BRPI0718056A2 - Inibidores da proteína cinase ikk-beta serina-treonina - Google Patents

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BRPI0718056A2
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David Festus Charles Moffat
Stephen John Davies
Michael Hugh Charlton
Simon Christopher Hirst
Stuart Thomas Onions
Jonathon Gareth Williams
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Chroma Therapeutics Ltd
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Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "INIBIDORES DA PROTEÍNA CINASE IKK-BETA SERINA-TREONINA".
A presente invenção refere-se as tiofeno carboxamidas caracte- rizadas pela presença na molécula de um grupo éster aminoácido, às com- posições contendo as mesmas, aos processos para suas preparações e ao seu uso na medicina como inibidores de IKK para o tratamento de doenças autoimunes e inflamatórias, incluindo doença pulmonar obstrutiva crônica, asma, artrite reumatóide, psoríase, doença dos intestinos inflamados, doen- ça de Crohn, colite ulcerativa, esclerose múltipla, diabetes, dermatite atópi- ca, doença de enxerto versus hospedeiro, lúpus eritematoso sistêmico. Os compostos são também de uso no tratamento dos estados de doença proli- ferativos, tais como cânceres. Antecedentes da Invenção
A expressão de muitos genes pró-inflamatórios é regulada pelo fator nuclear ativador transcricional-ZeB (NF-ZcB). Estes fatores de transcrição têm estado sob suspeita em razão da descoberta de que desempenham um papel importante nas doenças inflamatórias crônicas e agudas. Parece que a regulação aberrante de NF-ZcB também poderia fundamentar doenças autoi- munes e tipos diferentes de câncer.
Exemplos de genes que dependem da ativação de NF-ZcB inclu- em: o fator de necrose de tumor das citocinas TNF-α, interleucinas (IL)-6, IL- 8 e IL-1p; as moléculas de adesão E-selectina, molécula de adesão interce- Iular (ICAM)-I e molécula de adesão de célula vascular (VCAM)-I; e as en- zimas sintase de óxido nítrico (NOS) e ciclo-oxigenase (C0X)-2. NF-ZcB nor- malmente reside no citoplasma das células não estimuladas como um com- plexo inativo com um elemento da família da proteína inibidora IkB. Contudo, mediante ativação celular, IkB é fosforilado pela IkB cinase (IKK) e é subse- qüentemente degradado. NF-ZeB então se desloca para o núcleo em que media a expressão pró-inflamatória do gene.
Existem três IZeBs clássicos: IZeBa, IZeBP e IZeBc; todos os quais requerem fosforilação de dois resíduos de serina chave antes de serem de- gradados. Duas enzimas principais IKK-α e ΙΚΚ-β parecem ser responsáveis pela fosforilação de IZfB. Foi verificado que as versões dominante-negativo (DN) de cada uma destas enzimas (em que a ligação de ATP é incapacitada pela mutação de um resíduo de domínio de cinase) suprimem a ativação de NF-ZfB por TNF-α, IL-1 β e LPS. De modo importante, foi verificado que ΙΚΚ-β DN é um inibidor mais potente que IKK-α DN (Zandi, E Ce//, 1997, 91, 243). Adicionalmente, a geração de camundongo com deficiência de IKK-α e ΙΚΚ- β estabeleceu a necessidade de ΙΚΚ-β para ativação de NF-ZfB pelos estímu- los pró-inflamatórios e reforçou o papel dominante de IKK-α sugerido pelos dados bioquímicos. Na realidade, foi demonstrado que IKK-α foi dispensável para ativação de NF-ZfB por estes estímulos (Tanaka, M.; Immunity 1999, 10, 421). Assim, a inibição de ΙΚΚ-β representa um alvo potencialmente atraente para modulação da função imune e consequentemente o desenvolvimento de fármacos para o tratamento das doenças autoimunes. Breve Descrição da Presente Invenção Esta invenção torna possível uma classe de tiofeno carboxami-
das que são inibidores potentes e seletivos das isoformas IKK, especifica- mente ΙΚΚβ. Os compostos são assim de uso na medicina, por exemplo, no tratamento de uma variedade de estados de doença profilerativos, tais como, condições relacionadas à hiperatividade de IKK, bem como doenças modu- Iadas por cascata NF-kB. Além disto, os compostos da presente invenção são úteis no tratamento de acidentes vasculares, osteoporose, artrite reuma- tóide e outros transtornos inflamatórios. Os compostos são caracterizados pela presença na molécula de um motivo de aminoácido ou um motivo de éster de aminoácido que é hidrolisável por uma carboxilesterase intracelular. Os compostos da presente invenção possuindo o motivo de éster aminoáci- do lipófilo cruzam uma membrana de célula e são hidrolisados no ácido pe- las carboxilesterases intracelulares. O produto de hidrólise polar se acumula em uma célula uma vez que ele não atravessa prontamente a membrana da célula. Consequentemente, a atividade inibidora de IKK do composto é pro- Iongada e melhorada dentro da célula. Os compostos da presente invenção estão relacionados aos inibidores de IKK englobados pela descrição no Pe- dido de Patente Internacional número WO 2004063186, porém diferem da- quele dos presentes compostos por possuírem o motivo do éster de aminoá- cido referido acima.
Descrição Detalhada da Presente Invenção
De acordo com a presente invenção é provido um composto da fórmula (IA) ou (IB)1 ou um sal, N-óxido, hidrato ou solvato do mesmo: 0^nh' O.
(IA)
(IB)
em que:
R7 é hidrogênio ou (CrC6)alquila opcionalmente substituída; o anel A é um anel arila ou heteroarila opcionalmente substituído ou sistema de anel de 5-13 átomos de anel;
Z é (a) um radical da fórmula RiR2CHNH-Y-L1-X1-(CH2)z- em que: Ri é um grupo ácido carboxílico (-COOH), ou um grupo éster que é hidroli- sável por uma ou mais enzimas esterase intracelular em um grupo ácido carboxílico;
R2 é a cadeia lateral de um alfa aminoácido natural ou sintético;
Y é uma ligação, -C(=0)-, -S(=0)2-, -C(=0)0-, -C(=0)NR3-, -C(=S)-NR3, - C(=NH)-NR3 ou -S(=0)2NR3- em que R3 é hidrogênio ou Ci-C6 alquila opcio- nalmente substituída;
L1 é um radical divalente da fórmula -(AIk1)m(Q)n(AIk2)p- em que m, η e ρ são independentemente 0 ou 1,
Q é (i) um radical carbocíclico ou heterocíclico mono ou bicíclico divalente opcionalmente substituído possuindo 5-13 elementos de anel ou (ii), no ca- so em que ρ é 0, um radical divalente da fórmula -Q1-X2- em que X2 é -O, - S- ou NRa- em que Ra é hidrogênio ou Ci-C3 alquila opcionalmente substitu- ida, e Q1 é um radical carbocíclico ou heterocíclico mono ou bicíclico diva- lente opcionalmente substituído possuindo 5-13 elementos de anel, Alk1 e Alk2 representam independente e opcionalmente radicais C3-C7 ciclo- alquila divalentes substituídos, ou radicais CrC6 alquileno, C2-C6 alquenile- no, ou C2-C6 alquinileno opcionalmente substituídos, lineares ou ramificados, que podem conter opcionalmente ou terminar em uma ligação éter (-0-), tioéter (-S-) ou amino (-NRa-) em que Ra é hidrogênio ou CrC3 alquila op- cionalmente substituída;
X1 é uma ligação, -C(=0)-; ou -S(=0)2-; -NR4Ci=O)-, -C(=0)NR4-, - NR4C(=0)-NR5-, -NR4S(=0)2-, ou -S(=0)2NR4- em que R4 e R5 são indepen- dentemente hidrogênio ou CrC6 alquila opcionalmente substituída; e ζ é 0 ou 1.
Em outro aspecto amplo, a invenção provê o uso de um compos- to da fórmula (IA) ou (IB) conforme definido acima, ou um N-óxido, sal, hidra- to ou solvato do mesmo na preparação de uma composição para inibição da atividade de IKK, especialmente ΙΚΚβ, bem como doenças moduladas pela
cascata NF-ArB.
Os compostos aos quais esta invenção refere-se podem ser u- sados para inibição da atividade de IKK, especialmente ΙΚΚβ, in vitro ou in vivo.
Composições farmacêuticas compreendendo um composto da presente invenção em conjunto com um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis e excipientes, também fazem parte da presente invenção.
Em um aspecto da presente invenção, os compostos da presen- te invenção podem ser usados na preparação de uma composição para o tratamento de doença neoplásica/proliferativa, autoimune ou inflamatória, especificamente aqueles mencionados acima nos quais a atividade de IKK, especialmente ΙΚΚβ, desempenha um papel.
Em outro aspecto, a invenção provê um método para o trata- mento dos tipos de doença precedentes, que compreende administração a um indivíduo que sofre de tal doença de uma quantidade eficaz de um com- posto da fórmula (IA) ou (IB) conforme definido acima. Terminologia
Conforme usado neste documento, o termo "(Ca-Cb)alquila" em que a e b são inteiros refere-se a um radical alquila de cadeia linear ou rami- ficada possuindo de a a b átomos de carbono. Assim, quando a é 1 e b é 6, por exemplo, o termo inclui metila, etila, n-propila, isopropila, n-butila, isobuti- la, sec-butila, terc-butila, n-pentila e n-hexila.
Conforme usado neste documento, o termo "radical (Ca-
Cb)alquileno divalente" em que a e b são inteiros refere-se a uma cadeia hi- drocarboneto saturada possuindo de a a b átomos de carbono e duas valên- cias insatisfeitas.
Conforme usado neste documento, o termo "(Ca-Cb)alquenila" em que a e b são inteiros refere-se a uma porção alquenila de cadeia linear ou ramificada possuindo de a a b átomos de carbono possuindo pelo menos uma ligação dupla de cada estereoquímica E ou Z, quando aplicável. O ter- mo inclui, por exemplo, vinila, alila, 1- e 2-butenila e 2-metil-2-propenila.
Conforme usado neste documento, o termo "radical (Ca- Cb)alquenileno divalente" significa uma cadeia hidrocarboneto possuindo de a a b átomos de carbono, pelo menos uma ligação dupla, e duas valências insatisfeitas.
Conforme usado neste documento, o termo "(Ca-Cb)alquinila" em que a e b são inteiros refere-se aos grupos hidrocarboneto de cadeia linear ou cadeia ramificada possuindo de a a b átomos de carbono e possuindo, além disto, uma ligação tripla. Este termo incluiria, por exemplo, etinila, 1- propinila, 1- e 2-butinila, 2-metil-2-propinila, 2-pentinila, 3-pentinila, 4- pentinila, 2-hexinila, 3-hexinila, 4-hexinila e 5-hexinila.
Conforme usado neste documento, o termo "radical(Ca- Cb)alquinileno divalente" em que a e b são inteiros refere-se a uma cadeia hidrocarboneto divalente possuindo de a a b átomos de carbono, e pelo me- nos uma ligação tripla.
Conforme usado neste documento, o termo "carbocíclico" refere- se a um radical mono, bi ou tricíclico possuindo até 16 átomos de anel, todos os quais sendo carbono e incluindo arila e cicloalquila.
Conforme usado neste documento, o termo "cicloalquila" refere- se a um radical carbocíclico saturado monocíclico possuindo de 3-8 átomos de carbono e inclui, por exemplo, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclo- hexila, ciclo-heptila e ciclo-octila.
Conforme usado neste documento o termo não-qualificado "ari- la" refere-se a um radical carbocíclico mono, bi ou tricíclico aromático e inclui radicais possuindo dois anéis carbocíclicos monocíclicos, aromáticos que são diretamente ligados por uma ligação covalente. Ilustrativo de tais radi- cais são fenila, bifenila e naftila.
Conforme usado neste documento o termo não-qualificado "he- teroarila" refere-se a um radical aromático, mono, bi ou tricíclico contendo um ou mais heteroátomos selecionados de S, N e O, e inclui radicais possu- indo dois de tais anéis monocíclicos, ou um de tal anel monocíclico e um anel arila monocíclico, que são diretamente ligados por uma ligação covalen- te. Ilustrativos de tais radicais são tienila, benztienila, furila, benzfurila, pirroli- la, imidazolila, benzimidazolila, tiazolila, benztiazolila, isotiazolila, benzisotia- zolila, pirazolila, oxazolila, benzoxazolila, isoxazolila, benzisoxazolila, isotia- zolila, triazolila, benztriazolila, tiadiazolila, oxadiazolila, piridinila, piridazinila, pirimidinila, pirazinila, triazinila, indolila e indazolila.
Conforme usado neste documento o termo não-qualificado "he- terociclila" ou "heterocíclico" inclui "heteroarila" conforme definido acima, e em seu significado não-aromático, refere-se a um radical mono, bi ou tricícli- co não-aromático contendo um ou mais heteroátomos selecionados de S, N e O, e aos grupos consistindo em radical monocíclico não-aromático conten- do um ou mais de tais heteroátomos que são covalentemente ligados a outro tal radical ou a um radical carbocíclico monocíclico. Ilustrativos de tais radi- cais são pirrolila, furanila, tienila, piperidinila, imidazolila, oxazolila, isoxazoli- la, tiazolila, tiadiazolila, pirazolila, piridinila, pirrolidinila, pirimidinila, morfolini- la, piperazinila, indolila, morfolinila, benzfuranila, piranila, isoxazolila, benzi- midazolila, metilenodioxifenila, etilenodioxifenila, maleimido e grupos succi- nimido.
Um "radical fenileno, piridinileno, pirimidinileno ou pirazinileno divalente" é um anel benzeno, piridina, pirimidina ou pirazina com duas va- lências insatisfeitas e inclui 1,3-fenileno, 1,4-fenileno, e o que se segue: (\ //Ν
fW V/
A menos que de outra forma especificado no contexto no qual ocorre, o termo "substituído" conforme aplicado a qualquer porção neste do- cumento significa substituído com até quatro substituintes compatíveis, cada um podendo se independentemente, por exemplo, (Ci-C6)alquila, (Cr C6)alcóxi, hidróxi, hidróxi(CrC6)alquila, mercapto, mercapto(C1-C6)alquila, (CrC6)alquiltio, fenila, halo (incluído flúor, bromo e cloro), trifluorometila, tri- fluorometóxi, nitro, nitrila, (-CN), oxo, -COOH, -COORa, -CORa, -SO2Ra, - CONH2, -SO2NH2, -CONHRa1 -SO2NHRa, -CONRaRb, -SO2NRaR8, -NH2, - NHRa, -NRaRb, -OCONH2, -OCONHRa, -OCONRaRb, -NHCORa, - NHCOORa, -NRbCOORa, -NHSO2ORa, -NRbSO2OH1 -NR8SO2ORa1 - NHCONH2, -NRaCONH2i -NHCONHRb -NRaCONHRb1 -NHCONRaRb ou - NRaCONRaRb em que Ra e R8 são independentemente a (CrC6)alquila, (C3-C6) cicloalquila, fenila ou heteroarila monocíclica possuindo 5 ou 6 áto- mos de anel, ou Ra e R8 quando anexados ao mesmo átomo de nitrogênio formam um grupo amino cíclico (por exemplo, morfolino, piperidinila, pipera- zinila ou tetra-hidropirrolila). Um "substituinte opcional" pode ser um dos gru- pos substituintes precedentes.
Conforme usado neste documento, o termo "sal" inclui adição de base, adição de ácido e sais quaternários. Os compostos da presente inven- ção que são ácidos podem formar sais incluindo sais farmaceuticamente aceitáveis, com bases, tais como, hidróxidos de metal alcalino, por exemplo, hidróxidos de sódio e potássio; hidróxidos de metal alcalino, por exemplo, hidróxidos de cálcio, bário e magnésio; com bases orgânicas, por exemplo, N-metil-D-glucamina, colina tris(hidroximetil)amino-metano, L-arginina, L- lisina, N-etil piperidina, dibenzilamina e similares. Aqueles compostos (IA) e (IB) que são básicos podem formar sais, incluindo sais farmaceuticamente aceitáveis com ácidos inorgânicos, por exemplo, ácidos hidroálicos, tais co- mo, ácidos clorídricos ou bromídricos, ácido sulfúrico, ácido nítrico ou ácido fosfórico e similares e com ácidos orgânicos, por exemplo, com ácido acéti- co, tartárico, succínico, fumário, maléico, málico, salicíclico, cítrico, metanos- sulfônico, p-toluenossulfônico, benzóico, benzenossulfônico, glutâmico, lácti- co e mandélico e similares.
Espera-se que os compostos da presente invenção possam ser recuperados na forma de hidrato ou solvato. O termo "solvato" é empregado aqui para descrever um complexo molecular compreendendo o composto da presente invenção e uma quantidade estequiométrica de uma ou mais molé- culas de solvente farmaceuticamente aceitáveis, por exemplo, etanol. O ter- mo "hidrato" é empregado quando o solvente é água.
Os compostos da presente invenção que contém um ou mais centros quirais reais ou em potencial, em razão da presença de átomos de carbono assimétricos, podem existir como vários diastereoisômeros com estequiometia R ou S em cada centro quiral. A invenção inclui todos tais di- astereoisômeros e misturas dos mesmos.
O termo "éster" ou "grupo éster" ou "grupo carboxila esterificado" em conexão com o substituinte Ri acima significa um grupo RxO(C=O)- em que Rx é o grupo que caracteriza o éster, notadamente derivado do álcool
RxOH.
Nos compostos da presente invenção, os substituintes e grupos variáveis serão discutidos agora em mais detalhes:
O substituinte R7
R7 é hidrogênio ou (CrC6)alquila opcionalmente substituída, tal
como metila, etila ou n- ou iso-propila. É correntemente preferido que R7 seja hidrogênio. O anel A
O anel A é um anel arila ou heteroarila divalente opcionalmente
substituído de 5-13 átomos, tal como, anel monocíclico de 5 ou 6 elementos ou um sistema de anel bicíclico 5,6-, 6,6- ou 5,5-, Exemplos incluem radicais divalentes fenileno, piridinileno, pirimidinileno e pirazinileno. Correntemente preferido é o 1,4-fenileno ou 1,3-fenileno. Substituintes opcionais no anel A podem ser selecionados, por exemplo, de flúor, cloro, metila e trifluorometila. O radical Z da fórmula -(CHi)7-X1-L1-Y- NHCHR1R2 O grupo Ri em Z
R1 é um grupo ácido carboxílico ou um grupo éster que é hidroli- sável por uma ou mais enzimas carboxilesterase intracelulares em um grupo ácido carboxílico. Enzimas carboxilesterase intracelulares capazes de hidro- Iisar o grupo éster de um composto da presente invenção no ácido corres- pondente incluem os três isotipos de enzima humana conhecidos hCE-1, hCE-2 e hCE-3. Embora estas sejam consideradas como sendo as enzimas principais, outras enzimas, tais como, bifenilidrolase (BPH) também podem ter um papel na hidrolisação do éster. Em geral, as carboxilesterase hidrola- ses de éster aminoácido livre em relação ao ácido de origem também hidro- lisarão o motivo de éster quando covalentemente conjugadas no inibidor IKK. Consequentemente, o ensaio de célula rompida descrito neste docu- mento provê uma primeira classificação confiável, rápida e simples para os ésteres que possuem o perfil de hidrólise necessário. Os motivos do éster selecionados daquela forma podem então ser reensaiados no mesmo ensaio de carboxilesterase quando conjugados ao modulador através da química de conjugação escolhida, de modo a confirmar que ainda existe um substrato de carboxilesterase naquela base.
Exemplos de grupos éster específicos Ri sujeitos ao requisito de que podem ser hidrolisáveis por enzima carboxilesterase intracelular, inclu- em aqueles da fórmula -(C=O)ORi4 em que Ri4 é R8R9RioC- em que:
(i) R8 é hidrogênio ou (CrC3)alquil-(Z1)a-[(CrC3)alquil]b- ou (C2-
C3)alquenil-(Z1)a-[(CrC3)alquila]b- opcionalmente substituído em que a e b são independentemente 0 ou 1 e Z1 é -O-, -S-, ou -NR11- em que R11 é hi- drogênio ou (CrC3)alquila; e R9 e R10 são independentemente hidrogênio ou (CrC3)alquil-;
(ii) R8 é hidrogênio ou R12R13N-(CrC3)alquil- opcionalmente substituído em que R12 é hidrogênio ou (CrC3)alquila e R13 é hidrogênio ou (C1-C3)SlquiIa; ou R12 e R13 em conjunto com o átomo de nitrogênio ao qual estão anexados formam um anel heterocíclico monocíciico, opcionalmente substituído de 5- ou 6- átomos de anel ou sistema de anel heterocíclico bicí- clico de 8 a 10 átomos no anel, e R9 e R10 são independentemente hidrogê- nio ou (C-i-C3)alquil-; ou
(iii) Rs e R9 tomados em conjunto com o átomo de carbono ao qual estão anexados formam um anel carbocíclico monocíciico opcionalmen- te substituído de 3 a 7 átomos no anel ou sistema de anel carbocíclico bicí- clico de 8 a 10 átomos no anel e R10 é hidrogênio.
Dentro destas classes, R1O é freqüentemente hidrogênio. Exem- plos específicos de R14 incluem metila, etila, n- ou iso-propila, n-, sec- ou terc-butila, ciclo-hexila, alila, fenila, benzila, 2-, 3- ou 4-piridilmetila, N- metilpiperidin-4-ila, tetra-hidrofuran-3-ila, metoxietila, indanila, norbornila, dimetilaminoetila ou morfolinoetila. É correntemente preferido quando R14 é ciclopentila ou terc-butila.
