BRPI0809244A2

BRPI0809244A2 - Métodos de tratamento de uma anormalidade de movimento, e para identificação de um agente que inibe a atividade pde7.

Info

Publication number: BRPI0809244A2
Application number: BRPI0809244-3A
Authority: BR
Inventors: John E Bergmann; Neil S Cutshall; Gregory A Demopulos; Vincent A Florio; George Gaitanaris; Patrick Gray; John Hohmann; Rene Onrust; Hongkui Zeng
Original assignee: Omeros Corp
Priority date: 2007-03-27
Filing date: 2008-03-27
Publication date: 2014-09-23
Also published as: AU2008230710B2; CA2681650A1; CN101917992A; CN104758291B; CN104758291A; AU2008230710A1; MX2009010450A; RU2449790C2; US20190183824A1; JP2014198718A; JP5943964B2; JP2010522768A; US20080260643A1; EP2139475A2; WO2008119057A2; CA2681650C; EP2139475B1; JP5580192B2; NZ580413A; US20110091388A1

Description

“MÉTODOS DE TRATAMENTO DE UMA ANORMALIDADE DE MOVIMENTO, E PARA IDENTIFICAÇÃO DE UM AGENTE QUE INIBE A ATIVIDADE PDE7”

REFERÊNCIA CRUZADA PELOS PEDIDOS RELACIONADOS

Este pedido reivindica o benefício do Pedido Condicional US N°. 60/920.496, depositado em 27 de Março de 2007, sob 35 USC. § 119(e), a descoberta de que é neste incorporado por referência.

CAMPO DA INVENÇÃO A presente invenção diz respeito a métodos de tratamento de uma anormalidade de movimento associado com a patologia de um distúrbio de movimento que compreende administrar a um paciente em necessidade desta quantidade de um agente inibidor PDE7 eficaz para inibir a atividade enzimática de PDE7.

FUNDAMENTO O mal de Parkinson ("PD") é um distúrbio progressivo que afeta um grupo pequeno de neurônios (denominada a substantia nigra) no mesencéfalo. PD é associado com a depleção de dopamina, que é importante para a manutenção do controle de movimento através da interação com células no corpo estriado. Aproximadamente uma a cada 1.000 pessoas contraem a doença e cerca de 1 % da população na idade de 65 sofre de PD. Os sintomas comuns de PD incluem tremor em repouso, firmeza (ou rigidez) de músculos, atraso de movimento (de movimento lento) e perda da balança (disfunção postural).

O mal de Parkinson é uma das três condições distintas que pode ser categorizada junto como Parkinsonismo. O mal de Parkinson, ou agitação de paralisia, é a forma mais comum de Parkinsonismo, aflingindo aproximadamente 75 % dos casos e é de origem ou causa desconhecida. Um segundo tipo de Parkinsonismo é causado pelos medicamentos e toxinas, incluindo monóxido de carbono, manganês e um composto químico conhecido como MPTP (metilfeniltetraidropiridina). Uma terceira forma de Parkinsonismo, referido como Parkinsonismo vascular, pode ser causado por pequenos acidentes vasculares cerebrais múltiplos que danificam as células cerebrais que produzem dopamina.

5 Muitos tratamentos foram experimentado visto que James

Parkinson nomeou e descreveu a condição em 1817. Mais tratamentos são terapias sintomáticas, tal como usando a terapia farmacocinética por exemplo, levodopa, agonistas receptores de dopamina, inibidores de MAO-B, inibidores de COMT) ou terapia de estimulação profunda do cérebro, para 10 aliviar os sintomas da doença. Recentemente, as terapias neuroprotetoras foram o objetivo de intensa busca e esforços de desenvolvimento.

A combinação terapêutica de levodopa (L-dopa), um precursor de dopamina e um inibidor de descarboxilase de dopa (carbidopa), é considerado ser um dos mais tratamentos eficazes para os sintomas do mal de Parkinson (The Medicai Letter 35:31-34, 1993). Entretanto, certas limitações da combinação tomar-se aparente dentro de dois a cinco anos de iniciação de uma terapia de combinação. Como os progressos da doença, o benefício de cada dosagem tomar-se mais curto (o "efeito de desgaste") e alguns pacientes flutuam imprevisivelmente entre a mobilidade e a imobilidade (o “efeito Iigadesliga”). Períodos "ligado" são usualmente associados com concentrações de levodopa de alto plasma e frequentemente incluem movimentos involuntários anormais (isto é, discinesias). Períodos "desligado" foram correlacionados com concentrações de levodopa de baixo plasma e episódios de bradicinética. Portanto, a necessidade existe para os tratamentos eficazes adicionais para o mal de Parkinson.

A característica patológica saliente do mal de Parkinson é a degeneração de neurônios dopaminérgicos na substantia nigra compacta (SNc) que projetam ao estriado. Fomo L.S., J. Neuropathol Exp Neurol 55:259-272, 1996. É considerado que relativamente a depleção de dopamina seletiva no estriado e outros gânglios basais resultam em descarga desordenada e aumentada e sincronização em áreas motoras dos arcos motores de gânglios-talamocorticol basais. Wichmann e Delong, Neuropsychopharmacology: The Fifth Generation of Progress, Chapter 122, 5 "Neurocircuitry of Parkinson Disease," 2002. Além disso o mal de Parkinson, função anormal do gânglio basal também foi implicado em uma variedade de distúrbios neurológicos com as anomalias de movimento. Tais distúrbios neurológicos incluem síndrome das pernas inquietas (Hening, W. et al., Sleep 22:970-999, 1999) e doença de Huntington (Vonsattel, J.P. et al., J. 10 Neuropathol. Exp. Neurol. 44:559-577, 1985). O estudo das conseqüências das mudanças patofisiológicas no gânglio basal que resultam da perda da transmissão dopaminérgica no gânglio basal foi facilitado pela descoberta que primatas e roedores tratados com MPTP desenvolveram mudanças anatômicas e de comportamento que firmemente imitam as características do mal de 15 Parkinson em humanos. Ver, por exemplo, Bankiewicz, K.S. et al., Life Sei. 39:7-16, 1986, Bums, R.S. et al., PNAS 80:4546-4550, 1983.

A fosfodiesterase de nucleotídeo cíclico (PDEs) representa uma família de enzimas que hidrolizam os segundos mensageiros intracelulares obíquo, 3’,5’-monofosfato de adenosina (cAMP) e 3’,5’20 monofosfato de guanosina (cGMP), aos seus metabólitos 5’,monofosfato inativo correspondente. Pelo menos 11 classes distintas de isozimas PDE (PDEl-Il) são acreditadas existir, cada uma possuindo características cinéticas e físicas únicas e representando famílias de gene único, dentro de cada uma das classes distintas de PDE, aqui pode ser até quatro sub-tipos 25 distintos. (Crocker, I. et al., Drugs Today 35(7):519-535, 1999; Fawcett, L. et al., PNAS 97(7):3702-3703, 2000; e Yuasa, K. et al., J. Biol. Chem. 275(40):31496-31479, 2000).

Virtualmente todos da fosfodiesterase são expressados no sistema nervoso central ("SNC"), fabricando esta família de gene de uma fonte atrativa particular de novos alvos para o tratamento de distúrbios neurodegenerativos e psiquiátricos. Entretanto, todos os neurônios expressam fosfodiesterase múltipla, que difere em especificidade de nucleotídeo, afinidade, controle regulador e compartimentalização sub-celular, fabricando ligações do alvo para uma doença específica com o tratamento da dificuldade da doença. Portanto existe uma necessidade para identificar um alvo a partir da família de fosfodiesterase com o tratamento de uma doença SNC específica, tal como mal de Parkinson e outros distúrbios neurológicos com anomalias de movimento.

Apesar das vantagens na busca e tratamento do mal de Parkinson, uma necessidade existe para novos tratamentos para esta doença e outros distúrbios neurológicos com anomalias de movimento. A presente invenção procura executar esta necessidade e fornecer ainda vantagens relacionadas.

SUMÁRIO

De acordo com o precedente em um aspecto, a invenção fornece um método de tratamento da anormalidade de movimento associada com a patologia de um distúrbio de movimento neurológico. O método de acordo com este aspecto da invenção compreende administrar a um paciente em necessidade desta quantidade de um agente inibidor PDE7 eficaz para inibir a atividade enzimática de PDE7 em que tal inibição da atividade enzimática PDE7 é o modo terapêutico principal da ação do inibidor PDE7 no tratamento da anormalidade de movimento.

De acordo com o precedente em um aspecto, a invenção fornece um método de tratamento da anormalidade de movimento associado com a patologia de um distúrbio neurológico. O método de acordo com este aspecto da invenção compreende a administração a um paciente em necessidade desta quantidade de um agente inibidor PDE7 eficaz para inibir a atividade enzimática de PDE7 em que tal inibição da atividade enzimática PDE7 é o modo terapêutico principal da ação do inibidor PDE7 no tratamento da anormalidade de movimento.

Em um outro aspecto, a invenção fornece um método para a identificação de um agente que inibe a atividade PDE7 útil para o tratamento da anormalidade de movimento associado com a patologia de um distúrbio de movimento neurológico em um paciente mamífero em necessidade deste. O método deste aspecto da invenção compreende (a) determinar o IC50 para a inibição de PDE7A e/ou atividade PDE7B de cada uma das pluralidades dos agentes; (b) selecionar os agentes a partir da pluralidade dos agentes tendo um IC50 para a inibição de PDE7A e/ou atividade PDE7B de menos do que cerca de 1 μΜ; (c) determinar o IC50 para a inibição da atividade PDE4 dos agentes tendo um IC50 para a inibição da atividade PDE7 de menos do que cerca de 1 μΜ; (d) identificar os agentes úteis para o tratamento de um distúrbio de movimento pela seleção dos compostos tendo um IC50 Para a inibição da atividade PDE4 maior do que 10 vezes o menor do IC50 para a inibição da atividade PDE7A e o IC50 para a inibição da atividade PDE7B; e (e) avaliar a atividade dos compostos identificados em um ensaio modelo do distúrbio de movimento neurológico em que um agente que tem um IC50 para a inibição da atividade PDE7A e/ou PDE7B de menos do que cerca de 1 μΜ e um IC50 para a inibição da atividade PDE4 maior do que 10 vezes o menor do IC50 para a inibição da atividade PDE7A e o IC50 para a inibição da atividade PDE7B e é determinado ser eficaz para tratar pelo menos uma anormalidade de movimento em um ensaio modelo em um ensaio modelo, é indicativo de um agente inibidor PDE7 útil para o tratamento a anormalidade de movimento associado com a patologia de um distúrbio de movimento neurológico em um paciente mamífero.

Em um outro aspecto, a invenção fornece um método de tratamento de uma anormalidade de movimento associado com a patologia de um distúrbio de movimento neurológico. O método de acordo com este aspecto da invenção compreende administrar a um paciente em necessidade desta quantidade terapeuticamente eficaz de um composto químico que é um inibidor PDE7, o composto químico caracterizado em que: (i) o composto químico tem um IC50 para a inibição de PDE7A e/ou atividade PDE7B de 5 menos do que cerca de 1 μΜ; e (ii) o composto químico tem um IC50 para a inibição de PDE 3 maior do que 10 vezes o menor do IC5o para a inibição da atividade PDE7A e o IC5o para a inibição da atividade PDE7B.

