BRPI0715506A2 - Novas moléculas pequenas inibidoras de mdm2 e usos das mesmas - Google Patents

Description

“MOLÉCULAS PEQUENAS INIBIDORAS DE MDM2 E USOS DAS MESMAS” O presente pedido reivindica a prioridade para o Pedido de Patente Provisional Americano número de série 60/841.150, depositada em 30/08/2006, o qual é incorporado aqui por referência em sua totalidade.

FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO

Campo da invenção

Esta invenção está no campo da química medicinal. Em particular, a invenção relaciona-se a moléculas pequenas que funcionam como antagonistas da interação entre p53 e MDM2 e seu uso terapêutico para o tratamento do câncer e de outras doenças.

Técnica relacionada

O fenótipo celular de câncer agressivo é o resultado de uma variedade de alterações genéticas e epigenéticas que conduzem à desregulação das vias de sinalização intracelular (Ponder, Nature 411:336 (2001)). Em comum para todas as células cancerosas, entretanto, é sua falha em executar um programa apoptótico, e falta de apoptose adequada 15 devido aos defeitos na maquinaria de apoptose normal é uma marca de câncer (Lowe et al., Carcinogenesis 21:485 (2000)). A inabilidade das células cancerosas em executar um programa apoptótico devido aos defeitos na maquinaria apoptótica normal é, assim, freqüentemente associada com um aumento na resistência à quimioterapia, à radiação, ou à apoptose induzida por imunoterapia. A resistência primária ou adquirida do câncer humano de ori20 gens diferentes aos protocolos atuais de tratamento devido aos defeitos de apoptose é o principal problema na terapia atual do câncer (Lowe et al., Carcinogenesis 21:485 (2000); Nicholson, Nature 407:810 (2000)). Conseqüentemente, os esforços atuais e futuros com respeito ao projeto e ao desenvolvimento de novas terapias anti-câncer específicas a alvos moleculares para melhorar a sobrevivência e a qualidade de vida dos pacientes com câncer 25 devem incluir estratégias que especificamente tenham como alvo a resistência da célula cancerosa à apoptose. Nesse sentido, tendo como alvo os reguladores negativos cruciais que desempenham um papel central em inibir diretamente a apoptose em células cancerosas representa uma estratégia terapêutica altamente prometedora para o desenho de novas drogas anti-câncers.

O supressor do tumor p53 desempenha um papel central no controle da progressão

do ciclo celular e apoptose (Vogelstein et al., Nature 408:307 (2000)). É um alvo terapêutico atrativo para o desenho de droga anti-câncer porque sua atividade supressora de tumor pode ser estimulada para erradicar células tumorais (Vogelstein et al., Nature 408:307 (2000); Chene, Nat. Rev. Cancer 3:102 (2003)). Uma nova abordagem para estimular a atividade de 35 p53 é através da inibição de sua interação com a proteína MDM2 usando moléculas pequenas inibidoras não-peptídeo (Chene, Nat. Rev. Cancer 3:102 (2003); Vassilev et al., Science 303:844 (2004)). MDM2 e p53 são partes de uma alça de realimentação auto-reguladora (Wu et al., Genes Dev. 7:1126 (1993)). MDM2 é ativado transcripcionalmente por p53 e MDM2, por sua vez, inibe a atividade de p53 pelo menos por três mecanismos (Wu et al., Genes Dev. 7:1126 (1993). Primeiro, a proteína MDM2 se liga diretamente ao domínio de 5 transativação do p53 e desse modo inibe a transativação mediada por p53. Segundo, a proteína MDM2 contém uma seqüência sinal de exportação nuclear, e em cima da ligação a p53, induz a exportação nuclear de p53, impedindo que p53 se ligue aos DNAs alvos. Terceiro, a proteína MDM2 é uma E3 ubiquitina Iigase e, em cima da ligação a p53, é capaz de promover a degradação de p53. Portanto, funcionando como um inibidor celular endógeno 10 potente da atividade de p53, MDM2 inibe eficazmente a apoptose mediada por p53, a interrupção do ciclo celular e reparo do DNA. Conseqüentemente, moléculas pequenas inibidoras que se ligam a MDM2 e bloqueiam a interação entre MDM2 e p53 podem promover a atividade de p53 nas células com um p53 funcional e estimular efeitos celulares mediados por p53 tais como interrupção do ciclo celular, apoptose, ou reparo do DNA (Chene, Nat.

Rev. Cancer 3:102 (2003); Vassilev et al., Science 303:844 (2004)).

Embora inibidores de alta afinidade baseados em peptídeo tenham sido projetados com sucesso no passado (Garcia-Echeverria et al., Med. Chem 43:3205 (2000)), estes inibidores não são moléculas do tipo droga por causa de suas permeabilidade celular e biodisponibilidade in vivo pobres. Apesar dos esforços intensivos pela indústria farmacêutica, es20 tratégias de seleção de alto rendimento tiveram sucesso muito limitado na identificação de moléculas pequenas inibidoras não-peptídeo potentes. Conseqüentemente, há uma necessidade por moléculas pequenas inibidoras não-peptídeo, do tipo droga, da interação p53- MDM2.

O desenho das moléculas pequenas inibidoras não-peptídeo que têm como alvo a 25 interação p53-MDM2 está atualmente sendo perseguida como uma estratégia atrativa para o desenho de droga anti-câncer (Chene, Nat. Rev. Cancer 3:102 (2003); Vassilev et al., Science 303:844 (2004)). A base estrutural desta interação foi estabelecida por cristalografia de raio X (Kussie et al., Science 274:948 (1996)). A estrutura de cristal mostra que a interação entre p53 e MDM2 é primariamente mediada por três resíduos hidrofóbicos (Phel9, Trp23 e 30 Leu26) a partir de p53 e por uma fenda hidrofóbica pequena, profunda em MDM2. Esta fenda hidrofóbica é um local ideal para projetar moléculas pequenas inibidoras que podem interromper a interação p53-MDM2 (Chene, Nat. Rev. Cancer 3:102 (2003)).

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

É geralmente aceito que a inabilidade das células cancerosas ou de suas células de apoio de se submeterem à apoptose em resposta a lesões genéticas ou à exposição a indutores de apoptose (tais como agentes anti-câncer e radiação) é um fator principal no início e na progressão do câncer. A indução da apoptose nas células cancerosas ou em suas céluIas de apoio (por exemplo, células neovasculares na vasculatura tumoral) é considerado um mecanismo de ação universal para virtualmente todas as drogas terapêuticas de câncer efetivas ou terapias de radiação no mercado ou na prática hoje. Uma razão para a inabilidade de uma célula submeter-se à apoptose é uma diminuição na atividade supressora de tumor 5 do p53, que é em muitos casos devido às ações inibitórias de MDM2 em p53 nas células tumorais que contêm p53 funcional. A inibição da atividade de p53 resulta em alterações nas vias de apoptose assim como no regulamento do ciclo celular.

A presente invenção contempla essa exposição dos animais que sofrem de câncer a quantidades terapêuticamente eficazes de drogas (por exemplo, moléculas pequenas) que aumentam as funções de p53 e as proteínas relacionadas a p53 (por exemplo, p63, p73) inibindo a interação entre p53 ou proteínas relacionadas a p53 e MDM2 ou proteínas relacionadas a MDM2 (por exemplo, MDMX) irão inibir o crescimento das células cancerosas ou das células de apoio imediatamente e/ou irão tornar tais células como uma população mais suscetíveis à atividade de indução de morte celular de drogas terapêuticas de câncer ou de terapias de radiação. Em particular, os inibidores da invenção podem prolongar a meia-vida de p53 interferindo com a interação p53-MDM2 que iria normalmente promover a degradação de p53. A presente invenção contempla que os inibidores da interação entre p53 ou proteínas relacionadas a p53 e MDM2 e proteínas relacionadas a MDM2 satisfazem uma necessidade não alcançada para o tratamento de tipos múltiplos de câncer, ou quando administrada como monoterapia para induzir a inibição do crescimento da célula, apoptose e/ou interrupção do ciclo celular nas células cancerosas, ou quando administrado em um relacionamento temporal com agentes adicionais, tais como outras drogas de indução de morte celular ou drogas terapêuticas de câncer de interrupção do ciclo celular ou terapias de radiação (terapias da combinação), de forma a tornar uma proporção maior das células cancerosas ou das células de suporte suscetíveis a executar o programa de apoptose comparado com a proporção correspondente de células em um animal tratado somente com a droga terapêutica do câncer ou terapia de radiação sozinho.

Em determinadas modalidades da invenção, o tratamento da combinação dos animais com uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto da presente invenção e 30 um curso de um agente anti-câncer ou radiação produzem uma resposta maior do tumor e um benefício clínico em tais animais comparados àqueles tratados com o composto ou com as drogas anti-câncer/radiação sozinho. Posto de outra maneira, porque os compostos irão abaixar o princípio apoptótico de todas as células, a proporção de células que executarão com sucesso o programa de apoptose em resposta, a atividade indutora de apoptose de 35 drogas anti-câncer/radiação é aumentada. Alternativamente, os compostos da presente invenção serão usados para permitir a administração de uma dose de um agente anti-câncer e/ou radiação mais baixa, e conseqüentemente menos tóxica e de mais tolerável, para produzir a mesma resposta do tumor/benefício clínico que a dose convencional do agente anticâncer /radiação sozinho. Uma vez que as doses para todas as drogas anti-câncer aprovadas e tratamentos de radiação são conhecidos, a presente invenção contempla as várias combinações delas com os presentes compostos. Também, uma vez que os compostos da 5 presente invenção podem atuar, pelo menos em parte, estimulando as atividades próapoptóticas e/ou de inibição do ciclo celular de p53 e de proteínas relacionadas a p53, a exposição das células cancerosas e das células de apoio às quantidades terapêuticamente eficazes dos compostos deve temporalmente ser ligada para coincidir com as tentativas das células de executar o programa de apoptose em resposta ao agente anti-câncer ou à terapia 10 de radiação. Assim, em algumas modalidades, administrando as composições da presente invenção em relação a determinados relacionamentos temporais, fornece especialmente práticas terapêuticas eficazes.

Em outras modalidades da invenção, os inibidores da interação entre p53 ou proteínas relacionadas a p53 e MDM2 e proteínas relacionadas a MDM2 podem proteger células 15 normais (por exemplo, não hiperproliferativas) dos efeitos tóxicos de determinados agentes quimioterapêuticos e da radiação, possivelmente através da habilidade dos inibidores de induzir a interrupção do ciclo celular. Em particular, os inibidores da invenção podem causar a interrupção do ciclo celular nas células que compreendem o p53 do tipo selvagem enquanto não possui nenhum efeito nas células cancerosas que compreendem p53 mutante ou 20 deletado. Este efeito protetor diferencial pode permitir um tratamento mais eficaz do câncer permitindo o uso de doses mais elevadas ou tratamentos mais longos de agentes quimioterapêuticos ou tratamentos sem aumentar os efeitos colaterais tóxicos de tal tratamento.

A presente invenção se refere aos compostos que são úteis para inibir a interação entre p53 ou proteínas relacionadas a p53 e MDM2 ou proteínas relacionadas a MDM2 e aumentar a sensibilidade das células aos indutores de apoptose e/ou interrupção do ciclo celular. Em uma modalidade particular, os compostos têm a Fórmula I:

I

R8

I

ou um sal ou um pró-fármaco farmaceuticamente aceitável do mesmo, onde:

X é CH, O, N, ou S, onde R8 é ausente se X é O ou S;

Y é O, S, ou NR';

Ri, R2, R3, R4, R5, Re, e R7 são independente H ou alquila opcionalmente substituída,

cicloalquila, alquenila, cicloalquenila, alquinila, arila, heterocíclico, CO2R', OCOR', CONR1R", cicloalquila, alquenila, cicloalquenila, alquinila, arila, heterocíclico, CO2R', OCOR', CONR'R", NR"COR', NR1SO2R", SO2NR1R", (C=NR1)NRmR'", ou NR1R11; ou

R7 forma um arila, cicloalquila, ou grupo heterocíclico com um de R5 ou R6;

R8 é H ou alquil, cicloalquila, alquenila, cicloalquenila, alquinila, arila, heterocíclico, CO2R1, OCOR1, CONR1R", SO2NR1R", ou (C=NRl)NRllR1" opcionalmente substituídos;

R9 representa um grupo 6-cloro e um 5-flúor; e

cada R1, R" e R"1 é independente H ou alquil, cicloalquila, alquenila, cicloalquenila, alquinila, arila, ou heterocíclico opcionalmente substituído; ou

R1 e R", ou R" e R1", formam um anel;

onde um de R3 e de R4 é CONRR1, e um de R e R1 é um grupo cicloalquila-alquil ou

monociclo-heterocicloalquila opcionalmente substituída ou grupo dihidroxialquil amino não contendo um grupo de hidroxil na posição 3 do grupo alquil.

A invenção se relaciona aos compostos representados pela Fórmula I, os quais são inibidores da interação entre p53 ou proteínas relacionadas a p53 e MDM2 ou proteínas reIacionadas a MDM2. A invenção se relaciona ao uso dos compostos da invenção para induzir a interrupção do ciclo celular e/ou apoptose nas células que contêm p53 ou proteínas relacionadas a p53 funcionais. A invenção também se relaciona ao uso dos compostos da invenção para sensibilizar células a agentes adicionais, tais como indutores de apoptose e/ou da interrupção do ciclo celular, e quimioproteção de células normais através da indução da interrupção do ciclo celular antes do tratamento com agentes quimioterapêuticos. Em uma modalidade, a invenção se relaciona aos métodos para tornar uma célula normal resistente aos agentes quimioterapêuticos ou aos tratamentos, compreendendo o contato da célula com um composto da invenção. Em uma modalidade, a invenção se relaciona aos métodos para proteger células normais em um animal com uma doença hiperproliferativa dos efeitos colaterais tóxicos de agentes quimioterapêuticos ou de tratamentos, compreendendo administrar ao referido animal um composto da invenção. Em uma modalidade particular, a invenção é direcionada ao tratamento, à melhora, ou à prevenção de desordens, efeitos colaterais, ou circunstâncias causadas pela administração de agentes quimioterapêuticos às células não cancerosas normais administrando a um animal passando por quimioterapia um composto da presente invenção. Exemplos de tais desordens e condições causadas pela quimioterapia incluem, sem limitação, mucosite, estomatite, xerostomia, desordens gastrintestinais, e calvície.

Os compostos da invenção são úteis para o tratamento, a melhora, ou a prevenção das desordens, tais como aquelas responsivas à indução da morte celular apoptótica, por exemplo, desordens caracterizadas pela desregulação da apoptose, incluindo doenças hiperproliferativas tais como o câncer. Em determinadas modalidades, os compostos podem ser usados para tratar, melhorar, ou prevenir o câncer que é caracterizado pela resistência às terapias do câncer (por exemplo, aquelas células cancerosas que são quimioresistentes, resistentes à radiação, resistentes a hormônio, e semelhante). Em outras modalidades, os compostos podem ser usados para tratar doenças hiperproliferativas caracterizadas pela expressão de p53 ou de proteínas relacionadas a p53 funcionais. Em outras modalidades, a invenção se relaciona ao uso dos compostos da invenção para proteger células normais (por exemplo, não hiperproliferativas) dos efeitos colaterais tóxicos de agentes quimioterapêuticos e de tratamentos pela indução da interrupção do ciclo celular naquelas células.

A presente invenção fornece composições farmacêuticas que compreendem um composto da Fórmula I em uma quantidade terapeuticamente eficaz para induzir a apoptose nas células ou para sensibilizar células aos indutores de apoptose.

A invenção ainda fornece kits que compreendem um composto de Fórmula I e instruções para administrar o composto a um animal. Os kits podem opcionalmente conter outros agentes terapêuticos, por exemplo, agentes anti-câncer ou agentes moduladores de apoptose.

A invenção também fornece métodos para fazer os compostos da Fórmula I.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

A presente invenção se relaciona aos compostos representados pela Fórmula I, os quais funcionam como inibidores da interação entre p53 ou proteínas relacionada a p53 e MDM2 ou proteínas relacionadas a MDM2. Inibindo o efeito negativo de MDM2 ou de proteínas relacionadas a MDM2 em p53 ou em proteínas relacionadas a p53, estes compostos sensibilizam as células aos indutores de apoptose e/ou de interrupção do ciclo celular e, em alguns casos, as elas mesmas induzem a apoptose e/ou interrupção do ciclo celular. Conseqüentemente, a invenção se relaciona a métodos para sensibilizar células a indutores de apoptose e/ou de interrupção do ciclo celular e a métodos para induzir a apoptose e/ou a interrupção do ciclo celular nas células, compreendendo colocar as células em contato com um composto de Fórmula I sozinho ou em combinação com agentes adicionais, por exemplo, um indutor de apoptose ou de um interruptor do ciclo celular. A invenção ainda se relaciona aos métodos para tratar, melhorar, ou prevenir desordens em um animal, tal como aquelas que são responsivas à indução de apoptose, compreendendo administrar ao animal um composto de Fórmula I e agentes adicionais, por exemplo, um indutor de apoptose. Tais desordens incluem aquelas caracterizadas pela desregulação da apoptose e aquelas caracterizadas pela proliferação de células expressando p53 ou proteínas relacionadas a p53 funcionais. Em outras modalidades, a invenção se relaciona a métodos para proteger células normais (por exemplo, não hiperproliferativas) em um animal dos efeitos colaterais, tóxicos de agentes e tratamentos quimioterapêuticos compreendendo administrar ao animal um composto de Fórmula I.

Os termos "agente anti-câncer" e "droga anti-câncer", como usado aqui, se referem a quaisquer agentes terapêuticos (por exemplo, compostos quimioterapêuticos e/ou compostos terapêuticos moleculares), terapias antisentido, terapias de radiação, ou intervenções cirúrgicas, usadas no tratamento de doenças hiperproliferativas tais como o câncer (por exemplo, nos mamíferos).

O termo "pró-droga", como usado aqui, se refere a um derivado farmacologicamen

te inativo de uma molécula "droga" de origem que requer biotransformação (por exemplo, ou espontânea ou enzimática) dentro do sistema fisiológico alvo para liberar, ou para converter (por exemplo, enzimaticamente, fisiologicamente, mecanicamente, eletromagneticamente) a pró-droga na droga ativa. As pró-drogas são desenhadas superar os problemas associados com estabilidade, toxicidade, falta da especificidade, ou biodisponibilidade limitada. Pródrogas exemplares compreendem uma molécula da droga ativa própria e um grupo mascarante químico (por exemplo, um grupo que suprima reversívelmente a atividade da droga). Algumas pró-drogas são variações ou derivados dos compostos que têm grupos cliváveis sob condições metabólicas. Pró-drogas exemplares se tornam farmaceuticamente ativas in vivo ou in vitro quando se submetem à solvólise sob circunstâncias fisiológicas ou se submetem à degradação enzimática ou outra transformação bioquímica (por exemplo, fosforilação, hidrogenação, deshidrogenação, glicosilação). As pró-drogas geralmente oferecem vantagens de solubilidade, compatibilidade tissular, ou liberação atrasada no organismo mamífero. (Veja, por exemplo, Bundgard, Design of Prodrugs, pp. 7-9, 21-24, Elsevier, Amsterdam (1985); e Silverman1 The Organic Chemistry of Drug Design and Drug Action, pp. 352-401, Academic Press, San Diego, CA (1992)). Pró-drogas comuns incluem derivados de ácidos tais como os ésteres preparados pela reação dos ácidos de origem com um álcool adequado (por exemplo, um alcanol inferior), amidas prepararadas pela reação do composto ácido de origem com uma amina, ou os grupos básicos reagem para formar um derivado da base acilado (por exemplo, uma alquilamida inferior).

O termo "sal farmaceuticamente aceitável", como usado aqui, se refere a qualquer sal (por exemplo, obtido pela reação com um ácido ou uma base) de um composto da presente invenção que é tolerada fisiologicamente no animal alvo (por exemplo, um mamífero). Os sais dos compostos da presente invenção podem ser derivados de ácidos e bases inor30 gânicos ou orgânicos. Exemplos de ácidos incluem, mas não estão limitados a, ácido clorídrico, bromídrico, sulfúrico, nítrico, perclórico, fumárico, maléico, fosfórico, glicólico, lático, salicílico, succínicp, tolueno-p-sulfônico, tartárico, acético, cítrico, metanosulfônico, etanosulfônico, fórmico, benzóico, malônico, sulfônico, naftaleno-2-sulfônico, benzenosulfônico, e semelhantes. Outros ácidos, tais como oxálico, enquanto não eles mesmos farmaceutíca35 mente aceitáveis, podem ser empregados na preparação de sais úteis como intermediários na obtenção dos compostos da invenção e de seus sais de adição ácida farmaceuticamente aceitáveis. Exemplos de bases incluem, mas não estão limitados a, hidróxidos de metais alcalinos (por exemplo, sódio), hidróxidos de metais alcalino-terrosos (por exemplo, magnésio), amônia, e compostos de fórmula NW4+, onde W é C1-4 alquil, e semelhantes.

