BRPI0721162A2 - Terapia combinada para o tratamento de infecções por hepatite c - Google Patents

Description

TERAPIA COMBINADA PARA O TRATAMENTO DE INFECÇÕES POR HEPATITE C CAMPO DA INVENÇÃO

Esta invenção fornece um método de tratamento de hepatite C, por fornecimento de um composto de Fórmula I (mostrada abaixo) em combinação com pelo menos um agente ativo adicional a um paciente infectado com o vírus da hepatite C. Também são aqui fornecidas combinações farmacêuticas que compreendem um composto de Fórmula I e pelo menos um agente ativo adicional. A combinação farmacêutica pode ser uma forma de dosagem unitária ou uma composição farmacêutica embalada.

FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO Estima-se que 3% da população do mundo estejam infectados com o vírus da hepatite C. Daqueles expostos ao HCV, 80% se tornam infectados cronicamente, pelo menos 30% desenvolvem cirrose hepática e 1-4% desenvolvem carcinoma

I

hepatocelular. O vírus da hepatite C (HCV) é uma das causas mais prevalentes de doença hepática crônica nos Estados Unidos, sendo supostamente responsável por cerca de 15 por cento de hepatite viral aguda, 60 a 70 por cento de hepatite crônica, e até 50 por cento de cirrose, doença hepática em estágio final e câncer hepático. A infecção crônica pelo HCV é a causa mais comum de transplante de fígado nos Estados Unidos, na Austrália e ma maior parte da Europa. Estima-se que a Hepatite C cause 10.000 a 12.000 mortes anualmente nos Estados Unidos. Embora a fase aguda da infecção pelo HCV esteja normalmente associada a sintomas leves, algumas evidências sugerem que apenas cerca de 15% a 20% das pessoas infectadas ficarão livres do HCV. O HCV é um vírus de RNA envelopado, de fita simples, que contém um genoma de fita positiva de cerca de 9,6 kb. O HCV é classificado como um membro do gênero Hepacivirus da família Flaviviridae. Foram caracterizadas pelo menos 4 cepas de HCV, GT-I - GT-4.

0 ciclo de vida do HCV inclui a entrada em células hospedeiras; a tradução do genoma do HCV, processamento de poliproteína e montagem do complexo de replicase; replicação de RNA e montagem e liberação de vírion. A

tradução do genoma de RNA do HCV gera uma poliproteína com comprimento de mais de 3.000 aminoácidos que é processada por pelo menos duas proteases celulares e duas virais. A poliproteína de HCV é:

NH2-C-El-E2-p7-NS2-N53-NS4A-NS4B-NS5A-NS5B-COOH.

Há relatos de que a peptidase sinalizadora celular e a

peptidase do peptídeo sinalizador são responsáveis pela clivagem do terço do terminal N da poliproteína (C-E1-E2- p7) das proteínas não estruturais (NS2-NS3-NS4A-NS4B-NS5A- NS5B) . A NS2-NS3 protease medeia uma primeira clivagem cis 20 no sítio NS2-NS3. A NS3-NS4A protease então medeia uma segunda clivagem cis na junção NS3-NS4A. O complexo NS3- NS4A então cliva em três sítios abaixo para separar as proteínas não estruturais restantes. 0 processamento preciso da poliproteína é considerado essencial para a 25 formação de um complexo de HCV replicase ativo.

Após a poliproteína ter sido clivada, o complexo de replicase que compreende pelo menos as proteínas não estruturais NS3-NS5B é montado. O complexo de replicase é citoplasmático e associado à membrana. Atividades 3 0 enzimáticas importantes no complexo de replicase incluem atividade de serina protease e atividade de NTPase helicase em NS3 e atividade de RNA polimerase RNA-dependente de NS5B. No processo de replicação de RNA, é produzida uma cópia complementar de fita negativa do RNA genômico. A 5 cópia de fita negativa é usada como modelo para a síntese de RNAs genômicos de fita positiva adicionais que podem participar da tradução, replicação, embalagem ou qualquer combinação destas para produzir a prole de vírus. A montagem de um complexo de replicase funcional foi descrita 10 como um componente do mecanismo de replicação do HCV. O Pedido Provisório 60/669,872 "Pharmaceutical Composições and Methods of Inhibiting HCV Replication", depositado em

11 de abril de 2005, é aqui incorporado por referência em sua totalidade quanto à sua revelação relacionada à montagem do complexo de replicase.

0 tratamento atual da infecção por hepatite C tipicamente inclui a administração de um interferon, por exemplo, um interferon peguilado (IFN), em combinação com ribavirina. 0 sucesso das terapias atuais medido por resposta virológica sustentada (SVR) depende da cepa de HCV com a qual o paciente está infectado e da adesão do paciente ao regime de tratamento. Somente 50% dos pacientes infectados com a cepa de HCV GT-I exibem uma resposta virológica sustentada. Agentes antivirais com atuação direta como, por exemplo, ACH-806, VX-950 e NM 283 (pró- fármaco de NM 107) estão em desenvolvimento clínico para o tratamento de HCV crônico. Em função da ausência de terapias eficazes para o tratamento para certas cepas de HCV e da alta taxa de mutação do HCV, podem ser necessárias 3 0 combinações de agentes ativos com mecanismos de ação complementares para suprimir a emergência de resistência viral. A presente invenção preenche essa necessidade e

A invenção fornece um método de tratamento de hepatite C que compreende o fornecimento de um composto de Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável deste; com pelo menos um agente ativo adicional a um paciente infectado com um vírus da hepatite C, em que a Fórmula I é:

Dentro da Fórmula I, as variáveis A1, Ri, R2 e A2 possuem as seguintes definições:

A1 é um 3-piridil opcionalmente substituído;

R1 e R2 são escolhidos independentemente de hidrogênio e C1-C6 alquil; e A2 é fenil substituído na posição para com C3-C8 alquil ou C3-C8 alcóxi e opcionalmente substituído com um ou mais substituintes escolhidos independentemente de halogênio, hidróxi, ciano, C1-C6 alquil, C1-C6 alcóxi, mono- e di-(C1-C6 alquil) amino, C2-C6 alcanoil, C1-C2 haloalquil, C1-C2 haloalcóxi e fenil.

A invenção também fornece combinações farmacêuticas que compreendem um composto de Fórmula I (como mostrado acima) ou um sal farmacêutico aceitável deste, e pelo menos um agente ativo adicional. O composto de Fórmula I pode ser fornecido em uma forma de dosagem única, ou pode ser formulado como formas de dosagem separadas e fornecido como formas de dosagem separadas. Por exemplo, o composto de

fornece vantagens adicionais, que são aqui descritas.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

O S

R1 R2 Fórmula I e pelo menos um agente ativo adicional podem ser fornecidos juntos em um recipiente como uma combinação farmacêutica embalada. Essas combinações embaladas podem conter instruções para utilização da combinação para o tratamento de uma infecção por hepatite C.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

FIGURA 1. Estruturas do genoma de replicons de HCV. a) Protótipo de G418 - replicon selecionável 1377/NS3-3'1 e b) G418 bicistrônico - replicon selecionável I3891uc-ubi- neo/NS3-3'/ET que expressa um repórter de luciferase e que contém três mutações adaptivas (E1202G, T12801, K1846T; setas).

FIGURA 2. Colônias restantes após tratamento por 9 dias. 0 ensaio foi realizado como descrito abaixo. Os números de colônias para placas não tratadas e tratadas com um único agente foram estimados após divisão das placas em 8 porções iguais e contagem de cada uma das porções (total de 4 porções cada).

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

TERMINOLOGIA

Os termos "um" e "uma" não representam uma limitação de quantidade, mas, em vez disso, representam a presença de pelo menos um dos itens citados. 0 termo "ou" significa "e/ou". Os termos "que compreende", "que possui", "que inclui" e "que contém" devem ser considerados como termos em aberto (ou seja, que significam "que incluem, sem limitação") . A citação de faixas de valores visa simplesmente servir como um método abreviado de se referir individualmente a cada valor separado que caia dentro da faixa, a menos que aqui indicado de forma diferente, e cada valor separado é incorporado na especificação como se fosse individualmente aqui citado. Os limites de todas as faixas estão incluídos na faixa e são independentemente combináveis. Todos os métodos aqui descritos podem ser 5 realizados em uma ordem adequada, a menos que aqui indicado de forma diferente ou de outro modo claramente contra- indicado pelo contexto. 0 uso de qualquer um e todos os exemplos, ou de termos exemplares (por exemplo, "tais como"), visa simplesmente melhor ilustrar a invenção e não 10 impõe uma limitação sobre o escopo da invenção, a menos que indicado de forma diferente. Nenhum termo na especificação deve ser considerado como indicando qualquer elemento não essencial como essencial para a prática da invenção, como aqui usada. A menos que definido de forma diferente, os 15 termos técnicos e científicos aqui utilizados possuem os mesmos significados normalmente compreendidos por aqueles habilitados na técnica à qual esta invenção pertence.

Um "agente ativo" significa um composto (incluindo um composto de Fórmula I), elemento ou mistura que, quando

2 0 administrado a um paciente, isoladamente ou em combinação

com outro composto, elemento ou mistura, confere, direta ou indiretamente, um efeito fisiológico no paciente. O efeito fisiológico indireto pode ocorrer por meio de um metabólito ou outro mecanismo indireto. Quando o agente ativo for um 25 composto, então sais, solvatos (incluindo hidratos) do composto ou sal livre, formas cristalinas, formas não cristalinas e quaisquer polimorfos do composto serão incluídos. Os compostos podem conter um ou mais elementos assimétricos como, por exemplo, centros estereogênicos,

3 0 eixos estereogênicos e semelhantes, por exemplo, átomos de carbono assimétricos, de tal forma que os compostos possam existir em diferentes formas estereoisoméricas. Esses compostos podem ser, por exemplo, racematos ou formas opticamente ativas. Para compostos com dois ou mais elementos assimétricos, esses compostos podem

adicionalmente ser misturas de diastereômeros. Para compostos que possuem centros assimétricos, estão englobados todos os isômeros ópticos em forma pura e misturas destes. Além disso, compostos com ligações duplas 10 carbono-carbono podem ocorrer nas formas ZeE, com todas as formas isoméricas dos compostos. Nessas situações, os enantiômeros únicos, ou seja, formas oticamente ativas podem ser obtidas por síntese assimétrica, síntese a partir de precursores opticamente puros, ou por resolução dos 15 racematos. A resolução dos racematos também pode ser obtida, por exemplo, por métodos convencionais como, por exemplo, cristalização na presença de um agente de resolução, ou cromatografia, usando, por exemplo, uma coluna quiral de HPLC. Todas as formas são aqui 20 contempladas, independentemente dos métodos usados para obtê-las.

