo. A proteína liofilizada é substancialmente resistente à degradação, à agregação, à oxidação, e a outros processos degenerativos, enquanto no estado seco por congelamento. A proteína liofilizada pode ser reconstituída com água opcionalmente contendo um preservativo bacteriostático (por exemplo, álcool benzílico) antes da administração.

DEFINIÇÕES O termo "carreador" inclui um diluente, adjuvante, excipiente ou veículo com o qual uma composição seja administrada. Os carreadores podem incluir líquidos estéreis, tais como, por exemplo, água e óleos, incluindo os óleos de petróleo, de origem animal, vegetal ou sintética, tais como, por exemplo, o óleo de amendoim, o óleo de soja, óleo mineral, óleo de sésamo, e outros.

O termo "excipiente" inclui um agente não terapêutico adicionado a uma composição farmacêutica para prover um efeito desejado de consistência ou estabilização. Excipientes farmacêuticos adequados incluem, por exemplo, amido, glicose, lactose, sacarose, gelatina, malte, arroz, farinha, giz, gel de sílica, estearato de sódio, monoestearato de glicerol, talco, cloreto de sódio, leite desnatado em pó, glicerol, propileno, glicol, água, etanol e outros.

O termo "liofilizado" ou "secado por congelamento" inclui um estado de uma substância que tenha sido submetida a um procedimento de secagem tal como a liofilização, em que pelo menos 90 % da umidade tenham sido removidos.

ANTAGONISTAS DO VEGF

Um antagonista do VEGF é um composto capaz de bloquear ou de inibir a ação biológica do fator de crescimento endotelial vascular (VEGF), e inclui proteínas de fusão capazes de aprisionar o VEGF. Em uma forma de realização preferida, o antagonista do VEGF é a proteína de fusão da SEQ ID NO: 2 ou 4; mais preferível a SEQ ID NO: 4. Nas formas de realização específicas, o antagonista do VEGF é expresso em uma linhagem de células de mamíferos tais como a célula do CHO, e pode ser modificado pós-translacionalmente. Em uma forma de realização específica, a proteína de fusão compreende os aminoácidos 27 a 457 da SEQ ID NO: 4 e é glicosilada nos resíduos de Asn 62, 94, 149, 222 e 308. Preferivelmente, o antagonista do VEGF é um dímero composto de duas proteínas de fusão da SEQ ID NO: 4. O antagonista do VEGF dos métodos e formulações da invenção pode ser preparado por qualquer método adequado conhecido na técnica, ou que venha a ser conhecido. O antagonista do VEGF é de preferência substancialmente livre de contaminantes protéicos no momento em que ele seja usado para preparar a formulação farmaceuticamente aceitável. Por "substancialmente livre de contaminantes protéicos" denota-se, de preferência, que pelo menos 90 % do peso da proteína da preparação do antagonista de proteína de fusão específico do VEGF usada para produzir uma formulação, é proteína do antagonista de proteína de fusão do VEGF, mais preferível pelo menos 95 %, o mais preferível pelo menos 99 %. A proteína de fusão é de preferência substancialmente livre de agregados. "Substancialmente livre de agregados" significa que pelo menos 90 % do peso da proteína de fusão não se acha presente em um agregado no momento em que a proteína de fusão é usada para preparar a formulação farmaceuticamente eficaz. A menos que de outra forma estabelecido, os fosfatos empregados são fosfatos de sódio e um pH de tamponamento desejado é obtido pela mistura apropriada de quantidades de fosfato de sódio mono- e dibásico.

FORMULAÇÕES OFTÁLMICAS LÍQUIDAS ESTÁVEIS

Em um aspecto, a invenção fornece uma formulação estável farmaceuticamente aceitável compreendendo um antagonista do VEGF, em que a formulação seja uma formulação líquida adequada para uso ofltálmico. Preferivelmente, a formulação líquida compreende uma quantidade farmaceuticamente eficaz do antagonista do VEGF. A formulação também pode compreender um ou mais carreadores, tampões, agentes de tonicidade, estabilizadores e/ou excipientes farmaceuticamente aceitáveis. Um exemplo de uma formulação líquida farmaceuticamente aceitável compreende um antagonista do VEGF em uma quantidade farmaceuticamente eficaz, um tampão e um co-solvente orgânico tal como o polissorbato, um agente de tonicidade tal como o NaCl, e, opcionalmente, um estabilizador tal como a sacarose ou a trealose.