Os macrófagos são conhecidos por desempenharem um papel importante nos transtornos inflamatórios através da distribuição das citocinas especificamente TNFa e IL-1 (van Roon e outros, Arthritis e Rheumatism, 2003, 1229-1238). Na artrite reumatóide eles são os principais constribuintes para a manutenção da inflamação da articulação e destruição da mesma. Os macrófagos também estão envolvidos no crescimento e desenvolvimento de tumores (Naldini and Carraro, Curr Drug Targets Inflamm Allergy, 2005, 3-8). Consequentemente, os agentes que alvejam seletivamente a proliferação e função da célula de macrófago seriam importantes no tratamento do câncer e doença autoimune. Espera-se que o alvejamento dos tipos de célula espe- cíficos conduza a efeitos colaterais reduzidos. Os inventores descobriram um método para alvejar inibidores para as células que expressam hCE-1, especificamente, macrófagos e outras células derivadas da linhagem mielo- monocítica, tais como, monócitos, osteoclastos e células dendríticas. Isto tem como base a observação de que o modo no qual o motivo de esterase é ligado ao inibidor determina se ele é hidrolisável por todas as três carboxiles- terases humanas ou apenas por hCE-1, e consequentemente se ou não ele se acumula nos diferentes tipos de célula. Especificamente, foi verificado que os macrófagos e outras células derivadas da linhagem mielo-monocítica, ambas normal e cancerígena, contêm a carboxilesterase humana hCE-1, considerando-se que outros tipos de célula não contêm. Nas fórmulas gerais (IA) e (IB)1 quando o nitrogênio do motivo da esterase R1CH(R2)NH- não é diretamente ligado à carbonila (-C(=0)-), isto é, quando Y não é um radical - C(=0), -C(=0)0- ou -C(=0)NR3-, o éster apenas será hidrolisável por hCE-1 e consequentemente os inibidores se acumulam seletivamente nas células relacionadas ao macrófago. A cadeia de aminoácido lateral R? em Z
Sujeita ao requisito de que o grupo éster Ri seja hidrolisável por enzimas carboxilesterase intracelulares, a identidade do grupo R2 de cadeia lateral não é importante para os compostos seletivos não macrófagos. Para os compostos seletivos macrófagos, são preferidas as cadeias laterais, tais como, valina, ciclo-hexilglicina, terc-butilserina, terc-butilcisteína, prolina, fe- nilalanina, Ieucina e fenilglicina.
Exemplos de cadeias laterais de aminoácido incluem grupos:
(CrC6)alquila, fenila, 2,- 3- ou 4-hidroxifenila, 2,- 3- ou 4- metoxifenila, 2, 3- ou 4-piridilmetila, benzila, feniletila, 2-, 3- ou 4- hidroxibenzila, 2,- 3 ou 4-benziloxibenzila, 2,- 3- ou A- (C-i-C6)alcoxibenzila, e benzilóxi(Ci-C6alquil)-;
o grupo caracterizante de um aminoácido α natural em que qual- quer grupo funcional pode ser protegido;
grupos -[AlkJnRi6 em que Alk é um grupo (CrC6)alquila ou (C2- Ce)alquenila opcionalmente interrompido por um ou mais átomos -O- ou -S- ou grupos -N(R17)- [em que R17 é um átomo de hidrogênio ou um grupo (C1- C6)alquila], η é O ou 1, e R16 é um grupo cicloalquila ou cicloalquenila opcio- nalmente substituído;
um grupo benzila substituído no anel fenila por um grupo da fór- mula -OCH2COR18 em que R18 é hidroxila, amino, (C-i-CeJalcóxi, fenil(Cr C6)alcóxi, (CrC6)alquilamino, di((C1-C6)alquila)amino, fenil(Cr C6)alquilamino, o resíduo de um aminoácido ou haleto ácido, derivado éster ou amida do mesmo, o dito resíduo sendo ligado através de uma ligação de amida, o dito aminoácido sendo selecionado de glicina, α ou β alanina, vali- na, leucina, isoleucina, fenilalanina, tirosina, trifptofano, serina, treonina, cis- teína, metionina, asparaina, glutamina, lisina, histidina, arginina, ácido glu- tâmico e ácido aspártico;
um grupo (CrC6)alquila heterocíclico, sendo tanto não substituí- do ou mono ou dissubstituído com halo, nitro, carbóxi, (CrC6)alcóxi, ciano, (Ci-C6)alcanoila, trifluormetil (Ci-C6)alquila, hidróxi, formila, amino, (Cr C6)alquilamino, di-(Ci-C6)alquilamino, mercapto, (CrC6)alquiltio, NdroxifC1- C6)alquila, mercapto(CrC6)alquila ou (CrC6)alquilfenilmetila; e um grupo -CRaRbRc em que:
cada um dentre Ra, Rb e Rc é independentemente hidrogênio, (Ci-C6)alquila, (C2-C6)alquenila, (C2-C6)alquinila, fenil(Ci-C6)alquila, (C3- C8)cicloalquila; ou
Rc é hidrogênio e Ra e Rb são independentemente fenila ou hete- roarila, tal como, piridila; ou
Rc é hidrogênio, (Ci-C6)alquila, (C2-C6)alquenila, (C2-C6)alquÍnila, fenil(CrC6)alquila ou (C3-C8)cicloalquila, e Ra e Rb em conjunto com o átomo de carbono ao qual eles estão anexados formam uma cicloalquila de 3 a 8 elementos ou um anel heterocíclico de 5 a 6 elementos; ou
Ra, Rb e Rc em conjunto com o átomo de carbono ao qual eles estão anexados formam um anel tricíclico (por exemplo, adamantila); ou
Ra e Rb são independentemente (C-|-C6)alquila, (C2-Ceialquenila, (C2-C6)alquinila, fenil(Ci-Ce)alquila ou um grupo conforme definido para Rc abaixo, que não hidrogênio ou Ra e Rb em conjunto com o átomo de carbono ao qual eles estão anexados formam um anel cicloalquila ou heterocíclico e Rc é hidrogênio, -OH, -SH, halogênio, -CN, -CO2H1 (C1-C^perfluoroalquila, - CH2OH, -C02(CrC6)alquila, -0(CrC6)alquila, -0(C2-C6)alquenila, -S(Cr C6)alquila, -SO(CrC6)alquila, -SO2(CrC6) alquila, -S(C2-C6)alquenila, - SO(C2-C6)alquenila, -S02(C2-C6)alquenila ou um grupo -Q-W em que Q re- presenta uma ligação ou -O-, -S-, -SO- ou -SO2- e W representa um grupo fenila, fenilalquila, (C3-C8)cicloalquila, (C3-C8)cicloalquilalquila, (C4- C8)cicloalquenila, (C4-C8)CicloaIqueniIaIquiIa, heteroarila ou heteroarilalquila, o grupo W podendo ser opcionalmente substituído por um ou mais substitu- intes independentemente selecionados de hidroxila, halogênio, -CN1 -CO2H1 -C02(CrC6)alquila, -CONH2, -CONH(CrCe)alquila, -CONHíCrCe alquil)2, - CHO1 -CH2OH1 (C1-C4)PerfluoroaIquiIal -0(Ci-C6)alquila, -S(CrC6)alquila, - SO(CrC6)alquila, -SO^CrCeJalquila, -NO2, -NH2l -NHÍCrCeJalquila, -N((Cr C6)alquila)2l -NHCO(CrC6)alquila, (CrC6)alquila, (C2-C6)alquenila, (C2- C6)alquinila, (C3-C8)CiCloaIquiIa1 (C4-C8)cicloalquenila, fenila ou benzila.
Exemplos de grupos R2 específicos incluem hidrogênio (a "ca- deia lateral" glicina), benzila, fenila, cicloexilmetila, ciclo-hexila, piridin-3- ilmetila, terc-butoximetila, iso-butila, sec-butila, terc-butila, 1-benziltio-1- metiletila, 1 -metiltio-1 -metiletila, 1-mercapto-l-metiletila, e feniletila. Os gru- pos R2 presentemente preferidos incluem fenila, benzila, iso-butila, ciclo- hexila e terc-butoximetila.
Para os compostos da presente invenção que devem ser admi- nistrados sistemicamente, os ésteres com uma taxa lenta de clivagem de carboxilesterase são os preferidos, uma vez que eles são menos suscetíveis ao metabolismo pré-sistêmico. Sua capacidade de alcançar seu tecido-alvo intactos é portanto aumentada e o éster pode ser convertido dentro das célu- las do tecido-alvo no produto ácido. Contudo, para administração local, em que o éster é tanto diretamente aplicado ao tecido-alvo quanto direcionado para lá, por exemplo, por inalação, será freqüentemente desejado que o és- ter tenha uma taxa rápida de clivagem da esterase, de modo a minimizar a exposição e efeitos colaterais conseqüentes e indesejáveis. Nos compostos desta invenção, se o carbono adjacente ao alfa carbono do éster do alfa a- minoácido for monossubstituído, isto é, R2 é -CH2Rz (Rz sendo o monos- substituinte) então os ésteres tendem a ser clivados mais rapidamente que se cada carbono for di ou trissubstituído, como no caso em que R2 é, por exemplo, fenila ou ciclo-hexila. O radica! -(CH9)7-X1 -L1-Y- no Z
Este radical (ou ligação) surge da estratégia da química especí- fica escolhida para ligar o motivo do éster do aminoácido R1CH(R2)NH- ao restante da molécula. Claramente, a estratégia química para aquele acopla- mento pode variar muito e assim muitas combinações de variáveis z, L11 X1 e Y são possíveis. A combinação precisa das variáveis constituindo a química de ligação entre o motivo do éster de aminoácido e o restante da molécula freqüentemente será irrelevante ao modo de ligação primário dos compostos como um todo. Por outro lado, aquela química de ligação pode, em alguns casos, coletar interações de ligação adicionais com a enzima, pelo que, me- lhorando a ligação.
Deve ser observado que os benefícios do motivo do éster de aminoácido descritos acima (entrada fácil dentro da célula, hidrólise de car- boxilesterase dentro da célula e acúmulo dentro da célula do produto de hi- drólise de ácido carboxílico ativo) são obtidos de modo melhor quando a li- gação entre o motivo do éster de aminoácido e o restante da molécula não for um substrato para atividade da peptídase dentro da célula, o que pode resultar em clivagem do aminoácido da célula. Naturalmente, a estabilidade para peptidases intracelulares é facilmente testada por incubação do com- posto com teores de célula interrompidos, e análise para qualquer tal cliva- gem.
Com as observações gerais precedentes em mente, tomando-se as variáveis que constituem o radical -(CH2)Z-X1-L1-Y- por sua vez:
ζ pode ser 0 ou 1;
No radical L1, exemplos de radicais Alk1 e Alk2 quando presen- tes, incluem:
—CH2-, —CH2CH2-, —CH2CH2CH2-, —CH2CH2CH2CH2-1 -CH=CH1 — CH=CHCH2-, -CH2CH=CH-, CH2CH=CHCH2-CeC-, -CSCCH2-, CH2CEC-, e CH2CeCCH2. Exemplos adicionais de Alk1 e Alk2 incluem -CH2W-, - CH2CH2W-, -CH2CH2WCH2-, -CH2CH2WCH(CH3)-, -CH2WCH2CH2-, - Ch2WCH2CH2WCH2-, e -WCH2CH2- em que W é -O-, -S-, -NH-, -N(CH3)- ou -Ch2CH2N(CH2CH2OH)CH2-. Exemplos adicionais de Alk1 e Alk2 incluem radicais ciclopropila, ciclopentila e ciclo-hexila divalentes.
Alk1 e Alk2 quando presentes podem também ser alquila de ca- deia ramificada, tal como, -CH(CH3)-, -C(CH3)2- ou em cada orientação - CH2CH(CH3)-, -CH2C(CH3)2-.
Em L1, quando η for 0, e pelo menos um de m e ρ será 1, o radi- cal sendo uma cadeia de hidrocarboneto (opcionalmente substituída e talvez possuindo uma ligação éter, tioéter ou amino). Presentemente é preferido que não existam substituintes em L1. Quando ambos m e ρ forem 0, L1 será um radical heterocíclico, carbocíclico mono ou bicíclico divalente com 5-13 átomos de carbono (opcionalmente substituído, porém presentemente prefe- rido como não sendo substituído e talvez ligado a um átomo adjacente atra- vés de uma ligação éter, de tioéter ou de amino). (Observação: isto ocorre quando Q é -Q2-X2-, se possível nesta aplicação). Quando η for 1 e pelo menos um de m e ρ for 1, L1 será um radical divalente incluindo uma ou mais cadeias hidrocarboneto (opcionalmente substituído, e talvez possuindo uma ligação éter, tioéter ou amino) e um radical heterocíclico ou carbocíclico mo- no ou bicíclico com 5-13 átomos no anel (opcionalmente substituído, porém presentemente preferido como não sendo substituído e talvez ligado a um átomo adjacente através de uma ligação éter, tioéter ou amino).
Quando presente, Q pode ser, por exemplo, um radical fenila, naftila, ciclopropila, ciclopentila ou ciclo-hexila divalente ou um radical hete- rocíclico mono ou bicíclico possuindo 5 a 13 elementos no anel, tal como, piperidinila, piperazinila, indolila, piridila, tienila ou pirrolila.
Em algumas concretizações da presente invenção, L1, m e ρ po- de ser 0 com η sendo 1. Em outras concretizações, η e ρ em que ser 0 com m sendo 1. Nas concretizações adicionais, m, η e ρ podem ser todos 0. Ain- da nas concretizações adicionais m pode ser 0, η pode ser 1 com Q sendo um radical heterocíclico monocíclico e ρ pode ser 0 ou 1. Especificamente, Alk1 e Alk2, quando presentes, podem ser selecionados dentre -CH2-, - CH2CH2-, e -CH2CH2CH2- e Q quando presente pode ser selecionado de:
O O+ ■
em que EeG são independentemente CH ou N. A ligação X1 representa uma ligação, -(C=O)-, -S(O2)-, - NR4C(=0)-, -C(=0)NR4-, -NR4C(=0)-NR5-, -NR4S(=0)2- ou -S(=0)2NR4- em que R4 e R5 são independentemente hidrogênio ou CrC6 alquila opcional- mente substituída, tal como, metila ou etila.
A ligação Y é uma ligação, -C(=0)-, -S(=0)2-, -C(=0)0-, -
C(=0)NR3-, -C(=S)-NR3, -C(=NH)-NR3 ou -S(=0)2NR3- em que R3 é hidro- gênio ou C1-C6 alquila opcionalmente substituída, tal como, metila ou etila.
Freqüentemente ζ será O e X1 e Y serão independentemente uma ligação, de modo que o motive da aminoácido esterase RiR2CHNH- é ligado ao anel contendo X pelo radical L1 conforme definido e discutido aci- ma.
Especificamente nos compostos exemplares da presente inven- ção, o radical
R1R2CHNH-Y-L1X1-(CH2)z- é selecionado de R1R2CHNH-(CH2)a- , R1R2CHNH-(CH2)aO-, e R1R2ChnH-CH2CH=CHCH2-, em que a é 1, 2, 3, 4 ou 5.
1 1
Em outros compostos da presente invenção R1R2CHNH-Y-L X - (CH2)z-, é selecionado de: R1R2CHNHSO2-, R1R2CHNHCO-,
R1R2CHNH — (CH2)01 (CH2>O,I ~h
R1R2CHNH — (CH2)01 ^^y^ (CH2)0lI N-j-
R1R2CHNH — (CH2)01 \ y-(CH2)0i1
R1R2CHNH — (CH2)01 -(CH^o,i
Compostos específicos da presente invenção incluem aqueles
dos exemplos deste documento, seus sais, N-óxidos, hídratos e solvatos.
Conforme mencionado acima, os compostos aos quais a inven- ção refere-se são inibidores de IKK, especialmente da atividade da ΙΚΚβ ci- nase e são portanto de uso no tratamento das doenças moduladas pela ati- vidade de IKK e da cascata NF-ZfB. Tais doenças incluem doença neoplási- ca/proliferativa, imune e inflamatória. Especificamente, os usos dos compos- tos incluem tratamento de cânceres, tais como, câncer hepatocelular ou me- lanoma, porém também incluindo câncer do intestino, câncer ovariano, cân- ceres da cabeça e pescoço e escamoso cervical, cânceres gástrico e de pulmão, oligodendrogliomas anaplásticos, glioblastoma multiforme ou medu- loblastomas; e tratamento da artrite reumatóide, psoríase, doença dos intes- tinos inflamados, doença de Crohn, colite ulcerativa, doença pulmonar obs- trutiva crônica, asma, esclerose múltipla, diabetes, dermatite atópica, doença de enxerto versus hospedeiro ou lúpus eritematoso sistêmico.
Os compostos com os quais a invenção se relaciona podem ser preparados por administração por qualquer via consistente com suas propri- edades farmacocinéticas. As composições administráveis oralmente podem estar na forma de comprimidos, cápsulas, pós, grânulos, pastilhas, prepara- ções líquidas ou em gel, tais como, soluções ou suspensões parente- rais,orais, tópicas ou estéreis. Comprimidos e cápsulas para administração oral podem estar na forma de apresentação de dose unitária e podem conter excipientes convencionais, tais como, agentes de ligação, por exemplo, xa- rope, acácia, gelatina, sorbitol, tragacanto ou polivinil-pirrolidona; cargas, por exemplo, lactose, açúcar, amido de milho, fosfato de cálcio, sorbitol ou glici- na; lubrificante de compostagem, por exemplo, estearato de magnésio, talco, polietileno glicol ou sílica; desintegrantes, por exemplo, amido de batata ou agentes de umectação aceitáveis, tais como, Iauril sulfato de sódio. Os com- primidos podem ser revestidos de acordo com os métodos bem conhecidos na prática farmacêutica normal. As preparações líquidas orais podem estar na forma, por exemplo, de suspensões aquosas ou oleosas, soluções, emul- sões, xaropes ou elixires ou podem estar presentes como um produto seco para reconstituição com água ou outro veículo apropriado antes do uso. Tais preparações líquidas podem conter aditivos convencionais, tais como, agen- tes de suspensão, por exemplo, sorbitol, xarope, metil celulose, xarope de glicose, gorduras comestíveis hidrogenadas com gelatina; agentes emulsio- nantes, por exemplo, Iecitina1 mono-eato de sorbitano ou acácia; veículos não-aquosos (que podem incluir óleos comestíveis), por exemplo, óleo de amêndoa, óleo de coco fracionado, ésteres oleosos, tais como, glicerina, propileno glicol ou álcool etílico, conservantes, por exemplo, metila ou p- hidroxibenzoato de propila ou ácido sórbico e caso desejado agentes aroma- tizantes ou corantes convencionais.
Para aplicação tópica à pele, o fármaco pode se constituir em um creme, loção ou unguento. As formulações de creme ou unguento que podem ser usadas para o fármaco são formulações convencionais bem co- nhecidas na técnica, por exemplo, conforme descrito nos livros texto-padrão de farmacêutica, tais como, British Pharmacopoeia.
Os compostos da presente invenção podem ser administrados na forma inalada. A geração do aerossol pode ser realizada usando, por e- xemplo, atomizadores de jato acionados por pressão ou atomizadores ul- trassônicos, preferivelmente usando aerossóis medidos acionados por pro- pelente ou administração isenta de propelente de compostos ativos e esfe- ronizados, por exemplo, de cápsulas de gelatina ou outros sistemas de dis- tribuição de "pó seco". Os compostos ativos podem ser dosados conforme descrito, de-
pendendo do sistema inalador empregado. Além dos compostos ativos, as formas de administração podem conter adicionalmente excipientes, tais co- mo, por exemplo, propelentes (por exemplo, Frigen no caso de aerossóis medidos), substâncias ativas na superfície, emulsionantes, estabilizadores, conservantes, aromatizantes, cargas (por exemplo, Iactose no caso de ina- Iadores de pó), ou caso apropriado, compostos ativos adicionais.
Para fins de inalação, um grande número de sistemas se encon- tra disponível com os quais os aerossóis de tamanho de partícula ótimo po- dem ser gerados e administrados usando uma técnica de inalação que é apropriada ao paciente. Além do uso dos adaptadores (espaçadores, expan- sores) e recipientes conformados em pêra (por exemplo, Nebulator®, Volu- matic®), e dispositivos automáticos emitindo uma aspersão tamponada (Au- tohaler®), para aerossóis medidos, especificamente no caso de inaladores de pó, várias soluções técnicas estão disponíveis (por exemplo, Diskhaler®, Rotadisk®, Turbohaler® ou os inaladores, por exemplo, conforme descrito na EP-A-0505321).
Para aplicação tópica aos olhos, o fármaco pode ser constituído
em uma solução ou suspensão em um veículo aquoso ou não-aquoso esté- ril. Aditivos, por exemplo, tampões, tais como, metabissulfito de sódio e ede- ato de dissódio; conservantes incluindo agentes bactericidas e fungicidas, tais como, acetato mercúrico de fenila ou nitrato, cloreto de benzalcônio ou clorexidina e agentes espessantes, tais como, hipromelose, podem também
ser adicionados.
O ingrediente ativo também pode ser administrado parenteral- mente em um meio estéril. Dependendo do veículo e da concentração, o fármaco pode tanto ser suspenso ou dissolvido no veículo. Vantajosamente, adjuvantes, tais como, anestésico local, conservante e agentes de tampo- namento podem ser dissolvidos no veículo.
Os compostos da presente invenção podem ser empregados em conjunto com várias substâncias farmaceuticamente ativas conhecidas. Por exemplo, os compostos da presente invenção podem ser usados com citotó- xicos, inibidores de HDAC1 inibidores de cinase, inibidores de aminopeptida- se, inibidores de protease, antagonistas de bcl-2, inibidores de mTor e anti- corpos monoclonais (por exemplo, aqueles direcionados aos receptores de fator de crescimento). Citotóxicos preferidos incluem, por exemplo, taxanos, platinas, anti-metabólitos, tais como, 5-fluoroacila, inibidores de topoisome- rase e similares. Os fármacos da invenção compreendendo os derivados de aminoácido da fórmula (IA) ou (IB), tautômeros dos mesmos ou sais farma- ceuticamente aceitáveis, N-óxidos, hidratos ou solvatos dos mesmos, por- tanto compreendem adicional e tipicamente um citotóxico, um inibidor HDAC, um inibidor de cinase, um inibidor de aminopeptidase e/ou um anti-
corpo monoclonal.
Adicionalmente, a presente invenção prove uma composição
farmacêutica compreendendo: (a) um derivado de aminoácido da fórmula (IA) ou (IB) ou um sal farmaceuticamente aceitável, N-óxido, hidrato ou solvato do mesmo;
(b) um agente citotóxico, um inibidor de HDAC, um inibidor de cina- se, um inibidor de aminopeptidase, um inibidor de protease, um antagonista de bcl-2, um inibidor de mTor e/ou um anticorpo monoclonal; e
(c) um veículo farmaceuticamente aceitável ou diluente. Também é provido um produto compreendendo:
(a) um derivado de aminoácido da fórmula (IA) ou (IB) ou um sal farmaceuti- camente aceitável, N-óxido, hidrato ou solvato do mesmo;
(b) um agente citotóxico, um inibidor de HDAC, um inibidor de cinase, um inibidor de aminopeptidase, um inibidor de protease, um antagonista de bcl- 2, um inibidor de mTor e/ou um anticorpo monoclonal
para o uso em separado, simultâneo ou seqüencial no tratamento do corpo
humano ou de um animal.
