BRPI0716812A2 - Pro drogas polimericas direcionadas contendo ligantes multifuncionais - Google Patents

Pro drogas polimericas direcionadas contendo ligantes multifuncionais Download PDF

Info

Publication number
BRPI0716812A2
BRPI0716812A2 BRPI0716812-8A BRPI0716812A BRPI0716812A2 BR PI0716812 A2 BRPI0716812 A2 BR PI0716812A2 BR PI0716812 A BRPI0716812 A BR PI0716812A BR PI0716812 A2 BRPI0716812 A2 BR PI0716812A2
Authority
BR
Brazil
Prior art keywords
formula
original document
document page
see original
group
Prior art date
Application number
BRPI0716812-8A
Other languages
English (en)
Inventor
Zhao Hong
Reddy Prasanna
Belen Rubio Maria
Original Assignee
Enzon Pharmaceuticals, Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Enzon Pharmaceuticals, Inc filed Critical Enzon Pharmaceuticals, Inc
Publication of BRPI0716812A2 publication Critical patent/BRPI0716812A2/pt

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
    • C08G65/34—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from hydroxy compounds or their metallic derivatives
    • C08G65/48—Polymers modified by chemical after-treatment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G73/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a linkage containing nitrogen with or without oxygen or carbon in the main chain of the macromolecule, not provided for in groups C08G12/00 - C08G71/00
    • C08G73/06—Polycondensates having nitrogen-containing heterocyclic rings in the main chain of the macromolecule
    • C08G73/10—Polyimides; Polyester-imides; Polyamide-imides; Polyamide acids or similar polyimide precursors
    • C08G73/12—Unsaturated polyimide precursors
    • C08G73/121—Preparatory processes from unsaturated precursors and polyamines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/74—Synthetic polymeric materials
    • A61K31/785—Polymers containing nitrogen
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/549—Sugars, nucleosides, nucleotides or nucleic acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/55—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound the modifying agent being also a pharmacologically or therapeutically active agent, i.e. the entire conjugate being a codrug
    • A61K47/551—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound the modifying agent being also a pharmacologically or therapeutically active agent, i.e. the entire conjugate being a codrug one of the codrug's components being a vitamin, e.g. niacinamide, vitamin B3, cobalamin, vitamin B12, folate, vitamin A or retinoic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/645—Polycationic or polyanionic oligopeptides, polypeptides or polyamino acids, e.g. polylysine, polyarginine, polyglutamic acid or peptide TAT
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/65—Peptidic linkers, binders or spacers, e.g. peptidic enzyme-labile linkers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/6807—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug or compound being a sugar, nucleoside, nucleotide, nucleic acid, e.g. RNA antisense
    • A61K47/6809—Antibiotics, e.g. antitumor antibiotics anthracyclins, adriamycin, doxorubicin or daunomycin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • C07K5/0215—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing natural amino acids, forming a peptide bond via their side chain functional group, e.g. epsilon-Lys, gamma-Glu
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06017—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/06034—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms
    • C07K5/06052—Val-amino acid
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06086—Dipeptides with the first amino acid being basic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0815—Tripeptides with the first amino acid being basic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/08—Tripeptides
    • C07K5/0819—Tripeptides with the first amino acid being acidic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G64/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a carbonic ester link in the main chain of the macromolecule
    • C08G64/20—General preparatory processes
    • C08G64/26—General preparatory processes using halocarbonates
    • C08G64/28—General preparatory processes using halocarbonates and phenols
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
    • C08G65/02—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring
    • C08G65/32—Polymers modified by chemical after-treatment
    • C08G65/329—Polymers modified by chemical after-treatment with organic compounds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08L—COMPOSITIONS OF MACROMOLECULAR COMPOUNDS
    • C08L71/00—Compositions of polyethers obtained by reactions forming an ether link in the main chain; Compositions of derivatives of such polymers
    • C08L71/02—Polyalkylene oxides

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Polyethers (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)