A estabilidade é determinada de várias maneiras nos pontos do tempo especificados, incluindo a determinação do pH, a inspeção visual da cor e da aparência, a determinação do conteúdo total de proteínas pelos métodos conhecidos na técnica, por exemplo a espectroscopia UV, e a pureza é determinada, por exemplo, por SDS-PAGE, HPLC de exclusão de tamanho, determinação da atividade por bioensaio, a focalização isoelétrica, e a quantificação do isoaspartato. Em um exemplo de um bioensaio útil para se determinar a atividade do antagonista do VEGF, uma linhagem celular BAF/3 VEGFRl/EPOR é usada para se determinar a ligação do VEGF165 pelo antagonista do VEGF da invenção.

As formulações líquidas podem ser armazenadas em um ambiente desprovido de oxigênio. Os ambientes desprovidos de oxigênio podem ser gerados pelo armazenamento das formulações sob um gás inerte tal como, por exemplo, nitrogênio ou argônio. As formulações líquidas são preferivelmente armazenadas em cerca de 5 °C. FORMULAÇÕES OFTÁLMICAS LIOFILIZADAS

Em um aspecto da invenção, é provida uma formulação oftalmicamente aceitável compreendendo um antagonista do VEGF, em que a formulação é uma formulação liofilizável. As formulações liofilizáveis podem ser reconstituídas em soluções, suspensões, emulsões ou em qualquer outra forma adequada para administração ou uso. As formulações liofilizáveis são tipicamente primeiro preparadas como líquidos, depois são congeladas e liofilizadas. O volume líquido total antes da liofilização pode ser menor, igual ou maior do que o volume final reconstituído da formulação liofilizada. O processo de liofilização é bem conhecido daqueles de experiência normal na técnica, e tipicamente inclui a sublimação da água de uma formulação congelada sob condições controladas. As formulações liofilizadas podem ser armazenadas em uma ampla faixa de temperaturas. As formulações liofilizadas podem ser armazenadas a menos de 25 °C, por exemplo, refrigerada em 2 a 8 °C, ou na temperatura ambiente (por exemplo, aproximadamente 25 °C). De preferência as formulações liofilizadas são armazenadas abaixo de cerca de 25 °C, mais preferível em cerca de 4 a 20 °C; abaixo de cerca de 4 °C; abaixo de cerca de -20 °C; cerca de -40 °C; cerca de -70 °C, ou cerca de -80 °C. A estabilidade da formulação liofilizada pode ser determinada por vários meios conhecidos na técnica, por exemplo pela aparência visual do bolo e/ou pelo conteúdo de umidade.

As formulações liofilizadas são tipicamente reconstituídas para uso pela adição de uma solução aquosa para dissolver a formulação liofilizada. Uma ampla variedade de soluções aquosas pode ser usada para reconstituir uma formulação liofilizada. Preferivelmente, as formulações liofilizadas são reconstituídas com o uso de água. As formulações liofilizadas são de preferência reconstituídas com uma solução consistindo essencialmente de água [por exemplo, WFI da USP (Farmacopéia dos Estados Unidos), ou água para injeção) ou água bacteriostática (por exemplo, WFI da USP com 0,9 % de álcool benzílico). Entretanto as soluções contendo tampões e/ou excipientes e/ou um ou mais carreadores farmaceuticamente aceitáveis podem também ser usadas.

As formulações secadas por congelamento ou liofilizadas são tipicamente preparadas de líquidos, isto é, de soluções, suspensões, emulsões etc. Assim, o líquido que deva ser submetido à secagem por congelamento ou à liofilização, preferivelmente compreende todos os componentes desejados em uma formulação líquida reconstituída final. Como resultado, quando reconstituída, a formulação secada por congelamento ou liofilizada se tornará uma formulação líquida desejada após a reconstituição.

EXEMPLOS Antes que os presentes métodos sejam descritos, deve ficar entendido que esta invenção não se acha limitada aos métodos particulares e às condições experimentais descritas, tendo em vista que tais métodos e condições podem variar. Deve também ficar entendido que a terminologia aqui usada se destina a descrever formas de realização particulares apenas, e não é intenção que sejam limitativas, uma vez que o escopo da presente invenção será apenas limitado pelas reivindicações anexas.

