BRPI0807727A2 - Sais 668 - Google Patents

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "SAIS 668". A presente invenção referes-e a novas formas salinas de N-[2- (dietilamino)etil]-/V-(2-{[2-(4-hidróxi-2-oxo-2,3-di-hidro-1,3-benzotiazol-7- il)etil]amino}etil)-3-[2-(1-naftil)etóxi]propanamida, composições contendo tais novas formas salinas, processos para preparar tais formas salinas, e o uso de tais formas salinas no tratamento de estados doentios (tais como estados doentios respiratórios como, por exemplo, asma ou COPD).

A base livre de /V-[2-(Dietilamino)etil]-/V-(2-{[2-(4-hidróxi-2-oxo-

2,3-di-hidro-1,3-benzotiazol-7-il)etil]amino}etil)-3-[2-(1-naftil)etóxi]propana- mida e seu sais de dibromidrato e dicloridrato são agonistas β-2- adrenoceptores e são descritos no PCT/SE2006/000927 (publicado como WO 2007/018461, veja os Exemplos 7, 15 e 16). Estes compostos mostram uma seletividade pelo adrenoceptor β-2 de até 10 vezes em relação aos a1D-adrenérgicos, βΐ-adrenérgicos e dopamina D2.

A presente invenção provê um sal farmaceuticamente aceitável de N-[2-(Dietilamino)etil]-A/-(2-{[2-(4-hidróxi-2-oxo-2,3-di-hidro-1,3-

benzotiazol-7-il)etil]amino}etil)-3-[2-(1-naftil)etóxi]propanamida desde que não seja o sal de dibromidrato ou dicloridrato.

Um sal farmaceuticamente aceitável inclui, por exemplo, um tri- fluoroacetato, sulfato, fosfato, acetato, fumarato, maleato, citrato, piruvato, succinato, oxalato, metanossulfonato, p-toluenossulfonato, bissulfato, ben- zenossulfonato, etanossulfonato, malonato, xinafoato, ascorbato, oleato, ni- cotinato, sacarinato, adipato, formiato, glicolato, L-lactato, D-lactato, asparta- to, malato, L-tartarato, D-tartarato, estearato, 2-furoato, 3-furoato, napadisila- to (naftaleno-1,5-dissulfonato ou naftaleno-1-(ácido sulfônico)-5-sulfonato), edisilato (etano-1,2-dissulfonato ou etano-1 -(ácido sulfônico)-2-sulfonato), isetionato (2-hidroxietilsulfonato), 2-mesitilenossulfonato ou 2- naftalenossulfonato. O D-mandelato ou o L-mandelato também podem ser um sal adequado.

Um sal da invenção pode existir na forma de um solvato (tais como hidratos), e a presente invenção cobre todos tais solventes.

Em um aspecto em particular, a presente invenção oferece um I

sal farmaceuticamente aceitável de N-[2-(Dietilamino)etil]-A/-(2-{[2-(4-hidróxi-

i

2-oxo-2,3-di-hidro-1,3-benzotiazol-7-il)etil]amino}etil)-3-[2-(1- naftil)etóxi]propanamida o qual é um sal de citrato, ditosilato, fosfato, dixina- foato, sulfato, monobenzoato, fumarato ou besilato.

Em um outro aspecto, a presente invenção oferece um sal de

monocitrato de N-[2-(Dietilamino)etil]-/V-(2-{[2-(4-hidróxi-2-oxo-2,3-di-hidro-

1.3-benzotiazol-7-il)etil]amino}etil)-3-[2-(1-naftil)etóxi]propanamida.

Ainda em outro aspecto, a presente invenção oferece um sal de citrato de N-[2-(Dietilamino)etil]-A/-(2-{[2-(4-hidróxi-2-oxo-2,3-di-hidro-1,3- benzotiazol-7-il)etil]amino}etil)-3-[2-(1-naftil)etóxi]propanamida com um pa- drão de difração de raios X em pó (XR PD)contendo picos específicos a: 4,4 (±0,1°), 7,2 (±0,1°), 13,7 (±0,1°), 17,4 (±0,1°), 18,7 (±0,1 °)e 21,4 (±0,1°)2Θ.

Um sal de citrato pode ser preparado através da adição de ácido cítrico a uma solução de N-[2-(Dietilamino)etil]-/V-(2-{[2-(4-hidróxi-2-oxo-2,3- 15 di-hidro-1,3-benzotiazol-7-il)etil]amino}etil)-3-[2-(1-naftil)etóxi]propanamida em um álcool alifático adequado (tal como o metanol), solubilizando todo o material (a temperatura elevada se necessário)e permitindo seu resfriamen- to, a partir do que o sal de citrato se precipita da solução e pode ser coleta- do.

Em um outro aspecto, a presente invenção oferece um sal de

dixinafoato de N-[2-(Dietilamino)etil]-/V-(2-{[2-(4-hidróxi-2-oxo-2,3-di-hidro-

1.3-benzotiazol-7-il)etil]amino}etil)-3-[2-(1-naftil)etóxi]propanamida.

Em ainda outro aspecto, a presente invenção oferece um sal de dixinafoato de N-[2-(Dietilamino)etil]-/\/-(2-{[2-(4-hidróxi-2-oxo-2,3-di-hidro- 25 1,3-benzotiazol-7-il)etil]amino}etil)-3-[2-(1-naftil)etóxi]propanamida na forma de um di-hidrato com um padrão de difração de raios X em pó contendo pi- cos específicos a: 4,8 (±0,1°), 7,7 (±0,1°), 9,1 (±0,1°), 12,2 (±0,1°), 16,1 (±0,1 °)e 21,3 (±0,1 °)2Θ.

Em um outro aspecto, a presente invenção oferece um sal de dixinafoato de N-[2-(Dietilamino)etil]-A/-(2-{[2-(4-hidróxi-2-oxo-2,3-di-hidro-

1.3-benzotiazol-7-il)etil]amino}etil)-3-[2-(1 -naftil)etóxi]propanamida na forma de um Di-Hemi-hirato com um padrão de difração de raios X em pó contendo picos específicos a: 8,5 (±0,1°), 9,4 (±0,1°), 11,6 (±0,1°), 11,9 (±0,1°), 16,6 (±0,1°), 17,7 (±0,1 °)e 22,4 (±0,1°)2Θ.

Um sal de xinafoato pode ser preparado através da adição de ácido 1-hidróxi-2-naftoico a uma solução de N-[2-(Dietilamino)etil]-/S/-(2-{[2- (4-hidróxi-2-oxo-2,3-di-hidro-1,3-benzotiazol-7-il)etil]amino}etil)-3-[2-(1 -

naftil)etóxi]propanamida em um álcool alifático adequado (tal como o meta- nol), misturando em temperatura elevada (tal como temperatura de refluxo)e permitindo seu resfriamento, a partir do que o sal de xinafoato pode ser cole- tado.

Em um outro aspecto, a presente invenção oferece um sal de

fosfato de N-[2-(Dietilamino)etil]-/V-(2-{[2-(4-hidróxi-2-oxo-2,3-di-hidro-1,3- benzotiazol-7-il)etil]amino}etil)-3-[2-(1-naftil)etóxi]propanamida.

Em ainda um outro aspecto, a presente invenção oferece um sal de fosfato de N-[2-(Dietilamino)etil]-/V-(2-{[2-(4-hidróxi-2-oxo-2,3-di-hidro-1,3- 15 benzotiazol-7-il)etil]amino}etil)-3-[2-(1-naftil)etóxi]propanamida na forma de um Di-Hemi-hirato com um padrão de difração de raios X em pó contendo picos específicos a: 5,5 (±0,1°), 8,4 (±0,1°), 9,04 (±0,1°), 11,8 (±0,1°), 16,3 (±0,1 °)e 20,6 (±0,1°)2Θ.

Um sal de fosfato pode ser preparado através da adição de áci- 20 do fosfórico a uma solução de N-[2-(Dietilamino)etil]-A/-(2-{[2-(4-hidróxi-2- oxo-2,3-di-hidro-1,3-benzotiazol-7-il)etil]amino}etil)-3-[2-(1- naftil)etóxi]propanamida em um álcool alifático adequado (tal como o meta- nol), misturando em temperatura elevada (tal como temperatura de refluxo), e permitindo seu resfriamento, a partir do que o sal de fosfato pode ser cole- 25 tado.

Em um outro aspecto, a presente invenção oferece um sal de monobenzoato de N-[2-(Dietilamino)etil]-/V-(2-{[2-(4-hidróxi-2-oxo-2,3-di- hidro-1,3-benzotiazol-7-il)etil]amino}etil)-3-[2-(1-naftil)etóxi]propanamida.

Em ainda um outro aspecto, a presente invenção oferece uma forma cristalina do sal de monobenzoato de N-[2-(Dietilamino)etil]-A/-(2-{[2- (4-hidróxi-2-oxo-2,3-di-hidro-1,3-benzotiazol-7-il)etil]amino}etil)-3-[2-(1- naftil)etóxi]propanamida com um padrão de difração de raios X em pó con- I

tendo picos específicos a: 5,6 (±0,1°), 8,3 (±0,1°), 9,5 (±0,1°), 14,8 (±0,1°),

i

20,1 (±0,1 °)e 22,5 (±0,1°)2Θ.

Um sal de benzoato pode ser preparado através da adição de ácido benzoico a uma solução de N-[2-(Dietilamino)etil]-/V-(2-{[2-(4-hidróxi-2- oxo-2,3-di-hidro-1,3-benzotiazol-7-il)etil]amino}etil)-3-[2-(1-

naftil)etóxi]propanamida em um álcool alifático adequado (tal como o meta- nol), misturando (por exemplo, à temperatura ambiente (tal como de 10- 30°C))e então coletando o sal de benzoato.

Os sais da presente invenção podem ser preparados através da utilização ou da adaptação: dos métodos apresentados acima; dos métodos apresentados em Preparações ou dos Exemplos abaixo; ou dos métodos descritos na literatura.

Os sais da invenção podem ser utilizados no tratamento de:

1. trato respiratório: doenças obstrutivas das vias respirató- rias incluindo: asma, incluindo a asma brônquica, alérgica, intrínseca, extrín- seca, induzida por atividade física, induzida pelo uso de fármacos (incluindo a aspirina e induzindo por NSAID)e induzida pela inalação de poeira, tanto intermitente quanto persistente e em todos os graus de severidade, e outras causas de hiperresponsividade das vias respiratórias; doença pulmonar obs- trutiva crônica (COPD); bronquite, incluindo bronquite infecciosa e eosinofíli- ca; enfisema; bronquiectasia; fibrose cística; sarcoidose; pulmão de fazen- deiro e doenças relacionadas; pneumonia de hipersensibilidade; fibrose pul- monar, incluindo alveolite fibrosante criptogênica, pneumonias intersticiais idiopáticas, complicações fibróticas de terapia antineoplásica e infecção crô- nica, incluindo tuberculose e aspergilose e outras infecções fúngicas; com- plicações de transplante de pulmão; distúrbios vasculíticos e trombóticos da vasculatura do pulmão e hipertensão pulmonar; atividade antitussiva, inclu- indo o tratamento de tosse crônica associada a condições inflamatórias e secretoras das vias respiratórias e tosse iatrogênica; rinite aguda e crônica, incluindo a rinite medicamentosa, e rinite vasomotora; rinite alérgica sazonal e perene, incluindo a rinite nervosa (febre do feno); polipose nasal; infecção viral aguda, incluindo o resfriado comum e infecções devido ao vírus sincicial respiratório, influenza, coronavírus (incluindo SARS)ou adenovírus; ou eso- fagite eosinofílica;

2. ossos e articulações: artrites associadas a ou incluindo a osteoartrite/osteoartrose, primária ou secundária a, por exemplo, displasia congênita do quadril; espondilite lombar e cervical e dores no pescoço e na parte inferior das costas; osteoartrite; artrite reumatoide e doença de Still; espondiloartropatias soronegativas, incluindo a espondilite anquilosante, a artrite psoriática, a artrite reativa e a espondartropatia indiferenciada; artrite séptica e outros distúrbios ósseos e artropatias relacionadas a infecções, tais como a tuberculose, incluindo a doença de Pott e a síndrome de Poncet; sinosite aguda de crônica induzida por cristais, incluindo a gota por urato, a doença por depósito de pirofosfato de cálcio e o tendão relacionado à apatita de cálcio, inflamação bursal e sinovial; doença de Behcet; síndrome de Sjo- gren primária e secundária; esclerose sistêmica e esclerodermia limitada; lúpus eritematoso sistêmico, doença mista do tecido conectivo e doença indi- ferenciada do tecido conectivo; miopatias inflamatórias, incluindo a derma- tomiosite e a polimiosite; polimialgia reumática; artrite juvenil, incluindo artrite idiopática inflamatória com qualquer distribuição articular e síndromes asso- ciadas, e febre reumática e suas complicações sistêmicas; vasculites, inclu- indo a arterite de células gigantes, arterite de Takayasu, síndrome de Churg- Strauss, poliarterite nodosa, poliarterite microscópica, e vasculite associada a infecções virais, reações de hipersensibilidade, crioglobulinas, e paraprote- ínas; dor na parte inferior das costas; febre familiar do mediterrâneo, sín- drome de Muckle-Wells, e Febre Familiar da Hibérnia, doença de Kikuchi; artralgias induzidas pelo uso de fármacos, tendinite, e miopatias;

3. dor e remodelação do tecido conectivo em distúrbios musculoesqueléticos devido a lesões [por exemplo, lesões esportivasjou doenças: artrite (por exemplo, artrite reumatoide, osteoartrite, gota ou artro- paia por deposição de cristais), outras doenças das articulações (tais como 30 degeneração do disco intervertebral ou degeneração da articulação tempo- romandibular), doenças da remodelação óssea (tais como osteoporose, do- ença de Paqet ou osteonecrose), policondrite, escleroderma, doença mista dos tecidos conectivos, espondiloartropatias ou doenças periodontais (tais

i

como periodontite);