Description

PRO DROGAS POLIMÉRICAS DIRECIONADAS CONTENDO LIGANTES
MULTIFUNCIONAIS
REFERÊNCIA CRUZADA COM PEDIDOS RELACIONADOS
Este pedido de patente reivindica prioridade do pedido de patente US No. 60/844.943 depositado em 15 de setembro de 2006, cujos ensinamentos são aqui incorporados por referência.
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO
Sabe-se que muitos dos agentes anti-câncer de baixo peso molecular apresentam toxidez significante. Ao longo dos anos, varias tentativas de se reduzir a toxidez e melhorar a eficácia destes agentes anti-câncer de baixo peso molecular foram apresentadas.
Uma tentativa de se reduzir a toxidez e melhorar a eficácia destes agentes anti-câncer de baixo peso molecular foi direcionada a sistemas de transporte de drogas focada em agentes direcionadores. Por exemplo, o agente direcionador, tal como anticorpo de cadeia simples, peptídeos RGD ou ácido fólico, pode direcionar o transporte do agente terapêutico e melhorar seu efeito terapêutico. Ao mesmo tempo, o transporte direcionado de quimioterápicos muito potentes reduz sua toxidez. A estratégia foi validada, por exemplo, pela aprovação de Mylotarg® a gentuzumab zogamicina da Wyeth, um anticorpo humanizado anti CD33 ligado a citotoxina caliqueamicina, para leucemia mieloide aguda (AML) pelo FDA.
Tradicionalmente, os imunoconjugados incluem três componentes: um agente direcionador tal como um anticorpo monoclonal, uma citotoxina e um ligante.
Entretanto, esta estratégia requer que o anticorpo mantenha um alto grau de sua afinidade de ligação a seu antígeno depois da conjugação com a droga. Mais ainda, os conjugados anticorpo-droga precisam ser estáveis em tampões ou plasma e não devem liberar a toxina prematuramente durante o trajeto. Eles precisam também ser internalizados considerando que o anticorpo se liga ao seu antígeno na superfície da célula. Mesmo assim, a molécula da droga precisa ser liberada intacta dentro da célula tumoral desejada numa velocidade também desejada.
Anticorpos de cadeia simples (SCAs) ou anticorpos antígeno-ligantes de cadeia simples incluem o domínio de ligação de um anticorpo completo com apenas um quarto de seu tamanho. Entretanto, SCA pode se ligar ao antígeno especificamente com alta afinidade. Uma descrição da teoria e da produção de proteínas antígeno-ligantes de cadeia simples pode ser encontrada, por exemplo, nas patentes US Nos. 4.946.778, 5.260.203, 5.455.030 e 5.518.889. As proteínas antígeno-ligantes de cadeia simples produzidas pelos processos citados nos documentos de patente US acima citados possuem especificidade de ligação e afinidade substancialmente similar ao fragmento Fab correspondente, seus ensinamentos sendo aqui incorporados por referência. Mais recentemente, o documento de patente US No. 6.872.393 revelou polipeptídeos de cadeia simples de oxido de polialquileno. Os ensinamentos de cada uma das patentes a seguir são aqui incorporados por referência.
A despeito das tentativas e avanços, ainda existe a necessidade de se prover sistemas de transporte poliméricos de drogas focados em agentes direcionadores tendo atividade terapêutica desejada e menor toxidez. A presente invenção se concentra nesta necessidade e em outras.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
De modo a sobrepor os problemas acima mencionados e melhorar a tecnologia para transporte de drogas por polímeros, são providos compostos novos e vantajosos que empregam o uso de ambas as tecnologias de agente direcionador e PEGilação assim como técnicas terapêuticas melhoradas. Sendo assim, de acordo com um aspecto da presente invenção são providos compostos de Fórmula (I):
D-(Li)a-L2-(L3)b-D2
A
em que:
Ri é um polímero hidrossolúvel substancialmente não-antigênico;
A é um grupo de proteção ou
D1-(L1)a-L2-(L3)b-D2 .
5
cada Dι é independentemente selecionado dentre porções direcionadoras, grupos funcionais e grupos de saída, preferencialmente porções direcionadoras; cada D2 é independentemente selecionado dentre porções biologicamente ativas, grupos funcionais e grupos de saída, preferêncialmente porções biologicamente ativas;
cada Li é independentemente um ligante permanente ou um ligante lábil, preferêncialmente um ligante permanente; L2 é um ligante multifuncional;
cada L3 é independentemente um ligante permanente ou um ligante lábil, preferêncialmente um ligante lábil; e
(a) e (b) são independentemente zero ou um número inteiro positivo, preferêncialmente zero ou 1.
Em um aspecto da invenção, o resíduo polimérico é um óxido de polietileno que pode ser conjugado tanto a moléculas de droga pequenas quanto a anticorpos de cadeia simples (SCA) por meio de ligantes lábeis e ligantes permanentes por meio de ligantes multifuncionais. Desta maneira, são apresentados compostos que fornecem uma plataforma de transporte SCA-PEG-Ligante-Droga para encaminhamento direcionado de compostos citotóxicos que são moléculas pequenas. Adicionalmente, é vantajoso que a carga de ambos molécula pequena e SCA por local de ligação sejam aumentados em comparação com os conjugados SCA-droga tradicionais. Assim, são apresentadas pro drogas SCA direcionadas que são custo-efetivas e de baixo custo. Mais ainda, as pro drogas da presente invenção proporcionam métodos para regulação da meia-vida de circulação das drogas, por exemplo, com o aumento da meia-vida de circulação, quando desejado, através do uso de ligantes apropriados.
Em um aspecto geral da presente invenção, sem limitação, é descrito na estrutura
abaixo:
Targeting—(permanent linker)—(multifuncional Iinker )—(releasable linker)— Drug Moiety -
Cêeg)
onde: "targeting moiety" = porção direcionadora, "multifuncional linker" = ligante multifuncional, "releasable linker" = ligante lábil e "drug" = droga ,
em que PEG é ligado a ambos SCA e droga, tal como um agente citotóxico, por meio de um ligante multifuncional centralmente posicionado; o ligante com o SCA é permanente enquanto que o ligante com o agente citotóxico é lábil e pode ser configurado para ser estável no sangue, mas facilmente degradado na presença de uma enzima sitio-específica. Em um aspecto preferido, o SCA é ligado por meio de um ligante permanente tal como um contendo um grupo maleiimida e o agente citotóxico por meio de um ligante lábil tal como um ligante peptidila (VaI-Cit) que pode ser especificamente degradado pela captesina B. Em uma modalidade preferida, o agente citotóxico é SN38.
Aspectos adicionais da presente invenção incluem métodos para fazer os polímeros
ativados contendo ligantes multifuncionais, métodos para preparar conjugados contendo os mesmos assim como métodos de tratamento baseados na administração de quantidades eficazes dos conjugados contendo uma porção biologicamente ativa ao paciente (mamífero) com necessidade do mesmo. Ό Uma das vantagens da presente invenção é a de que os sistemas de transporte
poliméricos aqui descritos são estáveis e, assim, aumentam a biodisponibilidade de drogas.
Uma outra vantagem é a de que os sistemas de transporte polimérico podem liberar as drogas intactas dentro das células tumorais alvo.
Ainda outra vantagem é a de que a razão de liberação das drogas pode ser modificada para alcançar uma velocidade desejada.
Uma outra vantagem, ainda, dos sistemas poliméricos correspondendo à presente invenção é a de que eles são apropriados para drogas de baixo pelo molecular e oligonuneotideos tais como RNAs de pequena interferência antisenso (siRNA) ou compostos LNA.
Outras vantagens e vantagens adicionais ficarão evidentes a partir da descrição a
seguir.
Para os fins da presente invenção, o termo "resíduo" deve ser entendido como significando uma parte do composto ao qual se faz referência, i.e. citotoxina, SN38, ligante permanente, ligante multifuncional, ligante lábil, etc. que permanece depois do composto ter sofrido reação de substituição com um outro composto.
Para os fins da presente invenção, o termo "resíduo polimérico" ou "resíduo PEG" deve ser entendido como significando a porção do polímero ou do PEG que permanece depois que este tenha sofrido uma reação com outros compostos, porções, etc.
Para os fins da presente invenção, alquilas substituídas incluem carboxialquilas, aminoalquilas, dialquilaminos, hidroxialquilas e mercaptoalquila; alquenilas substituídas incluem carboxialquenilas, aminoalquenilas, dialquenilaminos, hidroxialquenilas e mercaptoalquenilas; alquinilas substituídas incluem carboxialquinilas, aminoalquinilas, dialquilaminos, hidroxialquinilas e mercaptoalquinilas; cicloalquilas substituídas incluem porções tais como 4-clorociclohexila; arilas incluem porções tais como naftila; arilas substituídas incluem porções tais como 3-bromo fenila; aralquilas incluem porções tais como tolila; heteroalquilas incluem porções tais como etiltiofeno; heteroalquilas substituídas incluem porções tais como 3-metoxitiofeno; alcoxi inclui porções tais como metoxi; e fenoxi inclui porções tais como 3-nitrofenoxi. Halo deve ser entendido como incluindo flúor, cloro, iodo e bromo.
Para os fins da presente invenção "ácido nucléico" ou "nucleotídeo" deve ser entendido como incluindo ácido desoxirribonucléico (DNA), ácido ribonucléico (RNA) tanto de fita simples quanto de fita dupla, a não ser que especificado em contrario, e modificações químicas dos mesmos.
Para os fins da presente invenção, os termos, "uma porção biologicamente ativa" e "um resíduo de porção biologicamente ativa" devem ser entendidos como significando a parte do composto biologicamente ativo que permanece depois do composto ter sofrido uma reação de substituição na qual a porção transportadora foi ligada.
Para fins de facilitar a descrição, e não de maneira limitante, deve ser entendido que o termo "porções biologicamente ativas" seja intercambiável com "drogas", "agentes citotoxicos", "citotoxinas".
Para fins de facilitar a descrição, e não de maneira limitante, deve ser entendido que o termo "moléculas pequenas" seja intercambiável com "compostos farmaceuticamente ativos".
A não ser que definido em contrario, para os fins da presente invenção:
O termo "alquila" deve ser entendido como incluindo, por exemplo, halo-, alcoxi-, e nitro- C1-12 alquilas lineares, ramificadas ou substituídas, C3.8 cicloalquilas substituídas ou cicloalquilas substituídas, etc.;
o termo "substituído/a" deve ser entendido como incluindo a adição ou troca de um ou mais átomos contidos dentro de um grupo funcional ou composto por um ou mais átomos diferentes;
o termo "alquilas substituídas" inclui carboxialquilas, aminoalquilas, dialquilaminos, hidroxialquilas e mercaptoalquilas; o termo "cicloalquilas substituídas" inclui porções tais como 4-clorociclohexila; arilas incluem porções tais como naftila; arilas substituídas incluem porções tais como 3- bromofenila; aralquilas incluem porções tais como toluila; heteroalquilas incluem porções tais como etiltiofeno;
o termo "heteroalquilas substituídas" inclui porções tais como 3-metoxitiofeno; alcoxi inclui porções tais como metoxi; e fenoxi inclui porções tais como 3-nitrofenoxi;
o termo "halo" deve ser entendido como incluindo flúor, cloro, iodo e bromo; e
os termos "quantidades suficientes" e "quantidades eficazes", para os fins da presente invenção, devem ser entendidos como significando uma quantidade que vai alcançar um efeito terapêutico sendo que tal efeito deve ser entendido pelos técnicos no assunto.
BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS
FIG. 1 esquematicamente ilustra métodos sintéticos descritos nos Exemplos 1-5.
FIG. 2 esquematicamente ilustra métodos sintéticos descritos nos Exemplos 6-7.
FIG. 3 esquematicamente ilustra métodos sintéticos descritos nos Exemplos 8-9.
FIG. 4 esquematicamente ilustra métodos sintéticos descritos nos Exemplos 10-14.
FIG. 5 esquematicamente ilustra métodos sintéticos descritos nos Exemplos 15-17.
FIG. 6 esquematicamente ilustra métodos sintéticos descritos nos Exemplos 18-19.
FIG. 7 esquematicamente ilustra métodos sintéticos descritos nos Exemplos 20-23.
FIG. 8 esquematicamente ilustra métodos sintéticos descritos nos Exemplos 24-25.
FIG. 9 esquematicamente ilustra métodos sintéticos descritos nos Exemplos 26-28.
FIG. 10 esquematicamente ilustra métodos sintéticos descritos nos Exemplos 29-32.
FIG. 11 esquematicamente ilustra métodos sintéticos descritos nos Exemplos 33-35.
FIG. 12 esquematicamente ilustra métodos sintéticos descritos nos Exemplos 36-38.
FIG. 13 esquematicamente ilustra métodos sintéticos descritos nos Exemplos 39-40.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO A. PANORAMA
Em um aspecto da presente invenção, são providos compostos de (I): D1-(L1)a-L2-(L3)b-D2
R
ι
A
em que:
Ri é um polímero hidrossolúvel substancialmente não-antigênico; A é um grupo de proteção ou
D1-(L1)a-L2-(L3)b-D2 .
>
cada D, é independentemente selecionado dentre porções direcionadoras, grupos funcionais e grupos de saída, preferêncialmente porções direcionadoras;
cada D2 é independentemente selecionado dentre porções biologicamente ativas, grupos funcionais e grupos de saída, preferêncialmente porções biologicamente ativas;
cada Li é independentemente um ligante permanente ou um Iigante lábil, preferêncialmente um ligante permanente; L2 é um ligante multifuncional;
cada L3 é independentemente um ligante permanente ou um ligante lábil, preferêncialmente ligante lábil; e
(a) e (b) são independentemente zero ou um número inteiro positivo, preferêncialmente zero ou 1.
Em um aspecto preferido da invenção, os sistemas poliméricos de transporte direcionados incluem compostos de Fórmula:
R
A-R1-N
Ll (lia),
A-R1-N
R
ι ■
L3-D2
d2 L1-D1 (Ilb),
L3-D2
A-R1-N
-IN-L-I-U1
d3 R12 (Hc)5
A-R1-N
LrD1 (Hd)
LrD1 (He), (Hg)
A-R1-N
A-R
A-R1-N
(IIh),
U-Do
-L1-D1
(IIi) e
L1-D1
-L3-D3
(Hj).
em que
R2 e R' 2 são independentemente selecionados dentre hidrogênio, Ci_6 alquila, C2-6
alquenila, C2.6 alquinila, C3.19 alquila ramificada, C3.8 cicloalquila, C,_6 alquila substituída, C2- 6 alquenila substituída, C2.6 alquinila substituída, C.v8 cicloalquila substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroraila substituída, Cu6 heteroalquila, Cv6 heteroalquila substituída, Cu6 alcoxi, ariloxi, Cv6 heteroalcoxi, heteroariloxi, C2.6 alcanoila, arilcarbonila, C2-6 alcoxicarbonila, ariloxicarbonila, C2.6 alcanoiloxi, arilcarboniloxi, C2.6 alcanoila substituída, arilcabonila substituída, C2.6 alcanoiloxi substituída, ariloxicarbonila substituída, C2.6 alcanoiloxi substituída e arilcarboniloxi substituída;
(cl), (c2), (c3), (c4), (c5), (c6), (c'6), (c"6), (c7) e (c8) são independentemente zero ou um número inteiro positivo, preferêncialmente zero ou um número inteiro de cerca de 1 a cerca de 10, e mais preferêncialmente zero, 1 ou 2;
(dl), (d2), (d3), (d4), (d5) e (d7) são independentemente zero ou um número inteiro positivo, preferêncialmente zero ou um número inteiro de cerca de 1 a cerca de 10, e mais preferêncialmente zero ou um número inteiro de cerca de 1 a cerca de 4; e todas as outras variáveis são previamente definidas. Em outro aspecto, os sistemas poliméricos aqui descritos são tanto protegidos em um
de seus terminais com um grupo CH3, i.e. mPEG tanto quanto, em outras modalidades, PEGs bis-ativados são providos, tais como os de Fórmula: H
A-R1-N
-L3-D2 -L1-D1
O
ο O
D2-L3^ η H /-L3-D2
)—N—R1—N—( D1-L1-^ \ L1-Di
O O
ο
V-L3-D2 A-R1-NHV O
A-R1-NH
A-R1-NH
L1-D1
HN-L1-D1,
.0 0 D2-L3^ VL3-D2
OVNH-R1-NH^O
D1-L<
.0
D9-L
D1-L1
NH-R1-NH
LrD1,
3-υ2
L1-D1
7°
D2-L3-^i Η / L3-D2
-N-R1-NH-
D1-L1-NH
HN-L
A-R1-NH
LrD1,
Λ
L3-D2
A-R1—N
0 P
L1-D1 .0
ρΛ
L3-D2
A—R1-N
M
O
LrD1,
P
D2-L3- f VlS-D2
-NH-R1-NH-
D1-L1
L1-D1
\
L3-D2
Ο,
K
Dr Li
N—R1—N
Li-D1, Ο.
D2-L3
.0
O
M
Vc/
N—R1-N
D1-L1
M
L3-D2
.0
LrD1,
As-D2
A-R1-NH
D9-L
2-"-3
L3-D2 D2-L3.
,L3-D2
-O
NH-R1-NH
"O'
L3-C 10
A-R1-NH
L3-D9
Do-L
2"L3
Li-D1
D1-L1
NH-R1-NH O.
A-R
R2 N-
L1-D1
-O-L3-D2
-S-L1-D
1,
D1-L1
L3-D5
R2
-N
L1-D1
LrD1 ,
O—L3-D2 —S-L1-D1
R2
-N
O
,0
O-L1-D1
—S-L3-D
D1-L1-O-
3, e D3-L3 S
R2
-N-
-R1—N-
>-0—L1-D1 ^-S-L3-D3.
Outros grupos de proteção opcionais incluem H, NH2, OH, CO2H, C,.6 alcoxi e Cn6 alquila. Grupos de proteção preferidos incluem metoxi e metila.
Na maioria dos aspectos da presente invenção, os polímeros aqui incluídos são geralmente descritos como polímeros substancialmente não-antigênicos. Dentro do gênero de polímeros, óxidos de polialquileno são preferidos e polietileno glicóis (PEGs) são os mais preferidos. Para fins de facilitar a descrição e não de, a invenção é algumas vezes descrita utilizando PEG como o polímero protótipo. Deve ser entendido, entretanto, que o escopo da invenção aplica-se a uma grande variedade de polímeros que podem ser lineares, substancialmente lineares, ramificados, etc.
Em outro aspecto da invenção, as porções biológicas incluem porções contendo - NH2, -OHe-SH.
20
B. LIGANTES MULTIFUNCIONAIS (L2)
Em vista das estruturas da presente invenção, o ligante multifuncional permite ligações (lábil ou permanente) de 3 ou mais componentes, i.e. um agente direcionador, um polímero e um composto citotóxico biologicamente ativo tal como SN38. Um técnico no assunto poderá notar que outras moléculas incluindo pelo menos três grupos funcionais independentes podem também ser utilizadas. Um ligante multifuncional preferido pode ser um resíduo de ácido aspártico ou uma lisina.
L2 tendo pelo menos três sítios funcionais pode ser selecionado dentre: <Μ
I-N
d4
4
(Id),
(Ig), e
em que
R2 e R' 2 são independentemente selecionados dentre hidrogênio, Ci_6 alquila, C2_6 alquenila, C2-6 alquinila, C3.19 alquila ramificada, C3.8 cicloalquila, Cn6 alquila substituída, C2- 6 alquenila substituída, C2-6 alquinila substituída, C3.8 cicloalquila substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, Cn6 heteroalquila, Cu6 heteroalquila substituída, Cu6 alcóxi, arilóxi, Cu6 heteroalcóxi, heteroarilóxi, C2.6 alcanoila, arilacarbonila, C2.6 alcoxicarbonila, ariloxicarbonila, C2.6 alcanoilóxi, arilcarbonilóxi, C2.6 alcanoila substituída, arilcarbonila substituída, C2-6 alcanoilóxi substituída, ariloxicarbonila substituída, C2_6 alcanoilóxi substituída e arilcarbonilóxi substituída;
(cl), (c2), (c3), (c4), (c5), (c6), (c'6), (c"6), (c7) e (c8) são previamente definidos; e (dl), (d2), (d3), (d4), (d5) e (d7) são também previamente definidos. Modalidades preferidas incluem: O.
Qs s
o. O
H /*"
1 ' \ ,
HNl
-N-
O C. POLÍMEROS HIDROSSOLÚVEIS SUBSTANCIALMENTE NÃO- ANTIGÊNICOS (R1)
As pro drogas da presente invenção incluem um resíduo polimérico Ru preferêncialmente polímeros hidrossolúveis e substancialmente não-antigênicos. Exemplos apropriados de tais polímeros incluem óxidos de polialquileno (PAO) tais como polietileno glicóis. Alguns polímeros preferidos são polietileno glicóis tais como mPEG. Uma lista não- limitante de tais polímeros inclui assim homopolímeros de óxidos de polialquileno tais como poletileno glicol (PEG) ou polipropileno glicóis, poliois polioxietilenados, copolímeros dos mesmos e copolimeors bloco dos mesmos.
A porção polimérica dos compostos aqui descritos possui um peso molecular médio de cerca de 2.000 a cerca de 100.000 daltons, preferêncialmente de cerca de 5.000 a cerca de 60.000 daltons. Em alguns aspectos, o óxido de polialquileno pode ser de cerca de 5.000 a cerca de 25.000, e preferêncialmente de cerca de 12.000 a cerca de 20.000 daltons quando proteínas ou oligonucleotídeos são ligados ou alternativamente de cerca de 20.000 a cerca de 45.000 daltons, e preferêncialmente de cerca de 30.000 a cerca de 40.000 daltons quando compostos farmaceuticamente ativos (moléculas pequenas tais como as tendo peso molecular médio menor do que cerca de 1.500 daltons) são empregadas nos compostos aqui descritos.
Polietileno glicol (PEG) é geralmente representado ela estrutura: -O-(CH2CH2O)n-
onde (n) é um numero inteiro de cerca de 10 a cerca de 2.300, e é dependente do número de braços poliméricos quando polímeros multi-braços são utilizados. Será entendido que o polímero hidrossolúvel será funcionalizado para ligação com ligantes. Alternativamente, a porção do resíduo polietileno glicol (PEG) da invenção pode ser representada pela estrutura:
-Y7I-(CH2CH2O)n-CH2CH2Y7I-. -Y71-(CH2CH2O)n-CH2C(=Y72)-Y71-,
-Y7i-C(=Y72)-(CH2)a71 -Y73-(CH2CH2O)n-CH2CH2-Y73-(CH2)a7i-C(=Y72)-Y7i-, -Y71-(CR7IR72)a72-Y73-(CH2)b71-O-(CH2CH2O)n-(CH2)b71-Y73-(CR71R72)a72-Y7,-, -Y71-(CH2CH2O)n-CH2CH2-, -Y71-(CH2CH2O)n-CH2Q=Y72)-,
-C(=Y72)-(CH2)a7l-Y73-(CH2CH20)n-CH2CH2-Y73-(CH2)a71-C(=Y72)-,e -(CR7IR72)a72-Y73-(CH2)b71-O-(CH2CH2O)n-(CH2)b7rY73-(CR71R72)a72-, em que:
Y7I e Y73 são independentemente O, S, SO, SO2, NR73 ou uma ligação; Y72 é O, S, ou NR74;
R71-74 são independentemente as mesmas porções que podem ser utilizadas para R2; (a71), (a72), e (b71) são independentemente zero ou um número inteiro positivo, preferêncialmente 0-6, e mais preferêncialmente 1; e
(n) é um número inteiro de cerca de 10 a cerca de 2300.
Como um exemplo, o PEG pode ser funcionalizado da seguinte maneira, não- limitante:
-C(=Y74)-(CH2)m-(CH2CH20)n-, -C(=Y74)-Y-(CH2)m-(CH2CH20)n-, -C(=Y74)-NR, ,-(CH2)m-(CH2CH2O)n-, -CR75R76-(CH2)m-(CH2CH2O)n- em que
R75 e R76 são independentemente selecionados dentre of H, Cu6 alquilas, arilas, arilas substituídas, aralquilas, heteroalquilas, heteroalquilas substituídas e C,.6 alquilas substituídas; m é zero ou é um número inteiro positivo, e preferêncialmente 1; Y74 é O ou S; e
η representa o grau de polimerização. Muito embora as pro drogas da presente invenção possam ser formadas utilizando-se qualquer dos polímeros substancialmente não-antigênicos aqui descritos, alguns óxidos de polialquileno preferidos incluem:
CH3O-PEG-O-(CH2)m-CO2H; PEG-NHS;
CH3O-PEG-O-(CH2)m-NR11R12; e CH3O-PEG-O-(CH2)2-S-(CH2)m-C02H; SC-PEG; ou
Quaisquer dos PEGs ativados conhecidos no estado da técnica. Em particular, polietileno glicóis mono-ativados (PEGs), PAOs terminados em Cu4 alquila tais mono-metil-polietileno glicóis (mPEGs) são preferidos quando polímeros mono- substituídos são desejados; óxidos de polietileno bis-ativados são preferidos quando pro drogas dissubstituídas são desejadas.
Polímeros ativados mono- ou di-ácido tais como ácidos PEG ou diácidos PEG são utilizados para proporcionar a ligação desejada. Ácidos PAO apropriados podem ser sintetizados pela conversão de mPEG-OH a um éster etílico. Ver também Gehrhardt, H., e colaboradores, Polymer Bulletin 18: 487 (1987) e Veronese, F.M., e colaboradores, J. Controlled Release 10; 145 (1989). Alternativamente, o ácido PAO pode ser sintetizado pela conversão de um mPEG-OH a um éster /-butilico. Ver, por exemplo, as patentes US Nos. 5.605.976 e US No. 5.965.566. Os ensinamentos destes documentos são aqui incorporados por referência.
Derivados ramificados ou U-PEG são descritos nas patentes US Nos. 5.643.575, 5.919.455, 6.113.906 e 6.566.506, cujos ensinamentos são aqui incorporados por referência. Uma lista não-limitante destes polímeros corresponde aos sistemas poliméricos (i) - (vii) com as seguintes estruturas: O
Il
mPEG—O—C^ C|_|2
H2 ií61 ί- íí \ H Γ
mPEG—O—C. eu
N
H (i), O
