BRPI0721538A2

BRPI0721538A2 - mÉtodos de tratamento de infestaÇço de peste, de extermÍnio de peste de invertebrados, de inibiÇço de evento de remodelaÇço e de incubaÇço de ovos em invertebrado nço ectoparasÍtico em populaÇço de invertebrados, de controle ou extermÍnio de populaÇço de peste de invertebrados e de seleÇço de agente quelante como candidato inibidor de evento de remodelaÇço de invertebrados a partir de coleÇço de agentes quelantes de metal

Info

Publication number: BRPI0721538A2
Application number: BRPI0721538-0A
Authority: BR
Inventors: Vernon Morrison Bowles; Paul Macleman
Original assignee: Hatchtech Pty Ltd
Priority date: 2007-04-05
Filing date: 2007-04-05
Publication date: 2013-01-08
Also published as: CA2683141A1; WO2008122837A2; EP2141991A2; AU2014204433A1; AU2007350855A1; US20100204277A1; JP2010523538A; CN101686678A; EP2141991A4; CA2683141C; JP5390503B2; AU2016200196A1; WO2008122837A3; AU2017204784A1

Abstract

Métodos de Tratamento de Infestação de Peste, de Extermínio de Peste de Invertebrados, de Inibição de Evento de Remodelação e de Incubação de Ovos em Invertebrado Não Ectoparasítico em População de Invertebrados, de Controle ou Extermínio de População de Peste de Invertebrados e de Seleção de Agente Quelante Como Candidato Inibidor de Evento de Remodelação de Invertebrados a Partir de Coleção de Agentes Quelantes de Metal . A presente invenção é direcionada para métodos de tratamento de infestação de peste por inibição de processos metabólicos da peste, tais como, por exemplo, processos envolvidos na remodelação do invertebrado.

Description

"Métodos de Tratamento de Infestação de Peste, de Extermínio de Peste de Invertebrados, de Inibição de Evento de Remodelação e de Incubação de Ovos em Invertebrado Não Ectoparasítico em População de Invertebrados, de Controle ou Extermínio de População de Peste de Invertebrados e de Seleção de Agente Quelante Como Candidato Inibidor de Evento de

*

^ Remodelação de Invertebrados a Partir de Coleção

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de Agentes Quelantes de Metal"

Relatório Descritivo

Campo da Invenção

A presente invenção refere-se a composições e métodos para inibir a atividade de uma enzima ou enzimas que estão diretamente ou indire- tamente envolvidas em eventos de remodelação de invertebrados. Em particular, a invenção refere-se a composições e métodos para controle de organismos multicelulares invertebrados tendo estruturas de proteí- nas de ligações cruzadas que incluem, mas, sem limitação, ovos, bai- nhas, carapaças, exoesqueletos, cistos, casulos ou ooteca. A invenção também fornece métodos para inibir processos tais como apólise, ecdise, eclosão de ovos, enquistamento, derramamento de bainha e metamorfose. A invenção também fornece métodos e composições para prevenir, tratar ou controlar infestações de uma praga invertebrada que se submete a eventos de remodelação.

Antecedentes da Invenção

Pragas que se submetem a eventos de remodelação, tais como uma eclosão de ovo, muda e/ou metamorfose de pupas para adulto, causam problemas significantes em uma ampla variedade de situações. Por exemplo, pragas que se submetem a tais eventos de remodelação podem infestar externamente humanos ou animais e irritar, ferir e/ou causar infestações, particularmente em humanos e animais domestica- dos. Estas pragas podem também infestar internamente humanos e animais, causando infecção, problemas gastrointestinais, inchaço, e/ou problemas linfãticos e perda de sangue. Pragas que se submetem a eventos de remodelação podem também infestar plantas e suas larvas ou outros estágios do ciclo de vida podem comer folhas, flores, raízes e frutos causando danos significantes a culturas comercialmente impor- tantes. Outras pragas que se submetem a estes eventos de remodelação infestam o meio ambiente e causam doenças a humanos ou animais ou danos à propriedade. Por exemplo, cupins causam significativo dano à propriedade e a presença de poeira ou ácaros pode causar asma em humanos.

Um grande número de pesticidas é conhecido para controlar ou eliminar pragas em plantas, humanos, animais e ambientais. Estes pesticidas podem ser usados na forma de aerossóis, spray espacial, líquidos, sabonetes, xampu, talcos molháveis, grânulos, engodos, pós, comprimidos e semelhantes.

Métodos de controle convencionais para pragas dependem do uso de pesticidas químicos, tais como hidrocarbonetos clorinados (DDT, endosulfano, etc.), piretrinas sintéticas e naturais (piretrina, permetri- na, cipermetrina, deltametrina), reguladores de crescimento de insetos que são conhecidos por interferir na síntese de quitina, toxinas bacteri- anas inseticidas (toxinas Bacillus thuringiensis (Bt)) e nematicidas, incluindo tanto fumigantes quanto não fumigantes (i.e., grânulos ou líquidos formulados). No entanto, problemas significantes são associa- dos com o uso de pesticidas, incluindo comunalidade em órgãos-alvos e modos de ação levando ao desenvolvimento de resistência pela praga- alvo, a necessidade de maior utilização de pesticida, a persistência de produtos químicos no ambiente e nos tecidos da planta e do animal, efeitos prejudiciais no hospedeiro e em organismos que não-alvo e falta de atividade ovicida.

A abordagem moderna de controle de espécies de pragas depende de uma combinação de fatores, incluindo o uso de estratégias de admi- nistração apropriadas que visa a minimizar o uso de pesticidas, mas ainda permite controle efetivo. Esta mudança na abordagem de controle tem sido necessária devido ao uso e dependência exagerados em produ- tos químicos levando a problemas maiores de resistência a muitos dos produtos químicos comumente usados. Ademais, devido a seus modos de ação freqüentemente bastante específicos, um número de produtos químicos usados na área freqüentemente apenas mira em estágios específicos do ciclo de vida quando o alvo apropriado está sendo expres- sado. Por exemplo, um pesticida pode controlar pragas matando larvas apenas após elas emergirem de ovos, ou matar a praga durante seus estágios de vida de pupa ou de adulto. Entretanto, quaisquer ovos presentes na aplicação do pesticida não são freqüentemente afetados e com o amadurecimento e eclosão resultam em reinfestação da planta, do humano, do animal ou do ambiente. Isto resulta em aplicação repetida do pesticida ou exposição prolongada ao pesticida sendo requerida para controle continuado da praga. Isto é não só inconvenien- te e dispendioso, mas também aumenta os riscos ao ambiente, planta, humano ou animal.

Consequentemente, persiste uma necessidade de fornecimento de métodos e composições alternativas que são efetivas na prevenção ou controle de eventos de remodelação associados com o desenvolvimento de pragas por todos os diferentes estágios de desenvolvimento para fornecer controle mais eficiente e efetivo. Sumário da Invenção

A presente invenção é direcionada a métodos de tratamento de in- festação de pragas por inibição de processos metabólicos da praga, tais como, por exemplo, processos envolvidos em remodelação de inverte- brados. Em modalidades específicas, os métodos da invenção compre- endem diminuir derramamento de bainha de um invertebrado contato externo de uma praga com um composto de fórmula (!):

em que X é selecionado de uma ligação covalente, -C(R5)2-, -Z- ou - C(R5)2-Z-C(R5)2-;

R1 e R1' são independentemente selecionados de hidrogênio, alquil Ci-6, uma alquil Ci-6 de cadeia ramificada, alquenila C2-6, alquinila C2-6, hidróxi, alcóxi C1-6, tiol, alquiltio C1-6, halogênio, C(R6)3, CO2H, alquil C02Ci-6, SO3H, alquil SO3C1-6, NH2, alquil NHCi-e ou N(alquil Ci-6)2, ou R1 e R19 tomados em conjunto são -C(R5)2-, -C(R5)2-C(R5)2-, -CR5=CR5-, C(O), C(S) ou NH;

R2, R2', R3, R3', R4 e R4' são independentemente selecionados de hidrogênio, alquil C1-6, alquenila C2-6, alquinila C2-6, hidróxi, alcóxi C1-6, tiol, alquiltiol Ci-6) halogênio, CN, C(R6)3, CO2H, alquil CO2C1-6, SO3H, alquil S03Ci-6, NH2, alquil NHCi-6 ou N(alquil Ci-6)2, -CH2CHNH(CO2H), NH(alquileno Ci-6)N(alquil Ci-õ)2 ou um anel heterocíclico ou carbocíclico com 5 ou 6 membros; ou

R2 e R3 ou R3 e R4 e/ou R2' e R3' ou R3' e R4' tomados em conjunto com os átomos de carbono aos quais eles estão ligados formam um anel heterocíclico ou carbocíclico com 5 ou 6 membros;

cada R5 é independentemente selecionado de hidrogênio, alquil Ci-6, uma alquil Ci-6 de cadeia ramificada, alquenila C2-6, alquinila C2-6, hidróxi, alcóxi C1-6, tiol, alquiltiol C1-6, CO2H, alquil CO2C1-6, SO3H, alquil SO3C1-6, NH2, alquil NHCi-6 ou N(alquil Ci-6)2;

cada R6 é independentemente selecionado de hidrogênio e halogê- nio; e Z é selecionado de uma ligação covalente, -NH-, -O-, -S-, -C(O)- e -C(S)-;

um sal farmaceuticamente, veterinaria ou agriculturalmente acei- tável dos mesmos em uma quantidade efetiva para inibir ou diminuir a taxa de derramamento de bainha do referido invertebrado.

Outras modalidades da invenção compreendem métodos de tra- tamento de infestação de pragas compreendendo diminuir enquista- mento de um invertebrado pelo contato externo de uma praga com um composto de fórmula:

em que X é selecionado de uma ligação covalente, -C(R5)2-, -Z- ou -C(R5)2-Z-C(R5)2-; R1 e R1' são independentemente selecionados de hidrogênio, alquil Ci-6, alquil Ci-6 de cadeia ramificada, alquenila C2-6, alquinila C2-6, hidróxi, alcóxi C1-6, tiol, alquiltio C1-6, halogênio, C(R6)3, CO2H, alquil CO2C1-6, SO3H, alquil SO3C1-6, NII2, alquil NHCi-e ou N(alquil Ci-6)2, ou R1 e R19 tomados conjuntamente são -C(R5)2-, -C(R5)2-C(R5)2-, -CR5=CR5-, C(O), C(S) ou NH;

R2, R2', R3, R3', R4 e R4' são independentemente selecionados de hidrogênio, alquil C1-6, uma alquil C1-6 de cadeia ramificada, alquenila C2-6, alquinila C2-6, hidróxi, alcóxi C1-6, tiol, alquiltiol C1-6, halogênio, " 10 CN, C(R6)3, CO2H, alquil C02Ci-6, SO3H, alquil S03Ci-6, NH2, alquil NHC1-6 ou N(alquil Ci-6)2, -CH2CHNH(CO2H), NH(alquileno Ci-6)N(alquil Ci-6)2 ou um anel heterocíclico ou carbocíclico com 5 ou 6 membros; ou

cada R5 ê independentemente selecionado de hidrogênio, alquil C1-6, uma alquil C1-6 de cadeia ramificada, alquenila C2-6, alquinila C2-6, hidróxi, alcóxi C1-6, tiol, alquiltiol C1-6, CO2H, alquil C02Ci-6, SO3H, alquil S03Ci-6, NH2, alquil NHCi-6 ou N(alquil Ci-6)2;

cada R6 é independentemente selecionado de hidrogênio e halogê-

nio; e

Z é selecionado de uma ligação covalente, -NH-, -O-, -S-, -C(O)- e -C(S)-;

um sal farmaceuticamente, veterinaria ou agriculturalmente acei- tável dos mesmos em uma quantidade efetiva para inibir ou de outra forma diminuir a taxa de enquistamento do dito invertebrado.

A invenção ainda contempla métodos de tratamento de infestação de pragas compreendendo diminuir a apólise de um invertebrado pelo contato externo de uma praga com um composto de fórmula:

em que X é selecionado de uma ligação covalente -C (R5) 2-, -Z- ou -C(RS)2-Z-C(RS)2-;

R1 e R1' são independentemente selecionados de hidrogênio, alquil C1-6, uma alquil C1-6 de cadeia ramificada, alquenila C2-6, alquinila C2-e, hidróxi, alcóxi C1-6, tiol, alquiltio C1-6, halogênio, C(R5)3, CO2H, alquil C02Ci-6, SO3H, alquil SO3C1-6, NH2, alquil NHCi-õ ou N(alquil Ci-6)2, ou R1 e R19 tomados conjuntamente são -C(R5)2-, -C(R5)2-C(R5)2-, -CR5-CR5-, C(O), C(S) ou NH;

R2, R2', R3, R3', R4 e R4' são independentemente selecionados de hidrogênio, alquil C1-6, uma alquil C1-6 de cadeia ramificada, alquenila C2-6, alquinila C2-6, hidróxi, alcóxi C1-6, tiol, alquiltiol C1-6, halogênio, CN, C(R6)3, CO2H, alquil C02Ci-6, SO3H, alquil SO3C1-6, NH2, alquil NHC1-6 ou N(alquil C 1-5)2, -CH2CHNH(CO2H), NH(alquileno Ci-6)N(alquil Ci-õ)2 ou um anel heterocíclico ou carbocíclico com 5 ou 6 membros; ou

cada R5 é independentemente selecionado de hidrogênio, alquil C1-6, uma alquil C1-6 de cadeia ramificada, alquenila C2-6, alquinila C2-6, hidróxi, alcóxi Ci-6, tiol, alquiltiol Ci-6, CO2H, alquil CO2C1-6, SO3H, alquil SO3C1-6, NH2, alquil NHCi-6 ou N(alquil Ci-efa

cada R6 é independentemente selecionado de hidrogênio e halogê-

nio; e

Zé selecionado de uma ligação covalente, -NH-, -O-, -S-, -C(O)-

e -C(S)-;

um sal farmaceuticamente, veterinaria ou agriculturalmente acei- tável dos mesmos em uma quantidade efetiva para inibir ou de outra forma diminuir a taxa de apólise do dito invertebrado.

Ainda noutra alternativas modalidades, os métodos da invenção

envolvem tratamento de infestação de praga compreendendo inibir a metamorfose de um invertebrado pelo contato externo de dita praga com um composto de fórmula:

em que X é selecionado de uma ligação covalente -C(R5)2-, -Z- ou

-C(R5)2-Z-C(R5)2-;

R1 e R1' são independentemente selecionados de hidrogênio, alquil C1-6, uma alquil C1-6 de cadeia ramificada, alquenila C2-6, alquinila C2-6, hidróxi, alcóxi C1-6, tiol, alquiltio C1-6, halogênio, C(R5)3, CO2H, alquil C02Ci-6, SO3H, alquil SO3C1-6, NH2, alquil NHCi-e ou N(alquil Ci-6)2, ou R1 e R19 tomados conjuntamente são -C(R5)2-, -C(R5)2-C(R5)2-, -CR5=CR5-, C(O), C(S) ou NH;

R2, R2', R3, R3', R4 e R4' são independentemente selecionados de hidrogênio, alquil Ci-6, uma alquil Ci-6 de cadeia ramificada, alquenila C2-6, alquinila C2-6, hidróxi, alcóxi C1-6, tiol, alquiltiol C1-6, halogênio, CN, C(R6)3, CO2H, alquil CO2C1-6, SO3H, alquil S03Ci-6, NH2, alquil NHC1-6 ou N(alquil Ci-6)2, -CH2CHNH(CO2H), NH(alquileno Ci-6)N(alquil C1-0)2 ou um anel heterocíclico ou carbocíclico com 5 ou 6 membros; ou

cada R5 é independentemente selecionado de hidrogênio, alquil C1-6, uma alquil C1-6 de cadeia ramificada, alquenila C2-6, alquinila C2-6, hidróxi, alcóxi C1-6, tiol, alquiltiol C1-6, CO2H, alquil C02Ci-6, SO3H, alquil S03Ci-6, NH2, alquil NHC1-6 ou N(alquil Ci-õ)2;

cada R6 é independentemente selecionado de hidrogênio e halogê-

nio; e

Z é selecionado de uma ligação covalente, -NH-, -O-, -S-, -C(O)- e -C(S)-;

um sal farmaceuticamente, veterinaria ou agriculturalmente acei- tável dos mesmos em uma quantidade efetiva para inibir ou de outra forma diminuir a taxa de metamorfose do dito invertebrado.

Nos métodos da invenção, É preferível que o composto seja um agente quelante de metal, em que o agente quelante de metal tem pelo menos dois átomos polares capazes de coordenar simultaneamente com um íon de metal, tem um valor clogP de /1 e <4; e/ou e uma refrativi- dade molar na faixa de 40 a 90 cm3/mole. Em modalidades específicas, o agente quelante de metal não é 1,10-fenantrolina. Em outras modali- dades, o agente quelante nao é um composto dipiridila.

Os métodos da invenção contemplam o uso de múltiplos pestici- das e intervenções para tratar infestações. Em modalidades específicas, os métodos ainda compreendem o contato de dita praga com um se- gundo pesticida.

Outros aspectos da invenção compreendem métodos de tratar in- festação por praga compreendendo diminuir derramamento de bainha de um invertebrado pelo contato externo de uma praga com um com- posto de fórmula (II):

(II)

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em que Y1 e Y2 são independentemente selecionados de O, NR28,

ou S;

R21, R22, R23 e R24 são independentemente selecionados de hidro- gênio, alquil C1-6, uma alquil C1-6 com cadeia ramificada, alquenila C2-6, alquinila C2-6, hidróxi, alcóxi C1-6, tiol, alquiltio C1-6, halogênio, CN, C(R29)3, CO2H, alquil CO2C1-6, SO3H, alquil SO3C1-6, NH2, alquil NHCi-e, N(alquil Ci-6)2 ou um anel carbocíclico ou heterocíclico; ou

R21 e R22 ou R22 e R23 e R24 tomados em conjunto com os átomos de carbono aos quais eles estão ligados formam um anel carbocíclico ou heterocíclico com 5 ou 6 membros; R25 e R26 são independentemente selecionados de hidrogênio, al- quil Ci-6, uma alquil Ci-6 de cadeia ramificada, alquenila C2-6, alquinila C2-6, hidróxi, alcóxi C1-6, tiol, alquiltio C1-6, halogênio, CN, C(R2g)3, CO2H, alquil CO2C1-6, SO3H, alquil SO3C1-6, NII2, alquil NHCi-e ou N (alquil C i-õ) 2; ou

R25 e R26 juntamente com os átomos de carbono aos quais eles es- tão ligados formam um anel heterocíclico ou carbocíclico com 5 a 6 membros;

R27 é alquil C1-6, uma alquil C1-6 de cadeia ramificada, alquenila C2-6, alquinila C2-6, hidróxi, alcóxi C1-6, tiol, alquiltio C1-6, C(R29)2, N(R30)2, ou um anel carbocíclico com 5 ou 6 membros ou anel heterocí- clico;

R28 é hidrogênio, alquil C1-6, uma alquil C1-6 com cadeia ramifica- da;

R29 é hidrogênio ou halogênio; e

cada R30 é independentemente selecionado de hidrogênio, alquil C1-6, uma alquil C1-6 de cadeia ramificada, alquenila C2-6, alquinila C2-6, um anel carbocíclico com 5 a 6 membros ou anel heterocíclico;

ou um sal farmaceuticamente, veterinaria ou agriculturalmente aceitável dos mesmos em uma quantidade efetiva para inibir ou diminu- ir a taxa de derramamento de bainha do dito invertebrado.

Ainda outra realização da invenção descreve um método de tratar infestação de pragas compreendendo diminuir o enquistamento de um invertebrado pelo contato externo da praga com um composto de fórmu- Ia (II): em que Y1 e Y2 são independentemente selecionados de O, NR28,

ou S;

R21, R22, R23 e R24 são independentemente selecionados de hidro- gênio, alquil C1-6, uma alquil C1-6 com cadeia ramificada, alquenila C2-6, alquinila C2-6, hidróxi, alcóxi C1-6, tiol, alquiltio C1-6, halogênio, CN, C(R2Q)S, CO2H, alquil C02Ci-6, SO3H, alquil SO3C1-6, NH2, alquil NHCi-e, N(alquil Ci-6)2 ou um anel carbocíclico ou heterocíclico; ou

R21 e R22 ou R22 e R23 e R24 tomados em conjunto com os átomos de carbono aos quais eles estão ligados formam um anel carbocíclico ou heterocíclico com 5 ou 6 membros;

R25 e R26 são independentemente selecionados de hidrogênio, al- quil C1-6, uma alquil C1-6 de cadeia ramificada, alquenila C2-6, alquinila C2-6, hidróxi, alcóxi C1-6, tiol, alquiltio C1-6, halogênio, CN, C(R2g)3, CO2H, alquil C02Ci-6, SO3H, alquil S03Ci-6, NH2, alquil NHCi-6 ou N (alquil C 1-6)2; ou

20

R28 é hidrogênio, alquil Ci-6, uma alquil Ci-6 com cadeia ramifica- da;

R29 é hidrogênio ou halogênio; e

cada R30 é independentemente selecionado de hidrogênio, alquil Ci-6, uma alquil Ci-6 de cadeia ramificada, alquenila C2-6, alquinila C2-6, um anel carbocíclico com 5 a 6 membros ou anel heterocíclico;

ou um sal farmaceuticamente, veterinaria ou agriculturalmente aceitável dos mesmos em uma quantidade efetiva para inibir ou de outra forma diminuir a taxa de enquistamento do dito invertebrado.

A invenção também contempla métodos de tratar infestação de praga compreendendo a diminuição da apólise de um invertebrado pelo contato externo de uma praga com um composto de fórmula (II):

15

(Π)

em que Y1 e Y2 são independentemente selecionados de O, NR28,

ou S;

R21, R22, R23 e R24 são independentemente selecionados de hidro- gênio, alquil C1-6, uma alquil C1-6 com cadeia ramificada, alquenila C2-6, alquinila C2-6, hidróxi, alcóxi C1-6, tiol, alquiltio C1-6, halogênio, CN, C(R29)3, CO2H, alquil C02Ci-6, SO3H, alquil SO3C1-6, NH2, alquil NHCi-e, N(alquil Ci-ô)2 ou um anel carbocíclico ou heterocíclico; ou

R25 e R26 são independentemente selecionados de hidrogênio, al- quil C1-6, uma alquil C1-6 de cadeia ramificada, alquenila C2-6, alquinila C2-6, hidróxi, alcóxi C1-6, tiol, alquiltio C1-6, halogênio, CN, C(R29)3, CO2H, alquil CO2C1-6, SO3H, alquil SO3C1-6, NH2, alquil NHC1-6 ou N (alquil C 1-5)2; ou

R28 é hidrogênio, uma alquil C1-6, uma alquil C1-6 com cadeia ra- mificada;

R29 ê hidrogênio ou halogênio; e

ou um sal farmaceuticamente, veterinaria ou agriculturalmente aceitável dos mesmos em uma quantidade efetiva para inibir ou diminu- ir a taxa de apólise do dito invertebrado. Ainda outro método alternativo de tratamento de infestação de pragas compreende inibir a metamorfose de um invertebrado pelo contato externo de dita praga com um composto de fórmula:

em que Y1 e Y2 são independentemente selecionados de O, NR28,

ou S;

R21, R22, R23 e R24 são independentemente selecionados de hidro- gênio, alquil C1-6, uma alquil C1-6 com cadeia ramificada, alquenila C2-6, alquinila C2-6, hidróxi, alcóxi C1-6, tiol, alquiltio C1-6, halogênio, CN,

C(R29)3, CO2H, alquil CO2C1-6, SO3H, alquil SO3C1-6, NH2, alquil NHCi-e, N(alquil C 1-0)2 ou um anel carbocíclico ou heterocíclico; ou

R25 e R26 são independentemente selecionados de hidrogênio, al-

quil C1-6, uma alquil C1-6 de cadeia ramificada, alquenila C2-6, alquinila C2-6, hidróxi, alcóxi C1-6, tiol, alquiltio C1-6, halogênio, CN, C(R2g)3, CO2H, alquil C02Ci-6, SO3H, alquil S03Ci-6, NH2, alquil NHCi-6 ou N (alquil C 1-0)2; ou

R25 e R26 juntamente com os átomos de carbono aos quais eles es-

tão ligados formam um anel heterocíclico ou carbocíclico com 5 a 6 membros;

R27 é alquil Ci-e, uma alquil C i-β de cadeia ramificada, alquenila C2-6, alquinila C2-6, hidróxi, alcóxi C1-6, tiol, alquiltio C1-6, C(R29)2, n(r30)2, ou um anel carbocíclico com 5 ou 6 membros ou anel heterocí- clico;

R28 é hidrogênio, uma alquil C1-6, uma alquil C1-6 com cadeia ra- mificada;

R29 é hidrogênio ou halogênio; e

cada R30 é independentemente selecionado de hidrogênio, alquil C1-6, uma alquil C1-6 de cadeia ramificada, alquenila C2-6, alquinila C2-6, um anel carbocíclico com 5 a 6 membros ou anel heterocíclico; ou um sal farmaceuticamente, veterinaria ou agriculturalmente aceitável dos mesmos em uma quantidade efetiva para inibir ou de outra forma diminuir a taxa de metamorfose do dito invertebrado.

Novamente, em cada um dos métodos precedentes, o composto é

preferencialmente um agente quelante de metal, em que o agente quelante de metal tem pelo menos dois átomos polares capazes de coordenar simultaneamente com um íon de metal, tem um valor clogP de /1 e <4; e/ou e uma refratividade molar na faixa de 40 a 90 cm3/mole. No entanto, é contemplado que o agente quelante de metal não é 1,10-fenantrolina. Os métodos precedentes podem ainda compre- ender o contato da praga com um segundo, terceiro, quarto ou mais pesticidas. Ainda, a praga pode ser tratada múltiplas vezes com os vários pesticidas descritos neste documento.

Em modalidades preferidas da invenção, os métodos descritos

neste documento produzem uma maior diminuição na taxa de derra- mamento de bainha, enquistamento, apólise ou metamorfose do que é observada com a administração de 1,10 fenantrolina. Em modalidades particularmente preferidas, os métodos são em- pregados para matar uma praga invertebrada, dito método compreende o contato externo de dita praga com um composto de fórmula (I):

em que X é selecionado de uma ligação covalente, -C(R5)2-, -Z- ou

- C(RS)2-Z-C(RS)2-;

R1 e R1' são independentemente selecionados de hidrogênio, alquil Ci-6, uma alquil Ci-6 de cadeia ramificada, alquenila C2-6, alquinila C2-6, hidróxi, alcóxi C1-6, tiol, alquiltio C1-6, halogênio, C(R6)3, CO2H, alquil C02Ci-6, SO3H, alquil SO3C1-6, NH2, alquil NHC1-6 ou N(alquil Ci-6)2, ou R1 e R19 tomados conjuntamente são -C(R5)2-, -C(R5)2-C(R5)2-, -CR5=CR5-, C(O), C(S) ou NH;

R2, R2', R3, R3', R4 e R4' são independentemente selecionados de hidrogênio, alquil C1-6, uma alquil C1-6 de cadeia ramificada, alquenila C2-6, alquinila C2-6, hidróxi, alcóxi C1-6, tiol, alquiltiol C1-6, halogênio, CN, C(RS)3, CO2H, alquil C02Ci-6, SO3H, alquil S03Ci-6, NH2, alquil NHC1-6 ou N(alquil Ci-6)2, -CH2CHNH(CO2H), NH(alquileno Ci-6)N(alquil Ci-õ)2 ou um anel heterocíclico ou carbocíclico com 5 ou 6 membros; ou

R2 e R3 ou R3 e R4 e/ou R2' e R3' ou R3' e R4' tomados em conjunto com os átomos de carbono aos quais eles estão ligados formam um anel heterocíclico ou carbocíclico com 5 ou 6 membros; cada R5 é independentemente selecionado de hidrogênio, alquil Ci-6, uma alquil Ci-6 de cadeia ramificada, alquenila C2-6, alquinila C2-6, hidróxi, alcóxi C1-6, tiol, alquiltiol C1-6, CO2H, alquil CO2C1-6, SO3H, alquil SO3C1-6, NH2, alquil NHCi-õ ou N(alquil Ci-6)2;

cada R6 é independentemente selecionado de hidrogênio e halogê-

nio; e

Z é selecionado de uma ligação covalente, -NH-, -O-, -S-, -C(O)- e -C(S)-;

um sal farmaceuticamente, veterinaria ou agriculturalmente acei- tável dos mesmos em uma quantidade efetiva para matar dito inverte- brado.

Outras modalidades preferidas são direcionadas a métodos para matar uma praga invertebrada, dito método compreendendo o contato externo de dita praga com um composto de fórmula (II):

15

em que Y1 e Y2 são independentemente selecionados de O, NR28,

ou S;

R21, R22, R23 e R24 são independentemente selecionados de hidro- gênio, alquil C1-6, uma alquil C1-6 com cadeia ramificada, alquenila C2-6, alquinila C2-6, hidróxi, alcóxi C1-6, tiol, alquiltio C1-6, halogênio, CN, C(R29)s, CO2H, alquil C02Ci-6, SO3H, alquil SO3C1-6, NH2, alquil NHCi-e, N(alquil Ci-6)2 ou um anel carbocíclico ou heterocíclico; ou

R25 e R26 são independentemente selecionados de hidrogênio, al-

quil Ci-6, uma alquil Ci-6 de cadeia ramificada, alquenila C2-6, alquinila C2-6, hidróxi, alcóxi C1-6, tiol, alquiltio C1-6, halogênio, CN, C(R29)3, CO2H, alquil CO2C1-6, SO3H, alquil SO3C1-6, NH2, alquil NHCi-e ou N (alquil C i-õ) 2; ou

R25 e R26 juntamente com os átomos de carbono aos quais eles es-

tão ligados formam um anel heterocíclico ou carbocíclico com 5 a 6 membros;

R28 é hidrogênio, alquil C1-6, uma alquil C1-6 com cadeia ramifica- da;

R29 ê hidrogênio ou halogênio; e

cada R30 é independentemente selecionado de hidrogênio, alquil

C1-6, uma alquil C1-6 de cadeia ramificada, alquenila C2-6, alquinila C2-6, um anel carbocíclico com 5 a 6 membros ou anel heterocíclico;

ou um sal farmaceuticamente, veterinaria ou agriculturalmente aceitável dos mesmos em uma quantidade efetiva para matar dito invertebrado.

Nos métodos da invenção para matar, a praga invertebrada é se- lecionada a partir do grupo consistindo em nematoides, trematódeos, cestoides, piolhos, pulgas, ácaros e sarnas, traças, besouros, lagartas, borboletas, cupins, aracnídeos, baratas, centopeias, pulgas e ácaros.

É preferível que os métodos sejam tais que eles são usados para matar pelo menos algumas das pragas invertebradas que estão infes- tando um hospedeiro. Em modalidades preferidas, os métodos produ- zem resultados nos quais pelo menos 25% das pragas em uma dada infestação é morta. Em outras modalidades, pelo menos 30% da popu- lação da praga são mortas. Ainda noutra alternativas modalidades, pelo menos 50% da população de invertebrados em uma dada infestação é morta. Ainda noutra alternativas modalidades preferidas, pelo menos 75% da população de praga invertebrada em uma dada infestação é r morta.

Também são contemplados métodos de inibir um evento de remo- delação em uma população de invertebrados compreendendo o contato de dita população de invertebrado com um composto de fórmula (I):

em que X é selecionado de uma ligação covalente, -C(R5)2-, -Z- ou -C(RS)2-Z-C(RS)2-;

20

R1 e R1' são independentemente selecionados de hidrogênio, alquil Ci-6, uma alquil Ci-6 de cadeia ramificada, alquenila C2-6, alquinila C2-6, hidróxi, alcóxi C1-6, tiol, alquiltio C1-6, halogênio, C(R6)3, CO2H, alquil CO2C1-6, SO3H, alquil SO3C1-6, NH2, alquil NHCi-e ou N(alquil Ci-6)2, ou R1 e R19 tomados conjuntamente são -C(R5)2-, -C(R5)2-C(R5)2-, -CR5=CR5-, C(O), C(S) ou NH;

R2, R2', R3, R3', R4 e R4' são independentemente selecionados de hidrogênio, alquil C1-6, uma alquil C1-6 de cadeia ramificada, alquenila C2-6, alquinila C2-6, hidróxi, alcóxi C1-6, tiol, alquiltiol C1-6, halogênio, CN, C(R6)3, CO2H, alquil CO2C1-6, SO3H, alquil S03Ci-6, NH2, alquil NHC1-6 ou N(alquil Ci-6)2, -CH2CHNH(CO2H), NH(alquileno Ci-6)N(alquil Ci-õ)2 ou um anel heterocíclico ou carbocíclico com 5 ou 6 membros; ou

R2 e R3 ou R3 e R4 e/ou R2' e R3' ou R3' e R4' tomados em conjunto

com os átomos de carbono aos quais eles estão ligados formam um anel heterocíclico ou carbocíclico com 5 ou 6 membros;

cada R5 é independentemente selecionado de hidrogênio, alquil C1-6, uma alquil C1-6 de cadeia ramificada, alquenila C2-6, alquinila C2-6, hidróxi, alcóxi C1-6, tiol, alquiltiol C1-6, CO2H, alquil C02Ci-6, SO3H, alquil S03Ci-6, NH2, alquil NHCi-β ou N(alquil Ci-e)2;

cada R6 é independentemente selecionado de hidrogênio e halogê- nio; e

Z é selecionado de uma ligação covalente, -NH-, -O-, -S-, -C(O)- e -C(S)-;

um sal farmaceuticamente, veterinaria ou agriculturalmente acei- tável dos mesmos em uma quantidade efetiva para inibir o referido evento de remodelação de invertebrado, em que dito evento de remode- lação de invertebrado não é eclosão de ovo e dito invertebrado não é um inseto ectoparasita.

