BRPI0719319A2

BRPI0719319A2 - Liberação colônica usando contas de zn/pectina com um revestimento de eudragit

Info

Publication number: BRPI0719319A2
Application number: BRPI0719319-0A
Authority: BR
Inventors: Antoine Andremont; Helene-Celine Huguet
Original assignee: Da Volterra
Priority date: 2006-11-17
Filing date: 2007-11-16
Publication date: 2014-02-04
Also published as: CN101795675A; EP2081557A1; CA2678131A1; JP2010510196A; WO2008059062A1; AU2007321111A1

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "LIBERAÇÃO COLÔNICA USANDO CONTAS DE Zn/PECTINA COM UM REVESTIMEN- TO DE EUDRAGIT".

Campo da Invenção

A presente invenção é na área de sistemas de liberação de fár- maco oral para administrar agentes ativos, tais como enzimas metalo- específicas, ao cólon.

Antecedentes da Invenção

Sistemas de liberação de fármaco que especificamente liberam agentes ativos ao cólon foram reconhecidos como tendo vantagens terapêu- ticas importantes. Um número grande de condições colônicas poderia ser efetivamente tratado mais eficazmente se o ingrediente ativo fosse localmen- te liberado. Exemplos de tais distúrbios colônicos incluem doença de Crohn, colite ulcerativa, câncer colorretal e constipação.

Liberação colônica pode também beneficiar pacientes quando, de um ponto de vista terapêutico, uma demora em absorção for necessária. Exemplos incluem o tratamento de distúrbios tais como asma noturna ou angina (Kinget R. et al. (1998), Colonic Drug Targeting, Journal of Drug Tar- geting, 6, 129).

Liberação colônica pode ser também usada para administrar po- lipeptídeos terapeuticamente ativos. Polipeptídeos são tipicamente adminis- trados por injeção, porque eles são degradados no estômago. Porque inje- ção é dolorosa, esforços investigatórios focalizaram em usar o cólon como um sítio de absorção para polipeptídeos ativos, incluindo analgésicos, con- servantes, vacinas, insulina, e similares. A absorção dos polipeptídeos no cólon parece ser mais eficaz que em outros sítios no trato digestivo. Isto é particularmente devido à atividade proteolítica relativamente fraca no intesti- no delgado e a ausência da atividade da peptidase associada à membrana das células epiteliais colônicas.

Seguindo sua administração oral, os antibióticos atravessam o estômago e são depois absorvidos no intestino delgado para espalhar no organismo inteiro e tratar o(s) sítio(s) de erupção infecciosa ao(s) qual(is) eles foram administrados. Igualmente, uma fração de antibióticos ingerida (a importância desta fração varia com as características de cada antibiótico) não é absorvida e continua seu progresso para o cólon antes de ser elimina- do nas fezes. Estes antibióticos residuais são combinados, no intestino gros- 5 so, com uma fração dos antibióticos absorvidos, mas que são re-excretados no trato digestivo por meio de eliminação biliar. Esta fração é de importância variável como uma função do metabolismo e das vias de eliminação para cada antibiótico. Por fim, para certos antibióticos, uma fração da dose absor- vida é eliminada diretamente do sangue através da mucosa intestinal de vol- 10 ta para o lúmen do trato digestivo, um bom exemplo é conhecido com cipro- floxacina. Desse modo, se administrados oral ou parenteralmente, uma fra- ção residual dos antibióticos ativos é em geral encontrada no cólon. Este é o caso, em graus variados, para a grande maioria dos antibióticos das várias famílias usadas nas terapêuticas, com a exceção notável exclusiva dos anti- 15 bióticos da família aminoglicosídeo para os quais excreção intestinal é insig- nificante. Para outros antibióticos, excreção intestinal de uma atividade anti- biótica residual terá uma variedade de conseqüências, todas prejudiciais. De fato, o cólon abriga um ecossistema bacteriano complexo e muito denso (vá- rias centenas de espécies bacterianas diferentes; mais que 1011 bactérias 20 por grama de conteúdo colônico) que será afetado pela chegada dos resí- duos antibióticos ativos. O seguinte pode ser observado:

1. Desequilíbrio da flora que é a causa principal de diarréia banal ocorrendo seguindo tratamentos com antibióticos (Bartlett J. G. (2002) Clini- cai practice. Antibiotic associated diarréia, /Vew England Journal of Medicine,

346, 334). Embora esta diarréia seja em geral não séria e cessa rapidamen- te, ou espontaneamente ou na conclusão do tratamento com antibióticos, é adversamente percebido pelos pacientes e soma ao desconforto da enfermi- dade original para a qual o antibiótico foi prescrito;

2. Interferência com a resistência à colonização através de bac- térias exogênicas (ou "efeito de barreira") com possível risco de infecção, tal

como intoxicação alimentar de salmonela (Holmberg S. D. et al. (1984) Drug resistant Salmonella from animais fed antimicrobials, New England Journal of Medicine, 311,617);

3. Seleção de micro-organismos resistentes ao antibiótico. Estes micro-organismos podem ser de vários tipos:

a) primeiro eles podem ser bactérias patogênicas tais como por exemplo, Clostridium difficile, uma espécie capaz de segregar toxinas que

causam uma forma de colite conhecida como colite pseudomembranosa (Bartlett J. G. (1997) Clostridium difficile infection: pathophysiology and diag- nosis, Seminar in Gastrointestinal Disease, 8, 12);

b) eles podem também ser micro-organismos que são patogêni- cos relativamente fracos, mas cuja multiplicação pode levar a uma infecção

associada (Candidose vaginal ou cistite resistente a Escherichia coli).

c) eles podem ser por fim bactérias resistentes a fármaco co- mensal não-patogênico cuja multiplicação e eliminação fecal aumentarão a disseminação da resistência ao antibiótico no ambiente. Está bem documen-

tado que os genes de resistência a antibióticos são carregados por elemen- tos genéticos móveis ou transponíveis que podem conter até 5 ou 6 genes de resistência a antibióticos, e são facilmente transmitidos a outras bacté- rias, até mesmo ao longo das espécies. Por conseguinte, estas bactérias comensais resistentes podem constituir uma fonte importante que leva à re- 20 sistência a fármacos para espécies patogênicas. Este risco é correntemente considerado seminal em termos do caráter inquieto da evolução para muItir- resistência a fármacos por numerosas espécies patogênicas para seres hu- manos.

Seria, portanto desejável ter fármacos e sistemas de liberação de fármaco que agiriam para reduzir a quantidade de antibióticos residuais que alcançam o cólon seguindo terapia antibiótica oral ou parenteral.

Numerosas estratégias que exploram os diversos parâmetros fisiológicos do trato digestivo foram inventadas com a meta para liberar in- gredientes ativos no cólon. Estas estratégias focalizaram em sistemas de 30 liberação de fármaco com base em (1) usar polímeros que são sensíveis às variações no pH, (2) formas de liberação de fármaco tempo-dependente, (3) pró-medicamentos ou polímeros degradantes por bactérias da flora intesti- nal.

Seria vantajoso ter sistemas de liberação de fármaco adicional que permita a administração de agentes ativos ao cólon, incluindo, mas não limitado a, agentes que reduzem a quantidade de antibióticos residuais no 5 cólon. A presente invenção fornece tais sistemas de liberação de fármaco. Sumário da Invenção

Sistemas de liberação de fármaco que podem liberar agentes profiláticos, terapêuticos e/ou diagnósticos ao cólon são revelados. Os sis- temas incluem contas de pectina reticulada por exemplo com um cátion de 10 metal zinco ou qualquer cátion divalente de interesse cujas contas são de- pois revestidas com polímeros do tipo Eudragit®.

Outras modalidades são expostas nas reivindicações que são aqui incorporadas em sua totalidade por referência.

Os sistemas de liberação de fármaco sao oralmente administrá- 15 veis, mas podem liberar os agentes ativos ao cólon. Em algumas modalida- des, eles podem administrar os agentes em várias posições no trato gastrin- testinal, incluindo o cólon.

Em uma modalidade, o agente terapêutico é um agente capaz de reduzir a quantidade residual de antibióticos residuais que alcançam o

1 20 cólon seguindo terapia antibiótica oral ou parenteral, tal como uma enzima metalo-dependente. Aplicação é ilustrada para β-lactamase L1 de Stenotro- phomonas maltophilia. Porém, pode-se também usar β-lactamases que não sejam metalo-enzimas (classes A, C ou D). Além disso, pode-se usar enzi- mas, metalo-dependente ou não, para inativar outras classes de antibióticos 25 tais como macrolídeos, quinolonas e fluoriquinolonas, glicopeptídeos, Iipo- peptídios, ciclinas, oxazolidinonas, e outras classes de antibióticos. As enzi- mas podem ter a seqüência total da enzima nativa, ou pode ser truncada ou do contrário modificada contanto que elas mantenham a atividade aceitável. Agentes de liberação capazes de reduzir a quantidade de antibióticos resi- 30 duais que alcançam o cólon seguindo terapia antibiótica oral ou parenteral podem limitar o desenvolvimento da resistência bacteriana. Em outras moda- lidades, os agentes terapêuticos incluem, mas não são limitados a: • Peptídeos e proteínas (incluindo, mas não limitadas a, enzi- mas, hormônios, citocinas, linfocinas, fatores de crescimento, anticorpos, e similares) quer naturais, sintéticos ou recombinantes;

• Ácidos nucleicos e compostos incluindo elementos de ácidos 5 nucleicos (incluindo, mas não limitados a, plasmídeos, oligonucleotídeos (o-

ligorribonucleotídeos, deoxirribonucleotídeos, SiRNAs ou ShRNAs de vários comprimentos, e moléculas misturadas, incluindo bases naturais e/ou modi- ficadas, e opcionalmente contendo substituições e modificações), como também ácidos nucleicos de peptídeo;

· Estruturas complexas de origem natural, recombinante ou sin-

tética, incluindo, mas não limitadas a, vírus (incluindo DNA e RNA vírus, ví- rus que marcam células animais, vírus que marcam células vegetais, ou ví- rus que marcam bactérias melhores conhecidas como bacteriófagos), bacté- rias (em qualquer forma, incluindo esporos), micoplasmas, leveduras e ou-

tros eucariotos unicelulares (em qualquer forma, incluindo esporos)

• Moléculas químicas naturais, sintéticas ou misturadas ou mistu- ras das mesmas de qualquer tamanho, classe ou estrutura;

• Compostos para uso em diagnose, tratamento ou investigação de seres humanos e animais para qualquer razão ou condição, incluindo do-

enças infecciosas (incluindo, mas não limitadas, às de origem bacteriana e viral), doenças inflamatórias, cânceres;

• Compostos para ajudar, complementar ou modificar um trata- mento com agentes anti-infecciosos, anti-inflamatórios, agentes anticâncer, agentes imunomodificadores, e outros, particularmente onde tal ajuda, com-

plementação, ou modificação referir-se à habilidade de bloquear ou modular a atividade dos receptores no cólon, ou inativar outros agentes terapêuticos que poderiam modular a atividade dos receptores no cólon.

Liberação cólon-específica é obtida mediante formulação de um agente profilático, terapêutico, e/ou diagnóstico, tal como uma enzima meta-

lo-dependente ou outro agente capaz de reduzir a quantidade de antibióticos residuais que alcançam o cólon seguindo terapia de antibiótico oral ou pa- renteral, com polímeros específicos que se degradam no cólon, tais como pectina. A pectina é gelificada/reticulada com um cátion tal como um cátion de zinco. A formulação, tipicamente na forma de contas de pectina ionica- mente reticulada, é subsequentemente revestida com um polímero específi- co tal como um polímero de Eudragit®.

A liberação pode ser modulada para ocorrer em vários sítios pré-

selecionados de liberação dentro do trato intestinal através de gelifica- ção/reticulação de uma mistura do agente profiláctico, terapêutico, e/ou di- agnóstico e pectina, com cátions metálicos divalentes tais como Ca2+ ou Zn2+.

10 Esforços anteriores focalizaram em revestir contas de pectina

com polímeros catiônicos tais como imina de polietileno (PEI), quitosana ou outros polímeros catiônicos, para impedir as contas de pectina de se degra- darem no trato gastrintestinal superior. Tais esforços são descritos, por e- xemplo, no Pedido de Patente U. S. 10/524.318, e Pedido de Patente U. S.

15 N0 60/651.352, os conteúdos destas são por este meio incorporados por re- ferência.

A presente invenção refere-se ao revestimento das contas de pectina com polímeros de Eudragit® tais como FS30D, L30D (também co- nhecidos como L30D-55), NE30D, misturas dos mesmos ou outros tipos de-

* 20 sejáveis de polímeros de Eudragit® para alcançar a liberação desejada do agente profiláctico, terapêutico e/ou diagnóstico em níveis predefinidos do trato gastrointestinal (GIT).

Quando o revestimento de Eudragit® for dissolvido, de acordo com certos parâmetros tais como pH ou tempo, as contas são degradadas 25 preferencialmente por enzimas pectinolíticas encontradas na parte inferior do trato intestinal. Degradação da pectina depois libera o agente profiláctico, terapêutico e/ou diagnóstico encapsulado dentro da conta.

Um aspecto da invenção é prover uma formulação de metalo- enzima estável para a liberação intestinal ou colônica inferior de uma tal en- 30 zima. O uso de cátions de zinco para reticular a pectina é particularmente preferido quando as enzimas metalo-dependentes específicas, que são de- pendentes de Zn2+, puderem interagir com as outras espécies catiônicas se elas forem usadas para gelificar as contas de pectina. Tais interações pode- riam drasticamente afetar a atividade de tais enzimas metalo-dependentes. Consequentemente, uma modalidade do sistema de liberação de fármaco envolve usar íons de Zn2+ como um agente reticulante para as contas de 5 pectina e em associação com as enzimas Zn+-dependentes que são muito sensíveis à presença de outros cátions competitivos. Claro que, se as enzi- mas forem dependentes de outros cátions de metal, tais outros cátions de metal (se eles tiverem uma valência excedendo a +1) podem ser usados pa- ra reticular a pectina.

Os processos para se obter tais contas podem envolver condi-

ções processuais específicas, tais como tempo para gelificação, lavagem, e secagem, que podem ser otimizados para fornecer contas de qualidade mais altas, com eficácia otimizada in vitro e in vivo. Portanto, outra modalidade da invenção refere-se aos processos para preparar contas de pectina reticula- 15 das com zinco e revestidas com Eudragit®.

Breve Descrição das Figuras

Figura 1 é um gráfico que mostra a eficiência do enxágüe de á- gua para remover cátions metálicos em excesso de uma formulação de β- Iacatamase L1 em contas de pectina reticuladas com acetato de zinco, me- 20 didas em termos de condutividade (mS/cm) por amostra seguindo várias la- vagens.

Figura 2 é um gráfico que mostra o efeito de tempo de gelifica- ção, processo de enxágüe, e tempo de secagem sob restabelecimento da atividade de β-lactamase L1.

Figura 3 é um gráfico que mostra a atividade enzimática de β-

Iactamase L1 usando CENTA como um substrato, medida em termos de resposta (OD/min) versus concentração de L1 (pg/ml).

Figura 4 é uma série de micrógrafos de elétrons de varredura que mostram contas revestidas com Eudragit preparadas usando os méto- 30 dos descritos aqui, e um corte transversal das contas mostrando a espessu- ra aproximada da camada de Eudragit.

Figura 5 é um quadro mostrando a cinética de liberação da β- * Iactamase L1 de contas não-revestidas, e contas revestidas com Eudragit com ou sem pré-revestimento de hidroxipropil metil celulose (HPMC), medi- da em termos da atividade (pg/mg de contas) versus tempo (minutos). Tri- ângulos azuis representam contas não-revestidas; círculos vermelhos repre- 5 sentam contas revestidas com 40 % de Eudragit L30D-55 sem pré- revestimento; quadrados verdes representam contas pré-revestidas com 5 % de HPMC e revestidas com 40 % de Eudragit L30D-55.

Figura 6 é um quadro mostrando a hidrólise de amoxicilina por contas não-revestidas, e revestidas com Eudragit com ou sem um pré- 10 revestimento de hidroxipropil metil celulose (HPMC), medida em termos de amoxicilina residual (%) versus tempo (minutos). Triângulos azuis represen- tam contas não-revestidas; círculos vermelhos representam contas revesti- das com 40 % de Eudragit L30D-55 sem pré-revestimento; quadrados ver- des representam contas pré-revestidas com HPMC e revestidas com Eudra- 15 git L30D-55.

Figura 7 é um quadro mostrando o efeito das contas de pectina revestidas com Eudragit contendo β-lactamase L1 sob surgimento de bacté- rias resistentes a antibiótico em porquinho tratados com amoxicilina, medida em termos de bactérias resistentes à amoxicilina (%) versus duração do tra- > 20 tamento (dias). Triângulos azuis representam animais sem tratar (n=12); lo- sangos vermelhos representam animais tratados com amoxicilina e contas de pectina de placebo (n=12); quadrados verdes representam animais trata- dos com amoxicilina junto com contas de pectina revestidas com Eudragit contendo β-lactamase L1 (n=4).

Descrição Detalhada da Invenção

Os sistemas de liberação de fármaco descritos aqui serão me- lhores entendidos com referência à descrição detalhada a seguir.

I. CONTAS DE PECTINA

As contas de pectina são formadas de pectina, íons de zinco, e outro revestimento com polímeros de Eudragit® e encapsuladas com um ou mais agentes ativos.

Estabilidade e proteção das contas de pectina em meio gástrico e meio intestinal são asseguradas pelo revestimento de polímero de Eudragit ®. Em contraste, as contas não-revestidas com pectina tendem não ser es- táveis em um tal ambiente e podem não proteger adequadamente seus con- teúdos contra degradação e/ou inativação. O revestimento de Eudragit ® 5 assegura que elas resistam o bastante de forma que seus conteúdos sejam capazes de alcançar o cólon intactos.

Pectina

Pectina é um polissacarídeo isolado das paredes celulares de plantas superiores, usada amplamente na indústria alimentícia agrícola (co- 10 mo um coágulo ou espessante para geleias, sorvetes e outros) e ciência farmacêutica. Ela é polimolecular e polidispersada. Sua composição varia, dependendo da fonte, condições de extração e fatores ambientais. Pectinas são principalmente compostas de cadeias lineares de ácido beta-1,4-(D)- galacturônico, às vezes entremeadas por unidades de ramnose. Os grupos 15 carboxílicos do ácido galacturônico podem ser parcialmente estereficados para render pectinas metíladas. Dois tipos de pectinas são distinguidos de acordo com seu grau de metilação (DM: número de grupos metóxi por 100 unidades de ácido galacturônico):

- pectina altamente metilada (HM:metóxi alto) onde o grau de metilação varia entre 50 e 80 %. É ligeiramente solúvel em água e forma

géis em meio acídico (pH < 3,6) ou na presença de açúcares;

- pectina metilada fraca (LM:metóxi baixo), com um grau de meti- lação que varia de 25 a 50 %. Mais solúvel em água que a pectina HM, dá géis na presença de cátions divalentes tais como íons de Ca2+. De fato, os

íons de Ca2+ formam "pontes" entre os grupos carboxilados livres das meta- des de ácido galacturônico. A rede que é formada foi descrita por Grant et al. sob o nome de «modelo de caixa ovo» (Grant G. T. et al. (1973) Biological interactions between polysaccharides and divalent cátions: the egg-box mo- del, FEBS Letters, 32, 195).

Há também pectinas amidadas. Tratamento de pectina por amô-

nio transforma alguns grupos carboxilato de metila (-COOCH3) em grupos carboxamida (-CONH2). Esta amidação confere propriedades novas às pec- * tinas, em particular resistência melhor às variações no pH. Pectinas amida- das tendem a ser mais tolerantes às variações no pH, e vem sendo estudas para a fabricação de comprimidos matriciais para liberação colônica (Waker- Iy Z. et al. (1997) Studies on amidated pectins as potential carriers in colonic drug delivery, Journal of Pharmacy and Pharmacology. 49, 622).

Pectina é degradada por enzimas que originam de plantas mais altas e vários micro-organismos (fungos, bactérias, e similares) entre as quais bactérias da flora colônica humana. As enzimas produzidas pela mi- croflora abrangem uma mistura de polissacaridases, glicosidases e estera- ses.

Cátions de Zinco

Cátions de zinco divalentes podem ser usados de vários sais de zinco para reticular a pectina. Exemplos incluem sulfato de zinco, cloreto de zinco, e acetato de zinco.

Na presente invenção, os agentes para revestimentos entéricos

são preferivelmente copolímeros de ácido metacrílico - acrilato de alquila, tais como polímeros de Eudragit®.

Polímeros de Eudragit®

O revestimento dos núcleos carregados com fármaco, tais como 20 comprimidos, cápsulas, grânulos, péletes ou cristais, oferece muitas vanta- gens sobre as contrapartes não-revestidas, tais como estabilidade fisicoquí- mica mais alta, complacência melhor e eficiência terapêutica aumentada dos ingredientes ativos. De fato, a eficácia de uma medicação não só depende dos ativos que ela contém, mas também da formulação e processamento.

Poli(met)acrilatos provaram-se particularmente adequados como

materiais de revestimento. Estes polímeros, tipicamente usados em quanti- dades de apenas alguns miligramas, são farmacologicamente inativos, isto é, são excretados inalterados.

EUDRAGIT® é o nome comercial para copolímeros derivados de ésteres de ácido acrílico e metacrílico cujas propriedades são determinadas através dos grupos funcionais. Os tipos de EUDRAGIT® individuais diferem em sua proporção de grupos neutros, alcalinos ou ácidos e, desse modo, em termos das propriedades fisicoquímicas. O uso hábil e combinação de dife- rentes polímeros de EUDRAGIT® oferecem soluções ideais para liberação de fármaco controlada em várias aplicações farmacêuticas e técnicas. EU- DRAGIT® provê filmes funcionais para comprimido de liberação contínua e 5 revestimentos de pelota. Os polímeros são descritos nas farmacopeias inter- nacionais tais como pH. Eur., USP/NF, DMF e JPE.

Polímeros de EUDRAGIT® podem prover as possibilidades a seguir para liberação de fármaco controlada:

• Alvejamento do trato gastrointestinal (gastrorresistência, Iibera- ção no cólon)

• Revestimentos protetores (mascaramento de gosto e odor, pro- teção contra umidade)

• Liberação de fármaco (formulações de liberação contínua).