Todas as formas (por exemplo, solvatos, isômeros ópticos, formas enantioméricas, polimorfos, composto e sais livres) de um agente ativo podem ser empregadas, tanto isoladamente quanto em combinação.

Como aqui usado, o termo "alquil" inclui grupos hidrocarboneto alifáticos tanto de cadeia ramificada quanto de cadeia linear, que possuem o número de átomos de carbono especificado, geralmente de 1 a cerca de 12 átomos de carbono. O termo C1-C6 alquil, como aqui usado, indica um grupo alquil que possui de 1 a cerca de 6 átomos de carbono. Quando C0-Cn alquil é aqui usado em conjunto com outro grupo, por exemplo, aril C0-C4 alquil, o grupo indicado, nesse caso aril, está ligado diretamente por uma 5 ligação covalente única (C0) , ou está anexado por uma cadeia alquil que possui o número de átomos de carbono especificado, nesse caso, de 1 a cerca de 4 átomos de carbono. Exemplos de alquil incluem, sem limitação, metil, etil, n-propil, isopropil, n-butil, 3- metilbutil, t-butil, 10 n-pentil e sec-pentil.

"Alcanoil" indica um grupo alquil como definido acima, anexado por meio de uma ponte ceto (-(C=O)-) . Grupos alcanoil possuem o número indicado de átomos de carbono, com o carbono do grupo ceto estando incluído nos átomos de 15 carbono numerados. Por exemplo, um grupo C2 alcanoil é um grupo acetil que possui a fórmula CH3(C=O)-.

O termo "mono- e/ou dialquilamino" indica grupos alquilamino secundários ou terciários, em que os grupos alquil são como definidos acima e possuem o número indicado

2 0 de átomos de carbono. 0 ponto de adesão do grupo

alquilamino é no nitrogênio. Os grupos alquil são escolhidos independentemente. Exemplos de grupos mono- e dialquilamino incluem metilamino, dimetilamino e metil- propil-amino. Grupos "mono- e/ou dialquilaminoalquil" são 25 grupos mono- e/ou dialquilamino anexados por meio de um vinculador alquil que possui o número de átomos de carbono especificado, por exemplo, um grupo di-metilaminoetil. Substituintes de amino terciário podem ser designados pela nomenclatura da forma N-R-N- R', que indica que os grupos R

3 0 e R1 estão, ambos, anexados a um único átomo de nitrogênio. Como aqui usado, "haloalquil" indica grupos alquil tanto de cadeia ramificada quanto de cadeia linear que possuem o número de átomos de carbono especificado, substituídos com 1 ou mais átomos de halogênio, geralmente 5 até o número máximo permitido de átomos de halogênio. Exemplos de haloalquil incluem, sem limitação, trifluormetil, difluormetil, 2-fluoretil e penta-fluoretil.

"Haloalcóxi" indica um grupo haloalquil, como definido acima, anexado por meio de uma ponte de oxigênio (oxigênio de um radical álcool).

"Halo" ou "halogênio", como aqui usado, refere-se a flúor, cloro, bromo ou iodo.

A frase "opcionalmente substituído" indica que esses grupos podem ser não substituídos ou substituídos em uma ou mais de quaisquer posições disponíveis, tipicamente 1, 2, 3 ou 4 posições, por um ou mais grupos adequados, tais como aqueles aqui revelados.

Grupos adequados que podem estar presentes em uma posição substituída incluem, sem limitação, por exemplo, 20 halogênio; ciano; hidroxil; nitro; azido; alcanoil (por exemplo, um grupo C2-C6 alcanoil como acil ou semelhantes) ; carboxamido; grupos alquil (incluindo grupos cicloalquil, que possuem 1 a cerca de 8 átomos de carbono, ou 1 a cerca de 6 átomos de carbono); grupos alquenil e alquinil 25 (incluindo grupos que possuem uma ou mais ligações insaturadas e de 2 a cerca de 8, ou 2 a cerca de 6 átomos de carbono); grupos alcóxi que possuem uma ou mais ligações oxigênio e de 1 a cerca de 8, ou de 1 a cerca de 6 átomos de carbono; arilóxi como, por exemplo, fenóxi; grupos

3 0 alquiltio, incluindo aqueles que possuem uma ou mais ligações tioéter e de 1 a cerca de 8 átomos de carbono, ou de 1 a cerca de 6 átomos de carbono; grupos alquilsulfinil, incluindo aqueles que possuem uma ou mais ligações sulfinil e de 1 a cerca de 8 átomos de carbono, ou de 1 a cerca de 6 5 átomos de carbono; grupos alquilsulfonil, incluindo aqueles que possuem uma ou mais ligações sulfonil e de 1 a cerca de 8 átomos de carbono, ou de 1 a cerca de 6 átomos de carbono; grupos aminoalquil, incluindo grupos que possuem um ou mais átomos de N e de 1 a cerca de 8, ou de 1 a cerca 10 de 6 átomos de carbono; aril, que possui 6 ou mais carbonos e um ou mais anéis (por exemplo, fenil, bifenil, naftil, ou semelhantes, cada anel aromático substituído ou não substituído); arilalquil, que possui 1 a 3 anéis separados ou fundidos e de 6 a cerca de 18 átomos de carbono no anel, 15 com benzil sendo um grupo arilalquil exemplar; arilalcóxi, que possui 1 a 3 anéis separados ou fundidos e de 6 a cerca de 18 átomos de carbono no anel, com benzilóxi sendo um grupo arilalcóxi exemplar; ou um grupo heterocíclico saturado, insaturado ou aromático, que possui 1 a 3 anéis

2 0 separados ou fundidos com 3 a cerca de 8 membros por anel e

um ou mais átomos de N, 0 ou S, por exemplo, coumarinil, quinolinil, isoquinolinil, quinazolinil, piridil,

pirazinil, pirimidinil, fiiranil, pirrolil, tienil, tiazolil, triazinil, oxazolil, isoxazolil, imidazolil, 25 indolil, benzofuranil, benzotiazolil, tetrahidrofiiranil, tetrahidropiranil, piperidinil, morfolinil, piperazinil e pirrolidinil. Esses grupos heterocíclico podem ainda ser substituídos, por exemplo, com hidróxi, alquil, alcóxi, halogênio e amino.

3 0 Um "paciente" é um animal humano ou não humano que necessita de tratamento médico. 0 tratamento médico pode incluir tratamento de uma condição existente, por exemplo, uma doença ou um distúrbio, tratamento profilático ou preventivo, ou tratamento diagnóstico. Em algumas modalidades, o paciente é um paciente humano.

"Sais farmaceuticamente aceitáveis" de compostos de Fórmula I, e de outros agentes ativos aqui discutidos, também incluem solvatos e hidratos desses agentes ativos. 0 agente ativo pode ser modificado por produção de sais 10 atóxicos de adição de ácido ou base deste. Exemplos de sais farmaceuticamente aceitáveis incluem sais de adição de ácido mineral ou orgânico de resíduos básicos como, por exemplo, aminas; sais de adição de álcalis ou orgânica de resíduos ácidos; e semelhantes, e combinações que 15 compreendem um ou mais dos sais citados anteriormente. Os sais farmaceuticamente aceitáveis incluem sais atóxicos e os sais de amônio quaternário de compostos de Fórmula I ou de pelo menos um agente ativo adicional. Por exemplo, sais ácidos atóxicos incluem aqueles derivados de ácidos

2 0 inorgânicos, tais como clorídrico, hidrobrômico, sulfúrico, sulfâmico, fosfórico, nítrico e semelhantes; outros sais inorgânicos aceitáveis incluem sais de metal como, por exemplo, sal de sódio, sal de potássio, sal de césio, e semelhantes; e sais de metal alcalino terroso, por exemplo, 25 sal de cálcio, sal de magnésio, e semelhantes, e combinações que compreendem um ou mais dos sais citados anteriormente. Sais orgânicos farmaceuticamente aceitáveis incluem sais preparados a partir de ácidos orgânicos como, por exemplo, ácido acético, propiônico, succínico, 30 glicólico, esteárico, lático, málico, tartárico, cítrico, ascórbico, pamóico, maléico, hidroximaléico, fenilacético, glutâmico, benzóico, salicílico, mesílico, esílico, besílico, sulfanílico, 2-acetoxibenzóico, fumárico, toluenossulfônico, metanossulfônico, etano dissulfônico,

oxãlico, isetiônico, HOOC-(CH2)n-COOH, em que n é 0-4, e semelhantes; sais de amina orgânica como, por exemplo, sal de trietilamina, sal de piridina, sal de picolina, sal de etanolamina, sal de trietanolamina, sal de

diciclohexilamina, sal de N,N'-dibenziletilenodiamina, e semelhantes; e sais de aminoácido como, por exemplo, arginato, asparginato, glutamato, e semelhantes; e combinações que compreendem um ou mais dos sais citados anteriormente.

"Que fornece" significa que gera, administra, vende, distribui, transfere (comercialmente ou não), fabrica, compõe ou dispensa.

0 "fornecimento de um composto de Fórmula I com pelo menos um agente ativo adicional" significa que o composto de Fórmula I e o(s) agente(s) ativo(s) adicional(s) são 20 fornecidos simultaneamente em uma forma de dosagem única, fornecidos concomitantemente em formas de dosagem separadas, ou fornecidos em formas de dosagem separadas para administração separadas por alguma quantidade de tempo que está dentro do tempo no qual tanto o composto de 25 Fórmula I quanto (o) pelo menos um agente ativo adicional está no interior da corrente sangüínea de um paciente. 0 composto de Fórmula Ieo agente ativo adicional não precisam ser prescritos a um paciente pelo mesmo profissional médico. 0 agente ou os agentes ativos

3 0 adicionais podem ' não precisar de uma prescrição. A administração do composto de Fórmula I ou de pelo menos um agente ativo adicional pode ocorrer por meio de qualquer via apropriada, por exemplo, comprimidos orais, cápsulas orais, líquidos orais, inalação, injeção, supositórios ou contato tópico.

