BRPI0714552A2

BRPI0714552A2 - identificaÇço de um tipo de sacarose sintase e uso do mesmo em modificaÇço de fibra

Info

Publication number: BRPI0714552A2
Application number: BRPI0714552-7A
Authority: BR
Inventors: Yong Ling Ruan; Robert Furbank; Elizabeth Brill; THOURNOUT MICHAEL van; Antonio Arioli
Original assignee: Commw Scient & Industrail Res Organisation; Bayer Bioscience Nv
Priority date: 2006-07-25
Filing date: 2007-07-20
Publication date: 2013-05-07
Also published as: CN101495626A; ZA200900106B

Abstract

IDENTIFICAÇçO DE UM TIPO DE SACAROSE SINTASE E USO DO MESMO EM MODIFICAÇçO DE FIBRA. A presente invenção refere-se a métodos e meios par modificar características de fibra em uma planta produtora de fibra, tal como algodão, com base no uso de um novo tipo de proteína sacarose sintase ou ácidos nucléicos relacionados.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "IDENTIFICA- ÇÃO DE UM TIPO DE SACAROSE SINTASE E USO DO MESMO EM MO- DIFICAÇÃO DE FIBRA".

Campo da Invenção

A invenção refere-se ao campo de agricultura, mais especifica- mente, ao uso de técnicas de biologia molecular para alterar plantas produ- toras de fibra, particularmente plantas de algodão, e/ou acelerar a geração de tais plantas contendo fibra. Métodos e meios são providos para modificar a qualidade da fibra, por exemplo, aumentando ou diminuindo os teores de celulose, resistência da fibra, uniformidade da fibra ou micronaire (índice de diâmetro de fibra). São também providos métodos para identificar marcado- res moleculares associados com tais características em uma população de variedades de algodão e plantas progenitoras relacionadas. Técnica anterior

Muito da fibra de alta qualidade para a indústria têxtil é provido pelo algodão. Cerca de 90% do algodão cultivado em todo o mundo são Gossypium hirsutum L., enquanto Gossypium barbadense é responsável por cerca de 8%. Consequentemente, a modificação de características de fibras de algodão para melhor satisfazer as necessidades da indústria é um grande esforço em geração através ou de métodos clássicos ou alterando geneti- camente o genoma de plantas de algodão. Objetivos a serem atingidos in- cluem comprimento da fibra de algodão maior, resistência, capacidade de tingimento, produção de fibra com penugem menor, razão de maturidade de fibra, teor de fibra imatura, uniformidade da fibra e "micronaire".

A US 6472588 e o WO 0117333 provêem métodos para o au- mento da qualidade da fibra de algodão produzida a partir de uma planta de algodão através da transformação com um DNA codificando sacarose fosfa- to sintase. As qualidades da fibra incluem resistência, comprimento, razão de maturidade da fibra, teor de fibra imatura, uniformidade da fibra e "micro- naire".

O W09508914 descreve uma planta produtora de fibra compre- endendo em seu genoma um construto genético heterólogo. O construto ge- nético compreende um promotor específico de fibra e uma seqüência de co- dificação codificando uma peroxidase de planta, tal como uma peroxidase de algodão.

O W09626639 provê métodos por meio dos quais seqüência de codificação de preferência direcionando expressão de gene em tecido de ovário, particularmente bem precoce em desenvolvimento de fruta, são utili- zadas para expressar hormônios de modificação de crescimento de planta em tecido de óvulo de algodão. Os métodos permitem a modificação das características da cápsula de plantas de algodão e provêem um mecanismo para alteração das características de qualidade da fibra tal como dimensão e resistência da fibra.

As US5981834, US5597718, US5620882, US5521708 e US 5495070 todas descrevem um método para engenheirar geneticamente uma planta produtora de fibra e a identificação de clones de cDNA úteis para i- dentificação de genes de fibra em algodão. Os clones de cDNA são úteis no desenvolvimento de clones genômicos correspondentes de plantas produto- ras de fibra para permitir engenharia genética de algodão e outras plantas usando esses genes. Seqüências de codificação desses genes isolados são usadas em orientação de sentido e antissentido para alterar as característi- cas de fibra das plantas produtoras de fibra transgênica.

Os pedidos de patente US publicados US2002049999 e US2003074697 ambos descrevem plantas de algodão do gênero Gossypium com características de fibra de algodão aperfeiçoadas. A planta de algodão tem um cassete de expressão contendo um gene codificando uma enzima selecionada do grupo consistindo em endoxiloglucan transferase, catalase e peroxidase de modo que o gene é expresso em células de fibra de algodão para melhorar as características da fibra de algodão.

A US5880110 produz fibras de algodão com características de fibra aperfeiçoadas através de tratamento com brassinoesteróides.

O WO 01/40250 provê métodos para aperfeiçoamento da quali- dade da fibra de algodão através da modulação de expressão de gene de fator de transcrição. O WO 96/40924 provê novos construtos de DNA que podem ser usados como sondas moleculares ou inseridos em um hospedeiro de planta para prover modificação de transcrição de uma seqüência de DNA de inte- resse durante vários estágios de desenvolvimento da fibra de algodão. Os construtos de DNA compreendem uma região reguladora de iniciação trans- cripcional de fibra de algodão associada com um gene, que é expresso em fibra de algodão. Também é novo algodão tendo uma fibra de algodão que tem uma cor natural introduzida pela expressão em células de fibra de algo- dão, usando tal construto, de genes de pigmento.

A EP0834566 provê um gene que controla o mecanismo de for- mação de fibra em planta de algodão e que pode ser usado para aperfeiço- amento industrialmente útil.

Ruan e outros 2003) (The Plant Celll vol. 15, 952-964) descre- vem que supressão de expressão do gene de sacarose sintase reprime ini- ciação de célula, alongamento e desenvolvimento de semente de fibra de algodão. Os resultados descritos aqui provêem evidência direta de que a expressão de Sacarose sintase na epiderme do óvulo é crucial para a inicia- ção e alongamento de fibras de célula única. Os resultados descritos tam- bém permitem concluir que a supressão de Sus no revestimento da semente apenas reduz crescimento de fibra sem afetar o desenvolvimento do embrião e tamanho da semente. O artigo conclui que novas percepções no papel de Sus no controle de desenvolvimento de célula de planta e semente oferecem oportunidades para modificar desenvolvimento de fibra e de semente através de engenharia genética de expressão de Sus.

O W00245485 descreve métodos e meios para modular quali- dade de fibra em plantas produtoras de fibra, tal como algodão, através da modulação e/ou expressão de atividade de sacarose sintase em tais plantas.

Baud e outros 2004 (Journal of Experimental Botany, Vol. 55, N- 396, pp. 397-409) descrevem a estrutura e perfil de expressão da família multigene de sacarose sintase tendo seis membros em Arabidopsis.

Nenhum documento da técnica anterior descreve o reconheci- mento do tipo atualmente reconhecido de sacarose sintase, nem seu envol- vimento em desenvolvimento parede de célula de planta secundária, tal co- mo tipo C em plantas. Este novo tipo de proteína Sus abre a possibilidade para métodos e meios novos para alterar características de fibra de plantas produtoras de fibra tal como algodão, que podem ser combinados mais com qualquer um dos métodos para alterar características de fibra. Tais métodos e meios são descritos nas modalidades e reivindicações descritas a seguir. Sumário da Invenção

Em uma modalidade da invenção, um novo tipo de proteína sa- carose sintase é provido tendo uma seqüência de aminoácido compreen- dendo uma seqüência de aminoácido selecionada de uma seqüência de a - minoácido tendo pelo menos 50% de homologia de seqüência com a se- qüência de aminoácido de qualquer SEQ ID NO.: 2, 3, 5, 7, 9, 11 ou 13; ou uma seqüência de aminoácido compreendendo a seqüência de aminoácido de qualquer SEQ ID NO.: 2, 3, 5, 7, 9, 11 ou 13; uma seqüência de aminoá- cido localizada na parte amino terminal da dita proteína, a dita seqüência de aminoácido compreendendo pelo menos cerca de 60% de identidade de se- qüência com a seqüência de aminoácido da SEQ ID NO.: 16; ou uma se- qüência de aminoácido localizada na parte carbóxi-terminal da dita proteína, a dita seqüência de aminoácido compreendendo pelo menos cerca de 60% de identidade de seqüência com a seqüência de aminoácido da SEQ ID NO. 15. A proteína sacarose sintase pode compreender uma seqüência N- terminal hidrofóbica. Ela pode também compreender qualquer uma das se- qüências de aminoácido que seguem: a seqüência de aminoácido da SEQ ID N0.:3 do aminoácido 383 ao aminoácido 394; a seqüência de aminoácido da SEQ ID N0.:3 do aminoácido 270 ao aminoácido 329; a seqüência de aminoácido da SEQ ID N-:3 do aminoácido 549 ao aminoácido 737; a se- qüência de aminoácido da SEQ ID N9:3 do aminoácido 1 até o aminoácido 545; ou a seqüência de aminoácido da SEQ ID Nõ:3 do aminoácido 18 até o aminoácido 794.

Em outra modalidade da invenção, um anticorpo reconhecendo a proteína sacarose sintase nova isolada é provido.

Em ainda outra modalidade, a invenção provê uma molécula de DNA ou ácido nucléico isolado codificando a proteína sacarose sintase nova, tal como ácido nucléico compreendendo a seqüência de nucleotídeo de qualquer SEQ ID N9: 1, 4, 6, 8, 10, 12 ou 14.

A invenção provê ainda um cassete de expressão compreen- dendo as moléculas de DNA operavelmente ligado que seguem: um promo- tor expressável em planta tal como um promotor expressável em planta con- trolando transcrição de preferência em células de fibra de uma planta produ- tora de fibra; um DNA codificando as novas proteínas sacarose sintase pro- vidas; e opcionalmente uma região de terminação de transcrição e poliadeni- lação.

A invenção também provê um cassete de expressão compreen- dendo as moléculas de DNA operavelmente ligado: um promotor expressá- vel em planta um DNA que quando transcrito resulta em uma molécula de RNA a dita molécula de RNA compreendendo ou uma seqüência de nucleo- tídeo de pelo menos 19 nucleotídeos consecutivos tendo pelo menos cerca de 94% de identidade de seqüência com a seqüência de nucleotídeo de um gene codificando isoforma C de sacarose sintase endógena ou com o com- plemento da dita seqüência de nucleotídeo de um gene codificando isoforma C de sacarose sintase endógena ou uma seqüência de ácido nucléico de pelo menos 19 nucleotídeos consecutivos tendo pelo menos cerca de 94% de identidade de seqüência com uma seqüência de nucleotídeo de sacarose sintases de isoforma tipo C novas; e opcionalmente uma região de termina- ção de transcrição e poliadenilação.

Outra modalidade da invenção é um cassete de expressão com- preendendo as moléculas de DNA operavelmente ligado que seguem: um promotor expressável de planta, de preferência um promotor expressável em planta que controla transcrição de preferência nas células de fibra; um DNA, que quando transcrito dá uma molécula de RNA de filamento duplo capaz de reduzir a expressão de um gene SusC endógeno para a planta produtora de fibra, e a molécula de RNA compreendendo uma primeira e uma segunda região de RNA onde a primeira região de RNA compreende uma seqüência de nucleotídeo de pelo menos 19 nucleotídeos consecutivos tendo pelo me- nos cerca de 94% de identidade de seqüência com a seqüência de nucleotí- deo de um gene SusC endógeno ou com a seqüência de nucleotídeo das seqüências de nucleotídeo providas codificando proteínas SusC; a segunda região de RNA compreendendo uma seqüência de nucleotídeo complemen- tar aos pelo menos 19 nucleotídeos consecutivos da primeira região de RNA; as primeira e segunda regiões de RNA são capazes de emparelha- mento de base para formar uma molécula de RNA de filamento duplo entre pelo menos os 19 nucleotídeos consecutivos das primeira e segunda regi- ões; e opcionalmente uma região de extremidade 3' compreendendo sinais de terminação e poliadenilação de transcrição funcionando em células da planta.

A invenção provê a inda uma célula de planta compreendendo um promotor expressável em planta heterólogo operavelmente ligado a uma molécula de DNA selecionada das moléculas de DNA que seguem: um DNA codificando uma sacarose sintase nova da isoforma C ou codificando um RNA inibidor para uma gene codificando SusC. A célula pode ser uma célula de uma planta produtora de fibra tal como algodão. Também compreendidas pela invenção são plantas, sementes ou partes de planta ou tecidos que compreendem ou consistem essencialmente em tais células de planta bem como fibras produzidas por tais plantas.

Em ainda outra modalidade da invenção, um método para modi- ficação das características de fibra de uma planta produtora de fibra é provi- do, o dito método compreendendo modificação, tal como aumento ou dimi- nuição do nível funcional de uma isoforma C de sacarose sintase ou uma sacarose sintase com características similares em células ou paredes de célula ou fluido apoplástico da dita planta. Isto pode ser convenientemente conseguido através da provisão das plantas com os cassetes de expressão descritos aqui.

A invenção também compreende uso de uma nova proteína tipo SusC ou ácido nucléico de codificação para modificar as características de uma fibra em uma planta produtora de fibra. Breve descrição das figuras e desenhos Figura 1. Gráficos de hidrofobicidade de proteínas SusC e prote- ínas sacarose similares. A. Gráfico para SusC de uma variedade Gossypium hirsutum; B: Gráfico para SusC de uma variedade Gossypium barbadense\ C: Gráfico para SusC de Gossypium arboretum; D: Gráfico para SusC de Gossypium raymondír, E: Gráfico para SusC de Gossypium Iongicalyx subti- po 1; F: Gráfico para SusC de Gossypium Iongicalyx subtipo 2; G: Gráfico para sacarose sintase de Vigna radiata; H: Gráfico para sacarose sintase de Eucalyptus grandis; I: Gráfico para isoformas de sacarose sintase 6 de Ara- bidopsis thaliana-, K: Gráfico de sacarose sintase de Populus tremuloides. Todos os gráficos de hidrofobicidade descrevem um terminal N hidrofóbico para sacarose sintases diferentes.

Figura 2. Análise de expressão do gene SusC em tecido de fibra de algodão através de RT-PCR. Dpa: dias pós-anestesia; gDNA: DNA ge- nômico de controle. Faixas 1 e 8: marcador de 1 kb. Figura 3: íntrons e exons em genes codificando sacarose sintase

de algodão. A distribuição de íntron éxon é esquematicamente representada para sacarose sintase tipo C e comparada com sacarose sintase tipos BeA de algodão. Caixas pretas representam os exons.

Figura 4. Análise de estrutura 2D da parte N-terminal de genes de sacarose sintase de algodão. Análise de estrutura analítica 2D (HCA + JPRED) da parte N-terminal do gene de susyC comparado com as outras sacarose sintases de Gossypium hirsutum. A seta mostra a influência da região específica de susyC na estrutura 2d circundante. (P) = sítios de fosfo- rilação putativos.

Figura 5: Análise de estrutura 2D da parte C-terminal de genes

de sacarose sintase de algodão. A estrutura de folha beta parece estar au- sente na estrutura susyC 2D.

Figura 6: Análise fenotípica de plantas de Arabidopsis transgêni- cas. Troncos fasciados, bifurcados, espessos são mostrados em 2 linhagens transgênicas independentes carregando genes quiméricos de CaMV35S- SusC (painéis A e B). Os painéis CeD mostram um fenótipo tricoma típico na geração T2 de genes quiméricos de CaMV 35S-SusC e S2A-SusC. O painel C é uma fotomontagem tridimensional.

Figura 7: Western blot de mudas de 12 com transgene de CaMV 35S-SusC usando anticorpo específico de SUS C. Faixa A: plantas com fe- nótipo leve; Faixa B: planta com fenótipo severo; Faixa C: planta com fenóti- po leve; Faixa D: planta com fenótipo severo; WT: planta do tipo selvagem. Descrição detalhada

A presente invenção é baseada na identificação de uma nova isoforma de sacarose sintase (chamada SusC ou SuSyC) de fibras cujo perfil de expressão no nível de RNA é intimamente relacionado com o início de fase de desenvolvimento de parede de célula secundária em plantas produ- toras de fibra tal como algodão. A proteína é abundante durante a formação da parede de célula secundária e está localizada predominantemente no apoplasto. Sua localização, abundância e perfil de expressão indicam que este novo tipo de isoforma de sacarose sintase é a principal isoforma pre- sente na parede celular no estágio de síntese de parede de célula secundá- ria. Sem pretender limitar a invenção a um modo de ação particular, é pen- sado que esta isoforma de sacarose sintase está envolvida em seqüestro de açúcares do fluido apoplástico circundando a fibra e incorporação dos mes- mos como UDPGIicose em celulose e/ou calose. Deste modo, em uma primeira modalidade, a invenção provê um

método para modificação das características da parede de célula em uma célula de planta caracterizado pelo fato de que o nível funcional desta nova isoforma de sacarose sintase (SusC) ou sacarose sintases com característi- cas similares é modificado. O nível funcional da isoforma tipo C de sacarose sintase ou sa-

carose sintases com características similares pode ser modificado através da expressão aumentada de tal isoforma na célula de planta. Isto pode ser convenientemente conseguido através da introdução de um construto de expressão compreendendo os ácidos nucléicos operavelmente ligados que seguem, por exemplo, moléculas de DNA:

a) um promotor expressável de planta

b) um ácido nucléico codificando uma isoforma C de sacarose sin- tase ou uma sacarose sintase com características similares; e opcionalmen- te

c) uma região de terminação e poliadenilação de transcrição.

Conforme usado aqui, "sacarose sintase" refere-se a uma enzima que é ca- paz de catálise da síntese de sacarose a partir de NDP-glicose (tal como uridina difosfato glicose) e D-frutose. A enzima pode também catalisar a hi- drólise de sacarose em glicose e frutose. A enzima é classificada como EC 2.4.1.13. Sinônimos para sacarose sintase são glicosiltransferase, uridina difosfoglicose-frutose, sacarose sintetase, sacarose-UDP glicosiltransferase, sacarose-uridina difosfato glicosiltransferase, Sus, SuSy, UDP-glicose- frutose glicostiltransferase, UDP-glicose:D-frutose 2-alfa-D- glicosiltransferase e uridina difosfoglicose-frutose glicosiltransferase.

Vários genes de plantas codificando enzimas sacarose sintase foram descritos. O W002/45485 (páginas 16 a 20) provê uma lista extensa de números de acesso no Genbank para seqüência de nucleotídeo codifi- cando genes de sacarose sintase de planta, partes da mesma ou seqüên- cias de nucleotídeo tendo similaridade de seqüência com genes de sacarose sintase.

Ensaios enzimáticos para atividade de sacarose sintase foram descritos (vi- de, por exemplo, Counce and Gravois, 2006, Crop Science, Vol. 46: pp. 1501-1507, particularmente páginas 1502 e 1503; Anthon e Emerich, 1990, Vol. 92: pp. 346-351, particularmente página 347; ambos documentos aqui incorporados a título de referência).

A "isoforma C de sacarose sintase" ou "SusC" ou SuSyC" é ca- racterizada pela presença de uma seqüência de aminoácido N-terminal hi- drofóbica (Vide Figura 1). Os 44 primeiros aminoácidos formam uma região hidrofóbica, particularmente resíduos 26 a 44 da, por exemplo, SEQ ID NO.:3. Outras enzimas sacarose sintase de planta caracterizadas por tal se- qüência de aminoácido N-terminal hidrofóbica são sacarose sintase 6 de Arabidopsis thaliana (Número de acesso At1g73370); a sacarose sintase de feijão mungbean (Número de acesso D10266), a sacarose sintase de Eu- calyptus spp. (Número de acesso DD014303) e a sacarose sintase de chou- po (Número de acesso AY341026) (todas as seqüências aqui incorporadas a título de referência).

Alinhamento das seqüências de aminoácido de SusC diferentes e comparação com outras sacarose sintases de plantas desvrevem a pre- sença de extensões de 20-25 aminoácidos consecutivos localizados no ter- minal N (SEQ ID NO:16) ou terminal C (SEQ ID NO:15) respectivamente, que são conservadas dentro das seqüências de aminoácido de SusC e au- sentes das outras sacarose sintases de planta. A seqüência N-terminal (HKSQKLLSVLDKEAGNQALDGMVV; SEQ ID Nq 16) está geralmente loca- lizada entre a posição de aminoácido 36 e posição de aminoácido 59, en- quanto a seqüência C-terminal (AYQEQRGRKRYIEMLHAWMYNNRVKT; SEQ ID Nq 15) está geralmente localizada entre as posições de aminoácido 765 e 790.

Proteínas sacarose sintase foram também descritas possuir uma região de ligação de actina putativa (Winter H e outros, 1998, FEBS Ietters 430, 205- 208; Winter, H. e Huber S.C., 2000 Criticai Reviews in Plant Sciences 19(1), 31-67) que em isoformas de SusC tem a seqüência de aminoácido consenso que segue: KDVAAE[V/I]TKEFQ (SEQ ID N53 da posição de aminoácido 383 para a posição de aminoácido 394). O resíduo Iisina (K) geralmente encon- trado na posição 383 e o resíduo fenilalanina (F)1 geralmente encontrado na posição 393, são também indicativos de uma proteína tipo SusC.

Proteínas sacarose sintase foram também descritas possuir uma região de ligação de Uridina putativa que em isoformas de SusC tem a se- qüência de aminoácido que segue VVIMTPHGYFAQDNVLGYPDTGGQVVYLLDQVRALEEELLHRFKLQGLDIT PRILVITRL (SEQ ID Nq 3 da posição de aminoácido 270 até a posição de aminoácido 329).

Usando pesquisas baseadas em computador os domínios ou assinaturas que seguem puderam ser identificados na seqüência de amino- ácido das isoformas de SusC. Esses domínios ou assinaturas são comparti- lhados com outras sacarose sintases de plantas.

Glicosil transferase, domínio grupo 1: (1PR001296; PF00534) Proteínas contendo este domínio transferem açúcares ligados a UDP1 ADP, GDP ou CMP para uma variedade de substratos, incluindo glico- gênio, frutose-6-fosfato e lipopolissacarídeos. As enzimas bacterianas estão envolvidas em vários processos biossintéticos que incluem biossíntese de exopolissacarídeo, biossíntese de núcleo de lipopolissacarídeo e a biossín- tese do polissacarídeo da saliva ácido colânico. Este domínio corresponde à seqüência de aminoácido da SEQ ID Ne:3, por exemplo, das posições de aminoácido 549 a 737.

Assinatura da família de sacarose sintase (IPR000368; PF00862): Esta assi- natura caracteriza uma família incluindo a maior parte das proteínas sacaro- se sintase. No entanto, a região carboxila terminal da sacarose sintase per- tence à família glicosil transferase. Esta enzima é encontrada principalmente em plantas, mas também aparece em bactérias. Este domínio corresponde à seqüência de aminoácido de SEQ ID NQ:3, por exemplo, do aminoácido po- sições 1 a 545.

Assinatura da família sacarose sintase, plantas e cianobactérias (I- PR012820): Esta assinatura representa sacarose sintases, uma enzima que, apesar de seu nome, usos geralmente dificilmente produzem sacarose. Sa- carose mais UDP (ou ADP) se torna D-frutose mais UDP-glicose (ou ADP- glicose), que é então disponível para biossíntese de parede celular (ou ami- do). A enzima é homóloga à sacarose fosfato sintase, que catalisa a penúl- tima etapa em síntese de sacarose. Sacarose sintase é encontrada, até ago- ra, exclusivamente em plantas e cianobactérias. Este domínio corresponde à seqüência de aminoácido da SEQ ID NQ: 3, por exemplo, das posições de aminoácido 18 a 794.

Esses domínios podem facilmente ser reconhecidos por pesqui- sas baseadas em computador usando, por exemplo, perfis PROSITE (PRO- SITE está disponível em www.expansv.ch/prosite). Alternativamente, o ban- co de dados e algoritmo BLOCKS (blocks.fhcrc.org) podem ser usados para identificar esses domínios. Outros bancos de dados e algoritmos estão tam- bém disponíveis (pFAM: http://www.sanger.ac.uk/SOftware/Pfam/ INTER- PRO: http://www.ebi.ac.uk/interpro/; os números PF citados acima referem- se a banco de dados e algoritmo pFAM e números IPR ao banco de dados e algoritmo INTERPO).

A presente invenção prove várias seqüências de aminoácido e seqüências de nucleotídeo variantes (cDNA bem como DNA genômico) para isoformas de SUsC isoladas de cultivares de Gossypium hirsutum (SEQ ID NOs.: 3-4), cv de Gossypium barbadense (SEQ ID NOs.: 5 e 6), Gossypium arboretum (SEQ ID NOs.: 7 e 8), Gossypium raimondii (SEQ ID NOs.: 9 e 10) e Gossypium Iongicaiyx (SEQ ID NOs.: 11 e 14).

Outras seqüências de nucleotídeo variantes podem ser obtidas

de outras cultivares de Gossypium hirsutum ou Gossypium barbadense ou de plantas progenitoras de algodão tal como Gossypium arboretum, Gossy- pium herbaceum e Gossypium raimondii e Gossypium Iongicalyx ou outras espécies Gossypium, especialmente espécies Gossypium compreendendo um genoma tipo D, tal como Gossypium aridum, Gossypium davidsonii, Gossypium gossypioides, Gossypium klotzschianum, Gossypium turberi, Gossypium tríiobum, Gossypium turneri, Gossypium mustelinum, Gossypium tomentosum, Gossypium darwinii. Seqüências de aminoácido ou seqüências de nucleotídeo variantes incluem modificações de uma seqüência através da adição, deleção ou substituição de aminoácidos ou nucleotídeos, respecti- vamente. Amplificacao por PCR de ácidos nucléicos condificando SusC é possível a partir de outras espécies Gossypium compreendendo genoma tipo D. Tais ácidos nucléicos amplificados por PCR parecem compreender

um sítio de restrição de EcoRI característico para ácidos nucléicos codifi- cando Sus tipo C.

Variantes da isoforma C de sacarose sintase podem ser encontradas em hibridização estringente usando a seqüência de nucleotídeo de qualquer SEQ ID N2: 1, 4, 6, 8, 10, 12 ou 14 ou parte da mesma compreendendo pelo menos cerca de 25 ou 50 nucleotídeos consecutivos da SEQ ID N9: 1, 4, 6, 8, 10, 12 ou 14 ou as seqüências de nucleotídeo complementares da mes- ma, como uma sonda. Uma sonda útil particular pode ser a seqüência de nucleotídeo codificando a seqüência N-terminal ou C-terminal de SEQ ID Nos.: 15 e 16, tal como as seqüências de nucleotídeo de qualquer uma da SEQ ID NQ: 1, 4, 6, 8, 10, 12 ou 14 codificando a seqüência de aminoácido da SEQ ID NQ: 15 ou 16.

"Condições de hibridização estringentes" conforme aqui usado significa que hibridização vai geralmente acontecer se houver pelo menos 95% e de preferência pelo menos 97% de identidade de seqüência entre a sonda e a sequência-alvo. Exemplos de condições de hibridização estringen- tes são incubação da noite para o dia em uma solução compreendendo for- mamida 50%, 5 χ SSC (NaC1150 mM, citrato de trissódio 15 mM), fosfato de sódio 50 mM (pH 7,6), 5x solução de Denhardt, dextran sulfato 10%, e 20 MiTVhiI de DNA carreador cisalhado, desnaturado tal como DNA de esperma de salmão, seguido por lavagem do apoio de hibridização em 0,1 χ SSC em aproximadamente 65e C, de preferência por cerca de 10 minutos. Outras condições de hibridização e lavagem são bem conhecidas e são exemplifi- cadas em Sambrook e outros, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Se- gunda Edição, Cold Spring Harbor, NY (1989), particularmente capítulo 11.

Tais seqüências variantes podem ser também obtidas através de amplificação de DNA usando oligonucleotídeos específicos para genes de sacarose sintase (SusC) como iniciadores, tal como, mas não limitado a, oligonucleotídeos compreendendo ou consistindo em cerca de 20 a cerca de 50 nucleotídeos consecutivos da seqüência de nucleotídeo da SEQ ID N9: 1, 4, 6, 8, 20, 12 ou 14 ou seu complemento. As SEQ ID Nos.: 17 e 18 mostram as seqüências de nucleotídeo de iniciadores que são particularmente ade- quadas como iniciadores específicos de SusC.