H Il
m-PEG-N-C^
CH-(Υ63ΟΗ2)„610(=0)- H / m-PEG—Ν—C
0 (ϋ),
O
Il H
m-PEG-O—C—Ν,
m-PEG-0—C—N' Il H
(CH2)4
,CH-(Y63CH2)„6iC(=0)-
O (iü),
O
m-PEG-0—C—NH \
O
(CH2)w62 N-
C
w61
-(CH2)W64C(=0)-
,(CH2)w63
m-PEG-0—C-N
Il H
O O
Il H
m-PEG-O—C—N
\
(CH2)w62
m-PEG-O—C-N
Il H
HÇ-(Y63CH2)w61C(O)-
,(CH2)w63
o (v), e
O
m-PEG—C-NH
\
(ÇH2)W62
m-PEG—C-N'
Il H
HÇ-(V63CH2)w61 C(=0)-
(CH2)w63
o (Vi)
em que: Yôi-62 são independentemente O, S ou NR6I;
Y63 é O, NR62, S, SO ou SO2
(w62), (w63) e (w64) são independentemente O ou um número inteiro positivo, preferêncialmente de cerca de O a cerca de 10, mais preferencialmente de cerca de 1 a cerca de 6;
(w61) é O ou 1;
mPEG é metóxi PEG
em que PEG é previamente definido e o peso molecular total da porção polimérica é de cerca de 2.000 a cerca de 100000 daltons; e Rói e R62 são independentemente selecionados dentre hidrogênio, C,.6 alquila, C2.6
alquenila, C2.6 alquinila, C3.|9 alquila ramificada, C3.8 cicloalquila, Ci.6 alquila substituída, C2. 6 alquenila substituída, C2.6 alquinila substituída, C3. cicloalquila substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, C,.6 heteroalquila, Cu6 heteroalquila substituída, Cn6 alcóxi, arilóxi, C,.6 heteroalcóxi, heteroarilóxi, C2.6 alcanoila, arilcarbonila, C2_6 alcoxicarbonila, ariloxicarbonila, C2.6 alcanoilóxi, arilcarbonilóxi, C2.6 alcanoila substituída, arilcarbonila substituída, C2.6 alcanoilóxi substituída, ariloxicarbonila substituída, C2.6 alcanoilóxi substituída, e arilcarbonilóxi substituída.
Em ainda outro aspecto, os polímeros incluem PEG-OH multi-braços ou "PEG- estrela", produtos tais como os descritos no catálogo uNOF Corp. Drug Delivery System catalog, Ver. 8, April 2006", cujo conteúdo é aqui incorporado por referência. Os conjugados poliméricos multi-braços apresentam quatro ou mais braços poliméricos e preferêncialmente quatro ou oito braços poliméricos.
Para fins de ilustração e não limitantes, o resíduo de polietileno glicol (PEG) multi- braços pode ser H2C-O-(CH2CH2O)nH
I
HC-0 — (CH2CH2O)nH
CH2
Ο* I
CH2
HC-O — (CH2CH2O)nH
CH2
r*
ο
CH2
HC-O-(CH2CH2O)nH
H2C-O-(CH2CH2O)nH
em que:
(χ) é 0 e um número inteiro positivo, i.e. de cerca de O a cerca de 28; e (n) é o grau de polimerização. Em uma modalidade particular da presente invenção, o PEG multi-braços possui a
estrutura:
H2C-O-(CH2CH2O)nH
HC-O-(CH2CH2O)nH
CH2
ο- ι
CH2
HC-O-(CH2CH2O)nH
CH2
r<
O
CH2
HC-O-(CH2CH2O)nH
H2C-O-(CH2CH2O)nH
em que η é um número inteiro positivo. Em uma modalidade preferida da invenção, os polímeros possuem um peso molecular total de cerca de 5.000 Da a cerca de 60.000 Da, e preferencialmente de 12.000 Da a 40.000 Da.
Em ainda outra modalidade particular, o PEG multi-braços possui a estrutura: 10
15
ou
(OCH2CH2)nOH (OCH2CH2)'nOH
H0-(CH2CH2O)n- HO-(CH2CH2O)r,''
em que η é um número inteiro positivo. Em uma modalidade preferida da invenção, o grau de polimerização para o polímero multi-braços (n) é de cerca de 28 a cerca de 350 para fornecer polímeros tendo um peso molecular total de cerca de 5.000 Da a cerca de 60.000 Da, e preferêncialmente de cerca de 65 a cerca de 270 (12.000-45.000 daltons) para fornecer polímeros tendo peso molecular total de cerca de 12.000 Da a 45.000 Da. Isto representa o número de unidades repetidoras na cadeia polimérica e é dependente do peso molecular do mesmo.
Os polímeros podem ser convertidos a polímeros apropriadamente ativados, utilizando-se técnicas de ativação descritas nas patentes US Nos. 5.122.614 ou 5.808.096. Especificamente, tais PEGs podem ser de Fórmula:
(CHaCH2O)ti,
Hoch^^och^ /;
uVTVu--
^H2CH2
O
j ^CH2CH2OJu- pjjp„
Q--PI-LnH O "2O.
-u O2LJi ^jOCH2 CH2Ju ■
Estrela
ou
O -CH^CHz -(OCHzCHzXi-O ° -CHjZHz ^OCHZCHZJ1,0
Multi-bracos
O -(CH^CH^-CH^H^
ICHiCHjPJlJ-CH2CH2-O-
em que:
(u') é um número inteiro de cerca de 4 a cerca de 455; e até 3 porções terminais do resíduo é/são protegidas com metila ou outra alquila inferior. Em algumas modalidades preferidas, todos os quatro braços do PEG podem ser convertidos em grupos de ativação apropriados, para facilitar a ligação de grupos aromáticos. Tais compostos, antes da conversão, incluem:
H3C-(OCH2CH2)u.\
O
H3C^(OCH2CH2)u^V
,(CH2CH2OW CT CH2CH2^qj_|
CX
(CH2CH2o)u.^CH^
-oh
, (CH2CH2O)u.-^ μ P ^o CH2CH2-
HaC-(OCH2CH2)u^o
^(CH2CH2O)1,
H3C-(OCH2CH2)/° 0H
HnC-
-(OCH2CH2)u,\
HO-
-CH2CH2--(OCH2CH2)u
(CH2CH2O)u,-^ O' 2 2 CH2CH2-
(CH2CH20)-CH2CH2.
OH
-OH
^ (CH2CH2O)u-^
H0^CH2CH2^(OCH2CH2)u ch^-OH
(CH2CH20)-ch2CH2^ CH2CH2--(OCH2CH2)U^ 0H
H3C-(OCH2CH2)u-O
H3C-(OCH2CH2)L
0—(CH2CH2O)U-CH2CH2—OH
-(CH2CH2O)u-CH3
H3C-(OCH2CH2)U-O
H3C-(OCH2CH2)U.-
O
O-(CH2CH2O)u-CH3
O-
-(CH2CH2O)u-CH2CH2-OH H3C-(OCH2CH2)u-O
H3C-(OCH2CH2)u.
-O
O
O-(CH2CH2O)u-CH2CH2-OH
"(CH2CH2O)u'—CH2CH2—OH
HO-CH2CH2-(OCH2CH2)U-O
H3C-(OCH2CH2)u
-O
O
0—(CH2CH2O)u-CH2CH2—OH
O-
"(CH2CH2O)u. CH3
H3C-(OCH2CH2)u.-0
HO-CH2CH2-(OCH2CH2)U-
-0
O-(CH2CH2O)u-CH2CH2-OH
"(CH2CH2O)u-CH3
H3C-(OCH2CH2)u-O
HO-CH2CH2-(OCH2CH2)U.'
-0
0
0—(CH2CH2O)u-CH2CH2-—OH
0-
"(CH2CH2O)u.—CH2CH2—OH
HO-CH2CH2-(OCH2CH2)U-O H3C-(OCH2CH2)u-0
0
O-(CH2CH2O)u-CH2CH2-OH
0-
-(CH2CH2O)u-CH2CH2-OH
HO-CH2CH2-(OCH2CH2)U.-0
HO-CH2CH2-(OCH2CH2)U.
-O
O
O-(CH2CH2O)U-CH2CH2-OH
O-
"(CH2CH2O)u-CH2CH2-OH
As substancias poliméricas aqui incluídas são preferêncialmente hidrossolúveis em temperatura ambiente. Uma lista não-limitante de tais polímeros inclui homopolímeros de oxido de polialquileno, tais como pilietileno glicol (PEG) ou polipropileno glicóis, poliois polioxietilenados, copolímeros dos mesmos e copolímeros bloco dos mesmos, contanto que a solubilidade em água dos copolímeros bloco seja mantida. Em ainda outra modalidade, e como uma alternativa aos polímeros de base PAO, um ou mais materiais não-antigênicos eficazes tais como dextrana, alcoóis polivinílicos, polímeros baseados em carboidrato, hidroxipropilmetacrilamida (HPMA), óxidos de polialquileno, e/ou copolímeros dos mesmos podem ser utilizados. Ver também a patente US No. 6.153.655, cujos ensinamentos são aqui incorporados por referência. Será entendido por um técnico no assunto que o mesmo tipo de ativação pode ser empregada, como descrito aqui para PAOs tais como PEG. Os técnicos no assunto irão ainda notar que a lista a seguir é meramente ilustrativa e que quaisquer materiais poliméricos tendo as qualidades aqui descritas são contemplados. Para os fins da presente invenção "substancialmente ou efetivamente não-antigênico" significa qualquer material conhecido no estado da técnica como sendo não-tóxico e não desencadeando uma resposta imunogênica apreciável em mamíferos.
Em alguns aspectos, polímeros tendo grupos amina terminais podem ser empregados para fazer os compostos aqui descritos. Os métodos para preparar polímeros contendo terminações amino em alta pureza são descritos nos pedidos de patente US Nos. 11/508.507 e 11/537.172, cujos ensinamentos são aqui incorporados por referência. Por exemplo, polímeros contendo azidas reagem com agentes redutores baseados em fosfina, tais como trifenilfosfina ou um agente redutor boroidreto de metal alcalino tal como NaBH4. Alternativamente, polímeros incluindo grupos de saída reagem com sais de amina tais como o sal de potássio de metil-tert-butil imidodicarbonato (KNMeBoc) ou o sal de potássio de di- tert-butil imidodicarbonato (KNBoc2) seguido de desproteção do grupo amino protegido. A pureza dos polímeros contendo aminas terminais formados por estes processos é maior do que cerca de 95% e preferêncialmente maior do que 99%.
Em aspectos alternativos, polímeros contendo grupos de ácidos carboxílicos terminais podem ser empregados nos sistema de transporte poliméricos aqui descritos. Métodos para preparar os polímeros tendo US No. 11/328.662, cujos ensinamentos são aqui incorporados por referência. Os métodos incluem primeiro se preparar um éster de alquila terciário de um óxido de polialquileno seguido da conversão ao derivado de ácido carboxílico do mesmo. A primeira etapa da preparação dos ácidos carboxílicos de PAO do processo inclui formar um intermediário tal como o éster t-butílico do ácido carboxílico óxido de polialquileno. Este intermediário é formado reagindo-se o PAO com um haloacetato de t-butila na presença de uma base tal como t-butóxido de potássio. Uma vez formado o intermediário éster de t-butila, o derivado de ácido carboxílico do óxido de polialquileno pode ser prontamente obtido em pureza que excede 92%, preferêncialmente excedendo 97%, mais preferêncialmente excedendo 99% e ainda mais preferêncialmente excedendo 99,5% de pureza.
5
D. AGENTES DIRECIONADORES (D1)
Agentes direcionadores podem ser ligados aos compostos poliméricos aqui descritos para guiar os conjugados até a área alvo in vivo. Os agentes direcionadores permitem que porções biologicamente ativas tais como compostos farmaceuticamente ativos e oligonucleotídeos tenham eficácia terapêutica na área alvo, i.e. o local do tumor. O transporte direcionado in vivo aumenta o uptake celular destas moléculas para que tenham eficácia terapêutica melhorada. Em certos aspectos, alguns peptídeos penetradores de célula podem ser trocados por uma variedade de peptídeos direcionadores para transporte direcionado ao local do tumor.
'5 Em um aspecto da invenção, a porção direcionadora, tal como um anticorpo de cadeia
simples (SCA) ou anticorpo ligante de antígeno de cadeia simples, anticorpo monoclonal, peptídeos de adesão celular tais como peptídeos RGD e Selectina, peptídeos de penetração celular (CPPs) tais como TAT, Penetratina e (Arg)9, ligas receptoras, moléculas de carboidrato direcionadoras ou lectinas, oligonucleotídeos, derivados de oligonucleotídeo tais como ácidos nucléicos bloqueados (LNA) e aptâmeros, ou semelhantes, permitem que drogas citotóxicas sejam especificamente direcionadas às regiões alvo. Ver Curr Opin Pharmacol. 2006 0ct;6(5):509-14, "Cell-penetrating peptides as vectors for peptide, protein and oligonucleotide delivery"; ver também J Pharm Sei. 2006 Sep;95(9): 1856-72 "Cell adhesion molecules for targeted drug delivery'", cujos ensinamento são aqui incorporados por referência.
As porções direcionadoras podem ser rotuladas com compostos biotinilados, compostos fluorescentes, compostos radiomarcados. Uma marca apropriada é preparada pela ligação de qualquer porção apropriada, e.g., um resíduo de aminoácido, a qualquer isótopo com emissão conhecido no estado da técnica, marcador radio-opaco, marcador de ressonância magnética, ou outros marcadores isotópicos não-radioativos apropriados para imagem por ressonância magnética, marcadores do tipo fluorescente, marcadores exibindo cores do visível e/ou capazes de fluorescer sob ultravioleta, infravermelho ou estimulação eletroquímica, para permitir a imagem do tecido tumoral durante procedimento cirúrgico e assim por diante. Opcionalmente, o marcador diagnostico é incorporado a e/ou ligado a uma porção terapêutica conjugada, permitindo o monitoramento da distribuição terapêutica de um material biologicamente dentro de um paciente animal ou humano.
Em ainda uma modalidade adicional da presente invenção, os conjugados marcados são prontamente preparados por métodos conhecidos no estado da técnica com qualquer marcador apropriado, incluindo, e.g., marcadores radioisotópicos. Simplesmente para fins de exemplo, estes incluem l31Iodo, 123Iodo, 99mTecnecio e/ou 111Indio para produzir agentes radioimunocintigráficos para uptake seletivo em células tumorais in vivo. Por exemplo, existem vários métodos conhecidos no estado da técnica para ligar peptídeos a Tc-99m, incluindo, simplesmente para fins de exemplo, os mostrados nas patentes US Nos. 5.328.679; 5.888.474; 5.997.844 e 5.997.845, aqui incorporados por referência.
Porções direcionadoras preferidas são anticorpos de cadeia simples (SCAs) ou fragmentos variáveis de anticorpos de cadeia simples (sFv). Um SCA apresenta domínios de anticorpos que podem se ligar ou reconhecer moléculas especificas de células tumorais alvo. Adicionalmente ao fato de manter um sitio de ligação de antígeno, um SCA PEGilado pode, por meio de ligantes, reduzir a antigenicidade e aumentar a meia vida do SCA na corrente sangüínea.
Os termos "anticorpo de cadeia simples" (SCA), "molécula ou anticorpo que liga
antígeno de cadeia SimpleS" ou "Fv de cadeia simples" (sFv) são utilizados de maneira intercambiável. O anticorpo de cadeia simples tem afinidade de ligação com o antígeno. Anticorpo de cadeia simples (SCA) ou sFv de cadeia simples foram construídos de varias maneiras. Uma descrição da teoria e produção de proteínas ligantes de antígeno de cadeia simples pode ser encontrada nos pedidos de patente e patente US No. 10/915.069 e US No. 6.824.782, cujos ensinamentos são aqui incorporados por referência.
Tipicamente, domínios SCA ou Fv podem ser selecionados dentre anticorpos monoclonais conhecidos na literatura por suas abreviaturas 26-10, MOPC 315, 741F8, 520C9, McPC 603, Dl.3, phOx murino, phOx humano, RFL3.8 sTCR, 1A6, Sel55-4,18-2- 3,4-4-20,7Α4-1, B6.2, CC49,3C2,2c, MA-15C5/K12G0, Ox, etc. (ver, Huston, J. S. e colaboradores, Proc. Natl. Acad. Sei. USA 85:5879-5883 (1988); Huston, J. S. e colaboradores, SIM News 38(4) (Supp): 11 (1988); McCartney, J. e colaboradores, ICSU Short Reports 10:114 (1990); McCartney, J. E. e colaboradores, resultados não publicados (1990); Nedelman, M. A. e colaboradores, J. Nuclear Med. 32 (Supp.):1005 (1991); Huston, J. S. e colaboradores, In: Molecular Design and Modeling: Concepts and Applications, Part B, editado por J. J. Langone, Methods in Enzymology 203:46-88 (1991); Huston, J. S. e colaboradores, In: Advances in the Applications of Monoclonal Antibodies in Clinicai Oncology, Epenetos, A. A. (Ed.), London, Chapman & Hall (1993); Bird, R. E. e colaboradores, Science 242:423-426 (1988); Bedzyk, W. D. e colaboradores, J. Biol. Chem. 265:18615-18620 (1990); Colcher, D. e colaboradores, J. Nat. Câncer Inst. 82:1191-1197 (1990); Gibbs, R. A. e colaboradores, Proc. Natl. Acad. Sei. USA 88:4001-4004 (1991); Milenic, D. E. e colaboradores, Câncer Research 51:6363-6371 (1991); Pantoliano, M. W. e colaboradores, Biochemistry 30:10117-10125 (1991); Chaudhary, V. K. e colaboradores, Nature 339:394-397 (1989); Chaudhary, V. K. e colaboradores, Proc. Natl. Acad. Sei. USA 87:1066-1070 (1990); Batra, J. K. e colaboradores, Biochem. Biophys. Res. Comm. 171:1-6 (1990); Batra, J. K. e colaboradores. J. Biol. Chem. 265:15198-15202 (1990); Chaudhary, V. K. e colaboradores, Proc. Natl. Acad Sei. USA 87:9491-9494 (1990); Batra, J. K. e colaboradores, Mol. Cell. Biol. 11:2200-2205 (1991); Brinkmann, U. e colaboradores, Proc. Natl. Acad. Sei. USA 88:8616-8620 (1991); Seetharam, S. e colaboradores, J. Biol. Chem. 266:17376-17381 (1991); Brinkmann, U. e colaboradores, Proc. Natl. Acad. Sei. USA 89:3075-3079 (1992); Glockshuber, R. et al., Biochemistry 29:1362-1367 (1990); Skerra, A. e colaboradores, Bio/Technol. 9:273-278 (1991); Pack, P. e colaboradores, Biochemistry 31:1579-1534 (1992); Clackson, T. e colaboradores, Nature 352:624-628 (1991); Marks, J. D. e colaboradores, J. Mol. Biol. 222:581-597 (1991); Iverson, B. L. e colaboradores, Science 249:659-662 (1990); Roberts, V. A. e colaboradores, Proc. Natl. Acad. Sei. USA 87:6654-6658 (1990); Condra, J. H. e colaboradores, J. Biol. Chem. 265:2292-2295 (1990); Laroche, Y. e colaboradores, J. Biol. Chem. 266:16343-16349 (1991); Holvoet, P. e colaboradores, J. Biol. Chem. 266:19717-19724 (1991); Anand, Ν. N. e colaboradores, J. Biol. Chem. 266:21874-21879 (1991); Fuchs, P. e colaboradores, Biol Technol. 9:1369-1372 (1991); Breitling, F. e colaboradores, Gene 104:104-153 (1991); Seehaus, T. e colaboradores, Gene 114:235-237 (1992); Takkinen, K. e colaboradores, Protein Engng. 4:837-841 (1991); Dreher, M. L. e colaboradores, J. Immunol. Methods 139:197-205 (1991); Mottez, E. e colaboradores, Eur. J. Immunol. 21:467-471 (1991); Traunecker, A. e colaboradores, Proc. Natl. Acad. Sei. USA 88:8646-8650 (1991); Traunecker, A. e colaboradores, EMBO J. 10:3655-3659 (1991); Hoo, W. F. S. e colaboradores, Proc. Nati. Acad. Sei. USA 89:4759- 4763 (1993)). Cada uma destas publicações foi incorporada por referência.
Alternativamente, as porções direcionadoras podem ser oligonucleotídeos ou
derivados destes. Os oligonucleotídeos (análogos) não são limitados a uma única espécie mas, ao contrario, são planejados para funcionar com uma variedade de tais porções, sendo entendido que ligantes podem se ligar a um ou mais grupos 3'- ou 5'-, normalmente grupos PO4 ou SO4 de um nucleotídeo. Os oligonucleotídeos incluem oligonucleotídeos antisenso ou complementares, RNA de pequena interferência (siRNA), ácido nucléico bloqueado (LNA), micro RNA (miRNA), ácido nucléico peptidico (PNA), olligo morfolino fosforodiamidato (PMO) e aptamero, etc.
Por exemplo, uma lista não limitante de grupos direcionadores inclui fator de crescimento de célula vascular endotelial, FGF2, somatostatina e análogos de somatostatina, transferrina, melanotropina, ApoE e peptídeos ApoE, fator de von Willebrand e peptídeos de fator de Willebrand, proteína de fibra adeniviral e peptídeos de proteína de fibra adenoviral, PDl e peptídeos PD1, EGF e peptídeos EGF, peptídeos RGD, folato, etc. Outros agentes direcionadores opcionais notados pelo técnico no assunto podem também ser empregados nos compostos aqui descritos. Preferêncialmente, os agentes direcionadores incluem anticorpo de cadeia simples
(SCA), peptídeos RGD, selectina, TAT, penetratina, Oligo(Arg), preferêncialmente (Arg)9, ácido fólico, etc. Para os fins da presente invenção, o termo "TAT" pode ser entendido como significando uma porção de trans-ativador da proteína de ativação de transcrição incluindo a seqüência peptídica YGRKKRRQRRR, por exemplo. A lista das seqüências e estruturas de peptídeos utilizados no relatório descritivo e exemplos inclui: C-TAT: (SEQ ID NO: 1) CYGRKKRRQRRR ; C-(Arg)9: (SEQ ID NO: 2) CRRRRRRRRR ; RGD pode ser linear ou cíclico: ácido fólico
(Arg)9 pode incluir uma cisteina para conjugação tal como CRRRRRRRRR e TAT
pode adicionar uma cisteina extra no final do peptídeo tal como CYGRKKRRQRRRC.
E. PORÇÕES BIOLOGICAMENTE ATIVAS (D2)
Uma grande variedade de porções biologicamente ativas pode ser ligada aos polímeros ativados aqui descritos. As porções biologicamente ativas incluem compostos farmaceuticamente ativos, enzimas, proteínas, oligonucleotídeos, anticorpos, anticorpos monoclonais, anticorpos de cadeia simples e peptídeos.
Qualquer agente citotóxico ou quimioterápico, i.e. ácido fólico, etc. Capaz de se ligar a um polímero, incluindo mas sem limitação aos das porções biologicamente ativas são descritos na patente US No. 5.965.566, cujos ensinamentos são aqui incorporados por referência.
Em um aspecto da invenção, os compostos biologicamente ativos são apropriados para uso medicinal ou diagnostico no tratamento de animais, e.g., mamíferos incluindo humanos, para condições nas quais tal tratamento é desejado. Em outro aspecto, porções biologicamente ativas contendo amino-, hidroxil- ou tiol-
se encontram dentro do escopo da presente invenção. A única limitação nos tipos de porções biologicamente ativas apropriadas para inclusão é a de que ao menos um grupo amino-, hidroxil- ou tiol- esteja disponível para reagir e se ligar com uma porção carregadora e que não haja perda substancial na bioatividade na forma do conjugado aos sistemas de transporte poliméricos aqui descritos.
Alternativamente, compostos precursores apropriados para incorporação nos compostos conjugados poliméricos de transporte da presente invenção podem ser ativos depois da liberação hidrolitica do composto ligado, ou inativos depois da liberação hidrolitica do composto ligado mas ativos depois de processamento/reação posterior. Por exemplo, uma droga anticancer que é transportado para a corrente sangüínea pelo sistema de transporte polimérico permanecera inativa até entrar na célula cancerosa ou tumoral, onde será ativada pela química da célula, e.g., por uma reação enzimática que é única daquela célula.
Numa modalidade preferida os sistemas de transporte polimérico aqui descritos incluem compostos farmaceuticamente ativos.
Para os fins da presente invenção deve ser entendido que os compostos farmaceuticamente incluem moléculas de baixo peso molecular. Tipicamente, os compostos farmaceuticamente aceitáveis possuem um peso molecular menor do que cerca de 1.500 daltons. Uma lista não-limitante destes compostos inclui inibidores da DNA topoisomerase I tais como camptotecina e análogos, taxanos e derivados de paclitaxel, nucleosideos incluindo AZT e aciclovir, compostos de antraciclina incluindo daunorrubicina e doxorrubicina, compostos relacionados a anti-metabolitos incluindo Ara-C (citosina arabinosida) e gencitabina, etc.
1. Taxanos e Derivados de Taxano
Uma classe dos compostos incluídos nas composições de pro droga da presente invenção é a dos taxanos. Para os fins da presente invenção, o termo "taxano" inclui todos os compostos dentro da família terpenica dos taxanos. Assim, taxol® (paclitaxel), derivados te/Y-butóxi-carbonil-amina 3'-substituídos (taxotere®) e semelhantes assim como outros análogos disponíveis de, por exemplo Sigma Chemical de St. Louis, Missouri, se encontram dentro do escopo da presente invenção.
Estes compostos se mostraram agentes anti—câncer eficazes. Vários estudos indicam que os agentes possuem atividade contra diversas neoplasias. Até agora, o uso deles era severamente por, entre outros motivos, sua pequena disponibilização, pouca solubilidade em água e hipersensitividade. Deve ser entendido que outros taxanos, incluindo 7-aril- carbamatos e 7-carbazatos revelados nas patentes US Nos. 5.622.986 e 5.547.981 também podem ser incluídos dentre a pro drogas da presente invenção. Os ensinamentos destes documentos são aqui incorporados por referência.
Embora os exemplos descrevam inter alia paclitaxel para fins ilustrativos, deve ser entendido que os métodos aqui descritos são apropriados para todos os taxanos e moléculas relacionados.
2. Camptotecina e Inibidores Relacionados da Topoisomerase I
Camptotecina é um alcalóide citotóxico insolúvel em água produzido por árvores camptoteca accuminata naturais da China e nothapodytes foetida da índia. Camptotecina, compostos relacionados e análogos são também conhecidos por serem potenciais anticancerígenos ou agentes antitumorais e se mostraram ativos in vitro e in vivo. Camptotecina e compostos relacionados são também candidatos para conversão a pro drogas da presente invenção. Ver, por exemplo a patente US No. 5.004.758 e a publicação de Hawkins, iiOncology", de dezembro de 1992, pgs. 17-23. Camptotecina e análogos relacionados são, por exemplo, Topotecan, Irinotecan (CPT-11) ou SN38.
Análogos de camptotecina adicionais incluem aqueles reportados na literatura incluindo 10-hdroxicamptotecinas, 11-hidroxicamptotecinas e/ou 10,11- dihidroxicamptotecinas, 7- e/ou 9- alquila, alquila substituída, cicloalquila, alcóxi, alquenila, aminoalquila, etc. camptotecinas, camptotecinas substituídas no anel-A tais como 10,11- alquilenodioxicamptotecinas, tais como as descritas na patente US No. 5.646.159, cujos ensinamentos são aqui incorporados por referência, etc.