Os métodos de vários aspectos da invenção são úteis para tratar a anormalidade de movimento associado com um distúrbio neurológico. 10 Os métodos de vários aspectos da invenção também são úteis para tratar um distúrbio de movimento neurológico. Os métodos de vários aspectos da invenção ainda são úteis para tratar a anormalidade de movimento associado com um distúrbio de movimento neurológico.

Em algumas formas de realização de vários aspectos da invenção, os métodos são úteis para tratar um distúrbio de movimento neurológico, a anormalidade de movimento associado com um distúrbio neurológico e/ou a anormalidade de movimento associado com um distúrbio de movimento neurológico, que é tratável com um agonista ou precursor receptor de dopamina de um agonista receptor de dopamina. Em algumas formas de realização, os métodos são úteis para tratar um distúrbio de movimento neurológico selecionados do grupo do mal de Parkinson, Parkinsonismo pós-encefalítico, Distonia responsiva à dopamina, síndrome Shy-Drager, distúrbio de movimento periódico do membro (PLMD), movimentos periódicos do membro no sono (PLMS), síndrome de Tourette e síndrome das pernas inquietas (RL S).

Em algumas formas de realização de vários aspectos da invenção, os métodos são úteis para tratar a anormalidade de movimento associados com a patologia de ura distúrbio de movimento neurológico e/ou a patologia de um distúrbio neurológico. Em algumas formas de realização de vários aspectos da invenção, os métodos são úteis para tratar a anormalidade de movimento associado com a patologia de um distúrbio de movimento neurológico que é tratável com um agonista ou precursor receptor de dopamina de um agonista receptor de dopamina. Em algumas formas de 5 realização, os métodos são úteis para tratar a anormalidade de movimento associado com a patologia de um distúrbio de movimento neurológico selecionados do grupo do mal de Parkinson, Parkinsonismo pós-encefalítico, Distonia responsiva à dopamina, síndrome Shy-Drager, distúrbio de movimento periódico do membro (PLMD), movimentos periódicos do 10 membro no sono (PLMS), síndrome de Tourette e síndrome das pernas inquietas (RL S).

DESCRIÇÃO DOS DESENHOS Os aspectos precedentes e muitas das vantagens contínuas desta invenção tomará mais rapidamente apreciado como o mesmo tomar-se 15 melhor entendido por referência à seguinte descrição detalhada, quando levado em conjunção com o desenho acompanhante. Em certas destas figuras, a importância estatística é indicada pela marcação em que "*" refere-se a um valor p de menos do que 0,05, "**" refere-se a um valor p de menos do que

0,01 e "***" refere-se a um valor p de menos do que 0,005. Nas figuras:

FIGURA 1 é um fluxograma ilustrando o caminho de

neurotransmissão no gânglio basal em um mensencéfalo de um paciente mamífero saudável, com caminhos de excitação rotulados "+" com setas com hachuras e com caminhos inibidores rotulados com setas abertas;

FIGURA 2A ilustra um modelo proposto do caminho ativado pelo receptor de dopamina em um paciente saudável, ilustrando a nova descoberta que o caminho de sinalização intracelular ativado pelo receptor dopamina é sub-regulado ou antagonizado por PDE7, que hidroliza cAMP por este 5 ’monofosfato (5'AMP);

FIGURA 2B ilustra um modelo proposto pelos presentes inventores do caminho ativado pelo receptor de dopamina em um paciente não tratado com mal de Parkinson (PD), mostrando que a quantidade reduzida do caminho de sinalização intracelular ativado do receptor dopamina ainda é sub-regulado ou antagonizado por PDE7, que hidroliza cAMP por este 5 5’monofosfato (5'AMP), conduzindo a níveis baixos de PKA ativado a ativação neuronal reduzido como comparado a um paciente saudável;

FIGURA 2C ilustra um modelo proposto pelos presentes inventores do caminho ativado pelo receptor de dopamina em um paciente com mal de Parkinson (PD) tratado com um agente inibidor PDE7, mostrando 10 que a presença de um agente inibidor PDE7 que é eficaz para inibir a atividade enzimática PDE7 bloqueando a hidrólise de cAMP eficazmente aumentando os níveis intracelulares cAMP, ativando a proteína cinase A ("PKA"), que modula a fosforilação de elementos a jusante nos caminhos de sinalização intracelular, levando a um aumento na ativação neuronal de 15 acordo com várias formas de realização dos métodos da invenção;

FIGURA 3A é um gráfico ilustrando a atividade inibidora PDE7A (IC5o), expressado como contagens por minuto ("CPM"), de um agente inibidor representativo PDE7 (OM69) útil nos métodos da invenção;

FIGURA 3B é um gráfico ilustrando a atividade inibidora PDE7B (IC50), expressado como CPM, de um agente inibidor representativo PDE7 (OM69) útil nos métodos da invenção;

FIGURA 4A é um gráfico ilustrando a atividade inibidora PDE7A (IC50), expressado como CPM, de um agente inibidor representativo PDE7 (OM955) útil nos métodos da invenção;

FIGURA 4B é um gráfico ilustrando a atividade inibidora

PDE7B (IC50) expressado como CPM, de um agente inibidor representativo PDE7 (OM955) útil nos métodos da invenção;

FIGURA 5A é um gráfico ilustrando a atividade inibidora PDE7A (IC50), expressado como CPM, de um agente inibidor representativo PDE7 (ΟΜ956) útil nos métodos da invenção;

FIGURA 5B é um gráfico ilustrando a atividade inibidora PDE7B (IC5o), expressado como CPM, de um agente inibidor representativo PDE7 (OM956) útil nos métodos da invenção;

FIGURA 6A é um gráfico ilustrando a atividade inibidora

PDE7A (IC50), expressado como CPM, de um agente inibidor representativo PDE7 (QM056) útil nos métodos da invenção;

FIGURA 6B é um gráfico ilustrando a atividade inibidora PDE7B (IC50), expressado como CPM, de um agente inibidor representativo PDE7 (OM056) útil nos métodos da invenção;

FIGURA 7 é um gráfico comparando a concentração (ng/g) no tecido do cérebro e plasma durante o tempo de um inibidor representativo PDE7 (OM69) útil no método da invenção;

FIGURA 8 é um diagrama de fluxo ilustrando um experimento 15 realizado em um modelo de camundongo metilfeniltetraidropiridina (“MPTP”) do mal de Parkinson para avaliar inicialmente um agente inibidor representativo PDE7 (OM69) útil nos métodos da invenção, administrado sozinho ou em combinação com L-dopa, em comparação com o efeito de Ldopa sozinho, como descrito no Exemplo 5;

FIGURA 9 é um gráfico bar ilustrando o teste de comprimento

do avanço da pata pintada no modelo de camundongo MPTP seguindo o protocolo ilustrado na FIGURA 8, demonstrando que um agente inibidor representativo PDE7 (OM69) útil no método da invenção aumenta o comprimento do avanço em camundongos tratados por MPTP, quando 25 administrado sozinho ou em combinação com L-dopa e compara a efetividade deste inibidor por L-dopa sozinho a um controle salino, como descrito no Exemplo 5;

FIGURA 10 é um gráfico bar ilustrando uma sub-série dos dados mostrados na FIGURA 9, comparando o efeito no comprimento do avanço no modelo de camundongo MPTP de várias dosagens de um agente inibidor representativo PDE7 (OM69 (composto 1)) útil no método da invenção, várias dosagens de L-dopa e combinações de OM69 e L-dopa, como descrito no Exemplo 5;

FIGURA 11 é um gráfico bar ilustrando uma sub-série dos

dados mostrados na FIGURA 9, comparando o efeito no comprimento do avanço no modelo de camundongo MPTP de um inibidor representativo PDE7 (OM69) útil no método da invenção, L-dopa e combinações destes, em comparação aos camundongos de controle salino (isto é, não tratado por MPTP), como descrito no Exemplo 5;

FIGURA 12 é um diagrama de fluxo ilustrando um experimento realizado no modelo de camundongo MPTP do mal de Parkinson para confirmar que o inibidor representativo PDE7 (OM69) aumenta o comprimento do avanço em camundongos tratados por MPTP, como descrito no Exemplo 6;

FIGURA 13A é um gráfico bar ilustrando que o dimetilacetamida de controle de veículo: polietileno glicol: ácido metanossulfônico (DMA:PEG:MSA) não altera o comprimento do avanço em camundongos tratados por MPTP quando administrados sozinho, como descrito no Exemplo 7;

FIGURA 13B é um gráfico bar ilustrando que o ácido tartárico de controle de veículo (TA) não altera o comprimento do avanço em camundongos tratados por MPTP quando administrados sozinho, como descrito no Exemplo 7;

FIGURA 14 é um gráfico bar ilustrando o teste de

comprimento do avanço da pata pintada no modelo de camundongo MPTP demonstrando que o agente inibidor representativo PDE7 OM955 (composto

2) aumenta o comprimento do avanço em camundongos MPTP, com recuperação total do comprimento do avanço de linha de base a 20 minutos após a dosagem de 0,5 mg/kg, como descrito no Exemplo 7;

FIGURA 15A é um gráfico bar ilustrando o teste de comprimento do avanço da pata pintada no modelo de camundongo MPTP demonstrando que 1 mg/kg de L-dopa não aumenta o comprimento do avanço em camundongos MPTP em um nível significante a 20 minutos após a administração, como descrito no Exemplo 7;

FIGURA 15B é um gráfico bar ilustrando o teste de comprimento do avanço da pata pintada no modelo de camundongo MPTP, demonstrando que 0,1 mg/kg de OM955 (composto 2) não aumenta comprimento do avanço em camundongos MPTP em um nível significante a minutos após a administração, como descrito no Exemplo 7;

FIGURA 15C é um gráfico bar ilustrando o teste de comprimento do avanço da pata pintada no modelo de camundongo MPTP, demonstrando os camundongos administrados a combinação de 0,1 mg/kg de 15 OM955 (composto 2) e 1 mg/kg L-dopa mostra a recuperação total do comprimento do avanço em camundongos tratados por MPTP em um nível significante a 20 minutos após a administração, deste demonstrando resultados sinergísticos da combinação, como descrito no Exemplo 7;

FIGURA 16 é um gráfico bar ilustrando o teste de comprimento do avanço da pata pintada no modelo de camundongo MPTP, demonstrando que o agente inibidor representativo PDE7 OM956 (composto

3) aumenta o comprimento do avanço em camundongos tratados por MPTP, com recuperação total de comprimento do avanço em linha de base a 20 minutos após a dosagem de 0,5 mg/kg, como descrito no Exemplo 7;

FIGURA 17 é um gráfico bar ilustrando o teste de

comprimento do avanço da pata pintada no modelo de camundongo MPTP, demonstrando que o agente inibidor representativo PDE7 OM056 (composto

4) aumenta o comprimento do avanço em camundongos tratados por MPTP, com recuperação total de comprimento do avanço em linha de base a 20 minutos após a dosagem de 0,05 mg/kg, como descrito no Exemplo 7; e

FIGURA 18 é um gráfico bar ilustrando o teste de comprimento do avanço da pata pintada no modelo de camundongo MPTP, demonstrando que o agente inibidor representativo PDE7 OM69 (composto 1) 5 aumenta o comprimento do avanço em camundongos tratados por MPTP em uma maneira dependente de dosagem e ainda demonstrando que a combinação de OM69 e L-dopa fornece a maior do que aditivo (isto é, sinergístico) aumenta no comprimento do avanço em camundongos tratados por MPTP, como descrito no Exemplo 6.