4. pele: psoríase, dermatite atópica, dermatite de contato ou outras dermatoses eczematosas, e reações de hipersensibilidade tardia;

fito e fotodermatite; dermatite seborréica, dermatite herpetiforme, líquen pla- no, líquen escleroso e atrófico, pioderma gangrenoso, sarcóide cutâneo, lú- pus eritematoso discóide, pênfigo, penfigóide, epidermolise bolhosa, urticá- ria, angioedema, vasculites, eritemas tóxicos, eosinofilias cutâneas, alopécia areata, calvície masculina, síndrome de Sweet, doença de Weber-Christian,

eritema multiforme; celulite, infecciosa e nâo-infecciosa; paniculite; Iinfoma cutâneo, câncer de pele não-melanoma e outras lesões displásicas; distúr- bios induzidos pelo uso de fármacos, incluindo erupções cutâneas;

5. olhos: blefarite; conjuntivite, incluindo as conjuntivites a- lérgicas vernais e perenes; irite; uveíte anterior e posterior; coroidite; autoi-

munes; doenças autoimunes, degenerativas ou inflamatórias que afetam a retina; oftalmites incluindo oftalmite simpática; sarcoidose; infecções virais, fúngicas e bacterianas;

6. trato gastrointestinal: glossite, gengivite, periodontite; esofagite, incluindo refluxo; gastro-enterite eosinofílica, mastocitose, doença

de Crohn, colites incluindo colite ulcerativa, proctite, prurido anal; doença celíaca, síndrome do intestino irritável, e alergias relacionadas à alimenta- ção, as quais podem ter efeitos remotos do intestino (por exemplo, enxaque- ca, rinite ou eczema);

7. abdominal: hepatite, incluindo autoimune, alcoólica e vi-

ral; fibrose e cirrose hepática; colecistite; pancreatite, aguda e crônica;

8. genitourinária: nefrite incluindo nefrite glomerular e in- tersticial; síndrome nefrótica; cistite incluindo e cistite (intersticial)aguda e crônica úlcera de Hunner e; uretrite, prostatite, epididimite, ooforite e salpin- gite agudas e crônicas; vulvovaginite; doença de Peyronie; disfunção erétil

(masculina e feminina);

9. rejeição a transplante: aguda e crônica seguindo, por exemplo, transplante de rim, coracão, fígado, pulmão, medula óssea, pele ou córnea ou após transfusão sanguínea; ou doença de enxerto contra hospe- deiro crônica;

10. CNS: Mal de Alzheimer e outros distúrbios demenciantes incluindo CJD e nvCJD; amiloidose; esclerose múltipla e outras síndromes

5 demielinizantes; vasculite e aterosclerose cerebral; arterite temporal; miaste- nia gravis; dor aguda e crônica (aguda, intermitente ou persistente, de ori- gem central ou periférica)incluindo dor visceral, dores de cabeça, enxaque- ca, neuralgia do trigêmino, dor facial atípica, dor nos ossos e nas articula- ções, dor em decorrência de câncer e invasão tumoral, síndromes de dores 10 neuropáticas incluindo neuropatias diabética, pós-herpética e associada ao HIV; neurossarcoidose; complicações de processos infecciosos ou autoimu- nes malignos para o sistema nervoso central e periférico;

11. outros distúrbios alérgicos e autoimunes incluindo a tire- oidite de Hashimoto, doença de Graves, doença de addison, diabetes melli-

tus, púrpura trombocitopênica idiopática, fasciite eosinofílica, síndrome de hiper-IgE, síndrome antifosfolípide;

12. outros distúrbios com componentes imunológicos ou in- flamatórios; incluindo síndrome da imunodeficiência adquirida (AIDS), han- seníase, síndrome de Sezary, e síndromes paraneoplásicas;

13. cardiovascular: aterosclerose, afetando a circulação peri-

férica e coronária; pericardite; miocardite, cardiomiopatias inflamatórias e autoimunes incluindo sarcóide do miocárdio; lesões de reperfusão isquêmi- ca; endocardite, valvulite, e aortite incluindo infecciosa (por exemplo, sifilíti- ca); vasculite; distúrbios das veias proximais e perféricas incluindo flebite e 25 trombose, incluindo trombose de veia profunda e complicações de veias va- ricosas;

14. oncologia: tratamento de cânceres comuns incluindo tu- mores de próstata, mama, pulmão, ovário, pâncreas, intestino e cólon, estô- mago, pele e cérebro e malignidades afetando a medula óssea (incluindo as 30 leucemias)e sistemas linfoproliferativos, tais como os Iinfomas de Hodgkin e não-Hodgkin; incluindo a prevenção e o tratamento de doenças metastáticas e recorrências tumorais, e síndromes oaraneoplásicas; e. I 8

15. trato gastrointestinal: doença celíaca, proctite, gastronte-

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rite eosinofílica, mastocitose, doença de Crohn, colite ulcerativa, colite mi- croscópica, colite indeterminada, distúrbio do intestino irritável, síndrome do intestino irritável, diarréia não-inflamatória, alergias alimentares com efeitos 5 remotos do intestino, por exemplo, enxaqueca, rinite e eczema.

Desta forma, a presente invenção oferece um sal como aqui an- tes definido para o uso em terapia.

Em um outro aspecto, a presente invenção provê o uso de um sal conforme aqui antes definido na manufatura de um medicamento para uso em terapia (por exemplo, de um estado doentio respiratório).

Em ainda em outro aspecto, a presente invenção oferece um sal conforme aqui antes descrito para o tratamento dos estados doentios respi- ratórios.

No contexto do presente relatório descritivo, o termo "terapia" também inclui "profilaxia" a menos que haja indicações específicas do con- trário. Os termos "terapêutico" e "terapeuticamente" devem ser entendidos de acordo.

Espera-se que a profilaxia seja particularmente relevante para o tratamento de pessoas que tenham sofrido um episódio prévio de, ou sejam 20 de qualquer outra maneira consideradas como de risco elevado de, a doen- ça ou condição em questão. As pessoas em risco de desenvolvimento de uma condição ou doença em particular geralmente incluem aquelas com his- tórico familiar da doença ou condição, ou aquelas que foram identificadas por exames ou testagem genética como sendo particularmente suscetíveis 25 ao desenvolvimento da doença ou condição.

A invenção ainda oferece um método de tratamento, ou de re- dução do risco, de uma condição ou doença inflamatória (incluindo condi- ções ou doenças reversíveis que obstruam as vias respiratórias) que envolva a administração a um paciente em necessidade da mesma e uma quantida- de terapeuticamente eficaz de um sal conforme aqui antes definido.

Em particular, um sal da presente invenção pode ser utilizado no tratamento de síndrome de anaústia respiratória aauda (ARDS), enfizema pulmonar, bronquite, bronquiectasia, doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), asma e rinite.

Para os usos terapêuticos acima mencionados, a dosagem ad- ministrada irá, com certeza, variar de acordo com o composto empregado, o 5 modo de administração, o tratamento desejado e o distúrbio indicado. Por exemplo, a dose diária do composto da invenção, caso inalado, pode ficar na faixa de 0,05 microgramas por quilogramas de massa corporal (pg/kg)a 100 microgramas por quilograma de massa corporal (pg/kg). Alternativamente, caso o composto seja administrado de forma oral, então a dose diária do 10 composto da invenção pode ficar na faixa de 0,01 microgramas por quilo- gramas de massa corporal (pg/kg)a 100 miligramas por quilogramas de massa corporal (mg/kg).

Um sal da invenção pode ser utilizado isoladamente, porém irá em geral ser administrado na forma de uma composição farmacêutica na 15 qual um sal da invenção (ingrediente ativo)se encontra associado a veículos, diluentes ou adjuvantes farmaceuticamente aceitáveis. Os procedimentos convencionais para a seleção e preparação de formulações farmacêuticas aceitáveis são descritos em, por exemplo, "Pharmaceuticals - The Science of Dosage Form Designs", Μ. E. Aulton, Churchill Livingstone, 1988.

Dependendo do modo de administração, a composição farma-

cêutica irá, por exemplo, conter de 0,05 a 99% em peso (porcento em peso), tal como de 0,05 a 80% em peso, por exemplo, de 0,10 a 70% em peso e tal como de 0,10 a 50% em peso de ingrediente ativo, todos as porcentagens em peso estando baseadas no peso total da composição.

A presente invenção também provê uma composição farmacêu-

tica contendo um sal conforme aqui antes definido, em associação com um veículo, diluente ou adjuvante farmaceuticamente aceitável.

A invenção ainda prove um processo para a preparação de uma composição farmacêutica da invenção, o qual envolve a mistura de um sal conforme aqui antes definido com um veículo, diluente ou adjuvante farma- ceuticamente aceitável.

Uma composição farmacêutica da invenção pode ser admistra- da de forma tópica (por exemplo, na pele ou no pulmão e/ou vias respirató- rias)na forma, por exemplo, cremes, soluções, suspensões, aerossol de hep- tafluoroalcano (HFA)ou formulações em pó seco, por exemplo, formulações no dispositivo de inalação conhecido como Turbuhaler®; ou de forma sistê- mica, por exemplo, por administração oral na forma de comprimidos, cápsu- las, xaropes, pó ou grânulo; ou por administração parenteral na forma de soluções ou suspensões; ou por administração subcutânea; ou por adminis- tração retal na forma de supositórios; ou de forma transdérmica.

Uma formulação em pó seco ou aereossol de HFA pressurizado de um sal da invenção pode ser administrada por inalação nasal ou oral. Pa- ra inalação, o sal é desejavelmente finamente divido. O composto finamente dividido possui, por exemplo, um diâmetro mediano de massa de menos 10 μΐη, e pode ser suspenso em uma mistura propelente com a assistência de um dispersante, tal como um ácido graxo Cs-C2O ou um sal do mesmo (por exemplo, ácido oléico), um sal biliar, um fosfolípideo, um sacarídeo de alqui- la, um tensoativo perfluorinado ou polietoxilado, ou outros dispersantes far- maceuticamente aceitáveis.

Um sal da invenção pode também ser administrado através de um inalante de pó seco. O inalante pode ser um inalante de dose única ou de doses múltiplas, e pode ser um inalante de pó seco ativado pela respira- ção.

Uma das possibilidades é misturar o composto finamente divido da invenção com uma substância carreadora, por exemplo, com um mono-, di- ou polissacarídeo, um álcool de açúcar ou algum outro poliol. Um veículo adequado é, por exemplo, um açúcar, por exemplo, lactose, glicose, rafino- se, malesitose, lactitol, maltitol, trealose, sucrose, manitol; ou amido. Alterna- tivamente, o composto finamente dividido pode ser revestido por uma outra substância. A mistura em pó pode também ser envasada em cápsulas de gelatina dura, cada uma contendo a dose desejada do composto ativo.

Uma outra possibilidade é processar o pó finamente dividido em esferas que se quebram durante o procedimento de inalação. O pó colocado em esferas pode ser envasado no reservatório do fármaco de um inalante com múltiplas doses, por exemplo, aquele conhecido como Turbuhaler®, no qual uma unidade de dosagem indica a dose desejada a qual é então inala- da pelo paciente. Com este sistema, o ingrediente ativo, com ou sem uma substância veiculoa, é administrado ao paciente.

Para administração oral, o composto da invenção pode ser mis- turado a um adjuvante ou veículo, por exemplo, a lactose, sacarose, sorbitol, manitol; um amido como, por exemplo, o amido de batata, o amido de milho ou a amilopectina; um derivado de celulose; um Iigante como, por exemplo, gelatina ou polivinilpirrolidona; e/ou um lubrificante como, por exemplo, este- arato de magnésio, estearato de cálcio, polietileno glicol, uma cera, parafina e similares, e então prensado em comprimidos. Caso sejam requeridos com- primidos revestidos, os núcleos, preparados conforme acima descritos, po- dem ser revestidos com uma solução de açúcar concentrada que pode con- ter, por exemplo, goma arábica, gelatina, talco e dióxido de titânio. Alternati- vamente, o comprimido pode ser revestido com um polímero adequado dis- solvido em um solvente orgânico prontamente volátil.

Para apreparação de cápsulas de gelatina mole, o composto da invenção pode ser misturado a, por exemplo, um óleo vegetal ou a polietile- no glicol. Cápsulas de gelatina dura podem conter grânulos do composto usando os excipientes acima mencionados para comprimidos. As formula- ções líquidas ou semissólidas do composto da invenção podem, desta for- ma, ser envasadas em cápsulas de gelatina dura.

Uma preparação líquida para aplicação oral pode estar na forma de um xarope ou suspensão, por exemplo, uma solução contendo um sal da invenção, o balanço sendo açúcar e uma mistura de etanol, água, glicerol e propileno glicol. Opcionalmente, tal preparação líquida pode conter um agen- te corante, flavorizante, sacarina e/ou carboximetilcelulose como agente es- pessante ou algum outro excipiente conhecido por aqueles versados na téc- nica.

Um sal da invenção pode ainda ser administrado em conjunção com um outro composto utilizado para o tratamento de uma ou mais condi- ções acima. A invenção, portanto, ainda se refere a uma terapia de combina- ção, na qual um sal da invenção ou uma formulação ou composição farma- cêutica contendo um sal da invenção, é administrado concomitantemente ou seqüencialmente ou na forma de uma preparação combinada com outro ou outros agentes terapêuticos, para o tratamento de uma ou mais das condi- ções listadas.