"Tratamento", como aqui usado, inclui o fornecimento de um composto de Fórmula I e de pelo menos um agente ativo adicional suficiente para: (a) a prevenção da ocorrência de uma doença ou de um sintoma de uma doença em um paciente

que está predisposto à doença, mas que ainda não foi diagnosticado como tendo a doença (por exemplo, incluindo doenças que podem estar associadas ou causadas por uma doença primária (como, por exemplo, na fibrose hepática que pode resultar no contexto de infecção crônica pelo HCV));

(b) a inibição da doença, ou seja, a interrupção de seu desenvolvimento; e (c) o alívio da doença, ou seja, causar a regressão da doença. "Que trata" e "tratamento" também significam o fornecimento de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de Fórmula I e de

2 0 pelo menos um agente ativo adicional a um paciente que

possui ou que está suscetível a uma infecção por hepatite C. Uma "quantidade terapeuticamente eficaz" de uma combinação farmacêutica desta invenção significa uma quantidade eficaz, quando administrada a um paciente, para

fornecer um benefício terapêutico como, por exemplo, uma melhora dos sintomas, por exemplo, uma quantidade eficaz para diminuir os sintomas de uma infecção por hepatite C. Por exemplo, um paciente infectado com um vírus da hepatite C pode apresentar níveis elevados de certas enzimas

3 0 hepáticas, incluindo aspartato aminotrasferase (AST) e alanina aminotrasferase (ALT). Os níveis normais de AST são de 5 a 40 unidades por litro de soro (a parte líquida dó sangue) -e os níveis normais de ALT são de 7 a 56 unidades por litro de soro. Dessa forma, uma quantidade terapeuticamente eficaz é uma quantidade suficiente para fornecer uma redução significativa dos níveis elevados de AST e ALT ou uma quantidade suficiente para fornecer um retorno dos níveis de AST e ALT à faixa da normalidade, uma quantidade terapeuticamente eficaz também é uma quantidade suficiente para evitar um aumento significativo ou para reduzir significativamente o nível detectável de vírus ou anticorpos virais no sangue, soro ou tecidos do paciente. Um método de determinação da eficácia do tratamento inclui a medida dos níveis de RNA de HCV por um método convencional para a determinação dos níveis de RNA viral como, por exemplo, o ensaio TaqMan da Roche. Em* certas modalidades preferidas, o tratamento reduz os níveis' de RNA de HCV abaixo do limite de quantificação (30 Ul/ml, medidos pelo Roche TaqMan® da Roche) ou, mais preferivelmente, abaixo do limite de detecção (10 Ul/ml, TaqMan Roche).

Um aumento ou uma redução significativa do nível detectável de vírus ou de anticorpos virais é qualquer mudança detectável que seja estatisticamente significativa em um teste paramétrico padronizado de significância 25 estatística como, por exemplo, o teste T de Student, em que p < 0,05.

COMBINAÇÕES FARMACÊUTICAS

A invenção também fornece combinações farmacêuticas que compreendem um composto de Fórmula I (como mostrado

3 0 acima) ou um sal farmacêutico aceitável deste e pelo menos um agente ativo adicional. 0 composto de Fórmula I pode ser fornecido em uma forma de dosagem única, ou pode ser formulado como formas de dosagem separadas e fornecido junto com as formas de dosagem separadas. Por exemplo, o 5 composto de Fórmula I e pelo menos um agente ativo adicional podem ser fornecidos juntos em um recipiente como uma combinação farmacêutica embalada. Essas combinações embaladas podem conter instruções para utilização da combinação para o tratamento de uma infecção por hepatite 10 C.

Combinações que fornecem efeitos sinérgicos ou aditivos são úteis no tratamento de HCV e estão incluídas na invenção. Em certas modalidades, o composto de Fórmula I e pelo menos um agente ativo adicional fornecem um efeito 15 sinérgico. Em outras modalidades, o composto de Fórmula I e pelo menos um agente ativo adicional fornecem um efeito aditivo. Uma combinação que fornece um efeito sinérgico é uma combinação que fornece um efeito terapêutico ou profilático maior do que a melhora incrementai no resultado

2 0 do tratamento que seria prevista ou esperada de partir de uma combinação aditiva (i) do benefício terapêutico ou profilático do composto de Fórmula I quando administrado na mesma dosagem que uma monoterapia e (ii) do benefício terapêutico e profilático do agente ativo adicional quando

2 5 administrado na mesma dosagem que uma monoterapia. Por

exemplo, uma combinação que exibe um índice de combinação (CI) igual ou menor do que 0,9 em um ensaio para efeitos farmacológicos sinérgicos, como calculado pelo método de Chou e Talalay, é considerada uma combinação sinérgica.

3 0 0 (pelo menos um) agente ativo adicional pode ter atividade antiviral direta ou pode atuar por meio de outro mecanismo para aumentar a eficácia do tratamento. Por exemplo, inibidores de protease NS3/4A, incluindo VX-950, são metabolizados por enzimas do citocromo p450, 5 particularmente pela isoenzima 3A4. A eficácia da terapia antiviral pode ser aumentada por inibição das isoenzimas CYP que metabolizam o fármaco antiviral e, dessa forma, aumentando a exposição do paciente ao fármaco. Desse modo, os inibidores da monooxigenase do citocromo p450 são úteis 10 como agentes ativos adicionais nos métodos e nas combinações farmacêuticas desta invenção.

Compostos de Fórmula I específicos úteis nas combinações farmacêuticas aqui descritas incluem os seguintes compostos e seus sais, hidratos, pró-fármacos e polimorfos farmaceuticamente aceitáveis desses compostos:

1-(3-Ciclopropil-4-(pentilóxi)fenil)-3- nicotinoiltiouréia;

Metil 2-OXO-2-(5-((3-(4-(pentilóxi)-3-(trifluormetil) fenil)tioureido))piridin-2 -ilamino)acetato;

Metil 2-(5-( (3-(4-(heptilóxi)fenil)tioureido)carbonil)

piridin-2-ilamino)-2-oxoacetato;

1-(2-(2-Amino-2-oxoacetamido)nicotinoil)-3-(4- (pentilóxi)-3-(trifluormetil)fenil)tiouréia;

1-(6-(2- (Dimetilamino)etóxi)nicotinoil)-3 -(4 - (pentilóxi)-3-(trifluormetil)fenil)tiouréia;

1-(2-Metilnicotinoil)-3-(4-(pentilóxi)-3- (trifluormetil)fenil)tiouréia;

1-(6-(4-Metilpiperazin-l-il)nicotinoil)-3-(4- pentilfenil)tiouréia;

1- (6-(4-Metilpiperazin-1-il)nicotinoil)-3-(4- (pentilóxi)fenil)tiouréia; 1-(3-Flúor-4-(pentilóxi)fenil)-3-(6-(4-metilpiperazin- 1-il)nicotinoil)tiouréia;

1-(6-(4-Metilpiperazin-1-il)nicotinoil)-3-(4- (pentilóxi)-3-(trifluormetil)fenil)tiouréia;

1-(3-Metil-4-(pentilóxi)fenil)-3-(6-(4-metilpiperazin- 1-il)nicotinoil)tiouréia;

1-(6-hidroxinicotinoil)-3-(4-(pentilóxi)fenil) tiouréia;

1-(6-hidroxinicotinoil)-3-(4-pentilfenil)tiouréia;

1-(3-Flúor-4-(pentilóxi)fenil)-3-(6-hidroxinicotinoil) tiouréia;

1-(6-Hidroxinicotinoil)-3-(4-(pentilóxi)-3- (trifluormetil)fenil)tiouréia;

1-(5-Hidroxinicotinoil)-3-(4-(pentilóxi)-3- (trifluormetil)fenil)tiouréia;

1-(3-Flúor-4-(pentilóxi)fenil)-3-(5-hidroxinicotinoil) tiouréia;

1-(6-(Morfolino-4-carbonil)nicotinoil)-3-(4- (pentilóxi)-3-(trifluormetil)fenil)tiouréia;

1-(6-((Dimetilamino)metil)nicotinoil)-3-(4- (pentilóxi)-3-(trifluormetil)fenil)tiouréia;

1-(6-Acetamidonicotinoil)-3-(4-(pentilóxi)-3- (trifluormetil)fenil)tiouréia;

(5-((3-(4-(Pentilóxi)-3-(trifluormetil)fenil) tioureido)carbonil)piridin-2-il)metil acetato;

1-(6-(Hidroximetil)nicotinoil)-3-(4-(pentilóxi)-3- (trifluormetil)fenil)tiouréia;

1-(6-(Morfolinometil)nicotinoil)-3-(4-(pentilóxi) fenil)tiouréia; I-(6-(Morfolinometil)nicotinoil)-3-(4-(pentilóxi)-3- (trifluormetil)fenil)tiouréia;

1- (6- ( (»Dimetilamino) metil) ríicotinoil) -3- (4- pentilfenil)tiouréia;

1-(4-(Heptilóxi)fenil)-3-(6-(morfolino-4-carbonil)

nicotinoil)tiouréia;

1-(6-(Morfolino-4-carbonil)nicotinoil)-3-(4-(octilóxi) fenil)tiouréia;

1-(6-(Morfolino-4-carbonil)nicotinoil)-3-(4- pentilfenil)tiouréia;

1-(4-(Heptilóxi)fenil)-3-(6-((4-metilpiperazin-1-il) metil)nicotinoil)tiouréia;

1-(6-((4-Metilpiperazin-l-il)metil)nicotinoil)-3-(4- (pentilóxi)-3 -(trifluormetil)fenil)tiouréia;

1-(6-((Dimetilamino)metil)nicotinoil)-3-(4-(pentilóxi)

fenil)tiouréia;

1-(4-(Heptilóxi)fenil)-3-(6-hidroxinicotinoil) tiouréia;

1-(6-((Dimetilamino)metil)nicotinoil)-3-(4-(hexilóxi) fenil)tiouréia;

1-(4 -(Hexilóxi)fenil)-3 -(6 -(morfolinometil)nicotinoil) tiouréia;

1-(4-(Heptilóxi)fenil)-3-(6-(morfolinometil) nicotinoil)tiouréia;

1-(3-Flúor-4-(pentilóxi)fenil)-3-(6-

morfolinonicotinoil)tiouréia;

1-(6-Cianonicotinoil)-3-(4-(pentilóxi)-3- (trifluormetil)fenil)tiouréia;

1-(6-Cianonicotinoil)-3-(3-flúor-4-(pentilóxi)fenil)

3 0 tiouréia; 1-(2-Cianonicotinoil)-3-(4-(pentilóxi)fenil)tiouréia;

1-(.6 (2 Morfolinoetoxi) nicotinoil)-3-(4-(pentilóxi)-3- (trif Iuoririefel) fenil) tiouréia;

1-(3-Flúor-4-(pentilóxi)fenil)-3-(6-(2-morfolinoetoxi) nicotinoil)tiouréia;

1-(6-(2-Morfolinoetoxi)nicotinoil)-3-(4-(pentilóxi) fenil)tiouréia;

1-(6-(2-Morfolinoetoxi)nicotinoil)-3-(4-pentilfenil) tiouréia;

1-(6-(Dimetilamino)nicotinoil)-3-(4-(pentilóxi)-3-

(trifluormetil)fenil)tiouréia;

1-(6 - (Dimetilamino)nicotinoil)-3 -(4 -(pentilóxi)fenil) tiouréia;