Em uma modalidade preferida da presente invenção o agente citotóxico é SN38.
3. OligonucIeotideos
De modo a entender completamente o escopo da presente invenção, os seguintes termos são definidos. O técnico no assunto entenderá que os termos "ácido nucléico" ou "nucleotídeo" se aplicam ao ácido desoxirribonucléico ("DNA"), ácido ribonucléico ("RNA") tanto de fita simples quanto de fita dupla, a menos que especificado em contrario, e quaisquer modificações químicas dos mesmos. Um "oligonucleotídeo" é geralmente um polinucleotídeo pequeno, e.g., variando em tamanho de cerca de 2 a cerca de 200 nucleotídeos, ou mais preferêncialmente de cerca de 10 a cerca de 30 nucleotídeos de comprimento. Os oligonucleotídeos de acordo com a presente invenção são geralmente ácidos nucléicos sintéticos e são de fita simples, a não ser que especificado em contrario. Os termos "polinucleotídeo" e "ácido polinucléico" podem ser utilizados aqui como sinônimos.
Modificações nos oligonucleotídeos contemplados na invenção incluem, por exemplo, a adição ou a substituição de nucleotídeos selecionados com grupos funcionais ou porções que permitem a ligação covalente de um oligonucleotídeo a um polímero desejado, e/ou a adição ou substituição de porções funcionais que incorporem carga adicional, polarizabilidade, ligação hidrogênio, interação eletrostática e funcionalidade ao oligonucleotídeo. Tais modificações incluem, mas não se limitam a, modificações na posição 2'- do açúcar, modificações na posição 5- de pirimidina, modificações na posição 8- de purina, modificações em aminas exocíclicas, substituição de 4-tiouridina, substituição de 5- bromo ou 5-iodouracila, modificações no esqueleto, metilações, combinações de pares e bases tais como as das isobases isocitidina e isoguanidina, e combinações análogas. Modificações de oligonucleotídeo também podem incluir modificações 3' e 5' tais como proteção. Uma lista não-limitante de análogos de nucleosideo inclui: t
O-
-O-
B
O
O=P-S"
Fosfotioato
O-
O
O
O=P-O" /
2-0-Metil
B
ο-ι _ B
ο 0
0=Ê-0"
ζ
Ί-MOE
O-
B
0 xF
O=P-O"
/
2'-Fluoro
2'-AP
NH2
HNA
CeNA
B
N' H
-f O
PNA
y,
O=P-N
\
Morfolino
F B
ο
O=Ii-O" 2'-F-ANA
0
0-
B
ο
O-P-O 2'-f3-hidroxi)propil
λ
OH
0-
B
N
O=P-O"
S
3'-Fosforamidato
0-
B
ο
O=P-BH3" Boranofosfatos
10
Ver mais exemplos de análogos de nucleosideos descritos em Freier & Altmann; Nucl. Acid Res., 1997, 25, 4429-4443 e Uhlmann; Curr. Opinion in DrugDevelopment, 2000, 3(2), 293- 213, cujos ensinamentos são aqui incorporados por referência.
O termo "antisenso", como aqui utilizado, se refere a seqüência e nucleotídeos que são complementares a seqüência especificas de DNA ou RNA que codificam um produto gênico ou que codificam uma seqüência controle. O termo "fita antisenso" é utilizado em referência a uma fita de ácido nucléico que é complementar à fita "senso". Na operação normal do metabolismo celular, a fita senso da molécula de DNA é a fita que codifica polipeptideos e/ou outros produtos gênicos. A fita senso serve como um molde para a síntese do RNA mensageiro ("mRNA") transcrito (uma fita antisenso) que, por sua vez, direciona a síntese de qualquer produto gênico codificado. Moléculas de ácido nucléico antisenso podem ser produzidas por métodos conhecidos no estado da técnica, incluindo a síntese pela ligação do gene(s) de interesse em orientação reversa em um promotor viral que permite a síntese de uma fita complementar. Uma vez introduzida na célula, esta fita transcrita combina com seqüências naturais produzidas pela célula para formar duplexos. Estes duplexos então bloqueiam tanto transcrição quanto translação posteriores. Desta maneira, fenótipos mutantes podem ser gerados. As designações "negativo" ou (-) são também conhecidas no estado da técnica como se referindo à fita antisenso e "positivo" ou (+) são como se referindo a fitas senso.
Em uma modalidade preferida, a escolha de conjugação é um η oligonucleotídeo (ou "polinucleotídeo") e, depois da conjugação, o alvo é referido como um resíduo de oligonucleotídeo. Os oligonucleotídeos podem ser selecionados dentre quaisquer oligonucleotídeos e oligodeoxinucleotídeos com esqueletos fosfodiéster ou fosforotioato conhecidos no estado da técnica.
Os derivados de oligonucleotídeos ou oligonucloetideo podem incluir de cerca de 10 a cerca de 1000 ácidos nucléicos e, preferêncialmente, polinucleotídeos relativamente pequenos, e.g., variando em tamanho de cerca de 2 a cerca de 200 nucleotídeos, ou mais preferêncialmente de cerca delO a cerca de 30 nucleotídeos em comprimento.
Adicionalmente, oligonucleotídeos e oligodeoxinucleotídeos úteis de acordo com a presente invenção incluem, mas não são limitados a, os seguintes:
Oligonucleotídeos e oligodeoxinucleotídeos com esqueletos naturais fosfodiéster ou fosfotioato ou qualquer análogo de esqueleto modificado;
LNA (Ácido nucléico bloqueado);
PNA (Ácido nucléico com esqueleto peptídico);
RNA de pequena interferência (siRNA);
microRNA (miRNA);
Ácido nucléico com esqueleto peptídico (PNA);
Oligonucleotídeos morfolino fosfodiamidato (PMO);
triciclo-DNA;
decoi ODN (oligonucleotídeo de fita dupla); seqüência de RNA catalítica (RNAi);
ribozimas;
aptameros;
spiegelmeros (oligonucleotídeos de conformação L); CpG oligômeros, e semelhantes, tais como os descritos em:
Tides 2002, "Oligonucleotide and Peptide Technology Conferences", May 6-8, 2002, Las Vegas, NV e "Oligonucleotide & Peptide Technologies", 18th & 19th November 2003, Hamburg, Germany, cujos conteúdos são aqui incorporados por referência.
Oligonucleotídeos de acordo com a presente invenção podem opcionalmente incluir quaisquer análogos ou derivados apropriados conhecidos no estado da técnica, incluindo os listados na Tabela 1 abaixo:
TABELA 1 Análogos de NucIeotideos e Derivados representativos 4-acetilcitidina 5-metoxiaminometil-2-tiouridina 5-(carboxihidroximetil)uridina beta, D-manosilqueuosina 2'-0-metilcitidina 5-metoxicarbonilmetil-2-tiouridina 5-carboximetilaminometil-2-tiouridina 5-metoxicarboni ImetiIuridina 5-carboximetilaminometiluridina 5-metoxiuridina Dihidrouridina 2-metiltio-N6-isopenteniIadenosine 2'-0-metilpseudouridina N-((9-beta-D-ribofuranosil-2- metiltiopurin-6-il)carbamoil)treonina D-galactosilqueuosina N-((9-beta-D-ribofuranosilpurin-6-il)N- metilcarbamoil)treonina 2'-0-metilguanosina Acido uridina-5-oxiacetico -metilester Inosina Acido uridina-5-oxiacetico N6-isopenteniladenosina Wibutoxosina 1-metiladenosina Pseudouridina 1 -metilpseudouridina Queuosina 1-metilguanosina 2-tiocitidina 1-metilinosina 5-metil-2-tiouridina 2,2-dimetilguanosina 2-tiouridina 2-metiladenosina 4-tiouridina 2-metilguanosina 5-metiluridina 3-metilcitidina N-((9-beta-D-ribofuranosilpurina-6-iI)- carbamoil)treonina 5-metilcitidina 2'-0-metil-5-metiluridina N6-metiladenosina 2'-0-metiluridina 7-metilguanosina wibutosina 5-metilaminometiluridina 3-(3-amino-3-carboxi-propil)uridina Adenosina bloqueada Citidina bloqueada Guanosina bloqueada Timina bloqueada Uridina bloqueada Metilcitidina bloqueada
Preferêncialmente, o oligonucleotídeo se envolve nas células tumorais alvo ou regula a proteína implicada na resistência das células tumorais ao composto terapêutico anti-câncer. Por exemplo, qualquer proteína conhecida no estado da técnica, tal como BCL-2, para regulação de oligonucleotídeos antisensos para terapia do câncer pode ser utilizada para a presente invenção. Ver o pedido de patente US No. 10/822.205, depositado em 9 de abril de 2004, cujos ensinamentos são aqui incorporados por referência. Uma lista não-limitante de oligonucleotídeos terapêuticos preferidos inclui oligonucleotídeos antisenso HIF-Ia e oligonucleotídeos. antisense Survivina. Em uma modalidade preferida, o oligonucleotídeo pode ser, por exemplo, um
oligonucleotídeo que tenha substancialmente uma seqüência de nucleotídeos substancialmente similar a de Genasense (a/k/a oblimersen de sódio, produzido por Genta Inc., Berkeley Heights, NJ). Genasense é um oligonucleotídeo antisenso de fosfotioato de 18 unidades, TCTCCCAGCGTGCGCCAT (SEQ ID NO: 6), complementar aos seis primeiros códons da seqüência iniciadora do mRNA humano bcl-2 (mRNA humano bcl-2 é conhecido no estado da técnica, e é descrito, e.g., como SEQ ID NO: 19 na patente US No. 6.414.134, aqui incorporada por referência). O U.S. Food and Drug Administration (FDA) deu ao Genasense a classificação de Droga Órfã (Orphan Drug) em agosto de 2000. Modalidades preferidas incluem: (i) LNA antisenso Survivina (SEQ ID NO: 3)
mCs-Ts-mCs-As.as-ts-cs-cs-as-ts-gs-gs-mCs-As-Gs-c;
onde as letras maiúsculas representam LNA, o "s" representa um esqueleto fosfotioato;
(ii) siRNA antisenso Bcl2:
SENSE 5'- GCAUGCGGCCUCUGUUUGAdTdT-3' (SEQ ID NO: 4)
ANTISENSE 3'- dTdTCGUACGCCGGAGACAAACU-5 ' (SEQ ID NO: 5) onde dT representa DNA;
(iii) Genasense (oligonucleotídeo fosfotioato antisenso): (SEQ ID NO: 6) ts-cs-ts-cs.cs-cs-as-gs-cs-gs-ts-gs-cs-gs-cs-cs-cs-as-t onde as letras minúsculas representam DNA e "s" representa esqueleto fosfotioato;
(iv) HIFla LNA antisenso (SEQ ID: 7)
5'- sTsGsGscsasasgscsastscscsTsGsTsa -3' (SEQ ID NO: 7) onde as letras maiúsculas representam LNA, o "s" representa um esqueleto fosfotioato;
LNA inclui 2'-0, 4'-C metileno-biciclonucleotídeo como mostrado abaixo:
onde "monomer" = monômero e "configuration" = configuração.
Ver a descrição detalhada de LNA de survivina nos pedidos de patente US Nos. 11/272.124, intitulado "LNA Oligonucleotídeos and the Treatmemt of Câncer" e 10/776.934, intitulado "Oligomeric Compounds for the Modulation Survivin Expression", cujos ensinamentos são aqui incorporados por referência. Ver também os pedidos de patente US Nos. 10/407.807, intitulado "Oligomeric Compounds for the Modulation HIF-I Alpha Expression" e 11/271.686, intitulado "Potent LNA Oligonucleotídeos for Inhibition of HIF- IA Expression", cujos conteúdos são aqui incorporados por referência.
Os oligonucleotídeos empregados nos compostos aqui descritos podem ser modificados com ligantes (CH2)w amino nas terminações 5' ou 3' dos oligonucleotídeos, onde w, nesse aspecto, é um número inteiro positivo preferêncialmente de cerca de 1 a cerca de 10, preferêncialmente 6. Os oligonucleotídeos modificados contemplados nos compostos aqui descritos podem ser NH-(CH2)w-Oligonucleotideo.
Numa modalidade preferida, a terminação 5' da mesma fita de siRNA é modificada. Por exemplo, o siRNA empregado nos conjugados poliméricos é modificado com um 5'-C6- NH2. Uma modalidade particular da presente invenção emprega Bcl2-siRNA tendo a seqüência de
1
8 LNA Monomer β-D configuration
SENSO 5'-(NH2-C6)GCAUGCGGCCUCUGUUUGAdTdT-3' ANTISENSO 3'- dTdTCGUACGCCGGAGACAAACU-5'. Em uma outra modalidade preferida, os compostos aqui descritos podem incluir oligonucleotídeos modificados com ésteres impedidos contendo ligantes (CH2)w amino. Ver o pedido de patente US No. 60/844.942 intitulado "Polyalkylene Oxide Having Hindered Ester-Based Biodegradable Linkers", cujos ensinamentos são aqui incorporados por referência. Os compostos poliméricos podem liberar os oligonucleotídeos sem a cauda amino. Por exemplo, os oligonucleotídeos podem ter a estrutura:
preferêncialmente cerca de 6.
Em ainda outra modalidade preferida, os oligonucleotídeos podem ser modificados com ligantes (CH2)w sulfhidril (tio oligonucleotídeos). Os tio oligonucletideos podem ser utilizados para conjugação direta ao resíduo cisteina do peptídeo positivamente carregado por meio do grupo maleimidila. Os tio oligonucleotídeos podem ter estrutura SH-(CH2)w- Oligonucleotídeo. Os tio oligonucleotídeos podem ainda incluir ésteres impedidos tendo a estrutura:
10
(onde "oligonucleotide" =
oligonucleotídeo).
20
Exemplos dos oligonucleotídeos modificados incluem:
(i) Genasense modificado com cauda C6-NH2:
5'- NH2- C6- stsCstscscscsasgscsgstsgscsgscscsast -3'
S
Il
O-P-T-sC-sT-sC-sC-sC-sA-sG-sC-sG-sT-sG-sC-sG-sC-sC-sA-sT Cr
25
(ii) HIFla LNA antisenso modificado com cauda C6-NH2: 5'- NH2-C6- sTsGsGscsasasgscsastscscsTsGsTsa -3';
(iii) Survivina LNA antisenso modificado com cauda C6-NH2: 5'- NH2- C6- smCsTsmCsAsastscscsastsgsgsmCsAsGsc -3';
(iv) Survivina LNA antisenso modificado com cauda C6-SH:
5'- HS- C6- smCsTsmCsAsastscscsastsgsgsmCsAsGsc -3';
(v) Genasense modificado com cauda de éster impedido:
O
O—T-C-T-C-C-C-A-G-C-G-T-G-C-G-C-C-A-T
4. Porções Biologicamente Ativas Adicionais
Em adição, os compostos da presente invenção podem ser preparados utilizando-se muitos outros compostos. Por exemplo, os compostos biologicamente ativos tais como derivados cisplatina contendo grupos OH, floxuridina, podofilotoxina e compostos relacionados podem ser incluídos.
Outros compostos precursores úteis incluem, por exemplo, algumas proteínas, enzimas e peptídeos de baixo peso molecular biologicamente ativos, incluindo peptido glicanos, assim como outros agentes anti-tumor, agentes cardiovasculares tais como forskolina, anti-neoplásicos tais como combretastatina, vinblastina, vincristina, doxorrubicina, AraC, maitansina, etc. anti-infectivos tais como vancomicina, etc. anti- fungicos tais como nistatin ou amfoteracina B, agentes anti-inflamatórios, agentes esteroidais e semelhantes.
A seguir ilustram-se porções biologicamente ativas que são apropriadas para as pro drogas da presente invenção.
F. LIGANTES PERMANENTES E LÁBEIS: (L1 e L3)
Os ligantes L, e L3 incluem ligantes bifuncionais. Os bifuncionaispodem ser ligantes permanentes ou lábeis. Os ligantes bifuncionais incluem aminoácidos ou derivados de aminoácidos. Os aminoácidos podem ser tanto aminoácidos de ocorrência natural ou não. Derivados e análogos de aminoácidos de ocorrência natural, assim como vários aminoácidos sem ocorrência natural conhecidos no estado da técnica (D ou L), hidrofóbicos ou não, também são contemplados dentro do escopo da invenção. Uma lista não-limitante apropriada dos aminoácidos sem ocorrência natural inclui ácido 2-aminoadípico, ácido 3-aminoadípico, beta-alanina, ácido beta-aminopropiônico, ácido 2-aminobutírico, ácido 4-aminobutírico, ácido piperidinico, ácido 6-aminocapróico, ácido 2-aminoheptanóico, ácido 2- aminoisobutírico, ácido 3-aminoisobutírico, ácido 2-aminopimelico, ácido 2,4-aminobutírico, desmosina, ácido 2,2-diaminopimélico, ácido 2,3-diaminopropiônico, N-etilglicina, N- etilasparagina, 3-hydroxiprolina, 4-hidroxiprolina, isodesmosina, allo-isoleucina, N- metilglicina, sarcosina, N-metil-isoleucina, 6-N-metil-lisina, N-metilvalina, norvalina, norleucina, e ornitina. Alguns resíduos de aminoácidos preferidos são selecionados dentre glicina, alanina, metionina e sarcosina e, mais preferêncialmente, glicina. Alternativamente, Li e L3 podem ser selecionados dentre: -[C(=0)]v(CR22R23)t[C(=0)]v-, -[C(=0)]v(CR22R23)r0[C(=0)]v -, -[C(=0)]v(CR22R23)t-NR26[C(=0)]v-, -[C(=0)]v0(CR22R23)t[C(=0)]v -, -[C(=0)]v0(CR22R23)t0[C(=0)]v-, -[C(=0)]v0(CR22R23)tNR26[C(=0)]v-, -[C(=0)]vNR2,(CR22R23)t[C(=0)]v-, -[C(=0)]vNR21(CR22R23)t0[C(=0)]v-, -[C(=0)]vNR21(CR22R23)tNR26[C(=0)]v-, -[C(=0)]v(CR22R23)t0-(CR28R29)r[C(=0)]v-, -[C(=0)]v(CR22R23)tNR26-(CR28R29)t.[C(=0)]v-, -[C(=0)]v(CR22R23)tS-(CR28R29),[C(=0)]v-, -[C(=0)]v0(CR22R23)t0-(CR28R29)t[C(=0)]v-, -[C(=0)]v0(CR22R23)tNR26-(CR28R29)f[C(=0)]v.-, -[C(=0)]v0(CR22R23)tS-(CR28R29)t[C(=0)]v-, -[C(=0)]vNR21(CR22R23)t0-(CR28R29)t[C(=0)]v-, -[C(=0)]vNR2l(CR22R23)tNR26-(CR28R29)t.[C(=0)]v-, -[C(=0)]vNR2l(CR22R23)tS-(CR28R29)t.[C(=0)]v-, -[C(=0)]v(CR22R23CR28R290)tNR26[C(=0)]v- , -[C(=0)]v(CR22R23CR28R290)t[C(=0)]v-, -[C(-0)]v0(CR22R23CR28R290)tNR26[C(=0)]v- , -[C(=0)]v0(CR22R23CR28R290)t[C(=0)]v -, -[C(=0)]vNR21(CR22R23CR28R290)tNR26[C(=0)]v-, -[C(=0)]vNR2I(CR22R23CR28R290)t[C(=0)]v-, -[C(=0)]v(CR22R23CR28R290)t(CR24R25)f[C(=0)]v-, -[C(=0)]v0(CR22R23CR28R290)t(CR24R25)t.[C(=0)]v-,
-[C(=0)]vNR21(CR22R23CR28R290)t(CR24R25)t[C(=0)]v-, -[C(=0)]v(CR22R23CR28R290)t(CR24R25)r0[C(=0)]v-, -[C(=0)]v(CR22R23)t(CR24R25CR28R290)t[C(=0)]v-, -[C(=0)]v(CR22R23)t(CR24R25CR28R290)t'NR26[C(=0)]V'-, -[C(=0)]v0(CR22R23CR28R290)t(CR24R25)tO[C(=0)]v-,
-[C(=0)]v0(CR22R23)t(CR24R25CR28R290)t[C(=0)]v-, -[C(=0)]v0(CR22R23)t(CR24CR25CR28R290)t NR26[C(=0)]v-, _[C(=0)]VNR21 (CR22R23CR28R29O)t(CR24R25)1 0[C(=0)]ν -, _[C(=0)]vNR2i(CR22R23),(CR24R25CR28R29O)t-[C(=0)]v -, -[C(=0)]vNR21(CR22R23)t(CR24R25CR28R290)tNR26[C(=0)]v-,
O
-[C(=0)]v0(CR22R23)t^x ^-(CR24R25)t.NR26[C(=0)]v,-
-O-
-[C(=0)]vNR21(CR22R23)t \\ h (CR24R25)t.NR26[C(=0)]v'
-O-
e
20
-[C(=0)]vNR2 i(CR22R23)t \\ Λ— (CR24R25)t, 0[C(=0)]V.
em que: R-21-29 São independentemente selecionados dentre hidrogênio, Cu6 alquilas, C3_i2 alquilas ramificadas, C3.8 cicloalquilas, Ci.6 alquilas substituídas, C3.8 ciloalquilas substituídas, arilas, arilas substituídas, aralquilas, C,.6 heteroalquilas, C,.6 heteroalquilas substituídas, C|.6alcóxi, fenóxi e C|.6heteroalcóxi;
(t) e (f) são independentemente zero ou um número inteiro positivo, preferêncialmente zero ou r um número inteiro de cerca de 1 a cerca de 12, mais preferêncialmente um número inteiro de cerca de 1 a cerca de 8 e ainda mais preferêncialmente 1 ou 2; e
(v) e (v') são independentemente zero ou 1.
Preferêncialmente, os ligantes bifuncionais podem ser selecionados dentre:
-[C(=0)]rNH(CH2)2CH=N-NHC(=0)-(CH2)2-,
-[C(=0)]rNH(CH2)2(CH2CH20)2(CH2)2NH[C(=0)]r- -,
-[C(=0)]rNH(CH2CH2)(CH2CH20)2NH[C(=0)]r-,
-[C(=0)]rNH(CH2CH2)sNH(CH2CH2)s [C(=0)]r -,
-[C(=0)]r NH(CH2CH2)sS(CH2CH2)s [C(=0)]r- ,
-[C(=0)]rNH(CH2CH2)(CH2CH20)[C(=0)]r -,
-[C(=0)]rNH(CH2CH2)s0(CH2CH2)s[C(=0)]r-,
-[C(=0)]rNH(CH2CH20)(CH2)NH[C(=0)]r-,
-[C(=0)]rNH(CH2CH20)2(CH2)[C(=0)]r-,
-[C(=0)]rNH(CH2CH20)s(CH2)s[C(=0)]r-,
-[C(=0)]rNHCH2CH2NH[C(=0)]r- ,
-[C(=0)]rNH(CH2CH2)20[C(=0)]r· -,
-[C(=0)]rNH(CH2CH20)[C(=0)]r- ,
-[C(=0)]rNH(CH2CH20)2[C(=0)]r-,
-[C(=0)]rNH(CH2)3[C(=0)]r- ,
-[C(=0)]r0(CH2CH20)2(CH2)[C(=0)]r-,
-[C(=0)]r0(CH2)2NH(CH2)2[C(=0)]r -,
-[C(=0)]r0(CH2CH20)2NH[C(=0)]r-,
-[C(=0)]r0(CH2)20(CH2)2[C(=0)]r-,
-[C(=0)]r0(CH2)2S(CH2)2[C(=0)]r- ,
-[C(=0)]r0(CH2CH2)NH[C(=0)]r -, -[C(=0)]r0(CH2CH2)0[C(=0)]r- , -[C(=0)]r0(CH2)3NH[C(=0)]r -, -[C(=0)]r0(CH2)30[C(=0)]r- , -[C(=0)]r0(CH2)3[C(=0)]r- , -[C(=0)]rCH2NHCH2[C(=0)]r- , -[C(=0)]rCH20CH2[C(=0)]r -, -[C(=0)]rCH2SCH2[C(=0)]r -, -[C(=0)]rS(CH2)3[C(=0)]r- , -[C(=0)]r(CH2)3[C(=0)]r-,
—[C(=0)]r0CH2^~^^CH2NH[C(=0)]r.-
9
—[C(=0)]r0CH2^^^-CH20[C(=0)]r--
9
-[C(=0)]rNHCH2-^^-CH2NH[C(=0)]r·- -[C(=0)]rNHCH2-^^>-CH20[C(=0)]r.—
em que (r) e (r') são independentemente zero ou 1, contanto que ambos (r) e (r') não sejam simultaneamente zero.
1. Ligantes lábeis
Numa modalidade preferida de presente invenção, os compostos aqui descritos apresentam uma porção biologicamente ativa ligada a um ligante lábil. Uma vantagem da invenção é que a porção biologicamente ativa pode ser liberada de maneira controlada.
Dentre os ligantes lábeis podem ser ligantes baseados na eliminação de benzila, ligantes baseados em trialquila bloqueadas (ou baseados em bloqueio lactonizado trialquila), ligantes baseados em bicina, ligantes ácidos lábeis, peptídeos lisossomalmente cliváveis e peptídeos cliváveis por captepsina B. Dentre os ligantes ácidos lábeis podem ser ligação de dissulfeto, ligantes contendo hidrazona e ligantes contendo tiopropionato.
Alternativamente, os ligantes lábeis são ligantes lábeis intracelulares, ligantes extracelulares e ligantes acidicos lábeis. Os ligantes ácidos lábeis, tais como ligações de hidrazona, podem ser hidrolizados no ambiente ácido do lisossoma. Alguns ligantes lábeis apropriados são oligopeptídeos incluindo Val-Cit, Ala-Leu-Ala-Leu, Gly-Phe-Leu-Gly e Phe-Lys. Um ligante lábil preferido é um ligante peptidila (Val-Cit) que pode ser especificamente degradado por captesina B. Preferêncialmente, L3 inclui ligante lábil. Os ligantes lábeis preferidos incluem:
L1
al
ií"
C-
R31
I
-Y12-Ar-I-C-
bl I
v32
Vl4
Il
-Y13-C-
γιτ| >—I-C
Liaj-O- Ϊ1Ϊ j11
R
38
C (CR44R45)
111 ^40
Y
A51 (J')x'1 1-(L14)q1-
Y
1Í
-C--(L1)-O--
L Jp1N 7°11
R39 -R42
C (CR46R47) m11
19
R43
k11 N-Ç-C-(J)x11^
/ R41
n11
->-s—s->—
^50
I
Ν—N—
R
51 O
-Val-Cit-,
-Gly-Phe-Leu-Gly-, -AIa-Leu-Ala-Leu-, -Phe-Lys-,
O
H /==■
-VaI—Cit—C-Ν^λ λ
Il H /=\ Phe-Lys-C-N-(^J)—v
O
Il H
-Val-Cit—λ w O-^T 0 O,
O O,
-Val-Cit-C(=0)-CH20CH2-C(=0)-, -Val-Cit-C(=0)-CH2SCH2-C(=0)-, e -NHCH(CH3)-C(=0)-NH(CH2)6-C(CH3)2-C(=0)- em que,
Yi i-i9 são independentemente O, S ou NR48;
R-31-48, R50-51 e A5I são independentemente selecionado dentre hidrogênio, Cj-6 alquilas, C3-I2 alquilas ramificadas, C3-8 cicloalquilas, Cn6 alquilas substituídas, C3.8 ciloalquilas substituídas, arilas, arilas substituídas, aralquilas, Ci_6 heteroalquilas, Ci_6 heteroalquilas substituídas, Ci_6alcóxi, fenóxi e Cn6heteroalcóxi; Ar é uma porção arila ou heteroarila;
Ln-I5 são independentemente espaçadores bifuncionais selecionados; J e J'
são independentemente selecionados dentre porções ativamente transportadas para uma célula alvo, porções hidrofobicas, porções Iigantes bifuncionais e combinações destes;
(cll), (hll), (kl 1), (111), (mil) e (η 11) são independentemente números inteiros positivos selecionados, preferencialmente 1; (ali), (el 1), (gll), (J11), (o 11) e (qll) são independentemente tanto zero ou um número inteiro positivo, preferêncialmente 1; e
(bll), (xll), (x'll), (fl 1), (il 1) e (pl 1) são independentemente zero ou um.
Vários Iigantes lábeis. baseados em eliminação de benzila ou baseados em trialquila bloqueadas são descritos, por exemplo, nas petentes US Nos. 6.180.095, 6.720.306, 5.965.119, 6.624.142 e 6.303.569, cujos conteúdos são aqui incorporados por referência. Os ligantes baseados em bicina são também descritos nas patentes US Nos. 7.122.189 e 7.087.229 e nos pedidos de patente US Nos. 10/557.522, 11/502.108 e 11/011.818, cujos conteúdos são aqui incorporados por referência.
Preferêncialmente, os compostos biologicamente ativos incluindo oligonucleotídeos são ligados a porções poliméricas dos compostos aqui descritos por meio de ligantes ácidos lábeis. Sem se prender a nenhuma teoria, os ligantes ácidos lábeis facilitam a liberação de oligonucleotídeos dos compostos poliméricos dentro de células e especificamente no lisossoma, endossoma ou macropinossoma.
2. Ligantes permanentes
Em aspectos preferidos da invenção, a porção direcionadora tal como SCA é ligada ao ligante multifuncional por um ligante permanente. Os ligantes permanentes são capazes de se conjugar a porções direcionadoras e ao ligante multifuncional. Um ligante permanente preferido pode ser uma molécula contendo maleimidila que pode prover uma ligação tio-éter.
Os ligantes permanentes contendo grupos maleimidila podem ser selecionados dentre:
OOO Numa modalidade alternativa, os Iigantes permanentes incluem estruturas correspondendo a aquelas mostradas acima, mas ao invés de um grupo maleimidila, tendo grupos tais como vinila, resíduos de sulfona, amino, carbóxi, mercapto, hidrazide, carbamato a semelhantes ao invés de maleimidila.
5
G. GRUPOS DE SAÍDA E GRUPOS FUNCIONAIS