Polímeros de EUDRAGIT® estão disponíveis em uma gama ex-

tensiva de diferentes concentrações e formas físicas, incluindo soluções a- quosas, dispersão aquosa, soluções orgânicas, e substâncias sólidas.

As propriedades farmacêuticas dos polímeros de EUDRAGIT® são determinadas pelas propriedades químicas de seus grupos funcionais. Uma distinção é feita entre:

· Poli(met)acrilatos, solúveis em fluidos digestivos (através de

formação de sal)

EUDRAGIT® L (Copolímero de ácido metacrílico), S (Copolíme- ro de ácido metacrílico), polímeros FS e E (Copolímero de metacrilato butila- do básico) com grupos acídicos ou alcalinos permitem liberação pH- dependente do ingrediente ativo.

Aplicações: de mascaramento de gosto simples somente por meio de resistência ao fluido gástrico, para liberação de fármaco controlada em todas as seções do intestino.

• Poli(met)acrilatos, insolúveis em fluidos digestivos Polímeros de EUDRAGIT® RL e RS (copolímeros de metacrilato

de amônia) com polímeros alcalinos e de EUDRAGIT® NE com grupos neu- tros permitem a liberação de tempo controlado do ativo através de inchação pH-independente.

Informações sobre polímeros de Eudragit são encontradas em: http://www.pharma-

polymers.com/pharmapolymers/en/eudragit/entericcoatings/ e em 5 http://www.pharma-

polimers.com/pharmapolymers/en/eudragit/regulatorytoxicology/ Revestimentos Entéricos: Gastrorresistência e Liberação no Cólon

Revestimentos entéricos de EUDRAGIT® fornecem proteção contra liberação de fármaco no estômago e permitem liberação controlada no intestino. Liberação de fármaco marcada no trato gastrintestinal é reco- mendada para aplicações particulares ou estratégias terapêuticas, por e- xemplo quando o fármaco é fracamente solúvel no trato digestivo superior, ou quando o fármaco pode ser degradado pelo fluido gástrico. Em segundo lugar, esta forma de dosagem é muito amigável ao paciente como não es- tressa o estômago e o número de doses do fármaco terapêutico pode ser consideravelmente reduzido, graças à liberação prolongada. O critério domi- nante para liberação é a dissolução pH-dependente do revestimento que ocorre em uma certa seção do intestino (pH 5 a mais de 7) ao invés do es- tômago (pH 1-5). Para estas aplicações, EUDRAGIT® tipo aniônico conten- >■ 20 do grupos carboxila pode ser misturado entre si. Isto torna possível finamen- te ajustar o pH da dissolução, e desse modo definir o sítio de liberação do fármaco no intestino. EUDRAGIT® tipos LeS são adequados para revesti- mentos entéricos. EUDRAGIT® FS 30 D (dispersão aquosa de um copolíme- ro aniônico com base em acrilato de metila, metacrilato de metila e ácido metacrílico) é especificamente usado para liberação controlada no cólon.

Benefícios da aplicação dos revestimentos de EUDRAGIT® en- téricos incluem:

• liberação de fármaco pH-dependente

• proteção dos ativos sensíveis ao fluido gástrico

30 · proteção da mucosa gástrica dos ativos agressivos

• aumento na eficácia do fármaco

• estabilidade de armazenamento boa • liberação controlada no alvejamento do cólon/GI Agentes Ativos

O agente ativo pode ser um anti-infeccioso, por exemplo antibió- ticos, compostos anti-inflamatórios, anti-histaminas, anticolinérgicos, antivi- 5 rais, antimitóticos, peptídeos, proteínas, enzimas, ácidos nucleicos (RNA ou DNA), ácidos nucleicos de peptídeo, plasmídeos, genes, oligonucleotídeos de antissentido, RNA interferente, ribozimas, moléculas pequenas com ca- pacidades de ligação ou atividades específicas (tais como quimioterapêutica marcada), agentes de diagnósticos, agentes imunossupressores, vírus, bac- 10 térias, outros micro-organismos ou células eucarióticas.

O agente ativo pode ser introduzido no sistema de liberação de fármaco como um pó, uma solução, uma suspensão, ou complexado com um agente solubilizante, tais como uma cíclodextrina ou qualquer outro com- posto adequado.

Alguns dos agentes ativos descritos aqui podem ser administra-

dos na forma de pró-medicamentos. Pró-medicamentos veem sendo am- plamente estudados para o alvejamento colônico de vários ingredientes ati- vos (tais como fármacos anti-inflamatórios esteroides e não-esteroides, e espasmolíticos).

Estes sistemas são com base na capacidade das enzimas pro-

duzidas pela flora colônica para agir nos pró-medicamentos para liberar a forma ativa do ingrediente ativo.

Os pró-medicamentos podem ser com base na ação das azorre- ductases bacterianas, de forma que os agentes ativos são marcados no có- 25 Ion com os sistemas de liberação de fármaco descritos aqui, e os agentes ativos são formados por reação do pró-medicamento com uma azorreducta- se bacteriana que provê um mecanismo dual para assegurar que os fárma- cos são administrados ao cólon. Química representativa para formar tais pró- medicamentos é descrita, por exemplo, em Peppercorn Μ. A. et al. (1972) 30 The role of intestinal bactéria in the metabolism of salicylazosulfapyridin, The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics, 181, 555 e 64, 240. *· Outro método consiste em usar hidrolases bacterianas tais como

glicosidases e polissacaridases (Friend D. R. (1995) Glycoside prodrugs: novel pharmacotherapy for colonic diseases, S. T. P. Pharma Sciences, 5, 70; Friend D. R. et al. (1984) A colon-specific drug-delivery system based on 5 drug glycosides and the glycosidases of colonic bactéria, Journal of Medici- nal Chemistry, 27, 261; Friend D. R. et al. (1985) Drug glycosides: potential prodrugs for colon-specific drug delivery, Journal of Medicinal Chemistry, 28, 51; e Friend D.R. et al. (1992) Drug glycosides in oral colon-specific drug delivery, Journal of Controlled Release, 19, 109). Pró-medicamentos veem 10 sendo assim desenvolvidos acoplando, por exemplo, açúcar com esteroides (glicose, galactose, celobiose, dextrana (pedido de patente internacional WO 90/09168)), ciclodextrinas Hirayama F. et al. (1996) In vitro evaluation of Bi- phenylyl Acetic Acid-beta-Cyclodextrin conjugates as colon-targeting pro- drugs: drug release behavior in rat biological media, Journal of Pharmacy 15 and Pharmacology, 48,27).

a) Agentes que Inativam Antibióticos

Em uma modalidade, o agente ativo é uma enzima capaz de ina- tivar antibióticos no cólon. Qualquer agente que inativa um antibiótico pode ser administrado.

Quando o antibiótico for um antibiótico beta-lactama, β-

Iactamases podem ser usadas. A enzima selecionada, isto é, β-lactamase L1, uma β-lactamase Zn2+-dependente de Stenotrophomonas maltophilia, foi escolhida de uma série de β-lactamases porque suas características mostra- ram o melhor perfil para a aplicação marcada. Também, foi demonstrada ter 25 um perfil de estabilidade excelente. As características das várias β- Iaetamases avaliadas são descritas daqui por diante.

Há uma variedade de enzimas que são conhecidas ser metalo- dependentes, além da enzima β-lactamase L1 debatida acima. Quando de- sejar-se administrar tais enzimas a um paciente por meio de administração 30 oral, cuidado deve ser tomado para evitar ter a enzima digerida no estômago ou intestino superior. Consequentemente, o sistema de liberação de fármaco descrito aqui pode ser vantajosamente usado para liberar tais enzimas meta- lo-dependentes. O cátion usado para reticular a pectina compreende o cátion do qual a enzima depende.

Uma enzima representativa é β-lactamase L1, um β-lactamase de Zn2+-dependente de Stenotrophomonas maltophilia, que foi escolhida de 5 uma série de β-lactamases porque suas características mostraram o melhor perfil para a aplicação marcada. Também, demonstrou ter um perfil de esta- bilidade excelente. As características das várias β-lactamases avaliadas são descritas daqui por diante.

Quando o antibiótico for de outra classe de antibióticos, as enzi- mas ou outras moléculas que inativam tais antibióticos podem ser usadas. Um tal exemplo seria usar uma eritromicina esterase para inativar antibióti- cos de macrolídeo.

Uma eritromicina esterase representativa é aquela revelada por Andremont A. et al. ((1985) "Plasmid mediated susceptibility to intestinal 15 microbial antagonisms in Escherichia coli", Infect. Immun. 49(3):751), os con- teúdos desta são por este meio incorporados por referência. Quando o anti- biótico for uma quinolona, o agente ativo pode ser um capaz de inativar as quinolonas. Agentes representativos incluem aqueles revelados por Chen, Y et al. ((1997) "Microbicidal models of soil metabolisms biotransformations of 20 danofioxacin", Journal of Industrial Microbiology and Biotechnology 19:378).

Os pacientes podem ser tratados com combinações destes a-

gentes.

Enzimas de β-lactamase representativas, e sua eficácia em vá- rios antibióticos, são mostradas na Tabela 1.

Tabela 1

Antibióticos FEZ-1* Km(MM) Kcat/K™ L-1 (p)** Km KcatZKm Kcat (S_1) (μΜ/S'1) Kcat (S-1) (μΜ) (μΜ/S’1) Penicilina Benzilpenicilina 70 590 0,11 600 38 16 Ampicilina >5,5 >5000 0,011 520 55 9,5 Cabenicilina 35 1600 0,023 Continuação...

Pipericilina 50 4200 0,012 Azloeilina Mezloeilina Tiearcilina >65 >5000 0,013 Timoeilina Cefalosporina Cefaloridina 16 1000 0,016 Cefalotina 300 120 2,5 82 8,9 9,2 Cefoxitina 1 3 0,33 Cefuroxina Cefotaxim 165 70 2,4 270 10 27 Ceftazidina Cefepim >6 >1000 0,006 Cefpirom Nitroeefina 90 100 0,9 41 4 10 Moxalaetama 3 18 0,17 Carbapenem Imipenem >200 >1000 0,2 370 57 6,5 Meropenem 45 85 0,5 157 15 10 Biapenem 70 >1000 0,07 134 32 4,2 Monobactamas Aztreonam Carumonam Inativadores com base em meca¬ nismo Sulbaetama Tazobaetama 40 700 1,06 Ácido clavulânico <0,01 >1000 <0,000 11 22 0,5 01 Penicilina Benzilpenieilina 320 520 0,62 56 49 1,114 Ampieilina 950 200 4,8 125 90 1,4 I Cabenicilina 0,02 185 205 0,9 Pipericilina 0,72 300 125 2,4 Azlocilina 200 200 1 Mezloeilina 200 125 1,4 Tieareilina 1,1 740 0,0015 180 125 1,6 Timoeilina >2000 <0,0001 7,7 390 0,002 Cefalosporina Cefaloridina 53 22 2,4 140 50 2,8 Cefalotina 48 21 2,4 130 11 12 Cefoxitina 16 8 2 15 13 1,2 Cefuroxina 8 37 0,22 8 20 0,4 Cefotaxim 1,3 4 0,45 70 12 5,8 Ceftazidina 8 44 0,18 3,6 72 0,05 Cefepim 7 11 0,66 >40 >400 0,1 Cefpirom 9 14 0,64 180 180 1 Nitroeefina 63 27 2,3 770 18 43 Moxalaetam 90 55 1,6 Carbapenem Imipenem 46 39 1,2 34 9 3,8 Meropenem 50 10 5 2 2,5 Biapenem 160 28 6 8,5 15 0,55 Monobactamas Aztreonam >0,01 >1000 <0,0001 <0,01 >1000 <0,000 1 Carumonam >0,01 >1000 <0,0001 Inativadores com base em meca¬ nismo Sulbaetam 23 320 0,072 Tazobaetam 28 875 0,032 Ácido lavulânico * (Mercuri et al, Antimicrob. Agents. Chemother. abril de 2001; 45(4): 1254- 1262)

** (Carenbauer et al., BMC Biochem. 2002; 3:4. Epub fevereiro de 2002. 13; Frere1 2005, dados inéditos)

*** (Murphy et al, 2003, Antimicrob. Ag. Chemother. fevereiro de 2003, 47(2):582-7; Laraki et al., Antimicrob. Ag. Chemother. abril de 1999, 43 (4): 902-6)

5 **** (Docquier et al., J Antimicrob. Chemother. fevereiro de 2003, 51(2):257- 266)

b) Agentes que Tratam Câncer de Cólon

Quando os sistemas de liberação de fármaco são usados para tratar câncer de cólon, qualquer tipo de agente antitumor pode ser usado. Os 10 agentes antitumor podem ser, por exemplo, agentes antiproliferativos, agen- tes para modificação ou reparo de DNA, inibidores da síntese de DNA, regu- ladores de transcrição DNA/RNA, inibidores de processamento de RNA, a- gentes que afetam a expressão de proteína, síntese e estabilidade, agentes que afetam a localização da proteína ou sua habilidade para exercer sua 15 ação fisiológica, agentes que interferem com interações de proteína-proteína ou de proteína-ácido nucleico, agentes que agem através da interferência de RNA, moléculas de ligação de receptor de qualquer natureza química (inclu- indo moléculas pequenas e anticorpos), toxinas marcadas, ativadores de enzima, inibidores de enzima, reguladores de gene, inibidores de HSP-90,

1 20 moléculas que interferem com microtúbulos ou outros componentes citoes- queléticos ou adesão e motilidade celular, agentes para fototerapia, e adjun- tos de terapia.

Agentes antiproliferativos representativos incluem N-acetil-D- esfingosina (ceramida C2), apigenina, cloreto de berberina, sal de dissódio 25 de ácido diclorometilenodifosfônico, loe-emodina, emodin, HA 14-1, N- hexanoil-D-esfingosina (ceramida C6), 7b-hidroxicolesterol, 25- hidroxicolesterol, hiperforin, parthenolida, e rapamicina.

Agentes representativos para modificação e reparo de DNA in- cluem afidicolina, sulfato de bleomicina, carboplatina, carmustina, clorambu- 30 cil, monoidrato de ciclofosfamida, monoidrato de ciclofosfamida ISOP AC®, dicloreto de cis-diaminoplatina(ll) (Cisplatina), esculetina, melfalan, cloridrato de metoxiamina, mitomicina C, diídrocloreto de mitoxantrona, oxaliplatína, e estreptozocina.

Inibidores da síntese de DNA representativos incluem (±)ametopterina (metotrexato), 1,4-dióxido de 3-amino-l,2,4-benzotriazina, aminopterina, b-D-arabinofuranosídeo de citosina (Ara-C), cloridrato de b-D- 5 arabinofuranosídeo de citosina (Ara-C), 2-fluoroadenina-9-b-D- arabinofuranosídeo (desfosfato de fludarabina; F-ara-A), 5-fluoro-5’- deoxiuridina, 5-fluorouracil, ganciclovir, hidroxiureia, 6-mercaptopurina, e 6- tioguanina.

Reguladores de transcrição de DNA/RNA representativos inclu- em actinomicina D, cloridrato de daunorrubicina, 1-b-D-ribofuranosídeo de 5,6-diclorobenzimidazol, cloridrato de doxorrubicina, homo-harringtonina, e cloridrato de idarrubicina.

Ativadores e inibidores de enzima representativos incluem fors- colina, DL-aminoglutetimida, apicidina, inibidor de Bowman-Birk, buteína, 15 (S)-(+)-camptotecina, curcumina, (-)-deguelina, (-)-depudecina, hiclato de doxiciclina, etoposídeo, formestana, sal de sódio de fostriecina, hispidina, ácido 2-imino-l-imidazolidinoacético (Ciclocreatina), oxanflatina, ácido 4- fenilbutírico, roscovitina, valproato de sódio, tricostatina A, tirfostina AG 34, tirfostina AG 879, fragmento de inibidor de tripsina urinária, ácido valproico 20 (ácido 2-propilpentanoico), e XK469.

Reguladores de gene representativos incluem 5-aza-2’- deoxicitidina, 5-azacitidina, colecalciferol (Vitamina D3), ciglitizona, acetato de ciproterona, 15-deóxi-D1214-prostaglandina J2, epitestosterona, flutamida, sal de amônio de ácido glicirrízico (glicirrizina), 4-hidroxitamoxifeno, mifepris- 25 tona, cloridrato de procainamida, cloridrato de raloxifeno, todo trans-retinal (aldeído de vitamina A), ácido retinoico (ácido de vitamina A), ácido 9-cis- retinoico, ácido 13-cis-retinoico, p-hidroxianilida de ácido retinoico, retinol (Vitamina A), tamoxifeno, sal de citrato de tamoxifeno, ácido tetradeciltioacé- tico, e troglitazona.

Inibidores de HSP-90 representativos incluem 17-(alilamino)-17-

demetoxigeldanamicina e geldanamicina.

Inibidores de microtúbulo representativos incluem colquicinas, dolastatina 15, nocodazol, taxanos e em particular paclitaxel, podofilotoxina, rizoxina, sal de sulfato de vinblastina, sal de sulfato de vincristina, e sal de sulfato de vindesina e sal de ditartrato de vinorelbina (Navelbina).

Agentes representativos para executar fototerapia incluem anéis 5 de porfirina fotoativos, hipericina, 5-metoxipsoraleno, 8-metoxipsoraleno, psoraleno e ácido ursodeoxicólico.

Agentes representativos usados como adjuntos de terapia inclu- em amifostina, 4-amino-1,8-naftalimida, brefeldina A, cimetidina, sal de dis- sódio de fosfomicina, sal de acetato de Ieuprolida (leuprorrelina), sal de ace- 10 tato de hormônio de liberação de hormônio Iuteinizante (LH-RH), lectina, clo- ridrato de papaverina, pifltrina-a, bromidrato de (-)-escopolamina, e tapsigar- gina.

Os agentes podem também ser agentes anti-VEGF (fator de crescimento endotelial vascular), como tais são conhecidos na técnica. Vá- 15 rios anticorpos e moléculas pequenas estão correntemente em experimenta- ções clínicas ou foram aprovados que funcionam inibindo VEGF, tal como Avastina (Bevacizumab), SU5416, SU11248 e LADRA 43-9006. Os agentes podem também ser direcionados contra receptores de fator de crescimento tais como aqueles da família de EGF/Erb-B tais como Receptor de EGF (I-

1 20 ressa ou Gefitinib, e Tarceva ou Erlotinib), Erb-B2, receptor (Herceptina ou Trastuzumab), outros receptores (tais como Rituximab ou Ritu- xan/MabThera), tirosina cinases, tirosina cinases de não-receptor, seri- na/treonina cinases celulares (incluindo MAP cinases), e várias outras prote- ínas cujo desregramento contribui para oncogênese (tal como as proteínas 25 G de família pequena/Ras e grande/heterotriméricas). Vários anticorpos e moléculas pequenas que marcam aquelas moléculas estão correntemente em vários estágios de desenvolvimento (incluindo aprovados para tratamen- to ou em experimentações clínicas). Alguns dos agentes antitumor comu- mente usados correntemente em uso ou em experimentações clínicas inclu- 30 em paclitaxel, docetaxel, tamoxifeno, vinorelbina, gemcitabina, cisplatina, etoposida, topotecano, irinotecano, anastrozol, rituximab, trastuzumab, fluda- rabina, ciclofosfamida, gentuzumab, carboplatina, interferonas, e doxorrubi- cina. O agente anticâncer comumente usado é paclitaxel que é usado sozi- nho ou em combinação com outros fármacos de quimioterapia tais como: 5- FU, doxorrubicina, vinorelbina, Citoxan, e cisplatina.

Terapia de combinação pode ser fornecida combinando dois ou 5 mais dos compostos acima.

c) Agentes que Tratam a Doença de Chrohn

Há vários métodos terapêuticos para tratar doença de Chrohn. A maioria das pessoas é tratada primeiro com fármacos contendo mesalamina, uma substância que ajuda a controlar a inflamação. Sulfasalazina é o co- 10 mumente usado destes fármacos. Pacientes que não beneficiam deste ou que não podem tolerar o mesmo podem ser postos em outros fármacos con- tendo mesalamina, em geral conhecido como agentes 5-ASA, tais como A- sacol, Dipentum, ou Pentasa. Corticosteroides são frequentemente adminis- trados para controlar inflamação.

Agentes imunossupressores são também usados para tratar do-

ença de Crohn. Comumente prescrito é 6-mercaptopurina e um fármaco re- lacionado, azatioprina. Agentes imunossupressores trabalham bloqueando a reação imune que contribui para a inflamação.

Podem ser tratados os pacientes com combinações destes a- gentes, por exemplo, combinações de corticosteroides e fármacos imunos- supressores.

A U. S. Food and Drug Administration aprovou o fármaco inflixi- mab (marca, Remicade) para o tratamento de doença de Crohn moderada a severa que não responde às terapias padrão (substâncias de mesalamina, 25 corticosteroides, agentes imunossupressores) e para o tratamento de fístulas abertas com dreno. Infiiximab é um anticorpo do fator alfa antitumoral de ne- crose (TNF-alfa). Estes e outros agentes anti-TNF-alfa podem ser usados para remover TNF-alfa do cólon, assim impedindo inflamação, sem os efei- tos colaterais que poderiam resultar se TNF-alfa fosse removido do fluxo 30 sanguíneo fora do cólon.