A menos que de outra forma definido, todos os termos técnicos e científicos aqui usados têm o mesmo significado como comumente entendido por uma pessoa habilitada na técnica à qual esta invenção pertence. Embora quaisquer métodos e materiais semelhantes ou equivalentes àqueles aqui descritos possam ser usados na prática ou nos testes da presente invenção, os métodos e materiais preferidos são agora descritos.

EXEMPLO 1

ESTABILIDADE DA FORMULAÇÃO LÍQUIDA DE 50 mg/ml DO CAPTADOR DO VEGF ARMAZENADO A 5 °C EM FRASCOS DE VIDRO DE 3 ml.

Uma formulação líquida oftálmica contendo 50 mg/ml de

Captador do VEGF (SEQ ID NO: 4), 10 mM de fosfato, 50 mM de NaCl, 0,1 % de polissorbato 20, 5 % de sacarose, e pH 6,25, foi armazenada em 5 0C em frascos de vidro de 3 ml, e as amostras foram testadas em 3, 6, 9, 12 e 24 meses. A estabilidade foi determinada por SE-HPLC. Os resultados são apresentados na Tabela 1. A turbidez foi medida em OD40S nm; e o percentual de proteína recuperada e a pureza por HPLC de exclusão de tamanho.

TABELA 1

ESTABILIDADE DOS 50 mg/ml DA PROTEÍNA DO CAPTADOR DO VEGF (VGFT-SS065) <table>table see original document page 16</column></row><table>

EXEMPLO 2

ESTABILIDADE DOS 50 mg/ml DA FORMULAÇÃO LÍQUIDA DO CAPTADOR DO VEGF ARMAZENADOS A 5 °C EM FRASCOS DE VIDRO DE 3 ml

Uma formulação líquida contendo 50 mg/ml do Captador do VEGF (SEQ ID NO: 4), 10 mM de fosfato, 50 mM de NaCl, 3 % de polietileno glicol 3350, 5 % de sacarose, e pH de 6,25, foi armazenada em 5 ºC em frascos de vidro de 3 ml, e amostras testadas em 3, 8, 9, 12, 18 e 24 meses. Os resultados da estabilidade são apresentados na Tabela 2. A turbidez, o percentual de proteína recuperada e a pureza foram determinados como descrito acima. TABELA 2

ESTABILIDADE DOS 50 mg/ml DA PROTEÍNA DO CAPTADOR DO VEGF (VGFT-SS065)

<table>table see original document page 16</column></row><table>

EXEMPLO 3

ESTABILIDADE DOS 40 mg/ml DA FORMULAÇÃO LÍQUIDA DO CAPTADOR DO VEGF ARMAZENADOS A 5 °C EM FRASCOS DE

VIDRO DE 3 ml Uma formulação líquida contendo 40 mg/ml de captador de VEGF (SEQ ID NO: 4), IOmM de fosfato, 50 mM de NaCl, 0,03 % de polissorbato 20, 5 % de sacarose, e pH de 6,3, foi armazenada em 5 0C em frascos de vidro de 3 ml, e as amostras foram testadas em 0,5, 1, 2, 3 e 4 meses. Os resultados da estabilidade são apresentados na Tabela 3. A turbidez, o percentual de proteína recuperada e a pureza foram determinados como descrito acima.

TABELA 3

ESTABILIDADE DOS 40 mg/ml DA PROTEÍNA DE CAPTADOR DO VEGF (VGFT-SS207)

<table>table see original document page 17</column></row><table>

EXEMPLO 4

ESTABILIDADE DOS 40 mg/ml DA FORMULAÇÃO LÍQUIDA DO CAPTADOR DO VEGF AflMAZENADOS EM 5°C EM SERINGA DE VIDRO PRÉ-CARREGADA

Uma formulação líquida contendo 40 mg/ml de captador de VEGF (SEQ ID NO: 4), 10 mM de fosfato, 40 mM de NaCl, 0,03 % de polissorbato 20, 5 % de sacarose, e pH de 6,3, foi armazenada em 5 0C em seringa de vidro de Luer pré-carregada com êmbolo revestido 4023/50 FluoroTec e as amostras foram testadas em 0,5, 1, 2, 3 e 4 meses. Os resultados da estabilidade são apresentados na Tabela 4. A turbidez, o percentual de proteína recuperada e a pureza foram determinados como descrito acima.