DESCRIÇÃO DETALHADA

A presente invenção é baseada na descoberta surpreendente pelos presentes inventores que os inibidores seletivos do fosfodiesterase de nucleotídeo cíclico de tipo 7 (PDE7) causa um melhoramento impressionante na função motora no modelo do camundongo 1-metil, 4-fenil, 1,2,3,6- 15 tetraidropiridina (MPTP) do mal de Parkinson (PD). Através do uso do modelo animal MPTP, os presentes inventores tem mostrado que a administração dos agentes inibidores seletivos PDE7 em camundongos lesionado por MPTP é eficaz para restaurar o comprimento do avanço nestes animais em uma maneira comparável para o tratamento com L-dopa, mas em 20 uma dosagem surpreendentemente baixa em comparação à dosagem de Ldopa requerida para atingir um nível equivalente de resposta. Além disso, os inventores tem demonstrado que a combinação das dosagens sub-ótimas de Ldopa e um inibidor seletivo PDE7, quando administrado junto, fornece um maior efeito do que o aditivo (isto é, sinergístico), novamente restaurando o 25 comprimento do avanço em camundongos lesionados por MPTP a valores normais.

I. Definições

A não ser especificamente definido neste, todos os termos usados neste tem o mesmo significado como deve ser entendido por aqueles com habilidade comum na técnica da presente invenção. As seguintes definições são fornecidas a fim de fornecer claramente com respeito aos termos como são usados na especificação e reivindicações para descrever a presente invenção.

Como usado neste, o termo "distúrbio do movimento

neurológico" refere-se a um distúrbio de movimento caracterizado por uma deficiência ou defeito na sinalização de dopamina que é clinicamente manifestado por um ou mais anomalias de movimento associado com a patologia do distúrbio do movimento, tal como movimentos involuntários 10 anormais, tremor em repouso, alterações no tônus muscular, dificuldade na iniciação do movimento (de movimento lento) e/ou perturbações na estabilidade postural.

Como usado neste, o termo "mal de Parkinson" refere-se a uma síndrome clínica marcada por quatro sinais cardeais: (1) tremor em repouso; (2) rigidez, (3) de movimento lento e (4) deficiência de reflexos posturais.

Como usado neste, o termo "Parkinsonismo pós-encefalítico" refere-se ao Parkinsonismo que ocorre após e presumidamente como um resultado de encefalite.

Como usado neste, o termo "Parkinsonismo" refere-se a

qualquer um grupo de distúrbios neurológicos similares o mal de Parkinson, marcado por quatro sinais cardeais do mal de Parkinson: tremor em repouso, muscular rigidez, bradicinesia e deficiência em reflexos posturais.

Como usado neste, o termo "de movimento lento" ou "acinesia" refere-se a uma deficiência de movimento espontâneo ou automático.

Como usado neste, o termo "hipercinersia" ou "discinesia" refere-se ao movimento involuntário anormal ou excessivo.

Como usado neste, o termo "tremor" refere-se aos movimentos osciladores relativamente rítmicos, que podem, por exemplo, resultam de contrações que alternam de grupos dos músculos opositores por exemplo, tremor de Parkinson).

Como usado neste, o termo "distonia" refere-se aos movimentos involuntários com contrações sustentadas na extremidade do movimento.

Como usado neste, o termo "distonia responsiva à dopamina" refere-se a um distúrbio de movimento neurológico em que as contrações do músculo sustentado causam torção e movimentos repetitivos ou posturas 10 anormais e que podem ser aliviados pelos agentes que aumentam o nível de dopamina ou intensificam a sinalização através dos caminhos dopaminérgicos. Um tal distúrbio pode ser associado com mal de Parkinson, Parkinsonismo juvenil, paralisia supranuclear progressiva, degeneração gangliônica basal cortical, certos tipos de atrofia de sistema múltiplo, ou 15 Parkinsonismo-distonia recessive ligada por DYT3 X.

Como usado neste, o termo "movimento periódico do membro no sono " (PLMS) refere-se a uma condição em que as pernas dos pacientes move-se ou contraem-se involuntariamente durante o sono. Se estes movimentos resultam na perturbação do sono, esta síndrome é referida como distúrbio de movimento periódico do membro (PLMD).

Como usado neste, o termo "síndrome das pernas inquietas" (RLS) refere-se a um distúrbio neurológico de patofisiologia incerta que é caracterizada pelas sensações de dor, queimação, formigamento, ou arrepio das pernas que ocorrem especialmente a noite, usualmente quando deitam 25 (como antes do sono) e causa um desejo forte de mover as pernas que é frequentemente acompanhado pela dificuldade em deitar e manter o sono e pela contração involuntária das pernas durante o sono.

Como usado neste, o termo "síndrome Shy-Drager" refere-se a um distúrbio neurológico degenerativo caracterizado pela hipotensão ortoestática, disfunção autonômica, disfunção da bexiga e Déficits semelhantes à Parkinson em movimento.

Como usado neste, o termo "agente dopaminérgico" refere-se a um agente que tem funções de intensificar ou substituir os efeitos mediados 5 pela dopamina no sistema nervoso central, incluindo dopamina (se um método clinicamente eficaz de liberação deve ser desenvolvido), precursores de dopamina, tal como L-dopa, co-fatores de dopamina, inibidores de enzima que metabolizam dopamina, outros agonistas receptores de dopamina e compostos precursores que são metabolicamente convertidos a um agonista 10 receptor de dopamina, bem como inibidores de absorção de dopamina.

Como usado neste, o termo "agonista receptor de dopamina" refere-se a qualquer molécula que causa a ativação de um ou mais dos subtipos da família de proteína de receptor de dopamina.

Como usado neste, o termo " alvo molecular conhecido por ser envolvido com a patologia do mal de Parkinson" inclui caquechol-Ometiltransferase (COMT), monamina oxidase B (MAO-B), transportadores de dopamina (DAT), hidroxilase de tirosina, receptores de dopamina, receptores de A2a de adenosina e receptores de gabapentina.

Como usado neste, o termo "alvo molecular conhecido por ser 20 associado com o caminho de sinalização de dopamina" inclui caquechol-Ometiltransferase (COMT), monamine oxidase B (MAO-B), transportadores de dopamina (DAT), hidroxilase de tirosina, dopa descarboxilase, receptores de dopamina, receptores N-metil D-aspartato (NMDA), receptores acetilcolina muscarínico, receptores de ácido butírico amino gama (GABA), adenilila 25 ciclase, proteína cinase A (PKA), dopamina e fosfoproteína regulada por AMP cíclica de peso molecular 32.000 (DARPP32) e proteína fosfatase-1.

Como usado neste, o termo "tratamento" inclui terapia sintomática para reduzir, aliviar, ou mascarar os sintomas da doença ou distúrbio, bem como terapia para a prevenção, ameaça, interrupção, ou inversão da progressão da gravidade da condição ou sintomas sendo tratados. Como tal, o termo "tratamento" inclui ambos tratamentos terapêuticos médicos tanto de uma condição estabelecida ou sintomas e/ou quanto de administração profilática, como apropriado.

Como usado neste, o termo "tratamento de uma anormalidade

de movimento associado com a patologia de um distúrbio de movimento neurológico" refere-se a inversão, alívio, melhoramento ou inibição de uma ou mais anomalias de movimento associadas com o distúrbio do movimento neurológico.

Como usado neste, o termo "tratamento de um distúrbio de

movimento neurológico" inclui:

(1) tratar a anormalidade de movimento associado com a patologia de um distúrbio de movimento neurológico; e/ou (2) tratar um distúrbio de movimento neurológico.

Como usado neste, o termo "tratar um distúrbio neurológico"

inclui: (1) tratar a anormalidade de movimento associado com a patologia de um distúrbio neurológico; e/ou (2) tratar um distúrbio neurológico.

Como usado neste, o termo "tratamento" também abrange, dependendo da condição do paciente em necessidade deste, prevenindo o 20 distúrbio do movimento neurológico ou prevenindo a anormalidade de movimento associado com a patologia do distúrbio do movimento neurológico ou prevenindo o distúrbio neurológico ou prevenindo a anormalidade de movimento associado com a patologia do distúrbio neurológico, incluindo o início da anormalidade de movimento ou de 25 quaisquer sintomas associados com este, bem como redução da gravidade da anormalidade de movimento, ou prevenção de uma repetição da anormalidade de movimento.

Como usado neste o termo "PDE7" é usado genericamente por referir todos os produtos de tradução codificados pelos transcritos de um ou ambos destes dois genes (PDE7A e/ou PDE7B).

Como usado neste, o termo "agente inibidor PDE7 " refere-se a um agente, tal como um composto químico, um peptídeo, ou uma molécula de ácido nucléico, que diretamente ou indiretamente inibe ou bloqueia a 5 atividade de fosfodiesterase de PDE7A, PDE7B, ou PDE7A e PDE7B. Em algumas casos, o agente podem ligar-se ou interagir diretamente com a proteína PDE7. Um agente que liga-se ao PDE7 pode atuar para inibir ou bloquear a ativação PDE7 por quaisquer meios adequados, tal como pela inibição da ligação de cAMP ou ligando o substrato com PDE7. Em outros 10 casos, o agente inibidor PDE7 pode inibir a atividade PDE7 indiretamente, tal como pela diminuição da expressão da proteína PDE7.

Como usado neste, o termo "indivíduo mamífero" inclui todos os mamíferos, incluindo sem limitação humanos, primatas não humanos, cachorros, gatos, cavalos, ovelhas, cabras, vacas, coelhos, porcos e roedores.

II. Uso dos agentes inibidores PDE7 para tratar a anormalidade

de movimento associado com a patologia de um distúrbio de movimento neurológico

O sistema dopaminérgico é fortemente implicado na regulação da atividade locomotora e movimento no geral. Ver, por exemplo, Tran, A.H. et al., PNAS 102:2117-2122, 2005; Tran, A.H. et al., PNAS 99:8986-8991, 2002. Por exemplo evidências mostram que uma disfunção dopaminérgicas desempenham um papel crítico no mal de Parkinson, Parkinsonismo,

tl It

síndrome das pernas inquietas ( RLS ), distúrbio de movimento periódico do membro (PLMD), movimento periódico do membro no sono ("PLMS") e 25 outros distúrbios de movimento. No mal de Parkinson existe uma deficiência de dopamina no estriado, que resulta de uma perda de neurônios pigmentados na substantia nigra e locus ceruleus com perda correspondente de seus neurotransmissores de dopamina e norepinefrina. No parkinsonismo pósencefálico, o mesencéfalo é afetado, com perda de neurônios substantia nigra. Wyngaarden e Smith, Cecil Textbook of Medicine, 17 Ed. "Neurological e Behavioral Disease: Seção 5: The Extrapyramidal Distúrbios: Parkinsonismo," 1985.

É considerado que a depleção relativamente de dopamina seletiva no estriado e outros gânglios basais resultam em descarga desordenada e aumentada e sincronização em áreas motoras dos arcos motores de gânglios-talamocorticol basais. Wichmann e Delong, Neuropsychopharmacology: The Fifth Generation of Progress, Chapter 122, "Neurocircuitry of Parkinson’s Disease," 2002.