Em particular, para o tratamento de doenças inflamatórias tais como (mas não restritas a) artrite reumatoide, osteoartrite, asma, rinite alér- gica, doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), psoríase e doenças intes- tinais inflamatórias, um sal da invenção pode ser combinado com um dos seguintes agentes: anti-inflamatórios não-esteroidals (daqui em diante NSAIDA) incluindo inibidores não seletivos de ciclo-oxigenase COX-1/COX-2 aplicados de forma tópica ou sistêmica (tais como piroxicam, diclofenac, áci- dos propiônicos tais como naproxeno, flurbiprofeno, fenoprofeno, cetoprofe- no e ibuprofeno, fenamatos tais como ácido mefenâmico, indometacina, su- lindac, azapropazona, pirazolonas tais como fenilbutazona, salicilatos tais como a aspirina): inibidores seletivos da COX-2 (tais como meloxicam, cele- coxib, rofecoxib, valdecoxib, lumarocoxibe, parecoxibe e etoricoxibe); doado- res de oxido nítrico inibidores da ciclo-oxigenase (CINODs); glicocorticoste- róides (administrados por vias tópicas, orais, intramusculares, intravenosas ou intra-articulares); metotrexato; leflunomida; hidroxicloroquina; d- penicilamina; auranofina ou outras preparações douradas parenterais ou orais; analgésicos; diacereína, terapias intra-articulares tais como derivados de ácido hialurônico; e suplementos nutricionais tais como glicosamina.

A presente invenção ainda se refere à combinação de um sal da invenção em uma citocina ou agonista ou antagonista da função da citocina, (incluindo agentes que atuam sobre as vias de sinalização da citocina tais como os moduladores do sistema SOCS)incluindo os interferons alfa, beta, e gama; fator de crescimento semelhante à insulina tipo I (IGF-1); interleucinas (IL)incluindo as IL1 a 17, e inibidores ou antagonistas da interleucina tais como o anakinra; inibidores do fator de necrose tumoral alfa (TNF-α) tais como os anticorpos monoclonais anti-TNF (por exemplo, infliximabe; adali- mumabe, e CDP-870)e antagonistas do receptor de TNF incluindo moléculas de imunoglobulina (tais como etanercept)e agentes de baixo peso molecular tais como a pentoxifilina.

Em adição, a invenção se refere à combinação de um sal da in- 5 venção com um anticorpo monoclonal atuante contra linfócitos-B (tais como CD20 (rituximab), MRA-alLI6Re linfócitos-T, CTLA4-lg, HuMax 11-15).

A presente invenção ainda se refere à combinação de um sal da invenção com um modulador da recepção da quimiocina, tal como um anta- gonista do CCR1, CCR2, CCR2A, CCR2B, CCR3, CCR4, CCR5, CCR6, 10 CCR7, CCR8, CCR9, CCR10 e CCR11 (para a família C-C); CXCR1, CX- CR2, CXCR3, CXCR4 e CXCR5 (para a família C-X-C)e CX3CRI para a fa- mília C-X3-C.

A presente invenção se refere também à combinação de um sal da invenção com um inibidor da metaloprotease matricial (MMPs), isto é, as 15 estromelisinas, as colagenases e as gelatinases, assim como agrecanase; especialmente a colagenase-1 (MMP-1), colagenase-2 (MMP-8), colagena- se-3 (MMP-13), estromelisina-1 (MMP-3), estromelisina-2 (MMP-10), e es- tromelisina-3 (MMP-11)e MMP-9 e MMP-12, incluindo agentes tais como a doxiciclina.

A presente invenção ainda se refere também à combinação de

um sal da invenção e um inibidor da biosíntese do leucotrieno, inibidor da 5- Iipoxigenase (5-LO)ou antagonista da proteína de ativação da 5-lipoxigenase (FLAP) tal como; zileuton; ABT-761; fenleuton; tepoxalina; Abbott-79175; Abbott-85761; a /V-(5-substituída)-tiofeno-2-alquilsulfonamida; 2,6-di-terc- 25 butilfenol-hidrazonas; metoxitetra-hidropirano tal como Zeneca ZD-2138; o composto SB-210661; um composto de 2-cianonaftaleno piridinila substituí- da tal como o L-739,010; um composto 2-cianoquinolina tal como L-746,530; ou um composto indol ou quinolina tais como MK-591, MK-886, e BAY x 1005.

A presente invenção ainda se refere à combinação de um sal da

invenção e um antagonista do receptor para os Ieucotrienos (LT)B4, LTC4, LTD4, e LTE4. selecionado a partir do grupo consistindo nas fenotiazinas-3- I

1s tais como a L-651.392; compostos amidina tais como o CGS-25019c;

i

benzoxalaminas tais como ontazolast; benzenocarboximidamidas tais como BIIL 284/260; e compostos tais como zafirlukast, ablukast, montelukast, pranlukast, verlukast (MK-679), RG-12525, Ro-245913, iralukast (CGP 5 45715A), e BAYx 7195.

A presente invenção também se refere ainda à combinação de um sal da invenção e um inibidor da fosfodiesterase (PDE)tal como uma me- tilxantanina incluindo a teofilina e a aminofilina; um inibidor seletivo da isoen- zima PDE incluindo um inibidor PDE4, um inibidor da isoforma da PDE4D ou um inibidor de PDE5.

A presente invenção se refere ainda à combinação de um sal da invenção e um antagonista do receptor de histamina tipo 1 tal como cetirizi- na, loratadina, desloratadina, fexofenadina, acrivastina, terfenadina, astemi- sol, azelastina, Ievocabastina, clorfeniramina, prometazina, ciclizina, ou mi- zolastina; aplicado oralmente, topicamente ou parenteralmente.

A presente invenção também se refere ainda à combinação de um sal da invenção e um inibidor de bombas de próton (tal como o omepra- zol)ou um antagonista do receptor de histamina tipo 2 gastroprotetor.

A presente invenção se refere ainda à combinação de um sal da invenção e um antagonista do receptor de histamina tipo 4.

A presente invenção também se refere ainda à combinação de um sal da invenção e um agente simpatomimético vasoconstritor agonista dos adrenoceptores alfa-1/alfa-2, tais como propil-hexedrina, fenileprina, fe- nilpropanolamina, efedrina, pseudoefedrina, hidrocloreto de nafazolina, hi- 25 drocloreto de oximetazolina, hidrocloreto de tetra-hidrozolina, hidrocloreto de xilometazolina, hidrocloreto de tramazolina ou hidrocloreto de etilnorepinefri- na.

A presente invenção se refere ainda à combinação de um sal da invenção e um agente anticolinérgico incluindo antagonistas de receptores muscarínicos (M1, M2, e M3)tais como atropina, hioscina, glicopirrolato, brometo de ipratrópio, brometo de tiotrópio, brometo de oxitrópio, pirenzepi- na ou telezenpina. A presente invenção se refere ainda à combinação de um sal da invenção e uma cromona, tal como o cromoglicato de sódio ou o nedocromil sódico.

A presente invenção também se refere ainda à combinação de um sal da invenção com um glicocorticóide tal como flunisolida, triamcinolo- na acetonida, depropionato de beclometasona, budesonida, propionato de fluticasona, ciclesonida ou furoato de mometasona.

A presente invenção se refere ainda à combinação de um sal da invenção com um agente que module um receptor hormonal nuclear tal co- mo os PPARs.

A presente invenção também se refere ainda à combinação de um sal da invenção com uma imunoglobulina (lg)ou preparação de Ig ou um antagonista ou anticorpo modulador da função da Ig tal como o anti-IgE (por exemplo, omalizumabe).

A presente invenção se refere ainda à combinação de um sal da

invenção e um outro agente anti-inflamatório aplicado de forma tópica ou sistêmica, tal como a talidomida ou um derivado da mesma, um retinóide, ditranol ou calcipotriol.

A presente invenção também se refere ainda à combinação de um sal da invenção, e combinações de aminossalicilatos e sulfapiridina tais como a sulfasalazina, a mesalazina, a balsalazida e a olsalazina; e agentes imunomoduladores tais como tiopurinas e corticosteróides tais como bude- sonida.

A presente invenção se refere ainda à combinação de um sal da 25 invenção, com um agente antibacteriano tal como um derivado da peniclina, uma tetracicilina, uma macrolida, uma beta-lactam, uma fluoroquinolona, metronidazol, uma aminoglicosida inalável; um agente antiviral incluindo aci- clovir, famciclovir, valaciclovir, ganciclovir, cidofovir, amantadina, rimantadi- na, ribavirina, zanamavir e oseltamivir; um inibidor de protease tal como indi- 30 navir, nelfinavir, ritonavir e saquinavir; um nucleosídeo inibidor de transcrip- tase reversa tal como didanosina, lamivudina, estavudina, zalcitabina ou zi- dovudina; ou um inibidor de transcriptase reversa não-nucleosídeo tal como nevirapina ou efavirenz.

A presente invenção também se refere ainda à combinação de um sal da invenção e de um agente cardiovascular tal como um bloqueador de canais de cálcio, um bloqueador dos beta-adrenoceptores, um inibidor da 5 enzima de proteção da angiotensina (ACE), um antagonista de receptor da angiotensina 2; um agente de redução lipídica tal como uma estatina e um fibrato; um modulador da morfologia das células sanguíneas tal como pento- xifilina; trombolíticos, ou um anticoagulante tal como um inibidor de agrega- ção plaquetária.

A presente invenção se refere ainda à combinação de um sal da

invenção e um agente do CNS tal como um antidepressivo (tal como sertra- lina), um fármaco anti-Parkinsoniana (tais como deprenil, L-dopa, ropinirol, pramipexol, um inibidor da MAOB tal como selegina e rasagilina, um inibidor da comP tais como tasmar, um inibidor da A-2, um inibidor da recaptação de 15 dopamina, um antagonista de NMDA, um agonista de nicotina, um agonista de dopamina ou um inibidor de óxido nítrico sintase neuronal), ou um fárma- co anti-AzIheimer tal como donepezil, rivastigmina, tacrina, um inibidor da COX-2, propentofilina ou metrifonato.

A presente invenção também se refere ainda à combinação de 20 um sal da invenção, e um agente para o tratamento de dor crônica ou aguda, tal como um analgésico de atuação central ou periférica (por exemplo, um opióide ou derivado do mesmo), carbamazepina, fenitoína, valproato sódico, amitriptilina ou outro agente antidepressivo, paracetamol ou um anti- inflamatório não-esteroidal.

A presente invenção se refere ainda à combinação de um sal da

invenção com um agente anestésico local aplicado de forma parenteral ou tópica (incluindo por inalação)tal como a linocaína ou um derivado da mes- ma.

Um sal da presente invenção pode também ser utilizado em combinação com um agente antiosteoporótico incluindo um agente hormonal tal como o raloxifeno ou um bifosfonado tal como alendronato.

A presente invenção também se refere ainda à combinação de um sal da invenção com um: (i) inibidor da triptase; (ii) antagonista do fator de ativação plaquetária (PAF); (iii) inibidor da enzima de conversão da inter- Ieucina (ICE) ; (iv) inibidor da IMPDH; (v) inibidores das moléculas de ade- são incluindo o antagonista da VLA-4; (vi) catepsina; (vii) inibidor da quinase 5 tal como o inibidor da tirosina quinase (tais como Btk1 Itk, Jak3 ou MAP, por exemplo, mesilato de Imatinib ou Gefitinib), uma serina/treosina quinase (tais como um inibidor de uma quinase MAP tais como p38, JNK1 proteína quina- se A, B ou C1 ou IKK), ou uma quinase envolvida na regulação do ciclo celu- lar (tais como a quinase dependente) ; (viii) inibidor da glicose-6-fosfato de- 10 hidrogenase; (ix) antagonista do receptor quinina-B.subl. - ou B.sub2. -; (x) agente anti-gota, por exemplo, colchicina; (xi) inibidor da oxidase xantina, por exemplo, alopurinol; (xii) agente uricossúrico, por exemplo, probenecid, sulfinpirazona ou benzbromarona; (xiii) secretagogo de hormônio de cresci- mento; (xiv) fator de crescimento transformador (TGFp) ; (xv) fator de cres- 15 cimento derivado plaquetário (PDGF) ; (xvi) fator de crescimento fibroblásti- co, por exemplo, fator de crescimento fibroblástico básico (bFGF); (xvii) fator estimulante de colônia de granulócitos e nacrófagos (GM-CSF); (xviii) creme de capsaicína; (xix) antagonista do receptor taquicinina NK.subl. ou NK.sub3. tais como NKP-608C, SB-233412 (talnetant) ou D-4418; (xx) inibi- 20 dor da elastase tais como UT-77 ou ZD-0892; (xxi) inibidor da enzima con- versora da TNF-alfa (TACE) ; (xxii) inibidor da sintase de óxido nítrico indu- zido (iNOS) ; (xxiii) molécula homóloga de receptor quimioatrativo expressa- da nas células TH2, (tais como antagonistas da CRTH2) ; (xxiv) inibidor do P38; (xxv) agente modulador da função dos receptores Toll-Iike (TLR), (xxvi) 25 agente modulador da atividade dos receptores purinérgicos tais como P2X7; (xxvii) inibidor da ativação do fator de transcrição tal como NFkB, API, ou STATS; ou, (xxviii) um agonista dos receptores de glicocorticóide.

Métodos Preparatórios Gerais

A seguir são relacionados métodos preparatórios para dibromi- dratos de A/-[2-(Dietilamino)etil]-/V-(2-{[2-(4-hidróxi-2-oxo-2,3-di-hidro-1,3- benzotiazol-7-il)etil]amino}etil)-3-[2-( 1 -naftil)etóxi]propanamida (chamado Composto A em Preparações, Exemplos e ensaios)e também estudos e da- dos mostrando a atividade deste composto.

I

Nos exemplos, a /V-[2-(Dietilamino)etil]-/V-(2-{[2-(4-hidróxi-2-oxo-

2,3-di-hidro-1,3-benzotiazol-7-il)etil]amino}etil)-3-[2-(1 - naftil)etóxi]propanamida é chamada Composto B.

Foram registrados os espectros 1H RMN em um instrumento Va-

rian Inova 400 MHz ou um Varian Mercury-MX 300 MHz. Os picos centrais de clorofórmio-d (Õh 7,27 ppm), dimetilsulfóxido-c/6 (õh 2,50 ppm), acetonitri- Ia-C^ (õh 1,95 ppm)ou metanol-d* (δΗ 3,31 ppm)foram utilizados como refe- rências internas. A cromatografia em coluna foi realizada utilizando sílica-gel 10 (0,040-0,063 mm, Merck). A menos que declarado de outra maneira, as ma- térias-primas foram comercialmente disponíveis. Todos os solventes e rea- gentes comerciais estavam em graduação laboratorial e foram utilizados conforme recebidos.