Exemplos de sais incluem, mas não são limitados a: acetato, adipato, alginato, aspartato, benzoato, benzenosulfonato, bissulfato, butirato, citrato, canforato, canforsulfonato, ciclopentanopropionato, digluconato, dodecilsulfato, etanosulfonato, fumarato, flucoheptanoato, glicerofosfato, hemisulfato, heptanoato, hexanoato, cloreto, brometo, iodeto, 2- hidroxietanosulfonato, lactato, maleato, mesilato, metanosulfonato, 2-naftalenosulfonato, nicotinato, oxalato, palmoato, pectinato, persulfato, fenilpropionato, picrato, pivalato, propionato, succinato, tartrato, tiocianato, tosilato, undecanoato, e semelhante. Outros exemplos de sais incluem ânions dos compostos da presente invenção combinados com um cátion adequado tal como Na+, NH4\ e NW4+ (onde W é um grupo C-m alquil), e semelhantes. Para uso terapêutico, os sais dos compostos da presente invenção são contemplados como sendo farmaceuticamente aceitáveis. Entretanto, sais de ácidos e bases que são nãofarmaceuticamente aceitáveis podem igualmente encontrar uso, por exemplo, na preparação ou na purificação de um composto farmaceuticamente aceitável.

O termo "quantidade terapeuticamente eficaz", como usado aqui, se refere àquela quantidade do agente terapêutico suficiente para conduzir à melhora de um ou mais sintomas de uma desordem, ou impedem o avanço de uma desordem, ou causam a regressão 20 da desordem. Por exemplo, no que diz respeito ao tratamento do câncer, em uma modalidade, uma quantidade terapeuticamente eficaz irá se referir à quantidade de um agente terapêutico que diminua a taxa de crescimento do tumor, diminua a massa do tumor, diminua o número de metástases, aumente o tempo para progressão do tumor, ou aumente o tempo de sobrevivência por pelo menos 5%, pelo menos 10%, pelo menos 15%, pelo menos 20%, 25 pelo menos 25%, pelo menos 30%, pelo menos 35%, pelo menos 40%, pelo menos 45%, pelo menos 50%, pelo menos 55%, pelo menos 60%, pelo menos 65%, pelo menos 70%, pelo menos 75%, pelo menos 80%, pelo menos 85%, pelo menos 90%, pelo menos 95%, ou pelo menos 100%.

Os termos "sensibilizar" e "sensibilização", como usado aqui, se referem a tornar, 30 através da administração de um primeiro agente (por exemplo, um composto de Fórmula I), um animal ou uma célula dentro de um animal mais suscetível, ou mais responsivo, aos efeitos biológicos (por exemplo, promoção ou atraso de um aspecto da função celular incluindo, mas não limitado a, divisão celular, crescimento celular, proliferação, invasão, angiogênese, neccose, ou apoptose) de um segundo agente. O efeito de sensibilização de um primeiro 35 agente em uma célula alvo pode ser medido como a diferença no efeito biológico pretendido (por exemplo, promoção ou atraso de um aspecto da função celular incluindo, mas não limitado a, crescimento celular, proliferação, invasão, angiogênese, ou apoptose) observado em cima da administração de um segundo agente com e sem a administração do primeiro agente. A resposta da célula sensibilizada pode ser aumentada por pelo menos 10%, pelo menos 20%, pelo menos 30%, pelo menos 40%, pelo menos 50%, pelo menos 60%, pelo menos 70%, pelo menos r 80%, pelo menos 90%, pelo menos 100%, pelo menos 150%, pelo menos 200%, pelo menos 350%, pelo menos 300%, pelo menos 350%, pelo menos 400%, pelo menos 450%, ou pelo menos 500% sobre a resposta na ausência do primeiro agente.

O termo "desregulação da apoptose", como usado aqui, se refere a qualquer aberração na habilidade (por exemplo, pré-disposição) de uma célula a se submeter à morte celular através da apoptose. A desregulação da apoptose é associada com ou induzida por uma variedade de circunstâncias, exemplos não-limitativos dos quais incluem, desordens auto-imunes (por exemplo, lúpus eritematoso sistêmico, artrite reumatóide, doença do transplante-versus-hospedeiro, miastenia grave, ou síndrome de Sjõgren), condições inflamatórias crônicas (por exemplo, psoríase, asma ou doença de Crohn), desordens hiperproliferativas (por exemplo, tumores, Iinfomas de célula B, ou Iinfomas de célula T), infecções virais (por exemplo, herpes, papiloma, ou HIV), e outras condições tais como osteoartrite e o aterosclerose. Deve-se anotar que quando a desregulação é induzida por ou associada com uma infecção viral, a infecção viral pode ou não pode ser detectável no momento que a desregulação ocorre ou é observada. Isto é, a desregulação induzida por vírus pode ocorrer mesmo após o desaparecimento dos sintomas da infecção viral.

O termo "p53 funcional", como usado aqui, se refere ao p53 do tipo selvagem expresso em níveis normais, elevados, ou baixos e p53 mutante que retenha pelo menos 5% da atividade do p53 do tipo selvagem, por exemplo, pelo menos 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, ou mais atividade do tipo selvagem.

O termo "proteína relacionada a p53", como usado aqui, se refere a proteínas que têm pelo menos 25% de homologia de seqüência com p53, que têm a atividade supressora de tumor, e que são inibidas pela interação com MDM2 ou proteínas relacionadas a MDM2. Exemplos de proteínas relacionadas a p53 incluem, mas não estão limitados a, p63 e p73.

O termo "proteína relacionada a MDM2", como usado aqui, se refere a proteínas que têm pelo menos 25% de homologia de seqüência com MDM2, e interagem com e inibem p53 ou proteínas relacionadas a p53. Exemplos de proteínas relacionadas a MDM2 incluem, mas não estão limitados a, MDMX e HDM2.

O termo "doença hiperproliferativa", como usado aqui, se refere a qualquer condição na qual uma população localizada de células proliferantes em um animal não estiver governada pelas limitações usuais do crescimento normal. Exemplos de desordens híperproliferativas incluem tumores, neoplasmas, Iinfomas e semelhantes. Um neoplasma é dito como sendo benigno se ele não se submete à invasão ou à metástase e maligno se faz qualquer uma destes. Uma célula "metastásica" significa que a célula pode invadir e destruir estruturas corporais vizinhas. Hiperplasia é uma forma de proliferação celular envolvendo um aumento no número de células em um tecido ou órgão sem alteração significativa na estrutura ou na função. Metaplasia é uma forma de crescimento celular controlado no qual um tipo de célula completamente diferenciada substitui para outro tipo de célula diferenciada.

O crescimento patológico de células linfóides ativadas geralmente resulta em uma desordem auto-imune ou em uma condição inflamatória crônica. Como usado aqui, o termo "desordem auto-imune", se refere a qualquer condição em que um organismo produz anticorpos ou células imunes que reconhecem as próprias moléculas, células ou tecidos do organismo. Exemplos não-limitativos de desordens auto-imunes incluem anemia hemolítica auto-imune, hepatite auto-imune, doença de Berger ou nefropatia de IgA, psilose celíaca, síndrome da fatiga crônica, doença de Crohn, dermatomiosite, fibromialgia, doença de enxerto versus hospedeiro, doença de Grave, tireoidite de Hashimoto, trombocitopenia idiopática púrpura, líquen plano, esclerose múltipla, miastenia grave, psoríase, febre reumática, artrite reumática, escleroderma, síndrome de Sjõgren, lúpus eritematoso sistêmico, diabetes do tipo 1, colite ulcerativa, vitiligo, e semelhantes.

O termo "doença neoplástica", como usado aqui, se refere a qualquer crescimento anormal de células sendo ou benignas (não cancerosas) ou malignas (cancerosa).

O termo "célula normal", como usado aqui, refere uma célula que não esteja se submetendo ao crescimento ou à divisão anormal. As células normais são não cancerosas e não fazem parte de nenhuma doença hiperproliferativa ou desordem.

O termo "agente antineoplástico", como usado aqui, se refere a qualquer composto que retarde a proliferação, o crescimento, ou a propagação de um neoplasma alvo (por exemplo, maligno).

Os termos "prevenir", "prevenindo", e "prevenção", como usados aqui, se referem a uma diminuição na ocorrência de células patológicas (por exemplo, células hiperproliferativas ou neoplásticas) em um animal. A prevenção pode ser completa, por exemplo, a ausência total de células patológicas em um indivíduo. A prevenção pode igualmente ser parcial, de tal forma que a ocorrência de células patológicas em um indivíduo é menos do que aquela que ocorreria sem a presente invenção.

O termo "agentes moduladores de apoptose", como usado aqui, se refere a agentes os quais estão envolvidos na modulação de apoptose (por exemplo, inibição, diminuição, aumento, promoção). Exemplos de agentes moduladores de apoptose incluem proteínas que compreendem um domínio de morte tal como, mas não limitado a, Fas/CD95, TRAMP, TNF RI, DRI, DR2, DR3, DR4, DR5, DR6, FADD, e RIP. Outros exemplos de agentes moduladores de apoptose incluem, mas não estão limitados a, TNFa1 Iigante Fas, anticorpos para Fas/CD95 e outros receptores da família TNF, TRAIL (igualmente conhecido como Ligante Apo2 ou Apo2L/TRAIL), anticorpos para TRAIL-RI ou TRAIL-R2, Bcl-2, p53, BAX1 BAD1 Akt, CAD1 PI3 quinase, PPI1 e proteínas da caspase. Agentes moduladores incluem amplamente os agonistas e os antagonistas de receptores da família TNF e Iigantes da família TNF. Os agentes moduladores podem ser solúveis ou limitados à membrana (por exemplo, Iigante ou receptor). Os agentes moduladores incluem aqueles os quais são indutores de apoptose, tais como TNF ou um Iigante relacionado a TNF, particularmente um Iigante TRAMP, um Iigante Fas/CD95, um Iigante TNFR-1, ou TRAIL.

Em um aspecto da invenção, os inibidores da interação entre p53 e MDM2 são compostos de Fórmula I:

ou um sal ou uma pró-droga farmaceuticamente aceitável do mesmo, onde:

X é CH, O, N, ou S, onde R8 é ausente se X é O ou S;

Y é O, S, ou NR';

R-ι, R2· R3. R4, R5, Re- e R7 são independente H ou alquil opcionalmente substituído, cicloalquil, alquenil, cicloalquenil, alquinil, aril, heterocíclico, CO2R', OCOR', CONR'R", NRmCOR', NR1SO2R", S02NR'R", (C=NRl)NRllR1", ou NR1R"; ou

R7 forma um aril, cicloalquil, ou grupo heterocíclico com um de R5 ou R6;

R8 é H ou alquil, cicloalquil, alquenil, cicloalquenil, alquinil, aril, heterocíclico, CO2R', OCOR', CONR1R", SO2NR1R", ou (C=NR1)NRmR1" opcionalmente substituídos;

R9 representa um grupo 6-cloro e um 5-flúor; e

cada R', R" e R"' é independente H ou alquil, cicloalquil, alquenil, cicloalquenil, alquinil, aril, ou heterocíclico opcionalmente substituído; ou

R' e R", ou R" e R1", formam um anel;

onde um de R3 e de R4 é CONRR', e um de R e R' é um grupo cicloalquil-alquil ou monociclo-heterocicloalquil opcionalmente substituído ou grupo dihidroxialquil amino não contendo um grupo de hidroxil na posição 3 do grupo alquil.

Em uma modalidade mais particular, um de R1 e R2 da Fórmula I é um aril substituído ou não substituído (por exemplo, fenil), heteroaril substituído ou não substituído, cicloalquil, alquil linear ou ramificado, amida ou éster.

Em uma outra modalidade, um de R5 e R6 é um grupo C3.18 alquil, por exemplo, propil, isopropil, sec-butil, ferí-butil, isopentil, ciclopentil, norbornil, ou adamantil, ou um gru

R8 po arila ou heteroarila de 5 ou 6 membros.

Em outra modalidade, os compostos de Fórmula I possuem uma estrutura estereoquímica conforme mostrado na Fórmula Il ou Fórmula III:

R8

Il

Hl

ou um sal ou um pró-fármaco farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em uma modalidade, os compostos da Fórmula I possuem a Fórmula IV:

IV

onde Ri-R9 e Y são como definidos acima.

Em outra modalidade, os compostos de Fórmula IV têm uma estrutura estereoquímica conforme mostrado na Fórmula V ou Fórmula VI:

10

V VI

ou um sal ou um pró-fármaco farmaceuticamente aceitável do mesmo.

Em uma modalidade, os compostos de Fórmula I possuem a Fórmula VII: Vll

onde R1-R9 são como definidos acima.

Em outra modalidade, os compostos da Fórmula Vll têm uma estrutura estereoquímica conforme mostrado na Fórmula Vlll ou Fórmula IX:

Vlll

IX

ou um sal ou um pró-fármaco farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em uma modalidade, os compostos de Fórmula I possuem a Fórmula X:

MO

10

onde: R1, R5, R7, e R9 são como definidos acima;

R10 é H; e

R11 é um grupo cicloalquila-alquil ou um monociclo-heterocicloalquila opcionalmente substituída ou um grupo dihidroxialquil amino não contendo um grupo hidroxil na posição 3 do grupo alquil;

ou R10 e R11 formam juntos um grupo monociclo-heterocicloalquila opcionalmente substituída.

Exemplos de grupos cicloalquila-alquil substituídos incluem C1^ alquil substituído por um grupo cicloalquila como descrito aqui abaixo o qual é ainda substituído por um ou mais grupos hidroxil. Exemplos de grupos heterocicloalquila incluem C1^ alquil substituído por um grupo monociclo-heterocicloalquila como descrito aqui abaixo.

Exemplos particulares de grupos cicloalquila-alquil incluem os grupos 2-(3- hidroxiciclopentil)etilamino, e 3-(3-hidroxiciclopentil)propilamino. Os respectivos grupos hidroxil podem ter as configurações ou R ou S.

Exemplos particulares de grupos heterocicloalquila substituídos incluem os grupos 2-(l-morfolinil)etilamino e 3-(l-morfolinil)propilamino.

Exemplos particulares de grupos dihidroxialquilamino incluem os grupos ReS 4,5- dihidroxipentilamino, e 4-hidróxi-3-(metilhidroxi)butilamino.

É esperado que quando um grupo hidroxil não está presente na posição 3 do grupo alquil, o composto possa exibir estabilidade melhorada durante sua preparação. Sem ser limitado a qualquer teoria particular, a estabilidade melhorada pode resultar a partir da ausência de um grupo 3-hidroxil nucleofílico o qual pode deslocar o grupo amino da amida 15 formando assim um anel de 6 membros contendo éster. Acredita-se que grupos dihidroxialquil não contendo um grupo 3-hidróxi não irão participar em tal reação e serão mais estáveisl e capazes de serem feitos em um rendimento mais elevado.

Em uma modalidade adicional, os compostos de Fórmula I possuem uma das Fórmulas XI-XXVI: ^9“·~ R,«

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onde R1, R5, R7, R9, R10, e R11 são como definidos acima.

Em uma outra modalidade, os compostos de Fórmula I possuem uma das Fórmulas XXVII e XXVIII:

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onde R1, R5, R7, R9, R10, e R11 são como definidos acima.

Em outra modalidade, os compostos de Fórmula I possuem a Fórmula XLVIII: onde:

Ri> R3, R4> Rõ e R9 são como definidos acima.

Em uma modalidade adicional, os compostos de Fórmula I possuem uma das Fórmulas XLIX-LX TV:

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Ri. R31 R4· R5 e R9 são como definidos acima.

modalidade mais adicional, os compostos de Fórmula I possuem a Fórmu

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onde:

Ri, R4, Rs, Rg, R10, e R11 são como definidos acima.

Em uma modalidade adicional, os compostos de Fórmula I possuem uma das Fórmulas LXVI e LXVII:

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onde: R1, R4, R5, R9, R10, e R11 são como definidos acima.

Modalidades particulares da presente invenção incluem, sem limitação, qualquer um dos seguintes compostos: Cf

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cialmente grupos metila, etila, propila, isopropila, t-butila, sec-butila, 3-pentila, adamantil, norbornil, e 3-hexila.

Grupos alquenila úteis incluem grupos C2.is alquila de cadeia linear ou ramificada, especialmente etenila, propenila, isopropenila, butenila, isobutenila, e hexenila.

Grupos alquinila úteis são grupos C2-I8 alquinila, especialmente grupos etinila, propinila, butinila, e 2-butinial.

Grupos cicloalquila úteis são C3.8 cicloalquila. Grupos cicloalquila típicos incluem ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclohexila e cicloheptila.

Grupos arila úteis incluem C6-M arila, especialmente grupos fenila, naftila, fenantre

nila, antracenila, indenila, azulenila, bifenila, bifenilenila, e fluorenila.

Grupos heteroarila úteis incluem tienil, benzo[b]tienil, nafto[2,3-b]tienil, tiantrenil, furil, piranil, isobenzofuranil, cromenil, xantenil, fenoxantenil, 2H-pirrolil, pirrolil, imidazolil, pirazolil, piridil, pirazinil, pirimidinil, piridazinil, indolizinil, isoindolil, 3H-indolil, indolil, indazolil, 15 purinil, 4H-quinolizinil, isoquinolil, quinolil, ftalzinil, naftiridinil, quinozalinil, cinolinil, pteridinil, carbazolil, β-carbolinil, fenantridinil, acridinil, perimidinil, fenantrolinil, fenazinil, isotiazolil, fenotiazinil, isoxazolil, furazanil, fenoxazinil, 1,4-dihidroquinoxalina-2,3-diona, 7-aminoisocumarina, pirido[l,2-a]pirimidin-4-ona, l,2-benzoisoxazol-3-il, benzimidazolil, 2-oxindolil, e 2- oxobenzimidazolil. Onde o grupo heteroarila contém um átomo de nitrogênio em um anel, tal átomo de nitrogênio pode ser sob a forma de um N-óxido, por exemplo, um N-óxido piridil, N-óxido pirazinil, N-óxido pirimidinil, e semelhantes.

Grupos heterocíclico úteis incluem grupos heterocíclicos monocíclicos tais como te

trahidrofuranil, piranil, piperidinil, piperizinil, pirrolidinil, imidazolidinil, imidazolinil, morfolinil, pirazolidinil, pirazolinil, e semelhantes. Grupos heterocíclicos multi-ciclo incluem grupos indolinil, isoindolinil, quinuclidinil, cromanil, isocromanil, tetronoil, tetrahidroisoquinolinil, assim como grupos heterocíclico fundidos com um anel heteroarila, por exemplo, grupos 5,6- dihidro-8H-[l,2,4]triazolo[4,3-A]pirazinil opcionalmente substituídos.

Substituents opcionais incluem um ou mais alquil; halo; haloalquil; cicloalquila; arila opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquil inferior, alcoxi inferior, metilenodioxi, halo, haloalquil, aminosulfonil, arila, ou heteroarila; ariloxi opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquil inferior, alcoxi inferior, metilenodioxi, halo, haloalquil, aminosulfonil,

arila, ou heteroarila; aralquil; heteroarila opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquil inferior, alcoxi inferior, metilenodioxi, halo, haloalquil, aminosulfonil, arila, ou heteroarila; heteroariloxi opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquil inferior, alcoxi inferior, metilenedioxi, halo, haloalquil, aminosulfonil, arila, ou heteroarila; alcoxi; alquiltio; arilatio; amida; amino; aminoalquil, alquilamino, aciloxi; arilaciloxi opcionalmente substituído com 20 um ou mais grupos alquil inferior, alcoxi inferior, metilenodioxi, halo, haloalquil, aminosulfonil, arila, ou heteroarila; difenilfosfiniloxi opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquil inferior, alcoxi inferior, metilenodioxi, halo, haloalquil, aminosulfonil, arila, ou heteroarila; heterociclo opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquil inferior, alcoxi inferior, metilenodioxi, halo, haloalquil, aminosulfonil, arila, heteroarila, sulfonil substituído com ami25 noácido, ou sulfonil substituído com derivado de aminoácido; heterocicloacil opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquil inferior, alcoxi inferior, metilenodioxi, halo, haloalquil, aminosulfonil, arila, heteroarila; heterocicloalcoxi opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquil inferior, alcoxi inferior, metilenodioxi, halo, haloalquil, aminosulfonil, arila, ou heteroarila; heterocicloalquila parcialmente insaturado opcionalmente substituído com um 30 ou mais grupos alquil inferior, alcoxi inferior, metilenodioxi, halo, haloalquil, aminosulfonil, arila, ou heteroarila; ou heterocicloalquiloxi parcialmente insaturado opcionalmente substituído com um ou mais grupos alquil inferior, alcoxi inferior, metilenodioxi, halo, haloalquil, aminosulfonil, arila, ou heteroarila.