Agentes antidiarreicos são frequentemente também administra- dos, incluindo difenoxilato, loperamida, e codeína. d) Agentes que Tratam Colite Ulcerativa

Os agentes que são usados para tratar colite ulcerativa sobre- põem aqueles usados para tratar doença de Chrohn. Exemplos incluem a- minossalicilatos, fármacos contendo ácido 5-aminossalicílico (5-ASA), para 5 ajudar a controlar inflamação, tais como sulfasalazina, olsalazina, mesalami- na, e balsalazida. Eles também incluem corticosteroides tais como predniso- na e hidrocortisona, e imunomoduladores tais como azatioprina e 6- mercapto-purina (6-MP), citocinas, interleucinas, e linfocinas. Ciclosporina pode ser usada com 6-MP ou azatioprina para tratar colite ulcerativa ativa, 10 severa. Agentes anti-TNF-alfa, as thiazolidinedionas ou glitazonas, incluindo rosiglitazona e pioglitazona, podem também ser usados.

e) Agentes gue Tratam Constipacão/Síndrome do Intestino Irritável

Constipação, tal como aquela associada à síndrome de intestino irritável, é frequentemente tratada usando laxantes estimulantes, laxantes 15 osmóticos tais como Lactulose e MiraLax, amolecedores de fezes (tais como óleo mineral ou Colace), agentes de massa (tais como Metamucil ou farelo de trigo). Agentes tais como Zelnorm (também chamado tegaserod) podem ser usados para tratar IBS com constipação. Adicionalmente, medicações anticolinérgicas tais como Bentyl® e Levsin® foram constatadas serem úteis 20 em aliviar os espasmos intestinais da IBS.

f) Proteína e Fármacos de Peptídeo

Os sistemas de liberação de fármaco podem ser usados para oralmente administrar proteínas e peptídeos que poderiam ser do contrário degradados se administrados oralmente, e que poderiam ter que ser admi- nistrados do contrário intramuscular ou intravenosamente. Exemplos de pro- teína e fármacos de peptídeo úteis na presente invenção incluem:

Peptídeos de hormônio adrenocorticotrópico (ACTH) incluindo, mas não limitados a, ACTH, humano; ACTH 1-10; ACTH 1-13, humano: AC- TH 1-16, humano; ACTH 1-17; ACTH 1-24, humano; ACTH 4-10; ACTH 4- 30 11; ACTH 6-24; ACTH 7-38, humano; ACTH 18-39, humano; ACTH, rato; ACTH 12-39, rato; tropina de célula beta (ACTH 22-39); biotinil-ACTH 1-24, humano; biotinil-ACTH 7-38, humano; corticostatina, humano; corticostatina, coelho; [Met(02)4, DLys81 Phe9] ACTH 4-9, humano; [Met(O)4, DLys81 Phe9] ACTH 4-9, humano; N-acetila, ACTH 1-17, humano; e ebiratida.

Peptídeos de adrenomedulina incluindo, mas não limitados a, adrenomedulina, adrenomedulina 1-52, humana; adrenomedulina 1-12, hu- 5 mana; adrenomedulina 13-52, humana; adrenomedulina 22-52, humana; pró-adrenomedulina 45-92, humana; pró-adrenomedulina 153-185, humana; adrenomedulina 1-52, porcina; pró-adrenomedulina (N-20), porcina; adreno- medulina 1-50, rato; adrenomedulina 11-50, rato; e pró-N20 (peptídeo N- terminal de proadrenomedulina 20), rato.

Peptídeos de alatostatina incluindo, mas não limitados a, alatos-

tatina I; alatostatina II; alatostatina III; e alatostatina IV.

Peptídeos de amilina incluindo, mas não limitados a, acetil- amilina 8-37, humana; amilina acetilada 8-37, rato; AC 187 antagonista de amilina; antagonista de amilina AC253; antagonista de amilina AC625; amili- 15 na 8-37, humana; amilina (IAPP), gato; amilina (insulinoma ou polipeptídeo amiloide da ilhota (IAPP)); amida de amilina, humana; amilina 1-13 (peptídeo associado a diabetes 1-13), humana; amilina 20-29 (IAPP 20-29), humana; antagonista de amilina AC625; amilina 8-37, humana; amilina (IAPP), gato; amilina, rato; amilina 8-37, rato; biotinil-amilina, rato; e amida de biotinil- 20 amilina, humana.

Peptídeos de fragmento de beta-proteína amiloide incluindo, mas não limitados a, beta-proteína da doença de Alzheimer 12-28 (SP17); beta-proteína amiloide 25-35; precursor de beta/A4-proteína amiloide 328- 332; precursor de beta/A4 proteína amiloide (APP) 319 - 335; beta-proteína 25 amiloide 1-43; beta-proteína amiloide 1-42; beta-proteína amiloide 1-40; be- ta-proteína amiloide 10-20; beta-proteína amiloide 22-35; beta proteína da doença de Alzheimer (SP28); peptídeo beta-amiloide 1-42, rato; peptídeo beta-amiloide 1-40, rato; beta-amiloide 1-11; beta-amiloide 31-35; beta- amiloide 32-35; beta-amiloide 35-25; precursor de proteína beta-amiloide / 30 A4 96-110; precursor de proteína beta-amiloide 651-616; beta-amiloide 1-38; [Gln11]-beta-proteína da doença de Alzheimer; [Gln11]-beta-amiloide 1-40; [Gln22]-beta-amiloide 6-40; componente não-A beta do amiloide da doença de Alzheimer (NAC); P3, (A beta 17-40) β-peptídeo amiloide da doença de Alzheimer; e SAP (componente P amiloide de soro) 194-204.

Peptídeos de angiotensina incluindo, mas não limitados a, A- 779; Ala-Pro-Gly-angiotensina II; [lle3,Val5]-angiotensina II; antipeptídeo de angiotensina III; fragmento de angiogenina 108-122; fragmento de angioge- nina 108-123; inibidor da enzima de conversão de angiotensina I; angioten- sina I, humana; substrato da enzima de conversão de angiotensina I; angio- tensina 11-7, humana; angiopeptina; angiotensina II, humana; antipeptídeo de angiotensina II; angiotensina Il 1-4, humana; angiotensina Il 3-8, humana; angiotensina Il 4-8, humana; angiotensina Il 5-8, humana; angiotensina Ill ([Des-Asp1]-angiotensina II), humana; inibidor da angiotensina Ill ([Il7]- angiotensina III); inibidor da enzima de conversão da angiotensina (Neo- thunnus macropterus); [Asn1, Val5]-angiotensina I, peixe-sapo; [Asn1, Val5, Asn9]-angiotensina I, salmão; [Asn1, Val5, Gly9]-angiotensina I, enguia; [Asn1, Val5]-angiotensina I 1-7, enguia, peixe-sapo, salmão; [Asn1, Val5]- angiotensina II; biotinil-angiotensina I, humana; biotinil-angiotensina II, hu- mana; biotinil-Ala-Ala-Ala-angiotensina II; [Des-Asp1]-angiotensina I, huma- na; [p-aminofenilalanina6]-angiotensina II; substrato de renina (angiotensinó- geno 1-13), humano; preangiotensinógeno 1-14 (tetradecapeptídeo de subs- trato de renina), humano; tetradecapeptídeo de substrato de renina (angio- tensinógeno 1-14), porcino; [Sar1]-angiotensina II, [Sar1]-angiotensina Il 1-7 amida; [Sar1, Ala8]-angiotensina II; [Sar1, lle8]-angiotensina II; [Sar1, Thr8]- angiotensina II; [Sar1, Tyr(Me)4]-angiotensina Il (Sarmesin); [Sar1, Valr, Ala8]- angiotensina II; [Sar1, lle7]-angiotensina III; substrato de renina de tetradeca- peptídeo sintético (No. 2); [Val4]-angiotensina III; [Val5]-angiotensina II; [Val5]- angiotensina I, humana; [Val5]-angiotensina I; [Vai5, Asn9]-angiotensina I, rã- touro; e [Vai5, Ser9]-angiotensina I, ave.

Peptídeos antibióticos incluindo, mas não limitados a, Ac-SQNY; bactenecina, bovina; CAP 37 (20-44); carbormetoxicarbonil-DPro-DPhe- OBzl; peptídeo de CD36 P 139-155; peptídeo de CD36 P 93-110; peptídeo híbrido de cecropina A-melittin [CA(1-7)M(2-9)NH2]; cecropina B, ácido livre; fragmento de CD de CYS(Bzl)84 81-92; defensina (humana) HNP-2; derma- septina; peptídeo de immünoestimulação, humano; Iactoferricina, bovina (BLFC); e espaçador de magainina.

Polipeptídeos antigênicos, que podem suscitar uma resposta imune intensificada, intensificar uma resposta imune e/ou causar uma res- posta de forma imunizante eficaz para doenças e/ou agentes causadores de doença incluindo, mas não limitados a, adenovírus; antraz; Bordetella per- tussus; botulismo; rinotraqueíte bovina; Branhamella catarrhalis; hepatite canina; sinomose canina; Clamídias; cólera; coccidiomicose; varíola bovina; citomegalovírus; febre de Dengue; toxoplasmose de dengue; difteria; encefa- lite; Escherichia coli enterotoxigênico; vírus de Epstein Barr; encefalite eqüi- na; anemia infecciosa equina; influenza equina; pneumonia equina; rinovírus equino; Eseheriehia coii\ leucemia felina; flavivírus; globulina; influenza de haemophilus do tipo b; Haemophilus influenzae] Haemophilus pertussis; He- Iieobaeter pylon; hemophilus ??; hepatite ??; vírus da hepatite A; vírus da hepatite B; vírus da Hepatite C; vírus do herpes; HIV; vírus HIV-1; vírus HIV- 2; HTLV I; HTLV II; HTLV III; influenza ?; encefalite japonesa; espécies de Klebsiellae; Legionella pneumophila; leishmania; lepra; doença de lyme; i- munógeno de malária; sarampo; meningite; Meningococcus; polissacarídeo meningocócico do grupo A; polissacarídeo meningocócico do grupo C; ca- xumba; vírus da caxumba; micobactérias; Mycobaeterium tubereulosis-, Neis- seria; Neisseria gonorrhoeae\ Neisseria meningitidis; língua azul ovina; ence- falite ovina; vírus do papiloma; para influenza; paramixovírus; toxinas de co- queluche; pestilência; pneumococcus; Pneumoeystis earinir, pneumonia; po- liovírus; espécies de Proteus; Pseudomonas aeruginosa; raiva; vírus sincitial respiratório; rotavírus; rubéola; Salmonellae; esquistosomíase; shigellae; vírus da imunodeficiência de símio; varíola; Staphyloeeoeus aureus\ espé- cies de Staphyloeeoeus; Streptoeeoeus pneumoniae; Streptoeeoeus pyoge- nes; espécies de Streptoeeoeus; Clostridium diffieile; espécies de Clostridi- um; influenza suína; tétano; Treponema pallidum; febre tifoide; vacínia; vírus de varicela-zoster; e bibrio cholerae.

Peptídeos antimicrobianos incluindo, mas não limitados a, bufo- rin I; buforin II; cecropin A; cecropin B; cecropin P1, porcino; gaegurin 2 (Ra- na rugosa); gaegurin 5 (Rana rugosa); indolicidin; protegrin-(PG)-l; magainin 1; e magainin 2; e peptídeo de T-22 [Tyr5,12, Lys7]-poli-femusin II.

Peptídeos relacionados à apoptose incluindo, mas não limitados a, beta-proteína da doença de Alzheimer (SP28); peptídeo inibidor de calpa- 5 ína; inibidor IV de capsase; capsase-3, substrato IV; inibidor I de caspase-1, permeável à célula; inibidor Vl de caspase-1; substrato Ill de caspase-3, fluo- rogênico; substrato V de caspase-1, fluorogênico; inibidor I de caspase-3, permeável à célula; inibidor Ill de caspase-6 ICE; inibidor Ill de [Des-Ac, bio- tinaJ-ICE; inibidor Il da enzima de conversão de IL-1 B (ICE); substrato IV da 10 enzima de conversão de IL-I B (ICE); MDL 28170; e MG-132.

Peptídeos natriuréticos atriais incluindo, mas não limitados a, alfa-ANP (alfa-chANP), galinha; anantin; ANP 1-11, rato; ANP 8-30, rã; ANP

11-30, rã; ANP-21 (fANP-21), rã; ANP-24 (fANP-24), rã; ANP-30, rã; frag- mento de ANP 5-28, humano, canino; ANP-7-23, humano; fragmento de 15 ANP 7-28, humano, canino; polipeptídeo alfa-atrial natriurético 1-28, huma- no, canino; A71915, rato; fator atrial natriurético 8-33, rato; polipeptídeo atrial natriurético 3-28, humano; polipeptídeo atrial natriurético 4-28, humano, ca- nino; polipeptídeo atrial natriurético 5-27; humano; peptídeo atrial natriurético (ANP), enguia; atriopeptina I, rato, coelho, camundongo; atriopeptina II, rato,

1 20 coelho, camundongo; atriopeptina III, rato, coelho, camundongo; fator natriu- rético atrial (rANF), rato, auriculina A (ANF de rato 126-149); auriculina B (ANF de rato 126-150); beta-ANP (1-28, dímero, antiparalelo); beta-rANF 17- 48; biotinil-alfa-ANP 1-28, humano, canino; biotinil-fator natriurético atrial (bi- otinil-rANF), rato; cardiodilatin 1-16, humano; C-ANF 4-23, rato; Des-[Cys105, 25 Cys121]-fator natriurético atrial 104-126, rato; [Met(O)12] ANP 1-28, humano; [Mpr7,DAIa9]ANP 7-28, amida, rato; prepro-ANF 104-116, humano; prepro- ANF 26-55 (proANF 1-30), humano; prepro-ANF 56-92 (proANF 31-67), hu- mano; prepro-ANF 104-123, humano; [Tyr°]-atriopeptina I, rato, coelho, ca- mundongo; [Tyr°]-atriopeptina II, rato, coelho, camundongo; [Tyr°]-prepro 30 ANF 104-123, humano; urodilatin (CDD/ANP 95-126); peptídeo natriurético ventricular (VNP), enguia; e peptídeo natriurético ventricular (VNP), truta ar- co-íris. Peptídeos de células de bolsa, mas não limitados a, peptídeo de célula de bolsa alfa; peptídeo de célula de bolsa alfa 1-9; peptídeo de célula de bolsa alfa 1-8; peptídeo de célula de bolsa alfa 1-7; fator de célula de bol- sa beta; e fator de célula de bolca gama.

Peptídeos de bombesina incluindo, mas não limitados a, alfa-sl

caseína 101-123 (leite bovino); biotinil-bombesina; bombesina 8-14; bombe- sina; [Leu13-psi (CH2NH)Leu14]-bombesina; [D-Phe61 Des-Met14]-bombesina 6-14 etilamida; [DPhe12]-bombesina; [DPhe12, l_eu14]-bombesina; [Tyr4]- bombesina; e [Tyr4, DPhe12]-bombesina.

Peptídeos de GLA de osso (BGP) incluindo, mas não limitados

à, proteína de GLA de osso; proteína de GLA de osso 45-49; [Glu17, Gla21,24]-osteocalcina 1-49, humana; miclopeptídeo-2 (MP-2); osteocalcina 1- 49 humana; osteocalcina 37-49, humana; e [Tyr38, Phe42’46] proteína de GLA de osso 38-49, humana.

Peptídeos de bradiquinina incluindo, mas não limitados a, [Ala2,6,

des-Pro3]-bradiquinina; bradiquinina; bradiquinina (Bowfin. Gar); peptídeo potencializadores de bradiquinina; bradiquinina 1-3; bradiquinina 1-5; bradi- quinina 1-6; bradiquinina 1-7; bradiquinina 2-7; bradiquinina 2-9; [DPhe7] bradiquinina; [Des-Arg9]-bradiquinina; [Des-Arg10]-Lys-bradiquinina ([Des- 20 Arg10]-calidina); [D-N-Me-Phe7]-bradiquinina; [Des-Arg91 Leu8]-bradiquinina; Lys-bradiquinina (kalidina); Lys-[Des-Arg9, Leu8]-bradiquinina ([Des- Arg10,Leu9]-calidina); [Lys°-Hyp3]-bradiquinina; ovoquinina; [Lys01 Ala3]- bradiquinina; Met-Lys-bradiquinina; peptídeo potencializador de bradiquinina de peptídeo K12; [(pCI)Phe5,8]-bradiquinina; T-cinina (Ile-Ser-bradiquinina); 25 [Thi5,8, D-Phe7]-bradiquinina; [Tyr°]-bradiquinina; [Tyr5]-bradiquinina; [Tyr8]- bradiquinina; e calicreína.

Peptídeos natriuréticos do cérebro (BNP) incluindo, mas não li- mitados a, BNP 32, canino; peptídeo semlhante a BNP, enguia; BNP-32, humano; BNP-45, camundongo; BNP-26, porcino; BNP-32, porcino; biotinil- BNP-32, porcino; BNP-32, rato; biotinil-BNP-32, rato; BNP-45 (BNP 51-95, peptídeo natriurético cardíaco 5K), rato; e [Tyr°]-BNP 1-32, humano.

C-peptídeos incluindo, mas não limitados a, C-peptídeo; e [Tyr0]- C-peptídeo, humano.

Peptídeos natriuréticos do tipo C (CNP) incluindo, mas não limi- tados a, peptídeo natriuréticos do tipo C, galinha; peptídeo natriurético 22 do tipo C2 (CNP-22), porcino, rato, humano; peptídeo natriurético 53 do tipo C 5 (CNP-53), humano; peptídeo natriurético 53 do tipo C (CNP-53), porcino, rato; peptídeo natriurético 53 do tipo C-53 (porcino, rato) 1-29 (CNP-53 1 - 29); prepro-CNP 1-27, rato; prepro-CNP 30-50, porcino, rato; peptídeo de vasonatrina (VNP); e [Tyr°]-peptídeo natriurético 22 do tipo C ([Tyr°]-CNP- 22).

Peptídeos de calcitonina incluindo, mas não limitados a, biotinil-

calcitonina, humana; biotinil-calcitonina, rato; biotinil-calcitonina, salmão; cal- citonina, galinha; calcitonina, enguia; calcitonina, humana; calcitonina, porci- na; calcitonina, rato; calcitonina, salmão; calcitonina 1-7, humana; calcitonina 8-32, salmão; catacalcina (PDN-21) (C-procalcitonina); e N-proCT (peptídeo 15 de clivagem de procalcitonin amino-terminal), humano.

Peptídeos relacionados ao gene de calcitonina (CGRP) incluin- do, mas não limitados a, acetil-alfa-CGRP 19-37, humano; alfa-CGRP 19-37, humano; alfa-CGRP 23-37, humano; biotinil-CGRP, humano; biotinil-CGRP

II, humano; biotinil-CGRP, rato; beta-CGRP, rato; biotinil-beta-CGRP, rato; CGRP, rato; CGRP, humano; peptídeo de calcitonina adjacente ao término C; CGRP 1-19, humano; CGRP 20-37, humano; CGRP 8-37, humano; C- GRP II, humano; CGRP, rato; CGRP 8-37, rato; CGRP 29-37, rato; CGRP

30-37, rato; CGRP 31-37, rato; CGRP 32-37, rato; CGRP 33-37, rato; CGRP

31-37, rato; ([Cys(Acm)2,7]-CGRP; elcatonina; [Tyr0J-CGRP, humano; [Tyr0]- CGRP II, humano; [Tyr°]-CGRP 28-37, rato; [Tyr°]-CGRP, rato; e [Tyr22]-

CGRP 22-37, rato.

Peptídeos CART incluindo, mas não limitados a, CART, humano; CART 55-102, humano; CART, rato; e CART 55 - 102, rato.

Peptídeos de casomorfina incluindo, mas não limitados a, beta- casomorfina, humana; beta-casomorfina 1-3; beta-casomorfina 1-3, amida; beta-casomorfina, bovina; beta-casomorfina 1-4, bovina; beta-casomorfina 1- 5, bovina; beta-casomorfina 1-5, amida, bovina; beta-casomorfina 1-6, bovi- na; [DAIa ]-beta-casomorfina 1-3, amida, bovina; [DAIa2,Hyp4,Tyr5]-beta- casomorfina 1-5 amida; [DAIa2,DPro4,Tyr5]-beta-casomorfina 1-5, amida; [DAIa2,Tyr5]-beta-casomorfina 1-5, amida, bovina; [DAIa2,4,Tyr5]-beta- casomorfina 1-5, amida, bovina; [DAIa2, (pCI)Phe3]-beta-casomorfina, amida, 5 bovina; [DAIa2]-beta-casomorfina 1-4, amida, bovina; [DAIa2]-beta- casomorfina 1-5, bovina; [DAIa2]-beta-casomorfina 1-5, amida, bovina; [DA- la2,Met5]-beta-casomorfina 1-5, bovina; [DPro2]-beta-casomorfina 1-5, amida, bovina; [DAIa2]-beta-casomorfina 1-6, bovina; [DPro2]-beta-casomorfina 1-4, amida; [Des-Tyr1]-beta-casomorfina, bovina; [DAIa2,4,Tyr5]-beta-casomorfina 10 1-5, amida, bovina; [DAIa2, (pCI)Phe3]-beta-casomorfina, amida, bovina; [DA- la2]-beta-casomorfina 1-4, amida, bovina; [DAIa2]-beta-casomorfina 1-5, bo- vina; [DAIa2]-beta-casomorfina 1-5, amida, bovina; [DAIa2, Met5]-beta- casomorfina 1-5, bovina; [DPro2]-beta-casomorfina 1-5, amida, bovina; [DA- la2]-beta-casomorfina 1-6, bovina; [DPro2]-beta-casomorfina 1-4, amida; 15 [Des-Tyr1]-beta-casomorfina, bovina; e [Val3]-beta-casomorfina 1-4, amida, bovina.

Peptídeos quimotáticos incluindo, mas não limitados a, defensi- na 1 (humana) HNP-I (peptídeo de neutrófilo humano-1); e N-formil-Met-Leu- Phe.

Peptídeos de colecistoquinina (CCK) incluindo, mas não limita-

dos a, caeruleína; colecistoquinina; colecistoquinina-pancreozimina; CCK-33, humano; octapeptídeo de colecistoquinina 1-4 (não-sulfatado) (CCK 26-29, não-sulfatado); octapeptídeo de colecistoquinina (CCK 26-33); octapeptídeo de colecistoquinina (não-sulfatado) (CCK 26-33, não-sulfatado); heptapeptí- 25 deo de colecistoquinina (CCK 27-33); tetrapeptídeo de colecistoquinina (CCK 30 - 33); CCK-33, porcino; CR 1 409, antagonista de colecistoquinina; peptídeo de flanqueamento de CCK (não-sulfatado); colecistoquinina de N- acetila, CCK 26-30, sulfatada; colecistoquinina de N-acetila, CCK 26-31, sul- fatada; colecistoquinina de N-acetila, CCK 26-31, não-sulfatada; fragmento 30 de CCK de prepro V-9-M; e proglumida.