O método a seguir foi utilizado para análise do LC/MS:

Instrumento Agilent 1100; coluna Waters Symmetry 2,1 x 30

mm; APCI de massa; Taxa de Fluxo 0,7 ml/min; Comprimento de onda 254 nm; Solvente A: água + 0,1% de TFA; Solvente B: acetonitrila + 0,1% de TFA ; Gradiente 15-95%/B 8 min, 95% B 1 min.

A cromatografia analítica foi rodada em uma Symmetry C-I8- column, 2,1 x 30 mm com tamanho de partícula 3,5 μίτι, com acetonitri- la/água/0,1% de ácido trifluoroacético como fase móvel em um gradiente de 5% a 95% de acetonitrila por 8 minutos a um fluxo de 0,7 ml/min.

Detalhes dos Instrumentos:

o XRPD (Difração de raios X em pó)- máquina Philips X- 25 Pert MPD em configuração θ - Θ na faixa de varreadura de 2o a 40° 2Θ com exposição de 100 segundos por 0,03° de incremento. Os raios x foram gera- dos por um tubo de foco longo-fino de cobre operado a 45kV e 40mA. Os comprimentos de onda dos raios x de cobre foram 1,5405Á (Kai)e 1,5444 Â (Ka2). Os dados foram coletados em retentores "zero background" sobre os 30 quais foram colocados ~2 mg do composto. O retentor foi feito de um único cristal de silício, o qual foi cortado em um plano não-difratante e então polido em uma finalização opticamente plana. Os raios x incidentes sobre esta su- perfície foram anulados por extinção de Bragg. Os dados do XRPD são a- presentados nas tabelas abaixo, sendo providos os dados de ângulo de re- flexão (°2θ)β espaçamento-D (Â)(agrupados).

o Os termogramas por DSC (calorimetria diferencial de 5 varredura) foram mensurados usando uma máquina TA Q1000 com panelas de alumínio e tampas furadas. O peso das amostras variou de 1 a 5 mg. O procedimento foi realizado sobre um fluxo de gás nitrogênio (50 ml/min)e a temperatura estudada de 25 a 300°C a uma constante taxa de aumento de temperatura de 10°C por minuto.

o Os termogramas por TGA (Análise Termogravimétri-

ca)foram mensurados usando uma máquina TA Q500, com panelas de plati- na. O peso das amostras variou de 2 a 15 mg. O procedimento foi realizado sobre um fluxo de gás nitrogênio (60ml/min)e a temperatura estudada de 25 a 300°C a uma constante taxa de aumento de temperatura de 10°C por mi- nuto.

o Os espectros RMN de Estado Sólido da C13 CPMAS (Pola- rização brutozada còm rotação em torno do ângulo mágico)foram obtidos utilizando uma máquina Bruker Avance 400WB. As amostras foram analisa- das utilizando uma sonda de 4mm com os seguintes parâmetros: polariza- 20 ção brutozada acentuada, pulso composto de tppm15, desprendimento do 1H1 um tempo de contato de 2ms, e uma taxa de rotação de 5 kHz.

o Os espectros Raman foram registrados utilizando um mi- croscópio raman Jobin Yvon Horiba Lab Ram HR. A amostra sólida de -0,1 mg foi colocada em uma lamina de vidro e o raio laser foi focado em 25 uma única partícula que foi representativa do total da amostra. Os espectros foram registrados como aquisição de 2-4 minutos ao longo de uma faixa de 200 a 2000

cm-1.

o Os espectros IV (infravermelho)foram registrados utili- zando uma máquina Perkin Elmer Spectrum GX FT-IR System equipada com uma conexão Specac ATR. A amostra sólida de ~1mg foi colocada so- bre a superfície de diamante do ATR e foi aplicada uma pressão de 70cN-M. I 20

Os espectros foram registrados como 64 scans ao longo de uma faixa de

4 1 1

4000 a 625 cm , com um intervalo de 1cm e uma resolução de 4cm .

o Os perfis GVS foram mensurados utilizando um instru- mento Dynamic Vapour Sorption DVS-1. A amostra sólida de ca. 4-1 Omg foi 5 colocada em um recipiente de vidro e o peso da amostra foi registrado du- rante um método em etapas de ciclo duplo (40 a 90 a 0 a 90 a 0% de umida- de relativa (RH), em etapas de 10% de RH).

o A estequiometria iônica foi mensurada utilizando um gradi- ente KOH e uma coluna Dionex AS11 com detecção eletroquímica e um ins- trumento Dionex IC3000.

o Os espectros 1H RMN da solução foram registrados utili- zando um espectrômetro Varian Unity Inova a uma frequência de 400 MHz.

As abreviações dos termos utilizados nos exemplos possuem os seguintes significados:

SCX: Extração de fase sólida com um solvente de ácido sulfô-

nico

HPLC: Cromatografia líquida de alto desempenho DMF: A/,A/-Dimetilformamida Preparação 1

Dibromidrato de /V-[2-(Dietilamino)etil]-/V-(2-{[2-(4-hidróxi-2-

oxo-2,3-di-hidro-1,3-benzotiazol-7-il)etil]amino}etil)-3-[2-(1-naftil)etóxi] propanamida (Composto A)

o

'N

HO Y 's Ί

N-i M

u v. r

H O

n

a) 3-[2-(1-naftil)etóxi]propanoato de íerc-Butila

O 1-NaftaIeno etanol (10 g)foi tratado com hidróxido de benzil- ‘25 trimetilamônia (Triton B®; 0,9 mL de uma solução a 40% em metanol)e a mistura resultante foi agitada em vácuo por 30 minutos. A mistura foi então resfriada a O0C e tratada com acrilato de terc-butila (8,19 g). A mistura resul- tante foi lentamente aquecida à temperatura ambiente e mexida ao Ionqo da noite. A mistura bruta foi subsequentemente absorvida em óxido de alumínio (30 g)e eluída com dietiléter (200 ml_). Os orgânicos foram concentrados para gerar um material bruto (16,6 g), o qual foi purificado por eluição com cromatografia rápida em sílica com 1:8, dietiléter: hexano para gerar o com- 5 posto do subtítulo (12,83 g).

1H RMN (CDCI3)õ 8,05 (dd, 1H), 7,84 (dd, 1H), 7,72 (dd, 1H), 7,54-7,34 (m, 4H), 3,81-3,69 (m, 4H), 3,35 (t, 2H), 2,52-2,47 (m, 2H), 1,45 (s, 9H).

b) ácido 3-[2-(1-Naftil)etóxi] propanoico

O 3-[2-(1-naftil)etóxi]propanoato de terc-Butila (6,19 g)foi colo-

cado em diclorometano (30 mL)e tratado com ácido trifluoroacético (5 mL). A solução resultante foi agitada à temperatura ambiente por 2 horas, sendo adicionado 1 mL adicional de ácido trifluoroacético, após o que a mistura foi agitada ao longo da noite. A mistura foi concentrada e colocada em uma so- 15 lução de hidróxido de sódio a 2M (30 mL)e lavada com éter (2 x 20 mL). A camada aquosa foi subsequentemente acidificada (utilizando 1M ácido clorí- drico a 1M) e extraída com éter (2 x 30 mL). Os orgânicos combinados foram lavados com salina (20 mL), secos sobre sulfato de magnésio anidro, filtra- dos e concentrados a vácuo para gerar o composto do subtítulo (5,66 g)na 20 forma de um óleo claro.

1H RMN (CDCI3)õ 8,05 (bs, 1H), 7,85 (bs, 1H), 7,74 (bs, 1H),

7,50-7,38 (m, 4H), 3,84-3,75 (bm, 4H), 3,39 (bs, 2H), 2,65 (bs, 2H).

c) A/-(2-Dietilaminoetil)-/S/-(2-hidroxietil)-3-[2-(1- naftil)etóxi]propanamida Adicionou-se gota a gota cloreto de oxalila (0,33 g)a uma solu-

ção de ácido 3-[2-(1-naftil)etóxi] propanoico (0,53 g)em diclorometano (10 mL), sendo adicionada dimetilformamida (1 gota) e mexida continuamente à temperatura ambiente por uma hora. A mistura foi subsequentemente con- centrada, re-dissolvida em diclorometano (10 mL) e adicionada gota a gota a 30 uma solução de 2-(2-dietilaminaetilamina)etanol (0,35 g) e diisopropiletilami- na (0,56 g)em diclorometano (10 mL). A mistura resultante foi agitada à tem- peratura ambiente por 1 hora, diluída (diclorometano, 50 mL), lavada com água (2 x 20 mL), salina (20 mL), seca sobre sulfato de magnésio e concen-

i

trada para gerar o produto bruto (0,91 g)o qual foi purificado por cromatogra- fia em coluna rápida (eluição com 5-7% de metanol em diclorometano)para gerar 0,63 g do composto do subtítulo.

5 1H RMN (CDCI3)õ 8,05 (d, 1H), 7,85 (d, 1H), 7,73 (d, 1H), 7,52-

7,47 (m, 2H), 7,42-7,35 (m, 2H), 3,84-3,78 (m, 6H), 3,72-3,70 (m, 1/2H), 3,45-3,35 (m, 6H), 2,79-2,77 (m, 1+1/2H), 2,62-2,58 (m, 2H), 2,54-2,49 (m, 4H), 1,04-1,01 (m, 6H).

d) W-[2-(Dietilamino)etil]-W-(2-{[2-(4-hidróxi-2-oxo-2,3-di- hidro-1,3-benzotiazol-7-il)etil]amino}etil)-3-[2-(1- naftil)etóxi]propanamida

Uma solução de dimetilsulfóxido (0,097 g)em diclorometano (1 mL)foi adicionada a uma solução de cloreto de oxalila (0,079 g)em dicloro- metano (10 mL)a -78°C. A reação foi agitada por 15 minutos e então uma 15 solução de A/-(2-dietilaminoetil)-/V-(2-hidroxietil)-3-[2-(1-naftil)etóxi] propana- mida (0,22 g)em diclorometano (lavado em 1 mL+ 1mL)foi adicionada e a mistura da reação mexida por mais 15 minutos. Adicionou-se trietilamina (0,29 g)e permitiu-se que a reação aquecesse à temperatura ambiente por 1 hora, a mistura foi subsequentemente diluída (diclorometano 30 mL), os or- 20 gânicos lavados com bicarbonato de sódio (20 mL), salina (20 mL), secos sobre sulfato de magnésio anidro, filtrados e concentrados a vácuo para ge- rar o composto do subtítulo (0,21 g).

O produto bruto foi dissolvido em metanol (10 mL)e cloridrato de 7-(2-aminoetil)-4-hidróxi-1,3-bentiazol-2(3H)-ona (preparado conforme o pro- 25 cedimento delineado em Organic Process Research & Development 2004, 8(4), 628-642; 0,131 g)foi adicionado junto com ácido acético (0,1 mL)e água (0,1 mL). Após agitar à temperatura ambiente por 30 minutos, foi adicionado cianoboridrato de sódio (0,020 g)e a mistura da reação foi agitada ao longo da noite. Foi adicionada amônia (7N em metanol, 1 mL)e a mistura foi con- 30 centrada. O resíduo bruto foi purificado por eluição em coluna cromatográfi- ca rápida com 1% de amônia; 5%-7% metanol em diclorometano. O produto bruto foi utilizado diretamente na próxima etapa. Uma preparação de A/-[2-(Dietilamino)etil]-/V-(2-{[2-(4-hidróxi-2- oxo-2,3-di-hidro-1,3-benzotiazol-7-il)etil]amino}etil)-3-[2-(1- naftil)etóxi]propanamida forneceu uma amostra que foi analisada.

1H RMN (400 MHz, DMSO)õ 8,06 (d, 1H), 7,90 (d, 1H), 7,77 (d, 1H), 7,51 (m, 2H), 7,40 (m, 2H), 6,80 (m, 1H), 6,70 (m, 1H), 3,68 (m, 4H),

3,27 (m, 6H), 2,79 - 2,53 (o número de prótons não pôde ser determinado),

2.44 (m, 4H), 0.92 (m, 6H).

Figura 1: XRPD da Forma Amorfa do Composto B

e) Bromidrato de A/-[2-(Dietilamino)etil]-/V-(2-{[2-(4- hidróxi-2-oxo-2,3-di-hidro-1,3-benzotiazol-7-il)etil]amino}etil)-3-[2-(1- naftil)etóxi]propanamida

A A/-[2-(Dietilamino)etil]-A/-(2-{[2-(4-hidróxi-2-oxo-2,3-di-hidro-

1,3-benzotiazol-7-il)etil]amino}etil)-3-[2-(1-naftil)etóxi]propanamida (0,052 g)foi dissolvida em etanol (1,5 mL)e tratada com 48% de ácido bromídrico (21 μΙ). O sal de dibromidrato sólido branco (0,058 g)foi coletado por filtra- ção.