Certos dos compostos da presente invenção podem existir como estereoisômeros incluindo isômeros ópticos. A invenção inclui todos os estereoisômeros, como preparações do estereoisômero puro individual e preparações enriquecidas de cada um, e ambas as misturas racêmicas de tais estereoisômeros assim como os enantiômeros individuais que podem ser separados de acordo com os métodos que são bem conhecidos àqueles habilitados na arte.

Os compostos e os processos da presente invenção serão melhor compreendidos em relação aos seguintes esquemas sintéticos que ilustram os métodos pelos quais os

compostos da invenção podem ser preparados. Os materiais de partida podem ser obtidos a partir de fontes comerciais ou preparados pelos métodos bem estabelecidos da literatura conhecidos àqueles habilitados ordinariamente na arte. Será prontamente aparente para um habilitado ordinariamente na arte que os compostos definidos acima podem ser sintetizados pela substituição dos reagentes e dos agentes adequados nas sínteses mostradas abaixo.

Os compostos que têm a estrutura geral da fórmula X são sintetizados usando uma

cicloadição 1,3-dipolar assimétrica como a etapa chave (Esquema 1).

Esquema 1.

6 X

Reagentes e ccondições: a) CH2CI2-CH3CN1 KF-AI2O3, microondas, ou metanol, refluxo de piperidina; b) peneiras moleculares de 4Â, tolueno, 70°C; c) amina, r.t; d) Pb(OAc)4,

CH2CI2-MeOH (1:1), O0C1 ou nitrato cérico (IV) de amônio (CAN), CH3CN1 K2CO3l r.t.

Os compostos que têm a fórmula LXV são preparados por um método similar como a preparação da fórmula X (Esquema 5).

Esquema 5. O^O^Ph

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Reagentes e ccondições: a) CH2CI2-CH3CN1 KF-AI2O3, microondas, ou metanol, refluxo de piperidina; b) peneiras moleculares de 4Á, tolueno, 70°C; c) amina, r.t; d) Pb(OAc)4, CH2CI2-MeOH (1:1), O0C, ou nitrato cérico (IV) de amônio (CAN)1 CH3CN1 K2CO3l r.t.

Um aspecto da invenção relacionou-se aos métodos para preparar compostos inibidores de MDM2. Em uma modalidade, a invenção se relaciona a um método para preparar um composto tendo a fórmula X1 compreendendo:

a) condensar um composto da Fórmula 1 com um composto da Fórmula 2, por exemplo, em um solvente ou em uma mistura de solventes (por exemplo, CH2CI2 e CH3CN) sob microondas na presença de um catalizador (por exemplo, KF-AI2O3) ou na presença de uma base em um solvente adequado para formar um composto da Fórmula 3;

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b) condensar o composto da Fórmula 3 com um composto da Fórmula 4 e um composto da Fórmula 5, por exemplo, em um solvente apoiar (por exemplo, tolueno) na presença de um agente de desidratação (por exemplo, peneira molecular de 4Â) em temperatura elevada (por exemplo, cerca de 70°C) para formar um composto da Fórmula 6; e °γθγρ*

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Em uma outra modalidade, a invenção se relaciona a um método para preparar um composto que tem a fórmula LXV, compreendendo:

a) condensar um composto da Fórmula 16 com um composto da Fórmula 2, por exemplo, em um solvente ou em uma mistura de solventes (por exemplo, CH2CI2 e CH3CN) sob microondas na presença de um catalizador (por exemplo, KF-AI2O3) ou na presença de uma base em um solvente adequado para dar forma a um composto da Fórmula 17

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b) condensar o composto da Fórmula 17 com um composto da Fórmula 4 e um composto da Fórmula 5, por exemplo, em um solvente apoiar (por exemplo, tolueno) na presença de um agente de desidratação (por exemplo, peneira molecular de 4Â) em temperatura elevada (por exemplo, cerca de 70°C) para formar um composto da Fórmula 18; e c) tratar o composto da Fórmula 18 com um agente de oxidação (por exemplo, Pb(OAc)4, nitrato cérico de amônio) em um solvente ou em uma mistura de solventes (por exemplo, CH2CI2 e MeOH1 CH3CN) em uma temperatura adequada (por exemplo, cerca de O0C ou temperatura ambiente) para formar um composto de Fórmula LXV;

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I

LXV

onde:

R1, R5, R9, R10 e Ri1 são como definidos acima.

Um aspecto importante da presente invenção é que os compostos da Fórmula I induzem a interrupção do ciclo celular e/ou a apoptose e igualmente potencializam a indução da interrupção do ciclo celular e/ou da apoptose ou sozinho ou em resposta aos sinais de indução da apoptose adicionais. Conseqüentemente, contempla-se que estes compostos sensibilizam células à indução da interrupção do ciclo celular e/ou da apoptose, incluindo células que são resistentes a tais estímulos de indução. Os inibidores da interação entre p53 ou de proteínas relacionada a p53 e MDM2 ou de proteínas relacionadas a MDM2 da presente invenção podem ser usados para induzir a apoptose em qualquer desordem que possa ser tratada, melhorada, ou prevenida pela indução da apoptose. Em uma modalidade, os inibidores podem ser usados para induzir a apoptose nas células que compreendem p53 ou proteínas relacionadas a p53 funcionais.

Em outra modalidade, a invenção é relativa à modulação de um estado associado à apoptose o qual é associado com um ou mais agentes moduladores de apoptose. Exemplos de agentes moduladores de apoptose incluem, mas não estão limitados a, Fas/CD95, TRAMP, TNF Rlt DRI, DR2, DR3, DR4, DR5, DR6, FADD, RIP, TNFct, Iigante Fas1 TRAIL, anticorpos para TRAIL-RI ou TRAIL-R2, Bcl-2, p53, BAX1 BAD1 Akt1 CAD1 PI3 quinase, PPI1 e proteínas da caspase. Outros agentes envolvidos na fase de iniciação, decisão e degradação de apoptose são também incluídos. Exemplos de agentes moduladores de apoptose incluem agentes, a atividade, presença, ou mudança na concentração dos quais, pode mo5 dular a apoptose em um indivíduo. Agentes moduladores de apoptose incluem aqueles que são indutores de apoptose, tais como TNF ou um Iigante relacionado a TNF, particularmente um Iigante TRAMP, um Iigante Fas/CD95, um Iigante TNFR-1, ou TRAIL.

Em algumas modalidades, as composições e os métodos da presente invenção são usados para tratar células doentes, tecidos, órgãos, ou condições patológica e/ou estados de doença em um animal (por exemplo, um indivíduo mamífero incluindo, mas não limitado

a, humanos e animais veterinários). Nesta consideração, várias doenças e patologias são favoráveis ao tratamento ou à profilaxia usando os presentes métodos e composições. Uma lista exemplar não Iimitativa destas doenças e condições inclui, mas não está limitada a, câncer da mama, câncer de próstata, linfoma, câncer de pele, câncer pancreático, câncer de 15 cólon, melanoma, melanoma maligno, câncer ovariano, câncer de cérebro, carcinoma de cérebro primário, câncer da cabeça-pescoço, glioma, glioblastoma, câncer de fígado, câncer de bexiga, câncer de pulmão de célula não pequena, carcinoma de cabeça ou pescoço, carcinoma de mama, carcinoma ovariano, carcinoma de pulmão, carcinoma de pulmão de célula pequena, tumor de Wilms1 carcinoma cervical, carcinoma testicular, carcinoma da bexiga, 20 carcinoma pancreático, carcinoma do estômago, carcinoma de cólon, carcinoma de próstata, carcinoma genitourinário, carcinoma de tireóide, carcinoma esofágico, mieloma, mieloma múltiplo, carcinoma adrenal, carcinoma de célula renal, carcinoma endometrial, carcinoma do córtex adrenal, insulinoma pancreático maligno, carcinoma carcinóide maligno, coriocarcinoma, micose fungóide, hipercalcemia maligna, hiperplasia cervical, leucemia, leucemia 25 linfocítica aguda, leucemia Iinfocitica crônica, leucemia mielogênica aguda, leucemia mielogênica crônica, leucemia granulocítica crônica, leucemia granulocítica aguda, leucemia de células cabeludas (tricoleucemia), neuroblastoma, rabdomiossarcoma, sarcoma de Kaposi, policitemia vera, trombocitose essencial, doença de Hodgkin, linfoma de não Hodgkin, sarcoma de tecido mole, sarcoma osteogênico, macroglobulinemia primária, e retinoblastoma, e 30 semelhantes, doenças auto-imunes mediadas pelas células TeB; doenças inflamatórias; infecções; doenças hiperproliferativas; AIDS; condições degenerativas, doenças vasculares, e semelhantes. Em algumas modalidades, as células cancerosas que estão sendo tratadas são metastásicas. Em outras modalidades, as células cancerosas que estão sendo tratadas são resistentes aos agentes anti-câncer.

Em algumas modalidades, infecções adequadas para o tratamento com as compo

sições e os métodos da presente invenção incluem, mas não estão limitadas a, infecções causadas por vírus, bactérias, fungos, micoplasma, príons, e semelhantes. Algumas modalidades da presente invenção fornecem métodos para administrar uma quantidade eficaz de um composto de Fórmula I e pelo menos um agente terapêutico adicional (incluindo, mas não limitado a, quimioterapêuticos antineoplásicos, agentes moduladores de apoptose, antimicrobianos, antivirais, antifúngicos, e agentes anti-inflamatórios)

e/ou técnica terapêutica (por exemplo, intervenção cirúrgica, e/ou radioterapias).

Um número de agentes anti-câncer adequados são contemplados para o uso nos métodos da presente invenção. Certamente, a presente invenção contempla, mas não é limitada a, administração de numerosos agentes anti-câncer tais como: agentes que induzem a apoptose; polinucleotídeo (por exemplo, antisentido, ribozimas, siRNA); polipeptídeos 10 (por exemplo, enzimas e anticorpos); miméticos biológicos (por exemplo, miméticos gossipol ou BH3); agentes que ligam (por exemplo, oligomerizam ou complexam) com uma família Bcl-2 de proteína tal como Bax; alcalóides; agentes alquilantes; antibióticos antitumorais; antimetabólitos; hormônios; compostos de platina; anticorpos monoclonais ou policlonais (por exemplo, anticorpos conjugados com drogas, toxinas, defensinas anti-câncer), toxinas; 15 radionuclídeos; modificadores da resposta biológica (por exemplo, interferons (por exemplo, IFN-σ) e interleucinas (por exemplo, IL-2)); agentes de imunoterapia adotiva; fatores de crescimento hematopoiético; agentes que induzem a diferenciação celular do tumor (por exemplo, todo ácido trans-retinóico); reagentes de terapia gênica (por exemplo, reagentes de terapia antisentido e nucleotídeos); vacinas tumorais; inibidores de angiogênese; inibido20 res de proteossoma: moduladores de NF-KB; compostos anti-CDK; inibidores de HDAC; e semelhantes. Numerosos outros exemplos de compostos quimioterapêuticos e terapias anticâncer adequados para a co-administração com os compostos divulgados são conhecidos àqueles habilitados na arte.

Em determinadas modalidades, os agentes anti-câncer compreendem agentes que induzem ou estimulam a apoptose. Agentes que induzem a apoptose incluem, mas não estão limitados a, radiação (por exemplo, raios X, raio gama, UV); fatores relacionados ao fator de necrose tumoral (TNF) (por exemplo, as proteínas receptoras da família TNF, Iigantes da família TNF, TRAIL, anticorpos para TRAIL-RI ou TRAIL-R2); inibidores da quinase (por exemplo, inibidor da quinase do receptor de fator de crescimento epidérmico (EGFR), inibidor da quinase do receptor de fator de crescimento vascular (VGFR), inibidor da quinase do receptor do fator de crescimento de fibroblasto (FGFR), inibidor da quinase do receptor de fator de crescimento derivado de plaqueta (PDGFR), e inibidores da quinase de Bcr- Ab1 (tais como GLEEVEC)); moléculas antisentido; anticorpos (por exemplo, HERCEPTIN, RITUXAN, ZEVALIN, e AVASTIN); anti-estrogênios (por exemplo, raloxifeno e tamoxifeno); anti-andrógenos (por exemplo, flutamida, bicalutamida, finasterida, aminoglutetamida, cetoconazol, e corticosteróide); inibidores da ciclooxigenase 2 (COX-2) (por exemplo, celecoxib, meloxicam, NS-398, e drogas anti-inflamatórias não-esteroidais (NSAIDs)); drogas antiinflamatórias (por exemplo, butazolidina, DECADRON, DELTASONE, dexametasona, dexametasona intensol, DEXONE, HEXADROL, hidroxicloroquina, METICORTEN, ORADEXON, ORASONE, oxifenbutazona, PEDIAPRED, fenilbutazona, PLAQUENIL, prednisolona, prednisona, PRELONE, e TANDEARIL); e drogas quimioterapêuticas do câncer 5 (por exemplo, irinotecan (CAMPTOSAR), CPT-11, fludarabina (FLUDARA), dacarbazina (DTIC), dexametasona, mitoxantrona, MYLOTARG, VP-16, cisplatina, carboplatina, oxaliplatina, 5-FU, doxorubicina, gencitabina, bortezomib, gefitinib, bevacízumab, TAXOTERE ou TAXOL); moléculas de sinalização celular; ceramidas e citocinas; estaurosporina, e semelhantes.

Em ainda outras modalidades, as composições e os métodos da presente invenção

fornecem um composto de Fórmula I e pelo menos um agente anti-hiperproliferativo ou antineoplásico selecionado de agentes alquilantes, antimetabólitos, e produtos naturais (por exemplo, compostos derivados de ervas e outras plantas e/ou animais).

Agentes alquilantes adequados para o uso nas presentes composições e métodos 15 incluem, mas não estão limitados a: 1) mostardas de nitrogênio (por exemplo, mecloretamina, ciclofosfamida, ifosfamida, melfalan (L-sarcolisina); e clorambucil); 2) etileniminas e metilmelaminas (por exemplo, hexametilmelamina e tiotepa); 3) alquil sulfonatos (por exemplo, busulfan); 4) nitrosoureas (por exemplo, carmustina (BCNU); Iomustina (CCNU); semustina (metil-CCNU); e estreptozocina (estreptozotocina)); e 5) triazenos (por exemplo, dacarbazi20 na (DTIC; dimetiltriazenoimid-azolacarboxamida)).

Em algumas modalidades, antimetabólitos adequados para uso nas presentes composições e métodos incluem, mas não estão limitados a: 1) análogos do ácido fólico (por exemplo, metotrexato (ametopterina)); 2) análogos da pirimidina (por exemplo, fluorouracil (5-fluorouracil; 5-FU), floxuridina (fluorode-oxiuridina; FudR), e citarabina (citosina arabinosi25 da)); e 3) análogos da purina (por exemplo, mercaptopurina (6-mercaptopurina; 6-MP), tioguanina (6-tioguanina; TG), e pentostatina (2'-deoxicoformicina)).

Em ainda modalidades adicionais, agentes quimioterapêuticos adequados para uso nas composições e métodos da presente invenção incluem, mas não estão limitados a: 1) alcalóides da vinca (por exemplo, vinblastina (VLB), vincristina); 2) epipodofilotoxinas (por 30 exemplo, etoposídeo e teniposídeo); 3) antibióticos (por exemplo, dactinomicina (actinomicina D), daunorubicina (daunomicina; rubidomicina), doxorubicina, bleomicina, plicamicina (mitramicina), e mitomicina (mitomicina C)); 4) enzimas (por exemplo, L-asparaginase); 5) modificadores de resposta biológica (por exemplo, interferon-alfa); 6) complexos de coordenação de platina (por exemplo, cisplatina (cis-DDP) e carboplatina); 7) antracenedionas (por 35 exemplo, mitoxantrona); 8) uréias substituídas (por exemplo, hidroxiuréia); 9) derivados de metilhidrazina (por exemplo, procarbazina (N-metilhidrazina; MIH)); 10) supressores adrenocorticaís (por exemplo, mitotano (ο,ρ'-DDD) e aminoglutetimida); 11) adrenocorticosteróides (por exemplo, prednisona); 12) progestinas (por exemplo, caproato de hidroxiprogesterona, acetato de medroxiprogesterona, e acetato de megestrol); 13) estrogênios (por exemplo, dietilstilbestrol e etinil estradiol); 14) antiestrogênios (por exemplo, tamoxifeno); 15) androgênios (por exemplo, propionato de testosterona e fluoximesterona); 16) antiandrogênios 5 (por exemplo, flutamida): e 17) análogos do hormônio que libera gonadotropina (por exemplo, leuprolide).

Qualquer agente oncolítico que é rotineiramente usado no contexto da terapia do câncer encontra uso nas composições e nos métodos da presente invenção. Por exemplo, a Agência de Medicamentos e Alimentos dos E.U. mantém um formulário dos agentes oncolí10 ticos aprovados para o uso nos Estados Unidos. As agências internacionais complementares ao U.S.F.D.A. mantêm formulários similares. A tabela 1 fornece uma lista de agentes antineoplásticos exemplares aprovados para o uso nos E.U. Aqueles habilitados na arte apreciarão que a “classificação do produto” exigido em todos os quimioterapêuticos aprovados no E.U. descreve as indicações aprovadas, dosando a informação, dados de toxicidade, 15 e semelhantes, para os agentes exemplares.

Tabela 1.