1-(6-(Dimetilamino)nicotinoil)-3-(4-pentilfenil)

tiouréia;

1-(5-(Furan-3-il)nicotinoil)-3-(4-(pentilóxi)-3- (trifluormetil)fenil)tiouréia;

1-(3-Flúor-4-(pentilóxi)fenil)-3-(5-(furan-3-il) nicotinoil)tiouréia;

2 0 1-(5-(Furan-3-il)nicotinoil)-3-(4-(pentilóxi)fenil)

tiouréia;

1-(3-Ciano-4-(pentilóxi)fenil)-3-nicotinoiltiouréia;

1-(5-Bromonicotinoil)-3-(4-(pentilóxi)-3- (trifluormetil)fenil)tiouréia;

1-(6-(Dimetilcarbamoil)nicotinoil)-3-(4-(pentilóxi)-3-

(trifluormetil)fenil)tiouréia;

1-(6-(Dimetilcarbamoil)nicotinoil)-3-(3-flúor-4- (pentilóxi)fenil)tiouréia;

1-(3-Ciano-4-(pentilóxi)fenil)-3-(6-(dimetilcarbamoil) nicotinoil)tiouréia; I-(6-(Dimetilcarbamoil)nicotinoil)-3-(4-(pentilóxi) fenil)tiouréia;

1-(3-Cloro-4-(pentilóxi)fenil)-3-(6-cianonicotinoil) tiouréia;

1-(5-Cianonicotinoil)-3-(4-(pentilóxi)-3- (trifluormetil)fenil)tiouréia;

Metil 5-((3-(4-(pentilóxi)-3-(trifluormetil)fenil)

tioureido)carbonil)nicotinato;

1-(3-Flúor-4-(pentilóxi)fenil)-3-(6-(1-metilpiperazina -4-carbonil)nicotinoil)tiouréia;

1-(3-Cloro-4-(pentilóxi)fenil)-3-(6-(1-metilpiperazina -4-carbonil)nicotinoil)tiouréia;

1-(6-(l-Metilpiperazina-4-carbonil)nicotinoil)-3-(4- (pentilóxi)fenil)tiouréia;

1-(3-Cloro-4-(pentilóxi)fenil)-3-nicotinoiltiouréia;

1-(4-(Pentilóxi)fenil)-3-(6-(2-(pirrolidin-l-il)etil) nicotinoil)tiouréia;

1-(4-Pentilfenil)-3 -(6 -(2 -(pirrolidin-l-il)etil) nicotinoil)tiouréia;

1-(2-(4-Fluorfenoxi)nicotinoil)-3-(4-pentilfenil) tiouréia;

1-Nicotinoil-3 -(4-(octilóxi)fenil)tiouréia;

l-Nicotinoil-3-(4-octilfenil)tiouréia;

1-(4-(Hexilóxi)fenil)-3-nicotinoiltiouréia;

1-(4-Hexilfenil)-3-nicotinoiltiouréia;

1-(3-Flúor-4-(pentilóxi)fenil)-3-nicotinoiltiouréia;

l-Nicotinoil-3-(4-(pentilóxi)-3-(trifluormetil)fenil) tiouréia;

1-(4-Butoxifenil)-3-nicotinoiltiouréia;

1-(4-(Heptilóxi)-3-(trifluormetil)fenil)-3- nicotinoiltiouréia;

1-(3-Cloro-4-(pentilóxi)fenil)-3-nicotinoiltiouréia;

ou

1- (4 -1sopropóxi- 3 -(trifluormetil)fenil)-3- nicotinoiltiouréia.

Compostos de Fórmula I úteis nas combinações farmacêuticas aqui descritas também incluem os seguintes compostos e os sais, hidratos, pró-fármacos e polimorfos farmaceuticamente aceitáveis desses compostos:

(1-(5-bromonicotinoil)-3-(4-(pentilóxi)-3-(trifluormetil)

fenil)tiouréia)

10

CF3

O

Λ

S

N

N N:

H H

15

(l-nicotinoil-3-(4-(pentilóxi)-3-(trifluormetil)fenil)

tiouréia) (ACH-806)

20

N

(1-(4-(hexilóxi)fenil)-3-nicotinoiltiouréia)

O

O

S

25

iBr

N

Ni JSi

H H

Λ

F

F F

30 10

15

20

25

O

(I-(6-(dimetilcarbamoil)nicotinoil)-3-(4-(pentilóxi)-3- (trifluormetil)fenil)tiouréia)

(1-(6-((dimetilamino)metil)nicotinoil)-3-(4-(pentilóxi)-3- (trifluormetil)fenil)tiouréia)

(1-(6-((4-metilpiperazin-l-il)metil)nicotinoil)-3-(4· (pentilóxi)-3-(trifluormetil)fenil)tiouréia)

,0.

ff

I H

.N.

O

30

(1-(4 -(hexilóxi)fenil)-3 -(6-(morfolinometil)nicotinoil)

tiouréia)

O agente ativo adicional ou os agentes ativos adicionais nos métodos de tratamento e combinações farmacêuticas aqui fornecidas podem ser um inibidor de caspase, um inibidor de ciclofilina, um inibidor de monooxigenase de citocromo P450, um glicocorticóide, uma

Jif-0 hematopoietina, um inibidor de fusão, um inibidor de entrada, um inibidor de capsídeo, um inibidor de helicase (NS3), um agente terapêutico homeopático, um composto imunomodulador (inclui interferon), um imunossupressor, uma interleucina, um intensificador de interferon, um inibidor de IRES, um anticorpo monoclonal ou policlonal, um análogo de nucleosídeo, um inibidor não nucleosídeo, um inibidor de proteína P7, um inibidor de polimerase (incluindo RNA polimerase RNA-dependente NS5B), inibidores de protease (incluindo inibidores da metaloprotease de HCV NS2-3 e inibidores de protease NS3/4A), um agente de interferência de RNA, uma vacina terapêutica, um agonista de TNF, um inibidor de tubulina, um inibidor de NS5A, um inibidor de NS5B, um inibidor de quinase, um agonista de receptor Toll- Iike ou um modulador de receptor de esfingosina-1-fosfato.

Sem se prender a uma teoria em particular, acredita-se que ACH-806 e outros compostos de Fórmula I inibem a replicação do HCV por meio de efeitos em NS4A do HCV. Na maioria das modalidades, o agente ativo adicional ou os

2 0 agentes ativos adicionais terão um mecanismo de ação distinto daquele de ACH-806.

Em certas modalidades, o agente ativo adicional (ou agentes) é um inibidor de protease de HCV ou inibidor de polimerase de HCV. Por exemplo, o inibidor de protease pode 25 ser telaprevir (VX-950) e o inibidor de polimerase pode ser valopicitabina, ou NM 107, o agente ativo no qual valopicitabina é convertida.

Os métodos de tratamento aqui descritos incluem pelo menos um composto de Fórmula I e um segundo agente ativo, mas podem também incluir agentes ativos adicionais. Em certas modalidades, o método de tratamento inclui o fornecimento a um paciente de um composto de Fórmula I e um interferon como, por exemplo, um interferon peguilado ou um interferon gama. O interferon pode ser o único composto 5 fornecido com o composto de Fórmula I, ou pode ser fornecido com um agente ativo adicional que não seja um interferon.

Os métodos de tratamento e as combinações farmacêuticas da invenção que incluem compostos de Fórmula I podem incluir qualquer um dos seguintes compostos e substâncias como agente ativo adicional:

Inibidores_de_caspase : IDN 6 55 6 (Idun

Pharmaceuticals).

Inibidores de ciclofilina: NIM811 (Novartis) e DEBIO- 025 (Debiopharm).

Inibidores da monooxigenase de citocromo P450: ritonavir (WO 94/14436), cetoconazol, troleandomicina, 4- metil pirazol, ciclosporina, clometiazol, cimetidina, itraconazol, fluconazol, miconazol, fluvoxamina,

fluoxetina, nefazodona, sertralina, indinavir, nelfinavir, amprenavir, fosamprenavir, saquinavir, lopinavir,

delavirdina, eritromicina, VX- 944 e VX-497. Inibidores de CYP preferidos incluem ritonavir, cetoconazol,

troleandomicina, 4-metil pirazol, ciclosporina e clometiazol.

Glicocorticóides: hidrocortisona, cortisona,

prednisona, prednisolona, metilprednisolona, triamcinolona, parametasona, betametasona, e dexametasona.

Hematopoietinas: hematopoietina-1 e hematopoietina-2.

3 0 Outros membros da superfamília das hematopoietinas, tais como os vários fatores de estimulação de colônias (por exemplo (por exemplo, G-CSF, GM-CSF, M-CSF) , Epo e SCF (fator de célula-tronco)).

Terapias homeopáticas: cardo-leiteiro (milk thistle), 5 silimarina, ginseng, glicirrizina, raiz de licopódio, esquisandra, vitamina C, vitamina E, beta caroteno e selênio.

Compostos_imunomoduladores: talidomida, IL-2,

hematopoietinas, inibidores de IMPDH, por exemplo, Merimepodib (Vertex Pharmaceuticals Inc.), interferon, incluindo interferon natural (por exemplo, OMNIFERON, Viragen e SUMIFERON, Sumitomo, uma mistura de interferons naturais), interferon alfa natural (ALFERON, Hemispherx Biopharma, Inc.), interferon alfa nl de células Iinfoblastóides (WELLFERON, Glaxo Wellcome), interferon alfa oral, Peg-interferon, Peg-interferon alfa 2a (PEGASYS, Roche), interferon alfa 2a recombinante (ROFERON, Roche), interferon alfa 2b inalado (AERX, Aradigm), Peg-interferon alfa 2b (ALBUFERON, Human Genome Sciences/ Novartis, PEGINTRON, Schering), interferon alfa 2b recombinante (INTRON A, Schering) , interferon alfa 2b peguilado (PEG- INTRON, Schering, VIRAFERONPEG, Schering), interferon beta- la (REBIF, Serono, Inc. e Pfizer), interferon alfa de consenso (INFERGEN, Valeant Pharmaceutical), interferon gama-lb (ACTIMMUNE, Intermune, Inc.), interferon alfa não peguilado, interferon alfa e seus análogos e timosina alfa

1 sintética (ZADAXIN, SciClone Pharmaceuticals Inc.).

Imunossupressores: sirolimus (RAPAMUNE, Wyeth).

Interleucinas: ((IL-1, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IL-Il, IL-12) , LIF, TGF-beta, TNF-alfa) e outros fatores de baixo peso molecular (por exemplo, AcSDKP, pEEDCK, hormônios tímicos e minicitocinas).

Intensificadores de interferon: EMZ702 (Transition Therapeutics).

Inibidores de IRES: VGX-410C (VGX Pharma).