O gânglio basal serve como um maior absorção ao sistema motor do trato piramidal. O gânglio basal compreende cinco pares nucléicos incluindo: o núcleo caudado, núcleo putamen, pallidum, subtalâmico e substantia nigra. O núcleo subtalâmico é no diencéfalo. O substantia nigra é localizada no mesencéfalo. O núcleo caudado, putamen e pallidum vivem dentro dos hemisférios cerebrais e são coletivamente referidos como o corpo estriado. O caudado e putamen são considerados coletivamente como o estriado, que serve como o local principal de absorção neural no gânglio basal. O estriado recebe aferentes de todas as partes do córtex cerebral e do mediano central nucleoso de tálamo. A maior produção do estriado é o pallidum e a zona da porção reticulada da substania nigra. A parte dorsal da substantia nigra manda eferentes ao estriado (do caminho nigroestriatal dopaminérgicos) e a parte ventral da substantia nigra recebe fibras do estriado.

A FIGURA 1 ilustra o caminho de neurotransmissão no gânglio basal no mensencéfalo de um paciente mamífero saudável com caminhos de excitação rotulados "+" com setas com hachuras e com caminhos inibidores rotulados com setas abertas. Como mostrado na FIGURA 1, os caminhos neurais conectam a produção dos caminhos do gânglio basal, um grupo do ácido nucléico funcionalmente relacionado subcortical que inclui a porção externa do globulus pallidus ("GPe"), a porção interna do globulus pallidus ("GPi"), a substantia nigra pars compacta ("SNc") e a substantia nigra para reticulata ("SNr") ao estriado. A FIGURA 1 também ilustra os caminhos que conectam os núcleos subtalâmicos ("STN") ao GPe, o GPi e o SNr. Como 5 mostrado na FIGURA 1, em um paciente saudável, a Dopamina ("DA") a partir das células que produzem dopamina no SNc manda um sinal de excitação aos receptores de dopamina Dl ("Dl"), que, uma vez ativada, manda um sinal de inibição ao SNr e um sinal de inibição ao GPi. Como ainda mostrado na FIGURA I, DA a partir das células que produzem 10 dopamina no SNc também manda um sinal inibidor aos receptores de dopamina D2 ("D2"), que inibe os receptores D2 a partir da expedição de um sinal inibidor ao GPe.

A característica patológica proeminente do mal de Parkinson ("PD") é a degeneração de neurônios dopaminérgicos na substantia nigra pars 15 compacta (SNc) que projeta ao estriado. Forno, L.S., J. Neuropathol Exp Neurol 55:259-272, 1996. Nos estágios precoces do mal de Parkinson, foi determinado que a depleção de dopamina é maior no território sensorimotor do estriado, consistente com a manifestação precoce da disfunção motora. Kish, S.J. et al., N. Engl. J. Med. 318:876-880, 1988.

Nas doenças PD e Parkinsonismo, as células que produzem

dopamina no SNc são perdidas, conduzindo a um déficit na sinalização dopaminérgica ao estriado. Por causa de DA usualmente ativa a produção estriatal inibidora ao SNr por intermédio de receptores Dl em um paciente saudável (como mostrado na FIGURA 1), este caminho é atenuado em PD. 25 De modo contrário, por causa de DA inibe a produção estriatal inibidora ao GPe por intermédio de receptores D2 em um paciente saudável (como mostrado na FIGURA 1), este caminho é aumentado em PD. Portanto, um déficit na sinalização dopaminérgica ao estriado em PD tem o efeito de rede de causar a inibição da rede do caminho excitatório a partir do tálamo ao córtex.

O monofosfato de adenosina cíclica (cAMP) é um segundo mensageiro que media a resposta biológica das células a uma ampla faixa do estímulo extracelular. Quando o agonista apropriado liga-se a um receptor de 5 superfície celular específico, adenilila ciclase é ativada para converter trifosfato de adenosina (ATP) ao cAMP. E teorizado que as ações induzidas por agonistas de cAMP dentro da célula são predominantemente mediados pela ação da proteína dependente de cAMP. As ações intracelulares de cAMP são terminadas pelo transporte da produção de nucleotídeo da célula, ou pela 10 clivagem enzimática por fosfodiesterase de nucleotídeo cíclico (PDEs), que lidroliza a ligação 3-fosfodiéster para formar monofosfato de 5'-adenosina (5'-AMP), que é um metabólito inativo. Portanto, a família da enzima intracelular de PDEs regula o nível de cAMP nas células.

A FIGURA 2A ilustra um modelo proposto do caminho ativado pelo receptor de dopamina em um paciente saudável. Como mostrado na FIGURA 2A, em pacientes saudáveis a Dopamina (DA) (descrita como três setas) que é produzida pelos neurônios dopaminérgicos na substantia nigra pars compacta (SNc), liga-se e ativa o receptor de Dopamina Dl que leva à ativação de adenilila ciclase e níveis cAMP aumentados. A proteína cinase A ativada por cAMP ("PKA"), que modula a fosforilação de elementos a jusante nos caminhos de sinalização intracelular, conduzindo a ativação do neurônio. Como mostrado na FIGURA 2A, é teorizado que o caminho de sinalização intracelular ativado pelo receptor dopamina é sub-regulado ou antagonizado por PDE7, que hidroliza cAMP por este 5’monofosfato (5ΆΜΡ).

A FIGURA 2B ilustra um modelo proposto do caminho ativado pelo receptor de dopamina em um paciente não tratado com mal de Parkinson (PD). Como mostrado na FIGURA 2B, no paciente PD uma quantidade reduzida de dopamina (DA) (descrito como uma seta em comparação a três setas no paciente saudável) é disponível pela ligação ao receptor dopamina (Dl) por exemplo, como descrito com referência a FIGURA 1, as células que produzem dopamina no SNc estão perdidas, levando um déficit na sinalização dopaminérgica ao estriado. O nível reduzido de DA liga-se e ativa o receptor de Dopamina Dl a um grau menor no paciente PD, que leva a um mínimo de ativação de adenilila ciclase e um aumento atenuado nos níveis de cAMP. Como um resultado, o grau de ativação da proteína cinase A ("PKA") é menor, que por sua vez leva a menor fosforilação de elementos a jusante nos caminhos de sinalização intracelular e um grau inferior de ativação neuronal. Como mostrado na FIGURA 2B, é teorizado que a quantidade reduzida do caminho de sinalização intracelular ativado do receptor dopamina ainda é sub-regulado ou antagonizado por PDE7, que hidroliza cAMP por este 5’monofosfato (5ΆΜΡ), conduzindo a níveis baixos de PKA ativado a ativação neuronal reduzido como comparado a um paciente saudável.

A FIGURA 2C ilustra um modelo proposto do caminho ativado pelo receptor de dopamina em um paciente com mal de Parkinson (PD) tratado com um agente inibidor PDE7. Como mostrado na FIGURA 2C, no paciente PD uma quantidade reduzida de dopamina (DA) (descrito como 20 uma seta em comparação a três setas no paciente saudável) é disponível pela ligação ao receptor dopamina (Dl) por exemplo, como descrito com referência a FIGURA 1, as células que produzem dopamina no SNc estão perdidas, conduzindo a um déficit na sinalização dopaminérgica ao estriado. O nível reduzido de DA liga-se e ativa o receptor de Dopamina Dla um grau 25 menor no paciente PD, que conduz a ativação mínima de adenilila ciclase e um aumento atenuado nos níveis cAMP. Entretanto, como ainda mostrado na FIGURA 2C, a presença de um agente inibidor PDE7 que é eficaz para inibir a atividade enzimática PDE7 bloqueando a hidrólise de cAMP, por meio deste aumentando os níveis cAMP intracelulares, permitindo um grau mais normal de ativação da proteína cinase A ("PKA"), que modula a fosforilação de elementos a jusante nos caminhos de sinalização intracelular, levando a um aumento na ativação neuronal.

No suporte do modelo de sinalização de dopamina mostrado nas FIGURAS 2A a 2C, os presentes inventores tem descobertos que a administração de um agente inibidor PDE7 que inibe a atividade enzimática de PDE7 resulta no melhoramento de uma anormalidade de movimento associado com a patologia de um distúrbio de movimento, tal como mal de Parkinson. Os dados apresentados neste demonstraram que os inibidores PDE7 são eficazes para restaurar o movimento do membro, como medido pelo comprimento do avanço de pata, em um camundongo tratado por MPTP e que os efeitos sinergísticos são observados quando os inibidores PDE7 são combinados com L-dopa no modelo de camundongo MPTP. Com base na descoberta surpreendente feita pelos presentes inventores, é acreditado que PDE7 tem um papel na sinalização pós-sináptica e dopamina no cérebro, especificamente em áreas conhecidas por ser associadas com a locomoção.

Além disso o mal de Parkinson, função anormal do gânglio basal também foi implicada em uma variedade de distúrbios neurológicos com anomalias de movimento. Tais distúrbios neurológicos incluem síndrome 20 das pernas inquietas (Hening, W. et al., Sleep 22:970-999, 1999). Portanto, com base nos estudos descritos neste, é acreditado que um agente inibidor PDE7 terá uma efeito terapêutico em tal distúrbios neurológico de movimento.

Portanto, enquanto não desejar ser ligado pela teoria, é 25 acreditado que os agentes inibidores PDE7 podem ser úteis para tratar distúrbios neurológicos caracterizados pela função anormal do gânglio basal, tal como uma deficiência na sinalização do receptor dopamina, por exemplo, mal de Parkinson, Parkinsonismo pós-encefalítico, Parkinsonismo induzido por medicamento, Distonia responsiva à dopamina, síndrome Shy-Drager, distúrbio de movimento periódico do membro (PLMD), movimentos periódicos do membro no sono (PLMS) e síndrome das pernas inquietas (RLS) pela inibição da atividade PDE7 e por meio deste prevenir a degradação de cAMP no gânglio basal. É portanto acreditado que os agentes 5 inibidores PDE7 podem ser úteis para tratar estes e outros distúrbios neurológicos de movimento e distúrbios neurológicos caracterizados por anomalias de movimento que são correntemente tratados com L-dopa, outros agonistas de dopamina ou precursores ou outros agente dopaminérgicos.

Em algumas aspectos da invenção, os inibidores PDE7 são 10 usados para tratar a anormalidade de movimento associado com a patologia de um distúrbio neurológico, se ou não tal distúrbio é associado com defeito de sinalização da dopamina da deficiência em que tal inibição da atividade enzimática PDE7 é o modo terapêutico principal da ação do inibidor PDE7 no tratamento da anormalidade de movimento.

Em algumas formas de realização, a invenção fornece métodos

de tratamento de uma anormalidade de movimento associado com a patologia de um distúrbio de movimento neurológico que compreende administrar a um paciente em necessidade desta quantidade de um agente inibidor PDE7 eficaz para inibir a atividade enzimática de PDE7 em que tal inibição da atividade 20 enzimática PDE7 é o modo terapêutico principal da ação do inibidor PDE7 no tratamento da anormalidade de movimento. Em algumas formas de realização, a invenção fornece métodos de melhoramento dos sintomas de um distúrbio de movimento, incluindo mas não limitando a um distúrbio do caminho de sinalização intracelular do receptor dopamina, que compreende 25 administrar um agente inibidor PDE7 que inibe a atividade enzimática de PDE7. Em algumas formas de realização, o distúrbio do movimento neurológico é tratável com um agonista ou precursor receptor de dopamina de um agonista receptor de dopamina. Mal de Parkinson

O parkinsonismo é uma síndrome clínica que consiste de quatro sinais cardeais: (1) tremor em repouso; (2) rigidez, (3) de movimento lento e (4) deficiência de reflexos posturais.