Aldesleucina Proleucina Chiron Corp., Emeryville, (des-alanil-1, serina-125 interleucina- CA 2humana) Alemtuzumab Campath Millennium and ILEX (anticorpo IgGIK anti CD52) Partners, LP, Cambridge, MA Alitretinoina Panretin Ligand Pharmaceuticals, (ácido 9-cis-retinóico) Inc., San Diego CA Alopurinol Ziloprim GIaxoSmithKIine, Re¬ (sal monossódico de 1,5-dihidro-4 H - search pirazolo[3,4-d]pirimidin-4- Triangle Park1 NC ona) Altretamina Hexalen US Bioscience1 West (N,N,N',N',N",N",- hexametil-1,3,5-triazina- Conshohocken1 PA 2, 4, 6-triamina) Amifostina Etiol US Bioscienee (etanetiol, 2-[(3-aminopropil)amino]-, dihidrogeno fosfato (éster)) Anastrozol Arimidex AstraZeneca (1,3-Benzenodiacetonitrila, a, a, a', a'- Pharmaceuticals, LP, tetrametil-5-(1 H-1,2,4-triazol-1 -ilmetil)) Wilmington, DE Trióxido arsênico Trisenox Cell Therapeutic, Inc., Seattle, WA Asparaginase Elspar Merck & Co., Inc., (L-asparagine amidohidrolase, tipo EC-2) Whitehouse Station, NJ BCG Live TICE BCG Organon Teknika, Corp., (preparação Iiofilizada de uma cepa atenu¬ Durham, NC ada deMycobacterium bovis (Bacillus CalmetteGukin [BCG], subcepa Montreal) bexaroteno cápsulas Targretin Ligand Pharmaceuticals (ácido 4-[1 -(5,6,7,8-tetrahidro-3,5,5,8,8- pentametil-2-naptalenil) etenil] benzóico) bexaroteno gel Targretin Ligand Pharmaceuticals Bleomicina Blenoxano Bristol-Myers Squibb Co., (antibióticos citotóxicos glicopeptídeos pro¬ NY1 NY duzidos por Streptomyces verticillus; bleomicina A2 e bleomicina B2) Capecitabina Xeloda Roche (5'-deoxi-5-flúor-N-[(pentiloxi)carbonil]citidina) Carboplatina Paraplatina Bristol-Myers Squibb (platinum, diamina [1,1- ciclobutanodicarboxilato(2-)-0, 0']-,(SP-4-2)) Carmustina BCNU, Bristol-Myers Squibb (1,3-bis(2-cloroetil)-1 -nitrosouréia) BiCNU Carmustina com implante de Polifeprosan Gliadel Guilford Pharmaceuti¬ Wafer cals, Inc., Baltimore, MD Celecoxib Celebrex Searle Pharmaceuticals, (as 4-[5-(4-metilfenil)-3- (trifluormetil)- Inglaterra 1 H-pirazol-1-il] benzenesulfonamida) Clorambucil Leueeran GIaxoSmithKIine (ácido 4- [bis(2cloretil)amino]benzenebutanóico) Cisplatina Platinol Bristol-Myers Squibb (PtCI2H6N2) Cladribina Leustatin, R.W. Johnson (2-cloro-2'-deoxi-b-D-adenosina) 2-CdA Pharmaceutical Re¬ search lnstitute, Raritan, NJ Ciclofosfamida Citoxan, Bristol-Myers Squibb (2-[bis(2-cloroetil)amino] tetrahidro-2H- Neosar 13,2-oxazafosforine 2-óxido monohidrato) Citarabina Citosar-U Pharmacia & Upjohn (1-b-D-Arabinofuranosilcitosina, C9H13N3O5) Company citarabine Iipossomal DepoCit Skye Pharmaceuticals, Inc., San Diego, CA Dacarbazina DTIC- Bayer AG, Leverkusen, (5-(3,3-dimetil-l-triazeno)-imidazol-4- Dome Alemanha earboxamida (DTIC)) Dactinomicina, actinomicina D Cosmegen Merck (actinomicina produzida por Streptomyces parvullus, C62H86N12°16) Darbepoetina alfa Aranesp Amgen1 Inc., Thousand (peptídeo reeombinante) Oaks, CA daunorubicina Iipossomal DanuoXom Nexstar Pharmaceuti¬ (cloridrato de (8S-cis)-8-acetil-10-[(3-amino- e cals, 2,3,6-trideoxi-a-L-lixo-hexopiranosil)oxi]- Inc., Boulder, CO 7,8,9,10-tetrahidro-6, 8,11-trihidroxi- I metoxi-5,12-naftacenediona) Daunorubicina HCI, daunomicina Cerubidina Wyeth Ayerst, Madison, (cloridrato de (1 S ,3 S )-3-Acetil- NJ 1,2,3,4,6,11-hexahidro-3,5,12-trihidroxi-10- metoxi-6,11-dioxo-l-naftacenyl 3-amino2,3,6-trideoxi-(alpha)-L- lixo hexopiranosídeo) Denileucina diftitox Ontak Seragen, Inc., Hopkinton, (peptídeo recombinante) MA Dexrazoxana Zinecard Pharmacia & Upjohn ((S)-4,4’-(1-metil-1,2-ethanediil)bis-2,6- Company piperazinediona) Docetaxel Taxotere Aventis Pharmaceuticals, ((2R,3S)-N-carboxi-3-fenilisoserine, N-tert- Inc., Bridgewater, NJ butil éster, 13-éster with 5b-20-epoxi12a,4,7b,10b,13a-hexahidroxitax-11-en-9- ona 4-acetato 2-benzoato, trihidrato) Doxorubicina HCI Adriamycin Pharmacia & Upjohn (8S,10S)-10-[(3-amino-2,3,6-trideoxi-a-L- , Rubex Company lixo-hexopiranosil)oxi] -8-glicolil-7,8,9,10- tetrahidro-6,8,11- trihidroxi-l-metoxi-5,12- naftacenediona hidrocloride) doxorubicina Adriamycin Pharmacia & Upjohn PFS Company njeção Intravenosa doxorubicin Iipossomal Doxil Sequus Pharmaceuti¬ cals, Inc., Menlo park, CA propionato de dromostanolona Dromostano Eli Lilly & Company, (propionato de 17b-Hidroxi-2a-metil-5a- lona Indianápolis, IN androstan-3-ona) propionato de dromostanolona Masterona Syntex, Corp., Palo Alto, injeção CA Solução de Elliott B Solução de Orphan Medicai, Inc Elliott B Epirubicina Ellence Pharmacia & Upjohn (cloridrato de (8S-cis)-10-[(3-amino-2,3,6- Company trideoxi-a-L-arabino- hexopiranosil)oxi]7,8,9,10-tetrahidro-6,8,11 -trihidroxi-8- (hidroxiacetil)-l -metoxi5,12-naftacenediona) Epoetin alfa Epogen Amgen, Inc (peptídeo recombinante) Estramustina Emcit Pharmacia & Upjohn (estra-1,3,5(10)-trieno-3,17-diol(17(beta))-, Company 3- [bis(2-cloroetil)carbamato] 17-(dihidrogeno fosfato), sal dissódico, monohidrato, ou estradiol 3-[bis(2-cloroetil)carbamato] 17- (dihidrogeno fosfato), sal dissódico, monohidrato) Fosfato de etoposídeo Etopophos Bristol-Myers Squibb (4'-Demetilepipodofilotoxina 9-[4,6-0-(R)etilideno-(beta)-D-glucopiranosídeo], 4'(dihidrogeno fosfato)) etoposídeo, VP-16 Vepesid Bristol-Myers Squibb (4'-demetilepipodofilotoxina 9-[4,6-0-(R)etilideno-(beta)-D-glucopiranosídeo]) Exemestano Aromasin Pharmacia & Upjohn (6-metilenandrosta-1,4-dieno-3,17-diona) Company Filgrastim Neupogen Amgen, Inc (r-metHuG-CSF) floxuridina (intra-arterial) FUDR Roche (2'-deoxi-5-fluorouridina) Fludarabina Fludara Berlex Laboratories, Inc., (análogo nucleotídeo fluorado do agente Cedar Knolls, NJ antiviral vidarabina, 9-b -Darabinofuranosiladenina (ara-A)) Fluorouracil, 5-FU Adrucil ICN Pharmaceuticals, (5-flúor-2,4(1H,3H)-pirimidinediona) Inc., Humacao, Porto Rico Fulvestrant Faslodex IPR Pharmaceuticals, (7-alfa-[9-(4,4,5,5,5-penta Guaiama, Porto Rico fluoropentilsulfinil) nonil]estra-1,3,5-(10)trieno-3,17-beta-diol) Gencitabina Gemzar Eli Lilly (monocloridrato de 2'-deoxi-2', 2'difluorocitidina (isômero-b)) Gemtuzumab Ozogamicina Milotarg Wyeth Ayerst (anti-CD33 hP67.6) Acetato de Goserelina Implante de AstraZeneca Pharma¬ (sal acetato de [D-Ser(But)6,Azgli10]LHRH; Zoladex ceuticals piro-G I u-H is-Trp-Ser-Tir-D-Ser(But)-LeuArg-Pro-Azgli-NH2 acetato [C59H84N18O14 -(C2H4O2)c Hidroxiuréia Hidrea Bristol-Myers Squibb Ibritumomab Tiuxetan Zeialina Biogen IDEC, Inc., (imunoconjugado resultante de uma ligação Cambridge MA covalente de tiouréia entre o anticorpo monoclonal Ibritumomab e o quelante de liga¬ ção tiuxetan [N-[2-bis(carboximetil)amino]3-(p-isotiocianatofenil)- propil]-[N-[2- bis(carboximetil)amino]-2-(metil) etil]glicina) Idarubicina Idamicina Pharmacia & Upjohn (5, 12-Naftacenediona, 9-acetil-7-[(3- Company amino-2,3,6-trideoxi-(alfa)-L- lixo hexopiranosil)oxi]-7,8,9,10-tetrahidro6,9,11-trihidroxihidrocloreto, (7S- eis )) Ifosfamida IFEX Bristol-Myers Squibb (3-(2-cloroetil)-2-[(2- cloroetil)amino]tetrahidro-2H-1,3,2- oxazafosforina 2-óxido) Mesilato de Imatinib Gleevec Novartis AG, Basel, (4-[(4-Metil-l-piperazinil)metil]-N-[4- Suiça metil-3-[[4-(3-piridinil)-2- pirimidinil]amino]-fenil]benzamida metanosulfonato) Interferon alfa-2a Roferon-A Hoffmann-La Roche, (peptídeo recombinante) Inc., Nutley, NJ Interferon alfa-2b Intron A Schering AG, Berlin, (peptídeo recombinante) (Betaseron Alemanhay Liofilizado) Irinotecan HC1 Camptosar Pharmacia & Upjohn ((4S)-4,11 -dietil-4-hidroxi-9-[(4- piperi- Company dinopiperidino)carboniloxi]-1 H-pirano[3', 4': 6,7] indolizino[1,2-b] quinolina-3,14(4H, 12H) dione hidrochloride trihidrato) Letrozol Femara Novartis (4,4'-(1 Η-1,2,4 -Triazol-l-ilmetileno) dibenzonitrila) Leucoiorina Wellcoiori Immunex, Corp., Seattle, (Ácido L-Glutâmico, N[4[[(2amino-5-formil- n, WA 1,4,5,6,7,8 hexahidro4oxo6- Leucoiorina pteridinil)metil]amino]benzoil], sal de cálcio (1:1)) Leiamisol HC1 Ergamisol Janssen Research (monocloridrato de (-)-( S)-2,3,5, 6- Foundation, Titusville, NJ tetrahidro-6-fenilimidazo[2,1-b] tiazol C11H12N2S*HCI) Lomustina CeeNU Bristol-Myers Squibb (1 -(2-cloro-etil)-3-ciclo hexil-1 nitrosouréia) Mecloretamina, mostarda de nitrogênio Mustargen Merck (cloridrato de 2-cloro-N-(2-cloroetil)-Nmetiletanamina) Acetato de Megestrol Megace Bristol-Myers Squibb 17a( aceriloxi)- 6- metilpregna- 4,6- dieno3,20- diona Melfalan, L-PAM Alceran GIaxoSmithKIine (4-[bis(2-cloroetil) amino]-L-fenilalanina) Mercaptopurina, 6-MP Purinetol GIaxoSmithKIine (Monohidrato de 1,7-dihidro-6 H -purina-6- tiona) Mesna Mesnex Asta Medica (sulfonato de sódio 2-mercaptoetano) Metotrexato Methotrexat .ederle Laboratories (ácido N-[4-[[(2,4-diamino-6- D pteridinil)metil] metilamino]benzoil]-Lglutâmico) Metoxsalen Uiadex Therakos, Inc., Way Ex(9-metoxi-7H-furo[3,2-g] [ 1 ]-benzopiran-7- ton, ona) Pa Mitomicina C Mutamicin Bristol-Myers Squibb mitomicina C Mitozitrex SuperGen, Inc., Dublin, CA Mitotano Lisodren Bristol-Myers Squibb (1,1 -d icloro-2-(o-clorofen il )-2-(pclorofenil) etano) Mitoxantrona Novantrona Immunex Corporation (dicloridrato de 1,4-dihidroxi-5,8-bis[[2-[(2- hidroxietil)amino]etil]amino]-9,10- antracenediona) Fenpropionato de Nandrolona Durabolin- Organon, Inc., West Or50 ange, NJ Nofetumomab Verluma Boehringer Ingelheim Pharma KG, Alemanha Oprelvecina Neumega Genetics Institute, Inc., (IL-11) Alexandria, VA Oxaliplatina Eloxatin Sanofi Synthelabo, Inc., (cis-[( 1 R,2R)-I ,2-ciclohexanediamine- NY1 N1NT NY [oxalato(2-)-0,0'] platina) Paclitaxel TAXOL Bristol-Myers Squibb (513, 20-Epoxi-1,2a, 4,7f3, 1013, 13ahexahidroxitax-11 -en-9-ona 4,10-diacetato 2- benzoatol 3-éster com (2R, 3 S)- N-benzoil3- fenilisoserina) Pamidronato Aredia Novartis (ácido fosfônico (3-amino-lhidroxipropilideno) bis-, sal dissódico, pentahidrato, (APD)) I Pegademase Adagen Enzon Pharmaceuticals, ((monometoxipolietileno glicol (Pegademas Inc., succinimidil) 11-17 -adenosina deamina- e Bovino) Bridgewater, NJ se) Pegaspargase Oncaspar Enzon (monometoxipolietileno glicol succinimidil L-asparaginase) Pegfilgrastim Neulasta Amgen, Inc (conjugado covalente de metionil recombi¬ nante humano G-CSF (FiIgrastim) e monometoxipolietileno glicol) Pentostatina Nipent Parke-Davis Pharmaceutical Co., Rockville, MD Pipobroman Vercite Abbott Laboratories, Abbott Park, IL Plicamicina1 Mitramicina Mitracina Pfizer, Inc., NY, NY (antibiótico produzido por Streptomyces plicatus) Porfimer sódio Photofrin QLT Phototherapeutics, Inc., Vancouver, Canadá Procarbazina Matulane Sigma Tau Pharmaceuti¬ (monocloridrato de N-isopropil- 1-(2- cals, metilhidrazina)-p-toluamida) Inc., Gaithersburg, MD Quinacrina Atabrine Abbott Labs (6-cloro-9-( 1 -metil-4-dietil-amina) butilamino-2-metoxiacridina) Rasburicase Elitek Sanofi-Synthelabo, Inc., (paptídeo recombinante) Rituximab Rituxan Genentech, Inc., South (anticorpo recombinante anti-CD20) San Francisco, CA Sargramostim Prokine Immunex Corp (paptídeo recombinante) Estreptozocina Zanosar Pharmacia & Upjohn (estreptozocina 2 -deoxi - 2 -[[(metilnitroso Company amino)carbonil]amino] -a(e b ) - D - glucopiranose e 220 mg ácido cítrico anidro) Talco Sclerosol Bryan, Corp., Woburn, (Mg3Si4O10 (OH)2) MA Tamoxifeno Nolvadex AstraZeneca Pharma¬ ((Z)2-[4-(1,2-difenil-1 -butenil) fenoxi]-N, ceuticals N-dimetiletanamina 2-hidroxi-1,2,3- propanetricarboxilato (1:1)) Temozolomida Temodar Schering (3,4-dihidro-3-metil-4-oxoimidazo[5,1-d]as-tetrazina-8-carboxamida) teniposídeo, VM-26 Vumon Bristol-Myers Squibb (4'-demetilepipodofilotoxina 9-[4,6-0-(R)2- tenilideno-(beta)-D-glucopiranosidel) Testolactona Teslac Bristol-Myers Squibb (ácido 13-hidroxi-3-oxo-13,17- secoandrosta-1,4- dien-17-óico [dgr ]lactona) Thioguanina, 6-TO Tioguanina GIaxoSmithKIine (2-amino-1,7-dihidro-6 H - purina-6-tiona) Tiotepa Tioplex Immunex Corporation (Aziridina, 1,1',l"-fosfinotioilidinetris-, ou sulfeto de Tris (1 -aziridinil) fosfina) Topotecan HC1 Hicamtina GIaxoSmithKIine (monocloridrato de (S)-10-[(dimetilamino) metil]-4-etil-4,9-dihidroxi-1 H-pirano[3', 4': 6,7] indolizino[1,2-b] quinolina-3,14- (4H,12H)-diona) Toremifeno Fareston Roberts Pharmaceutical (citrato de 2-(p-[(Z)-4-cloro-1,2-difenil-1- Corp., Eatontown, NJ butenil]-fenoxi)-N,N-dimetiletilamina (1:1)) Tositumomab, 1131 Tositumomab Bexxar CorixaSeattIe1 WA (anticorpo recombinante monoclonal IgG2a Coip., Iambda anti-CD20 imunoterapêutico de murina (I 131 é um anticorpo radioimunoterapêutico)) Trastuzumab Herceptin Genentech, Inc (anticorpo recombinante monoclonal IgG kappa anti-HER2) Tretinoína, ATRA Vesanoid Roche (ácido todo-trans retinóico) Mostarda Uracil Mostarda Roberts Labs Uracil Cápsulas Valrubicin, N-trifluoracetiladriamicina-14- Valstar Anthra --> Medeva valerato ((2S-cis)-2- [ 1,2,3,4,6,11-hexahidro-2,5,12- trihidroxi-7 metoxi-6,11-dioxo-[[4 2,3,6- trideoxi-3- [(trifluoracetil)-amino-a-L-lixohexopiranosil]oxil]-2-naftacenil]-2- oxoetil pentanoato) Vinblastina, Leurocristina Velban Eli Lilly (c46h56n40 i o*H2S04) Vincristina Oncovin Eli Lilly (C46H56N40 i o*H,S04) Vinorelbina Navelbine GIaxoSmithKIine (3' ,4'-didehidro-4'-deoxi-C'noriincaleucoblastina [R-(R*,R*)-2,3- dihidroxibutanodioato (1:2)(sal)]) Zoledronato, Ácido Zoledrônico Zometa Novartis (ácido (1 -Hidrox i-2-imidazo 1-1 -il-fosfonoetil) fosfônico monohidratado) Agentes anti-câncer ainda incluem compostos que foram identificados por ter atividade anti-câncer, mas atualmente não são aprovados pela Agência de Medicamentos e Alimentos dos E.U. ou por outras agências complementares ou estão se submetendo à avaliação para usos novos. Os exemplos incluem, mas não estão limitados a, 3-AP, 12-0- 5 tetradecanoilforbol-13-acetato, 17AAG, 852A, ABI-007, ABR-217620, ABT-751, ADI-PEG 20, AE-941, AG-013736, AGROIOO, alanosina, AMG 706, anticorpo G250, antineoplastons, AP23573, apaziquona, APC8015, atiprimod, ATN-161, atrasenten, azacitidina, BB-10901, BCX-1777, bevacizumab, BG0000I, bicalutamida, BMS 247550, bortezomib, briostatina-1, buserelina, calcitriol, CCI-779, CDB-2914, cefixime, cetuximab, CG0070, cilengitide, clofara10 bine, fosfato de combretastatina A4, CP-675,206, CP-724,714, CpG 7909, curcumina, decitabina, DENSPM, doxercalciferol, E7070, E7389, ecteinascidina 743, efaproxiral, eflornitina, EKB-569, enzastaurina, erlotinib, exisulind, fenretinida, flavopiridol, fludarabina, flutamida, fotemustina, FR901228, G17DT, galiximab, gefitinib, genisteína, glufosfamida, GTI-2040, histrelin, HKI-272, homoharringtonina, HSPPC-96, proteína de fusão hul4.18-interleucina-2, 15 HuMax-CD4, iloprost, imiquimod, infliximab, interleucina-12, IPI-504, irofulven, ixabepilona, lapatinib, lenalidomída, lestaurtinib, leuprolida, imunotoxina LMB-9, lonafarnib, luniliximab, mafosfamida, MB07133, MDX-0I0, MLN2704, anticorpo monoclonal 3F8, anticorpo monoclonal J591, motexafin, MS-275, MVA-MUCI - IL2, nilutamida, nitrocamptotecina, dicloridrato de nolatrexed, nolvadex, NS-9, 06-benzilguanina, oblimersen sódico, ONIX-O15, oregovo20 mab, OSI-774, panitumumab, paraplatina, PD-0325901, pemetrexed, PHY906, pioglitazona, pirfenidona, pixantrona, PS-341, PSC 833, PXD101, pirazoloacridina, R115777, RAD001, ranpirnase, análogo da rebecamicina, proteína rhuAngiostatina, rhuMab 2C4, rosiglitazona, rubitecan, S-1, S-8184, satraplatina, SB-, 15992, SGN-0010, SGN-40, sorafenib, SR31747A, ST1571, SU011248, ácido suberoilanilida hidroxâmico, suramina, talabostat, talampanel, 25 tariquidar, temsirolimus, imunotoxina TGFa-PE38, talidomida, timalfasina, tipifarnib, tirapazamina, TLK286, trabectedina, glucuronato de trimetrexato, TroVax1 UCN-1, ácido valpróico, vinflunina, VNP40101M, volociximab, vorinostat, VX-680, ZDI 839, ZD6474, zileuton, e tricloridrato de zosuquidar.

Para uma descrição mais detalhada de agentes anti-câncer e de outros agentes terapêuticos, aqueles habilitados na arte são referidos a qualquer número de manuais instrutivos incluindo, mas não limitados a, Physician's Desk Reference e a Goodman e a Gilman's "Pharmaceutical Basis of Therapeutics" décima edição, Eds. Hardman et al., 2002.

A presente invenção fornece métodos para administrar um composto de Fórmula I com terapia de radiação. A invenção não é limitada pelos tipos, quantidades, ou sistemas de liberação e administração usados para liberar a dose terapêutica da radiação a um animal. Por exemplo, o animal pode receber radioterapia de fóton, terapia de radiação de emissão de partícula, os outros tipos de radioterapias, e combinações das mesmas. Em algumas modalidades, a radiação é liberada ao animal usando um acelerador linear. Em ainda outras modalidades, a radiação é liberada usando uma faca gama.