Em adição a explorar a variação natural para isoformas de SusC, seqüências variantes podem ser também obtidas através da geração induzida de variação in vitro ou in vivo. Vários métodos para geração induzi- da in vitro de seqüências de nucleotídeo variantes estão disponíveis na téc- nica incluindo, mas não limitado a, técnicas de embaralhamento ou evolução direta de DNA conforme descrito na Patente US 5605793, patente US 5.811.238 e patente US 5.830.721. Métodos para geração induzida in vivo de seqüência de nucleotídeo variante são também bem conhecidos na técni- ca e podem incluir exposição de plantas de algodão ou plantas progenitoras de algodão a mutagênicos tal como radiação por ionização, SEM, MMS ou similar, seguido por isolamento dos ácidos nucléicos codificando SusC1 por exemplo, conforme descrito em outro lugar aqui.

Tendo identificado as seqüências consenso C-terminais e N- terminais para uma sacarose sintase tipo SusC, os inventores identificaram as seqüências de nucleotídeo que seguem em bancos de dados codificando seqüências de aminoácido compreendendo tais seqüências consenso. U- sando a região consenso N-terminal (SEQ ID NQ:16) as seqüências que se- guem (identificadas pelo seu Número de acesso) foram isoladas: EM- BL.C0499214 (cDNA de Gossypium hirsutum; EMBL: C0499090 (cDNA de Gossypium hirsutum)·, EMBLCP498472 (cDNA de Gossypium hirsutum)·, EMBL:C)498387 (cDNA de Gossypium hirsutum)·, EMBL:C)497432 (Gossy- pium hirsutum cDNA); EMBL:C0497275 (Gossypium hirsutum cDNA); EM- BL:C0496887 (Gossypium hirsutum cDNA); EMBL:C0496593 (Gossypium hirsutum cDNA); EMBL.O0495954 (Gossypium hirsutum cDNA); EM- BL:C0495804 (Gossypium hirsutum cDNA); EMBL:C0495643(Gossyp/um hirsutum cDNA); EMBLC0495623 (Gossypium hirsutum cDNA); EM- BL:C0495601 {Gossypium hirsutum cDNA); EMBL:C0495511 (Gossypium hirsutum cDNA); EMBL:C0494831 (Gossypium hirsutum cDNA); EM- BL:C0494779 (Gossypium hirsutum cDNA); EMBL:C0494693 (Gossypium hirsutum cDNA); EMBLC0494536 (Gossypium hirsutum cDNA); EM- BLC0494182 (Gossypium hirsutum cDNA); EMBL:C0493935 (Gossypium hirsutum cDNA); EMBL.C0493780 (Gossypium hirsutum cDNA); EM- BL:C0493725 (Gossypium hirsutum cDNA); EMBL.C0493724 (Gossypium hirsutum cDNA); EMBL:C0493589 (Gossypium hirsutum cDNA); EM- BL.-C0493043 (Gossypium hirsutum cDNA); EMBL:C0493007(Gossypium hirsutum cDNA); EMBL:C0492969 (Gossypium hirsutum cDNA); EM- BL.C0492566 (Gossypium hirsutum cDNA); EMBL:C0490959 (Gossypium hirsutum cDNA); EMBL:BF272227 (Gossypium arboreum cDNA clone GA_Eb0014E15f); EMBL:C0493732 (Gossypium hirsutum cDNA); EM- BL:C0493111 (Gossypium hirsutum cDNA); EMBL:C0491540 (Gossypium hirsutum cDNA); EMBLC0493583 (Gossypium hirsutum cDNA); EM- BL:C0493765 (Gossypium hirsutum cDNA); e EMBLC0498054 (Gossypium hirsutum cDNA). Todas as seqüências citadas são aqui incorporadas a título de referência. Usando a região de consenso C-terminal (SEQ ID NQ:15) as seqüências que seguem (Identificadas pelo seu número de acesso) foram isoladas: EMBL:DT463218 (Gossypium hirsutum cDNA clone GH_CHX13D22-3); EMBLC0499051 (Gossypium hirsutum cDNA); EM- BLC0498850(Gossypium hirsutum cDNA); EMBL:C0498685 (Gossypium hirsutum cDNA); EMBL:C0498361 (Gossypium hirsutum cDNA); EM- BL:C0498044 (Gossypium hirsutum cDNA); EMBL:C0497702 (Gossypium hirsutum cDNA); EMBLC0497506 (Gossypium hirsutum cDNA); EM- BL:C0497291 (Gossypium hirsutum cDNA); EMBL:C0497151 Gossypium hirsutum cDNA); EMBL:C0496924 (Gossypium hirsutum cDNA); EM- BL:C0496907 (Gossypium hirsutum cDNA); EMBL:C0496748 (Gossypium hirsutum cDNA); EMBL:C0496747 (Gossypium hirsutum cDNA); EM- BL:C0496373 (Gossypium hirsutum cDNA); EMBL:C0496003 (Gossypium hirsutum cDNA); EMBL:C0495974 (Gossypium hirsutum cDNA); EM- BL:C0495570 (Gossypium hirsutum cDNA); EMBL:C0494691 (Gossypium hirsutum cDNA); EMBL:C0493817 (Gossypium hirsutum cDNA); EM- BL:C0493779 (Gossypium hirsutum cDNA); EMBL:C0493750 (Gossypium hirsutum cDNA); EMBL:C0492925 (Gossypium hirsutum cDNA); EM- BL:C0492917 (Gossypium hirsutum cDNA); EMBLC0492529 (Gossypium hirsutum cDNA); EMBL:C0492496 (Gossypium hirsutum cDNA); EM- BL:C0493902 (Gossypium hirsutum cDNA); EMBL:BQ412019 Gossypium

arboreum cDNA clone GA_Ed0053A09r); EMBL:C0497086 (Gossypium

hirsutum cDNA) EMBL:C0494597 (Gossypium hirsutum cDNA); EM- BL:C0494374 (Gossypium hirsutum cDNA); EMBLC0499615 (Gossypium hirsutum cDNA) ; EMBLC0490812 (Gossypium hirsutum cDNA); EM- BL:C0493178 (Gossypium hirsutum cDNA).

Formas variantes de sacarose sintase isoforma C adequadas para a invenção podem então ter uma seqüência de aminoácido que com- preende uma seqüência de aminoácido tendo pelo menos cerca de 60% ou cerca de 70% ou cerca de 80% ou cerca de 90% ou cerca de 95% de identi- dade de seqüência com a seqüência de aminoácido de seqüência consenso N-terminal (SEQ ID Ne:16) ou a seqüência consenso C-terminal (SEQ ID NQ: 15) ou ambas. As variantes podem ter uma seqüência de aminoácido tendo pelo menos cerca de 60% ou cerca de 70% ou cerca de 80% ou cerca de 90% ou cerca de 95% de identidade de seqüência com a seqüência de ami- noácido de qualquer uma das isoformas SusC de SEQ ID Ng: 2, 3, 5, 7, 9, 11 ou 13. Seqüências de nucleotídeo codificando tais variantes podem ter uma seqüência de nucleotídeo tendo pelo menos cerca de 60% ou cerca de 70% ou cerca de 80% ou cerca de 90% ou cerca de 95% de identidade de se- qüência com a seqüência de nucleotídeo de qualquer uma das seqüências de nucleotídeo da SEQ ID NQ: 1, 4, 6, 8, 10, 12 ou 14.

Para o propósito da presente invenção, a "identidade de se- qüência" de duas seqüências de nucleotídeo ou aminoácido relacionadas, expressa como porcentagem, refere-se ao número de posição nas duas se- qüências otimamente alinhadas que têm resíduos idênticos (x100) dividido pelo número de posições comparado. Uma lacuna, isto é, uma posição em um alinhamento onde um resíduo está presente em uma seqüência mas não na outra, é considerada como uma posição com resíduos não-idênticos. O alinhamento das duas seqüências é realizado através do algoritmo Needle- man e Wunsch (Needleman e Wunsch, 1970). O alinhamento de seqüência auxiliado por computador acima pode ser convenientemente realizado usan- do programa de software padrão tal como GAP que é parte da Wisconsin Package Version 10.1 (Genetics Computer Group, Madison, Wisconsin, LI- SA) usando a scoring default matrix com uma penalidade de criação de la- cuna de 50 e uma penalidade de extensão de coluna de 3.

Será claro que sempre que seqüências de nucleotídeo de molé- culas de RNA forem definidas através de referência à seqüência de nucleo- tídeo de moléculas de DNA correspondentes, a timina (T) na seqüência de nucleotídeo deve ser substituída por uracila (U). Se referência é feita a mo- léculas de RNA ou DNA ficará claro a partir do contexto da aplicação. O nível funcional da isoforma de sacarose sintase tipo C ou sa- carose sintases com características similares pode também ser aumentado através de variação de seqüência induzida in vivo. Para esta finalidade, mé- todos para variação de seqüência induzida conhecidos na técnica conforme descrito em outro local neste documento podem ser aplicados para plantas de produção de fibra, tal como plantas de algodão e plantas produtoras de fibra podem ser identificadas que exibem uma atividade maior para atividade da sacarose sintase isoforma C (por exemplo, usando o ensaio enzimático descrito aqui) ou que exibem uma concentração maior de sacarose sintase, particularmente de sacarose sintase isoforma C no fluido apoplástico ou pa- rede celular, particularmente durante a fase de desenvolvimento da forma- ção de parede de célula secundária, e particularmente em paredes de célula da fibra ou no fluido apoplástico circundando essas fibras.

Para algumas plantas produtoras de fibra, pode ser vantajoso modificar as características da fibra através da diminuição do nível funcional de sacarose sintase isoforma C ou sacarose sintases com características similares. Isto pode novamente ser convenientemente conseguido através da introdução de um gene codificando um RNA de silenciamento.

Em uma modalidade, o gene codificando o RNA de silenciamen- to pode codificar uma molécula de RNA de silenciamento ou uma molécula de RNA inibidora, capaz de redução da expressão de um gene endógeno codificando uma sacarose sintase isoforma C para alterar características de fibra. Tal redução da expressão de um gene codificando uma sacarose sin- tase isoforma C deve acontecer de preferência através de silenciamento pós-transcripcional. No entanto, será claro que mesmo quando uma molécu- la de RNA inibidora diminui a expressão de um gene de SusC através de silenciamento pós-transcripcional, tal molécula de RNA pode também exer- cer outras funções dentro de uma célula, tal como guia da metilação de DNA do gene de SusC endógeno, novamente por fim levando à expressão menor deste gene. Também, expressão de genes de SusC endógenos pode ser reduzida através de silenciamento transcripcional, por exemplo, usando RNAi ou dsRNA direcionado contra a região promotora do gene de SusC endógeno.

Vários métodos estão disponíveis na técnica para produzir uma molécula de RNA de silenciamento, isto é, uma molécula de RNA que quan- do expressa reduz a expressão de um gene particular ou grupo de genes, incluindo as chamadas tecnologias de RNA de "sentido" ou "antissentido".

Então, em uma modalidade, a molécula de RNA inibidora codifi- cando gene quimérico é baseada na chamada tecnologia de antissentido. Em outras palavras, a região de codificação do gene quimérico compreende uma seqüência de nucleotídeo de pelo menos 20 nucleotídeos consecutivos do complemento da seqüência de nucleotídeo de um gene de SusC endó- geno. Tal gene quimérico pode ser construído ligando operavelmente um fragmento de DNA compreendendo pelo menos 20 nucleotídeos de um gene de SusC, que pode ser isolado ou identificado conforme descrito em outro lugar neste pedido, em orientação inversa a um promotor expressável em planta e região de formação de extremidade 3' envolvida em terminação de transcrição e poliadenilação. Será claro que não há nenhuma necessidade de saber a seqüência de nucleotídeo exata ou a seqüência de nucleotídeo completa de tal fragmento de DNA do gene de SusC isolado.

Em outra modalidade, a molécula de RNA inibidora codificando gene quimérico é baseada na chamada tecnologia de co-supressão. Em ou- tras palavras, a região de codificação do gene quimérico compreende uma seqüência de nucleotídeo de pelo menos 20 nucleotídeos consecutivos da seqüência de ácido nucléico de um gene de SusC endógeno da planta. Tal gene quimérico pode ser construído ligando operavelmente um fragmento de DNA compreendendo pelo menos 20 nucleotídeos de um gene de SusC, que pode ser isolado ou identificado conforme descrito em outro lugar neste pedido, em orientação direta a um promotor expressável em planta e região de formação de extremidade 3' envolvida em terminação de transcrição e poliadenilação. Novamente, ficará claro que não há nenhuma necessidade de saber a seqüência de nucleotídeo exata ou a seqüência de nucleotídeo completa de tal fragmento de DNA ou do gene de SusC isolado.

A eficiência dos genes quiméricos acima mencionados na redu- 10

15

ção da expressão dos genes de SusC endógenos pode ser aumentada mais através da inclusão de elemento de DNA que resulta na expressão de molé- culas de RNA inibidoras não-poliadeniladas, aberrantes, ou resulta na reten- ção das moléculas de RNA inibidoras no núcleo das células. Um tal elemen- to de DNA adequado para este propósito é uma região de DNA codificando uma ribozima autocatalítica (self-splicing), conforme descrito no WO 0001133 (incorporado a título de referência). Outro tal elemento de DNA adequado para este propósito é uma região de DNA codificando uma locali- zação nuclear ou sinal de retenção de RNAj conforme descrito no

PCT/AU03O0292 publicado como W003O76619 (incorporado a título de re- ferência).

Um modo conveniente e muito eficiente de regulação descen- dente da expressão de um gene de interesse usa o chamado RNA de fila- mento duplo (dsRNA) ou RNA de interferência (RNAi)1 conforme descrito, por exemplo, no W09963050 (incorporado a título de referência). Nesta tec- nologia, uma molécula de RNA é introduzida em uma célula de planta, com o que a molécula de RNA é capaz de formar uma região de RNA de filamento duplo em pelo menos cerca de 19 a cerca de 21 nucleotídeos, e com o que um dos filamentos desta região de RNA de filamento duplo é mais ou menos idêntica em seqüência de nucleotídeo ao gene-alvo ("região de sentido"), enquanto o outro filamento é mais ou menos idêntico em seqüência de nu- cleotídeo ao complemento do gene-alvo ou da região de sentido ("região de antissentido"). É esperado que para silenciamento da expressão do gene- alvo, a seqüência de nucleotídeo das 19 seqüências de nucleotídeo conse- cutivas possa ter uma falta de combinação, ou as regiões de sentido e antis- sentido podem diferir em um nucleotídeo. Para conseguir a construção de tais moléculas de RNA ou dos genes quiméricos de codificação, pode ser feito uso do vetor conforme descrito no WO 02059294.

Então, em uma modalidade da invenção, um método para alte- ração das características de fibra de uma planta produtora de fibra, tal como algodão, é provido compreendendo a etapa de introdução de um gene qui- mérico em uma célula da planta produtora de fibra, onde o gene quimérico

20 compreende os elementos de DNA operavelmente ligados que seguem: (a) um promotor expressável de planta, de preferência um promotor

expressável em planta que controla transcrição de preferência nas células de fibra;

(b) uma região de DNA transcrito, que quando transcrito dá uma

molécula de RNA de filamento duplo capaz de reduzir a expressão de um gene de SusC endógeno para a planta produtora de fibra, e a molécula de RNA compreendendo uma primeira e uma segunda região de DNA onde i) a primeira região de RNA compreende uma seqüência de nucle-

otídeo de pelo menos 19 nucleotídeos consecutivos tendo pelo menos cerca de 94% de identidade de seqüência com a seqüência de nucleotídeo de um gene de SusC endógeno;

ü) a segunda região de RNA compreende uma seqüência de nu-

cleotídeo complementar a pelo menos 19 nucleotídeos consecutivos da pri- meira região de RNA;

üi) as primeira e segunda regiões de RNA são capazes de empare-

Ihamento de base para formar uma molécula de RNA de filamento duplo en- tre pelo menos os 19 nucleotídeos das primeira e segunda regiões; e (c) uma região de extremidade 3' compreendendo sinais de terminação de transcrição e poliadenilação funcionando em células da planta.

O comprimento das primeira e segunda regiões de RNA (região de sentido e antissentido) pode variar de a partir de cerca de 19 nucleotí- deos (nt) até um comprimento igualando o comprimento (em nucleotídeos) de um gene de SusC endógeno. O comprimento total da seqüência de nu- cleotídeo de sentido ou antissentido pode então ser pelo menos 25 nt ou pelo menos cerca de 50 nt ou pelo menos cerca de 100 nt ou pelo menos cerca de 150 nt ou pelo menos cerca de 200 nt ou pelo menos cerca de 500 nt. E esperado que não haja nenhum limite para o comprimento total da se- qüência de nucleotídeo de sentido ou de antissentido. No entanto, por ra- zões práticas (tal como, por exemplo, estabilidade dos genes quiméricos) é esperado que o comprimento da seqüência de nucleotídeo de sentido ou antissentido não deva exceder 5000 nt, particularmente não deva exceder 2500 nt e poderia ser limitado a cerca de 1000 nt.

Será compreendido que quanto maior o comprimento total da região de sentido ou antissentido, menos estringentes as necessidades de identidade de seqüência entre essas regiões e a seqüência correspondente em um gene de SusC endógeno ou seu complemento. De preferência, o á- cido nucléico de interesse deve ter uma identidade de seqüência de pelo menos cerca de 75% com a sequência-alvo correspondente, particularmente pelo menos cerca de 80%, mais particularmente de preferência pelo menos cerca de 85%, muito particularmente cerca de 90%, especialmente cerca de 95%, mais especialmente cerca de 100%, muito especialmente ser idêntica à parte correspondente da sequência-alvo ou seu complemento. No entanto, é preferido que o ácido nucléico de interesse sempre inclua uma seqüência de cerca de 19 nucleotídeos consecutivos, particularmente cerca de 25 nt, mais particularmente cerca de 50 nt, especialmente cerca de 100 nt, muito particularmente cerca de 250 nt com 100% de identidade de seqüência com a parte correspondente do ácido nucléico-alvo. De preferência, para cálculo da identidade de seqüência e projeto da seqüência de sentido ou antissenti- do correspondente, o número de lacunas deve ser minimizado, particular- mente para as seqüências de sentido mais curtas. dsRNA codificando genes quiméricos de acordo com a invenção

podem compreender um íntron, tal como um íntron heterólogo, localizado, por exemplo, na seqüência espaçadora entre as regiões de RNA de sentido e antissentido de acordo com a revelação do WO 9963050 (incorporado a- qui a título de referência). Em outra modalidade, a molécula de RNA de silenciamento ou

de RNA inibidor pode ser uma molécula de microRNA, projetada, sintetizada e/ou modulada para direcionar e causar clivagem de genes de SusC endó- genos em uma planta produtora de fibra, tal como uma planta de algodão. Vários métodos foram descritos para gerar e usar miRNAs para um gene- alvo específico (incluindo, mas não-limitado a, Schwab e outros (2006, Plant Cell, 18(5): 1121-1133), W02006€44322, W02005O47505, WP 06009836, incorporados aqui a título de referência). Geralmente, uma estrutura de miRNA existente é modificado na porção de reconhecimento de gene-alvo de modo que o miRNA gerado agora guia o complexo RISC para clivar as moléculas de RNA transcritas do ácido nucléico-alvo. Estruturas de miRNA poderiam ser modificadas ou sintetizadas de modo que o miRNA agora compreende 21 nucleotídeos consecutivos da seqüência de nucleotídeo de uma seqüência de nucleotídeo codificando SusC1 tal como as seqüências representadas na Listagem de seqüência, e permitindo faltas de combinação de acordo com as regras descritas aqui abaixo. Seqüências particularmente adequadas das quais 21 nucleotídeos consecutivos podem ser escolhidos compreendem as seqüências de nucleotídeo codificando as seqüências de aminoácido específicas de SusC conforme aqui descrito.

Então, em uma modalidade, a invenção provê um método para regulação descendente da expressão de uma ou aumento da resistência de plantas a condições de crescimento adversas, compreendendo as etapas de a. introdução de um gene quimérico em células das ditas plantas, o

dito gene quimérico compreendendo as regiões de DNA operavelmente liga- do que seguem:

i. um promotor expressável de planta;

ii. uma região de DNA que quando da introdução e transcrição em uma célula de planta é processada em miRNA, com o que o miRNA é capaz de reconhecer e guiar a clivagem do mRNA de um gene codificando SusC da planta; e

iii. opcionalmente, uma região de DNA 3' envolvida em terminação de transcrição e poliadenilação.

A região de DNA mencionada processada em miRNA pode compreender uma seqüência de nucleotídeo que é essencialmente complementar a uma seqüência de nucleotídeo de pelo menos 21 nucleotídeos consecutivos de um gene codificando SusC, contanto que uma ou mais das faltas de combi- nação sejam permitidas:

a. Uma falta de combinação entre o nucleotídeo na extremidade 5'

do miRNA e a seqüência de nucleotídeo correspondente na molécula de RNA; b. Uma falta de combinação entre qualquer um dos nucleotídeos na posição 1 até a posição 9 do miRNA e a seqüência de nucleotídeo cor- respondente na molécula de RNA;

c. Três faltas de combinação entre qualquer um dos nucleotídeos na posição 12 até a posição 21 do miRNA e a seqüência de nucleotídeo cor- respondente na molécula de RNA contanto que não haja mais de duas faltas de combinação consecutivas.

Diminuição do nível funcional de Sacarose sintase isoforma C pode ser vantajosa, por exemplo, em células de fibra que levam à fibra com penugem em algodão para reduzir ou evitar a divergência de energia e me- tabólitos para a produção da fibra com penugem menos favorecida às custas de produção de algodão.

Conforme aqui usado, um "gene endógeno" é um gene que a- contece naturalmente nas espécies da planta produtora de fibra que foram escolhidas para modulação de características de fibra ou um gene que acon- tece naturalmente em uma espécie de outra planta produtora de fibra, mas pode ser introduzido na espécie da planta produtora de fibra que foi escolhi- da para modulação de características de fibra através de técnicas de gera- ção convencionais.

Ficará claro que a expressão de gene de SusC endógeno pode ser também regulada descendentemente usando genes quiméricos confor- me aqui descrito, onde o DNA codificando o RNA específico-alvo tem uma seqüência de nucleotídeo de pelo menos 20 nucleotídeos consecutivos sele- cionada das seqüências de nucleotídeo codificando as seqüências de ami- noácido da SEQ ID N2: 2, 3, 5, 7, 9, 11 ou 13 ou seu complemento, ou onde o RNA específico-alvo tem uma seqüência de nucleotídeo de pelo menos 20 nucleotídeos consecutivos selecionada das seqüências de nucleotídeo da SEQ ID N9: 1, 4, 6, 8, 10, 12 ou 14.

Conforme aqui usado, o termo "promotor" significa qualquer DNA que é reconhecido e ligado (diretamente ou indiretamente) por uma RNA-polimerase dependente de DNA durante iniciação da transcrição. Um promotor inclui o sítio de iniciação de transcrição, e sítios de ligação para fatores de iniciação de transcrição e RNA polimerase, e pode compreender vários outros sítios (por exemplo, acentuadores), aos quais proteínas regu- ladoras de expressão de gene podem se ligar.

Conforme aqui usado, o termo "promotor expressável em planta" significa uma seqüência de DNA que é capaz de controlar (iniciação) de transcrição em uma célula de planta. O promotor de genes quiméricos des- crito aqui pode ser naturalmente associado com as regiões de codificação ou ele pode ser um promotor heterólogo. O termo promotor expressável em planta inclui qualquer promotor de origem de planta, mas também qualquer promotor de origem de não-planta que seja capaz de direcionar a transcrição em uma célula de planta, isto é, certos promotores de origem viral ou bacte- riana tal como o CaMV35S, o promotor do vírus do trevo subterrâneo N5 4 ou Ng 7 ou promotores do gene de T-DNA e similar.

O promotor expressável em planta pode ser constitutivo ou ele pode iniciar a transcrição da região ligada a jusante de maneira espacial ou temporária. Um promotor expressável em planta que controla início e manu- tenção de transcrição de preferência em células de fibra é um promotor que direciona a transcrição da região de DNA operavelmente ligado para um ní- vel maior em células de fibra e nas células de epiderme de base do que em outras células ou tecidos da planta. Tais promotores incluem o promotor de algodão de um gene de β-tubulina específico de fibra (conforme descrito no W00210377), o promotor do algodão de um gene de actina específico de fibra (conforme descrito no W00210413), o promotor de um gene de proteí- na de transferência de lipídeo específico de fibra de algodão (conforme des- crito na US5792933), um promotor de um gene expansina de algodão (W09830698) ou um promotor de um gene de quitinase em algodão (US2003106097) ou os promotores dos genes específicos de fibra descritos na US6259003 ou US6166294. O promotor pode ser também induzível por composto químico (geralmente em combinação com um ativador transcrip- cional) conforme descrito, por exemplo, no W09321334, US5514578, EP0823480, W098O5789, W001/34821 ou W00220811.

Os métodos descritos aqui vão mudar as características de fi- bras produzidas pelas plantas modificadas incluído resistência, comprimen- to, finura da fibra, razão de maturidade da fibra, teor de fibra imatura, unifor- midade da fibra e "micronaire".

- O "micronaire" da fibra (que pode ser determinado através de HVI) é uma medida sem unidade que depende ambos da maturidade da fi- bra (ou espessura da parede determinada por teor de celulose de parede secundária) e diâmetro da fibra.

- Resistência do feixe da fibra (através de HVI) é expressa em unidades de (cN4ex). Ela é a resistência específica do feixe de fibra onde a

finura da fibra individual (tex) é calculada a partir do valor de "micronaire".

- Finura da fibra (através de AFIS) é expressa como (mTex). Ela representa o peso, em miligramas, de um quilômetro da fibra. Mil metros de fibras com uma massa de 1 miligrama é igual a 1 millitex.

- A razão de maturidade da fibra (através de AFIS) é uma ex-

pressão do grau de espessamento de parede celular (dependendo da depo- sição de celulose na parede celular secundária). É a razão de fibras com uma razão de circularidade de 0,5 (ou mais) dividida pela quantidade de fi- bras com 0,25 (ou menos) de circularidade. (Fibras com paredes mais es- pessas são menos propensas a colapso e permanecem mais circulares

quando da secagem). Quanto maior a razão da maturidade, mais maduras as fibras são e melhor as fibras são para tingimento.

- O teor de fibra imatura ("% IFC", através de AFIS) é a porcen- tagem de fibras com maturidade de menos do que 0,25. Quando menor a % de IFC, mais adequada é a fibra para tingimento.

- Várias unidades diferentes são usadas como indicadores de

comprimento de fibra, mostra valores para três dessas conforme agora des- crito. Média superior ("UHM", através de HIVI) é o comprimento médio da metade mais longa das fibras (base em peso).

- O índice de Uniformidade de fibra ("Ul", através de HVI) ex-

pressa a razão do valor médio (Comprimento Médio) para o Comprimento

Médio Superior. Ele é uma medida do espalhamento de comprimento da fi- bra dentro de uma população; se todas as fibras tiverem o mesmo compri- mento Ul seria igual a 100%. Teor de Fibra Curta ("% SFC1 através de HVI) é a porcentagem de fibras de menos do que [1,27 cm] [1/2]" de comprimento em uma base em peso. HVI é pensado medir o Teor de Fibra Curta confor- me determinado através de genética apenas uma vez que a medição não impõe estresse de quebra de fibra potencial adicional.

Outros indicadores de comprimento de fibra incluem o compri- mento com base em peso ("L(p)" [cm] [pol.], através de AFIS) é o compri- mento médio de fibras calculado em uma base em peso. O comprimento com base em número ("L(n)M [cm] [pol.], através de AFIS) é o comprimento médio de fibras calculado através de número. O comprimento "L5% (n)" [cm] [pol.] (através de AFIS) é o span Iength 5% ou o comprimento estendido em 5% das fibras quando elas são paralelas e aleatoriamente distribuídas. O comprimento "L2,5% (n)" [cm] [pol.] (através de AFIS) é o span Iength 2,5%, ou o comprimento estendido em 2,5% das fibras quando elas são paralelas ou aleatoriamente distribuídas. O "UQL (p)" [pol.] (através de AFIS) é o com- primento quartil superior de fibras em peso, ou o comprimento excedido em 25% das fibras em peso. Finalmente, "SFC (n)" [cm] [pol.] e "SFC (p)"[pol.] (através de AFIS) são a porcentagem de fibras de menos do que 1,27 cm (0,50 polegada) de comprimento com base em número e peso, respectiva- mente. Em contraste com HVI, AFIS bate as fibras antes de tomar essas medições, que tem potencial para causar quebra de fibra. Valores de SFC AFIS são uma boa indicação das características das fibras após processa- mento normal.