5 Dos cálculos de bradicinesia para a maioria dos sintomas e

sinais Parkinsonianos. Parkinsonismo pode ser categorizado nos seguintes grupos etiológicos: o distúrbio primário referido como mal de Parkinson, secundário, Parkinsonismo adquirido (devido à exposições a medicamentos ou toxinas, acidentes vasculares cerebrais prévios, ou encefalite) e síndrome 10 do "Parkinsonismo-plus" (que diminui movimentos oculares, hipotensão ortoestática, ataxia cerebelar ou demência em um Paciente parkisoniano).

Lesões de substantia nigra com perda resultante de dopamina no estriado resultam na síndrome bradicinética de Parkinsonismo. No mal de Parkinson, existe uma perda de neurônios pigmentados na substantia nigra e local ceroloso com perda subsequente de seus neurotransmissores de dopamina e norepinefrina.

Os modelos de animais de PD confiam severamente na descoberta fortuita que MPTP sistemicamente administrado (l-metil-4-fenil1,2,3,6-tetraidropiridina) causam morte da célula neuronal específica na 20 substantia nigra de humanos, macacos e roedores (Jakowec, M.W. et al., Comp. Med. 54(5):497-513, 2004). A origem da morte celular é recordativa do que se vê em pacientes PD no período da autópsia. Comumente usado os modelos animais para o mal de Parkinson incluem um modelo MPTP de macaco, um modelo 6-OHDA de rato e um modelo MPTP de camundongo. 25 Como descrito nos exemplos 5 a 7 neste, o modelo de camundongo lesionado por MPTP de PD pode ser usado para avaliar a eficácia dos agentes inibidores PDE7 úteis no método da invenção para reduzir ou diminuir as alterações induzidas por MPTP em seu comprimento do avanço, comprimento do passo na grade e falhas da pata na grade (Tillerson, J.L. et al., Exp. Neurol. 178(1):80-90, 2002).

Como demonstrados nos exemplos 5 a 7, os agentes inibidores PDE7 são eficazes para restaurar os movimentos dos membros em um camundongo tratado por MPTP. Embora os métodos correntes para o tratamento do mal de Parkinson no geral envolve o tratamento com agonistas receptores de dopamina, os métodos da presente invenção são direcionados a inibição da atividade fosfodiesterase PDE7 em um paciente com sinalização de dopamina diminuída a fim de aumentar os níveis cAMP, por meio deste • r conduzindo a atividade PKA aumentada. E teorizado que os inibidores de PDE7 podem ter vantagens no medicamento PD corrente ou reduzir os níveis requeridos de tais medicamentos. Por exemplo, o uso crônico de L-dopa, o mais comum medicamento PD, causam diversas discinesias (Bezard, E. et al., Nat. Rev. Neurosci. 2(8):577-88, 2001). Qualquer medicamento PD alternativo por L-dopa pode ajudar neste sério efeito colateral.

Como ainda demonstrado nos exemplos 5 a 7, a combinação

dos agentes inibidores PDE7 e L-dopa, um agonista receptor de dopamina, fornece um efeito sinergístico, conduzindo ainda a um melhoramento maior mo movimento periódico em um camundongo tratado por MPTP. Um medicamento usado em conjunção com L-dopa que permite à ameaça da 20 dosagem de L-dopa, tal como um agente inibidor PDE7, pode atrasar o início da discinesia. Além disso, por causa dos níveis aumentados de dopamina resultando de terapia de L-dopa pode aumentar o dano oxidativo a neurônios compactos no nível de substância nigra, um agente tal como um inibidor PDE7 que permite à ameaça da dosagem de L-dopa pode atrasar a progressão 25 da doença. Consequentemente, os inibidores PDE7 da presente invenção podem ser administrados em conjunção com L-dopa, outros agonistas receptores de dopamina, precursores agonistas receptores de dopamina ou outros agentes dopaminérgicos, dado em uma forma de dosagem de combinação, dando correntemente (isto é, ao mesmo tempo), ou dando seqüencialmente por exemplo, em rotação).

Síndrome das pernas inquietas (RLS)

A síndrome das pernas inquietas (RLS) é uma condição neurológica comum que também envolve sistemas de dopamina. RLS é um distúrbio motor sensorial para o qual o maior critério obrigatório para a diagnose são: (1) um desejo de mover as pernas, usualmente associado por uma sensação desconfortável nos membros, (2) uma piora dos sintomas durante os períodos de repouso e inatividade, (3) um melhoramento dos sintomas pelo movimento; e (4) uma aparência ou piora de sintomas durante o anoitecer ou noite. Allen, R.P. et al., Sleep Med 4:101-119, 2003. O critério sustentador, que são comuns mas não essenciais para diagnose RLS, inclui a presença de movimentos periódicos dos membros no sono (PLMS), que são movimentos involuntários dos membros inferiores durante o sono, frequentemente que ocorre em seqüências de pelo menos 4, com um intervalo de inter-movimento de 5 a 90 segundos. (Baier et al., J. Neurological Sciences 198:71-77, 2002). Outro critério sustentador para a diagnose de RLS são responsáveis pelas dosagens baixas dos tratamentos dopaminérgicos. Allen, R.P. et al., supra. RLS e PLMS são altamente representados em pacientes afetados pelo mal de Parkinson e outras formas de Parkinsonismo. Poewe, W. et al., Neurology 63:S12-S16, 2004.

Foi determinado que o mecanismo patogênico de RLS é caracterizado por uma disfunção neurológica do sistema dopaminérgico. O sistema dopaminérgico foi implicado em RLS pelos estudos de imagem funcional (Turjanski, N. et al., Neurology 52:932-37, 1999) e pela forte 25 eficácia do tratamento agonista de dopamina para humanos RLS e PLMS (Montplaisier, J. et al., Neurology 52:938-43, 1999; Trenkwalder, C. et al., Neurology 62:1391-97, 2004; e Walters, A.S. et al., Mov. Disord. 19:1414- 23, 2004). Por exemplo, estudos clínicos com os seguintes medicamentos usados para tratar o mal de Parkinson também tem eficácia por agonistas RLS: (I) DA: Sinemet™ (L-dopa, carbidopa), Stalevo™ (L-dopa, carbidopa entacapone), Permax (pergolide), Parlodel (bromocriptina); (2) agonistas D2,D3,D4: Mirapex™ (pramipexol), Requip™ (ropinirol); (3) antagonistas

T*\ Λ rPX Λ

mACh: Cogentin (benztropina), Artane (triexifenidila); (4) inibidores 5 MAO: Eldepryl™ (selegilina) e (5) inibidor COMT Tasmar™ (tolcapona). Ver, por exemplo, Hentz J.G. et al., Mov Disord. 15(2): 324-7 (2000); Walters A.S. et al., Ann Neurol 24(3):455-8 (1988); Trenkwalder C. et al., Neurology 62(8): 1391-7 (2004); Polo O. et al., Clin Neuropharmacol 31 (1 ):61 (2007); Kohnen R. Sleep 22(8): 1073-81 (1999); e Shapiro C. Mov 10 Disord 17(2): 398-401 (2002).

O modelo de camundongo MPTP descrito neste é amplamente conhecido como um modelo do mal de Parkinson, mas este também pode representar distúrbios que são caracterizados pela insuficiência de dopamina ou aqueles que respondem aos agonistas receptores de dopamina por 15 exemplo, síndrome das pernas inquietas. Portanto, a resposta observada nos animais tratados por MPTP, como demonstrado nos exemplos 5 a 7 supra, podem ser razoável considerado ser transferível à síndrome das pernas inquietas e outros distúrbios de movimento caracterizado pela insuficiência de dopamina, tal como distonia responsiva à dopamina, síndrome Shy-Drager, 20 movimentos periódicos do membro no sono (PLMS) e síndrome de Tourette.

Distúrbio de movimento periódico do membro (PLMD)Zmovimentos periódicos do membro no sono (PLMS)

O distúrbio de movimento periódico do membro (PLMD) é uma síndrome caracterizada pela pertubação do sono secundário ao 25 movimento periódico do membro durante o sono (PLMS). Enquanto comumente associado com RLS (Manconi M. et al., Sleep Med. 8(5):491-7 (2007); Haba-Rubio J. et al., Neurophysiol Clin. 33(4): 180-4 (2003)), PLMD também pode ser observado no ajuste do dano da medula espinhal (De Mello M.T. et al., Spinal Cord. 42(4):218-21 (2004)), narcoplepsia (Homyak M. et al., Sleep Med Rev. 10(3): 169-77 (2006)), outros distúrbios do sono (Horyak, 2006 supra, Saletu M. et al., Hum Psychopharmacol. 16(2): 177-187 (2001)), ou uremia (Walker S.L. et al., Sleep 19(3):214-8 (1996)).

PLMD pode ocorrer na ausência de uma patologia primária identificável (Vetrugno R. et al., Neurol Sei. 28 Suppl 1 :S9-S 14 (2007), Horyak, 2006 supra). Em todos estes ajustes, uma disfunção subjacente na sinalização de dopamina é indicada pelo melhoramento clínico observado com L-dopa (Wolkove N. et al., CMAJ. 176(10): 1449-54 (2007), De Mello M.T. et al. 2004, supra) ou agonistas dopaminérgicos (Manconi M. et al., Sleep Med. 8(5):491-7 (2007); Haba-Rubio J. et al., Neurophysiol Clin. 33(4): 180-4 (2003), Saletu M. et al., Hum Psychopharmacol. 16(2): 177-187 (2001)). Portanto, por causa de PLMD e PLMS são caracterizados por uma disfunção na sinalização de dopamina e são tratáveis com L-dopa, é acreditado que o uso dos agentes inibidores PDE7 podem ser úteis para tratar PLMD e/ou PLMS quando administrados a um paciente em necessidade deste sozinho, ou em conjunção com L-dopa ou outro agonista receptor de dopamina concorrentemente ou seqüencial. O idade do modelo animal de rato, descrito por Baier P.C. et al., J Neurol Sei. 15;198(l-2):71-7 (2002), pode ser usado para avaliar a eficácia dos agentes inibidores PDE7 para o tratamento de PLMS.