A fonte de radiação pode ser externa ou interna ao animal. A terapia de radiação externa é a mais comum e envolve direcionar uma emissão de radiação alta-tensão a um local de tumor através da utilização da pele, por exemplo, de um acelerador linear. Enquanto a emissão da radiação estiver localizada no local do tumor, é quase impossível evitar a exposição do tecido normal, saudável. Entretanto, a radiação externa é geralmente bem tolerada por animais. A terapia de radiação interna envolve implantar uma fonte de emissão de radiação, tal como grânulos, fios, pellets, cápsulas, partículas, e semelhantes, dentro do corpo ou perto do local do tumor incluindo o uso dos sistemas de liberação que especificamente têm como alvo células cancerosas (por exemplo, usando as partículas unidas aos Iigantes de ligação de célula cancerosa). Tais implantes podem ser removidos depois do tratamento, ou deixados no corpo inativos. Tipos de terapia de radiação interna incluem, mas não estão limitados a, braquiterapia, irradiação intersticial, irradiação intracavidade, radioimunoterapia, e semelhantes.

O animal pode opcionalmente receber radiosensibilizadores (por exemplo, metronidazol, misonidazol, Budr intra-arterial, iododeoxiuridina intravenosa (IudR), nitroimidazol, 5- substituído-4-nitroimidazolas, 2H-isoindoledionas, [[(2-bromoetil)-amino]metil]-nitro-IHimidazol-1-etanol, derivados de nitroanilina, citotoxinas seletivas de hipoxia de afinidade a DNA, Iigante de DNA halogenado, óxidos de 1,2,4 benzotriazina, derivados de 2- nitroimidazol, derivados de nitroazol contendo flúor, benzamida, nicotinamida, intercalador de acridina, 5-tiotetrazol, 3-nitro-l,2,4-triazol, derivado de 4,5-dinitroimidazol, texafrinas hidroxiladas, cisplatina, mitomicina, tiripazamína, nitrosouréia, mercaptopurina, metotrexato, flúoruracil, bleomicina, vincristina, carboplatina, epirubicina, doxorubicina, ciclofosfamida, vindesinae, etoposídeo, paclitaxel, calor (hipertermia), e semelhantes), radioprotetores (por exemplo, cisteamina, aminoalquil dihidrogeno fosforotioatos, amifostina (WR 2721), IL-I1 IL

6, e semelhantes). Radiosensibilizadores realçam a morte de células tumorais. Radioprotetores protegem o tecido saudável dos efeitos prejudiciais da radiação.

Qualquer tipo de radiação pode ser administrado a um animal, contanto que a dose da radiação seja tolerada pelo animal sem efeitos colaterais negativos inaceitáveis. Tipos adequados de radioterapia incluem, por exemplo, radioterapia ionizante (eletromagnética) (por exemplo, raios X ou raios gama) ou terapia de radiação de emissão de partícula (por exemplo, radiação de energia linear elevada). A radiação ionizante é definida como a radiação compreendendo partículas ou fótons que têm energia suficiente para produzir ionização, isto é, ganho ou perda de elétrons (como descrito em, por exemplo, E.U. 5.770.581 incorporado aqui por referência em sua totalidade). Os efeitos da radiação podem pelo menos parcialmente ser controlados pelo clínico. Em uma modalidade, a dose da radiação é fracionada para exposição máxima da célula alvo e toxicidade reduzida.

Em uma modalidade, a dose total da radiação administrada a um animal é aproxi

madamente .01 Gray (Gy) a aproximadamente 100 Gy. Em outra modalidade, aproximadamente 10 Gy a aproximadamente 65 Gy (por exemplo, aproximadamente 15 Gy, 20 Gy, 25 Gy, 30 Gy, 35 Gy1 40 Gy, 45 Gy, 50 Gy, 55 Gy, ou 60 Gy) são administrados durante o curso do tratamento. Enquanto em algumas modalidades uma dose completa da radiação pode ser administrada durante o curso de um dia, a dose total idealmente está fracionada e administrada durante diversos dias. Desejavelmente, a radioterapia é administrada durante o curso pelo menos cerca de 3 dias, por exemplo, pelo menos 5, 7, 10, 14, 17, 21, 25, 28, 32, 35, 38, 42, 46, 52, ou 56 dias (aproximadamente 1-8 semanas). Conseqüentemente, uma dose diária de radiação compreenderá aproximadamente 1-5 Gy (por exemplo, aproximadamente 1 Gy, 1,5 Gy, 1,8 Gy, 2 Gy, 2,5 Gy1 2,8 Gy, 3 Gy, 3,2 Gy1 3,5 Gy1 3,8 Gy, 4 Gy1 4,2 Gy, ou 4,5 Gy), ou 1-2 Gy {por exemplo, 1,5-2 Gy). A dose diária da radiação deve ser suficiente para induzir a destruição das células alvo. Se esticado durante um período, em uma modalidade, a radiação não é administrada todo dia, desse modo permitindo que o animal descanse e os efeitos da terapia a ser realizada. Por exemplo, a radiação é administrada desejavelmente em 5 dias consecutivos, e não administrada em 2 dias, para cada semana de tratamento, permitindo desse modo 2 dias de descanso por semana. Entretanto, a radiação pode ser administrada 1 dia/semana, 2 dias/semana, 3 dias/semana, 4 dias/semana, 5 dias/semana, 6 dias/semana, ou todos os 7 dias/semana, dependendo da responsividade do animal e quaisquer efeitos colaterais potenciais. A terapia de radiação pode ser iniciada a qualquer hora no período terapêutico. Em uma modalidade, a radiação é iniciada na semana

1 ou na semana 2, e administrada pela duração restante do período terapêutico. Por exemplo, a radiação é administrada nas semanas 1-6 ou nas semanas 2-6 de um período terapêutico que compreende 6 semanas para o tratamento, por exemplo, de um tumor sólido. Alternativamente, a radiação é administrada nas semanas 1-5 ou nas semanas 2-5 de um 30 período terapêutico que compreende 5 semanas. Estas programações exemplares da administração da radioterapia não tema a intenção, entretanto, de limitar a presente invenção.

Agentes terapêuticos antimicrobianos podem também ser usados como agentes terapêuticos na presente invenção. Qualquer agente que possa matar, inibir, ou de outra forma atenuar a função de organismos microbianos pode ser usado, bem como qualquer agen35 te contemplado por ter tais atividades. Agentes antimicrobianos incluem, mas não estão limitados a, antibióticos naturais e sintéticos, anticorpos, proteínas inibitórias (por exemplo, defensinas), ácidos nucléicos antisentido, agentes de ruptura de membrana e semelhantes, usados sozinhos ou em combinação. De fato, qualquer tipo de antibiótico pode ser usado incluindo, mas não limitado a, agentes antibacterianos, agentes antivirais, agentes antifúngicos, e semelhantes.

Em algumas modalidades da presente invenção, um composto de Fórmula I e um ou mais agentes terapêuticos ou agentes anti-câncer são administrados a um animal sob uma ou mais das seguintes condições: em periodicidades diferentes, em durações diferentes, em concentrações diferentes, por rotas diferentes de administração, etc. Em algumas modalidades, o composto é administrado antes do agente terapêutico ou anti-câncer, por exemplo, 0,5, 1, 2, 3, 4, 5, 10, 12, ou 18 horas, 1, 2, 3, 4, 5, ou 6 dias, ou 1, 2, 3, ou 4 semanas antes da administração do agente terapêutico ou anti-câncer. Em algumas modalidades, o composto é administrado após o agente terapêutico ou anti-câncer, por exemplo, 0,5, 1, 2, 3, 4, 5, 10, 12, ou 18 horas, 1, 2, 3, 4, 5, ou 6 dias, ou 1, 2, 3, ou 4 semanas após a administração do agente anti-câncer. Em algumas modalidades, o composto e o agente terapêutico ou anti-câncer são administrados simultaneamente, mas em programações diferentes, por exemplo, o composto é administrado diariamente enquanto o agente terapêutico ou anticâncer é administrado uma vez por semana, uma vez cada duas semanas, uma vez cada três semanas, ou uma vez cada quatro semanas. Em outras modalidades, o composto é administrado uma vez por semana enquanto o agente terapêutico ou anti-câncer é administrado diariamente, uma vez por semana, uma vez cada duas semanas, uma vez cada três semanas, ou uma vez cada quatro semanas.

Composições dentro do escopo desta invenção incluem todas as composições onde os compostos da presente invenção estão contidos em uma quantidade que seja eficaz para alcançar sua finalidade pretendida. Enquanto as necessidades individuais variam, a determinação de faixas ótimas de quantidades eficazes de cada componente está dentro da 25 habilidade na arte. Tipicamente, os compostos podem ser administrados aos mamíferos, por exemplo, humanos, oralmente em uma dose de 0,0025 a 50 mg/kg, ou em uma quantidade equivalente do sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, por dia do peso corporal do mamífero que está sendo tratado para desordens responsivas à indução de apoptose. Em uma modalidade, aproximadamente 0,01 a aproximadamente 25 mg/kg são administrados 30 oralmente para tratar, melhorar, ou impedir tais desordens. Para injeção intramuscular, a dose é geralmente aproximadamente metade da dose oral. Por exemplo, uma dose intramuscular adequada seria de aproximadamente 0,0025 a aproximadamente 25 mg/kg, ou de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 5 mg/kg.

A dose oral unitária pode compreender de aproximadamente 0,01 a aproximadamente 1000 mg, por exemplo, de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 100 mg do composto. A dose unitária pode ser administrada uma ou mais vezes diariamente como um ou mais tabletes ou cápsulas cada um contendo de aproximadamente 0,1 a aproximadamente 10 mg, convenientemente de aproximadamente 0,25 a 50 mg do composto ou seus solvatos.

Em uma formulação tópica, o composto pode estar presente em uma concentração de aproximadamente 0,01 a 100 mg por grama de veículo. Em uma modalidade, o composto está presente em uma concentração de aproximadamente 0,07-1,0 mg/ml, por exemplo, aproximadamente 0,1-0,5 mg/ml, e em uma modalidade, aproximadamente 0,4 mg/ml.

Em adição à administração do composto como um produto químico bruto, os compostos da invenção podem ser administrados como parte de uma preparação farmacêutica contendo carreadores farmaceuticamente aceitáveis adequados compreendendo excipien10 tes e os auxiliares que facilitam o processamento dos compostos nas preparações que podem ser usadas farmaceuticamente. As preparações, particularmente aquelas preparações que podem ser administradas oralmente ou topicamente e que podem ser usadas por um tipo da administração, tal como tabletes, drágeas, lozangos e cápsulas de liberação lenta, enxaguatórios e lavagens bucais, géis, suspensões líquidas, enxaguatórios de cabelo, géis 15 de cabelo, xampus e também as preparações que podem ser administradas retalmente, tais como supositórios, assim como soluções adequadas para administração por infusão intravenosa, injeção, topicamente ou oralmente, contêm de aproximadamente 0,01 a 99 por cento, em uma modalidade de aproximadamente 0,25 a 75 por cento do(s) composto(s) ativo(s), junto com o excipiente.

As composições farmacêuticas da invenção podem ser administradas a qualquer

animal que puder experimentar os efeitos benéficos dos compostos da invenção. Primeiros entre tais animais são os mamíferos, por exemplo, humanos, embora a invenção não tenha a intenção de ser limitada assim. Outros animais incluem animais veterinários (vacas, carneiros, porcos, cavalos, cães, gatos e semelhantes).

Os compostos e as composições farmacêuticas dos mesmos podem ser adminis

trados por qualquer meio que consiga sua finalidade pretendida. Por exemplo, a administração pode ser por rotas parenterais, subcutâneas, intravenosas, intramusculares, intraperitoneais, transdérmicas, bucais, intratecais, intracranial, intranasal ou tópicas. Alternativamente, ou simultaneamente, a administração pode ser pela rota oral. A dosagem administrada 30 será dependente da idade, da saúde, e do peso do recebedor, tipo do tratamento simultâneo, caso haja, freqüência do tratamento, e a natureza do efeito desejado.

As preparações farmacêuticas da presente invenção são fabricadas em uma maneira que é por si só conhecida, por exemplo, por meios de processos convencionais de mistura, granulação, fabricação de drágea, dissolução, ou liofilização. Assim, as preparações far35 macêuticas para o uso oral podem ser obtidas pela combinação os compostos ativos com excipientes sólidos, opcionalmente pulverizando a mistura resultante e processando a mistura dos grânulos, após ter adicionado auxiliares adequados, se desejado ou necessário, para obter tabletes ou núcleos de drágeas. Os excipientes adequados são, em particular, preenchimentos tais como sacarideos, por exemplo, Iactose ou sacarose, manitol ou sorbitol, preparações de celulose e/ou fosfatos de cálcio, por exemplo, fosfato tricálcico ou hidrogeno fosfato de cálcio, assim como aglutinantes tais como a pasta de amido, usando, por exemplo, amido de milho, amido de trigo, amido de arroz, fécula de batata, gelatina, tragacanto, metil celulose, hidroxipropilmetilcelulose, carboximetilcelulose de sódio, e/ou polivinil pirrolidona. Se desejado, agentes de desintegração podem ser adicionados tais como os amidos mencionados acima e também carboximetil-amido, polivinil pirrolidona de ligação cruzada, ágar, ou ácido algínico ou um sal do mesmo, tal como alginato de sódio. Os auxiliares são, acima de tudo, agentes reguladores de fluxo e lubrificantes, por exemplo, sílica, talco, ácido esteárico ou sais do mesmo, tais como estearato de magnésio ou estearato de cálcio, e/ou polietileno glicol. Os núcleos de drágeas são fornecidos com revestimentos adequados que, se desejado, são resistentes aos sucos gástricos. Para este propósito, soluções concentradas de sacarídeo podem ser usadas, as quais podem opcionalmente conter goma arábica, talco, polivinil pirrolidona, polietileno glicol e/ou dióxido de titânio, soluções de laca e solventes orgânicos adequados ou misturas de solventes. A fim de produzir revestimentos resistentes aos sucos gástricos, soluções de preparações de celulose adequadas tais como acetilcelulose ftalato ou hidroxipropilmetil-celulose ftalato, são usadas. Substâncias corantes ou pigmentos podem ser adicionados aos tabletes ou aos revestimentos das drágeas, por exemplo, para identificação ou a fim de caracterizar combinações de doses compostas ativas.

Outras preparações farmacêuticas que podem ser usadas oralmente incluem cápsulas duras feitas de gelatina, assim como moles, cápsulas seladas feitas de gelatina e um plastificante tal como o glicerol ou o sorbitol. Cápsulas duras podem conter os compostos ativos sob a forma de grânulos que podem ser misturados com os preenchimentos tais como lactose, aglutinantes tais como amidos, e/ou lubrificantes tais como talco ou estearato de magnésio e, opcionalmente, estabilizantes. Em cápsulas moles, os compostos ativos são, em uma modalidade, dissolvidos ou suspensos em líquidos adequados, tais como óleos gordos, ou parafina líquida. Além disso, estabilizantes podem ser adicionados.

As preparações farmacêuticas possíveis que podem ser usadas retalmente incluem, por exemplo, os supositórios, que consistem em uma combinação de um ou mais dos compostos ativos com uma base de supositório. As bases adequadas de supositório são, por exemplo, triglicerídeos naturais ou sintéticos, ou hidrocarbonetos de parafina. Além disso, éJguatenente possfvet usar cápsulas retais de gelatina as quais consistem em uma combinação dos compostos ativos com uma base. Materiais de base possíveis incluem, por exemplo, triglicerídeos líquidos, polietileno glicóis, ou hidrocarbonetos de parafina.

Formulações adequadas para administração parenteral incluem soluções aquosas dos compostos ativos na forma solúvel em água, por exemplo, sais solúveis em água e soluções alcalinas. Além disso, suspensões dos compostos ativos como suspensões de injeção oleosas adequadas da podem ser administradas. Solventes ou veículos lipofílicos adequados incluem óleos gordos, por exemplo, óleo de sésamo, ou ésteres sintéticos de ácido graxo, por exemplo, oleato de etila ou triglicerídeos ou polietileno glicol-400. As suspensões de injeção aquosa podem conter substâncias que aumentam a viscosidade da suspensão incluem, por exemplo, carboximetil celulose de sódio, sorbitol, e/ou dextrano. Opcionalmente, a suspensão pode igualmente conter estabilizantes.

As composições tópicas desta invenção são formuladas em uma modalidade como óleos, cremes, loções, pomadas e semelhantes pela escolha de veículos adequados. Os veículos adequados incluem os óleos vegetais ou minerais, petrolato branco (parafina mole branca), gorduras ou óleos de cadeia ramificada, gorduras animais e álcool de alto peso molecular (maior do que C12). Os veículos podem ser aqueles em que o ingrediente ativo é solúvel. Emulsificantes, estabilizantes, umectantes e antioxidantes podem igualmente ser incluídos assim como agentes que dão cor ou fragrância, se desejado. Adicionalmente, os realçadores de penetração transdérmica podem ser empregados nestas formulações tópicas. Exemplos de tais realçadores podem ser encontrados nas patentes americanas nos. 3.989.816 e 4.444.762.

Cremes podem ser formulados a partir de uma mistura de óleo mineral, cera de abelha auto-emulsificante e água em que mistura o ingrediente ativo, dissolvido em uma pequena quantidade de um óleo tal como o óleo de amêndoa, é misturado. Um exemplo típico de tal creme é um que inclui aproximadamente 40 partes de água, aproximadamente 20 partes de cera de abelha, aproximadamente 40 partes de óleo mineral e aproximadamente 1 parte de óleo de amêndoa.

As pomadas podem ser formuladas misturando uma solução do ingrediente ativo em um óleo vegetal tal como óleo de amêndoa com a parafina mole morna e permitindo a mistura esfriar. Um exemplo típico de tal pomada é uma que inclui aproximadamente 30% de óleo de amêndoa e aproximadamente 70% de parafina mole branca por peso.

As loções podem convenientemente ser preparadas dissolvendo o ingrediente ativo, em um álcool de alto peso molecular adequado tal como propileno glicol ou polietileno glicol.

Os seguintes exemplos são ilustrativos, mas não limitantes, do método e das composições da presente invenção. Outras modificações e adaptações adequadas da variedade de .condições e de parâmetros encontrados normalmente na terapia clínica e que são óbvios àqueles habilitados na arte estão dentro do espírito e escopo da invenção.

EXEMPLO 1

6-CLORO-4'-(3-CLORO-FEN I L)-2'- (2,2-DIMETIL-PROPIL)-5-FLÚOR-2-OXO-1,2- DIHIDRO-SPIRO[INDOL-3,3t-PIRROLIDINA]-5'-ÁCIDO CARBOXÍLICO(3,4-DIHIDRÓXIB(JTIL)-AM IDA

1H NMR (300 MHz1 CD3OH), δ 7.70 (d, 1H, J=8.4 Hz), 7.40-7.20 (m, 3H), 7.09 (m, 1H), 6.88 (d, 1H, J=6.0 Hz), 5.22 (d, 1H, J=11.4 Hz), 4.39 (m, 1H), 4.11 (d, 1H, J=11.1 Hz), 5 3.65-3.32 (m, 9H), 1.85 (m, 1H), 1.60 (m, 1H), 1.41 (m, 1H), 1.19 (m, 1H), 0.84 (s, 9H). EXEMPLO 2

6-CLORO-4'-(3-CLORO-FENIL)-2'-(2,2-DIMETIL-PROPIL)-5-FLÚOR-2-OXO-1,2- DIHIDRO-SPIRO[INDOL-3,3-PIRROLIDINA]-5'-ÁCIDO CARBOXÍLICO (2,3-DIHIDROXIPROPIL)-AMIDA

1H NMR (300 MHz, CD3OH), δ 7.74 (d, 1H, J=7.5 Hz), 7.35-7.15 (m, 3H), 7.11 (m,

1H), 6.88 (d, 1H, J=6.0 Hz), 5.22 (d, 1H, J=11.4 Hz), 4.33 (m, 1H), 4.28 (d, 1H, J=10.5 Hz),

3.67 (m, 2H), 3.65-3.32 (m, 4H), 2.05 (m, 1H), 1.90 (m, 1H), 1.56 (m, 1H), 0.87 (s, 9H).