Ficará claro que os métodos e meios descritos aqui para alterar as características de fibras em plantas produtoras de fibra tal como plantas de algodão podem ser combinados com outros métodos para alterar as ca- racterísticas de fibra como conhecido na técnica.

Em uma modalidade da invenção, os métodos e meios do pre- sente pedido são combinados com aqueles descritos no W02005/017157 (incorporado aqui a título de referência) ou W001/17333. É esperado que a expressão combinada dos genes vá resultar em um efeito sinérgico sobre o aumento do comprimento e/ou resistência da fibra. Os métodos e meios do presente pedido podem ser também combinados com outros métodos e meios direcionados à modificação das características da fibra conforme des- crito, por exemplo, no PCT/EP2006/005853 ou no W098/00549.

Os genes quiméricos podem ser introduzidos através de trans- formações subsequentes em células de uma planta ou podem ser combina- dos em células de uma planta através de cruzamento entre plantas compre- endendo um gene quimérico cada.

Como o início de síntese de parede celular secundária em fibras, de modo que fibras de algodão se sobrepõem à fase de alongamento de fibra, pode ser ainda vantajoso retardar o início de expressão da isoforma C de Sacarose até um estágio posterior, deste modo prolongando a fase de alongamento de fibra. Este retardo na expressão do gene de SusC pode a- inda ser combinado com uma expressão aumentada da expressão do gene de SusC em um estágio posterior. Um modo de atingir este r-etardo seria "trocar" o(s) gene(s) de SusC endógeno(s) por um gene de SusC cuja ex- pressão é ativada em uma mudança mais tarde do que os genes de SusC endógenos, por exemplo, através da redução da expressão do gene de SusC endógeno, conforme aqui descrito, e introdução da região de codifica- ção de SusC sob o controle de um promotor que é ativado em um estágio desenvolvimental posterior de síntese de parede celular secundária, tal co- mo, por exemplo, o promotor E6 (John, M.E., Keller, G., Proc. Nati Acad. Sei. USA 1996, 93:12768-12773). A região de codificação de SusC quiméri- ca sob controle de um promotor expresso em um estágio posterior em sínte- se de parede celular secundária pode ser introduzida ectopicamente, ou o gene de SusC endógeno pode ser introduzido através de técnicas de re- combinação homóloga, conforme descrito, por exemplo, no PCTVEP2006/003086. Como o gene de SusC das cultivares de Gossypium barbadense, tal como variedades ΡΙΜΑ, parece ser expresso em um estágio mais tarde do que o gene de SusC de variedades G. hirsutum, "troca" do gene de SusC em variedades de G. hirsutum por genes de SusC de cultiva- res de G. barbadense é esperada prolongar a fase de alongamento de fibra e levar a fibras de algodão mais longas. A invenção também compreende os genes quiméricos aqui des- critos, bem como plantas, sementes, tecidos compreendendo esses genes quiméricos e fibras produzidas a partir de tais plantas.

Métodos para transformar plantas são bem conhecidos na técni- ca. Métodos para transformar plantas de algodão são também bem conheci- dos na técnica. Transformação mediada por agrobacterium de algodão foi descrita, por exemplo, na patente US 5.004.863 ou na patente US 6.483.013 e transformação de algodão através de bombardeamento de partícula é rela- tado, por exemplo, no WO 92/15675.

Os genes quiméricos de acordo com a invenção podem ser in- troduzidos em plantas de uma maneira estável ou de uma maneira transien- te usando métodos bem conhecidos na técnica. Os genes quiméricos podem ser introduzidos em plantas ou podem ser gerados dentro da célula de plan- ta conforme descrito, por exemplo, na EP 1339859.

Os genes quiméricos podem ser introduzidos através de trans- formação em plantas de algodão das quais calos embriogênicos podem ser derivados, tal como Coker 312, Coker310, Coker 5Acala SJ-5, GSC25110, FIBERMAX 819 , Siokra 1-3, T25, GSA75, Acala SJ2, Acala SJ4, Acala SJ5, Acala SJ-C1, Acala B1644, Acala B1654-26, Acala B1654-43, Acala B3991, Acala GC356, Acala GC510, Acala GAM1, Acala C1, Acala Royale, Aeala Maxxa, Acala Prema, Acala B638, Acala B1810, Acala B2724, Acala B4894, Acala B5002, não-Acala variedade "picker" Siokra, "stripper" FC2017, Coker 315, STONEVILLE 506, STONEVILLE 825, DP50, DP61, DP90, DP77, DES119, McN235, HBX87, HBX191, HBX107, FC 3027, CHEMBRED A1, CHEMBRED A2, CHEMBRED A3, CHEMBRED A4, CHEMBRED B1, CHEMBRED B2, CHEMBRED B3, CHEMBRED C1, CHEMBRED C2, CHEMBRED C3, CHEMBRED C4, PAYMASTER 145, HS26, HS46, SICA- LA, PIMA S6 ORO BLANCO ΡΙΜΑ, FIBERMAX FM5013, FIBERMAX FM5015, FIBERMAX FM5017, FIBERMAX FM989, FIBERMAX FM832, FI- BERMAX FM966, FIBERMAX FM958, FIBERMAX FM989, FIBERMAX FM958, FIBERMAX FM832, FIBERMAX FM991, FIBERMAX FM819, FI- BERMAX FM800, FIBERMAX FM960, FIBERMAX FM966, FIBERMAX FM981, FIBERMAX FM5035, FIBERMAX FM5044, FIBERMAX FM5045, FIBERMAX FM5013, FIBERMAX FM5015, FIBERMAX FM5017 ou FIBER- MAX FM5024 e plantas com genótipos derivados dos mesmos. "Algodão" conforme aqui usado inclui Gossypium hirsutum ou Gossypium barbadense. "Plantas progenitoras de algodão" incluem Gossypium arbore- tum, Gossypium herbaceum e Gossypium raimondii e Gossypium longicaiyx.

Não obstante, os métodos e meios da presente invenção podem ser também empregados para outras espécies de planta tal como cânhamo, juta, Iinho e plantas lenhosas, incluindo, mas não limitado a, Pinus spp., Po- pulus spp., Picea spp., Eucalyptus spp., etc.

A planta transformada obtida pode ser usada em um esquema de geração convencional para produzir plantas mais transformadas com as mesmas características ou para introduzir o gene quimérico de acordo com a invenção em outras variedades da mesma espécie de planta ou relacionada, ou em plantas híbridas. Sementes obtidas das plantas transformadas con- têm os genes quiméricos da invenção como um inserto genômico estável e são também compreendidas pela invenção.

Em outra modalidade, o método é provido para identificação de variações alélicas das proteínas envolvidas em características de fibra em uma população de genótipos ou variedades diferentes de uma espécie de planta particular, de preferência uma espécie de planta produtora de fibra, que estão correlacionadas ou sozinhas ou em combinação com a quantida- de e/ou qualidade de produção de fibra. Este método inclui as etapas que seguem:

a) provisão de uma população de variedades ou genótipos diferen-

tes de uma espécie de planta particular ou espécies de planta de intercru- zamento compreendendo formas alélicas diferentes das seqüências de nu- cleotídeo codificando Sacarose sintase isoforma C, tal como seqüências de nucleotídeo codificando SEQ ID Nq 1, 4, 6, 8, 10, 12 ou 14. As formas aléli- cas diferentes podem ser identificadas usando os métodos descritos em ou- tro local neste pedido. De preferência, uma população de segregação é pro- vida, onde combinações diferentes das variações alélicas das proteínas SusC estão presentes. Métodos para produção de populações de segrega- ção são bem conhecidos na técnica de geração de planta.

b) determinação de parâmetros relacionados com características de fibra para cada indivíduo da população;

c) determinação da presença de uma forma alélica particular das seqüências de nucleotídeo codificando SusC para cada indivíduo da popula- ção; e

d) correlação da ocorrência de característica de fibra particular com a presença de uma forma alélica particular da seqüência de nucleotídeo a- cima mencionada ou uma combinação particular de tais formas alélicas.

A informação resultante pode ser usada para acelerar varieda- des de programa de geração com características de fibra e resistência à se- ca particulares, através da determinação da presença ou ausência de formas alélicas, usando técnicas de biologia molecular convencionais.

Formas alélicas do gene de SusC associadas com característi- cas de fibra particulares podem ser também identificadas, isoladas e introdu- zidas em plantas, tal como plantas de algodão, com o que a expressão da SusC endógena foi reduzida ou eliminada. Tal redução de expressão dos genes de SusC endógenos pode ser convenientemente conseguida através de silenciamento pós-transcripcional ou transcripcional conforme aqui descri- to, ou pode ser conseguida através de inativação, tal como através de dele- ção, dos genes de SusC endógenos. Introdução das formas alélicas pode ser conseguida através de técnicas de geração ou através de transformação com os genes isolados.

Em outra modalidade da invenção, anticorpos criados contra o novo tipo de genes de Sacarose sintase são providos, particularmente anti- corpos reconhecendo as proteínas SusC tendo as seqüências de aminoáci- do de SEQ ID Ng: 2, 3, 5, 7, 9, 11 ou 13.

Conforme aqui usado, "compreendendo" deve ser interpretado como especificando a presença das características, inteiros, etapas ou com- ponentes declarados conforme referido, mas não impede a presença ou adi- ção de uma ou mais das características, inteiros, etapas ou componentes, ou grupos dos mesmos. Então, por exemplo, um ácido nucléico ou proteína compreendendo uma seqüência de nucleotídeos ou aminoácidos pode com- preender mais nucleotídeos ou aminoácidos do que aqueles realmente cita- dos, isto é, ser embebidos em um ácido nucléico ou proteína maior. Um ge- ne quimérico compreendendo uma região de DNA1 que é funcionalmente ou estruturalmente definida, pode compreender regiões de DNA adicionais, etc.

Os exemplos não-limitantes que seguem descrevem a identifica- ção de um novo tipo de sacarose sintase envolvida em síntese de parede de célula de planta secundária e genes quiméricos para alteração das caracte- rísticas de fibra em plantas produtoras de fibra tal como algodão e usos dos mesmos. A menos que de outro modo declarado nos Exemplos, todas as técnicas de DNA recombinante são realizadas de acordo com protocolos padrão conforme descrito em Sambrook e outros (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Segunda Edição, Cold Spring Harbor Laboratory Press, NY e nos Volumes 1 e 2 de Ausubel e outros (1994) Current Proto- cols in Molecular Biology, Current Protocols, USA. Materiais e métodos pa- drão para trabalho molecular de planta são descritos em Plant Molecular Bio- logy Labfax (1993) de R.D.D. Croy, publicado em conjunto pela BIOS Scien- tific Publication Ltd. (RU) e Blackwell Scientific Publications, RU.

Na descrição e nos exemplos, referência é feita às seqüências que seguem representadas na listagem de seqüência: SEQ ID N-:1: Seqüência de nucleotídeo de cDNA codificando sacarose sin- tase tipo C de algodão.

SEQ ID NQ:2: Seqüência de aminoácido de cDNA codificando sacarose sin- tase tipo C de algodão.

SEQ ID NQ:3: Seqüência de aminoácido de SusC de uma cultivar de Gossy- pium hirsutum.

SEQ ID NQ:4: Seqüência de nucleotídeo de DNA genômico de SusC de culti- var de Gossypium hirsutum.

SEQ ID N9:5: Seqüência de aminoácido de SusC de cultivar de Gossypium barbadense.

SEQ ID Ns:6: Seqüência de nucleotídeo de DNA genômico de SusC de culti- var de Gossypium barbadense codificando a proteína SUSc de SEQ ID N9:7. SEQ ID N-:7: Seqüência de aminoácido de SusC de Gossypium arboreum. SEQ ID Ng:8: Seqüência de nucleotídeo de DNA genômico de SusC de Gossypium arboretum.

SEQ ID NQ:9: Seqüência de aminoácido de SusC de Gossypium raimondii. SEQ ID NQ:10: Seqüência de nucleotídeo de DNA genômico de SusC de Gossypium raimondii.

SEQ ID NQ:11: Seqüência de aminoácido de SusC de Gossypium Iongicalyx subtipo 1

SEQ ID NQ: 12: Seqüência de nucleotídeo de DNA genômico de SusC de Gossypium Iongicalyx subtipo 1

SEQ ID NQ: 13: Seqüência de aminoácido de SusC de Gossypium Iongicalyx subtipo 2

SEQ ID N-: 14: Seqüência de nucleotídeo de DNA genômico de SusC de Gossypium Iongicalyx subtipo 2

SEQ ID NQ:15: Seqüência de aminoácido da seqüência consenso C-terminal de SusC

SEQ ID Ns:16: Seqüência de aminoácido da seqüência consenso N-terminal de SusC

SEQ ID NQ:17: Seqüência de oligonucleotídeo usada como iniciador especí- fico de SUS C (5'UTR)

SEQ ID NQ:18: Seqüência de oligonucleotídeo usada como iniciador especí- fico de SUS C (3'UTR). Exemplos

Exemplo 1. Identificação de sacarose sintases do tipo C em espécie Gossy- pium

Identificação de SusC. Foi mostrado que existem pelo menos 3 classes de genes de Sus expressos em fibra de algodão durante o desen- volvimento, chamados tipos A, B e C. Os tipos A/D são homólogos à se- qüência previamente relatada (Número de acesso U73588) e o tipo B mostra similaridade de seqüência forte com a seqüência publicada. As seqüências tipo C providas neste documento são novas e mostram expressão diferencial entre fase de alongamento e de parede celular secundária. O tipo C parece ser a isoforma que aparece em estágios posteriores em desenvolvimento de fibra. SusC é apenas 76% idêntica às proteínas dos tipos A e B no nível de aminoácido. Usando RTPCR e análise Northern foi mostrado que o perfil de expressão desenvolvimental do transcrito tipo C precede síntese de parede celular secundária mas mostra um padrão mais comensurável com um papel nesta fase de desenvolvimento de fibra enquanto os tipos AeB são expres- sos muito cedo em alongamento de fibra. O gene do tipo C é também ex- presso fortemente em tecido de caule. cDNA foi isolado de tecido de fibra em estágios diferentes de

seu desenvolvimento: 5, 10, 15, 20, 40 dias pós-antese (dpa). Bibliotecas foram feitas a partir desses cDNAs e DNA foi isolado. Este DNA foi então usado para caracterizar a expresso de susyC usando 9 ng de cada DNA de biblioteca como material de partida para uma reação de PCR usando como iniciadores o iniciador específico do tipo SusC de SEQ ID Nos.: 17 e 18. O tamanho esperado do fragmento amplificado é 2550 pb para o cDNA e 3353 pb para o DNA genômico. Controles apropriados foram ativados para validar o caráter semiquantitativo deste ensaio. A Figura 2 mostra os resultados, e permite também concluir que mRNA de SusC é relativamente mais abundan- te a 20-40 dpa.

Fracionamento de proteína. Extratos de proteína de fibras em estágio de alongamento (8-11 DAF) e estágio de síntese de parede de célula secundária (15-25 DAF) foram fracionados para prover frações solúvel (cito- sólica) e microssomal (membrana de plasma, citoesqueleto e tonoplasto). A fração microssomal foi purificada mais para enriquecer proteínas de mem- brana de plasma. Esta fração PM não tem mais nenhuma contaminação ci- toesqueletal ou de parede de célula, conforme julgado através de western blotting contra actina. Também incluída foi também outra fração celular com- preendendo proteínas apoplásticas de fibras intactas obtidas através de Ia- vagem suave com tampão isotônico incluindo inibidores de protease e EG- TA. Essas preparações de proteína foram ativadas em SDS-PAGE e as pro- teínas Sus identificadas através de western blotting. Os fragmentos de gel foram excisados e submetidos à digestão tríptica seguido por espectrometria de massa em tandem para identificar a forma de Sus presente. Exemplos de peptídeos de assinatura usados para identificar a isoforma de SusC são mostrados nas Tabelas 1A e 1B. O peso molecular previsto de SusC é 90,3 kDa conforme oposto a 92,4 para as proteínas tipos A/D e B permitindo se- paração da forma C das isoformas A/B em SDS-PAGE. Esta separação foi confirmada através de análise dessas 2 faixas através de MS-MS de peptí- deo (a faixa maior contém peptídeos de assinatura de A e B enquanto a fai- xa menor sozinha tem peptídeos tipo C únicos).

Tabela 1A: Peptídeos específicos de SusC detectados em apoplasto

apoplasto 8d apoplasto 17d apoplasto 25d Nenhum tipo C detectado 9.20e+005 (R)KAEEYLTPLSSDTPYSV FEK() 1.45e+006 (R)IQDVNSLQHALR() 8.17e+005 2.37e006 (K)LLTLTG VYG FSK(H) (R)KAEEYLTPLS SDTPYSVFEK() 1.32e+006 2.16e006 (K)YTWQIYSEK() (K)NLTGLVEFYAK(N) 6.90e+005 (R)STQEAVVSSPLVALAI R() 7.45e+006 (K)LQG LDITPR(I) 3.64e+006 (K)YTWQIYSEK() 5.53e+006 (R)VVDGIDVFDPK(F) 3.34e+006 (K) LLTLTGVYGFSK(H) 4.17e+005 (K)D TLGQYESHIAF- TLPGLYR(V) 3.50e+005 (K)LFVEEMPVAEYLR(L) Tabela 1B: Peptídeos específicos de SusC detectados em fração microsso- mal

micros- somal 8d micros- somal 13d microssomal 20d microssomal 25d Nenhum tipo C de- tectado Nenhum tipo C de- tectado 6.06E+006 (R)KAEEYLTPLSSDTPY SVFEK() 3.94E+006 (R) KAEEYLTPLS SDTPYSVFEK() 7.64E+006 (K)LLTLTGVYGF SK(H) 1.13E+006 (K)LFVEE MPVAE- YLR(L) 2.31 E+006 (R)IQ DVNSLQHALR() 3.89E+006 (R)VVDGIDVFDPK(F ) 6.70E+006 (R)VVDGIDVFDPK(F 3.68E+006 (K)LLTLTGVYGF SK(H) 1.82E+006 (R)YIEmLHAWmYNNR( V) 3.97E+005 (K)SGFNIDPYNGDL AAETLANFFEK(C) 3.19E+006 (K)YTWQIYSEK() 2.63E+006 (K)NLTGLV EF- YAK(N) 1.99E+006 (R)STQEA VVSSPLVAL AIR() 1.26E+006 (R)STQEAVV SSPL- VALAI R( 1.05E+006 (R)LGESLATHPQQAK(S ) 2.05E+006 (K)NLTGLVEFYAK(N ) 5.72E+006 (K)LFVEE m PVAE- YLR(L) 3.01 E+006 (K)D TLGQYESHIA FTLPGLYR(V) 8.25E+005 (K)DTLGQYESHIAFTLP GLYR(V) 2.18E+006 (R)IQ DVNSL- QHALR() 5.25E+006 (K)LQG LDITPR(I) 8.02E+005 (R)YIEmLH AWmYNNR(V) 3.28E+006 (K)NLTGLVEFYAK(N) 3.60E+005 (K)TKYPDSDIN WK(Q 9.91E+005 (K)SIGNGmDFLNR(H ) 5.35E+005 (R)L GESLATHPQQ AK(S) 5.59E+005 (R)ALEEELLHR(F) 2.77E+006 (K)LFVEE mPVAE- YLR(L)

A Tabela 2 apresenta um sumário dos dados de espec. de mas- sa e SDSPAGE/Western. De nota particular é a pouca abundância de proteí- na Sus-C de frações solúvel, microssomal e PM. Isto parece paradoxal con- siderando os níveis altos de transcrito presentes nos estágios finais do de- senvolvimento de fibra. Lavagens apoplásticas no estágio final de desenvol- vimento descrevem que a proteína tipo C está presente em níveis altos (com relação a A) em western blots, o inverso das observações para as frações citosólica, microssomal e PM. Sus-C é altamente abundante em 25 DAF e não podia ser detectada em 8 DAF através de MS-MS de peptídeo. Em con- traste, Sus-A possivelmente Sus-B são ubiquitárias durante o desenvolvi- mento (em todas as frações). Sus-A é a principal, e possivelmente a única isoforma em frações PM e ativa como uma proteína de 85 kDa em SDS-

PAGE.

Tabela 2. Sumário de dados de espec. de massa e SDSPAGBWestern

microssomal 8 dpa (faixa su- perior) Susy A+B microssomal 8 dpa (faixa infe- rior) Susy A ou A+B microssomal 15 dpa Susy A+C ou A+B+C membrana de plasma 8 dpa Susy A ou A+B membrana de plasma 15 dpa Susy A or A+B solúvel 8 dpa Susy A ou A+B solúvel 15 dpa Susy A+B apoplasto 8 dpa (faixa superi- or) Susy A+B (quantidade muito baixa) apoplasto 8 dpa (faixa inferior) Susy A+B (faixa predominante) apoplasto 25 dpa (faixa superi- or) Susy A+B+C *(quantidade muito baixa) apoplasto 25 dpa (faixa inferi- or) Susy C (faixa predominante)

A presença de C nesta amostra é mais provavelmente devido à contamina- ção de faixa inferior grande que corresponde à SusC.

O número de peptídeos se compara com Sus-C na fração de apoplasto a 25 DAF e o sinal de western indica que esta isoforma é abun- dante, e apenas predominantemente presente no apoplasto a 25 DAF. Inte- ressantemente, SusA e B estão presentes como as formas dominantes no apoplasto em fibra de 8 DAF. Esses resultados implicam em um papel prin- cipal para Sus na parede de célula de fibra de algodão e a correlação de expressão de Sus-C no nível de RNA com formação de parede secundária e a abundância da proteína nas paredes a 25 DAF sugerem que Sus-C é a isoforma de parede de célula principal no estágio de síntese de parede se- cundária. Trabalho com imuno-ouro EM mostra claramente sinal de Sus na parede de célula secundária externa. Isto está inteiramente de acordo com a presença de proteína Sus-C no apoplasto do estágio de parede celular. Exemplo 2. Análise da isoforma SusC e identificação de diferenças entre as isoformas diferentes de sacarose sintase em algodão e espécies relaciona- das

Sítios de fosforilação. Um sítio de fosforilação de serina situado na extremidade N da proteína foi bem caracterizado na literatura, tendo RXXS como uma seqüência consenso. A fosforilação deste aminoácido seri- na específico em Zea mays (com as posições que seguem: 12RXXS15) pare- ce se relacionar com a liberação da enzima susy da membrana de plasma (Winter, H, e outros, 1997 - FEBS Letters 420, 151-155; Hardin, S.C. e ou- tros, 2004, Plant Physiology 134, 1427-1438). Mutação deste mesmo amino- ácido serina na posição 8RXXS11 faz com que a sacarose sintase de mung bean seja mais eficiente em uso de sacarose para fazer UDPgIicose (= Km maior) (Nakai T. e outros, 1999, Proc. Natl. Acad. Sci., USA 96, 14-18). Fos- forilação neste sítio específico foi também caracterizada em soja e parece se relacionar com a perda em hidrofobicidade e então putativamente com o en- fraquecimento da ligação com a membrana de plasma (Zhang, X.Q. e ou- tros, 1999, Archives of Biochemistry and Biophysics 371, 70-82). Este sítio de fosforilação foi também caracterizado em outras espécies de planta: (sy- camoré) (Pozueta-Romero, J. e outros, 2004 - Physoiogia Piantarum 122, p. 275), pêra Japonesa (Tanase, K. e outros, 2002-Physoiogia Piantarum 114, p. 21) e Gossypium hirsutum (algodão upiand) (Haigler, C.H. e outros - 2001 - Piant Molecular Biology 47, 29-51). Conclusões desses estudos indicam que a fosforilação tem uma influência sobre o valor Km da enzima.

Uma seqüência consenso similar pode ser identificada em todas as proteínas sacarose sintase G isoladas com as posições de aminoácido que seguem: 27RXXS30. Este sítio de fosforilação é então situado mais para dentro da proteína. Uma assinatura similar pode ser encontrada em outros genes de sacarose sintase de planta conhecidos: L19762, AY205302, AY205085, AJ537575, M18745, U2487, X75332, Y76091, X82504, AJ131999. A maioria desses genes tem ambos sítios de fosforilação 8RXXS11 e 27RXXS30. Proteínas L19762 e AJ131999 apenas têm o último.

Outro sítio de fosforilação de serina foi caracterizado na literatu- ra: Ser170 de susl (milho). Este sítio foi correlacionado com marcação de proteína susy para proteólise (Hardin, S.C. e outros, 2003, The Plant Jour- nal, 35, 588-603). Este aminoácido Ser está também presente em SusC. Apenas duas sacarose sintases não contêm este resíduo Serina: Atsus5 e AB018561.

Domínios e proteína, sítios funcionais e motivos específicos pre- sentes em SusC (usando o programa Inter Pro Scan). SusC contém dois domínios chamados respectivamente sacarose sintase (dos aminoácidos 1 a 545) e glicosil transferase (dos aminoácidos 549 a 737) e uma região de fa- mília chamada sacarose sintase (dos aminoácidos 18 a 794). Sítio de ligação de UDP: a seqüência que segue representa a região de ligação de Uridina nas proteínas sacarose sintase C: 270VVIMTPHGYFAQDNVLGYPDTGGQVVYILDQVRALEEELLHRFKLQGLDI TPRILVITRL329. Esta seqüência mostra uma homologia muito alta em todas as sacarose sintases de planta conhecidas.

Estrutura genômica. Uma comparação foi feita no nível genômi- co do gene de SusyC com os outros genes de susy de algodão isolados (Fi- gura 3). Ficará imediatamente claro que o gene de susyC tem uma estrutura genômica particular pelo fato de que ele tem menos íntrons comparado com os outros genes de susy de Gossypium spp. A estrutura de éxon do íntron do gene de SusyC é também consideravelmente diferente dos genes susy de Arabidopsis.

Hidrofobicidade. O gráfico de hidrofobicidade de susyC foi anali- sado comparando-o a outras sacarose sintases de planta conhecidas. A ex- tremidade N-terminal parece ser hidrofóbica, uma particularidade que não deve ser encontrada na maior parte das sacarose sintases de planta. As sa- carose sintases que seguem eram mais similares a SusC neste nível: SUS6 (Arabidopsis thaliana), sacarose sintase de mung bean (D10266), sacarose sintase de eucalyptus (DD014303) e sacarose sintase de choupo (AY341026).

Região de ligação de actina. Uma região de ligação de actina putativa foi descrita na literatura e parece estar presente nas sacarose sinta- ses (Winter, H. e outros - 1998 - FEBS Ietters 430, 205-208. Winter, H. e Hu- ber, S.C. - 2000 - Criticai Reviews in Plant Sciences 19(1), 31-67). Esta regi- ão se liga especificamente à F-actina. O sítio de ligação de actina de SusyC putativo tem a seqüência de aminoácido que segue: 383KDVAAEITKEFQ394. Os aminoácidos destacados em negrito são os que são específicos para SusyC. A seqüência consenso para este sítio entre sacarose sintases de planta diferentes é: [^E,D]-D-[V,A]-[A,G,S,T]-X-E-[L,V,I]-[T,S1A1M]- [K,R,G,M,L]-E-[F*,L,M]-[Q,N].

Interessantemente, 383K(=lys) tem uma cadeia lateral básica en- quanto os resíduos de aminoácido (E(=glu) e D(=asp) têm cadeias laterais ácidas. Como K é único para a susyC isto pode indicar que esta proteína específica não se liga aos filamentos de F-actina. Além disso, o aminoácido F(=Phe), único para susyC, é mais volumoso do que seus contrapartes L e M das outras sacarose sintases de planta. Isto poderia atrapalhar mais a ligação com actina.