MS: APCI (+ve)579 (M+1)

1H RMN õ(DMSO)11,78-11,71 (m, 1H), 10,11-10,06 (m, 1H),

9,51-9,43 (m, 0.33H), 9,21-9,13 (m, 0.66H), 8,75-8,66 (m, 1H), 8,59-8,51 (m, 1H), 8,06 (d, 1H), 7,95-7,90 (m, 1H), 7,79 (d, 1H), 7,60-7,48 (m, 2H), 7,47- 7,39 (m, 2H), 6,87 (t, 1H), 6,76 (dd, 1H), 3,78-3,53 (m, 10H), 3,25-3,09 (m, 10H), 2,91-2,80 (m, 2H), 2,73-2,61 (m, 2H), 1,26-1,15 (m, 6H). RMN indica uma mistura de aproximadamente 2:1 de rotâmeros a 298K. DRXP (Figura 2) DSC Estado Sólido Raman IV 2Θ (espaçamento -D) RMN 4,9(17,9) 26,2(3,4) Início 232,4 63,7 204,1 1240,8 205 1276 2110C 8,9(9,9) 28,0(3,2) 225,8 48,4 233,5 1276,8 236 1379 12,2(7,3) 28,4(3,1) 224,5 44,9 246,5 1374,7 300 1436 13,5(6,6) 31,0(2,9) 190,9 39,8 367,5 1434,7 368 1465 13,9(6,4) 31,6(2,8) 182,7 36,2 394,6 1452,0 395 1577 14,8(6,0) 33,0(2,7) 180,6 33,5 440,1 1577,1 441 1586 15,8(5,6) 164,0 27,9 470,0 1595,9 471 1597 16,2(5,5) 141,2 9.2 488,9 1633,7 490 1633 16,6(5,4) 134,8 6.0 505,3 1689,1 506 1689 17,4(5,1) 132,9 590,3 591 18,1(4,9) 130,8 642,5 643 19,3(4,6) 127,5 725,4 726 20,3(4,4) 123,1 789,5 790 20,7(4,3) 120,9 807,7 807 21,4(4,2) 114,2 855,0 855 22,9(3,9) 91,4 924,0 942 23,7(3,8) 85,0 1028,7 1029 24,3(3,7) 75,3 1075,1 1069 25,6(3,5) 66,6 1143,9 1241 Figura 2: XRPD do Polimorfo A do Composto A Preparação 2

Dibromidrato de /V-[2-(Dietilamino) etil]-A/-(2-{[2-(4-hidróxi-2- oxo-2,3-di-hidro-1,3-benzotiazol-7-il)etil]amino}etil)-3-[2-(1- naftil)etóxi]propanamida (Composto A)

a)A/,-(2,2-Dimetoxietil)-/V, A/-dietil-etano-1,2-diamina. r

MeO^^N^

OMe H

Uma solução de N,N-dietil-etilenodiamina (150 g)em metanol (500 ml_)foi tratada rapidamente gota a gota com dimetilacetal glioxal (60% em peso soln. em água, 225 g) a 10-15°C. Depois da adição completa, a solução foi aquecida a 15°C, e então a 22°C e deixada a esta temperatura 5 por 16 horas. A mistura da reação foi tratada com paládio a 5% em carbono (pasta 38H tipo Johnson-Matthey, 15 g)e hidrogenada a 600 Kpa (6 bar) até a reação estar completa conforme julgado pelo GC/MS. O catalisador foi re- movido por filtração e o filtrado evaporado até secar (azeótropo de tolueno, 2,5 L), gerando 196,2 g do composto do subtítulo.

1H RMN (CDCI3): 4,48 (t, 1H), 3,39 (s, 6H), 2,75 (d, 2H), 2,69 (t,

2H), 2,57-2,48 (m, 6H), 1,01 (ts, 6H).

b)/V-[2-(Dietilamino)etil]-/V-(2,2-dimetoxietil)-3-[2-(1-

naftil)etóxi]propanamida.

Adicionou-se gota a gota cloreto de oxalila (151 ml_)por 45 minu- 15 tos a uma solução de ácido 3-[2-(1-naftil)etóxi] propanoico (389 g)(Exemplo 7 etapa b))em diclorometano (2,1 L)e DMF (0,5 mL). A mistura da reação foi agitada por 16 horas adicionais. A mistura foi subsequentemente concentra- da, novamente dissolvida em DCM (1,7 L)e adicionada gota a gota por 1,75 horas a O0C a uma solução de A/’-(2,2-dimetoxietil)-/V,/\/-dietiletano-1,2- 20 diamina (325 g)e isopropildietilamina (551 mL)em DCM (1,7 L). A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente por 3 horas, lavado com uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (5x1 L), água (1.5 l)e seca sobre sulfato de sódio e concentrada para gerar 650 g do composto do subtí- tulo.

m/e 431 (M+H+, 100%) c) /V-[2-(Dietilamino) etil]-3-[2-(1-naftil)etóxi]-/V-(2- oxoetil)propanamida.

o

S rNi

Uma solução de /V-[2-(dietilamino)etiI]-A/-(2,2-dimetoxietil)-3-[2- (1-naftil)etóxi]propanamida (93 g)em DCM (270 ml)foi tratada gota a gota a 5 O0C com ácido trifuloroacético (270 ml)por 1,5 horas. Depois da adição, per- mitiu-se que a mistura da reação aquecesse à temperatura ambiente, sendo mexida por 1 hora adicional. A mistura da reação foi concentrada e o resíduo despejado em uma solução aquosa saturada de bicarbonato de sódio (1800 mL, manusear com cuidado). A mistura aquosa foi extraída com DCM 10 (4x400 mL)e os extratos combinados foram secos sobre sulfato de magnésio e concentrados. O resíduo foi utilizado diretamente na reação seguinte.

d)Dibromidrato de A/-[2-(Dietilamino)etil]-A/-(2-{[2-(4-hidróxi- 2-oxo-2,3-di-hidro-1,3-benzotiazol-7-il)etil]amino}etil)-3-[2-(1- naftil)etóxi]propanamida (Composto A)

Uma suspensão de cloridrato de 7-(2-amino-etil)-4-hidróxi-3H-

benzotiazol-2-ona (53g)em NMP seco (216 mL)foi aquecida a 60°C e tratada em uma porção com uma solução de NaOH (8,2 g)em metanol (102 mL). A suspensão laranja brilhante foi resfriada temperatura ambiente e tratada gota a gota com uma solução de A/-[2-(dietilamino)etil]-3-[2-(1 -naftil)etóxi]-A/-(2- 20 oxoetil)propanamida em diclorometano (475 mL)por 20 minutos. A reação foi agitada por 25 minutos. O triacetoxiboridrato de sódio (91,5 g)foi então adi- cionado em porções por 20 minutos e a mistura mexida por 50 minutos adi- cionais. A mistura da reação foi despejada em água (1,8 L)e a solução ácida (pH5) foi lavada com metil éter de terc-butila (TBME)(3x500 mL). A fase a- quosa foi basificada a até pH8 através da adição de carbonato de potássio sólido e extraída com diclorometano (3x750 mL); os extratos orgânicos com- binados foram secos sobre sulfato de magnésio e concentrados para gerar um óleo escuro. Este foi dissolvido em etanol (200 mL)e adicionou-se ácido 5 bromídrico aquoso a 48% (73 mL). A solução foi deixada em repouso por 30 minutos e então evaporada até atingir secura. O resíduo foi triturado com etanol (560 mL); o sólido resultando foi coletado por filtração e seco a vácuo a 50°C. O sólido grudento foi suspenso em etanol fervendo (100 mL)e filtra- do enquanto ainda estava quente. O sólido coletado foi seco a vácuo a 50°C. 10 Este material foi recristalizado a partir de etanol/água (3:1, 500 mL). Depois de ficar em repouso ao longo da noite, o sólido resultante foi coletado por filtração e lavada com etanol gelado (75 mL). A secagem a vácuo a 50°C por

24 horas produziu 57 g do composto do título.

Preparação 3

A/-í2-(dietilamino)etil1-A/-(2-(f2-(4-hidróxi-2-oxo-2,3-di-hidro-1.3-

benzotiazol-7-il)etinamino)etil)-3-f2-(1-naftil)etóxi1propanamida (Composto B)

O dibromidrato de /V-[2-(dietilarnino)etil]-/V-(2-{[2-(4-hidróxi-2- oxo-2,3-di-hidro-1,3-benzotiazol-7-il)etil]amino}etil)-3-[2-(1-naftil)etóxi] propa- namida (10 g)foi repartida entre uma solução saturada de bicarbonato de 20 sódio (100 mL)e diclorometano (100 mL)(um pouco de metanol foi adiciona- do para auxiliar na solubilídade). A mistura foi agitada à temperatura ambien- te por 1 hora.

As fases foram então separadas e a fase aquosa foi extraída com uma porção adicional de diclorometano (100 mL]). A fase orgânica 25 combinada foi lavada com uma solução saturada de bicarbonato de sódio (100 mL)e com uma solução saturada de salina (100ml)então sendo seca sobre sulfato de magnésio, filtrada e evaporada para deixa o composto do título (8,66 g).

1H RMN (400 MHz, DMSO)õ 8,06 (d, 1H), 7,90 (d, 1H), 7,77 (d, 1H), 7,51 (m, 2H), 7,40 (m, 2H), 6,80 (m, 1H), 6,70 (m, 1H), 3,68 (m, 4H),

3,27 (m, 6H), 2,79 - 2,53 (o número de prótons não pôde ser determinado),

2,44 (m, 4H), 0,92 (m, 6H). Preparação 4

Dibromidrato de /V-í2-(dietilamino)etil1-A/-(2-(í2-(4-hidróxi-2-oxo-

2,3-di-hidro-1,3-benzotiazol-7-iOetinamino)etiO-3-í2-( 1 - naftiDetóxflpropanamida (Composto A)

Uma suspensão de dibromidrato de /V-[2-(dietilamino)etil]-A/-(2-

{[2-(4-hidróxi-2-oxo-2,3-di-hidro-1,3-benzotiazol-7-il)etil]amino}etil)-3-[2-(1- naftil)etóxi]propanamída (preparada, por exemplo, conforme a Preparação 2)(1,88 kg)em 80:20 de isopropanol: água (20,97 kg) foi aquecida a tempera- tura de refluxo. A solução foi então filtrada, permitindo-se que o filtrado res- 10 friasse à 50°C antes que se adicionasse uma semente de bromidrato de N- [2-(dietilamino)etil]-/V-(2-{[2-(4-hidróxi-2-oxo-2,3-di-hidro-1,3-benzotiazol-7- il)etil]amino}etil)-3-[2-(1-naftil)etóxi]propanamida (1,08 g). A temperatura foi mantida a 50°C por 20 minutos, então a mistura da reação foi resfriada a 5°C a uma taxa de 0,1°C/min. A suspensão foi mantida a 5°C por 3 dias e então 15 o material precipitado foi coletado por filtração. O bolo foi lavado com 80:20 de isopropanokágua (2,91 kg). O sólido foi então seco a vácuo a 40°C a pe- so constante para gerar o composto do título (1.545 kg).

1H RMN (400 MHz, DMSO, 90°C)õ 11,50 - 8,52 (m, 3H), 8,06 (d, 1H), 7,90 (d, 1H), 7,77 (d, 1H), 7,52 (m, 2H), 7,42 (m, 2H), 6,87 (d, 1H), 6,76 (d, 1H), 3,74 (m, 4H), 3,61 (br, 4H), 3,29 (t, 2H), 3,2-3,0 (o número de prótons não pôde ser determinado), 2,87 (m, 2H), 2,65 (t, 2H), 1,22 (t, 6H).

Preparação 5

Dicloridrato de A/-í2-(dietilamino)etil1-A/-(2-(f2-(4-hidróxi-2-oxo-

2,3-di-hidro-1,3-benzotiazol-7-il)etinamino)etil)-3-f2-(1-nafti0etóxil propana-

mida

Uma solução de ácido clorídrico a 37 % p/p (245,95 pL)foi adi- cionada a uma solução de dicloridrato A/-[2-(dietilamino)etil]-/V-(2-{[2-(4- hidróxi-2-oxo-2,3-di-hidro-1,3-benzotiazol-7-il)etil]amino}etil)-3-[2-(1-naftil) etóxi] propanamida (0,56 g)em metanol (5,6 ml_)produzindo uma solução 30 clara que foi agitada à temperatura ambiente por 15 minutos. Uma alíquota de 0,5 mL foi tirado do total da solução e tratada com éter de dietila para formar um sólido móvel. Esta suspensão foi colocada de volta na solução e a mistura foi agitada à temperatura ambiente por 2 horas. O composto do título foi então coletado por filtração, lavada com metanol (1,12 ml_)e seco no filtro (0,46 g).

1H RMN (400 MHz, DMSO, 90°C)õ 11,46 (m, 1H), 8,06 (d, 1H),

7,88 (d, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,55 - 7,38 (m, 4H), 6,88 (d, 1H), 6,76 (d, 1H), 3,74 (m, 8H), 3,28 (t, 2H), 3,2-3,0 (número de prótons não pôde ser determi- nado), 2,92 (m, 2H), 2,66 (t, 2H), 1,25 (t, 6H).

Calculado para C32H44CI2N4O4S: C, 58,98; H, 6,81; N, 8,60; S, 4,92. Encontrado: C, 58,89; H, 6,87; N, 8,58; S, 5,24.

10

DRXP (Figura 3) DSC Estado Sólido Raman IR RMN 4,9(18,2) 27,9(3,20) Início- 232,4 66,6 207,8 1379,3 3163 946 192°C 7,7(11,5) 28,2(3,16) 225,8 63,7 242,2 1412,2 2981 927 8,9(10.0) 28,5(3,13) 224,5 51,9 310,8 1437,1 2877 868 9,2(9,6) 29,1(3,07) 190,9 48,4 368,2 1451,2 2787 844 12,0(7,4) 30,6(2,92) 184,5 36,2 395,6 1483,5 2428 812 12,5(7,1) 32,1(2,78) 182,7 31,7 470,6 1576,9 1683 797 13,7(6,5) 180,6 27,9 490,5 1599,3 1631 741 14,8(6,0) 164,0 8,6 505,6 1634,7 1514 721 15,9(5,6) 141,2 5,8 594,4 1687,3 1467 644 16,4(5,4) 134,8 642,8 1435 16,9(5,2) 132,9 694,4 1420 18,5(4,81) 130,8 726,0 1393 19,4(4,58) 123,1 807,7 1335 21,1(4,21) 114,2 854,4 1293 23,17(3,84 91,4 926,3 1183 ) 24,8(3,60) 85,0 1029,8 1144 25,4(3,50) 83,2 1073,9 1113 26,0(3,43) 81,1 1185,8 1059 27,1(3,29) 77,7 1276,8 1019 Figura 3: DRXP do Polimorfo A do sal de dicloridrato do Com- posto B

Os exemplos a seguir ilustram a invenção.