EXEMPLO 3

6-CLORO-4'-(3-CLORO-FENIL)-2'-(2,2-DIMETIL-PROPIL)-5-FLÚOR-2-OXO-1,2-

DIHIDRO-SPIRO [INDOL-3,3’-PIRROLIDINA]-5'-ÁCIDO CARBOXÍLICO (3,5-DIHIDROXIPENTIL)-AMIDA HO

Cl

F

OH

H

1H NMR (300 MHz1 CD3OH), δ 7.72 (d, 1 Η, J=8.4 Hz), 7.35-7.15 (m, 3H), 7.10 (m, 1H), 6.88 (d, 1H, J=6.0 Hz), 5.23 (d, 1H, J=11.1 Hz), 4.65 (m, 1H), 4.13 (d, 1H, J=1 1.4 Hz), 3.61 (m, 2H), 3.65-3.32 (m, 5H), 2.02 (m, 1H), 1.93 (m, 1H), 1.56 (m, 3H), 1.15 (m, 1H), 0.92 (s, 9H).

5

EXEMPLO 4

6-CLORO-4'-(3-CLORO-FENIL)-2'-(2,2-DIMETIL-PROPIL)-5-FLÚOR-2-OXO-1,2- DIHIDRO-SPIRO [INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]- 5-ÁCIDO CARBOXÍLICO[2-(3-HIDROXICICLOPENTIL)-ETIL]-AMIDA

(m, 2H), 2.96 (m, 1H), 2.21-1.12 (m, 1H), 0.85 (s, 9H).

EXEMPLO 5

6-CLORO-4'-(3-CLORO-FENIL)-2'-(2,2-DIMETIL-PROPIL)-5-FLÚOR-2-OXO-1,2- DIHIDRO-SPIRO [INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5’-ÁCIDO CARBOXÍLICO [2-(3-HIDRÓXI15 CICLOPENTIL)-ETIL]-AMIDA

Cl

HCl

1H NMR (300 MHz, CD3OH), δ 7.69 (d, 1H, J=8.4 Hz), 7.40-7.20 (m, 3H), 7.10 (m, 10 1H), 6.86 (m, 1H), 5.24 (d, 1H, J=11.1 Hz), 4.35 (d, 1H, J=8.4 Hz), 4.09 (m, 1H), 3.61-3.32 1H NMR (300 MHz1 CD3OH), δ 7.69 (d, 1Η, J=8.4 Hz), 7.40-7.20 (m, 3H), 7.10 (m, 1H), 6.86 (m, 1H), 5.24 (d, 1H, J=11.1 Hz), 4.48 (d, 1H, J=8.4 Hz), 4.12 (m, 1H), 3.64-3.32 (m, 2H), 2.96 (m, 1H), 2.20-1.10 (m, 11H), 0.85 (s, 9H).

EXEMPLO 6

5 6-CLORO-4' - (3-CLORO-FENIL)-2'-(2,2-DIMETIL-PROPIL)-5-FLÚOR-2-OXO-l,2-

DIHIDRO-SPIRO [INDOL-S.S^PIRROLIDINAl-^-ÁCIDO CARBOXÍLICO [2(3-HIDROXICICLOPENTIL)-ETIL]-AMIDA

1H NMR (300 MHz1 CD3OH), δ 7.69 (d, 1H, J=8.4 Hz), 7.40-7.20 (m, 3H), 7.10 (m, 1H), 6.86 (m, 1H), 5.24 (d, 1H, J=11.1 Hz), 4.47 (d, 1H, J=8.4 Hz), 4.11 (m, 1H), 3.65-3.32 (m, 2H), 2.96 (m, 1H), 2.20-1.10 (m, 11H), 0.91 (s, 9H).

EXEMPLO 7

6-CLORO-4'-(3-CLORO-FENIL)-2'-(2,2-DIMETIL-PROPIL)-5-FLÚOR-2-OXO-l,2- DIHIDRO-SPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5'-ÁCIDO CARBOXÍLICO [2(3-HIDROXICICLOPENTIL)-ETIL]-AMIDA 1H NMR (300 MHz1 CD3OH), δ 112 (d, 1 Η, J=8.4 Hz), 7.38-7.22 (m, 3H), 7.10 (m, 1H), 6.87 (m, 1H), 5.23 (d, 1H, J=11.1 Hz), 4.48 (d, 1H, J=8.4 Hz), 4.12 (m, 1H), 3.56-3.25 (m, 2H), 2.98 (m, 1H), 2.20-1.10 (m, 11H), 0.86 (s, 9H).

EXEMPLO 8

6-CLORO-4'-(3-CLORO-4-FLÚOR-FENIL)-2'-(2,2-DIMETIL-PROPIL)-5-FLÚOR-2-

OXO-l,2-DIHIDRO-SPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5'-ÁCIDO CARBOXÍLICO (4,5- DIHIDROXI-PENTIL)-AMIDA

1H NMR (CD30D, 300 MHz), δ 7.73 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.41 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.14 (d, J=6.7 Hz1 2H), 5.25 (d, J=11.3 Hz, 1H), 4.49 (d, J=6.6 Hz, 1H), 4.15 (d, J=6.4 Hz, 1H), 3.48-3.10 (m, 5H), 1.94 (dd, J=8.1, 15.4 Hz, 1H), 1.70-1.10 (m, 5H), 0.92 (s, 9H).

EXEMPLO 9

6-CLORO-4' - (3-CLORO-4-FLÚOR-FENIL) - 2' - (2,2-DIMETIL-PROPIL) - 5- FLÚOR-2-OXO-I, 2-DIHIDRO-SPIRO [INDOL-3,3' - PIRROLIDINA] - 5' - ÁCIDO CARBOXÍLICO (3 - MORPHOLIN-4- IL-PROP IL) - AMIDA 1H NMR (CD30D, 300 MHz), δ 7.82-7.19 (m, 4Η), 6.90 (d, J=5.56, 1 Η), 5.39 (d, J=9.9 Hz1 1H), 4.55 (d, J=6.9 Hz1 1H), 4.28 (d, J=9.3 Hz1 1H), 4.20-3.85 (m, 4H), 3.70-3.40 (m, 2H), 3.25-3.00 (m, 4H), 2.20-1.85 (m, 3H), 1.69 (d, J=15.3 Hz1 2H), 0.934 (s, 9H), 0.70 (t, J=11.3 Hz1 1H).

EXEMPLO 10

6-CLORO-4'-(3-CLORO-2-FLÚOR-FENIL)-2'-(2,2-DIMETIL-PROPIL)-5-FLÚOR-2- OXO-I.2-DIHIDRO-SPIRO [INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5'-ÁCIDO CARBOXÍLICO(4- HIDROXI-3-HIDROXIMETIL-BUTIL)-AMIDA

H1 (300 MHz CD30D), δ 8.56 (s br, 1H), 7.68 (t, J=6.6 Hz1 1H), 7.42 (t, J=7.2 Hz1 1H), 7.25 (t, J=7.8 Hz, 1H), 7.05 (d, J=8.7 Hz1 1H), 6.95 (d, J=6.0 Hz1 1H), 5.22 (d, J=10.5 Hz, 1H), 4.54 (d, J=10.5 Hz, 1H), 4.34-4.31 (m, 1H), 3.51-3.49 (m, 4H), 3.36-3.32 (m, 2H), 2.08 (dd, J=15.3, 7.5 Hz, 1H), 1.53-1.49 (m, 2H), 1.33 (dd, J=15.3, 2.7 Hz, 1H), 0.93-0.89 (m, 1H), 0.86 (s, 9H).

EXEMPLO 11 H1 (300 MHz CD30D), δ 8.56 (s br, 1 Η), 7.65 (t, J=6.6 Hz1 1H), 7.45 (t, J=7.2 Hz1 1H), 7.26 (t, J=7.8 Hz1 1H), 7.01 (d, J=8.7 Hz1 1H), 6.95 (d, J=6.0 Hz1 1H), 5.14 (d, J=10.5 Hz1 1H), 4.51 (d, J=10.5 Hz1 1H), 4.26 (m, 1H), 3.55-3.50 (m, 2H), 3.37-3.31 (m, 3H), 2.08- 2.02 (m, 1H), 1.71-1.45 (m, 2H), 1.35-1.23 (m, 3H), 0.86 (s, 9H).

EXEMPLO 12

6-CLORO-4'-(3-CLORO-2-FLÚOR-FENIL)-2'-(2,2-DIMETIL-PROPIL)-5-FLÚOR-2- OXO-l,2-DIHIDRO-SPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5'-ÁCIDO CARBOXÍLICO(3,4-

DIHIDROXI-BUTIL)-AMIDA (MI-419)

OH

H1 (300 MHz CD30D), δ 8.55 (s br, 1H), 7.66 (t, J=6.6 Hz, 1H), 7.42 (t, J=7.8 Hz1 1H), 7.28-7.23 (m, 2H), 7.01 (d, J=8.7 Hz1 1H), 6.95 (d, J=6.0 Hz1 1H), 5.20 (d, J=10.5 Hz1 1H), 4.53 (d, J=10.5 Hz, 1H), 4.26 (m, 1H), 3.52 (m, 1H), 3.40-3.33 (m, 4H), 2.03 (m, 1H), 1.71-1.45 (m, 2H), 1.35-1.28 (m, 1H), 0.86 (s, 9H).

EXEMPLO 13

6-CLORO-4'-(3-CLORO-FENIL)-2'-(2,2-DIMETIL-PROPIL)-5-FLÚOR-2-OXO-l,2- DIHIDRO-SPIRO [INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5'-ÁCIDO CARBOXÍLICO (2 MORFOLINA-4- L-ETIL)-AMIDA r?

1H NMR (300 MHz1 CD3OH), δ 7.74 (d, 1 Η, J=7.5 Hz), 7.35-7.15 (m, 3H), 7.11 (m, 1H), 6.88 (d, 1H, J=6.0 Hz), 5.22 (d, 1H, J=11.4 Hz), 4.55 (d, 1H, J=9.6 Hz), 4.24 (d, 1H, J=6.3 Hz), 4.20-3.85 (m, 4H), 3.70-3.40 (m, 4H), 3.25-3.00 (m, 4H), 2.09 (m, 1H), 1.27 (m, 1H), 0.934 (s, 9H).

EXEMPLO 14

6-CLORO-4'-(3-CLORO-FENIL)-2'-(2,2-DIMETIL-PROPIL)-5-FLÚOR-2-OXO-1,2- DIHIDRO-SPIRO[INDOL-PIRROLIDINA-ÁCIDO CARBOXÍLICO (3 MORFOLINA-4-ILPROPIL)-AMIDA

1H NMR (CD30D, 300 MHz), δ 7.72 (d, 1H, J=8.4 Hz), 7.38-7.22 (m, 3H), 7.10 (m, 1H), 6.87 (m, 1H), 5.23 (d, 1H, J=11.1 Hz), 4.55 (d, J=6.9 Hz, 1H), 4.28 (d, J=9.3 Hz, 1H), 4.20-3.85 (m, 4H), 3.70-3.40 (m, 2H), 3.25-3.00 (m, 4H), 2.20-1.85 (m, 4H), 1.69 (d, J=15.3 Hz, 2H), 0.934 (s, 9H).

EXEMPLO 15

6-CLORO-4'-(3-CLORO-FENIL)-2'-(2,2-DIMETIL-PROPIL)-5-FLÚOR-2-OXO-1,2- DIHIDRO-SPIRO[INDOL-3,31-PIRROLIDINA]-5'-ÁCIDO CARBOXÍLICO (4,5-DIHIDROXIPENTIL)-AMIDA 1H NMR (CD30D, 300 MHz), δ 7.69 (d, 1 Η, J=8.4 Hz), 7.40-7.20 (m, 3Η), 7.10 (m, 1H), 6.86 (m, 1H), 5.24 (d, 1H, J=11.1 Hz), 4.51 (d, J=10.5 Hz1 1H), 4.26 (m, 1H), 3.55-3.50 (m, 2H), 3.37-3.31 (m, 3H), 2.08-2.02 (m, 2H), 1.71-1.45 (m, 2H), 1.35-1.23 (m, 3H), 0.86 (s, 9H).

EXEMPLO 16

6-CLORO-4'-(3-CLORO-FENIL)-2'-(2,2-DIMETIL-PROPIL)-5-FLÚOR-2-OXO-1,2- DIHIDRO-SPIRO [INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5'-ÁCIDO CARBOXÍLICO (4 HIDROXI-3- HIDROXIMETIL-BUTIL)-AMIDA

OH

1H NMR (300 MHz, CD3OH), & 7.69 (d, 1H, J=8.4 Hz), 7.40-7.20 (m, 3H), 7.10 (m, 1H), 6.86 (m, 1H), 5.24 (d, 1H, J=11.1 Hz), 4.54 (d, J=10.5 Hz, 1H), 4.34-4.31 (m, 1H), 3.51- 3.49 (m, 4H), 3.36-3.32 (m, 2H), 2.08 (dd, J=15.3, 7.5 Hz, 1H), 1.53-1.49 (m, 2H), 1.33 (dd, J=15.3, 2.7 Hz, 1H), 0.93-0.89 (m, 1H), 0.86 (s, 9H).

EXEMPLO 17

(2'R, 3S,3";S, 4'R, 5'R) 6-CLORO-4'-(3-CLORO-4-FLÚOR-FENIL)-2'-(2.2-DIMETILPROPIL)-5-FLÚOR-2-OXO-l,2-DIHIDRO-SPIRO[INDOL-3,3’-PIRROLIDINA]-5'-ÁClDO CARBOXÍLICO (3,4-DIHIDROXI-BUTIL)-AMIDA (MI-319) Fórmula: C27H3ICI2F2N3O4-HCI (sal de HCL) 1H NMR (300 MHz1 MeOD), δ 8.44 (m, 1H), 7.70 (d, 1H, J=8.4 Hz), 7.41 (m, 1H), 7.14 (m, 2H), 6.90 (d, 1H, J=6.0 Hz), 5.20 (d, 1H, J=11.1 Hz), 4.47 (d, 1H, J=8.1 Hz), 4.14 (d, 1H, J=10.8 Hz), 3.47 (m, 4H), 1.91 (dd, 1H, J=15.6, 8.4 Hz), 1.57 (m, 1H), 1.43 (m, 1H), 1.21 (dd, 1H, J=15.6, 1.8 Hz), 0.92 (s, 9H); 13C 5 NMR (75 MHz, MeOD), δ 176.28, 166.52, 157.03, 153.19, 139.65, 130.67, 129.58, 129.48, 128.46, 128.40, 124.54, 124.44, 122.58, 122.33, 121.41, 121.17, 117.21, 1 16.93, 113.37, 113.03, 112.41, 69.69, 66.05, 64.36, 62.93, 61.91, 55.48, 42.25, 36.99, 32.59, 29.84, 28.40. EXEMPLO 18 (MI-219)

OH

EXEMPLO 19

6-CLORO-4'-(3-CLORO-4-FLUORFENIL)-2'-CICLOPENTILMETIL-5-FLÚOR-2-

OXO-1,2-DIHID RO-SPIRO [INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5'-ÁCIDO CARBOXÍLICO (3,4-

DIHIDROXI-BUTIL)-AMIDA (MDM2-319-1) 1H NMR (300 MHz, CD30D), δ 7.72 (d, 1Η, J=8.5 Hz), 7.46-7.40 (m, 1H), 7.23- 7.12 (m, 2H), 6.88 (d, 1H, J=6.0 Hz), 5.12 (d, 1H, J=11.3 Hz), 4.39-4.35 (m, 1H), 4.14 (d, IH5 J=11.3 Hz), 3.41-3.28 (m, 5H), 1.92-1.78 (m, 2H), 1.62-1.42 (m, 8H), 1.28 (d, 1H, J=15.8 Hz), 1.10-0.90 (m, 2H).

EXEMPLO 20

(MDM2-319-2)

EXEMPLO 21 (MDM2-319-3)

EXEMPLO 22

6-CLORO-4'-(3-CLORO-4-FLUORFENIL)-2'-CICLOHEXIL-5-FLÚOR-2-OXO-1,2-

DIHIDRO-SPIRO [ΙΝϋΟί-3,3'-Ρ^ΡΟϋΟΙΝΑ]-5'-ΑαθΟ CARBOXÍLICO (3,4-DIHIDROXIBUTIL)-AMIDA (MDM2-319-4) 1H NMR (300 MHz1 CD30D), <S 8.54-8.40 (m, 2H), 7.56 (d, 1H, J=8.4 Hz), 7.31- 7.29 (m, 1H), 7.16-7.11 (m, 2H), 6.82 (d, 1H, J=6.1 Hz), 4.99-4.95 (m, 1H), 4.21-4.01 (m, 2H), 3.39-3.19 (m, 5H), 2.50-2.40 (m, 1H), 2.00-1.83 (m, 2H), 1.63-1.54 (m, 4H), 1.44-1.09 (m, 6H).

EXEMPLO 23

(MDM2-319-5)

EXEMPLO 24

6-CLORO-4'-(3-CLORO-4-FLUORFENIL)-2'-(2,2-DIMETIL-PROPIL)-5-FLÚOR-2- OXO-l,2-DIHIDRO-SPIRO [INDOL-3,3’-PIRROLIDINA]-5'-ÁCIDO CARBOXÍLICO [2 (3- HIDROXI-CICLOPENTIL)-ETIL]-AMIDA (MDM2-319-6)

1H NMR (300 MHz, CD30D), ó 8.52-8.49 (m, 1H), 7.72 (d, 1H, J=8.5 Hz), 7.40 (d, 1H1 J=10.0 Hz), 7.16-7.15 (m, 2H), 6.90 (d, 1H, J=6.0 Hz), 5.27-5.23 (m, 1H), 4.49 (d, 1H, J=8.2 Hz), 4.14-4.07 (m, 2H), 3.24-3.22 (m, 1H), 3.10-3.02 (m, 1H), 1.93-1.83 (m, 2H), 1.75-

1.18 (m, 7H), 1.05-0.93 (m, 1H), 0.92 (s. 9H), 0.85-0.81 (m, 1H).

EXEMPLO 25 (MI-319-7)

EXEMPLO 26

e-CLORO-^S-CLOFKM-FLUORFENIL^-CICLOPENTIL-S-FLÚOR^-OXO-l^DIHIDRO-SPIRO [INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5'-ÁCIDO CARBOXÍLICO (3,4-DIHIDROXIBUTIL)-AMIDA (MI-319-8)

1H NMR (300 MHz1 CD30D), 6 7.68 (d, 1H, J=8.5 Hz), 7.40-7.37 (m, 1H), 7.16- 7.11

(m, 2H), 6.86 (d, 1H, J=6.0 Hz), 5.15 (d, 1H, J=11.6 Hz), 4.27 (d, 1H, J=11.0 Hz), 4.15 (d,

1H, J=11.6 Hz), 3.39-3.24 (m, 5H), 2.30-2.28 (m, 1H), 2.10-2.05 (m, 1H), 1.62-1.31 (m, 7H), 1.15-1.12 (m, 1H), 0.78-0.75 (m, 1H).

EXEMPLO 27

6-CLORO-4'-(3-CLORO-4-FLUORFENIL)-2,-(2,2-DIMETIL-PROPIL)-5-FLÚOR-5'

(4-METIL-PIPERAZINA-1-CARBONIL)-1H-SPIRO[INDOL-3,3’-PIRROLIDINA]-2-ONA (MI-319-9) 1H NMR (300 MHz1 CD30D), δ 7.73-7.70 (m, 1 Η), 7.58-7.51 (m, 1 Η), 7.29-7.19 (m, 2Η), 6.93-6.89 (m, 1Η), 5.83-5.80 (m, 1 Η), 4.70-4.68 (m, 1 Η), 4.44-4.25 (m, 2Η), 3.98 - 3.52 (m, 3Η), 3.36-3.22 (m, 2Η), 2.92-2.85 (m, 3Η), 2.40-1.89 (m, 2Η), 1.20 (d, 1Η, J=15.3 Hz),

0.95-0.90 (m, 9Η).

EXEMPLO 28

(MI-319-10)

EXEMPLO 29 (MI-319-11)

EXEMPLO 30 (ΜΙ-319- 1 1 - A)

EXEMPLO 31 (ΜΙ-319- 12)

EXEMPLO 32

l,-ACETIL-6-CLORO-4'-(3-CLORO-4-FLUORFENIL)-2'-(2,2-DIMETIL-PROPIL)-5- FLÚOR-2-OXO-l,2-DIHIDRO-SPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5'-ÁCIDO CARBOXÍLICO (3,4-DIHIDROXI-BUTIL)-AMIDA (MI-319-13) 1H NMR (300 MHz1 CD3CI), 6 8.08 (s, 1Η), 7.19-7.12 (m, 1Η), 6.93-6.77 (m, 4Η), 4.93 (d, 1H, J=10.2 Hz), 4.75 (d, 1H, 10.2 Hz), 4.00-3.98 (m, 1H), 3.78-3.30 (m, 5H), 2.80- 2.77 (m, 1H), 2.23 (s, 3H), 1.76-1.64 (m, 1H), 1.56-1.52 (m, 2H), 0.92 (s, 9H).