Síntese
Existem várias estratégias sintéticas para a síntese dos compos- tos (I) às quais a presente invenção refere-se, porém todas se fiam na quí- mica conhecida e química orgânica sintética conhecida. Assim, os compos- tos da fórmula (I) podem ser sintetizados de acordo com os procedimentos descritos na literatura padrão e são bem conhecidos dos versados na técni- ca. As fontes de literatura típicas são "Advanced organic chemistry", 4° edi- ção (Wiley), J March, "Comprehensive Organic Transformation", 2a edição (Wiley), R.C. Larock, "Handbook of Heterocyclic Chemistry", 2° edição (Per- gamon), A.R. Katritzky), artigos revistos, tais como em "Synthesis", "Acc. Chem. Res.", "Chem. ReV ou fontes de literatura primárias identificadas por pesquisas de literatura padrão online ou de fontes secundárias, tais como, "Chemical Abstracts" ou "Beilstein".
Os compostos da presente invenção podem ser preparados por vários processos geralmente descritos a seguir e mais especificamente nos Exemplos a seguir. Nas reações descritas a seguir, pode ser necessário pro- teger os grupos funcionais reativos, por exemplo, grupos hidroxila, amino e carbóxi, em que estes são desejados no produto final, para evitar sua parti- cipação indesejada nas reações [vide, por exemplo, Greene, T.W., "Protec- ting Groups in Organic Synthesis", John Wiley and Sons, 1999]. Grupos de proteção convencionais podem ser usados em conjunto com a prática pa- drão. Em alguns momentos, a desproteção pode ser realizada na etapa final, na síntese de um composto da fórmula geral (IA) ou (IB), e os processos de acordo com a invenção descrita neste documento são entendidos como se estendendo a tal remoção dos grupos de proteção.
Conforme mencionado acima, os compostos aos quais a inven- ção refere-se são inibidores da família Ι/cB , a saber, IKK-α e ΙΚΚ-β e são portanto de uso no tratamento de doença proliferativa celular, tal como, cân- cer, e no tratamento de inflamações em seres humanos e outros mamíferos. Abreviaturas MeOH = metanol EtOH = etanol EtOAc = acetato de etila DCM = diclorometano DIBAL = hidreto de di-isobutilalumínio DMF = dimetilformamida DME = éter dimetílico DMSO = sulfóxido de dimetila DMAP = dimetilamino piridina TFA = ácido trifluoroacético THF = tetra-hidrofurano Na2COa = carbonato de sódio HCI = ácido clorídrico DIPEA = di-isopropiletilamina LiHMDS = lítio bis(trimetilssilil)amida
MP-CNBH3 = cianoborohidreto de metilpoliestireno trietilamônio macroposo- ro
NaH = hidreto de sódio
NaOH = hidróxido de sódio
NaHCO3 = carbonato hidrogenado de sódio HCI = ácido clorídrico Pd/C = paládio sobre carbono
PdCI2(dppf) = [1,1'-Bis(difenilfosfino)ferroceno] dicloropaládio(ll). EDC = 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodi-imida KOAc = acetato de potássio
TBAI = iodeto de tetrabutil amônio mL = mililitro(s) g = grama(s) mg = miligram(s) mol = mol(s)
mmol = milimol(s) Sat = saturado(a)
LCMS = cromatografia de líquido de alto desempenho/espectrometria de massa
RMN = ressonância magnética nuclear
Reagentes e solventes disponíveis comercialmente (classificação HPLC) foram usados sem purificação adicional. Os solventes foram removidos em- pregando um evaporador giratório Buchi. Irradiação por micro-ondas foi rea- lizada empregando um modelo CEM Discpory ajustado a 300W. Purificação dos compostos por coluna de cromatografia flash foi realizada empregando gel de sílica, tamanho de partícula 40-63μ μνη (malha 230-400) obtido na Fluorochem. A purificação dos compostos por HPLC preparatória foi realiza- da em um sistema de preparação Agilent empregando colunas C18 de pre- paração Agilent de fase inversa (5 pm, 50 χ 21,2 mm), gradiente 0-100% B (A = água/amônia a 0,1% ou ácido fórmico a 0,1% e B = acetonitrila/amônia a 0,1% ou ácido fórmico a 0,1%) por 10 minutos, fluxo = 28 mL/minuto, de- tecção UV a 254 nm.
Os espectros 1H RMN foram registrados em um espectrômetro Bruker 400 ou 300 MHz AV em solventes deuterados. Os deslocamentos químicos (δ) são em partes por milhão. Análise de cromatografia de camada fina (TLC) foi realizada com placas Kieselgel 60 F254 (Merck) e visualizada empregando luz UV. HPCL/EM analíticas foram obtidas como se segue: Coluna Scalar C-18 preparatória Agilent, 5 pm (4,6 χ 50 mm, taxa de fluxo 2,5 mL/minuto) eluindo com um gradiente H2O-MeCN contendo 0,1% v/v de ácido fórmico por 7 minutos com detecção de UV a 254 nm. Informações do gradiente: 0 - meio minuto: 95% H20-5% MeCN; 0,5 -5,0 min; Elevação de 95% H20-5% MeCN para 5% H20-95% MeCN; 5,0 - 5 minutos e meio: Man- ter a 5% H20-95% MeCN; 5 minutos e meio - 5 minutos e seis segundos: Manter a 5% H20-95% MeCN, taxa de fluxo aumentou para 3 minutos e meio mL/minuto; 5 minutos e seis segundos - 6 segundos e seis minutos: Manter a 5% H20-95% MeCN1 taxa de fluxo 3,5 mL/minuto; 6 minutos e seis segundos - 6 minutos e setenta e cinco segundos: Retorno para 95% H2O- 5% MeCN, taxa de fluxo 3,5 mL/minuto; 6 minutos e setenta e cinco segun- dos - 6 minutos e nove segundos: Manter a 95% H20-5% MeCN, taxa de fluxo 3,5 mL/minuto; 6 minutos e nove segundos - 7 minutos: Manter a 95% H20-5% MeCN, taxa de fluxo reduzida para 2,5 mL/minuto. Os espectros de massa foram obtidos empregando uma fonte de múltiplos modos Agilent tan- to no modo positivo (APCI + ESI+) quanto no modo negativo (APCI + ESI").
Exemplos de tais métodos que podem ser empregados para a síntese dos compostos da fórmula geral (IA) e (IB) são estabelecidos, porém não limitados às reações mostradas nos esquemas 1-9 a seguir.
O esquema 1 ilustra a via sintética geral para a preparação dos exemplos descritos a seguir, usando química Suzuki tradicional para acoplar o éster boronato relevante (ou ácido) intermediários (4-11) ao núcleo de tio- feno central (Intermediário 1). ^sVoh nc
ο
hcAS
NH,
etapa 1
O
Λ
Cl3C NCO
etapa 2
NH0
n k
HN L
>-0
CI3C
etapa 3
0
B(OH)2
/Wq etapa 5
r I2N
intermediário 2 estágio 6
Br
// V
NH0
NH
NH0
// v
s Ί^ Stage 4
H2N
intermediário 1
estágio 7
Br""~xo'—NH
S X
HN
O
CI3C
O
Esquema 1
O Esquema 2 ilustra uma síntese alternativa aos análogos de tiofeno substituídos com fenila. OH
OH
H'NYO
NaBH(OAc)3
OH
ι Β.
I
α°νχτ
intermediário 4a-4f
OH
u
NH
Η,N intermediário 1
O^A-B
R
Esquema 2
O Esquema 3 ilustra a síntese com relação aos análogos de tio- feno do Iigante fenila.
H2N^Ah
NaNO,, HCI
Br
CuCl2, HCI
IXja"
NaBH(OAc)3 R
Cl
O-,
«Vo
bispinacolatodiboro
Cl
B
O intermediários 5a-5b
PdCI2(dppf) Br
""'to
nVo
7-h
Pd(PPh3),
a0v
LiOH
HO
Esquema 3
O Esquema 4 ilustra a com relação aos análogos de tiofeno de Iigante estendido.
ο
Br
Η,Ν
NaBH(OAc)3
"Ο
Pd(PPh3)4
Br
Α"
Η,Ν U
,Br
OAb-
bispinacolatodiboro
PdCI2(dppf)
intermediários 6a, 6b
intermediário 1 Esquema 4
Os Esquemas 5 e 6 ilustram a síntese em relação aos análogos de tiofeno ligados ao oxigênio estendido.
,Br Vk^o. ^ ^Br
HO
HCI
Br
^oV
O bispinacolatoboro
ι
Ric PdCI2(dppf)
intermediários 7a, 7 b
Pd(PPh3)4
Esquema 5
Cl0ArN
R
NaBH(OAc)3
Br HO
Br y
vCI
cr
Br
B-Q bi spinscolatoboro
PdCI2(dppf)
CX0IrN
R
o^v
DlPEA
Br
intermediários 8a, 8b
Pd(PPh3)4
CX0XrN------
Esquema 6
O Esquema 7 ilustra a síntese dos análogos de tiofeno do Iigante alceno alternativos.
CX0ArNH2 Cl0AfH^
(Boc)2O
Ψ
-Cl0ArI
o
Esquema 7 O Esquema 8 ilustra uma síntese alternativa para os análogos
de tiofeno do Iigante alceno.
,Br
DIBAL
Br
MnO,
OH
Cx0V
B-Q^ bispinacolatoboro
PdClj(dppf)
intermediários 9c-9h
Pd(PPh3),
a0v
Esquema 8
Br
NaBH(OAc)3
a0v
Br
O esquema 9 ilustra a síntese dos análogos de tiofeno do Iigante estendido substituído com fenila. Br
MePPH1Br
LiHMDS
ΒΓ Pb(OAc)4 0
Br
NaBH(OAc)3
CUi
αψ
bispinacolatodiboron PdCI2(dppf)
αχ«
NH,
Br
Intermediate 11a
Pd(PPh3)4
αχ«
exemplo 22
O Jl-NH2 Br-^ ^NH H2N u intermediário 1 O NH2 O /"I. H2N u
Esquema 9
1 .Intermediários
Intermediário 1 5-bromo-2-(carbamoilamino)tiofeno-3-carboxamida
A síntese do Intermediário 1 ressaltado nos estágios 1-4 no es- quema 1 é detalhada no W003104218.
Intermediário 2 2-(carbamoilaminoV5-(4-formilfenintiofeno-3-carboxamida
10
A uma mistura de 5-bromo-2-(carbamoilamino)tiofeno-3- carboxamida (1,0 g, 3,79 mmols), ácido 4-formilfenil borônico (0,625 g, 4,17 mmols) e tetracis(trifenilfosfina) catalisador de Pd (0,438 g, 0,379 mmol) em DME (50 mL) foi adicionado à solução aquosa saturada de carbonato hidro- genado de sódio (10 mL). O recipiente de reação foi fluxado com hidrogênio e aquecido a 90°C por toda noite. LCMS indicou consumo completo do ma- terial de partida. A mistura de reação foi concentrada empregando um eva- porador giratório. O resíduo marrom escuro resultante foi dissolvido em DCM (17 mL) e agitado com solução aquosa de hidróxido de sódio 2M (8,5 mL) por 20 minutos. Éter dietílico (20 mL) foi adicionado e a mistura agitada por mais 30 minutos. A suspensão resultante foi sonicada por 2 minutos. A filtra- ção forneceu um precipitado, que foi lavado com éter dietílico quente para fornecer um sólido colorido (440 mg).
LCMS: m/z 288 [M-H]+; m/z 290 [M+H]+. Intermediários 3a-3i - Preparação de ésteres de aminoácido
Route I.
^cAN
estágio 1. cidopentanol
Estágio 2
EDCl, DMAP, DMF . l,
γ \ HCI/dioxano HCI H2N fí J \
O LV DCM o '—'
Via 2
estágio 1. cidopentanol
, ___.OH
H2N pTSA, ciclo-hexano
15 Intermediário 3 a
Intermediário 3b
Intermediário 3 c
Intermediário 3 d
HCl H2N'
Intermediário 3e
Intermediário 3g
Intermediário 3h
H2N
β T>
Intermediário 3f
H2N
o X>
Intermediário 3i
Síntese dos compostos ressaltados na Lista 1 Via I (exemplificada para o Intermediário 3e) Estágio 1 - Formação de Ester
o U
A uma solução de ácido (S)-2-terc-butoxicarbonilamino-3-ciclo- hexil-propiônico (5 g, 19,4 mmols) em DMF (50 mL) a 0°C foi adicionado ci- clopentanol (8,8 mL, 97,15 mmols), EDCI (4,09 g, 21,37 mmols) e finalmente DMAP (237 mg, 1,94 mmol). A mistura de reação foi aquecida para tempera- tura ambiente e agitada por 18 horas. O DMF foi removido in vácuo para for- necer um óleo límpido. Este foi separado entre água e EtOAc. A fase orgâni- ca foi seca (MgS04) e concentrada in vácuo. O extrato bruto foi purificado por cromatografia de coluna (25% EtOAc em heptano) para render o produto desejado como um óleo límpido (14,87 g, 55%). 1H RMN (300 MHz1 d6- DMSO) δ; 7,09 (1H, d), 5,08 (1H, t), 3,76 (1H, t), 1,50-1,85 (10H, br m), 1,39 (9H, s), 1,00-1,25 (9H, brm).
Estágio 2 - Cloridrato de (2S)-amino(ciclo-hexil)acetato de ciclopentila (In- termediário 3e)
DCM (100 mL) e tratado com 4M HCI/dioxano (22,8 mL, 91,38 mmols) e a mistura de reação foi agitada a temperatura ambiente por 24 horas. A mistu- ra bruta foi concentrada sob pressão reduzida para fornecer um óleo laranja. Este foi triturado com Et2O para fornecer um precipitado branco. Este foi la- vado adicionalmente com Et2O para fornecer o produto desejado como um pó branco (7,78 g, 65%). 1H RMN (300MHz, cfe-DMSO) δ; 8,45 (3H, br s), 5,22(1 H11), 3,28 (1H, d), 1,95-1,50 (10H, brm), 1,30-0,90 (9H, brm). Via Il (exemplificada para Intermediário 3c)
Estágio 1 - 4-metilbenzenossulfonato de (1S)-2-(ciclopentilóxi)-2-oxo-1- feniletanaminio (Intermediário 3c)
O produto do estágio 1 (14,87 g, 45,69 mmols) foi dissolvido em
A uma pasta de (S)-fenilglicina (5 g, 33,1 mmols) em cicloexano (150 mL) foi adicionado ciclopentanol (29,84 ml_, 331 mmols) e ácido p- tolueno sulfônico (6,92 g, 36,4 mmols). A reação foi equipada com um recep- tor Dean-Stark e aquecido a 135°C para dissolução completa. Após 12 ho- ras, a reação foi resfriada para temperatura ambiente conduzindo a precipi- tação de um sólido branco. O sólido foi filtrado e lavado com EtOAc antes da secagem sob pressão reduzida para fornecer o produto necessário como um pó branco (11,01 g, 85%). 1H RMN (300MHz, d6-DMSO) δ; 8,82 (2H, br s), 8,73 (1H, br s), 7,47 (7H, m), 7,11 (2H, d), 5,25 (1H, br s), 5,18 (1H, m), 2,29 (3H, s), 1,87-1,36 (8H, m).
Os ésteres do (R)aminoácido correspondentes dos intermediá-
rios acima podem ser preparados de modo similar ao mostrado acima, par- tindo dos (R)aminoácidos relevantes disponíveis comercialmente. Além dis- so, os ésteres de terc-butila de Ieucina e fenilglicina se encontram comerci- almente disponíveis e são usados diretamente quando apropriado.
Intermediário 4a - /V-[3-(di-hidroxiboril)benzill-L-leucinato de ciclopentila
A síntese do Intermediário 4a segue a via sintética mostrada no
esquema 2.
A uma solução do Intermediário 3a (244,6 mg, 1,227 mmol) e ácido (3-formilfenil) borônico (184 mg, 1,227 mmol) em DCM (10 mL) foi adi- cionado NaBH(OAc)3 (780 mg, 3,68 mmols) em porções por 20 minutos. A reação foi agitada a temperatura ambiente por 2 horas após o que a mistura de reação foi derramada em 1M HCI (50 mL) e foi lavada com DCM (50 mL). A fase aquosa foi neutralizada para pH 7 com NaHCOs e extraída com DCM (2 χ 50 mL). Os extratos orgânicos combinados foram secos sobre sulfato de magnésio e o solvente removido. O produto (270,3 mg, 0,811 mmol, 66,1% de rendimento) foi isolado como um sólido espumado incolor e foi usado di- retamente.
LCMS: m/z 334 [M+H]+.
Intermediário 4b - Ácido [3-({[(1S)-2-(ciclopentilóxi)-2-oxo-1-
20
25 feniletilIaminolmetiOfeninborônico
OH
oVtx^oh
A síntese com relação ao Intermediário 4b segue uma rota sinté- tica similar para o Intermediário 4a empregando o Intermediário 3c no es- quema 2.
LCMS: m/z 354 [M+Hf.
Intermediário 4c - Ácido r3-grMSV1-ciclo-hexil-2-(ciclopentilóxi)-2- oxoetilIaminolmetiDfeniriborônico
OH
αΤ«χτΒ·°Η
A síntese com relação ao Intermediário 4c segue uma rota sinté-
tica similar para o Intermediário 4a empregando o Intermediário 3e no es- quema 2.
LCMS: m/z 360 [M+H]+.
Intermediário 4d - 0-terc-butil-A/-í3-(di-hidroxiboraninbenzill-L-serinato de ciclopentila
.0
OH
I
o
A síntese com relação ao Intermediário 4d segue uma rota sinté- tica similar para o Intermediário 4a empregando o Intermediário 3f no es- quema 2. LCMS: m/z 364 [M+H]+.
Intermediário 4e - Q-terc-butil-A/-r3-(di-hidroxiboranil)benzin-L-treoninato de
ciclopentila A síntese com relação ao Intermediário 4e segue uma rota sinté- tica similar para o Intermediário 4a empregando o Intermediário 3g no es- quema 2. LCMS: m/z 322 [M+H]+.
Intermediário 4f - A/-r3-(di-hidroxiboraninbenzil1-L-valinato de ciclopentila ^V OH
αΫ«χτΒ·°Η
A síntese com relação ao Intermediário 4f segue uma rota sinté- tica similar para o Intermediário 4a empregando o Intermediário 3i no es- quema 2.
LCMS: m/z 320 [M+H]+.
Intermediário 5a - /V43-doro-4-(4.4.5.5-tetrametil-1.3.2-dioxaborolan-2- il)benzil1-L-leucinato de ciclopentila .O.
O
A síntese com relação ao Intermediário 5a segue a via sintética
mostrada no esquema 3.
A um frasco contendo éster ciclopentílico do ácido (S)-2-(4- bromo-3-cloro-benzilamino)-4-metil-pentanóico (715 mg, 1,775 mmol), bis[pinacolato]diboro (90 mg, 3,55 mmols), PdCI2(dppf) (130 mg, 0,178 mmol) e acetato de potássio (348 mg, 3,55 mmols) foi adicionado DMSO (10 ml_, seco) e o recipiente de reação completamente purgado com N2. A mistu- ra de reação foi colocada em um banho de óleo preaquecido a 80°C. Análise após 2 horas mostrou o produto desejado além do material de partida resi- dual. A reação permaneceu a 80°C por mais 3 horas. A mistura de reação foi resfriada para temperatura ambiente e derramada em água (10 mL). O pro- duto foi extraído em Et2O e os extratos orgânicos combinados foram lavados com água e salmoura, secos sobre sulfato de magnésio e o solvente remo- vido. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna eluindo com 10- 20% EtOAc em hexanos para render 150 mg de um óleo incolor. Purificação adicional por captura e distribuição em SCX forneceu 62 mg, 0,131 mmol, 7,4% de rendimento. LCMS: m/z 450 [M+H]+.
O éster ciclopentílico do ácido (S)-2-(4-bromo-3-cloro- benzilamino)-4-metil-pentanóico foi preparado como se segue. A um frasco contendo 4-bromo-3-cloro-benzaldeído (0,5 g, 2,278
mmols) e Intermediário 3a (0,537 g, 2,278 mmols) foi adicionado DCM (10 mL) e agitado a temperatura ambiente por 20 minutos, após o que Na- BH(OAc)3 (1,45 g, 6,83 mmols) foi adicionado em porções. A reação foi agi- tada a temperatura ambiente por 2 horas. A mistura de reação foi derramada em 2M HCI e extraída com DCM. A camada aquosa foi neutralizada com NaHCO3 e extraída novamente em DCM. Os extratos orgânicos combinados foram lavados com água, secos sobre sulfato de magnésio e o solvente re- movido in vácuo para fornecer 900 mg de um óleo incolor. Análise por LCMS mostrou o produto desejado em conjunto com o Intermediário 3a não reagi- do. O produto foi purificado por cromatografia de coluna eluindo com 50- 100% DCM em hexanos para fornecer 715 mg, 1,243 mmol, 54,5% de ren- dimento como um óleo incolor. LCMS: m/z 401,8/403,8 [M+H]+.
O 4-bromo-3-cloro-benzaldeído foi preparado conforme mostra- do a seguir.
4-Bromo-3-amino-benzaldeído (1,39 g, 6,95 mmols) foi dissolvi-
do em HCI (conc.) (15 mL) e tratado com nitrito de sódio (0,504 g, 7,30 mmols) a 0°C. A reação foi agitada por 30 minutos, então deixada aquecer para temperatura ambiente por 30 minutos. A mistura foi adicionada fria a uma solução agitada de cloreto de cobre (0,964 g, 9,74 mmols) em HCI (conc.) (10 mL) a temperatura ambiente. A solução verde foi aquecida a 60°C por 45 minutos então deixada resfriar. A mistura de reação foi derra- mada em água e extraída em EtOAc. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água, NaHCO3 e salmoura, secas sobre sulfato de mag- nésio e o solvente removido in vácuo para fornecer 1,2 g de um óleo mar- rom. O produto foi purificado por cromatografia de coluna eluindo com 10% EtOAc em hexanos. O produto foi isolado como um sólido ceroso incolor (1,061 g, 4,50 mmols, 64,7% de rendimento).