Outro método da invenção é para inibir um evento de remodela- ção em uma população de invertebrado compreendendo o contato interno de dita população de invertebrado com um composto de fórmula

em que Y1 e Y2 sao independentemente selecionados de O, NR28,

ou S;

R21, R22, R23 e R24 são independentemente selecionados de hidro- gênio, alquil C1-6, uma alquil C1-6 com cadeia ramificada, alquenila C2-6, alquinila C2-6, hidróxi, alcóxi C1-6, tiol, alquiltio C1-6, halogênio, CN, C(R29)S, CO2H, alquil CO2C1-6, SO3H, alquil SO3C1-6, NH2, alquil NHCi-e, N(alquil Ci-6)2 ou um anel carbocíclico ou heterocíclico; ou

R25 e R26 são independentemente selecionados de hidrogênio, al- quil C1-6, uma alquil C1-6 de cadeia ramificada, alquenila C2-6, alquinila C2-6, hidróxi, alcóxi C1-6, tiol, alquiltio C1-6, halogênio, CN, C(R29)3, CO2H, alquil CO2C1-6, SO3H, alquil S03Ci-6, NH2, alquil NHCi-6 ou N (alquil C 1-0)2; ou

(II):

(H)

R25 e R26 juntamente com os átomos de carbono aos quais eles es- tão ligados formam um anel heterocíclico ou carbocíclico com 5 a 6 membros; R27 é alquil C1-6, uma alquil C1-6 de cadeia ramificada, alquenila C2-6, alquinila C2-6, hidróxi, alcóxi Ci-e, tiol, alquiltio C1-6, C(R29)S, N(R30)2, ou um anel carbocíclico com 5 ou 6 membros ou anel heterocí- clico;

R28 é hidrogênio, alquil C1-6, uma alquil C1-6 com cadeia ramifica- da;

R29 é hidrogênio ou halogênio; e

ou um sal farmaceuticamente, veterinaria ou agriculturalmente aceitável dos mesmos em uma quantidade efetiva para inibir dito evento de remodelação de invertebrado, em que dito evento de remodelação de invertebrado não é eclosão de ovo e dito invertebrado não é um inseto ectoparasita.

A invenção também fornece métodos de inibir a eclosão de ovo em um invertebrado não-ectoparasita uma população de invertebrados compreendendo o contato de dito invertebrado com um composto de fórmula (I): em que X é selecionado de uma ligação covalente, -C(R5)2-, -Z- ou - C(RS)2-Z-C(RS)2-;

R1 e R1' são independentemente selecionados de hidrogênio, alquil Ci-6, uma alquil Ci-6 de cadeia ramificada, alquenila C2-6, alquinila C2-6, hidróxi, alcóxi Ci-6, tiol, alquiltio Ci-6, halogênio, C(R6)3, CO2H, alquil C02Ci-6, SO3H, alquil SO3C1-6, NH2, alquil NHCi-5 ou N(alquil Ci-6)2, ou R1 e Ris tomados em conjunto são -C(R5)2-, -C(RS)2-C(RS)2-, -CRS=CRS-, C(O), C(S) ou NH;

" R2, R2', R3, R3', R4 e R4' são independentemente selecionados de

hidrogênio, alquil C1-6, uma alquil C1-6 de cadeia ramificada, alquenila C2-6, alquinila C2-6, hidróxi, alcóxi C1-6, tiol, alquiltiol C1-6, halogênio, CN, C(R6)3, CO2H, alquil CO2C1-6, SO3H, alquil SO3C1-6, NII2, alquil NHC1-6 ou N(alquil Ci-6)2, -CH2CHNH(CO2H), NH(alquileno Ci-6)N(alquil C 1-6)2 ou um anel heterocíclico ou carbocíclico com 5 ou 6 membros; ou

R2 e R3 ou R3 e R4 e/ou R2' e R3' ou R3' e R4' tomados em conjunto

cada R5 ê independentemente selecionado de hidrogênio, alquil C1-6, uma alquil C1-6 de cadeia ramificada, alquenila C2-6, alquinila C2-6, hidróxi, alcóxi C1-6, tiol, alquiltiol C1-6, CO2H, alquil CO2C1-6, SO3H, alquil S03Ci-6, NH2, alquil NHCi-e ou N(alquil Ci-5)2;

cada R6 é independentemente selecionado de hidrogênio e halogê- nio; e

Z é selecionado de uma ligação covalente, -NI-I-, -O-, -S-, -C(O)- e -C(S)-;

ou um sal farmaceuticamente, veterinaria ou agriculturalmente aceitável dos mesmos em uma quantidade efetiva para inibir dita eclosão de ovo.

Também é fornecido um método de inibir a eclosão do ovo em um invertebrado não-ectoparasita uma população de invertebrados compre- endendo o contato de dito invertebrado com um composto de fórmula (II):

em que Y1 e Y2 são independentemente selecionados de O, NR28,

ou S;

R21, R22, R23 e R24 são independentemente selecionados de hidro- gênio, alquil C1-6, uma alquil C1-6 com cadeia ramificada, alquenila C2-6, alquinila C2-6, hidróxi, alcóxi C1-6, tiol, alquiltio C1-6, halogênio, CN, C(R29)3, CO2H, alquil CO2C1-6, SO3H, alquil S03Ci-6) NH2, alquil NHCi-e, N(alquil C 1-6)2 ou um anel carbocíclico ou heterocíclico; ou

R25 e R26 são independentemente selecionados de hidrogênio, al- quil C1-6, uma alquil C1-6 de cadeia ramificada, alquenila C2-6, alquinila C2-6, hidróxi, alcóxi C1-6, tiol, alquiltio C1-6, halogênio, CN, C(R29)3, CO2H, alquil CO2C1-6, SO3H, alquil SO3C1-6, NH2, alquil Nl-ICi-e ou N (alquil C1-6) 2; ou R25 e R26 juntamente com os átomos de carbono aos quais eles es- tão ligados formam um anel heterocíclico ou carbocíclico com 5 a 5 membros;

R27 é alquil Ci-6, uma alquil Ci-6 de cadeia ramificada, alquenila C2-6, alquinila C2-6, hidróxi, alcóxi C1-6, tiol, alquiltio C1-6, C(R29)2, N(RSO)2, ou um anel carbocíclico com 5 ou 6 membros ou anel heterocí- clico;

R28 é hidrogênio, alquil C1-6, uma alquil C1-6 com cadeia ramifica- da;

R29 é hidrogênio ou halogênio; e

Preferencialmente, o invertebrado não-ectoparasita é selecionado do grupo consistindo em nematoides, trematódeos e cestoides Em modalidades mais preferidas, o invertebrado é um nematoide Preferen- cialmente, o nematoide é inibido em seu estágio larval.

A presente invenção fornece métodos adicionais para identificar e selecionar um agente quelante como um inibidor de eventos de remode- lação de invertebrado candidato de uma coleção de agentes quelantes de metal;

dito método compreendendo selecionar um agente quelante de

metal que tenha pelo menos dois átomos polares capaz de simultanea- mente coordenar com um íon de metal e

i) um valor clogP de / 1 e <4; e/ou

ii) uma refratividade molar na faixa de 40 a 90 cm3/mole.

Desta forma, os métodos da invenção podem ser usados para ras- trear bibliotecas combinatórias por modelo de droga racional de agentes que possam ser usados como inibidores de remodelação de invertebra- dos e/ou como pesticidas em geral.

Ainda outro aspecto da invenção envolve ensaios de rastreamento nos quais agentes são identificados e/ou selecionados. Tais métodos envolvem identificação ou seleção de um agente quelante como um inibidor candidato de eventos de remodelação de invertebrados de uma coleção de agentes quelantes de metal de fórmula (II):

R:i Yi Y2

em que Y1 e Y2 são independentemente selecionados de O, NR28,

ou S;

R21, R22, R23 e R24 são independentemente selecionados de hidro- gênio, alquil Ci-6, uma alquil Ci-6 com cadeia ramificada, alquenila C2 6, alquinila C2-6, hidróxi, alcóxi C1-6, tiol, alquiltio Ci-e, halogênio, CN, C(R29)3, CO2H, alquil CO2C1-6, SO3H, alquil S03Ci-6, NH2, alquil NHCi-6, N(alquil Ci-ô)2 ou um anel carbocíclico ou heterocíclico; ou R21 e R22 ou R22 e R23 e R24 tomados em conjunto com os átomos de carbono aos quais eles estão ligados formam um anel carbocíclico ou heterocíclico com 5 ou 6 membros;

R25 e R26 são independentemente selecionados de hidrogênio, al- quil C1-6, uma alquil C1-6 de cadeia ramificada, alquenila C2-6, alquinila C2-6, hidróxi, alcóxi C1-6, tiol, alquiltio C1-6, halogênio, CN, C(R29)3, CO2H, alquil CO2C1-6, SO3H, alquil SO3C1-6, NH2, alquil NHCi-e ou N(alquil C 1-0)2; ou

R27 é alquil C1-6, uma alquil C1-6 de cadeia ramificada, alquenila C2-6, alquinila C2-6, hidróxi, alcóxi C1-6, tiol, alquiltio C1-6, C(R29)2, N(Rao)2, ou um anel carbocíclico com 5 ou 6 membros ou anel heterocí- clico;

R28 é hidrogênio, alquil C1-6, uma alquil C1-6 com cadeia ramifica- da;

R29 ê hidrogênio ou halogênio; e

ou um sal farmaceuticamente, veterinaria ou agriculturalmente aceitável dos mesmos;

dito método compreendendo selecionar um agente quelante de metal de fórmula (II) que tenha pelo menos dois átomos polares capazes de simultaneamente coordenar com um íon de metal e i) um valor clogP de /1 e <4; e/ou

ii) uma refratividade molar na faixa de 40 a 90 cm3/mole.

Ainda noutra alternativas modalidades, os métodos da invenção envolvem métodos de triagem para identificar ou selecionar um agente quelante como um inibidor de eventos de remodelação de invertebrado candidato de uma coleção de agentes quelantes de metal de fórmula I:

em que X é selecionado de uma ligação covalente, -C(R5)2-, -Z- ou -C(R5)2-Z-C(R5)2-;

R1 e R1' são independentemente selecionados de hidrogênio, alquil Ci-6, uma alquil Ci-6 de cadeia ramificada, alquenila C2-6, alquinila C2-6, hidróxi, alcóxi Ci-6, tiol, alquiltio Ci-6, halogênio, C(R6)3, CO2H, alquil C02Ci-6, SO3H, alquil SO3C1-6, NH2, alquil NHC1-6 ou N(alquil Ci-6)2, ou R1 e R19 tomados conjuntamente são -C(R5)2-, -C(R5)2-C(R5)2-, -CR5=CR5-, C(O), C(S) ou NH;

R2, R2', R3, R3', R4 e R4' são independentemente selecionados de hidrogênio, alquil C1-6, uma alquil C1-6 de cadeia ramificada, alquenila C2-6, alquinila C2-6, hidróxi, alcóxi C1-6, tiol, alquiltiol C1-6, halogênio, CN, C(R6)3, CO2H, alquil C02Ci-6, SO3H, alquil S03Ci-6, NH2, alquil NHC1-6 ou N(alquil Ci-6)2, -CH2CHNH(CO2H), NH(alquileno Ci-6)N(alquil C 1-6)2 ou um anel heterocíclico ou carbocíclico com 5 ou 6 membros; ou

cada R5 é independentemente selecionado de hidrogênio, alquil Ci-6, uma alquil Ci-6 de cadeia ramificada, alquenila C2-6, alquinila C2-6, hidróxi, alcóxi C1-6, tiol, alquiltiol C1-6, CO2H, alquil CO2C1-6, SO3H, alquil SO3C1-6, NI-I2, alquil NHCi-e ou N(alquil Ci-6)2;

cada R6 é independentemente selecionado de hidrogênio e halogê-

nio; e

Z é selecionado de uma ligação covalente, -NH-, -O-, -S-, -C(O)- e -C(S)-;

dito método compreendendo selecionar um agente quelante de metal de fórmula (I) que tenha pelo menos dois átomos polares capazes de simultaneamente coordenar com um íon de metal e

i) um valor clogP de /1 e <4; e/ou ii) uma refratividade molar na faixa de 40 a 90

cm3/mole.

Os ensaios de rastreamento da invenção podem ser combinados com ensaios biológicos convencionais empregados para determinar a eficácia de um dado agente como um pesticida. Como tal, os ensaios de rastreamento acima podem ser combinados com ensaios designados para determinar o efeito na eclosão de ovo, muda, metamorfose e os semelhantes, bem como ensaios de enzima in vitro que determinam a atividade de uma ou mais das enzimas envolvidas em um ou mais dos eventos de remodelação. Em modalidades específicas, os ensaios de rastreamento podem ser combinados com ensaios que determinam a eficácia dos compostos como inibidores de proteases e semelhantes.

Breve Descrição das Figuras Figura 1: apresenta uma análise SDS-PAGE com substrato de ge- latina de atividade de protease de lavagens obtidas de várias amostras de cabelo e ovos de piolhos (lavagens de casca de ovo ESW) seguindo coloração do gel como azul de Coomassie e descoloração. A Coluna 1 mostra a atividade de protease detectada nas lavagens obtidas de ovos de piolhos não eclodidos dentro de 12 horas de eclosão (amostra 1) na região de mais alto peso molecular do gel SDS, acima de 50kDa (Figura IA, coluna 1). Um padrão similar de atividade de protease foi detectado nas lavagens tomadas de amostras de cabelo humano seguidas de remoção dos ovos de piolho (amostra 2) (Figura IA, coluna 2). Entretan- to, o tratamento do cabelo com 1% de hipoclorito de sódio antes de coletar as lavagens (amostra 3) removeu completamente a atividade de protease (Figura IA, coluna 3). O tratamento com hipoclorito foi tam- bém capaz de remover as proteases estranhas de ovos de piolho não eclodidos (amostra 4) (Figura IA, coluna 4). O hipoclorito foi usado para tratar ovos não eclodidos antes da coleta dos ESWs para todas as análises de protease subsequentes.

Diversas proteases distintas foram observadas nos ESWs de ovos tratados com hipoclorito coletados até 2 horas após a eclosão dos ovos (amostra 5) (Figura 1B). Faixas de atividade de protease foram detecta- das cerca de 25-30 kDa, 50 kDa e houve um número de faixas mais claras detectadas acima de 50 kDa. Essas proteases foram especifica- mente associadas com os ovos de piolhos ao tempo da eclosão do ovo e foram denominadas lavagens de casca de ovo (ESW).

Figura 2: As proteases presentes nas ESWs de piolho foram ainda

caracterizadas pela suas classe mecanicista. Incubação com os agentes quelantes de metal EDTA e 1,10-fenantrolina, para inibir metaloprotea- ses, resultou em uma redução na atividade de protease comparada com os controles não tratados (Figura 2A e 2B, respectivamente). Em con- traste, não houve redução aparente na atividade de protease quando a ESW foi incubada com o inibidor de protease de serina/cisteína PMSF (Figura 2B), o inibidor de protease de cisteína E-64 (Figura 2B) ou o inibidor de protease aspártica pepstatina (dados não mostrados).

Figura 3: apresenta um SDS-PAGE com gelatina bidimensional que foi usado para avaliar o número de espécies de protease presentes nas ESWs de piolho. Cada uma das três principais regiões de atividade de protease no SDS-PAGE em gelatina unidimensional (Figura 1B) determinadas para um número de proteases distintas presentes nas ESWs de piolho com atividade na faixa de peso molecular de 25-30 kDa determinadas para pelo menos sete proteases distintas com pontos isoelétricos na faixa de pH neutro para alcalino, ao passo que a faixa de atividade de protease de cerca de 50 kDa determinada para pelo menos onze regiões de protease distintas com pontos isoelétricos na região de pH ácido para neutro. Pelo menos cinco proteases com pesos molecula- res acima de 75 kDa foram também observadas.

A fim de investigar mais profundamente o efeito de 1,10- fenantrolina na atividade de protease do ESWs, as proteases foram separadas por eletroforese em gel bidimensional e o gel incubado na presença de 10 mM de 1,10-fenantrolina. Os resultados destes estudos confirmaram o efeito inibitório deste inibidor de metaloprotease na atividade das proteases de ovo de piolho. Houve redução geral na atividade de protease na região de 25-30 kDa e uma clara redução nas proteases presentes ao redor da região 50kDa e acima de 75 kDa (Figu- ra 3B).

Figura 4: apresenta o efeito de 1,10-fenantrolina na eclosão de

ovo em piolhos. Ovos foram tratados 5 dias após a postura e depois a eclosão foi observada ao longo do tempo.

Figura 5: apresenta o efeito de Lannate®, contendo metomil, na eclosão de ovos em ovos de Helicoverpa. A eficácia do ovicida foi avalia- da em 5 mM, 2,5 mM, 2,25 mM e 0,125 mM de metomil.

Figura 6: apresenta o efeito de 2-acetil-l-tetralona na eclosão de ovos em ovos de Helicoverpa armigera. A eficácia do ovicida foi avaliada em 2mM e ImM de 2-acetil-l-tetralona.

Figura 7: apresenta o efeito de 2-acetil-l-tetralona na eclosão de

ovos em ovos de Plutella. A atividade do ovicida foi avaliada em 2mM, ImM, 0,5 mM e 0,lmM.

Figura 8: apresenta o efeito de 5,5'-dimetil-2,2'-dipiridila na eclo- são de ovos em ovos de H. contortus. A eficácia do ovicida foi avaliada - 10 em 180 ug/mL, 18 ug/mL, 1,8 μg/mL e 0,18 ,ug/mL.

Figura 9: apresenta o efeito de ivermectina na eclosão de ovos em ovos de II. contortus. A eficácia do ovicida foi avaliada em 200 μg/mL, 100 μg/mL, 50 μg/mL, 25 μg/mL e 12,5 μ§/ηι]ϋ.

Figura 10: apresenta o efeito de 2-acetil-l-tetralona na eclosão de ovos em ovos de H. contortus. A eficácia do ovicida foi avaliada em 110 μg/mL e 22 μg/mL.

Descrição da Invenção

Em um aspecto da invenção é proporcionado um método de inibir um processo de remodelação em um invertebrado aplicando-se exter- namente uma composição pesticida substancialmente como descrito abaixo, neste documento. O processo de remodelação a ser inibido pode ser qualquer processo que é envolvido no ciclo de vida de uma praga invertebrada. Como tal, a invenção contempla inibir processos, tais como eclosão de ovo, enquistamento, derramamento de bainha, apólise, ecdise ou metamorfose. Sem ser limitada a uma dada teoria ou meca- nismo de ação, a invenção pode, mas não precisa necessariamente, envolver a inibição de uma enzima de protease envolvida nesse processo de remodelação. É conhecido, por exemplo, que enzimas de protease estão envolvidas na hidrólise de proteínas em ovos, bainhas, carapaças, exoesqueletos, cistos, casulos ou ooteca, enfraquecendo a estrutura e pelo menos parcialmente permitindo que os invertebrados se livrem da estrutura. Em alguns métodos alternativos da invenção, é contemplado que o processo de remodelação indiretamente envolve uma enzima de protease, por exemplo, uma dada proteína ou peptídeo pode ser reque- rido para o processo de remodelação, tal como um hormônio que sinali- za que o processo de remodelação deve ocorrer e as composições da invenção são capazes de inibir a produção desse hormônio. Preferenci- almente, a enzima de protease é uma enzima metaloprotease.

O termo "evento de remodelação" refere-se a um evento no ciclo de vida de um invertebrado que altera o ambiente imediato dos inverte- brados ou altera a forma física dos invertebrados e facilita a progressão do organismo de um estágio de vida no ciclo de vida para o próximo estágio de vida. Exemplos de eventos de remodelação incluna eclosão de ovos, enquistamento, apólise de uma cutícula ou exoesqueleto, ecdise de uma cutícula ou exoesqueleto e metamorfose.

Como usado neste documento, "eclosão de ovo" refere-se à eclo- são de um invertebrado de um ovo de membrana fina onde a eclosão é auxiliada por enzimas de protease. Ovos de membrana fina incluem aqueles ovos que possuem cascas ou cutículas compreendendo predo- minantemente uma matriz de proteína, com ou sem proteína curtida, são permeáveis a gás, mas essencialmente impermeáveis à água, são em geral não-mineralizadas, têm menos de 20 mm de comprimento e não são passíveis de eclosão unicamente por meios mecânicos, por exemplo, por mastigação ou ruptura não assistidas.

Como usado neste documento, "enquistamento" refere-se à emer- são de um larval embrionário ou protozoários quiescente, taeniid, trematódeo ou outras espécies de um saco membranoso fechado ou cavidade de tecido em algum estágio de seu ciclo de vida. Esses sacos podem ser formados em parte ou totalmente de material proteico que devem ser remodelados a fim do invertebrado emergir. Os cistos podem ser formados dentro do corpo de um hospedeiro, tal como um humano ou um caramujo, ou ser diretamente depositado no ambiente. Enquis- tamento deve ocorrer no momento certo e da maneira certa a fim de o invertebrado continuar com estágios subsequentes de seu ciclo de vida.

Como usado neste documento, "derramamento de bainha", refere- se a um processo de muda em vermes, tais como nematódeos. Após a eclosão, um nematódeo atravessa quatro estágios larvais antes de emergir como um adulto imaturo. Os estágios larvais são revestidos em uma cutícula ou bainha que tem um papel protetivo. O processo envol- ve duas etapas, a síntese de uma nova cutícula e o derramamento de bainha ou descamação da cutícula velha. Derramamento de bainha também pode ser essencial para permitir a infecção de um novo hospe- deiro. Por exemplo, derramamento de bainha do terceiro estágio larval de H. contortus no rúmen de um hospedeiro resulta em infecção do hospedeiro. As condições ambientais no rúmen ativam células secreto- ras no nematódeo para liberar hormônios. Os hormônios agem em células excretoras e estimulam a captação de água, o que em retorno, ativa enzimas que são liberadas no espaço entre a cutícula nova e a velha. As enzimas enfraquecem a cutícula velha, a qual, então, se rompe, permitindo que o verme se liberte da cutícula velha.

Como usado neste documento, "apólise" refere-se à separação da cutícula da epiderme de um invertebrado. Esta separação permite a formação de uma nova cutícula sem a exposição ao ambiente. Durante este processo, enzimas são secretadas do invertebrado, que digerem as camadas interiores da cutícula.

Como usado neste documento, o termo "ecdise" refere-se à des- camação de uma cutícula velha. Ecdise ocorre após a apólise. Após a apólise, fluido de muda contendo enzimas inativas é secretado no espaço entre a epiderme e a cutícula velha. A nova cutícula é então formada. As enzimas no fluido de muda são então ativadas e as regiões inferiores da cutícula velha, a endocutícula e a mesocutícula, são digeridas. A exocutícula e epicutícula da cutícula velha, que não são digeridas, são, então, descarnadas.

Como usado neste documento, "metamorfose" refere-se ao pro- cesso biológico no qual alguns invertebrados, após a eclosão, atraves- sam uma mudança conspícua na forma ou estrutura por crescimento e diferenciação celular, que é freqüentemente acompanhada por uma mudança no habitai e/ou comportamento. Metamorfose normalmente prossegue em estágios distintos, normalmente começando com uma larva ou crisálida, opcionalmente passando por uma pupa, e resulta em um adulto. Metamorfose de uma crisálida, em geral tendo a forma de um adulto, pode ser marcada pelo desenvolvimento de asas. Em con- traste, outros invertebrados podem ter larvas que diferem substancial- mente do adulto e passam por um estágio inativo chamado pupa, do qual emerge um adulto. O crescimento e a metamorfose são controlados por hormônios produzidos pelo invertebrado. Uma combinação de hormônios pode ser usada, por exemplo, na secreção de ecdisona (um esteroide) e o hormônio juvenil permite a muda e crescimento de uma crisálida ou larva sem maturação por metamorfose para um adulto. Quando o hormônio juvenil deixa de ser produzido, a metamorfose prossegue.

O termo "expondo um invertebrado", como usado neste documen- to, refere-se à exposição de invertebrado em qualquer parte de seu ciclo de vida, incluindo, mas não limitado a, um ovo de invertebrado, ooteca, um cisto, uma crisálida de invertebrado, uma larva de invertebrado, um instar de invertebrado, uma pupa de invertebrado, e qualquer estágio juvenil ou estágio adulto de um invertebrado. O termo "em contato" como usado neste documento pode ser referir a um contato externo da praga com a composição da invenção. Alternativamente, a praga pode entrar em contato com a composição da invenção porque a praga ingeriu a composição. Ainda noutra alternativa, a praga está em contato com a invenção porque o hospedeiro da praga ingeriu ou esteve em contato com a composição e por estar em contato físico com o hospedei- ro, a praga ou ingere ou entra em contato externamente com as compo- sições da invenção. É notado que as composições e métodos da inven- ção são empregados para matar, inibir ou de outra forma romper o estágio de ciclo de vida que é exposto às composições da invenção. Por exemplo, onde a composição é usada para inibir eclosão de ovo, a composição é exposta diretamente ao ovo do invertebrado em vez de ser exposta a um estágio diferente no ciclo de vida do invertebrado. Como tal, nos métodos da invenção, não é necessário que as composições inibitórias sejam ingeridas pelo hospedeiro ou até pela praga a fim de ter seus efeitos inibitórios como é requerido, por exemplo, nos métodos descritos nas Patentes US 5.766.609 e 6.150.125. Preferencialmente, as composições e métodos da presente invenção são tais que as composi- ções estão simplesmente em contato com a superfície ou ambiente exterior do invertebrado e agem tanto matando o invertebrado direta- mente, quanto para retardar, inibir ou de outra forma prevenir que o invertebrado progrida para o próximo estágio de seu ciclo de vida. Desse modo, em certas modalidades, é contemplado que os métodos da inven- ção são usados para tratar uma infestação de praga matando, inibindo ou de outra forma desfazendo tal infestação impedindo e removendo a infestação no estágio de ciclo de vida do invertebrado no qual a compo- sição é aplicada. Portanto, na presente invenção, é fornecido um método de tratamento de infestação por pulga de uma maneira tal que a pulga não necessariamente ingere as composições da invenção, ao passo que para nematódeos e lagartas a composição pode ser ingerida. A Patente US 5.766.609, por outro lado, requer que uma pulga deva ingerir certos compostos, a fim de inibir proteases que formam componentes signifi- cantes do intestino médio da pulga e assim reduz a fecundidade das pulgas por tal ingestão de inibidores de protease. Desse modo, uma diferença chave entre o uso das composições da presente invenção e os métodos ensinados pela Patente US 5.766.609 é que as composições da presente invenção agem diretamente no animal em contato com/alimentado com/de outra forma exposto às composições, em vez de as composições terem um efeito em gerações subsequentes (por exemplo, onde ovos de pulga são expostos, há uma diminuição na eclosão de ovo enquanto as pulgas podem bem permanecer não afeta- das).

O termo "agente quelante de metal", como usado neste documen- to, refere-se a uma molécula tendo pelo menos dois átomos polares, tais como nitrogênio, oxigênio, enxofre e fósforo, e estão situados na molé- cula tal que eles são capazes de simultaneamente coordenar em um íon de metal. O agente quelante de metal também tem um valor clogP de /1 e <4 e/ou uma refratividade molar na faixa de 40 a 90 cm3/mole. Em algumas modalidades, o agente quelante tem um valor clogP de /1 e < 3 e uma refratividade molar na faixa de 40 a 70 cm3/mole. Em algumas modalidades, o pLDso do agente quelante é /2, preferencialmente /3, mais preferencialmente /4. Em algumas modalidades, a associação constante ou LogKb dos agentes quelantes de metal para zinco é >5,00.

Os íons de metal que são capazes de ser coordenados pelo agente quelante de metal são quaisquer íons de metal que ocorrem em metalo- proteases, particularmente metaloproteases que estão envolvidas na quebra de estruturas contendo proteínas de ligação cruzada associadas com ovos, bainhas, carapaças, cutículas, exoesqueletos, cistos ou ooteca e/ou que facilitam a progressão do organismo de um estágio de vida para o próximo estágio de vida. Tais íons de metal incluem íons de metal divalentes e trivalentes, particularmente íons de metais alcalino- terrosos divalentes e íons de metal de transição divalentes ou trivalen- tes. Em algumas modalidades, os íons de metal que são capazes de serem coordenados são selecionados de Ca++, Mg++, Cu++, Fe++, Zn++ e Fe+++, especialmente Cu++, Fe++ e Zn++, mais especialmente Zn++.

ClogP é uma predição calculada do valor IogP de um composto. O valor IogP de um composto, que é o logaritmo de seu coeficiente de partição entre n-octanol e água [(log(C0ctanoi/Cágua)], é uma medida bem estabelecida da hidrofilicidade do composto. O cálculo do clogP é base- ado no tipo de átomo e inclui informação referente a várias proprieda- des atômicas, tais como número atômico, membros do anel, tipos de ligações com vizinhos imediatos e estado de aromaticidade. ClogP pode ser calculado usando um programa clogP (Biobyte).

A refratividade molar é uma medida do volume ocupado por um átomo ou grupo e depende da temperatura, do índice de refração, da pressão. A refratividade molar fornece uma indicação do tamanho da molécula e da polarizabilidade da molécula. A refratividade molar foi calculada usando o módulo CMR (Refratividade Molar Calculada) do programa de computador ClogP (Biobyte).

Log LD50 é obtido do percentual observado de atividade ovicida pela conversão usando uma transformação de logito modificada. Os valores de percentual observado de atividade ovicida foram transforma- dos usando a equação:

BA = Iog ((5 + %)/(105 - %))

Os 5% adicionais foram usados para permitir que um número se- ja calculado quando 0% e 100% de atividade fossem observados. O BA é uma correção bruta para o registro da concentração no qual os compos- tos foram testados. Correlação entre valores de BA e de LD50 permite o cálculo do Log LD50. Um valor pLDso menor que 2 é considerado inativo (Classe 0), um valor pLDso entre 2 e 3 é considerado fracamente ativo (Classe 1), um valor pLDso entre 3 e 4 é considerado moderadamente ativo (Classe 2) e um pLDso maior que 4 é considerado fortemente ativo (Classe 3). Em modalidades preferidas, o valor pLDso é maior do que 2, especialmente maior do que 3 e mais especialmente maior do que 4.

Sem desejar ficar vinculado pela teoria, acredita-se que os agen-

tes quelantes de metal vinculam e removem os íons de metal requeridos para atividade de metaloprotease fazendo a protease ficar inativa. Essa teoria é apoiada pela adição de íons de metal invertendo o efeito inibitó- rio do agente quelante de metal.

»

Em algumas modalidades, o agente quelante de metal é um com-

posto de fórmula (I):

R1 e R1' são independentemente selecionados de hidrogênio, alquil

Ci-6, uma alquil Ci-6 de cadeia ramificada, alquenila C2-6, alquinila C2-6, hidróxi, alcóxi Ci-6, tiol, alquiltio Ci-6, halogênio, C(R6)3, CO2H, alquil C02Ci-6, SO3H, alquil SO3C1-6, NH2, alquil NHCi-6 ou N(alquil Ci-eja, ou R1 e R19 tomados em conjunto são -C(R5)2-, -C(R5)2-C(R5)2-, -CR5-CR5-, C(O), C(S) ou ΝΗ;

R2, R2', R3, R3', R4 e R4' são independentemente selecionados de hidrogênio, alquil Ci-6, uma alquil Ci-6 de cadeia ramificada, alquenila C2-6, alquinila C2-6, hidróxi, alcóxi C1-6, tiol, alquiltiol C1-6, halogênio, CN, C(R6)3, CO2H, alquil C02Ci-6, SO3H, alquil S03Ci-6, NH2, alquil NHC1-6 ou N(alquil Ci-6)2, -CH2CHNH(CO2H), NII(alquileno Ci-e)N(alquil Ci-ô)2 ou um anel heterocíclico ou carbocíclico com 5 ou 6 membros; ou

R2 e R3 ou R3 e R4 e/ou R2' e R3' ou R3' e R4' tomados em conjunto

cada R5 é independentemente selecionado de hidrogênio, alquil C1-6, uma alquil C1-6 de cadeia ramificada, alquenila C2-6, alquinila C2-6, hidróxi, alcóxi C1-6, tiol, alquiltiol C1-6, CO2H, alquil CO2C1-6, SO3II, alquil S03Ci-6, NH2, alquil NHC1-6 ou N(alquil Ci-6)2;

ou um sal farmaceuticamente, veterinaria ou agriculturalmente

aceitável dos mesmos.

Compostos preferidos de fórmula (I) têm pelo menos uma das se- guintes características:

R1 e R1' são independentemente selecionados de alquil C1-6, uma alquil C1-6 de cadeia ramificada, alquenila C2-6, alquinila C2-6, hidróxi, alcóxi C1-6, tiol, alquiltio Ci-6, CO2H, alquil C02Ci-6, SO3H, alquil SO3Ci- 6, NH2, alquil NHCi-e ou N(alquil Ci-6)2, mais preferencialmente hidrogê- nio ou alquil C1-3, ainda mais preferencialmente hidrogênio ou metila;

R2 e R2' são independentemente hidrogênio ou alquil C1-3, mais preferencialmente hidrogênio;

R3, R3', R4 e R4' são independentemente selecionados de hidrogê- nio, alquil Ci-6, uma alquil Ci-e de cadeia ramificada, alquenila C2-6, alquinila C2-6, alcóxi C1-6, alquiltiol C1-6 ou alquil CO2C1-6, preferencial- mente hidrogênio ou alquil C1-3, mais preferencialmente hidrogênio ou metila; ou R3 e R4 e/ou R3' e R4' tomados em conjunto com os átomos de carbono aos quais eles estão ligados formam um anel carbocíclico ou heterocíclico com 5 a 6 membros, preferencialmente um anel aromático;

cada R5 é independentemente selecionado de hidrogênio, alquil C1-6, uma alquil C1-6 de cadeia ramificada, alquenila C2-6, alquinila C2-6, alcóxi C1-6, alquiltiol C1-6 ou alquil CO2C1-6, preferencialmente hidrogê- nio ou alquil C1-3, mais preferencialmente hidrogênio ou metila;

cada R5 é independentemente hidrogênio ou flúor, especialmente onde cada R6 é flúor;

X é uma ligação covalente, -CH2-Z-CH2- ou Z, preferencialmente uma ligação covalente; e

Zé -NH-, -O- ou -S-, preferencialmente -NH-.

Em algumas modalidades, os substituintes R1, R2, R3, R4, R1', R2', R3' e R4' são doadores de elétrons, ou não afetam a densidade de elétron do anel de piridila.