Peptídeos de fator estimulante de colônia incluindo, mas não limitados a, fator estimulante de colônia (CSF); GM-CSF; M-CSF; e G-CSF. Peptídeos de fator de liberação de corticotropina (CRF) incluindo, mas não limitados a, astressina; CRF 12-41 alfa-helicoidal; biotinil-CRF, ovino; biotinil- CRF, humano, rato; CRF, bovino; CRF, humano, rato; CRF, ovino; CRF, porcino; [Cys21]-CRF, humano, rato; antagonista de CRF (CRF alfa-helicoidal 5 9-41); CRF 6-33, humano, rato; [DPro5]-CRF, humano, rato; [D-Phe12, N- Ie21'38J-CRF 12-41, humano, rato; peptídeo eosinofilotático; [Met(O)21J-CRF, ovino; [NIe21jTyr32J-CRF, ovino; CRF de prepro 125-151, humano; sauvagina, rã; [Tyr0J-CRF, humano, rato; [Tyr0J-CRF, ovino; [Tyr0J-CRF 34-41, ovino; [Tyr°J-urocortina; amida de urocortina, humana; urocortina, rato; urotensina I 10 (Catostomus commersoni); urotensina II; e urotensina Il (Rana ridibunda).

Peptídeos de cortistatina incluindo, mas não limitados a, cortista- tina 29; cortistatina 29 (1-13); [Tyr0J-Cortistatina 29; pró-cortistatina 28-47; e pró-cortistatina 51-81.

Peptídeos de citocina incluindo, mas não limitados a, fator alfa 15 de necrose tumoral (TNF-α); e fator β de necrose tumoral (TNF-β). Interleu- cinas, incluindo mas não limitados a IL-1a, IL-1 β, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-10, IL-12, e IL-13. Peptídeos de interleucina incluindo, mas não limitados a, interleucina-1 beta 165-181, rato; e interleucina-8 (IL-8, CINC/gro), rato. Quimocinas incluindo mas não limitadas a RANTES, MCP-I, 20 MIP-1a, ΜΙΡ-Ιβ.

Peptídeos de dermorfina incluindo, mas não limitados a, dermor- fina e análogo de dermorfina 1-4.

Peptídeos de dinorfina incluindo, mas não limitados a, dinorfina grande (prodinorfina 209-240), porcina; biotinil-dinorfina A (biotinil- prodinorfina 209-225); [DAIa2, DArgeJ-dinorfina A 1-13, porcina; [D-AIa2J- dinorfina A, porcina; [D-Ala2J-dinorfina A, amida, porcina; [D-Ala2]-dinorfina A 1-13, amida, porcina; [D-Ala2]-dinorfina A 1-9, porcina; [DArg6J-dinorfina A 1- 13, porcina; [DArg8J-dinorfina A 1-13, porcina; [Des-Tyr1J-dinorfina A 1-8; [D- Pro10J-dinorfina A 1-11, porcina; dinorfina A amida, porcina; dinorfina A 1-6, porcina; dinorfina A 1-7, porcina; dinorfina A 1-8, porcina; dinorfina A 1-9, porcina; dinorfina A 1-10, porcina; dinorfina A 1-10 amida, porcina; dinorfina A 1-11, porcina; dinorfina A 1-12, porcina; dinorfina A 1-13, porcina; dinorfina A 1-13 amida, porcina; DAKLI (dinorfina A-Iigante de análogo capa); DAKLI- biotina ([Arg11,13]-dinorfina A (1-13)-Gly-NH(CH2)5NH-biotina); dinorfina A 2- 17, porcina; dinorfina 2-17, amida, porcina; dinorfina A 2-12, porcina; dinorfi- na A 3-17, amida, porcina; dinorfina A 3-8, porcina; dinorfina A 3-13, porcina;

5 dinorfina A 3-17, porcina; dinorfina A 7-17, porcina; dinorfina A 8-17, porcina; dinorfina A 6-17, porcina; dinorfina A 13-17, porcina; dinorfina A (prodinorfina 209-225), porcina; dinorfina B 1-9; [MeTyr1, MeArg7, D-Leu8]-dinorfina 1-8 amida de etila; [(nMe)Tyr1] dinorfina A I - 13, amida, porcina; [Phe7]-dinorfina A 1-7, porcina; [Phe7]-dinorfina A 1-7, amida, porcina; e prodinorfina 228-256 10 (dinorfina B 29) (leumorfina), porcina. Peptídeos de endorfina incluindo, mas não limitados a, alfa-neo-endorfina, porcina; beta-neo-endorfina; Ac-beta- endorfina, camelo, bovina, ovina; Ac-beta-endorfina 1-27, camelo, bovina, ovina; Ac-beta-endorfina, humana; Ac-beta-endorfina 1-26, humana; Ac- beta-endorfina 1-27, humana; Ac-gama-endorfina (Ac-beta-lipotropina 61- 15 77); acetil-alfa-endorfina; alfa-endorfina (beta-lipotropina 61-76); análogo de alfa-neo-endorfina; alfa-neo-endorfina 1-7; [Arg8]-alfa-neo-endorfina 1-8; beta-endorfina (beta-lipotropina 61-91), camelo, bovina, ovina; beta- endorfina 1-27, camelo, bovina, ovina; beta-endorfina, equina; beta-endorfina (beta-lipotropina 61-91), humana; beta-endorfina (1-5) + (16-31), humana; 20 beta-endorfina 1-26, humana; beta-endorfina 1-27, humana; beta-endorfina 6-31, humana; beta-endorfina 18-31, humana; beta-endorfina, porcina; beta- endorfina, rato; beta-lipotropina 1-10, porcina; beta-lipotropina 60-65; beta- lipotropina 61-64; beta-lipotropina 61-69; beta-lipotropina 88-91; biotinil-beta- endorfina (biotinil-beta-lipotropina 61-91); biocitina-beta-endorfina, humana; 25 gama-endorfina (beta-lipotropina 61-77); [DAIa2]-alfa-neo-endorfina 1-2, ami- da; [DAIa2]-beta-lipotropina 61-69; [DAIa2]-gama-endorfina; [Des-Tyr1-beta- endorfina, humano; [Des-Tyr1]-gama-endorfina (beta-lipotropin 62-77); [Leu5]-beta-endorfina, camelo, bovina, ovina; [Met5, Lys6]-alfa-neo-endorfina 1-6; [Met5, Lys6,7]-alfa-neo-endorfina 1-7; e [Met5, Lys6, Arg7]-alfa-neo- 30 endorfina 1-7.

Peptídeos de endotelina incluindo, mas não limitados a, endote- lina-1 (ET-I); endotelina-1 [Biotina-Lys9]; endotelina-1 (1-15), humana; endo- telina-1 (1-15), amida, humana; Ac-endotelina-1 (16-21), humana; Ac- [DTrp16]-endotelina-1 (16-21), humana; [Ala3,11]-endotelina-1; [Dprl, Asp15]- endotelina-1; [Ala2]-endotelina-3, humana; [Ala18]-endotelina-1, humana; [Asn18]-endotelina-1, humana; [Res-701-1]- antagonista de receptor B de 5 endotelina; Suc-[Glu9, Ala11,15]-endotelina-1 (8-21), IRL-1620; endotelina-C- hexapeptídeo terminal; [D-Val]-endotelina-1 grande (16-38), humana; endo- telina-2 (ET-2), humana, canina; endotelina-3 (ET-3), humana, rato, porcina, coelho; biotinil-endotelina-3 (biotinil-ET-3); prepro-endotelina-1 (94-109), porcina; BQ-518; BQ-610; BQ-788; antagonista de relaxamento endotélio- 10 dependente; FR139317; IRL-1038; JKC-30 1; JKC-302; PD-145065; PD 142893; sarafotoxina S6a (atractaspis engaddensis); sarafotoxina S6b (a- tractaspis engaddensis); sarafotoxina S6c (atractaspis engaddensis; [Lys4]- sarafotoxina S6c; sarafotoxina S6d; endotelina-1 grande, humana; endoteli- na-1 biotinil-grande, humana; endotelina-1 grande (1-39), porcina; endoteli- 15 na-3 grande (22-41), amida, humana; endotelina-1 grande (22-39), rato; en- dotelina-1 grande (1-39), bovina; endotelina-1 grande (22-39), bovina; endo- telina-1 grande (19-38), humana; endotelina-1 grande (22-38), humana; en- dotelina-2 grande, humana; endotelina-2 grande (22-37), humana; endoteli- na-3 grande, humana; endotelina-1 grande, porcina; endotelina-1 grande 20 (22-39) (prepro-endotelina-1 (74-91)); endotelina-1 grande, rato; endotelina-2 grande (1-38), humana; endotelina-2 grande (22-38), humana; endotelina-3 grande, rato; endotelina-1 biotinil-grande, humana; e [Tyr123]-prepro- endotelina (110-130), amida, humana.

Peptídeos de antagonista de receptor de ETa incluindo, mas não limitados a, [BQ-123]; [BE18257B]; [BE-18257A]/[W-7338A]; [BQ-485]; FR139317; PD-151242; e TTA-386.

Peptídeos de antagonista de receptor de ETb incluindo, mas não limitados a, [BQ-3020]; [RES-701-3]; e [IRL-1720],

Peptídeos de encefalina incluindo, mas não limitados a, adrenor- fina, ácido livre; amidorfina (proencefalina A (104-129)-NH2), bovina; BAM- 12P (dodecapeptídeo de medula ad-renal bovina); BAM-22P (docosapeptí- deo de medula ad-renal bovina); benzoil-Phe-Ala-Arg; encefalina; [D-Ala^, D- l_eu5]-encefalina; [D-Ala2, D-Met5]-encefalina; [DAIa2]-Leu-encefalina, amida; [DAIa2,Leu5,Arg6]-encefalina; [Des-Tyr1,DPen25]-encefalina; [Des- Tyr1,DPen2,Pen5]-encefalina; [Des-Tyr1]-Leu-encefalina; [D-Pen2,5]- encefalina; [DPen2, Pen5]-encefalina; substrato de encefalinase; [D-Pen2, pCI-Phe4, D-Pen5]-encefalina; Leu-encefalina; Leu-encefalina, amida; biotinil- Leu-encefalina; [D-Ala2]-Leu-encefalina; [D-Ser^-Leu-encefalina-Thr (peptí- deo de delta-receptor) (DSLET); [D-Thr^-Leu-encefalina-Thr (DTLET); [Lys6]- Leu-encefalina; [Met5, Arg6]-encefalina; [Met5, Arg6]-encefalina-Arg; [Met51Arg6,Phe7]-encefalina, amida; Met-encefalina; biotinil-Met-encefalina; [D-Ala2]-Met-encefalina; [D-Ala2]-Met-encefaiina, amida; Met-encefalina-Arg- Phe; Met-encefalina, amida; [Ala2]-Met-encefalina, amida; [DMet2, Pro5]- encefalina, amida; [DTrp2]-Met-encefalina, amida, metorfinamida (adrenorfi- na); peptídeo B, bovino; peptídeo E ad-renal de 3200 Dalton, bovino; peptí- deo F, bovino; preproencefalina B 186-204, humana; espinorfina, bovina; e tiorfano (D, L, 3-mercapto-2-benzilpropanoil-glicina).

Efrina B, seus análogos e antagonistas.

Peptídeos de fibronectina incluindo, mas não limitados a fator-4 de plaquetas (58-70), humano; equistatina (Eehis carinatus); região conser- vada de selectin Ε, P, L; análogo de fibronectina; proteína de ligação de fi- bronectina; fibrinopeptídeo A, humano; [Tyr°]-fibrinopeptídeo A, humano; fi- brinopeptídeo B, humano; [Glu1]-fibrinopeptídeo B, humano; [Tyr15]- fibrinopeptídeo B, humano; fragmento de beta-cadeia de fibrinogênio de 24- 42; peptídeo de inibidor de ligação de fibrinogênio; peptídeo relacionado à fibronectina (fragmento de ligação de colágeno); fator de inibição de fibrinóli- se; FN-C/H-1 (fragmento de ligação de heparina de fibronectina); FN-C/H-V (fragmento de ligação de heparina de fibronectina); peptídeo de ligação de heparina; peptídeo penta de laminina, amida; Leu-Asp-Val-NH2 (LDV-NH2), humano, bovino, rato, galinha; necrofibrina, humano; necrofibrina, rato; e peptídeo IIB de glicoproteína de membrana de plaqueta 296-306. Peptídeos de galanina incluindo, mas não limitados a, galanina,

humano; galanina 1-19, humano; preprogalanina 1-30, humano; preprogala- nina 65-88, humana; preprogalanina 89 - 123, humana; galanina, porcina; galanina 1-16, porcina, rato; galanina, rato; biotinil-galanina, rato; preproga- Ianina 28-67, rato; galanina 1-13-bradiquinina 2-9, amida; M40, galanina 1- 13 -Pro-Pro-(AIa-Leu) 2-Ala-amida; C7, galanina 1-13-espantídeo-amida; GMAP 1-41, amida; GMAP 16-41, amida; GMAP 25-41, amida; galantídeo; e entero-cassinina.

Peptídeos de gastrina incluindo, mas não limitados a, gastrina, galinha; peptídeo inibidor gástrico (GIP), humano; gastrina I, humana; bioti- nil-gastrina I, humana; gastrina grande-1, humana; peptídeo de liberação de gastrina, humano; peptídeo de liberação de gastrina 1-16, humano; polipep- tídeo inibidor gástrico (GIP), porcina; peptídeo de liberação de gastrina, por- cina; peptídeo de liberação de biotinil-gastrina, porcina; peptídeo de libera- ção de gastrina 14-27, porcina, humano; gastrina pequena, rato; pentagas- trina; peptídeo inibidor gástrico 1-30, porcina; peptídeo inibidor gástrico 1-30, amida, porcina; [Tyr°]-inibidor gástrico peptídeo 23-42, humano; e peptídeo inibidor gástrico, rato.

Peptídeos de glucagon incluindo, mas não limitados a, [Des- His1,Glu9]-glucagon, extendina-4, glucagon, humano; biotinil-glucagon, hu- mano; glucagon 19-29, humano; glucagon 22-29, humano; Des-His1-[Glu9]- glucagon, amida; peptídeo semelhante a glucagon 1, amida (preproglucagon 72-107, amida); peptídeo semelhante a glucagon 1 (preproglucagon 72 - 108), humano; peptídeo semelhante a glucagon 1 (7-36) (preproglucagon 78-107, amida); peptídeo semelhante a glucagon II, rato; peptídeo biotinil- semelhante a glucagon-1 (7-36) (biotinil-preproglucagon 78-107, amida); peptídeo semelhante a glucagon 2 (preproglucagon 126-159), humano; oxin- tomodulina/glucagon 37; e valosina (peptídeo VQY), porcina.

Peptídeos associados a Gn-RH (GAP) incluindo, mas não limita- dos a, peptídeo Gn-RH associado 25-53, humano; Gn-RH peptídeo associa- do 1-24, humano; peptídeo associado a Gn-RH 1-13, humano; peptídeo as- sociado Gn-RH 1-13, rato; peptídeo de liberação de gonadotropina, folicular, humano; [Tyr°]-intervalo ([Tyr°]-Peptídeo de Precursor de Gn-RH 14-69), humano; e precursor de propiomelanocortina (POMC) 27-52, porcina.

Peptídeos de fator de crescimento incluindo, mas não limitados a, fatores de crescimento de célula; fatores de crescimento epidérmico; fator de crescimento de tumor; TGF-alfa, humano; TGF-alfa, de outras espécies de TGF-beta mamíferas; alfa-TGF 34-43; EGF humano (fator de crescimento epidérmico); fator de crescimento de fibroblasto acídico; fator de crescimento de fibroblasto básico; fator de crescimento de fibroblasto básico 13-18; fator de crescimento de fibroblasto básico 120-125; fator de crescimento de fibro- blasto acídico derivado do cérebro 1-11; fator crescimento de fibroblasto bá- sico derivado do cérebro 1-24; fator de crescimento de fibroblasto acídico derivado do cérebro 102-111; [Cys(Acm20,31)]-fator de crescimento epidérmi- co 20-31; peptídeo de receptor de fator de crescimento epidérmico 985-996; fator de crescimento semelhante à insulina (IGF)-I, galinha; IGF-I, rato; IGF-I1 humano; Des (1-3) IGF-I, humano; IGF-I R3, humano; IGF-I R3, humano; IGF-I R3 longo, humano; análogo de peptídeo adjuvante; peptídeo anorexi- gênico; Des (1-6) IGF-II, humano; IGF-II R6, humano; análogo de IGF-I; IGF I (24-41); IGF I (57-70); IGF I (30-41); IGF II; IGF Il (33-40); [Tyr°]-IGF Il (33 - 40); fator de crescimento de célula do fígado; midcina; midcina 60-121, hu- mana; N-acetila, alfa-TGF 34-43, éster de metila, rato; fator de desenvolvi- mento nervoso (NGF), camundongo; fator de crescimento derivado das pla- quetas; antagonista de fator de crescimento derivado das plaquetas; Iigantes para os receptores da família de Erb-B.

Peptídeos de hormônio de crescimento incluindo, mas não limi- tados a, hormônio de crescimento (hGH), humano; hormônio de crescimento 1-43, humano; hormônio de crescimento 6-13, humano; fator de liberação de hormônio de crescimento, humano; fator de liberação de hormônio de cres- cimento, bovino; de fator de liberação de hormônio de crescimento, porcina; fator de liberação de hormônio de crescimento 1-29, amida, rato; fator de crescimento de pró-liberação de hormônio, humano; fator de liberação de hormônio de crescimento de biotinila, humano; fator de liberação de hormô- nio de crescimento 1-29, amida, humano; [D-Ala2]-fator de liberação de hor- mônio de crescimento 1-29, amida, humano; [N-Ac-Tyr1, D-Arg2]-GRF 1-29, amida; [His1, Nle27]-fator de liberação de hormônio de crescimento 1-32, a- mida; fator de liberação de hormônio de crescimento 1-37, humano; fator de liberação de hormônio de crescimento 1-40, humano; fator de liberação de hormônio de crescimento 1-40, amida, humano; fator de liberação de hor- mônio de crescimento 30-44, amida, humano; fator de liberação de hormônio de crescimento, camundongo; fator de liberação de hormônio de crescimen- to, ovino; fator de liberação de hormônio de crescimento, rato; fator de libe- ração de hormônio de crescimento de biotinila, rato; GHRP-6 ([His1, Lys6]- GHRP); hexarrelina (hexapeptídeo de liberação de hormônio de crescimen- to); e [D-Lys3]-GHRP-6.

Proteínas de ligação de GTP e peptídeos de fragmento das mesmas incluindo, mas não limitados a, [Arg8]-fragmento de proteína de li- gação de GTP, alfa Gs; fragmentos da proteína de ligação de GTP, da famí- lia beta G; fragmentos da proteína de ligação de GTP, da família de G gama; fragmento de proteína de ligação de GTP, Galfa; fragmentos da proteína de ligação de GTP, Go alfa a e b; fragmento de proteína de ligação de GTP, alfa Gs; e fragmentos da proteína de ligação de GTP, G i1 alfa, G i2 alfa, G i3 alfa; fragmento da proteína de ligação de GTP, Golf alfa; fragmento da proteína de ligação de GTP, alfa Gz; fragmento da proteína de ligação de GTP, alfa Gq.

Peptídeos de guanilina incluindo, mas não limitados a, guanilina, humana; guanilina, rato; e uroguanilina.

Peptídeos de inibina incluindo, mas não limitados a, inibina, bo- vina; inibiria, alfa-subunidade 1-32, humana; [Tyr°]-inibína, alfa-subunidade 1-32, humana; peptídeo semelhante à inibina seminal do plasma, humano; [Tyr°]-peptídeo semelhante à inibina seminal do plasma, humano; inibina, alfa-subunidade 1-32, porcina; e [Tyr°]-inibina, alfa-subunidade 1-32, porci- na.

Peptídeos de interferona incluindo, mas não limitados a, espé- cies de interferona alfa (por exemplo, alfal, alfa2, alfa2a, alfa2b, alfa2c, al- fa2d, alfa3, alfa4, alfa4a, alfa4b, alfa5, alfa?, alfa74, alfa76, alfaA, alfaB, al- faC, alfaCI, alfaD, alfaE, alfaF, alfaG, alfaG, alfaH, alfal, alfaJI, alfaJ2, alfaK, alfaL); espécies de interferona beta (por exemplo, betai a); espécies de inter- ferona gama (por exemplo, gamai a, gamai b); interferona epsilo; interferona tau; interferona ômega ou qualquer análogo de interferona ômega. Vários análogos de interferona gama são descritos em Pechenov et al. "Methods for preparation of recombinante cytokine proteins V. mutant analogues of human inteferon-gamma with higher stability and activity" Protein Expr. Purif. 24:173-180 (2002) são incorporados aqui por referência em sua totalidade para ensinamentos direcionados para a preparação e testagem dos análo- gos de interferona.

Peptídeos de insulina incluindo, mas não limitados a, insulina, humana; insulina, porcina; IGF-I1 humano; fator de crescimento semelhante à insulina Il (69-84); fator de crescimento semelhante à pró-insulina Il (68- 102), humano; fator de crescimento semelhante à pró-insulina Il (105-128), humano; [AspB28]-insulina, humana; [LysB28]-insulina, humana; [LeuB28]- insulina, humana; [ValB28]-insulina, humana; [AlaB28]-insulina, humana; [Asp828, ProB29]-insulina, humana; [Lys628, ProB29]-insulina, humana; [Leu828, ProB29]-insulina, humana; [ValB28, ProB29]-insulina, humana; [Ala828, Pro629]- insulina, humana; [Ç3lyA21]-insulina, humana; [Gl/21, GlnB3]-insulina, humana; [AlaA21]-insulina, humana; [AlaA21, GlnB3]-insulina, humana; [GlnB3]-insulina, humana; [GlnB30]-insulina, humana; [Gl/21' GluB30]-insulina, humana; [Gl/21' GlnB3]insulina, humana; [Gln63, GluB30]-insulina, humana; insulina de B22- B30, humana; insulina de B23-B30, humana; insulina de B25-B30, humana; insulina de B26-B30, humana; insulina de B27-B30, humana; insulina de B29-B30, humana; a cadeia A de insulina humana, e a cadeia de B de insu- lina humana.

Peptídeos de Iaminina incluindo, mas não limitados a, laminina; alfa 1 (l)-CB3 435-438, rato; e inibidor de ligação de laminina.

Peptídeos de Ieptina incluindo, mas não limitados a, Ieptina 93- 105, humano; Ieptina 22-56, rato; Tyr-Ieptina 26-39, humana; e Ieptina 116- 130, amida, camundongo.