Anticorpos monoclonais e policlonais: XTL-6865 (XTL), HuMax-HepC (Genmab), Globina Imune de Hepatite C (humana)

(CIVACIR, Nabi Biopharmceuticals).

Análogos de nucleosídeo: Lamivudina (EPIVIR, 3TC, 10 GlaxoSmithKline), MK-0608 (Merck), zalcitabina (HIVID, Roche US Pharmaceuticals), ribavirina (including COPEGUS (Roche), REBETOL (Schering), VILONA (ICN Pharmaceuticals, e VIRAZOLE (ICN Pharmaceuticals), e viramidina (Valeant Pharmaceuticals), um pró-fármaco de amidina de ribavirina. 15 Também podem ser empregadas combinações de análogos de nucleosídeos.

Inibidores não nucleosídeos: delaviridina (RESCRIPTOR, Pfizer) e HCV-796 (Viropharm).

Inibidor da proteína P7: amantadina (SYMMETREL, Endo Pharmaceuticals, Inc.).

Inibidores de polimerase: NM283 (valopicitabina) (Idenix) e NM 107 (Idenix), PSI- 6130 (Roche/ Pharmasset).

Inibidores de protease: BILN-2061 (Boehringer Ingelheim), GW-433908 (pró-fármaco de Amprenavir, Glaxo/ 25 Vertex), indinavir (CRIXIVAN, Merck), ITMN-191 (Intermune/ Array Biopharma), VX950 (Vertex) e combinações que compreendem um ou mais dos inibidores de protease citados anteriormente.

Interferência de RNA: SIRNA-034 RNAi (Sirna

3 0 Therapeutics). Vacinas terapêuticas: IC41 (Intercell), IMN-OlOl (Imnogenetics), GI 5005 (Globeimmune), Chronvac-C (Tripep/ Inovio), ED-iOO^ (Imnogènetics) , Hepavaxx C (ViRex Medicai) .

Agonistas de TNF: adalimumab (HUMIRA, Abbott) , entanercept (ENBREL, Amgen e Wyeth), infliximab (REMICADE, Centocor, Inc.).

Inibidores da tubulina: colchicina.

Moduladores do receptor de esfingosina-l-fosfato: FTY72 0 (Novartis).

Agonistas de TLR: ANA-975 (Anadys Pharmaceuticals) ,

agonista de TLR7 (Anadys Pharmaceuticals), CPG10101 (Coley) e agonistas de TLR9, incluindo CPG 7909 (Coley).

Inibidores de ciclofilina: NIM811 (Novartis) e DEBlO- 025 (Debiopharm).

Os pacientes que recebem medicações para hepatite C

recebem tipicamente interferon junto com outro agente ativo. Dessa forma, os métodos de tratamento e as combinações farmacêuticas nas quais um composto de Fórmula

I é fornecido junto com um interferon, por exemplo,

interferon peguilado alfa 2a, como os agentes ativos adicionais, estão incluídos como modalidades. Da mesma forma, os métodos e as combinações farmacêuticas nas quais a ribavirina é um agente ativo adicional são aqui fornecidos, e como modalidades.

2 5 FORMULAÇÕES FARMACÊUTICAS

Embora seja possível que os agentes ativos presentes nos métodos e nas combinações farmacêuticas aqui descritas, incluindo compostos de Fórmula I, sejam administrados puros, pode ser preferível formular os agentes ativos como

3 0 formulações farmacêuticas. As formulações farmacêuticas podem ser preparadas com excipientes farmaceuticamente aceitáveis, tais como veículos, solventes, estabilizantes, adjuvantes, diluentes, glidantes etc., dependendo do modo de administração e da forma de dosagem específicos. As 5 formulações opcionalmente contêm excipientes, tais como aqueles apresentados no "Handbook of Pharmaceutical Excipients", 5a Edição (2005).

Agentes ativos úteis nos métodos e nas formulações farmacêuticas aqui descritas podem ser formulados em uma 10 forma de dosagem unitária, ou em formas de dosagem separadas destinadas ã administração simultânea ou seqüencial a um paciente que necessita de tratamento. Quando administrada seqüencialmente, a combinação pode ser administrada em duas ou mais, três ou mais, quatro ou mais, 15 cinco ou mais, ou seis ou mais administrações. Em uma modalidade alternativa, é possível administrar um ou mais compostos da presente invenção e um ou mais ingredientes ativos adicionais por vias diferentes.

As formulações farmacêuticas da invenção compreendem 20 uma quantidade terapêutica ou profilaticamente eficaz de um composto de Fórmula I e um agente ativo adicional, juntos com um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis. Uma quantidade terapêutica ou profilaticamente eficaz de uma combinação da invenção inclui uma quantidade inibidora

2 5 viral da combinação.

As combinações da invenção podem ser administradas por qualquer via adequada à condição a ser tratada. Vias adequadas incluem a via parenteral (incluindo subcutânea, intramuscular, intravenosa, intradérmica, intratecal e epidural), oral, nasal, tópica (incluindo bucal e sublingual) , retal, vaginal, e semelhantes. Será observado que a via de administração preferida pode variar, dependendo, po‘r exemplo, da condição do receptor e da duração do tratamento. Em uma modalidade preferida, o 5 tratamento é administrado oralmente ou parenteralmente a um paciente que possui anticorpos contra o vírus da hepatite C.

As formulações da presente invenção, por exemplo, para administração parenteral ou oral, são mais tipicamente 10 sólidos, soluções líquidas, emulsões ou suspensões, embora formulações inaláveis para administração pulmonar sejam geralmente líquidos ou pós, com formulações em pó sendo geralmente preferidas. Uma combinação farmacêutica da invenção também pode ser formulada como um sólido 15 liofilizado que é reconstituído com um solvente fisiologicamente compatível, antes da administração. Formulações farmacêuticas da invenção alternativas podem ser preparadas como xaropes, elixires, cremes, pomadas, comprimidos, e semelhantes.

2 0 Podem ser preparadas formulações para uso oral que

incluem, por exemplo, comprimidos, pastilhas, pílulas, eletuários, suspensões aquosas ou oleosas, soluções não aquosas, pós ou grânulos dispersíveis (incluindo partículas micronizadas ou nanopartícuas), emulsões, cápsulas rígidas 25 ou macias, xaropes ou elixires. As formulações destinadas ao uso oral podem ser preparadas de acordo com qualquer método conhecido na técnica para a fabricação de formulações farmacêuticas, e essas formulações podem conter um ou mais agentes, incluindo agentes adoçantes, agentes

3 0 flavorizantes, agentes corantes e agentes conservantes, a fim de fornecer uma preparação palatável.

As formulações farmacêuticas conterão excipientes. Excipientes adequados podem ser moléculas transportadoras que incluem macromoléculas grandes, lentamente

5 metabolizadas, tais como proteínas, polissacarídeos, ácidos poliláticos, ácidos poliglicólicos, aminoácidos

poliméricos, copolímeros de aminoácidos e partículas viris inativas. Outros excipientes exemplares incluem antioxidantes como, por exemplo, ácido ascórbico; agentes quelantes como, por exemplo, EDTA; carboidratos, tais como dextrina, hidroxialquilcelulose, hidroxialquilmetil-

celulose, ácido esteárico; líquidos, tais como óleos, água, solução salina, glicerol e etanol; agentes umidificantes ou emulsificantes; substâncias de tamponamento do pH; e semelhantes. Lipossomos também estão incluídos dentro da definição de excipientes farmaceuticamente aceitáveis.

Excipientes farmaceuticamente aceitáveis

particularmente adequados para uso em conjunto com comprimidos incluem, por exemplo, diluentes inertes, por 20 exemplo, celuloses, carbonato de cálcio ou sódio, lactose, fosfato de cálcio ou sódio; agentes de desintegração, tais como croscarmelose sódica, povidona entrecruzada, amido de milho ou ácido algínico; agentes ligantes, tais como povidona, amido, gelatina ou acácia; e agentes 25 lubrificantes, tais como estearato de magnésio, ácido esteárico ou talco.

Veículos constituem uma classe de excipientes que serão freqüentemente usados nas combinações aqui descritas. 0 material de transporte necessário para produzir uma forma

3 0 de dosagem única será determinado por aqueles habilitados na técnica, e irá variar, dependendo de considerações que incluem o hospedeiro, a natureza da condição tratada, o modo de administração específico, a formulação farmacêutica e a toxicidade. Os agentes ativos podem ser formulados com 5 uma quantidade apropriada e conveniente de material de transporte, que pode variar, por exemplo, de cerca de 5% a cerca de 95% da composição total (peso:peso).

Os comprimidos podem ser não revestidos ou podem ser revestidos por técnicas conhecidas, que incluem a 10 microencapsulação para retardar a desintegração e adsorção no trato gastrintestinal e, dessa forma, fornecer uma ação sustentada ao longo de um período de tempo maior. Por exemplo, pode ser empregado um material de retardo de tempo como, por exemplo, monoestearato de glicerila ou 15 diestearato de glicerila isoladamente ou com uma cera.

As formulações para uso oral também podem ser apresentadas como cápsulas de gelatina rígida, nas quais o ingrediente ativo é misturado com um diluente sólido inerte, por exemplo, celuloses, lactose, fosfato de cálcio 20 ou caulim, ou como cápsulas de gelatina macia nas quais o ingrediente ativo é misturado com meio não aquoso ou oleoso como, por exemplo, glicerina, propileno glicol, polietileno glicol, óleo de amendoim, parafina líquida ou azeite de oliva.

Em outra modalidade, as formulações farmacêuticas são

formuladas como suspensões que compreendem um composto da presente invenção em uma mistura com pelo menos um excipiente farmaceuticamente aceitável adequado à fabricação de uma suspensão. Ainda em outra modalidade, as

3 0 formulações farmacêuticas são formuladas como pós e grânulos dispersíveis adequados à preparação de uma suspensão pela adição de excipientes adequados. Excipientes adequados para uso em relação às suspensões incluem agentes de suspensão, por exemplo, carboximetilcelulose sódica, 5 metilcelulose, hidroxipropil metilcelulose, alginato de sódio, polivinilpirrolidona, goma tragacanto, goma acácia, agentes dispersantes ou umidificantes, por exemplo, uma fosfatida de ocorrência natural (por exemplo, lecitina), um produto da condensação de um óxido de alquileno com um 10 ácido graxo (por exemplo, estearato de polioxietileno) , um produto da condensação de óxido de etileno com um álcool alifático de cadeia longa (por exemplo,

heptadecaetilenooxicetanol) , um produto da condensação de óxido de etileno com um éster parcial derivado de um ácido 15 graxo e um anidrido de hexitol (por exemplo, sorbitano monooleato de polioxietileno); e agentes espessantes, por exemplo, carbômero, cera de abelha, parafina sólida ou álcool cetílico. As suspensões também podem conter um ou mais conservantes como, por exemplo, ácido acético, metil

2 0 e/ou n-propil p-hidróxi-benzoato; um ou mais agentes corantes; um ou mais agentes f lavorizantes; e um ou mais agentes adoçantes como, por exemplo, sacarose ou sacarina.