Atrofia de sistema múltiplo incluindo síndrome de Shy-Drager A atrofia do sistema múltiplo é um grupo de distúrbios neurodegenerativos progressivos que inclui a síndrome de Shy-Drager, atrofia olivopontocerebelar e degeneração estriatonigral. os sintomas característicos 25 inclui anomalias motoras semelhantes à Parkinson, hipotensão ortoestática, disfunção da bexiga e disfunção cerebelar (Vanacore N., J Neural Transm. 112(12):1605-12 (2005). Uma similaridade patológica com o mal de Parkinson é sugerido pela descoberta depósitos de alfa sinucleína nas espécimes de autópsia a partir de ambas doenças (Yoshida M., Neuropathology 27(5):484-93 (2007); Wenning G.K. et al., Acta Neuropathol. 109(2):129-40 (2005); Moore D.J. et al, Annu Rev Neurosci. 28:57-87 (2005). L-dopa é usado comumente na terapia para aliviar os sintomas parkinsoniano com a taxa de resposta estimada entre 33 % e 60 % 5 (Gilman S. et al., J Neural Transm. 112(12): 1687-94 (2005); Colosimo C. et al., J Neural Transm. 112(12): 1695-704 (2005)). Portanto, por causa de alguns distúrbios de atrofia de sistema múltiplo (incluindo síndrome de ShyDrager) são tratáveis com L-dopa, é acreditado que o uso de agentes inibidores PDE7 podem ser úteis para tratar aqueles tipos de distúrbios de 10 atrofia de sistema múltiplo, tal como síndrome de Shy-Drager, que são terapeuticamente responsáveis para o tratamento com agente dopaminérgico, quando administrado a um paciente em necessidade deste sozinho, ou em conjunção com L-dopa, agonista receptor de dopamina ou outro agente

r

dopaminérgicos correntemente ou seqüencial. E conhecido que o modelo 15 MPTP é um modelo que é preditivo pela atrofia do sistema múltiplo, incluindo síndrome de Shy-Drager. Stefanova N. et al., Trends Neurosci. 28(9):501-6 (2005). O modelo de animal da atrofia do sistema múltiplo, como descrito por Stefanova N. et al., Trends Neurosci. 28(9):501-6 (2005) também pode ser usado para avaliar a eficácia dos agentes inibidores PDE7 para o 20 tratamento de distúrbios de atrofia de sistema múltiplo, tal como síndrome de Shy-Drager.

Portanto, com base nos estudos descritos neste, é acreditado que o uso de agentes inibidores PDE7 podem ser úteis para tratar distúrbios de atrofia de sistema múltiplo que são terapeuticamente responsáveis para o 25 tratamento com agentes dopaminérgicos, incluindo síndrome de Shy-Drager, quando administrado a um paciente em necessidade deste sozinho, ou em conjunção com a agonistas receptores de dopamina correntemente ou seqüencial. Síndrome de Tourette

A síndrome de Tourette é um distúrbio de neurodesenvolvimento em que os sintomas proeminentes são movimentos estereotipados ou vocalizações ou "tiques" (Muller N. Dialogues Clin Neurosci. 9(2): 161-71 (2007); Leckman JF et al J Child Neurol. 21(8):642-9

(2006)). Existe uma evidência anatômica e de neuroimagem para o envolvimento do sistema dopaminérgico no gânglio basal nesta doença (Muller N. Dialogues Clin Neurosci. 9(2): 161-71 (2007)). Enquanto antipsicóticos, que bloqueiam os receptores de dopamina D2, são um das classes 10 de medicamentos usados para tratar tiques incapazes na síndrome Tourette, estudo clínico de passagem cego duplo com o agonista receptor de dopamina pergolide demonstrado que este medicamento significantemente melhora os tiques (Gilbert DL et al Neurology. 28;54(6):1310-5 (2000)).

Portanto, por causa da síndrome de Tourette é caracterizado 15 por uma disfunção na sinalização de dopamina e são tratáveis com o pergolida do agonista de Dopamina, acredita-se que o uso de agentes inibidores PDE7 possam ser úteis para tratar síndrome de Tourette quando administrado a um paciente em necessidade deste sozinho, ou em conjunção com agonistas receptores de dopamina ou outros agentes dopaminérgicos correntemente ou 20 seqüencial.

Doença de Huntington

A doença de Huntington é uma doença progressiva, geneticamente determinada e neurologicamente fatal que é caracterizada pelos movimentos de convulsão (coréia) que não aumenta a gravidade e, em 25 combinação com melhoramentos cognitivos eventualmente conduz a imobilidade completa e perda da função em atividades do modo de vida diária. A perda seletiva de neurônios espinhosos médios no estriado é uma característica proeminente e é acredita ser uma causa primária de movimentos coréicos (Standaert DG e Young AB in Goodman e Gilman's Pharmacological Basis of Therapeuties 10 ed MeGraw-Hill New York 2001; Capítulo 22, pp 562-564). Não existe medicamento que seja útil na diminuição da taxa de progressão de Huntington e muito pouco que são consistentemente úteis no melhoramento dos sintomas. Uma revisão recente 5 citada agentes anti-psicóticos tal como haloperidol como "possivelmente útil " no tratamento de movimentos coreicos. A mesma revisão estabeleceu que L-dopa e o agonista dopamina pramipexol foram "possivelmente úteis" para o tratamento de rigidez (Bonelli RM et al. Curr Pharm Des. 12(21):2701- 20.(2006)). Alguns relatos sugerem que L-dopa ou pramipexol podem ser 10 úteis em uma variante específica (variante Westphal) de Huntington em que os sintomas do parkinsoniano são proeminentes (Bonelli RM et al Clin Neuropharmacol. 25(l):58-60 (2002); Reuter I, J Neurol Neurosurg Psychiatry. 68(2):238-41(2000)). Entretanto, os processos controlados não tem sido realizado. Portanto, é possível que um composto inibidor PDE7 deve 15 ser útil em pacientes de Huntington que são responsáveis por L-dopa, outros agonistas de dopamina ou precursores, ou outros agentes dopaminérgicos.

Distonia responsiva à dopamina:

A distonia responsiva à dopamina (DRD) é um início precoce, progressivo e amplo geneticamente da doença neurológica determinada 20 caracterizada pela rigidez difusa e outros sintomas semelhantes a Parkinson. Segawa M et al., Adv Neurol. 14:215-33 (1976). A depleção de dopamina no estriado é observado que os terminais nervosos estão intactos. Uma causa maior de DRD é uma eficácia herdada na enzima GTP cicloidrolase, a enzima limitando da taxa na síntese de tetraidrobiopterina (doença de Segawa), que é 25 por sua vez um co-fator essencial para a hidroxilase de tirosina. Ichinose H et al., J Biol Chem. 380(12): 1355-64 (1999). Esta deficiência leva à depleção de dopa e dopamina em terminais estriatais de nigro. Os tratamentos com combinações de L-dopa/carbidopa por exemplo, Sinemet) é altamente bem sucedida e é o padrão da cura nesta doença. Jeon B, J Korean Med Sei. 12(4):269-79 (1997). Por causa desta responsabilidade desta doença por Ldopa e a integridade do caminho de sinalização de dopamina em neurônios espinhosos médios, é acreditado que o composto inibidor PDE7 da presente invenção também pode provar por ser tratamentos eficazes por DRD.

III. Agentes inibidores PDE7

A fosfodiesterase de nucleotídeo cíclica tipo 7 (PDE7) é identificada como uma única família com base nesta seqüência de aminoácido primário e atividade enzimática distinta. Os genes PDE identificados como código PDE7 (PDE7A e PDE7B), por PDEs específicos por cAMP. A 10 caracterização farmacológica e bioquímica de PDE7 mostra uma alta afinidade de PDE específico por cAMP (Km=0,2 μΜ) que é não é afetado por cGMP não pelos inibidores seletivos de outros PDEs. A enzima PDE7 seletivamente decomposta por cAMP e é caracterizada como uma enzima que não é inibida por rolipram, um inibidor seletivo de PDE4, que é uma família 15 distinta de PDE específico por cAMP. Dois sub-tipos foram identificados dentro da família PDE7, PDE7A (Michael, T. et al., J Biol. Chem. 268(17): 12925-12932, 1993; Han, P. et al., JBiol. Chem. 272(26): 16152- 16157, 1997) e PDE7B (Patente US N°. 6,146,876; Gardner, C. et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 272(1): 186-192, 2000; e Saski, T. et al., 20 Biochem. Biophys. Res. Commun. 271(3):575-583, 2000). Os dois produtos do gene exibiram 70 % de identidade nos seus domínios catalíticos do terminal C (Hetman J.M. et al., PNAS 97(l):472-476 (2000).

O PDE7A tem três variantes de união (PDE7A1, PDE7A2 e PDE7A3); estas variantes são geradas por intermédio da união alternativa 25 tanto no terminal N quanto no C (Bloom, TJ. e J.A. Beavo, Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 93:14188-14192, 1996). A seqüência de nucleotídeo de PDE7A, variante transcripta 1, é acessível nos bancos de dados públicos pelo número de Acessão NM_002603. A proteína PDE7A1 humana (SEQ ID N°: 2 codificada pela SEQ ID N°: 1) tem 456 aminoácidos e migram em um peso molecular aparente de 53 a 55 kDa em SDS-PAGE reduzido.

A seqüência de nucleotídeo de PDE7A, variante transcripta 2, é acessível em bancos de dados públicos pelo Número de Acessão NM_002604. A proteína PDE7A2 humana (SEQ ID N0:4 codificada pela SEQ ID N°:3) tem 424 aminoácidos.

A proteína PDE7A tem uma região de cerca de 270 aminoácidos na extremidade do terminal carbóxi que apresenta a similaridade significante (~23 % de homologia) às regiões análogas de outros PDEs que hidrolizam cAMP. Esta região serve como o domínio catalítico. A região do 10 terminal amino desta proteína é divergente de que outros PDEs e presumidamente mediam as propriedades reguladoras e distintivas únicas a esta família da enzima.

A seqüência de nucleotídeo de PDE7B humano é acessível em bancos de dados públicos pelo Número de Acessão NM_018945, fornecido como SEQ ID N°:6 codificada pela SEQ ID N°:7. Três variantes de união de PDE7B foram relatadas: PDE7B 1, PDE7B2 e PDE7B3. PDE7B é publicada no WO 01/62904, Patente US N0. 6.146.876.

Tanto o PDE7B2 quanto o PDE7B3 possuem seqüências de terminais N únicos. Os produtos do gene PDE7B humano tem um peso 20 molecular aparente de 53-55 kDa em SDS-PAGE reduzido (Sasaki, T., Kotera, J., Omori, K., Biochemical J. 361:211-220, 2002). Como em PDE7A, o PDE7B tem uma região significantemente conservada de cerca de 270 aminoácidos comuns a todos os PDEs no terminal carbóxi, que serve como o domínio catalítico. Similar à proteína PDE7A, a região do terminal amino da 25 proteína PDE7B é divergente e presumidamente leva em considerações as propriedades reguladores e distintivas únicas às famílias PDE individuais. A proteína PDE7B mostra a homologia a outros PDEs dependentes de cAMP (23 %) dentro do domínio catalítico. O polipeptídeo PDE7B é 61 % homólogo por PDE7A, de acordo com o WO 2004/044196. PDE7 também é unicamente localizado em pacientes mamíferos relativos à outras famílias PDE. A expressão PDE7A foi detectada na maioria dos tecidos analisados, incluindo o cérebro, coração, rim, músculo esqueletal, baço e útero (Bloom et al., PNAS 93:14188, 1996). Dentro do 5 cérebro, PDE7A é amplamente distribuído tanto em populações celulares neuronais quanto em não neuronais (Miro et al., Synapse 40:201, 2001). A ampla expressão PDE7A no cérebro, incluindo o gânglio basal e substantia nigra, fornece uma base teórica para um papel por PDE7A no controle motor bem como outras funções do cérebro.