Intermediário 5b - A/-r2-metil-4-(4,4.5.5-tetrametil-1.3.2-dioxaborolan-2- il)benzin-L-leucinato de ciclopentila
empregando 4-bromo-2-metil-benzaldeído no esquema 3. LCMS: m/z 430 [M+H]+.
Intermediário 6a - A/-(2-r4-(4,4.5,5-tetrametil-1,3.2-dioxaborolan-2-il)fenil1etil)- L-Ieucinato de ciclopentila
A síntese com relação ao Intermediário 6a segue a via sintética mostrada no esquema 4.
Um frasco carregado com éster ciclopentílico do ácido (S)-2-[2- (4-bromo-fenil)-etilamino]-4-metil-pentanóico (320 mg, 0,837 mmol), bis[pinacolato]diboro (319 mg, 1,255 mmol), PdCbídppf) (30 mg, 5% em mol) e KOAc (123 mg, 1,255 mmol) foi fluxado com hidrogênio e DMSO (seco, 2 mL) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada a 80°C por 5 horas e foi julgada como estando completa por LCMS. A mistura foi resfriada para tem- peratura ambiente, derramada sobre água e extraída com éter. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água (3 vezes) e salmoura, secas (MgSO4)1 filtradas e evaporadas in vácuo para fornecer um resíduo oleoso escuro 467,2 mg. O resíduo escuro foi purificado por cromatografia de colu-
Sintetizado através de métodos análogos ao Intermediário 5a na eluindo com 10% EtOAc em hexanos para fornecer o produto como um óleo incolor 223 mg (62 %). LCMS: m/z 430 [M+H]+.
O éster ciclopentílico do ácido (S)-2-[2-(4-bromo-fenil)-etilamino]- 4-metil-pentanóico foi preparado conforme descrito a seguir.
A uma solução agitada do Intermediário 3a (500 mg, 2,509
mmols) e 4-bromofenilacetaldeído (510 mg, 2,56 mmols) em DCM (15 ml_) sob uma atmosfera inerte a temperatura ambiente, foi adicionado Na- BH(OAc)3 (1,595 g, 7,53 mmols) por um período de 20 minutos e agitado a temperatura ambiente por 30 minutos. A mistura de reação foi adicionado 2M HCI (50 mL) e extraído com DCM (50 mL χ 2). A camada de DCM foi se- ca por MgSO4 e o solvente removido para fornecer 994 mg de um sólido in- color oleoso, captura e distribuição em SCX forneceu o produto como um óleo amarelo pálido (320 mg, 33%). LCMS: m/z 384 [M+H]+. Intermediário 6b - /V-(2-r3-cloro-4-(4.4,5,5-tetrametil-1.3.2-dioxaborolan-2- ihfenilletiD-L-leucinato de ciclopentila
VJ o
Sintetizado através de métodos análogos ao Intermediário 6a, empregando 4-bromo-3-cloro-fenilacetaldeído no esquema 4. LCMS: m/z 464 [M+H]+. Intermediário 6c - A/-(2-f3-(4.4.5.5-tetrametil-1.3.2-dioxaborolan-2-il)fenilletil}-
L-Ieucinato de ciclopentila
Sintetizado através de métodos análogos ao Intermediário 6a,
empregando 3-bromofenilacetaldeído no esquema 4.
LCMS: m/z 430 [M+Hf.
Intermediário 6d - (2SHenil({2-f3-(4,4.5,5-tetrametil-1.3.2-dioxaborolan-2- iDfeninetil)amino)acetato de ciclopentila
Sintetizado através de métodos análogos ao Intermediário 6a, empregando 3-bromofenilacetaldeído e o Intermediário 3c no esquema 4. LCMS: m/z 450 [M+Hf.
Intermediário 6e - Q-terc-butil-/V-(2-r3-(4.4.5.5-tetrametil-1.3.2-dioxaborolan- 2-ilWenilletilVL-serinato de ciclopentila
Sintetizado através de métodos análogos ao Intermediário 6a, empregando 3-bromofenilacetaldeído e o Intermediário 3f no esquema 4. LCMS: m/z 460 [M+H]+.
Intermediário 6f - Q-terc-butil-/V-(2-r3-(4.4.5.5-tetrametil-1.3.2-dioxaborolan-2- infenil1etil)-L-treoninato de ciclopentila
1 o
Cf l ^XJ
Sintetizado através de métodos análogos ao Intermediário 6a, empregando 3-bromofenilacetaldeído e o Intermediário 3g no esquema 4. LCMS: m/z 474 [M+H]+.
Intermediário 7a - /V-(3-r4-(4A5.5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- infenóxilpropilVL-leucinato de ciclopentila A via sintética para o Intermediário 7a é mostrada no esquema 5.
A uma mistura de éster ciclopentílico do ácido (S)-2-[3-(4-bromo- fenóxi)-propilamino]-4-metil-pentanóico (0,37 g, 0,897 mmol), bis[pinacolato]diboro (0,684 g, 2,69 mmols), PdCI2(dppf) (0,066 g, 0,090 mmol) e KOAc (0,264 g, 2,69 mmols) foi adicionado DMSO (2 ml_). A mistura foi purgada com nitrogênio e colocada em um banho de óleo preaquecido a 80°C. Após 4 horas a reação foi julgada como estando completa por LC-MS. A mistura foi resfriada para temperatura ambiente e derramada sobre uma mistura de éter e água. A fase aquosa foi extraída com éter e os orgânicos combinados lavados com água (4 vezes) e salmoura. Após secagem e eva- poração o resíduo foi submetido à cromatografia de coluna eluindo com 5 a 10% de EtOAc em hexanos. Rendimento = 0,2 g, 0,435 mmol, 48,5% de rendimento. LCMS: m/z 460 [M+Hf.
O éster ciclopentílico do ácido (S)-2-[3-(4-bromo-fenóxi)- propilamino]-4-metil-pentanóico foi preparado conforme mostrado a seguir.
A uma solução de Intermediário 3a (0,365 g, 1,833 mmol) e 3-(4- bromo-fenóxi)-propionaldeído (0,6 g, 1,833 mmol) em DCM (15 mL) foi adi- cionado NaBH(OAc)3 (1,166 g, 5,50 mmols). Quando da agitação a tempera- tura ambiente por 2 horas a reação foi julgada como estando completa por LC-MS. 1M HCI (10 mL) foi adicionado à mistura de reação e agitado rapi- damente por 10 minutos. A mistura foi derramada sobre NaHCO3 saturado e extraída com DCM. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre sulfato de magnésio, filtradas e evaporadas. O resíduo foi submetido à cro- matografia de coluna eluindo com 10% EtOAc em hexanos. Rendimento = 0,375 g, 0,818 mmol, 44,6% de rendimento. LCMS: m/z 412 e 414 [M+H]\ O 3-(4-bromo-fenóxi)-propionaldeído foi preparado conforme mostrado a seguir.
2-[3-(4-Bromo-fenóxi)-propil]-[1,3]dioxolano (1,5 g, 5,49 mmols) foi dissolvido em acetona (15 mL) e tratado com água (10 mL). HCI (14,98 ml_, 165 mmols) foi adicionado à solução. Quando da agitação a temperatura ambiente por 1 hora a reação foi julgada como estando completa por TLC (20% de EtOAc em hexanos). A mistura foi derramada em água e extraída com éter. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com 2M NaOH, água e salmoura, secas sobre sulfato de magnésio, filtradas e evaporadas in vácuo. Rendimento = 0,6 g, 1,833 mmol, 33,4% de rendimento.
O 2-[3-(4-Bromo-fenóxi)-propil]-[1,3]dioxolano foi preparado con- forme mostrado a seguir.
A uma mistura de 4-bromofenol (10 g, 57,8 mmols), TBAI (0,813 g, 5,78 mmols) e K2CO3 (7,99 g, 57,8 mmols) em DMF (50 mL) foi adiciona- do 2-(3-bromo-propil)-[1,3]dioxolano (10,19 mL, 87 mmols). A mistura foi co- locada em um banho de óleo preaquecido a 50°C por 3 horas. A mistura foi resfriada para temperatura ambiente, derramada sobre 2M NaOH e extraída com éter. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com mais 2M NaOH, 1M HCI (2 vezes), água (2 vezes) e salmoura. Após secagem por sulfato de magnésio, filtração e evaporação in vácuo, o resíduo foi absorvido sobre sílica e submetido à cromatografia de coluna eluindo com 6% de EtO- Ac em hexanos para fornecer um sólido branco. Rendimento = 12,5 g, 43,5 mmols, 75% de rendimento.
Intermediário 7b - /V-(3-r3-cloro-4-(4,4.5,5-tetrametil-1.3,2-dioxaborolan-2- il)fenóxi1propil)-L-leucinato de ciclopentila
Sintetizado através de métodos análogos ao Intermediário 7a, empregando 4-bromo-3-clorofenol no esquema 5. LCMS: m/z 494 [M+H]+.
Intermediário 8a - /V-{5-f4-(4.4,5,5-tetrametil-1.3,2-dioxaborolan-2- iDfenóxibentilVL-leucinato de ciclopentila
A via sintética para o Intermediário 8a é mostrada no esquema 6.
A uma mistura de éster ciclopentílico do ácido (S)-2-[5-(4-bromo- fenóxi)-pentilamino]-4-metil-pentanóico (0,63 g, 1,430 mmol), bis[pinacolato]diboro (0,908 g, 3,58 mmols), PdCI2(dppf) (0,105 g, 0,143 mmol) e KOAc (0,351 g, 3,58 mmols) foi adicionado DMSO (5 ml_). A mistura foi purgada com nitrogênio e colocada em um banho de óleo preaquecido a 80°C. Após aquecimento por 4 horas a reação foi julgada como estando completa por LC-MS. A mistura foi derramada sobre água e extraída com éter. Os orgânicos combinados foram lavados com água (3 vezes) e salmou- ra, secos (MgSO4), filtrados e evaporados sob pressão reduzida, e submeti- dos à cromatografia de coluna eluindo com 10% de EtOAc em hexanos. Rendimento = 0,61 g, 1,214 mmol, 85% de rendimento. Pureza LCMS a 97%: m/z 488 [M+H]+.
O éster ciclopentílico do ácido (S)-2-[5-(4-bromo-fenóxi)- pentilamino]-4-metil-pentanóico foi preparado conforme mostrado a seguir.
DIPEA (2,2 mL, 13,01 mmols) foi adicionado a uma mistura do Intermediário 3a (2,3 g, 9,76 mmols) e TBAI (0,458 g, 3,25 mmols) em DMF (5 mL). Uma solução de 1-Bromo-4-(5-cloro-pentilóxi)-benzeno (0,903 g, 3,25 mmols) em DMF (2 mL) foi adicionada à mistura e colocada em um ba- nho de óleo preaquecido a 95°C. A mistura foi agitada por toda noite. LC-MS indicou aproximadamente 60% de conversão. A mistura foi derramada sobre água e extraída com éter e as camadas orgânicas combinadas lavadas com NaHCOs saturado, água (2 vezes) e salmoura. Após secagem (MgSO4) e evaporação sob pressão reduzida, o resíduo foi submetido à cromatografia de coluna eluindo com 10 a 15% de EtOAc em hexanos. Rendimento = 0,64 g, 1,381 mmol, 42,5% de rendimento.
O 1-bromo-4-(5-cloro-pentilóxi)-benzeno foi preparado através de um procedimento similar à síntese do 2-[3-(4-bromo-fenóxi)-propil]- [1,3]dioxolano já descrita acima. Pureza LCMS a 95%: m/z 440 e 442 [M+H]+.
Intermediário 8b - /V-(543-cloro-4-(4.4.5.5-tetrametil-1.3.2-dioxaborolan-2- iWenóxilpentill-L-leucinato de ciclopentila
10
Sintetizado através de métodos análogos ao Intermediário 8a, empregando 1-bromo-2-cloro-4-(5-cloro-pentilóxi)-benzeno no esquema 6. Pureza LCMS a 98%: m/z 522 [M+H]+.
Intermediário 9a - A/-(terc-butoxicarbonil)-/V-((2a-3-r4-r4.4.5.5-tetrametil- 1.3.2-dioxaborolan-2-il)fenillprop-2-en-1-il)-L-leucinato de ciclopentila
A via sintética para o Intermediário 9a é mostrada no esquema 7.
Uma mistura de A/-[(2E)-3-(4-bromofenil)prop-2-en-1-il]-A/-(terc- butoxicarbonil)-L-leucinato de ciclopentila (204 mg, 0,413 mmol), bis[pinacolato]diboro (157 mg, 0,619 mmol), acetato de potássio (60,7 mg, 0,619 mmol) e PdCI2(dppf) (16,85 mg, 0,021 mmol) foi suspensa em DMSO (1,6 mL) e purgada com hidrogênio. A mistura de reação foi aquecida a uma temperatura de banho de óleo de 50°C e deixada agitar por toda noite. A mistura de reação foi dividida entre éter e água. A camada aquosa foi extraí- da com uma porção adicionai de éter. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas sobre MgSO4 e concentrada in vácuo para fornecer um resíduo marrom. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna, eluindo com 5% acetato de etila em iso-hexano. O produto ne- cessário foi isolado como um óleo incolor límpido (102 mg, 0,188 mmol, 46%). Pureza LCMS a 100%: m/z 542,1 [M+H]+.
O /\/-[(2E)-3-(4-bromofenil)prop-2-en-1-il]-A/-(terc-butoxicarbonil)- L-Ieucinato de ciclopentila foi preparado conforme mostrado a seguir.
Uma mistura de /V-alil-A/-(terc-butoxicarbonil)-L-leucinato de ci- clopentila (1 g, 2,95 mmols), 4-bromo-iodobenzeno (0,917 g, 3,24 mmols), acetato de paládio (II) (0,066 g, 0,295 mmol), TBAI (1,197 g, 3,24 mmols) e bicarbonato de sódio (0,742 g, 8,84 mmols) foi suspensa em acetonitrila se- ca (10 mL). A mistura foi purgada com nitrogênio e colocada em um banho de óleo preaquecido a 70°C. A reação permaneceu em agitação por 2 horas. LCMS confirmou que a reação estava incompleta, assim, mais 3 mg de ace- tato de paládio (II) foram adicionados a uma mistura de reação. Após mais 3 horas, a mistura de reação foi deixada repousar e resfriar para temperatura ambiente. A mistura de reação bruta foi eluída com acetonitrila e adsorvida sobre sílica antes da cromatografia de coluna, eluindo com 5% de acetato de etila em iso-hexano. O produto necessário foi isolado como um óleo incolor (220 mg, 0,445 mmol, 15% de rendimento). Pureza LCMS a 100%: m/z 494,0, 496,0 [M+H]+.
O A/-alil-A/-(terc-butoxicarbonil)-L-leucinato de ciclopentila foi
preparado conforme mostrado a seguir.
/V-alil-L-leucinato de ciclopentila (2 g, 8,36 mmols) e anidrido Boc (1,824 g, 8,36 mmols) foram adicionados em conjunto em um frasco que foi então capeado com um septo. A mistura de reação foi deixada agitar por toda noite. A mistura de reação foi dividida entre éter e água. A fase orgâni- ca foi lavada seqüencialmente com 1M HCI, NaHCO3 saturado e salmoura, seca sobre MgSO4 e concentrada in vácuo para fornecer um óleo incolor (2,66 g, 7,84 mmols, 94%). Pureza LCMS a 100%: m/z 340,2 [M+H]+.
O N-aIil-L-Ieucinato de ciclopentila foi preparado conforme mos- trado a seguir.
Uma suspensão de hidrato hidróxido de lítio (2,72 g, 64,7 mmols) e um pó passado em crivo 4Â (15 g) foram agitados em DMF (150 mL) por 20 minutos. O Intermediário 3a (base livre) (6 g, 30,1 mmols) foi adi- cionado e a agitação continuou por 40 minutos. Brometo de alila (3,13 mL, 36,1 mmols) foi então adicionado e a mistura agitada por toda noite a tempe- ratura ambiente. LCMS mostrou a formação do produto com algum produto dialquilado. A mistura foi filtrada, derramada sobre água e extraída (3 vezes) com éter. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água (3 vezes) e salmoura, secas sobre sulfato de magnésio, filtradas e evaporadas in vácuo. O resíduo foi submetido à cromatografia de coluna eluindo com 5% de EtOAc em hexanos. O produto foi isolado como um óleo incolor. Rendi- mento = 4,34 g, 18,13 mmols, 60,2% de rendimento. LCMS: m/z 240,1 [M+H]+.
Intermediário 9b - A/-í(2E)-3-r4-(4.4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)fenillprop-2-en-1-il)-L-leucinato de terc-butila
A via sintética para o Intermediário 9b é mostrada no esquema 8.
Bispinacolatodiboro (0,897 g, 3,53 mmols), PdCI2(dppf) (0,120 g, 0,165 mmol) e KOAc (0,347 g, 3,53 mmols) foram adicionados a uma solu- ção de A/-[(2E)-3-(4-bromofenil)prop-2-en-1-il]-L-leucinato de terc-butila (0,9 g, 2,354 mmols) em DMSO (5 mL) e o frasco evacuado e reenchido com hidrogênio. A reação foi então aquecida a 80°C por 3 horas. A reação foi derramada sobre água (50 mL) e o produto extraído com EtOAc (2 χ 50 mL). Os orgânicos combinados foram então lavados com água (2 χ 25 mL) e sal- moura (25 mL), secos (MgSO4) e concentrados in vácuo para fornecer um óleo negro. O material bruto foi purificado por cromatografia de coluna e o produto eluiu com 10% de EtOAc em i-hexano para fornecer um óleo amare- lo. (0,62 g, 1,444 mmol, 61,3% de rendimento). LCMS: m/z 430 [M+H]+.
O A/-[(2E)-3-(4-bromofenil)prop-2-en-1-il]-L-leucinato de tere-
butila foi preparado conforme mostrado a seguir.
A uma mistura de (E)-3-(4-Bromo-fenil)-propenal (0,75 g, 3,20 mmols) e L-Ieucinato de terc-butila (1,073 g, 4,80 mmols) foi adicionado THF (20 mL) seguido por cerca de 5 g de um pó de crivo 4Á. O recipiente foi flu- xado com hidrogênio e colocado em um banho de óleo preaquecido a 60°C por 70 minutos após o que a reação estava completa. A mistura foi resfriada em um banho de gelo e tratada com Na(OAc)3BH (3,39 g, 15,99 mmols) em uma porção simples. Após agitação por 30 minutos, água (1 mL) e MeOH (3 mL) foi adicionada para ajudar na solubilidade. Após agitação por mais 40 minutos a reação foi julgada como estando completa por TLC (20% EtOAc em hexanos). 1M HCI (50 mL) foi adicionado à mistura e a mistura foi então derramada sobre NaHCO3 saturado e extraída com éter. Os extratos orgâni- cos combinados foram secos sobre sulfato de magnésio, filtrados e evapo- rados in vácuo antes da purificação por cromatografia de coluna eluindo com 10 a 20% de EtOAc em hexanos. Rendimento = 1 g, 2,354 mmols, 73,6% de rendimento. LCMS: m/z 382 [M+H]+.
O (E)-3-(4-bromo-fenil)-propenal foi preparado conforme mostra- do a seguir.
A uma solução de (E)-3-(4-bromo-fenil)-prop-2-en-1-ol (1 g, 4,69 mmols) em DME (20 mL) foi adicionado dióxido de manganês (8,16 g, 94 mmols). Após agitação a temperatura ambiente por 1 hora a reação foi jul- gada como estando completa por TLC (20% de EtOAc em hexanos). A mis- tura foi filtrada através de uma almofada de celite, lavando com DME (2x15 mL). Após evaporação in vácuo um sólido incolor foi obtido. Rendimento =
0,95 g, 4,50 mmol, 96% de rendimento.
O (E)-3-(4-bromo-fenil)-prop-2-en-1-ol foi preparado conforme
mostrado a seguir. A uma solução de éster etílico do ácido (E)-3-(4-bromo-fenil)- acrílico (13,5 g, 52,9 mmols) sob nitrogênio a -78°C foi adicionado DIBAL, gota a gota, em tolueno (159 mL, 159 mmols) por 1 hora. Após a adição, a solução foi agitada por mais 1 hora na mesma temperatura e então deixada aquecer para -50°C por 5 minutos. 1M HCI (200 mL) foi adicionado gota a gota enquanto a mistura de reação foi aquecida para temperatura ambiente. Após uma rápida agitação por 30 minutos a temperatura ambiente, EtOAc (500 mL) foi adicionado e a camada orgânica coletada. A camada aquosa foi extraída com EtOAc adicional. As fases orgânicas combinadas foram lava- das com mais 1M HCI e salmoura, secas sobre sulfato de magnésio, filtradas e evaporadas in vácuo. O resíduo foi triturado a partir de hexanos (100 mL) para fornecer um sólido branco que foi coletado por filtração e lavado com hexanos (200 mL). Rendimento = 9,8 g, 46,0 mmols, 87% de rendimento. Intermediário 9c - (2SHenil(((2a-3-f4-(4.4.5.5-tetrametil-1.3.2-dioxaborolan- 2-il)fenillprop-2-en-1-il)amino)etanoato de ciclopentila
A via sintética para o Intermediário 9c é similar a do Intermediá- rio 9b empregando Intermediário 3c no esquema 8. LCMS: m/z 462 [M+H]+.
Intermediário 9d - (2SVciclo-hexil(((2E)-3-[4-(4,4.5.5-tetrametil-1,3.2- dioxaborolan-2-il)feninprop-2-en-1 -il)amino)etanoato de ciclopentila
A via sintética para o Intermediário 9d é similar a do Intermediá- rio 9b empregando Intermediário 3e no esquema 8. LCMS: m/z 468 [M+Hf.
Intermediário 9e - Q-terc-butil-/V-((2a-3-f4-(4.4,5.5-tetrametil-1.3.2- dioxaborolan-2-il)fenil1prop-2-en-1 -ilI-L-serinato de ciclopentila
A via sintética para o Intermediário 9e é similar a do Intermediá- rio 9b empregando Intermediário 3f no esquema 8. LCMS: m/z 472 [M+H]+.