Suspensões oleosas podem ser formuladas por suspensão do ingrediente ativo em um óleo vegetal, por exemplo, óleo 25 de amendoim, azeite de oliva, óleo de gergelim ou óleo de coco, ou em um óleo mineral como, por exemplo, parafina líquida. As suspensões orais podem conter um agente espessante, por exemplo, cera de abelha, parafina rígida ou álcool cetílico. Opcionalmente, podem ser adicionados 30 agentes adoçantes e agentes flavorizantes para gerar uma preparação oral palatável. Um ou mais antioxidantes, por exemplo, ácido ascórbico, podem ser adicionados como conservante·.

As formulações farmacêuticas da invenção também podem 5 estar na forma de emulsões óleo em água. Em um aspecto, a fase oleosa de uma emulsão pode compreender apenas um ou mais emulsificadores (também conhecidos como emulgentes). Em um aspecto preferido, a fase oleosa compreende uma mistura de pelo menos um emulsificador com uma gordura ou 10 um óleo ou tanto com uma gordura quanto um óleo. De preferência, é incluído um emulsificador hidrofílico junto com um emulsif icador lipofílico, que atua como um estabilizante. Prefere-se também incluir tanto um óleo quanto uma gordura. Emulgentes e estabilizantes de emulsão 15 adequados para uso na formulação da invenção incluem Tween 60, Span® 80, álcool cetoestearíIico, álcool benzílico, álcool miristílico, mono-estearato de glicerila e sódio lauril sulfato. Em um aspecto da presente invenção, a fase oleosa compreende um óleo vegetal como, por exemplo, azeite

2 0 de oliva ou óleo de amendoim, um óleo mineral, por exemplo, parafina líquida, ou uma mistura destes. Agentes emulsificantes adequados incluem gomas de ocorrência natural, por exemplo, goma acácia e goma tragacanto; fosfatidas de ocorrência natural, por exemplo, lecitina de 25 soja, ésteres ou ésteres parciais derivados de ácidos graxos; anidridos de hexitol, por exemplo, monooleato de sorbitano; e produtos da condensação desses produtos desses ésteres parciais com óxido de etileno, por exemplo, sorbitano monooleato de polioxietileno. A emulsão também 30 pode conter agentes adoçantes e flavorizantes. Xaropes e elixires podem ser formulados com agentes adoçantes, tais como glicerol, sorbitol ou sacarose. Em um aspecto, essas formulações também podem conter um demulcente, um agente conservante, um agente flavorizante, agente corante ou 5 qualquer combinação desses ingredientes. Uma emulsão ou suspensão pode ser formulada de acordo com a técnica conhecida com a utilização daqueles agentes dispersantes ou umidificantes adequados e agentes de suspensão.

Em algumas modalidades, as formulações farmacêuticas 10 estão na forma de uma preparação injetável estéril. Um injetável pode ser administrado, por exemplo, por injeção, infusão ou como um bolo. Preparações injetáveis incluem, como exemplo não limitante, emulsões aquosas e suspensões oleaginosas injetáveis estéreis. A preparação injetável 15 estéril também pode ser uma solução ou suspensão injetável estéril em um diluente ou solvente atóxico parenteralmente aceitável, por exemplo, uma solução em 1,2-propano-diol. A preparação injetável estéril também pode ser preparada como um pó liofilizado. Entre os veículos e solventes aceitáveis

2 0 que podem ser empregados, estão água, solução de Ringer e

solução isotônica de cloreto de sódio. Além disso, óleos fixos estéreis podem ser empregados como meio solvente ou de suspensão. Para essa finalidade, qualquer óleo fixo brando pode ser empregado, incluindo mono- ou diglicerídeos 25 sintéticos. Além disso, ácidos graxos como, por exemplo, ácido oléico, também podem ser usados na preparação de inj etáveis.

Os agentes ativos das combinações farmacêuticas aqui descritas podem ser formulados para administração oral em

3 0 uma formulação baseada em lipídeos adequada aos compostos de baixa solubilidade. Formulações baseadas em lipxdeos podem geralmente aumentar a biodisponibilidade oral desses compostos. Em '·' uma modalidade, uma formulação farmacêutica da invenção compreende uma quantidade terapêutica ou 5 profilaticamente eficaz de um composto da presente invenção, junto com pelo menos um excipiente farmaceuticamente aceitável selecionado de: ácidos graxos de cadeia média ou ésteres de propileno glicol destes (por exemplo, ésteres de propileno glicol de ácidos graxos 10 comestíveis como, por exemplo, ácidos graxos caprílicos e cápricos), e tensoativos farmaceuticamente aceitáveis como, por exemplo, óleo de rícino hidrogenado polioxil 40. Podem ser adicionadas ciclodextrinas como intensificadores da solubilidade aquosa. Ciclodextrinas incluem derivados 15 hidroxipropil, hidroxietil, glicosil, maltosil e maltotriosil de α-, β- e γ-ciclodextrina. Um intensificador de solubilidade de ciclodextrina particularmente preferido é hidroxipropil-p-ciclodextrina (HPBC), que pode ser adicionado a qualquer uma das formulações descritas acima 20 para aumentar ainda mais as características de solubilidade aquosa dos compostos da presente invenção. Em uma modalidade, a composição compreende hidroxipropil-β- ciclodextrina 0,1% a 20%, mais preferivelmente hidroxipropil^-ciclodextrina 1% a 15% e, ainda mais 25 preferivelmente, hidroxipropil^-ciclodextrina de 2,5% a 10%. A quantidade de intensificador de solubilidade empregada dependerá da quantidade do composto da presente invenção na composição.

As formulações da presente invenção podem ser 3 0 fornecidas na forma de dosagem unitária ou em recipientes raultidoses, incluindo, por exemplo, ampolas e frascos lacrados, e podem ser armazenadas em uma condição seca por congelamento* Óu liofilizada, que necessitam somente da adição do veículo líquido estéril, por exemplo, solução 5 salina para injeção, imediatamente antes do uso. Em uma modalidade, as formulações de dosagem unitária contêm uma dose ou subdose diária, ou uma fração desta, do ingrediente ativo.

FORMULAÇÕES EMBAIjADAS

A invenção inclui combinações farmacêuticas embaladas.

Essas combinações embaladas incluem um composto de Fórmula

I e pelo menos um agente ativo adicional, juntos em um recipiente. 0 recipiente pode adicionalmente incluir instruções para utilização da combinação para o tratamento

ou prevenção de uma infecção por hepatite C em um paciente.

0 composto de Fórmula I e um ou mais agentes ativos adicionais podem ser combinados em uma forma de dosagem única, ou podem estar presentes em formas de dosagem separadas.

2 0 MÉTODOS DE TRATAMENTO

A invenção inclui métodos de prevenção e tratamento de infecções por hepatite C, por administração de uma quantidade eficaz de um ou mais compostos de Fórmula I e pelo menos um agente ativo adicional ao paciente em risco

para infecção por hepatite C ou infectado com um vírus da hepatite C.

De acordo com os métodos da invenção, a combinação de agentes ativos pode ser: (1) co-formulada e administrada ou liberada simultaneamente em uma formulação combinada; (2)

3 0 liberada por alternância ou em paralelo como formulações separadas; ou (3) por qualquer outro regime de terapia combinada conhecida na técnica. Quando liberados em terapia por alternância, os métodos da invenção podem compreender a administração ou liberação dos ingredientes ativos 5 seqüencialmente, por exemplo, em solução, emulsão, suspensão, comprimidos, pílulas ou cápsulas separadas, ou por injeções diferentes em seringas separadas. Em geral, durante a terapia por alternância, uma dosagem eficaz de cada ingrediente ativo é administrada seqüencialmente, ou 10 seja, serialmente, enquanto na terapia simultânea dosagens eficazes de dois ou mais ingredientes ativos são administradas juntas. Também podem ser utilizadas várias seqüências de terapia combinada intermitente.

As combinações farmacêuticas aqui reveladas são úteis 15 para a prevenção e o tratamento de infecções por hepatite C e pacientes. Uma quantidade eficaz de uma combinação farmacêutica da invenção pode ser uma quantidade suficiente para (a) evitar a ocorrência de hepatite C ou um sintoma de hepatite C em um paciente que pode estar predisposto à

2 0 hepatite C, mas que ainda não foi diagnosticado como tendo

a doença, ou para evitar doenças que podem estar associadas ou causadas por uma infecção primária por hepatite C (por exemplo, fibrose hepática que pode resultar no contexto de infecção crônica pelo HCV) ; (b) inibir a progressão de 25 hepatite C; e (c) causar uma regressão da infecção por hepatite C. Uma quantidade de uma composição farmacêutica eficaz para inibir o progresso ou causar uma regressão da hepatite C inclui uma quantidade eficaz para interromper a piora dos sintomas de hepatite C ou para reduzir os

3 0 sintomas apresentados por um paciente infectado com o vírus da hepatite C. Alternativamente, uma interrupção da progressão ou a regressão de hepatite C pode ser indicada por qualquer um entre diversos marcadores para a doença. Por exemplo, uma ausência de aumento ou uma redução na 5 carga viral de hepatite C, ou uma ausência de aumento ou uma redução no número de anticorpos circulantes para HCV no sangue de um paciente, são marcadores de uma interrupção da progressão ou de uma regressão de infecção por hepatite C. Outros marcadores de doença da hepatite C incluem níveis de 10 aminotransferase, particularmente níveis das enzimas hepáticas AST e ALT. Os níveis normais de AST são de 5 a 40 unidades por litro de soro (a parte líquida do sangue) e os níveis normais de ALT são de 7 a 56 unidades por litro de soro. Esses níveis tipicamente estarão elevados em um 15 paciente infectado pelo HCV. A regressão da doença é normalmente marcada pelo retorno dos níveis de AST e ALT à faixa da normalidade.

Os sintomas de hepatite C que podem ser afetados por uma quantidade eficaz de uma combinação farmacêutica da 20 invenção incluem função hepática diminuída, fadiga, sintomas semelhantes aos da grupe: febre, calafrios, dores musculares, dor articular e dores de cabeça, náuseas, aversão a certos alimentos, perda de peso inexplicável, distúrbios psicológicos, incluindo depressão, sensibilidade

2 5 do abdome e icterícia.