Compostos preferidos são compostos biarila de fórmula (I):

20

em que X é selecionado de uma ligação covalente, -C(R5)2-, -Z- ou - C(RS)2-Z-C(RS)2-;

R1 e R19 são independentemente selecionados de hidrogênio, al- quil Ci-6, uma alquil Ci-6 de cadeia ramificada, alquenila C2-6, alquinila C2-6, hidróxi, alcóxi C1-6, tiol, alquiltio C1-6, halogênio, C(R6)3, CO2H, alquil C02Ci-6, SO3H, alquil SO3C1-6, NH2, alquil NHCi-e ou N(alquil Ci- 0)2;

R2, R2', R3, R3', R4 e R4' são independentemente selecionados de hidrogênio, alquil C1-6, uma alquil C1-6 de cadeia ramificada, alquenila C2-6, alquinila C2-6, hidróxi, alcóxi C1-6, tiol, alquiltiol C1-6, halogênio, CN, C(R6)3, CO2H, alquil CO2C1-6, SO3H, alquil S03Ci-6, NII2, alquil NIIC1-6 ou N(alquil Ci-6)2, -CH2CHNH(CO2H), NH(alquileno Ci-6)N(alquil C1-6)2 ou um anel heterociclico ou carbocíclico com 5 ou 6 membros; ou

R2 e R3 ou R3 e R4 e/ou R2' e R3' ou R3' e R4' tomados em conjunto com os átomos de carbono aos quais eles estão ligados formam um anel heterociclico ou carbocíclico com 5 ou 6 membros;

cada R5 ê independentemente selecionado de hidrogênio, alquil C1-6, uma alquil C1-6 de cadeia ramificada, alquenila C2-6, alquinila C2-6, hidróxi, alcóxi C1-6, tiol, alquiltiol C1-6, CO2H, alquil CO2C1-6, SO3H, alquil S03Ci-6, NH2, alquil NHCi-e ou N(alquil Ci-6)2;

cada R5 é independentemente selecionado de hidrogênio e halogê-

nio; e Z é selecionado de uma ligação covalente, -NH-, -O-, -S-, -C(O)- e -C(S)-;

ou um sal farmaceuticamente, veterinaria ou agriculturalmente aceitável dos mesmos.

Compostos preferidos da fórmula (!) incluem

2,2'-dipiridila, 6,6'-dimetil-2,2'-dipiridila, 5,5 '-dimetil-2,2 '-dipiridila, 5,5'-dietil-2,2'-dipiridila, 4,4'-dimetil-2,2'-dipiridila, 2 - (2 -piridinil) quinolina, 2,2-dipiridilamina, 2,2',6,2"-terpiridina

Em algumas modalidades, o agente quelante de metal preferido é um composto de fórmula II:

em que Y1 e Y2 são independentemente selecionados de O, NR28,

ou S;

R21, R22, R23 e R24 são independentemente selecionados de hidro- gênio, alquil C1-6, uma alquil C1-6 com cadeia ramificada, alquenila C2-6, alquinila C2-6, hidróxi, alcóxi C1-6, tiol, alquiltio C1-6, halogênio, CN, C(R29)3, CO2H, alquil CO2C1-6, SO3H, alquil SO3C1-6, NII2, alquil NHCi-e, N(alquil Ci-ô)2 ou um anel carbocíclico ou heterocíclico; ou R21 e R22 ou R22 e R23 e R24 tomados em conjunto com os átomos de carbono aos quais eles estão ligados formam um anel carbocíclico ou heterocíclico com 5 ou 6 membros;

R25 e R26 são independentemente selecionados de hidrogênio, al- quil Ci-6, uma alquil Ci-6 de cadeia ramificada, alquenila C2-6, alquinila C2-6, hidróxi, alcóxi C1-6, tiol, alquiltio C1-6, halogênio, CN, C(R29)3, CO2H, alquil CO2C1-6, SO3H, alquil SO3C1-6, NH2, alquil NHCi-6 ou N (alquil C 1-0)2; ou

R27 é alquil C1-6, uma alquil C1-6 de cadeia ramificada, alquenila C2-6, alquinila C2-6, hidróxi, alcóxi C1-6, tiol, alquiltio C1-6, C(R29)2, N(R3o)2, ou um anel carbocíclico com 5 ou 6 membros ou anel heterocí- clico;

1

R28 é hidrogênio, alquil C1-6, uma alquil C1-6 com cadeia ramifica- da;

R29 ê hidrogênio ou halogênio; e

Compostos preferidos de fórmula (II) têm pelo menos uma das se- guintes características:

R21, R22, R23 e R24 são independentemente selecionados de hidro- gênio, alquil C1-6, uma alquil C1-6 com cadeia ramificada, alquenila C2-6, alquinila C2-6, halogênio, NH2, alquil NHC1-6, N(alquil Ci-õ)2 ou CN, preferencialmente hidrogênio ou alquil C1-6, uma alquil C1-6 com cadeia ramificada, mais preferencialmente hidrogênio ou alquil C1-3, especial - mente hidrogênio ou metila;

R25 e R26 são independentemente selecionados de hidrogênio, al- quil C1-6, uma alquil C1-6 de cadeia ramificada, alquenila C2-6, alquinila C2-6, halogênio, NH2, NH(alquil Ci-õ), Nfalquil Ci-õ)2 ou CN, preferencial- mente hidrogênio ou ou alquil C1-6, uma alquil C1-6 de cadeia ramifica- da, mais preferencialmente hidrogênio ou alquil C1-3, especialmente hidrogênio ou metila; ou

R25 e R26 tomados em conjunto com os átomos de carbono aos quais eles estão ligados formam um anel heterocíclico ou carbocíclico com 5 a 6 membros, especialmente um anel carbocíclico, mais especial- mente um anel carbocíclico insaturado com 6 membros;

R27 é alquil C1-6, uma alquil C1-6 de cadeia ramificada, alquenila C1-6, alquinila C1-6, C(R29)3, ou um anel carbocíclico ou heterocíclico com ou 6 membros; especialmente alquil C1-6, uma alquil C1-6 de cadeia ramificada, ou um anel carbocíclico com 5 a 6 membros, preferencial- mente uma alquil C1-3 ou um anel carbocíclico com 6 membros; especi- almente metila ou fenila;

Os composto preferidos de fórmula (II) incluem: dibenzoilmetano,

benzoilacetona, e 2-acetil-1 -tetralona,

Como usado neste documento, o termo "alquila" refere-se a um grupo hidrocarboneto saturado com cadeia linear ou ramificada e pode ter um número especificado de átomos de carbono. Por exemplo, Ci-Cõ como em "alquil Ci-Có" inclui grupos tendo 1, 2, 3, 4, 5 ou 6 carbonos em um arranjo linear ou ramificado. Exemplos de grupos alquila apropriados incluem, mas, sem limitação, metila, etila, n.-propila, i- propila, n-butila, i-butila, í-butila, n-pentila, 2-metilbutila, 3- metilbutila, 4-metilbutila, n-hexila, 2-metilpentila, 3-metilpentila, 4- metilpentila, 5-metilpentila, 2-etilbutila e 3-etilbutila. Alquil Ci-6, como usado neste documento, também inclui alquil Ci-6 de cadeia ramificada.

Como usado neste documento, o termo "alquenila" refere-se a um grupo hidrocarboneto com cadeia linear ou ramificado, tendo uma ou mais duplas ligações entre átomos de carbono e pode ter um número especificado de átomos de carbono. Por exemplo, C2-C6, como em "alquenila C2-C6", inclui grupos tendo 2, 3, 4, 5 ou 6 átomos de carbono em um arranjo linear ou ramificado. Exemplos de grupos alquenila apropriados incluem, mas, sem limitação, etenila, propenila, isoprope- nila, butenila, pentenila e hexenila.

Como usado neste documento, o termo "alquinila" refere-se a um grupo hidrocarboneto com cadeia linear ou ramificado, tendo uma ou mais ligações triplas entre átomos de carbono, e pode ter um número especificado de átomos de carbono. Por exemplo, C2-C6, como em "alquinila C2-C6", inclui grupos tendo 2, 3, 4, 5 ou 6 átomos de carbono em um arranjo linear ou ramificado. Exemplos de grupos alquinila apropriados incluem, mas, sem limitação, etinila, propinila, butinila, pentinila e hexinila. Como usado neste documento, o termo "halo" ou "halogênio" refe- re-se a flúor, cloro, bromo e iodo.

Os termos "alquilóxi" ou "alcóxi", como usados neste documento, representam um grupo alquila, como definido acima, ligado por uma ponte de oxigênio. Exemplos de grupos alquilóxi apropriados incluem, mas, sem limitação, metóxi, etóxi, n-propilóxi, í-propilóxi, n-butilóxi, i- butilóxi, í-butilóxi, n-pentilóxi e n-hexilóxi.

O termo "alquiltio", como usado neste documento, representa um grupo alquila, como acima definido, ligado por uma ponte de enxofre, exemplos de grupos alquiltio apropriados incluem, mas, sem limitação, metiltio, etiltio, propiltio, ι-propiltio, butiltio, i-butiltio, í-butiltio, pentil- tio, hexiltio.

O termo "anel carbocíclico", como usado neste documento, refere- se a um anel de 3 a 10 membros ou sistema de anel fundido, no qual todos os átomos que formam o anel são átomos de carbono. O anel carbocíclico C3-10 pode ser saturado, insaturado ou aromático. Exem- plos de anéis carbocíclicos apropriados incluem, mas, sem limitação, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclopentenila, ciclohexila, ciclohe- xenila, fenila, naftila e tetrahidronaftila.

O termo "anel heterocíclico", como usado neste documento, refe-

re-se a um anel com 3 a 10 membros ou um sistema de anel fundido, no qual pelo menos um dos átomos que formam o anel é um heteroá- tomo. Preferencialmente, o heteroátomo é selecionado de nitrogênio, oxigênio, enxofre e fósforo. O anel heterocíclico C3-10 pode ser saturado, insaturado ou aromático. Exemplos de anéis heterocíclicos apropriados incluem, mas, sem limitação, benzoimidazolila, benzofuranila, benzofu- razanila, benzopirazolil, benzotriazolila, benzotiofenila, benzoxazolila, carbazolila, carbolinil, cinolinila, furanila, imidazoila, indolinila, indoli- la, indolazinil, indazolila, isobenzofuranila, isoindolila, isoquinolila, isotiazolila, isoxazolila, naftpiridinila, oxadiazolila, oxazolila, oxazolina, isoxazolina, oxetanila, piranila, pirazinila, pirazolila, piridazinila, pirido- piridinila, piridazinila, piridila, pirimidila, pirrolila, quinazolinila, quino- lila, quinoxalinila, tetrahidropiranila, tetrazolila, tetrazolopiridila, tiadiazolila, tiazolila, tienila, triazolila, azetidinila, aziridinila, 1,4- dioxanila, hexahidroazepinila, piperazinila, piperidinila, pirrolidinila, morfolinila, tiomorfolinila, dihidrobenzoimidazolila, dihidrobenzofurani- la, dihidro-benzotiofenila, dihidrobenzoxazolila, dihidrofuranila, dihidro- imidazolila, dihidroindolila, dihidroisooxazolila, dihidroisotiazolila, dihidrooxadia-zolila, dihidrooxazolila, dihidropirazinila, dihidropirazoli- la, dihidropiridi-nila, dihidropirimidinila, dihidropirrolila, dihidroquino- linila, dihidro-tetrazolila, dihidrotiadiazolila, dihidrotiazolila, dihidrotie- nila, dihidro-triazolila, dihidroazetidinila, metilenodioxibenzoíla, tetra- hidrofuranila, e tetrahidrotienila, e óxidos-N dos mesmos. A ligação de um substituinte heterociclila pode ocorrer por meio de um átomo de carbono ou por um heteroátomo.

Como usado neste documento, o termo "arila" destina-se a signifi- car qualquer anel de carbono monocíclico ou bicíclico estável de até 6 átomos em cada anel, em que pelo menos um anel é aromático. Exem- pios de tais grupos arila incluem, mas, sem limitação, fenila, naftila e tetrahidronaftila.

O termo "heteroarila", como usado neste documento, representa um anel bicíclico ou monocíclico estável de até 6 átomos em cada anel, em que pelo menos um anel é aromático e pelo menos um anel contém de 1 a 4 heteroátomos selecionados do grupo consistindo em O, N e S. Grupos heteroarila dentro do escopo desta invenção incluem, mas, sem limitação, acridinila, carbazolila, cinolinila, quinoxalinila, isoquinolinila, oxazolila, isoxazolila, indolila, pirazinila, piridazinila, piridinila, pirimi- dinila, pirrolila, tetrahidroquinolina.

Os compostos da invenção podem estar na forma de sais farma- ceuticamente, veterinaria ou agriculturalmente aceitáveis. Sais farma- ceuticamente aceitáveis apropriados incluem, mas, sem limitação, sais de ácidos inorgânicos farmaceuticamente aceitáveis, tais como ácidos hidroclórico, sulfúrico, fosfórico, nítrico, carbônico, bórico, sulfâmico, e hidrobrômico, ou sais de ácidos orgânicos farmaceuti-camente aceitá- veis, tais como ácidos acético, propiônico, butírico, tartárico, maleico, hidroximaleico, fumárico, maleico, cítrico, láctico, múcico, glucônico, benzoico, succínico, oxálico, fenilacético, metanossulfônico, toluenos- sulfônico, benzenossulfônico, salicíclico, sulfanílico, aspártico, glutâmi- co, edético, esteárico, palmítico, oleico, láurico, pantotênico, tânico, ascórbico e valérico.

Sais básicos incluem, mas, sem limitação, aqueles formados com cátions farmaceuticamente aceitáveis, tais como sódio, potássio, lítio, cálcio, magnésio, amônia e alquilamônia.

Grupos básicos contendo nitrogênio podem ser quartenizados

com tais agentes como haleto de alquila inferior, tais como cloretos, brometos e iodetos de metila, etila, propila e butila; sulfatos de dialqui- la, como sulfato de dimetil e de dietil; e outros.

Também será reconhecido que muitos compostos da invenção possuem centros assimétricos e são, desse modo, capazes de existir em mais de uma forma estereoisomérica. A invenção, assim, refere-se também a compostos em forma isomérica substancialmente pura em um ou mais centros assimétricos, por exemplo, maior do que cerca de 90% ee, tal como cerca de 95% ou 97% ee ou maior do que 99% ee, bem como misturas, incluindo misturas racêmicas, dos mesmos. Tais isôme- ros podem ser preparados por síntese assimétrica, por exemplo, usando intermediários quirais ou por resolução quiral.

Um número de agentes quelantes de metal e de inibidores de me- taloprotease úteis na presente invenção pode ser obtido comercialmente de companhias de especialidade química. Aqueles não comercialmente disponíveis podem ser sintetizados de matérias-primas comercialmente disponíveis usando reações conhecidas daqueles versados na técnica.

Por exemplo, 2,2'-bipiridilas e 1,10-fenantrolinas substituídas po- dem ser obtidas de 2,2'-bipiridilas ou 1,10-fenantrolinas halogenadas. Por exemplo, ácido 2,2'-bipiridina-6,6'-dicarboxílico pode ser obtido de 6,6'-dibromo-2,2'-dipiridila por troca de metal-halogênio por butil-lítio, por tratamento com gelo seco e acidificação [Buhleier et. al., Chem. Ber., 1978, 111: 200-204], Monossubstituição de uma bipiridila, por exem- plo, com CH2CHNI-l2(C02H) na posição 6, pode ser obtida pelo tratamen- to de 6-metil-2,2'-bipiridila com N-bromosuccinimida, seguido por alquilação com éster N-protegido-glicina. Os grupos de proteção podem então ser removidos por hidrólise ácida, (Imperiali B. e Fisher S.L., J. Org. Chem., 1992, 57: 757-759).

2,2'-Dipiridilas podem sofrer substituição nucleofílica nas posi- ções C6 e C 4 para introduzir substituint.es. Esta reação é mais favorável quando uma dipiridila halogenada é usada como a matéria-prima. Por exemplo, uma amina pode ser introduzida em C6 e/ou C6' usando 2,2'- dipiridila 6-mono ou di-halogenada e reagindo esta matéria-prima com amônia.

Ácidos bipiridil-sulfônicos podem ser preparados de 2,2'-bipiridila pelo aquecimento tanto com óleum (uma solução de trióxido de enxofre em ácido sulfúrico concentrado) quanto com sulfato de mercúrio (I- I)/ácido sulfúrico concentrado a 300°C.

Bipiridilas assimetricamente substituídas podem ser obtidas de bipiridilas simétricas, por exemplo, ácido 6'-metil-2,2'-bipiridila-6- carboxílico pode ser preparado de 6,6'-dimetil-2,2'-bipiridila por oxida- ção com dióxido de selênio, seguido pelo tratamento com nitrato de prata (Al-Saya e colaboradores, European J. Org. Chem., 2004, 173- 182).

Compostos de fórmula (II) podem ser preparados reagindo um benzaldeído apropriadamente substituído e uma cetona, tal como acetofenona ou acetona usando uma reação aldólica depois convertendo a hidroxicetona resultante em uma 1,3-dicetona, como mostrado no Esquema 1:

1. Cli

2. base catalysod hydrdysis

Esquema 1

10

Compostos de fórmula (II) na forma de tetralonas podem ser pre- parados usando a reação de Haworth seguida por substituição de a, como mostrado no Esquema 2: R-:

O

u

η

π

1. AlCIj

2. ZtVHC

ο

3. H2SOi Uv

K--

O

base

O

H'

,Jt ν

Os invertebrados que são inibidos de sofrer eventos remodela- dores na presente invenção são pragas que infestam internamente e externamente humanos ou animais, infestam plantas ou infestam propriedade ou um ambiente particular. Por exemplo, pragas que infestam internamente humanos ou animais incluem, mas, sem limita- ção, nematódeos, trematódeos e cestoides, pragas que infestam exter- namente humanos ou animais incluem, mas, sem limitação, piolhos, pulgas, ácaros e sarnas, pragas que infestam plantas incluem, mas, sem limitação, traças, besouros, lagartas de borboletas e nematóides, pragas que danificam a propriedade incluem, mas, sem limitação, cupins e pragas que infestam um ambiente incluem, mas, sem limita- ção, aracnídeos, baratas, lacraias, pulgas e piolhos.

Em outra realização, é fornecido um método de tratamento ou prevenção de uma infestação de praga de um hospedeiro ou ambiente compreendendo aplicar ou administrar ao hospedeiro ou ambiente uma quantidade efetiva de pelo menos um agente quelante de metal, em que o agente quelante de metal tem pelo menos dois átomos polares capazes de simultaneamente coordenar com um íon de metal e

i) um valor clogP de /1 e <4; e/ou

ii) uma refratividade molar na faixa de 40 a 90 cm3/ mole;

ou um sal farmaceuticamente, veterinaria ou agriculturalmente

aceitável dos mesmos.

O hospedeiro tratado pelos métodos da invenção pode ser selecio- nado de, mas não é limitado a, o grupo consistindo em humanos, ovelha, gado, cavalos, porcos, aves domésticas, cachorros e gatos. Os métodos de tratamento ou prevenção da presente invenção podem ser aplicáveis a plantas e ou outros locais de criação, alimentação ou

«

habitação de plagas. Plantas tratadas pelos métodos da invenção são preferencialmente selecionadas dentre, mas, sem limitação, o grupo que consiste em algodão, oleaginosas ou safras de grãos de cereais, tais como canola, silvicultura, tal como árvores, espécimes de plantas, tais como árvores, plantas ornamentais, tais como arbustos, flores, tais como crisântemo, margarida de michaelmas, gerãnio e rosas, árvores frutíferas, tais como macieiras, pereiras, ameixeiras, árvores de kiwi e variedades de citrinos, por exemplo, limões, laranjas, limas e toranjas, cereais, tais como milho e milho-doce, culturas de vinhas, tais como uvas, tubérculos, plantas de pastagem, tais como trevos-dos-prados e trevo-branco, lucerna e tremoços, e vegetais, como cultura de couves, por exemplo, brócolis e couve-flor, repolho, tomates, abobrinha, alho- poró, alface e feijões, bem como leguminosa, tais como feijão, soja, feijão-da-china, guandu e grão-de-bico e culturas de vinhas, como uvas.

O ambiente a ser tratado pelos métodos da presente invenção in- cluem os ambientes de um animal, humano ou planta que é ou pode se tornar infestado por uma praga e inclui, mas, sem limitação, solos circundantes de plantas, jardins, gramados, canis, celeiros ou enclau- suramento de animais, carpetes, vestuário, roupa de cama e camas e os locais de reprodução de pragas. O ambiente também inclui propriedade que possa ser danificada por uma praga, por exemplo, construções, mobília e produtos de madeira, que possam ser danificados ou destruí- dos por cupins.

As pragas preferidas que sofrem eventos de remodelação e podem ser controladas pelos métodos descritos incluem, mas, sem limitação, espécies de uma classe, subclasse ou uma ordem selecionada do filo Platelmintos, tais como as classes Cestoda e Trematoda, do filo Nemato- da, tais como as classes Adenophoria ou Secernentea, do filo Arthropo- da, tal como as classes Crustacea1 Arachnida, Insecta e Aearina.

Da classe eestoda existem duas ordens, a saber, Cestodana e Eu- cestodia das quais os cyclophillideans são da maior importância para humanos, porque eles infectam pessoas e gado. Duas importantes solitárias são a solitária do porco, Taenia soliurn, e a solitária do boi, T. saginata.

Da classe trematoda, a subclasse Digenea, que inclui os tremató- deos. Os trematódeos podem ser classificados em dois grupos, na base do sistema que eles infectam. Trematódeos de tecidos são espécies que infectam os dutos biliares, pulmões, ou outros tecidos biológicos, que incluem trematódeos pulmonares, Paragonimus westermani, e os trematódeos hepáticos, Clonorchis sinensis, Fasciola hepatiea e Faseiola gigantiea. O outro grupo é conhecido como trematódeos sangüíneos, e habitam o sangue em alguns estágios de seu ciclo de vida. Trematódeos sangüíneos incluem várias espécies do gênero Schistosoma.

Nematódeos, normalmente parasitários em humanos, incluem tri- churis, ancilóstomo, oxiúros, ácaris, e filárias. Dentro do filo nematódeo está a classe Adenophoria e a subclasse Enoplia, que inclui as lombri- gas. A maioria dos nematódeos nesta subclasse é de vida livre, mas o grupo também inclui a ordem Trichiurida, que inclui trichuris parasitá- rios e vermes triehina.

Também dentro dos nematódeos está o Secementea, subclasse Rhabdítia, que é, em sua maioria, composta por nematódeos parasitá- rios, embora existam algumas espécies de vida livre também. Uma ordem importante é a Ascaridida, que inclui vermes que infectam muitos mamíferos terrestres e marinhos. Famílias importantes dentro desta ordem incluem Ascarididae, que inclui a lombriga intestinal gigante e espécies relacionadas e Toxocaridae, que inclui parasitas de canídeos, felinos e guaxinins, mas que pode parasitar berrantemente humanos e causar larva migrans visceral. Outra ordem importante é a Strongylida, que inclui o gênero Metastrongylus, um nematódeo da família Metastrongylidae, normalmente encontrado como lungworms em porcos e às vezes causando bronquite verminosa. A subfamília Strong- ylinae (strongyles grandes) e Cyathostominae, (strongyles pequenos) são nematódeos importantes de cavalos, enquanto a família Triehostrongyli- dae contém um número de parasitas intestinais economi-camente importantes de ovelhas e gado, incluindo Haernonchus contortus, H. placei, Teladorsagia circumcincta, Trichostrongylus colubriformis e Coo- peria spp.

Além dos parasitas nematódeos de hospedeiros mamíferos, exis- tem diversos grupos de nematódeos parasitas de plantas que podem causar diversas perdas de colheita. Os gêneros mais comuns são Aphe- lenchoide (nematódeos foliares), Meloidogyne (nematódeos de galha), Heterodera, Globodera (nematódeos de cisto), tais como nematódeo em batata, Nacobhus, Pratylenehus (nematódeos das lesões), Ditylenehus Xiphinema, Longidorus, Triehodorus. Diversas espécies de nematódeos fitoparasitários causam danos histológicos a raízes, incluindo a forma- ção de galhas visíveis {Meloidgyne), que são sinais úteis para seu diag- nóstico no campo. Algumas espécies de nematódeo transmitem vírus de plantas por sua atividade de alimentação nas raízes. Um desses nema- tódeos é Xiphinema index, vetor do GFLV (Grapevine Fanleaf Vírus), uma doença importante de uvas. Outros nematódeos ligam casca de árvores e árvores florestais. O representante mais importante deste grupo é Bursaphelenchus xylophilus, o nematódeo do pinho, presente na Ásia e na América e recentemente descoberto na Europa.

Do crustacea, classe Maxillopoda, subclasse Maxillopoda, que in- clui o piolho de peixe.

Do Insecta, as ordens incluem: Lepidóptera, Iíemíptera, Ortóptera, Psocoptera, Isoptera, Coleóptera, Dictyoptera, Thysanoptera, Homópíera, Díptera, Siphonaptera e Phthiraptera, que compreende Anoplura e Mallophaga.

As pragas apropriadas que podem ser controladas usando os mé- todos da presente invenção incluem:

(a) da ordem dos lepidópteros (Lepidóptera), por exemplo, Adoxoph- yes orana, Agrotis ypsilon, Agrotis segetum, Alabama argillacea, Anticar- sia gemmatalis, Argyresthia conjugella, Autographa gamma, Cacoecia murinana, Capua reticulana, Chonstoneura fumiferana, Chilo partellus, Choristoneura oceidentalis, Chrysodexis Spp., Cirphis unipuneta, Cna- phalocrocis medinalis, Crocidolomia hinotalis, Crocidolomia pavonana, Cydia pomonella, Dendrolimus pini, Diaphania nitidalis, Diatraea gran- diosella, Earias insulana, Elasmopalpus lignosellus, Epiphyas postvitta- na (Walker), Eupoecilia ambiguella, Feltia subterranea, Grapholitha funebrana, Grapholitha molesta, Helicoverpa spp., tal como Helicoverpa armigera, Heliothis armigera, IIeliothis vireseens, Heliothis zea, Hellula undalis, Hibernia defoliaria, Hyphantria eunea, Hyponomeuta malinellus, Keiferia lycopersicella, Lambdina fiseellaria, Laphygma exígua, Leucopte- ra seitella, Lithocolletis blaneardella, Lobesia botrana, Loxostege stictiea- Iis1 Lymantria díspar, Lymantria monaeha, Lyonetia elerkella, Manduca sexta, Malacosoma neustria, Mamestra brassicae, Mocis repanda, Ope- rophthera brumata, Orgyia pseudotsugata, Ostrinia nubilalis, Pandemis heparana, Panolis flammea, Pectinophora gossypieüa, Phthorimaea operculella, Phyllocnistis citrella, IHeris brassicae, IHeris rapae, Plathype- na scabra, Platynota stultana, Plutella xylostella, Prays citri, Prays oleae, I^rodenia sunia, Prodenia ornithogalli, Pseudoplusia includens, Rhyacio- nia frustrana, Scrobipalpula absoluta, Sesamia inferens, Sparganothis pilleriana, Spodoptera frugiperda, Spodoptera littoralis, Spodoptera litura, Syllepta derogata, Synanthedon myopaeformis, Thaumatopoea pityo- eampa, Tortrix viridana, Trichoplusia ni, Tryporyza ineertulas, Zeiraphera eanadensis; especialmente Heliothis spp., Helicoverpa Spp., Crocidolomia pavonana, Pieris rapae, Phthorimaea operculella, Chrysodexis Spp., e Plutella xylostella;

(b) da ordem dos hemípteras (Hemiptera), por exemplo, Aphis, Bemi- sia, Phorodon, Aeneolamia, Empoasca, Parkinsiella, Pyrilla, Aonidiella, Coccus, Pseudococcus, Helopeltis, Lygus, Dysdercus, Oxycarenus, Neza- ra, Aleyrodes, Triatoma, Psylla, Myzus, Megoura, Phylloxera, Adelges, Nilaparvata, Nephotettix ou Cimwx spp.;

(c) da ordem dos ortópteras (Orthoptera), por exemplo, Gryllotalpa gryllotalpa, Locusta migratória, Melanoplus bivittatus, Melanoplus femur- rubrum, Melanoplus mexicanus, Melanoplus sanguinipes, Melanoplus spretus, Nomadacris septemfasciata, Schistocerca americana, Schistocer- ca peregrina, Stauronotus maroccanus, Schistocerca gregaria;

(d) da ordem dos psocópteros (Psocoptera), por exemplo, Peripsocus spp.;

(e) da ordem dos himenópteros (IIymenoptera), por exemplo, Athalia rosae, Atta cephalotes, Atta sexdens, Atta texana, Hoplocampa minuta, Hoplocampa testudinea, Iridomyrmes humilis, Iridomyrmex purpureus, Monomorium pharaonis, Solenopotes eapillatus, Solenopsis geminata, Solenopsis invicta, Solenopsis richteri, Technomyrmex albipes;

(í) da ordem dos térmites (Isoptera), por exemplo, Calotermes flavicol- lis, Coptotermes spp, Leucotermes flavipes, Macrotermes subhyalinus, Nasutitermes spp, tais como Nasutitermes walkeri, Odontotermes formo- sartus, Reticulitermes lucifugus, Termes natalensis;

(g) da ordem dos besouros (Coleóptera), por exemplo, Anthonomus grandis, Anthonomus pomorum, Apion vorax, Atomaria linearis, Blasto-

phagus piniperda, Cassida nebulosa, Cerotoma trifurcata, Ceuthorhyn- chus assimilis, Ceuthorhynchus napi, Chaetocnema tihialis, Conoderus vespertinus, Crioceris asparagi, Dendroctonus refipennis, Diahrotica longicomis, Diahrotica 12-punctata, Diahrotica virgifera, Epilaehna varivestis, Epitrix hirtipennis, Eutinohothrus brasiliensis, Hylobius abie- tis, Hypera brunneipennis, Hypera postiça, Ips typographus, Lema bilineata, Lema rnelanopus, Leptinotarsa decemlineata, Limonius califor- nicus, Lissorhoptrus oryzophilus, Melanotus communis, Meligethes aeneus, Melolontha hippocastani, Melolontha melolontha, Oulema oryzae, Ortiorrhynchus suleatus, Otiorrhynchus ovatus, Phaedon eochleariae, Phyllopertha horticola, Phyllophaga sp., Phyllotreta ehrysoeephala, Phyllotreta nemorum, Phyllotreta striolata, Popillia japoniea, Psylliodes napi, Scolytus intrieatus, Sitona lineatus, Sitophilus granarius;

(h) da ordem Dictyoptera, por exemplo, das famílias Polyphagidae, Bladberidae, Blattidae, Epilampridae, Chaeteesidae, Metallyeidae,

Mantoididae, Amorphoscelid.ae, Eremiaphilidae, IIymenopudidae, IvIanti- dae e Empusidae;

(i) da ordem dos tripés (Thysanoptera), por exemplo, Frankliniella fusca, Frankliniella occidentalis, Frankliniella tritici, Haplothrips tritici, Heliothrips haemorrhoidalis, Scirtothrips citri, Thrips oryzae, Thrips

palmi, Thrips tabaci;

(j) da ordem dos homópteros (Homoptera), por exemplo, Acyrthosi- phon onobrychis, Acyrthosiphon pisum, Adelges laricis, Aonidiella auran- tii, Aphidula nasturtii, Aphis fabae, Aphis gossypii, Aphis pomi, Aulacor- thum solani, Bemisia tabaci, Brachycaudus cardui, Brevicoryne brassica- e, Dalbulus maidis, Dreyfusia nordmannianae, Dreyfusia piceae, Dysa- phis radicola, Empoasca fabae, Eriosoma lanigerum, Laodelphax striatel- la, Macrosiphum avenae, Macrosiphum euphorbiae, Macrosiphon rosae, Megoura viciae, Metopolophium dirhodum, Myzus persicae, Myzus cerasi, Nephotettix cincticeps, Nilaparvata lugens, Perkinsiella saccharicida, Phorodon humuli, Psylla mali, Psylla piri, Psylla pyricola, Rhopalosiphum maidis, Schizaphis graminum, Sitobion avenae, Sogatella furcifera, Toxoptera citricida, Trialeurodes abutilonea, Trialeurodes vaporariorum, Viteus vitifolii;

(k) da ordem dos dípteros (Diptera), por exemplo, Anastrepha ludens, Ceratitis capitata, Contarinia sorghicola, Dacus cucurbitae, Dacnxs oleae, Dasineura brassicae, Delia coarctata, Delia radicum, Hydrellia griseola, Hylemyia platura, Liriomyza sativae, Liriomyza trifolii, Lucilia Sp., Maye- tiola destructor, Musca sp., Orseolia oryzae, Oscinella frit, Pegomya hyoscyami, Phorbia antiqua, Phorbia brassicae, Phorbia coarctata, Khagoletis cerasi, Rhagoletis pomonella\

(1) da ordem Phthiraptera (Anoplura), por exemplo, Pthirus púbis, Pediculus humanus capitus, Pediculus humanus humanus, o piolho sugador de nariz longo, linognathus vituli, o piolho sugador de nariz curto, IIaematopinus eurysternus, o piolho azul pequeno, Solenopotes capillatus, o piolho do búfalo, Haematopinus tuberculatus, e o tail switch louse, Haematopinus quadripertusis, e da Mallophaga, por exemplo, do gênero Bovicola, tal como Bovicola ovis ou Bovicola bovis, Durnulania, Trichodectus e Menopon; especialmente Bovicola ovis ou Bovicola bovis; (m) da ordem dos sifonapteros (Siphonaptera), por exemplo, Ctenoce- phalides ou Pulex spp.

(n) da ordem Blattodea, incluindo Periplaneta Americana, Blattella germanica e Blattela asahinai;

(o) da Dermaptera, que são as tesourinhas;

(p) da ordem Arachnida, por exemplo, Ixodes holocyclus, Boophilus microplus, Rhipicephalus sanguineus, Sarcoptes seabiei var. humani, Sarcoptes seabiei canis, Sarcoptes seabiei suis, Sarcoptes seabiei bovis, Psoroptes ovis e Dermatophagoides spp., especialmente Sarcoptes seabiei var. humani, Sarcoptes seabiei canis, Sarcoptes seabiei suis, Sarcoptes seabiei bovis, Psoroptes ovis e Dermatophagoides spp. As pragas especialmente preferidas que infestam plantas incluem IIelicoverpa spp., tais como Helicoverpa armigera, Helieoverpa Zea e Helieoverpa punetigera (Budworms), Croeidolomia pavonana (lagarta da cabeça de repolho), Piens rapae (borboleta do repolho branco), Phthori- rriaea operculella (traça da batata), Chrsyodexis spp. (Tobacco loopers), Plutella xylostella (Traça das crucíferas) e Epiphyas postvittana (Walker) (traça da maçã), Cydia pomonella (Mariposa-das-maçãs), Weevil spp, Aphelenchoides (nematódeos foliares), Meloidogyrie (nematódeos de galha), Heterodera, Globodera (nematódeos de cistos), tais como nema- tódeo em batata, Nacobhus, Pratylenehus (nematódeos das lesões), Ditylenehus, Xiphinema, Longidorus, Trichodorus Meloidogyne e Xiphi- nema index.