EXEMPLO 33

6-CLORO-4'-(3-CLORO-4-FLUORFENIL)-2'-(2,2-DIMETIL-PROPIL)-5-FLÚOR-2-

OXO-r-OXI-l,2,4’,5'-TETRAHIDRO-SPIRO[INDOL-3,3'-PIRROL]-5’-ÁCIDO CARBOXÍLICO (3,4-DIHIDROXI-BUTIL)-AMIDA (MI-319-14)

1H NMR (300 MHz, CD3CI), 6 7.35-7.27 (m, 1H), 7.09-7.07 (m, 1H), 6.92-6.89 (m, 1H), 6.79-6.75 (m, 2H), 5.55 (d, 1H, J=11.0 Hz), 4.20 (d, 1H, J=11.0 Hz), 3.67-3.65 (m, 2H), 3.44-3.32 (m, 3H), 2.80 (d, 1H, J=13.1 Hz), 1.80 (d, 1H, J=13.1 Hz), 1.70-1.60 (m, 2H), 0.84 (s, 9H).

EXEMPLO 34

{[6-CLORO-4'-(3-CLORO-4-FLUORFENIL)-2'-(2,2-DIMETIL-PROPIL)-5-FLÚOR-2- OXO-l,2-DIHIDRO-SPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5'-CARBONILA]-AMINA}- ÁCIDO ACÉTICO

(MI-319-15)

1H NMR (300 MHz, CD30D), δ 7.64 (d, 1H, J=8.4 Hz), 7.38 (d, 1H, J=6.2 Hz), 7.27- 7.21 (m, 1Η), 7.10-7.07 (m, 1 Η), 6.90-6.84 (m, 1Η), 5.08 (d, 1Η, J=9.9 Hz), 4.22-3.88 (m, 4H), 1.76-1.68 (m, 1H), 1.12-1.06 (m, 1H), 0.84 (s, 9H).

EXEMPLO 35 (Ml-319-16)

EXEMPLO 36

6-CLORO-4' - (3-CLORO-4-FLÚORFENIL) - 2' - (2,2-DIMETIL-PROPIL) - 5- FLÚOR-2-OXO-I, 2-DIHIDRO-SPIRO [INDOL-3,3’ - PIRROLIDINA] - 5' - ÁCIDO CARBOXÍLICO (2-IMIDAZOL-l-IL-ETIL) - AMIDA (Ml-319-17)

1H NMR (300 MHz1 CD30D), δ 8.99 (s, 1H), 7.78 (d, 1H, J=8.4 Hz), 7.50-7.45 (m, 2H), 7.37-7.35 (m, 1H), 7.19-7.11 (m, 2H), 6.89 (d, 1H, J=6.0 Hz), 5.32 (d, 1H, J=11.4 Hz), 4.52 (d, 1H, J=6.8 Hz), 4.41-4.36 (m, 2H), 4.19 (d, 1H, J=11.4 Hz), 3.73-3.31 (m, 2H), 1.99- 1.91 (m, 1H), 1.21-1.16 (m, 1H), 0.92 (s, 9H).

EXEMPLO 37

7- {[6-CLORO-4'-(3-CLORO-4-FLUORFENIL)-2'-(2,2-DIMETIL-PROPIL)-5-FLÚOR2-OXO-l,2-DIHIDRO-SPIRO [INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5'-CARBONIL]-AMINO}-3,5-

DIHIDROXI- ÁCIDO HEPTANÓICO (MI-319-18) 1H NMR (300 MHz1 CD30D), δ 7.60 (d, 1 Η, J=8.4 Hz), 7.37 (d, 1Η, J=7.5 Hz), 7.08- 7.06 (m, 2H), 6.87-6.84 (m, 1H), 4.84 (d, 1H, J=10.2 Hz), 4.15-4.08 (m, 1H), 4.00- 3.96 (m, 2H), 3.80-3.75 (m, 1H), 3.36-3.32 (m, 2H), 2.49-2.43 (m, 2H), 1.65-1.55 (m, 6H), 1.04 (m, 1H), 0.92 (s, 9H).

EXEMPLO 38

6-CLORO~4'-(3-CLORO-4-FLUORFENIL)-2'-(2,2-DIMETIL-PROPIL)-5-FLÚOR-2- OXO-I1 2-DIHIDRO-SPIRO [INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5'-ÁCIDO CARBOXÍLICO (2,3,4- TRIHIDROXI-BUTIL)-AMIDA (MI-319-19)

1H NMR (300 MHz, CD30D), & 7.83-7.66 (m, 1H), 7.30-7.10 (m, 3H), 6.92-6.88 (m,

1H), 5.30-5.11 (m, 1H), 4.48-4.21 (m, 1H), 4.15-3.95 (m, 1H), 3.64-3.60 (m, 2H), 3.51 - 3.47 (m, 2H), 3.32-3.24 (m, 2H), 1.95-1.88 (m, 1H), 1.23-1.13 (m, 1H), 0.92-0.82 (m, 9H). EXEMPLO 39

6-CLORO-4'-(3-CLORO-4-FLÚORFENIL)-2'-(2,2-DIMETIL-PROPIL)-5-FLÚOR-2- OXO-I.2-DIHIDRO-SPIRO [INDOL-3,3’-PIRROLIDINA]-5’-ÁCIDO CARBOXÍLICO (2- GUANI Dl NO-ETI L)-AM IDA (Ml-319-20) 1H NMR (300 MHz1 CD30D), δ 7.69 (d, 1H1 J=8.4 Hz), 7.39 (d, 1H, J=6.7 Hz), 7.14- 7.04 (m, 2H), 6.89 (d, 1H, J=5.8 Hz), 5.24 (d, 1H, J=11.3 Hz), 4.44 (d, 1H, J=8.0 Hz), 3.80- 3.65 (m, 2H), 3.08-3.00 (m, 2H), 1.89-1.87 (m, 1H), 1.71-1.64 (m, 2H), 1.40-1.33 (m, 1H), 0.91 (s, 9H).

EXEMPLO 40

(MI-319-21)

EXEMPLO 41

6-CLORO-4'-(3-CLORO-4-FLUORFENIL)-5-FLÚOR-2'-(2-METIL-PROPENIL)-2- OXO-l,2-DIHIDRO-SPIRO[INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5'-ÁCIDO CARBOXÍLICO (3,4- DIHIDROXI-BUTIL)-AMIDA 1H NMR (300 MHz, CD3CI), δ 8.19-8.1 1 (m, 1Η), 7.28-7.19 (m, 3Η), 6.96-6.85 (m, 2Η), 6.68 (d, 1 Η, J=5.9 Hz), 4.97 (d, 1 Η, J=8.9 Hz), 4.60-4.55 (m, 1H), 4.30-4.27 (m, 1H), 3.82 (d, 1H, J=9.2 Hz), 3.71-3.23 (m, 4H), 1.58-1.54 (m, 5H), 1.46 (s, 3H).

EXEMPLO 42

6-CLORO-4'-(3-CLORO-4-FLUORFENIL)-2'-(2,2-DIMETIL-PROPIL)-5-FLÚOR-2-

OXO-l,2-DIHIDRO-SPIRO [INDOL-3,3'-PIRROLIDINA]-5'-ÁCIDO CARBOXÍLICO (2- UREIDO-ETIL)-AMIDA

1H NMR (300 MHz, CD3OD), δ 7.71 (d, 1H, J=8.4 Hz), 7.43 (d, 1H, J=6.0 Hz), 7.15-

7.12 (m, 2H), 6.93-6.89 (m, 1H), 5.19 (d, 1H, J=11.2 Hz), 4.48 (d, 1H, J=11.2 Hz), 4.16-4.13 (m, 1H), 3.32-3.23 (m, 2H), 2.97-2.89 (m, 2H), 1.95-1.90 (m, 1H), 1.57-1.53 (m, 2H), 1.23-

1.18 (m, 1H), 0.92 (s, 9H).

EXEMPLO 43

(2'R, 3S, 4'R, 5'R)-6-CLORO-N-((S)-3,4-DIHIDROXIBUTIL)-5-FLÚOR-4’- (3- FLUORFENIL)-2'-NEOPENTIL-2-OXOSPIRO [INDOLINA-3,3'-PIRROLIDINA]-5'

CARBOXAMIDA

(MI-519-1)

OH

1H NMR (300 MHz, CD3OD), δ 8.43 (m, 1H), 7.72 (d, 1H, J=8.4 Hz), 7.30-7.15 (m, 1H), 7.06 (d, 2H, J=8.88 Hz), 6.95 (d, 1H, J=7.8 Hz), 6.88 (d, 1H, J=6.0 Hz), 5.28 (d, 1H, J=11.3 Hz), 4.51-4.40 (m, 1H), 4.16 (d, J=11.3 Hz), 3.50-3.20 (m, 5H), 1.93 (dd, 1H, J=8.3, 15.5 Hz), 1.62-1.36 (m, 2H), 1.23-1.13 (m, 1H), 0.92 (s, 9H).

EXEMPLO 44

(2'R, 3S,4'S,5'R)-6-CLORO-4'-(2,3-DIFLUORFENIL)-N-((S)-3,4-DIHIDROXIBUTIL)5-FLÚOR-2'-NEOPENTIL-2-OXOSPIRO [INDOLINA-3,3'-PIRROLIDINA]-5'-CARBOXAMIDA (MI-519-2)

1H NMR (300 MHz, CD3OD), δ 8.47 (m, 1H), 7.73 (d, 1H, J=7.2 Hz), 7.43-7.30 (m, 1H), 7.23-7.15 (m, 2H), 6.89 (d, 1H, J=6.0 Hz), 5.29 (d, 1H, J=11.1 Hz), 4.64 (d, 1H, J=11 -4 Hz), 4.58-4.50 (m, 1H), 3.50-3.20 (m, 5H), 1.93 (dd, 1H, J=8.3, 15.5 Hz), 1.67 - 1.36 (m, 2H), 1.23-1.13 (m, 1H), 0.92 (s, 9H).

EXEMPLO 45

(2'R, 3S,4'R, 5'R)-6-CLORO-4’-(3,4-DIFLÚORFENIL)-N((S)-3,4-DIHIDROXIBUTIL)5-FLÚOR-2'-NEOPENTIL-2-OXOSPIRO [INDOLINA-S.^-PIRROLIDINAJ-õ^CARBOXAMIDA (MI-519-3)

1H NMR (300 MHz, CD3OD), δ 8.43 (m, 1H), 7.73-7.69 (m, 1H), 7.27-1.10 (m, 2H),

6.97-6.94 (m, 1H), 6.90 (d, 1H, J=6.0 Hz), 5.26-5.23 (m, 1H), 4.49 (d, 1H, J=7.5 Hz), 4.16-

4.13 (m, 1H), 3.50-3.15 (m, 5H), 1.96-1.88 (m, 1H), 1.62-1.40 (m, 2H), 1.23-1.13 (m, 1H), 0.92 (s, 9H).

EXEMPLO 46 (2'R, 3S,4’S, 5'R)-6-CLORO-4'-(2,5-DIFLUORFENIL)-N-((S)-3,4-DIHIDROXIBUTIL)5-FLÚOR-2'-NEOPENTIL-2-OXOSPIRO [INDOLINA-3,3'-PIRROLIDINA]-5'-CARBOXAMIDA (MI-519-5)

OH

1H NMR (300 MHz, CD3OD), 6 8.49 (m, 1H), 7.71 (d, 1H, J=7.2 Hz), 7.45-7.40 (m, 1H), 7.15-7.00 (m, 2H), 6.89 (d, 1H, J=6.0 Hz), 5.23 (d, 1H, J=11.l Hz), 4.63 (d, 1H, J=1 1.4 Hz), 4.58-4.50 (m, 1H), 3.50-3.20 (m, 5H), 1.93 (dd, 1H, J=8.3, 15.5 Hz), 1.67 - 1.36 (m, 2H),

1.18 (dd, 1H, J=1.9, 15.5 Hz), 0.92 (s, 9H).

EXEMPLO 47

(2’R, 3S,4'S,5'R)-6-CLORO-N-((S)-3,4-DIHIDROXIBUTIL)-5-FLÚOR-4,-(2-

FLUORFENIL)-2'-NEOPENTIL-2-OXOSPIRO [INDOLINA-3,3'-PIRROLIDINA]-5' CARBOXAMIDA

(MI-519-6)

OH

1H NMR (300 MHz, CD3OD), δ 8.43 (m, 1H), 7.70-7.64 (m, 2H), 7.40-7.18 (m, 2H), 7.01-6.94 (m, 1H), 6.85 (d, 1H, J=6.0 Hz), 5.25 (d, 1H, J=11.3 Hz), 4.62 (d, 1H, J=12 Hz), 4.55-4.52 (m, 1H), 3.50-3.20 (m, 5H), 1.91 (dd, 1H, J=8.3, 15.5 Hz), 1.62-1.32 (m, 2H), 1.18 (dd, 1H, J=1.8, 15.3 Hz), 0.92 (s, 9H).

EXEMPLO 48

(2'R, 3S,4'R, 5,R)-6-CLORO-N-((S)-3,4-DIHIDROXIBUTIL)-5-FLÚOR-4'-(4- FLUORFENIL)-2'-NEOPENTIL-2-OXOSPIRO [INDOLINA-3,3'-PIRROLIDINA]-5'

CARBOXAMIDA (ΜΙ-519-7)

OH

1H NMR (300 MHz1 CD3OD), δ 8.39 (m, 1Η), 7.70 (d, 1 Η, J=8.5 Hz), 7.25-7.21 (m, 2H), 7.03-6.96 (m, 2H), 6.87 (d, 1H, J=6.0 Hz), 5.26 (d, 1H, J=11.3 Hz), 4.48 (m, 1H,), 4.12 (d, J=11.4 Hz), 3.50-3.20 (m, 5H), 1.92 (dd, 1H, J=8.3, 15.5 Hz), 1.62-1.32 (m, 2H), 1.20 (dd,

1H, J=2.0, 15.3 Hz), 0.92 (s, 9H).

EXEMPLO 49

INIBIÇÃO DO CRESCIMENTO CELULAR

Uma vantagem principal de moléculas pequenas não peptídeo inibidoras sobre inibidores a base de peptídeo é sua permeabilidade de célula superior. É previsto que inibido10 res de não-peptídeo poderosos da interação p53-MDM2 serão eficazes na inibição de crescimento da célula e na divisão em células cancerosas com uma forma do tipo selvagem p53 através da estimulação da atividade de p53. Além disso, eles são previstos para terem seletividade nas células cancerosas com uma perda de p53 ou uma forma mutante, nãofuncional de p53. Para testar estas previsões, um ensaio de crescimento de célula foi de15 senvolvido usando linhas de células de câncer de próstata humano LNCaP (p53 do tipo selvagem) e PC-3 (p53 nulo). Os efeitos tóxicos dos compostos da invenção foram testados.

As células foram semeadas em 96 placas de cultura de célula de fundo bem liso em uma densidade das células 3-4x103 células/poço e incubadas na presença dos compostos por 4 dias. A taxa de inibição do crescimento da célula depois que o tratamento com con20 centrações crescentes dos compostos foi determinada usando WST-8 (2 (2-metoxi-4- nitrofenil)-3 (4-nitrofenil)-5-(2,4disulfofenil)-2H-sal monossódico de tetrazólio (Dojindo Molecular Technologies Inc., Gaithersburg, Mariland). WST-8 foi adicionado em uma concentração final de 10% a cada poço e as placas foram incubadas a 37°C por 2-3 horas. A absorvência das amostras foi medida em 450 nm em um leitor da placa (Dispositivo Molecular25 TECAN ULTRA). A concentração dos compostos que inibiram o crescimento da célula por 50% (IC50) foram calculados comparando a absorvência nas células não tratadas e nas células tratadas com os compostos. Segundo as indicações da Tabela 2, os compostos da invenção foram aproximadamente 5-fold que a aproximadamente 50-fold mais eficazes na inibição do crescimento da célula em células de LNCaP p53-positivo em comparação às células de PC3 p53-negativo.

Os compostos da invenção foram testados similarmente contra as linhas de célula do câncer do cólon HCTI16 (p53 do tipo selvagem), e HT-29 (p53 mutante). Como mostrado na Tabela 2, a maioria dos compostos testados exibiu uma potência mais elevada para a 5 inibição do crescimento de célula em células de HCT116 de p53-positivo em comparação às células de HCTI16 de p53-negativo, com a diferença a maior em potência sendo cerca de 25 fold.

Desde que as células normais também têm o p53 tipo selvagem, um interesse potencial no desenvolvimento dos inibidores da interação p53-MDM2 como novas drogas con10 tra o câncer é que elas podem ser não-seletivas e igualmente ativas em matar células normais assim como em matar células cancerosas. Os compostos serão avaliados em células epiteliais da próstata humana normal (PrEC) com o p53 do tipo selvagem para confirmar se mostram uma boa seletividade para células cancerosas.

Tabela 2

Composto IC50 ± SD LNCaP PC3 HCTl 16 HCTl 16 (μΜ)* ICj0 IC50 p53WT p53KO (Ki ± SD) (μΜ) (μΜ) ICso IC50 (μΜ) (μΜ) (μΜ) MDM2-319 0.076 0.2738 15.4 0.7174 11.83 (0.0063) 0.1839 9.08 0.6145 12.2 0.077 0.2291 I.35 0.2466 14.23 (0.006) 0.2289 II.61 0.52 12.75 0.064 ±0.04 ±3.3 ±0.24 ± 1.29 (0.005) 0.092 0.115 0.122 0.13 0.18 0.17 0.16 0.10 MDM2-319-1 0.194 0.2612 HCTl 16 0.9085 12.66 0.072 0.3602 1.364 10.39 MDM2-319-2 175 3.474 14.39 15.46 22.24 (16.43) 3.378 19.64 21.3 19.49 >80 4.005 19.58 8.508 25.44 3.61 ± 17.87 ± 15.08 ± 22.39 ± 0.3 3.01 6.4 2.97 MDM2-319-3 0.37 1.758 16.65 3.813 13.84 (0.034) 1.241 17.45 4.109 24.78 0.45 0.8472 22.16 2.826 16.72 0.23 1.28 ± 18.75 ± 3.58 ± 18.44 ± 0.4 2.97 0.67 5.67 MDM2-319-4 0.71 1.417 18.53 5.03 13.13 (0.066) 1.294 23.38 5.801 26.48 1.16 0.8902 25.6 2.413 13.39 0.46 1.21 ± 22.5 ± 4.41 ± 17.6 ± 0.29 3.61 1.77 7.6 MDM2-319-5 0.055 0.6020 9.47 0.9927 10.52 0.040 0.4653 5.553 1.286 5.39 0.6341 8.711 1.502 8.403 0.56 ± 7.91 ±2 1.23 ± 8.1 ±2.5 0.08 0.2 MDM2-319-6 0.59 2.583 21.4 5.452 14.29 0.55 1.223 20.83 7.41 16.06 Flu 1.931 14.15 5.957 14.58 1.91 ± 18.7 ± 4 6.26 ± 14.97 ± 0.6 1.0 0.9 Ml-319-7 39.33 2.17 39.74 8.22 >30 1.917 34.29 7.954 >30 Ml-319-8 0.34 0.9631 30.66 4.114 30.95 0.53 0.8928 20.72 4.732 25.48 0.6625 18.43 2.738 22.69 1.46 ± 23.27 ± 3.86 ± 26.3 ± 1.13 6.5 1.02 4.2 Ml-319-9 3.58 2.866 20.91 7.48 9.711 2.7661.7 5.547 9.198 8.189 5 6.09 4.631 4.52 2.46 ± 11.12 ± 7.1 ±2.3 7.47 ± 0.61 8.5 2.66 Ml-319-10 0.22 0.7764 10.47 1.411 11.58 0.26 0.8283 10.36 1.947 9.84 0.4493 8.074 1.088 5.454 0.68 ± 9.63 ± 1.48 ± 8.9 ± 0.2 1.35 0.4 3.1 MI-319-11 5.13 2.846 17.29 13.5 13.38 5.39 3.078 14.71 15.82 18 5.11 4.219 24.24 24.89 24.68 3.38 ± 18.7 ± 18.4 ± 18.85 ± 0.73 4.9 5.9 5.45 Ml-319-11-A 2.24 0.3078 1.765 2.153 3.966 1.64 0.5313 2.754 2.816 2.627 0.4624 4.024 0.9753 4.182 0.43 ± 2.84 ± 1.98 ± 3.59 ± 0.11 1.1 0.9 0.84 Ml-319-i 2 2.30 1.974 22.35 12.37 13.45 2.96 2.571 20.89 13.2 17.84 1.931 13.31 4.365 14.13 2.15 x 18.85 ± 9.97 ± 15.14 ± 0.35 4.85 4.87 2.36 Ml-319-13 5.87 3.663 17.2 3.227 32.64 5.04 2.316 14,48 6.368 35.05 4.85 20.28 10.98 33.02 3.6 ± 17,32 ± 6.85 ± 33.57 x 1.26 2.9 3.8 1.29 Ml-319-14 2.04 4.221 40.08 8.008 >30 1.66 2.63 40.2 9.266 >30 1.979 >30 5.738 >30 2.94 ± 7,6? ± 1,1 1.7 MI 19-15 0.35 4,522 >30 12.13 >30 0.18 4.125 >30 12.89 >30 6.113 >30 13.89 >30 4.92 ± 12.97 ± 1.05 0,88 MI-319-I6 0.85 (Flu) 24,07 >30 >30 >30 0.76 (Flu) MI-319-17 0.39 1.098 14 2.096 25.13 0.49 1,548 22.02 3.792 22.33 1,511 23.63 3.148 25.14 Ml-319-18 3.51 >30 >30 >30 >30 3,57 >30 >30 >30 >30 Ml-319-19 0.50 1.235 30,68 2,68 >30 0.49 2.398 >30 5.981 >30 1,2 41.65 4.596 77.64 Ml-319-20 27,44 V V >30 UJ O O 31.59 I 66.12 93.54 >100 Ml-319-23 2.838 21.87 4.402 11.76 1.836 14.07 3.884 13.25 Cálculo de Ki: MDM2 [10nM]; F-6[1nM]; Nova amostra da proteína MDM2: Kd: 0.88 ± 0.41 nM (equação hiperbólica; usando 1 nM 6F)