Exemplo 1

Citrato de A/-r2-(dietilamino)etil1-/V-(2-(r2-(4-hidróxi-2-oxo-2.3-di-

hidro-1.3-benzotiazol-7-il)etinamino)etil)-3-f2-( 1 -naftiQetóxflpropanamida

Adicionou-se ácido cítrico (248,96 mg)a uma solução de N-[2- (dietilamino)etil]-/V-(2-{[2-(4-hidróxi-2-oxo-2,3-di-hidro-1,3-benzotiazol-7- il)etil]amino}etil)-3-[2-(1-naftil)etóxi]propanamida (0,5 g)em metanol (5 mL). 10 Imediatamente, a solução clara se tornou opaca e um óleo laranja se deline- ou. A mistura foi aquecida a uma temperatura externa de 60°C formando uma solução clara, a qual se permitiu que resfriasse à temperatura ambiente e mexida por 48 horas. O precipitado resultante foi coletado por filtração e lavado com metanol (1 mL)e éter de dietila (1 mL). O sólido foi então seco a 15 vácuo à temperatura ambiente por 4 horas para gerar o composto do título (0,3 g).

1H RMN (400 MHz, DMSO, 90°C)õ 8,06 (d, 1H), 7,88 (d, 1H), 7,75 (d, 1H), 7,50 (m, 2H), 7,39 (m, 2H), 6,82 (d, 1H), 6,72 (d, 1H), 3,75 (t, 2H), 3,70 (t, 2H), 3,6-3,3 (o número de prótons não pôde ser determinado), 3,28 (t, 2H), 3,1-2,4 (o número de prótons não pôde ser determinado), 0,99 (br, 6H).

Figura 4: DRXP do Di-hidrato de Polimorfo A do Sal de Citrato do Composto B

DRXP (Figura 4) DSC Estado Só¬ Raman IR lido RMN 4,4(20,3) 21,4(4,14) Início 228,2 48,1 269,7 1141,6 2979 868 112°C 6,2(14,3) 24,2(3,69) 226,2 45,0 295,1 1281,4 2864 838 7,2(12,2) 25,8(3,46) 184,1 43,5 373,7 1371,2 2616 799 7,8(11,3) 27,2(3,28) 181,9 37,3 406,2 1440,8 2459 748 8,6(10,3) 27,9(3,19) 178,5 32,9 434,4 1482,9 1686 695 . . . 11,0(8,1) 31,7(2,82) 176,4 25,9 470,6 1515,0 1626 663 12,3(7.2) 171,9 8,7 511,8 1578,9 1561 12,9(6,9) 170,5 6,5 553,3 1624,6 1514 13,7(6,5) 141,8 2,8 597,5 1702,0 1455 14,4(6.1) 134,3 667,5 1416 14,8(6,0) 128,7 699,3 1371 15,6(5,7) 126,8 715,4 1324 16,0(5,5) 125,6 802,3 1280 16,9(5,2) 124,0 846,9 1231 17,4(5,1) 122,5 865,1 1182 18,7(4,75) 120,4 938,9 1108 19,2(4,63) 109,1 981,7 1058 20,6(4,32) 77,0 1026,4 934 21,0(4,22) I 70,8 1078,5 900 Exemplo 2

Ditosilato de /V-f2-(dietilamino)etil1-A/-(2-(f2-(4-hidróxi-2-oxo-2.3- di-hidro-1.3-benzotiazol-7-il)etinamino)etil)-3-í2-( 1 -naftiDetóxilpropanamida

Adicionou-se monohidrato de ácido p-Tolueno sulfônico (667,33 mg)em uma porção a uma solução de A/-[2-(dietilamino)etil]-A/-(2-{[2-(4- hidróxi-2-oxo-2,3-di-hidro-1,3-benzotiazol-7-il)etil]amino}etil)-3-[2-(1- naftil)etóxi]propanamida (1 g)em metanol (10 ml_)produzindo uma solução clara. Esta foi agitada à temperatura ambiente por 30 minutos e então o sol- vente foi removido a vácuo. O resíduo foi mexido em éter de dietila (20 ml_)a temperatura ambiente por 16 horas, e então o solvente foi removido e adi- cionou-se metil éter de t-butila (20 mL). Esta mistura foi então mexida à tem- peratura ambiente por 16 horas e o sólido resultante ser coletado por filtra- ção e lavado com metil éter de t-butila (5 mL). O composto do título foi seco a vácuo à temperatura ambiente por 16 horas para deixar o composto do título na forma de um sólido amorfo (1,18 g). 1H RMN (400 MHz1 DMSO, 90°C)õ 11,35 (1 Η, br), 8,05 (d, 1H), 7,88 (d, 1H), 7,76 (d, 1H), 7,51 (m, 6H), 7,40 (m, 2H), 7,09 (d, 4H), 6,83 (d, 1H), 6,74 (d, 1H), 3,77 (t, 2H), 3,72 (t, 2H), 3,64 (br, 4H), 3,4-3,0 (o número de prótons não pôde ser determinado), 2,85 (m, 2H), 2,64 (t, 2H), 2,28 (s, 6H), 1,22 (t, 6H).

Figura 5: DRXP da forma Amorfa do Sal de Di-Tosilato do Com- posto B

Exemplo 3

P/-Hemi-hidrado de fosfato /V-[2-(dietilamino)etin-/V-(2-([2-(4- hidróxi-2-oxo-2,3-di-hidro-1,3-benzotiazol-7-il)etinamino)etil)-3-f2-( 1 - naftiPetóxnpropanamida

Adicionou-se ácido fosfórico (199,19 mg)a uma solução de A/-[2- (dietilamino)etil]-/\/-(2-{[2-(4-hidróxi-2-oxo-2,3-di-hidro-1,3-benzotiazol-7- il)etil]amino}etil)-3-[2-(1-naftil)etóxi]propanamida (1 g)em metanol (10

ml_)produzindo uma goma. A mistura foi aquecida a temperatura de refluxo, e ao ser mexida continuadamente gerou um sólido móvel. Permitiu-se que a suspensão resfriasse vagarosamente à temperatura ambiente, sendo então filtrada e o bolo lavado com metanol (2 mL). Permitiu-se que o composto do título (0,93 g)secasse sobre o filtro.

1H RMN (400 MHz, DMSO, 90°C)õ 8,05 (d, 1H), 7,87 (d, 1H),

7,74 (m, 1H), 7,48 (m, 2H), 7,38 (m, 2H), 6,78 (d, 1H), 6,68 (d, 1H), 3,73 (t, 2H), 3,67 (t, 2H), 3,31 (m, o número de prótons não pôde ser determinado), 3,26 (t, 2H), 2,8-2,3 (o número de prótons não pôde ser determinado), 0,94 (t, 6H).

Figura 6: DRXP do Polimorfo A de Di-Hemi-hirato de Sal de Fos-

fato do Composto B DRXP DSC Estado Sóli¬ Raman IR (Figura 6) do RMN 5,5(16,1) 22,8(3,90) Início 223,1 80,3 372,7 1199,5 2987 94°C 8,4(10,5) 23,4(3,79) 193,1 72,5 403,0 1278,7 2877 9,04(9,8) 24,3(3,65) 183,6 65,4 736,0 1300,5 2392 9,7(9,1) 25,1(3,54) 182,0 49,3 472,2 1372,3 1686 10,5(8,4) 26,0(3,43) 176,8 45,8 513,1 1440,3 1630 11,8(7,5) 27,0(3,30) 173,2 33,7 536,5 1517,3 1513 12,9(6,9) 28,5(3,13) 170,4 28,5 565,2 1580,2 1443 13,6(6,5) 167,7 9,4 598,7 1622,8 1397 15,0(5,9) 161,7 9,1 668,4 1699,9 1291 15,8(5,6) 143,3 696,5 1200 16,3(5,4) 133,9 711,8 1141 16,8(5,3) 127,0 779,6 1100 17,8(5,0) 124,5 854,4 1019 18,3(4,85) 121,6 941,3 868 19,3(4,60) 119,3 989,0 842 19,3(4,59) 117,9 1022,4 791 19,8(4,47) 112,0 1062,0 695 20,6(4,30) 84,1 1104,4 670 21,9(4,06) 82,6 1143,9 Exemplo 4A

Di-hidrato de dixinafoato A/-[2-(dietilamino)etil1-A/-(2-(f2-(4- hidróxi-2-oxo-2.3-di-hidro-1.3-benzotiazol-7-il)etinamino}etil)-3-f2-( 1 - naftiDetóxilpropanamida

Adicionou-se uma suspensão de ácido 1-hidróxi-2-naftoico (328,42 mg)em metanol (3 mL)a uma solução de A/-f2-(dietilamino)etil]-/V-(2- {[2-(4-hidróxi-2-oxo-2,3-di-hidro-1,3-benzotiazol-7-il)etil]amino}etil)-3-[2-(1- naftil)etóxi]propanamida (0,5 g)em metanol (3 ml_)e a mistura resultante foi aquecida a temperatura do refluxo, permitindo-se então que resfriasse à temperatura ambiente e sendo mexida por 16 horas. O composto do título foi 5 filtrado, lavado com metanol (1 ml_)e seco a vácuo à temperatura ambiente por 1 hora (0,47 g).

1H RMN (400 MHz, DMSO, 90°C)õ 8,24 (d, 2H), 8,04 (d, 1H),

7,87 (d, 1H), 7,75 (m, 5H), 7,50 (m, 4H), 7,40 (m, 4H), 7,11 (d, 2H), 6,83 (d, 1H), 6,73 (d, 1H), 3,75 (t, 2H), 3,70 (t, 2H), 3,6-3,3 (m, 4H), 3,26 (t, 2H), 2,6- 3,1 (o número de prótons não pôde ser determinado), 2,59 (t, 2H), 1,05 (br, 6H).

DRXP DSC Estado Só¬ Raman IR (Figura 7) lido RMN 4,8(18,4) 24,9(3,58) Início 226,9 50,1 232,8 1159,1 3162 741 92°C 7,7(11,5) 26,0(3,43) 210,0 49,0 287,2 1201,4 2983 723 9,1(9,8) 26,4(3,38) 187,3 43,2 326,9 1256,5 2878 696 9,5(9,3) 27,5(3,24) 185,7 33,1 360,7 1371,5 2429 651 10,8(8,2) 30,3(2,95) 164,8 29,3 405,6 1398,8 1683 12,2(7,3) 161,9 26,2 424,8 1432,0 1631 12,8(6,9) 160,2 25,7 475,6 1467,1 1513 15,4(5,7) 159,6 7,8 492,0 1579,4 1435 16,1(5,5) 142,4 3,7 514,7 1626,4 1420 17,2(5,2) 137,5 532,4 1400 18,6(4,76) 136,0 556,4 1293 19,1(4,64) 133,9 591,2 1203 19,9(4,46) 131,5 623,6 1184 20,5(4,33) 126,8 656,7 1142 21,3(4,17) 125,0 693,5 1113 22,8(3,90) 75,3 726,0 1020 23,3(3,82) 71,5 787,1 868 23,6(3,77) 68,0 1020,6 843 24,3(3,66) 51,2 1095,3 799 Figura 7: DRXP do Polimorfo A de Di-Hidrato de Sal de Di- xinafoato do Composto B Exemplo 4B

Di-Hemi-hirato de dixinafoato de A/-[2-(dietilamino)etill-A/-(2-([2- (4-hidróxi-2-oxo-2,3-di-hidro-1,3-benzotiazol-7-il)etinamino)etin-3-í2-(1- naftiDetóxflpropanamida

20mg de Di-Hidrato de Polimorfo A (Exemplo 4A)foi dispersado em água (0,5 ml_)por uma semana. A suspensão resultante foi centrifugada e o supernadante foi separado do material sólido, o último sendo deixado para secar ao ar ao por uma noite em uma capela.

DRXP (Figura 8) DSC 4,8(18,58) 21,4(4,15) Início abaixo 90°C 7,5(11,9) 22,4(3,98) 7,8(11,4) 24,7(3,60) 8,5(10,4) 25,2(3,53) 8,8(10,0) 25,6(3,48) 9,4(9,4) 26,1(3,41) 10,6(8,3) 11,6(7,7) 11,9(7,5) 12,3(7,2) 12,7(7,0) 13,4(6,6) 15,3(5,8) 15,6(5,7) 16,6(5,33) 17,7(5,0) 18,4(4,83) 18,7(4,76) 18,8(4,71) Figura 8: DRXP do Polimorfo A do Di-Hemi-hirato de Sal de Di- xinafoato do Composto B Exemplo 5

Sulfato de A/-r2-(dietilamino)etin-A/-(2-(í2-(4-hidróxi-2-oxo-2,3-di- hidro-1,3-benzotiazol-7-il)etinamino)etiD-3-í2-(1-naftiDetc>xnpropanamida

Adicionou-se ácido sulfúrico concentrado (23,98 pL)gota a gota a uma solução de /V-[2-(dietilamino)etil]-/S/-(2-{[2-(4-hidróxi-2-oxo-2,3-di-hidro-

1,3-benzotiazol-7-il)etil]amino}etil)-3-[2-(1-naftil)etóxi]propanamida (0,25 g)em metanol (2,5 mL). A mistura foi agitada à temperatura ambiente por 20 10 minutos e então aquecida a uma temperatura externa de 60°C permitindo-se então que esta resfriasse de volta à temperatura ambiente. Adicionou-se metil éter de t-butila (0,5 mL)e a mistura foi aquecida a uma temperatura ex- terna de 60°C, permitindo-se então que ficasse à temperatura ambiente. A mistura foi transferida para um outro frasco para dissolver a mistura em me- 15 tanol e então o solvente foi removido a vácuo. Adicinou-se metil éter de t- butila (10 mL)ao resíduo e a mistura foi agitada à temperatura ambiente por

16 horas. O composto do título foi coletado por filtração e seco no filtro (0,24 g). Verificou-se o sólido amorfo.