As pragas especialmente preferidas que infestam animais domés- ticos incluem Bovieola ovis (piolho de ovelha), Bovicola hovis, Haemato- pinus eurysternus (piolho do gado de nariz curto), Linognathus vituli (piolho do gado de nariz longo), Solenopotes eapillatus (tubereule-hearing lousé), Sareoptes seabiei canis (sarna), Sareoptes seabiei suis, Sareoptes seabiei bovis, Psoroptes ovis, Haemonehus eontortus, II. placei, Telador- sagia circximeineta, Tnchostrongylus eolubriformis, e Cooperia spp.

As pragas especialmente preferidas que infestam humanos inclu-

em IyIhirus púbis, Pediculus humanus capitus, Pediculus humanus humanus, Sareoptes seabiei var. humani e Dermatophgoides spp.

Numa modalidade, a praga que se previne que sofra um evento de remodelação pela presente invenção é selecionada a partir do grupo que consiste em ovos de piolho, pulga, carrapato, mosca, ácaro e de outras pragas picadoras ou sugadoras de sangue. Em uma realização, o ovo da praga é um ovo de piolho, mais preferencialmente ovo de piolho de cabeça. Piolhos são parasitas que se alimentam de pele animal e sangue e eles depositam seus sucos digestivos e material fecal na pele. Essas matérias, bem como a ferida da picada, causam irritação e lesões de pele do coçar resultante, e podem causar uma infecção séria com inflamação ganglionar. Piolhos são também vetores de certas doenças, tais como tifo epidêmico ou exantemático e febre recorrente. O piolho- fêmea adulto tem uma duração de vida de cerca de um mês e pode pôr até 10 ovos por dia. Piolhos que podem infectar humanos podem incluir as espécies de piolho-caranguejo (l^thirus púbis) e as espécies separadas Pediculus humanus, que é composta de duas subespécies, Pedicnxlus humanus capitis ou piolho de cabeça e Pediculus humanus humanus ou piolho do corpo (Busvine, Antenna, 1993, 17: 196-201). As subespécies de piolhos acima estão intimamente relacionadas e são conhecidas por cruzar entre si com sucesso na situação de laboratório (Busvine, Cuta- neous Infestations and Insect Bites, 1985, 163-174).

O piolho de cabeça Pediculus humanus var. capitis, é um ectopa- rasita de hospedeiro específico que vive exclusivamente em cabeças de humanos e se alimenta por sucção de sangue do escalpo. Seguindo uma refeição de sangue, o piolho-fêmea adulto maduro colocará até 10 ovos próximo ao escalpo por um período de 24 horas. Os ovos são ligados firmemente ao eixo do cabelo por uma cola. De sete a dez dias após a colocação, dependendo da temperatura e umidade, os ovos irão eclodir e as ninfas emergentes começam a se alimentar. As ninfas progridem por três mudas (Io instar, 2o instar, 3o instar), com cada muda levando de 3 a 5 semanas para completar. Seguindo a muda final, o macho ou fêmea adulta emerge, com o acasalamento ocorrendo logo dois dias depois. Dentro de horas de alimentação, ovos serão produzidos e o ciclo continua. Todo o ciclo de vida do ovo ao ovo leva aproximadamente de 20 a 30 dias para se completar, dependendo das condições de aquecimento e umidade. Seguindo à eclosão do ovo, as cascas de ovos permanecem ligadas ao eixo do cabelo e irão gradual- mente se distanciar do escalpo conforme o cabelo cresce. Ovos eclodidos (lêndeas) são relativamente fáceis de serem detectadas devido à sua natureza refrativa, aparecendo brancos sob luz artificial, em contraste, ovos não eclodidos têm cor marrom levemente pálido, permitindo que eles combinem com a maioria de cores de cabelo e, assim, dificultando sua detecção.

Em outra mdalidade, a praga que é prevenida de sofrer um evento de remodelação pela presente invenção é uma que infesta um hospedei- ro vegetal, incluindo as raízes de planta. Em uma realização preferida, a praga é um ovo de budivorm, um ovo de lagarta, uma borboleta, uma traça ou um nematóide de raiz. Lagartas, borboletas, traças, nemató- deos de solo e suas larvas se alimentam de plantas de culturas valiosas, * 10 tais como algodão, culturas de oleaginosas, tais como canola, plantas ornamentais, flores, árvores frutíferas, culturas de cereais, culturas de vinhas, culturas de tubérculos, culturas de pastagens, tabaco, legumi- nosas e vegetais, especialmente culturas de couve, tais como couve-flor e brócolis, algodão, milho, milho-doce, tomates, tabaco e leguminosas, tais como soja, feijão, feijão-da-china, guandu e grão-de-bico.

As larvas de traça das crucíferas (Plutella xylostella) se alimentam de todas as plantas da família Brassica/cruciferae, incluindo canola e mostarda, culturas vegetais, tais como brócolis, couve-flor e repolho e também em diversas plantas de estufa. Normalmente, a traça das crucíferas leva cerca de 32 dias para se desenvolver de ovo para adulto. No entanto, dependendo da comida e das condições de tempo, uma geração pode levar de 21 a 51 dias para se completar. Traças fêmeas adultas colocam uma média de 160 ovos durante um período de vida de cerca de 16 dias. Uma fêmea colocará ovos à noite e colocará o maior número de ovos na primeira noite após emergir da pupa. Os ovos são pequenos, esféricos ou ovais e amarelo-esbranquiçado e são grudados à superfícies superior e inferior de uma folha tanto isoladamente quanto em grupo de dois ou três. Os ovos são normalmente postos ao longo das veias da folha onde a superfície da folha é desigual. Os ovos eclodem em cerca de cinco a seis diais. Após eclodir, as larvas se entocam na folha e começam a comer os tecidos da folha internamente. Após cerca de uma semana, as larvas saem da folha e se alimentam externamente. As larvas sofrem muda três vezes durante 10 a 21 dias e na maturidade são cerca de 12 mm de comprimento. As larvas fazem pupa em casulos delicados em malha aberta ligados às folhas e o estágio de pupa dura de a 15 dias.

Budworrns, tais como lagarta da espiga do milho, bicho do toma- te, lagarta-da-maçã-do-algodoeiro, e cotton Bollworm são pragas sérias em um número de culturas, tais como girassóis, abobrinha, feijões, * 10 pimentas, alfafas, batatas, alho-poró, algodão, milho, ameixas, plantas cítricas, tomates, tabaco e alface, e flores, tais como gerânios e rosas. O budworm ocorre em muitas regiões do mundo e em climas temperados podem ter 2-3 gerações por temporada com hibernação em pupas no solo. Em regiões tropicais, os budworrns podem continuar a ser ativos durante o ano. Ovos são pequenos (~ 0,5 mm de diâmetro) e em forma de domo com um fundo levemente achatado. Os ovos são normalmente postos singularmente próximo a brotos ou partes de flores ou em folhas. Um adulto pode pôr 500-3000 ovos. Os ovos eclodem após apenas três dias a 25°C ou em mais tempo a temperaturas mais frescas, por exem- pio, 9 dias a 17°C. O período de alimentação larval é de cerca de 19 a 26 dias sob condições de temperatura e alimentação favoráveis e, quando totalmente desenvolvidas, as larvas se movem para o solo para fazer pupa. O período pupal em geral dura de 8 a 21 dias, embora pupas diapáusicas possam hibernar em solo em regiões temperadas.

Em outra modalidade, a praga que é impedida de sofrer um even-

to de remodelação pela presente invenção é uma que infeste interna- mente um humano ou animal. Em uma realização preferida, a praga é um nematódeo, um trematódeo ou um cestóide. Nematódeos (lombri- gas), trematódeos e cestóides são vermes achatados e podem causar dano significante a humanos ou animais agriculturalmente importan- tes, tais como ovelhas, vacas, porcos e cabras.

Haernonchus contortus, um parasita intestinal que infesta ovelhas e cabras, e vermes machos e fêmeas adultos vivem no abomaso ou no estômago verdadeiro de animais ruminantes. Os vermes fêmeas deposi- tam 5.000 a 10.000 ovos por dia, os quais saem do hospedeiro com as fezes. Após a eclosão os jovens do primeiro e segundo estágios se ali- mentam de bactérias. Os jovens do terceiro estágio mantêm uma cutí- cula como uma bainha e o jovem do terceiro estágio é ingerido pelo hospedeiro enquanto pastando. Os vermes jovens com bainha passam * 10 para o hospedeiro e exbainha antes de entrar no abomaso. No abomaso os vermes jovens derramadas se entocam na mucosa e se alimentam de sangue. Uma vez atingida a vida adulta, ocorre o acasalamento e outros ovos são postos. Todo o ciclo de vida deste parasita leva aproximada- mente 21 dias. Ovelhas infestadas podem sofrer Ul thrift resultando em perda de peso e em grandes infestações pode resultar em anemia, que, deixada sem tratamento, pode causar a morte do animal.

Em uma modalidade da presente invenção, os métodos e compo- sições são para tratar ou prevenir infestação externa de um humano ou animal por uma praga ou parasita que sofre eventos de remodelação, tais como piolhos, pulgas, ácaros ou carrapatos, inibindo esses eventos de remodelação. A inibição de eventos de remodelação tem a vantagem de interromper os ciclos de vida e/ou ciclos de reprodução da praga ou parasita controlando com isso a infestação.

Em outra realização os métodos e composições são para tratar ou prevenir infestação interna de um humano ou animal por uma praga ou parasita que sofre eventos de remodelação, tais como nematódeos e trematódeos, inibindo a transição de um estágio do ciclo de vida da praga ou parasita para o próximo. A inibição de eventos de remodelação tem a vantagem de interromper os ciclos de vida e ciclos de reprodução da praga ou parasita em um número de pontos diferentes controlando, assim, a infestação.

Ainda noutra alternativa modalidade, os métodos e composições são para tratar ou prevenir infestação de um ambiente com uma praga ou parasita inibindo eventos de remodelação da praga ou parasita.

Por exemplo, os ovos das pragas ou parasitas podem ser postos

em solo ao redor de uma planta, em carpete ou cortinas em uma casa (por exemplo, ovos de pulgas), roupas de cama ou colchões (por exem- plo, ovos de ácaros ou ovos de percevejos) ou sobre ou na proximidade de estruturas de madeira, tais como construções ou outros produtos de madeira (por exemplo, ovos de cupins). A eclosão dos ovos permite reinfestação de humanos, animais ou plantas no ambiente ou danos a produtos no ambiente. A inibição de eventos de remodelação tem a vantagem de interromper os ciclos de reprodução da praga ou parasita, controlando, assim, a infestação. Ademais, a prevenção da reinfestação resulta em uma redução do número de aplicações de pesticidas reque- ridos para controlar uma infestação.

Ainda noutra alternativa realização da presente invenção, os mé- todos e composições da invenção são para tratar ou prevenir infestação larval de plantas inibindo eventos de remodelação. Os presentes reque- rentes identificaram agentes quelantes de metal como agentes efetivos para inibir eventos de remodelação que afetam tanto ovos quanto larvas que se alimentam de plantas comercialmente valiosas. O uso de agentes quelantes de metal para inibir eventos de remodelação tem a vantagem de inibir ciclos de reprodução de organismos que produzem larvas que se alimentam de plantas comercialmente valiosas, controlando, desse modo, a infestação por praga das plantas comercialmente valiosas.

O termo "metaloprotease", como usado neste documento, é usado para ser referir a uma protease envolvida nos eventos de remodelação de invertebrados durante um ou mais estágios do desenvolvimento de uma espécie de praga, em que a protease tem um íon de metal ativo que age como um catalisador. Preferencialmente, a metaloprotease contém um íon de zinco que participa na catálise polarizando uma molécula de água para atacar uma ligação de substrato de peptídeo. Mais preferen- cialmente, a metaloprotease é sensível a agentes quelantes de metal que são capazes de diretamente ou indiretamente bloquear sua atividade. A metaloprotease pode estar envolvida na indução de eclosão de ovo agindo no opérculo de um ovo para facilitar a eclosão do ovo ou pode reduzir a força da casca do ovo, permitindo que a ninfa ou lavas desobs- truam a casca durante a eclosão. A metaloprotease pode também estar envolvida na facilitação da mudança de um estágio larval ou imaturo para um estágio subseqüente e também para a forma madura ou adulta. A metaloprotease pode estar diretamente ou indiretamente envolvida nos eventos de remodelação. Metaloproteases apropriadas envolvidas em eventos de remodelação podem incluir endoproteases (enzimas que se decompõe dentro da cadeia peptídica) e exoproteases (enzimas que decompõem aminoácido(s) dos terminais de peptídeos). Exoproteases podem ainda ser categorizadas como carboxiproteases (que decompõem aminoácido(s) do C-terminal) ou aminopeptidase (que decompõem aminoácidos do N-terrninal). MctalocarboxipioLeases reque- rem um cátion bivalente (normalmente Zn2+) para atividade, enquanto aminopeptidases são em geral classificadas de acordo com sua depen- dência em íons de metal (Zn2+ ou Mg2+). Eles existem tanto em formas livre quanto ligado à membrana e atividade de auxílio em pll alto (8-10). Um método de detectar metalproteases associados com eclosão de ovo pode envolver coletar o fluido circundante do embrião em desenvolvi- mento tanto no momento da eclosão do ovo quanto lavando as cascas de ovo vazias logo após a eclosão do ovo e analisando a amostra para a presença de proteases usando análise SDS-PAGE com substrato de gelatina. Tendo apresentado a presença de atividade proteolítica da amostra é então possível incubar a amostra na presença de um inibidor de metaloprotease que foi identificado como tendo o arranjo requerido de átomos polares e valores clogP e/ou refratividade molar e em algu- mas modalidades, uma preferência por quelantes com íons de zinco, e então reanalisar as amostras tratadas para determinar se a atividade das proteases extraídas do ovo foi inibida. Tendo mostrado inibição da atividade de metaloprotease(s) obtida do ovo eclodido, é então possível expor ovos não eclodidos, por exemplo, ao mesmo inibidor e avaliar se inibição da eclosão de ovos ocorre. Abordagem similar pode ser feita para determinar agentes quelantes de metal apropriados para inibir outros eventos de remodelação, tais como apólise, ecdise, derramamen- to da bainha ou metamorfose. Por exemplo, o fluido pode ser obtido de invertebrados sofrendo apólise, ecdise ou metamorfose e a presença de proteases detectada como acima descrito. Agentes quelantes de metal apropriados podem ser então determinados. Metaloproteases envolvidas na eclosão de ovo pode também ser identificado pela identificação de um gene codificando uma metaloprotease, silenciando aquele gene e mostrando que o ovo é incapaz de eclodir pelos métodos conhecidos daqueles versados na técnica.

A frase "inibindo eventos de remodelação", como usada neste do- cumento, é usada para significar a inibição de enzimas de proteases envolvidas em eventos de remodelação que envolvem o invólucros de organismos multicelulares invertebrados, por exemplo, ovos, bainhas, carapaças, exoesqueletos, cistos, casulos ou ooteca. Na presente inven- ção, um estágio do ciclo de vida particular da praga invertebrada é exposto a um agente quelante de metal que é capaz de prevenir um evento de remodelação quando comparado ao mesmo estágio de ciclo de vida que não é tratado. No caso de eclosão de ovo, este evento de remo- delação pode ser caracterizado pelo hatchflap ou opérculo do ovo abrin- do e, logo em seguida, a emersão de uma larva ou ninfa. No caso do piolho, a cabeça aparece primeiro, seguida pelo tórax, ao qual as pernas estão ligadas. Finalmente, o abdômen emerge e a ninfa se livra do ovo. No caso de um ovo de traça ou borboleta, a casca de ovo é enfraquecida pela ação de enzimas de protease e a larva emergente rompe a casca do ovo. A eclosão de ovo é tomada para excluir danos ou ruptura acidental de uma casca de ovo.

Preferencialmente, o agente quelante de metal é um composto ca- paz de inibir eventos de remodelação quando é aplicado a um estágio do ciclo de vida das pragas em qualquer momento entre a colocação e durante a vida adulta.

O evento de remodelação ocorre preferencialmente em uma praga presente em, mas não limitada a, um organismo hospedeiro, tal como na pele, pelo, pele ou velo de um animal ou pele ou pelo, tal como cabelo de um humano. Em modalidades alternativas da invenção o evento de remodelação ocorre em uma praga presente em plantas hospedeiras ou nas raízes de plantas incluindo culturas de cereais, árvores frutíferas, algodão, culturas de oleaginosas, plantas ornamen- tais, flores, culturas de vinhas, culturas de tubérculos, culturas de pastagens e vegetais. Ainda noutra alternativas modalidades, o evento de remodelação ocorre em uma praga que está presente em um ambien- te ou local de criação, tal como, mas não limitado a, casas e constru- ções, recintos para animais domésticos ou de fazenda, carpetes, roupas de cama, como lençóis e cobertores, cortinas e móveis. Ainda noutra alternativas modalidades, o evento de remodelação ocorre em uma praga que está dentro de um hospedeiro, tal como, mas não limitado a, humanos, animais domésticos e de fazenda.

De acordo com a presente invenção, a praga pode ser exposta a um agente quelante de metal por quaisquer meios apropriados. Uma pessoa versada na técnica apreciará que estes meios possam variar amplamente, dependendo de se o agente quelante deve ser aplicado a um hospedeiro, tal como uma planta, ou aplicado ou administrado a um animal, incluindo um humano, ou aplicado a vários ambientes de outros locais de reprodução, e dependendo da natureza e tipo da praga mirada. Os meios apropriados para expor a praga presente em animais a agentes quelantes de metal incluem, mas, sem limitação, aplicação tópica direta, tal como por imersão ou por pulverização, implantação, formulações ou dispositivos de lançamento retardado, ou oralmente. Onde a invenção é aplicada a humanos, formulações apropriadas para aplicação tópica incluem, mas, sem limitação, borrifadores, aerossóis, xampus, musses, cremes e loções, e formulações apropriadas para aplicação interna incluem, mas, sem limitação, comprimidos, cápsulas ou formulações líquidas. Em algumas situações, administração paren- teral por injeção pode ser o meio mais apropriado de tratamento para humanos ou animais. Nos casos em que o agente quelante de metal deva ser aplicado a plantas, os meios apropriados incluem, mas, sem limitação, borrifadores, pós, incluindo talcos molháveis, grânulos molháveis e concentrados de suspensão, pastilhas, líquidos, incluindo microencapsulamento e aerossóis. O método da invenção também abrange o uso concorrente ou sucessivo de dois ou mais agentes que- lantes de metal ou o uso de um ou mais agentes quelantes de metal em conjunção concorrentemente ou sucessivamente com outros agentes conhecidos que controlam pragas.

Ainda noutro aspecto da invenção, os métodos e composições po- dem incluir outros pesticidas que controlam a eclosão, larvas, ninfas ou pragas adultas. Por exemplo, pesticidas apropriados que podem ser usados em conjunção, tanto simultaneamente, separadamente ou seqüencialmente, com os agentes quelantes de metal da presente invenção incluem lactonas macrocíclicas, tais como espinosade, inseti- cidas botânicos, inseticidas carbamatos, inseticidas desidratantes, inseticidas dintrofenóis, inseticidas com flúor, inseticidas formamidina, tais como armitraz, inseticidas fumigantes, inseticidas inorgânicos, reguladores de crescimento de insetos (incluindo inibidores de síntese de quitina, análogos a hormônios juvenis, hormônios juvenis, agonistas de hormônio de muda, antagonistas de hormônios de muda, hormônios de muda, inibidores de muda), inseticidas nicotinóides, inseticidas organoclorados, inseticidas organofosforados, inseticidas de organotio- fosfato heterocíclico, inseticidas de organotiofosfato fenil, inseticidas de fosfonatos, inseticidas de fosfonotioatos, inseticidas de fosforamidatos, inseticidas de fosforamidotiatos, inseticidas de fosforodiamidas, inseti- cidas de oxadiazinas, inseticidas de ftalimidas, inseticidas de pirazola, inseticidas de piretróides, inseticidas de pirimidinaminas, inseticidas de pirrol, inseticidas de ácido terônico, inseticidas de tiouréia e inseticidas de uréia, incluindo agentes descritos nas EP 0191236, US 5.288.483 e US 6.727.228. Outros inseticidas úteis incluem copolióis de dimeticona, tais como aqueles descritos na US 6.663.876 e na US 6.607.716, que têm baixa toxicidade. Nemiticidas úteis que podem ser usados incluem Oxfendazole, Albendazole, Mebendazole/closantel, Fenbendazole e triclabenzazole. Infecção por trematódeos e cestóides podem também ser tratadas com Praziquantel.

O agente quelante de metal pode ser aplicado ao cabelo ou pele de um hospedeiro quando o hospedeiro é um humano ou animal, preferen- cialmente em uma região que é infestada por uma praga. A infestação pode ser devido a pragas selecionadas do grupo consistindo em piolhos, pulgas, carrapatos, ácaros e outras pragas picadoras ou sugadoras de sangue, e combinações das mesmas. O agente quelante de metal pode ser aplicado topicamente na forma de pomadas, composições aquosas, incluindo soluções e suspensões, cremes, loções, aerossóis, borrifadores ou talcos. Quando a praga infesta internamente o humano ou animal, o agente quelante de metal pode ser aplicado ou administrado interna- mente, por exemplo, na forma de um comprimido, cápsula ou formula- ção líquida ingerível. Quando o hospedeiro é uma planta, a infestação pela praga é preferencialmente devida a pragas selecionadas de lagar- tas, borboletas, pragas ou nematódeos. O agente quelante de metal pode ser aplicado topicamente, por exemplo, na forma de um spray ou pó. Quando a infestação é no ambiente, tal como uma infestação por cupins, o agente quelante de metal pode ser aplicado em uma formula- ção tal como um spray, fumigante ou pó.

O termo "quantidade efetiva" significa uma concentração de pelo menos um agente quelante de metal suficiente para fornecer tratamento ou prevenção de uma infestação por praga em um hospedeiro ou em um ambiente. A quantidade efetiva de um agente quelante de metal usada nos métodos da presente invenção pode variar dependendo do hospe- deiro e do tipo e nível da infestação. Em uma modalidade, o agente quelante de metal é aplicado no escalpo da uma pessoa sofrendo de infestação por piolho de cabeça e é deixado na pessoa tratada por um período de tempo para prevenir eclosão de ovos de piolho. Preferencial- mente, o período de tempo é entre 5 e 15 minutos. O agente quelante de metal é preferencialmente usado a uma concentração de entre cerca de 0,OOOlmM a 1M, preferencialmente 0,01mM e IOOmM, mais preferenci- almente na faixa de 0,lmM e IOOmM. A quantidade efetiva depende do agente quelante de metal usado. Entretanto, alguns componentes de dipiridila podem convenientemente ser aplicados na faixa de 5 mM a IOOmM, especialmente em um nível de cerca de 50mM. Quantidades apropriadas de compostos de fórmula (II), tais como compostos de tetralona, podem ser aplicados a um nível na faixa de 0,5 mM a IOOmM, especialmente ImM a 50mM. Já que um número significante de proteases mamíferas requer zinco para sua atividade e pode ser afetado por agentes quelantes de metal, seria necessário garantir que o agente quelante de metal tenha sido usado em uma quantidade segura e efetiva e mire preferencialmente especialmente em um evento de remodelação específico, tal como uma eclosão de ovo, apólise, ecdise, derramamento da bainha ou metamorfose.

Em outra realização o agente quelante de metal é aplicado a uma planta comercialmente valiosa para prevenir eventos de remodelação ocorrendo numa praga que estão envolvidos, por exemplo, na eclosão de ovo ou muda. O agente quelante pode ser aplicado diretamente ou indiretamente em pragas que estão presentes no solo ou nas folhas, brotos, troncos, flores ou frutos de uma planta por aplicação em spray, por escovação ou espanando. As composições apropriadas incluem concentrados emulsificáveis, soluções diluíveis ou borrifáveis direta- mente, emulsões diluídas, talcos molháveis, talcos, pós ou grânulos solúveis. O agente quelante de metal é preferencialmente usado em uma concentração desde cerca de 0,0001 mM a 1M, preferencialmente 0,01mM e IOOmM, mais preferencialmente na faixa de 0,lmM e 30mM. A quantidade efetiva depende do agente quelante de metal usado. Entretanto, alguns compostos de dipiridila podem apropriadamente ser aplicados na faixa de 5 mM a 15 mM, especialmente em um nível de cerca de 10 mM.

Quantidades apropriadas de compostos de fórmula (II) incluem, mas, sem limitação, a faixa de O1ImM a 20mM, especialmente I1OmM a mM.

O hospedeiro tratado pelos métodos da invenção pode ser selecio- nado de, mas, sem limitação, o grupo consistindo em humanos, ovelha, gado, cavalos, porcos, aves domésticas, cachorros e gatos. Os métodos de tratamento ou prevenção da presente invenção podem ser aplicados a plantas e ou outros locais de reprodução de pragas. Plantas ou suas raízes tratadas pelos métodos da invenção são preferencialmente sele- cionadas a partir do grupo consistindo em algodão, culturas de oleagi- nosas, tal como canola, plantas ornamentais, tais como arbustos, flores, tais como crisântemo, margarida de michaelmas, gerânio e rosas, árvores frutíferas, tais como macieiras, pereiras, ameixeiras, árvores de kiwi, de groselha e variedades de citrinos, por exemplo, limões, laranjas, limas e toranjas, cereais, tais como milho e milho-doce, culturas de vinhas, tais como uvas, tubérculos, plantas de pastagem, tais como trevos-dos-prados e trevo-branco, lucerna e tremoços, e vegetais, como cultura de couves, por exemplo, brócolis e couve-flor, repolho, tomates, abobrinha, alho-poró, alface e feijões, bem como leguminosas, tais como feijão, soja, feijão-da-china, guandu e grão-de-bico.

As composições da presente invenção podem ser formuladas como soluções e emulsões. Excipientes apropriados, tais como emulsificado- res, surfactantes, estabilizadores, corantes, intensificadores de penetra- ção e antioxidantes, também podem estar presentes nas composições. Veículos apropriados que podem ser adicionados nas composições podem incluir água, soluções salinas, álcoois, glicóis de polietileno, gelatina, lactose, esterato de magnésio e ácido silícico. As composições podem incluir soluções aquosas estéreis e não estéreis. Numa modali- dade, as composições estão em uma forma solúvel e o agente quelante de metal é diluído em uma solução de água ou salina tamponada estéril solúvel. As composições podem também ser formuladas como suspen- sões em meio aquoso, não aquoso ou mistura-do. As suspensões aquosas podem ainda conter substâncias que aumentam a viscosidade da suspensão e podem também conter estabilizadores. As soluções podem também conter tampões, diluentes e outros aditivos apropriados. As composições podem ir<~"-lnir outros rnmnnrienteR adiuntos nue são

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compatíveis com a atividade do agente quelante de metal. As composi- ções da presente invenção podem ser formuladas e usadas como espu- mas, emulsões, microemulsões, xampus, musses, cremes e geléias. As formulações das composições acima descritas seriam conhecidas da- queles versados no campo dos pesticidas.

Os ingredientes ativos de acordo com a invenção podem ser usa-

dos para inibir eventos de remodelação que ocorrem em pragas em plantas ou em suas raízes, principalmente em culturas de plantas úteis e ornamentais na agricultura, na horticultura e na silvicultura, ou em partes de tais plantas, tais como frutos, flores, folhagem, caule, tubér- culo ou raízes e, em alguns casos, até em partes das plantas que são formadas em um momento mais tardio é concedida proteção contra estas pragas. Nestas composições, o ingrediente ativo é empregado juntamente com pelo menos um dos auxiliares convencionalmente usados na técnica de formulação, tais como extensores, por exemplo, solventes ou veículos sólidos, ou tais que compostos de superfície ativa (surfactantes).

São exemplos de solventes apropriados: hidrocarbonetos aromáti- cos parcialmente hidrogenados ou não hidrogenados, preferencialmente as frações C8-C12 de alquilbenzenos, tais como misturas de xileno, naftalenos alquilados ou tetrahidronaftaleno, hidrocarbonetos alifáticos ou cicloalifãticos, como parafinas ou ciclohexano, álcoois, tais como metanol, etanol, propanol ou butanol, glicóis e seus éteres e ésteres, tais como glicol de propileno, dipropileno glicol éter, glicol de hexileno, glicol de etileno, dietóxi de glicol, etileno glicol monometil éter ou etileno glicol monoetila éter, cetonas, tais como ciclohexanona, isoforona ou diacetona álcool, solventes fortemente polares, tais como N- metilpirrolidina-2-ona, N-metil-pirrolidina, dimetil sulfóxido ou N,N- dimetilformamida, água, colza livre ou epoxidada, óleo de mamona, coco ou soja, e óleos de silicone.

Veículos sólidos que são usados, por exemplo, para pós e talcos dispersíveis são, em regra, minerais naturais do terreno, tais como calcita, mica, caulim, montmorilonita ou atapulgita. Para melhorar as propriedades físicas, também é possível adicionar sílicas altamente dispersas ou polímeros altamente absortivos. Veículos adsortivos de partículas apropriados para grânulos são tipos porosos, tais como, pedra-pomes, pó de tijolo, sepiolita ou bentonita, e materiais de veículos não sortivos apropriados são calcita ou areia. Ademais, um grande número de materiais granulados de natureza orgânica ou inorgânica pode ser usado, em particular dolimita ou resíduos de plantas pulveri- zadas. Compostos de superfície-ativa apropriados são, dependendo da natureza do ingrediente ativo a ser formulado, surfactantes não iônicos, catiônicos e/ou aniônicos ou misturas de surfactantes que têm boas propriedades emulsificantes, dispersantes e de molhagem. Os surfac- tantes listados abaixo são apenas para serem considerados como exemplos; muito mais surfactantes convencionalmente usados na técnica de formulação e apropriados em conformidade com a invenção são descritos na literatura relevante.

Surfactantes não iônicos apropriados são primeiramente deriva- dos poliglicol éter de álcoois alifáticos ou cicloalifáticos, de ácidos graxos saturados ou insaturados e alquilfenóis, que podem conter de 3 a 30 grupos de glicol éter e de 8 a 20 átomos de carbono no radical hidrocarboneto (alifático) e de 6 a 18 átomos de carbono no radical alquila dos alquilfenóis. Também são apropriados adutos de óxido de polietileno solúveis em água com glicol de polipropileno, glicol de etile- nodiaminopolipropileno e glicol de alquilpolipropileno tendo de 1 a 10 carbonos na cadeia alquila e de 20 a 250 de etileno glicol éter e de IOa 100 grupos de propileno glicol éter. Os compostos acima mencionados normalmente contém de 1 a 5 unidades de glicol He etileno por \jnidade de glicol de propileno. Exemplos que podem ser mencionados são nonilfenilpolietoxietanóis, óleo de mamona poliglicol éteres, adutos de óxido de polipropileno/polietileno, tributilfenoxipolietoxietanol, glicol de polietileno e octilfenoxipolietoxietanol. Também são apropriados ésteres de ácido graxo de sorbitano de polioxietileno, como trioleato de sorbita- no de polioxietileno.

Os surfactantes catiônicos são principalmente sais de amônia quartenária, que têm, como substituintes, pelo menos um radical alquila de 8 a 22 átomos de carbono e, como outros substituintes, radicais alquila inferior, benzila ou hidroxialquila inferior, que podem ser halogenados. Os sais estão preferencialmente na forma de haletos, metilsulfatos ou etilsulfatos. Exemplos são cloreto de esteariltrimetil- amônia e brometo de benzildi(2-cloroetil)etilamônia.

Surfactantes aniônicos apropriados podem ser tanto sabões solú- veis em água, quanto compostos de superfície-ativa sintéticos solúveis em água. Sabões que são apropriados são os sais de metais alcalinos, sais de metais alcalinos-terrosos e sais de amônia substituídos ou não substituídos de ácidos graxos mais altos (C10-C22), tais como os sais de sódio ou potássio de ácido oléico ou esteárico, ou de misturas de ácidos graxos naturais, que podem ser obtidas, por exemplo, de óleo de coco ou de breu líquido; ou metiltaurinatos de ácidos graxos. Entretanto, surfactantes sintéticos, em particular sulfonatos graxos, sulfatos gra- xos, derivados de benzimidazole sulfonado ou alquilarilsulfonatos, são usados mais freqüentemente. Como regra, os sulfonatos graxos e sulfatos graxos existem como sais de metal alcalino, sais de metal alcalino-terroso ou sais de amônia substituído ou não substituído e em geral têm um radical alquila de 8 a 22 átomos de carbono, alquila também incluindo o seguimento alquila de radicais acila. Exemplos de sulfonatos graxo e sulfatos graxos incluem o sal de sódio ou de cálcio de ácido lignosulfônico, de éster dod.ecilsulfúrico ou de uma mistura de sulfato álcool graxo preparada com ácidos graxos naturais. Este grupo também inclui os sais dos ácidos ésteres sulfúricos e sulfônicos de adutos de óxido de etileno/ álcool graxo. Os derivados de benzimodazole sulfonado contêm preferencialmente 2 grupos sulfo e um radical de ácido graxo tendo aproximadamente de 8 a 22 átomos de carbono. Exemplos de alquilarilsulfonatos são os sais de sódio, de cálcio ou de trietanolamónia de ácido dodecilbenzenosulfônico, de ácido dibutilnafta- lenosulfônico ou de um ácido naftalenosulfônico/ condensado formalde- ído. Também são apropriados fosfatos correspondentes, tais como sais do éster fosfórico de um aduto óxido de p-nonilfenol(4-14)etileno, ou fosfolipídicos. Em uma realização preferida, a composição compreende um agen- te quelante de metal a uma concentração de cerca de O3OOOlmM a 1M, preferencialmente entre 0,lmM a IOOmM, mais preferencialmente na faixa de O1ImM a 50mM. Composições contendo alguns agentes quelan- tes de metal, por exemplo, os compostos de fórmula I, podem preferen- cialmente conter entre 5 e 50mM do composto, especialmente em um nível de cerca de 30mM. Composições contendo compostos de fórmula (II) podem preferencialmente conter entre 0,lmM a IOOmM, especial- mente IjOmM a 50mM.