TABELA 4

ESTABILIDADE DOS 40 mg/ml DA PROTEÍNA DO CAPTADOR DO VEGF (VGFT-SS207) <table>table see original document page 18</column></row><table>

EXEMPLO 5

ESTABILIDADE DOS 40 mg/ml DA FORMULAÇÃO LÍQUIDA DO CAPTADOR DO VEGF ARMAZENADOS EM 5 °C EM FRASCOS DE VIDRO DE 3 ml

Uma formulação líquida contendo 40 mg/ml de Captador de

VEGF (SEQ ID NO: 4), 10 mM de fosfato, 135 mM de NaCl, 0,03 % de polissorbato 20, e pH de 6,3, foi armazenada em 5 0C em frascos de vidro de 3 ml, e as amostras foram testadas em 0,5, 1, 2, 3 e 4 meses. Os resultados da estabilidade são apresentados na Tabela 5. A turbidez, o percentual de proteína recuperada e a pureza foram determinados como descrito acima. TABELA 5 ESTABILIDADE DOS 40 mg/ml DA PROTEÍNA DE CAPTADOR DO VEGF (VGFT-SS203)

<table>table see original document page 18</column></row><table> EXEMPLO 6

ESTABILIDADE DOS 40 mg/ml DA FORMULAÇÃO LÍQUIDA DO CAPTADOR DO VEGF ARMAZENADOS EM 5 °C EM SERINGA DE VIDRO PRÉ-CARREGADA DE 1 ml

Uma formulação líquida contendo 40 mg/ml de Captador de VEGF (SEQ ID NO: 4), 10 mM de fosfato, 135 mM de NaCl, 0,03 % de polissorbato 20, e pH de 6,3, foi armazenada em 5 0C em seringa de Luer de vidro pré-carregada com êmbolo revestido 4023/50 FluoroTec, e as amostras foram testadas em 0,5, 1, 2, 3, 4 e 5 meses. Os resultados da estabilidade são apresentados na Tabela 6. A turbidez, o percentual de proteína recuperada e a pureza foram determinados como descrito acima.

TABELA 6

ESTABILIDADE DOS 40 mg/ml DA PROTEÍNA DO CAPTADOR DO VEGF (VGFT-SS203)

<table>table see original document page 19</column></row><table>

EXEMPLO 7

ESTABILIDADE DOS 20 mg/ml DA FORMULAÇÃO LÍQUIDA DO CAPTADOR DO VEGF LIOFILIZADA ARMAZENADOS A 5 °C EM FRASCOS DE VIDRO DE 3 ml E RECONSTITUÍDOS ATÉ 40 mg/ml.

0,8 ml de uma formulação líquida contendo 20 mg/ml de Captador de VEGF (SEQ ID NO: 4), 5 mM de fosfato, 20 mM de NaCl, 0,015 % de polissorbato 20, 2,5 % de sacarose, e pH de 6,3, foi liofilizado em frascos de vidro de 3 ml. As amostras foram armazenadas em 5 0C e testadas em 1 e 2 meses. O Captador de VEGF foi reconstituído até uma concentração final de 40 mg/ml de Captador de VEGF (volume final de 0,4 ml). Os resultados da estabilidade são apresentados na Tabela 7 (t = tempo em meses; * = aparência visual; ** = tempo de reconstituição). A turbidez, o percentual de proteína recuperada e a pureza foram determinados como descrito acima.

TABELA 7

ESTABILIDADE DOS 20 mg/ml DA PROTEÍNA DO CAPTADOR DO VEGF (VGFT-SS216) LIOFILIZADA

<table>table see original document page 20</column></row><table>

EXEMPLO 8

ESTABILIDADE DOS 20 mg/ml DA FORMULAÇÃO DO CAPTADOR DO VEGF ARMAZENADOS EM 5 °C EM FRASCOS DE VIDRO DE 3 ml

0,8 ml de uma formulação líquida contendo 20 mg/ml de

Captador de VEGF (SEQ ID NO: 4), 5 mM de fosfato, 67,5 mM de NaCl, 0,015 % de polissorbato 20, e pH de 6,3, foi liofilizado em frascos de vidro de 3 ml. As amostras foram armazenadas em 5 0C e testadas em 1, 2 e 3 meses. O captador de VEGF foi reconstituído até uma concentração final de 40 mg/ml de Captador de VEGF (volume final de 0,4 ml). Os resultados da estabilidade são apresentados na Tabela 8 (t = tempo em meses; * = aparência visual; ** = tempo de reconstituição).