Em alguns aspectos, grupos de saída apropriados incluem, sem limitação, halogênios (Br, Cl), carbonato ativado, carbonilimidazol, imida-tione cíclica, isocianato, N- hidroxisuccinimidila, para-nitrofenóxi, N-hidroxiftalimida, N-hidroxibenzotriazolil, imidazol, tosilato, mesilato, tresilato, nosilato, CrC6 alquilóxi, CrC6 alcanoilóxi, arilcarbonilóxi, orto- nitrofenóxi, N-hidroxibenzotriazolil, imidazol, pentafluorofenóxi, 1,3,5-triclorofenóxi, e 1,3,5-trifluorofenóxi ou outros grupos de saída apropriados que serão evidentes para um técnico no assunto.
Para os fins da presente invenção, grupos de saída devem ser entendidos como grupos capazes de reagir com um nucleofilo encontrado no alvo desejado, i.e. uma porção biologicamente ativa e uma porção direcionadora.
Em algumas modalidades preferidas, grupos funcionais para serem ligados aos sistemas de transporte polimérico incluem maleimidila, vinila, resíduos de sulfona, amino, carbóxi, mercapto, hidrazida, carbazato e semelhantes, que podem ainda ser conjugados a um grupo ativo ou grupo direcionador.
Para os fins da presente invenção, quando Di ou D2 são grupos funcionais , os grupos Li e L3 não são porções funcionais.
Numa modalidade preferida, o grupo funcional pode ser maleimidila e os grupos de saída podem ser selecionados dentre OH, metóxi, tert-butóxi, para-nitrofenóxi e N- hidroxisuccinimidila.
H. MODALIDADES PREFERIDAS CORRESPONDENDO A FÓRMULA (I)
Algumas modalidades particulares preparadas pelos métodos aqui descritos incluem:
30 O
-VaI—Cit—C-D2
O _ ο
D2 /—{ />-Ν—C-Cit-Val
^—Ο ^ NH Η
HN'
-Vai—Cit-C-
O
ο=' B ' PEG f"/........j O
O
H O
0 K
H 7
mPE G^1-nYS
0
Il
-VaI—Cit—C-D2
0 Ο.
D2-C-Cit-Val
mPEG
D2
/——cit—va|.
O
O
HN^Val-Cit-C—ΝΗΛχ
Do
O Q
-X^-D1
O
O Val—Cit-C—NH
^ t~\ D2
mPEG
HN/Val~-Cit-C~D2
O
-N
O H
O
O
D2-C-Cit-Val
H Η ι
O o (
O
w , li
-VaI—Cit—C—-D
-N' Ò H
υ
O
-VaI—Cit—C-D2
mPEG
D2—C-Cit-Val
O
-VaI—Cit—C-D2
8 M.
o ^VaI—Cit—C-D2
mPEG
O
O
O
PEG
O
O
mPEG
O
•Vai—Cit—C-NH-
O f^N'*52
íl A.S.
W //
D1
O
D2 O
D2
mPEG
O
^ /)—NH-C-Cit-Val
R52^n'R51h o'
N
NH
PEG
O
O
Il
Phe-Lys-C-
O r^N'*52
N^ Λ .S. em que
mPEG tem Fórmula: CH3-O(CH2CH2O)n-; PEG tem Fórmula -O(CH2CH2O)n-;
(n) é um número inteiro positivo de cerca de 10 a cerca de 2.300; R51 e R52 são independentemente selecionados dentre hidrogênio, Ci_6 alquilas, C3-I2 alquilas ramificadas, C3.8 cicloalquilas, Cu6 alquilas substituídas, C3.8 ciloalquilas substituídas, arilas, arilas substituídas, aralquilas, CN6 heteroalquilas, Cu6 heteroalquilas substituídas, C,.6alcóxi, C|.6 alquiloxicarbonila, ariloxicarbonil, fenóxi e Cn6 heteroalcóxi; D1 é uma porção direcionadora, um grupo funcional ou um grupo de saída; e D2 é uma porção biologicamente ativa, um grupo funcional ou um grupo de saída. Compostos poliméricos preferidos de acordo com a presente invenção incluem:
mPEG^N
SN38
nY^=-V
O O
SN38
C—SN38
mPEG^N
O
SN38—C-
-Cit—Val
"NH I H
O H hV
O
Il /= -VaI—Cit-C
^ //
SN38
O
Il
\\ /-C-Cit-Val
SN38 NH
η Hr
O
-VaI—Cit—C-
W //
0
SN38
mPEG
O H
O
SN38 -k.
O
O'
0
Il
SN38 j—& /)-N—C-Cit-Val
V-O ^jf H NH
o^VpEG-γΝ^
U0
3-SN38
mPEG
SN38
o
Il
SN38C-Cit-Val
η 7
peg^nY% Q
O
O
Il
-VaI—Cit—C-SN38 H hV
mPEG^NY"S
O
Il /= -VaI—Cit—C
^ //
"o O.
SN38
\ />— C-Cit-Val
SN38 ^NH
SN38
mPEG
O
HN/Val-Cit-C—ΝΗΛχ ^
O o.
SN38
O
O
O
O
SN38 /—(\ />-NH-C-Cit-Val
o cA ^n
Γ
PEG' O O
HN'
O
Il
-VaI—Cit—C-NH-
O
W
SN38
O
O
Il
-VaI—Cit—C-SN38
H HN mPEG^N O
O
NO2,
O
Il
SN38 C-Cit-Val
NH
NHBoch o^VN^PEG
•Vai—Cit—C-SN38
O NHBoc N
NO2
NO2 O
H "ϊ ^ SN38
mPEG^YNVx) NHBoc N'
S JL λ .s. 1
O
NO,
O
Il
SN38
-Cit-Val
NHBoc ο
-S A ,ν
NO2
PEG
NO2
mPEG^Y
SN38
NO2
i)—NH-C-Cit-Val
PEG
O Il
-VaI—Cit—C-NH
Ό NHBoc N
O
SN38
O
Il
,Phe-Lys-C-
-SN38
ι
mPEG^i^V^O NHBoc N'
NO2,
O
Il
SN38 C-Lys-Phe
O
Il
NH
PEG
HN'
,Phe—Lys-C-SN38
O
NO2 , O
H "ϊ " SN38
mPEG^^^V^O NHBoc N'
0
NO2
O
Il
\ /)-C-Lys—Phe
SN38 ^ NH Η
NHBCCh 0^YNY^peg
NO2
mPEG
O
Il / — \
.Phe-Lys-C-NH—(J>—χ SN38
H 0-^
N Χο
0
O
NO,
NO2 ,
SN38 /—<! )—NH-C-Lys-Phe
^0 i: τ η
υ """ N NHBoc O^Vn Y^PEG-
O O
O
O
HN
/Phe-Lys-C-NH—(J
Ό NHBoc N
O
M
SN38
O
NO2
O
Il
-VaI—Cit—C-SN38
mPEG^ff γ' ^O
O L ^^ ^NH2
O
Il
SN38C-Cit-Val
O
Il
^VaI—Cit—C-SN38
Y-PEG-V-A,
O-LNA LNA-O
PEG
0
Il
-VaI—Cit—C-SN38
mPEG^YN^0
0
Il
SN38 C-Cit-Val
SCA
S-SCA
PEG
O-LNA
SN38
S-SCA
SN38
mPEG^N- 0
S-SCA
0
Il
SN38—C-Cit-Val
SCA-S
nY-PEG
3—SN38
SCA O
mPEG
/Val-Cit-C-^ H ι SN38
O
SN38
SCA-S
SN38
S-SCA
mPEG^Y
O
Λ /)-N-C-Cit-Val
SN38—^ ^ H NH
° 0
H ,Ν.
H
,Nv
^Val-Cit-C-N-^ „
SN38
O
SCA-S
Jx
O
Ν" ·Λ H 0
w ~Ν O H .Ο.
S-SCA
H 7
O
O
Il
-VaI—Cit-C-SN38
Ό Ο. F .
O
Il
SN38-C-Cit-Val
-VaI—Cit—C-SN38
-Nv^-S-SCA O mPEG
HN
O
Il /=■ -VaI—Cit-C
O ο.
^ //
SN38
vV
^Ny/ S-SCA O
O
<\ />—C-Cit-Val
SN38 NH
SCA-S-V Μ. - J 0 O
HN/Val-Cit-C^x //
mPEG^^ O
SN38
\ /-NH—C-Cit—Val
SN38—^ NH
PEG
3-SN38
mPEG
SN38-C-Cit-Val
PEG
•Vai—Cit—(:-SN38 O
Il
Λ/al—Cit—C-
-SN38
ι
mPEG^^Y^O Η NH2
S-SCA
O
SN38-
SCA-S'
-Cit-Val
NH
2 η o^Vr^T
^-N^^J O O
SN38
S-SCA
O
H Ϊ
mPEG^fl^y^O H NH2
O L ^N^
O
SN38
SCA-S
PEG
O
O
O
mPEG
S-SCA
SN38
SN38
O
O
Á /)-NH-C-Cit-Val
NH2 H O' N
NH
SCA-S'
PEG' O O
HN'
O
,-Val—Cit-C—NH-
0 H NH2
O
SN38
O
^S-SCA
O O
Il
,Phe-Lys-C-SN38
mPEG^YNY^0 H
O ^N^^-Folic acid
O
SN38-C-Lys-Phe
Folie acid^^-N O
O
Il
Phe-Lys-C-SN38
O
Il
,Phe-Lys-C-SN38
mPEG^f^Y^O NH2
O L ^N. A .S-
S-SCA
O
O
Il
O
SN38-C-Lys-Phe
Phe-Lys-C-SN38
SCA-S
"S-SCA
O
mPEG
O
SN38
/Phe-Lys-C-<( >
SN38
SCA-S
S-SCA O
,Phe—Lys-C—NH—)
π
H NH2
SN38
O
"S-SCA
O
\ )—NH-C-Lys-Phe
SN38—W NH
O KlLJ J^ ,N
O
SCA-S
NH2 H o
^PEG O Ò
HN
O
,Phe—Lys-C—NH—i)
O H NH2 N-
SN38
O
O
"S-SCA
C-SN38
S-RGD
SN38-C-Cit-Val
RGD-S
PEG
C-SN38
S-RGD
O
Il
-VaI—Cit—C—SN38
mPEG^YNy^O
O
S-RGD
O
Il
SN38—C-Cit-Val
RGD
HN
O
Il
-Vai—Cit—C—SN38
o o (
RGD mPEG
SN38
O'
^y-S-RGD
SN38
RGD
_ 0 λ V-C-Cit-Val
NH
0^X ^ Y^" peg^T
H O
SN38
S-RGD
mPEG
HN'
O
Il
-VaI—Cit—C-SN38
O
O ο.
.N^V-S-RGD O
SN38
PEG
Val—Cit—C-SN38
S-RGD mPEG
SN38
\ /)—C-Cit-Val
SN38 " NH
H H
.0 O^r^Y^PEG^f^V^O Ο.
O
rgd-s-λ^ν.
O
SN38
O
-N^^-S-RGD O
PEG
HN'
O
Il
Λ/al—Cit—C-SN38
O
O
N-___,-NH-RGD
Π ο
ο
SN38-C-Cit-Val .Val—Cit—C-SN38
NH Η Η HN
ι_ι ο\νΥ^ρεο^υν>Λο η
RGD-NH^^^^J O O L/^^N__^NH-RGD
T T
ο ο O
Il
MaS—Cit-C-SN38
NH2
O ,N^ A. - S-
SN38
RGD-S'
S-RGD
C-SN38
nY-PEG-YV O O
'S-RGD
O
mPEG
O
SN38
O
Il
Λ /)-C-Cit-Val
RGD-S'
NH H |_|
η OsS-nY^PEOTn
O O
O
Il
-VaI—Cit-c—NH—4 }
mPEG
-SN38
O
S-RGD O
Il
Phe-Lys-C-SN38
mPEG
Il °
SN38-C-Lys-Phe /Phe-Lys-C-SN38
NH Η η HN
RGD-NI-K___ν
π
ο
Ν^^^ O O
3-SN38
mPEG
S-RGD
SN38-C-Lys-Phe
RGD-S'
PEG
Phe-Lys-C-SN38
O
mPEG
O
O
O
Il
\ />-C-Lys—Phe
SN38 W NH
S-RGD
O
RGD-S'
2 H 0^N^PEG
O O
^Phe-Lys-C-NH—<J )
η Hi
mPEG^|-NY^O H NH2
SN38
"S-RGD
O
SN38
mPEG
LNA-O
O-LNA
H H
H O- YnY-PEG^Ynt -O FoIic Acid^^N^^^ J O O L^-. Acid
Π Π
O O
O-LNA
mPEG
LNA-O
H
-N^O
NH
H
Folie Acid ^^^ ν
Π
O
em que
S-SCA é um anticorpo de cadeia simples;
"r^-V^A η
O O
O-LNA
N^ Folie Acid
Π
O RGD é
HS
LNA é ácido nucléico bloqueado; "Folie acid" é o resíduo de
OH
SN38 é 7-etil-10-hidroxicamptotecina;
mPEG tem Fórmula: CH3-O(CH2CH2O)n-;
PEG tem Fórmula -O(CH2CH2O)n-; e
(n) é um número inteiro positivo de cerca de 10 a cerca de 2.300.
I. MÉTODOS PARA PREPARAR OS CONJUGADOS
Geralmente, os conjugados podem ser feitos pela adição seqüencial de polímero, agente citotóxico e porção direcionadora ao ligante multifuncional. A ordem exata de adição não é limitada a esta ordem e, como será evidente para um técnico no assunto, existem aspectos onde o PEG será adicionado primeiro ao ligante multifuncional, seguido pela adição do agente direcionador tal como um anticorpo monoclonal. Detalhes relativos a alguns aspectos preferidos desta modalidade são apresentados nos Exemplos abaixo.
Em um aspecto da invenção, o composto polimérico tendo um ligante multifuncional pode ser preparado pela conjugação de um composto polimérico tendo um grupo OH ou um grupo de saída terminal com um nucleofilo contendo um agente citotóxico ligado por meio de um ligante opcional. O técnico no assunto poderá utilizar menor quantidade de nucleofilo quando comparado ao número de grupos de saída no polímero para formar um intermediário contendo tanto agente citotóxico e grupos de saída. Este intermediário pode ainda reagir com uma porção direcionadora para formar o conjugado polimérico multi-substituído com agente citotóxico e agente direcionador. Alternativamente, o polímero pode ser ativado com grupos diferentes para dar reatividades químicas diferentes frente a várias porções nucleofilicas. Por exemplo, grupos de proteção diferentes tais como tert-Bu éster e éster metílico de terminais de ácidos carboxílicos podem ser desprotegidos seletivamente e passo-a-passo para gerar vários graus de grupos ativos para serem conjugados com agentes biologicamente ativos tais como agentes citotóxicos e agentes direcionadores. Como mostrado na FIG. 1, o grupo maleimidila e éster succinimidilico podem reagir seletivamente com porções contendo SH ou NH2, respectivamente.
Todas as reações químicas aqui descritas são reações com condições e etapas necessárias conhecidas de um técnico no assunto. As reações sintéticas aqui descritas não necessitam de experimentação desnecessária.
Os métodos para preparar conjugados poliméricos contendo ligantes multifuncionais compreendem:
Reagir um composto de Fórmula (IIIa):
M1-(L1)a-L2-M2
Ri
A21 (IIIa)
com um composto contendo uma porção biologicamente ativa de Fórmula (IIIb): M3-(L3)b—D22
sob condições suficientes para formar um composto de Fórmula (IIIc):
M1-(L1)a-L2-(L3)b-D22
I
í1
a22 (IIIC)
em que
R, é um polímero hidrossolúvel substancialmente não-antigênico;
A2I é um grupo de proteção ou A22 é um grupo de proteção ou
M1-(L1)a-L2-(L3)b-D22 .
Mi é um grupo funcional;
D22 é uma porção biologicamente ativa;
M2 é OH ou um grupo de saída;
M3 é OH, NH2, ou SH;
Li é um ligante permanente ou um ligante lábil;
L2 é um ligante multifuncional;
L3 é um ligante permanente ou um ligante lábil; e
(a) e (b) são independentemente zero ou um número inteiro positivo.
Os métodos ainda incluem
Reagir o composto de Fórmula (IIIc):
M1-(L1)a-L2-(L3)b-D22
f
A22 (IIIC)
com uma porção contendo nucleofílo tendo Fórmula (IIId) D2-M4 (I]Id)
em condições suficientes para formar um composto de Fórmula (IIIe) D2-(L1)a-L2-(L3)b-D22
I
Ri
A23 (IIIe)
em que:
A23 é um grupo de proteção ou
D2-(L1)a-L2-(L3)b-D22 .
Mi é um functional group; D2I é uma porção direcionadora; e M4 é OH, NH2, ou SH. A ligação de um composto nucleofilico tal como os de Fórmula (IIIb) ao PEG ou outro polímero pode ser feita utilizando técnicas de síntese orgânica padrão bem conhecidas de um técnico no assunto. A porção polimérica ativada tal como SC-PEG, PEG-amina, ácidos PEG, etc. pode ser obtida tanto de fontes comerciais quanto ser sintetizada pelo técnico no assunto sem experimentação desnecessária.
A ligação de composto nucleofilico tal como os de Fórmula (IIIb) a porções poliméricas é preferêncialmente conduzida na presença de um agente de acoplamento. Uma lista não-limitante de agentes de acoplamento inclui 1,3-diisopropilcarbodiimida (DIPC), qualquer carbodiimida de dialquila, haletos de 2-halo-l-alquil-piridinio (regaentes de Mukaiyama), 1 -(3-dimetilaminopropil)-3-etil carbodiimida (EDC), anidrido cíclico de ácido propanofosfônico (PPACA) e fenil diclorofosfatos, etc. que são disponíveis, por exemplo, de fontes comerciais tais como Sigma-Aldrich Chemical, ou sintetizados utilizando técnicas conhecidas.
Preferêncialmente, as reações são conduzidas em solvente inerte tal como diclorometano, clorofórmio, DMF ou misturas destes. As reações podem ser preferêncialmente conduzidas na presença de uma base tal como dimetilaminopiridina (DMAP), diisopropileti lamina, piridina, trietilamina, etc. para neutralizar ácidos eventualmente gerados. As reações podem ser conduzidas em temperaturas de cerca de O0C a cerca de 22°C (temperatura ambiente). Algumas modalidades particulares preparadas pelos métodos aqui descritos incluem:
H. MÉTODOS DE TRATAMENTO
Em aspectos alternativos da invenção, são também apresentados métodos para tratar um mamífero compreendendo administrar uma quantidade eficaz de uma composição farmacêutica contendo um composto da presente invenção de Fórmula (I) a um paciente com necessidade da mesma.
Em um aspecto preferido da invenção, são também providos métodos para tratar um paciente tendo uma neoplasia ou câncer, compreendendo administrar uma quantidade eficaz de uma composição farmacêutica contendo um composto da presente invenção de Fórmula (I) a um paciente com necessidade da mesma. Em alguns aspectos, o câncer sendo tratado pode ser um ou mais dos seguintes: tumores sólidos, linfomas, câncer de pulmão de célula pequena, leucemia linfócita aguda (ALL), câncer pancreático, glioblastoma, câncer de ovário, cânceres gástricos, etc. As composições são úteis para tratar doenças neoplásicas, reduzir o fardo do tumor, prevenir metástases ou neoplasmas e prevenir recorrências de tumor/crescimento neoplásico em mamíferos.
Um outro aspecto da presente invenção apresenta métodos de tratamento de varias condições médicas em mamíferos. Resumidamente, qualquer porção biologicamente ativa que possa ser ligada ao polímero PEG pode ser administrada a um mamífero com necessidade de tal tratamento. Qualquer oligonucleotídeo, etc. que tenha efeito terapêutico em seu estado não-conjugado pode ser utilizado em sua forma conjugada, feita como aqui descrito.
A quantidade de composição que será administrada vai depender da molécula precursora ali incluída. Geralmente, a quantidade de pro droga utilizada nos métodos de tratamento é uma quantidade que alcança eficazmente o resultado terapêutico em mamíferos. Naturalmente, as doses de vários compostos por drogas variarão dependendo do composto precursor, razão de in vivo, peso molecular do polímero, etc. um técnico no assunto determinara a dose ótima dos conjugados de transporte poliméricos baseando-se na experiência clinica e na indicação de tratamento. As dosagens verdadeiras serão evidentes para um técnico no assunto sem experimentação desnecessária.
Os compostos da presente invenção podem ser incluídos em uma ou mais composições farmacêuticas para administração em mamíferos. As composições farmacêuticas podem ser com base em uma solução, suspensão, tablete, cápsula ou semelhante, preparadas de acordo com métodos bastante conhecidos no estado da técnica. Também é contemplado que tais composições podem ser para vias orais e/ou parenterais, dependendo das necessidades do técnico no assunto. Uma solução e/ou suspensão da composição pode ser utilizada, por exemplo, como um veiculo para injeção ou infiltração da composição por meio de técnicas conhecidas no estado da técnica, e.g., injeção intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, subcutânea e semelhantes. TaI administração pode também ser por infusão em um orifício ou cavidade, assim como por inalação ou vias intranasais. Em aspectos preferidos da invenção, entretanto, os conjugados poliméricos são administrados parenteralmente a mamíferos com necessidade dos mesmos.
Em ainda um aspecto da presente invenção, são providos métodos para administrar polinucleotídeos (oligonucleotídeos), preferêncialmente oligonucleotídeos antisenso a células de mamíferos. Os métodos incluem transportar uma quantidade efetiva do conjugado preparado como aqui descrito para a condição sendo tratada e dependerão da eficácia dos polinucleotídeos para tais condições. Por exemplo, se o oligonucleotídeo não-conjugado (por exemplo BCL2 oligonucleotídeos antisenso, Survivin-oligonucleotídeos antisenso) possuir eficácia contra certos cânceres ou células neoplásicas, o método vai incluir transportar um conjugado polimérico contendo os oligonucleotídeos a células tendo suceptibilidade aos oligonucleotídeos nativos. O transporte pode ser feito in vivo, como parte de uma composição apropriada, ou diretamente a células num ambiente ex vivo. Em um tratamento particular, os conjugados poliméricos incluindo oligonucleotídeos (SEQ ID NO. 1, SEQ ID NOs: 2 e 3, e SEQ ID NO: 4) podem ser utilizados.
EXEMPLOS
Os exemplos a seguir servem para melhor compreensão da invenção mas não são, de maneira nenhuma, restritores do escopo da invenção. Os números em negrito citados nos Exemplos correspondem aos mostrados na Fig. 1. Abreviações foram utilizadas em todos os exemplos, tais como DCC (diciclohexilcarbodiimida), DCM (diclorometano), DCU (Diciclohexilureia), DIEA (diisopropiletilamina), DIPC (diisopropilcarbodiimida), DMAP (4-dimetilaminopiridina), DMF (Ν,Ν'-dimetilformamida), DSC (disuccinimidil carbonato), EDC (l-(3-dimetilaminopropil)-3-etil carbodiimida), EEDQ (2-etoxi-l-etoxicarbonil-l ,2- dihidroquinolina), IPA (isopropanol), NHS (N-hidroxisuccinimida), NMM (N- metilmorfolina), PEG (polietileno glicol), SCA-SH (amticorpo de cadeia simples), SN38 (7- etil-10-hidroxicamptotecina), TBDPS (tert-butil-dipropilsilil), e TEA (trietilamina).
Procedimentos Gerais. Todas as reações foram conduzidas em atmosfera de nitrogênio seco ou argônio. Reagentes comerciais foram utilizados sem posterior purificação. Todos os compostos PEG foram secos in vácuo ou por destilação azeotropica com tolueno antes do uso. Espectros de RMN1H foram obtidos em 300 MHz e os de RMN13C em 75,46 MHz utilizando um espectrômetro Varian Mercury 300 e clorofórmio deuterado foi utilizado como solvente a não ser que especificado em contrario. Deslocamentos químicos (δ) foram reportados em partes por milhão (ppm) a partir do deslocamento do tetrametil silano (TMS).
Método de HPLC. A mistura reacional e a pureza dos intermediários e produtos finais foram monitorados em um instrumento Beckman Coulter System Gold® HPLC. Ele emprega uma coluna de fase reversa ZORBAX® 300SB C8 (150 χ 4,6 mm) ou Phenomenex Júpiter® 300A Cl8 (150 χ 4,6 mm) com detetor UV 168 Diode Array, usando gradiente de 10-90 % de acetonitrila 0,05 % de ácido trifluoroacético (TFA) em razão de fluxo de 1 mL/min.
Exemplo 1. N-(Metoxicarbonil)maleimida (composto 1).
Metilcloroformato (4,4 mL, 56,7 mmol, 1 eq) foi adicionado a uma solução de maleimide (5,5 g, 56,7 mmol, 1 eq) e NMM (6,2 mL, 56,7 mmol, 1 eq) em 200 mL of EtOAc em 0°C. A suspensão foi agitada a O0C por 30 minutos, filtrada e lavada com EtOAc. O filtrado e as lavagens foram combinados e lavados com água fria sob Na2SO4 anidro. Depois da filtração e evaporação sob vácuo, um sólido rosa foi obtido. Purificação por cromatografia em coluna com sílica gel (Hexano-EtOAc, 1:1, v/v) deu o produto (4,8 g, 55%).
Exemplo 2. NE-Maleoil-a-(Boc)-L-lisina (composto 2).
N-(Metoxicarbonil)maleimida (315 mg, 2,03 mmol, 1 eq) foi adicionado a uma solução de Boc-L-Iisina (500 mg, 2,03 mmol, I eq) em 10 mL de NaHCO3 aquoso saturado a 0°C. A mistura foi agitada vigorosamente a O0C por 40 minutos em temperatura ambiente por mais uma hora. Depois de resfriada a 0°C, a solução foi acidificada a pH 3,0 com H2SO4 concentrado antes de extração com acetato de etila. As fases orgânicas foram combinadas e secas sob MgSO4 anidro. Depois da remoção do solvente in vácuo, o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna com silica gel utilizando uma mistura de CHCI3-MeOH (5:1, v/v) para dar o produto (458 mg, 69%): RMN1H δ 1,39-1,87 (6 Η, m, (CH2)3), 1,44 (9H, s, Boc), 3,52 (2H, t, J = 7,2 Hz, NCH2), 4,25-4,30 (1H, m, CH), 5,15 (1H, d, NH), 6,70 (2H, s, maleimide).
Exemplo 3. NE-Maleoil-a-L-lisina (composto 3). Uma solução de NE-maleoil-a-(Boc)-L-lisina (172 mg, 0,53 mmol) em 5 mL de DCM anidro foi tratada com 10 mL de solução 2N HCI em éter etílico por uma hora em temperatura ambiente antes da adição de 10 mL de éter etílico anidro. O sólido resultante foi filtrado para dar um rendimento de 82 mg (59%) do sal de HCl de N£-Maleoil-a-L-lisina: RMN1H (CD3OD) δ 1,36-1,54 (2 Η, m, CH2), 1,65 (2 Η, q, J = 7,2 Hz, CH2), 1,83-2,02 (2 Η, m, CH2), 1,44 (9H, s, Boc), 3,53 (2H, t, J = 6,9 Hz, NCH2), 3.95 (1H, t, 6,2 Hz, CH), 6,82 (2H, s, maleimide); RMN13C (CD3OD) δ 23,17, 29,03, 31,01, 37,96, 135,26, 172,34, 175,20.
Exemplo 4. 5KmPEG-amida-Lys(NE-maIeoiI)-COOH (composto 4).
A uma solução de 51SnPEGCOONHS (805 mg, 0,16 mmol, 1 eq) em 8 mL de DCM anidro, adicionou-se NE-maleoil-a-L-lisina (3, 82 mg, 0,31 mmol, 2 eq) em 2 mL de DMF seguido por DIEA (109 μί, 0,62 mmol, 4 eq). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite, filtrada e evaporada sob vácuo. O resíduo foi primeiramente precipitado com DCM/éter e então recristalizado com CH3CN/IPA. RMN13C (CDCI3): δ 22,53, 28,02, 31,69, 37,32, 51,18, 58,86, 70,11-71,73 (PEG), 133,84, 169,51, 170,38, 172,41.
Exemplo 5. 5KmPEG-amida-Lys(NE-maleoil)-NHS (composto 5).
5KmPEG-Lys(NE-maleoil)-COOH (4) e NHS em DCM a O0C foram tratados com DCC. A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. O solvente foi evaporado sob vácuo e o resíduo precipitado com DCM/éter e então recristalizado com CH3CN/IPA.
Exemplo 6. SKmPEG-carbamato-Lys(NE-maIeoiI)-COOH (composto 6).
A uma solução de 5KmPEGCOONHS (5 g, 0,98 mmol, 1 eq) em 45 mL de DCM anidro, adicionou-se NE-maleoil-a-L-lisina (3, 514 mg, 1,95 mmol, 2 eq) em 5 mL de DMF seguido de DIEA (0,7 mL, 3,92 mmol, 4 eq). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite, filtrada e evaporada sob vácuo. O resíduo foi primeiramente precipitado com DCM/éter etílico e então recristalizado com CH3CN/IPA para dar o composto 6: RMN13C δ 22,30, 28,01, 31,89, 37,29, 53,26, 58,89, 64,06, 69,31-71,77 (PEG), 133,87, 155,60, 170,42, 172,82. Exemplo 7. 5KmPEG-carbamato-Lys(Ne-maleoil)-NHS (composto 7).
A uma solução de 5KmPEG-carbamato-Lys(Ne-maleoil)-COOH (6, 1 g, 0,19 mmol, 1 eq) e NHS (88 mg, 0,76 mmol, 4 eq) em 10 mL de DCM a 0°C adicionou-se DIPC (118 μί, 0,76 mmol, 4 eq). A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. Os solventes foram evaporados sob vácuo e o resíduo foi precipitado com DCM/éter e então recristalizado com CH3CN/IPA para dar o composto 7: RMN13C δ 22,31, 25,90, 28,25, 32,39, 37,44, 52,42, 59,30, 64,92, 69,64-72,18 (PEG), 134,25, 155,59, 167,75, 168,55, 170,91.
Exemplo 8. Composto 8.
A uma solução de 5'extGS (5 mg, 0,85 μιηοΐ) em tampão PBS (2,5 mL, pH 7,8) adicionou-se o composto 7 (92 mg, 17 μιηοΐ, 20 eq) e a mistura foi agitada em temperatura ambiente por 2 horas. A mistura reacional foi diluída a 10 mL com água, filtrada e vertida numa coluna Poros HQ, de troca iônica forte (10 mm χ 1,5 mm, volume de leito ~ 16 mL) que foi pré- equilibrada com tampão Tris-HCI 20 mM, pH 7,0 (tampão A). A coluna foi lavada com 3-4 volumes de coluna de tampão A para remover o excesso de ligante PEG. Então, o produto foi eluido com um gradiente de 0 a 100 % IM NaCl em tampão Tris-HCI 20 mM, pH 7,0, tampão B em 10 minutos, seguido por 100 % tampão B por 10 minutos numa razão de fluxo de 10 mL/min. O produto eluido foi dessalgado utilizando-se uma coluna de dessalinização HiPrep (50 mL) e liofilizado para dar o 8 (1 mg oligo equivalente, 40% rendimento).
Exemplo 9. Composto 9.