Peptídeos de Ieucoquinina incluindo, mas não limitados a, Ieu- comiossuppressina (LMS); Ieucopiroquinina (LPK); Ieucoquinina I; Ieucoqui- nina II; Ieucoquinina III; Ieucoquinina IV; Ieucoquinina VI; Ieucoquinina VII; e Ieucoquinina VIII. Peptídeos de hormônios de liberação de hormônio Iuteinizante incluindo, mas não limitados a, antide; Gn-RH II, galinha; hormônio de libe- ração de hormônio Iuteinizante (LH-RH) (GnRH); biotinil-LH-RH; cetrorelix (D-20761); [D-AIa6J-LH-RH; [Gln8]-LH-RH (LH-RH de galinha); [DLeu6, Val7] LH-RH 1-9, amida de etila; [D-Lys6J-LH-RH; [D-Phe21 Pro3, D- Phe6]-LH-RH; [DPhe2, DAIa6]-LH-RH; [Des-Gly10]-LH-RH, amida de etila; [D-Ala61 Des- Gly10]-LH-RH, amida de etila; [DTrp6]-LH-RH, amida de etila; [D-Trp6, Des- GIy10J-LH-RH, amida de etila (Deslorrelina); [DSer(But)6, Des-GIy10J-LH-RH, amida de etila; amida de etila; leuprolídeo; LH-RH 4-10; LH-RH 7-10; LH-RH, ácido livre; LH-RH, lampreia; LH-RH, salmão; [Lys8J-LH-RH; [Trp71Leu8J LH- RH, ácido livre; e [(t-Bu)DSer6, (Aza)GIy10J-LH-RH.

Peptídeos de mastoparan incluindo, mas não limitados a, mas- toparan; mas7; mas8; mas17; e mastoparan X.

Peptídeos desgranulantes de mastócito incluindo, mas não Iimi- tados a, peptídeo desgranulante de mastócito HR-1; e peptídeo desgranu- Iante de mastócito H-2.

Peptídeos estimulante de hormônio de melanócito (MSH) inclu- indo, mas não limitados a, [Ac-Cys4lDPhe7lCys10J alfa-MSH 4-13, amida; hormônio estimulante alfa-melanócito; alfa-MSH, ácido livre; beta-MSH, por- cina; hormônio estimulante de biotinil-alfa-melanócito; biotinil-[Nle4, D-Phe7J hormônio estimulante de alfa-melanócito; [Des - AcetilJ-alfa-MSH; [DPhe7J- alfa-MSH, amida; gama-1-MSH, amida; [Lys°]-gama-l-MSH, amida; fator ini- bidor de liberação de MSH, amida; [Nle4]-alfa-MSH, amida; [Nle4, D-Phe7J- alfa-MSH; N-Acetila, [NIe41DPhe7J alfa-MSH 4-10, amida; beta-MSH, huma- no; e gama-MSH.

Peptídeos de morficeptina incluindo, mas não limitados a, morfi- ceptina (beta-casomorfina 1-4 amida); [D-Pro]-morficeptina; e [N-MePhe31D- Pro4]-morficeptina.

Peptídeos de motilina incluindo, mas não limitados a, motilina, canino; motilina, porcina; biotinil-motilina, porcina; e [Leu13]-motilina, porcina.

Neuro-peptídeos incluindo, mas não limitados a, Ac-Asp-GIu; peptídeo cardioexcitatório de achatina 1 (ACEP-I) (Achatina fulica); hormônio adipocinético (ΑΚΗ) (Locust); hormônio adipocinético (Heliothis zea e Man- duca sexta); alitesina; hormônio adipocinético de Tabanus atratus (Taa- AKH); hormônio adipocinético Il (Locusta migratória); hormônio adipocinético Il (Schistocera gregaria); hormônio adipocinético Ill (AKH-3); hormônio adi- pocinético G (AKH-G) (Gryllus bimaculatus); alatotropina (A) (Manduca sex- ta); alatotropina 6-13 (Manduca sexta); amida de APGW (Lymnaea stagna- lis); bucalina; cerebelina; [Des-Ser1]-cerebelina; corazonina (American Coc- kroach Periplaneta americana); peptídeo cardioativo de crustáceo (CCAP); eritróforo de crustáceo; DF2 (Procambarus clarkii); fragmento de inibidor de ligação de diazepam, humano; fragmento de inibidor de ligação de diazepam (ODN); peptídeo relacionado à eledoisina; amida de FMRF (neuro-peptídeo cardioexcitatório de molúsculo); Gly-Pro-Glu (GPE), humano; granuliberrina R; neuropeptídeo de ativadorde cabeça; [His7]-corazonina; fator Il hipertrea- lossêmico de bicho-pau; hormônio hipotrealossêmico de Tabanus atratus (Taa-HoTH); cloridrato de isoguvacina; metiodeto de bicuculina; ácido piperi- dino-4-sulfônico; peptídeo de junção de proopiomelanocortina (POMC), bo- vino; peptídeo de junção, rato; amida de KSAYMRF (P. redivivus); cassinina; cinetensina; levitídeo; litorin; LUQ 81-91 (Aplysia califomica)] LUQ 83-91 (A- plysia califomica)] peptídeo mioativo I (Periplanetin CC-I) (Neuro-hormônio D); peptídeo mioativo Il (Periplanetina CC-2); miomodulina; peptídeo especí- fico para neurônio; enolase específica para neurônio 404-443, rato; neuro- peptídeo FF; neuropeptídeo K1 porcino; neuropeptídeo de NEI (prepro-MCH 131-143), rato; neuropeptídeo de NGE (prepro-MCH 110-128), rato; NFI (Procambarus clarkii)] PBAN-I (Bombyx mod)\ Hez-PBAN (Heliothis zea); SCPB (peptídeo cardioativo de aplisia); secretoneurina, rato; uperoleína; u- requistaquiquinina I; urequistaquiquinina II; peptídeo relacionado à xenopsi- na I; peptídeo relacionado à xenopsina II; peptídeo de pedal (Pep), aplisia; peptídeo F1, lagosta; filomedusina; mastoparan de polistes; proctolina; rana- tensina; Ro I (Gafanhoto de Lubber, Romalea microptera); Ro Il (Gafanhoto de Lubber, Romalea microptera); SALMF amida 1 (SI); SALMF amida 2 (S2); e SCPA.

Peptídeos de neuropeptídeo Y (NPY) incluindo, mas não limita- dos a, [Leu31,Pro34]-neuropeptídeo Y, humano; neuropeptídeo F (Moniezia expansa); antagonista de NPY B1BP3226; Bis (31/31') {[Cys31, Trp32, Nva34] NPY 31-36}; neuropeptídeo Y, humano, rato; amida de neuropeptídeo Y 1- 24, humana; biotinil-neuropeptídeo Y; [D-Tyr27'36, D-Thr32J-NPY 27-36; Des 10-17 (ciclo 7-21) [Cys7'21, Pro34]-NPY; C2-NPY; [Leu31, Pro34] neuropeptídeo Y, humano; neuropeptídeo Y, ácido livre, humano; neuropeptídeo Y, ácido livre, porcino; prepro NPY 68-97, humano; N-acetil-[Leu28, Leu31] NPY 24-36; neuropeptídeo Y, porcino; [D-Trp32]-neuropeptídeo Y, porcino; [D-Trp32] NPY 1-36, humano; [Leu17jDTrp32] neuropeptídeo Y, humano; [Leu31, Pro34]-NPY, porcino; NPY 2-36, porcino; NPY 3-36, humano; NPY 3-36, porcino; NPY 13- 36, humano; NPY 13-36, porcino; NPY 16-36, porcino; NPY 18-36, porcino; NPY 20-36; NFY 22-36; NPY 26-36; [Pro34]-NPY 1-36, humano; [Pro34]- neuropeptídeo Y, porcino; PYX-I; PYX-2; T4-[NPY(33-36)]4; e Tyr(OMe)21]- neuropeptídeo Y, humano. Peptídeos de fator neurotrópico incluindo, mas não limitados a,

fator neurotrópico derivado glial (GDNF); fator neurotrópico derivado do cé- rebro (BDNF); e fator neurotrópico ciliar (CNTF).

Ligantes do receptor de Notch incluindo, mas não limitados a proteínas semalhantes à Delta 1, à Delta 2, à Delta 3, à Delta 4, Denteado-1 e Denteado-2, e fragmentos dos mesmos.

Peptídeos de Orexina incluindo, mas não limitados a, orexina A; orexina B, humano; orexina B, rato, camundongo.

Peptídeos opioides incluindo, mas não limitados a, fragmento de alfa-caseína 90-95; BAM - 18P; casomoquinina L; casoxina D; cristalino; DALDA; dermencefalina (deltorfina) (Phylomedusa sauvagei); [D-Ala2]- deltorfina I; [D-Ala2]-deltorfina II; endomorfina-1; endomorfina-2; quiotorfina; [DArg2]-quiotorfina; peptídeo de tolerância à morfina; peptídeo de modulça- ção de morfina, fragmento do término C; neuropeptídeo modulador de morfi- na (A-18-F-NH2); nociceptina [orfanina FQ] (agonista de ORLI); TIPP; Tyr- MIF-I; Tyr-W-MIF-I; valorfina; LW-hemorfína-6, humana; Leu-valorfina-Arg; e Z-pró-D-Leu.

Peptídeos de oxitocina incluindo, mas não limitados a, [Asub]- oxitocina; oxitocina; biotinil-oxitocina; [Thr4, Gly7]-oxitocina; e ácido tocinoico ([lle3]-ácido pressinoico).

PACAP (peptídeo de ativação de ciclase adenilante pituitária) peptídeos incluindo, mas não limitados a, PACAP 1-27, humano, ovino, rato; PACAP (1-27)-Gly-Lys-Arg-NH2, humano; [Des-GIn16J-PACAP 6-27, huma- no, ovino, rato; PACAP38, rã; PACAP27-NH2, humano, ovino, rato; biotinil- PACAP27-NH2, humano, ovino, rato; PACAP 6-27, humano, ovino, rato; PACAP38, humano, ovino, rato; biotinil-PACAP38, humano, ovino, rato; PA- CAP 6-38, humano, ovino, rato; PACAP27-NH2, humano, ovino, rato; biotinil- PACAP27-NH2, humano, ovino, rato; PACAP 6-27, humano, ovino, rato; PACAP38, humano, ovino, rato; biotinil-PACAP38, humano, ovino, rato; PA- CAP 6-38, humano, ovino, rato; PACAP38 16-38, humano, ovino, rato; PA- CAP38 31-38, humano, ovino, rato; PACAP38 31-38, humano, ovino, rato; peptídeo relacionado a PACAP (PRP), humano; e peptídeo relacionado a PACAP (PRP), rato.

Peptídeos de pancreastatina incluindo, mas não limitados a, cromostatina, bovina; pancreastatina (hPST-52) (cromogranina A 250-301, amida); pancreastatina 24-52 (hPST-29), humana; cromogranina UNS 286- 301, amida, humano; pancreastatina, porcina; biotinil-pancreastatina, porci- na; [Nle8]-pancreastatina, porcina; [Tyr0,Nle8]-pancreastatina, porcino; [Tyr0]- pancreastatina, porcina; parastatina 1-19 (cromogranina A 347-365), porcina; pancreastatina (cromogranina A 264-314-amida, rato; biotinil-pancreastatina (biotinil-cromogranina A 264-314-amida; [Tyr°]-pancreastatina, rato; pancre- astatina 26-51, rato; e pancreastatina 33-49, porcina.

Polipeptídeos pancreáticos incluindo, mas não limitados a, poli- peptídeo pancreático, aviário; polipeptídeo pancreático, humano; ácido de polipeptídeo pancreático de fragmento C, humano; amida de polipeptídeo pancreático de fragmento C1 humano; polipeptídeo pancreático (Rana tem- porária); polipeptídeo pancreático, rato; e polipeptídeo pancreático, salmão.

Peptídeos do hormônio da paratiroide incluindo, mas não limita- dos a, [Asp76]-hormônio da paratiroide 39-84, humano; [Asp76]-hormônío da paratiroide 53-84, humano; hormônio 64-84, humano; [Asn, Leu18]-hormônio da paratiroide 1-34, humano; [Cys5>28]-hormônio da paratiroide 1-34, hu- mano; fator de malignidade de hipercalcemia 1-40; [Leu]-hormônio da parati- roide 1-34, humano; [Lys(biotinil)13, Nle8'18, Tyr34]-hormônio de da paratiroide 1-34 amida; [Nle8'18, Tyr34]-hormônio da paratiroide 1-34 amida; [Nle8'18, T- yr34]-hormônio da paratiroide 3-34 amida, bovino; [Nle8'18, Tyr34]-hormônio da paratiroide 1-34, humano; [Nle8'18, Tyr34]-hormônio da paratiroide 1-34 ami- da, humano; [Nle8'18, Tyr34]-hormônio da paratiroide 3-34 amida, humano; [Nle8'18, Tyr34]-hormônio da paratiroide 7-34 amida, bovino; [Nle8'21, Tyr34]- hormônio da paratiroide 1-34 amida, rato; hormônio da paratiroide 44-68, humano; hormônio da paratiroide 1-34, bovino; hormônio da paratiroide 3-34, bovino; hormônio da paratiroide 1-31 amida, humano; hormônio da paratiroi- de 1-34, humano; hormônio da paratiroide 13-34, humano; hormônio da pa- ratiroide 1-34, rato; hormônio da paratiroide 1-38, humano; hormônio da pa- ratiroide 1-44, humano; hormônio da paratiroide 28-48, humano; hormônio da paratiroide 39-68, humano; hormônio da paratiroide 39-84, humano; hor- mônio da paratiroide 53-84, humano; hormônio da paratiroide 69-84, huma- no; hormônio da paratiroide 70-84, humano; [Pro34]-peptídeo YY (PYY), hu- mano; [Tyr0]-fator de malignidade de hipercalcemia 1-40; [Tyr°]-hormônio da paratiroide 1-44, humano; [Tyr0]-hormônio da paratiroide 1-34, humano; [T- yr1]-hormônio da paratiroide 1-34, humano; [Tyr^-hormônio da paratiroide 27-48, humano; [Tyr34]-hormônio da paratiroide 7-34 amida, bovino; [Tyr43]- hormônio da paratiroide 43-68, humano; [Tyr52, Asn76]-hormônio da paratiroi- de 52-84, humano; e [Tyr63]-hormônio da paratiroide 63-84, humano.

Peptídeos relacionados ao hormônio da paratiroide (PTH) inclu- indo, mas não limitados a, PTHrP ([Tyr36]-amida de PTHrP 1-36), galinha; hHCF-(l-34)-NH2 (fator hipercalcêmico humoral), humano; proteína 1-34 re- lacionada ao PTH, humana; proteína relacionada a biotinil-PTH 1-34, huma- na; [Tyr°]-proteína relacionada ao PTH 1-34, humana; [Tyr34]-amida da prote- ína relacionada ao PTH 1-34, humana; proteína relacionada ao PTH 1-37, humana; ]-amida da proteína relacionada ao PTH 7 - 34, humana; ]-amida da proteína relacionada ao PTH 38-64, humana; ]-amida da proteína relaciona- da ao PTH 67 - 86, humana; proteína relacionada ao PTH 107-111, humana, rato, camundongo; ácido livre da proteína relacionada ao PTH 107-111; pro- teína relacionada ao PTH 107-138, humano; e proteína relacionada ao PTH 109-111, humano.

Peptídeos de peptídeo T incluindo, mas não limitados a, peptí- deo T; [D-Ala1]-peptídeo T; e [D-Ala1]-amida de peptídeo T.

Peptídeos de liberação de prolactina incluindo, mas não limita- dos a, peptídeo de liberação de prolactina 31, humano; peptídeo de libera- ção de prolactina 20, humano; peptídeo de liberação de prolactina 31, rato; peptídeo de liberação de prolactina 20, rato; peptídeo de liberação de prolac- tina 31, bovino; e peptídeo de liberação de prolactina 20, bovino.

Peptídeos de peptídeo YY (PYY) incluindo, mas não limitados a, PYY, humano; PYY 3-36, humano; biotinil-PYY, humano; PYY, porcino, rato; e [Leu31, Pro34]-PYY, humano.

Peptídeos de substrato de renina incluindo, mas não limitados a, acetila, angiotensinógeno 1-14, humano; angiotensinógeno 1-14, porcino; tetradecapeptídeo de substrato de renina, rato; [Cys8]-tetradecapeptídeo de substrato de renina, rato; [Leu8]-tetradecapeptídeo de substrato de renina, rato; e [Val8]-tetradecapeptídeo de substrato de renin, rato.

Peptídeos de secretina incluindo, mas não limitados a, secretina, canina; secretina, galinha; secretina, humana; biotinil-secretina, humana; secretina, porcina; e secretina, rato.

Peptídeos de somatostatina (GIF) incluindo, mas não limitados a, BIM-23027; biotinil-somatostatina; cortístatina biotinilada 17, humana; cor- tistatina 14, rato; cortístatina 17, humana; [Tyr°]-cortistatina 17, humana; cor- tistatina 29, rato; [D-Trp8]-somatostatina; [DTrp8, DCys14]-somatostatina; [D- Trp8, Tyr11]-somatostatina; [D-Trp11]-somatostatina; NTB (Naltriben); [Nle8]- somatostatina 1-28; octreotídeo (SMS 201-995); prosomatostatina 1-32, por- cina; [Tyr°]-somatostatina; [Tyr1]-somatostatina; [Tyr1]-somatostatina 28 (1- 14); [Tyr11]-somatostatína; [Tyr0, D-Trp8]-somatostatina; somatostatina; anta- gonista de somatostatina; somatostatina-25; somatostatina-28; somatostati- na 28 (1-12); biotinil-somatostatina-28; [Tyr°]-somatostatina-28; [Leu8, D- Trp22, Tyr25Homatostatina^S; biotinil-[Leu8, D-Trp22, Ty^j-somatostatina- 28; somatostatina-28 (1-14); e análogo de somatostatina, RC -160.

Peptídeos de substância P incluindo, mas não limitados a, anta- gonista-2 de proteína G; Ac-[Arg6, Sar91 Met(02)11]-substância P 6-11; [Arg3]- substância P; Ac-éster de Trp-3,5-bis(trifluorometil)benzila; Ac-[Arg6, Sar9, Met(02)11]-substância P 6-11; [D-Ala4]-substância P 4-11; [Tyr6, D-Phe71 D- His9]-substância P 6-11 (sendida); biotinil-substância P; biotinil-NTE[Arg3]- substância P; [Tyr8]-substância P; [Sar9, Met(02)11]-substância P; [D-Pro21 D- Trp7,9]-substância P; [D-Pro4, 0- Trp7'9]-substância P 4-11; substância P 4-11; [DTrp2'7,9]-substância P; [(Deidro)Pro2'4, Pro9]-substância P; [Deidro-Pro4]- substância P 4-11; [Glp5,(Me)Phe8,Sar9]-substância P 5-11; [GIp51Sar9]- substância P 5-11; [Glp5]-substância P 5-11; hepta-substância P (substância P 5-11); hexa-substância P(substance P 6-11); [MePhe8,Sar9]-substância P; [Nle11]-substância P; Octa-substância P(substância P 4-11); [pG|u1]-hexa- substância P ([pGlu6]-substância P 6-1 1); [pGIu6, D-Pro9]-substância P 6-11; [(pN02)Phe7Nle11]-substância P; penta-substância P (substância P 7-11); [Pro9]-substância P; GR73632, substância P 7 -11; [Sar4]-substância P 4-11; [Sar9]-substância P; septida ([pGIu6, Pro9]-substância P 6 - 11); espantida I; espantida II; substância P; substância P1 bacalhau; substância P1 truta; anta- gonista de substância P; substância P-Gly-Lys-Arg; substância P 1-4; subs- k 20 tância P 1-6; substância P 1-7; substância P 1-9; deca-substância P (subs- tância P 2-11); nona-substância P (substância P 3-11); tetrapeptídeo de substância P (substância P 8-11); tripeptídeo de substância P (substância P 9-11); substância P, ácido livre; éster metílico de substância P; e [Tyr8lNIe11] substância P.

Peptídeos de taquicinina incluindo, mas não limitados a, [Ala51

beta-Ala8] neuroquinina A 4-10; eledoisina; Iocustataquiquinina I (Lom-TK-I) (Locusta migratória); Iocustataquinina Il (Lom-TK-II) (Locusta migratória); neuroquinina A 4-10; neuroquinina A (neuromedina L1 substância K); neuro- quinina A, bacalhau e truta; biotinil-neuroquinina A (biotinil-neuromedina L1 biotinil-substância K); [Tyr°]-neuroquinina A; [Tyr6]-substância K; FR64349; [Lys31 Gly8-(R)-gama-lactam-Leu9]-neuroquinina A 3-10; GR83074; GR87389; GR94800; [Beta-Ala8]-neuroquinina A 4-10; [Nle10]-neuroquinina A 4-10; [Trp7, beta—Ala8]-neuroquinina A 4-10; neuroquinina B (neuromedina K); biotinil-neuroquinina B (biotinil-neuromedina K); [MePhe7]-rieuroquinina B; [Pro7]-neuroquinina B; [Tyr]-neuroquinina B; neuromedina B, porcina; bio- tinil-neuromedina B, porcina; neuromedina B-30, porcina; neuromedina B-32, porcina; antagonista de receptor de neuromedina B; neuromedina C, porci- na; neuromedina N1 porcina; neuromedina (U-8), porcina; neuromedina (U- 25), porcina; neuromedina U, rato; neuropeptídeo-gama (gama- preprotaquinina 72-92); PG-KII; fiilolitorina; [Leu8]-filolitorina (Phyllomedusa sauvagei); fisalemina; fisalemina 1-11; esciliorinina II, amida, esqualo; senk- tida, peptídeo de receptor de neuroquinina seletiva B; [Sei^J-neuromedina C; beta-preprotaquinina 69-91, humana; beta-preprotaquinina 111-129, huma- na; taquiplesina I; xenopsina; e xenopsina 25 (xenina 25), humana.

Peptídeos de hormônio de liberação de tirotropina (TRH) incluin- do, mas não limitados a, hormônio de liberação de biotinil-tirotropina; [Glu1]- TRH; His-pró-dicetopiperazina; [3-Me-His2]-TRH; pGlu-GIn-pró-amida; pGlu- His; [Phe2]-TRH; prepro TRH 53-74; prepro TRH 83-106; prepro-TRH 160- 169 (Ps4, peptídeo de potencialização de TRH-); prepro-TRH 178-199; hor- mônio de liberação de tirotropina (TRH); TRH, ácido livre; TRH-SH Pro; e peptídeo de precursor de TRH.