Intermediário 9f - /V-((2a-3-í4-(4.4.5.5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2-
il)fenillprop-2-en-1-il)-D-leucinato de terc-butila
9b empregando ciclopentil-D-leucinato no esquema 8. LCMS: m/z 442 [M+H]+. Intermediário 9q - (2S)-ciclo-hexiia(2£)-3-r4-(4,4.5,5-tetrametil-1.3.2- dioxaborolan-2-il)feninprop-2-en-1-il)amino)etanoato de terc-butila
A via sintética para o Intermediário 9g é similar a do Intermediá- rio 9b empregando Intermediário 3h no esquema 8. LCMS: m/z 468 [M+H]+.
Intermediário 9h - 0-terc-butil-A/-((2a-3-r4-(4.4.5.5-tetrametil-1.3,2- dioxaborolan-2-il)fenil1prop-2-en-1 -ilVL-treoninato de ciclopentila
A via sintética para o Intermediário 9g é similar a do Intermediá- rio 9b empregando Intermediário 3g no esquema 8. LCMS: m/z 486 [M+H]+.
Intermediário 10 - A/-((2a-3-r3-(4.4.5.5-tetrametil-1.3.2-dioxaborolan-2- infenil1prop-2-en-1-il)-L-leucinato de ciclopentila
A via sintética para o Intermediário 10 é similar a do Intermediá- rio 9a empregando 3-bromo-iodobenzeno no esquema 7. LCMS: m/z 442 [M+H]+.
Intermediário 11a - A/-(2-í2-flúor-5-(4.4.5.5-tetrametil-1.3.2-dioxaborolan-2- infenil1etil)-L-leucinato de ciclopentila A via sintética para o Intermediário 11a é mostrada no esquema 9.
A/-{2-[2-flúor-5-bromofenil]etil}-L-leucinato de ciclopentila (450 mg, 1,124 mmol), bis-pinacolatodiboro (428 mg, 1,686 mmol), PdCI2(dppf) (92 mg, 0,112 mmol) e acetato de potássio (276 mg, 2,81 mmols) foram combinados em um recipiente seco e purgados com N2. DMSO (3 ml_) foi adicionado e a mistura aquecida a 80°C por 18 horas para completar a rea- ção. A mistura foi dividida entre Et2O (50 mL) e água (100 mL) e as fases separadas. A fase aquosa foi extraída com Et2O (2 χ 25 mL) e as fases or- gânicas combinadas lavadas com salmoura (3 χ 100 mL), secas (MgSO4) e evaporadas in vácuo para fornecer o produto bruto como um óleo amarelo. Purificação por cromatografia de coluna (5-10% EtOAc/iso-hexano) forneceu o produto (286 mg, 0,511 mmol, 45,5% de rendimento) como um óleo ama- relo pálido, m/z 448 [M+H]+.
/V-{2-[2-flúor-5-bromofenil]etil}-L-leucinato de ciclopentila foi preparado con- forme mostrado a seguir.
(5-bromo-2-fluorfenil)acetaldeído (0,336 g, 1,548 mmol) foi dis- solvido em DCM (12 mL) e tratado com Intermediário 3a (0,719 g, 1,935 mmol). A solução resultante foi agitada a temperatura ambiente por 20 minu- tos, e então tratada com triacetóxi boroidreto de sódio (1,641 g, 7,74 mmols) em porções. A mistura foi agitada a temperatura ambiente por 2 horas para completar a reação. A mistura foi saturada com 1 M HCI, então neutralizada com solução de NaHCO3. A mistura foi diluída com DCM (75 mL) e as fases separadas. A fase aquosa foi extraída com DCM (25 mL) e as fases orgâni- cas combinadas foram lavadas com solução de NaHCO3 (100 mL) e salmou- ra (100 mL), secas (MgSO4) e evaporadas in vácuo para fornecer o produto bruto como um óleo amarelo. Purificação por cromatografia de coluna (5% EtOAc/iso-hexano) forneceu o produto (450 mg, 0,877 mmol, 56,6% de ren- dimento) como um óleo amarelo pálido, m/z 400 [M+H]+.
(5-bromo-2-fluorfenil)acetaldeído foi preparado conforme mos- trado a seguir.
Uma solução de 4-bromo-2-etenil-1-fluorbenzeno (1,3 g, 3,23
mmols) em DCM (10 mL) foi adicionada gota a gota por 30 minutos a uma solução de tetra acetato de chumbo (1,434 g, 3,23 mmols) em TFA (5 mL) a 0°C. A mistura foi então deixada aquecer para temperatura ambiente e agi- tada por uma hora e meia. Análise de TLC sugeriu que a reação estava in- completa, de modo que a mistura foi agitada a temperatura ambiente por 18 horas. A mistura foi derramada sobre água (50 mL) e agitada por 10 minu- tos, então extraída com DCM (50 mL). A fase orgânica foi lavada com solu- ção de NaHCOs (100 mL), salmoura (100 mL), seca (MgSO4) e evaporada in vácuo para fornecer o produto bruto como um óleo amarelo. Purificação por cromatografia de coluna (0-5% EtOAc/iso-hexano) forneceu o produto (336 mg, 1,548 mmol, 47,9% de rendimento) como um óleo amarelo pálido.
4-bromo-2-etenil-1-fluorbenzeno foi preparado conforme mostra- do a seguir.
Brometo de metil trifenilfosfônio (6,60 g, 18,47 mmols) em THF (40 mL) foi tratado gota a gota com 1M LiHMDS (18,47 mL, 18,47 mmols) a - 10°C e a solução resultante agitada nesta temperatura por 30 minutos, então resfriada a -78°C. Uma solução de 5-bromo-2-fluorbenzaldeído (2,5 g, 12,31 mmols) em THF (10 mL) foi então adicionada gota a gota. A mistura foi agi- tada a -78°C por 10 minutos, então deixada aquecer para temperatura ambi- ente e agitada por mais 3 horas. A mistura foi derramada sobre água (200 mL) e extraída em iso-hexano (2 χ 200 mL). As fases orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (200 mL), secas (MgSO4) e evaporadas in vá- cuo para fornecer o produto bruto. Purificação por cromatografia de coluna forneceu o produto (1,34 g, 3,33 mmols, 27,1% de rendimento) como um óleo incolor límpido.
Intermediário 11b - A/-{2-[2-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioxaborolan-2- il)feninetil)-L-leucinato de ciclopentila A síntese do Intermediário 11b é similar a do Intermediário 11a empregando 5-bromo-2-metilbenzaldeído no esquema 9. LCMS: m/z 444 [M+H]+.
Intermediário 11c - /V-(2-r2-cloro-5-(4,4,5l5-tetrametil-1 ,S^-dioxaborolan^- il)fenilletilVL-leucinato de ciclopentila
A síntese do Intermediário 11c é similar a do Intermediário 11a empregando 5-bromo-2-clorobenzaldeído no esquema 9. LCMS: m/z 464 [M+H]+. Exemplos
Os exemplos que se seguem ilustram a preparação dos compos- tos específicos da presente invenção e as propriedades inibidoras dos mes- mos:
Exemplo 1 - (2S)-((4-[4-carbamoil-5-(carbamoilamino)-2-tienil1benzil)ami- no)(fenil)acetato de ciclopentila O.
NH
0 _ /ri
O' ^NH
^NH2
Pureza em LC/EM 95%, m/z 493 [M+H]+, 1H RMN (400 MHz1 DMSOd6), δ: 11,0 (1H, s), 7,8 (1H, s), 7,72 (2H, br s), 7,6 (2H, d, J=8,8Hz), 7,46 (2H, d, J=8,3Hz), 7,5-7,3 (5H, m), 7,0 (2H, s), 5,1 (1H, m), 4,2 (1H, s), 3,6 (2Η, s), 3,0 (1 Η, s), 1,9-1,4 (8Η, m).
A uma solução de amida do ácido 5-(4-formil-fenil)-2-ureído- tiofeno-3-carboxílico (Intermediário 2) (0,15 g, 0,518 mmol) e Intermediário 3c (0,227 g, 1,037 mmol) em tetra-hidrofurano (4,5 ml_) sob nitrogênio foi adicionado DIPEA (0,181 mL, 1,037 mmol) e a reação deixada agitar por 5 minutos antes da adição de ácido acético (1,5 mL). Após agitação por mais minutos, MP-CNBH3 (0,665 g, 1,556 mmol) foi adicionado e a reação dei- xada agitar a temperatura ambiente por uma hora e meia, então por toda noite. O MP-CNBH3 foi lavado com diclorometano e as lavagens combinadas e o filtrado foram concentrados in vácuo. O resíduo foi absorvido em um vo- lume mínimo de metanol e passado por coluna de 5 g SCX1 eluindo o produ- to com amônia a 1% em metanol. O produto bruto foi purificado por croma- tografia de coluna eluindo com 3:2 acetato de etila:iso-hexano (75 mg, 49%).
Os exemplos que se seguem foram preparados de modo similar ao Exemplo 1.
Exemplo 2 - A/-(4-[4-carbamoil-5-(carbamoilamino)-2-tieninbenzil)-L-leucinato de ciclopentila
A partir do Intermediário 2 e Intermediário 3a. Pureza em LC/EM 99%, m/z 473 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz,
DMSO-Cf6), δ: 10,9 (1H, s), 7,7 (1H, s), 7,62 (2H, brs), 7,46 (2H, d, J=8,3Hz), 7,25 (2H, d, J=8,3Hz), 7,0 (2H, br s), 5,1 (1H, m), 3,72 (1H, d, J=13,7Hz), 3,53 (1H, d, J=12,9Hz), 3,10 (1H, t, J=7,1Hz), 1,80-1,71 (3H, m), 1,68-1,33 (8H, m), 0,81 (3H, d, J=8,7Hz), 0,78 (3H, d, J=8,8Hz). Exemplo 3 - A/-{4-[4-carbamoil-5-(carbamoilamino)-2-tieninbenzil)-L-
fenilalaninato de ciclopentila O
A partir do Intermediário 2 e Intermediário 3d.
Pureza em LC/EM 98%, m/z 507 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz,
DMSOd6), δ: 10,9 (1H, s), 7,7 (1H, s), 7,62 (2H, br s), 7,46 (2H, d, J=8,3Hz), 7,25 (2H, d, J=8,3Hz), 7,21 (5H, m), 7,0 (2H, br s), 5,0 (1H, m), 3,72 (1H, d, J=13,7Hz), 3,58 (1H, d, J=12,9Hz), 3,35 (1H, m), 2,90 (1H, dd, J=7,3Hz), 2,79 (1H, dd, J=8,1 Hz), 1,80-1,71 (2H, m), 1,68-1,33 (6H, m). Exemplo 4 - (2RH(4-f4-carbamoil-5-(carbamoilamino)-2-tieninbenzil)ami- no)(fenil)acetato de ciclopentila
A partir do Intermediário 2 e Intermediário 3c (R) isômero. Pureza em LC/EM 95%, m/z 493 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz1
DMSO-cy6), δ: 11,0 (1H, s), 7,8 (2H, d, J= 8,4Hz), 7,62 (2H, br s), 7,4 (2H, d, J=8,7Hz), 7,5-7,3 (7H, m), 7,0 (2H, br s), 5,15 (1H, m), 4,43 (1H, s), 3,7 (2H, s), 3,1 (1H1 s), 1,9-1,4 (8H, m).
Exemplo 5 - (2S)-((4-f4-carbamoil-5-(carbamoilamino)-2-tieninbenzil)ami- no)(2-naftil)acetato de ciclopentila
O O.
O
NH A partir do Intermediário 2 e Intermediário 3b. Pureza em LC/EM 93%, m/z 543 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz1 DMSO-Cf6), δ: 11,0 (1H, s), 7,8 (4H, m), 7,69 (1H, s), 7,65 (2H, br s), 7,55- 7,43 (5H, m), 7,3 (2H, d, J=13,4Hz), 7,26 (1H, br s), 6,9 (2H, br s), 5,15 (1H, m), 4,43 (1H, s), 3,7 (2H, s), 3,1 (1H, s), 1,9-1,4 (8H, m). Exemplo 6 - A/-(4-r4-carbamoil-5-(carbamoilamino)-2-tienil1-3-clorobenzil)-L- Ieucinato de ciclopentila
A um frasco contendo Intermediário 5a (62 mg, 0,138 mmol), Intermediário 1 (33,1 mg, 0,125 mmol) e tetracis(trifenilfosfina)paládio (14,48 mg, 0,013 mmol) foi adicionado DME sob N2. A mistura de reação foi agitada e 1 ml_ de solução aquosa de bicarbonato de sódio foi adicionada. O frasco de reação foi colocado em um banho de óleo preaquecido a 80 0C. Após 2 horas, análise mostrou conversão completa no produto desejado. A mistura de reação resfriou para temperatura ambiente e foi derramada sobre água, extraída com EtOAc e os extratos orgânicos combinados lavados com á- gua/salmoura antes da secagem por sulfato de magnésio. O produto foi puri- ficado por cromatografia de coluna eluindo com 3-5% MeOH em DCM para fornecer 37,5 mg, 0,072 mmol, 57,8% de rendimento. Pureza LCMS a 98%: m/z 507/509 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz,
DMSO-d6), δ: 10,9 (1 Η, s), 7,7 (1 Η, s), 7,62 (2H, br s), 7,44 (2H, d, J=8,7Hz), 7,29 (1H, s), 7,0(2H, br s), 5,1 (1H, m), 3,72 (1H, d, J=13,7Hz), 3,53 (2H, d, J=12,9Hz), 3,10 (1H, t, J=7,1Hz), 1,80-1,71 (2H, m), 1,68-1,33 (6H, m), 0,81 (3H, d, J=8,7Hz), 0,78 (2H, d, J=8,8Hz). Exemplo 7 - A/-{4-r4-carbamoil-5-(carbamoilamino)-2-tienill-2-metilbenzil)-L- Ieucinato de ciclopentila 10
15
20
Sintetizado através de um procedimento similar ao Exemplo 6 empregando o Intermediário 5b.
Pureza LCMS a 99 %, m/z 487 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz1 DM- SO), δ: 11,0 (1H, s), 7,7 (1H, s), 7,7 (1H, br s), 7,3 (3H, m), 7,2 (1H, d, J = 7,7Hz), 7,0 (2H, br s), 5,1 (1H, m), 3,7 (1H, d, J = 13,1Hz), 3,5 (1H, d, J = 13,1 Hz), 3,1 (1H, br s), 3,0 (1H, br s), 2,3 (3H, s), 1,8 (2H, m), 1,6 (7H, m), 1,4 (2H, m), 0,9 (3H, d J = 6,6Hz), 0,8 (3H, d J = 6,6Hz). Exemplo 8 - A/-(3-r4-carbamoil-5-(carbamoilamino)-2-tienil1benzil)-L-leucinato
Um frasco contendo tetracis(trifenilfosfina)paládio (99 mg, 0,085 mmol), o Intermediário 1 (22 mg, 0,854 mmol) e o Intermediário 4a (313 mg, 0,939 mmol) foi purgado com N2 e DME (seco, 12 mL) foi adicionado. A mis- tura foi adicionada à solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (2,5 mL) e a mistura de reação foi aquecida a 90°C em um banho de óleo por 4 horas. A mistura foi resfriada para temperatura ambiente e derramada em água (50 mL) e extraída com EtOAc (100 mL). Os extratos orgânicos combi- nados foram lavados com salmoura, secos sobre sulfato de magnésio e re- duzidos à secura sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna eluindo com 0-3% MeOH em DCM. O produto desejado (291 mg, 0,573 mmol, 67,1% de rendimento) foi isolado como um sólido amarelo páli- do.
Pureza LCMS a 100%: m/z 473 [M+H]+, 472 [M-H]-. 1H RMN (400 MHz1 DMSO-Cf6), δ: 10,9 (1Η, s), 7,7 (1Η, s), 7,62 (2Η, br s), 7,46 (1H, s), 7,25 (3H, m), 7,0(2H, br s), 5,1 (1H, m), 3,72 (1H, d, J=13,7Hz), 3,53 (2H, d, J=12,9Hz), 3,10 (1H, t, J=7,1Hz), 1,80-1,71 (2H, m), 1,68-1,33 (6H, m), 0,81 (3H, d, J=8,7Hz), 0,78 (2H, d, J=8,8Hz). Exemplos 9-15
Os exemplos que se seguem foram sintetizados de modo similar ao Exemplo 8 empregando vários ésteres de aminoácído conforme detalha- do para os Intermediários 4b-4f.
Número do Exem- plo Intermedi- ário usado Rn Rm Denominação Pureza em LCMS (2S)-({3-[4- carbamoil-5- 9 4b Ó Ciclopentila (carbamoilamino)- 2- tie- nil]benzil}amino)(fe nil)acetato de ci- clopentila 91% de pure- za: m/z 493 [M+H]+ (2S)-({3-[4- carbamoil-5- 4c δ Ciclopentila (carbamoilamino)- 2- tie- nil]benzil}amino)(ci clo-hexil)acetato de ciclopentila 97% de pure- za: m/z 499 [M+H]+ 11 4d Ciclopentila 0-terc-butil-A/-{3- [4-earbamoil-5- (earbamoilami- no)tiofen-2- il]benzil}-L-serinato de eielopentila 98% de pure- za: m/z 503 [M+Hf 12* Exemplo 11 Cielopentila /V-{3-[4-carbamoil- 5- (earbamoilami- no)tiofen-2- il]benzil}-L-serinato de eielopentila 98% de pure- za: m/z 447 [M+H]+ 13 4e HO^ Ciclopentila A/-{3-[4-carbamoil- 5- (earbamoilami- no)tiofen-2- il]benzil}-L- treoninato de ei- elopentila 97% de pure- za: m/z 461 [M+H]+ 14 íerf-butil-L- Ieucinato "V í-butila A/-{3-[4-earbamoil- 5- (earbamoilamino)- 2-tienil]benzil}-L- Ieucinato de terc- butila 96% de pure- za: m/z 461 [M+Hf 41 * Cielopentila /\/-{3-[4-carbamoil- 5- (earbamoilami- no)tiofen-2- il]benzil}-L-valinato de eielopentila 96% de pure- za: m/z 459,5 [M+H]+ * Exemplo 12 foi preparado do Exemplo 11 empregando o procedimento ex- perimental mostrado a seguir.
A uma solução do Exemplo 11 (40 mg, 0,080 mmol) em DCM (2 mL) foi adicionado ácido trifluoroacético (0,4 mL). A mistura de reação per- maneceu em agitação por toda noite a temperatura ambiente. O solvente foi removido in vácuo e o resíduo foi adicionado metanol e 2 gotas de ácido a- cético. A solução foi carregada sobre uma coluna de SCX e o produto eluído com 1% amônia em metanol. A porção de amônia foi concentrada in vácuo para fornecer um óleo ao qual foram adicionados DCM e iso-hexano. Um sólido foi obtido e coletado porfiltração (22 mg, 55% de rendimento).
1H RMN (400 MHz1 DMSO-d6), δ: 11,0 (1H, s), 7,7 (1H, s), 7,7 (1H, br s), 7,4 (1H, s), 7,4 (1H, d), 7,3 (2H, m), 7,1 (1H, d), 6,9 (2H, br s), 5,1 (1H, m), 4,8 (1H, br s), 3,8 (1H, d), 3,6 (3H, m), 3,2 (1H, br s), 1,8 (2H, m), 1,6-1,4 (6H, m).
Exemplo 16 - A/-(2-{4-r4-carbamoil-5-(carbamoilamino)-2-tieninfenil)etin-L- Ieucinato de ciclopentila
Um frasco carregado com Intermediário 6a (153 mg, 0,356 mmol), Intermediário 1 (86 mg, 0,324 mmol) e Pd(PPh3)4 (37,4 mg, 0,032 mmol) foi purgado com nitrogênio. DME (6 mL, seco) foi adicionado em con- junto com NaHCO3 (1,0 mL, solução aquosa saturada) e a reação aquecida a 80°C por 3 horas. A mistura de reação foi resfriada para temperatura am- biente e derramada em água (50 mL). Extração do produto com EtOAc (2 χ 40 mL) foi seguida de lavagem das camadas orgânicas com água (50 mL) e salmoura (50 mL) e secagem por sulfato de magnésio. A remoção do solven- te sob pressão reduzida forneceu um sólido oleoso marrom que foi contami- nado com óxido de trifenilfosfina. Purificação por captura e distribuição em SCX (eluindo com MeOH) forneceu 53 mg de um óleo laranja que possuía apenas 70% de pureza. O produto foi purificado por cromatografia de coluna eluindo com EtOAc 50% em hexanos para fornecer 42 mg (27%) de um pó laranja pálido.
Pureza LCMS a 96%: m/z 487 [M+H]+; 485 [M-H]". 1H RMN (400
MHz, DMSO-Cf6), δ: 10,9 (1H, s), 7,8 (2H, s), 7,44 (2H, d, J=8,7Hz), 7,29 (1H, s), 7,23 (2H, d, J=8,7Hz), 6,9 (2H, br s), 5,1 (1H, m), 3,10 (1H, t, J=7,1Hz), 2,6-2,79 (4H, m), 1,80-1,71 (3H, m), 1,68 -1,33 (7H, m), 1,32 (1H, m), 0,81 (3H, d, J=8,7Hz), 0,78 (2H, d, J=8,8Hz).
Exemplo 17 - A/-(2-(4-r4-carbamoil-5-(carbamoilamino)-2-tienil1-3- clorofenil)etil)-L-leucinato de ciclopentila
Sintetizado através de um procedimento similar ao Exemplo 16 empregando o Intermediário 6b.
Pureza LCMS a 98%: m/z 522 [M+Hf. 1H RMN (400 MHz, DM- SO-de), δ: 10,9 (1H, s), 7,8 (2H, s), 7,42 (1H, s), 7,29 (1H, s), 7,23 (2H, d, J=8,7Hz), 6,9 (2H, br s), 5,1 (1H, m), 3,10 (1H, t, J=7,1 Hz), 2,6-2,79 (4H, m), 1,80-1,71 (3H, m), 1,68-1,33 (7H, m), 1,32 (1H, m), 0,81 (3H, d, J=8,7Hz), 0,78 (2H, d, J=8,8Hz).
Exemplo 18 - A/-(2-(3-r4-carbamoil-5-(carbamoilamino)-2-tienil1fenilletil)-L- Ieucinato de ciclopentila
U INlH2
Sintetizado através de um procedimento similar ao Exemplo 16 empregando o Intermediário 6c.