A uma solução de composto 8 (1 mg oligo equivalente) em tampão PBS (1 mL, pH 7,0) adicionou-se o peptídeo cRGDfC (1 mg , 1,7 μιηοΐ) e a mistura foi agitada em temperatura ambiente por 2 horas. A mistura reacional foi diluída a 20 mL com água e vertida numa coluna Poros HQ, de troca iônica forte (10 mm χ 1,5 mm, volume de leito ~ 16 mL) que foi pré-equilibrada com tampão Tris-HCl 20 mM, pH 7,0 (tampão A). A coluna foi lavada com 3-4 volumes de coluna de tampão A para remover o excesso de ligante PEG. Então, o produto foi eluido com um gradiente de 0 a 100 % IM NaCl em tampão in Tris-HCl 20 mM, pH 7,0, tampão B por 10 minutos, seguido por 100 % tampão B por 10 minutos com razão de fluxo de 10 mL/min. O produto eluido foi dessalgado utilizando-se a coluna de dessalinização HiPrep (50 mL) e Iiofilizado para dar o composto 9 (0,78 mg oligo equivalente, 78% rendimento).
Exemplo 10. Composto 10.
A uma solução de álcool p-amino-benzilico (1 g, 8,12 mmol, 1 eq) em 80 mL de THF anidro adicionou-se DIEA (1,4 mL, 8,12 mmol, 1 eq) e Boc2O (1,9 mL, 8,12 mmol, 1 eq). A mistura foi aquecida a refluxo durante a noite e então resfriada e evaporada sob vácuo. O resíduo foi dissolvido em EtOAc. A fase orgânica foi lavada com solução 0,1N de HCl, seca sob MgSO4, filtrada e evaporada sob vácuo. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna em silica gel (Hex-EtOAc, 1:1, v/v) para dar 1,85 g de produto (rendimento quantitativo): RMN1H δ 1,49 (9H, s), 2,17 (1H, s), 4,53 (2H, s), 6,83 (1H, s), 7,19 (2H, d, J = 8,5 Hz), 7,28 (2H, d, J = 8,2 Hz); RMN13C δ 28,28, 64,54, 80,37, 118,49, 127,59, 135,31, 137,46, 152,72.
Exemplo 11. Composto 11.
A uma solução a -20°C do composto 10 (220 mg, 0,98 mmol, 1 eq) e DIEA (188 μί, 1,08 mmol, 1,1 eq) em 8 mL de DCM anidro, adicionou-se uma solução de MsCl (84 μί, 1,08 mmol, 1,1 eq) em 2 mL de DCM andro, gota a gota. A mistura foi deixada alcançar a temperatura ambiente e então agitada por 1 hora. A mistura reacional foi lavada com solução de NaHCO3 saturada, solução de NH4Cl saturada e salmoura, seca sob MgSO4, filtrada e evaporada sob vácuo. O composto bruto foi utilizado na etapa seguinte sem purificação adicional.
Exemplo 12. Composto 12.
O composto 11 (0,98 mmol, 2 eq) foi dissolvido em 15 mL de DMF anidro e adicionou-se SN38 (192 mg, 0,49 mmol, 1 eq) e K2C03 (68 mg, 0,49 mmol, 1 eq). A mistura reacional foi aquecida a uma temperatura de 60° usando-se um banho de óleo pré-aquecido. Após 2 horas, o HPLC mostrou o desaparecimento total de SN38 e a formação substancial do produto. A mistura reacional foi evaporada sob vácuo e o resíduo re-dissolvido em EtOAc e lavado com água, NH4CI saturado e salmoura, seco sob MgS04, filtrado e evaporado sob vácuo. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna em silica gel (CH2Cl2- EtOAc, 1:1, v/v) para dar 140 mg de produto (48% rendimento): RMN1H (DMSO-rf6) δ 0,88 (3H, t, J = 7,0 Hz), 1,27 (3H, t, J = 7,3 Hz), 1,47 (9H, s), 1,85-1,88 (2H, m), 3,15-3,17 (2H, m), 5,25 (2H, s), 5,26 (2H, s), 5,42 (2H, s), 6,49 (1H, s), 7,26 (1H, s), 7,41-7,56 (6H, m), 8,05 (1H, d, J = 9,1 Hz), 9,39 (1H, s); RMN13C (DMSO-ífc) δ 7,65, 13,31, 22,09, 27,96, 30,11, 49,31, 65,05, 69,47, 72,17, 78,84, 95,74, 103,39, 117,71, 117,92, 122,35, 127,44, 127,99, 128,43, 129,59, 131,07, 139,07, 143,46, 144,06, 145,92, 149,21, 149,69, 152,37, 156,46, 156,82, 172,11.
Exemplo 13. Composto 13.
Uma solução 15% (v/v) TFA em DCM foi adicionada ao composto 12 (535 mg) e a mistura foi agitada em temperatura ambiente por Ih ou até que o HPLC tenha mostrado completo desaparecimento do material de partida. Éter etílico (200 mL) foi adicionado e o sólido resultante foi filtrado e lavado com mais éter (307 mg, 58% rendimento).
15
Exemplo 14. Composto 14.
Composto 13 (48 mg, 0,1 mmol, 1 eq) e 15 (36 mg, 0,1 mmol, 1 eq) foram tratados com EEDQ (48 mg, 0,2 mmol, 2 eq). A mistura foi agitada no escuro em temperatura ambiente durante a noite. Os solventes foram removidos sob vácuo e o resíduo sólido foi triturado com 10 mL de éter etílico. O sólido foi filtrado e purificado por cromatografia em coluna com silica gel (CHCl3:MeOH, 15:1 a 9:1) para dar o produto desejado (8 mg, 9% rendimento): RMN13C (DMSO-40 δ 7,8, 13,49, 18,11, 18,17, 18,58, 19,13, 19,25, 22,25, 26,51, 26,72, 28,19, 29,59, 30,26, 30,41, 30,50, 49,49, 51,67, 51,80, 52,90, 55,98, 59,26, 59,67, 63,03, 65,21, 69,54, 72,33, 77,91, 78,01, 95,92, 103,63, 118,10, 118,95, 122,52, 127,63, 128,21, 128,58, 131,17, 131,27, 138,53, 143,69, 144,25, 146,10, 149,43, 149,86, 155,15, 155,26, 156,63, 156,97, 158,48, 158,66, 170,39, 171,15, 171,33, 172,15, 172,29.
Exemplo 15. Boc-VaI-Cit-OH (Composto 15).
Boc-Val-NHS (10 g, 31,81 mmol, 1 eq) em 80 mL de DME foi adicionado a uma solução de L-citrulina (5,85 g, 33,40 mmol, 1,05 eq) em 20 mL de THF e NaHCO3 (2,8g, 33,40 mmol, 1,05 eq) em 80 mL de água. A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante noite. Ácido cítrico aquoso (200 mL de solução 15% em água) foi adicionado e a mistura foi extraída com 10% IPA/EtOAc (2 χ 200 mL). A suspensão foi lavada com água (2 χ 200 mL) e o solvente evaporado sob vácuo. O sólido resultante foi triturado com 200 mL de éter etílico e filtrado para dar o produto (6,08 g, 51% rendimento): RMN1H (CD3OD) δ 0,92 (3H, d, J = 6,7 Hz), 0,97 (3H, d, J = 6,7 Hz), 1,44 (9H, s), 1,51-2,06 (5H, m), 3,12 (2H, t, J = 6,7 Hz), 3,90 (1H, d, J = 7,0 Hz), 4,37-4,41 (1H, m). RMN13C (CD3OD): δ 18,58, 19,83, 27,58, 28,75, 30,03, 32,09, 40,48, 53,33, 61,38, 80,49, 157,75, 162,05, 174,30, 174,69.
Exemplo 16. Composto 16 (Boc-Val-Cit-PAB).
Boc-Val-Cit (1 g, 2,67 mmol, leq) e álcool p-aminobenzilico (362 mg, 2,94 mmol, 1,1 eq) em 2:1 DCM/MeOH (26 mL/13 mL) foram tratados com EEDQ (1,32 g, 5,34 mmol, 2 eq). A mistura foi agitada no escuro em temperatura ambiente durante a noite. Os solventes foram removidos sob vácuo e o sólido resultante triturado com 10 mL de éter etílico. O sólido foi coletado por filtração e lavado com éter etílico para dar o produto (900 mg, 70%): RMN1H (CD3OD) δ 0,93 (3H, d, J = 7,0 Hz), 0,97 (3H, d, J = 7,0 Hz), 1,44 (9H, s), 1,49-2,06 (5H, m), 3,07-3,29 (2H, m), 3,91 (1H, d, J = 6,7 Hz), 4,50-4,55 (3H, m), 7,29 (2H, d, J = 8,5 Hz), 7,54 (2H, d, J = 8,5 Hz), 8,22 (1H, d, J = 7,3 Hz); RMN13C (CD3OD) δ 18,64, 19,85, 27,84, 28,75, 30,61, 31,92, 40,28, 54,90, 54,99, 61,73, 64,78, 80,62, 121,09, 128,44, 138,47, 138,55, 158,01, 162,11, 172,00, 174,42, 174,52.
20
Exemplo 17. Composto 14 (Boc-Val-Cit-PABE-SN38).
A uma suspensão de Boc-Val-Cit-PAB (214 mg, 0,45 mmol, 1 eq) em 3 mL de CH3CN, adicionou-se DIEA (0,23 mL, 1,35 mmol, 3 eq) seguida de adição, gota a gota, de uma solução de MsCI (0,1 mL, 1,35 mmol, 3 eq) em 1 mL CH3CN. Depois de 1 hora, TLC mostrou não restar mais material de partida (CHCI3-MeOH, 5:1, v/v). A mistura reacional foi evaporada sob vácuo e o resíduo resultante foi dissolvido em EtOAc. A fase orgânica foi lavada com NH4CI saturado, NaHCO3 saturado e salmoura; seco sob MgS04, filtrado e evaporado sob vácuo. O resíduo bruto foi dissolvido em 5 mL of DMF e adicionou-se SN38 (88 mg, 0,22 mmol, 0,5 eq) e K2CO3 (31 mg, 0,22 eq, 0,5 eq) e a mistura foi aquecida a 60°C por 3 horas. A formação de produto foi monitorada e conformada ao produto preparado no Exemplo 14 por HPLC. Exemplo 18. Composto 17.
Composto 14 em DCM foi tratado com solução 2N HCl em éter. Depois de completada a reação, adicionou-se éter adicional e o sólido resultante foi filtrado e lavado com éter para dar Val-Cit-PABE-SN38. A uma solução de composto 5 em DCM anidro, adicionou-se HCI-Val-Cit-PABE-SN38 em DMF anidro seguido de D1EA. A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. O solvente foi removido sob vácuo e o sólido resultante foi precipitado com DCM/éter e recristalizado com CH3CN/IPA para dar o produto.
Exemplo 19. Composto 18.
A uma solução de composto 17 (Ieq) numa mistura de DCM/DMF, adicionou-se RGDC (2 eq). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite e então o solvente foi evaporado sob vácuo. O resíduo foi precipitado com DCM/éter etílico e recristalizado com DMF/IPA para dar o produto.
Exemplo 20. Composto 19.
A uma solução de 20kPEGSC de 4 braços (7 g, 0,35 mmol, 1 eq) em 60 mL de DCM anidro, adicionou-se Lys(Boc)-OH (690 mg, 2,8 mmol, 2 eq) em 15 mL de DMF seguido de DIEA (1 mL, 5,6 mmol, 4 eq). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite, filtrada e evaporada sob vácuo. O resíduo foi primeiramente filtrado com DCM/éter etílico e recristalizado com CH3CN/IPA para dar o composto 19: RMN13C δ 21,88, 27,97, 29,04, 31,57, 39,60, 44,98, 53,00, 63,44, 68,86-70,37 (PEG), 78,04, 155,26, 172,89.
Exemplo 21. Composto 20.
A uma solução de PEG de 4 braços -Lys(Boc)-OH em 25 mL de DCM anidro, adicionou-se uma solução 4N HCl em dioxano (25 mL). A reação foi agitada em temperatura ambiente por 4 horas e então evaporada sob vácuo. O resíduo foi precipitado pela adição de éter etílico. O sólido foi filtrado e lavado com éter para dar o PEG de 4 braços -Lys-OH (1,77 g): RMN13C δ 21,97, 26,54, 31,22, 39,63, 45,11, 53,16, 63,66, 69,88-70,51 (PEG), 78,04, 155,59, 172,78. Exemplo 22. Composto 21.
Uma solução de BocCys(NPys)-OH (300 mg, 0,80 mmol, 1 eq) e NHS (97 mg, 0,84 mmol, 1,05 eq) em 10 mL de DCM anidro a 0°C foi tratada com DCC (173 mg, 0,84 mmol, 1,05 eq). A mistura foi deixada amornar a temperatura ambiente e agitada durante a noite. O produto lateral DCU sólido foi filtrado. Ao filtrado, adicionou-se composto 20 (1,7 g, 0,082 mmol, 1 eq) seguido por DIEA (114 μί, 0,66 mmol, 8 eq). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite e evaporada sob vácuo. O resíduo foi primeiramente precipitado com DCM/éter e, então, recristalizado CH3CN/IPA para dar o composto 21 (1,5 g): RMN13C δ 22,32, 25,52, 28,27, 28,83, 31,90, 39,03, 42,45, 45,38, 53,41, 53,58, 63,91, 64,37, 69,30-72,38 (PEG), 80,11, 120,98, 133,94, 142,54, 153,34, 155,51, 155,71, 157,28, 169,98, 173,32.
Exemplo 23. Composto 22.
A uma solução de composto 21 (1,5 g, 0,07 mmol, 1 eq) e NHS (125 mg, 1,09 mmol, 16 eq) em 15 mL de DCM a O0C, adicionou-se DIPC (168 μΐ, 1,09 mmol, 16 eq). A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. Os solventes foram evaporados sob vácuo e o resíduo precipitado com DCM/éter e, então, recristalizados com CH3CN/IPA para dar o produto (1,3 g): RMN13C δ 22,05, 25,76, 25,93, 28,68, 28,92, 32,01, 38,89, 42,49, 45,79, 52,40, 53,97, 64,78, 69,57-71,77 (PEG), 80,47, 121,32, 134,29, 142,93, 153,75, 155,71, 157,60, 168,18, 169,14, 169,71, 170,56.
Exemplo 24. Composto 23.
(BocPheLys(Fmoc)-OH). A uma solução de BocPheOSu (l,5g, 4,14mmol, 1 eq) em DCM (10,3 mL) e DMF (10,3 mL), adicionou-se H-Lys(Fmoc)-OH (l,84g, 4,55 mmol, 1,1 eq) seguido por DIEA (2,9 mL, 16,56 mmol, 4 eq). A mistura reacional resultante foi agitada durante a noite e diluída com acetato de etila. A solução foi lavada com água (30 mL χ 2) e salmoura (30 mL χ 2). As fases orgânicas foram combinadas, secas sob MgSO4 e concentradas in vácuo to dar um resíduo amarelo. O resíduo bruto foi então cromatografado sobre silica gel utilizando CHCl3-MeOH (3:1, v/v) para dar o produto. MS. [M+l]+ 616.
Exemplo 25. Composto 24. Composto 13 (111 mg, 0,22 mmol, I eq) e 16 (208 mg, 0,34 mmol, 1,5 eq) foram tratados com EEDQ (167 mg, 0,67 mmol, 3 eq). A mistura foi agitada no escuro em temperatura ambiente durante a noite. Os solventes foram removidos sob vácuo e o resíduo resultante triturado com 10 mL de éter etílico. O sólido foi filtrado e purificado por cromatografia em coluna em silica gel (CH2Cl2-EtOAc, 1:1 a 1:2, v/v) para dar o produto desejado (20 mg, 8% rendimento). MS. [M+l]+ 1095.
Exemplo 26. Composto 25.
Composto 24 (8 eq) foi tratado com solução 4N HCl em dioxano. A reação foi agitada em temperatura ambiente por 4 horas. Éter etílico foi adicionado e o sólido foi filtrado. Este sólido foi dissolvido em DMF e adicionado a uma solução de composto 22 (Ieq) em DCM. Adicionou-se DIEA (16 eq) a esta mistura e a reação foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. O solvente foi removido sob vácuo e o sólido resultante precipitado com DCM/éter etílico e recristalizado com DMF/IPA para dar o produto.
Exemplo 27. Composto 26.
A uma solução de composto 25 em DCM, adicionou-se piperidina. A mistura reacional foi agitada por 4 horas. O solvente foi removido sob vácuo e o sólido resultante precipitado com DCM/éter etílico e recristalizado com DMF/IPA para dar o produto.
Exemplo 28. Composto 27.
A uma solução de composto 26 (Ieq) numa mistura de DCM/DMF, adicionou-se RGDC (2 eq). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite e então o solvente foi evaporado sob vácuo. O resíduo foi precipitado com DCM/éter e recristalizado com DMF/IPA para dar o produto.
Exemplo 29. FmocVaI-Cit-OH (Composto 28 ).
Fmoc-Val-NHS (2,5 g, 5,73 mmol, 1 eq) em 15 mL de DME foi adicionado a uma solução de L-citrulina (1,05 g, 6,01 mmol, 1,05 eq) em 8 mL de THF e NaHCO3 (505 mg, 6,01 mmol, 1,05 eq) em 15 mL de água. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. Ácido cítrico aquoso (75 mL de uma solução 15% em água) foi adicionado e a mistura foi extraída com 10% IPA/EtOAc (2 χ 100 mL). As fases orgânicas foram lavadas com água (3 χ 100 mL) e o solvente foi evaporado sob vácuo. O sólido resultante foi triturado com 100 mL de éter etílico e filtrado para dar o produto (1,98 g, 70% rendimento): RMN1H (DMSO-J6) δ 0,86 (3H, d, J = 6,7 Hz), 0,90 (3H, d, J = 7,0 Hz), 1,40-1,48 (2H, m), 1,51-1,75 (2H, m), 1,98 (1H, sext, J = 6,8 Hz), 2,95 (2H, q, J = 6,2 Hz), 3,93 (1H, dd, J = 7,3, 8,8 Hz), 4,14-4,29 (4 H, m), 5,40 (2H, sinal largo), 5,96 (1H, t, J = 5,6 Hz), 7,32 (2H, t, J = 7,5 Hz), 7,39-7,44 (3H, m), 7,75 (2H, t, J = 6,3 Hz), 7,89 (2H, d, J = 7,3 Hz), 8,19 (1H, d, J = 7,3 Hz); RMN13C (DMSO-J6) δ 18,31, 19,25, 26,75, 28,40, 30,59, 46,68, 51,91, 59,81, 64,92, 65,65, 1 19,98, 125,30, 126,94, 127,52, 140,55, 143,61, 143,76, 155,88, 158,58, 171,12,173,25.
Exemplo 30. FmocVal-Cit-PAB (Composto 29).
Uma solução de composto 28 (1 g, 2,01 mmol, leq) e álcool p-aminobenzilico (273 mg, 2,21 mmol, 1,1 eq) numa mistura de DCM/MeOH (20 mL/10 mL) foi tratada com EEDQ (996 mg, 4,03 mmol, 2 eq). A mistura foi agitada no escuro em temperatura ambiente durante a noite. Os solventes foram removidos sob vácuo e o sólido resultante foi triturado com 10 mL de éter etílico. O sólido foi coletado por filtração e lavado com éter etílico para dar o produto (925 mg, 76% rendimento): RMN1H (DMSO-J6) δ 0,87 (6H, d, t = 7,5 Hz), 1,36-1,47 (2H, m), 1,51-1,75 (2H, m), 1,99 (1H, sext, J = 6,7 Hz), 2,90-3,04 (3H, m), 3,93 (1H, dd, J = 7,3, 8,8 Hz), 4,23-4,38 (4 H, m), 4,43 (2H, d, J = 5,3 Hz), 5,13 (1H, t, J = 5,6 Hz), 5,43 (2H, sinal largo), 5,99 (1H, t, J = 5,6 Hz), 7,23 (2H, d, J = 8,5 Hz), 7,32 (2H, t, J = 7,3 Hz), 7,39-7,48 (3H, m), 7,54 (2H, d, J =8,5 Hz), 7,74 (2H, t, J = 6,7 Hz), 7,89 (2H, d, J = 7,6 Hz), 8,12 (1H, d, J = 7,3 Hz); RMN13C (DMSO-J6) δ 18,34, 19,28, 26,84, 29,56, 30,47, 46,67, 53,05, 60,05, 62,55, 65,65, 118,71, 119,98, 125,23, 126,79, 126,94, 127,51, 137,27, 137,36, 140,55, 143,60, 143,73, 155,93, 158,69, 170,17, 171,06.
Exemplo 31. Val-Cit-PAB (Composto 30).
A uma solução de composto 29 (622 mg, 1,03 mmol) em 10 mL de DMF anidro foi adicionada piperidina (2 mL). A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante a noite e então os solventes evaporados sob vácuo. O resíduo foi triturado com DCM e o sólido resultante foi filtrado e lavado com DCM para dar produto (283 mg, 72% rendimento): RMN1H (DMSO-J6) δ 0,79 (3Η, d, J = 6,7 Hz), 0,89 (3Η, d, J = 6,7 Hz), 1,38-1,42 (2H, m), 1,52-1,68 (2H, m), 1,94 (1H, sext, J = 6,3 Hz), 2,89-3,01 (2H, m), 3,05 (1H, d, J = 4,7 Hz), 4,46 (2H, s), 5,09 (1H, sinal largo), 5,40 (2H, s), 5,98 (1H, t, J = 5,3 Hz), 7,23 (2H, d, J = 8,2 Hz), 7,54 (2H, d, J = 8,5 Hz), 8,14 (1H, sinal largo), 10,03 (1H, s); RMN13C (DMSO-J6) δ
16.80, 19,33, 26,53, 29,95, 31,10, 52,31, 59,33, 62,35, 118,61, 126,59, 137,06, 137,14,
158.44, 170,06, 173,69.
Exemplo 32. Composto 31.
A uma solução de composto 22 (1,3 g, 0,06 mmol, 1 eq) em 15 mL de DCM anidro e 3 mL de DMF anidro, adicionou-se o composto 30 (175 mg, 0,46 mmol, 8 eq). A mistura reacional foi agitada durante a noite em temperatura ambiente e o solvente foi evaporado sob vácuo. O resíduo foi precipitado com DCM/éter e recristalizado com CH3CN/IPA para dar o produto (1.1 g): RMN13C (CDCI3/CD3OD) δ 18,48, 19,46, 22,85, 26,74, 28,54, 28,94, 29,50, 30,47,
31.81, 39,21, 42,04, 45,79, 53,51, 54,06, 55,32, 59,67, 64,32, 65,04, 69,54-70,99 (PEG), 80,70, 120,23, 121,44, 127,64, 134,31, 137,16, 142,94, 153,86, 155,86, 156,85, 160,44,
170.45, 171,02, 171,87, 173,19.
Exemplo 33. Composto 32.
A uma solução de composto 31 (1 eq) numa mistura de DCM/DMF (4/1, v/v), adicionou-se DSC (16 eq) e a mistura foi resfriada a 0°C. Então, piridina (16 eq) foi adicionada e a mistura gradualmente amornada a temperatura ambiente e agitada durante a noite. O solvente foi evaporado sob vácuo e o resíduo foi precipitado com DCM/éter etílico e recristalizado com CH3CN/IPA para dar o produto.
Exemplo 34. Composto 33.
A uma solução de composto 32 adicionou-se doxorrubicina. A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. O solvente foi evaporado sob vácuo e o resíduo foi precipitado com DCM/éter etílico e recristalizado com DMF/IPA para dar o produto.
Exemplo 35. Composto 34. A uma solução de composto 33 (Ieq) numa mistura de DCM/DMF adicionou-se RGDC (2 eq). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. O solvente foi evaporado sob vácuo e o resíduo foi precipitado com DCM/éter etílico e recristalizado com DMF/IPA para dar o produto.
Exemplo 36. Composto 35.
A uma solução de composto 19 (6,14 g, 0,307 mmol, 1 eq) e NHS (283 mg, 2,456 mmol, 8 eq) em 31 mL de DCM anidro a O0C, adicionou-se DCC (507 mg, 2,456 mmol, 2 eq). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite, filtrada sob uma placa de Celite® e evaporada sob vácuo. O resíduo foi precipitado com DCM/éter etílico e recristalizado com CH3CN/IPA para dar o produto (5,69 g, 86%): RMN13C δ 21,59, 25,21, 28,11,29,03,31,42, 39,36, 45,13,51,80, 64,07, 68,90-70,53 (PEG), 155,15, 155,58, 168,17, 168,54.
Exemplo 37. Composto 36
A uma solução de composto 35 (5,Og, 0,232 mmol, 1 eq) em 23 mL de DCM anidro e DMF anidro, adicionou-se HCl-NH2Cys(NPys)-OH (0,77g, 2,78 mmol, 12 eq) seguido por DIEA (0,65 mL, 3,71 mmol, 16 eq). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante a noite e evaporada sob vácuo depois de filtrada sob uma placa de Celite®. O resíduo foi precipitado com DCM/éter etílico e recristalizado com CH3CN/IPA para dar o produto (4,88 g, 95% rendimento): RMN13C δ 22,17, 28,22, 29,27, 31,85, 39,92, 45,22, 51,85, 54,49, 63,98, 69,06-70,62 (PEG), 78,56, 120,87, 132,88, 142,27, 153,44, 155,67, 156,47, 162,14, 170,74, 171,20.
Exemplo 38. Composto 37.
A uma solução de composto 36 (4,38g, 0,197 mmol, 1 eq) em DCM (44 mL), adicionou-se 8.8 mL de TFA e a mistura reacional foi deixada agitando durante a noite em temperatura ambiente. Depois de 20 horas a mistura reacional foi evaporada sob vácuo e o resíduo foi precipitado com DCM/éter etílico e recristalizado com CH3CN/IPA para dar o produto (2,1 g, 49%): RMN13C δ 21,47, 26,41, 31,64, 39,47, 45,25, 52,32, 54,11, 63,75, 69,12-70,65 (PEG), 120,85, 133,46, 142,25, 153,67, 155,64, 156,39, 171,53, 171,79. Exemplo 39. Composto 38.
A uma solução de ácido fólico (124mg, 0,28mmol, leq) em 3,1 mL de DMSO em temperatura ambiente, adicionou-se NHS (71 mg, 0,616 mmol, 2,2 eq) seguido de adição de DCC (64 mg, 0,308 mmol, 1,1 eq) e 63 μί de trietilamina. A mistura reacional foi agitada durante a noite no escuro e filtrada sob uma placa de Celite® para dar uma solução amarela de FA-NHS que foi utilizada para a próxima etapa de acoplamento com o ligante. A uma solução de H2N-Lys(PEG de 4 braços)CysNPys (37, 381 mg, 0,0175mmol, leq) em 4 mL de DCM anidro e DMF anidro, adicionou-se uma solução de DMSO de FA-NHS (preparado como mostrado acima) seguido por DIEA (49 μι, 0,28 mmol, 16 eq). A mistura reacional foi deixada agitando durante a noite no escuro em temperatura ambiente. Ela foi então dialisada por 4 dias com água destilada. A solução amarela foi então liofilizada para dar 197 mg do produto final.
Exemplo 40. Composto 39.
A uma solução de C6-tio-LNA-survivina (OligoSH) em tampão fosfato pH 6,5, adicionou-se o 38 e a solução foi agitada por 1 hora em temperatura ambiente. O progresso da reação foi verificado por HPLC de troca aniônica. A mistura reacional foi filtrada com filtro 0,2 micra e vertido numa coluna de troca aniônica Poros. O produto foi eluido com um gradiente usando sistema de tampão 20 mM Tris. HCl 2M NaCI em pH 7,0. O produto foi dessalgado e liofilizado. LISTAGEM DE SEQÜÊNCIAS <110> ENZON PHARMACEUTICALS , INC
5
<120> PRO DROGAS POLIMERICAS DIRECIONADAS CONTENDO LIGANTES MULTIFUNCIONAIS
<130> 213.12 63-PCT
10
<140> <141>
<150> 60/884.943 <151> 15 -09-2006
<160> 7
<170> PatentIn Ver. 3.3
<210> 1 <211> 12 <212> PRT <213> Seqüência artificial
<220>
<223> Descrição de Seqüência artificial: Peptideo sintético <4 00> 1
Cys Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg 1 5 10
<210> 2 <211> 10 <212> PRT
<213> Seqüência artificial 40 <220>
<223> Descrição de Seqüência artificial: Peptideo sintético <400> 2
Cys Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg Arg 10
45
<210> 3 <211> 16 <212> DNA 50 <213> Seqüência artificial <220> <223> Descrição de Seqüência <220>
<221> aspecto-miscelânia <222> (1) (16) <223> Tioesqueleto
<220>
<221> base modificada <222> (1)
<223> Citosina metilada <22 0>
<221> aspecto-miscelânia <222> (1) <223> LNA
<2 2 0>
<221> aspecto-miscelânia
<222> (2)
<223> LNA
<220>
<221> base modificada
<222> (3)
<223> Citosina metilada <220>
<221> aspecto-miscelânia
<222> (3)
<223> LNA
<220>
<221> aspecto-miscelânia <222> (4) <223> LNA
<220>
40 <221> base modificada <222> (13)
<223> Citosina metilada <220>
45 <221> aspecto-miscelânia <222> (13) <223> LNA
<220>
50 <221> aspecto-miscelânia <222> (14) <223> LNA
2/4
artificial: Oligonucleotideo sintético 15
<220>
<221> aspecto-miscelânia
<222> (15)
<223> LNA
<400> 3
ctcaatccat ggcagc ΐ6
10
<210> 4 <211> 21 <212> DNA
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Descrição de Combined DNA/RNA Molecule: Oligonucleotideo sintético
<220>
<223> Descrição de Seqüência artificial: Oligonucleotideo sintético <220>
<221> aspecto-miscelânia <222> (1) (19) <223> RNA
<400> 4
gcaugcggcc ucuguuugat t 21
<210> 5 <211> 21 <212> DNA
<213> Seqüência artificial
<220>
<223> Descrição de molécula combinada DNA/RNA: 40 Oligonucleotideo sintético
<220>
<223> Descrição de Seqüência artificial: Oligonucleotideo sintético
45 <220>
<221> aspecto-miscelânia <222> (1) (19) <223> RNA
50 <400> 5
ucaaacagag gccgcaugct t 21 <210> 6 <211> 18 <212> DNA <213> Seqüência artificial
<22 0>
<223> Descrição de Seqüência artificial: Oligonucleotideo sintético
<220>
<221> aspecto-miscelânia
<222> (1)..(18)
<223> Tioesqueleto
<400> 6
tctcccagcg tgcgccat 18
<210> 7
<211> 16
<212> DNA
<213> Seqüência artificial <220>
<223> Descrição de Seqüência artificial: Oligonucleotideo sintético <220>
<221> aspecto-miscelânia
<222> (1) (16)
<223> Tioesqueleto
<220>
<221> aspecto-miscelânia <222> (1) (3) <223> LNA
<220>
<221> aspecto-miscelânia <222> (13) (15) 40 <223> LNA
<400> 7
tggcaagcat cctgta
16