Um composto que inibe eventos de remodelação de eclosão de ovo em uma praga podem ser identificados usando um método compreen- dendo avaliar o valor clogP e/ou refratividade molar do composto e/ou a capacidade do composto ligar zinco e/ou inibir uma metaloprotease envolvida no evento de remodelação.

Noutro aspecto da invenção, é fornecido um método de selecionar uma agente quelante como um inibidor candidato de eventos de remo- delação de invertebrados de uma coleção de agentes quelantes de metal, dito método compreendendo selecionar agentes quelantes de metal que Lêm pelo menos dois átomos polares capazes de simultaneamente coordenar com um íon de metal e

(i) um valor clogP de / 1 e <4; e/ou

(ii) uma refratividade molar na faixa de 40 a 90 cm3/mole;

O clogP de um agente quelante de metal pode ser calculado de seu valor IogP usando um programa clogP, por exemplo, o programa fornecido pela Biobythe. Valores IogP podem ser obtidos da literatura ou podem ser calculados de um coeficiente de partição medido entre n- octanol e água.

A refratividade molar de um agente quelante de metal pode ser calculado usando o programa de computador CMR (refratividade molar calculada) da Biobythe.

Em algumas modalidades, o agente quelante de metal é selecio- nado de forma a inibir uma enzima metaloprotease dependente de zinco envolvida em um evento de remodelação de invertebrado. Em tais casos, o agente quelante a ligar íons de zinco pode ser determinado determi- nando-se a associação constante (IogKb) dos agentes quelantes de metal para zinco. A associação constante pode ser determinada da literatura usando métodos conhecidos daqueles versados na técnica. Em modali- - 10 dades preferidas nas quais a enzima metaloprotease é uma enzima metaloprotease dependente de zinco, agentes quelantes de metal tendo uma associação constante para zinco de mais de 5,0 são selecionados.

Um procedimento similar pode ser seguido se a metaloprotease a ser inibida incluir um íon de metal outro que não zinco, por exemplo, Mg++, Cu++ ou Fe++. A associação constante do agente quelante de metal para aquele íon de metal pode ser avaliada e selecionados os agentes quelantes de metal tendo as maiores constantes de associação.

Identificação de agentes quelantes de metal apropriados pode a- inda compreender testar o composto em um ensaio biológico. Um ensaio biológico apropriado preferencialmente compreende expor uma amostra de controle de pragas na qual o evento remodelador possa ocorrer a uma solução tampão de controle ou formulação de controle enquanto ao mesmo tempo expondo uma amostra de teste de pragas na qual a remodelação igualmente possa ocorrer a uma solução ou formulação compreendendo um composto teste.

Um composto que é efetivo na inibição a um evento de remodela- ção em uma praga é identificado quando o evento de remodelação é observado nas pragas da amostra ou formulação de controle e o evento de remodelação não é observado na amostra de teste das pragas. No ensaio biológico da presente invenção, o evento de remodelação pode ocorrer em uma praga selecionada a partir do grupo consistindo em piolho, pulga, carrapato, mosca, ácaro e outras pragas picadoras ou sugadoras de sangue e ainda inclui pragas que vivem dentro de um hospedeiro mamífero, tais como trematódeos, nematódeos e cestóides. No ensaio biológico da presente invenção, o evento de remodelação pode ocorrer em pragas que infestam plantas, tais como lagartas, traças, borboletas e nematódeos de solo. Alternativamente, o evento de remode- lação ocorre em uma praga que infesta um ambiente, tal como um ovo de cupim ou ovo de ácaro s.

A solução tampão de controle pode incluir, mas, sem limitação, soro fisiológico tamponado de fosfato estéril ou água ou um solvente orgânico. O composto testado é preferencialmente um agente quelante de metal. Em um exemplo de um ensaio biológico de eclosão de ovo, é observada a eclosão de ovo quando o hatchflap ou opérculo do ovo abre e logo em seguida as larvas ou ninfas começam a emergir. No caso de piolhos, a cabeça aparece primeiro, seguida pelo tórax, ao qual as pernas estão ligadas. Finalmente, o abdômen sai e a ninfa se livra do ovo. No caso de piolho de cabeça, as cascas de ovo permanecem então unidas ao eixo do cabelo. Um composto teste de agente quelante de metal pode ser identificado como apropriado para uso na invenção se os ovos expostos ao tampão de controle exibem um nível alto, por exemplo, 70-100%, de eclosão ao passo que o ovo exposto ao agente quelante de metal de teste exibe um nível baixo, por exemplo, 0-30%, de eclosão de ovo, especialmente onde 100% da inibição da eclosão de ovo ocorre.

Em modalidades preferidas, o pLDso do agente quelante de metal é maior do que 2, preferencialmente maior do que 3, e mais especial- mente maior do que 4.

Outros ensaios biológicos podem ser usados para avaliar a ativi- dade de agentes quelantes de metal selecionados na inibição de outros eventos de remodelação, tais como enquistamento, derramamento da bainha, apólise, ecdise ou metamorfose. Por exemplo, um invertebrado em um particular estágio da vida, por exemplo, um cisto, uma larva, um casulo, uma pupa, uma ninfa ou um adulto, pode ser exposto a um agente quelante de metal de teste em um veículo e a ocorrência de um evento de remodelação, tal como enquistamento, derramamento de bainha, apólise, ecdise ou metamorfose observado e comparado com um grupo de controle de invertebrados expostos a veículo na ausência de agente quelante de metal de teste.

Noutro aspecto da invenção é proporcionado um uso de pelo me- nos um agente quelante de metal na fabricação de uma composição para inibir uma enzima de protease envolvida em eventos de remodela- ção de invertebrados ou para tratar ou prevenir infestação de pragas, em que pelo menos um agente quelante tem pelo meos dois átomos polares capazes de simultaneamente coordenar com um íon de metal e

(i) um valor clogP de / 1 e <4; e/ou

(ii) uma refratividade molar na faixa de 40 a 90 cm3/mole;

ou urn sal farmaccuticarncntc, vctcrmaria ou agriculturalmcntc aceitável dos mesmos.

Em uma modalidade, a praga é uma que infesta uma planta hos- pedeira. Em outra realização, a praga é uma que infesta um animal doméstico. Ainda noutra alternativa realização, a praga é uma que infesta um ambiente.

Agentes compreendendo pelo menos um agente quelante de metal também são englobados pela presente invenção, como descrito neste documento, para inibir uma enzima de protease envolvida em eventos de remodelação de invertebrados ou para tratar ou prevenir infestação de pragas. Em alguns aspectos da invenção será possível identificar agentes pesticidas adicionais para inibição de infestação por invertebrados de um hospedeiro. Como acima notado, descobriu-se que compostos de Fórmula I e II são particularmente úteis na inibição de vários processos em remodelação de invertebrado e/ou processos metabólicos de inver- tebrados. A estratégia de desenhos racionais de drogas pode ser usada para identificar especificamente esses inibidores. Está agora estabeleci- do na presente invenção que compostos de Fórmula I e II têm proprie- dades úteis na inibição de proteases de invertebrados. As estratégias de desenho de droga podem ser criadas, nas quais cada um dos grupos R na estrutura nuclear de Fórmula I e Fórmula II é separadamente e individualmente fixado e a eficácia do agente resultante em um dado ensaio é determinada. A estrutura de Fórmula I e Fórmula II que especi- ficamente interage com, por exemplo, a protease, pode ser modelada usando ferramentas computacionais. Estas ferramentas podem permitir que uma molécula de droga seja construída dentro da biomolécula usando conhecimento de sua estrutura e a natureza de seu local ativo.

Os compostos testados quanto à eficácia como pesticidas podem ser parte de um conjunto ou biblioteca de compostos, que podem ser um conjunto ou biblioteca diversa ou um conjunto ou biblioteca centra- da, como ficará claro à pessoa versada. As bibliotecas que podem ser usadas para esse rastreio podem ser preparadas usando processos químicos combinatoriais conhecidos na técnica ou meios convencionais para síntese química. Coleções de compostos da fórmula (I) e/ou fórmu- la (II), que podem ser sintetizados manualmente ou de uma maneira semiautomatizada ou totalmente automatizada. Neste caso, é possível, por exemplo, automatizar o procedimento para a produção desses compostos, preparação ou purificação dos produtos ou dos intermediá- rios geralmente como descrito em, por exemplo, por S. H. DeWitt em uAnnual Reports in Combinatonal Chernistry and Molecular Diversity: Automated Synthesis", Volume I, Verlag Escom 1997, págs. 69 a 77. Além disso, compostos da fórmula (I) e/ou fórmula (II) podem ser preparados em parte ou totalmente por métodos suportados por fase sólida. Para este fim, etapas intermediárias individuais ou todas as etapas intermediárias da síntese ou de uma síntese adaptada para se ajustar ao procedimento em questão estão vinculadas a uma resina sintética. Métodos de sínteses suportadas por fase sólida são descritos extensamente na literatura especializada, por exemplo, Barry A. Bunin em "The CominatorialIndex", Academic Press, 1998.

Durante esta especificação, a palavra "compreendem", ou varia- • 10 ções tais como "compreende" ou "compreendendo", será entendida implicar a inclusão de um determinado elemento, totalidade ou etapa, ou grupo de elementos, totalidades ou etapas, mas a exclusão de qual- quer outro elemento, totalidade ou etapa, ou grupo de elementos, totalidades ou etapas.

Em algumas modalidades específicas, é notado que os compostos

usados nesta invenção não são bestatina. O composto usado na inven- ção não é 1,10-fenantrolina. Em outras modalidades, o composto usado na invenção não é 2,2'-bipiridina.

A invenção irá doravante ser descrito por meio dos seguintes Fi-

guras e Exemplos não limitadores.

Exemplos Exemplo 1

Avaliação do Mecanismo do Evento de Remodelação Associado com a Eclosão de Ovo de Piolhos:

O mecanismo de eclosão do ovo de piolhos foi avaliado sob um

microscópio de dissecação. Piolhos-fêmeas do corpo foram alimentados por uma hora e meia em um coelho antes de serem transferidos para uma placa de Petri contendo cabelo humano. A placa de Petri foi, então, colocada em uma incubadora a 32°C; 32% de umidade relativa. Dentro de 5 horas de alimentação, as piolhos fêmeas começaram a pôr seus ovos. Cada fêmea coloca até 10 ovos em uma sessão. Os ovos se desen- volveram durante os próximos 7-9 dias. Dentro das últimas 12 horas antes da eclosão, as seguintes mudanças foram observadas. Os olhos do embrião em desenvolvimento puderam ser claramente detectados dentro do ovo, com o embrião em desenvolvimento orientado de modo que sua cabeça está adjacente ao hatch flap ou opérculo. O embrião pode ser observado se movendo dentro do ovo. A eclosão ocorre quando o opérculo abre e logo em seguida o embrião começa a emergir. A cabeça aparece primeiro, seguida pelo tórax, ao qual estão ligadas as pernas. Finalmente, o abdômen sai e a ninfa se livra do ovo que perma- nece grudada no cabelo. Não existem estruturas óbvias associa-das com a cabeça da ninfa recém-emergida visíveis sob microscópio de luz, que facilitariam a eclosão (isto é, nenhum dente do ovo está presente). Esta observação sugere que enquanto movimento físico da ninfa dentro do ovo provavelmente contribui para a eclosão do ovo, outros eventos bioquímicos específicos estão envolvidos.

Exemplo 2 Detecção de Atividade de Protease em Extratos de Ovo de Piolhos:

Dentro de 12 horas de eclosão, 50 ovos de piolhos do corpo (Pedi- culus humarius humanus) foram removidos do cabelo e colocados em um tubo de eppendorf de 1 mL. 20 μΐ, de água destilada foi adicionada aos ovos não eclodidos e a preparação incubada por 30 minutos a 32°C. Os 20 μΐ^ foram recuperados, liofilizados e armazenados a -70°C. A esta amostra se referiu como amostra 1. Um número de outras amostras foram também coletadas como descrito. Amostra 2 foi coletada remo- vendo-se os ovos de piolho não eclodidos de quatro fios de cabelo que tinham aproximadamente 3 cm, cortando o cabelo em 0,5 cm de com- primento, e colocando-os em um tubo de microcentrífuga contendo 20 μΐ de água destilada e incubando a 32°C por 30 minutos. A amostra 3 foi coletada como para a amostra 2, mas o cabelo foi colocado em um tubo contendo 10 mL de 1% de hipoclorito de sódio por 1 minuto, seguido por cinco lavagens de 1 minuto em 25 mL de água destilada para remover o hipoclorito de sódio antes de ser incubado em um tubo de microcentrífuga contendo 20 μΐ de água destilada e incubado como para a Amostra 2. A Amostra 4 foi coletada de ovos não eclodidos que foram removidos do cabelo e lavados com 1% de hipoclorito de sódio e incubados em 20 μΐ de água destilada da mesma maneira que o cabelo na Amostra 3. Finalmente, a Amostra 5 foi coletada de ovos que esta- vam dentro de 24 horas da eclosão que foram lavados com 1% de hipoclorito de sódio, então retornada para a incubadora a 32°C até que eles eclodiram, as cascas de ovos vazias coletadas de 0 a 2 horas após a eclosão do ovo, colocadas em um tubo de microcentrífuga de 1 mL contendo 20 μΐ de água destilada e incubadas como para as Amostras 1-4. Para todas as amostras 1-5, os 20 μΐ de Tmido foram recolhidos, liofilizados e armazenados a -70°C. Refere-se às lavagens recuperadas destas cascas de ovos recentemente eclodidos como lavagens de casca de ovo (ESWs). A fim de procurar pela presença de proteases presentes nestas diferentes amostras, as amostras liofilizadas foram ressuspensas em 15 μΐ de tampão de amostra SDS não redutor, centrifugadas em 10.000g por 2 minutos e todos os 15μL carregados para 10% de géis SDS-PAGE com substrato de gelatina. Os géis foram fracionados a 4°C por 10 minutos a lOmA, seguido por outros 25 minutos a 15mA por gel. Eles foram, então, incubados por 2 χ 20 minutos em uma solução Triton-X 100 2,5%, seguido por uma incubação de três horas em 0,1M Tris/HCl contendo ImM de CaCb pH 8.0. Foi detectada atividade como áreas claras no gel, o resultado de atividade de protease degradando a gelatina dentro do gel.

A atividade de protease nas ESWs de ovos de piolho foi também examinada usando eletroforese em gel bidimensional. É necessário coletar grandes números de cascas de ovos recentemente eclodidos.

Seguido à colocação de ovos em pedaços de panos, os piolhos-fêmeas adultos foram removidos e os panos com os ovos lavados com 1% de hipoclorito de sódio como para a coleta de ESWs. Os ovos foram, então, retornados para a incubadora e permitidos para eclodir. Tipicamente 100 a 500 cascas de ovos eclodidos foram coletados (0-2 horas após a eclosão), colocados em um tubo de microcentrífuga contendo 200 μΐ de água destilada, incubados e as amostras tratadas como descrito acima. Para análise, ESWs foram ressuspensas em tampão de rehidratação (8 M Uréia, 2% 3-[(3-colamidopropil)dimetilamónia]-l-propanosulfonato 2% Tampão gradiente de pH imobilisado 3-10 (Amersham Phamacia Biotech, Uppsala, Sweden)) e usado para rehidratar 7 cm de tiras Immobiline DryStrips pH 3-10 (Amershaw Bioscience) durante a noite. As tiras foram transferidas para o aparelho Multiphor II (Pharmacia, Sweden), sofreu eletroforese na primeira dimensão a 200 V por 1 minu- to, aumentando para 3.500 V durante os próximos 90 minutos, seguido por 65 minutos a 3.500 V, equilibradas (õ M uréia, 30% glicerol, 50 mM Tris pH 8.8 e 2% SDS) e depois fracionadas em um gel SDS-PAGE 10% contendo 0,1% de gelatina para a segunda dimensão. O gel foi então fracionado e desenvolvido como descrito anteriormente.

A gelatina SDS-PAGE foi usada para analisar a atividade de pro- tease em ESWs de ovos de piolho tanto antes quanto depois da eclosão, e de amostras de cabelo humano. Uma tentativa foi feita para determi- nar os níveis de proteínas em cada uma das diferentes amostras ESW, entretanto, isso se provou sem sucesso devido aos níveis de proteínas muito baixos apresentados. Desse modo, para propósitos de compara- ção, foram descritas amostras em termos do número de ovos de piolho dos quais foram obtidas as lavagens.

A atividade de protease foi detectada em lavagens de ovos não e- clodidos dentro de 12 horas de eclosão (Amostra 1) na região de maior peso molecular do gel, acima de 50 kDa (Figura IA, Coluna 1). Um padrão similar de atividade de protease foi detectada nas lavagens tiradas de amostras de cabelo humano, seguida da remoção dos ovos de piolho (Amostra 2) (Figura IA, Coluna 2). Entretanto, o tratamento do cabelo com 1% de hipoclorito de sódio antes da coleta das lavagens (Amostra 3) removeu completamente a atividade de protease (Figura IA, Coluna 3). O tratamento com hipoclorito foi também capaz de remover as proteases estranhas de ovos de piolho não eclodidos (Amostra 4) (Figura IA, Coluna 4). O hipoclorito foi usado para tratar ovos não eclodidos antes da coleta de ESWs para todas as análises de protease subsequentes.

Diversas proteases distintas foram observadas nas ESWs de ovos

tratados com hipoclorito coletados até 2 horas pós a eclosão dos ovos (Amostra 5) (Figura 1B). Faixas de atividade de protease foram detecta- das em cerca de 25-30 kDa, 50 kDa e houve umas faixas mais claras detectadas acima de 50 kDa.

SDS-PAGE em gelatina bidimensional foi usada para avaliar mais

precisamente o número de espécies de protease presentes nos ESWs de piolho. Cada uma das três regiões principais da atividade de protease na SDS-PAGE em gelatina unidimensional (Figura 1B) determinada a um número de proteases distintas quando analisadas por SDS-PAGE em gelatina bidimensional (Figura 3A). As proteases presentes nas ESWs de piolho com atividade na faixa de peso molecular de 25-30 kDa determinadas em pelo menos sete proteases distintas com pontos isoelétricos na faixa de pH neutro a alcalino, ao passo que a faixa de atividade de protease de cerca de 50 kDa determinada a pelo menos onze regiões de protease distintas com pontos isoelétricos na região de pl-l ácido a neutro. O padrão de faixas regular das proteases na região de 50 kDa sugere que elas possam estar relacionadas de alguma forma. Pelo menos cinco proteases com pesos moleculares acima de 75 kDa foram também observadas.

Em conclusão, o processo de eclosão em piolhos foi estudado por

microscópio de luz. A eclosão de ovo parece estar associada com ativi- dade física da ninfa em desenvolvimento dentro do ovo. Entretanto, a falta de quaisquer estruturas especializadas para perfurar ou soltar o hatch flap ou opérculo indica que o processo de eclosão também pode envolver um componente bioquímico.

Embora proteases altamente ativas tenham sido detectadas du- rante o tempo de eclosão de ovo em piolhos, a fonte primária destas proteases parece ser de origem materna. A remoção desta atividade antes da eclosão do ovo foi alcançada usando hipoclorito de sódio com o piolho progredindo para nascer com sucesso. Análise subseqüente do ESW de piolhos recém nascidos indicou a presença de um número de espécies de proteases que foram ainda investigadas como alvos para inibir a eclosão de ovo em piolhos.

Avaliações similares podem ser feitas para outros eventos de re- modelação de ovos de pragas.

Exemplo 3 Caracterização de Proteases em Lavagens de Cascas de Ovos:

A fim de avaliar o potencial de proteases de eclosão de piolhos nas lavagens de casca de ovos como alvos para inibir eclosão de ovos foi primeiro necessário caracterizar a natureza das proteases de eclosão. Inibidores das 4 maiores classes de proteases foram usados para classi- ficar as proteases na ESW.

Géis com gelatina como substrato para 10% SDS-PAGE foram carregados com lavagens de cascas de ovos liofilizadas de 100 ovos de piolhos que foram ressuspensas em 50 μΐ^ de tampão de amostra não redutor com amostras liquidificadas em 10 μΐ^ por raia. Os géis foram fracionados a 4°C por 10 minutos a 10 mA por gel, seguido por outros minutos a 15 mA por gel. Géis foram, então cortados em tiras e cada tira incubada por 2 χ 20 minutos em uma solução Triton-X 100 2,5% contendo um inibidor específico. Os inibidores usados foram o inibidor de serina-protease PMSF (5 mM), os inibidores de metaloproteases 1,10- fenantrolina (10 mM) e EDTA (ácido etilenodiamina tetracético) 10 mM, o de protease aspártica Pepstatina (5μΜ) e o inibidor de cisteina E-64 (10μΜ). As tiras de gel foram então incubadas em 0,1M Tris/HCl con- tendo ImM CaCb pH 8 contendo os diferentes inibidores de protease por 3 horas em 37°C, antes sendo coradas em azul de Coomassie e descoradas como previamente descrito.

Incubação com os agentes quelantes de metal EDTA e 1,10- fenantrolina, para inibir metalproteases, resultou em uma redução na atividade de protease comparada aos controles não tratados (Figura 2A e 2B, respectivamente). Em contraste, não houve redução aparente na atividade de protease quando as ESWs foram incubadas com o inibidor de serina/cisteina protease PMSF (Figura 2B), o inibidor de cisteina protease E-64 (Figura 2B) ou pepstatina inibidora de protease aspártica (dados não mostrados).

A fim de investigar a fundo o efeito de 1,10-fenantrolina na ativi-

dade de protease de lavagens de casca de ovo, as proteases foram separadas por eletroforese em gel bidimensional e o gel incubado na presença de 10 mM de 1,10-fenantrolina. Os resultados destes estudos confirmaram o efeito inibitório deste inibidor de metaloprotease na atividade das proteases de ovo de piolho. Houve uma redução geral na atividade de protease na região 25-30kDa e uma clara redução nas proteases em torno da região 50kDa e acima de 75kDa (Figura 3B).

Uma abordagem similar pode ser usada para caracterizar protea- ses em lavagens de cascas de ovos de outros ovos de membrana fina de diferentes pragas.

Exemplo 4

Desenvolvimento de um Bioensaio in Vitro Para Medir a Eclosão de Ovos de Piolhos:

Para avaliar os efeitos potenciais de inibidores de protease na e- closão de ovos de piolhos foi necessário desenvolver um bioensaio in vitro confiável. Piolhos machos e fêmeas do corpo foram alimentados em um coelho como descrito anteriormente. Piolhos adultos fêmeas e machos em uma razão de 3:1 foram, então, transferidos para uma placa de Petri limpa contendo pano de nylon de aproximadamente 3x3 cm2 e deixados por 12 horas a 32°C. Durante esse período, o piolho-fêmea pôs seus ovos e ligou-os ao tecido. Todos os piolhos seriam então removidos e permitiu-se que os ovos incubassem pelos 5 dias seguintes. No Dia 6, o pano contendo os ovos seria colocado por 1 minuto em uma solução de 1% de hipoclorito de sódio e, então, lavado extensivamente. Os ovos progrediriam, então, para seus estágios finais de desenvolvi- mento e eclodiriam. Em ovos de controle não tratados, um percentual médio confiável de eclosão de entre 85 e 95 por cento foi obtido usando o ensaio de eclosão de ovo in vilro. Foi descoberto subseqüentemente que para o ensaio de eclosão de ovo não foi necessário pré-tratar os ovos de piolhos com hipoclorito de sódio.

Uma abordagem similar pode ser usada para desenvolver bioen- saios in vitro para medir outros eventos de remodelação que incluem, mas, sem limitação, eclosão de ovo de membrana fina. Exemplo 5

Identificação de Compostos Que Podem Inibir

a Atividade de Proteases de Eclosão de Piolhos:

(a) Teste de inibidores de protease usando bioensaio de eclosão de ovo de piolhos:

Tendo aprimorado um bioensaio para medir eclosão de ovo em pi- olhos, a próxima fase da pesquisa foi usar este bioensaio como um meio de teste dos efeitos de diferentes inibidores de protease na eclosão de ovos.

Ovos de piolhos foram postos em pano como descrito acima. Cin-

co dias após a colocação, o pano contendo ovos de piolho foi removido e imerso em uma solução de 1% de hipoclorito de sódio antes de ser lavado extensivamente em água destilada e secos com papel de seda. Ovos de piolhos foram contados sob um microscópio dissecante e o pano cortado em lotes de entre 10 e 30 ovos com 3-5 réplicas usadas por tratamento. O pano contendo ovos de piolho foi então imerso em uma solução de inibidor de protease por um período de 10 minutos, colocado em papel de seda por 1 minuto para secar antes de ser trans- ferido para uma placa de Petri limpa e incubado até a eclosão. Os ovos foram observados a intervalos de tempo regulares para evidência de ovos eclodindo durante os próximos 1-2 dias, tempo em que os ovos de controle tinham eclodido. Foram tipicamente preparadas soluções de inibidor de protease como soluções-mães e adicionadas frescas na concentração apropriada. Uma solução-mãe foi especificamente prepa- rada como se segue: 1,10-fenantrolina (200mM em metanol). Além disso, os níveis equivalentes do solvente foram adicionados aos ovos de controle não contendo inibidor para teste para quaisquer efeitos isola- dos do tampão. O percentual de inibição de eclosão foi calculado como o percentual de redução na eclosão de ovos comparado ao controle não tratado. Ao controle não tratado foi atribuído um percentual de eclosão de 100%.

A adição de 1,10-fenantrolina, um agente quelante de metal e um inibidor de metaloprotease inibiu significativamente a eclosão de ovo em piolhos em 10 mM, enquanto em ImM o nível de inibição foi de aproxi- madamente 30%, comparado com aquele dos controles (refere-se a Figura 4).

Estes resultados proporcionam dados sobre o efeito de um agente quelante de metal específico e inibidor de metaloprotease na eclosão de ovos em piolhos. Foi notado, contudo, que quando foi adicionada 1,10- fenantrolina dentro de 24 horas de eclosão, foi observada inibição da eclosão de ovos variável (dados não exibidos). Esta variabilidade na inibição de eclosão poderia ser devido a um número de fatores que se relacionam com o estágio de desenvolvimento específico do piolho. Ademais, estes estudos indicaram que é muito difícil prever o tempo exato de eclosão de ovo e, portanto, a escolha de um ponto temporal único no qual tratar os ovos pode ser problemático quando avaliando os efeitos de um inibidor específico na eclosão do ovo. O sistema de ensaio in vitro foi, portanto, modificado para dar conta desta variabilidade no desenvolvimento de piolhos.

(b) Experimento de curso de tempo utilizando no ensaio de eclosão in vitro:

Foi conduzida uma série de experimentos de curso de tempo co- mo um meio de avaliar inibidores de eclosão de ovo de piolhos. Os ovos foram postos em pano como descrito anteriormente e então a intervalos de 24 horas um inibidor foi adicionado a um novo grupo de ovos para ovos até 120 horas após a colocação. Os ovos foram, então, incubados a 28°C por outros 8 dias para permitir a eclosão de ovo. Esse método de avaliar inibidores mais de perto reflete a situação de campo onde ovos de piolhos estarão em vários estágios de desenvolvimento.

Os resultados destes estudos são mostrados na Tabela 1. Inibição signiíicante por 1,10-fenantrolina foi demonstrada em concentrações variantes durante o curso da eclosão dos piolhos. Um grau de depen- dência de concentração foi também observado com os efeitos inibitórios de 1,10-fenantrolina. Os resultados indicam que experimentos de curso de tempo fornecem meios mais confiáveis de avaliação de efeitos de inibidores específicos na eclosão de ovos de piolhos. Tabela 1

Percentual de inibição da eclosão de ovos, seguindo tratamento com diferentes concentrações de 1,10-fenantrolina em intervalos de 24 horas

após a colocação dos ovos

Tempo após a colocação do ovo (h) Inibidor 24h 48h 72h 96h 120h 144h mM 1,10- fenantrolina 100 100 100 100 100 100 mM 1,10- fenantrolina 100 100 100 100 93 96 2,5 mM 1,10- fenantrolina 100 100 85 85 89 60

Os resultados dos estudos acima indicam que enzimas de eclosão de piolhos são proteases da classe metalo a julgar ela capacidade do agente quelante de metal e inibidor de metaloprotease 1,10-fenantrolina inibir sua atividade. Ademais, este composto foi capaz de inibir signifi- cativamente eclosão de ovo em piolhos em todos os pontos temporais examinados com alguma evidência de um efeito dependente de dose particularmente quando ovos foram tratados com as concentrações menores em torno do tempo de eclosão. 1,10-fenantrolina exerce seus efeitos por sua capacidade de quelar íons de metal, preferencialmente zinco e assim inibindo proteases dependentes de zinco.

Exemplo 6

Identificação de Agentes Quelantes de Metal Apropriados Para Inibir a Eclosão de Ovos de Piolhos ou de Plutella:

Um número de agentes quelantes de metal com potencial para i- nibir os eventos de remodelação associados com eclosão de ovo de membrana fina em piolhos foi analisado comparando-se sua atividade ovicida percentual em piolhos em diferentes concentrações, seu logito calculado pLDso, Pref pLDso, classe de Atividade, clogP e refratividade mola foram determinados. Os resultados são mostrados na Tabela 2. VO

(Ν Λ

i—<

υ Xi d H

MR IO LO IO IO 00 LO clogP 2,05 2,05 2,56 2,56 Classe de atividade O=inativo 1= baixa 2=média 3=alta i—l o CS CS Pref pLDso CS Λ CS V CM a Logito calcu- lado pLDso CO co" o" 2,85 Μ co~ Concen- tração mM O ι—i O ι—i o CO o τ—i Atividade ovicida % 100,00% 0,00% 100,00% 100,00% Piolhos (L) Plutella (P) J Dl, J Ph Nome 1,10-fenantrolina 4,7-fenantrolina 5,5'-dimetil bipiridina 5,5'-dimetil bipiridina OO ιο VO LO 00 LO νΟ LO MD LO VO LO VO LO VO LO VO LO VO LO (Μ CN CN CN CN CN CN CO CO CM CNI CN CO τ—Ι CM Λ CO Λ ^ V CO Λ CN ^tr CM τ—Ι CO CO IN CO CO ■sl- "tf- CO CN CO ι—I ο" O ι—I .—ι τ—I ο" O ι—ι CD r—I 98,00% 57,00% 100,00% 100,00% 0,00% 100,00% 100,00% CU Cu CU -J Cu PH J CU ê Cu '-M CC S .S '-M CC <υ ΰ •3 os <υ β '-M 03 <υ α '-Μ ο3 S .S F-H '-Μ (ΰ «υ à rB 03 <υ d •s 3 -α C C χί S=I ^ !S -υ ^ § -B σ -α • rmmI ♦ κ Τ3 .tl Γο ιο ^ ίο IO ^ ιο VO ^ ώ ·& VO οο σι

VO ■Φ CO ιο oo 00 VO 00 VO LO LO νΟ IO VO IO τ—Ι IN IN LO LO VO CO CN r—I CM CN CN CN i-H ι—I O O O CO O CO Λ CN Λ CN V CN V CN V CO Λ CN V CN CO IN ί- IN 00 IN CO O Ο O •Φ O *—ι <ο O ,—ι O ι-1 O ι—Ι O r-l <D ,—( O ι—I 65,00% 100,00% 0,00% 0,00% i 0,00% 100% I 0,00% Q Ph 2 J Oh J Oh J CU - § 9 CX J Q 4,4'-dimetil ι bipiridina 2,2'-bipiridina 2-benzil-piridina 2-fenil-piridina 2,2',6,2"- terpiridina 2,2',6,2"- terpiridina 2,2'-Bis(4,5- dimetilimidazole)

OO IO ο ιο O LO OJ νΟ νΟ 4,33 CO CO ο" J 0I ι—Ι ^ O1 τ—Ι IO σ\ CN ο" ο ο O τ-Η O ι—I O CN V CN V CN V CN Λ CN V CN Λ CN V N <s ο" CO Co" C^ τ—ι COfv CO~ O ο" ο ι—I '-\ S-' τ—ι O ι—I O .—ι O τ—Ι O τ—Ι O τ—Ι 0,00% CJv O CD ο" O^ O O ο" Ov O O ι—I O Ov ο" -ο Ox O O^ ο" O ι—I nÇ> Ov O Ov ο" J α, J Q J a Dh Θ ^ Dh 9 2,2'-biquinolina cti C • i-h "ο 0 • i-h CX 1 CN I? τ—t • rh 8 S ^ I CN^ ^ • 1—1 Q OS C S JS [6 'Π 'α B ι CN Λ β ♦ τ—( ε js 'B 'C ♦ i-h α ♦ i-h -υ ι csL CN Cti ■ S 1 C η ^ '-B S ι · r—t ri CN Vh 3 α Z JS ι CO 1 V CO ti rH Cl ^ ^ O Cti .!n cti ο Λ O Ό Vh 1 CX COv τ—I "-1 O IN vO 00 VD O r—I o CJi I-H 00 ι—I IN 1,74 3,36 6,29 4,63 3,08 3,43 ο o o o o I CN ν CN V CN V CN V CN V CN V t- ο" N o" IN o" IN o" IN o~ IN o" ο r—I r—i O r—I O ι—I O i—I O ι—I 0,00% 0,00% 0,00% 0,00% 0,00% Ov O CD CD 9 D^ 9 ^ 9 CU j Q 2,2' Bipiridmila- 5,5'-ácido carbo- xílico dimetil éster 4-Morfolina-4-il- 2-piridina-2-il- quinolina* l,3-Bis-(4-ter- butil-fenil)- propano-1,3- diona l,3-Bis-(3,5- dimetil-fenil)- propano-1,3- diona 1,3-Bis-(4-metóxi- fenil)-propano- 1,3-diona 1 - (4 -Cloro-fenil) - 3-fenil-propano- 1,3-diona CO IN IN IN CN CO I—I <M ι—I CN 3,81 1,65 2,64 0,11 -0,75 0,27 ι o ι—I o o csi V CN V csi Λ CN V CN V CN V IN ο" IN o" OO1 CN IN cT IN cT IN o" Ν—> τ—I O *—I O 1—I O ι—I O 1—I O 1—I 0,00% 0,00% 90,00% ov O O o~ 0,00% 0,00% J Dh J Dh Dh 9 CU 9 (χ ζ 9 CU l-(5-Cloro-2- hidroxi-fenil)-3- fenil-propano-1,3- diona 4,4,4 -Trifluoro -1 - fenil-butano-1,3- diona Dibenzoil metano Trans-2- aminociclohexa- nol Glicina metil éster 2-Amino-l-fenil etanol co co νθ ι—I 00 co ο co vo co νο νο 0,42 σ> io τ—I I ι—ι io ο" in cd ο" vo cn ο" cti cd ι—I σι cd ι—I ο o o o o Γ—I o cm v cn v cn ν cn v cn v cxd cn cn v in ο" ιν ο~ in ο" in ο" in ο" ccL cn in ι—I ο ι—I '-V J ^-1 o ι—ι o ι—Ι o τ—Ι o τ—ι ι—Ι 0,00% CJv o ο" -ο Ov o o ο" -ο o cd 0~ Civ o o ο" Ox o cd ο" cti CDv o cd 9 ou 9 «χ 9 CU 9 λ 9 CX 9 9 Cl. Etil- acetaimidoacetato I O ί-Η TJ 5 O B υ « § ο * TJ • I-H υ >< 1 cC X <υ O w cn « ο M £ • 1—( -M <υ υ < ι τ—Ι I O C O s ctf < α ι Q I Λ ° ο .a α .a <υ Pi § O X ό o • «Ή υ χ) cd C O -M OJ υ d • r-H O N C <υ CQ * Oj β O -M <υ υ cd --i 'ο N β <υ CQ LO LO LO LO 4,68 1,53 1,53 o r—I CO CN V CN Λ CO Λ IN <S CO CO CO1 'w' τ—1 O i—l i—l 0,00% 100,00% 100,00% -J Dh Dh Dh l-(4 -tert- butilfenil)-3-(4- metoxifenil)- propano-1,3- diona 2-acetil-l- tetralona 2-acetol-l- tetralona

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> o Exemplo 7

Efeito de Pós-Tratamento de Ovos Lavados com 1-10 Fenantrolina:

Um experimento foi realizado para determinar se lavagem dos ovos afetaria a atividade inibitória de 1,10-fenantrolina (Tabela 3). Um grupo controle (5% metanol) foi também estabelecido. O percentual de inibição de eclosão foi calculado como a redução percentual na eclosão de ovo comparada com o controle não tratado. Ao controle não tratado foi atribuído um percentual de eclosão de 100%. Os resultados deste experimento indicam que a 1,10-fenantrolina é ainda altamente eficaz para inibir a eclosão de ovos de piolhos seguindo lavagem de ovos em água. Em ovos em estágio mais tardio que estão se aproximando da eclosão do ovo (dia 5) os efeitos parecem refletir uma dependência de concentração similar àquela observada quando as concentrações mais baixas do inibidor foram usadas. Foi também notado que uma propor- ção de ovos tratados com 1,10-fenantrolina teve embriões que parece- ram se desenvolver normalmente, falhando, contudo, para nascer. Tabela 3

Percentual de inibição da eclosão de ovos seguindo tratamento com 10 mM de 1-10 fenantrolina em intervalos de 24 horas após a colocação dos ovos em piolhos. Ovos de piolhos foram tratados com inibidor por 10 minutos e deixados sem lavagem ou tratamento por 1 minuto e então

deixados eclodir.