Seqüências de aminoácido específicas para proteínas SusC. Quando do alinhamento das diferentes sacarose sintases de planta se tor- nou aparente que algumas regiões do gene de susyC eram muito diferentes e específicas. Essas regiões estão situadas respectivamente nas extremida- des N- e C-terminais do gene de susyC e têm a seqüência de aminoácido que segue:

A (região N-terminal) = 36HKSQKLLSVLDKEAGNQALDGMVV59 B (região C-terminal) = 765AYQEQRGRKRYIEMLHAWMYNNRVKT790

A região N-terminal foi analisada examinando sua estrutura 2D prevista. Para este propósito os programas que seguem foram usados: HCA (análise de agrupamento hidrofóbico) e JPRED. Os resultados de ambos programas foram alinhados e comparados com as outras Sacarose sintases de Gossypium hirsutum (Figura 4). Está claro a partir desta análise que susC neste local é absolutamente única em estrutura. Os sítios de fosforilação diferentes são também indicados confirmando a característica única do gene de susyC. Uma análise similar foi realizada na região C-terminal (Figura 5). Novamente, a estrutura da SusC era diferente da estrutura das outras saca- rose sintases de algodão nesta região.

As regiões específicas de SusC N-terminais e C-terminais foram usadas para identificar seqüências EST em bancos de dados. Os resultados são sumarizados na tabela 3 que segue. Óvulos Parede Parede Outras espé- Outras Total (-3 a 0) de célu- de célula cies de gossy- espé- la pri- secundá- pium cies de mária ria planta (0 a 15 (20 a 40 dpa) dpa) Região N- 0 0 35 1 (=7-10 dpa) 0 36 terminal Região C- 1 0 30 1 (=7-10 dpa) 0 32 terminal

Tabela: número de EST's extraídas de alguns tecidos e espécies de planta específicos.

Exemplo 3. Superexpressão de SusC em algodão

Usando técnicas de DNA recombinante padrão, os elementos de DNA que seguem são operavelmente ligados:

• um promotor específico de fibra de algodão conforme descrito no W02004/066571

• uma região de DNA codificando uma sacarose sintase C tendo a seqüência de nucleotídeo da SEQ ID N-1

• uma região de terminador 3' nos.

Este gene quimérico é introduzido em um vetor T-DNA junto com um gene bar selecionável. O vetor T-DNA é introduzido em Agrobacterium tumefaciens e usado para produzir plantas de algodão transgênicas confor- me descrito na US 6.483.013.

Plantas de algodão transgênicas compreendendo o gene quimé- rico são analisadas quanto à expressão aumentada de SusC1 particularmen- te nas fibras, e as fibras obtidas dessas plantas são analisadas quanto à re- sistência de fibra, comprimento de fibra, razão de maturidade de fibra, teor de fibra imatura, uniformidade de fibra e "micronaire". Exemplo 4. Regulação descendente da expressão da isoforma SusC em

algodão Usando técnicas de DNA recombinante padrão, os elementos de DNA que seguem são operavelmente ligados:

• uma região de promotor CaMV 35S

• uma região de codificação de RNA de sentido correspondendo à seqüência de nucleotídeo da SEQ ID Ng 1 codificando a seqüência especí- fica de SusC N-terminal de SEQ ID Ne 18 ou a seqüência específica de SusC C-terminal da SEQ ID Ne 17.

• uma região de codificação de RNA de antissentido correspon- dendo ao complemento da seqüência de nucleotídeo da região de RNA de

sentido.

• uma região de terminador 3' nos.

Plantas de algodão transgênicas compreendendo o gene quimé- rico são analisadas quanto à expressão menor de SusC1 particularmente nas fibras, e as fibras obtidas dessas plantas são analisadas quanto à resistência de fibra, comprimento de fibra, razão de maturidade de fibra, teor de fibra imatura, uniformidade de fibra e "micronaire".

Exemplo 5. Superexpressão da isoforma de SusC em Arabidopsis thaliana transgênica

Usando técnicas de DNA recombinante padrão, os elementos de DNA que seguem foram operavelmente ligados: · uma região de promotor CaMV35S

• a região de DNA codificando a SusC de SEQ ID Ne:2 (SEQ ID N6:1 de nt84ant2474)

• uma região de terminador 3' nos

Ainda, o elemento de DNA que segue era operavelmente ligado · o promotor específico de caule do gene S2A de alfafa (Abra-

hams e outros, 1995, Plant Mo. Bioi., 27:413-528) que resulta em expressão vascular e tricoma em uma faixa de espécies de planta • A região de DNA codificando a SusC de SEQ ID NQ:2 (SEQ ID Ns: 1 de nt 84 a nt 2474).

• Uma região de terminador 3' nos.

Esses genes quiméricos foram introduzidos em um vetor T-DNA junto com um gene bar selecionável. O vetor T-DNA foi introduzido em A- grobacteríum tumefaciens e usado para produzir A. thaliana transgênica u- sando um método de mergulho floral. Plantas foram regeneradas e fenótipos registrados na geração T2 com vários fenótipos interessantes observados rotineiramente em plantas transgênicas obtendo um dos transgenes acima descritos.

Muitas das linhagens transgênicas para ambos construtos mos- tram ramificação de raiz acentuada em cultura, incluindo crescimento de raiz lateral extensiva. Adicionalmente observados foram perda de dominância apical, ramos florais múltiplos, perda de simetria de roseta e rigidez, rompi- mento de folha e filotaxia floral e tempo retardado de florescimento.

É imaginado que a ramificação aumentada e a perda de dominân- cia apical sejam devido a alongamento de célula reduzido em zonas meristemá- ticas devido a espessamento secundário prematuro de paredes de célula.

Uma grande proporção de linhagens transgênicas com qualquer um dos genes quiméricos mostrou um efeito fenotípico sobre estruturas tri- coma. Ramificação maior e pedestais espessos são geralmente vistos (Figu- ras 6C e D) e densidade de tricoma parece ser maior.

Caules e ramos florais de linhagens transgênicas Sus-C geral- mente mostram espessamento extremo e são bifurcados, possivelmente fasciados (Figuras 6A e B).

Três métodos foram usados para relacionar fenótipo com ex- pressão de transgene:

1) RT-PCR para Sus-C e o gene de Sus endógeno

2) Western blotting usando o anticorpo específico de Sus-C (vide Figura 7)

3) Ensaio de atividade de Sus

Linhagens transgênicas mostrando níveis altos de expressão de 35S-Sus-C, correlacionado com os fenótipos mais severos Listagem de seqüência <110> Bayer BioScience N.V.

Commonwealth Scientific and Industrial Research

Organization

Ruan, Yong-Ling

Furbank, Robert

Brill, Lizz

Van Thournhout, Michel

Arioli, Antonio

<120> Identificação de um Tipo de Sacarose Sintase e uso do Mesmo em Modificação Fibra

<130> BCS 06-2008 WOl <150> EP 06015433.3 <151> 2006-07-25 <150> US 60/834066 <151> 2006-07-28 <160> 18

<170> PatentIn versão 3.3 <210> 1 <211> 2635 <212> DNA

<213> Gossypium hirsutum <220>

<221> CDS

<222> (84)..(2474)

<400> 1

acgcggggtg tctttgattt ttatccatat cctaattctt catacattcc ttcccttctg 60

ccatttcagg aacccaaaaa aca atg gct tca ate agt gtt tgt gag cgt ttg 113

Met Ala Ser Ile Ser Val Cys Glu Arg Leu 10

ggt gaa tet cta gct act cat cca cag cag gea aag tet ate ttg tca 161

Gly Glu Ser Leu Ala Thr His Pro Gln Gln Ala Lys Ser Ile Leu Ser 20 25

agg att gaa age ctc gga aag ggt att cat aag tet caa aag ctg ctc 209

Arg Ile Glu Ser Leu Gly Lys Gly Ile His Lys Ser Gln Lys Leu Leu 35 40

tcg gtt ctc gat aaa gag gcc gga aat caa gea ctt gat ggg atg gtg 257

Ser Val Leu Asp Lys Glu Ala Gly Asn Gln Ala Leu Asp Gly Met Val

45 50 55

gtg ggg gtc ctc agg tcc act cag gaa gct gta gtg tcg tet cca ttg 305

Val Gly Val Leu Arg Ser Thr Gln Glu Ala Val Val Ser Ser Pro Leu 60 65 70

gtt gcc ctt gcc att cgt tca gct cct gga gtt tgg gag tac att gct 353

Val Ala Leu Ala Ile Arg Ser Ala Pro Gly Val Trp Glu Tyr Ile Ala 75 80 85 90

gtg gag gtc caa aag ctt ttt gtg gag gaa atg ccc gtt gct gag tat 401

Val Glu Val Gln Lys Leu Phe Val Glu Glu Met Pro Val Ala Glu Tyr

95 100 105

cta cgg ttg aag gaa gaa ctt gtt gat gga age tcc aat ggc gag ttt 449

Leu Arg Leu Lys Glu Glu Leu Val Asp Gly Ser Ser Asn Gly Glu Phe

110 115 120

atg ttg gaa ttg gac ttt ggt gea ttc aat aat tet gtt cct cgt cca 497

Met Leu Glu Leu Asp Phe Gly Ala Phe Asn Asn Ser Val Pro Arg Pro

125 130 135

tet ctt tca aag tcc att ggt aat ggc atg gac ttc ctc aac cgc cac 545

Ser Leu Ser Lys Ser Ile Gly Asn Gly Met Asp Phe Leu Asn Arg His

140 145 150

ctt tet gcc aag cta ttt caa gac aag gag aac ttg aac ttg ttg ctt 593

Leu Ser Ala Lys Leu Phe Gln Asp Lys Glu Asn Leu Asn Leu Leu Leu 155 160 165 170

gaa ttt ctc caa att cac tgc cag aag gga aag ggt atg ctg ttg aat 641

Glu Phe Leu Gln Ile His Cys Gln Lys Gly Lys Gly Met Leu Leu Asn

175 180 185

gac aga ate caa gat gtg aat tcc ctc caa cat gea tta agg aag gcc 689

20

25 Asp Arg Ile

gag gag tat Glu Glu Tyr

205

gag aaa agg Glu Lys Arg 220 gct gag cat Ala Glu His 235

gca cct gat Ala Pro Asp

1 5 gtc gcc aat

Val Ala Asn

aat gtt ttg Asn Val Leu

285

gat caa gtt Asp Gln Val

300 caa gga ctc

Gln Gly Leu 315

cct gat gct Pro Asp Ala

gga acc aag

Gly Thr Lys

Gln Asp Val Asn Ser 190

ctg act cct cta tcc Leu Thr Pro Leu Ser 210

ttt ctg ggg att ggt Phe Leu Gly Ile Gly 225

gtt ctt gag atg ate Val Leu Glu Met Ile 240

cct gtc gca ctt gaa Pro Val Ala Leu Glu 255

gtt gta ate atg act Val Val Ile Met Thr 270

gga tac cct gac aca Gly Tyr Pro Asp Thr 290

cgt gcc ttg gag gaa Arg Ala Leu Glu Glu 305

gac att acc cca cgt Asp Ile Thr Pro Arg 320

gta gga aca act tgc Val Gly Thr Thr Cys 335

tat tet gat att ctt Tyr Ser Asp Ile Leu 350

Leu Gln His Ala Leu 195

tcg gat acc ccg tac Ser Asp Thr Pro Tyr 215

ttg gag aag gga tgg Leu Glu Lys Gly Trp 230

cat ctt cta ttg gat His Leu Leu Leu Asp 245

age ttc ctt gga aga Ser Phe Leu Gly Arg 260

ccc cat gga tac ttt Pro His Gly Tyr Phe 275

ggt ggt cag gtt gtt Gly Gly Gln Val Val 295

gag ttg ctt cat cgt Glu Leu Leu His Arg 310

ate cta gtc att act Ile Leu Val Ile Thr 325

ggt cag cgt ctt gag Gly Gln Arg Leu Glu 340

cgg gta ccc ttc aga Arg Val Pro Phe Arg 355

Arg Lys Ala 200

tca gtt ttc 737

Ser Val Phe

ggt gat aat 785

Gly Asp Asn

ctc ctt cag 833

Leu Leu Gln 250

ate cca ttg 881

Ile Pro Leu 265

gcc caa gac 929

Ala Gln Asp 280

tat ate tta 977

Tyr Ile Leu

ttc aag ctg 1025

Phe Lys Leu

cgg ctc ctc 1073

Arg Leu Leu 330

aaa gtg tat 1121

Lys Val Tyr 345

act gag aag 1169

Thr Glu Lys

360 10

15

gga att gta cgt cca tgg ate tca cga ttc aaa gtc tgg cct tac ctg 1217

Gly Ile Val Arg Pro Trp Ile Ser Arg Phe Lys Val Trp Pro Tyr Leu

365 370 375

gag act tac act aag gat gtt gea gct gag ate acc aaa gag ttc cag 1265

Glu Thr Tyr Thr Lys Asp Val Ala Ala Glu Ile Thr Lys Glu Phe Gln

380 385 390

ggc aag cct gat ctg att gtt ggg aac tac agt gat gga aac att gtt 1313

Gly Lys Pro Asp Leu Ile Val Gly Asn Tyr Ser Asp Gly Asn Ile Val 395 400 405 410

gct tet tta ttg gea cat aag ttt gat gtt aca cag tgc act att gct 1361

Ala Ser Leu Leu Ala His Lys Phe Asp Val Thr Gln Cys Thr Ile Ala

415 420 425

cgt gea ctc gag aag acg aaa tac ccg gat tca gac att aac tgg aaa 1409

Arg Ala Leu Glu Lys Thr Lys Tyr Pro Asp Ser Asp Ile Asn Trp Lys

430 435 440

cag ctt gag gat aag tat cac ttc tcc tgt cag ttt act gct gat ctt 1457

Gln Leu Glu Asp Lys Tyr His Phe Ser Cys Gln Phe Thr Ala Asp Leu

445 450 455

att gct atg aac cat act gat ttt ate ate acc age acc ttc caa gag 1505

Ile Ala Met Asn His Thr Asp Phe Ile Ile Thr Ser Thr Phe Gln Glu

460 465 470

att gct gga age aag gac act ctc ggc caa tac gag agt cac att gct 1553

Ile Ala Gly Ser Lys Asp Thr Leu Gly Gln Tyr Glu Ser His Ile Ala 475 480 485 490

ttc act ctt cca ggg ctc tac cgc gtt gtt gat ggg ate gat gtt ttt 1601 Phe Thr Leu Pro Gly Leu Tyr Arg Val Val Asp Gly Ile Asp Val Phe

495 500 505

gat ccc aaa ttc aat att gtc tcc cct ggt gct gat atg age ata tac 1649

Asp Pro Lys Phe Asn Ile Val Ser Pro Gly Ala Asp Met Ser Ile Tyr

510 515 520

ttc cct tac acg gaa gag aag cgg agg ttg aag aag ttc cac ccg gag 1697

Phe Pro Tyr Thr Glu Glu Lys Arg Arg Leu Lys Lys Phe His Pro Glu

20

30 att gaa gag Ile Glu Glu 540

gta cta aaa Val Leu Lys 555

gac cga gtg Asp Arg Val

10

age cgg ctg Ser Arg Leu

aga aag gaa 1 5 Arg Lys Glu 605

tat gaa ctt Tyr Glu Leu 620

tcg tcc cag Ser Ser Gln 635

tgc gac acc Cys Asp Thr

25

ggc ttg act Gly Leu Thr

aca tgt tac Thr Cys Tyr 685

ttc aac ate

530

ctt ctt tac age cct Leu Leu Tyr Ser Pro 545

gac cgc aac aag ccg Asp Arg Asn Lys Pro 560

aag aac tta act ggg Lys Asn Leu Thr Gly 575

agg gaa ctg gtt aac Arg Glu Leu Val Asn 590

tcc aag gac tta gaa Ser Lys Asp Leu Glu 610

ate gaa aaa tac aag Ile Glu Lys Tyr Lys 625

atg aac cga gtg aga Met Asn Arg Val Arg 640

aag gga gea ttc gtt Lys Gly Ala Phe Val 655

gtt gtt gag gea atg Val Val Glu Ala Met 670

999 ggc cct gct gag Gly Gly Pro Ala Glu 690

gat cct tat aac ggt

48

535

gtt gag aat aca gag Val Glu Asn Thr Glu 550

att ctg ttt acc atg Ile Leu Phe Thr Met 565

ctc gta gag ttc tat Leu Val Glu Phe Tyr 580

ttg gtt gta gta ggt Leu Val Val Val Gly 595

gaa aag gct gaa atg Glu Lys Ala Glu Met 615

ttg aat gga caa ttc Leu Asn Gly Gln Phe 630

aat ggt gaa ctc tat Asn Gly Glu Leu Tyr 645

cag cct cct ata tac Gln Pro Pro Ile Tyr 660

acc tgt gga cta cca Thr Cys Gly Leu Pro 675

att ata gtt cac gga Ile Ile Val His Gly 695

gat ttg gct gcc gag

cac tta tgt 1745

His Leu Cys

gea agg ttg 1793 Ala Arg Leu 570

gcc aag aac 1841

Ala Lys Asn 585

gga gat agg 1889 Gly Asp Arg 600

aag aag atg 1937

Lys Lys Met

aga tgg ata 1985 Arg Trp Ile

cgt tat att 2033 Arg Tyr Ile 650

gag gct ttt 2081

Glu Ala Phe 665

aca ttt gea 2129 Thr Phe Ala 680

aaa tcg ggg 2177

Lys Ser Gly

acc ctt gcc 2225 10

Phe Asn Ile Asp Pro Tyr Asn Gly Asp Leu Ala Ala Glu Thr Leu Ala

700 705 710

aat ttc ttc gag aag tgc aaa gcg gat cca tct tat tgg gat gag ate 2273

Asn Phe Phe Glu Lys Cys Lys Ala Asp Pro Ser Tyr Trp Asp Glu Ile

715 720 725 730

tcc cag gga ggg ttg aaa cgc ata cag gag aag tat aca tgg cag att 2321

Ser Gln Gly Gly Leu Lys Arg Ile Gln Glu Lys Tyr Thr Trp Gln Ile

735 740 745

tac tcc gag aag cta ttg act ctc acc gga gtt tat ggc ttt tcg aaa 23 69 Tyr Ser Glu Lys Leu Leu Thr Leu Thr Gly Val Tyr Gly Phe Ser Lys

750 755 760

cat gta gct tac cag gag caa cgt ggg cgc aag cgt tac att gaa atg 2417 His Val Ala Tyr Gln Glu Gln Arg Gly Arg Lys Arg Tyr Ile Glu Met

765 770 775

ttg cat gea tgg atg tat aac aat cgg gtc aag act gtt cca cta gct 2465 Leu His Ala Trp Met Tyr Asn Asn Arg Val Lys Thr Val Pro Leu Ala 780 785 790

gtt gag taa agaaaaagca aaaggctgct tggaaaccaa ggaatttcca 2514

Val Glu

795

agaatgattg ctattgaagt tttatttttg cttctttttt tcaatttcgt aaatgtttaa 2574 tttcaacttt ggggtttccc cttggaatgt tttgaactct gggtttggtc ccattgattg 2634 c

2635

<210> 2 <211> 796 <212> PRT

<213> Gossypium hirsutum <400> 2

15

20

30

Met Ala Ser Ile Ser Val Cys Glu Arg Leu Gly Glu Ser Leu Ala Thr 10 I5

His Pro Gln Gln Ala Lys Ser Ile Leu Ser Arg Ile Glu Ser Leu Gly 25 30 Lys Gly Ile His Lys Ser Gln Lys Leu Leu Ser Val Leu Asp Lys Glu

40 45

Ala Gly Asn Gln Ala Leu Asp Gly Met Val Val Gly Val Leu Arg Ser

50 55 60

Thr Gln Glu Ala Val Val Ser Ser Pro Leu Val Ala Leu Ala Ile Arg 65 70 75 80

Ser Ala Pro Gly Val Trp Glu Tyr Ile Ala Val Glu Val Gln Lys Leu

85 90 95

Phe Val Glu Glu Met Pro Val Ala Glu Tyr Leu Arg Leu Lys Glu Glu

100 105 110

Leu Val Asp Gly Ser Ser Asn Gly Glu Phe Met Leu Glu Leu Asp Phe

115 120 125

Gly Ala Phe Asn Asn Ser Val Pro Arg Pro Ser Leu Ser Lys Ser Ile

130 135 140

Gly Asn Gly Met Asp Phe Leu Asn Arg His Leu Ser Ala Lys Leu Phe 145 150 155 160

Gln Asp Lys Glu Asn Leu Asn Leu Leu Leu Glu Phe Leu Gln Ile His

165 170 175

Cys Gln Lys Gly Lys Gly Met Leu Leu Asn Asp Arg Ile Gln Asp Val

180 185 190

Asn Ser Leu Gln His Ala Leu Arg Lys Ala Glu Glu Tyr Leu Thr Pro

195 200 205

Leu Ser Ser Asp Thr Pro Tyr Ser Val Phe Glu Lys Arg Phe Leu Gly

210 215 220

Ile Gly Leu Glu Lys Gly Trp Gly Asp Asn Ala Glu His Val Leu Glu 225 230 235 240

Met Ile His Leu Leu Leu Asp Leu Leu Gln Ala Pro Asp Pro Val Ala

245 250 255

Leu Glu Ser Phe Leu Gly Arg Ile Pro Leu Val Ala Asn Val Val Ile

260 265 270

Met Thr Pro His Gly Tyr Phe Ala Gln Asp Asn Val Leu Gly Tyr Pro 275 280 285 Asp Thr Gly Gly Gln Val Val Tyr Ile Leu Asp Gln Val Arg Ala Leu

290 295 300

Glu Glu Glu Leu Leu His Arg Phe Lys Leu Gln Gly Leu Asp Ile Thr 305 310 315 320

Pro Arg Ile Leu Val Ile Thr Arg Leu Leu Pro Asp Ala Val Gly Thr

325 330 335

Thr Cys Gly Gln Arg Leu Glu Lys Val Tyr Gly Thr Lys Tyr Ser Asp

340 345 350

Ile Leu Arg Val Pro Phe Arg Thr Glu Lys Gly Ile Val Arg Pro Trp

355 360 365

Ile Ser Arg Phe Lys Val Trp Pro Tyr Leu Glu Thr Tyr Thr Lys Asp

370 375 380

Val Ala Ala Glu Ile Thr Lys Glu Phe Gln Gly Lys Pro Asp Leu Ile 385 390 395 400

Val Gly Asn Tyr Ser Asp Gly Asn Ile Val Ala Ser Leu Leu Ala His

405 410 415

Lys Phe Asp Val Thr Gln Cys Thr Ile Ala Arg Ala Leu Glu Lys Thr

420 425 430

Lys Tyr Pro Asp Ser Asp Ile Asn Trp Lys Gln Leu Glu Asp Lys Tyr

435 440 445

His Phe Ser Cys Gln Phe Thr Ala Asp Leu Ile Ala Met Asn His Thr

450 455 460

Asp Phe Ile Ile Thr Ser Thr Phe Gln Glu Ile Ala Gly Ser Lys Asp 465 470 475 480

Thr Leu Gly Gln Tyr Glu Ser His Ile Ala Phe Thr Leu Pro Gly Leu

485 490 495

Tyr Arg Val Val Asp Gly Ile Asp Val Phe Asp Pro Lys Phe Asn Ile

500 505 510

Val Ser Pro Gly Ala Asp Met Ser Ile Tyr Phe Pro Tyr Thr Glu Glu

515 520 525

Lys Arg Arg Leu Lys Lys Phe His Pro Glu Ile Glu Glu Leu Leu Tyr 530 535 540 Ser Pro Val Glu Asn Thr Glu His Leu Cys Val Leu Lys Asp Arg Asn 545 550 555 560

Lys Pro Ile Leu Phe Thr Met Ala Arg Leu Asp Arg Val Lys Asn Leu

565 570 575

Thr Gly Leu Val Glu Phe Tyr Ala Lys Asn Ser Arg Leu Arg Glu Leu

580 585 590

Val Asn Leu Val Val Val Gly Gly Asp Arg Arg Lys Glu Ser Lys Asp

595 600 605

Leu Glu Glu Lys Ala Glu Met Lys Lys Met Tyr Glu Leu Ile Glu Lys

610 615 620

Tyr Lys Leu Asn Gly Gln Phe Arg Trp Ile Ser Ser Gln Met Asn Arg 625 630 635 640

Val Arg Asn Gly Glu Leu Tyr Arg Tyr Ile Cys Asp Thr Lys Gly Ala

645 650 655

Phe Val Gln Pro Pro Ile Tyr Glu Ala Phe Gly Leu Thr Val Val Glu

660 665 670

Ala Met Thr Cys Gly Leu Pro Thr Phe Ala Thr Cys Tyr Gly Gly Pro

675 680 685

Ala Glu Ile Ile Val His Gly Lys Ser Gly Phe Asn Ile Asp Pro Tyr

690 695 700

Asn Gly Asp Leu Ala Ala Glu Thr Leu Ala Asn Phe Phe Glu Lys Cys 705 710 715 720

Lys Ala Asp Pro Ser Tyr Trp Asp Glu Ile Ser Gln Gly Gly Leu Lys

725 730 735

Arg Ile Gln Glu Lys Tyr Thr Trp Gln Ile Tyr Ser Glu Lys Leu Leu

740 745 750

Thr Leu Thr Gly Val Tyr Gly Phe Ser Lys His Val Ala Tyr Gln Glu

755 760 765

Gln Arg Gly Arg Lys Arg Tyr Ile Glu Met Leu His Ala Trp Met Tyr

770 775 780

Asn Asn Arg Val Lys Thr Val Pro Leu Ala Val Glu 785 790 795 <210> 3 <211> 796 <212> PRT