Claims (29)

1.Composto, caracterizado pelo fato de ser de Fórmula (I) <formula>formula see original document page 90</formula> em que: Ri é um polímero hidrossolúvel substancialmente não-antigênico; A é um grupo de proteção ou <formula>formula see original document page 90</formula> cada D1 é independentemente selecionado do grupo consistindo de porções direcionadoras, grupos funcionais e grupos de saída; cada D2 é independentemente selecionado do grupo consistindo de porções biologicamente ativas, grupos funcionais e grupos de saída; cada L| é independentemente um ligante permanente ou um ligante lábil selecionado; L2 é um ligante multifuncional; cada L3 é independentemente um ligante permanente ou um ligante lábil selecionado, (a) e (b) são independentemente zero ou um número inteiro positivo.
2. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que L2 é selecionado do grupo consistindo de: <formula>formula see original document page 90</formula> <formula>formula see original document page 91</formula> em que R2 e R' 2 são independentemente selecionados do grupo consistindo de hidrogênio, Cn6 alquila, C2.6 alquenila, C2.6 alquinila, C3-19 alquila ramificada, C3.8 cicloalquila, Cn6 alquila substituída, C2.6 alquenila substituída, C2_6 alquinila substituída, C3.8 cicloalquila substituída, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, Cu6 heteroalquila, C^6 heteroalquila substituída, Ci_6 alcóxi, arilóxi, Ci.6 heteroalcóxi, heteroarilóxi, C2.6 alcanoil, arilacarbonil, C2-6 alcoxicarbonil, arilaoxicarbonil, C2.6 alcanoilóxi, arilacarbonilóxi, C2.6 alcanoil substituída, arilcarbonil substituída, C2.6 alcanoilóxi substituída, ariloxicarbonil substituída, C2.6 alcanoilóxi substituída e arilcarbonilóxi substituída; (cl), (c2), (c3), (c4), (c5), (c6), (c'6), (c"6), (c7) e (c8) são independentemente zero ou um número inteiro positivo; e (dl), (d2), (d3), (d4), (d5) e (d7) são independentemente zero ou um número inteiro positivo.
3. Composto de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que L2 é selecionado do grupo consistindo de: <formula>formula see original document page 91</formula>
4. Composto de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de ser selecionado do grupo consistindo de: <formula>formula see original document page 92</formula>
5. Composto de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de ser selecionado do grupo consistindo de: <formula>formula see original document page 92</formula> <formula>formula see original document page 93</formula> <formula>formula see original document page 94</formula>
6. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a porção biológicamente ativa é selecionada do grupo consistindo de porções contendo -NH2, -OH e - SH.
7. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a porção biológicamente ativa é selecionada do grupo consistindo de compostos farmaceuticamente ativos, enzimas, proteínas, oligonucleotídeos, anticorpos, anticorpos monoclonais, anticorpos de cadeia simples e peptídeos.
8. Composto de acordo com a reivindicação 7, caracterizado pelo fato de que os compostos farmaceuticamente ativos são selecionados do grupo consistindo de inibidores de DNA topoisomerase, drogas inibidoras de microtubulos, agentes danificadores de DNA, antimetabolitos, análogos de nucleosideo e drogas anti-câncer.
9. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a porção biológicamente ativa é um oligonucleotídeo.
10. Composto de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que o oligonucleotídeo é selecionado do grupo consistindo de oligonucleotídeos antisenso, ácidos nucléicos bloqueados (LNA), RNA de pequena interferência (siRNA), microRNA (miRNA), aptameros, ácidos nucléicos peptídicos (PNA), e oligonucleotídeos morfolino fosfodiamidato (PMO).
11. Composto de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que o oligonucleotídeo é selecionado do grupo consistindo de oligonucleotídeos bcl-2 antisenso, oligonucleotídeos HIF-Ia antisenso e oligonucleotídeos Survivina antisenso.
12. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o agente direcionador é selecionado do grupo consistindo de anticorpos monoclonais, anticorpos de cadeia simples, peptídeos de adesão celular, peptídeos de penetração celular, ligantes de receptores, moléculas de carboidrato direcionadoras ou targeting lectinas e oligonucleotídeos.
13. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o agente direcionador é selecionado do grupo consistindo de peptídeo RGD, selectina, TAT, penetratina, (Arg)9 e ácido fólico.
14. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o ligante lábil é selecionado do grupo consistindo de ligantes baseados em eliminação de benzila, ligantes baseados em bloqueio trialquiia, ligantes baseados em bicina, ligantes acido-labeis, peptídeos cliváveis lisossomalmente e peptídeos cliváveis por captepsina B.
15. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que os ligante lábeis são independentemente selecionados do grupo consistindo de: <formula>formula see original document page 95</formula> <formula>formula see original document page 96</formula> -Val-Cit-, -Gly-Phe-Leu-Gly-, -Ala-Leu-Ala-Leu- -Phe-Lys-, <formula>formula see original document page 96</formula> Val-Cit-C(=0)-CH20CH2-C(=0)-, Val-Cit-C(=0)-CH2SCH2-C(=0)-, e -NHCH(CH3)-C(=0)-NH(CH2)6-C(CH3)2-C(=0)-, em que Y11-19 São independentemente O, S ou NR48; R.31-48, R-50, RiOO e A5I são independentemente selecionados do grupo consistindo de hidrogênio, C,.6 alquilas, C3.12 alquilas ramificadas, C3.8 cicloalquilas, C,.6 alquilas substituídas, C3.8 ciloalquilas substituídas, arilas, arilas substituídas, aralquilas, C,.6 heteroalquilas, Cu6Iieteroalquilas substituídas, C^alcóxi, C,.6 alquiloxicarbonil, fenóxi e C,. óheteroalcóxi; Ar é uma porção arila ou heteroarila; LiM5 são independentemente espaçadores bifuncionais selecionados; ZeZ' são independentemente selecionados do grupo consistindo de porções ativamente transportadas para uma célula alvo, porções hidrofóbicas, porções ligantes bifuncionais e combinações das mesmas; (cll), (hll), (kl 1), (111), (mil) e (nll) são independentemente números inteiros positivos selecionados; (ali), (ell), (gll), (jH), (oll) e (qll) são independentemente tanto zero ou um número inteiro positivo; e Cbl 1), (xl 1), (x'12), (fll), (ill) e (pl 1) são independentemente zero ou um.
16. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que os ligantes permanentes são independentemente selecionados do grupo consistindo de:<formula>formula see original document page 97</formula>
17. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que L1 e L3 são independentemente selecionados do grupo consistindo de um aminoácido, um derivado de aminoácido e um peptídeo.
18. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que Ri compreende um óxido de polialquileno linear, ramificado terminalmente ou multi-braços.
19. Composto de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que o óxido de polialquileno é selecionado do grupo consistindo de polietileno glicol e polipropileno glicol.
20. Composto de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que o óxido de polialquileno é selecionado do grupo consistindo de -Y2I-(CH2CH2O)n-CH2CH2Y2I-, -Y2,-(CH2CH20)n-CH2C(=Y22)-Y2,-, -Y2i-C(=Y22)-(CH2)a2-Y23-(CH2CH20)n-CH2CH2-Y23-(CH2)a2-C(=Y22)-Y2re -Y21-(CR5lR52)a2-Y23-(CH2)b2-O-(CH2CH2O)n-(CH2)b2-Y23-(CR51R52)a2-Y2I-, em que: Y21 e Y23 são independentemente O, S, SO, SO2, NR53 ou uma ligação; Y22 é O, S, ou NR53; R51.53 são independentemente selecionados do grupo para R2; (a2)e(b2) são independentemente zero ou um número inteiro positivo; e (n) é um número inteiro de cerca de 10 a cerca de 2300.
21. Composto de acordo com a reivindicação 18 caracterizado pelo fato de que o óxido de polialquileno é um polietileno glicol Fórmula, -O-(CH2CH2O)n- em que (n) é um número inteiro de cerca de 10 a cerca de 2,300.
22. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que Ri possui um peso molecular médio de cerca de 2.000 a cerca de 100.000 daltons.
23. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que R1 possui um peso molecular médio de cerca de 5.000 a cerca de 60.000 daltons.
24. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que R1 possui um peso molecular médio de cerca de 5.000 a cerca de 25.000 daltons ou de cerca de 20.000 a cerca de 45.000 daltons.
25. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de ser selecionado do grupo consistindo de: <formula>formula see original document page 99</formula> <formula>formula see original document page 100</formula> <formula>formula see original document page 101</formula> <formula>formula see original document page 102</formula> <formula>formula see original document page 103</formula> em que mPEG tem Fórmula: CH3-O(CH2CH2O)n-; PEG tem Fórmula -O(CH2CH2O)n-; (n) é um número inteiro positivo de cerca de 10 a cerca de 2.300; R5I e R52 são independentemente selecionados do grupo consistindo de hidrogênio, Ci-6 alquilas, C3-I2 alquilas ramificadas, C3.8 cicloalquilas, Cu6 alquilas substituídas, C3-s ciloalquilas substituídas, arilas, arilas substituídas, aralquilas, Ci.6 heteroalquilas, Ci-6 heteroalquilas substituídas, C,.6alcóxi, C,.6 alquiloxicarbonil, ariloxicarbonil, fenóxi e C1 heteroalcóxi; D1 é uma porção direcionadora, um grupo funcional ou um grupo de saída; e D2 é uma porção biologicamente ativa, um grupo funcional ou um grupo de saída. 25. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de se selecionado do grupo consistindo de: <formula>formula see original document page 104</formula> <formula>formula see original document page 105</formula> <formula>formula see original document page 106</formula> <formula>formula see original document page 107</formula> <formula>formula see original document page 108</formula> <formula>formula see original document page 109</formula> <formula>formula see original document page 110</formula> <formula>formula see original document page 111</formula> <formula>formula see original document page 112</formula> <formula>formula see original document page 113</formula> <formula>formula see original document page 114</formula> <formula>formula see original document page 115</formula> <formula>formula see original document page 116</formula> <formula>formula see original document page 117</formula> <formula>formula see original document page 118</formula> <formula>formula see original document page 119</formula> S-SCA é um anticorpo de cadeia simples; RGD é <formula>formula see original document page 120</formula> mPEG tem Fórmula: CHrO(CH2CH2O)n-; PEG tem Fórmula -O(CH2CH2O)n-; e (n) é um número inteiro positivo de cerca de 10 a cerca de 2.300.
26. Método para preparação de um conjugado polimérico contendo um ligante multifuncional caracterizado pelo fato de compreender: reagir um composto de Fórmula (IIIa): M1-(L1)a-L2-M2 <formula>formula see original document page 120</formula>com uma porção biologicamente ativa contendo um composto tendo a Fórmula (IIIb): M3—(L3)b-D22 sob condições suficientes para formar o composto de Fórmula (IIIc): M1-(L1)a-L2-(L3)b-D22 <formula>formula see original document page 120</formula> em que Ri é um polímero hidrossolúvel substancialmente não antigênico; A2I é um grupo de proteção ou <formula>formula see original document page 121</formula> A22 é um grupo de proteção ou <formula>formula see original document page 121</formula> Mi é um grupo funcional; D22 é uma porção biologicamente ativa; M2 é OH ou um grupo de saída; M3 é OH, NH2, ou SH; L, é um ligante permanente ou um ligante lábil; L2 é um ligante multifuncional; L3 é um ligante permanente ou um ligante lábil; e (a) e (b) são independentemente zero ou um número inteiro positivo.
27. Método de acordo com a reivindicação 26 caracterizado pelo fato ainda compreender: reagir o composto de Fórmula (IIIc): <formula>formula see original document page 121</formula> (IIIC) com uma porção nucleofilica tendo a Fórmula (IlId) 20 D21-M4 (H]d) em condições suficientes para formar um composto de Fórmula (IIIe): <formula>formula see original document page 121</formula> em que: A23 é um grupo de proteção ou <formula>formula see original document page 122</formula> Μ1 é um grupo funcional; D21 é uma porção direcionadora; M4 é OH, NH2, ou SH; e todas as outras variáveis são como descritas na reivindicação 27.
28. Método para tratar um mamífero, caracterizado pelo fato de compreender administrar uma quantidade eficaz de um composto de Fórmula (I) a um paciente com necesidade deste.
29. Método para administrar polinucleotídeos a células de mamíferos, caracterizado pelo fato de compreender transportar uma quantidade eficaz de um composto de Fórmula (I) a uma célula que requeira tal tratamento.
BRPI0716812-8A 2006-09-15 2007-09-15 Pro drogas polimericas direcionadas contendo ligantes multifuncionais BRPI0716812A2 (pt)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US84494306P 2006-09-15 2006-09-15
US60/844,943 2006-09-15
PCT/US2007/078600 WO2008034124A2 (en) 2006-09-15 2007-09-15 Targeted polymeric prodrugs containing multifunctional linkers