Tempo após a colocação (h) 24h 48h 72h 96h 120h Trata- dos/não 100 100 100 100 100 lavados Tratados/ lavados 100 100 100 97 62

Exemplo 8

Inibição de Eclosão de Ovos de Piolhos do Corpo com 1-10 Fenantrolina:

Foram conduzidos testes para determinar se agente quelante de metal e inibidor de metaloprotease 1,10-fenantrolina poderiam inibir eclosão de ovo de piolho de cabeça (Pediculis humanus capitus) ao contrário do piolho de corpo. Ovos de piolhos de cabeça foram obtidos colocando-se grupos de ambos os piolhos machos adultos de cabeça 1-2 e fêmeas adultas 6-8 em poços separados em uma placa de Petri de 24 poços contendo pano de algodão. A placa de Petri foi transferida para uma incubadora úmido a 32°C, 70% UR por 12 horas para permitir que o piolho-fêmea colocasse seus ovos. Após 12 horas, todos os piolhos adultos foram removidos dos poços da placa de Petri e uma série de experimento de curso de tempo foi conduzida. Um grupo de ovos (24h de idade) foi tratado por 10 minutos com 200 \xL de uma solução 10 mM de 1,10-fenantrolina. Um grupo de controle (isto é, sem tratamento de inibidor) de ovos foi também incluído. Os ovos foram removidos do inibidor, secos em papel de seda, colocados a 32°C, 70% UR e deixados eclodir. Um segundo grupo de ovos (com 48 horas de idade) foi tratado como anteriormente descrito e também deixado para eclodir. Este processo foi repetido a intervalos de 24 horas em ovos de piolhos de cabeça até 120 horas após a colocação. Este método de avaliação de inibidores reflete mais de perto a situação de campo em que os ovos de piolhos estarão em vários estágios de desenvolvimento na cabeça e permite que os efeitos inibitórios sejam observados nestes diferentes estágio do parasita.

Os resultados dos estudos acima indicam que a 1,10-fenantrolina pode inibir significativamente a eclosão de ovo em piolho de cabeça (Tabela 4).

Tabela 4

Percentual de inibição da eclosão de ovos seguindo tratamento com 10 mlví 1,10-fenantrolina a intervalos de 24 horas após a colocação do ovo em piolhos em relação ao controle.

Dias após a colocação I 2 3 4 5 Tratados 100 87 88 100 100

Estes resultados sugerem fortemente que piolhos de corpo são um modelo efetivo para análise dos efeitos de inibidores de protease na eclosão de ovos de piolhos de cabeça

25 Exemplo 9

Inibição da Eclosão de Ovos de Piolhos

com Quelantes de Metal:

Experimentos foram conduzidos usando dois agentes quelantes de metal, 2,2'-dipiridina e 6,6'-dimetil-2,2'-dipiridina, que têm valores clogP de 1,56 e 2,55 respectivamente e refratividades molares de 46 cm3/mol e 56 cm3/mol, respectivamente, para determinar seus efeitos na eclosão de ovos de piolhos. Estes compostos foram testados no ensaio de piolho padrão para determinar seus efeitos ovicidas (se referir ao exemplo 5 para método usado para inibidores testes). Os resultados deste estudo são mostrados nas Tabelas 5 e 6.

Tabela 5

Resultados de eclosão de ovo seguindo tratamento com 2,2'-dipiridila em intervalos de 24 horas após a colocação do ovo. Os resultados são indicados para: N (número de ovos por réplica), I-I (número de ovos eclodidos com sucesso) e Ph (número de ovos parcialmente eclodidos).

Réplicas 24h 48h 72h 96h 120h N H Ph N H Ph N H Ph N H Ph N H Ph 1 7 O O 6 O O 7 O O 13 0 0 10 0 0 2 8 O O 14 O O 7 O O 9 1 0 10 0 0 3 11 O O - - - 14 O O 10 0 0 13 0 0 Tabela 6

Resultados de eclosão de ovo seguindo tratamento com 6,6'-Dimentil- 2,2'-dipiridila em intervalos de 24 horas após a colocação do ovo. Os resultados estão indicados para: N (número de ovos por réplica), H (número de ovos eclodidos com sucesso) e Ph (número de ovos parcial- mente eclodidos).

Réplicas 24h 48h 72h 96h 120h N H Ph N H Ph N H Ph N H Ph N H Ph 1 10 0 13 0 0 15 0 0 25 0 0 23 0 0 2 10 0 0 11 0 0 16 0 0 22 0 0 9 0 0 3 11 0 0 6 0 0 10 0 0 18 0 0 - - -

Os resultados destes estudos indicam que ambos os 6,6'-Dimetil- 2,2'-dipiridila e 2,2'-dipiridila apresentaram atividade ovicida muito forte, com o que eclosão de ovo de piolhos foi completamente inibida em todos os pontos temporais examinados. Ambos 6,6'-Dimetil-2,2'~ dipiridila e 2,2'-dipiridila são agentes quelantes de metal e inibidores de metaloprotease que são não intercalados.

Exemplo 10

Avaliação Comparativa de Produtos Comerciais Contra Piolhos

com 1,10-Fenantrolina:

As propriedades ovicidas dos três maiores produtos para piolhos de cabeça comerciais foram avaliadas no ensaio de eclosão de ovo de piolhos padrão. Os três produtos comerciais para piolhos de cabeça foram os seguintes:

1. KP-24® Nelso Laboratories, ingredientes ativos 1% maldison (malation);

2. RID® Bayer, ingredientes ativos, 1% piretrinas; e

3. NIX® Pfizer, ingredientes ativos, 1% permetrina.

Estes três produtos foram testados de acordo com as recomenda- ções do fabricante. Grupos de ovos (com 24 horas de idade) foram tratados com os diferentes produtos de acordo com as recomendações dos fabricantes pelo período de tempo apropriado (5-10 minutos), segui- do por um enxágüe por 1-2 minutos em água a 32°C. Um controle positivo (10 mM 1,10-fenantrolina) e dois controles negativos (sem tratamento e 20% Metanol) foram também incorporados. Após a exposi- ção aos diferentes produtos, os ovos foram enxaguados com água morna a 32°C antes de serem secos em papel de seda e colocados em 32°C, 70% UR e deixados eclodir. Um segundo grupo de ovos (com 48 horas de idade) foi tratado como anteriormente descrito e também deixados eclodir. Este processo foi repetido em intervalos de 24 horas em ovos de piolhos de cabeça até 120 horas após a colocação. Este método de analisar inibidores reflete mais de perto a situação de campo onde ovos de piolhos estarão em vários estágios do desenvolvimento na cabeça e permite que os efeitos inibitórios sejam observados nestes diferentes estágios do parasita. Os resultados destes estudos são mostrados na Tabela 7. Tabela 7

Resultados de eclosão de ovo seguindo tratamento com 3 produtos para piolhos de cabeça comerciais, 10 mM 1,10-fenantrolina e controles em intervalos de 24 horas após a colocação do ovo. Os resultados estão indicados para: N (número de ovos por réplica), H (número de ovos

eclodidos com sucesso) e Ph (número de ovos parcialmente eclodidos).

NIX-Pfizer Réplicas 24h 48h 72h 96h 120h N II Ph N H Ph N H Ph N H Ph N I-I Ph 1 16 12 2 9 7 0 18 3 3 12 8 3 19 12 3 2 10 4 3 6 2 3 10 3 3 15 7 5 18 8 7 3 10 7 2 9 4 3 17 5 7 - - - 36 21 5 RID-Bayer Réplicas 24h 48h 72h 96h 12 Oh N I-I Ph N I-I Ph N H Ph N H Ph N I-I Ph 1 8 0 3 12 3 4 7 0 0 8 0 0 14 0 1 2 8 2 5 7 0 1 5 1 2 8 0 0 - - - 3 5 π o 1 r\ X \J r\ W rt r U 1 X 3 11 0 0 - - - KP24KP24 Réplicas 24h 48h 72h 96h 120h N H Ph N H Ph N H Ph N H Ph N H Ph 1 7 7 0 10 10 0 10 1 3 10 0 0 10 0 0 2 6 6 0 10 9 0 0 0 0 7 0 0 8 0 0 3 9 8 0 12 0 1 1,10-fenantrolina (10 mM) Réplicas 24h 48h 72h 96h 120h N H Ph N H Ph N H Ph N H Ph N H Ph 1 13 0 0 5 0 0 7 0 0 10 0 0 9 0 0 2 9 0 0 15 0 0 7 0 0 10 0 0 6 4 0 3 - - - 8 0 0 9 0 0 - - - 7 1 0 Controle (20% Metanol) Réplicas 24h 48h 72h 96h 120h N H Ph N H Ph N I-I Ph N H Ph N I-I Ph 1 - - - 14 14 0 10 10 0 10 10 0 13 13 0 2 - - - 5 4 0 8 8 0 10 9 0 7 7 0 3 - - - - - 0 9 7 0 4 4 0 10 10 0 Controle (não tratado) Réplicas 24h 48h 72h 96h 120h N FI Ph N H Ph N H Ph N H Ph N II Ph 1 10 9 0 11 11 0 25 24 0 10 8 0 20 20 0 2 20 18 0 8 7 0 10 10 0 11 10 0 20 18 0 3 - - - 8 8 0 - - - 10 10 0 - - -

Os resultados dos testes de 3 pediculicidas comerciais indicam que eles apresentam níveis inconsistentes de atividade ovicida através dos diferentes estágios de eclosão de ovo de piolhos. Ao passo que o composto 1,10-fenantrolina foi altamente efetivo na inibição da eclosão de ovos de piolhos.

Exemplo 11 Avaliação de Produtos Comerciais Adicionais Contra Piolhos:

As propriedades ovicidas dos dois maiores produtos para piolhos

de cabeça comerciais foram avaliadas no ensaio de eclosão de ovo de piolhos padrão. Os 2 produtos para piolhos de cabeça comerciais foram como se segue: 1. Pronto Plus® Shampoo Del Laboratories, ingredientes ativos 0,33% Piretrinas; e

2. Pronto Plus® Mousse Shampoo Del Laboratories, ingredientes ativos 0,33% Piretrinas.

Estes produtos foram testados de acordo com as recomendações do fabricante. Grupos de ovos (com 24 horas de idade) foram tratados com os diferentes produtos de acordo com as recomendações do fabri- cante pelo período de tempo apropriado (5-10 minutos), seguido por um enxágüe por 1-2 minutos em água a 32°C. Dois controles negativos (sem tratamento e 20% etanol) foram também incorporados. Após a exposição aos diferentes produtos, os ovos foram secos em papel de seda e coloca- dos a 32°C, 70% UR e deixados eclodirem. Um segundo grupo de ovos (com 48 horas de idade) foi tratado como descrito anteriormente e também deixado para eclodir. Este processo foi repetido em intervalos de 24 horas em ovos de piolho de cabeça até 120 horas após a colocação. Este método de análise de inibidores reflete mais de perto a situação de campo onde os ovos de piolhos estarão em vários estágios de desenvol- vimento na cabeça e permite que os efeitos inibitórios sejam observados nestes diferentes estágios do parasita. Os resultados destes estudos são apresentados na Tabela 8. Tabela 8

Resultados de eclosão de ovo seguindo tratamento com 2 produtos para piolhos de cabeça comerciais e controles em intervalos de 24 horas após a colocação do ovo. Os resultados estão indicados para: N (número de ovos por réplica), H (número de ovos eclodidos com sucesso) e Ph (nú- mero de ovos parcialmente eclodidos).

Pronto Plus Shampoo Réplicas 24h 48h 72h 96h 120h N H Ph N H Ph N I-I Ph N II Ph N I-I Ph 1 14 10 2 11 9 0 30 27 0 35 30 0 40 38 2 2 20 15 3 21 18 0 19 16 0 42 36 0 38 29 5 3 - Pronto Plus Mousse Shampoo Réplicas 24h 48h 72h 96h 120h N I-I Ph N H Ph N H Ph N I-I Ph N H Ph 1 10 8 O 18 15 0 47 31 9 63 8 34 51 7 40 2 15 13 O 10 6 0 30 14 8 29 5 10 50 8 30 o O -1 1 1 1 O - - - 34 13 17 21 1 15 31 1 17 Controle (etanol) Réplicas 24h 48h 72h 96h 120h N H Ph N H Ph N H Ph N H Ph N H Ph 1 12 10 O 18 16 0 40 36 1 21 20 0 49 47 0 2 11 9 O 21 18 0 41 37 0 28 26 0 39 36 0 3 11 11 O 13 11 0 75 70 0 29 27 0 36 34 0 Controle (não tratado) Réplicas 24h 48h 72h 96h 120h N H Ph N H Ph N H Ph N H Ph N H Ph 1 10 9 O 27 26 0 61 60 0 50 49 1 48 46 0 2 3

Os resultados do teste de 2 pediculicidas comerciais indicam que eles apresentam atividade ovicida muito pobre e inconsistente através dos diferentes estágios de eclosão de ovo de piolhos.

Exemplo 12

Avaliação de Compostos na Eclosão de Ovos de Plutella xylostella:

Centenas de ovos de Plutella xylostella (estirpe Waite) foram cole- tados, tendo sido postos durante um período de 24 horas. Dentro de 3-5 horas de coleta, os ovos foram tratados com diferentes inibidores como abaixo descrito.

Lotes de ovos de Plutella que foram postos em pano fino ou para- filme foram mergulhados em uma solução de inibidor específico por entre 2 e 10 segundos, a solução excedente foi drenada secando-se com papel de seda. O conjunto de ovos foi, então, colocado em uma caixa úmida a 25°C até a eclosão do ovo. Ovos de controle foram expostos a metanol absoluto como descrito acima. No dia 6 após a colocação, os ovos foram avaliados para os diferentes tratamentos e o percentual de eclosão de ovo foi determinado em relação ao controle, como mostrado na Tabela 9. Tabela 9

Efeitos ovicidas de inibidores na eclosão de ovos de Plutella xylosíella em

relação ao controle.

Inibidor Número eclodidos Número não eclodidos % Inibi- ção 6,6'-dimetil-2,2 '-dipiridila (10 mM) 0 79 100 6,6'-dimetil-2,2'-dipiridila (1 mM) 0 26 100 6,6'-dimetil-2,2'-dipiridila (O1ImM) 23 29 0 6,6'-dimetil-2,2'-dipiridila (0,01mM) 13 7 0 6,6'-dimetil-2,2'-dipiridila (0,001mM) 11 6 0 1,10-fenantrolina (10 mM) 0 45 100 1,10-fenantrolina (ImM) 15 16 0 Controle (100% MeOH) 63 92 -

A Tabela 9 indica que o quelante de metal 6,6'-dimentil-2,2'- dipiridila foi capaz de inibir a eclosão de ovo em Plutella xylostella de uma forma dependente de dose, com fortes efeitos ovicidas evidentes tanto em 10 quanto em ImM. Além disso, o inibidor de metaloprotea- se/quelante de metal, 1,10-fenantrolina foi também capaz de inibir significativamente eclosão de ovo deste inseto em 10 mM. Exemplo 13 Avaliação de Compostos na Eclosão de Ovos de Plutella xylostella:

Lotes de ovos de Plutella que foram postos em pano fino ou para- filme foram mergulhados em uma solução de inibidor específico por entre 2 e 10 segundos, a solução excedente foi drenada secando-se com papel de seda. O conjunto de ovos foi, então, colocado em uma caixa úmida a 25 graus até a eclosão do ovo. Ovos de controle foram expostos a metanol absoluto como descrito acima ou não tratados. No dia 6 após a colocação, os ovos foram avaliados para os diferentes tratamentos e o percentual de eclosão de ovo foi determinado em relação aos controles, como mostrado nas Tabelas 10 e 11. Tabela 10

Efeitos ovicidas de inibidores na eclosão de ovos de Plutella xylosíella em relação aos controles (ovos colocados em pano).

Inibidor Número eclodidos Número não eclodidos % Inibi- ção 6,6'-dimetil-2,2 '-dipiridila (10 mM) 0 53 100 6,6'-dimetil-2,2'-dipiridila (ImM) 0 23 100 6,6'-dimetil-2,2 '-dipiridila (OlImM) 49 0 0 6,6'-dimetil-2,2'-dipiridila (0,01mM) 23 4 12 5,5 '-dimetil-2,2 '-dipiridila (10 mM) 0 21 100 5,5'-dimetil -2,2 '-dipiridila (ImM) 5 22 78 4,4 '-dimetil-2,2 '-dipiridila (10 mM) 0 36 100 4,4'-dimetil-2,2'-dipiridila (ImM) 0 30 100 Controle (não tratados) 32 1 - Controle (100% MeOH) 34 1 - Tabela 11

Efeitos ovicidas de inibidores na eclosão de ovos de Plutella xylostella em relação aos controles (ovos postos em parafilme).

Inibidor Número eclodidos Número não eclodidos % Inibi- ção 6,6 '-dimetil-2,2 '-dipiridila (10 mM) 0 106 100 6,6'-dimetil-2,2'-dipiridila (ImM) 0 63 100 6,6'-dimetil-2,2'-dipiridila (OlImM) 65 11 7 6,6'-dimetil-2,2'-dipiridila (O1OlmM) 92 1 0 5,5'-dimetil-2,2'-dipiridila (10 mM) 0 138 100 5,5'-dimetil-2,2'-dipiridila (1 mM) 18 133 88 4,4 '-dimetil-2,2 '-dipiridila (10 mM) 0 139 100 4,4'-dimetil-2,2'-dipiridila (1 mM) 10 107 91 Controle (não tratados) 108 3 - Controle (100% MeOH) 58 7 -

As Tabelas 10 e 11 mostram os efeitos da exposição de ovos de Plutella xylostella a compostos de dipiridila selecionados em eclosão do ovo em relação aos controles. Os resultados mostram um efeito depen- dente de dose para 6,6'-dimetil-2,2'-dipiridila tanto com 10 como com ImM sendo efetivo na inibição da eclosão de ovos dos ovos de Plutella. Em 0,1 e 0,01mM, não houve efeitos observáveis na eclosão de ovo. Estes resultados confirmar os resultados mostrados no Exemplo 12 para este composto. Além disso, ambos 5,5'-dimetil-2,2'dipiridila e 4,4'- dimetil-2,2'-dipiridila foram capazes de inibir significativamente eclosão de ovo tanto em 10 quanto em ImM.

Não houve diferenças significantes observadas entre ovos postos

em pano ou em parafilme.

Exemplo 14

Controle de Helicoverpa spp. Com Padrão Industrial:

Lannate® (Crop Care Australasia Pty Ltd) contendo metomil como um composto ativo foi escolhido como controle comparativo.

Para o controle de Helicoverpa em algodão no campo é recomen- dada uma taxa de aplicação de 200mL/100L. Isso se equipara a apro- ximadamente 2,5 mM de composto ativo. Uma faixa de concentrações foi composta em água e os ovos colocados nas soluções por aproximada- mente 2-10 segundos. Os ovos que tinham sido postos em pano foram, então, secos com papel absorvente e colocados em uma incubadora a 26°C por 3-4 dias até a eclosão. As taxas de eclosão foram, então, avaliadas comparado com o controle apenas tratado com água (Figura 5). Os resultados indicam um efeito de titulação de dose forte de Lanna- te® contra ovos de Helicoverpa com eficácia muito boa evidente em 1,25 mM.

Exemplo 15

Controle de Helicoverpa spp. com 2-Acetil-l-Tetralona:

A atividade ovicida de 2-acetil-tetralona contra ovos de H. armige- ra foi avaliada como descrito no Exemplo 14. O composto foi dissolvido em 100% dietoxiglicol e diluído para uma concentração final de 1% em água. Os resultados são dados na Figura 6 e mostraram que 2-acetil-l- tetralona apresentou forte eficácia ovicida em 2mM com eficácia diminu- indo em ImM.

Exemplo 16 Avaliação de Compostos na Eclosão de Ovos de Helicoverpa armigera:

Centenas de ovos de Helicoverpa armigera (estirpes Tatura χ Too- woomba) foram coletadas, tendo sido postos em pano de malha fina durante um período de 24 horas. Dentro de 3 a 5 horas de coleta, todos os ovos foram tratados com diferentes inibidores, conforme descrito abaixo.

Lotes de ovos de Helicoverpa que foram expostos a uma solução de inibidor específico por entre 2 e 10 segundos, a solução excedente foi drenada secando-se com papel de seda. O conjunto de ovos foi, então, colocado em uma caixa úmida a 25 graus até a eclosão do ovo. Ovos de controle foram expostos a metanol absoluto como descrito acima. No dia 6 após a colocação, os ovos foram avaliados para os diferentes tratamen- tos e o percentual de eclosão de ovo foi determinado em relação ao controle, como mostrado na Tabela 12. Tabela 12

Efeitos ovicidas de inibidores na eclosão de ovos de ovos de Helicoverpa

armigera em relação ao controle.

Inibidor Número eclodidos Número não eclodidos % Inibi- ção 6,6'-dimetil-2,2'-dipiridila (10 mM) 7 98 94 6,6'-dimetil-2,2 '-dipiridila (1 mM) 4 140 97 6,6'-dimetil-2,2'-dipiridila (0,1 mM) na na 0 6,6'-dimetil-2,2'-dipiridila (O1OlmM) na na 0 6,6'-dimetil-2,2'-dipiridila (0,001mM) na na 0 1,10-fenantrolina (10 mM) 31 16 44 1,10-fenantrolina (ImM) na ria. o Controle (100% MeOH) na na 0

na refere-se a todos os ovos eclodindo e sendo devorados pelas lagartas recém-nascidas.

Os resultados na Tabela 12 indicam que 6,6'-dimetil-2,2'-dipiridila foi capaz de inibir significativamente eclosão de ovo de ovos de Helcover- pa armigera em 10 e ImM. Nenhuma inibição foi registrada em concen- trações abaixo deste nível. O composto 1,10-fenantrolina foi também capaz de inibir a eclosão de ovo em 10 mM apenas.

Exemplo 17

Avaliação de Compostos na Eclosão de Ovos de Helicoverpa armigera:

Centenas de ovos de Helicoverpa armigera (estirpes Tatura χ Too- woomba) foram coletados, tendo sido postos em pano de malha fina durante um período de 24 horas. Dentro de 3-5 horas de coleta, todos os ovos foram tratados com diferentes inibidores como abaixo descrito.

Lotes de ovos de I-Ielicoverpa foram então expostos a uma solução de inibidor específico por entre 2 e 10 segundos, a solução excedente foi drenada secando-se com papel de seda. O conjunto de ovos foi, então, colocado em uma caixa úmida a 25°C até a eclosão do ovo. Ovos de controle foram expostos a metanol absoluto como descrito acima. No dia 6 após a colocação, os ovos foram avaliados para os diferentes tratamen- tos e o percentual de eclosão de ovo foi determinado em relação ao controle, como mostrado na Tabela 13. Tabela 13

Efeitos ovicidas de inibidores na eclosão de ovos de Helicoverpa armigera

em relação ao controle.

Inibidor Número eclodidos Número não eclodidos % Inibi- ção 6,6'-dimetil-2,2'-dipiridila (10 mM) 3 48 94 6,6 '-dimetil-2,2'-dipiridila (ImM) 2 61 97 6,6 '-dimetil-2,2 '-dipiridila (0,lmM) 70 0 0 5,5 '-dimetil-2,2 '-dipiridila (10 mM) 0 42 100 4,4'-dimetil-2,2'-dipiridila (10 mM) 8 43 84 4,4'-dimetil-2,2'-dipiridila (ImM) 23 29 66 Controle (100% MeOH) 37 2 -

Os dados apresentados na Tabela 13, amparam os resultados an-

teriores fornecidos no Exemplo 4, demonstrando que 6,6'-dimetil-2,2'- dipiridila é capaz de inibir significativamente a eclosão de ovo de ovos de Helicoverpa armigera em ambos 10 e ImM. Em OjImM não foi observa- da inibição da eclosão de ovos com este composto. Além disso, dados são apresentados que indicam inibição significante de eclosão de ovo em mM tanto para 5,5'-dimetil-2,2'-dipiridila como para 4,4'-dimetil-2,2'- dipiridila. Além, inibição significante de eclosão de ovo foi observada em ImM de 4,4'-dimetil-2,2'-dipiridila.

Exemplo 18

15

Avaliação de Efeitos de 2-(2-Piridinil)Quinona na Eclosão de Ovos de Plutella xylostella:

Centenas de ovos de Plutella xylostella (estirpe Waite) foram cole- tados, tendo sido postos durante um período de 24 horas. Dentro de 24- 48 horas de coleta, os ovos foram tratados com diferentes inibidores como abaixo descrito.

Lotes de ovos de Plutella que foram postos em pano fino foram mergulhados em uma solução de inibidor específico por aproximada- mente 2 segundos, a solução excedente foi drenada secando-se com papel de seda. O conjunto de ovos foi, então, colocado em uma caixa úmida a 25 graus até a eclosão do ovo. Ovos de controle foram expostos a etanol absoluto como descrito acima. No dia 6 após a colocação, os ovos foram avaliados para os diferentes tratamentos e o percentual de eclosão de ovo foi determinado em relação ao controle.

Tabela 14

Efeitos ovicidas de inibidores na eclosão de ovos de Plutella xylostella em

relação ao controle.

Inibidor Número eclodidos Níliiictu não eclodidos % Inibi- ção 2-(2-piridinil)quinolina (10 mM) 2 56 96 Controle (100% ETOH) 55 14 -

A Tabela 14 indica que o composto quelante de metal 2-(2- piridinil)quinolina foi capaz de inibir eclosão de ovo em Plutella xylostella em 10 mM.

Exemplo 19

Avaliação de Efeitos de íons de Metal Adicionados na Inibição da Eclosão de Ovos por 6,6'-Dimetil-2-29-Dipiridila: Centenas de ovos de Plutella xylostella (estirpe Waite) foram cole- tados, tendo sido postos durante um período de 24 horas. Dentro de 24 horas de coleta, o seguinte modelo experimental foi escolhido. Lotes de ovos foram expostos a 10 mM de 6,6'-dimetil-2,2'-dipiridila por 2 segun- dos, enquanto lotes adicionais de ovos foram expostos ao solvente apenas (Metanol) por 2 segundos. A todos os lotes de ovos foi permitido secar ao ar por 20 minutos a temperatura ambiente. Os ovos foram então expostos por 2 segundos a FeS04 em 10, 5 ou ImM, secos ao ar e colocados na incubadora em 24°C e deixados eclodir durante os próxi- mos 6 dias. Além disso, um controle positivo de 10 mM 6,6'-dimetil-2,2'- dipiridila foi criado, no qual ovos foram expostos a este composto por 2 segundos, secos ao ar e colocados na incubadora. Tabela 15

Reversão dos efeitos ovicidas de 10 mM de 6,6'-dimetil-2,2'-dipiridila na eclosão de ovos de Plutella xylostella em relação ao controles de FeSCU.

Inibidor Número eclodidos Número não eclodidos % Inibi- ção 6,6'-dimetil-2,2 '-dipiridila (+ve) controle 0 44 100 6,6'-dimetil-2,2 '-dipiridila seguido por exposição de 2 segundos a MEOH 3 28 90 6,6'-dimetil-2,2 '-dipiridila seguido por exposição de 2 segundos a 10 mM FeSÜ4 12 19 38 6,6'-dimetil-2,2'-dipiridila seguido por exposição de 2 segundos a 5 mM FeS04 25 0 0 6,6'-dimetil-2,2'-dipiridila seguido por exposição de 2 segundos a ImM FeS04 η Λ 1 3

Os resultados apresentados na Tabela 15 indicam que a adição

dos íons de metal divalentes na forma de Fe em FeSÜ4 foi capaz de reverter os efeitos do agente quelante de metal 6,6'-dimetil-2,2'- dipiridila.

Os resultados indicam que a reversão dos efeitos inibitórios de 6,6'-dimetil-2,2'-dipiridila é devido ao Fe substituindo a ação deste inibidor ao contrário de uma simples diluição do inibidor pelo FeS04. Este efeito é indicado pela descoberta de que exposição dos ovos a MEOH sozinho após a exposição ao inibidor ainda resultou em um grau significante de inibição da eclosão de ovos.

Exemplo 20

Avaliação de Efeitos de íons de Metal Adicionados na Inibição da Eclosão de Ovos por 5,5'-Dimetil-2,2'-Dipiridila:

Centenas de ovos de Plutella xylostella (estirpe Waite) foram cole- tados, tendo sido postos durante um período de 24 horas. Dentro de 24 horas de coleta, o seguinte modelo experimental foi escolhido. Lotes de ovos foram expostos a 10 mM de 5,5'-dimetil-2,2'-dipiridila por 2 segun- dos, enquanto lotes adicionais de ovos foram expostos ao solvente apenas (Metanol) por 2 segundos. A todos os lotes de ovos foi permitido secar ao ar por 20 minutos a temperatura ambiente. Os ovos foram então expostos por 2 segundos a FeS04 em 10, 5 ou ImM, secos ao ar e colocados na incubadora em 24°C e deixados eclodir durante os próxi- mos 6 dias. Além disso, um controle positivo de 10 mM 5,5'-dimetil-2,2'- dipiridila foi criado, no qual ovos foram expostos a este composto por 2 segundos, secos ao ar e colocados na incubadora. Tabela 16

Reversão dos efeitos ovicidas de 10 mM de 5,5'-dimetil-2,2'-dipiridila na eclosão de ovos de Plutella xylostella em relação ao controles de FeSC>4

somente.

Inibidor Número eclodidos Número não eclodidos % Inibi- ção 5,5'-dimetil-2,2 '-dipiridila (+ve) controle 0 38 100 5,5'-dimetil-2,2'-dipiridila seguido por exposição de 2 segundos a MEOH 16 19 55 5,5'-dimetil-2,2'-dipiridila seguido por exposição de 2 segundos a 10 mM FeSÜ4 23 2 8 5,5'-dimetil-2,2'-dipiridila seguido por exposição de 2 segundos a 5 mM FeS04 25 0 0 cr cr? Hímíafil O O' '-J-M- o,o -aimetii -ui^muiict seguido por exposição de 2 segundos a ImM FeS04 39 0 0

Os resultados apresentados na Tabela 16 indicam que a adição dos íons de metal divalentes na forma de Fe em FeSÜ4 foi capaz de reverter os efeitos do agente quelante de metal 5,5'-dimetil-2,2'- dipiridila. Os resultados indicam que a reversão dos efeitos inibitórios de 5,5'-dimetil-2,2'-dipiridila é devido ao Fe removendo a ação deste inibi- dor ao contrário de uma simples diluição do inibidor pelo FeS04. Este efeito é indicado pela descoberta de que exposição dos ovos a MEOFI sozinho após a exposição ao inibidor ainda resultou em um grau signifi- cante de inibição da eclosão de ovos.