TABELA 8

<table>table see original document page 20</column></row><table> LISTAGEM DA SEQÜÊNCIA

<110> Regeneron Kharataeeuticais, Inc.

<120>Foiwiükç6es do Antaganiíta do TEOF Adequadas P&ra. Administração IMravitrea.

<130> SO50A-WO <140> A ser aírimdo

<141> 14/06/3007

<150> tStMSl 4.484 <151> 16)06/2006

<160> 4

<ne> FastSEQ pataWiBdowsVersão4.0

<210> 1 <211> 1453 «212> DHA

«213> s« qülneia Artifkkl <220>

<223> Sintética <4QO> 1

aagettgggc tgeaggfccga togecteceg aggatcgatc oocggçegag ctcgaattcg 60 c-aacciccat ggtcagctac tflgçacaccg gggtcctgct çtgcgcgccg etcagctgtc 120 Lguttctcac açgatecagt tceggaggta geesetttcgt agagatgfcac agtgaaatce iôd ccSaaattet eicacatgact gaaçgaagyg agctegtcac tccetgccgg gttaegteec 24 0 cfcaacatcac fcgtfcacfctta aaaaagtttc cacttgaeae tttgatecct gatçgaeaac 300 gcataatefcg ggacagtaça aagggcttce tcatatcaaa tgcaaegtac aaagaaatag 3$0 ggetfcctgac etgtgaagca ftcagtcaatg ggoatttgUe taagacaaac tatctcacse 420 atcçacaaac eaatacaate atagatgtgg ttctgagtcc gtetcatgga attgaactat 4S0 ctgtfcggago aeagcttçtc ttaaattgta cageaagoae tgeeeteaet gtggggatfcg 540 ACtteaacfcg ggaataecet tcttcgaagc atcagcataa gaaaettgce aeccgagace 600 taaaaaeeca gtetgggegt gagatgoega astttfctgag eacettaact atagatggtg <660 taocccçgag tg&eeaagga ttgtacacct gtgcagcatc cagfcggçefcg atgaccaage 720 Agaaeafcae atttgtcagg gtccatgaaa agogcccçgg egacaaaaet cacacatgcc 780 eacegtgcoc agcacctçaa etcetggggg gaccgteagt ettcctettc cccccaaaac 840 eeaaggacac ectcatgatc tcccggaecc ctgaggccao atgegtggtg gtggaegtg* »00 grcctcgaaga ceetgaggte aagttcaact ggcacgcgga eggcgtggag gtgeataatg 960 ccaagacaaa gccgcçggag gagcaçtaca acegeaeçta eegtgtggtc agcgtectea 1020 ecgtçctgca ccaggactgg ctgaatggca aqqaqtacaa qtueaaowte tccaacaaag 10 80 ccctcccagc ecccatcçsg aaaaccatee ccaaagccaa agggrcagece cgagaaccac 1140 aggtgtacae ectgccccca tcecgçgatg agetgaeeaa gaaccaggtc agcefcgaect 1200 geetggtcaa aggeteetat cecagcgaca tcgccgtgga gxgggagagc aatgg^eagc 12 60 cggagatcaa etacaagacc acgcctcccg tgetggacte cgaeggctec ttettectct 1320 Atagcaagefc eaeegtggec aagagcaggt tfgcaycagyg gaaeçtctcc tcatgcteeg 1380 tgátgcatga ggctefcgcac aaccactaca cgcagaagag cctctccctg cefceegggca 1440 aatgagcgge cgc 1453