0 termo "função hepática" refere-se a uma função normal do fígado, incluindo, sem limitação, uma função sintética que inclui a síntese de proteínas como, por exemplo, proteínas séricas (por exemplo, albumina, fatores da coagulação, fosfatase alcalina, aminotransferases (por exemplo, alanina transaminase, aspartato transaminase), 5'- nucleosidase, γ-glutaminiltranspeptidase etc.), a síntese de bílirrubina, a síntese de colesterol e a síntese de ácidos biliares; uma função hepática metabólica, incluindo 5 metabolismo de carboidratos, aminoácidos e metabolismo de amônia, metabolismo hormonal e metabolismo lipídico; detoxificação de fármacos exógenos; e uma função hemodinâmica, incluindo hemodinâmica esplênica e portal.

Uma quantidade eficaz de uma combinação aqui descrita 10 também fornecerá uma concentração suficiente dos agentes ativos na concentração quando administrada a um paciente. Uma concentração suficiente de um agente ativo é uma concentração do agente no corpo do paciente necessária para evitar ou combater a infecção. Tal quantidade pode ser 15 verificada experimentalmente, por exemplo, por avaliação da concentração sangüínea do agente, ou teoricamente, por cálculo da biodisponibilidade. A quantidade de um agente ativo suficiente para inibir a infecção viral in vitro pode ser determinada com um ensaio convencional para

2 0 infectividade viral como, por exemplo, um ensaio baseado em

replicon, que foi descrito na literatura.

A invenção também inclui a utilização de combinações farmacêuticas que compreendem um composto de Fórmula I e pelo menos um agente ativo adicional em terapias 25 profiláticas. No contexto de tratamento profilático ou preventivo, uma quantidade eficaz de um composto da invenção é uma quantidade suficiente para diminuir significativamente o risco do paciente para contrair uma infecção por hepatite C.

3 0 Os métodos de tratamento incluem o fornecimento de certas quantidades de dosagem do composto de Fórmula I e de pelo menos um agente ativo adicional a um paciente. Os níveis de dosagem de cada agente ativo de cerca de 0,1 mg a cerca de 14 0 mg por quilograma de peso corporal por dia são úteis no tratamento das condições indicadas acima (cerca de

0,5 mg a cerca de 7 g por paciente por dia) . A quantidade de ingrediente ativo que pode ser combinada com os materiais transportadores para produzir uma forma de dosagem única irá variar, dependendo do paciente tratado e 10 do modo de administração específico. As formas de dosagem unitária geralmente conterão entre cerca de 1 mg a cerca de 500 mg de cada agente ativo. Em certas modalidades, 25 mg a 500 mg ou 2 5 mg a 200 mg de ACH-806 ou de outro composto de Fórmula I são fornecidos diariamente a um paciente, e uma 15 quantidade eficaz de pelo menos um agente ativo adicional também é fornecida. Quando o agente ativo adicional for NM 283 (valopicitabina), 100 mg a 1000 mg/dia, ou 200 mg a 800 mg/dia, ou 200 a 400 mg/dia de um desses agentes serão tipicamente fornecidos ao paciente. Quando o agente ativo 20 adicional for VX-950, 1.000 mg a 3.750 mg/dia, ou 1.200 mg a 1.800 mg/dia serão administrados ao paciente. Regimes de tratamento nos quais VX-95 0 é um agente ativo adicional, e cerca de 350 a cerca de 450 mg ou cerca de 700 a cerca de 800 mg de VX-950 são administrados a um paciente três vezes 25 por dia, ou cerca de 350 a cerca de 450 mg ou cerca de 700 a cerca de 800 mg são administrados a cada 12 horas, são particularmente incluídos na invenção.

A freqüência de dosagem também pode variar, dependendo do composto usado e da doença específica tratada. No

3 0 entanto, para o tratamento da maioria dos distúrbios infecciosos, um regime de dosagem de 4 vezes ao dia ou menos é preferido, e um regime de dosagem de 1 ou 2 vezes

específico para qualquer paciente em particular dependerá de diversos fatores, que incluem a atividade do composto específico empregado, a idade, o peso corporal, a saúde geral, o sexo, a dieta, o momento da administração, a via de administração e a taxa de excreção, a combinação de 10 fármacos e a gravidade da doença específica tratada.

inibidor de polimerase de nucleosídeo NS5B NM-107 e do inibidor de serina protease N53 VX-950. Esses compostos são preparados com o uso de métodos bem conhecidos na técnica de química orgânica sintética e totalmente caracterizados por 1H-RNM, HPLC e LC-MS. Todos os compostos são

3 0 dissolvidos em DMSO e diluídos em meios apropriados nas

ao dia é particularmente preferido.

Será subentendido, no entanto, que o nível de dose

EXEMPLOS

EXEMPLO 1. PREPARAÇAO DE COMPOSTOS

NH2

15

NM-107

VX-950

CF3,

20

N

ACH-S06

São mostradas acima as estruturas de ACH-806, do concentrações especificadas, antes da adição às placas de teste no momento do ensaio. IFN-alfa-2b (INTRON A, Schering, Kenilworth, NJ) foi adquirido e diluído em meios apropriados nas concentrações especificadas, antes da adição às placas de teste no momento do ensaio.

EXEMPLO 2. LINHAGENS CELULARES As linhagens celulares Huh-9-13 e Huh-luc/neo foram obtidas do Dr. Ralf Bartenschlager. Essas linhagens celulares foram estabelecidas por transfecção de moléculas de RNA de replicon (subtipo lb, Con-1), como mostrado na Figura 2. As linhagens celulares foram mantidas em um meio completo [meio essencial mínimo modificado de Dulbecco (DMEM) (Gibco BRL, Carlsbad, Califórnia), soro bovino fetal 10% (FBS) , e Ix aminoácidos não essenciais (Gibco BRL, Carlsbad, Califórnia)] com a adição de 100 Ul/ml de penicilina, 100 μg/ml de estreptomicina e 0,5 mg/ml de G418 (Gibco BRL, Carlsbad, Califórnia).

EXEMPLO 3. ESTUDO DE COMBINAÇÃO DE CURTO PRAZO Células Huh-luc/neo foram semeadas em placas de 96 poços em uma densidade de 7.000 células/por poço. Um dia após as células terem sido plaqueadas, as células foram tratadas com ACH-806, IFN-alfa-2b, VX-950 ou NM-107 em várias concentrações, isoladamente ou em combinação. Todas as curvas de dose-resposta para os compostos individuais e suas combinações foram processadas em quádruplo. As concentrações de cada fármaco se espalharam em uma faixa similar acima e abaixo da EC50, de forma que são comparadas atividades antivirais equivalentes.

Após 72 horas de incubação, a inibição da replicação

3 0 do replicon de HCV em células Huh-luc/neo foi quantificada por medida da atividade de luciferase com o uso de um ensaio comercial de luciferase ("Britelite Ultra-High- Sensitive Luminescence Repórter Gene Assay System", Perkm Elmer, Wellesley, MA) de acordo com as instruções do 5 fabricante. A atividade anti-HCV foi expressa como a concentração que causou uma redução da atividade de luciferase (unidade relativa de luminescência, RLU) em 50% (EC50) ou 90% (EC90) , em comparação com os controles não tratados.

A toxicidade dos compostos foi avaliada por medida da

viabilidade celular com a utilização de um ensaio comercial de proliferação celular "CellTiter 96 Aqueous One Solution" (Promega, Madison, WI). A citotoxicidade foi expressa como a concentração que causou uma redução do valor da OD490 em 50% (CC50), em comparação com os controles não tratados.

Os dados experimentais foram analisados com a utilização de "CalcuSyn" (Biosoft, Ferguson, MO), um programa de computador baseado no método de Chou e Talalay (Chou, T. C. e P. Talalay, "Quantitative analysis of dose- 20 effect relationships: the combined effects of multiple drugs or enzyme inhibitors" (1984) Adv. Enzyme Regul. 22: 27-55). Nesse modelo, as curvas de dose-efeito para cada fármaco ou combinação de fármacos são convertidas em gráficos de mediana-efeito com o programa. 0 efeito da 25 combinação é então comparado com aquele de um único agente. É calculado um valor do índice de combinação (CI) para cada combinação experimental com base na seguinte equação:

CI = [(D)I/(Dx)I] + [(D) 2/(Dx) 2] + [ (D) I (D) 2/(Dx) I (Dx) 2] , em que: (Dx)I e (Dx)2 são as doses do fármaco 1 e do

3 0 fármaco 2 que possuem um efeito x quando cada fármaco é usado isoladamente, respectivamente, e (D)I e (D) 2 são as doses do fármaco 1 e do fármaco 2 que possuem o mesmo efeito x quando usados em combinação. Por convenção, um CI < 0,9 é considerado sinérgico, um CI > 0,9 ou <1,1 é 5 considerado aditivo, e um CI > 1,1 é considerado antagonista.

A extensão da sinergia ou do antagonismo também foi avaliada em um método analítico tridimensional desenvolvido por Prichard e Shipman (Prichard, M. Shipman, Κ., "A three- 10 dimensional model to analyze drug-drug interactions", (1990) Antiviral Res. 14: 181-206). Nesse modelo, o efeito aditivo teórico é calculado a partir das curvas de dose- resposta de compostos individuais pela equação Z = X + Y (1 - X) , em que XeY representam a inibição produzida pelo 15 fármaco 1 isoladamente e pelo fármaco 2 isoladamente, e respectivamente Z representa o efeito produzido pela combinação do fármaco 1 e do fármaco 2. A superfície aditiva teórica é subtraída da superfície experimental real, resultando em uma superfície que apareceria como um 20 plano horizontal em 0% de inibição, caso a combinação seja simplesmente aditiva. Qualquer pico acima desse plano indicaria sinergia, enquanto qualquer depressão abaixo desse pico indicaria antagonismo. Os intervalos de confiança de 95% para a superfície experimental dose- 25 resposta são usados para avaliar os dados estatisticamente. 0 volume do pico ou depressão é calculado para quantificar a sinergia ou antagonismo global produzido. Com base em Prichard e cols., volumes de sinergia maiores do que 50 μΜ 2% podem ser considerados significantes, assim como

3 0 volumes de antagonismo de menos de -5 0μΜ2%, em que as unidades dos eixos XeY são, ambas, μΜ, e a unidade do eixo Z é a percentagem de inibição.

Resultados

As conseqüências da combinação de ACH-806 com IFN, VX- 950 e NM-107 foram avaliadas inicialmente com o uso de um ensaio-padrão.