Exemplo 21

Eficácia Ovicida de Compostos Quelantes de Metal

Contra Plutella:

A eficácia ovicida de 2-acetil-l-tetralona foi também testada con-

tra ovos de Plutella. O composto foi dissolvido em dietoxiglicol e depois diluído para uma concentração final de 1% dietoxiglicol contendo ImM 2-acetil-l-tetralona e testados da mesma maneira que no Exemplo 13. Os resultados deste ensaio são dados na Figura 7 e indicam forte eficá- cia ovicida deste composto contra Plutella em 2 e ImM sem inibição observada em 0,5 mM.

Exemplo 22

Avaliação de Compostos na Eclosão de Ovos

de Plutella xylostella:

A eficácia ovicida He 2,2',6,2"-terpiridina c 5,5'-dietil-2,2'-uipiridiia

foi também testada contra ovos de Plutella. Os compostos foram dissol- vidos em dietoxiglicol e depois diluídos para uma concentração final de 1% dietoxiglicol contendo 1 mM 2,2',6,2"-terpiridina ou ImM e 0,lmM 5,5'-dietil-2,2'-dipiridila e testados da mesma maneira que no Exemplo 13. Os resultados deste ensaio são dados na Tabela 17 e indicam com- pleta inibição em ImM para ambos os compostos. Inibição parcial de eclosão de ovo foi observada em OjImM 5,5'-dietil-2,2'-dipiridila. Tabela 17

Efeitos ovicidas de compostos na eclosão de ovos de Plutella xylostella em relação aos controles (ovos postos em pano).

Inibidor Número eclodidos Número não eclodidos % Inibi- ção 5,5'-dietil-2,2'-dipiridila (1 mM) 0 34 100 5,5 '-dietil-2,2 '-dipiridila (0,1 mM) 22 34 31 2,2',6,2"-terpiridina (ImM) 0 46 100 Controle (1% dietoxiglicol) 37 39 -

Exemplo 23

Efeitos de 6,6'-Dimetil-2,2'-Dipiridila e 5,5'-Dimetil-2,2'-Dipiridila

na Eclosão de Ovos em Bovicola ovis:

Ovos de B. ovis foram coletados da lã de ovelhas que estavam in- festadas com este parasita. Os ovos foram coletados usando pinça e com o auxílio de um microscópio dissecante e colocados em placas de cultura de tecidos de 24 poços em grupos duplicados de 10 ovos por réplica. Os ovos foram então expostos ou a metanol somente (controle) ou aos compostos de teste tanto por 10 minutos quanto por 1 minuto antes de serem removidos dos poços e colocados em frascos de vidro contendo nutrimento na base do tubo. Os tubos foram colocados em recipientes de plástico contendo uma solução de sal (para manter umidade constan- te em 68%) e os recipientes mantidos a uma temperatura de 32°C. Os ovos foram monitorados para eclosão durante os 12 dias seguintes e % de inibição de eclosão determinada em comparação com os controles. Tabela 18

Efeitos de 6,6'-dimetil-2,2'-dipiridila e 5,5'-dimetil-2,2'-dipiridila na eclosão de ovos em Bovicola ovis.

Número de eclodidos Número de Inibidor em dife- não eclo- % Inibição rentes didos réplicas mM 5,5'-dimetil-2,2'- Rep 1. 0 10 100 dipiridila (10 minutos de exposição) Rep 2. 0 10 mM 5,5'-dimetil-2,2 Rep 1. 0 10 100 dipiridila (1 minuto de exposi- ção) Rep 2. 0 10 mM 6,6'-dimetil-2,2'- Rep 1. 0 10 100 dipiridila (10 minutos de exposição) Rep 2. 0 10 mM 6,6'-dimetil-2,2'- Rep 1. 0 10 100 dipiridila (1 minuto de exposi- ção) Rep 2. 0 10 Controle (Etanol) (10 minutos Rep 1. 5 5 - de exposição) Rep 2. 5 5 Controle (Etanol) (1 minuto de Rep 1. 4 6 - exposição) Rep 2. 5 5 Rep 1. 3 7 - Controle (Não tratado) Rep 2. 6 3

Os resultados apresentados na Tabela 18 indicam que seguindo uma exposição de 10 ou 1 minuto de ovos de piolho B. bovis a uma solução 10 mM de 5,5'-dimetil-2,2'-dipiridila ou 6,6'-dimetil-2,2'-dipiridi- Ia a eclosão de ovo neste ectoparasita poderia ser completamente inibida neste ensaio.

Exemplo 24

Efeitos de Agentes Quelantes de Metal na Eclosão de Ovos em Haemonchus contortus:

O parasita gastrointestinal Haemonchus contortus é um grande patógeno de ovelhas em todo o mundo. O parasita sobrevive através da capacidade dos vermes adultos se ligarem à mucosa abomasal da ovelha e extrair sangue. Uma fêmea adulta pode tirar aproximadamente 0,lml de sangue por dia. Os adultos podem viver por muitos meses com as fêmeas produzindo centenas de ovos por dia e animais infectados lar- gando mais de mil ovos por grama de fezes por dia na pastagem. Os ovos eclodem após 1-2 dias dependendo das condições de tempo e, seguindo duas mudas, larvas L3 infecciosas aparecem na pastagem e são consu- midas pelo hospedeiro. Uma vez no hospedeiro, as larvas L3 derramam da bainha no rúmen. migram para o abomaso e começam a se alimentar se entocando na mucosa, onde eles progridem por ainda 2 mudas. As ovelhas infectadas têm suas condições enfraquecidas e em casos mais graves sofrem desidratação e anemia devido à perda de sangue. Se os parasitas não forem removidos, os animais morrerão. O controle é centrado no uso estratégico de anti-helmínticos junto com manejo de pastagens. Problemas crescentes com a resistência do parasita repre- sentam problemas significantes para produtores, uma vez que a maioria dos anti-helmínticos no mercado não são mais eficazes contra este parasita. De fato, até ivermectina, que tinha mostrado significante potência para controlar este parasita, começou a falhar para o desenvol- vimento de resistência. Numa tentativa de melhorar o controle de H. contortus, os efeitos do composto 5,5'-dimetil-2,2'-dipiridila foram examinados em ovos II. contortus. Foram recuperados ovos das fezes de ovelhas infectadas usando um método de flutuação em sacarose padrão. Os ovos foram regulados para uma densidade de aproximadamente 2.500 ovos por mL e foram então expostos a concentrações variadas do composto e incuba- das por 48 horas a 25°C. Os ovos foram, então, examinados, para determinar a eficácia ovicida do composto em comparação com controle não tratado e um controle somente com solvente. A Figura 8 apresenta a eficácia ovicida de 5,5'-dimetil-2,2'-dipiridila em ovos de II. contortus.

A Figura 8 indica que 5,5'-dimetil-2,2'-dipiridila foi potencialmente ovicida em 180 e 18 ug/mL (equivalente a 1 e 0,1 mM do ativo, respecti- vamente). Uma comparação da eficácia ovicida entre 5,5'-dimetil-2,2'- dipiridila e o produto comercial ivermectina indicou que 5,5'-dimetil- 2,2'-dipiridila foi na ordem de IOx mais efetivo na inibição da eclosão de ovos de H. contortus comparado a ivermectina (Figura 8 e Figura 9).

Além disso, a eficácia ovicida do composto 2-acetil-l-tetralona foi examinada contra H. contortus (Figura 10). O mesmo protocolo foi usado como descrito para 5,5'-dimefil-2;2'-dipiridila. Os dados indicam que em 220ug/mL (ImM) e llOug/mL (0,5 mM) 2-acetil-l-tetralona foi altamen- te efetivo inibindo eclosão de ovo. Foi observada inibição parcial de eclosão de ovo em 22ug/mL (0,lmM).

Exemplo 25 Efeitos de 5,5'-DÍmetil-2,2'-Dipiridila na Eclosão de Ovos e Viabilidade

em Ácaros Dermatophagoides spp:

Um papel de filtro (90 mm de diâmetro) foi pego e colocado em um placa de Petri das mesmas dimensões. O papel de filtro foi então com- pletamente molhado com o composto teste, usando um pulverizador de bomba de ar pequeno. Ao papel de filtro molhado foi então permitido secar ao fluxo de ar livre. 200mg de meio de ácaros, contendo aproxi- madamente 500 ácaros/g, foi colocado no papel de filtro e o número de ácaros contado sob um microscópio. A arena foi então deixada por 2 semanas em uma incubadora em 25°C e 75% UR. Após 2 semanas, o número de ácaros na arena foi contado por uma segunda vez. Este experimento foi repetido 3 vezes com o composto teste e outras 3 vezes usando água como um controle. Os resultados estão apresentados na tabela 19.

Resultados

Réplica Contagem de 1 hora Contagem de 2 semanas 1 Composto teste 76 74 2 Composto teste 61 50 3 Composto teste 104 90 4 Controle 69 110 Controle 72 125 6 Controle 91 112

Tabela 19

Contagem de ácaros após 1 hora e duas semanas nos papéis de filtro tratados com composto teste e o controle

As populações de ácaros em papéis de filtro tratados mostraram

um pequeno declínio durante o período de 2 semanas. Isto pode ser devido ã prevenção de eclosão de ovos e/ou a efeitos em oviposição dos ácaros-fêmeas. Em contraste, os tratamentos de controle apresentaram pequenas diminuições em populações de ácaros, sugerindo uma morta- lidade menor de ácaros adultos e nenhum efeito adverso na viabilidade do ovo.

Exemplo 26 Efeitos de 5,5'-Dimetil-2,2'-Dipiridila na Eclosão de Ovos nas Pulgas de Gato Ctenocephalides felis.

Ovos de pulga de gato foram expostos por 10 minutos a 10 mM 5,5'-dimetil-2,2'-dipiridila e então removidos da solução e colocados em uma incubadora e deixados eclodir. Um grupo de ovos de ácaros foi exposto ao veículo apenas e foi usado como controle. Um terceiro grupo permaneceu sem tratamento. Subseqüentemente, os ovos foram exami- nados e o percentual de ovos que eclodiram com sucesso comparado aos controles determinados.

Exemplo 27 Efeitos de 5,5'-Dimetil-2,2'-Dipiridila na Eclosão de Ovos em Percevejos Cimex lectularius:

Ovos de percevejo foram expostos por 10 minutos a 10 mM 5,5'- dimetil-2,2'-dipiridila e depois removidos da solução e colocados em uma incubadora e deixados eclodir. Um grupo de ovos de ácaros foi exposto apenas ao veículo e foi usado como controle. Um terceiro grupo permaneceu sem tratamento. Subseqüentemente, os ovos foram exami- nados e o percentual de ovos que eclodiram com sucesso comparado com os controles determinados.

Exemplo 28 Efeitos de 5,5'-Dimetil-2,2'-Dipiridila na Sobrevivência em Haemonchus contortus: Foram expostas larvas do terceiro estágio de II. contortus a con- centrações variadas de 5,5'-dimetil-2,2'-dipiridila e os efeitos na muda de L3 e L4 examinados. As larvas tiveram as suas bainhas derramadas (as suas bainhas L2 foram removidas quimicamente) ou não derramadas (as suas bainhas L2 ficaram intactas). As larvas foram expostas a concentrações variadas de 5,5'-dimetil-2,2'-dipiridila adicionado ao seu meio de cultura DMEM e os efeitos em sobrevivência larval monitorado durante o tempo. Seguindo uma incubação de 30 minutos em 37°C, mais do que 90% das larvas derramadas expostas ale 0,5 mM do composto apareceram mortas. Em contraste, não foram observados efeitos adversos nas larvas não derramadas em comparação com as larvas controle até 3 dias após a exposição ao composto. No dia seis após a exposição, mais do que 90% das larvas pareceram ter morrido nos grupos de tratamento enquanto as larvas controle pareceram sau- dáveis. Este efeito larvicida nas larvas não derramadas pareceu ser dependente da dose já que seguindo uma exposição de ΙΟμΜ do com- posto as larvas pareceram normais até 6 dias após a exposição.

Exemplo 29

Efeito de 5,5'-Dimetil-2.2'-Dipiridila Formulada na Eclosão de Ovos no Piolho do Corpo:

5,5'-dimetil-2,2'-dipiridila foi formulada e avaliada no ensaio de ovo de piolho do corpo padrão.

Ovos de piolho do corpo (15-30 por réplica) de idades variadas fo- ram expostos por 10 minutos às soluções de teste ou a um placebo ou deixadas sem tratamento, seguido por lavagem com água por 1 minuto e secos com papel absorvente. Os ovos foram então incubados em 30°C durante os 10 dias pós-tratamento seguintes e o percentual de ovos que eclodiram com sucesso foi determinado (Tabela 20). Os resultados mostram uma forte dependência de dose da atividade ovicida, quando o composto 5,5'-dimetil-2,2'-dipiridila é formulado e aplicado a ovos de piolho do corpo.

Tabela 20

Um resumo dos dados é apresentado abaixo. Os dados são expressos como a % de ovos que eclodiram seguindo tratamento.

Tratamento Idade dos ovos 24h 48h 96h 120h Formulação de Placebo 88 93 92 96 Controle (Não tratado) 89 84 93 95 5,5'-dimetil-2,2 '-dipiridila (30mM) 0 0 0 0 5,5'-dimetil-2,2'-dipiridila (10 mM) 4 7 10 12 5,5'-dimetil-2,2'-dipiridila (5 mM) 21 58 64 65 5,5'-dimetil-2,2'-dipiridila (1 mM) 91 80 82 86

Exemplo 30

Efeito de S^-Dimetil^^-Dipiridila Formulada

na Eclosão de Ovos no Piolho de Cabeça:

Permitiu-se que piolhos fêmeas prenhes colocassem ovos. Os ovos foram contados, inspecionados sob um microscópio de luz e todos os ovos que pareceram não danificados foram alocados para um de dois grupos de tratamento. Um grupo foi exposto a 5'-dimetil-2,2'-dipiridila em uma formulação, enquanto o segundo grupo foi exposto à formula- ção apenas. O protocolo foi como se segue:

Tratamentos: 5'-dimetil-2,2'-dipiridila (20mM) n=10 Controle de veículo apenas n=10 Tempo de exposição: 10 minutos Tempo de lavagem: 1 minuto em ~37°C

Incubação: Todos os ovos foram colocados em 31°C em uma incubadora úmida e monitorados para sinais de desenvolvimento especificamente dos olhos e subseqüente eclosão, ver Tabela 21.

Resultados:

Tabela 21

Dia 1 (09/03)

Tratamento Ha44 Placebo Estágio do desenvol- vimento 1 desenvolvimento do olho 9 sem des. do olho 0 desenvolvimento do olho Dia 4 (13/03) Tratamento Ha44 Placebo Estágio do desenvol- vimento 1 eclodido 1 desenvolvimento do olho 8 sem des. do olho 4 desenvolvimento do olho 6 sem des. do olho Dia 5 (14/03)

Tratamento Ha44 Placebo Estágio do desenvol- vimento 1 desenvolvimento do olho 8 sem des. do olho 8 desenvolvimento do olho 2 sem des. do olho Dia 6 (15/03) Tratamento Ha44 Placebo Estágio do desenvol- vimento 1 desenvolvimento do olho 8 sem des. do olho 8 desenvolvimento do olho 1 sem des. do olho Dia 7 (16/03) Tratamento Ha44 Placebo Estágio do desenvol- vimento 1 desenvolvimento do olho 8 sem des. do olho 5 eclodidos 4 desenvolvimento do olho 1 sem des. do olho Dia 12 (21/03) Tratamento Ha44 Placebo Estágio do desenvol- vimento 1 desenvolvimento do olho 8 sem des. do olho 6 eclodidos 3 desenvolvimento do olho 1 sem des. do olho

Os resultados indicam que uma formulação de 20mM de 5'- dimetil-2,2'-dipiridila pode suprimir significativamente eclosão de ovo em piolho de cabeça. Dois dos ovos se desenvolveram, mas apenas um dos dois ovos eclodiu. Os outros 80% fracassaram na eclosão. No grupo tratado com Placebo, 60% dos ovos eclodiram, 30% se desenvolveram em ninfas, mas não eclodiram e 1 ovo não se desenvolveu. Estes dados indicam que uma formulação contendo 5'-dimetil-2,2'-dipiridila pode inibir significativamente eclosão em ovos de piolhos de cabeça.

Exemplo 31

Efeito Ovicida de 5,5'-Dimetil-2,2'-Dipiridila e 5,5'-Dietil-2,2'- Dipiridila na Eclosão de Ovos em Plutella na Estufa:

Um certo número de tratamentos e réplicas foi estabelecido na ca- sa de vidro usando plantas de repolho jovens que estavam no 4-5 está- gio de folhagem. Ovos de Plutella xylostella foram postos por fêmeas prenhes nas folhas, tal que cada planta continha 10 ovos. As plantas foram borrifadas com um ovicida comercial ou usando os compostos 5,5'-dimetil-2,2'-dipiridila e 5,5'-dietil-2,2'-dipiridila em uma formulação na taxa de 200L/Há usando um track sprayer. Também foram incluídos controles de água apenas ou Placebo. A eficácia ovicida foi monitorada durante um número de dias e o número de ovos eclodindo e larvas de lagartas emergindo foi registrado (Tabela 22). (Μ (Ν

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H Os resultados deste experimento indicam que ambos compostos de dipiridila produziram atividade ovicida significante em plantas de repolho comparado aos grupos de placebo e não tratados. Além disso, os resultados foram comparáveis ao produto Lannate contendo metomil.

Será observado por pessoas versadas na técnica que numerosas

variações e/ou modificações podem ser feitas à invenção, como mostra- do nas modalidades específicas, sem se afastar do espírito ou escopo da invenção como amplamente descrito. As presentes modalidades devem, portanto, ser consideradas em todos os aspectos como ilustrativas e não restritivas.

Todas as publicações discutidas acima estão incorporadas neste documento em sua totalidade.

Qualquer discussão de documentos, atos, materiais, dispositivos, artigos ou semelhantes que tenha sido incluída no presente Relatório Descritivo é apenas com o propósito de fornecer um contexto para a presente invenção. Não deve ser tomado como reconhecimento de que qualquer ou todos esses assuntos fazem parte da base técnica anterior ou eram de conhecimento geral comum no campo relevante para a presente invenção como existia em qualquer país antes da data de prioridade de cada Reivindicação deste Pedido.

Claims

"Métodos de Tratamento de Infestação de Peste, de Extermínio de Peste de Invertebrados, de Inibição de Evento de Remodelação e de Incubação de Ovos em Invertebrado Não Ectoparasítico em População de Invertebrados, de Controle ou Extermínio de População de Peste de Invertebrados e de Seleção de Agente Quelante Como Candidato Inibidor de Evento de Remodelação de Invertebrados a Partir de Coleção de Agentes Quelantes de Metal" Reivindicações

1. - Método de Tratamento de Infestação de Peste, caracterizado por que compreende diminuir o exsheathment (derramamento da bainha) de um invertebrado fazendo contatar externamente uma peste com um composto da fórmula (I): <formula>formula see original document page 146</formula>em que X é selecionado a partir de uma ligação covalente, - C(RS)2-, -Z- ou -C(RS)2-Z-C(RS)2-; R1 e R1' são independentemente selecionados a partir de hidrogênio, Ci-6alquil, uma cadeia ramificada Ci-6alquil, C2-6alquenil, C2-6alquinil, hidroxi, Ci-6alcoxi, tiol, Ci-ealquiltio, halógeno, C(R6)3, CO2H, C02Ci-6alquil, SO3H, S03Ci-6alquil, NH2, NHCi-6alquil ou N(Ci- 6alquil)2 ou R1 e R19 tomados em conjuntos são -C(R52-, -C(R5)2, -C(R5)2-, -CR5=CR5-, C(O), C(S) ou NH; R2, R2', R3, R3', R4 e R4' são independentemente selecio- nados a partir de hidrogênio, Ci-6alquil, uma cadeia ramificada Ci- 6alquil, C2-6alquenil, C2-6alquinil, hidroxi, Ci-,6alcoxi, tiol, Ci-6alquiltiol, halógeno, CN, C(R6)3, CO2H, C02Ci-6alquil, SO3H, S03Ci-6alquil, NH2, NHCi-ealquil ou N(Ci^alquil)2, -CH2CHNH(CO2H), NH(Ci-6alquileno)N(Ci-6alquil)2 ou um anel carbocíclico ou heterocíclico de ,5 ou 6 membros; ou R2 e R3 ou R3 e R4 e/ou R2' e R3' ou R3' e R4' tomados em conjunto com os átomos de carbono a que estão ligados formam um anel carbocíclico ou heterocíclico de 5 ou 6 membros; cada R5 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio, Ci-6alquil, uma cadeia ramificada Ci-6alquil, C2-6alquenil, C2-6alquinil, hidroxi, Ci-6alcoxi, tiol, Ci-6alquiltiol, CO2H, C02Ci-6alquil, SO3H, S03Ci-6alquil, NH2, NHCi-6alquil ou N(Ci-6alquil)2; cada R6 ê independentemente selecionado a partir de hidrogênio e halógeno; e Z é selecionado a partir de uma ligação covalente, -NH-, - O-, -S-, -C(O)- e -C(S)-; um sal farmacêutica, veterinaria ou agriculturalmente aceitável dos mesmos numa quantidade efetiva para inibir ou diminuir a taxa de exsheathment (derramamento da bainha) do referido inverte- brado.

2. - Método de Tratamento de Infestação de Peste, caracterizado por que compreende a excistação decrescente de um invertebrado por contato externo de uma peste com um composto da fórmula: <formula>formula see original document page 148</formula> em que X é selecionado a partir de uma ligação covalente, - C(R5)2-, -Z- ou -C(RS)2-Z-C(RS)2-; R1 e R1" são independentemente selecionados a partir de hidrogênio, Ci-6alquil, uma cadeia ramificada Ci-6alquil, C2-6alquenil, C2-6alquinil, hidroxi, Ci-6alcoxi, tiol, Ci-6alquiltio, halógeno, C(R6)3, CO2H, C02Ci.6alquil, SO3H, S03Ci-6alquil, NH2, NHCi-6alquil ou N(Ci-6alquil)2 ou R1 e R19 tomados em conjuntos são - C(R5)2-, -C(R5)2-C(R5)2-, -CR5=CR5-, C(O), C(S) ou NH; R2, R2', R3, R3', R4 e R4' são independentemente selecio- nados a partir de hidrogênio, Ci-6alquil, uma cadeia ramificada Ci- õalquil, C2-6alquenil, C2-6alquinil, hidroxi, Ci-6alcoxi, tiol, Ci-6alquiltiol, halógeno, CN, C(R6)3, CO2H, C02Ci-6alquil, SO3H, S03Ci-6alquil, NH2, NHCi-ealquil ou N(Ci-6alquil)2, -CH2CHNH(CO2H), NH(Ci-6alquileno)N(Ci-6alquil)2 ou um anel carbocíclico ou heterocíclico de 5 ou 6 membros; ou R2 e R3 ou R3 e R4 e/ou R2' e R3' ou R3' e R4' tomados em conjunto com os átomos de carbono a que estão ligados formam um (I) anel carbocíclico ou heterocíclico de 5 ou 6 membros; cada R5 é independentemente selecionado a- partir de hidrogênio, Ci-6alquil, uma cadeia ramificada de Ci-ealquil, C2-6alquenil, C2-6alquinil, hidroxi, Ci-6alcoxi, tiol, Ci-ealquiltiol, CO2H, C02Ci-6alquil, SO3H, S03Ci-6alquil, NH2, NHCi-6alquil ou N(C1^alquil)2; cada R6 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio e halógeno; e aceitável dos mesmos numa quantidade efetiva para inibir ou de outra forma diminuir a taxa de excistação do referido invertebrado.

3. - Método de Tratamento de Infestação de Peste, caracterizado por que compreende diminuir a apólise de um invertebrado fazendo conta- tar externamente uma peste com um composto da fórmula: Z é selecionado a partir de uma ligação covalente, -NH-, <formula>formula see original document page 149</formula> um sal farmacêutica, veterinaria ou agriculturalmente (I) em que X é selecionado a partir de uma ligação covalente, - C(R5)2-, -Z- ou -C(R5)2-Z-C(R5)2-; R1 e R1' são independentemente selecionados a partir de hidrogênio, Ci-6alquil, uma cadeia ramificada Ci-6alquil, C2-6alquenil, C2-6alquinil, hidroxi, Ci-6alcoxi, tiol, Ci-6alquiltio, halógeno, C(R6)3, CO2H, C02Ci-6alquil, SO3H, S03Ci-6alquil, NH2, NHCi-6alquil ou N(Ci- 6alquil)2 ou R1 e R19 tomados em conjuntos são - C(R5)2-, -C(R5)2-C(R5)2-, -CR5=CR5-, C(O), C(S) ou NH; R2, R2', R3, R3', R4 e R4' são independentemente selecio- nados a partir de hidrogênio, Ci-6alquil, uma cadeia ramificada Ci- õalquil, C2-6alquenil, C2-6alquinil, hidroxi, Ci-6alcoxi, tiol, Ci-6alquiltiol, halógeno, CN, C(RS)3, CO2H, C02Ci-6alquil, SO3H, S03Ci-6alquil, NH2, NHCi-ealquil ou N(Ci-6alquil)2, -CH2CHNH(CO2H), NH(Ci-6alquileno)N(Ci- 6alquil)2 ou um anel carbocíclico ou heterocíclico de 5 ou 6 membros; ou R2 e R3 ou R3 e R4 e/ou R2 e R3 ou R3 e R4 tomados em conjunto com os átomos de carbono a que estão ligados formam um anel carbocíclico ou heterocíclico de 5 ou 6 membros; cada R5 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio, Ci-6alquil, uma cadeia ramificada Ci-6alquil, C2-6alquenil, C2-6alquinil, hidroxi, Ci-6alcoxi, tiol, Ci-6alquiltiol, CO2H, C02Ci-6alquil, SO3H, S03Ci-6alquil, NH2, NHCi-6alquil ou N(Ci-6alquil)2; cada R6 ê independentemente selecionado a partir de hidrogênio e halógeno; e Z é selecionado a partir de uma ligação covalente, -NH-, - O-, -S-, -C(O)- e -C(S)-; um sal farmacêutica, veterinaria ou agriculturalmente aceitável dos mesmos numa quantidade efetiva para inibir ou de outra forma diminuir a taxa de apólise do referido invertebrado.

4. - Método de Tratamento de Infestação de Peste, caracterizado por que compreende inibir a metamorfose de um invertebrado fazendo contatar externamente a referida peste com um composto da fórmula: <formula>formula see original document page 151</formula> R1 e R1' são independentemente selecionados a partir de hidrogênio, Ci-6alquil, uma cadeia ramificada Ci-6alquil, C2-6alquenil, C2-6alquinil, hidroxi, Ci-6alcoxi, tiol, Ci-ealquiltio, halógeno, C(R6)3, CO2H, C02Ci-6alquil, SO3H, S03Ci-6alquil, NH2, NHCi-6alquil ou N(Ci- 6alquil)2 ou R1 e R19 tomados em conjuntos são - C(R5)2-, -C(R5)2-C(R5)2-, -CR5=CR5-, C(O), C(S) ou NH; R2, R2', R3, R3', R4 e R4' são independentemente selecio- nados a partir de hidrogênio, Ci-6alquil, uma cadeia ramificada Ci- ealquil, C2-6alquenil, C2-6alquinil, hidroxi, Ci-6alcoxi, tiol, Ci-6alquiltiol, halógeno, CN, C(R6)3, CO2H, C02Ci-6alquil, SO3H, SO3Ci-ealquil, NH2, NHCi-ealquil ou N(Ci-6alquil)2, -CH2CHNH(CO2H), NH(Ci-6alquileno)N(Ci- 6alquil)2 ou um anel carbocíclico ou heterocíclico de 5 ou 6 membros; ou R2 e R3 ou R3 e R4 e/ou R2 e R3 ou R3 e R4 tomados em conjunto com os átomos de carbono a que estão ligados formam um anel carbocíclico ou heterocíclico de 5 ou 6 membros; cada R5 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio, Ci-6alquil, uma cadeia ramificada Ci-6alquil, C2-6alquenil, C2-6alquinil, hidroxi, Ci-6alcoxi, tiol, Ci-6alquiltiol, CO2H, C02Ci-6alquil, SO3H, S03Ci-6alquil, NH2, NHCi-ealquil ou N(Ci-6alquil)2; cada R6 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio e halógeno; e Z é selecionado a partir de uma ligação covalente, -NH-, -0-, -S-, -C(O)- e -C(S)-; ou um sal farmacêutica, veterinaria ou agriculturalmente aceitável dos mesmos numa quantidade efetiva para inibir ou de outra forma diminuir a taxa de metamorfose do referido invertebrado.

5. Método de Tratamento de Infestação de Peste, de acordo com qualquer uma das Reivindicações de 1 a 4, caracterizado por que R3 e R3' é cada um independentemente etil ou metil.

6. Método de Tratamento de Infestação de Peste, de acordo com a Reivindicação 5, caracterizado por que R3 é etil.

7. Método de Tratamento de Infestação de Peste, de acordo com a Reivindicação 5, caracterizado por que R3 é metil.

8. - Método de Tratamento de Infestação de Peste, de acordo com a 20 Reivindicação 5, caracterizado por que R3 é metil.

9. - Método de Tratamento de Infestação de Peste, de acordo com a Reivindicação 5, caracterizado por que R3 é etil.

10. - Método de Tratamento de Infestação de Peste, de acordo com a Reivindicação 5, caracterizado por que R3' é etil e R3 é metil.

11. - Método de Tratamento de Infestação de Peste, de acordo com a Reivindicação 5, caracterizado por que ou R3 é metil e R3 é etil.

12. - Método de Tratamento de Infestação de Peste, de acordo com qualquer uma das Reivindicações de 1 a 4, caracterizado por que ambos os R3' e R3 são etil.

13. - Método de Tratamento de Infestação de Peste, de acordo com qualquer uma das Reivindicações de 1 a 4, caracterizado por que o referido composto é um agente quelante de metal, em que o agente quelante de metal tem pelo menos dois átomos polares capazes de simultaneamente coordenar com um íon de metal, tem um valor de clogP de /1 e <4; e/ou uma refratividade molar na faixa de 40 a 90 cm3/mole.

14. - Método de Tratamento de Infestação de Peste, de acordo com a Reivindicação 13, caracterizado por que o agente quelante de metal não é 1,10-fenantrolina.

15. - Método de Tratamento de Infestação de Peste, de acordo com a Reivindicação 13, caracterizado por que o agente quelante de metal não é 2,2'-bipiridina.

16. - Método de Tratamento de Infestação de Peste, de acordo com qualquer uma das Reivindicações de 1 a 4, caracterizado por que o referido método compreende, além disso, contatar a citada peste com um segundo praguicida.

17. - Método de Tratamento de Infestação de Peste, caracterizado por que compreende diminuir o exsheathment (derramamento da bainha) de um invertebrado fazendo contatar externamente uma peste com um composto da fórmula (II): <formula>formula see original document page 154</formula> em que Y1 e Y2 são independentemente selecionados a partir de O, NR2S ou S; R21, R22, R23 e R24 são independentemente selecionados a partir de hidrogênio, Ci-6alquil, uma cadeia ramificada de Ci-6alquil, C2- õalquenil, C2-6alquinil, hidroxi, Ci-6alcoxi, tiol, Ci-6alquiltio, halógeno, CN, C(R29)3, CO2H, C02Ci-6alquil, SO3H, S03Ci-6alquil, NH2, NHCi- ôalquil, N(Ci-6alquil)2 ou um anel carbocíclico ou hete-rocíclico; ou R21 e R22 ou R22 e R23 e R24 tomados em conjunto com os átomos de carbono a que estão ligados formam um anel carbocíclico ou heterocíclico de 5 ou 6 membros; R25 e R26 são independentemente selecionados a partir de hidrogênio, Ci-6alquil, uma cadeia ramificada Ci-6alquil, C2-6alquenil, Ci-6alquinil, hidroxi, Ci-6alcoxi, tiol, Ci-6alquiltio, halógeno, CN, C(R29)3, CO2H, C02Ci-6alquil, SO3H, S03Ci-6alquil, NH2, NHCi-6alquil ou N(Ci-6alquil)2; ou R25 e R26 em conjunto com os átomos de carbono a que estão ligados formam um anel carbocíclico ou heterocíclico de 5 ou 6 membros; R27 é Ci-6alquil, uma cadeia ramificada de Ci-6alquil, Ci- 6alquenil, C2-6alquinil, hidroxi, Ci-6alcoxi, tiol, Ci-6alquiltio, C(R29)2, N(R30)2 ou um anel carbocíclico ou anel heterocíclico de 5 ou 6 mem- bros; R28 é hidrogênio, Ci-6alquil ou uma cadeia ramificada Ci- õalquil; R29 é hidrogênio ou halógeno; e cada R30 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio, Ci-6alquil, uma cadeia ramificada de Ci-6alquil, Ci-6alquenil, Ci-6alquinil, um anel carbocíclico ou anel heterocíclico de 5 ou 6 mem- bros; ou um sal farmacêutica, veterinaria ou agriculturalmente aceitável dos mesmos numa quantidade efetiva para inibir ou diminuir a taxa de exsheathment (derramamento da bainha) do referido inverte- brado.

18. - Método de Tratamento de Infestação de Peste, caracterizado por que compreende diminuir a excistação de um invertebrado fazendo contatar externamente uma peste com um composto da fórmula (II): <formula>formula see original document page 155</formula> em que Y1 e Y2 são independentemente selecionados a partir de O, NR2S ou S; R21, R22, R23 e R24 são independentemente selecionados a partir de hidrogênio, Ci-6alquil, uma cadeia ramificada de Ci-6alquil, C2- õalquenil, C2-6alquinil, hidroxi, Ci-6alcoxi, tiol, Ci-6alquiltio, halógeno, CN, C(R29)3, CO2H, C02Ci-6alquil, SO3H, S03Ci-6alquil, NH2, NHCi-6alquil, N(Ci-6alquil)2 ou um anel carbocíclico ou heterocíclico; ou R21 e R22 ou R22 e R23 e R24 tomados em conjunto com os átomos de carbono a que estão ligados formam um anel carbocíclico ou heterocíclico de 5 ou 6 membros; R25 e R26 são independentemente selecionados a partir de hidrogênio, Ci-6alquil, uma cadeia ramificada Ci-6alquil, C2-6alquenil, C2-6alquinil, hidroxi, Ci-6alcoxi, tiol, Ci-6alquiltio, halógeno, CN, C(R29)3, CO2H, C02C1-6alquil, SO3H, S03Ci-6alquil, NH2, NHCi-6alquil ou N(Ci-6alquil)2; ou R25 e R26 em conjunto com os átomos de carbono a que estão ligados formam um anel carbocíclico ou heterocíclico de 5 ou 6 membros; R27 é Ci-6alquil, uma cadeia ramificada Ci-6alquil, C2- õalquenil, C2-6alquinil, hidroxi, Ci-6alcoxi, tiol, Ci-6alquiltio, C(R29)2, N(R3O)2 ou um anel carbocíclico ou anel heterocíclico de 5 ou 6 mem- bros; R28 é hidrogênio, Ci-6alquil, uma cadeia ramificada Ci- ôalquil; R29 é hidrogênio ou halógeno; e cada R30 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio, Ci-eak^iil, uma cadeia ramificada Ci-6alquil, C2-6alquenil, C2-6alquinil, um anel carbocíclico ou anel heterocíclico de 5 ou 6 mem- bros; ou um sal farmacêutica, veterinaria ou agriculturalmente aceitável dos mesmos numa quantidade efetiva para inibir ou de outra forma diminuir a taxa de excistação do referido invertebrado.