O Pureza LCMS a 99 %, m/z 487 [M+H]+. 1H RMN (400 MHz1 DM- SO-d6), δ: 11,0 (1H, s), 7,7 (1H, s), 7,7 (1H, br s), 7,3 (4H, m), 7,1 (1H,d, J = 7,4Hz), 7,0 (2H, br s), 5,1 (1H, m), 3,2 (1H, br s), 3,0 (1H, br s), 2,7 (4H, m), 1,8 (2H, m), 1,6 (7H, m), 1,3 (2H, m), 0,9 (3H, d J = 6,6Hz), 0,8 (3H, d J = 6,6Hz).
Os exemplos que se seguem foram sintetizados de modo similar ao Exemplo 18 empregando vários ésteres de aminoácido conforme deta-
lhado para os Intermediário 6d-6f.
Número do E- xemplo Intermediá- rio usado Rn Rm Denominação Pureza em LCMS (2S)-[(2-{3-[4- carbamoil-5- 19 6d ò ciclopen- tila (carbamoilami- no)-2- tie- nil]fenil}etil)amino ](fenil)acetato de ciclopentila 98% de pu- reza: m/z 507 [M+H]+ 0-terc-butil-/V-(2- {3-[4-carbamoil- 6e o+ ciclopen- tila 5- (carbamoilami- no)-2- tienil]fenil}etil)-L- serinato ciclopen- tila 95% de pu- reza: m/z 517 [M+H]+ 0-terc-butil-N-(2- {3-[4-carbamoil- 21 6f £ ciclopen- tila 5- (carbamoilami- no)-2- tienil]fenil}etil)-L- treoninato ciclo- pentila 96% de pu- reza: m/z 531 [M+H]+
Exemplo 22 - /V-(2-(5-r4-carbamoil-5-(carbamoilamino)tiofen-2-in-2- flúorfenil)etil)-L-leucinato de ciclopentila
Sintetizado através de um procedimento similar ao Exemplo 16 empregando o Intermediário 11a.
Pureza LCMS a 100 %, m/z 505 [M+H]\ 1H RMN (400 MHz1 DMSOd6), δ: 11,0 (1H, s), 7,6 (2H, br s), 7,4 (1H, m), 7,3 (1H, m), 7,3 (1H, m), 7,1 (1H, t), 6,9 (2H, br s), 5,0 (1H, m), 3,1 (1H, s), 2,7-2,5 (4H, m), 1,9 (1H, br s), 1,7 (2H, m), 1,6-1,4 (7H, m), 0,8 (3H, d), 0,8 (3H, d). Exemplo 23 - A/-(2-(5-[4-carbamoil-5-(carbamoilamino)tiofen-2-in-2-metilfe- nil)etil)-L-leucinato de ciclopentila
Sintetizado através de um procedimento similar ao Exemplo 16 empregando o Intermediário 11b.
Pureza LCMS a 97%, m/z 499,4 [M-H]", 1H RMN (400 MHz, DM-
10
15
Φ
SO-de), δ: 11,0 (1 Η, s), 7,7 (2Η, br s), 7,3 (2H, br s), 7,2 (1H, d), 7,1 (1H, d), 7,0 (2H, br s), 5,1 (1H, m), 3,2 (1H, m), 2,7 (4H, m), 2,2 (3H, s), 1,9 (1H, m), 1,8 (2H, m), 1,6 (7H, m), 1,4 (2H, m), 0,9 (3H, d), 0,8 (3H, d). Exemplo 24 - A/-(2-l5-r4-carbamoil-5-(carbamoilamino)tiofen-2-il1-2-clorofe- nil)etiD-L-leucinato de ciclopentila
Sintetizado através de um procedimento similar ao Exemplo 16 empregando o Intermediário 11c.
Pureza LCMS a 96%, m/z 519,5 [M-H]", 1H RMN (400 MHz, DM- SO-d6), δ: 11,0 (1 Η, s), 7,7 (1 Η, s), 7,7 (1 Η, br s), 7,5 (1H, d), 7,4 (1H, d), 7,4 (1H, dd), 7,3 (1H, br s), 7,0 (2H, br s), 5,1 (1H. M), 3,2 (1H, m), 2,8 (3H, m), 2,6 (1H, m), 2,0 (1H, br s), 1,8 (2H, m), 1,6 (7H, m), 1,3 (2H, m), 0,9 (3H, d), 0,8 (2H, m), 0,9 (3H, d).
Exemplo 25 - /V-(3-(4-í4-carbamoil-5-(carbamoilamino)-2-tienil1fenóxi)propil)- L-Ieucinato de ciclopentila
diário 1 (0,126 g, 0,479 mmol) e Pd(PPh3)4 (0,050 g, 0,044 mmol) foi adicio- nado DME (5 mL) seguido por 2 mL de uma solução saturada de NaHCOa- A mistura foi purgada com nitrogênio e colocada em um banho preaquecido a 80°C. Quando da agitação nesta temperatura por 3 horas a reação foi julga- da como estando completa por LC-MS. A mistura foi resfriada para tempera- tura ambiente, diluída com MeOH e absorvida sobre sílica. O resíduo foi
NH2
A uma mistura do Intermediário 7a (0,2 g, 0,435 mmol), Interme- submetido à cromatografia de coluna eluindo com 3 a 4% MeOH em DCM. O material foi então submetido à captura e liberação de SCX. Rendimento = 0,11 g, 0,213 mmol, 48,9% de rendimento.
Pureza LCMS a 100%: m/z 517 (M+H)+; 515 (M-H)". 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6), δ:10,91 (1 Η, s), 7,61 (1 Η, br s), 7,52 (1H1 s), 7,38 (2H, d, J=8,8Hz), 7,24 (1H, br s), 6,90 (3H, d, J=8,8Hz), 5,05 (1H, t, J=5,9Hz), 3,98 (2H, t, J =6,4Hz), 3,07 (1H, br s), 2,61 (1H, t, J=6,6Hz), 1,70 - 1,83 (4H, m), 1,49 -1,61 (6H, m), 1,32 (2H, t, J=7,1Hz), 0,81 (6H, dd, J=12,0, 6,6Hz). Exemplo 26 - /V-(3-f4-r4-carbamoil-5-(carbamoilamino)-2-tienill-3-clorofenó- xi)propil)-L-leucinato de ciclopentila
15
Sintetizado através de um procedimento similar ao Exemplo 25 empregando o Intermediário 7b.
Pureza LCMS a 98%: m/z 552 (M+H)+. 1H RMN (400 MHz, DM- SO-d6), δ: 10,98 (1H, s), 7,61 (1H, br s), 7,49 (1H, s), 7,41 (1H, d, J=8,8Hz), 7,27 (1H, br s), 7,07(1 H, m), 6,9 (2H, m), 5,08 (1H, m), 4,07 (2H, m), 3,05 (1H, m), 2,6 (1H, m), 1,8 (4H, m), 1,60-1,49 (7H, m), 1,3 (2H, m), 0,81 (3H ,d, J=8,4Hz), 0,79 (3H, d, J=8,7Hz).
Exemplo 27 - A/-(5-{4-f4-carbamoil-5-(carbamoilamino)-2-tieninfenóxi)pentil)- L-Ieucinato de ciclopentila
A uma mistura do Intermediário 8a (600 mg, 1,231 mmol), Inter- mediário 1 (361 mg, 1,231 mmol) e Pd(PPh3)4 (142 mg, 0,123 mmol) foi adi- cionado DME (8 mL). Após a adição de uma solução saturada de NaHCC>3 (3 mL), a mistura foi purgada com nitrogênio e colocada em um banho de óleo preaquecido a 80°C. Após 4 horas a reação foi julgada como estando completa por LCMS. A mistura foi diluída com MeOH1 absorvida sobre sílica e submetida à cromatografia de coluna eluindo com 3 a 5% MeOH em DCM. O produto foi isolado após evaporação (0,305 g, 0,543 mmol, 44,1% de ren- dimento).
Pureza LCMS a 100%: m/z 545 (M+H)+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-de), δ: 10,91 (1H, s), 7,60 (1H, br s), 7,52 (1H, s), 7,38 (2H, d, J=8,8Hz), 7,23 (1H, br s), 6,91 (3H, m), 5,05 (1H, t, J=6,1Hz), 3,92 (2H, t, J=6,4Hz), 3,06 (1H, m), 2,34(1 H, m), 1,72 - 1,80 (2H, m), 1,65 (3H, dd, J=10,5, 6,1Hz), 1,55 (3H, dd, J=10,5, 7.Hz), 1,50 - 1,61 (3H, m), 1,38 (4H, d, J=2,9Hz), 1,30 (3H, t, J=7,3Hz), 0,81 (6H, dd, J=11,0, 6,6Hz). Exemplo 28 - A/-(5-(4-r4-carbamoil-5-(carbamoilamino)-2-tienil1-3-clorofenó- xi)pentil)-L-leucinato de ciclopentila
O
^ NH2
Sintetizado através de um procedimento similar ao Exemplo 27 empregando Intermediário 8b.
Pureza LCMS a 98%: m/z 580 (M+H)+. 1H RMN (400 MHz, DM- SO-de), δ: 10,97 (1H, s), 7,69 (1h, br s), 7,45 (1H, s), 7,4 (1H, d, J=13Hz), 7,23 (1H, br s), 7,05 (1H, d, J= 8,5Hz), 6,9 (3H, m), 5,1 (1H, m), 4,0 (2H, m), 3,05 (1H,m), 2,3(1 H, m), 1,75 (2H, m), 1,69-1,45 (9H, m), 1,44-1,22 (6H, m), 0,81 (3H ,d, J=8,4Hz), 0,79 (3H, d, J=8,7Hz).
Exemplo 29 - A/-r(2F)-3-(4-r4-carbamoil-5-(carbamoilamino)-2-tieninfe-
25
nil)prop-2-en-1-in-L-leucinato de ciclopentila O NH2
Sintetizado através de um procedimento similar ao Exemplo 27 empregando o Intermediário 9a.
A uma solução de A/-(terc-butoxicarbonil)-/V-[(2E)-3-{4-[4- carbamoil-5-(carbamoilamino)tiofen-2-il]fenil}prop-2-en-1 -il]-L-leucinato de ciclopentila (Intermediário 9a) (39 mg, 0,065 mmol) em diclorometano (1 mL) foi adicionado ácido trifluoroacético (0,5 mL). A mistura de reação permane- ceu em agitação a temperatura ambiente por 2 horas. A mistura de reação foi avançou progressivamente por remoção dos solventes in vácuo. O resí- duo foi diluído com metanol e capturado por cromatografia de SCX, eluindo o produto com amônia em metanol. As porções de amônia foram concentradas in vácuo para fornecer um resíduo oleoso. Este foi absorvido em diclorome- tano e iso-hexano foi adicionado. Após a remoção do solvente in vácuo foi obtido um sólido laranja pálido (24,3 mg, 0,049 mmol, 75%). Pureza LCMS a 100%, m/z 499,0 [M+H]\ 1H RMN (400 MHz,
DMSO-d6), δ: 11,0 (1H, s), 7,7 (1H, s), 7,6 (1H, br s), 7,4 (2H, d, J = 8,3Hz), 7,3 (2H, d, J = 8,8Hz), 7,2 (1H, br s), 6,9 (2H, br s), 6,4 (1H, d, J = 15,7Hz), 6,2 (1H, m), 5,0 (1H, m), 3,3 (1H, H), 3,2 (2H, m), 1,8-1,7 (2H, m), 1,6-1,5 (7H, m), 1,3 (2H, m), 0,8 (6H, m). Exemplos 30-40
Os exemplos que se seguem foram sintetizados de modo similar ao Exemplo 29 empregando vários 4-bromo-iodobenzenos mono e dissubsti- tuídos disponíveis comercialmente, conforme detalhado para o Intermediário 9a no esquema 7. Número do Exem- plo Rx Ry Denominação Pureza em LCMS 2-metila H /V-[(2E)-3-{4-[4-carbamoil-5- (carbamoilamino)tiofen-2-il]-2- metilfenil}prop-2-en-1-il]-L-leucinato de ciclopentila 97% de pu- reza: m/z 511,2 [M-Hf 31 2-flúor H A/-[(2E)-3-{4-[4-carbamoil-5- (carbamoilamino)tiofen-2-il]-2- flúorfenil}prop-2-en-1-il]-L-leucinato de ciclopentila 98% de pu- reza: m/z 515,2 [M-Hf 32 2-cloro H /V-[(2E)-3-{4-[4-carbamoil-5- (carbamoilamino)tiofen-2-il]-2- clorofenil}prop-2-en-1-il]-L-íeucinato de ciclopentila 98% de pu- reza: m/z 531 [M-H]+ 33 3-metila H A/-[(2£)-3-{4-[4-carbamoil-5- (carbamoilamino)tiofen-2-il]-3- metilfenil}prop-2-en-1-il]-L-leucinato de ciclopentila 99% de pu- reza: m/z 513 [M+H]+ 34 3-flúor H A/-[(2£)-3-{4-[4-carbamoil-5- (carbamoilamino)tiofen-2-il]-3- flúorfenil}prop-2-en-1-il]-L-leucinato de ciclopentila 94% de pu- reza: m/z 515,3 [M-H]+ 3-cloro H A/-[(2E)-3-{4-[4-carbamoil-5- (carbamoilamino)tiofen-2-il]-3- clorofenil}prop-2-en-1-il]-L-leucinato de ciclopentila 96% de pu- reza: m/z 531,2 {M-H]+ 36 2-CF3 H N-[(2E)-3-{4-[4-carbamoil-5- (carbamoilamino)tiofen-2-il]-2- (trifluormetil)fenil}prop-2-en-1-il]-L- Ieucinato de ciclopentila 98% de pu- reza: m/z 565,4 [M-H]+ 37 2-flúor 5-flúor /\/-[(2£)-3-{4-[4-carbamoil-5- (carbamoilamino)tiofen-2-il]-2,5- difluorfenil}prop-2-en-1 -il]-L- Ieucinato de ciclopentila 98% de pu- reza: m/z 533,4 [M-H]+ 38 2-flúor 6-flúor A/-[(2£)-3-{4-[4-carbamoil-5- (carbamoilamino)tiofen-2-il]-2,6- difluorfenil}prop-2-en-1 -il]-L- Ieucinato de ciclopentila 100% de pureza: m/z 533,4 ΓΜ-Η r 39 3-CF3 H A/-[(2E)-3-{4-[4-carbamoil-5- (carbamoilamino)tiofen-2-il]-3- (trifluormetil)fenil}prop-2-en-1-il]-L- Ieucinato de ciclopentila 97% de pu- reza: m/z 565,4 [M-H]+ 40 2-metil 6-metil /\/-[(2£)-3-{4-[4-carbamoil-5- (carbamoilamino)tiofen-2-il]-2,6- dimetilfenil}prop-2-en-1 -Íl]-L- Ieucinato de ciclopentila 96% de pu- reza: m/z 525 [M-H]+
Exemplos 41-48
Os exemplos que se seguem foram sintetizados de modo similar ao Exemplo 27 empregando vários ésteres de aminoácido conforme deta- lhado para os Intermediários 9b-9h no esquema 8.
O
/ NH5
η P /-(
Η rvíi
Rn
Rm
Número do E- xemplo Interme- diário usado Rn Rm Denominação Pureza em LCMS 41 9c ciclopen- (2S)-{[(2E)-3-{4-[4- 97% de pu- Ó tila carbamoil-5- (carbamoilamino)-2- tienil]fenil}prop-2-en- 1- il]amino}(fenil)acetat o de ciclopentila reza: m/z 519 [M+H]+ 42 9b í-butila Λ/-[(2Ε)-3-{4-[4- carbamoil-5- (carbamoilamino)-2- tienil]fenil}prop-2-en- 1-il]-L-leucinato de terc-butila 99% de pu- reza: m/z 487 [M+H]+ 43 9e + ciclopen- tila 0-terc-butil-A/-[(2H)- 3-{4-[4-carbamoil-5- (carbamoilami- no)tiofen-2- il]fenil}prop-2-en-1- il]-L-serinato de ci- clopentila 100% de pureza: m/z 529 [M+Hf 44 9d δ ciclopen- tila (2S)-{[(2E)-3-{4-[4- carbamoil-5- (carbamoilami- no)tiofen-2- il]fenil}prop-2-en-1- il]amino}(ciclo- hexil)etanoato de ciclopentila 99% de pu- reza: m/z 525 [M+H]+ 45 9g δ í-butila (2S)-{[(2E)-3-{4-[4- carbamoil-5- (carbamoilami- no)tiofen-2- il]fenil}prop-2-en-1- 95% de pu- reza: m/z 511 [M-Hf il]amino}(ciclo- hexil)etanoato de terc-b utila 46 9f Y ciclopen- tila N-[(2E)-3-{4-[4- carbamoil-5- (carbamoilamino)-2- tienil]feníl}prop-2-en- 1-il]-D-leucinato de ciclopentila 97% de pu- reza: m/z 497 [M-H]+ 47 9h ciclopen- tila 0-terc-butil-/V-[(2£)- 3-{4-[4-carbamoil-5- (carbamoilami- no)tiofen-2- il]fenil}prop-2-en-1- il]-L-treoninato de ciclopentila 97% de pu- reza: m/z 543 [M+H]+ 48 Exemplo 47 HO-K ciclopen- tila /V-[(2E)-3-{4-[4- carbamoil-5- (carbamoilami- no)tiofen-2- il]fenil}prop-2-en-1- il]-L-treoninato de ciclopentila 98% de pu- reza: m/z 485 [M-H]+
Exemplo 49 - A/-r(2£)-3-(3-r4-carban tienil1fenil)prop-2-en-1-ill-L-leucinato de ciclopentila Sintetizado através de um procedimento similar ao Exemplo 16 empregando Intermediário 10.