Publications (1)

Publication Number Publication Date
BRPI0716812A2 true BRPI0716812A2 (pt) 2013-11-05

Family

ID=39184644

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
BRPI0716812-8A BRPI0716812A2 (pt) 2006-09-15 2007-09-15 Pro drogas polimericas direcionadas contendo ligantes multifuncionais

Country Status (11)

Country Link
EP (1) EP2073820A4 (pt)
JP (1) JP2010503708A (pt)
KR (1) KR20090057383A (pt)
CN (1) CN101541332A (pt)
AU (1) AU2007296056B2 (pt)
BR (1) BRPI0716812A2 (pt)
CA (1) CA2662981A1 (pt)
IL (1) IL197517A0 (pt)
MX (1) MX2009002855A (pt)
RU (1) RU2009114154A (pt)
WO (1) WO2008034124A2 (pt)

Families Citing this family (49)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2008131208A1 (en) 2007-04-20 2008-10-30 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Stable recombinant adenosine deaminase
US8586019B2 (en) 2008-05-22 2013-11-19 Ramot At Tel-Aviv University Ltd. Conjugates of polymers having a therapeutically active agent and an angiogenesis targeting moiety attached thereto and uses thereof in the treatment of angiogenesis related diseases
EP2303288A4 (en) 2008-05-22 2015-04-22 Univ Ramot CONJUGATES OF A POLYMER, A BISPHOSPHONATE AND AN ANTI-ANGIOGENESE MEDIUM AND ITS USE IN THE TREATMENT AND CONTROL OF ILLNESSES RELATED TO BONE
WO2009143412A2 (en) * 2008-05-23 2009-11-26 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Polymeric systems containing intracellular releasable disulfide linker for the delivery of oligonucleotides
MX2011000861A (es) 2008-07-23 2011-06-21 Hanmi Holdings Co Ltd Un complejo polipeptidico que consiste en un polimero no-peptidil que posee tres terminaciones funcionales.
CA2742838A1 (en) * 2008-11-17 2010-05-20 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Releasable polymeric lipids for nucleic acids delivery systems
EP2362729A1 (en) * 2008-11-17 2011-09-07 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Releasable conjugates for nucleic acids delivery systems
WO2011089215A1 (en) * 2010-01-22 2011-07-28 Ascendis Pharma As Dipeptide-based prodrug linkers for aromatic amine-containing drugs
WO2011130599A1 (en) * 2010-04-16 2011-10-20 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Polymeric conjugates of adenine nucleoside analogs
US20130096097A1 (en) 2010-06-11 2013-04-18 Japan Science And Technology Agency Pharmaceutical multimeric particles, and manufacturing method for same
WO2012075087A2 (en) * 2010-11-30 2012-06-07 Board Of Trustees Of The University Of Illinois Silica nanoparticle agent conjugates
CN103045720B (zh) * 2011-10-17 2014-08-20 格诺思博生物科技(上海)有限公司 检测病源细胞的靶向性分子及其应用
CN104244988A (zh) 2012-03-05 2014-12-24 雷蒙特亚特特拉维夫大学有限公司 结合治疗活性剂的聚合物、其制备方法以及其用途
CN102731518B (zh) * 2012-06-26 2014-12-03 济南精合医药科技有限公司 用于抗肿瘤药物的邻硝基芳甲氧基喜树碱缺氧激活前药
CN102746316B (zh) * 2012-06-26 2015-04-15 济南精合医药科技有限公司 用于抗肿瘤药物的间硝基芳甲氧基喜树碱缺氧激活前药
MX371201B (es) * 2013-10-04 2020-01-22 Prolynx Llc Conjugados de liberación lenta de sn-38.
NZ758049A (en) 2013-10-15 2024-03-22 Seagen Inc Pegylated drug-linkers for improved ligand-drug conjugate pharmacokinetics
GB201414098D0 (en) * 2014-08-08 2014-09-24 Illumina Cambridge Ltd Modified nucleotide linkers
EP3218009B1 (en) 2014-10-14 2021-04-07 Polytherics Limited Process for the conjugation of a peptide or protein with a reagent comprising a leaving group including a portion of peg
BR112017005760A2 (pt) * 2014-10-24 2017-12-12 Polytherics Ltd conjugados e reagentes de conjugação
JP6570034B2 (ja) * 2014-11-26 2019-09-04 日本化薬株式会社 新規なグルタミン酸誘導体およびその用途
CN105641708A (zh) * 2014-12-04 2016-06-08 上海中医药大学附属普陀医院 多肽修饰的聚(甲基丙烯酸寡聚乙二醇酯-co-蟾毒灵)纳米制剂及其制备方法
JP6772199B2 (ja) * 2015-08-11 2020-10-21 コヒレント バイオファーマ 多リガンド−薬物複合体及びその使用
CN107029242A (zh) 2015-11-03 2017-08-11 财团法人工业技术研究院 抗体药物复合物及其制造方法
KR20180090290A (ko) 2015-12-04 2018-08-10 시애틀 지네틱스, 인크. 사차화 튜불리신 화합물들의 컨쥬게이트들
US11793880B2 (en) 2015-12-04 2023-10-24 Seagen Inc. Conjugates of quaternized tubulysin compounds
CN109843919A (zh) 2016-03-25 2019-06-04 西雅图基因公司 用于制备聚乙二醇化的药物-接头及其中间体的方法
CN107375288B (zh) * 2016-05-16 2019-08-23 博瑞生物医药（苏州）股份有限公司 多臂的聚合靶向抗癌偶联物
CN106265683A (zh) * 2016-09-14 2017-01-04 江南大学 一种具有穿膜靶向特性的致病菌生物膜新型抑制剂的制备方法
US11135307B2 (en) * 2016-11-23 2021-10-05 Mersana Therapeutics, Inc. Peptide-containing linkers for antibody-drug conjugates
KR102648564B1 (ko) 2017-03-24 2024-03-19 씨젠 인크. 글루쿠로니드 약물-링커의 제조 공정 및 그 중간물
KR102279429B1 (ko) 2017-04-21 2021-07-20 브라이트제네 바이오-메디컬 테크놀로지 코., 엘티디. 멀티 암 표적 항암 콘쥬게이트
JP7231147B2 (ja) * 2017-06-29 2023-03-01 国立大学法人東海国立大学機構 Ｒｎａ導入試薬及びその利用
KR102762352B1 (ko) * 2017-11-30 2025-02-05 씨젠 인크. 약물 링커 화합물의 제조방법
SG11202006510XA (en) 2018-01-08 2020-08-28 Regeneron Pharma Steroids and antibody-conjugates thereof
MX2020007442A (es) 2018-01-12 2020-09-14 Prolynx Llc Protocolo para minimizar la toxicidad de dosificaciones de combinacion y agente formador de imagen para verificacion.
KR102141124B1 (ko) * 2018-01-30 2020-08-04 (주)바이오니아 이중 가닥 miRNA를 포함하는 이중나선 올리고뉴클레오타이드 구조체 및 이의 용도
KR20200134287A (ko) * 2018-04-02 2020-12-01 젠켐 테크놀로지 컴퍼니 리미티드 (베이징) 타겟성을 구비하는 세포막 투과 펩타이드-다중팔 폴리에틸렌글리콜-약물 켤레체 및 그 응용
CN113365664A (zh) * 2018-10-29 2021-09-07 梅尔莎纳医疗公司 具有含肽接头的半胱氨酸工程化的抗体-药物缀合物
BR112021005320A2 (pt) * 2018-12-17 2021-06-15 Remegen Co., Ltd. ligante para conjugados de anticorpo-fármaco e seu uso
US12161777B2 (en) 2020-07-02 2024-12-10 Davol Inc. Flowable hemostatic suspension
US11739166B2 (en) 2020-07-02 2023-08-29 Davol Inc. Reactive polysaccharide-based hemostatic agent
AU2021319279A1 (en) * 2020-07-28 2023-02-23 Chongqing Upgra Biotechnology Co., Ltd. Polyethylene glycol conjugate drug, and preparation method therefor and use thereof
EP4190360A1 (en) * 2020-07-28 2023-06-07 Chongqing Upgra Biotechnology Co., Ltd. Polyethylene glycol conjugate drug synergist, preparation method therefor, and use thereof
JP2024500994A (ja) 2020-12-28 2024-01-10 デボル，インコーポレイテッド タンパク質及び多官能化変性ポリエチレングリコール系架橋剤を含む反応性乾燥粉末状止血用材料
CA3198230A1 (en) * 2021-01-28 2022-08-04 Jian Chen Conjugate and use thereof
EP4471005A4 (en) * 2022-01-24 2025-11-19 Beijing Chempion Biotechnology Co Ltd CONJUGATED AND ITS USE
WO2025139993A1 (zh) * 2023-12-29 2025-07-03 四川科伦博泰生物医药股份有限公司 一类抗体药物偶联物、其药物组合物及应用
CN118994301B (zh) * 2024-08-13 2025-04-01 广州医科大学 一种中药小分子偶联化合物及其在耐药性肿瘤中的应用

Family Cites Families (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2626654B2 (ja) * 1990-03-31 1997-07-02 科学技術振興事業団 標的指向性高分子医薬化合物及びその中間体
US5643575A (en) * 1993-10-27 1997-07-01 Enzon, Inc. Non-antigenic branched polymer conjugates
US7011812B1 (en) * 1996-05-03 2006-03-14 Immunomedics, Inc. Targeted combination immunotherapy of cancer and infectious diseases
US6331289B1 (en) * 1996-10-28 2001-12-18 Nycomed Imaging As Targeted diagnostic/therapeutic agents having more than one different vectors
EP0979102A4 (en) * 1997-04-30 2005-11-23 Enzon Inc DETAILED POLYPEPTIDE MODIFIED BY POLYALKYLENE OXIDE
US5965119A (en) * 1997-12-30 1999-10-12 Enzon, Inc. Trialkyl-lock-facilitated polymeric prodrugs of amino-containing bioactive agents
US7060479B2 (en) * 1999-12-08 2006-06-13 Serono Genetics Institute, S.A. Full-length human cDNAs encoding potentially secreted proteins
US6153655A (en) * 1998-04-17 2000-11-28 Enzon, Inc. Terminally-branched polymeric linkers and polymeric conjugates containing the same
US6251382B1 (en) * 1998-04-17 2001-06-26 Enzon, Inc. Biodegradable high molecular weight polymeric linkers and their conjugates
US6214330B1 (en) * 1998-07-13 2001-04-10 Enzon, Inc. Coumarin and related aromatic-based polymeric prodrugs
US6777387B2 (en) * 2000-03-31 2004-08-17 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Terminally-branched polymeric linkers containing extension moieties and polymeric conjugates containing the same
ATE378342T1 (de) * 2001-02-20 2007-11-15 Enzon Inc Terminal verzweigte, polymere linker und diese enthaltende polymere konjugate
US7091186B2 (en) * 2001-09-24 2006-08-15 Seattle Genetics, Inc. p-Amidobenzylethers in drug delivery agents
CN100475269C (zh) * 2002-03-05 2009-04-08 北京键凯科技有限公司 亲水性聚合物-谷氨酸寡肽与药物分子的结合物、包含该结合物的组合物及用途
ITMI20020951A1 (it) * 2002-05-06 2003-11-06 Univ Degli Studi Trieste Derivati multifunzionali del polietilenglicole loro preparazione ed impiego
US7122189B2 (en) * 2002-08-13 2006-10-17 Enzon, Inc. Releasable polymeric conjugates based on aliphatic biodegradable linkers
NZ542687A (en) * 2003-04-13 2010-02-26 Enzon Pharmaceuticals Inc Polymeric oligonucleotide prodrugs
US20040228831A1 (en) * 2003-05-15 2004-11-18 Belinka Benjamin A. Polymeric conjugates for tissue activated drug delivery
GB0411186D0 (en) * 2004-05-19 2004-06-23 Celltech R&D Ltd Biological products
US7365127B2 (en) * 2005-02-04 2008-04-29 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Process for the preparation of polymer conjugates
US8012488B2 (en) * 2005-02-18 2011-09-06 Nof Corporation Polyoxyalkylene derivative

Also Published As

Publication number Publication date
WO2008034124A3 (en) 2008-08-07
RU2009114154A (ru) 2010-10-20
AU2007296056B2 (en) 2012-09-13
KR20090057383A (ko) 2009-06-05
CN101541332A (zh) 2009-09-23
EP2073820A4 (en) 2014-07-16
CA2662981A1 (en) 2008-03-20
JP2010503708A (ja) 2010-02-04
AU2007296056A1 (en) 2008-03-20
MX2009002855A (es) 2009-03-30
EP2073820A2 (en) 2009-07-01
WO2008034124A2 (en) 2008-03-20
IL197517A0 (en) 2009-12-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
BRPI0716812A2 (pt) Pro drogas polimericas direcionadas contendo ligantes multifuncionais
US8367065B2 (en) Targeted polymeric prodrugs containing multifunctional linkers
US20090202573A1 (en) Polymeric conjugates containing positively-charged moieties
US20090203706A1 (en) Lysine-based polymeric linkers
US20110230420A1 (en) Releasable conjugates for nucleic acids delivery systems
US20090016985A1 (en) Polymeric drug delivery system containing a multi-substituted aromatic moiety
KR20100051722A (ko) 피리딜 이황화 부분을 포함하는 폴리머 링커
AU2007296054A1 (en) Hindered ester-based biodegradable linkers for oligonucleotide delivery
US8268318B2 (en) Polyalkylene oxides having hindered ester-based biodegradable linkers
EP2123283A1 (en) The tetracyclic anthraquinones possessing anti-cancer effect
US8110559B2 (en) Hindered ester-based biodegradable linkers for oligonucleotide delivery
CN101516362A (zh) 含有带正电荷部分的聚合物的缀合物

Legal Events

Date Code Title Description
B11A Dismissal acc. art.33 of ipl - examination not requested within 36 months of filing
B11Y Definitive dismissal - extension of time limit for request of examination expired [chapter 11.1.1 patent gazette]