19. - Método de Tratamento de Infestação de Peste, caracterizado por que compreende diminuir a apólise de um invertebrado fazendo contatar externamente uma peste com um composto, da fórmula (II): <formula>formula see original document page 157</formula> em que Y1 e Y2 são independentemente selecionados a partir de O, NR2S ou S; R21, R22, R23 e R24 são independentemente selecionados a partir de hidrogênio, Ci-6alquil, uma cadeia ramificada Ci-6alquil, C2- õalquenil, C2-6alquinil, hidroxi, Ci-6alcoxi, tiol, Ci-6alquiltio, halógeno, CN, C(R29)3, CO2H, C02Ci-6alquil, SO3H, S03Ci-6alquil, NH2, NHCi- 6alquil, N(Ci-6alquil)2 ou um anel carbocíclico ou heterocíclico; ou R21 e R22 ou R22 e R23 e R24 tomados em conjunto com os átomos de carbono a que estão ligados formam um anel carbocíclico ou heterocíclico de 5 ou 6 membros; R25 e R26 são independentemente selecionados a partir de hidrogênio, Ci-6alquil, uma cadeia ramificada Ci-6alquil, C2-6alquenil, C2-6alquinil, hidroxi, Ci-6alcoxi, tiol, Ci-6alquiltio, halógeno, CN, C(R29)3, CO2H, C02Ci-6alquil, SO3H, S03Ci-6alquil, NH2, NHCi-6alquil ou N(Ci-6alquil)2; ou R25 e R25 em conjunto com os átomos de carbono a que estão ligados formam um anel carbocíclico ou heterocíclico de 5 ou 6 membros; R27 é Ci-ealquil, uma cadeia ramificada Ci-6alquil, C2- ôalquenil, C2-6alquinil, hidroxi, Ci-6alcoxi, tiol, Ci-6alquiltio, C(R29)2, N(R30)2 ou um anel carbocíclico ou anel heterocíclico de 5 ou 6 mem- bros; R28 é hidrogênio Ci-6alquil ou uma cadeia ramificada Ci- õalquil; R29 é hidrogênio ou halógeno; e cada R30 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio, Ci-6alquil, uma cadeia ramificada Ci-6alquil, C2-6alquenil, C2-6alquinil, um anel carbocíclico ou anel heterocíclico de 5 ou 6 mem- bros; ou um sal farmacêutica, veterinaria ou agriculturalmente aceitável dos mesmos numa quantidade efetiva para inibir ou diminuir a taxa de apólise do referido invertebrado.

20. - Método de Tratamento de Infestação de Peste, caracterizado por que compreende inibir a metamorfose de um invertebrado fazendo contatar externamente a referida peste com um composto da fórmula: <formula>formula see original document page 159</formula> em que Y1 e Y2 são independentemente selecionados a par- tir de O, NR28 ou S; R21, R22, R23 e R24 são independentemente selecionados a partir de hidrogênio, Ci-6alquil, uma cadeia ramificada Ci-6alquil, C2- ôalquenil, C2-6alquinil, hidroxi, Ci-ealcoxi, tiol, Ci-6alquiltio, halógeno, CN, C(R29)3, CO2H, C02Ci-6alquil, SO3H, S03Ci-6alquil, NH2, NHCi- õalquil, N(Ci-6alquil)2 ou um anel carbocíclico ou heterocíclico; ou R21 e R22 ou R22 e R23 e R24 tomados em conjunto com os átomos de carbono a que estão ligados formam um anel carbocíclico ou heterocíclico de 5 ou 6 membros; R25 e R26 são independentemente selecionados a partir de hidrogênio, Ci-6alquil, uma cadeia ramificada Ci-6alquil, C2-6alquenil, C2-6alquinil, hidroxi, Ci-6alcoxi, tiol, Ci-ealquiltio, halógeno, CN, C(R29)3, CO2H, C02Ci-6alquil, SO3H, S03Ci-6alquil, NH2, NHCi-6alquil ou N(Ci- 6alquil)2; ou R25 e R26 em conjunto com os átomos de carbono a que estão ligados formam um anel carbocíclico ou heterocíclico de 5 ou 6 membros; R27 é Ci-6alquil, uma cadeia ramificada Ci-6alquil, C2- ôalquenil, C2-6alquinil, hidroxi, Ci-6alcoxi, tiol, Ci-6alquiltio, C(R29)2, N(R30)2 ou um anel carbocíclico ou anel heterocíclico de 5 ou 6 mem- bros; R28 é hidrogênio, Ci-6alquil, uma cadeia ramificada Ci- õalquil; R29 é hidrogênio ou halógeno; e cada R30 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio, Ci-6alquil, uma cadeia ramificada Ci-ôalquil, C2-6alquenil, C2-6alquinil, um anel carbocíclico ou anel heterocíclico de 5 ou 6 mem- bros; ou um sal farmacêutica, veterinaria ou agriculturalmente aceitável dos mesmos numa quantidade efetiva para inibir ou de outra forma diminuir a taxa de metamorfose do referido invertebrado.

21. - Método de Tratamento de Infestação de Peste, de acordo com qualquer uma das Reivindicações de 17 a 20, caracterizado por que o referido composto é um agente quelante de metal, em que o agente quelante de metal tem pelo menos dois átomos polares capazes de coordenar simultaneamente com um íon de metal, tem um valor de clogP /1 e < 4; e/ou uma refratividade molar na faixa de 40 a 90 cm3/mole.

22. - Método de Tratamento de Infestação de Peste, de acordo com qualquer uma das Reivindicações de 17 a 20, caracterizado por que o referido método compreende, além disso, contatar a referida peste com um segundo praguicida.

23. - Método de Tratamento de Infestação de Peste, de acordo com qualquer uma das Reivindicações de 1 a 4 ou as Reivindicações de 17 a 20, caracterizado por que o referido método produz uma diminuição maior na taxa de exsheathment (derramamento da bainha), excistação, apólise ou metamorfose do que é visto com a administração de 1,10- fenantrolina.

24. - Método de Extermínio de Peste de Invertebrados, caracteri- zado por que o referido método compreende contatar a citada peste com um composto da fórmula (I): <formula>formula see original document page 161</formula> em que X é selecionado a partir de uma ligação covalente, - C(R5)2-, -Z- ou -C(R5)2-Z-C(R5)2-; R1 e R1' são independentemente selecionados a partir de hidrogênio, Ci-6alquil, uma cadeia ramificada Ci-6alquil, C2-6alquenil, C2-6alquinil, hidroxi, Ci-ealcoxi, tiol, Ci-6alquiltio, halógeno, C(R6)3, CO2H, C02Ci-6alquil, SO3H, S03Ci-6alquil, NH2, NHCi-6alquil ou N(Ci- 6alquil)2 ou R1 e R19 tomados em conjuntos são - C(R5)2-, -C(R5)2-C(R5)2-, -CR5=CR5-, C(O), C(S) ou NH; R2, R2', R3, R3', R4 e R4' são independentemente seleciona- is dos a partir de hidrogênio, Ci-6alquil, uma cadeia ramificada Ci-6alquil, C2-6alquenil, C2-6alquinil, hidroxi, Ci-6alcoxi, tiol, Ci-6alquiltiol, halógeno, CN, C(Re)3, CO2H, C02Ci-6alquil, SO3H, S03Ci-6alquil, NH2, NHCi-ealquil ou N(Ci-6alquil)2, -CH2CHNH(CO2H), NH(Ci-6alquileno)N(Ci- 6alquil)2 ou um anel carbocíclico ou heterocíclico de 5 ou 6 membros; ou R2 e R3 ou R3 e R4 e/ou R2 e R3' ou R3' e R4' tomados em conjunto com os átomos de carbono a que estão ligados formam um anel carbocíclico ou heterocíclico de 5 ou 6 membros; cada R5 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio, Ci-6alquil, uma cadeia ramificada Ci-6alquil, C2-6alquenil, C2-6alquinil, hidroxi, Ci-ealcoxi, tiol, Ci-6alquiltiol, CO2H, C02Ci-6alquil, SO3H, S03Ci-6alquil, NH2, NHCi-ealquil ou N(Ci^alquil)2; cada R é independentemente selecionado a partir de hidrogênio e halógeno; e Z é selecionado a partir de uma ligação covalente, -NH-, -O- , -S-, -C(O)- e -C(S)-; ou um sal farmacêutica, veterinaria ou agriculturalmente aceitável dos mesmos numa quantidade efetiva para matar disse inver- tebrado.

25. - Método de Extermínio de Peste de Invertebrados, caracterizado por que o referido método compreende contatar a citada peste com um composto da fórmula (II): em que Y1 e Y2 são independentemente selecionados a par- tir de O, NR2S ou S; R21, R22, R23 e R24 são independentemente selecionados a partir de hidrogênio, Ci-6alquil, uma cadeia ramificada Ci-6alquil, C2- õalquenil, C2-6alquinil, hidroxi, Ci-6alcoxi, tiol, Ci-6alquiltio, halógeno, CN, C(R29)3, CO2H, C02Ci-6alquil, SO3H, S03Ci-6alquil, NH2, NHCi- õalquil, N(Ci-6alquil)2 ou um anel carbocíclico ou heterocíclico; ou R21 e R22 ou R22 e R23 e R24 tomados em conjunto com os átomos de carbono a que estão ligados formam um anel carbocíclico ou heterocíclico de 5 ou 6 membros; R25 e R26 são independentemente selecionados a partir de hidrogênio, Ci-6alquil, uma cadeia ramificada Ci-6alquil, C2-6alquenil, C2-6alquinil, hidroxi, Ci-ealcoxi, tiol, Ci-6alquiltio, halógeno, CN, C(R29)3, CO2H, C02Ci-6alquil, SO3H, S03Ci-6alquil, NH2, NHCi-6alquil ou N(Ci-6alquil)2; ou R25 e R26 em conjunto com os átomos de carbono a que estão ligados formam um anel carbocíclico ou heterocíclico de 5 ou 6 membros; R27 é Ci-6alquil, uma cadeia ramificada de Ci-6alquil, C2- ealquenil, C2-6alquinil, hidroxi, Ci-ealcoxi, tiol, Ci-ealquiltio, C(R29)2, N(R30)2 ou um anel carbocíclico ou anel heterocíclico de 5 ou 6 mem- bros; R28 é hidrogênio, Ci-6alquil ou uma cadeia ramificada Ci- õalquil; R29 é hidrogênio ou halógeno; e cada R30 ê independentemente selecionado a partir de hidrogênio, Ci-6alquil, uma cadeia ramificada Ci-6alquil, C2-6alquenil, C2-6alquinil, um anel carbocíclico ou anel heterocíclico de 5 ou 6 mem- bros; ou um sal farmacêutica, veterinaria ou agriculturalmente aceitável dos mesmos numa quantidade efetiva para matar dito inverte- brado.

26. - Método de Extermínio de Peste de Invertebrados, de acordo com a Reivindicação 24 ou 25, caracterizado por que o referido inver- tebrado é selecionado do grupo que consiste em nematódios, tre- matódios, cestódios, piolhos, pulgas, ácaros e sarna, traças, besouros, borboletas de lagartas, térmitas, aracnídeos, baratas, lacraias, pulgas e ácaros.

27. - Método de Inibição de Evento de Remodelação em População de Invertebrados, caracterizado por que compreende contatar a referida peste com um composto da fórmula (I): em que X é selecionado a partir de uma ligação covalente, - C(R5)2-, -Z- ou -C(R5)2-Z-C(R5)2-; R1 e R1' são independentemente selecionados a partir de hidrogênio, Ci-6alquil, uma cadeia ramificada Ci-6alquil, C2-6alquenil, C2-6alquinil, hidroxi, Ci-ealcoxi, tiol, Ci-ealquiltio, halógeno, C(R6)3, CO2H, C02Ci-6alquil, SO3H, S03Ci-6alquil, NH2, NHCi-6alquil ou N(Ci- 6alquil)2 ou R1 e R19 tomados em conjuntos são -C(R5)2-, -C(R5)2-C(R5)2-, -CR5=CR5-, C(O), C(S) ou NH; R2, R2', R3, R3', R4 e R4' são independentemente seleciona- dos a partir de hidrogênio, Ci-6alquil, uma cadeia ramificada Ci-6alquil, C2-6alquenil, C2-6alquinil, hidroxi, Ci-ealcoxi, tiol, Ci-6alquiltiol, halógeno, CN, C(R6)3, CO2H, C02Ci-6alquil, SO3H, S03Ci-6alquil, NH2, NHCi-6alquil ou N(Ci-6alquil)2, -CH2CHNH(CO2H), NH(Ci-6alquileno)N(Ci- 6alquil)2 ou um anel carbocíclico ou heterocíclico de 5 ou 6 membros; ou R2 e R3 ou R3 e R4 e/ou R2 e R3 ou R3 e R4 tomados em con- junto com os átomos de carbono a que estão ligados formam um anel carbocíclico ou heterocíclico de 5 ou 6 membros; cada R5 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio, Ci-6alquil, uma cadeia ramificada Ci-6alquil, C2-6alquenil, C2-6alquinil, hidroxi, Ci-ealcoxi, tiol, Ci-6alquiltiol, CO2H, C02Ci-6alquil, SO3H, S03Ci-6alquil, NH2, NHCi-6alquil ou N(Ci-6alquil)2; cada R6 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio e halógeno; e Z é selecionado a partir de uma ligação covalente, -NH-, -0-, -S-, -C(O)- e -C(S)-; ou um sal farmaceuticam, veterinaria ou agriculturalmente aceitável dos mesmos numa quantidade efetiva para inibir evento de remodelação do citado invertebrado, em que o evento de remodelação do dito invertebrado não é incubação de ovos e o referido invertebrado não é um inseto ectoparasítico.

28. - Método de Inibição de Evento de Remodelação em População de Invertebrados, de acordo com a Reivindicação 27, caracterizado por que R3 e R3' são cada um independentemente etil ou metil.

29. - Método de Inibição de Evento de Remodelação em População de Invertebrados, caracterizado por que compreende contatar a referida peste com um composto da fórmula (II): <formula>formula see original document page 166</formula> em que Y1 e Y2 são independentemente selecionados a par- tir de O, NR2S ou S; R21, R22, R23 e R24 são independentemente selecionados a partir de hidrogênio, Ci-6alquil, uma cadeia ramificada Ci-6alquil, C2- ôalquenil, C2-6alquinil, hidroxi, Ci-6alcoxi, tiol, Ci-6alquiltio, halógeno, CN, C(R29)3, CO2H, C02Ci-6alquil, SO3H, S03Ci-6alquil, NH2, NHCi- 6alquil, N(Ci-6alquil)2 ou um anel carbocíclico ou heterocíclico; ou R21 e R22 ou R22 e R23 e R24 tomados em conjunto com os átomos de carbono a que estão ligados formam um anel carbocíclico ou heterocíclico de 5 ou 6 membros; R25 e R26 são independentemente selecionados a partir de hidrogênio, Ci-6alquil, uma cadeia ramificada de Ci-6alquil, C2-6alquenil, Ci-6alquinil, hidroxi, Ci-6alcoxi, tiol, Ci-ealquiltio, halógeno, CN, C(R29)3, CO2H, C02Ci-6alquil, SO3H, S03Ci-6alquil, NH2, NHCi-6alquil ou N(Ci- 6alquil)2; ou R25 e R26 em conjunto com os átomos de carbono a que estão ligados formam um anel carbocíclico ou heterocíclico de 5 ou 6 membros; R27 é Ci-6alquil, uma cadeia ramificada de Ci-6alquil, Ci- ealquenil, C2-6alquinil, hidroxi, Ci-6alcoxi, tiol, Ci-6alquiltio, C(R29)2, N(R30)2 ou um anel carbocíclico ou anel heterocíclico de 5 ou 6 mem- bros; R28 é hidrogênio, Ci-6alquil ou uma cadeia ramificada Ci- õalquil; R29 é hidrogênio ou halógeno; e cada R30 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio, Ci-6alquil, uma cadeia ramificada de Ci-ealquil, Ci-6alquenil, Ci-6alquinil, um anel carbocíclico ou anel heterocíclico de 5 ou 6 mem- bros; ou um sal farmacêutica, veterinaria ou agriculturalmente aceitável dos mesmos numa quantidade efetiva para inibir o citado evento de remodelação de invertebrado, em que dito evento de remode- lação de invertebrado não é incubação de ovos e o referido invertebrado não é um inseto ectoparasítico.

30. - Método de Inibição de Evento de Remodelação em População de Invertebrados, de acordo com a Reivindicação 27 ou 29, caracteri- zado por que a referida peste de invertebrado é selecionada a partir do grupo que consiste em nematódios, trematódios e cestódios.

31. - Método de Inibição de Incubação de Ovos em Invertebrado Não Ectoparasítico em População de Invertebrados, caracterizado por que compreende contatar o referido invertebrado com um composto da fórmula (I): <formula>formula see original document page 167</formula> <formula>formula see original document page 168</formula> em que X é selecionado a partir de uma ligação covalente, - C(RS)2-, -Z- ou -C(RS)2-Z-C(RS)2-; R1 e R1' são independentemente selecionados a partir de hidrogênio, Ci-6alquil, uma cadeia ramificada Ci-6alquil, C2-6alquenil, C2-6alquinil, hidroxi, Ci-6alcoxi, tiol, Ci-6alquiltio, halógeno, C(R6)3, CO2H, C02Ci-6alquil, SO3H, S03Ci-6alquil, NH2, NHCi-6alquil ou N(Ci- 6alquil)2 ou R1 e R19 tomados em conjuntos são - C(R5)2-, -C(RS)2-C(R5)2-, -CR5=CR5-, C(O), C(S) ou NH; R2, R2', R3, R3', R4 e R4' são independentemente seleciona- dos a partir de hidrogênio, Ci-6alquil, uma cadeia ramificada Ci-6alquil, C2-6alquenil, C2-6alquinil, hidroxi, Ci-6alcoxi, tiol, Ci-6alquiltiol, halógeno, CN, C(R6)3, CO2H, C02Ci-6alquil, SO3H, S03Ci-6alquil, NH2, NHCi-ealquil ou N(Ci-6alquil)2, -CH2CHNH(CO2H), NH(Ci-6alquileno)N(Ci- 6alquil)2 ou um anel carbocíclico ou heterocíclico de 5 ou 6 membros; ou R2 e R3 ou R3 e R4 e/ou R2 e R3 ou R3 e R4 tomados em con- junto com os átomos de carbono a que estão ligados formam um anel carbocíclico ou heterocíclico de 5 ou 6 membros; cada R5 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio, Ci-6alquil, uma cadeia ramificada de Ci-6alquil, C2- 6alquenil, C2-6alquinil, hidroxi, Ci-6alcoxi, tiol, Ci-6alquiltiol, CO2H, C02Ci-6alquil, SO3H, S03Ci-6alquil, NH2, NHCi-6alquil ou N(Ci-6alquil)2; cada R6 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio e halógeno; e Z é selecionado a partir de uma ligação covalente, -NH-, -O- , -S-, -C(O)- e -C(S)-; ou um sal farmaceuticam, veterinaria ou agriculturalmente aceitável dos mesmos numa quantidade efetiva para inibir a citada incubação de ovos.

32. - Método de Inibição de Incubação de Ovos em Invertebrado Não Ectoparasítico em População de Invertebrados, de acordo com a Reivindicação 31, caracterizado por que R3 e R3' são cada um inde- pendentemente etil ou metil.

33. - Método de Inibição de Incubação de Ovos em Invertebrado Não Ectoparasítico em População de Invertebrados, caracterizado por que compreende contatar o referido invertebrado com um composto da fórmula (II): <formula>formula see original document page 169</formula> em que Y1 e Y2 são independentemente selecionados a par- tir de O, NR2S ou S; R21, R22, R23 e R24 são independentemente selecionados a partir de hidrogênio, Ci-6alquil, uma cadeia ramificada Ci-6alquil, C2- 6alquenil, C2-6alquinil, hidroxi, Ci-6alcoxi, tiol, Ci-6alquiltio, halógeno, CN, C(R29)3, CO2H, C02Ci-6alquil, SO3H, S03Ci-6alquil, NH2, NHCi- ôalquil, N(Ci-6alquil)2 ou um anel carbocíclico ou heterocíclico; ou R21 e R22 ou R22 e R23 e R24 tomados em conjunto com os átomos de carbono a que estão ligados formam um anel carbocíclico ou heterocíclico de 5 ou 6 membros; R25 e R26 são independentemente selecionados a partir de hidrogênio, Ci-6alquil, uma cadeia ramificada Ci-6alquil, C2-6alquenil, C2-6alquinil, hidroxi, Ci-6alcoxi, tiol, Ci-6alquiltio, halógeno, CN, C(R29)3, CO2H, C02Ci-6alquil, SO3H, S03Ci-õalquil, NH2, NHCi-6alquil ou N(Ci- 6alquil)2; ou R25 e R26 em conjunto com os átomos de carbono a que estão ligados formam um anel carbocíclico ou heterocíclico de 5 ou 6 membros; R27 é Ci-6alquil, uma cadeia ramificada CiJPalquil, C2- õalquenil, C2^alquinil, hidroxi, Ci-6alcoxi, tiol, Ci-6alquiltio, C(R29)2, N(R30)2 ou um anel carbocíclico ou anel heterocíclico de 5 ou 6 mem- bros; R28 é hidrogênio, Ci-6alquil ou uma cadeia ramificada Ci- ealquil; R29 ê hidrogênio ou halógeno; e cada R30 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio, Ci-6alquil, uma cadeia ramificada Ci-6alquil, C2-6alquenil, C2-6alquinil, um anel carbocíclico ou anel heterocíclico de 5 ou 6 mem- bros; ou um sal farmacêutica, veterinaria ou agriculturalmente aceitável dos mesmos numa quantidade efetiva para inibir a citada incubação de ovos.

34. - Método de Inibição de Incubação de Ovos em Invertebrado Não Ectoparasítico em População de Invertebrados, de acordo com a Reivindicação 31 ou a Reivindicação 33, caracterizado por que o referido invertebrado é selecionado do grupo que consiste em nematódios, trematódios e cestódios.

35. - Método de Inibição de Incubação de Ovos em Invertebrado Não Ectoparasítico em População de Invertebrados, de acordo com a Reivindicação 34, caracterizado por que o referido invertebrado é um nematódio.

36. - Método de Inibição de Incubação de Ovos em Invertebrado Não Ectoparasítico em População de Invertebrados, de acordo com a Reivindicação 35, caracterizado por que o referido nematódio é inibido em sua fase larval.

37. - Método de Controle ou Extermínio de População de Peste de Invertebrados, caracterizado por que compreende contatar interior ou externamente a referida peste com um composto da fórmula (I): em que X é selecionado a partir de uma ligação covalente, - C(RS)2-, -Z- ou -C(RS)2-Z-C(RS)2-; R1 e R1' são independentemente selecionados a partir de hidrogênio, Ci-6alquil, uma cadeia ramificada Ci-6alquil, C2-6alquenil, C2-6alquinil, hidroxi, Ci-6alcoxi, tiol, Ci-6alquiltio, halógeno, C(R6)3, CO2H5 C02Ci-6alquil, SO3H, S03Ci-6alquil, NH2, NHCi-6alquil ou N(Ci- 6alquil)2 ou R1 e R19 tomados em conjunto são - C(R5)2-, -C(R5)2-C(R5)2-, -CR5=CR5-, C(O), C(S) ou NH; R2, R2', R3, R3', R4 e R4' são independentemente seleciona- dos a partir de hidrogênio, Ci-6alquil, uma cadeia ramificada Ci-6alquil, C2-6alquenil, C2-6alquinil, hidroxi, Ci-6alcoxi, tiol, Ci-6alquiltiol, halógeno, CN, C(R6)3, CO2H, C02Ci-6alquil, SO3H, S03Ci-6alquil, NH2, NHCi-ealquil ou N(Ci-6alquil)2, -CH2CHNH(CO2H), NH(Ci-6alquileno)N(Ci- 6alquil)2 ou um anel carbocíclico ou heterocíclico de 5 ou 6 membros; ou R2 e R3 ou R3 e R4 e/ou R2 e R3 ou R3 e R4 tomados em con- junto com os átomos de carbono a que estão ligados formam um anel carbocíclico ou heterocíclico de 5 ou 6 membros; cada R é independentemente selecionado a partir de hidrogênio, Ci-6alquil, uma cadeia ramificada Ci-6alquil, C2-6alquenil, C2-6alquinil, hidroxi, Ci-6alcoxi, tiol, Ci-6alquiltiol, CO2H, CO2Ci^alquil, SO3H, S03Ci-6alquil, NH2, NHCi-6alquil ou N(Ci-6alquil)2; cada R6 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio e halógeno; e Z é selecionado a partir de uma ligação covalente, -NH-, -O-, -S-, -C(O)- e -C(S)-; ou um sal farmaceuticam, veterinaria ou agriculturalmente aceitável dos mesmos numa quantidade efetiva para matar ou reduzir o tamanho da população de dita peste de invertebrado.

38. - Método de Inibição de Incubação de Ovos em Invertebrado Não Ectoparasítico em População de Invertebrados, de acordo com a Reivindicação 37, caracterizado por que R3 e R3' são cada um inde- pendentemente etil ou metil.

39. - Método de Controle ou Extermínio de População de Peste de Invertebrados, caracterizado por que compreende contatar interior ou externamente a referida peste com um composto da fórmula (II): em que Y1 e Y2 são independentemente selecionados a par- tir de O, NR2S ou S; R21, R22, R23 e R24 são independentemente selecionados a partir de hidrogênio, Ci-6alquil, uma cadeia ramificada Ci-6alquil, C2- õalquenil, C2-6alquinil, hidroxi, Ci-6alcoxi, tiol, Ci-6alquiltio, halógeno, CN, C(R29)3, CO2H, C02Ci-6alquü, SO3H, S03Ci-6alquil, NH2, NHCi- ôalquil, N(Ci-6alquil)2 ou um anel carbocíclico ou heterocíclico; ou R21 e R22 ou R22 e R23 e R24 tomados em conjunto com os átomos de carbono a que estão ligados formam um anel carbocíclico ou heterocíclico de 5 ou 6 membros; R25 e R26 são independentemente selecionados a partir de hidrogênio, Ci-6alquil, uma cadeia ramificada Ci-6alquil, C2-6alquenil, C2-6alquinil, hidroxi, Ci-6alcoxi, tiol, Ci-6alquiltio, halógeno, CN, C(R29)3, CO2H, C02Ci-6alquil, SO3H, S03Ci-6alquil, NH2, NHCi-6alquil ou N(Ci-6alquil)2; ou R25 e R26 em conjunto com os átomos de carbono a que estão ligados formam um anel carbocíclico ou heterocíclico de 5 ou 6 membros; R27 é Ci-6alquil, uma cadeia ramificada de Ci-6alquil, C2- 6alquenil, C2-6alquinil, hidroxi, Ci-ealcoxi, tiol, Ci-6alquiltio, C(R)2, N(R30)2 ou um anel carbocíclico ou anel heterocíclico de 5 ou 6 mem- bros; R28 é hidrogênio, Ci-6alquil ou uma cadeia ramificada Ci- õalquil; R29 é hidrogênio ou halógeno; e cada R30 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio, Ci-6alquil, uma cadeia ramificada de Ci-6alquil, C2-6alquenil, C2-6alquinil, um anel carbocíclico ou anel heterocíclico de 5 ou 6 mem- bros; ou um sal farmacêutica, veterinaria ou agriculturalmente aceitável dos mesmos numa quantidade efetiva para matar ou reduzir o tamanho da população de dita peste de invertebrado.

40. - Método de Seleção de Agente Quelante Como Candidato Inibi- dor de Evento de Remodelação de Invertebrados a Partir de Coleção de Agentes Quelantes de Metal, caracterizado por que o referido método compreende selecionar um agente quelante de metal que tenha pelo menos dois átomos polares capazes de coordenar simultaneamente com um íon de metal e i. um valor de clogP /1 e < 4; e/ou ii. uma refratividade molar na faixa de 40 a 90 cm3/mole.

41. - Método de Seleção de Agente Quelante Como Candidato Inibi- dor de Evento de Remodelação de Invertebrados a Partir de Coleção de Agentes Quelantes de Metal, caracterizado por que o referido agente quelante é da fórmula (II): (Π) em que Y1 e Y2 são independentemente selecionados a par- tir de O, NR28 ou S; R21, R22, R23 e R24 são independentemente selecionados a partir de hidrogênio, Ci-6alquil, uma cadeia ramificada Ci-ôalquil, C2- ôalquenil, C2-6alquinil, hidroxi, Ci-6alcoxi, tiol, Ci-6alquiltio, halógeno, CN, C(R29)3, CO2H, C02Ci-5alquil, SO3H, SOsCi-ealquil, NH2, NHCi- ôalquil, N(Ci-6alquil)2 ou um anel carbocíclico ou heterocíclico; ou R21 e R22 ou R22 e R23 e R24 tomados em conjunto com os átomos de carbono a que estão ligados formam um anel carbocíclico ou heterocíclico de 5 ou 6 membros; R25 e R26 são independentemente selecionados a partir de hidrogênio, Ci-6alquil, uma cadeia ramificada Ci-6alquil, C2-6alquenil, C2-6alquinil, hidroxi, Ci-6alcoxi, tiol, Ci-6alquiltio, halógeno, CN, C(R29)3, CO2H, C02Ci-6alquil, SO3H, S03Ci-6alquilNH2, NHCi-6alquil ou N(Ci-6alquil)2; ou R25 e R26 em conjunto com os átomos de carbono a que estão ligados formam um anel carbocíclico ou heterocíclico de 5 ou 6 membros; R27 é Ci-6alquil, uma cadeia ramificada Ci-6alquil, C2- ôalquenil, hidroxi, Ci-6alcoxi, tiol, Ci-6alquiltio, C(R29)2, N(R30)2 ou um anel carbocíclico ou anel heterocíclico de 5 ou 6 membros; R28 é hidrogênio, Ci-6alquil ou uma cadeia ramificada Ci- ôalquil; R29 é hidrogênio ou halógeno; e cada R30 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio, Ci-6alquil, uma cadeia ramificada Ci-ealquil, C2-6alquenil, C2-6alquinil, um anel carbocíclico ou anel heterocíclico de 5 ou 6 membros; ou um sal farmacêutica, veterinaria ou agriculturalmente aceitável dos mesmos; compreendendo o citado método selecionar um agente que- lante de metal da fórmula (II) que tenha pelo menos dois átomos polares capazes de coordenar simultaneamente com um íon de metal e i) um valor de clogP / 1 e < 4; e/ou ii) uma refratividade molar na faixa de 40 a 90 cm3/mole.

42. - Método de Seleção de Agente Quelante Como Candidato Inibi- dor de Evento de Remodelação de Invertebrados a Partir de Coleção de Agentes Quelantes de Metal, caracterizado por que o referido agente quelante é da fórmula (I): <formula>formula see original document page 177</formula> em que X é selecionado a partir de uma ligação covalente, - C(R5V, -Z- ou -C(R5)2-Z-C(RS)2-; R1 e R1' são independentemente selecionados a partir de hidrogênio, Ci-6alquil, uma cadeia ramificada Ci-6alquil, C2-6alquenil, Ci-6alquinil, hidroxi, Ci-6alcoxi, tiol, Ci-6alquiltio, halógeno, C(R6)3, CO2H, C02Ci-6alquil, SO3H, S03Ci-6alquil, NH2, NHCi-6alquil ou N(Ci- 6alquil)2 ou R1 e R19 tomados em conjuntos são -C(R5)2-, -C(R5)2-C(R5)2-, -CR5=CR5-, C(O), C(S) ou NH; R2, R2', R3, R3', R4 e R4' são independentemente seleciona- dos a partir de hidrogênio, Ci-6alquil, uma cadeia ramificada Ci-6alquil, C2-6alquenil, C2-6alquinil, hidroxi, Ci-6alcoxi, tiol, Ci-6alquiltiol, halógeno, CN, C(R6)3, CO2H, C02Ci-6alquil, SO3H, S03Ci-6alquil, NH2, NHCi-ealquil ou N(Ci-6alquil)2, -CH2CHNH(CO2H), NH(Ci-5alquileno)N(Ci- 6alquil)2 ou um anel carbocíclico ou heterocíclico de 5 ou 6 membros; ou R2 e R3 ou R3 e R4 e/ou R2 e R3 ou R3 e R4 tomados em con- junto com os átomos de carbono a que estão ligados formam um anel carbocíclico ou heterocíclico de 5 ou 6 membros; cada R5 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio, Ci-6alquil, uma cadeia ramificada Ci-6alquil, C2-6alquenil, C2-6alquinil, hidroxi, Ci-6alcoxi, tiol, Ci-6alquiltiol, CO2H, C02Ci-6alquil, SO3H, S03Ci-6alquil, NH2, NHCi-5alquil ou N(Ci.6alquil)2; cada R6 é independentemente selecionado a partir de hidrogênio e halógeno; e Z é selecionado a partir de uma ligação covalente, -NH-, -0-, -S-, -C(O)- e -C(S)-; compreendendo o citado método selecionar um agente que- lante de metal de fórmula (I) que tenha pelo menos dois átomos polares capazes de coordenar simultaneamente com um íon de metal e i) um valor de clogP /1 e < 4; e/ou ii) uma refratividade molar na faixa de 40 a 90 cm3/mole.