Pureza LCMS a 98%, m/z 499,2 [M+H]\ 1H RMN (400 MHz1 DMSO-Cf6), δ: 11,0 (1 Η, s), 7,7 (1 Η, s), 7,6 (1 Η, br s), 7,5 (1H, s), 7,3 (3H, m), 7,2 (1H, m), 6,9 (2H, br s), 6,5 (1H, d), 6,3 (1H, m), 5,0 (1H, m), 3,3 (1H, m), 3,2 (1H, m), 2,1 (1H, br s), 1,8 (2H, bm), 1,7-1,5 (7H, m), 1,4 (2H, m), 0,8 (6H, m). Dados da RMN
Número do E- xemplo Avaliação da RMN 9 1H RMN (400 MHz, DMSO-Gi6), δ: 11,0 (1H, s), 7,7 (1H, s), 7,7 (1H, br s), 7,4 (1H, s), 7,4-7,2 (7H, m), 7,1 (1H, d), 6,9 (2H, br s), 5,0 (1H, m), 4,2 (1H, d), 3,6 (2H, bd), 3,0 (1H, m), 1,8-1,3 (8H, m). 1H RMN (400 MHz1 DMSO-d6), δ: 11,0 (1H, s), 7,7 (1H, s), 7,7 (1H, br s), 7,4 (1H, s), 7,4 (1H, d), 7,3 (1H, t), 7,3 (1H, br s), 7,1 (1H, d), 6,9 (2H, br s), 5,0 (1H, m), 3,8 (1H, d), 3,5 (1H, d), 2,8 (1H, m), 2,3 (1H, m), 1,9-1,4 (12H, m), 1,2-0,9 (5H, m). 11 1H RMN (400 MHz, DMSO-Ci6), δ: 11,0 (1H, s), 7,7 (1H, s), 7,7 (1H, br s), 7,4 (1H, s), 7,4 (1H, d), 7,3 (2H, m), 7,1 (1H, d), 6,9 (2H, br s), 5,0 (1H, m), 3,8 (1H, d), 3,6 (1H, d), 3,4 (2H, m), 3,2 (1H, br s), 1,8 (2H, m), 1,7-1,5 (6H, m), 1,0 (9H, s). 12 1H RMN (400 MHz, DMSO-ck), δ: 11,0 (1H, s), 7,7 (1H, s), 7,7 (1Η, br s), 7,4 (1H, s), 7,4 (1H, d), 7,3 (2H, m), 7,1 (1H, d), 6,9 (2H, br s), 5,1 (1H, m), 4,8 (1H, br s), 3,8 (1H, d), 3,6 (3H, m), 3,2 (1H, br s), 1,8 (2H, m), 1,6-1,4 (6H, m). 13 1H RMN (400 MHz, DMSOd6), δ: 11,0 (1H, s), 7,7 (1H, s), 7,7 (1H, br s), 7,4 (1H, s), 7,4 (1H, d), 7,3 (2H, m), 7,1 (1H, d), 6,9 (2H, br s), 5,0 (1H, m), 4,8 (1H, br s), 3,8 (2H, m), 3,6 (1H, d), 2,9 (1H, br s), 1,8 (2H, m), 1,6-1,4 (6H, m), 1,1 (3H, d). 14 1H RMN (400 MHz, DMSOd6), δ: 11,0 (1H, s), 7,7 (2H, s), 7,5 (1H, br s), 7,4 (1H, d, J = 7,8Hz), 7,3 (2H, m), 7,2 (1H, d, J = 7,3Hz ), 7,0 (2H, br s), 3,8 (1H, d), 3,6 (1H, d), 3,0 (1H, t), 2,5 (2H, m), 1,8 (1H, septeto), 1,4 (9H, s), 1,4 (1H, m), 0,9 (3H, d, J = 6,6Hz), 0,8 (3H, d, J = 6,6Hz). 1H RMN (400 MHz, DMSOd6), δ: 11,0 (1H, s), 7,7 (2H, br s), 7,4 (1H, s), 7,3 (1H, d), 7,2 (1H, t), 7,1 (1H, d), 6,9 (2H, br s), 5,0 (1H, m), 3,7 (1H, d), 3,5 (1H, d), 2,8 (1H, br s), 2,3 (1H, br s), 1,8 (3H, m), 1,6-1,4 (6H, m), 0,8 (6H, m). 19 1H RMN (400 MHz1 DMSOd6), δ: 11,0 (1H, s), 7,7 (1H, s), 7,6 (1H, br s), 7,3-7,2 (8H, m), 7,0 (1H, d), 7,0 (2H, br s), 5,0 (1H, m), 4,3 (1H, s), 2,8-2,6 (4H, m), 1,8-1,6 (2H, m), 1,6-1,2 (6H, m). 1H RMN (400 MHz, DMSOd6), δ: 11,0 (1H, s), 7,7 (1H, s), 7,7 (1H, br s), 7,3 (4H, m), 7,0 (1H, d), 6,9 (2H, br s), 5,0 (1H, m), 3,4 (1H, m), 3,3 (1H, m), 3,2 (1H1 br s), 2,8 (1H, m), 2,6 (3H, m), 1,8 (1H, br s), 1,7 (2H, m), 1,6-1,4 (6H, m), 1,0 (9H, s). 21 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6), δ: 11,0 (1H, s), 7,7 (1H, s), 7,6 (1H, br s), 7,3 (4H, m), 7,0 (1H, d), 6,9 (2H, br s), 5,0 (1H, m), 3,8 (1H, m), 3,0 (1H, br s), 2,7 (1H, m), 2,6 (2H, m), 2,5 (1H, m), 1,8 (2H, m), 1,6-1,4 (6H, m), 1,1 (3H, d), 1,0 (9H, s). 1H RMN (400 MHz, DMSOd6), δ: 11,0 (1H, s), 7,7 (1H, s), 7,7 (1H, br s), 7,5 (1H, d), 7,3 (1H, d), 7,3 (2H, br s), 7,0 (2H, br s), 6,7 (1H, d), 6,1 (1H, m), 5,1 (1H, m), 3,4 (1H, m), 3,2 (2H, m), 3,0 (1H, br s), 2,3 (3H, s), 1,8 (2H, m), 1,6 (7H, m), 1,4 (2H, m), 0,9 (3H, d), 0,8 (3H, d). 31 1H RMN (400 MHz1 DMSO-Cf6), δ: 11,0 (1 Η, s), 7,8 (1Η, s), 7,7 (1 Η, br s), 7,6 (1 Η, m), 7,4 (2Η, br s), 7,3 (1 Η, m), 7,0 (2H, br s), 6,6 (1H, d, J = 16,1 Hz), 6,4 (1H, m), 5,1 (1H, m), 3,4 (1H, m), 3,2 (2H, m), 2,2 (1H, br s), 1,8 (2H, m), 1,6 (7H, m), 1,4 (2H, m), 0,9 (3H, d), 0,8 (3H, d). 32 1H RMN (400 MHz, DMSO-Qf6), δ: 11,0 (1H, s), 7,8 (1H, s), 7,7 (1H, d), 7,7 (1H, br s), 7,5 (1H, d), 7,4 (1H, dd), 7,4 (1H, br s), 7,0 (2H, br s), 6,8 (1H, d), 6,3 (1H, m), 5,1 (1H, m), 3,4 (1H, m), 3,2 (2H, m), 2,2 (1H, br s), 1,8 (2H, m), 1,6 (7H, m), 1,4 (2H, m), 0,9 (3H, d), 0,8 (3H, d). 34 1H RMN (400 MHz, DMSO-Cf6), δ: 11,1 (1H, s), 7,8 (1H, s), 7,8 (1H, br s), 7,6 (1H, m), 7,3 (3H, m), 7,0 (2H, br s), 6,5 (1H, d), 6,4 (1H, m), 5,1 (1H, m), 3,4 (1H, m), 3,2 (2H, m), 2,1 (1H, br s), 1,8 (2H, m), 1,6 (7H, m), 1,4 (2H, m), 0,9 (3H, d), 0,8 (3H, d). 1H RMN (400 MHz, DMSO-Cf6), δ: 11,0 (1H, s), 7,8 (1H, br s), 7,7 (1H, s), 7,5 (2H, m), 7,4 (1H, d), 7,3 (1H, br s), 7,0 (2H, br s), 6,5 (1H, d), 6,4 (1H, m), 5,1 (1H, m), 3,4 (1H, m), 3,2 (2H, m), 2,1 (1H, br s), 1,8 (2H, m), 1,6 (7H, m), 1,4 (2H, m), 0,9 (3H, d), 0,8 (3H, d). 36 1H RMN (400 MHz, DMSO-Cf6), δ:11,0 (1H, s), 7,9 (1H, s), 7,8 (1H, d), 7,8 (1H, s), 7,7 (1H, br s), 7,7 (1H, d), 7,4 (1H, br s), 7,0 (2H, br s), 6,7 (1H, d), 6,4 (1H, m), 5,1 (1H1 m), 3,4 (1H, m), 3,2 (2H, m), 2,1 (1H, br s), 1,8 (2H, m), 1,6 (7H, m), 1,4 (2H, m), 0,9 (3H, d), 0,8 (3H, d). 37 1H RMN (400 MHz, DMSO-Cf6), δ: 11,1 (1H, s), 7,9 (1H, s), 7,7 (1H, br s), 7,6 (1H, dd), 7,4 (1H, dd), 7,4 (1H, br s), 7,0 (2H, br s), 6,6 (1H, d), 6,5 (1H, m), 5,1 (1H, m), 3,4 (1H, m), 3,2 (2H, m), 2,1 (1H, br s), 1,8 (2H, m), 1,6 (7H, m), 1,4 (2H, m), 0,9 (3H, d), 0,8 (3H, d). 38 1H RMN (400 MHz, DMSO-Cf6), δ: 11,0 (1H, s), 7,9 (1H, s), 7,6 (1H, br s), 7,4 (1H, br s), 7,2 (2H, m), 7,1 (1H, br s), 7,0 (1H br s), 6,5 (2H, m), 5,1 (1H, m), 3,4 (1H, m), 3,2 (2H, m), 2,2 (1H, br s), 1,8 (2Η, m), 1,6 (7Η, m), 1,4 (2Η, m), 0,9 (3Η, d), 0,8 (3H, d). 39 1H RMN (400 MHz, DMSOd6), δ: 11,0 (1H, s), 7,8 (1H, s), 7,7 (1H, br s) 7,7 (1H, d), 7,5 (1H, d), 7,3 (1H, s), 7,3 (1H, br s), 7,0 (2H, br s), 6,6 (1H, d), 6,5 (1H, m), 5,1 (1H, m), 3,4 (1H, m), 3,2 (2H, m), 2,2 (1H, br s), 1,8 (2H, m), 1,6 (7H, m), 1,4 (2H, m), 0,9 (3H, d), 0,8 (3H, d). 40 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6), 5:11,0 (1H, s), 7,7 (2H, br s), 7,3 (1H, br s), 7,2 (2H, s), 7,0 (2H, br s), 6,4 (1H, d), 5,7 (1H, m), 5,1 (1H, m), 3,4 (1H, m), 3,2 (2H, m), 2,3 (6H, s), 2,2 (1H, br s), 1,8 (2H, m), 1,6 (7H, m), 1,4 (2H, m), 0,9 (3H, d), 0,8 (3H, d). 41 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6), δ: 11,0 (1H, s), 7,7 (1H, s), 7,7 (1H, br s), 7,5-7,3 (10H, m), 7,0 (2H, br s), 6,5 (1H, d), 6,3 (1H, m), 5,07 (1H, m), 4,3 (1H, m), 3,3 (2H, br s), 1,8-1,4 (8H, m). 43 1H RMN (400 MHz1 DMSOd6), δ: 11,0 (1H, s), 7,7 (1H, s), 7,6 (1H, br s), 7,5 (2H, d), 7,4 (2H, d), 7,3 (1H, br s), 7,0 (2H, br s), 6,5 (1H, d), 6,3 (1H, m), 5,1 (1H, m), 3,5 (1H, m), 3,4 (1H, m), 3,3 (1H, m), 3,2 (2H, m), 1,8-1,50 (8H, m), 1,09 (9H, s). 44 1H RMN (400 MHz, DMSOd6), δ: 11,0 (1H, s), 7,8 (1H, s), 7,7 (1H, br s), 7,5 (2H, d), 7,4 (2H, d), 7,3 (1H, br s), 7,0 (2H, br s), 6,5 (1H, d), 6,3 (1H, m), 5,1 (1H, m), 3,2 (1H, m), 2,9 (2H, br s), 1,9-1,5 (13H, m), 1,2-0,9 (6H, m). 45 1H RMN (400 MHz1 DMSO-d6), δ: 11,0 (1H, s), 7,3 (1H, s), 7,7 (1H, br s), 7,5 (2H, d), 7,4 (2H, d), 7,32 (1H, br s), 7,0 (2H, br s), 6,5 (1H, d), 6,2 (1H, m), 3,4 (1H, m), 3,2 (1H, m), 2,8 (1H, br s), 1,9 (1H, brs), 1,8-1,5 (10H, m), 1,4 (9H, s). 46 1H RMN (400 MHz, DMSOd6), δ: 11,0 (1H, s), 7,7 (1H, s), 7,6 (1H, br s), 7,5 (2H, d), 7,4 (2H, d), 7,3 (1H, br s), 7,0 (2H, br s), 6,5 (1H, d), 6,25 (1H, m), 5,1 (1H, m), 3,3 (1H, m), 3,2 (2H, m), 1,7 (1H, sep), 1,87-1,5 (8H, m), 1,4 (2H, m), 0,9 (3H, d), 0,8 (3H, d). 47 1H RMN (400 MHz1 DMSOd6), δ: 11,0 (1H, s), 7,7 (1H, s), 7,6 (1H1 br s), 7,5 (2H, d), 7,4 (2H, d), 7,32 (1H, br s), 7,0 (2H, br s), 6,5 (1 Η, d), 6,3 (1Η, m), 5,1 (1H, m), 3. 9 (1H, m), 3,3 (1H, m), 3,2 (1H, m), 3,1 (1H, br s), 1,8-1,5 (8H, m), 1,1 (3H, d), 1,09 (9H, s)._
48
1H RMN (400 MHz, DMSOd6), δ: 11,0 (1H, s), 7,7 (1H, s), 7,6 (1H, br s), 7,5 (2H, d), 7,4 (2H, d), 7,3 (1H, br s), 7,0 (2H, br s), 6,5 (1H, d), 6,27 (1H, m), 5,1 (1H, m), 4,7 (1H, br s), 3,8 (1H, m), 3,4 (1H, m), 3,2 (1H, m), 3,0 (1H, m),1,8-1,5 (8H, m), 1,1 (3H, d)._
Exemplo 50 Ácido (2S)-((4-r4-carbamoil-5-(carbamoilamino)-2-
tienil1benzil)amino)(fenil)acético
O
Pureza em LC/EM 96%, m/z 425 [M+H]+, 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6), δ: 11,0 (1 Η, br s), 7,7 (1H, s), 7,6 (1H, br s), 7,5 (2H, m), 7,4-7,3 (8H, m), 6,9 (2H, m), 4,2 (1H, s), 3,7 (2H, q, J=13,9 e 6,6Hz).
A uma solução de (2S)-({4-[4-carbamoil-5-(carbamoilamino)-2- tienil]benzil}amino)(fenil)acetato de ciclopentila(Exemplo 1) (50 mg, 102 pmols) em tetra-hidrofurano (1 mL) foi adicionado 1,0M de LiOH aquoso (0,508 mL, 508 pmols). A reação foi agitada a uma temperatura de banho de óleo de 40°C. Após 4 horas LCMS indicou que a reação estava 90% comple- ta. O aquecimento foi removido e a reação deixada agitar a temperatura am- biente por toda noite. O solvente foi removido in vácuo e ao resíduo foi adi- cionada água (2 mL). 5 gotas de ácido acético foram adicionadas à solução e o sólido precipitou. O sólido foi coletado por filtração e lavado seqüencial- mente com água, etanol e éter dietílico antes da secagem sob pressão redu- zida (26 mg, 60%).
Os exemplos que se seguem foram preparados de modo similar ao Exemplo 50. Quando necessário, os compostos foram purificados por HPLC de preparação para obter uma boa pureza. Exemplo 51 - A/-{4-f4-Carbamoil-5-(carbamoilamino)-2-tienil1benzil)-L-leucina
O
CT Nl-L
A partir do Exemplo 2. Pureza em LC/EM 99%, m/z 405 [M+H]+. Exemplo 52 - A/-(4-f4-Carbamoil-5-(carbamoilaminoV2-tieninbenzil>-L- fenilalanina
A partir do Exemplo 3. Pureza em LC/EM 98%, m/z 439 [M+H]+. Exemplo 53 - Ácido (2R)-((4-r4-Carbamoil-5-(carbamoilamino)-2-tienillben- zil)amino)(fenil)acético
O NHL
A partir do Exemplo 4. Pureza em LC/EM 95%, m/z 425 [M+H]+. Exemplo 54 - Ácido (2S)-((4-[4-Carbamoil-5-(carbamoilamino)-2-tieninben-
zil)amino)(2-nafti0acético Exemplo 55 - A/-(4-[4-carbamoil-5-(carbamoilamino)-2-tienin-3-clorobenzil)-L- Ieucina
A partir do Exemplo 6. Pureza em LC/EM 98%, m/z 508 [M+H]+. Exemplo 56 - A/-(4-[4-carbamoil-5-(carbamoilamino)-2-tienil1-2-metilbenzil)-L- Ieucina
A partir do Exemplo 7. Pureza LCMS a 92 %, m/z 417 [M-H]+. Exemplo 57 - A/-{3-f4-Carbamoil-5-(carbamoilamino)-2-tieninbenzil)-L-leucina
A partir do Exemplo 8. Pureza em LC/EM 98%, m/z 405 [M+H]+. Os exemplos que se seguem foram preparados de modo similar ao Exemplo 50. Quando necessário, os compostos foram purificados por HPLC de preparação para obter uma boa pureza.
Número do Exemplo Exemplo usado Rn Denominação Pureza em LCMS 58 9 δ Ácido (2S)-({3-[4- carbamoil-5- (carbamoilamino)-2- tie- nil]benzil}amino)(fenil)a cético 96% de pure- za: m/z 425 [M+H]+ 59 10 δ Ácido (2S)-({3-[4- carbamoil-5- (carbamoilamino)-2- tie- nil]benzil}amino)(ciclo- hexil)acético 94% de pure- za: m/z 431 [M+H]+ 60 11 0-terc-butil-/V-{3-[4- carbamoil-5- (carbamoilami- no)tiofen-2-il]benzil}-L- serina 100% de pu- reza: m/z 435 [M+H]+ 61 13 HO^ H A/-{3-[4-carbamoil-5- (carbamoilami- no)tiofen-2-il]benzil}-L- treonina 97% de pure- za: m/z 393 [M+H]+ 62 15 A/-{3-[4-carbamoil-5- (carbamoilami- no)tiofen-2-il]benzil}-L- valina de ciclopentila 91% de pure- za: m/z 391 [M+H]+ 10
Exemplo 63 - /V-(244-r4-Carbamoil-5-(carbaiTioilamino)-2-tienillfenil)etil)-L- Ieucina
O NH,
A partir do Exemplo 16. Pureza em LC/EM 96%, m/z 487 [M+H]+. Exemplo 64 - /V-(2-(4-r4-Carbamoil-5-(carbamoilamino)-2-tienin-3-clorofe- nil)etil)-L-leucina
A partir do Exemplo 17. Pureza em LC/EM 98%, m/z 522 [M+H]+. Exemplo 65 - A/-(3-{4-í4-Carbamoil-5-(carbamoilamino)-2-tieninfenóxi>propil)- L-Ieucina
A partir do Exemplo 25. Pureza em LC/EM A 100%, m/z 517
[M+H]+.
Exemplo 66 A/-(3-{4-[4-Carbamoil-5-(carbamoilamino)-2-tienin-3-clorofenó- xi)propil)-L-leucina A partir do Exemplo 26. Pureza em LC/EM a 100%, m/z 552
[M+H]+.
Exemplo 67 - A/-(5-(4-r4-Carbamoil-5-(carbamoilamino)-2-tienil1fenóxi)pentil)- L-Ieucina
10
O NH„
A partir do Exemplo 27. Pureza em LC/EM A 100%, m/z 545
[M+H]+.
Exemplo 68 - A/-(5-(4-r4-Carbamoil-5-(carbamoilamino)-2-tienin-3-clorofenó- xi)pentil)-L-leucina
O NH.
A partir do Exemplo 28. Pureza em LC/EM 98%, m/z 580 [M+H]+. Exemplo 69 - A/-[(2E)-3-{4-f4-Carbamoil-5-(carbamoilaminoV2-tieninfe- nil)prop-2-en-1 -ilI-L-leucina [Μ+ΗΓ, 1H RMN (400 MHz1 DMSO-d6), δ: 11,0 (1Η, s), 7,7 (1Η, s), 7,6 (1Η, br s), 7,5 (2H, d, J = 8,3 Hz), 7,4 (2H, d, J = 8,3 Hz), 7,3 (1H, br s), 7,0 (2H, br s), 6,6 (1H, d, J = 16,1 Hz), 6,2 (1H, m), 3,5 (1H, m), 3,3 (2H, m), 1,8 (1H, m), 1,4 (2H, m), 0,8 (6H, m).
Os exemplos que se seguem foram preparados de modo similar ao Exemplo 50. Quando necessário, os compostos foram purificados por HPLC de preparação para obter uma boa pureza.
Número Exemplo Pureza do Ε- usado Rx Ry Denominação em χε m pio LCMS Λ/-[(2Ε)-3-{4-[4- carbamoil-5- 93% de 70 30 2- H (carbamoilami- pureza: metila no)tiofen-2-il]-2- metilfenil}prop-2-en-1 - il]-L-leucina m/z 445 [M+H]+ 71 31 2-flúor H Λ/-[(2Ε)-3-{4-[4- carbamoil-5- (carbamoilami- no)tiofen-2-il]-2- flúorfenil}prop-2-en-1 - 98% de pureza: m/z 449 [M+H]+ il]-L-leucina A/-[(2E)-3-{4-[4- carbamoil-5- 91% de 72 32 2- H (carbamoilami- pureza: cloro no)tiofen-2-il]-2- clorofenil}prop-2-en-1 - il]-L-leucina m/z 466 [M+H]+ A/-[(2E)-3-{4-[4- carbamoil-5- 98% de 73 33 3- H (carbamoilami- pureza: metila no)tiofen-2-il]-3- metilfenil}prop-2-en-1 - il]-L-leucina m/z 445 [M+H]+ Λ/-[(2£)-3-{4-[4- carbamoil-5- 91% de 74 34 3-flúor H (carbamoilami- no)tiofen-2-il]-3- flúorfenil}prop-2-en-1 - il]-L-leucina pureza: m/z 449 [M+H]+ A/-[(2E)-3-{4-[4- carbamoil-5- 95% de 75 35 3- H (carbamoilami- pureza: cloro no)tiofen-2-il]-3- clorofenil}prop-2-en-1 - il]-L-leucina m/z 466 [M+H]+ Λ/-[(2Ε)-3-{4-[4- carbamoil-5- (carbamoilami- 95% de pureza: m/z 499 [M+Hf 76 36 2-CF3 H no)tiofen-2-il]-2- (trifluorme- til)fenil}prop-2-en-1 -il]- L-Ieucina 77 37 2-flúor 5-flúor /V-[(2E)-3-{4-[4- carbamoil-5- (carbamoilami- no)tiofen-2-il]-2,5- difluorfenil}prop-2-en- 1-il]-L-leucina 90% de pureza: m/z 467 [M+H]+ 78 38 2-flúor 6-flúor /V-[(2£)-3-{4-[4- carbamoil-5- (carbamoilami- no)tiofen-2-il]-2,6- difluorfenil}prop-2-en- 1-il]-L-leucina 93% de pureza: m/z 467 [M+H]+ 79 39 3-CF3 H Λ/-[(2Ε)-3-{4-[4- carbamoil-5- (carbamoilami- no)tiofen-2-il]-3- (trifluorme- til)fenil}prop-2-en-1 -il]- L-Ieucina 96% de pureza: m/z 499 [M+H]+ 80 40 2- metila 6- metila A/-[(2E)-3-{4-[4- carbamoil-5- (carbamoilami- no)tiofen-2-il]-2,6- dimetilfenil}prop-2-en- 1-il]-L-leucina de ci- clopentila 88% de pureza: m/z 459 [M+H]+
Os exemplos que se seguem foram preparados de modo similar
ao Exemplo 50. Quando necessário, os compostos foram purificados por HPLC de preparação para obter boa pureza. Número do E- xemplo Exemplo usado Rn Denominação Pureza em LCMS 81 41 δ Ácido (2S)-{[(2£)-3-{4-[4- carbamoil-5- (carbamoilamino)-2- tienil]fenil}prop-2-en-1 - il]amino}(fenil)acético 90% de pureza: m/z 451 [M+Hf 82 43 C 0-terc-butil-N-[(2E)-3-{4-[4- carbamoil-5- (carbamoilamino)tiofen-2- il]fenil}prop-2-en-1-il]-L-serina 98% de pureza: m/z 461 [M+Hf 83 44 ô Ácido (2S)-{[(2E)-3-{4-[4- carbamoil-5- (carbamoilamino)tiofen-2- il]fenil}prop-2-en-1- il]amino}(ciclo-hexil)etanóico 96% de pureza: m/z 456 [M+H]+ 84 46 Y A/-[(2E)-3-{4-[4-carbamoil-5- (carbamoilamino)-2- tienil]fenil}prop-2-en-1 -il]-D- Ieucina 99% de pureza: m/z 431 [M+H]+ 85 47 C L H 0-terc-butil-N-[(2E)-3-{4-[4- carbamoil-5- (carbamoilamino)tiofen-2- il]fenil}prop-2-en-1 -il]-L- treonina de ciclopentila 80% de pureza: m/z 475 [M+Hf 86 48 A/-[(2E)-3-{4-[4-carbamoil-5- (carbamoilamino)tiofen-2- 98% de pureza: Hh il]fenil}prop-2-en-1 -il]-L- m/z 419 HO^ treonina de ciclopentila H [M-H]+
Exemplo 87 - A/-(2-(3-r4-carbamoil-5-(carbamoilamino)-2-tieninfenil)etin-L- Ieucina O
HO'
A partir do Exemplo 18. Pureza LCMS a 98 %, m/z 417 [M-H]+. Os exemplos que se seguem foram sintetizados de modo similar
ao Exemplo 87 O
Número do E- xemplo Exemplo usado Rn Denominação Pureza em LCMS 88 19 δ Ácido (2S)-[(2-{3-[4- carbamoil-5- (carbamoilamino)-2- tie- nil]fenil}etil)amino](fenil)acét ico de ciclopentila 99% de pureza: m/z 437 [M-H]+ 89 20 j- -K 0-terc-butil-/V-(2-{3-[4- carbamoíl-5- (carbamoilamino)-2- tienil]fenil}etil)-L-serina de ciclopentila 91% de pureza: m/z 449 [M+H]+ Exemplo 90 - /V-(2-{5-[4-carbamoil-5-(carbamoilamino)tiofen-2-in-2- flúorfenil)etiQ-L-leucina
A partir do Exemplo 22. Pureza LCMS a 97 %, m/z 435 [M-H]+. Exemplo 91 - A/-(2-(5-r4-carbamoil-5-(carbamoilamino)tiofen-2-in-2-metilfe-
A partir do Exemplo 23. Pureza LCMS a 98 %, m/z 431 [M-H]+. Exemplo 92 - A/-(2-f5-r4-carbamoil-5-(carbamoilamino)tiofen-2-in-2- clorofenil)etil)-L-leucina de ciclopentila
A partir do Exemplo 24. Pureza LCMS a 97 %, m/z 451 [M-H]+. Exemplo 93 - A/-r(2E)-3-(3-r4-carbamoil-5-(carbamoilamino)-2-tieninfe- nil)prop-2-en-1 -ilI-L-leucina A partir do Exemplo 49. Pureza em LC/EM 90%, m/z 431 [M+H]+. Medição da Atividade Biológica Ensaio da Enzima ΙΚΚβ
A capacidade dos compostos de inibir a atividade da ΙΚΚβ cina- se foi medida em um ensaio realizado pela Invitrogen (Paisley, Reino Uni- do). O ensaio bioquímico Z'-LYTE™ emprega um formato de enzima aco- plado, com base em fluorescência e se baseia na sensibilidade diferencial dos peptídeos fosforilados e não fosforilados em relação à clivagem proteolí- tica. O substrato do peptídeo é rotulado com dois fluorforos, um em cada extremidade que constituem um par FRET. Na reação primária a cinase transfere o gama-fosfato de ATP para um resíduo de serina ou treonina sim- ples em um Fret-peptídeo sintético. Na reação secundária, uma protease específica do sítio reconhece e cliva FRET-peptídeos não fosforilados. A fosforilação dos FRET-peptídeos suprime a clivagem pelo Reagente de De- senvolvimento. A clivagem interrompe FRET entre o doador (isto é, coumari- na) e os fluorforos receptores (isto é, fluoresceína) no FRET- peptídeo, con- siderando-se que os FRET-peptídeos fosforilados não clivados mantêm FRET. Um método radiométrico, que calcula a razão (a Razão de Emissão) de emissão do doador para a emissão do receptor após excitação do fluorfo- ro do doador em 400 nm é empregada para quantificar o progresso da rea- ção.