Considerando a expressão PDE7A seja amplamente

distribuído no tecido cerebral, a expressão cerebral PDE7B é mais restrita e altamente enriquecida em áreas ligadas ao controle motor, tal como o estriado (Reyes-Irisarri et al, Neuroscience 132:1173, 2005). Entretanto, apesar da presença de PDE7 no tecido cerebral, antes dos dados debatidos na presente 15 aplicação, aqui não foram dados de ligação a PDE7 com qualquer doença SNC específica, tal como mal de Parkinson. Antes do uso de inibidores PDE7 foi focado em aplicações imunológicas com base no trabalho demonstrando que a inibição de PDE7 com pequenos RNAs de interferência (siRNA) podem regular a proliferação da célula T. Ver Rotella, D.P., Drug Discovery 2007, 20 22-23.

Consistente com o modelo de sinalização de dopamina mostrado nas FIGURAS 2A a 2C, a origem da expressão de PDE7A e PDE7B sobrepõe que o sistema dopaminérgico, que suporta a teoria que PDE7 é envolvido no regulamento da função motora. Portanto, enquanto não deseja25 se estar ligado pela teoria, acredita-se que o PD de tratamento pela inibição das funções PDE7 para auxiliar a sinalização de dopamina, que pode ser um mecanismo alternativo para o PD de tratamento comparado aos agonistas receptores de dopamina. Também é acreditado que um inibidor PDE7 pode ser útil como um agente terapêutico para a administração em conjunção (isto é, em combinação, concorrentemente ou seqüencial) com um ou mais agonistas receptores de dopamina ou outros agentes dopaminérgicos.

Na prática dos métodos da invenção, os agentes inibidores representativos PDE7 que inibem a atividade fosfodiesterase de PDE7 inclui: 5 moléculas que ligam-se a PDE7 e inibem a atividade da enzima de PDE7 (tal como pequenos inibidores de molécula ou peptídeos de bloqueamento que ligam-se a PDE7 e reduzem a atividade enzimática) e moléculas que diminuem a expressão de PDE7 no nível de transcrição e/ou de tradução (tal como moléculas de ácido nucléico anti-sentido PDE7, moléculas RNAi 10 específica por PDE7 e ribozimas PDE7), por meio deste prevenindo PDE7 a partir do cAMP da clivagem. O agente inibidor PDE7 pode ser usado sozinho como a terapia primária ou em combinação com outros terapêuticos (tal como agonistas receptores de dopamina) como uma terapia adjuvante para itensificar os benefícios terapêuticos, como debatido em supra.

A inibição de PDE7 é caracterizada por pelo menos uma das

seguintes mudanças que ocorre como um resultado da administração de um agente inibidor PDE7 de acordo com os métodos da invenção: a inibição da clivagem enzimática dependente de PDE7 da ligação 3'-fosfodiester em cAMP para formar monofosfato de 5’-adenosina (5'-AMP) (medido, por 20 exemplo, como descrito no Exemplo 1), uma redução no gene ou nível de expressão da proteína de PDE7, medido, por exemplo, pela análise da expressão do gene por exemplo, análise RT-PCR) ou análise de proteína por exemplo, Western blot).

Em algumas formas de realização, um agente inibidor PDE7 é 25 uma molécula ou composição que inibe a expressão de PDE7A, PDE7B, ou tanto PDE7A quanto PDE7B, tal como um nucleotídeo inibidor pequeno ou anti-sentido por exemplo, siRNA) que especificamente hibridiza com o mRNA celular e/ou DNA genômico correspondentes aos genes do alvo PDE7 de modo como para inibir sua transcripção e/ou tradução, ou uma ribozima que especificamente cliva-se o mRNA de um alvo PDE7.

Potência dos agentes inibidores PDE7

Em uma forma de realização, um agente inibidor PDE7 útil nos métodos da invenção é um composto que é suficientemente potente para 5 inibir a atividade enzimática de PDE7 (PDE7A, PDE7B, ou PDE7A e PDE7B) em um IC50 < 1 μΜ, preferivelmente menor do que ou cerca de 0,1 μΜ. Em uma forma de realização, o agente inibidor PDE7 é suficientemente potente para inibir a atividade enzimática de PDE7 (PDE7A, PDE7B, ou PDE7A e PDE7B) em um IC50 de cerca de 0,1 a cerca de 500 nM. Em uma 10 forma de realização, o agente inibidor PDE7 é potente para inibir a atividade enzimática de PDE7 (PDE7A, PDE7B, ou PDE7A e PDE7B) em um IC50 de cerca de 1 a cerca de 100 nM.

Os métodos representativos para determinar o IC50 por um agente inibidor PDE7 (PDE7A ou PDE7B) são fornecidos no Exemplo 1 neste e são bem conhecidos na técnica, tal como o ensaio de proximidade de cintilação (SPA) divulgado em Bardelle et al., Anal Biochem 15:275(2): 148- 55 (1999).

Asentes inibidores seletivos PDE7A ou PDE7B

Em uma forma de realização, o inibidor PDE7 útil no método 20 da invenção é um agente inibidor PDE7A. Em uma forma de realização, o agente inibidor PDE7A é potente para inibir a atividade enzimática de PDE7A em um IC50 de cerca de 0,1 a cerca de 500 nM. Em uma forma de realização, o inibidor PDE7A tem um IC50 de cerca de 1 a cerca de 100 nM. Um ensaio adequado para determinar o IC50 para o inibidor PDE7A usa 25 enzimas PDE7A2 humanas recombinantes expressadas em um sistema baculoviral. Este método de ensaio é uma modificação do ensaio SPA relatado por Bardelle et al. supra. Um ensaio exemplar para a medição da inibição de PDE7A é fornecido no Exemplo 1.

Em algumas formas de realização, o agente inibidor PDE7 exibe a atividade seletiva de isozima contra PDE7A. O agente inibidor seletivo PDE7A reduz a atividade PDE7A pelo menos duas vezes mais do que a atividade PDE7B, mais preferivelmente pelo menos 10 vezes, pelo menos 20 vezes, pelo menos 50 vezes, ou pelo menos 100 vezes. Em algumas formas 5 de realização, o agente inibidor PDE7A é um agente inibidor que é pelo menos 10 vezes (tal como pelo menos 20 vezes, ou pelo menos 50 vezes ou pelo menos 100 vezes) mais seletivo para a inibição da atividade PDE 7A do que para a atividade da enzima de qualquer outro PDE (PDE1-6, 7B e 8-11).

Em uma outra forma de realização, o inibidor PDE7 útil no 10 método da invenção é um inibidor PDE7B. Devido ao potencial para os efeitos colaterais reduzidos devido à expressão restrita dos níveis altos de PDE7B e da expressão em áreas do cérebro ligadas ao controle motor por exemplo, o estriado), inibidores para PDE7B podem ser úteis para o tratamento de distúrbios neurológicos de movimento tal como mal de 15 Parkinson.

Em uma forma de realização, o inibidor PDE7B tem um IC50 de cerca de 0,1 a cerca de 500 nM. Em uma forma de realização, o agente inibidor PDE7B é suficientemente potente para inibir a atividade enzimática de PDE7B em um IC5o de cerca de 0,1 a cerca de 500 nM. Em uma forma de 20 realização, o inibidor PDE7B tem um IC50 de cerca de 1 a cerca de 100 nM. Os métodos para determinar o IC50 pelo inibidor PDE7B são bem conhecidos na técnica, tal como os ensaios divulgados em Bardelle et al., supra. Um exemplo exemplar para a medição de inibição PDE7AB é fornecido no Exemplo 1.

Em algumas formas de realização, o inibidor PDE7 exibe

atividade seletiva isozima contra PDE7B. o agente inibidor seletivo PDE7B reduz a atividade PDE7B pelo menos duas vezes mais do que a atividade PDE7A, mais preferivelmente pelo menos 10 vezes, pelo menos 20 vezes, pelo menos 50 vezes, ou pelo menos 100 vezes. Em algumas formas de realização, o agente inibidor PDE7B é um agente inibidor que é pelo menos 10 vezes (tal como pelo menos 20 vezes, ou pelo menos 50 vezes ou pelo menos 100 vezes) mais seletivo para a inibição da atividade PDE7B do que para a atividade da enzima de qualquer outro PDE (PDE1-6, 7A e 8-11).

Seletividade de PDE7 em comparação com outros PDEs

Em algumas formas de realização, o agente inibidor PDE7 tem um IC5O para a inibição da atividade PDElB maior do que 5 vezes (tal como pelo menos 10 vezes, pelo menos 20 vezes, ou pelo menos 50 vezes ou pelo menos 100 vezes) o menor do IC5o para a inibição da atividade PDE7A e o 10 IC5O para a inibição da atividade PDE7B. Diferentemente estado, o inibidor PDE7 é mais potente (por 5 vezes, 10 vezes, 20 vezes, 50 vezes ou 100 vezes) na inibição da atividade de PDE7A ou PDE7B (seja qual for o PDE7A ou isozima de PDE7B no que o inibidor PDE7 tem mais efeito), do que este está na inibição da atividade de PDE1B. Para o propósito da presente 15 especificação, por meio do exemplo, esta propriedade pode ser ainda mais simples estado como o inibidor PDE7 é mais potente (por 5 vezes, 10 vezes, 20 vezes, 50 vezes ou 100 vezes) na inibição da atividade de PDE7 do que este está na inibição da atividade de PDE1B.

A inibição dupla de tanto o PDE7 quanto o PDElB pode conferir o benefício adicional no tratamento dos distúrbios de movimento com base no relatório que a anulação do gene para PDElB em camundongos estimulou o metabolismo de dopamina e sensibiliza os animais aos efeitos de agonistas dopaminérgicos (Siuciak et al., Neuropharmacology 53(1): 113-23

(2007)).

Em algumas formas de realização, o agente inibidor PDE7 tem

um IC5o para a inibição da atividade PDE10 maior do que 5 vezes (tal como pelo menos 10 vezes, ou pelo menos 20 vezes, ou pelo menos 50 vezes ou pelo menos 100 vezes) o menor do IC5o para a inibição da atividade PDE7A e o IC50 para a inibição da atividade PDE7B. A inibição dupla tanto de PDE7 quanto de PDElO pode conferir o benefício adicional no tratamento dos distúrbios de movimento com base no relatório que os inibidores seletivos de PDElO causam um aumento nos níveis de cAMP no estriado (Siuciak J.A. et al., Neuropharmacology 51(2):386-96 (2006)).

Em algumas formas de realização, o agente inibidor PDE7 tem um IC50 para a inibição da atividade PDE3 maior do que 10 vezes (tal como pelo menos 20 vezes, pelo menos 50 vezes ou pelo menos 100 vezes) o menor do IC50 para a inibição da atividade PDE7A e o IC50 para a inibição da atividade PDE7B. Esta é por causa da administração dos inibidores seletivos de PDE3 aos pacientes no dano do coração e foi mostrado aumentar sua taxa de mortalidade (Packer M. et al., N Engl J Med. 325(21): 1468-75 (1991)).

Em algumas formas de realização, o agente inibidor PDE7 tem um IC50 para a inibição da atividade PDE4 maior do que 10 vezes (tal como pelo menos 20 vezes, pelo menos 50 vezes ou pelo menos 100 vezes) o menor do IC50 para a inibição da atividade PDE7A e o IC50 para a inibição da atividade PDE7B. Esta é por causa da anulação de um dos genes PDE4 em camundongos foi mostrado levar à miopatia cardíaca (Lehnart S.E. et al., Cell 123(l):25-35 (2005)).