Peptídeos de toxina incluindo, mas não limitados a, ômega- agatoxina TK; agelenina, (aranha, Agelena opulenta); apamina (abelha melí- fera, Apis mellifera); calcicudina (CaC) (mamba verde, Dedroaspis angusti- ceps); calciseptina (mamba preta, Dendroaspis polilepis polilepis); caribdoto- xina (ChTX) (escorpião, Leiurus quinquestriatus var. hebraeus); clorotoxina; conotoxina Gl (caracol marinho, Conus geographus); conotoxina GS (caracol marinho, Conus geographus); conotoxina Ml (Marine Magus conus); alfa- conotoxina El, Conus ermineus; alfa-conotoxina SIA; alfa-conotoxina Im1; alfa-conotoxina Sl (caracol conífero, Conus striatus; microconotoxina GIIIB (caracol marinho, Conus geographus); ômega-conotoxina GVIA (caracol ma- rinho, Conus geographus); ômega-conotoxina MVIIA (Conus magus); ôme- ga-conotoxina MVIIC (Conus magus); ômega-conotoxina SVIB (caracol coní- fero, Conus striatus); inibidor de endotoxina; geografutoxina I (GTX-I) (μ- Conotoxina GUIA); iberiotoxina (IbTX) (escorpião, Buthus tamulus); caliotoxi- na 1-37; caliotoxina (escorpião, Androct-onus mauretanicus mauretanicus); peptídeo de desgranulação de mastócitos (MCD-peptídeo, peptídeo 401); margatoxina (MgTX) (escorpião, Centruriodes margaritatus); neurotoxina NSTX-3 (aranha pupua nova guiné, Nephilia maculata); PLTX-II (aranha, Plectreurys tristes); escilatoxina (leiurotoxina I); e toxina de esticodactila (ShK); toxina de difteria; ricina A; exotoxina de Pseudomonas aeruginosa A.

Imunotoxinas consistem em toxinas covalentemente ligadas a um anticorpo que age como um sistema de correção de direção, especifica- mente alvejando a toxina para aquelas células que se deseja eliminar por meio de um anticorpo (policlonal ou monoclonal) direcionado contra uma molécula, ou um grupo de moléculas, carregado na superfície das células marcadas. Toxinas incluindo, mas não limitadas àquelas citadas acima po- dem ser usadas para este efeito. A invenção descrita neste pedido de paten- te pode ser usada para Iiberartais imunotoxina ao cólon. Em alguns casos, o anticorpo pode ser substituído por uma molécula pequena que similarmente age para alvejar a toxina para um grupo escolhido de células.

Peptídeos intestinais vasoativos (VIP/PHI) incluindo, mas não limitados a, VIP, humano, porcino, rato, ovino; VIP-Gly-Lys-Arg-NH2; biotinil- -20 PHI (biotinil-PHI-27), porcino; [Glp16] VIP 16-28, porcino; PHI (PHI-27), por- cino; PHI (PHI-27), rato; PHM-27 (PHI), humano; prepro VIP 81-122, huma- no; preproVIP/PHM 111-122; prepro VIP/PHM 156-170; biotinil-PHM-27 (bio- tinil-PHI), humano; contratante vasoativo intestinal (endotelina-beta); peptí- deo octacosa intestinal vasoativo, galinha; peptídeo intestinal vasoativo, co- baia; biotinil-VIP, humano, porcino, rato; peptídeo intestinal vasoativo 1-12, humano, porcino, rato; peptídeo intestinal vasoativo 10-28, humano, porcino, rato; peptídeo intestinal vasoativo 11-28, humano, porcino, rato, ovino; pep- tídeo intestinal vasoativo (bacalhau, Gadus morhua); peptídeo intestinal va- soativo 6-28; antagonista de peptídeo intestinal vasoativo; antagonista de peptídeo intestinal vasoativo ([Ac-Tyr1, D-Phe2]-amida de GHRF 1-29); anta- gonista de receptor de peptídeo intestinal vasoativo (4-CI-D-Phe6, Leu17]- VIP); e inibidor de ligação de receptor de peptídeo intestinal vasoativo, L-8- Κ.

Peptídeos de vasopressina (ADH) incluindo, mas não limitados a, vasopressina; [Asu1'6, Arg8]-vasopressina; vasotocina; [Asu16lArg8]- vasotocina; [Lys8]-vasopressina; ácido pressinoico; [Arg]-desglicinamida de desamino vasopressina; [Arg]-vasopressina (AVP); [Arg8]-desglicinamida de vasopressina; biotinil-[Arg8]-vasopressina (biotinil-AVP); [D-Arg8]- vasopressina; desamino-[Arg8]-vasopressina; desamino-[D-Arg8]- vasopressina (DDAVP); [desamino-[D-3-(3'-piridil-Ala)]-[Arg8]-vasopressina; [1-(beta-Mercapto-beta, ácido beta-ciclopentametileno propiônico), 2-(0- metil)Tirosina]-[Arg8]-vasopressina; neuropeptídeo de metabólito de vaso- pressina [pGIu4, Cys6]; neuropeptídeo de metabólito de vasopressina [pGIu4, Cys6]; [Lys8]- desglicinamida de deamino vasopressina; [Lys8]-vasopressina; [Mpr1,Val4,DArg8]-vasopressina; [Phe2, He3, Orn8]-vasopressina ([Phe21 Orn8]-vasotocina); [Arg8]-vasotocina; e [d(CH2)5, Tyr(Me)2, Orn8]-vasotocina.

Peptídeos relacionados a vírus incluindo, mas não limitados a, substrato de CMV protease fluorogênico humano; proteína de núcleo de HCV 59-68; proteína de NS4A de HCV 18-40 (cepa JT); proteína de NS4A de HCV 21-34 (cepa JT); fragmento de ligação do receptor do vírus da hepa- tite; pré-região S do vírus da hepatitus B 120-145; [Alal27]-pré-S região do vírus da hepatitus B 120 - 131; inibidor do herpes vírus 2; fragmento da pro- teína de envelope de HIV 254-274; fragmento de gag de HIV 129-135; subs- trato de HIV; peptídeo P18; peptídeo T; [3,5 diiodo-Tyr7] peptídeo T; peptí- deo de inibidor de HIV-I de R15K; T20; T21; decapeptídeo P de V3 18-110; e peptídeo inibidor de replicação viral.

Proteínas da família Wnt, e fragmentos da mesma.

Embora certos análogos, fragmentos, e/ou fragmentos análogos tenham sido descritos dos vários polipeptídeos acima, é para ser entendido que outros análogos, fragmentos, e/ou fragmentos análogos que retêm toda ou alguma da atividade do polipeptídeo particular, ou pelo contrário que atua como um antagonista assim impedindo sua ação, podem também ser úteis nas modalidades da presente invenção. Análogos podem ser obtidos através de vários meios, como será entendido por aqueles versados na técnica. Por exemplo, certos aminoácidos podem ser substituídos por outros aminoácidos em um polipeptídeo sem perda apreciável da capacidade de ligação interati- va com estruturas tais como, por exemplo, regiões de ligação de antígeno de anticorpos ou sítios de ligação em moléculas de substrato. Como a capaci- dade interativa e a natureza de um fármaco de polipeptídeo definem sua ati- vidade funcional biológica, certas substituições de seqüência de aminoácido podem ser feitas na seqüência de aminoácido e não obstante permanece um polipeptídeo com propriedades semelhantes, ou pelo contrário confere esta atividade antagonística análoga com a qual interfere ou bloqueia a ação do produto natural. Além disso, moléculas pequenas, quer peptidomiméticas ou não, naturais ou sintéticas, podem ser capazes de substituir as proteínas e os peptídeos citados acima e tem atividade similar ligando a seus recepto- res. Pelo contrário, tais moléculas pequenas podem bloquear ou interferir com a atividade das proteínas e peptídeos citados acima por vários meca- nismos, incluindo, mas não limitados a, impedindo sua interação com seus receptores cognatos. Adicionalmente, muitas das proteínas citadas atuam acima como iniciadores das vias de sinalização. Uma modalidade desta in- venção é o uso de moléculas químicas (peptídeos, peptidomiméticos, ou qualquer outra molécula natural ou sintética de qualquer natureza química) como ativadores ou inibidores destas vias de sinalização. Exemplos desta estratégia é o uso de inibidores de gama-secretase para inibir a via de sinali- zação de Notch1 ou inibidores da interação entre beta-catenina e fatores de transcrição de Tcf para inibir a via de beta-catenina Wnt, ambos destes es- tão envolvidos em câncer colorretal. g) Agentes de Oliqonucleotídeo

Os agentes ativos podem também ser na forma de oligonucleo- tídeos, incluindo oligorribonucleotídeos, oligodeoxirribonucleotídeos e deri- vados dos mesmos úteis para propósitos profilácticos, paliativos ou terapêu- ticos, incluindo terapia de gene e o tratamento de câncer, tal como câncer de cólon. Um oligonucleotídeo é um polímero de uma unidade de repetição ge- nericamente conhecida como um nucleotídeo. Um nucleotídeo inalterado (de ocorrência natural) tem três componentes: (1) uma base heterocíclica con- tendo nitrogênio ligada por um de seus átomos de nitrogênio a (2) um açúcar de 5-pentofuranosila e (3) um fosfato estereficado em um dos átomos de carbono 5' ou 3' do açúcar. Quando incorporado em uma cadeia de oligonu- cleotídeo, o fosfato de um primeiro nucleotídeo é também estereficado em um açúcar adjacente de um segundo, nucleotídeo adjacente por meio de uma ligação de 3'-5' fosfato. Nucleotídeos são nucleosídeos que também incluem um grupo fosfato covalentemente ligado à porção de açúcar do nu- cleosídeo. Na formação dos oligonucleotídeos, os grupos fosfato covalente- mente ligam os nucleosídeos adjacentes uns aos outros para formar um composto polimérico linear. As respectivas extremidades desta estrutura po- limérica linear podem ser também unidas para formar uma estrutura circular, porém, dentro do contexto da invenção, estruturas lineares abertas são em geral preferidas.

Oligonucleotídeos podem incluir seqüências de nucleotídeo sufi- ciente em identidade e número para realizar hibridação específica com um ácido nucleico particular. Tais oligonucleotídeos que especificamente hibri- dam com a uma porção do filamento de senso de um gene são descritos comumente como "antissentido". No contexto da invenção, "hibridação" sig- nifica ligação de hidrogênio, que pode ser Watson-Crick, Hoogsteen ou liga- ção de hidrogênio Hoogsteen reversa, entre os nucleotídeos complementa- res. Por exemplo, adenina e timina são nucleobases complementares que pareiam através da formação de ligações de hidrogênio. "Complementares", como aqui usado, refere-se à capacidade para pareamento preciso entre os dois nucleotídeos. Por exemplo, se um nucleotídeo em uma certa posição de um oligonucleotídeo for capaz de ligação de hidrogênio com um nucleotídeo na mesma posição de uma molécula de DNA ou RNA, então o oligonucleotí- deo e DNA ou RNA são considerados complementares um ao outro naquela posição. O oligonucleotídeo e o DNA ou RNA são complementares um ao outro quando um número suficiente de posições correspondentes em cada molécula estiver ocupado por nucleotídeos que podem ligar hidrogênio entre si.

O termo "oligonucleotídeo" refere-se a um oligômero ou polímero de ácido ribonucléico (RNA) ou ácido desoxirribonucléico (DNA) ou miméti- cos dos mesmos. Este termo inclui oligonucleotídeos compostos de nucleo- bases de ocorrência natural, açúcares e ligações interaçúcar covalente (ca- deia principal) como também oligonucleotídeos tendo porções de ocorrência não-natural que funcionam similarmente. Eles podem ser uni- ou bifilamenta- res. Em geral, oligonucleotídeos formulados nas composições da invenção podem ser de cerca de 8 a cerca de 100 nucleotídeos em comprimento, mais preferivelmente de cerca de 10 a cerca de assim nucleotídeos em comprimento, e mais preferivelmente de cerca de 10 a cerca de 25 nucleotí- deos em comprimento.

Oligonucleotídeos que são formulados nas composições da in- venção incluem compostos antissentidos e outros oligonucleotídeos bioati- vos. Um debate de oligonucleotídeos antissentidos e algumas modificações desejáveis pode ser encontrado em De Mesmaeker et al. (Acc. Chem. Res., 1995,28,366).

Como aqui usado, compostos antissentidos incluem oligonucleo- tídeos antissentidos, ácidos nucleicos de peptídeo antissentidos (PNAs)1 RNA interferentes pequenos, RNA de alfinete curto, ribozimas e seqüências guias externas (EGSs). Em modulação antissenso do RNA mensageiro (mRNA), hibridação de um composto antissentido com seu alvo de niRNA interfere com o papel normal do mRNA e causas uma modulação de sua função nas células. As funções de mRNA a serem interferidas incluem todas as funções vitais tais como translocação do RNA para o sítio para translação de proteína, translação atual da proteína do RNA, splicing do RNA para ren- der uma ou mais espécies de mRNA, giro ou degradação do mRNA e possi- velmente até mesmo atividade catalítica independente que pode ser engas- tada pelo RNA. O efeito geral de tal interferência com função de mRNA é modulação da expressão de uma proteína, em que "modulação" ou significa um aumento (estimulação) ou uma diminuição (inibição) na expressão da proteína. No contexto da presente invenção, inibição é a forma preferida de modulação de expressão de gene.

Compostos antissensos podem exercer seu efeito por uma vari- edade de meios. Uns tais meios são a direção mediada antissentido de uma nuclease endógena, tal como RNase H em eucariotos ou RNase P em pro- cariotos, para o ácido nucleico alvo (Chiang et al., J. Biol. Chem., 1991, 266, 18162; Forsteretal., Science, 1990, 249, 783).

As seqüências que recrutam RNase P são conhecidas como Seqüências Guias Externas, consequentemente a abreviação "EGS" (Guer- rier-Takada et al., Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 1997, 94, 8468). Outros meios envolvem covalentemente ligar uma metade sintética tendo atividade de nu- clease a um oligonucleotídeo tendo uma seqüência antissentido, ao invés de contar com recrutamento de uma nuclease endógena. Metades sintéticas tendo atividade de nuclease incluem, mas não são limitadas a, RNAs enzi- máticos, complexos de íon de lantanídeo, e outros (Haseloff et al., Nature, 1988, 334, 585; Bakeretal., J. Am. Chem. Soe, 1997, 119, 8749).

Como aqui usado, o termo "composto antissentido" também in- clui ribozimas, moléculas de RNA sintéticas e derivadas das mesmas que qatalisam as reações de endorribonuclease altamente específicas (vide, em geral, Pat. U. S. No. 5.543.508 para Haseloffet al. e Pat. U. S. No. 5.545.729 para Goodchild et al.).

Além disso, o termo "composto antissentido" inclui RNA (ou DNAs que codificam tais RNAs) levando à modulação da expressão de gene pelo mecanismo de interferência de RNA. Tais moléculas incluem, mas não são limitadas a, RNA interferentes curtos, consistindo em RNA bifilamenta- res de menos de 50 pares de base, tipicamente 21 ou 29 nucleotídeos em comprimento com a adição em qualquer uma de suas extremidades de ou- tras moléculas químicas (incluindo deoxirribonucleotídeos, naturais ou modi- ficados), como também RNA alfinete curto (ou moléculas de DNA incluindo plasmídeos e vírus de qualquer natureza que leva à sua produção, in vitro ou in vivo) que age através do RNA interferente. Isto também inclui qualquer molécula de DNA ou de RNA, filamento simples ou duplo que conduz nas células para RNA interferente.

Os compostos antissentido formulados nas composições da in- venção (1) podem ser de cerca de 8 a cerca de 100 nucleotídeos em com- primento, mais preferivelmente de cerca de 10 a cerca de 30 nucleotídeos em comprimento, (2) uni ou bifilamentar, (3) são marcados para uma se- qüência de ácido nucleico requerida para a expressão de um gene de um mamífero, incluindo um ser humano, e (4), quando contatados com as célu- Ias que expressam o gene alvo, modulam sua expressão. Devido à atividade biológica do produto de gene codificado pelo gene alvo, modulação de sua expressão tem o resultado desejável de fornecer específico profiláctico, pali- ativo e/ou efeitos terapêuticos.

É entendido na técnica que a seqüência de nucleobase de um oligonucleotídeo ou outro composto antissentido não necessita ser 100 % complementar para sua seqüência de ácido nucleico alva para ser especifi- camente hidrolisável. Um composto antissentido é especificamente hidroli- sável para seu ácido nucleico-alvo quando houver um grau suficiente de complementaridade para evitar ligação não-específica do oligonucleotídeo às seqüências não-marcadas sob condições em que ligação específica é desejada, isto é, sob condições fisiológicas no caso de ensaios in vivo ou tratamento terapêutico, ou, no caso de ensaios in vitro, sob condições de ensaio.

Outros oligonucleotídeos bioativos incluem aptâmeros e chama- 1 20 rizes moleculares. Como aqui usado, o termo é significado referir-se a qual- quer oligonucleotídeo (incluindo um peptídeo-ácido nucleico ou PNA) que (1) fornece um efeito profiláctico, paliativo ou terapêutico para um animal em necessidade do mesmo e (2) age por um mecanismo não-antissentido, isto é, por alguns meios diferentes de hibridação com um ácido nucleico. O nome aptâmero foi criado por EHington et al. (Nature, 1990,

346, 818) para referir-se às moléculas de ácido nucleico que ajustaram e portanto se ligam com especificidade significativa aos Iigantes de ácido não- nucleico tais como peptídeos, proteínas e moléculas pequenas tais como fármacos e tinturas. Por causa destas propriedades de ligação de Iigantes específicos, os ácidos nucleicos e oligonucleotídeos que podem ser classifi- cados como aptâmeros podem ser facilmente purificados ou isolados por meio de cromatografia de afinidade usando colunas que carregam Iigante imobilizado. Aptâmeros podem ser ácidos nucleicos que são relativamente curtos àqueles que são tão grandes quanto alguns cem nucleotídeos. Por exemplo, aptâmeros de RNA que são 155 nucleotídeos de comprimento e que ligam tinturas tais como Cibacron Blue e Blue Reactive 4 com seletivi- dade boa foram relatados (Ellington et al., Nature, 1990, 346, 818). Embora as moléculas de RNA foram primeiro referidas como aptâmeros, o termo como usado na presente invenção refere-se a qualquer ácido nucleico ou oligonucleotídeo que exibem ligação específica a Iigantes de moléculas pe- quenas incluindo, mas não limitados a, DNA, RNA, derivados de DNA e con- jugados, derivados de RNA e conjugados, oligonucleotídeos modificados, oligonucleotídeos quiméricos, e gapmeros (vide, por exemplo, Pat. U.S. N0 5.523.3B9, para Ecker et al., emitida em 4 de junho de 1996 e incorporada aqui por referência).

Chamarizes moleculares são ácidos nucleicos bifilamentares curtos (incluindo ácidos nucleicos unifilamentares projetados "enovelarem-se de volta" neles próprios) que mimetizam um sítio em um ácido nucleico ao qual um fator, tal como uma proteína, se liga. Tais chamarizes são espera- dos competitivamente inibir o fator; ou seja, porque as moléculas de fator estão ligadas a um excesso do chamariz, a concentração de fator ligada ao sítio celular que corresponde ao chamariz diminui, com efeitos terapêuticos, paliativos ou profilácticos resultantes. Métodos de identificar e construir mo- léculas chamarizes são descritos, por exemplo, na Pat. U. S. No. 5.716.780 para Edwards et al.

Outro tipo de oligonucleotídeo bioativo é uma molécula híbrida de RNA-DNA que pode direcionar conversão do gene de um ácido nucleico endógeno (Cole-Strauss et al., Science, 1996, 273, 1386).

Cadeias principais de oligonucleotídeos modificados preferidos incluem, por exemplo, fosforotioatos, fosforotioatos quirais, fósforo-ditioatos, fosfotriésteres, aminoalquilafosfotriésters, fosfonatos de metila e outros de alquila incluindo fosfonatos de 3'-alquileno e fosfonatos quirais, fosfinatos, fosforamidatos incluindo fosforamidato de 3'-amino e aminoalquilfosforami- datos, tionofosforamidatos, tionoalquilfosfonatos, tionoalquilfosfotriésters, e boranofosfatos tendo ligações 3'-5' normais, análogos 2'-5' ligados destes, e aqueles tendo polaridade invertida em que os pares adjacentes das unida- des de nucleosídeo 3'-5' a 5-3' ou 2'-5' são ligados a 5'-2'. Vários sais, sais misturados e formas de ácido livre são também inclusos. Quaisquer dos oli- gonucleotídeos bioativos precedentes podem ser formulados no sistema de liberação de fármaco da invenção e usados para propósitos profilácticos ou terapêuticos. Os oligonucleotídeos podem ser estabilizados através de com- plexação, por exemplo, com lipídios catiônicos tais como Lipoplexe ou polí- meros catiônicos tais como Poliplexe. h) Agentes Diagnósticos

Imageamento médico é a visualização não-invasiva ou não- cirúrgica de órgãos ou processos internos. Métodos de diagnóstico represen- tativos incluem Raios X, imageamento de ressonância magnética (MRI), ra- dionuclídeos ou medicina nuclear, e ultrassom. Radionuclídeos são núcleos que se deterioram mediante dissi-

pação de energia em excesso (pai) para tornar-se estável (filho) por emissão de energia em forma de radiação particulada ou eletromagnética. Fluorosco- pia é uma tela fluorescente que detecta Raios gama ou X que são transmiti- dos por uma câmera de TV para fornecer imagens de tempo real dos órgãos > 20 em movimento usando agentes de contraste tais como PCTA. GATO - To- mografia axial computadorizada - leva vantagem das diferenças pequenas na densidade radiográfica do tecido para criar uma imagem. O cólon é fre- qüentemente imageado usando uma série Gl inferior de um enema de bário para conduzir um estudo radiográfico do cólon do intestino grande e reto. Tecnécio é um radiomarcador comum. Outros compostos radio-

marcados incluem radiomarcadores de iodo, tais como sulfato de iobengua- no 131I1 iodo123 de sódio, 131iodo de sódio, e marcações de índio, tais como radiomarcações de 111In, cloreto de índio, e satumomabpendetide de índio. Agentes de contraste de imageamento incluem agentes de contraste con- tendo ferro tais como ferumoxidas e gadolínio dentrítico.