<213> Gossypium hirsutum <4 00> 3

Met Ala Ser Ile Ser Val Cys Glu Arg Leu Gly Glu Ser Leu Ala Thr 10 15

His Pro Gln Gln Ala Lys Ser Ile Leu Ser Arg Ile Glu Ser Leu Gly

25 30

Lys Gly Ile His Lys Ser Gln Lys Leu Leu Ser Val Leu Asp Lys Glu

40 45

Ala Gly Asn Gln Ala Leu Asp Gly Met Val Val Glu Val Leu Arg Ser

50 55 60

Thr Gln Glu Ala Val Val Ser Ser Pro Leu Val Ala Leu Ala Ile Arg 65 70 75 80

Ser Ala Pro Gly Val Trp Glu Tyr Ile Ala Val Glu Val Gln Lys Leu

85 90 95

Phe Val Glu Glu Met Pro Val Ala Glu Tyr Leu Arg Leu Lys Glu Glu

100 105 110

Leu Val Asp Gly Ser Ser Asn Gly Glu Phe Met Leu Glu Leu Asp Phe

115 120 125

Gly Ala Phe Asn Asn Ser Val Pro Arg Pro Ser Leu Ser Lys Ser Ile

130 135 140

Gly Asn Gly Met Asp Phe Leu Asn Arg His Leu Ser Ala Lys Leu Phe 145 150 155 160

Gln Asp Lys Glu Asn Leu Asn Leu Leu Leu Glu Phe Leu Gln Ile His

165 170 175

Cys Gln Lys Gly Lys Gly Met Leu Leu Asn Asp Arg Ile Gln Asp Val

180 185 190

Asn Ser Leu Gln His Ala Leu Arg Lys Ala Glu Glu Tyr Leu Thr Pro

195 200 205

Leu Ser Ser Asp Thr Pro Tyr Ser Val Phe Glu Lys Arg Phe Leu Gly 210

Ile Gly Leu Glu Lys 225

Met Ile His Leu Leu 245

Leu Glu Ser Phe Leu 260

Met Thr Pro His Gly 275

Asp Thr Gly Gly Gln 290

Glu Glu Glu Leu Leu 305

Pro Arg Ile Leu Val 325

Thr Cys Gly Gln Arg 340

Ile Leu Arg Val Pro 355

Ile Ser Arg Phe Lys 370

Val Ala Ala Glu Ile 385

Val Gly Asn Tyr Ser 405

Lys Phe Asp Val Thr 420

Lys Tyr Pro Asp Ser 435

His Phe Ser Cys Gln 450

Asp Phe Ile Ile Thr

215

Gly Trp Gly Asp Asn Ala 230 235

Leu Asp Leu Leu Gln Ala 250

Gly Arg Ile Pro Leu Val 265

Tyr Phe Ala Gln Asp Asn 280

Val Val Tyr Ile Leu Asp 295

His Arg Phe Lys Leu Gln 310 315

Ile Thr Arg Leu Leu Pro 330

Leu Glu Lys Val Tyr Gly 345

Phe Arg Thr Glu Lys Gly 360

Val Trp Pro Tyr Leu Glu 375

Thr Lys Glu Phe Gln Gly 390 395

Asp Gly Asn Ile Val Ala 410

Gln Cys Thr Ile Ala His 425

Asp Ile Asn Trp Lys Gln 440

Phe Thr Ala Asp Leu Ile 455

Ser Thr Phe Gln Glu Ile

220

Glu His Val Leu Glu 240

Pro Asp Pro Val Ala 255

Ala Asn Val Val Ile 270

Val Leu Gly Tyr Pro 285

Gln Val Arg Ala Leu 300

Gly Leu Asp Ile Thr 320

Asp Ala Val Gly Thr 335

Thr Lys Tyr Ser Asp 350

Ile Val Arg Pro Trp 365

Thr Tyr Thr Lys Asp 380

Lys Pro Asp Leu Ile 400

Ser Leu Leu Ala His 415

Ala Leu Glu Lys Thr 430

Leu Glu Asp Lys Tyr 445

Ala Met Asn His Thr 460

Ala Gly Ser Lys Asp 465 470 475 480

Thr Leu Gly Gln Tyr Glu Ser His Ile Ala Phe Thr Leu Pro Gly Leu

485 490 495

Tyr Arg Val Val Asp Gly Ile Asp Val Phe Asp Pro Lys Phe Asn Ile

500 505 510

Val Ser Pro Gly Ala Asp Met Ser Ile Tyr Phe Pro Tyr Thr Glu Glu

515 520 525

Lys Arg Arg Leu Lys Lys Phe His Pro Glu Ile Glu Glu Leu Leu Tyr

530 535 540

Ser Pro Val Glu Asn Thr Glu His Leu Cys Val Leu Lys Asp Arg Asn 545 550 555 560

Lys Pro Ile Leu Phe Thr Met Ala Arg Leu Asp Arg Val Lys Asn Leu

565 570 575

Thr Gly Leu Val Glu Phe Tyr Ala Lys Asn Ser Arg Leu Arg Glu Leu

580 585 590

Val Asn Leu Val Val Val Gly Gly Asp Arg Arg Lys Glu Ser Lys Asp

595 600 605

Leu Glu Glu Lys Ala Glu Met Lys Lys Met Tyr Glu Leu Ile Glu Lys

610 615 620

Tyr Lys Leu Asn Gly Gln Phe Arg Trp Ile Ser Ser Gln Met Asn Arg 625 630 635 640

Val Arg Asn Gly Glu Leu Tyr Arg Tyr Ile Cys Asp Thr Lys Gly Ala

645 650 655

Phe Val Gln Pro Pro Ile Tyr Glu Ala Phe Gly Leu Thr Val Val Glu

660 665 670

Ala Met Thr Cys Gly Leu Pro Thr Phe Ala Thr Cys Tyr Gly Gly Pro

675 680 685

Ala Glu Ile Ile Val His Gly Lys Ser Gly Phe Asn Ile Asp Pro Tyr

690 695 700

Asn Gly Asp Leu Ala Ala Glu Thr Leu Ala Asn Phe Phe Glu Lys Cys 705 710 715 720

Lys Ala Asp Pro Ser Tyr Trp Asp Glu Ile Ser Gln Gly Gly Leu Lys 735 Lys Leu Leu 750

Tyr Gln Glu Trp Met Tyr

<210> 4

<211> 3353

<212> DNA

<213> Gossypium hirsutum <220>

<221> misc_feature

<222> (32) . . (34)

<223> códon de iniciação <220>

<221> éxon

<222> (32)..(111)

<223> exonl <220>

<221> éxon

<222> (197)..(314)

<223> exon2 <220>

<221> éxon

<222> (394)..(545)

<223> exon3 <220>

<221> éxon

<222> (625)..(817)

725

Arg Ile Gln Glu Lys Tyr 740

Thr Leu Thr Gly Val Tyr 755

Gln Arg Gly Arg Lys Arg 770

Asn Asn Arg Val Lys Thr 785 790

730

Thr Trp Gln Ile Tyr Ser Glu 745

Gly Phe Ser Lys His Val Ala 760 765

Tyr Ile Glu Met Leu His Ala 775 780

Val Pro Leu Ala Val Glu 795 <223> exon4 <220>

<221> éxon <222> (897)..(1328)

<223> exon5 <220>

<221> éxon <222> (1399) . . (1689)

<223> exon6 <220>

<221> éxon

<222> (1783) . . (1949)

<223> exon7 <220>

<221> éxon

<222> (2050) .. (2274)

<223> exon8

<220>

<221> éxon

<222> (2358) . . (3060)

<223> exon9 <220>

<221> éxon

<222> (3169) . . (3195)

<223> exonlO <220>

<221> misc_feature

<222> (3196) .. (3171)

<223> Códon de terminação

<400> 4

cccttctgcc atttcaggaa cccaaaaaac a atg gct tca ate agt gtt tgt 52

Met Ala Ser Ile Ser Val Cys 1 5

gag cgt ttg ggt gaa tct cta gct act cat cca cag cag gca aag tct 100

Glu Arg Leu Gly Glu Ser Leu Ala Thr His Pro Gln Gln Ala Lys Ser 15 20

ate ttg tca ag gtataatgta aataagtgct gccttcaaat ttctggtctt 151

Ile Leu Ser Arg 25

tcttcgttat tttttattac attgtttata tatgtcatat tgcag g att gaa age 206

Ile Glu Ser

30

ctc gga aag ggt att cat aag tct caa aag ctg ctc tcg gtt ctc gat 254

Leu Gly Lys Gly Ile His Lys Ser Gln Lys Leu Leu Ser Val Leu Asp

40 45

aaa gag gcc gga aat caa gca ctt gat ggg atg gtg gtg gag gtc ctc 3 02

1 5 Lys Glu Ala Gly Asn Gln Ala Leu Asp Gly Met Val Val Glu Val Leu 50 55 60

agg tcc act cag gtcacaataa aacaaaccct ttctttggtt atgtttcatg 354

Arg Ser Thr Gln 65

atgagaatat tggactgata tgttaccgtt atctaatag gaa gct gta gtg tcg 4 08

Glu Ala Val Val Ser 70

tct cca ttg gtt gcc ctt gcc att cgt tca gct cct gga gtt tgg gag 456

Ser Pro Leu Val Ala Leu Ala Ile Arg Ser Ala Pro Gly Val Trp Glu

75 80 85

tac att gct gtg gag gtc caa aag ctt ttt gtg gag gaa atg ccc gtt 504

Tyr Ile Ala Val Glu Val Gln Lys Leu Phe Val Glu Glu Met Pro Val

90 95 100

gct gag tat cta cgg ttg aag gaa gaa ctt gtt gat gga ag 545

Ala Glu Tyr Leu Arg Leu Lys Glu Glu Leu Val Asp Gly Ser 105 110 115

gtaggtagtt ttctcttaca gctcctggtt tatattatgt ttgagtttat gttgaacaat 605 10

15

gctcaatgat gtggttcag c tcc aat ggc gag ttt atg ttg gaa ttg gac 655

Ser Asn Gly Glu Phe Met Leu Glu Leu Asp 120 125

ttt ggt gca ttc aat aat tct gtt cct cgt cca tct ctt tca aag tcc 703

Phe Gly Ala Phe Asn Asn Ser Val Pro Arg Pro Ser Leu Ser Lys Ser

130 135 140

att ggt aat ggc atg gac ttc ctc aac cgc cac ctt tct gcc aag cta 751

Ile Gly Asn Gly Met Asp Phe Leu Asn Arg His Leu Ser Ala Lys Leu

145 150 155

ttt caa gac aag gag aac ttg aac ttg ttg ctt gaa ttt ctc caa att 799

Phe Gln Asp Lys Glu Asn Leu Asn Leu Leu Leu Glu Phe Leu Gln Ile 160 165 170 175

cac tgc cag aag gga aag gtaaaagttt cactttcact atttgttttt 847

His Cys Gln Lys Gly Lys 180

cctttctgta tacatcaaaa cttaagaatc gttcaatgtt atgccacag ggt atg ctg 905

Gly Met Leu

ttg aat gac aga ate caa gat gtg aat tcc ctc caa cat gca tta agg 953

Leu Asn Asp Arg Ile Gln Asp Val Asn Ser Leu Gln His Ala Leu Arg 185 190 195 200

aag gcc gag gag tat ctg act cct cta tcc tcg gat acc ccg tac tca 1001

Lys Ala Glu Glu Tyr Leu Thr Pro Leu Ser Ser Asp Thr Pro Tyr Ser

205 210 215

gtt ttc gag aaa agg ttt ctg ggg att ggt ttg gag aag gga tgg ggt 1049

Val Phe Glu Lys Arg Phe Leu Gly Ile Gly Leu Glu Lys Gly Trp Gly

220 225 230

gat aat gct gag cat gtt ctt gag atg ate cat ctt cta ttg gat ctc 1097

Asp Asn Ala Glu His Val Leu Glu Met Ile His Leu Leu Leu Asp Leu 235 240 245

ctt cag gca cct gat cct gtc gca ctt gaa age ttc ctt gga aga ate 1145

Leu Gln Ala Pro Asp Pro Val Ala Leu Glu Ser Phe Leu Gly Arg Ile

20

25 10

250 255 260

cca ttg gtc gcc aat gtt gta ate atg act ccc cat gga tac ttt gcc 1193

Pro Leu Val Ala Asn Val Val Ile Met Thr Pro His Gly Tyr Phe Ala 265 270 275 280

caa gac aat gtt ttg gga tac cct gac aca ggt ggt cag gtt gtt tat 1241

Gln Asp Asn Val Leu Gly Tyr Pro Asp Thr Gly Gly Gln Val Val Tyr

285 290 295

ate tta gat caa gtt cgt gcc ttg gag gaa gag ttg ctt cat cgt ttc 1289

Xle Leu Asp Gln Val Arg Ala Leu Glu Glu Glu Leu Leu His Arg Phe

300 305 310

aag ctg caa gga ctc gac att acc cca cgt ate cta gtc gtgagtatct 1338

Lys Leu Gln Gly Leu Asp Ile Thr Pro Arg Ile Leu Val 315 320 325

gaatgttaat tcagtttcga tcattatgtt taatgcttaa tttggctgtt tgtgtaccag 1398 att act cgg ctc ctc cct gat gct gta gga aca act tgc ggt cag cgt 1446 Ile Thr Arg Leu Leu Pro Asp Ala Val Gly Thr Thr Cys Gly Gln Arg

330 335 340

ctt gag aaa gtg tat gga acc aag tat tet gat att ctt cgg gta ccc 1494

Leu Glu Lys Val Tyr Gly Thr Lys Tyr Ser Asp Ile Leu Arg Val Pro 345 350 355

ttc aga act gag aag gga att gta cgt cca tgg ate tca cga ttc aaa 1542

Phe Arg Thr Glu Lys Gly Ile Val Arg Pro Trp Ile Ser Arg Phe Lys

360 365 370

gtc tgg cct tac ctg gag act tac act aag gat gtt gea gct gag ate 1590

Val Trp Pro Tyr Leu Glu Thr Tyr Thr Lys Asp Val Ala Ala Glu Ile 375 380 385

acc aaa gag ttc cag ggc aag cct gat ctg att gtt ggg aac tac agt 1638

Thr Lys Glu Phe Gln Gly Lys Pro Asp Leu Ile Val Gly Asn Tyr Ser 390 395 400 405

gat gga aac att gtt gct tet tta ttg gea cat aag ttt gat gtt aca 1686

Asp Gly Asn Ile Val Ala Ser Leu Leu Ala His Lys Phe Asp Val Thr 410 415 420

30 10

cag gtttgttaaa taccaattaa ttgaacaagt tccttgctgt attttgatgt 1739

Gln

tccccgtgca atctaaaaac ttggttttca atgttttatg cag tgc act att gct 1794

Cys Thr Ile Ala 425

cat gca ctc gag aag acg aaa tac ccg gat tca gac att aac tgg aaa 1842

His Ala Leu Glu Lys Thr Lys Tyr Pro Asp Ser Asp Ile Asn Trp Lys

430 435 440

cag ctt gag gat aag tat cac ttc tcc tgt cag ttt act gct gat ctt 1890

Gln Leu Glu Asp Lys Tyr His Phe Ser Cys Gln Phe Thr Ala Asp Leu

445 450 455

att gct atg aac cat act gat ttt ate ate acc age acc ttc caa gag 1938

Ile Ala Met Asn His Thr Asp Phe Ile Ile Thr Ser Thr Phe Gln Glu

460 465 470

att gct gga ag gtaatctatc tcccacttta ctacatttgg ttcccttgta 1989

Ile Ala Gly Ser

475

cgttgtaaat gttgccacct atttgagtcc ctaacaatgt tttcattcca tgattttcag 2049 c aag gac act ctc ggc caa tac gag agt cac att gct ttc act ctt cca 2098 Lys Asp Thr Leu Gly Gln Tyr Glu Ser His Ile Ala Phe Thr Leu Pro 480 485 490

ggg ctc tac cgc gtt gtt gat ggg ate gat gtt ttt gat ccc aaa ttc 2146

Gly Leu Tyr Arg Val Val Asp Gly Ile Asp Val Phe Asp Pro Lys Phe 495 500 505 510

aat att gtc tcc cct ggt gct gat atg age ata tac ttc cct tac acg 2194

Asn Ile Val Ser Pro Gly Ala Asp Met Ser Ile Tyr Phe Pro Tyr Thr

515 520 525

gaa gag aag cgg agg ttg aag aag ttc cac ccg gag att gaa gag ctt 2242

Glu Glu Lys Arg Arg Leu Lys Lys Phe His Pro Glu Ile Glu Glu Leu 530 535 540

ctt tac age cct gtt gag aat aca gag cac tt gtgagatttt ggtcctattt 2294 10

15

Leu Tyr Ser Pro Val Glu Asn Thr Glu His Leu

545 550

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agg ttg gac cga gtg aag aac tta act ggg ctc gta gag ttc tat gcc 2451

Arg Leu Asp Arg Val Lys Asn Leu Thr Gly Leu Val Glu Phe Tyr Ala

570 575 580

aag aac age cgg ctg agg gaa ctg gtt aac ttg gtt gta gta ggt gga 2499

Lys Asn Ser Arg Leu Arg Glu Leu Val Asn Leu Val Val Val Gly Gly 585 590 595 600

gat agg aga aag gaa tec aag gac tta gaa gaa aag gct gaa atg aag 2547

Asp Arg Arg Lys Glu Ser Lys Asp Leu Glu Glu Lys Ala Glu Met Lys

605 610 615

aag atg tat gaa ctt ate gaa aaa tac aag ttg aat gga caa ttc aga 2595

Lys Met Tyr Glu Leu Ile Glu Lys Tyr Lys Leu Asn Gly Gln Phe Arg

620 625 630

tgg ata tcg tcc cag atg aac cga gtg aga aat ggt gaa ctc tat cgt 2643

Trp Ile Ser Ser Gln Met Asn Arg Val Arg Asn Gly Glu Leu Tyr Arg 635 640 645

tat att tgc gac acc aag gga gca ttc gtt cag cct cct ata tac gag 2691

Tyr Ile Cys Asp Thr Lys Gly Ala Phe Val Gln Pro Pro Ile Tyr Glu 650 655 660

gct ttt ggc ttg act gtt gtt gag gca atg acc tgt gga cta cca aca 2739 Ala Phe Gly Leu Thr Val Val Glu Ala Met Thr Cys Gly Leu Pro Thr 665 670 675 680

ttt gca aca tgt tac ggg ggc cct gct gag att ata gtt cac gga aaa 2787

Phe Ala Thr Cys Tyr Gly Gly Pro Ala Glu Ile Ile Val His Gly Lys 685 690 695

tcg ggg ttc aac ate gat cct tat aac ggt gat ttg gct gcc gag acc 2835

Ser Gly Phe Asn Ile Asp Pro Tyr Asn Gly Asp Leu Ala Ala Glu Thr 10

700 705 710

ctt gcc aat ttc ttc gag aag tgc aaa gcg gat cca tct tat tgg gat 2883

Leu Ala Asn Phe Phe Glu Lys Cys Lys Ala Asp Pro Ser Tyr Trp Asp

715 720 725

gag ate tcc cag gga ggg ttg aaa cgc ata cag gag aag tat aca tgg 2931

Glu Ile Ser Gln Gly Gly Leu Lys Arg Ile Gln Glu Lys Tyr Thr Trp

730 735 740

cag att tac tcc gag aag cta ttg act ctc acc gga gtt tat ggc ttt 2979

Gln Ile Tyr Ser Glu Lys Leu Leu Thr Leu Thr Gly Val Tyr Gly Phe 745 750 755 760

tcg aaa cat gta gct tac cag gag caa cgt ggg cgc aag cgt tac att 3027

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765 770 775

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attattatta catcaaacat cattttactc tttcattgaa ctgaaatttt catgtttctg 3140 aatgtttgtt taattgtgtg ctttacag gtc aag act gtt cca cta gct gtt 3192

Val Lys Thr Val Pro Leu Ala Val 790 795

gag taaagaaaaa gcaaaaggct gcttggaaac caaggaattt ccaagaatga 3245

Glu

20

25

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<210> 5 <211> 796 <212> PRT

<213> Gossypium barbadense

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Lys Gly Ile His Lys Ser Gln Lys Leu Leu Ser Val Leu Asp Lys Glu

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50 55 60

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Ser Ala Pro Gly Val Trp Glu Tyr Ile Ala Val Glu Val Gln Lys Leu

85 90 95

Phe Val Glu Glu Met Pro Val Ala Glu Tyr Leu Arg Leu Lys Glu Glu

100 105 110

Leu Val Asp Gly Ser Ser Asn Gly Glu Phe Met Leu Glu Leu Asp Phe

115 120 125

Gly Ala Phe Asn Asn Ser Val Pro Arg Pro Ser Leu Ser Lys Ser Ile

130 135 140

Gly Asn Gly Met Asp Phe Leu Asn Arg His Leu Ser Ala Lys Leu Phe 145 150 155 160

Gln Asp Lys Glu Ser Leu Asn Leu Leu Leu Glu Phe Leu Gln Ile His

165 170 175

Cys Gln Lys Gly Lys Gly Met Leu Leu Asn Asp Arg Ile Gln Asp Val

180 185 190

Asn Ser Leu Gln His Ala Leu Arg Lys Ala Glu Glu Tyr Leu Thr Pro

195 200 205

Leu Ser Ser Asp Thr Pro Tyr Ser Val Phe Glu Lys Arg Phe Leu Gly

210 215 220

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Met Ile His Leu Leu Leu Asp Leu Leu Gln Ala Pro Asp Pro Val Ala

245 250 255

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275 280 285

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290 295 300

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Pro Arg Ile Leu Val Ile Thr Arg Leu Leu Pro Asp Ala Val Gly Thr

325 330 335

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340 345 350

Ile Leu Arg Val Pro Phe Arg Thr Glu Lys Gly Ile Val Arg Pro Trp

355 360 365

Ile Ser Arg Phe Lys Val Trp Pro Tyr Leu Glu Thr Tyr Thr Lys Asp

370 375 380

Val Ala Ala Glu Ile Thr Lys Glu Phe Gln Gly Lys Pro Asp Leu Ile 385 390 395 400

Val Gly Asn Tyr Ser Asp Gly Asn Ile Val Ala Ser Leu Leu Ala His

405 410 415

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420 425 430

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435 440 445

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450 455 460

Asp Phe Ile Ile Thr Ser Thr Phe Gln Glu Ile Ala Gly Ser Lys Asp 465 470 475 480

Thr Leu Gly Gln Tyr Glu Ser His Ile Ala Phe Thr Leu Pro Gly Leu

485 490 495

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500 505 510

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530 535 540

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Lys Pro Ile Leu Phe Thr Met Ala Arg Leu Asp Arg Val Lys Asn Leu

565 570 575

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580 585 590

Val Asn Leu Val Val Val Gly Gly Asp Arg Arg Lys Glu Ser Lys Asp

595 600 605

Leu Glu Glu Lys Ala Glu Met Lys Lys Met Tyr Glu Leu Ile Glu Lys

610 615 620

Tyr Lys Leu Asn Gly Gln Phe Arg Trp Ile Ser Ser Gln Met Asn Arg 625 630 635 640

Val Arg Asn Gly Glu Leu Tyr Arg Tyr Ile Cys Asp Thr Lys Gly Ala

645 650 655

Phe Val Gln Pro Ala Ile Tyr Glu Ala Phe Gly Leu Thr Val Val Glu

660 665 670

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675 680 685

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690 695 700

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Lys Ala Asp Pro Ser Tyr Trp Asp Glu Ile Ser Gln Gly Gly Leu Lys

725 730 735

Arg Ile Gln Glu Lys Tyr Thr Trp Gln Ile Tyr Ser Glu Lys Leu Leu

740 745 750

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755 760 765

Gln Arg Gly Arg Lys Arg Tyr Ile Glu Met Leu His Ala Trp Met Tyr 770 775 780 Asn Asn Arg Val Lys Thr Val Pro Leu Ala Val Glu 785 790 795

<210> 6 <211> 3352 <212> DNA

<213> Gossypium barbadense <220>

<221> misc_feature <222> (32)..(34) <223> códon de iniciação <220>

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<221> éxon <222> (197) .. (314)

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<222> (394).. (545)

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<221> éxon

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<220>

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vo

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75 80 85

tac att gct gtg gag gtc caa aag ctt ttt gtg gag gaa atg ccc gtt 504

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att ggt aat ggc atg gac ttc ctc aac cgc cac ctt tet gcc aag cta

703

751 Ile Gly Asn Gly Met Asp Phe Leu Asn Arg His Leu Ser Ala Lys Leu

145 150 155

ttt caa gac aag gag age ttg aac ttg ttg ctt gaa ttt ctc caa att 799

Phe Gln Asp Lys Glu Ser Leu Asn Leu Leu Leu Glu Phe Leu Gln Ile 160 165 170 175

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His Cys Gln Lys Gly Lys 180

cctttctgta tacatcaaaa cttaagaatc gttcaatgtt atgccacag ggt atg ctg 905 Gly Met Leu

ttg aat gac aga ate caa gat gtg aat tcc ctc caa cat gea tta agg 953

Leu Asn Asp Arg Ile Gln Asp Val Asn Ser Leu Gln His Ala Leu Arg

185 190 195 200

aag gcc gag gag tat ctg act cct cta tcc tcg gat acc ccg tac tca 1001

Lys Ala Glu Glu Tyr Leu Thr Pro Leu Ser Ser Asp Thr Pro Tyr Ser

205 210 215

gtt ttc gag aaa agg ttt ctg ggg att ggt ttg gag aag gga tgg ggt 1049

Val Phe Glu Lys Arg Phe Leu Gly Ile Gly Leu Glu Lys Gly Trp Gly

220 225 230

gat aat gct gag cat gtt ctt gag atg ate cat ctt cta ttg gat ctc 1097

Asp Asn Ala Glu His Val Leu Glu Met Ile His Leu Leu Leu Asp Leu

235 240 245

ctt cag gea cct gat cct gtc gea ctt gaa age ttc ctt gga aga ate 1145

Leu Gln Ala Pro Asp Pro Val Ala Leu Glu Ser Phe Leu Gly Arg Ile 250 255 260

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Pro Leu Val Ala Asn Val Val Ile Met Thr Pro His Gly Tyr Phe Ala 265 270 275 280

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15

20

25

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300 305 310

aag ctg caa gga ctc gac att acc cca cgC ate cta gtc gtgagtatct 1338

Lys Leu Gln Gly Leu Asp Ile Thr Pro Arg Ile Leu Val 315 320 325

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ctt gag aaa gtg tat gga acc aag tat tet gat att ctt cgg gta ccc 1494 Leu Glu Lys Val Tyr Gly Thr Lys Tyr Ser Asp Ile Leu Arg Val Pro

345 350 355

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Phe Arg Thr Glu Lys Gly Ile Val Arg Pro Trp Ile Ser Arg Phe Lys

360 355 370

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390 395 400 405

gat gga aac att gtt gct tet tta ttg gea cat aag ttt gat gtt aca 1686

Asp Gly Asn Ile Val Ala Ser Leu Leu Ala His Lys Phe Asp Val Thr

410 415 420

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Gln

30

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430 435 440

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460 465 470

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515 520 525

gaa gag aag cgg agg ttg aag aag ttc cac ccg gag att gaa gag ctt 2242

Glu Glu Lys Arg Arg Leu Lys Lys Phe His Pro Glu Ile Glu Glu Leu

530 535 540

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545 550

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555 560 565

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20

25 Arg Leu Asp Arg Val Lys Asn Leu Thr Gly Leu Val Glu Phe Tyr Ala

570 575 580

aag aac age cgg ctg agg gaa ctg gtt aac ttg gtt gta gta ggt gga 2498

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gat agg aga aag gaa tcc aag gac tta gaa gaa aag gct gaa atg aag 2546

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605 610 615

aag atg tat gaa ctt ate gaa aaa tac aag ttg aat gga caa ttc aga 2594

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650 655 660

gct ttt ggc ttg act gtt gtt gag gea atg acc tgt gga cta cca aca 2738

Ala Phe Gly Leu Thr Val Val Glu Ala Met Thr Cys Gly Leu Pro Thr 665 670 675 680

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Phe Ala Thr Cys Tyr Gly Gly Pro Ala Glu Ile Ile Val His Gly Lys

685 690 695

tcg ggg ttc aac ate gat cct tat aac ggt gat ttg gct gcc gag acc 2834

Ser Gly Phe Asn Ile Asp Pro Tyr Asn Gly Asp Leu Ala Ala Glu Thr 700 705 710

ctt gcc aat ttc ttc gag aag tgc aaa gcg gat cca tet tat tgg gat 2882

Leu Ala Asn Phe Phe Glu Lys Cys Lys Ala Asp Pro Ser Tyr Trp Asp

715 720 725

gag ate tcc cag gga ggg ttg aaa cgc ata cag gag aag tat aca tgg 2930

Glu Ile Ser Gln Gly Gly Leu Lys Arg Ile Gln Glu Lys Tyr Thr Trp 730 735 740

30 10

cag att tac tcc gag aag cta ttg act ctc acc gga gtt tat ggc ttt 2978

Gln Ile Tyr Ser Glu Lys Leu Leu Thr Leu Thr Gly Val Tyr Gly Phe 745 750 755 760

tcg aaa cat gta gct tac cag gag caa cgt ggg cgc aag cgt tac att 3026

Ser Lys His Val Ala Tyr Gln Glu Gln Arg Gly Arg Lys Arg Tyr Ile

765 770 775

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780 785

attattatta catcaaacat cattttactc tttcattgaa ctgaaaattt catgtttctg 3139 aatgtttgtt taattgtgtg ctttacag gtc aag act gtt cca cta gct gtt 3191

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gag taaagaaaaa gcaaaaggct gcttggaaac caaggaattt ccaagaatga 3244

Glu

ttgctattga agttttattt ttgcttcttt ttttcaattt ggtaaatgtt taatttcaac 3304 tttggggttt ccccttggaa tgttttgaac tctgggtttg gtcccatt 3352