<210> 2

<211> 458

<212> PRT

<213> Seqüência Artificiei <220>

<223> Sintética

<400> 2

Met Val Ser Tyr Trp Asp Thr Gly vai Leu Leu Cys Ala Leu Leu Ser 1 5 10 15 Cys x>eu Lau Leu Thr Sly Ser Ser Ser Gly Gly Arg Pro Phe Val Glu 20 25 30 Het Tyr Ser Glu Xla Pro Glu Xle Ile Hls Met Thr Glu Gly Arg Glu 35 40 45 Leu Val Ile £>ro Cys Acg Val Thr Ser Pro Asn Ila Thr Val Thr Leu 50 55 60 Lys Lys Phe Pro Leu Asp Tfer Leu xle Pro Asp Gly Lya Arg Ile Xlé 65 70 75 SO Trp IVsp Ser fcrg Lys Gly lie Xie Ser Asn Ala Thr Tyr Lys Glu 85 90 95 XI* Gly Leu Leu Thr Cys Glu Ala Thr Val Asn Gly HiS Leu Tyr Lys 100 105 110 Wit Asn Tyr Leu Thr Hls Arg Gln Thr Asn Thr Xle lie Asp vai Val 115 120 125 Leu Ser PXO Ser His Gly Xle Glu Leu Ser Val Gly Glu Lys Leu Val 130 135 140 Leu Asn Cys Thr Ala Arg Thr GlU Leu Asn Val Gly Ile Asp Pha Asn 145 150 155 160 Trp GlU Tyr Pro Ser Sar Lys HiS Gln His Lys Lys Leu vai Aen Axg 165 170 175 AS ρ XrfSU Lys Thr Gln Ser Gly Ser Glu Met Lys Lys Phe Leu Sec Thx 180 185 190 Leu Thr Ile Aap Gly V8I Thr Arg Ser Aap Glii Gly Leu Tyr Thr CyS 195 200 205 Ala Ala Ser Ser Gly Leu Met Thr Lys Lys Asn Ser Thr Phe Val Arg 210 215 220 Val HiS Glu x-ys Gly Pro Gly ASp Lys Thr HlS Thr Cye Pro Pro cys 22S 230 235 240 Pro Ala Pro GlU Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Pbe Sro Pro 245 250 255 Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lie ser Arg Thx Pro Glu Val Thr Cys 260 265 270 Val Val Val Aap Val Ser HlS Glu Asp Pro Glu vai Lys Phe Asn Trp 273 280 2Θ5 Tyr Val Asp Gly Val Giu Val His Asn Ala Lye Thr Lys Pro Arg GlU 290 235 300 Glu Gln Tyr Asn Sar Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu 305 310 315 320 Hie Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys çys Lys Val Ser Asn 325 330 335 Lys Ala Lau E»ro Ala Pro Ila GlU Lys Thr Xle ser Lys Ala Lys Gly 340 345 350 Gln Pro Arg GlU Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu 355 360 365 Leu Thr Lys Asn Gln vai Ser LSU Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr 370 375 380 Piro Ser Asp Xle Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Giy Glii Pro Glu Asn 305 390 395 400 ASn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe 405 410 415 Leu Tyr Ser Lys Leu Thr vai Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn 420 425 430 Val Phe Saar Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn HiS Tyr Thr 435 «-30 445 Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lya <210> 3 <211> 1377 <212> DSA

<213> Seqüência Artificial <22 0>

<223> Sintética

455

<213> <220 > <223" <400>3

(copiar da página 3)

<400> 3

atggtcagefc

acaggatcta

cccgaaatta

cctaacatca

egcataatct

gggcttctga

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cctgttggag

gacttcaact

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actgggaeac gttccggaag tacacatgac ctgttaottt gggacagtag cctgtgaagc ccaataeaat aaaagcttgt gggaataccc agtctgggag

gtgaccaagg catttgteag aactcctggg tctcccggac tcaagttcaa aggagcagta gçctgaatgg agaaaaccat catcccggga atcccagcga ccacgcctcc acaagagcag acaaccacta

cggggtcctg tgataccggt tgaaggaagg aaaaaagttt aaagggcttc aacagtcaat catagatgtg cttaaattgt

ttcttcgaag tgagatgaag attgtacacc ggtccatgaa gggaccgtca ccctgaggtc ctggtacgtg caacageacg caaggagtac ctecaaagcc tgagctgacc catcgccgtg cgtgctggac gtçgeagcag cacgcagaag

ctgtgcgcgc agacctttcg gagctcgtca ccacttgaca atcatatcaa gggcatttgt gttctgagtc acagcaagaa catcagcat· aaatttttga tgtgcagcat aaggaeaaaa gtcttcctct acatgcgtgg gacggcgtgg taccgtgtgg aagtgc&agg aaagggcagc aagaaccagg gagtgggaga tccgacggct gggaacgtet agcctctccc

tgctcagctg tagagatgt:a ttccctgccg ctttgatccc atgcaacgta ataagacaaa cgtctcatgg ctgaactaaa agaaacttgt gcaccttaac ccagtgggct ctcaeacetg tccccccaaa tggtggacgt aggtgcataa tcagcgtcct tctccaacaa cccgagaacc tcagcctgac gcaatgggca ccttcttcct tctcatgctc tgtctccggg

tctgcttctc cagtgaaatc ggttacgtca tgatggaaaa caaagaaata ctatctcaca aattgaacta tgtggggatt aaaccgagac tatagatggt gatgaccaag cccaccgtgc acccaaggac gagçcacgaa tgccaagaca caccgtcctg agcectecca acaggtgtac ctgcctggtc gccggagaac ctacagcaag cgfcgatgcat taaatga