A presente invenção pode ser usada para liberar aos agentes do cólon que permite ou facilita a visualização das estruturas, lesões, células que carregam moléculas de superfície celular ou intracelular definidas por qualquer técnica de imageamento incluindo, mas não restrito a, radiografia, radiotomografia, imageamento de ressonância magnética (MRI)1 ultrassom, tomografia de emissão de positron (varredura PET), ou qualquer outra forma de técnica de imageamento usando ondas radiomagnéticas de qualquer comprimento de onda. Por exemplo, moléculas pequenas ou anticorpos que reconhecem estruturas da superfície celular das células de câncer do cólon podem ser marcadas com radionuclídeos tais como "Tecnécio e usadas para detectar células tumorais e metástase de vários tamanhos incluindo micrometástases.

II. MÉTODOS PARA PREPARAR AS CONTAS DE PECTINA

Contas de pectina podem ser preparadas usando métodos co- nhecidos àqueles de habilidade na técnica, incluindo misturar o(s) agente(s) ativo(s) em uma solução de pectina, e gelificar as metades aniônicas de pec- tina com um cátion divalente tal como zinco divalente, por exemplo, na forma de uma solução de acetato de zinco.

A gelificação é tipicamente feita agitando uma solução, suspen- são ou dispersão do agente ativo, em uma modalidade, β-lactamase L1, e pectina, ajustando o pH da solução se necessário, e adicionando esta solu- ção a gotas para uma solução de acetato de zinco sob agitação. Em algu- mas modalidades onde o(s) agente(s) ativo(s) não for(em) afetado(s) adver- samente por outros íons de metal, íons de metal divalentes ou trivalentes diferentes de zinco podem ser usados.

Tecnologias adequadas para acrescentar a solução de pectina em gotas à solução de acetato de zinco são conhecidas àqueles de habili- dade na técnica; e incluem o sistema de multibico de Nisco Engineering AG e outras tecnologias relevantes para produzir gotas de uma solução de pec- tina.

As gotas de pectina sofrem um processo de gelificação, ideal- mente durante um tempo predeterminado para obter o melhor rendimento de encapsulação e eficiência de liberação subsequente.

A concentração da solução de pectina é vantajosamente por vol- ta de 4 por volta de 10 % (w/v), preferivelmente por volta de 4 a por volta de 7 %, o cátion de metal, tal como solução de acetato de zinco, é vantajosa- mente de cerca de 2 a cerca de 20 % (p/v), preferivelmente de cerca de 5 a cerca de 15 %. Mais preferivelmente, a solução de pectina é cerca de 5 % (p/v), a solução de acetato de zinco é cerca de 12 % (p/v).

As contas de pectina são vantajosamente agitadas no cátion de metal, tal como solução de acetato de zinco, a um pH de cerca de 6, a tem- peratura ambiente, sob agitação lenta, para pelo menos por volta de 12 mi- nutos até por volta de 20 horas, preferivelmente de por volta de 20 minutos a por volta de 2 horas.

As contas podem depois ser recolhidas e enxaguadas em água destilada, idealmente até a condutividade da solução de enxágue alcançar um planalto. Enxágue é preferivelmente feito pelo menos duas vezes ou sob um processo contínuo para minimizar a quantidade de acetato de zinco resi- dual se restabelecida na solução de enxágue.

As contas enxaguadas podem depois ser colhidas e submetidas a um processo de secagem usando métodos conhecidos àqueles de habili- dade na técnica, incluindo tecnologias de incubadora aquecida ou de leito fluidizado.

As contas são tipicamente secadas em uma temperatura de en-

tre por volta de 20 e por volta de 40°C para por volta de 30 min a por volta de 24 horas, preferivelmente a por volta de 35°C durante a noite. Secagem é preferivelmente executada até o peso das contas alcançar um platô.

O diâmetro das partículas pode ser finamente afinado usando agulhas de diâmetro interno apropriado para formar as gotas de pectina a- crescentadas à solução de acetato de zinco. As contas são preferivelmente entre cerca de 600 e 1500 pm em diâmetro.

Quando o agente ativo for β-lactamase L1, os rendimentos da encapsulação são tipicamente entre 50 e 100 %, medidos em termos de ati- vidade enzimática.

III. FORMAÇÃO DOS SISTEMAS DE LIBERAÇÃO DE FÁRMACO INCLU- INDO CONTAS DE PECTINA As contas de pectina podem ser colhidas, e combinadas com excipientes apropriados e formuladas em uma variedade de sistemas de li- beração oral de fármaco. Por exemplo, as contas podem ser combinadas com um excipiente sólido, e em comprimido, ou inclusas em uma cápsula.

As contas de pectina podem também ser combinadas com exci- pientes líquidos/géis que não degradam as contas de pectina, e a mistu- ra/dispersão pode ser incorporada em uma cápsula, tais como uma cápsula de gel.

Os comprimidos ou cápsulas podem ser revestidos, se desejado, com um revestimento entérico adequado para ajudar atravessando o estô- mago sem degradação. O pH no estômago é da ordem de 1 a 3, mas au- menta no intestino delgado e no cólon para atingir valores perto de 7 (Hov- gaard L. et al. (1996) Current Applications of Polysaccharides in Colon Tar- geting, Criticai Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems, 13, 185). Os sistemas de liberação de fármaco, na forma de comprimidos, cápsulas de gelatina, esferoides e outros, podem alcançar o cólon, sem serem expostos a estas variações no pH, os revestindo com um polímero pH-dependente, insolúvel em pH acídico mas solúvel em pH neutro ou alcalino (Kinget et al. op. cit). Os polímeros mais correntemente usados para este propósito são derivados de ácido metacrílico, Eudragit® LeS (Ashford M. et al. (1993), An in vivo investigation of the suitability of pH-dependent polymers for colonic targeting, International Journal of Pharmaceutics, 95, 193 e 95, 241; e David A. et al (1997) Acrylic polymers for colon-speeific drug delivery, S.T.P. Phar- ma Sciences, 7, 546) e mais recentemente Eudragit® FS.

Os sistemas de liberação de fármaco são administrados em uma quantidade eficaz adequada para fornecer o grau adequado de tratamento ou prevenção dos distúrbios para os quais os compostos são administrados. As quantidades eficientes destes compostos são tipicamente abaixo da con- centração de limiar requerida para suscitar qualquer efeito colateral apreciá- vel. Os compostos podem ser administrados em uma janela terapêutica na qual alguns distúrbios são tratados e certos efeitos colaterais são evitados. Idealmente, a dose eficaz dos compostos descritos aqui é suficiente para fornecer os efeitos desejados no cólon mas é insuficiente (isto é, não é a um nível alto o bastante) para fornecer efeitos colaterais indesejáveis em outro lugar no corpo.

Mais preferivelmente, doses eficazes estão em concentrações muito baixas, onde efeitos máximos são observados ocorrerem, com efeitos colaterais mínimos, e estas são otimizadas por liberação colônica marcada dos agentes ativos. As doses eficazes anteriores tipicamente representam aquela quantidade administrada como uma dose simples, ou como uma ou mais doses administradas em um período de 24 horas. IV. MÉTODOS DE TRATAMENTO USANDO OS SISTEMAS DE LIBERA- ÇÃO DE FÁRMACO DESCRITOS AQUI

Os sistemas de liberação de fármaco descritos aqui podem ser usados para tratar aqueles tipos de condições e distúrbios para os quais li- beração colônica é apropriada. Em uma modalidade, os distúrbios são aque- Ies que são o resultado da exposição do cólon a antibióticos, tais como diar- réia, modificação da flora comensal e o desenvolvimento de resistência bac- teriana aos antibióticos. Nesta modalidade, os sistemas de liberação de fár- maco contêm agentes que inativam os antibióticos, e os princípios ativos podem ser administrados em uma dosagem terapeuticamente eficaz a um - 20 paciente que foi, está sendo, ou será tratado com um ou vários antibióticos.

Quando a enzima metalo-dependente for uma enzima diferente de uma que inativa os antibióticos, tal enzima pode ser administrada para tratar os distúrbios específicos tratados por tais enzimas.

Em outra modalidade, os sistemas de liberação de fármaco são administrados a um paciente que sofre de câncer de cólon. Nesta modalida- de, os sistemas de liberação de fármaco incluem um ou mais agentes anti- tumores, e os sistemas são administrados em uma dosagem terapeutica- mente eficaz a um paciente que está sofrendo de câncer de cólon. Alternati- vamente, o câncer pode estar presente em outra localização no corpo, e os sistemas de liberação de fármaco podem ser usados para desviar do estô- mago e sua degradação concomitante de certos agentes antitumores, para evitar a necessidade de usar administração intramuscular ou intravenosa destes agentes.

Em outra modalidade, os sistemas de liberação de fármaco são administrados a um paciente que sofre de um distúrbio colônico tal como doença de Chrohn1 colite ulcerativa, síndrome de intestino irritável, diarréia, ou constipação. Nesta modalidade, os sistemas de liberação de fármaco in- cluem agentes que tratam ou impedem estes distúrbios, e os sistemas po- dem ser administrados em uma dosagem terapeuticamente eficaz a um pa- ciente que está sofrendo um tal distúrbio.

Em ainda outra modalidade, os sistemas de liberação de fárma- co são usados para administrar agentes ativos com base em peptídeo ou proteína, tais como insulina, anticorpos, e outros, ou terapêuticas com base em oligonucleotídeo, tais como terapia de antissentido ou RNA interferente, de forma que os agentes passam pelo estômago sem serem digeridos. Nes- ta modalidade, os sistemas de liberação de fármaco incluem estes agentes com base em proteína/peptídeo/oligonucleotídeo, e os sistemas podem ser administrados em uma dosagem terapeuticamente eficaz a um paciente em necessidade de tratamento com estes agentes, sem a necessidade de ad- ministrar estes agentes por meio de injeção subcutânea ou intravenosa.

Em uma outra modalidade, os sistemas de liberação de fármaco são usados para administrar agentes de diagnósticos ao cólon. Nesta moda- lidade, os sistemas de liberação de fármaco incluem agentes de diagnósti- cos, tais como agentes de contraste de imageamento, e os sistemas são administrados em uma dosagem diagnosticamente eficaz a um paciente que será submetido a um ensaio de diagnóstico para diagnose de um distúrbio colônico.

A presente invenção será também entendida com referência aos exemplos não-limitativos a seguir.

EXEMPLO 1: DESENVOLVIMENTO DE UM ENSAIO SENSÍVEL, QUANTI- TATIVO E ESPECÍFICO PARA β-LACTAMASE L1

Hidrólise de nitrocefin é uma técnica bem conhecida usada para quantificar a atividade de penicilinase. Porém, o formato usual é em tubos simples e não é adaptado para análise de um número grande de amostras. Este exemplo descreve o desenvolvimento e adequação para propósito de qualificação deste ensaio em formato de microplaca de 96 poços.

Uma solução de matéria-prima de nitrocefin foi obtida dissolven- do pó seco de nitrocefin a uma concentração de 10 mM em dimetilsulfóxido (DMSO). A solução de matéria-prima foi armazenada a -20°C e diluída 100 vezes imediatamente antes do uso em 50 mM de tampão fosfato de sódio (tampão Hepes) pH 7,0 contendo 0,1 mg/ml de albumina de soro bovino (BSA). Seleção do tampão é descrita na Tabela I.

μΙ contendo a solução a ser analisada foram acrescentados a 180 μΙ de nitrocefin diluído. Cinética de hidrólise de nitrocefin foi seguida a 37°C com absorbância medida a 492 nm a cada 30 segundos usando uma leitora de placa Multiskan Ascent (Thermo Labsystems).

O declive (diferença em absorbância/segundo) foi calculado u- sando o Excel Adds In Cellula (Prisma Technologies, Cambridge UK). β- Iactamase L1 (Eurogentec, Bélgica, aprox. 10 mg/mL foram determinados através de ensaio de pBCA) foi diluído 500x, 1000x, 2000x e 4000x em cada tampão de solubilização e a reação foi iniciada adicionando 20 μΙ de solução contendo enzima a 180 μΙ de tampões contendo nitrocefin a 100 μΜ.

Atividade de β-lactamase L1 foi testada em 10 mM de Hepes, 145 mM tampão de NaCI pH 7,4. A interferência de EDTA com a atividade da enzima metalo-dependente e a necessidade para uma proteína de veícu- lo (Albumina de Soro Bovino, abreviada como BSA) foi testado. Como ilus- trado na Tabela 2, EDTA (que pode ser usado para solubilizar contas in vitro para ensaiar seus conteúdos) deveria ser evitado. A inclusão de BSA ou ou- tras proteínas de veículo é benéfica.

TABELA 2: SELEÇÃO DA COMPOSIÇÃO DE TAMPÃO PARA QUANTIFI- CAÇÃO DA ATIVIDADE DE B-LACTAMASE L1

Tampão_Declive Rendimento

10mM Hepes, 145 mM NaCI pH 7,4 0,142 100 %

mM Hepes, 145 mM NaCI, 1 % EDTA pH 7,4 0,026 18,8 % mM Hepes, 145 mM NaCI, 0,1 mg/ml BSA pH 7,4 0,167 118,2 % ( mM Hepes, 145 mM NaCI, 0,1 mg/ml BSA, 1 % 0,084 59,0 % EDTA pH 7,4

Como ilustrado na Tabela 1, EDTA interfere com o ensaio da atividade enzimática, e BSA intensifica o restabelecimento da atividade en- zimática.

Exemplo 2: INSTABILIDADE DE β-LACTAMASE L1 EM MIS- TURA DE PECTINA ORIGINAL E EFEITO DE CONTRA-ÍON METÁLICO

0,3 ml de β-lactamase L1 (Eurogentec, Bélgica, aprox. 10mg/mL como determinado pelo ensaio de pBCA) foi misturado a 10g de uma solu- ção a 6 % de pectina (pectina amidatada metoxilada baixa (Unipectine)1 Tex- turant Systems, cat #OG175C) feita em água; o pH da solução de pectina não foi ajustado.

A mistura de pectina/p-lactamase L1 foi adicionada a gotas em um período de 2 minutos usando uma bomba peristáltica e uma agulha de 0,8 mm de diâmetro interno a um béquer contendo 40 ml de cloreto de cálcio (6 %) sob agitação (200 rpm) em temperatura ambiente.

Para permitir equilibro entre os íons de cálcio livres e ligados, as contas foram restabelecidas através de filtração após incubação adicional e lavadas 3 vezes em 200 ml de água purificada para eliminar excesso de cál- cio livre. Neste estágio, as contas são referidas como "contas gelificadas".

As contas foram secadas 2 horas a 37°C em um forno, rendendo contas secadas. 2x5 gotículas e 2 χ 15 gotículas foram amostradas na saí- da da agulha para medir a atividade inicial da β-lactamase L1. Contas livres de proteína foram também preparadas como controles negativos. A atividade enzimática de β-lactamase L1 (hidrólise de nitrocefin) foi quantificada com e sem íons de Zn (0,1 mM de ZnCI2) como descrito no exemplo 1.

Como ilustrado na Tabela 3, nenhuma atividade enzimática foi encontrada na mistura de β-lactamase L1 / pectina enquanto a atividade sig- nificativa foi restabelecida nas contas ensaiadas no tampão contendo Zn+2. TABELA 3: INATIVAÇÃO DE β-LACTAMASE L1 EM SOLUÇÃO DE PECTI- NA NÃO AJUSTADA EM pH

Declínio/min_Sem ZnAc Com ZnAc_

Antes da mistura com pectina 0,105 0,103 (100,0%) (100,0%) Mistura de β-Lactamase/pectina 0,000 0,000

(0,0 %) (0,0 %) Mili partículas gelificadas 0,0078 0,042

_(7,4 %)_(40,7 %)_

EXEMPLO 3: OTIMIZAÇÃO DE ION METÁLICO USADO PARA GELIFICAR A PECTINA, E O EFEITO DO pH DA SOLUÇÃO DE PECTINA.

Para determinar os efeitos dos parâmetros da solução de pecti- na e íons de zinco, um experimento comparando quatro formulações foi exe- cutado. O projeto foi construído de acordo com projeto fatorial, Design Ex- pert 6.0.10, Stat-Ease, Mineápolis. Dois parâmetros foram testados:

(a) pH da solução de pectina: 4,0 e 7,0

(b) o cátion metálico no banho de gelificação: Ca2+ (CaCI2) ou Zn2+ (acetato de zinco abreviou ZnAc)

As contas foram preparadas como descritas no Exemplo 2. Po- rém, a concentração da solução de pectina foi diminuída de 6 % para 4 % devido à diminuição na solubilidade da pectina com pH aumentado.

O rendimento da encapsulação foi medido ensaiando a atividade enzimática de β-Lactamase L1 como descrito no Exemplo 1.

contas foram solubilizadas em 20 ml de 10 mM de Hepes, 145 mM de NaCI, 0,1 mg/ml de BSA a um pH de 7,4, na presença ou ausência 1 % de pectinase (Pectinases de Aspergillus Aculeatus, Pectinex SP-L Ultra (SIGMA, França) durante a noite a 4°C.

O controle positivo foi preparado diluindo a mesma quantidade de β-lactamase L1 como conteria em 5 contas em 20 ml de 10 mM de He- pes, 145 mM de NaCI, 0,1 mg/ml de BSA pH 7,4. Como ilustrado na Tabela 4, β-lactamase L1 foi inativada independente do cátion usado para gelifica- ção da pectina quando a solução de pectina estava em pH 4,0 (4,3 % da atividade residual em cálcio e 3,8 % em zinco), enquanto que a atividade quase total foi retida após tamponação da solução de pectina para pH 7,0 (86,7 % em cálcio e 64,0 % em zinco).

TABELA 4: EFEITO DO CÁTION USADO PARA GELIFICAÇÃO E pH DA PECTINA NA ESTABILIDADE (RESTABELECIMENTO DA ATIVIDADE DE 3-LACTAMASE)

Amostra CaCI2, pH4 CaCI2, pH7 ZnAc5 pH4 ZnAc, pH7 Antes da mistura 0,102 0,090 0,108 0,090 (100%) (100 %) (100 %) (100 %) Contas gelificadas 0,004 0,072 0,004 0,072 Ov CO (80,0 %) (3,8 %) (80,0 %) Contas secadas 0,003 0,078 0,037 0,058 (31,7%) (86,7 %) (35,0 %) (64,0 %)

EXEMPLO 4: DETERMINAÇÃO DOS PARÂMETROS CRÍTICOS PARA FORMULAR β-LACTAMASE L1 PARA LIBERAÇÃO CÓLON-ESPECÍFICA

E OTIMIZAÇÃO DESTES PARÂMETROS Cinco parâmetros foram testados:

(a) Concentração da solução de pectina (Pectina amidada meto- xilada baixa (Unipectine), Texturant Systems, cat #OG175C): 4 % e 5 % (p/v)

(b) Cátion para gelificação: Ca2+ ou Zn2+

(c) Revestimento secundário das contas gelificadas com solução

polietilenoimina (PEI) (PEI, Peso molecular alto, livre de água (SIGMA- ALDRICH, França))

(d) pH da solução de PEI: 7 e 11 (solução original não ajustada

em pH).

(e) Solubilização das contas para ensaiar a atividade enzimática

encapsulada com e sem 1 % de pectinase.

Tabela 5 resume o projeto experimental TABELA 5: PROJETO EXPERIMENTAL PARA A OTIMIZAÇÃO DE PARÂME- TROS CRÍTICOS ENVOLVIDOS NA FORMULAÇÃO DE β-LACTAMASE L1 Operação A: Pectina B: íon C: Reves- D: pH de E: Peetina- (%) timento de PEI se

PEI

1 5 Zn2+ Sim 11 Sim 2 4 Zn2+ Sim 7 Sim 3 5 Ca2+ Não Sim 4 4 Ca2+ Sim 7 Não 5 Ca2+ Sim 7 Sim 6 4 Ca2+ Não Sim 7 4 Zn2+ Sim 11 Não 8 5 Ca2+ Sim 11 Não 9 4 Ca2+ Sim 11 Sim 4 Zn2+ Não Não 12 4 Zn2+ Não Sim 13 5 Zn2+ Sim 7 Não 14 5 Ca2+ Não Não 4 Ca2+ Não Não 16 5 Zn2+ Não Não

Estes 16 experimentos foram executados em duplicata (32 resultados). Ope- ração 13 replicada (34 resultados).

O pH das 4 % e 5 % das soluções de pectina foi ajustado em 7,0. Porém, foi determinado que o pH da solução a 5 % de pectina estava instável e diminuiu para pH 5,4 ao final dos experimentos. Uma solução a 5 % de pectina foi portanto também ajustada para pH 8,5 para comparação.

Por fim, os 48 resultados foram analisados usando Projeto Fato-

rial.

As contas foram preparadas como descritas no exemplo 2 exce- to que o tempo de gelificação no banho de cátion foi reduzido de 20 min para min para permitir uma regulação inteligente dos experimentos.

Amostras (5 contas) foram solubilizadas durante a noite a 4°C em 20 ml de 10 mM de Hepes, 145 mM de NaCI, 0,1 mg/ml de BSA pH 7,4 com e sem 1 % de pectinase antes de medir a atividade enzimática (hidrólise de nitrocefin como descrita no exemplo 1).