<210> 7

<211> 796

<212> PRT

<213> Gossypium arboreum <4 00> 7

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1 5 10 15

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25 30

Lys Gly Ile His Lys Ser Gln Lys Leu Leu Ser Val Leu Asp Lys Glu

40 45

Ala Gly Asn Gln Ala Leu Asp Gly Met Val Val Glu Val Leu Arg Ser

50 55 60

Thr Gln Glu Ala Val Val Ser Ser Pro Leu Val Ala Leu Ala Ile Arg 65 70 75 80

Ser Ala Pro Gly Val Trp Glu Tyr Ile Ala Val Glu Val Gln Lys Leu

85 90 95

Phe Val Glu Glu Met Pro Val Ala Glu Tyr Leu Arg Leu Lys Glu Glu

100 105 110

Leu Val Asp Gly Ser Ser Asn Gly Glu Phe Met Leu Glu Leu Asp Phe

115 120 125

Gly Ala Phe Asn Asn Ser Val Pro Arg Pro Ser Leu Ser Lys Ser Ile

130 135 140

Gly Asn Gly Met Asp Phe Leu Asn Arg His Leu Ser Ala Lys Leu Phe 145 150 155 160

Gln Asp Lys Glu Asn Leu Ser Leu Leu Leu Glu Phe Leu Gln Ile His

165 170 175

Cys Gln Lys Gly Lys Gly Met Leu Leu Asn Asp Arg Ile Gln Asp Val

180 185 190

Asn Ser Leu Gln His Ala Leu Arg Lys Ala Glu Glu Tyr Leu Thr Pro

195 200 205

Leu Thr Ser Asp Thr Pro Tyr Ser Val Phe Glu Lys Arg Phe Arg Glu

210 215 220

Ile Gly Leu Glu Lys Gly Trp Gly Asp Asn Ala Glu His Val Leu Glu 225 230 235 240

Met Ile His Leu Leu Leu Asp Leu Leu Gln Ala Pro Asp Pro Val Ala

245 250 255

Leu Glu Ser Phe Leu Gly Thr Ile Pro Leu Val Ala Asn Val Val Ile

260 265 270

Met Thr Pro His Gly Tyr Phe Ala Gln Asp Asn Val Leu Gly Tyr Pro

275 280 285

Asp Thr Gly Gly Gln Val Val Tyr Ile Leu Asp Gln Val Arg Ala Leu

290 295 300

Glu Glu Glu Leu Leu His Arg Phe Lys Leu Gln Gly Leu Asp Ile Thr 305 310 315 320

Pro Arg Ile Leu Val Ile Thr Arg Leu Leu Pro Asp Ala Val Gly Thr 325 330 335

Thr Cys Gly Gln Arg Leu Glu Lys Val Tyr Gly Thr Lys Tyr Ser Asp

340 345 350

Ile Leu Arg Val Pro Phe Arg Thr Glu Lys Gly Ile Val Arg Pro Trp

355 360 365

Ile Ser Arg Phe Lys Val Trp Pro Tyr Leu Glu Thr Tyr Thr Lys Asp

370 375 380

Val Ala Ala Glu Val Thr Lys Glu Phe Gln Gly Lys Pro Asp Leu Ile 385 390 395 400

Val Gly Asn Tyr Ser Asp Gly Asn Ile Val Ala Ser Leu Leu Ala Leu

405 410 415

Lys Phe Asp Val Thr Gln Cys Thr Ile Ala His Ala Leu Glu Lys Thr

420 425 430

Lys Tyr Pro Asp Ser Asp Ile Asn Trp Lys Gln Leu Glu Asp Lys Tyr

435 440 445

His Phe Ser Cys Gln Phe Thr Ala Asp Leu Ile Ala Met Asn His Thr

450 455 460

Asp Phe Ile Ile Thr Ser Thr Phe Gln Glu Ile Ala Gly Ser Lys Asp 465 470 475 480

Thr Leu Gly Gln Tyr Glu Ser His Ile Ala Phe Thr Leu Pro Gly Leu

485 490 495

Tyr Arg Val Val Asp Gly Ile Asp Val Phe Asp Pro Lys Phe Asn Ile

500 505 510

Val Ser Pro Gly Ala Asp Met Ser Ile Tyr Phe Pro Tyr Thr Glu Glu

515 520 525

Lys Arg Arg Leu Lys Lys Phe His Pro Glu Ile Glu Glu Leu Leu Tyr

530 535 540

Ser Pro Val Glu Asn Thr Glu His Leu Cys Val Leu Lys Asp Arg Asn 545 550 555 560

Lys Pro Val Leu Phe Thr Met Ala Arg Leu Asp Arg Val Lys Asn Leu

565 570 575

Thr Gly Leu Val Glu Phe Tyr Ala Lys Asn Ser Arg Leu Arg Glu Leu 580 585 590

Val Asn Leu Val Val Val Gly Gly Asp Arg Arg Lys Glu Ser Lys Asp

595 600 605

Leu Glu Glu Lys Ala Glu Met Lys Lys Met Tyr Glu Leu Ile Glu Lys

610 615 620

Tyr Lys Leu Asn Gly Gln Leu Arg Trp Ile Ser Ser Gln Met Asn Arg 625 630 635 640

Val Arg Asn Gly Glu Leu Tyr Arg Tyr Ile Cys Asp Thr Lys Gly Ala

645 650 655

Phe Val Gln Pro Ala Ile Tyr Glu Ala Phe Gly Leu Thr Val Val Glu

660 665 670

Ala Met Thr Cys Gly Leu Pro Thr Phe Ala Thr Cys Tyr Gly Gly Pro

675 680 685

Ala Glu Ile Ile Val His Gly Lys Ser Gly Phe Asn Ile Asp Pro Tyr

690 695 700

Asn Gly Asp Leu Ala Ala Glu Thr Leu Ala Asn Phe Phe Glu Lys Cys 705 710 715 720

Lys Ala Asp Pro Ser Tyr Trp Asp Glu Ile Ser Gln Gly Gly Leu Lys

725 730 735

Arg Ile Gln Glu Lys Tyr Thr Trp Gln Ile Tyr Ser Glu Lys Leu Leu

740 745 750

Thr Leu Thr Gly Val Tyr Gly Phe Ser Lys His Val Ala Tyr Gln Glu

755 760 765

Gln Arg Gly Arg Lys Arg Tyr Ile Glu Met Leu His Ala Leu Met Tyr

770 775 780

Asn Asn Arg Val Lys Thr Val Pro Leu Ala Val Glu 785 790 795

<210> 8 <211> 3352 <212> DNA

<213> Gossypium arboreum <220> <221> <222> <223> <220> <221> <222> <223> <220> <221> <222> <223> <220> <221> <222> <223> <220> <221> <222> <223> <22 0> <221> <222> <223> <220> <221> <222> <223> <220> <221> <222>

<223> <220>

éxon

(32) . . (111) exonl

misc_feature (32)..(34) ATG starcodon

éxon

(197)..(314) exon2

éxon

(390)..(541) exon3

éxon

(621) .. (813) exon4

éxon

(893)..(1324) exon5

éxon

(1395)..(1685) exon6

éxon

(1779) . . (1945) exon7 10

<221> éxon <222> (2046)..(2270) <223> exon8 <220>

< 2 21> éxon <222> (2355) .. (3057) <223> éxon 9 <220>

<221> éxon <222> (3162) .. (3188) <223> exonlO <220>

<221> misc_feature <222> (3189) . . (3191) <223> Códon de terminação <400> 8

cccttctgcc atttcaggaa ccaaaaaagc a atg gct tca ate agt gtc tgt 52

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gag cgt ttg ggt gaa tet cta gct act cat cca cag cag gea aag tet 100

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15 20

ate ttg tca ag gtataatgta aataagtgct gccttcaaag ttctggtctt 151

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25

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40 45

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50 55 60

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65

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90 95 100

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Glu Tyr Leu Arg Leu Lys Glu Glu Leu Val Asp Gly Ser 105 110 115

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Ser Asn Gly Glu Phe Met Leu Glu Leu Asp Phe Gly Ala 120 125 130

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150 155 160

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20

25

30 180

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270 275 280

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Asn Val Leu Gly Tyr Pro Asp Thr Gly Gly Gln Val Val Tyr Ile Leu 285 290 295

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300 305 310

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345 350 355

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395 400 405

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Asn Ile Val Ala Ser Leu Leu Ala Leu Lys Phe Asp Val Thr Gln 410 415 420

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485 490 495

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500 505 510

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530 535 540

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Ala Arg Leu Asp Arg Val Lys Asn Leu Thr Gly Leu Val Glu Phe Tyr

570 575 580

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Ala Lys Asn Ser Arg Leu Arg Glu Leu Val Asn Leu Val Val Val Gly 585 590 595

20

25

30 10

15

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aag aag atg tat gaa ctt ate gaa aaa tac aag ttg aat gga caa ttg 2589

Lys Lys Met Tyr Glu Leu Ile Glu Lys Tyr Lys Leu Asn Gly Gln Leu

620 625 630

aga tgg ata tcg tcc cag atg aac cgt gtg aga aat ggt gaa ctc tat 2637

Arg Trp Ile Ser Ser Gln Met Asn Arg Val Arg Asn Gly Glu Leu Tyr

635 640 645

cgt tat att tgc gac acc aag gga gea ttc gtt cag cct gct ata tac 2685

Arg Tyr Ile Cys Asp Thr Lys Gly Ala Phe Val Gln Pro Ala Ile Tyr

650 655 660

gag gct ttt ggc ttg act gtt gtt gag gea atg acc tgt gga cta cca 2733

Glu Ala Phe Gly Leu Thr Val Val Glu Ala Met Thr Cys Gly Leu Pro

665 670 675

aca ttt gea aca tgt tac ggg ggc cct gct gag att ata gtt cac gga 2781

Thr Phe Ala Thr Cys Tyr Gly Gly Pro Ala Glu Ile Ile Val His Gly 680 685 690 695

aaa tcg ggg ttc aac ate gac cct tat aac ggt gat ttg gct gcc gag 2829

Lys Ser Gly Phe Asn Ile Asp Pro Tyr Asn Gly Asp Leu Ala Ala Glu

700 705 710

acc ctt gcc aat ttc ttc gag aaa tgc aaa gcg gat cca tet tat tgg 2877

Thr Leu Ala Asn Phe Phe Glu Lys Cys Lys Ala Asp Pro Ser Tyr Trp

715 720 725

gat gag ate tcc cag gga ggg ttg aaa cgc ata cag gag aag tat aca 2925

Asp Glu Ile Ser Gln Gly Gly Leu Lys Arg Ile Gln Glu Lys Tyr Thr

730 735 740

tgg cag att tac tcc gag aag cta ttg act ctc acc gga gtt tat ggc 2973

Trp Gln Ile Tyr Ser Glu Lys Leu Leu Thr Leu Thr Gly Val Tyr Gly

745 750 755

ttt tcg aaa cat gta gct tac cag gag caa cgt ggg cgc aag cgt tac 3021

Phe Ser Lys His Val Ala Tyr Gln Glu Gln Arg Gly Arg Lys Arg Tyr

25

30 10

760 765 770 775

att gaa atg ttg cat gca ctg atg tat aac aat cgg gtaaaacagt 3067

Ile Glu Met Leu His Ala Leu Met Tyr Asn Asn Arg

780 785

catgtctatt attattatta catcaaacat cattttactc tttcattgaa ctgaaaattt 3127 catatttctg aatgtttaat tgtgtgcttt acag gtc aag act gtt cct cta gct 3182

Val Lys Thr Val Pro Leu Ala 790

gtt gag taaagaaaaa gcaaaaagct gcttggaaac taaggaattt ccaagaatga 3238

Val Glu 795

ctgctgttga agttttattt ttgcttttat tatttttttt ttcaattggt aaatgtttaa 3298 tttcaacttt gggtttcccc ttggaatgtt tcgaactctg ggtttggtcc catt 3352

<210> 9

<211> 796

<212> PRT

<213> Gossypium raimondii <4 00> 9

Met Ala Ser Ile Ser Val Cys Glu Arg Leu Gly Glu Ser Leu Ala Thr

1 5 10 15

His Pro Gln Gln Ala Lys Ser Ile Leu Ser Arg Ile Glu Ser Leu Gly

25 30

Lys Gly Ile His Lys Ser Gln Lys Leu Leu Ser Val Leu Asp Lys Glu 40 45

Ala Gly Asn Gln Ala Leu Asp Gly Met Val Val Glu Val Leu Arg Ser 50 55 60

Thr Gln Glu Ala Val Val Ser Ser Pro Leu Val Ala Leu Ala Ile Arg 65 70 75 80

Ser Ala Pro Gly Val Trp Glu Tyr Ile Ala Leu Glu Phe Gln Lys Leu

85 90 95

Phe Val Glu Glu Met Pro Val Ala Glu Tyr Leu Arg Leu Lys Glu Glu 100 105 110 Leu Val Asp Gly Ser Ser Asn Gly Glu Phe Met Leu Glu Leu Asp Phe

115 120 125

Gly Ala Phe Asn Asn Ser Val Pro Arg Pro Ser Leu Ser Lys Ser Ile

130 135 140

Gly Asn Gly Met Asp Phe Leu Asn Arg His Leu Ser Ala Lys Leu Phe 145 150 155 160

Gln Asp Lys Glu Asn Leu Asn Leu Leu Leu Glu Phe Leu Gln Ile Arg

165 170 175

Cys Gln Lys Gly Lys Gly Met Leu Leu Asn Asp Arg Ile Gln Asp Val

180 185 190

Asn Ser Leu Gln His Ala Leu Arg Lys Ala Glu Glu Tyr Leu Thr Pro

195 200 205

Leu Ser Ser Asp Thr Pro Tyr Ser Val Phe Glu Lys Arg Phe Leu Gly

210 215 220

Ile Gly Leu Glu Lys Gly Trp Gly Asp Asn Ala Glu His Val Leu Glu 225 230 235 240

Met Ile His Leu Leu Leu Asp Leu Leu Gln Ala Pro Asp Pro Val Ala

245 250 255

Leu Glu Ser Phe Leu Gly Arg Ile Pro Leu Val Ala Asn Val Val Ile

260 265 270

Met Thr Pro His Gly Tyr Phe Ala Gln Asp Asn Val Leu Gly Tyr Pro

275 280 285

Asp Thr Gly Gly Gln Val Val Tyr Ile Leu Asp Gln Val Arg Ala Leu

290 295 300

Glu Glu Glu Leu Leu His Arg Phe Lys Leu Gln Gly Leu Asp Ile Thr 305 310 315 320

Pro Arg Ile Leu Val Ile Thr Arg Leu Leu Pro Asp Ala Val Gly Thr

325 330 335

Thr Cys Gly Gln Arg Leu Glu Lys Val Tyr Gly Thr Lys Tyr Ser Asp

340 345 350

Ile Leu Arg Val Pro Phe Arg Thr Glu Lys Gly Ile Val Arg Pro Trp 355 360 365 Ile Ser Arg Phe Lys Val Trp Pro Tyr Leu Glu Thr Tyr Thr Lys Asp

370 375 380

Val Ala Ala Glu Ile Thr Lys Glu Phe Gln Gly Lys Pro Asp Leu Ile 385 390 395 400

Val Gly Asn Tyr Ser Asp Gly Asn Ile Val Ala Ser Leu Leu Ala His

405 410 415

Lys Phe Asp Val Thr Gln Cys Ser Ile Ala His Ala Leu Glu Lys Thr

420 425 430

Lys Tyr Pro Asp Ser Asp Ile Asn Trp Lys Gln Leu Glu Asp Lys Tyr

435 440 445

His Phe Ser Cys Gln Phe Thr Ala Asp Leu Ile Ala Met Asn His Thr

450 455 460

Asp Phe Ile Ile Thr Ser Thr Phe Gln Glu Ile Ala Gly Ser Lys Asp 465 470 475 480

Thr Leu Gly Gln Tyr Glu Ser His Ile Ala Phe Thr Leu Pro Gly Leu

485 490 495

Tyr Arg Val Val Asp Gly Ile Asp Val Phe Asp Pro Lys Phe Asn Ile

500 505 510

Val Ser Pro Gly Ala Asp Met Ser Ile Tyr Phe Pro Tyr Thr Glu Glu

515 520 525

Lys Arg Arg Leu Lys Lys Phe His Pro Glu Ile Glu Glu Leu Leu Tyr

530 535 540

Ser Pro Val Glu Asn Thr Glu His Leu Cys Val Leu Lys Asp Arg Asn 545 550 555 560

Lys Pro Ile Leu Phe Thr Met Ala Arg Leu Asp Arg Val Lys Asn Leu

565 570 575

Thr Gly Leu Val Glu Phe Tyr Ala Lys Asn Ser Arg Leu Arg Glu Leu

580 585 590

Val Asn Leu Val Val Val Gly Gly Asp Arg Arg Lys Glu Ser Lys Asp

595 600 605

Leu Glu Glu Lys Ala Glu Met Lys Lys Met Tyr Glu Leu Ile Glu Lys 610 615 620 Tyr Lys Leu Asn Gly Gln Phe Arg Trp Ile Ser Ser Gln Met Asn Arg 625 630 635 640

Val Arg Asn Gly Glu Leu Tyr Arg Tyr Ile Cys Asp Thr Lys Gly Ala

645 650 655

Phe Val Gln Pro Ala Ile Tyr Glu Ala Phe Gly Leu Thr Val Val Glu

660 665 670

Ala Met Thr Cys Gly Leu Pro Thr Phe Ala Thr Cys Tyr Gly Gly Pro

675 680 685

Ala Glu Ile Ile Val His Gly Lys Ser Gly Phe Asn Ile Asp Pro Tyr

690 695 700

Asn Gly Asp Leu Ala Ala Glu Thr Leu Ala Asn Phe Phe Glu Lys Cys 705 710 715 720

Lys Ala Asp Pro Ser Tyr Trp Asp Glu Ile Ser Gln Gly Gly Leu Lys

725 730 735

Arg Ile Gln Glu Lys Tyr Thr Trp Gln Ile Tyr Ser Glu Lys Leu Leu

740 745 750

Thr Leu Thr Gly Val Tyr Gly Phe Ser Lys His Val Ala Tyr Gln Glu

755 760 765

Gln Arg Gly Arg Lys Arg Tyr Ile Glu Met Leu His Ala Leu Met Tyr

770 775 780

Asn Asn Arg Val Lys Thr Ala Pro Leu Ala Val Glu 785 790 795

<210> 10 <211> 3354 <212> DNA

<213> Gossypium raimondii <220>

<221> éxon <222> (32).. (111) <223> exonl <220>

<221> misc_feature <222> (32) . . (34) <223> códon de iniciação <22 0>

<221> éxon

<222> (197)..(314)

<223> éxon 2 <220>

<221> éxon

<222> (394) . . (545)

<223> éxon 3 <220>

<221> éxon

<222> (625) . . (817)

<223> exon4 <220>

<221> éxon

<222> (897)..(1328)

<223> éxon 5 <220>

<221> éxon

<222> (1399)..(1689)

<223> éxon 6 <22 0>

<221> éxon

<222> (1783)..(1949)

<223> éxon 7 <220>

<221> éxon

<222> (2050)..(2274)

<223> éxon 8 <220>

<221> éxon 15

<222> (2358)..(3060) <223> éxon 9 <220>

<221> éxon <222> (3169)..(3195) <223> éxon 10 <220>

<221> misc_feature <222> (3196) .. (3198) <223> Códon de terminação <400> 10

cccttctgcc atttcaggaa cctaaaaaac a atg gct tca ate agt gtt tgt 52

Met Ala Ser Ile Ser Val Cys 1 5

gag cgt ttg ggt gaa tet cta gct act cat cca cag cag gea aag tet 100

Glu Arg Leu Gly Glu Ser Leu Ala Thr His Pro Gln Gln Ala Lys Ser

15 20

ate ttg tca ag gtataatgta aataagtgct gccttcaaat ttctggtctt 151

Ile Leu Ser Arg 25

tctttgttat tttttattac attgtttata tatgtcatat tgcag g att gaa age 206

Ile Glu Ser 30

etc gga aag ggt att cat aag tet caa aag ctg etc tcg gtt ctc gat 254

Leu Gly Lys Gly Ile His Lys Ser Gln Lys Leu Leu Ser Val Leu Asp

40 45

aaa gag gcc gga aat caa gea ctt gat ggg atg gtg gtg gag gtc ctc 302

Lys Glu Ala Gly Asn Gln Ala Leu Asp Gly Met Val Val Glu Val Leu

50 55 60

agg tcc act cag gtcacaataa aacaaaccct ttctttggtt atgtttcatg 354

Arg Ser Thr Gln 65

20

30 15

atgagaatat tggactgata tgttaccgct atctaatag gaa gct gta gtg tcg 408

Glu Ala Val Val Ser 70

tct cca ttg gtt gcc ctt gcc att cgt tca gct cct gga gtt tgg gag 456

Ser Pro Leu Val Ala Leu Ala Ile Arg Ser Ala Pro Gly Val Trp Glu 75 80 85

tac att gct ctg gag ttc caa aag ctt ttt gtg gag gaa atg ccc gtt 504

Tyr Ile Ala Leu Glu Phe Gln Lys Leu Phe Val Glu Glu Met Pro Val 90 95 100

gct gag tat cta cgg ttg aag gaa gaa ctt gtt gat gga ag 545

Ala Glu Tyr Leu Arg Leu Lys Glu Glu Leu Val Asp Gly Ser

105 110 115

gtaggtagtt ttctcttaca gctcctggtt tatattatgt ttgagtttat gttgaacaat 605 gctcaatgat gtggttcag c tcc aat ggc gag ttt atg ttg gaa ttg gac 655

Ser Asn Gly Glu Phe Met Leu Glu Leu Asp 120 125

ttt ggt gca ttc aat aat tct gtt cct cgt cca tct ctt tca aag tcc 703

Phe Gly Ala Phe Asn Asn Ser Val Pro Arg Pro Ser Leu Ser Lys Ser

130 135 140

att ggt aat ggc atg gac ttc ctc aac cgc cac ctt tct gcc aag cta 751

Ile Gly Asn Gly Met Asp Phe Leu Asn Arg His Leu Ser Ala Lys Leu

145 150 155

ttt caa gac aag gag aac ttg aac ttg ttg ctt gaa ttt ctc caa att 799

Phe Gln Asp Lys Glu Asn Leu Asn Leu Leu Leu Glu Phe Leu Gln Ile 160 165 170 175

cgc tgc cag aag gga aag gtaaaagttt cactttcact atttgttttt 847

Arg Cys Gln Lys Gly Lys 180

cctttctgta tacatcaaaa cttaagaatc gttcaatgtt atgccacag ggt atg ctg 905

Gly Met Leu

20

ttg aat gac aga ate caa gat gtg aat tcc ctc caa cat gca ttg agg

953 Leu Asn Asp Arg Ile Gln Asp Val Asn Ser Leu Gln His Ala Leu Arg 185 190 195 200

aag gcc gag gag tat ctg act cct cta tcg tcg gat acc ccg tac tca 1001

Lys Ala Glu Glu Tyr Leu Thr Pro Leu Ser Ser Asp Thr Pro Tyr Ser 205 210 215

gtt ttc gag aaa agg ttt ctg ggg att ggt ttg gag aag gga tgg ggc 1049 Val Phe Glu Lys Arg Phe Leu Gly Ile Gly Leu Glu Lys Gly Trp Gly

220 225 230

gat aat gct gag cat gtt ctt gag atg ate cat ctt cta ttg gat ctc 1097

Asp Asn Ala Glu His Val Leu Glu Met Ile His Leu Leu Leu Asp Leu 235 240 245

ctt cag gea cct gat cct gtc gea ctt gaa age ttc ctt gga aga ate 1145

Leu Gln Ala Pro Asp Pro Val Ala Leu Glu Ser Phe Leu Gly Arg Ile 250 255 260

cca ttg gtc gcc aat gtt gta ate atg act ccc cat gga tac ttt gcc 1193 Pro Leu Val Ala Asn Val Val Ile Met Thr Pro His Gly Tyr Phe Ala 265 270 275 280

caa gac aat gtt ttg gga tac cct gac aca ggt ggt cag gtt gtt tat 1241

Gln Asp Asn Val Leu Gly Tyr Pro Asp Thr Gly Gly Gln Val Val Tyr 285 290 295

ate tta gat caa gtt cgt gcc ttg gag gaa gag ttg ctt cat cgt ttc 1289

Ile Leu Asp Gln Val Arg Ala Leu Glu Glu Glu Leu Leu His Arg Phe

300 305 310

aag ctg caa gga ctc gac att acc cca cgt ate cta gtc gtgagtatct 1338

Lys Leu Gln Gly Leu Asp Ile Thr Pro Arg Ile Leu Val 315 320 325

gaatgttaat tcagtttcga tcattatgtt taatgcttaa tttggctgtt tgtgtaccag 1398 att act cgg ctc ctc cct gat gct gta gga aca act tgc gga cag cgt 1446

Ile Thr Arg Leu Leu Pro Asp Ala Val Gly Thr Thr Cys Gly Gln Arg 330 335 340

ctt gag aaa gtg tat gga acc aag tat tet gat att ctt cgg gta ccc 1494

Leu Glu Lys Val Tyr Gly Thr Lys Tyr Ser Asp Ile Leu Arg Val Pro 10

15

345 350

ttc aga act gag aag gga att gta cgt cca tgg ate

Phe Arg Thr Glu Lys Gly Ile Val Arg Pro Trp Ile 360 365

gcc tgg cct tac ctg gag act tac act aag gat gtt Val Trp Pro Tyr Leu Glu Thr Tyr Thr Lys Asp Val 375 380 385

acc aaa gag ttc cag ggc aag cct gat ctg att gtt Thr Lys Glu Phe Gln Gly Lys Pro Asp Leu Ile Val 390 395 400

gat gga aac att gtt gct tet tta ttg gea cat aag Asp Gly Asn Ile Val Ala Ser Leu Leu Ala His Lys

410 415

cag gtttgttaaa tgccaattaa ttgaacaagt tccttgctgt Gln

355

tca cga ttc aaa 1542

Ser Arg Phe Lys

370

gea gct gag ate 1590 Ala Ala Glu Ile

ggg aac tac agt 1638 Gly Asn Tyr Ser 405

ttt gat gtt aca 1686 Phe Asp Val Thr 420

attttgatgt 1739

20

25

30

tcctcgtgca atctaaaaac ttggttttca atgttttatg cag tgc tet att gct 1794

Cys Ser Ile Ala 425

cat gea etc gag aag acg aaa tac ccg gat tca gac att aac tgg aaa 1842

His Ala Leu Glu Lys Thr Lys Tyr Pro Asp Ser Asp Ile Asn Trp Lys

43O 435 440

cag ctt gag gat aag tat cac ttc tcc tgt cag ttt act gct gat ctt 1890

Gln Leu Glu Asp Lys Tyr His Phe Ser Cys Gln Phe Thr Ala Asp Leu

445 450 455

att gct atg aac cat act gat ttt ate ate acc age acc ttc caa gag 1938 Ile Ala Met Asn His Thr Asp Phe Ile Ile Thr Ser Thr Phe Gln Glu 460 465 47Q

att gct gga ag gtaatctatc tcccacttta ctacatttgg ttcccttgta 1989

Ile Ala Gly Ser

475

ggt ctc tac cgc gtt gtt gat ggg ate gat gtt ttt gat ccc aaa ttc 2146

Gly Leu Tyr Arg Val Val Asp Gly Ile Asp Val Phe Asp Pro Lys Phe 495 500 505 510

aat att gtc tcc cct ggt gct gat atg age ata tac ttc cct tac acg 2194

Asn Ile Val Ser Pro Gly Ala Asp Met Ser Ile Tyr Phe Pro Tyr Thr 515 520 525

gaa gag aag cgg agg ttg aag aag ttc cac ccg gag att gaa gag ctt 2242 Glu Glu Lys Arg Arg Leu Lys Lys Phe His Pro Glu Ile Glu Glu Leu

530 535 540

ctt tac age cct gtt gag aat aca gag cac tt gtgagatttt ggtcctattt 2294 Leu Tyr Ser Pro Val Glu Asn Thr Glu His Leu 545 550

ttacaccctt ttcactagat tttgtgttca gtgttaacaa tgtcttaaat tgttgtctca 2354 cag a tgt gta cta aaa gac cgc aac aag ccg att ctg ttt acc atg gea 2403 Cys Val Leu Lys Asp Arg Asn Lys Pro Ile Leu Phe Thr Met Ala 555 560 565

agg ttg gac cga gtg aag aac tta act ggg ctc gta gag ttc tat gcc 2451 Arg Leu Asp Arg Val Lys Asn Leu Thr Gly Leu Val Glu Phe Tyr Ala

570 575 580

aag aac age cgg ctg agg gaa ctg gtt aac ttg gtt gta gta ggt gga 2499

Lys Asn Ser Arg Leu Arg Glu Leu Val Asn Leu Val Val Val Gly Gly 585 590 595 600

gat agg aga aag gaa tcc aag gac tta gaa gaa aag gct gaa atg aag 2547

Asp Arg Arg Lys Glu Ser Lys Asp Leu Glu Glu Lys Ala Glu Met Lys

605 610 615

aag atg tat gaa ctt ate gaa aaa tac aag ttg aat gga caa ttc aga 2595

Lys Met Tyr Glu Leu Ile Glu Lys Tyr Lys Leu Asn Gly Gln Phe Arg 620 625 630

tgg ata tcg tcc cag atg aac cgt gtg aga aat ggt gaa ctc tat cgt 2643 Trp Ile Ser Ser Gln Met Asn Arg Val Arg Asn Gly Glu Leu Tyr Arg