60 120 180 240 300 360 420 480 540 6 OO 660 720 780 840 900 960 1020 1080 1140 1200 1260 1320 1377

<210> 4 <211> 458 <212> PRT

<213> Seqüência Artificial <220>

<223> Sintética

< 4 0 0> 4 Met Val Ser Tyr Trp Asp Thrr Gly Val Leu Cys Ala Leu Leu Ser 1 5 10 15 Cys Leu l«u Leu Thr Gly Ser Ser Ser Gly Ser Asp Thr Gly Aarg Pro 20 25 30 Piie Val Giti Met TyiSe Glu Ile Pro Glu Tle Ile His Met Tht Glu 35 40 45 Gly Arg Glu Leu Val Ile Pro Cys Arg Val Thr Ser Pro Asn Ile Thr 50 55 60 Val Thx Leu Lys iys Phe Pro Leu Asp Thr Leu 21« Pro Asp Gly Lys 65 70 7S 80 Arg Ile Ile Trp Asp Ser Arg Lys Cly Phe Ile Ile Ser Asn Ala Thr BS 90 SS Tyr LyS Glu Ile Gly Leu Leu Thr Cys Glu Ala Thr Val Asn Gly His 100 105 110 Lew Tyr Lya Thr Asn Tyr Leu Thr His Arg Gln Thr Asn Thr Ile Ile 115 120 125 Asp Val Val Leu Ser Pro Ser HiS 130 135 Lys Leu Val Leu Asa Cys Thr Ala 145 150 ASp Phe Aân Trp GIti Tyr Pro Ser 165 Val Asn Arg Asp Leu Lys Thr Gln 180 Leu Ser Thr Leu Thr Ile Asp Gly 195 200 Tyr Thr Cys Ala Ale Ser Ser Gly 210 215 Phe Val Arg Val Hla Glu Lys Asp 225 230 Pro Ala Pro Glu Leu Seu Gly Gly 245 Lys Pro Lys Asp Tbr Jtau Met Ile 260 Val Val Val Asp Val Ser KlS Glu 275 280 Tyr Vsil Asp Gly Val GlU vai Bis 290 295 Glu Gln Tyr Asrt Ser Thr Tyr Arg 305 310 His Gln Asp Trp Leu Asrt Gly Lvs 325 Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile GXu 340 Gln Pro Arg Glu Pro Sln vai Tyr 355 360 Leu Thr Lys Asn Glc Val Ser Leu 370 375 Pro Ser Aap Xle Ala Val Glu Trp 3 Θ5 390 Asn Tyr Iys Thr Thr Pro Pro Val 405 Leu Tyr Ser Lya LâU Thr vai Asp 420 Val Phe Ser Cys ser vai Met Hls 435 440 Gln Lys S«r Leu Ser Leu Ser Pro 450 455

Gly Ile Glu Leu Ser Val Giy GlU 140 Arg Thr Glu Leu Asn Val Gly Ile 155 160 Ser Lys Hls Gln Kis Lys Lys Leu 170 175 Ser Gly Ser Glu Met Iys Lys Phe 185 190 Val Thr Arg Ser Asp Gln Gly Lèu 205 Leu Met Thx Lys Lys Asn Ser Thr 220 Lys Thr Hls Thr Cys Pro Pro Cya 235 240 Pro Ser Val Phe Leu Fhet Pro Pro 250 255 Ser Axg Thr Pro Glil Val Ihr Cye 265 270 Asp Pro Glu vai Lys Phe As»» Trp 285 Asn fila Lys Thr Lys Pro Arg Glu 300 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

315 320

Glu Tyr 330 Lys Cys Lys Val Ser 335 Asn Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly 345 350 Thr Leu Pro Pro Ser 365 Arg Asp Glu Thr Cys Leu Val 380 Lya Gly Phe Tyc Glu Ser Asn 395 Gly Gln Pro Glu Asn 400 Leu Aap 410 Ser Aap Gly Ser Phe 415 Phe Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly ASIl 425 430 Glu Ala Leu His Asn 445 HiS Tyr Thr Gly Lys