0 efeito inibidor de ACH-806 em combinação com um de IFN, VX-950 e NM-107 sobre a replicação de replicon em células Huh-luc/neo tratadas por 3 dias foi monitorado pela 10 atividade de luciferase, um repórter para as cópias de replicon. Não foi observada citotoxicidade para nenhum dos tratamentos com compostos. O efeito inibidor sobre a replicação de replicon por esses tratamentos foi analisado com modelos de Chou e Talalay e de Prichard e Shipman. Os 15 resultados estão resumidos na Tabela 1. Não foi observado nenhum efeito antagonista. Além disso, foi observada uma atividade antiviral sinérgica de ACH-806 com VX-950 e NM- 107 . Tabela 1. Atividade antiviral combinatória após tratamento por 3 dias Fármaco Volume (DP) μΜ2 % Proporção Cl (DP) na inibição de replicon de Global Sinergia Antagonismo 50% 75% 90% IFN 4 (5) 5 (3) 1:10 1,12 (0,08) 0,93 (0,15) 0,81 (0,17) Aditivo 1:20 1,04 (0,05) 0,85 (0,09) 0,73 (0,10) VX-950 119 (4) 8 (3) 1: 10 0,86 (0,09) 0,82 (0,11) 0,83 (0,13) Sinergia 1:20 0,79 (0,06) 0,61 (0,12) 0,50 (0,15) NM-10 7 116(77) 2 (2) 1: 16 0,69 (0,02) 0,72 (0,06) 0,79 (0,12) Sinergia 1:32 0,67 (0,07) 0,71 (0,05) 0,83 (0,25) EXEMPLO 4. ESTUDO DE COMBINAÇÃO DE LONGO PRAZO

Células Huh-9-13 foram semeadas em placas de 10 cm em uma densidade de IO5 células/placa e foram tratadas com ACH-8 06 ou NM-107 nas concentrações de valores de 5 aproximadamente 5xEC50, tanto isoladamente quanto em combinação por 9 dias. Em outras repetições desse experimento, o tempo de tratamento variou de 7 a 10 dias. As células foram passadas uma vez a cada 3 dias em novas placas na mesma densidade (IO5 células/placa) e com 10 compostos frescos. Nenhum G418 esteve presente durante o tratamento de 9 dias. No 10° dia, as células foram passadas novamente para novas placas em uma densidade de IO5 células/placa, respectivamente, e foram tratadas somente com G418 por aproximadamente mais 3 semanas. Durante esse 15 tempo, as colônias se formaram. Durante as 2-3 semanas, os meios antigos foram substituídos por meios frescos duas vezes por semana. As colônias foram fixadas com formaldeído 10% e coradas com violeta cristal 2% em etanol 20%.

As conseqüências da combinação de longo prazo de ACH- 20 8 06 com IFN ou NM-107 também foram avaliadas com o uso de um ensaio de cura, como descrito acima. Nesse ensaio, o número das células nas quais os replicons ainda permaneciam após o tratamento de 9 dias foi quantificado com base no número das colônias formadas após seleção por G418. Os 25 resultados são apresentados na FIGURA 2. ACH-806 combinado com IFN ou NM-107 curou quase 99,99% das células contendo replicon (redução de 4 Iog), embora cada um por si próprio fosse de cerca de 90% (redução de 1 log).

Claims (16)

1. Método de tratamento de hepatite C1 caracterizado por compreender o fornecimento de um composto de Fórmula I ou um sal farmaceuticamente aceitável deste, com pelo menos um agente ativo adicional a um paciente infectado com um vírus da hepatite C, em que a Fórmula I é: <formula>formula see original document page 49</formula> em que: Ai é um 3-piridil opcionalmente substituído; R1 e R2 são escolhidos independentemente de hidrogênio e Ci-C6 alquil; e A2 é fenil substituído na posição para com C3-C8 alquil ou C3-C8 alcóxi e opcionalmente substituído com um ou mais substituintes escolhidos independentemente de halogênio, hidróxi, ciano, Ci-C6 alquil, Ci-C6 alcóxi, mono- e di-(Ci-C6 alquil) amino, C2-C6 alcanoil, C1-C2 halo alquil, Ci-C2 haloalcóxi e fenil.

2. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o composto de Fórmula I é: (l-nicotinoil-3-(4-(pentilóxi)-3-(trifluormetil)fenil) tiouréia); (1-(4-(hexilóxi)fenil)-3-nicotinoiltiouréia); (1-(5-bromonicotinoil)-3-(4-(pentilóxi)-3- (trifluormetil)fenil)tiouréia); (1-(6-(dimetilcarbamoil)nicotinoil)-3-(4-(pentilóxi)- 3-(trifluormetil)fenil)tiouréia); (I-(6-((dimetilamino)metil)nicotinoil)-3-(4- (pentilóxi)-3-(trifluormètil)fenil)tiouréia); (1- (6- (’-('4i-metilpipera:zin-l-il) métil) nicotinoil) -3- (4- (pentilóxi)-3-(trifluormetil)fenil)tiouréia); ou (1-(4-(hexilóxi)fenil)-3-(6- (morfolinometil)nicotinoil)tiouréia), ou um sal de qualquer um dos citados anteriormente.

3. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o composto de Fórmula I é (l-nicotinoil-3-(4-(pentilóxi)-3-(trifluormetil)fenil) tiouréia).

4. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2 ou 3, caracterizado pelo fato de que pelo menos um agente ativo adicional é um inibidor de caspase, um inibidor de ciclofilina, um inibidor de monooxigenase de citocromo P450, um glicocorticóide, uma hematopoietina, um inibidor de fusão, um inibidor de entrada, um inibidor de capsídeo, um inibidor de helicase, um agente terapêutico homeopático, um composto imunomodulador, um imunossupressor, uma interleucina, um intensificador de interferon, um inibidor de IRES, um anticorpo monoclonal ou policlonal, um análogo de nucleosídeo, um inibidor não nucleosídeo, um inibidor de proteína P7, um inibidor de polimerase, um inibidor de protease, um agente de interferência de RNA, uma vacina terapêutica, um agonista de TNF, um inibidor de tubulina, um inibidor de NS5A, um inibidor de NS5B, um inibidor de quinases, um agonista de receptor Toll-Iike e um modulador do receptor de esfingosina-1-fosfato.

5. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações I, 2, 3 ou 4, caracterizado pelo fato de que pelo menos um agente ativo adicional é um inibidor de protease de HCV ou um inibidor de polimerase de HCV.

6. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3 ou 4, caracterizado pelo fato de que pelo menos um agente ativo adicional é VX-950 ou valopicitabina.

7. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1, 2, 3, 4, 5 ou 6, caracterizado pelo fato de que é adicionalmente fornecido interferon ao paciente.

8. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que cerca de 25 mg/dia a cerca de 2.400 mg/dia (l-nicotinoil-3-(4-(pentilóxi)-3- trifluormetil)fenil)tiouréia) e cerca de 200 mg/dia a 400 mg/dia de valopicitabina ou cerca de 1.200 mg/dia a cerca de 1.8 00 mg/dia de VX-950 são fornecidos ao paciente. compreender um composto ou sal farmaceuticamente aceitável de Fórmula I ou um sal farmacêutico aceitável deste e pelo menos um agente ativo adicional, em que a Fórmula I é: em que: Αχ é um 3-piridil opcionalmente substituído; R1 e R2 são escolhidos independentemente de hidrogênio e C1-C6 alquil; e

9. Combinação farmacêutica caracterizada por <formula>formula see original document page 51</formula> A2 é fenil substituído na posição para com C3-C8 alquil ou C3-C8 alcóxi e opcionalmente substituído com um ou mais substituintes escolhidos independentemente de halogênío, hidróxi, ciano, Ci-C6 alquil, Ci-C6 alcóxi, mono- e di-(C1-C6 alquil) amino, C2-C6 alcanoil, C1-C2 haloalquil, C1-C2 haloalcóxi e fenil.

10. Combinação farmacêutica, de acordo com a reivindicação 9, caracterizada pelo fato de que o composto de Fórmula I é: (l-nicotinoil-3-(4-(pentilóxi)-3-(trifluormetil)fenil) tiouréia); (1-(4-(hexilóxi)fenil)-3-nicotinoiltiouréia); (1-(5-bromonicotinoil)-3-(4-(pentilóxi)-3- (trifluormetil)fenil)tiouréia); (1-(6-(dimetilcarbamoi1)nicotinoil)-3 -(4 -(pentilóxi)- 3-(trifluormetil)fenil)tiouréia); (1-(6-((dimetilamino)metil)nicotinoil)-3- (4- (pentilóxi) -3 - (trif luormetil) fenil) tiouréia) ,- (1-(6-((4-metilpiperazin-l-il)metil)nicotinoil)-3-(4- (pentilóxi)-3-(trifluormetil)fenil)tiouréia); ou (1-(4-(hexilóxi)fenil)-3-(6-(morfolinometil) nicotinoil) tiouréia) , ou um sal de qualquer um dos citados anteriormente.

11. Combinação farmacêutica, de acordo com a reivindicação 9, caracterizada pelo fato de que o composto de Fórmula I é (l-nicotinoil-3-(4-(pentilóxi)-3- (trifluormetil)fenil) tiouréia) ou um sal deste.

12. Combinação farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 9, 10 ou 11, caracterizada pelo fato de que pelo menos um dos agentes ativos adicionais é um inibidor de caspase, um inibidor de ciclofilina, um inibidor de monooxigenase de citocromo P450, um glicocorticóide, uma hematopoietina, um inibidor de fusão, um inibidor de entrada, um inibidor de capsídeo, um inibidor de helicase, um agente terapêutico homeopático, um composto imunomodulador, um imunossupressor, uma interleucina, um intensificador de interferon, um inibidor de IRES, um anticorpo monoclonal ou policlonal, um análogo de nucleosídeo, um inibidor não nucleosídeo, um inibidor de proteína P7, um inibidor de polimerase, um inibidor de protease, um agente de interferência de RNA, uma vacina terapêutica, um agonista de TNF, um inibidor de tubulina, um inibidor de NS5A, um inibidor de NS5B, um inibidor de quinases, um agonista de receptor Toll-Iike e um modulador do receptor de esfingosina-1-fosfato.

13. Combinação farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 9, 10, 11 ou 12, caracterizada pelo fato de que pelo menos um agente ativo adicional é um inibidor de protease de HCV ou um inibidor de polimerase de HCV.

14. Combinação farmacêutica, de acordo com a reivindicação 13, caracterizada pelo fato de que o agente ativo adicional é VX-950 ou valopicitabina.

15. Combinação farmacêutica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 9, 10, 11, 12, 13 ou 14, caracterizada pelo fato de que a combinação é uma forma de dosagem unitária.

16. Método de tratamento de hepatite C, caracterizado por compreender o fornecimento de: (i) uma combinação farmacêutica de qualquer uma das reivindicações 9, 10, 11, 12, 13, 14 ou 15 em um recipiente; e (ii) instruções para utilização da combinação para o tratamento de uma infecção por hepatite C em um paciente.