A Reação de Cinase de 10 μί final consiste em 0,9-8,0 ng de IKBKB (ΙΚΚβ), 2 μΜ de Peptídeo Ser/Thr 05 e ATP em 50 mM de HEPES pH 7,5, 0,01 %de BRIJ-35, 10 mM de MgCI2, 1 mM de EGTA. O ensaio é reali- zado em uma concentração de ATP em ou próxima ao Km. Após a incuba- ção da Reação de Cinase por 60 minutos a temperatura ambiente, 5 μΙ_ de uma diluição a 1:128 do Reagente de Desenvolvimento são adicionados. A placa de ensaio é incubada por mais de 60 minutos a temperatura ambiente e lida em um Ieitorde placa fluorescente. Os pontos de dados em duplicata são gerados de uma série de
diluições a 1/3 Iog em uma solução mestra do composto de teste em DMSO. Nove etapas de diluição são realizadas em uma concentração superior de 10 μΜ θ um nulo "sem composto" é incluído. Os dados são coletados e analisa- dos empregando software XUit da IDBS. A curva de resposta de dose é a- justada ao número do modelo 205 (modelo de resposta de dose sigmóide). A partir da curva gerada, a concentração fornecendo 50% de inibição é deter- minada e reportada. Estímulo LPS das células THP-1
Células THP-1 foram colocadas em placas em 100 pL a uma densidade de 4 χ 104 células/poço em placas tratadas com cultura de tecido de 96 poços na parte inferior V e incubadas a 37°C em CO2 a 5% por 16 ho- ras. Duas horas após a adição do inibidor em 100 μΙ_ de meio de cultura de tecido, as células foram estimuladas com LPS (cepa E coli 005:B5, Sigma) a uma concentração final de 1 μg/mL e incubadas a 37°C em CO2 a 5% por 6 horas. Os níveis de TNF-α foram medidos dos sobrenadantes isentos de célula por ELISA de intercalação (R&D Systems #QTA00B) Estimulação de LPS do sangue humano integral
Amostras de sangue foram colhidas por punção venosa empre- gando recipientes a vácuo heparinizados (Becton Dickinson) e diluídos em um volume igual de meios de cultura de tecido RPMI1640 (Sigma). 100 pL foram colocados em placa em placas tratadas com cultura de tecido de 96 poços com fundo em V. Duas horas após a adição do inibidor em 100 μί de meio RPMI1640, o sangue foi estimulado com LPS (cepa E coli 005:B5, Sigma) a uma concentração final de 100 ng/mL e incubado a 37°C em CO2 a 5% por 6 horas. Os níveis de TNF-α foram medidos dos sobrenadantes isen- tos de célula por ELISA de intercalação (R&D Systems #QTA00B).
Valores IC5o foram alocados a uma das três faixas como se se- gue:
Faixa A: IC50 < IOOOnM Faixa B: IOOOnM < IC50 <5000nM Faixa C: IC50 >5000nM NT = não testado Tabela de Resultados Número do Exemplo Atividade do inibi- dor versus ΙΚΚβ Atividade do inibidor versus distribuição de THP-1 TNFa Atividade do ini- bidor versus dis- tribuição de TNFa de sangue huma- no 1 B B B 2 A C B 3 C C NT 4 A C B C C NT 6 A C NT 7 A B NT 8 A A B 9 A A B B A B 11 A B B 12 A NT A 13 A A A 14 A A B NT NT B 16 B B NT 17 B C NT 18 B A B 19 A A A NT NT B 21 NT NT C 22 B B B 23 NT NT C 24 NT NT C B B NT 26 B B NT 27 A B NT 28 C B NT 29 A A A B B NT 31 B B B 32 B A B 33 C A B 34 A B NT B B NT 36 B C NT 37 B B NT 38 C NT B 39 C NT B 40 NT NT NT 41 A B B 42 A B C 43 A NT B 44 A NT C 45 A NT C 46 A NT B 47 NT NT C 48 NT NT B 49 A A A 50 A NT NT 51 A NT NT 52 A NT NT 53 A NT NT 54 A NT NT 55 A NT NT 56 A NT NT 57 A NT NT 58 A NT NT 59 A NT NT 60 A NT NT 61 A NT NT 62 NT NT NT 63 A NT NT 64 A NT NT 65 A NT NT 66 A NT NT 67 A NT NT 68 A NT NT 69 A NT NT 70 A NT NT 71 A NT NT 72 A NT NT 73 A NT NT 74 A NT NT 75 A NT NT 76 A NT NT 77 A NT NT 78 A NT NT 79 B NT NT 80 A NT NT 81 A NT NT 82 A NT NT 83 A NT NT 84 A NT NT 85 NT NT NT 86 NT NT NT 87 A NT NT 88 A NT NT 89 NT NT NT 90 A NT NT 91 NT NT NT 92 NT NT NT 93 A NT NT
Ensaio de Carboxilesterase de Célula Rompida
Qualquer dado composto da presente invenção em que Ri é um grupo éster pode ser testado para determinar se satisfaz o requisito de ser hidrolisado poresterases intracelulares, por teste no ensaio que se segue.
Preparação do extrato de célula
Células tumorais U937 ou HCT 116 (~ 109) foram lavadas em 4 volumes de Dulbeccos PBS (~ 1 litro) e esferonizadas a 525 g por 10 minu- tos a 4°C. Isto foi repetido duas vezes e a esfera de célula final foi ressus- pensa em 35 mL de tampão de homogeneização frio (Trizma a 10 mM, NaCI a 130 mM, CaCI2 a 0,5 mM, pH 7,0 a 25°C). Os homogenatos foram prepa- rados por cavitação do hidrogênio (4,82 MPa Poe 50 minutos a 4°C). O ho- mogenato foi mantido em gelo e suplementado com coquetel de inibidores em concentrações finais de: Leupeptina 1 μΜ AprotininaO1IpM E64 8 μΜ Pepstatina 1,5 μΜ
Bestatina 162 μΜ Quimostatina 33 μΜ
Após clarificação do homogenato celular por centrifugação a 525
g por 10 minutos, o sobrenadante resultante foi usado como uma fonte de atividade de esterase e foi armazenado a -80°C até ser necessário. Medição de Clivagem do Éster
A hidrólise dos ésteres nos ácidos carboxílicos correspondentes pode ser medida usando um extrato celular, preparado como acima. Para isto, extrato celular (-30 pg/volume de ensaio total de 0,5 mL) foi incubado a 37°C em um tampão Tris-HCI 25 mM, 125 mM de NaCI, pH 7,5 a 25°C. No tempo zero o éster (substrato) foi então adicionado a uma concentração final de 2,5 μΜ e as amostras foram incubadas a 37°C pelo tempo apropriado (geralmente 0 ou 80 minutos). As reações foram paradas por adição de vo- lumes de 3 vezes acetonitrila. Para amostras de tempo zero, a acetonitrila foi adicionada antes do composto de éster. Após centrifugação a 12.000 g por 5 minutos, as amostras foram analisadas quanto ao éster e seu ácido carboxí- Iico a temperatura ambiente por LCMS(Sciex API 3000, HP1100 bomba bi- nária, CTC PAL). A cromatografia se baseou em uma coluna AcCn (75 χ 2,1 mm) e uma fase móvel de acetonitrila a 5-95% em água/ácido fórmico a ♦ 10 0,1%.
A tabela 1 apresenta os dados mostrando que vários motivos de
éster aminoácido, conjugados aos vários inibidores de enzima intracelular por várias químicas de Iigante diferentes são todos hidrolisados por carboxi- esterases intracelulares nos ácidos correspondentes.__i_
Estrutura do conjugado do éster de R Iigante razão de preparação aminoácido taxa de hi- drólise das células U937(pg/mL /minuto) do conju- gado do éster a mi- no Qo, HaN •CH2CH20- 100-1OOO W02006117552 o > H2N 1000-50000 W02006117548 R-Ii8Ble „---(30^,NHOH O X CrY* >50000 W02006117567 R-Iipnte 'Γ^^ XX^-J te NH, Q ο H8N -CH2CM2Ç>- >50000 W02006117567 H |Γ Jv. {À Γ N NHa R-Ii^nK v^S. .. Γ li T* Ο-Γ -CH2 CHZO- 1000-50000 WO2006117567 Λ R-Iigantc NH, &l SJ^nh1 Λ -CH2- 1000-50000 W02006117867 NH1 Γτ X -CO- >50000 W02006117567 CrY^ R-Iigante Γ —. V NHOH >50000 W02006117549 S 0 crvV R-Iigante NHOH 0 >50000 W0200611754-9
Tabela 1

Claims (22)

1. Composto da fórmula (IA) ou (IB)1 ou um sal, N-óxido, hidrato ou solvato do mesmo: <formula>formula see original document page 96</formula> em que: R7 é hidrogênio ou (CrC6)alquila opcionalmente substituída; o anel A é um anel arila ou heteroarila opcionalmente substituído de 5-13 átomos de anel; Z é (a) um radical da fórmula R1R2CHNH-Y-L1-Xi-(CH2)2- em que: R1 é um grupo ácido carboxílico (-COOH), ou um grupo éster que é hidroli- sável por uma ou mais enzimas esterase intracelular em um grupo ácido carboxílico; R2 é a cadeia lateral de um alfa aminoácido natural ou sintético; Y é uma ligação, -C(=0)-, -S(=0)2-, -C(=0)0-, -C(=0)NR3-, -C(=S)-NR3 , - C(=NH)-NR3 ou -S(=0)2NR3- em que R3 é hidrogênio ou C1-C6 alquila opcio- nalmente substituída; L1 é um radical divalente da fórmula -(AIk1)m(Q)n(AIk2)p- em que m, η e ρ são independentemente 0 ou 1, Q é (i) um radical carbocíclico ou heterocíclico mono ou bicíclico divalente opcionalmente substituído possuindo 5-13 elementos de anel ou (ii), no ca- so em que ρ é 0, um radical divalente da fórmula -Q1-X2- em que X2 é -O, - S- ou NRa- em que Ra é hidrogênio ou C1-C3 alquila opcionalmente substitu- ída, e Q1 é um radical carbocíclico ou heterocíclico mono ou bicíclico diva- lente opcionalmente substituído possuindo 5-13 elementos de anel, Alk1 e Alk2 representam independente e opcionalmente radicais C3-C7 ciclo- alquila divalentes substituídos, ou radicais C1-C6 alquileno, C2-C6 alquenile- no, ou C2-C6 alquinileno opcionalmente substituídos, lineares ou ramificados, que podem conter opcionalmente ou terminar em uma ligação éter (-O-), tioéter (-S-) ou amino (-NRa-) em que Ra é hidrogênio ou C1-C3 alquila op- cionalmente substituída; X1 é uma ligação, -C(=0)-; ou -S(=0)2-; -NR4C(=0)-, -C(=0)NR4-, - NR4C(=0)-NR5-, -NR4S(=0)2-, ou -S(=0)2NR4- em que R4 e R5 são indepen- dentemente hidrogênio ou C1-Ce alquila opcionalmente substituída; e ζ é O ou 1.
2. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que R7 é hi- drogênio.
3. Composto de acordo com a reivindicação 1 ou reivindicação2, em que o anel A é 1,4-fenileno ou 1,3-fenileno opcionalmente substituído.
4. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, em que os substituintes opcionais no anel A são selecionados de flúor, cloro, metila e trifluorometila.
5. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, em que Ri é um grupo éster da fórmula -(C=O)ORi4 em que R14é R8RgRioC- em que: (i) R8 é hidrogênio ou (CrC3)alquil-(Z1)a-[(CrC3)alquila]b- ou (C2-C3)alquenil- (Z1)a-[(CrC3)alquila]b- opcionalmente substituído, em que a e b são inde- pendentemente 0 ou 1 e Z1 é -O-, -S-, ou -NRn- em que Rn é hidrogênio ou (Ci-C3)alquila; e Rg e R10 são independentemente hidrogênio ou (C1- C3)alquil-; (ii) R8 é hidrogênio ou Ri2Ri3N-(Ci-C3)alquil- opcionalmente substituído em que R12 é hidrogênio ou (CrC3)alquila e Ri3 é hidrogênio ou (Ci-C3)alquila; ou Ri2 e R13 em conjunto com o átomo de nitrogênio ao qual estão anexados formam um anel heterocíclico monocíclico, opcionalmente substituído de 5- ou 6- átomos de anel ou sistema de anel heterocíclico bicíclico de 8 a 10 átomos no anel, e Rg e R1O são independentemente hidrogênio ou (C1- C3)alquil-; ou (iii) R8 e R9 tomados em conjunto com o átomo de carbono ao qual estão anexados formam um anel carbocíclico monocíclico opcionalmente substitu- ido de 3 a 7 átomos no anel ou sistema de anel carbocíclico bicíclico de 8 a átomos no anel e R10 é hidrogênio.
6. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, em que R1 é metila, etila, n- ou iso-propila, n-, sec- ou terc-butila, ciclo- hexila, alila, fenila, benzila, 2-, 3- ou 4-piridilmetila, N-metilpiperidin-4-ila, te- tra-hidrofurano-3-ila, metoxietila, indanila, norbornila, dimetilaminoetila ou grupo éster morfolinoetila.
7. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, em que Ri é ciclopentila ou um grupo éster terc-butila.
8. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes em que R2 é cicloexilmetila, ciclo-hexila, piridin-3-ilmetila, sec- butila, terc-butila, 1 -benziltio-1 -metiletila, 1-metiltio-1-metiletila ou 1- mercapto-1 -metiletila
9. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6 em que R2 é fenila, benzila, feniletila, ciclo-hexila, terc-butoximetila ou iso-butila.
10. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes em que o radical RiR2CHNH-Y-L1X1-(CH2)z- é selecionado de R1R2CHNH-(CH2)a-, R1R2CHNH-(CH2)aO-, e R1R2ChnH-CH2CH=CHCH2-, em que a é 1, 2, 3, 4 ou 5.
11. Composto de acordo com a reivindicação 1, selecionado do grupo consistindo em: /S/-{4-[4-carbamoil-5-(carbamoilamino)-2-tienil]benzil}-L-leucinato de ciclopen- tila, A/-{3-[4-carbamoil-5-(carbamoilamino)-2-tienil]benzil}-L-leucinato de ciclopen- tila, A/-{4-[4-carbamoil-5-(carbamoilamino)-2-tienil]-3-clorobenzil}-L-leucinato de ciclopentila A/-[(2E)-3-{4-[4-carbamoil-5-(carbamoilamino)-2-tienil]fenil}prop-2-en-1-il]-L- Ieucinato de ciclopentila, (2S)-{[(2E)-3-{4-[4-carbamoil-5-(carbamoilamino)-2-tienil]fenil}prop-2-en-1- il]amino}(fenil)acetato de ciclopentila, (2S)-({3-[4-carbamoil-5-(carbamoilamino)-2-tienil]benzil}amino)(fenil)acetato de ciclopentila A/-[(2£)-3-{4-[4-carbamoil-5-(carbamoilamino)tiofen-2-il]-3-metilfenil}prop-2- en-1-il]-L-leucinato de ciclopentila, (2S)-[(2-{3-[4-carbamoil-5-(carbamoilamino)-2- tienil]fenil}etil)amino](fenil)acetato de ciclopentila, /\/-{3-[4-carbamoil-5-(carbamoilamino)tiofen-2-il]benzil}-L-treoninato de ciclo- pentila, (2S)-({3-[4-carbamoil-5-(carbamoilamino)-2-tienil]benzil}amino)(ciclo- hexil)acetato de ciclopentila, A/-[(2E)-3-{3-[4-carbamoil-5-(carbamoilamino)-2-tienil]fenil}prop-2-en-1-il]-L- Ieucinato de ciclopentila, A/-{3-[4-carbamoil-5-(carbamoilamino)-2-tienil]benzil}-L-leucinato de terc- butila, e A/-(2-{3-[4-carbamoil-5-(carbamoilamino)-2-tienil]fenil}etil)-L-leucinato de ci- clopentila, e seus sais, N-óxidos, hidratos ou solvatos.
12. Composição farmacêutica compreendendo um composto como definido em qualquer uma das reivindicações precedentes em conjun- to com um ou mais veículos e/ou excipientes farmaceuticamente aceitáveis.
13. Uso de um composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 11 na preparação de uma composição para inibição da atividade de uma enzima IKK.
14. Uso de acordo com a reivindicação 13, para a inibição da atividade de ΙΚΚβ, ex vivo ou in vivo.
15. Uso de um composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 11, na fabricação de uma composição para o tratamento de doença neoplásica/proliferativa, imune ou inflamatória.
16. Método para inibição da atividade de uma enzima IKK com- preendendo contato da enzima com uma quantidade de um composto como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 11, eficaz para tal inibição.
17. Método de acordo com a reivindicação 16, para a inibição da atividade de ΙΚΚβ, ex vivo ou in vivo.
18. Método para o tratamento de doença neoplásica/proliferativa, imune ou inflamatória, que compreende administração a um indivíduo que sofre de tal doença de uma quantidade eficaz de um composto como defini- do em qualquer uma das reivindicações 1 a 11.
19. Uso de acordo com a reivindicação 13, ou um método de acordo com a reivindicação 18, para o tratamento da proliferação de célula cancerígena.
20. Uso de acordo com a reivindicação 13, ou um método de acordo com a reivindicação 18, para o tratamento de câncer hepatocelular ou melanoma.
21. Uso de acordo com a reivindicação 13, ou um método de acordo com a reivindicação 18, para o tratamento de câncer dos intestinos, câncer ovariano, cânceres da cabeça e pescoço e escamoso cervical, cân- ceres gástrico e pulmonar, oligodendrogliomas anaplásicos, glioblastoma multiforme ou meduloblastomas.
22. Uso de acordo com a reivindicação 13, ou um método de acordo com a reivindicação 18, para o tratamento de artrite reumatóide, pso- ríase, doença dos intestinos inflamados, doença de Crohn, colite ulcerativa, doença pulmonar obstrutiva crônica, asma, esclerose múltipla, diabetes, dermatite atópica, doença de enxerto versus hospedeiro ou lúpus eritemato- so sistêmico.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB0619753D0 (en) 2006-10-06 2006-11-15 Chroma Therapeutics Ltd Enzyme inhibitors
GB0803747D0 (en) 2008-02-29 2008-04-09 Martin Enzyme and receptor modulation
EP2297128B1 (en) * 2008-04-23 2012-08-15 Chroma Therapeutics Ltd. Inhibitors of ikk- serine-threonine protein kinase
MX2010011643A (es) * 2008-04-26 2010-11-30 Chroma Therapeutics Ltd Tiofencarboxamidas sustituidas como inhibidores de la proteina cinasa ikk-beta serina, treonina.
CA2744360A1 (en) * 2008-11-26 2010-06-03 Trt Pharma Inc. Hybrid -ionone and curcumin molecules as anticancer agents
GB0903480D0 (en) 2009-02-27 2009-04-08 Chroma Therapeutics Ltd Enzyme Inhibitors
GB0907120D0 (en) * 2009-04-24 2009-06-03 Chroma Therapeutics Ltd Inhibitors of IKK-ß serine-threonine protein kinase
GB201211310D0 (en) 2012-06-26 2012-08-08 Chroma Therapeutics Ltd CSF-1R kinase inhibitors
PL3222616T3 (pl) 2012-10-17 2019-12-31 Macrophage Pharma Limited N-[2-{4-[6-amino-5-(2,4-difluorobenzoilo)-2-oksopirydyn-1(2h)-ylo]-3,5-difluorofenylo}etylo)-L-alaninian tert-butylu lub jego sól, hydrat lub solwat
AU2014362231B2 (en) * 2013-12-11 2019-04-04 Biogen Ma Inc. Biaryl compounds useful for the treatment of human diseases in oncology, neurology and immunology
GB201713975D0 (en) 2017-08-31 2017-10-18 Macrophage Pharma Ltd Medical use

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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SE0102616D0 (sv) 2001-07-25 2001-07-25 Astrazeneca Ab Novel compounds
SE0300092D0 (sv) * 2003-01-15 2003-01-15 Astrazeneca Ab Novel compounds

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