1H RMN (400 MHz, DMSO, 90°C) δ 8,05 (m, 1H), 7,88 (m, 1H), 7,75 (m, 1H), 7,50 (m, 2H), 7,38 (m, 2H), 6,85 (m, 1H), 6,73 (m, 1H), 3,74 (m, 4H), 3,58 - 3,40 (m, o número de prótons não pôde ser determinado), 3,28 (t, 2H), 3,03 - 2,73 (m, o número de prótons não pôde ser determinado), 2,60 (t, 2H), 1,09 (s, 6H).

Figura 9: DRXP da Forma Amorfa de Sal de Sulfato do Compos-

to B Exemplo 6

Monobenzoato de A/-r2-(dietilamino)etin-A/-(2-([2-(4-hidróxi-2- oxo-2.3-di-hidro-1,3-benzotiazol-7-il)etinamino)etil)-3-f2-(1- naftiDetóxflpropanamida Adicionou-se ácido benzoico (52,75 mg)em uma porção a uma

solução de /V-[2-(dietilamino)etil]-A/-(2-{[2-(4-hidróxi-2-oxo-2,3-di-hidro-1,3- benzotiazol-7-il)etil]amino}etil)-3-[2-(1 -naftil)etóxi]propanamida (0,25 g)em metanol (2,5 mL)produzindo uma solução clara. Esta foi agitada à tempera- tura ambiente por 1 hora e então o solvente foi removido a vácuo. O resíduo 10 foi mexido em acetonitrila (5 mL)a temperatura ambiente por 16 horas e en- tão o solvente foi removido e adicionou-se metil éter de t-butila (10 mL). Esta mistura foi agitada à temperatura ambiente por 3 horas antes que o compos- to do título fosse coletado por filtração. O composto do título foi isolado na forma de um sólido amorfo.

1H RMN (400 MHz, DMSO, 90°C)õ 8,04 (m, 1H), 7,94 (m, 2H),

7,87 (m, 1H), 7,73 (m, 1H), 7,57 - 7,34 (m, 7H), 6,84 - 6,68 (m, 2H), 3,80 - 3,54 (m, 6H), 3,30 (m, não pôde ser estabelecido devido à sobreposição com a água), 2,78 - 2,37 (m, o número de prótons não pôde ser determinado), 0,91 (m, 6H).

Figura 10: DRXP da Forma Amorfa do Monobenzoato do Com-

posto B

Exemplo 6A

Monobenzoato de A/-f2-(dietilamino)etil1-A/-(2-([2-(4-hidróxi-2- oxo-2,3-di-hidro-1.3-benzotiazol-7-il)etil1amino)etil)-3-r2-(1- naftiOetóxilpropanamida em uma forma cristalina

20mg da forma amorfa do sal de monobenzoato (Exemplo 6)fo- ram dissolvidos em 1 mL de propan-2-ol. A solução resultante foi deixada para evaporar vagarosamente à temperatura ambiente em uma capela, dei- xando um sólido esbranquiçado. DRXP (Figura 11) 5,6(15,8) 22,5(3,96) 7,8(11,3) 24,1(3,69) 8,3(10,6) 24,3(3,66) 9,5(9,3) 25,8(3,45) 12,0(7,4) 26,2(3,41) 13,7(6,4) 28,1(3,17) 14,8(6,0) 28,6(3,12) 15,5(5,7) 16,0(5,5) 16,6(5,3) 16,8(5,3) 17,4(5,1) 20,1(4,42) 20,9(4,25) 22,1(4,03) Figura 11: DRXP da Forma Cristalina do Monobenzoato do

Composto B

Exemplo 7

Monofumarato de A/-r2-(dietilamino)etin-A/-(2-([2-(4-hidróxi-2-

oxo-2,3-di-hidro-1.3-benzotiazol-7-il)etinamino)etiD-3-í2-( 1 -naftiDetóxil propa- namida

Adicionou-se ácido fumárico (168,31 mg)a uma solução de N-[2- (dietilamino)etil]-/V-(2-{[2-(4-hidróxi-2-oxo-2,3-di-hidro-1,3-benzotiazol-7- 10 il)etil]amino}etil)-3-[2-(1-naftil)etóxi]propanamida (0,84 g)em metanol (2 mL)produzindo uma mistura opaca. A mistura foi aquecida a uma temperatu- ra externa de 60°C, permitindo-se então que resfriasse a uma temperatura ambiente e foi agitada por 16 horas. O composto do título foi obtido na forma

Ho Mm2 Q£nijjrj2 3!T!0rfcÍ SnCS cl Θ YSnCPSrxSC SÍS S0CüPS 1H RMN (400 MHz, DMSO, 90°C)õ 8,05 (m, 1H), 7,87 (m, 1H), 7,74 (m, 1H), 7,49 (m, 2H), 7,38 (m, 2H), 6,80 (m, 1H), 6,70 (m, 1H), 6,58 (s, 2H), 3,78 - 3,53 (m, 6H), 3,36 - 3,19 (m, o número de prótons não pôde ser determinado), 2,82 - 2,40 (m, o número de prótons não pôde ser determina- do), 0,96-0,86 (m, 6H).

Figura 12: DRXP da Forma Amorfa do Sal de Monofumarato do

Composto B

Exemplo 8

Mono besilato de A/-[2-(dietilamino)etin-A/-(2-([2-(4-hidróxi-2-oxo- 2.3-di-hidro-1.3-benzotiazol-7-il)etillamino)etil)-3-f2-( 1 - naftiOetóxilpropanamida

Adicionou-se ácido benzenossulfônico (158,51 mg)a uma solu- ção de A/-[2-(dietilamino)etil]-/\/-(2-{[2-(4-hidróxi-2-oxo-2,3-di-hidro-1,3- benzotiazol-7-il)etil]amino}etil)-3-[2-(1-naftil)etóxi]propanamida (0,58 g)em 15 metanol (5,8 ml_)produzindo uma solução clara. A mistura foi agitada à tem- peratura ambiente por 1 hora. O composto do título foi obtido na forma de um sólido amorfo após a evaporação até a secura.

1H RMN (400 MHz, DMSO, 90°C)õ 8,05 (d, 1H), 7,88 (d, 1H),

7,75 (m, 1H), 7,64 (m, 2H), 7,50 (m, 2H), 7,40 (m, 2H), 7,28 (m, 3H), 6,83 (m, 1H), 6,73 (m, 1H), 3,77 - 3.35 (m, o número de prótons não pôde ser deter- minado), 3,28 (t, 2H), 3,01 - 2,47 (m, o número de prótons não pôde ser de- terminado), 1,05 (br, 6H).

Figura 13: DRXP da Forma Amorfa do Monobesilato do Com- posto B

Ensaios Biológicos

Produção de cAMP mediada por β2 adrenérgico

Preparação celular

Células H292 foram cultivadas em frascos incubadores de 225cm2 a 37°C, 5% de CO2 em meio RPMI contendo 10% (v/v)de FBS (soro bovino fetal)e 2 mM L-glutamina.

Método Experimental

Células H292 aderentes foram removidas de frascos de cultura tissular por tratamento com solução de desprendimento celular Accutase® por 15 minutos. Os frascos foram incubados por 15 minutos em um incuba- dor umidificado a 37°C, com CO2 a 5%. As células desprendidas foram no- vamente suspensas em meio RPMI (contendo 10% (v/v)de FBS e 2 mM de 5 L-glutamino)a 0,05 x 106 células por mL. Foram adicionadas 5000 células em 100 μί a cada poço de uma placa com 96 poços tratados para cultura tissular e as células foram incubadas por uma noite em uma incubadora u- midificada a 37°C, com CO2 a 5%. O meio da cultura foi removido e as célu- las foram lavadas duas vezes com 100 μΙ_ de tampão do ensaio e substituí- 10 das com 50 μΙ_ de tampão do ensaio (solução HBSS contendo 10mM HE- PES pH 7,4 e 5 mM de glicose). As células foram colocadas sob descanso à temperatura ambiente por 20 minutos após cada vez, adicionou-se 25 μΙ_ de rolipram (1,2 mM feito em tampão do ensaio contendo 2,4% (v/v)de dimetil- sulfóxido). As células incubadas com rolipram por 10 minutos, após o que os 15 compostos do teste foram adicionados e as células foram incubadas por 60 minutos à temperatura ambiente. A concentração final de rolipram no ensaio foi de 300 μΜ e a concentração final de veículo foi de 1,6% (v/v)dimetilsul- fóxido. A reação foi removida através da remoção dos supernadantes, la- vando-se uma vez com 100 μΙ_ de salina do ensaio e substituindo com 50 μΙ_ 20 de salina de lise. A monocamada celular foi congelada a -80°C por 30 minu- tos (ou ao longo de uma noite).

Detecção da cAMP por AlphaScreen®

A concentração da cAMP (monofosfato de adenosine cíclica)no Iisado cellular foi determinado utilizando a metodologia AlphaScreen®. A 25 placa com as células congeladas foi degelada por 20 minutos em um agita- dor de placas, então 10 μί do Iisado celular foram transferidos para uma placa branca de 96 poços. 40 μΐ_ de contas de detecção (detection beads) AlphaScreen® mistas pré-incubadas com cAMP biotinilada, foram adiciona- das a cada poço e a placa incubada à temperatura ambiente por 10 horas no 30 escuro. O final da AlphaScreen® foi mensurado utilizando um espectrofotô- metro EnVision (Perkin-Elmer lnc.)com as regulagens recomendadas pelo fabricante. As concentrações da cAMP foram designadas por referência à uma curva de calibração determinada no mesmo experimento utilizando concentrações-padrão da cAMP. As curvas de resposta de concentração para agonistas foram construídas e os dados enquadrados a uma equação logística com 4 parâmetros a fim de determinar tanto a pEC50 quanto a Ativi- 5 dade Instrínsica. A Atividade Intrinsica foi expressa como uma fração relativa à atividade máxima determinada por formoterol em cada experimento. Ensaios de Seletividade

a1D adrenérgico Preparação da Membrana As membranas foram preparadas a partir de células renais em-

brionárias humanas 293 (HEK293)expressando o receptor humano recombi- nante a1 d- Estas foram diluídas em tampão do ensaio (50mM HEPES1 1mM EDTA, 0,1% de gelatina, pH 7,4)para gerar uma concentração final de mem- branas e produziu uma janela clara entre a ligação específica máxima e mí- nima.

Método Experimental

Os ensaios foram realizados em placas de polipropileno com 96 poços com fundo em U. Foram adicionados 10 μί de [3H]-prazosina (0,3 nM de concentração final)e 10 μΙ_ de composto do teste (10x a concentração 20 final)a cada poço do teste. Para cada placa do ensaio, foram obtidas 8 repli- catas para ligação da [3H]-prazosina na presença do veículo de 10 μΙ_ (10% (v/v)de DMSO em tampão de ensaio; definindo a ligação máxima)ou 10μΙ_ de BMY7378 (10 μΜ da concentração final definindo a ligação não- específica (NSB)). As membranas foram então adicionadas para gerar um 25 volume final de 100 μΙ_. As placas foram incubadas por 2 horas à temperatu- ra ambiente e então filtradas em placas filtro GF/B revestidas com PEI pré- imersas por uma hora em tampão de ensaio, utilizando uma placa de 96 po- ços de coleta celular Tomtec. Foram realizadas 5 lavagens com 250 μΙ_ de solução tampão para lavagem (50mM HEPES, 1mM de EDTA, pH 7,4)à 4°C 30 para remover a radioatividade não-ligada. As placas foram secas e então seladas por baixo utilizando selantes de placa Packard e adicionou-se Mi- croScint-0 (50 uL)a casa poco. As placas foram seladas (TopSeaI A)e a ra- dioatividade de ligação ao filtro foi mensurada com o contador de cintilação (TopCount, Packard BioScience)utilizando um protocolo de contagem de 3 minutos.

A ligação específica total (B0)foi determinada através da subtra- ção da NSB média da ligação máxima média. Os valores de NSB foram também subtraídos dos valores de todos os outros poços. Estes dados fo- ram expressos como percentuais de B0. As curvas de concentração-efeito do composto (inibição da ligação [3H]-prazosina)foram determinadas utilizando diluições em série tipicamente na faixa de 0,1 nM a 10 μΜ. Os dados foram enquadrados a uma equação logística com quatro parâmetros para determi- nar a potência do composto, a qual foi expressa como plC50 (concentração molar Iog negativa induzindo 50% de inibição da ligação da [3H]-prazosina). β1 adrenérqico Preparação da Membrana Membranas contendo receptores beta 1 adrenérgicos recombi-

nantes humanos foram obtidas a partir do Euroscreen. Estas foram diluídas em Tampão de ensaio (50mM de HEPES, 1mM de EDTA, 120mM de NaCI, 0,1% de gelatina, pH 7,4)para gerar uma concentração final de membranas que produziu uma janela clara entre a ligação específica máxima e mínima. Método Experimental

Os ensaios foram realizados em placas de polipropileno com 96 poços com fundo em U. Foram adicionados 10 μΙ_ [125l]-lodocianopindolol (0,036 nM na concentração final)e 10 μί do composto testado (10x da con- centração final)a cada poço do teste. Para cada placa de ensaio, foram obti- 25 das 8 replicatas para ligação do [125l]-lodocianopindolol na presença de 10 μΙ_ de veículo (10% (v/v)de DMSO em Tampão de ensaio; definindo a liga- ção máxima)ou 10 μί de Propranolol (10 μΜ da concentração final; definindo ligação não-específica (NSB)). As membranas foram então adicionadas para alcançar o volume final de 100 pL. As placas foram incubadas por 2 horas à 30 temperatura ambiente e então filtradas em placas, filtros GF/B em placas revestidas com PEI, pré-imersas por 1 hora em Tampão de ensaio, utilizan- do uma placa de 96 pocos de coleta celular Tomtec. Foram realizadas 5 Ia- vagens com 250 μΙ_ de solução tampão de lavagem (50mM de HEPES, 1mM de EDTA, 120mM de NaCI1 pH 7,4)à 4°C para resolver a radioatividade não- ligada. As placas foram secas e então seladas por baixo utilizando selantes de placa Packard, adicionando-se MicroScint-O (50 μΙ_)8 cada poço. As pla- 5 cas foram seladas (TopSeaI A)e a radioatividade ligada ao filtro foi mensura- da com um contador de cintilação (TopCount, Packard BioScience)utilizando um protocolo de contagem de 3 minutos.