635 640 645

tat att tgc gac acc aag gga gca ttc gtt cag cct gct ata tac gag 2691

Tyr Ile Cys Asp Thr Lys Gly Ala Phe Val Gln Pro Ala Ile Tyr Glu 650 655 660

gct ttt ggc ttg act gtt gtt gag gca atg acc tgt gga cta cca aca 273 9 Ala Phe Gly Leu Thr Val Val Glu Ala Met Thr Cys Gly Leu Pro Thr 665 670 675 680

ttt gca aca tgc tac ggg ggc cct gct gag att ata gtt cac gga aaa 2787

Phe Ala Thr Cys Tyr Gly Gly Pro Ala Glu Ile Ile Val His Gly Lys

685 690 695

tcg ggg ttc aac ate gat cct tat aac ggt gat ttg gct gcc gag acc 2835

Ser Gly Phe Asn Ile Asp Pro Tyr Asn Gly Asp Leu Ala Ala Glu Thr 700 705 710

1 5 ctt gcc aat ttc ttc gag aag tgc aaa gcg gat cca tet tat tgg gat 2883 Leu Ala Asn Phe Phe Glu Lys Cys Lys Ala Asp Pro Ser Tyr Trp Asp

715 720 725

gag ate tcc cag gga ggg ttg aaa cgc ata cag gag aag tat aca tgg 2931 Glu Ile Ser Gln Gly Gly Leu Lys Arg Ile Gln Glu Lys Tyr Thr Trp 730 735 740

cag att tac tcc gag aag cta ttg act ctc acc gga gtt tat ggc ttt 2979

Gln Ile Tyr Ser Glu Lys Leu Leu Thr Leu Thr Gly Val Tyr Gly Phe 745 750 755 760

tcg aaa cat gta gct tac cag gag caa cgt ggg cgc aag cgt tac att 3027

Ser Lys His Val Ala Tyr Gln Glu Gln Arg Gly Arg Lys Arg Tyr Ile

765 770 775

gaa atg ttg cat gca ttg atg tat aac aat cgg gtaaaacaat catgtctatt 3080 Glu Met Leu His Ala Leu Met Tyr Asn Asn Arg 780 785

attattatta catcaaacat cattttactc tttcattgaa ctgaaaattt catgtttctg 3140 aatgtttgtt taattgtgtg ttttacag gtc aag act gct cca cta gct gtt 3192

Val Lys Thr Ala Pro Leu Ala Val 790 795

gag taaagaaaaa gcaaaaggct gcttggaaac taaggaattt ccaagaatga 3245

Glu

ttactattga agttttattt ttgcttcttt tttttcaatt tggtaaatgt ttaatttcaa 3305 ctttggggtt tccccttgga atgttttgaa ctctgggttt ggtcccatt 3354

<210> 11 <211> 796 <212> PRT <213> Gossypium Iongicalyx <4 00> 11

Met Ala Ser Ile Ser Val Cys Glu Arg Leu Gly Glu Ser Leu Ala Thr 10 15

His Pro Gln Gln Ala Lys Ser Ile Leu Ser Arg Ile Glu Ser Leu Gly

20 25 30

Lys Gly Ile His Lys Ser Gln Lys Leu Leu Ser Val Leu Asp Lys Glu

40 45

Ala Gly Asn Gln Ala Leu Asp Gly Met Val Val Glu Val Leu Arg Ser 50 55 60

Thr Gln Glu Ala Val Val Ser Ser Pro Leu Val Ala Leu Ala Ile Arg 65 70 75 80

Ser Ala Pro Gly Val Trp Glu Tyr Ile Ala Val Glu Val Gln Lys Leu

85 90 95

Phe Val Glu Glu Met Pro Val Ala Glu Tyr Leu Arg Leu Lys Glu Glu 100 105 110

Leu Val Asp Gly Ser Ser Lys Gly Glu Phe Met Leu Glu Leu Asp Phe

115 120 125

Gly Ala Phe Asn Asn Ser Val Pro Arg Pro Ser Leu Ser Lys Ser Ile 130 135 140

Gly Asn Gly Met Asp Phe Leu Asn Arg His Leu Ser Ala Lys Leu Phe 145 150 155 160

Gln Asp Lys Glu Asn Leu Asn Leu Leu Leu Glu Phe Leu Gln Ile His 165 170 175

Cys Gln Lys Gly Lys Gly Met Leu Leu Asn Asp Arg Ile Gln Asp Val

180 185 190

Asn Ser Leu Gln His Ala Leu Arg Lys Ala Glu Glu Tyr Leu Thr Pro

195 200 205

Leu Thr Ser Asp Thr Pro Tyr Ser Val Phe Glu Lys Arg Phe Arg Glu

210 215 220

Ile Gly Leu Glu Lys Gly Trp Gly Asp Asn Ala Glu His Val Leu Glu 225 230 235 240

Met Ile His Leu Leu Leu Asp Leu Leu Gln Ala Pro Asp Pro Val Ala

245 250 255

Leu Glu Ser Phe Leu Gly Arg Ile Pro Leu Val Ala Asn Val Val Ile

260 265 270

Met Thr Pro His Gly Tyr Phe Ala Gln Asp Asn Val Leu Gly Tyr Pro

275 280 285

Asp Thr Gly Gly Gln Val Val Tyr Ile Leu Asp Gln Val Arg Ala Leu

290 295 300

Glu Glu Glu Leu Leu His Arg Phe Lys Leu Gln Gly Leu Asp Ile Thr 305 310 315 320

Pro Arg Ile Leu Val Ile Thr Arg Leu Leu Pro Asp Ala Val Gly Thr

325 330 335

Thr Cys Gly Gln Arg Leu Glu Lys Val Tyr Gly Thr Lys Tyr Ser Asp

340 345 350

Ile Leu Arg Val Pro Phe Arg Thr Glu Lys Gly Ile Val Arg Pro Trp

355 360 365

Ile Ser Arg Phe Lys Val Trp Pro Tyr Leu Glu Thr Tyr Thr Lys Asp

370 375 380

Val Ala Ala Glu Ile Thr Lys Glu Phe Gln Gly Lys Pro Asp Leu Ile 385 390 395 400

Val Gly Asn Tyr Ser Asp Gly Asn Ile Val Ala Ser Leu Leu Ala His

405 410 415

Lys Phe Asp Val Thr Gln Cys Thr Ile Ala His Ala Leu Glu Lys Thr 420 425 430

Lys Tyr Pro Asp Ser Asp Ile Asn Trp Lys Gln Leu Glu Asp Lys Tyr

435 440 445

His Phe Ser Cys Gln Phe Thr Ala Asp Leu Ile Ala Met Asn His Thr

450 455 460

Asp Phe Val Ile Thr Ser Thr Phe Gln Glu Ile Ala Gly Ser Lys Asp 465 470 475 480

Thr Leu Gly Gln Tyr Glu Ser His Ile Ala Phe Thr Leu Pro Gly Leu

485 490 495

Tyr Arg Val Val Asp Gly Ile Asp Val Phe Asp Pro Lys Phe Asn Ile

500 505 510

Val Ser Pro Gly Ala Asp Met Ser Ile Tyr Phe Pro Tyr Thr Glu Glu

515 520 525

Lys Arg Arg Leu Lys Lys Phe His Pro Glu Ile Glu Glu Leu Leu Tyr

530 535 540

Ser Pro Val Glu Asn Thr Glu His Leu Cys Val Leu Lys Asp Arg Asn 545 550 555 560

Lys Pro Val Leu Phe Thr Met Ala Arg Leu Asp Arg Val Lys Asn Leu

565 570 575

Thr Gly Leu Val Glu Phe Tyr Ala Lys Asn Ser Arg Leu Arg Glu Leu

580 585 590

Val Asn Leu Val Val Val Gly Gly Asp Arg Arg Lys Glu Ser Lys Asp

595 600 605

Leu Glu Glu Lys Ala Glu Met Lys Lys Met Tyr Glu Leu Ile Glu Lys

610 615 620

Tyr Lys Leu Asn Gly Gln Phe Arg Trp Ile Ser Ser Gln Met Asn Arg 625 630 635 640

Val Arg Asn Gly Glu Leu Tyr Arg Tyr Ile Cys Asp Thr Lys Gly Ala

645 650 655

Phe Val Gln Pro Ala Ile Tyr Glu Ala Phe Gly Leu Thr Val Val Glu

660 665 670

Ala Met Thr Cys Gly Leu Pro Thr Phe Ala Thr Cys Tyr Gly Gly Pro 675 680 685 Ala Glu Ile Ile Val His Gly Lys Ser Gly Phe Asn Ile Asp Pro Tyr

69O 695 700

Asn Gly Asp Leu Ala Ala Glu Thr Leu Ala Asn Phe Phe Glu Lys Cys 705 ΊΟ 715 720

Lys Ala Asp Pro Ser Tyr Trp Asp Glu Ile Ser Gln Gly Gly Leu Lys

725 730 735

Arg Ile Gln Glu Lys Tyr Thr Trp Gln Ile Tyr Ser Glu Lys Leu Leu

740 745 750

Thr Leu Thr Gly Val Tyr Gly Phe Ser Lys His Val Ala Tyr Gln Glu 755 760 765

Gln Arg Gly Arg Lys Arg Tyr Ile Glu Met Leu His Ala Leu Met Tyr 770 775 780

Asn Asn Arg Val Lys Thr Val Pro Leu Ala Val Glu 785 790 795

<210> 12 <211> 3353 <212> DNA

<213> Gossypium longicalyx <220>

<221> éxon <222> (32).. (111) <223> éxon 1 <220>

<221> misc_feature <222> (32)..(34) <223> Códon de iniciação ATG <220>

<221> éxon <222> (195).. (312) 223> éxon 2 220> <221> éxon <222> (392).. (543) <223> éxon 3 <220>

<221> éxon <222> (623).. (815) <223> éxon 4 <220>

<221> éxon <222> (891) .. (1322) <223> éxon 5 <220>

<221> éxon <222> (1393)..(1683) <223> éxon 6 <22 0>

<221> éxon <222> (1777) .. (1943) <223> éxon 7 <220>

<221> éxon <222> (2044) .. (2268) <223> éxon 8 <220>

<221> éxon <222> (2353)..(3055) <223> éxon 9 <220>

<221> éxon <222> (3160) .. (3186) <223> éxon 10 <220> 10

15

<221> misc_feature <222> (3187)..(3189) <223> Códon de terminação <400> 12

cccttctgcc atttcaggaa cctaaaaaac a atg gct tca ate agt gtc tgt 52

Met Ala Ser Ile Ser Val Cys 1 5

gag cgt ttg ggt gaa tet cta gct act cat cca cag cag gea aag tet 100

Glu Arg Leu Gly Glu Ser Leu Ala Thr His Pro Gln Gln Ala Lys Ser

15 20

ate ttg tca ag gtataatgta aataagtgct gccttcaaag ttctggtctt 151

Ile Leu Ser Arg 25

tctttgttat tttttattac attgtttata tgtcatattg cag g att gaa age ctt 207

Ile Glu Ser Leu 30

gga aag ggt att cat aag tet caa aag ctg etc tcg gtt ctc gat aaa 255

Gly Lys Gly Ile His Lys Ser Gln Lys Leu Leu Ser Val Leu Asp Lys

40 45

gag gcc gga aat caa gea ctt gat ggg atg gtg gtg gag gtc ctc agg 3 03

Glu Ala Gly Asn Gln Ala Leu Asp Gly Met Val Val Glu Val Leu Arg

50 55 60

tcc act cag gtcacaataa aacaaaccct ttctttggtt atgtttcatg 352

Ser Thr Gln 65

atgagaatat tggactgata tgttaccatt atctaatag gaa gct gta gtg tcg 406

Glu Ala Val Val Ser 70

tet cca ttg gtt gcc ctt gcc att cgt tca gct cct gga gtt tgg gag 454

Ser Pro Leu Val Ala Leu Ala Ile Arg Ser Ala Pro Gly Val Trp Glu 75 80 85

tac att gct gtg gag gtc caa aag ctt ttt gtg gag gaa atg ccc gtt 502

20

25 10

15

Tyr Ile Ala Val Glu Val Gln Lys Leu Phe Val Glu Glu Met Pro Val

90 95 100

gct gag tat cta cgg ttg aag gaa gaa ctt gtt gac gga ag 543

Ala Glu Tyr Leu Arg Leu Lys Glu Glu Leu Val Asp Gly Ser

105 110 115

gtaggtagtt ttctcttaca gcCcctggtt tatgttatgt ttgagtttat gttgaacaat 603 gctcaatgat gtggttcag c tcc aag ggc gag ttt atg ttg gaa ttg gac 653

Ser Lys Gly Glu Phe Met Leu Glu Leu Asp 120 125

ttt ggt gca ttc aat aat tct gtt cct cgt cca tct ctt tca aag tcc 701

Phe Gly Ala Phe Asn Asn Ser Val Pro Arg Pro Ser Leu Ser Lys Ser

130 135 140

att ggt aat ggc atg gac ttc ctc aac cgc cac ctt tct gcc aag cta 749

Ile Gly Asn Gly Met Asp Phe Leu Asn Arg His Leu Ser Ala Lys Leu

145 150 155

ttt caa gac aag gag aac ttg aac ttg ttg ctt gaa ttt ctc caa att 797

Phe Gln Asp Lys Glu Asn Leu Asn Leu Leu Leu Glu Phe Leu Gln Ile 160 165 170 175

cac tgc cag aag gga aag gtaaaagttt cactttcact atttgttttt 845

His Cys Gln Lys Gly Lys

180

cctttataca tcaaaactca agaatcgttc aatgttatgc cacag ggt atg ctg ttg 902

Gly Met Leu Leu 185

aat gac aga ate caa gat gtg aat tcc ctc caa cat gca ttg agg aag 950

Asn Asp Arg Ile Gln Asp Val Asn Ser Leu Gln His Ala Leu Arg Lys

190 195 200

gcc gag gag tat ctg act ccc cta acg tcg gat acc ccg tac tcg gtt 998

Ala Glu Glu Tyr Leu Thr Pro Leu Thr Ser Asp Thr Pro Tyr Ser Val

205 210 215

ttc gag aaa agg ttt cgg gag att ggt ttg gag aag gga tgg ggt gat 1046

Phe Glu Lys Arg Phe Arg Glu Ile Gly Leu Glu Lys Gly Trp Gly Asp 10

15

20

25

30

220 225 230

aat gct gag cat gtt ctt gag atg ate cat ctt cta ttg gat ctc ctt 1094

Asn Ala Glu His Val Leu Glu Met Ile His Leu Leu Leu Asp Leu Leu

235 240 245

cag gea cct gat cct gtc gea ctt gaa age ttc ctt gga aga ate cca 1142 Gln Ala Pro Asp Pro Val Ala Leu Glu Ser Phe Leu Gly Arg Ile Pro 250 255 260 265

ttg gtc gcc aat gtt gta ate atg act ccc cat gga tac ttt gct caa 1190 Leu Val Ala Asn Val Val Ile Met Thr Pro His Gly Tyr Phe Ala Gln

270 275 280

gac aat gtt ttg gga tac cct gac aca ggt ggt cag gtt gtt tat ate 1238 Asp Asn Val Leu Gly Tyr Pro Asp Thr Gly Gly Gln Val Val Tyr Ile

285 290 295

tta gat caa gtt cgt gcc ttg gag gaa gag ttg ctt cat cgt ttc aag 1286

Leu Asp Gln Val Arg Ala Leu Glu Glu Glu Leu Leu His Arg Phe Lys

300 305 3io

ctg caa gga etc gac att acc cca cgt ate cta gtc gtgagtatct 1332

Leu Gln Gly Leu Asp Ile Thr Pro Arg Ile Leu Val 315 320 325

gaatgttaat tcggtttcga tcattatgtt taatgcttaa tttggctgtt tatgtaccag 1392 att act cgg ctc ctc cct gat gct gta gga aca act tgc ggt cag cgt 1440

Ile Thr Arg Leu Leu Pro Asp Ala Val Gly Thr Thr Cys Gly Gln Arg

330 335 340

ctt gaa aaa gtg tat gga acc aag tat tet gat att ctt cgg gta ccc 1488

Leu Glu Lys Val Tyr Gly Thr Lys Tyr Ser Asp Ile Leu Arg Val Pro

345 350 355

ttc aga act gag aag gga att gta cgt cca tgg ate tca cga ttc aaa 1536

Phe Arg Thr Glu Lys Gly Ile Val Arg Pro Trp Ile Ser Arg Phe Lys

360 365 370

gtc tgg cct tac ctg gag act tac act aag gat gtt gea gct gag ate 1584

Val Trp Pro Tyr Leu Glu Thr Tyr Thr Lys Asp Val Ala Ala Glu Ile 375 380 385 acc aaa gag ttc cag ggc aag cct gat ctg att gtt ggg aac tac agt 1632

Thr Lys Glu Phe Gln Gly Lys Pro Asp Leu Ile Val Gly Asn Tyr Ser

390 395 400 405

gat gera aac att gtt gct tet tta ttg gea cat aag ttt gat gtt aca 1680

Asp Gly Asn Ile Val Ala Ser Leu Leu Ala His Lys Phe Asp Val Thr

410 415 420

cag gtttgttaaa tgccaattaa ttgaacaagt tccttgctgt attttgatgt 1733

Gln

10

15

20

25

30

ttcccgtgca atctaaaaac ttggttttca atgttttatg cag tgc act att gct 1788

Cys Thr Ile Ala 425

cat gea ctt gag aag acg aaa tac ccg gat tca gac att aac tgg aaa 1836

His Ala Leu Glu Lys Thr Lys Tyr Pro Asp Ser Asp Ile Asn Trp Lys

430 435 440

cag ctt gag gat aag tat cac ttc tcc tgt cag ttt act gct gat ctt 1884

Gln Leu Glu Asp Lys Tyr His Phe Ser Cys Gln Phe Thr Ala Asp Leu

445 450 455

att gct atg aac cat act gat ttt gtc ate acc age acc ttc caa gag 1932

Ile Ala Met Asn His Thr Asp Phe Val Ile Thr Ser Thr Phe Gln Glu

460 465 470

att gct gga ag gtaatctatc tcccacttta ctaaatttgg ttcccttgta 1983

Ile Ala Gly Ser 475

cgttgtaaat gttgccacct atttgagtcc ctaacaatgt ttccattcca tgattttcag 2043 c aag gac act ctc ggc caa tac gag agt cac att gct ttc act ctt cca 2092 Lys Asp Thr Leu Gly Gln Tyr Glu Ser His Ile Ala Phe Thr Leu Pro 480 485 490

ggg ctc tac cgc gtt gtt gat ggg ate gat gtt ttt gat ccc aaa ttc 2140

Gly Leu Tyr Arg Val Val Asp Gly Ile Asp Val Phe Asp Pro Lys Phe 495 500 505 510

aat att gtc tcc cct ggt gct gat atg age ata tac ttc cct tac acg 2188 Asn Ile Val Ser Pro Gly Ala Asp Met Ser Ile Tyr Phe Pro Tyr Thr

515 520 525

gaa gag aag cga agg ttg aag aag ttc cac ccg gag att gaa gag ctt 2236

Glu Glu Lys Arg Arg Leu Lys Lys Phe His Pro Glu Ile Glu Glu Leu 530 535 540

ctt tac age cct gtt gag aat aca gag cac tt gtgggatttt ggtcctattt 22 88 Leu Tyr Ser Pro Val Glu Asn Thr Glu His Leu

545 550

ttacaccctt tttcactaga ttttgtgttc agtgttaaca atgtcttgaa ttgttgtctc 2348 acag a tgt gta cta aaa gac cgc aac aag ccg gtt ctg ttt acc atg 2395

Cys Val Leu Lys Asp Arg Asn Lys Pro Val Leu Phe Thr Met 555 560 565

gea agg ttg gac cga gtg aag aac tta act ggg ctc gta gag ttc tat 2443 Ala Arg Leu Asp Arg Val Lys Asn Leu Thr Gly Leu Val Glu Phe Tyr 570 575 580

gcc aag aac age cgg ctg agg gaa ctg gtt aac ttg gtt gta gta ggt 2491

Ala Lys Asn Ser Arg Leu Arg Glu Leu Val Asn Leu Val Val Val Gly

585 590 595

gga gat agg aga aag gaa tcc aag gac tta gaa gaa aag gct gaa atg 2539

Gly Asp Arg Arg Lys Glu Ser Lys Asp Leu Glu Glu Lys Ala Glu Met 600 605 610 615

aag aag atg tat gaa ctt ate gaa aaa tac aag ttg aat gga caa ttc 2587

Lys Lys Met Tyr Glu Leu Ile Glu Lys Tyr Lys Leu Asn Gly Gln Phe 620 625 630

aga tgg ata tcg tcc cag atg aac cgt gtg aga aat ggt gaa ctc tat 263 5 Arg Trp Ile Ser Ser Gln Met Asn Arg Val Arg Asn Gly Glu Leu Tyr

635 640 645

cgt tat att tgc gac acc aag gga gea ttc gtt cag cct gct ata tac 2683

Arg Tyr Ile Cys Asp Thr Lys Gly Ala Phe Val Gln Pro Ala Ile Tyr 650 655 660

gag gct ttt ggc ttg act gtt gtt gag gea atg acc tgt gga cta cca 2731

Glu Ala Phe Gly Leu Thr Val Val Glu Ala Met Thr Cys Gly Leu Pro 10

15

20

25

30

665 670 675

aca ttt gca aca tgt tac ggg ggc cct gct gag att ata gtt cac gga 2779

Thr Phe Ala Thr Cys Tyr Gly Gly Pro Ala Glu Ile Ile Val His Gly 680 685 690 695

aaa tcg ggg ttc aac ate gac cct tat aac ggt gat ttg gct gcc gag 2827

Lys Ser Gly Phe Asn Ile Asp Pro Tyr Asn Gly Asp Leu Ala Ala Glu

700 705 710

acc ctc gcc aat ttc ttc gag aaa tgc aaa gcg gat cca tet tat tgg 2875

Thr Leu Ala Asn Phe Phe Glu Lys Cys Lys Ala Asp Pro Ser Tyr Trp

715 720 725

gat gag ate tcc cag gga ggg ttg aaa cgc ata cag gag aag tat aca 2923

Asp Glu Ile Ser Gln Gly Gly Leu Lys Arg Ile Gln Glu Lys Tyr Thr

730 735 740

tgg cag att tac tcc gag aag cta ttg act ctc acc gga gtt tat ggc 2971

Trp Gln Ile Tyr Ser Glu Lys Leu Leu Thr Leu Thr Gly Val Tyr Gly

745 750 755

ttt tcg aaa cat gta gct tac cag gag caa cgt ggg cgc aag cgt tac 3019

Phe Ser Lys His Val Ala Tyr Gln Glu Gln Arg Gly Arg Lys Arg Tyr 760 765 770 775

att gaa atg ttg cat gca ttg atg tat aac aat cgg gtaaaacaat 3 065

Ile Glu Met Leu His Ala Leu Met Tyr Asn Asn Arg

780 785

catgtctatt attattatta catcaaacat cattttactc tttcattgaa ctgaaaattt 3125 catgtttctg aatgtttaat tgtgtgcttt acag gtc aag act gtt cct cta gct 3180

Val Lys Thr Val Pro Leu Ala 790

gtt gag taaagaaaca gcaaaaagct gcttggaaac caaggaattt ccaagaatga 3236

Val Glu

795

ttgctattga agttttattt ttgcttttct tttttttttt ttttttcaat ttggtaaatg 3296 tttaatttca actttggggt ttccccttgg aatgttttga actctgggtt tggtccc 3353

<210> 13 <211> 796 <212> PRT

<213> Gossypium Iongicalyx <400> 13

Met Ala Ser Ile Ser Val Cys Glu Arg Leu Gly Glu Ser Leu Ala Thr 10 15

His Pro Gln Gln Ala Lys Ser Ile Leu Ser Arg Ile Glu Ser Leu Gly

25 30

Lys Gly Ile His Lys Ser Gln Lys Leu Leu Ser Val Leu Asp Lys Glu

40 45

Ala Gly Asn Gln Ala Leu Asp Gly Met Val Val Glu Val Leu Arg Ser

50 55 60

Thr Gln Glu Ala Val Val Ser Ser Pro Leu Val Ala Leu Ala Ile Arg 65 70 75 80

Ser Ala Pro Gly Val Trp Glu Tyr Ile Ala Val Glu Val Gln Lys Leu

85 90 95

Phe Val Glu Glu Met Pro Val Ala Glu Tyr Leu Arg Leu Lys Glu Glu

100 105 110

Leu Val Asp Gly Ser Ser Asn Gly Glu Phe Met Leu Glu Leu Asp Phe

115 120 125

Gly Ala Phe Asn Asn Ser Val Pro Arg Pro Ser Leu Ser Lys Ser Ile

130 135 140

Gly Asn Gly Met Asp Phe Leu Asn Arg His Leu Ser Ala Lys Leu Phe 145 150 155 160

Gln Asp Lys Glu Asn Leu Asn Leu Leu Leu Glu Phe Leu Gln Ile His

165 170 175

Cys Gln Lys Gly Lys Gly Met Leu Leu Asn Asp Arg Ile Gln Asp Val

180 185 190

Asn Ser Leu Gln His Ala Leu Arg Lys Ala Glu Glu Tyr Leu Thr Pro

195 200 205

Leu Ser Ser Asp Thr Pro Tyr Ser Val Phe Glu Lys Arg Phe Leu Gly 210 215 220 Ile Gly Leu Glu Lys Gly Trp Gly Asp Asn Ala Glu His Val Leu Glu 225 230 235 240

Met Ile His Leu Leu Leu Asp Leu Leu Gln Ala Pro Asp Pro Val Ala

245 250 255

Leu Glu Ser Phe Leu Gly Arg Ile Pro Leu Val Ala Asn Val Val Ile

260 265 270

Met Thr Pro His Gly Tyr Phe Ala Gln Asp Asn Val Leu Gly Tyr Pro

275 280 285

Asp Thr Gly Gly Gln Val Val Tyr Ile Leu Asp Gln Val Arg Ala Leu

29O 295 300

Glu Glu Glu Leu Leu His Arg Ser Lys Leu Gln Gly Leu Asp Ile Thr 305 310 315 320

Pro Arg Ile Leu Val Ile Thr Arg Leu Leu Pro Asp Ala Val Gly Thr

32S 330 335

Thr Cys Gly Gln Arg Leu Glu Lys Val Tyr Gly Thr Lys Tyr Ser Asp

340 345 350

Ile Leu Arg Val Pro Phe Arg Thr Glu Lys Gly Ile Val Arg Pro Trp

355 360 365

Ile Ser Arg Phe Lys Val Trp Pro Tyr Leu Glu Thr Tyr Thr Lys Asp

370 375 380

Val Ala Ala Glu Ile Thr Lys Glu Phe Gln Gly Lys Pro Asp Leu Ile 385 390 395 400

Val Gly Asn Tyr Ser Asp Gly Asn Ile Val Ala Ser Leu Leu Ala His

405 410 415

Lys Phe Asp Val Thr Gln Cys Thr Ile Ala His Ala Leu Glu Lys Thr

420 425 430

Lys Tyr Pro Asp Ser Asp Ile Asn Trp Lys Gln Leu Glu Asp Lys Tyr

435 440 445

His Phe Ser Cys Gln Phe Thr Ala Asp Leu Ile Ala Met Asn His Thr

450 455 460

Asp Phe Ile Ile Thr Ser Thr Phe Gln Glu Ile Ala Gly Ser Lys Asp 465 470 475 480 Thr Leu Gly Gln Tyr Glu Ser His Ile Ala Phe Thr Leu Pro Gly Leu