Kd: 2.22 ± 0.93 nM (lote de Klotz; usando 1 nM 6F)

EXEMPLO 50

EFEITOS DOS INIBIDORES MDM2 NA EXPRESSÃO DE P53 E DE SEUS PRODUTOS DE GENE MDM2 E P21 ALVOS

As células cancerosas são tratadas com os compostos do teste ou 0.1% DMSO por 24 horas. As células são colhidas pela tripsinização e lavadas com a solução salina de fosfato frio, pH 7.5 (Invitrogen, Carlsbad, CA). As células são Iisadas por 30 minutos no tampão de Iise gelado como gelo (50 mM Tris (pH 7.5), 150 mM de NaCI, 1 mM de EDTA (pH 8.0),

25 mM de fluoreto de sódio, 1% NP-40 e 0.1% SDS) contendo 2 mM de ortovanadato de sódio, 1 mM de fluoreto de fenilmetilsulfonil e coquete inibidor de protease (Roche Applied

Science, Indianapolis, IN). Em seguida, os extratos da célula são centrifugados a 12,OOOxg a 4°C por 10 minutos para obter Iisados clarificados. A proteína é estimada pela corante BioRad. As Iisados de célula que contêm 35 /vg de proteína são redissolvidos em um gel de trisglicina a 4-20% (Invitrogen, Carlsbad, CA) e transferidos em membranas de poli(vinilideno 10 difluoreto). A imunodetecção das proteínas na membrana de transferência é executada pelo uso de anticorpos monoclonais de rato anti-p53 (Ab-6, Oncogene Research Products, Boston, MA), anti-MDM2 (SMP14, Santa Cruz Biotchnology, Santa Cruz, CA) e anti-p21 (BD Biosciences, San Díego, CA). O anticorpo para o /?-actínio (Sigma, St Louis, MO) é usado para avaliar o carregamento da proteína. Quando as linhas celulares do câncer do cólon 15 RKO (p53 tipo selvagem) e HT-29 (p53 mutante) são tratadas por 24 horas com os compostos da invenção, espera-se que os compostos induzirão a acumulação de p53 e de seus produtos de gene alvos somente nas células RKO que expressam o p53 do tipo selvagem.

EXEMPLO 51

MORTE CELULAR E APOPTOSE INDUZIDA PELOS INIBIDORES DE MDM2 As linhas celulares do câncer do cólon RKO (p53 tipo selvagem) e HT-29 (p53 mu

tante) e células normais do fibroblasto CCD-18Co são tratadas com as doses crescentes dos compostos da invenção por 4 dias em placas de Petri de seis poços. Os ensaios da exclusão do corante azul Tripano são executados para determinar a habilidade dos inibidores de induzir a morte celular. Após 4 dias de tratamento, as células flutuantes e aderentes são 25 colhidas e manchadas com 0.2% de uma solução de azul tripano (Sigma, St Louis, MO). Cada tratamento é executado em três exemplares e pelo menos 100 células são contadas. As células manchadas de azul ou as células não saudáveis morfologicamente são classificadas como células inoperantes. Para avaliar a apoptose, o índice de DNA sub-diplóide nas células tratadas com ou sem inibidores de teste são analisados pela mancha de iodeto de 30 propídio (PI). Após a lavagem uma vez com PBS frio, as células são fixadas em álcool etílico a 70% por 1 dia a -20°C. As células de fixadas com etanol são lavadas então duas vezes com PBS e manchadas com uma solução de corante que contém iodeto de propídio (PI) em 50 A/g/ml e o RNAse A em 100 //g/ml em PBS, por 20 minutos no escuro a temperatura ambiente. A aquisição de células e, análise do índice de DNA sub-diplóide é executada pela 35 citometria do fluxo usando o software CeIIQuest. Espera-se que somente as células cancerosas que expressam o p53 do tipo selvagem se submeterão à apoptose em resposta à administração dos compostos. EXEMPLO 52

EFEITO DOS INIBIDORES DE MDM2 NA PROGRESSÃO DO CICLO CELULAR EM CÉLULAS DE CÂNCER DE CÓLON

A progressão do ciclo celular é avaliada nas linhagens celulares de câncer de cólon 5 RKO (p53 do tipo selvagem) e HT-29 (p53mutante) e células normais do fibroblasto de cólon CCD-18Co pela determinação de células da fase S pela incorporação de bromodeoxiuridina (BrdU) seguida pela coloração com 0 anticorpo anti-BrdU marcado com FITC e pelo conteúdo total de DNA pela coloração com 7-aminoactinomicina D (7-DAA) de acordo com as instruções do fabricante (BD Biosciences, San Jose, CA). Resumidamente, células normais e 10 cancerosas, após a incubação durante a noite, são tratadas com ou sem os compostos de teste por 22 horas, seguidas por 2 horas adicionais de incubação com 10 μΜ de BrdU. As células são colhidas, fixadas e coradas com anti-BrdU marcado com FITC e 7-AAD. A distribuição do ciclo celular é analisada por citometria de fluxo. As células são adquiridas e os dados analisados usando o software CeIIQuest (BD Biosciences). É esperado que os com15 postos da invenção irão induzir uma depleção dependente de dose da fase S em células cancerosas RKO e em células normais do fibroblasto de cólon CCD-I8C0, ambos os quais expressam o p53 do tipo selvagem. Também é esperado que os compostos não tenham nenhum efeito apreciável na progressão do ciclo celular das células HT-29 que expressam o p53mutante.

EXEMPLO 53

PROTEÇÃO DE CÉLULAS NORMAIS DA QUIMIOTERAPIA COM INIBIDORES DE

MDM2

Células epiteliais normais da próstata PrEC são semeadas em placas de 6 poços e incubadas com os compostos da invenção por 24 horas, então 1 μΜ TAXOL (paclitaxel) é

adicionado por 2 dias. O azul Tripano é usado para determinar a viabilidade celular. Os dados são esperados mostrar que quando as células epiteliais normais da próstata são prétratadas com os compostos da invenção, as células são protegidas do TAXOL.

Tendo agora completamente descrito a invenção, será compreendido por aqueles com habilidade na arte que os mesmos podem ser executados dentro de uma escala ampla 30 e equivalente de condições, formulações, e outros parâmetros sem afetar o escopo da invenção ou qualquer modalidade da mesma. Todas as patentes, pedidos de patente e publicações mencionadas aqui são completamente incorporadas aqui por referência em sua totalidade.

Claims (54)

1. Composto, CARACTERIZADO pelo fato de ter a Fórmula I: <formula>formula see original document page 95</formula> ou um sal ou um pró-fármaco farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: X é CH1 O, N, ou S, em que R8 é ausente se X é O ou S; Y é O, S, ou NR'; Ri. R2, R3, R4, Rs, Re, e R7 são independente H ou alquila opcionalmente substituída, cicloalquila, alquenila, cicloalquenila, alquinila, arila, heterocíclico, CO2R', OCOR', CONR1R", NRnCOR', NRSO2R", SO2NR1R", (C=NR1)NRnR'", ou NR’R"; ou R7 forma um arila, cicloalquila, ou grupo heterocíclico com um de R5 ou R6; R8 é H ou alquil, cicloalquila, alquenila, cicloalquenila, alquinila, arila, heterocíclico, CO2R', OCOR', CONR'R", SO2NR1R", ou (C=NR1)NRmR"' opcionalmente substituídos; R9 representa um grupo 6-cloro e um 5-flúor; e cada R', R" e R"' é independente H ou alquil, cicloalquila, alquenila, cicloalquenila, alquinila, arila, ou heterocíclico opcionalmente substituído; ou R' e R", ou R" e R"', formam um anel; em que um de R3 e de R4 é CONRR', e um de R e R' é um grupo cicloalquil-alquila ou monociclo-heterocicloalquila opcionalmente substituída ou grupo dihidroxialquil amino não contendo um grupo hidroxil na posição 3 do grupo alquila.

2. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de ter a Fórmula Il ou a Fórmula III: <formula>formula see original document page 96</formula> ou um sal ou um pró-fármaco farmaceuticamente aceitável dos mesmos.

3. Composto, de acorodo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de ter a Fórmula IV: <formula>formula see original document page 96</formula> ou um sal ou um pró-fármaco farmaceuticamente aceitável do mesmo.

4. Composto, de acordo com a reivindicação 3, CARACTERIZADO pelo fato de ter a Fórmula V ou a Fórmula VI: <formula>formula see original document page 96</formula> ou um sal ou um pró-fármaco farmaceuticamente aceitável do mesmo.

5. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de ter a Fórmula VII: <formula>formula see original document page 97</formula> ou um sal ou um pró-fármaco farmaceuticamente aceitável do mesmo.

6. Composto, de acordo com a reivindicação 5, CARACTERIZADO pelo fato de ter a Fórmula Vlll ou a Fórmula IX: <formula>formula see original document page 97</formula> ou um sal ou um pró-fármaco farmaceuticamente aceitável dos mesmos.

7. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que um de Ri e de R2 é um arila ou heteroarila opcionalmente substituída.

8. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que um de R1 e R2 é cicloalquila, alquil de cadeia reta ou ramificada, amida ou éster.

9. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que um de R5 e de R6 é C3.18 alquila, arila, ou heteroarila.

10. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de ter a Fórmula X: <formula>formula see original document page 98</formula> ou um sal ou um pró-fármaco farmaceuticamente aceitável do mesmo, em que: R10 é hidrogênio, e R11 é um grupo cicloalquil-alquila ou monociclo-heterocicloalquila opcionalmente substituída ou grupo dihidroxialquil amino não contendo um grupo hidroxila na posição3 do grupo alquila; ou R10 e o R11 formam juntos um grupo monociclo-heterocicloalquila opcionalmente substituído.

11. Composto, de acordo com a reivindicação 10, CARACTERIZADO pelo fato de ter uma das Fórmulas XI-XXVI: <formula>formula see original document page 99</formula> ou um sal ou um pró-fármaco farmaceuticamente aceitável dos mesmos.

12. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de ter a Fórmula XXVII ou a Fórmula XXVIII: <formula>formula see original document page 99</formula> ou um sal ou um pró-fármaco farmaceuticamente aceitável dos mesmos, em que: R10 é hidrogênio, e R11 é um grupo cicloalquil-alquila ou monociclo-heterocicloalquila opcionalmente substituída ou um grupo dihidroxialquil amino não contendo um grupo hidroxila na posição 3 do grupo alquila; ou R10 e R11 formam juntos um grupo monociclo-heterocicloalquila opcionalmente substituída.

13. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de ter a Fórmula XLVI11: <formula>formula see original document page 100</formula> ou um sal ou um pró-fármaco farmaceuticamente aceitável do mesmo.

14. Composto, de acordo com a reivindicação 13, CARACTERIZADO pelo fato de ter uma das Fórmulas XLIX-LXIV: <formula>formula see original document page 101</formula> ou um sal ou um pró-fármaco farmaceuticamente aceitável dos mesmos.

15. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de ter a Fórmula LXV: <formula>formula see original document page 101</formula> ou um sal ou um pró-fármaco farmaceuticamente aceitável do mesmo, onde: R10 é hidrogênio, e R11 é um grupo cicloalquil-alquila ou monociclo-heterocicloalquila opcionalmente substituída ou um grupo dihidroxialquil amino não contendo um grupo hidroxila na posição 3do grupo alquila; ou R10 e R11 formam juntos um grupo monociclo-heterocicloalquila opcionalmente substituído.

16. Composto, de acordo com a reivindicação 15, CARACTERIZADO pelo fato de ter uma das Fórmulas LXVI e LXVII: <formula>formula see original document page 102</formula> ou um sal ou um pró-fármaco farmaceuticamente aceitável dos mesmos.

17. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de ser selecionado do grupo consistindo de: <formula>formula see original document page 102</formula> <formula>formula see original document page 103</formula> <formula>formula see original document page 104</formula> <formula>formula see original document page 105</formula> <formula>formula see original document page 106</formula> <formula>formula see original document page 107</formula> <formula>formula see original document page 108</formula> <formula>formula see original document page 109</formula> <formula>formula see original document page 110</formula> <formula>formula see original document page 111</formula> <formula>formula see original document page 112</formula> <formula>formula see original document page 113</formula> <formula>formula see original document page 114</formula> <formula>formula see original document page 115</formula> <formula>formula see original document page 116</formula>

18. Composto, CARACTERIZADO pelo fato de ser selecionado do grupo consistindo de: <formula>formula see original document page 117</formula> <formula>formula see original document page 118</formula> <formula>formula see original document page 119</formula>

19. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de ser: <formula>formula see original document page 119</formula>

20. Composição farmacêutica, CARACTERIZADA pelo fato de compreender um composto conforme definido nas reivindicações 1 ou 18 e um veículo farmaceuticamente aceitável.

21. Uso de um composto, conforme definido nas reivindicações 1 ou 18, CARACTERIZADO pelo fato de ser na fabricação de um medicamento para inibição do crescimento e/ou divisão celular, indução de apoptose e/ou indução da interrupção do ciclo celular em uma célula.

22. Uso de um composto, conforme definido nas reivindicações 1 ou 18, CARACTERIZADO pelo fato de ser na fabricação de um medicamento para tornar uma célula sensível a agente(s) adicional(is).

23. Uso, de acordo com a reivindicação 22, CARACTERIZADO pelo fato de adicionalmente compreender colocar em contato a célula com agente(s) adicional(is).

24. Uso, de acordo com a reivindicação 23, CARACTERIZADO pelo fato de que o referido agente adicional é um agente quimioterapêutico.

25. Uso, de acordo com a reivindicação 23, CARACTERIZADO pelo fato de que o referido agente adicional é radiação.

26. Uso de um composto, conforme definido nas reivindicações 1 ou 18, CARACTERIZADO pelo fato de ser na fabricação de um medicamento para tratar, melhorar, ou prevenir uma desordem..

27. Uso, de acordo com a reivindicação 26, CARACTERIZADO pelo fato de adicionalmente compreender a administração de um agente adicional.

28. Uso, de acordo com a reivindicação 27, CARACTERIZADO pelo fato de que o referido agente adicional é um agente quimioterapêutico.

29. Uso, de acordo com a reivindicação 27, CARACTERIZADO pelo fato de que o referido agente adicional é radiação.

30. Uso, de acordo com a reivindicação 26, CARACTERIZADO pelo fato de que a referida desordem é uma doença hiperproliferativa.

31. Uso, de acordo com a reivindicação 30, CARACTERIZADO pelo fato de que a referida doença hiperproliferativa é câncer.

32. Uso, de acordo com a reivindicação 27, CARACTERIZADO pelo fato de que o referido composto conforme definido na reivindicação 1 é administrado antes do(s) referido(s) agente(s) adicional(is).

33. Uso, de acordo com a reivindicação 27, CARACTERIZADO pelo fato de que o referido composto conforme definido na reivindicação 1 é administrado após o(s) referido(s) agente(s) adicional(is).

34. Uso, de acordo com a reivindicação 27, CARACTERIZADO pelo fato de que o referido composto conforme definido na reivindicação 1 é administrado simultaneamente com o(s) referido(s) agente(s) adicional(is).

35. Uso de um composto, conforme definido nas reivindicações 1 ou 18, CARACTERIZADO pelo fato de ser na fabricação de um medicamento para inibição da interação entre p53 ou de proteínas relacionadas a p53 e MDM2 ou de proteínas relacionadas a MDM2 em uma célula.

36. Uso de um composto, conforme definido nas reivindicações 1 ou 18, CARACTERIZADO pelo fato de ser na fabricação de um medicamento para inibição do crescimento de uma célula hiperproliferativa contendo p53 ou proteínas relacionadas a p53 funcionais.

37. Uso de um composto, conforme definido nas reivindicações 1 ou 18, CARACTERIZADO pelo fato de ser na fabricação de um medicamento para tratar, melhorar, ou prevenir uma doença hiperproliferativa indicada pela expressão de p53 ou de proteínas relacionadas a p53 funcionais.

38. Uso de um composto, conforme definido nas reivindicações 1 ou 18, CARACTERIZADO pelo fato de ser na fabricação de um medicamento para para tornar uma célula normal resistente aos agentes quimioterapêuticos ou tratamentos.

39. Uso, de acordo com a reivindicação 38, CARACTERIZADO pelo fato de que a referida célula normal compreende p53 do tipo selvagem.

40. Uso de um composto, conforme definido nas reivindicações 1 ou 18, CARACTERIZADO pelo fato de ser na fabricação de um medicamento para proteger células normais em um animal com uma doença hiperproliferativa dos efeitos colaterais tóxicos de agentes quimioterapêuticos ou tratamentos.

41. Uso, de acordo com a reivindicação 40, CARACTERIZADO pelo fato de que as referidas células normais compreendem p53 do tipo selvagem.

42. Uso, de acordo com a reivindicação 40, CARACTERIZADO pelo fato de que a referida doença hiperproliferativa é câncer.

43. Uso, de acordo com a reivindicação 42, CARACTERIZADO pelo fato de que o referido câncer compreende uma mutação ou uma deleção de p53.

44. Uso de um composto, conforme definido nas reivindicações 1 ou 18, CARACTERIZADO pelo fato de ser na fabricação de um medicamento para o tratamento, melhora, ou prevenção de uma desordem ou de uma condição causada pela administração de um agente quimioterapêutico ou tratamento, compreendendo a co-administração com um agente quimioterapêutico ou um tratamento.

45. Uso, de acordo com a reivindicação 44, CARACTERIZADO pelo fato de que a referida desordem ou condição é mucosite, estomatite, xerostomia, uma desordem gastrintestinal ou calvície.

46. Uso, de acordo com a reivindicação 44, CARACTERIZADO pelo fato de que o referido composto conforme definido nas reivindicações 1 ou 18 é administrado antes da administração do referido agente quimioterapêutico ou tratamento.

47. Kit, CARACTERIZADO pelo fato de que compreende um composto conforme definido nas reivindicações 1 ou 18.

48. Kit, de acordo com a reivindicação 47, CARACTERIZADO pelo fato de que adicionalmente compreende instruções para administrar o referido composto em um animal.

49. Kit, de acordo com a reivindicação 47, CARACTERIZADO pelo fato de que adicionalmente compreende agente(s) adicional(is).

50. Kit, de acordo com a reivindicação 49, CARACTERIZADO pelo fato de que o referido agente adicional é um agente quimioterapêutico.

51. Kit, de acordo com a reivindicação 48, CARACTERIZADO pelo fato de que as referidas instruções são para administrar o referido composto a um animal que tem uma doença hiperproliferativa.

52. Kit, de acordo com a reivindicação 51, CARACTERIZADO pelo fato de que a referida doença hiperproliferativa é câncer.

53. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de ser selecionado do grupo consistindo de: <formula>formula see original document page 123</formula>

54. Composto, CARACTERIZADO pelo fato de ser selecionado do grupo consistindo de: <formula>formula see original document page 123</formula> <formula>formula see original document page 124</formula> <formula>formula see original document page 125</formula>