A ligação específica total (B0)foi determinada pela subtração da NSB média da ligação máxima média. Os valores de NSB também foram 10 subtraídos dos valores de cada um dos outros poços. Estes dados foram expressos como percentuais de Bo. As curvas de concentração-efeito do composto (inibição da ligação do [125l]-lodocianopindolol)foram determinadas utilizando diluições em série tipicamente na faixa de 0,1 nM a 10 μΜ. Os da- dos foram enquadrados a uma equação logística com 4 parâmetros para 15 determinar a potência do composto, a qual expressa como plC50 (concentra- ção molar Iog negativa induzindo 50% de inibição da ligação do [125I]- lodocianopindolol).

Dopamina D2 Preparação da Membrana As membranas contendo os receptores dopaminérgicos huma-

nos do subtipo D2 foram obtidas com a Perkin Elmer. Estas foram diluídas com Tampão de ensaio (50mM de HEPES, 1mM de EDTA, 120mM de NaCI,

0,1% de gelatina, pH 7,4)para gerar uma concentração final de membranas que produziu uma janela clara entre a ligação específica máxima e mínima. Método Experimental

Os ensaios foram realizados em placas de polipropileno com 96 poços com fundo em U. Foram adicionados 30 μι. de [3H]-espiperona (0,16 nM da concentração final)e 30 μΙ_ do composto do teste (10x da con- centração final)a cada poço do teste. Para cada placa no ensaio, foram obti- 30 das 8 replicatas para ligação da [3H]-espiperona na presença de 30 μΐ_ veí- culos (10% (v/v)de DMSO em Tampão de ensaio; definindo a ligação máxi- ma ou 30 uLde Haloperidol (10 μΜ da concentração final; definindo ligação não-específica (NSB)). As membranas foram então adicionadas para obter um volume final de 300 pL. As placas foram incubadas por 2 horas à tempe- ratura ambiente e então filtrada nos filtros GF/B revestidas com PEI, pré- imersas por 1 hora em Tampão de ensaio, utilizando uma placa com 96 po- 5 ços de coleta celular Tomtec. Foram realizadas 5 lavagens com 250 μΐ_ de solução tampão (50mM de HEPES, 1mM de EDTA, 120mM de NaCI, pH 7,4)à 4°C para remover a radioatividade não-ligada. As placas foram secas e então seladas por baixo utilizando selantes de placa Packard, adicionando- se então MicroScint-O (50 μΙ_)8 cada poço. As placas foram seladas (Top- 10 Seal A)e a radioatividade ligada ao filtro foi mensurada com um contador de cintilação (TopCount, Packard BioScience)utilizando um protocolo de conta- gem de 3 minutos.

A ligação específica total (B0)foi determinada através da subtra- ção da NSB média da ligação máxima média. Os valores de NSB foram 15 também subtraídos dos valores de cada uma dos outros poços. Estes dados foram expressos com percentuais de B0. As curvas concentração-efeito do composto (inibição da ligação da [3H]-espiperona)foram determinadas utili- zando diluições em série tipicamente na faixa de 0,1 nM a 10 μΜ. Os dados foram enquadrados a uma equação logística com 4 parâmetros para deter- 20 minar a potência do composto, a qual foi expressa por plC50 (concentração molar Iog negativa induzindo 50% de inibição da ligação da [3H]-espiperona).

Ensaio de "onset"

Porquinhos-da-índia Dunkin-Hartley (entre 200 g e 300 g na en- trega)foram supridos por um estabelecimento de criação designados. Os 25 porquinhos-da-índia foram mortos por deslocamento serviçal e suas traquei- as foram removidas. O tecido conectivo aderente foi removido e cada tra- quéia cortada em 4 anéis. Os anéis de tecido foram então presos a um transdutor isométrico. Os tecidos foram lavados e uma força de 1 g foi apli- cada a cada anel. Em todos os experimentos se utilizou um desenho de cur- 30 va pareada. Foi aplicada aos tecidos uma dose de 1 μΜ de metacolina. Os tecidos foram então lavados (três vezes, com um minuto entre as lavagens), a tensão de repouso de 1 q foi novamente aplicada, deixando-se os tecidos em repouso por 1 hora para equilibrar. Os tecidos foram então contraídos com 1 μΜ de metacolina e uma vez obtida uma resposta clara foi construída uma curva resposta-concentração cumulativa à isoprenalina (10'9 M - 10'5 M). Os tecidos foram então lavados (três vezes, com um minuto entre as 5 lavagens)e deixados em repouso por 1 hora. Ao fim do período de repouso, os tecidos foram contraídos com 1 μΜ de metacolina e se adicionou uma concentração p[A]so do composto testado. Uma vez que o tecido alcançou o relaxamento máximo, uma concentração de 30 x p[A]50 do composto testado foi adicionada. Uma vez que respostas do tecido alcançou um platô, foram 10 adicionados 10 μΜ de sotalol ao banho para confirmar que o relaxamento foi β2 mediado.

Os dados foram coletados através da utilização do software A- Dlnstruments chart4forwindows software, o qual mensurou a tensão máxima gerada a cada concentração de agonista.

Para cada concentração da curva de concentração cumulative

da isoprenalina, a resposta foi calculada como % de relaxamento da contra- ção induzida pela metacolina. Uma curva recebeu os dados de logio[agonista](M)versus percentual de inibição da contração induzida pela metacolina. Estes dados foram então enquadrados a uma curva de regres- 20 são não-linear. Para cada experimento os dados da curva E/[A]foram en- quadrados utilizando uma função logística de 4 parâmetros da fórmula:

</?-«!.Μ··

~p Uf+Ul,"'

E [A]são o efeito farmacológico (% de relaxamento)e a concen- tração do agonista, respectivamente; α, β, [Aj50 e m são a assíntota, linha de base, localização e parâmetros de inclinação, respectivamente. A p[A]50 e a 25 IA de cada curva de isoprenalina foram determinadas a partir deste enqua- dramento, para determinar se os tecidos foram viáveis para gerar o tempo de "onset" para os compostos testados.

Para cada concentração p[A]50 do composto testado, a resposta foi calculada como % de relaxamento da contração induzida pela metacolina. Os resultados foram inseridos em % de relaxamento contra tempo, e o tem- po levado para alcançar o valor de relaxamento de 90% foi calculado e regis- ta

trado.

A adição de uma concentração 30 x p[A]50 permitiu uma deter- minação do efeito máximo do composto no tecido individual. Assim, o % do 5 efeito máximo do composto a uma concentração p[A]50 foi calculado e regis- trado.

Farmacocinéticas em Ratos

Uma solução de dosegem do composto testado foi preparada u- tilizando o veículo de dosagem adequado. A concentração do composto da 10 solução de dosagem foi ensaiada pela diluição de uma alíquota a uma con- centração nominal de 50μg■mΓ1 e e a calibração injeções em duplicata de uma solução-padrão e um padrão QC a esta concentração. Os compostos foram administrados de forma intravenosa como bolus em uma veia causai a três ratos com de 250-350 g (aproximadamente 1 ml-kg"1). Para a dose oral, 15 um grupo em separado de 2 ou 3 animais foram dosados por via oral (3 ml-kg'1). As doses de entrega foram estimadas pela perda de peso. A comi- da não foi habitualmente retirada dos animais antes da dosagem, embora este efeito tenha sido investigado caso necessário.

Amostras sanguíneas de 0,25 ml foram tiradas da veia caudal e 20 inseridas a 1ml, transferidas para tubos de EDTA e o plasma foi separado por centrifugação (5 minutos a 13000rpm)logo após a coleta das amostras, antes do armazenamento a -20°C. Os tempos amostrais típicos foram de 2,

4, 8, 15, 30, 60, 120, 180, 240, 300 (min)ou até que o t1 /2 terminal fosse descrito de forma precisa.

As concentrações plasmáticas das substâncias analisadas fo-

ram determinadas por espectrometria de massa. Soluções padrão e de con- trole de qualidade foram preparadas a uma concentração de 1 mg/ml em me- tanol. Uma série de amostras QC e padrão produzidas por diluição em série foram adicionadas ao plasma de rato de controle (50μΙ). A faixa das concen- 30 trações cobriu a faixa dos níveis da substância analisada presentes nas a- mostras dos ratos. As amostras, os QCs e os padrões foram submetidos à extração líquida utilizando 50μΙ de solvente orgânico e 100ul de solvente orgânico contendo um padrão interno, escolhido para se assemelhar à subs- tância analisada. As amostras foram então misturadas por inversão repetida, armazenadas a -20°C por pelo menos 1 hora, e centrifugadas a 3500 rpm em uma centrífuga em 20 minutos. Foram transferidas alíquotas (120 pl)de 5 cada amostra para análise utilizando LC-MSMS. As amostras-padrão e de controle de qualidade cobrindo as faixas de concentrações encontradas nas amostras do teste estiveram dentre 25% da concentração nominal.

A análise dos dados farmacocinéticos foi obtida utilizando Win- Nonlin. Foi utilizada uma análise não-compartimentada padrão para estimar os parâmetros tais como Tmax, Cmax, Lambda z, t1/2_Lambda_z, aUCall, aUCINF(observado), Cl(observado), Vss(observado).

Claims (13)

1. Sal farmaceuticamente aceitável de N-[2-(Dietilamino)etil]-A/- (2-{[2-(4-hidróxi-2-oxo-2,3-di-hidro-1,3-benzotiazol-7-il)etil]amino}etil)-3-[2-(1- naftil)etóxi]propanamida, desde que não sendo o sal dibromidrato ou diclori- drato.

2. Sal farmaceuticamente aceitável de acordo com a reivindica- ção 1, de forma que o sal seja um trifluoroacetato, sulfato, fosfato, acetato, fumarato, maleato, citrato, piruvato, succinato, oxalato, metanossulfonato, p- toluenossulfonato, bissulfato, benzenossulfonato, etanossulfonato, malonato, xinafoato, ascorbato, oleato, nicotinato, sacarinato, adipato, formato, glicola- to, L-lactato, D-lactato, aspartato, malato, L-tartrato, D-tartrato, estearato, 2- furoato, 3-furoato, napadisilato (naftaleno-1,5-dissulfonato ou naftaleno-1- (ácido sulfônico)-5-sulfonato), edisilato (etano-1,2-dissulfonato ou etano-1- (ácido sulfônico)-2-sulfonato), isetionato (2-hidroxietilsulfonato), 2- mesitilenossulfonato, 2-naftalenossulfonato, D-mandelato ou L-mandelato.

3. Sal farmaceuticamente aceitável de N-[2-(Dietilamino)etil]-/V- (2-{[2-(4-hidróxi-2-oxo-2,3-di-hidro-1,3-benzotiazol-7-il)etil]amino}etil)-3-[2-(1- naftil)etóxi]propanamida que seja um sal de citrato, ditosilato, fosfato, dixina- foato, sulfato, monobenzoato, fumarato ou besilato.

4. Processo para a preparação de um sal como definido na reivindicação 1, tal processo compreendendo a reação de um ácido adequado com A/-[2-(Dietilamino)etil]-A/-(2-{[2-(4-hidróxi-2-oxo-2,3-di-hidro- 1,3-benzotiazol-7-il)etil]amino}etil)-3-[2-(1-naftil)etóxi]propanamida em um solvente adequado,opcionalmente a temperaturas elevadas.

5. Composição farmacêutica contendo um sal farmaceuticamen- te aceitável como definido na reivindicação 1, em associação com um veícu- lo, diluente ou adjuvante farmaceuticamente aceitável.

6. Sal farmaceuticamente aceitável de acordo com a reivindica- ção 1, para uso terapêutico.

7. Uso de um sal farmaceuticamente aceitável como definido na reivindicação 1, na fabricação de um medicamento para o tratamento de condições ou doenças humanas nas quais seja benéfica a modulação da atividade do adrenoceptor β2.

8. Uso de um sal farmaceuticamente aceitável como definido na reivindicação 1, na fabricação de um medicamento para o tratamento da síndrome da angústia respiratória aguda (ARDS), ênfisema pulmonar, bronquite, bronquiectasia, doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), asma ou rinite.

9. Sal farmaceuticamente aceitável de acordo com a reivindica- ção 1, para o tratamento de estados doentios respiratórios.

10. Sal farmaceuticamente aceitável de acordo com a reivindicação 1 para o tratamento da síndrome da angústia respiratória aguda (SARA), ênfisema pulmonar, bronquite, bronquiectasia, doença pulmonar obstrutiva crônica (DPOC), asma ou rinite.

11. Método de tratamento ou de redução do risco de doenças ou condições, nas quais seja benéfica a modulação da atividade do adrenocep- tor β2, compreendendo a administração de uma quantidade terapeuticamen- te eficaz de um sal farmaceuticamente aceitável como definido na reivindica- ção 1, a um paciente em necessidade do mesmo.

12. Método de tratamento ou de redução do risco de condições ou doenças inflamatórias que compreende a administração de uma quanti- dade terapeuticamente eficaz de um sal farmaceuticamente aceitável como definido na reivindicação 1, a um paciente em necessidade do mesmo.

13. Método de acordo com a reivindicação 10 ou com a reivindicação 11, em que a condição ou doença seja a síndrome da angústia respiratória aguda (ARDS), ênfisema pulmonar, bronquite, bronquiectasia, doença pulmonar obstrutiva crônica (COPD), asma ou rinite.