485 490 495

Cys Arg Val Val Asp Gly Ile Asp Val Phe Asp Pro Lys Phe Asn Ile

500 505 510

Val Ser Pro Gly Ala Asp Met Ser Ile Tyr Phe Pro Tyr Thr Glu Glu

515 520 525

Lys Arg Arg Leu Lys Lys Phe His Pro Glu Ile Glu Glu Leu Leu Tyr

530 535 540

Ser Pro Val Glu Asn Thr Glu His Leu Cys Val Leu Lys Asp Arg Asn 545 550 555 560

Lys Pro Ile Leu Phe Thr Met Ala Arg Leu Asp Arg Val Lys Asn Leu

565 570 575

Thr Gly Leu Val Glu Phe Tyr Ala Lys Asn Ser Arg Leu Arg Glu Leu

580 585 590

Val Asn Leu Val Val Val Gly Gly Asp Arg Arg Lys Glu Ser Lys Asp

595 600 605

Leu Glu Glu Lys Ala Glu Met Lys Lys Met Tyr Glu Leu Ile Glu Lys

610 615 620

Tyr Lys Leu Asn Gly Gln Phe Arg Trp Ile Ser Ser Gln Met Asn Arg 625 630 635 640

Val Arg Asn Gly Glu Leu Tyr Arg Tyr Ile Cys Asp Thr Lys Gly Ala

645 650 655

Phe Val Gln Pro Pro Ile Tyr Glu Ala Phe Gly Leu Thr Val Val Glu

660 665 670

Ala Met Thr Cys Gly Leu Pro Thr Phe Ala Thr Cys Tyr Gly Gly Pro

675 680 685

Ala Glu Ile Ile Val His Gly Lys Ser Gly Phe Asn Ile Asp Pro Cys

690 695 700

Asn Gly Asp Leu Ala Ala Glu Thr Leu Ala Asn Phe Phe Glu Lys Cys 705 710 715 720

Lys Ala Asp Pro Ser Tyr Trp Asp Glu Ile Ser Gln Gly Gly Leu Lys 725 730 735 Arg Ile Gln Glu 740

Thr Leu Thr Gly 755

Gln Arg Gly Arg 770

Asn Asn Arg Val 785

<210> 14 <211> 3353 <212> DNA

<213> Gossypium longicalyx <220>

<221> éxon <222> (32) . . (111) <223> éxon 1 <220>

<221> misc_feature <222> (32) . . (34) <223> códon de iniciação <220>

<221> éxon <222> (197) . . (314) <223> éxon 2 <220>

<221> éxon <222> (394)..(545) <223> éxon 3 <220>

<221> éxon <222> (625)..(817) <223> éxon 4

Lys Tyr Thr Trp Gln Ile Tyr Ser Glu Lys Leu Leu

745 750

Val Tyr Gly Phe Ser Lys His Val Ala Tyr Gln Glu

760 765

Lys Arg Tyr Ile Glu Met Leu His Ala Trp Met Tyr

775 780

Lys Thr Val Pro Leu Ala Val Glu 790 795 <220>

<221> éxon

<222> (897) .. (1328)

<223> éxon 5

<220>

<221> éxon <222> (1399) .. (1689)

<223> éxon 6 <220>

<221> éxon

<222> (1783) .. (1949)

<223> éxon 7 <220>

<221> éxon

<222> (2050) .. (2274)

<223> éxon 8 <220>

<221> éxon

<222> (2358) .. (3060)

<223> éxon 9 <220>

<221> éxon

<222> (3169) .. (3195)

<223> éxon 10

<220>

<221> misc_feature <222> (3196) .. (3198) <223> Códon de terminação <4 00> 14

cccttctgcc atttcaggaa cccaaaaaac a atg gct tca ate agt gtt tgt

Met Ala Ser Ile Ser Val Cys 1 5 10

15

20

25

30

gag cgt ttg ggt gaa tct cta gct act cac cca cag cag gca aag tct 100

Glu Arg Leu Gly Glu Ser Leu Ala Thr His Pro Gln Gln Ala Lys Ser

15 20

ate ttg tca ag gtataatgta aataagtgct gccttcaaat ttctggtctt 151

Ile Leu Ser Arg 25

tcttcgttat tttttattac attgtttata tatgtcatat tgcag g att gaa age 206

Ile Glu Ser 30

ctc gga aag ggt att cat aag tct caa aag ctg ctc tcg gtt ctc gat 254

Leu Gly Lys Gly Ile His Lys Ser Gln Lys Leu Leu Ser Val Leu Asp

40 45

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Lys Glu Ala Gly Asn Gln Ala Leu Asp Gly Met Val Val Glu Val Leu

50 55 60

agg tcc act cag gtcacaataa aacaaaccct ttctttggtt atgtttcatg 354

Arg Ser Thr Gln 65

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Glu Ala Val Val Ser 70

tct cca ttg gtt gcc ctt gcc att cgt tca gct cct gga gtt tgg gag 456

Ser Pro Leu Val Ala Leu Ala Ile Arg Ser Ala Pro Gly Val Trp Glu

75 80 85

tac att gct gtg gag gtc caa aag ctt ttt gtg gag gaa atg ccc gtt 504

Tyr Ile Ala Val Glu Val Gln Lys Leu Phe Val Glu Glu Met Pro Val

90 95 100

gct gag tat cta cgg ttg aag gaa gaa ctt gtt gat gga ag 545

Ala Glu Tyr Leu Arg Leu Lys Glu Glu Leu Val Asp Gly Ser

105 110 115

gtaggtagtt ttctcttaca gctcctggtt tatattatgt ttgagtttat gttgaacaat 605 gctcaatgat gtggttcag c tcc aat ggc gag ttt atg ttg gaa ttg gac 655 10

15

30

Ser Asn Gly Glu Phe Met Leu Glu Leu Asp 120 125

ttt ggt gca ttc aat aat tct gtt ccc cgt cca tct ctt tca aag tcc 703

Phe Gly Ala Phe Asn Asn Ser Val Pro Arg Pro Ser Leu Ser Lys Ser

130 135 140

att ggt aat ggc atg gac ttc ctc aac cgc cac ctt tct gcc aag cta 751

Ile Gly Asn Gly Met Asp Phe Leu Asn Arg His Leu Ser Ala Lys Leu

145 150 155

ttt caa gac aag gag aac ttg aac ttg ttg ctt gaa ttt ctc caa att 799

Phe Gln Asp Lys Glu Asn Leu Asn Leu Leu Leu Glu Phe Leu Gln Ile 160 165 170 175

cac tgc cag aag gga aag gtaaaagttt cactttcact atttgttttt 847

His Cys Gln Lys Gly Lys 180

cctttctgta tacatcaaaa cttaagaatc gttcaatgtt atgccacag ggt atg ctg 905

Gly Met Leu

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Leu Asn Asp Arg Ile Gln Asp Val Asn Ser Leu Gln His Ala Leu Arg 185 190 195 200

aag gcc gag gag tat ctg act cct cta tcc tcg gat acc ccg tac tca 1001

Lys Ala Glu Glu Tyr Leu Thr Pro Leu Ser Ser Asp Thr Pro Tyr Ser

205 210 215

gtt ttc gag aaa agg ttt ctg ggg att ggt ttg gag aag gga tgg ggt 1049

Val Phe Glu Lys Arg Phe Leu Gly Ile Gly Leu Glu Lys Gly Trp Gly 220 225 230

gat aat gct gag cat gtt ctt gag atg ate cat ctt cta ttg gat ctc 1097

Asp Asn Ala Glu His Val Leu Glu Met Ile His Leu Leu Leu Asp Leu

235 240 245

ctt cag gca cct gat cct gtc gca ctt gaa age ttc ctt gga aga ate 1145

Leu Gln Ala Pro Asp Pro Val Ala Leu Glu Ser Phe Leu Gly Arg Ile 250 255 260 cca ttg gtc gcc aat gtt gta ate atg act ccc cat gga tac ttt gcc 1193

Pro Leu Val Ala Asn Val Val Ile Met Thr Pro His Gly Tyr Phe Ala 265 270 275 280

caa gac aat gtt ttg gga tac cct gac aca ggt ggt cag gtt gtt tat 1241

Gln Asp Asn Val Leu Gly Tyr Pro Asp Thr Gly Gly Gln Val Val Tyr 285 290 295

ate tta gat caa gtt cgt gcc ttg gag gaa gag ttg ctt cat cgt tcc 1289

Ile Leu Asp Gln Val Arg Ala Leu Glu Glu Glu Leu Leu His Arg Ser 300 305 310

aag ctg caa gga ctc gac att acc cca cgt ate cta gtc gtgagtatct 1338

Lys Leu Gln Gly Leu Asp Ile Thr Pro Arg Ile Leu Val 315 320 325

gaatgttaat tcagtttcga tcattatgtt taatgcttaa tttggctgtt tgtgtaccag 1398 att act cgg ctc ctc cct gat gct gta gga aca act tgc ggt cag cgt 1446

Ile Thr Arg Leu Leu Pro Asp Ala Val Gly Thr Thr Cys Gly Gln Arg

330 335 340

ctt gag aaa gtg tat gga acc aag tat tet gat att ctt cgg gta ccc 1494

Leu Glu Lys Val Tyr Gly Thr Lys Tyr Ser Asp Ile Leu Arg Val Pro 345 350 355

ttc aga act gag aag gga att gta cgt cca tgg ate tca cga ttc aaa 1542

Phe Arg Thr Glu Lys Gly Ile Val Arg Pro Trp Ile Ser Arg Phe Lys

360 365 370

gtc tgg cct tac ctg gag act tac act aag gat gtt gea gct gag ate 1590

Val Trp Pro Tyr Leu Glu Thr Tyr Thr Lys Asp Val Ala Ala Glu Ile 375 380 385

acc aaa gag ttc cag ggc aag cct gat ctg att gtt ggg aac tac agt 1638

Thr Lys Glu Phe Gln Gly Lys Pro Asp Leu Ile Val Gly Asn Tyr Ser 390 395 400 405

gat gga aac att gtt gct tet tta ttg gea cat aag ttt gat gtt aca 1686

Asp Gly Asn Ile Val Ala Ser Leu Leu Ala His Lys Phe Asp Val Thr

410 415 420

cag gtttgttaaa taccaattaa ttgaacaagt tccttgctgt attttgatgt 1739 15

Gln

tccccgtgca atctaaaaac ttggttttca atgttttatg cag tgc act att gct 1794

Cys Thr Ile Ala

425

cat gca ctc gag aag acg aaa tac ccg gat tca gac att aac tgg aaa 1842

His Ala Leu Glu Lys Thr Lys Tyr Pro Asp Ser Asp Ile Asn Trp Lys

430 435 440

cag ctt gag gat aag tat cac ttc tcc tgt cag ttt act gct gat ctt 1890

1 0 Gln Leu Glu Asp Lys Tyr His Phe Ser Cys Gln Phe Thr Ala Asp Leu 445 450 455

att gct atg aac cat act gat ttt ate ate acc age acc ttc caa gag 1938

Ile Ala Met Asn His Thr Asp Phe Ile Ile Thr Ser Thr Phe Gln Glu

460 465 470

att gct gga ag gtaatctatc tcccacttta ctacatttgg ttcccttgta 1989

Ile Ala Gly Ser 475

ggg ctc tgc cgc gtt gtt gat ggg ate gat gtt ttt gat ccc aaa ttc 2146

Gly Leu Cys Arg Val Val Asp Gly Ile Asp Val Phe Asp Pro Lys Phe 495 500 505 510

aat att gtc tcc cct ggt gct gat atg age ata tac ttc cct tac acg 2194

Asn Ile Val Ser Pro Gly Ala Asp Met Ser Ile Tyr Phe Pro Tyr Thr

515 520 525

gaa gag aag cgg agg ttg aag aag ttc cac ccg gag att gaa gag ctt 2242

Glu Glu Lys Arg Arg Leu Lys Lys Phe His Pro Glu Ile Glu Glu Leu 530 535 540

ctt tac age cct gtt gag aat aca gag cac tt gtgagatttt ggttctattt 2294 Leu Tyr Ser Pro Val Glu Asn Thr Glu His Leu

20

25 10

15

20

25

30

545 550

agg ttg gac cga gtg aag aac tta act ggg etc gta gag ttc tat gcc 2451

Arg Leu Asp Arg Val Lys Asn Leu Thr Gly Leu Val Glu Phe Tyr Ala

570 575 580

aag aac age cgg ctg agg gaa ctg gtt aac ttg gtt gta gta ggt gga 2499

Lys Asn Ser Arg Leu Arg Glu Leu Val Asn Leu Val Val Val Gly Gly 585 590 595 600

gat agg aga aag gaa tcc aag gac tta gaa gaa aag gct gaa atg aag 2547

Asp Arg Arg Lys Glu Ser Lys Asp Leu Glu Glu Lys Ala Glu Met Lys

605 610 615

aag atg tat gaa ctt ate gaa aaa tac aag ttg aat gga caa ttc aga 2595

Lys Met Tyr Glu Leu Ile Glu Lys Tyr Lys Leu Asn Gly Gln Phe Arg

620 625 630

tgg ata tcg tcc cag atg aac cga gtg aga aat ggt gaa ctc tat cgt 2643

Trp Ile Ser Ser Gln Met Asn Arg Val Arg Asn Gly Glu Leu Tyr Arg

635 640 645

tat att tgc gac acc aag gga gca ttc gtt cag cct cct ata tac gag 2691

Tyr Ile Cys Asp Thr Lys Gly Ala Phe Val Gln Pro Pro Ile Tyr Glu

650 655 660

gct ttt ggc ttg act gtt gtt gag gca atg acc tgt gga cta cca aca 2739

Ala Phe Gly Leu Thr Val Val Glu Ala Met Thr Cys Gly Leu Pro Thr 665 670 675 680

ttt gca aca tgt tac ggg ggc cct gct gag att ata gtt cac gga aaa 2787

Phe Ala Thr Cys Tyr Gly Gly Pro Ala Glu Ile Ile Val His Gly Lys

685 690 695

tcg ggg ttc aac ate gat cct tgt aac ggt gat ttg gct gcc gag acc 2835

Ser Gly Phe Asn Ile Asp Pro Cys Asn Gly Asp Leu Ala Ala Glu Thr 700 705 710 ctt gcc aat ttc ttc gag aag tgc aaa gcg gat cca tct tat tgg gat 2883

Leu Ala Asn Phe Phe Glu Lys Cys Lys Ala Asp Pro Ser Tyr Trp Asp

715 720 725

gag ate tcc cag gga ggg ttg aaa cgc ata cag gag aag tat aca tgg 2931

Glu Ile Ser Gln Gly Gly Leu Lys Arg Ile Gln Glu Lys Tyr Thr Trp 730 735 740

cag att tac tcc gag aag cta ttg act ctc acc gga gtt tat ggc ttt 2979

Gln Ile Tyr Ser Glu Lys Leu Leu Thr Leu Thr Gly Val Tyr Gly Phe 745 750 755 760

tcg aaa cat gta gct tac cag gag caa cgt ggg cgc aag cgt tac att 3027

Ser Lys His Val Ala Tyr Gln Glu Gln Arg Gly Arg Lys Arg Tyr Ile

765 770 775

gaa atg ttg cat gea tgg atg tat aac aat cgg gtaaaacaat catgtctatt 3 080 Glu Met Leu His Ala Trp Met Tyr Asn Asn Arg

780 785

Val Lys Thr Val Pro Leu Ala Val 790 795

gag taaagaaaaa gcaaaaggct gcttggaaac caaggaattt ccaagaatga 3245

Glu

<210> 15

<211> 26

<212> PRT

<213> Artificial <220>

<223> seqüência SusC de consenso C-terminal

<400> 15

Ala Tyr Gln Glu Gln Arg Gly Arg Lys Arg Tyr Ile Glu Met Leu His 10 15

Ala Trp Met Tyr Asn Asn Arg Val Lys Thr 25

<210> 16 <211> 24 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> seqüência SusC de consenso N-terminal <400> 16

His Lys Ser Gln Lys Leu Leu Ser Val Leu Asp Lys Glu Ala Gly Asn 10 15

Gln Ala Leu Asp Gly Met Val Val 20

<210> 17 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial <220>

<223> iniciador 1 de PCR específico para SusC <400> 17

cccttctgcc atttcaggaa cc <210> 18 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial <220>

<223> iniciador 1 de PCR específico para SusC <400> 18

aatgggacca aacccagagt tc

Claims

1. Proteína sacarose sintase isolada tendo uma seqüência de aminoácido compreendendo uma seqüência de aminoácido selecionada de: a. uma seqüência de aminoácido tendo pelo menos 80% de homologia de seqüência com a seqüência de aminoácido de acordo com qualquer reivindicação Nq 2, 3, 5, 7, 9, 11 ou 13; b. uma seqüência de aminoácido compreendendo a se- qüência de aminoácido de acordo com qualquer SEQ ID NO.: 2, 3, 5, 7, 9, 11 ou 13; c. uma seqüência de aminoácido localizada na parte ami- no-terminal da dita proteína, a dita seqüência de aminoácido compreenden- do pelo menos cerca de 60% de identidade de seqüência com a seqüência de aminoácido da SEQ ID Nq 16; ou d. uma seqüência de aminoácido localizada na parte car- bóxi-terminal da dita proteína, a dita seqüência de aminoácido compreen- dendo pelo menos cerca de 60% de identidade de seqüência com a seqüên- cia de aminoácido da SEQ ID N9 15.

2. Proteína sacarose sintase isolada de acordo com a reivindi- cação 1, em que a dita proteína compreende uma seqüência N-terminal hi- drofóbica.

3. Proteína sacarose sintase isolada de acordo com a reivindi- cação 1 ou reivindicação 2, em que a dita proteína compreende ainda qual- quer uma das seqüências de aminoácido que seguem: a. a seqüência de aminoácido da SEQ ID N-:3 do aminoá- cido 383 ao aminoácido 394 b. a seqüência de aminoácido da SEQ ID NQ:3 do aminoá- cido 270 ao aminoácido 329 c. a seqüência de aminoácido da SEQ ID N9:3 do aminoá- cido 549 ao aminoácido 737 d. a seqüência de aminoácido da SEQ ID N-:3 do aminoá- cido 1 ao aminoácido 545; ou e. a seqüência de aminoácido da SEQ ID NQ:3 do aminoá- cido 18 ao aminoácido 794.

4. Anticorpo reconhecendo a proteína isolada de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3.

5. Molécula ou ácido nucléico de DNA isolado codificando a pro- teína sacarose sintase como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 3.

6. Molécula ou ácido nucléico de DNA isolado de acordo com a reivindicação 5 compreendendo a seqüência de nucleotídeo de qualquer SEQ ID NO.:1, 4, 6, 8, 10, 12 ou 14.

7. Cassete de expressão compreendendo as moléculas de DNA operavelmente ligado que seguem: a. um promotor expressável em planta b. um DNA codificando uma sacarose sintase de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3 ou um DNA isolado de acordo com a reivindicação 6; e opcionalmente c. uma região de terminação de transcrição e poliadenila- ção.

8. Cassete de expressão de acordo com a reivindicação 7, em que o promotor expressável em planta controla transcrição de preferência em células de fibra de uma planta produtora de fibra.

9. Cassete de expressão compreendendo as moléculas de DNA operavelmente ligado que seguem: a. um promotor expressável em planta b. um DNA que quando transcrito resulta em uma molécula de RNA a dita molécula de RNA compreendendo uma seqüência de nucleo- tídeo selecionada de: i.uma seqüência de nucleotídeo de pelo menos 19 nucleotídeos consecutivos tendo pelo menos cerca de 94% de identidade de seqüência com a seqüência de nucleotídeo de um gene codificando isoforma C de sa- carose sintase endógena ou o complemento da dita seqüência de nucleotí- deo de um gene codificando isoforma C de sacarose sintase endógena; ii. uma seqüência de nucleotídeo de pelo menos 19 nu- cleotídeos consecutivos tendo pelo menos cerca de 94% de identidade de seqüência com uma seqüência de nucleotídeo de acordo com a reivindica- ção 5 ou reivindicação 6; e opcionalmente iii. uma região de terminação de transcrição e poliadenila- ção.

10. Cassete de expressão compreendendo as moléculas de DNA operavelmente ligado que seguem: a. um promotor expressável de planta, de preferência um promotor expressável em planta que controla a transcrição de preferência nas células de fibra; b. um DNA, que quando transcrito dá uma molécula de RNA de filamento duplo capaz de redução da expressão de um gene de SusC endógeno para a planta produtora de fibra, e a molécula de RNA com- preendendo primeira e segunda regiões de RNA em que i.a primeira região de RNA compreende uma seqüência de ácido nucléico de pelo menos 19 nucleotídeos consecutivos tendo pelo menos cerca de 94% de identidade de seqüência para a seqüência de nucleotídeo de um gene de SusC endógeno ou a seqüência de nucleotídeo de acordo com a reivindicação 5 ou reivindicação 6; ii. a segunda região de RNA compreendendo uma seqüên- cia de nucleotídeo complementar a pelo menos 19 nucleotídeos consecuti- vos da primeira região de RNA; iii. as primeiras e segunda regiões de RNA são capazes de emparelhamento de base para formarem uma molécula de RNA de filamento duplo entre pelo menos os 19 nucleotídeos consecutivos das primeira e se- gunda regiões; e c. uma região de extremidade 3' compreendendo sinais de terminação de transcrição e poliadenilação funcionando em células da plan- ta.

11. Cassete de expressão de acordo com a reivindicação 9 ou reivindicação 10, em que o promotor expressável em planta controla a trans- crição de preferência em células de fibra de uma planta produtora de fibra.

12. Cassete de expressão compreendendo as regiões de DNA operavelmente ligado que seguem: a. um promotor expressável de planta; b. uma região de DNA que quando da introdução e trans- crição em uma célula de planta é processada em miRNA, com o que o miR- NA é capaz de reconhecer e guiar a clivagem do mRNA de um gene codifi- cando SusC endógeno da planta; e c. opcionalmente, uma região de DNA 3' envolvida em ter- minação de transcrição e poliadenilação.

13. Cassete de expressão de acordo com a reivindicação 12, em que a dita região de DNA compreende uma seqüência de nucleotídeo que é essencialmente complementar a uma seqüência de nucleotídeo de pelo me- nos 21 nucleotídeos consecutivos de um gene de codificação de SusC1 tal como um gene de SusC compreendendo a seqüência de nucleotídeo de qualquer SEQ ID Ne:1, 4, 6, 8, 10, 12 ou 14, contanto que uma ou mais das faltas de combinação sejam permitidas: b. Uma falta de combinação entre o nucleotídeo na extremidade 5' do miRNA e a seqüência de nucleotídeo correspondente na molécula de RNA; c. Uma falta de combinação entre qualquer um dos nucleotídeos na posição 1 até a posição 9 do miRNA e a seqüência de nucleotídeo cor- respondente na molécula de RNA; ou d. Três faltas de combinação entre qualquer um dos nucleotí- deos na posição 12 até a posição 21 do miRNA e a seqüência de nucleotí- deo correspondente na molécula de RNA contanto que não haja mais do que duas faltas de combinação consecutivas.

14. Célula de planta compreendendo um promotor expressável em planta heterólogo operavelmente ligado a uma molécula de DNA sele- cionada das moléculas de DNA que seguem: a. um DNA codificando uma sacarose sintase de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3; b. um DNA de acordo com a reivindicação 6; c. um DNA que quando transcrito resulta em uma molécula de RNA a dita molécula de RNA compreendendo uma seqüência de nucleo- tídeo de pelo menos 19 nucleotídeos consecutivos tendo pelo menos cerca de 94% de identidade de seqüência com a seqüência de nucleotídeo de um gene codificando a isoforma C de sacarose sintase endógena ou o comple- mento da dita seqüência de nucleotídeo de um gene codificando uma iso- forma C de sacarose sintase endógena; d. um DNA que quando transcrito resulta em uma molécula de RNA a dita molécula de RNA compreendendo uma seqüência de nucleo- tídeo uma seqüência de nucleotídeo de pelo menos 19 nucleotídeos conse- cutivos tendo pelo menos cerca de 94% de identidade de seqüência com uma seqüência de nucleotídeo de acordo com a reivindicação 5 ou reivindi- cação 6; e. um DNA, que quando transcrito dá uma molécula de RNA de filamento duplo capaz de reduzir a expressão de um gene de SusC endógeno para a planta produtora de fibra, e a molécula de RNA compreen- dendo primeira e segunda regiões de RNA em que i. a primeira região de RNA compreende uma seqüência de nucleotídeo de pelo menos 19 nucleotídeos consecutivos tendo pelo me- nos cerca de 94% de identidade de seqüência com a seqüência de nucleotí- deo de um gene de SusC endógeno ou a seqüência de nucleotídeo de acor- do com a reivindicação 5 ou reivindicação 6; ii. a segunda região de RNA compreende uma seqüência de nucleotídeo complementar a pelo menos 19 nucleotídeos consecutivos da primeira região de RNA; e iii. as primeira e segunda regiões de RNA são capazes de emparelhamento de base para formarem uma molécula de RNA de filamento duplo entre pelo menos os 19 nucleotídeos consecutivos das primeira e se- gunda regiões; f.uma DNA que quando da transcrição em uma célula de planta é processado em um miRNA, com o que o miRNA é capaz de reconhecer e guiar a clivagem do mRNA de um gene codificando SusC endógeno da plan-

15. Célula de planta de acordo com a reivindicação 14, em que a dita molécula de DNA operavelmente ligado ao dito promotor expressável em planta é estavelmente integrada no genoma, de preferência o genoma nuclear da dita célula de planta.

16. Célula de planta de acordo com a reivindicação 14 ou reivin- dicação 15, em que a dita célula é de uma planta produtora de fibra.

17. Célula de planta de acordo com a reivindicação 16, em que a dita célula é de algodão.

18. Planta compreendendo a célula de planta como definida em qualquer uma das reivindicações 14 a 17 ou consistindo essencialmente em células de planta como definida em qualquer uma das reivindicações 14 a 17.

19. Planta de acordo com a reivindicação 18, a qual é uma plan- ta produtora de fibra.

20. Planta de acordo com a reivindicação 18, a qual é uma plan- ta de algodão.

21. Semente ou planta de progênie da planta como definida em qualquer uma das reivindicações 18 a 20 compreendendo uma célula de planta como definida na reivindicação 14.

22. Fibras da planta de acordo com a reivindicação 20 ou 21.

23. Método para modificação das características de fibra de uma planta produtora de fibra, o dito método compreendendo modificação do ní- vel funcional de uma isoforma C de sacarose sintase ou uma sacarose sin- tase com características similares em células ou paredes de célula ou fluido apoplástico da dita planta.

24. Método de acordo com a reivindicação 23, em que o nível funcional de uma sacarose sintase isoforma C ou sacarose sintase com ca- racterísticas similares é aumentado.

25. Método de acordo com a reivindicação 24, em que o nível funcional de uma sacarose sintase isoforma C é aumentado através da pro- visão das plantas com um cassete de expressão como definido na reivindi- cação 7 ou reivindicação 8.

26. Método de acordo com a reivindicação 24, em que o nível funcional de uma sacarose sintase similar à sacarose sintase isoforma C é aumentado através da provisão das plantas com um cassete de expressão compreendendo um promotor expressável em planta operavelmente ligado a uma região de DNA codificando uma sacarose sintase tendo uma região N- terminal hidrofóbica.

27. Método de acordo com a reivindicação 23, em que o nível funcional de uma sacarose sintase isoforma C ou sacarose sintase com ca- racterísticas similares é diminuído.

28. Método de acordo com a reivindicação 27, em que o nível funcional de uma sacarose sintase isoforma C é diminuído através da provi- são das plantas com um cassete de expressão como definido em qualquer uma das reivindicações 9 a 13.

29. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 23 a 28, em que uma das características de fibra que seguem foi modificada: resistência, comprimento, finura da fibra, razão de maturidade da fibra, teor de fibra imatura, uniformidade da fibra ou "micronaire".

30. Uso de uma proteína como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 3 para modificar as características de uma fibra em uma planta produtora de fibra.

31. Uso de um ácido nucléico como definido na reivindicação 5 ou reivindicação 6 para modificar as características de uma fibra em uma planta produtora de fibra.

32. Fibras obtidas através do método como definido em qualquer uma das reivindicações 23 a 29.

33. Tecido ou fio feito das fibras como definida na reivindicação 22 ou reivindicação 32.

34. Método para aumento da concentração de UDP-glicose e frutose no apoplasto de uma célula de planta compreendendo provisão da dita célula de planta com um cassete de expressão como definido na reivin- dicação 7 ou 8.