Claims

1. Formulação oftálmica de um antagonista do fator de crescimento endotelial vascular (VEGF), caracterizada pelo fato de que compreende: (a) 1 a 100 mg/ml de um antagonista do VEGF contendo a seqüência de aminoácidos de SEQ ID NO: 4; (b) 0,01 a 5 % de um ou mais co-solventes orgânicos que constitui um ou mais dentre polissorbato, polietileno glicol (PEG) e propileno glicol; (c) 30 a 150 mM de um agente de tonicidade selecionado de cloreto de sódio ou cloreto de potássio; e (d) 5 a 40 mM de tampão de fosfato de sódio; e opcionalmente ainda contendo 1,0 a 7,5 % de um agente de estabilização selecionado do grupo consistindo de sacarose, sorbitol, glicerol, trealose ou manitol, pH entre cerca de 5,8 e 7,0.

2. Formulação oftálmica de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que compreende cerca de 1 a 100 mg/ml, preferivelmente 10 a 80 mg/ml, do antagonista do VEGF, 10 mM de tampão de fosfato de sódio, 40 mM de NaCl, 0,03 % de polissorbato e 5 % de sacarose, pH de cerca de 6,2 a 6,3.

3. Formulação oftálmica de acordo com a reivindicação 2, caracterizada pelo fato de que compreende o antagonista do VEGF em uma concentração selecionado do grupo consistindo de 10 mg/ml, 20 mg/ml, 40 mg/ml e 80 mg/ml.

4. Formulação oftálmica de acordo com qualquer uma das reivindicações acima, caracterizada pelo fato de que compreende 10 a 80 mg/ml do antagonista do VEGF, 10 mM de fosfato de sódio, 0,03 % de polissorbato e 135 mM de cloreto de sódio, pH de cerca de 6,2 a 6,3.

5. Formulação liofilizável de um antagonista do fator de crescimento endotelial vascular (VEGF), caracterizada pelo fato de que compreende (a) 5 a 50 mg/ml do antagonista do VEGF, preferivelmente 5 mg/ml, 10 mg/ml, 20 mg/ml ou 40 mg/ml compreendendo a seqüência de aminoácidos da SEQ ID NO: 4; (b) 5 a 25 mM de tampão de fosfato de sódio, pH de cerca de -5,8 a 7,0; (c) 0,01 a 0,15 % de um co-solvente orgânico, selecionado do grupo consistindo de polissorbato, polietileno glicol (PEG), propileno glicol, e uma combinação destes; e, opcionalmente, (d) 1 a 10 % de um agente de estabilização selecionado do grupo consistindo de sacarose, sorbitol, glicerol, trealose e manitol; ou 20 a -150 mM de um agente de tonicidade, preferivelmente cloreto de sódio; ou 1 a -10 % do agente de estabilização e 20 a 150 mM do agente de tonicidade.

6. Formulação liofilizável de acordo com a reivindicação 5, caracterizada pelo fato de que compreende cerca de 20 mg/ml do antagonista do VEGF, cerca de 10 mM do tampão de fosfato de sódio, cerca de 0,03 % de polissorbato, cerca de 0,1 % de PEG, e cerca de 2,5 % de sacarose, pH de cerca de 6,2 a 6,3.

7. Formulação liofilizável de acordo com a reivindicação 5, caracterizada pelo fato de que compreende cerca de 20 mg/ml do antagonista do VEGF, cerca de 5 mM do tampão de fosfato de sódio, cerca de 0,015 % de polissorbato, cerca de 2,5 % de sacarose, e ainda compreendendo cloreto de sódio em cerca de 20 mM, pH de cerca de 6,2 a 6,3.

8. Formulação liofilizável de acordo com a reivindicação 6, caracterizada pelo fato de que compreende cerca de 20 mg/ml do antagonista do VEGF, cerca de 5 mM do tampão de fosfato de sódio, cerca de 0,015 % de polissorbato, e ainda compreendendo cloreto de sódio em cerca de 67,5 mM, pH de cerca de 6,2 a 6,3.

9. Método para produzir uma formulação liofilizada de um antagonista do fator de crescimento endotelial vascular (VEGF), caracterizado pelo fato de que compreende submeter a formulação pré-liofilizada como definida nas reivindicações 5 a 8 à liofilização, para gerar uma formulação liofilizada.

10. Seringa pré-carregada adequada para administração intravítrea, caracterizada pelo fato de que contém a formulação como definida na reivindicação 1.