Tabela 6 resume os resultados experimentais obtidos. TABELA 6: RESULTADOS TOTAIS DO PROJETO EXPERIMENTAL PARA OTIMIZAR PARÂMETROS CRÍTICOS ENVOLVIDOS NA FORMULAÇÃO DE 3-LACTAMASE L1 pe ração % PH íon PEI PH pectinase rendimento pec- pec- de tina tina PEI 1 5 5,4 Zn2+ sim 11 sim 1,201 17 5 5,4 Zn2+ sim 11 sim 1,13 3b 5 5,4 Zn2+ sim 11 sim 1,39 11 5 5,4 Zn2+ não sim 1,272 27 5 5,4 Zn2+ não sim 1,36 2b 5 5,4 Zn2+ não sim 1,044 1b 5 5,4 Zn2+ sim 7 sim 1,045 13 5 5,4 Zn2+ sim 7 não 0,687 29 5 5,4 Zn2+ sim 7 não 0,72 33 5 5,4 Zn2+ sim 7 não 0,661 34 5 5,4 Zn2+ sim 7 não 0,691 16 5 5,4 Zn2+ não não 0,762 32 5 5,4 Zn2+ não não 0,788 45 5 8,5 Zn2+ não sim 0,951 38 5 8,5 Zn2+ não sim 0,818 41 5 8,5 Zn2+ não não 0,245 48 5 8,5 Zn2+ não não 0,363 46 5 8,5 Zn2+ sim 7 não 0,815 39 5 8,5 Zn2+ sim 7 não 0,826 2 4 7 Zn2+ sim 7 sim 1,01 18 4 7 Zn2+ sim 7 sim 1,162 12 4 1 Zn2+ não sim 1,165 28 4 1 Zn2+ não sim 1,148 7 4 7 Zn2+ sim 11 não 0,727 23 4 7 Zn2+ sim 11 não 0,679 4 7 Zn2+ não não 0,674 26 4 7 Zn2+ não não 0,659 3 5 5,4 Ca2+ sim 7 sim 0,094 5 5,4 Ca2+ sim 7 sim 0,031 Operação % PH íon PEI PH pectinase rendimento pec- pec- de tina tina PEI 19 5 5,4 Ca2+ sim 7 sim 0,108 21 5 5,4 Ca2+ sim 7 sim 0,039 8 5 5,4 Ca2+ sim 11 não 0,047 24 5 5,4 Ca2+ sim 11 não 0,066 14 5 5,4 Ca2+ não não 0,488 5 5,4 Ca2+ não não 0,512 5 8,5 Ca2+ sim 7 sim 0,35 36 5 8,5 Ca2+ sim 7 sim 0,379 42 5 8,5 Ca2+ sim 7 sim 0,363 43 5 8,5 Ca2+ sim 7 sim 0,394 4b 5 8,5 Ca2+ sim 7 sim 0,53 7b 5 8,5 Ca2+ sim 7 não 0,704 37 5 8,5 Ca2+ sim 11 não 0,029 44 5 8,5 Ca2+ sim 11 não 0,029 9b 5 8,5 Ca2+ sim 11 não 0,737 40 5 8,5 Ca2+ não 0,322 47 5 8,5 Ca2+ não 0,656 6b 5 8,5 Ca2+ sim 11 sim 0,517 5b 5 8,5 Ca2+ não sim 0,656 8b 5 8,5 Ca2+ não não 0,967

Análise estatística monovariada simples (rendimento decrescen-

te da classificação de encapsulação) realçou que uma ótima formulação de β-lactamase L1 foi obtida usando os parâmetros a seguir:

(a) Uma concentração de pectina de 5 % (solubilidade máxima

em pH 5,4)

(b) Uma solução de pectina neutralizada em um pH de pelo me- nos 5,4

(c) Um íon de zinco deveria ser usado

(d) Um revestimento secundário pode ser também avaliado com outro tipo de polímeros

(e) Uma pectinase deveria ser usada para quantificar β- Iactamase L1 formulada

EXEMPLO 5: MELHORIA DA ESTABILIDADE DAS CONTAS COMPREEN- DENDO 3-LAETAMASE L1 EM MEIOS INTESTINAIS SIMULADOS (SIM) PARA CONCENTRAÇÃO DE ÍONS DE ZINCO AUMENTADA E DURAÇÃO DE SECAGEM

Contas contendo β-lactamase L1 foram preparadas como descri- tas no exemplo 4. Concentrações de acetato de zinco crescentes (6, 8, 10 e 12 %) foram testadas. Outro revestimento com ou sem PEI foi comparado.

Secagem das contas foi também aumentada de 2 horas para durante a noite. Eficiência da lavagem para remover íon metálico em exces- so usado para gelificação foi também monitorada medindo a condutividade da solução de enxágue de água.

Como ilustrado na figura 1, lavagem eficiente foi obtida após la- var as contas em três lavagens de água.

Como ilustrado na Tabela 7, a concentração mais alta de acetato de zinco aumentou estabilidade em SIM (Meio Intestinal Simulado, US Pharmacopeia 26) das contas contendo β-lactamase L1 enquanto revesti- mento secundário de PEI diminuiu sua estabilidade.

TABELA 7: EFEITO DA CONCENTRAÇÃO DE ACETATO DE ZINCO E REVESTIMENTO SECUNDÁRIO DE PEI NA ESTABILIDADE DAS CON- TAS CONTENDO β-LACTAMASE L1 EM SIM_

SIM Operação N0 % Zn PEI 1 h 2 h 3 h 4 h 5 h 8 10 % N + + + + + 3 12 % S + + + + + 4 12 % N + + + + + 2 8 % N + + + + + 6 % S - - - - - 1 8 % S + + - - - 7 10 % S + - - - - +: contas estáveis -: contas dissolvidas S: com revestimento secundário de PEI N: sem revestimento secundário de PEI

EXEMPLO 6: EFEITO DA CONCENTRAÇÃO DE ZINCO E TEMPO DE SE- CAGEM NA ESTABILIDADE DAS CONTAS EM MEIOS INTESTINAIS SI- MULADOS (SIM)

Contas contendo β-lactamase L1 foram previamente preparadas como descritas, e gelificadas com 6 ou 12 % de soluções de acetato de zin- co (vide Exemplo 5).

O efeito do tempo de secagem foi também testado secando as contas por 2, 4 e 16 h a 35°C (temperatura preferida a 37°C para propósitos de industrialização). Apenas contas gelificadas na solução a 12 % de zinco e secadas por mais que 4 h eram estáveis em SIM após 5 h de incubação a 37°C. A estabilidade das contas em SIM por 5h @ 37°C foi medida, e os re- sultados estão mostrados na Tabela 8. TABELA 8: ESTABILIDADE DAS CONTAS EM MEIO INTESTINAL SIMU- LADO POR 5 H A 37°C. OS NÚMEROS AINDA REPRESENTAM Q NÚME- RO DE CONTAS APARENTEMENTE INTACTAS NA SOLUÇÃO._

Incubação a 2 h de seca- 4 h de seca- durante a 37°C (h) gem gem noite mili- 1 5 0 0 partículas 2 1 0 0 em 5 % de 3 1 0 0 Zn 4 1 0 0 5 1 0 0 mili- 1 5 5 5 partículas 2 5 5 5 em 12 % 3 5 5 5 de Zn 4 4 5 5 5 3 4 5

Após lavar e incubação adicional em meio colònico simulado (SCM): 10 mM de Hepes, 145 mM de NaCI (solução de matéria-prima). 1 % de pectinase, 0,1 mg/ml de BSA foram adicionados logo antes do uso; pH foi ajustado para pH 6,0 com NaOH 1 M, 63 % da atividade inicial de β- Iactamase (hidrólise de nitrocefin) foram restabelecidos. EXEMPLO 7: EFEITO DO TEMPO DE GELIFICAÇÃO, PROCESSO DE ENXÁGUE, E TEMPO DE SECAGEM SOB RESTABELECIMENTO DA ATI- VIDADE DE β-LACTAMASE L1

Bateladas diferentes de contas foram preparadas usando um sistema de multibico de Nisco Engeneering AG. As contas sofreram várias vezes gelificação, processo de enxágue e tempo e tipo de processo de se- cagem e tempo.

Pareceu claramente que a melhor eficiência de encapsulação e atividade da enzima são obtidas quando o tempo de gelificação é menor que horas e quando enxágue é executado tal como para eliminar acetato de Zinco residual das contas. Os resultados estão apresentados na Figura 2, <■ EXEMPLO 8: DESENVOLVIMENTO DE UM ENSAIO SENSÍVEL, QUANTI- TATIVO E ESPECÍFICO PARA β-LACTAMASE L1

Hidrólise de CENTA é uma técnica bem conhecida usada para qualificar a atividade de β-lactamase. Porém, o formato usual é em tubos simples e não é adaptado para análise de um número grande de amostras. Este exemplo descreve o desenvolvimento e ajuste para propósito de qualifi- cação deste ensaio em formato de microplaca de 96 poços.

Uma solução de matéria-prima de CENTA foi obtida por solubili- zação do pó seco de CENTA a uma concentração de 25 mM em água; foi armazenada em alíquotas de 25 μΙ a -20°C. A mistura de ensaio foi termina- da diluindo 22 μΙ de solução de matéria-prima de CENTA no tampão de en- saio a seguir: 10 ml de 30 mM de tampão Hepes pH 7,5 contendo 50 pm de ZnCI2, consequentemente rendendo uma concentração de CENTA de 110 μΜ. Para o ensaio, 20 μΙ contendo a enzima a ser ensaiada foram acrescen- tados a 180 μΙ da mistura de ensaio, consequentemente usando uma con- centração final de 100 μΜ de CENTA no ensaio. Cinética da hidrólise de CENTA foi seguida a 37°C com uma medida de absorbância a 405 nm a ca- da 9 segundos usando uma leitora de placa Multiskan Ascent (Thermo Elec- tron Corporation). O declive (diferença em absorbância/segundo) foi calcula- do usando Ascent Software for Multiskan Ascent versão 2.6.

β-lactamase L1 (Eurogentec, Bélgica, aprox. 10 mg/mL como determinado pelo ensaio de pBCA) foi diluída a 0,2, 0,5, 1,0 e 2,0 pg/ml em tampão de ensaio e a reação foi iniciada por adição de 20 μΙ de solução con- tendo a enzima a 180 μΙ da mistura de ensaio. Como mostrado na Figura abaixo, o ensaio foi linear em 3 ensaios independentes com respeito à con- centração da enzima naquela faixa. Desvio-padrão foi menor que 10 %. EXEMPLO 9. LIBERAÇÃO DE β-LACTAMASE L1 DAS CONTAS NÃO- REVESTIDAS, E CONTAS REVESTIDAS COM EUDRAGIT COM OU SEM PRÉ-REVESTIMENTO DE HPMC. Uma batelada de contas de pectina contendo β-lactamase L1 foi

fabricada sob as condições a seguir: contas foram formadas adicionando a gotas através de uma agulha de diâmetro interno de 0,5 mm uma solução de % de pectina contendo 300 mg/l de β-lactamase L1 recombinante purifica- da (Eurogentec, Bélgica) em um banho a 12 % de acetato de Zn1 2H20. Contas foram gelificadas por 90 min no banho de acetato de Zn, colhidas, lavadas com água até a condutividade da água ter alcançado um platô está- vel, significando que enxágue está ótimo e por fim secadas a 35°C sob vá- cuo. As contas secadas obtidas eram 0,8 - 1,25 mm de diâmetro, pesavam em média 0,6 mg e continham aprox 5 a 6 pg de β-lactamase L1 por mg de contas. Eles foram deixadas não-revestidas, ou revestidas usando um Glatt GPC 1,1 com TOP pulverização de acordo com as fórmulas a seguir mos- tradas na Tabela 9.

TABELA 9

Materiais brutos Quantida- de (g) Batelada 83 Quantida- de (g) Batelada 100 Quantida- de (g) Batelada 82 Quantida- de (g) Batelada 99 Quantida- de (g) Batelada 81 Quantida- de (g) Batelada 97 Eudragit L30D- 55 1600,0 149,5 300,0 31,9 Eudragit NE 30 D 700,0 74,4 Eudragit FS30D 800,0 85,0 GMS (monoes- tearato de glice- rol) 24,0 2,2 15,0 1,6 12,0 1,3 Hidróxido de sódio 28,8 2,7 30,4 1,9 1,5 Tween 80 48,0 2,2 18,0 1,6 14,4 1,3 (polissorbato) 33% de solução aquosa Citrato de trietila 1107,2 94,5 4,50 67,2 10,0 25,2 Água 1600,0 149,5 565,7 1600,0 505,6 85,0 Pré-revestimento com 5 % de HPMC NÃO SIM NÃO SIM NÃO SIM

Pré-revestimento das contas foi executado com HPMC usando o mesmo material que para o revestimento com Eudragit. 1 Micrógrafos de varreduras de elétrons (SEMs) das contas reves-

tidas com Eudragit são mostrados na Figura 4. Um corte transversal mostra a espessura relativa do revestimento de Eudragit.

Para avaliar a liberação de β-lactamase L1, contas revestidas e não-revestidas foram incubadas sob mistura suave a 37°C em 50 mM de tampão de Hepes pH 7,4 contendo 0,1 M de NaCI e 100 PG/ml de pectina- ses de Aspergillus aculeatus (Sigma Aldrich). Meio foi retirado em vários tempos e ensaiado para atividade de β-lactamase usando o ensaio de nitro- cefina descrito no Exemplo 1. Cinética de liberação foi medida usando as contas revestidas e

não-revestidas, e os resultados estão mostrados na Figura 5. EXEMPLO 10: EFICIÊNCIA DE L1 LIBERADO PARA HIDROLISAR ANTI- BIÓTICOS in vitro

Para avaliar se as contas revestidas poderiam na verdade hidro- Iisar antibióticos quando eles alcançassem o cólon, elas foram incubadas sucessivamente por 1 h em meio gástrico simulado (0,1 N de HCI), 3 h a 37°C em meio intestinal simulado (50 mM de Na/K tampão de fosfato pH 6,8 contendo 0,1 M NaCI) e por fim para as quantidades indicadas de tempo no meio colônico simulado (50 mM de tampão de Hepes pH 7,4, 0,1 M de NaCI) contendo 100 de PG/ml de pectinases de Aspergillus aculeatus (Sigma Al- drich) e 2 mg/ml de amoxicilina. Meio foi retirado em vários tempos e a quan- tidade de amoxicilina residual foi medida por HPLC e absorção de UV. O procedimento foi executado usando um aparelho Bio-Diss Ill (Varian). Con- tas não-revestidas foram apenas incubadas no meio colônico simulado com pectinases e amoxicilina.

Os resultados estão mostrados na Figura 6.

Exemplo 11: Efeito de β-lactamase L1 contendo contas no apa- recimento de resistência bacteriana em porquinho tratado com amoxicilina.

Porquinho com 6-7 semanas de idade ou sem tratar, ou tratados oralmente com 20 mg/kg de amoxicilina por dia durante 7 dias. Metade dos animais tratados recebeu, junto com a dose diária de antibióticos, uma cáp- sula de gelatina enchida de 320 mg de contas de pectina contendo β- Iactamase L15 pré-revestidas com 5 % de HPMC e revestidas com 40 % de Eudragit L30D-55 (batelada 100); a outra metade recebeu similarmente con- tas de pectina revestidas de placebo. As fezes foram colhidas 3 dias antes do princípio do tratamento, e cada dia durante 7 dias de tratamento e anali- sadas para seu conteúdo de total e enterobactéria resistente à amoxicilina em placas de ágar de MacConkey contendo 0 ou 100 Mg/ml de amoxicilina. Como mostrado na Figura 7, as fezes dos animais sem tratar continham uma proporção mínima de bactérias resistentes à amoxicilina (< 5 %), enquanto que esta proporção rapidamente aumentou em animais tratados com amoxi- cilina, alcançando um valor entre 50 e 80 % após 7 dias. Em contraste, os animais que recebem contas contendo β-lactamase junto com amoxicilina apenas apresentaram um aumento transiente e limitado nas bactérias resis- tentes a antibiótico. Este experimento mostra que a co-administração das contas de pectina revestidas com Eudragit contendo β-lactamase L1 prote- geu porquinho contra o aparecimento de bactérias resistentes a antibióticos induzido pelo tratamento de animais com amoxicilina.

Todas as patentes e publicações reveladas aqui são incorpora- das por referência em sua totalidade. Modificações e variações da presente invenção serão óbvias àqueles versados na técnica da descrição detalhada anterior da invenção.

Claims

1. Sistema de liberação de fármaco para administração oral e liberação colônica de um agente profilático, terapêutico ou diagnóstico, com- preendendo uma conta de pectina contendo um agente profiláctico, terapêu- tico ou diagnóstico, em que a pectina é reticulada com um cátion de metal e a conta é revestida com um copolímero de ácido metacrílico-acrilato de al- quila para revestimentos entéricos ou um polímero derivado de ésteres de ácido acrílico e ácido metacrílico para revestimentos entéricos, e em que o dito agente é uma proteína, um ácido nucleico, um vírus, uma bactéria, um fungo, um micro-organismo, uma célula eucariótica, e qualquer combinação dos mesmos.

2. Sistema de liberação de fármaco de acordo com a reivindica- ção 1, em que o dito agente é selecionado do grupo que consiste em Iipopro- teínas, glicoproteínas, lipopeptídeos, glicopeptídeo, enzimas e oligonucleotí- deos.

3. Sistema de liberação de fármaco para administração oral e liberação colônica de um agente profiláctico, terapêutico ou diagnóstico, compreendendo uma conta de pectina contendo um agente profiláctico, te- rapêutico ou diagnóstico, em que a pectina é reticulada com zinco e a conta é revestida com um copolímero de ácido metacrílico-acrilato de alquila para revestimentos entéricos, ou um polímero derivado de ésteres de ácido acríli- co e ácido metacrílico para revestimentos entéricos.

4. Sistema de liberação de fármaco de acordo com quaisquer das reivindicações 1-3, em que o agente é um agente que inativa um antibió- tico no cólon.

5. Sistema de liberação de fármaco de acordo com quaisquer das reivindicações 1-3, em que o agente é um agente anticâncer, um agente anti-inflamatório, ou uma proteína ou peptídeo.

6. Sistema de liberação de fármaco de acordo com quaisquer das reivindicações 1-3, em que o agente é um agente capaz de tratar um distúrbio no cólon, um agente que bloqueia ou modula a atividade de recep- tores no cólon, ou um agente que inativa outros agentes terapêuticos que poderiam modular a atividade dos receptores no cólon.

7. Sistema de liberação de fármaco de acordo com a reivindica- ção 4, em que o agente que inativa um antibiótico é uma beta-lactamase, uma de eritromicina esterase, uma enzima que inativa um antibiótico de qui- nolona ou uma enzima que inativa um antibiótico de glicopeptídeo.

8. Sistema de liberação de fármaco de acordo com a reivindica- ção 7, em que o agente que inativa um antibiótico é beta-lactamase L1 de Stenotrophomonas maltophilia.

9. Sistema de liberação de fármaco de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, em que o copolímero de ácido metacrílico- acrilato de alquila, ou o polímero derivado de ésteres de ácido acrílico e áci- do metacrílico para revestimentos entéricos é selecionado do grupo que consiste em copolímeros de ácido metacrílico-acrilato de alquila ou políme- ros derivados dos ésteres de ácido acrílico e ácido metacrílico para revesti- mentos entéricos com grupos acídicos ou alcalinos, ou é selecionado do grupo que consiste em copolímeros de ácido metacrílico-acrilato de alquila ou polímeros derivados de ésteres de ácido acrílico e ácido metacrílico para revestimentos entéricos com grupos alcalinos ou neutros.

10. Sistema de liberação de fármaco para liberar uma enzima metalo-dependente, compreendendo contas de pectina encapsulando a en- zima metalo-dependente, em que o cátion de metal do qual a enzima de- pende é também usado para reticular a pectina, e em que as contas de pec- tina são revestidas com um copolímeros de ácido metacrílico-acrilato de al- quila para revestimentos entéricos ou um polímero derivado de ésteres de ácido acrílico e ácido metacrílico para revestimentos entéricos.

11. Sistema de liberação de fármaco de acordo com a reivindi- cação 10, em que a enzima metalo-dependente é beta-lactamase L1 de Ste- notrophomonas maltophilia.

12. Sistema de liberação de fármaco de acordo com a reivindi- cação 10 ou 11, em que o copolímero de ácido metacrílico-acrilato de alquila ou polímeros derivados de ésteres de ácido acrílico e ácido metacrílico para revestimentos entéricos é selecionado do grupo que consiste em copolíme- ros de ácido metacrílico-acrilato de alquila com grupos acídicos ou alcalinos, ou é selecionado do grupo que consiste em copolimeros de ácido metacríli- co-acrilato de alquila ou polímeros derivados de ésteres de ácido acrílico e ácido metacrílico para revestimentos entéricos, com grupos alcalinos ou neu- tros.

13. Sistema de liberação de fármaco de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4 e 7 a 12, para inativar um antibiótico no cólon de um paciente.

14. Sistema de liberação de fármaco de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6 e 9, para o tratamento de distúrbio tal como a doença de Crohn ou colite ulcerativa, em que o agente ativo é selecionado do grupo que consiste em aminossalicilatos, fármacos contendo ácido 5- aminossalicílico (5-ASA), corticosteroides, imunomoduladores, ciclosporina A, TNF alfa, tiazoldinodionas e glitazonas.

15. Sistema de liberação de fármaco de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6 e 9, para o tratamento de distúrbio tal como câncer do cólon, em que o agente ativo é selecionado do grupo que consiste em agentes antiproliferativos, agentes para modificação ou reparo de DNA1 inibidores da síntese de DNA, reguladores da transcrição de DNA/RNA, ini- bidores do processo de RNA, agentes que afetam a expressão, síntese e estabilidade da proteína, agentes que afetam a localização da proteína ou sua habilidade para exercer sua ação fisiológica, agentes que interferem com interações proteína-proteína ou proteína-ácido nucleico, agentes que agem através do RNA interferente, moléculas de ligação de receptor de qualquer natureza química (incluindo moléculas pequenas e anticorpos), to- xinas marcadas, ativadores de enzima, inibidores de enzima, reguladores de gene, inibidores de HSP 90, moléculas que interferem com microtúbulos ou outros componentes citoesqueléticos ou adesão e motilidade celulares, a- gentes para fototerapia, e adjuntos de terapia.

16. Sistema de liberação de fármaco de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6 e 9, para o tratamento de distúrbio tal como síndrome de intestino irritável ou constipação, em que o agente ativo é sele- cionado do grupo que consiste em laxantes estimulantes, laxantes osmóti- cos, amolecedores de fezes, agentes de volume, tegaserod, e medicações anticolinérgicas.

17. Sistema de liberação de fármaco de acordo com qual- quer uma das reivindicações 1 a 5 e 9, em que o sistema é usado como um agente diagnóstico, e o agente encapsulado é um agente diagnóstico.

18. Sistema de liberação de fármaco de acordo com reivin- dicação 17, em que o agente diagnóstico é selecionado do grupo que consiste em compostos radiomarcados, compostos rádio-opacos, e gases.