Em algumas formas de realização, o agente inibidor PDE7 tem um IC50 para a inibição da atividade PDE3 e a atividade PDE4 maior do que vezes (tal como pelo menos 20 vezes, pelo menos 50 vezes ou pelo menos 100 vezes) o menor do IC50 para a inibição da atividade PDE7A e o IC50 para a inibição da atividade PDE7B.

Em algumas formas de realização, o agente inibidor PDE7 tem um IC50 para a inibição da atividade PDE8 maior do que 10 vezes (tal como pelo menos 20 vezes, pelo menos 50 vezes ou pelo menos 100 vezes) o menor do IC50 para a inibição da atividade PDE7A e o IC50 para a inibição da atividade PDE 7B.

Em algumas formas de realização, o agente inibidor PDE7 tem um IC5O para a inibição da atividade PDE4 e a atividade PDE8 maior do que 10 vezes (tal como pelo menos 20 vezes, pelo menos 50 vezes ou pelo menos 100 vezes) o menor do IC50 para a inibição da atividade PDE7A e o IC50 para a inibição da atividade PDE7B. De acordo com esta forma de realização, é 5 conhecido que as famílias PDE que especificamente/preferivelmente hidrolizam cAMP e inclui PDE4, PDE7 e PDE8.

Em algumas formas de realização, o agente inibidor PDE7 tem um IC50 para a inibição da atividade de PDE1, PDE2, PDE3, PDE4 e PDE8, PDElO e PDEll maior do que 10 vezes o menor do IC50 para a inibição da 10 atividade PDE7A e o IC5o para a inibição da atividade PDE7B. De acordo com esta forma de realização, é conhecido que as famílias PDE que especificamente/preferivelmente hidrolizam o cAMP incluem famílias PDE4, PDE7 e PDE8 e o PDE1, PDE2, PDE3, PDE10 e PDEl 1 que mostram a atividade substancial contra tanto cAMP quanto cGMP.

Em algumas formas de realização, o agente inibidor PDE é um

inibidor seletivo PDE7 para o qual o menor do IC5o para a inibição da atividade PDE7A e o IC50 para a inibição da atividade PDE7B é menor do que um décimo (tal como um vigésimo, um quinquagésimo, ou um centésimo) o IC50 que o agente tem para a inibição de qualquer outra enzima PDE a partir das famílias de enzimas PDE1-6 e PDE8-11.

Um inibidor seletivo PDE7 pode ser identificado, por exemplo, pela comparação com a capacidade de um agente para inibir a atividade da enzima PDE7 (PDE7A, PDE7B ou PDE7A e PDE7B) por esta capacidade de inibir as enzimas PDE a partir de outras famílias PDE. Por 25 exemplo, um agente pode ser submetido ao ensaio por esta capacidade de inibir a atividade PDE7 bem como PDEl, PDE2, PDE3, PDE4, PDES, PDE6, PDE8, PDE9, PDE10 e PDEl 1. Métodos exemplares em comparação com a capacidade de um agente para inibir a atividade da enzima PDE7 por esta capacidade de inibir as enzimas PDE a partir de outras famílias PDE são fornecidas no Exemplo 2 neste. A razão da inibição IC5o para cada um de isozimas PDE(l-6 e 8-11) a uma inibição de IC50 de PDE7 (isto é, a mais sensível de PDE7A ou PDE7B) pode ser determinada por um ensaio padrão in vitro, in vivo, ou ex vivo, tal como aquele descrito neste.

Seletividade de PDE7 como comparado à outros alvos não

moleculares de PDE conhecidos por ser envolvidos com um distúrbio do movimento neurológico

Em algumas formas de realização, o agente inibidor PDE7 é selecionado pelo PDE7 e substancialmente inativo contra os não alvos moleculares de PDE conhecidos ou acreditados serem envolvidos com a patologia de um distúrbio de movimento neurológico.

Em algumas formas de realização, o agente inibidor PDE7 é um agente inibidor PDE7 para o qual o menor do IC50 Para a inibição da atividade PDE7A e o IC50 para a inibição da atividade PDE7B é menor do que metade (tal como menor do que um quinto, menor do que um décimo, tal como menor do que um vigésimo, menor do que um quinquagésimo, ou menor do que um centésimo) do IC50 que o agente tem para a inibição da atividade em outros alvos moleculares (i) conhecido por estar envolvido com a patologia de um distúrbio de movimento neurológico selecionado do grupo que consiste do mal de Parkinson, Parkinsonismo pós-encefalítico, Distonia responsiva à dopamina, síndrome Shy-Drager, Distúrbio de movimento períodico do membro (PLMD), movimentos periódicos do membro no sono (PLMS) e síndrome das pernas inquietas (RLS), ou (ii) em que outros medicamentos que são terapeuticamente eficazes para tratar a ação do distúrbio.

Em outras formas de realização, o agente inibidor PDE7 é selecionado pelo PDE7 e substancialmente inativo contra não alvos moleculares de PDE conhecidos por serem envolvidos com a patologia do mal de Parkinson. Em algumas formas de realização, o agente inibidor PDE7 é um agente inibidor PDE7 para o qual o menor do IC50 para a inibição da atividade PDE7A e o IC50 para a inibição da atividade PDE7B é menor do que metade (tal como menor do que um quinto, menor do que um décimo, menor do que um vigésimo, menor do que um quinquagésimo, ou menor do que um 5 centésimo) do IC50 que o agente tem para a inibição da atividade em outros alvos moleculares (i) conhecido por estar envolvido com a patologia do mal de Parkinson, tal como caquechol-O-metiltransferase (COMT), monamina oxidase B (MAO-B), transportadores de dopamina (DAT), hidroxilase de tirosina, receptores de dopamina, receptores de A2A de adenosina, receptores 10 de acetilcolina muscarínico, receptores de N-metil D-aspartato (NMDA), receptores de ácido butírico de gama amino (GABA) e receptores de gabapentina, ou (ii) em que outros medicamentos que sãoterapeuticamente eficazes para tratar mal de Parkinson act. Métodos exemplares em comparação com a capacidade de um agente para inibir a atividade da enzima 15 PDE7 por esta capacidade de inibir outros alvos moleculares conhecidos por serem envolvidos com a patologia do mal de Parkinson são fornecidos no Exemplo 4 neste.

Em outras formas de realização, o agente inibidor PDE7 é selecionado pelo PDE7 e substancialmente inativo contra não alvos 20 moleculares de PDE conhecidos por serem associados com o caminho de sinalização de dopamina. Em algumas formas de realização, o agente inibidor PDE7 é um agente inibidor PDE7 para o qual o menor do IC50 para a inibição da atividade PDE7A e o IC50 para a inibição da atividade PDE7B é menor do que metade (tal como menor do que um quinto, menor do que um décimo, tal 25 como menor do que um vigésimo, menor do que um quinquagésimo, ou menor do que um centésimo) do IC50 que o agente tem para a inibição da atividade em outros alvos moleculares conhecidos por serem associados com o caminho de sinalização de dopamina, tal como caquechol-O-metiltransferase (COMT), monamina oxidase B (MAO-B), transportadores de dopamina (DAT), hidroxilase de tirosina, dopa descarboxilase, receptores de dopamina, adenilila ciclase, proteína cinase A (PKA), dopamina e fosfoproteína regulada por AMP cíclica de peso molecular 32.000 (DARPP32) e proteína fosfatase-1. Os métodos exemplares em comparação com a capacidade de um agente para 5 inibir a atividade da enzima PDE7 por esta capacidade de inibir outros alvos moleculares conhecidos por serem associados com o caminho de sinalização de dopamina são fornecidos no Exemplo 4 neste.

Tipos de agentes inibidores PDE7

O agente inibidor PDE7 pode ser qualquer tipo de agente 10 incluindo, mas não limitando a, um composto químico, uma proteína ou polipeptídeo, um peptidomimético, uma molécula de ácido nucléico, ou ribozima. Em algumas formas de realização, os agentes inibidores PDE7 são pequenos inibidores de molécula incluindo substâncias sintéticas e naturais que tem um peso molecular baixo (isto é, menor do que cerca de 450 g/mol), 15 tal como, por exemplo, peptídeos, peptidomiméticos e inibidores não peptídeo tal como compostos químicos.

Compostos químicos:

Os inibidores PDE7 úteis nos métodos da invenção inclui agentes que são administrados por uma via convencional por exemplo, oral, 20 intramuscular, subcutânea, transdérmica, transbucal, intravenosa etc.) na corrente sanguínea e são ultimamente transportadas através do sistema vascular cruzando a barreira sanguínea do cérebro para inibir o PDE7 no cérebro. Consequentemente, para estes métodos de administração, os inibidores PDE7 tem a capacidade de cruzar a barreira sanguínea do cérebro. 25 Aqueles inibidores PDE descritos abaixo que tem a capacidade de cruzar a barreira sanguínea do cérebro por exemplo, aqueles tendo um peso molecular menor do que cerca de 450 g/mol e que são suficientemente liofílicos) são úteis nos métodos da invenção quando os inibidores são administrados por uma via que ultimamente transporta os inibidores ao cérebro na corrente sanguínea.

O seguinte é uma descrição de inibidores de PDE7 exemplares úteis nos métodos da invenção.

Em uma forma de realização, os inibidores de PDE7 úteis nos métodos da invenção são selecionados daqueles compostos no geral e especificamente divulgados em EP 1 454 897, WO 2003/053975 e US 20050148604, cada um expressamente incorporado neste por referência em sua totalidade. Em uma forma de realização, os inibidores de PDE7 úteis nos métodos da invenção têm as fórmulas:

R3

Os substituintes para os compostos acima são definidos como

segue:

A representa N ou CR4,

B representa um átomo de hidrogênio ou um átomo halogênio, Ri representa cicloalquila C3.7 opcionalmente substituído ou

terc-butila,

R2 representa hidrogênio, metila ou etila,

R3 representa um hidrogênio, nitro, ciano ou átomo halogênio, NR5R6, C(=X)R7, SO2NR5R6, ORg, NRgCONR5R6, NRgSO2Rg5 NRgCO2Rg, um grupo heteroarila, alquila C1.3 opcionalmente substituído, alquenila Ci_6 opcionalmente substituído ou heterocicloalquila saturado ou insaturado opcionalmente substituído,

R4 representa hidrogênio ou alcóxi C 1.3 substituído, se desejado, por um ou mais átomos de flúor,

R5 e R6 são os mesmos ou diferentes e Representam um átomo de hidrogênio, alquila Q-g opcionalmente substituído, heterocicloalquila opcionalmente substituído ou acila opcionalmente substituído ou, junto com o átomo de nitrogênio ao qual estes estão ligados, formam azetidinila, pirrolidinila, piperidinila, morfolino, tiomorfolino, piperazinila ou 5 homopiperazinila, cada um destes grupos sendo opcionalmente substituído por alquila Ci-4 opcionalmente substituído, OH, alcóxi C1.3, CO2H, NR5R6, um grupo oxo, NR9COR7 ou C(=0)R7,

R7 representa alquila Cj.6 opcionalmente substituído, OH, ORs

ou NR5R6,

R8 representa hidrogênio, um grupo alquila Ci_6 opcionalmente

substituído ou heterocicloalquila opcionalmente substituído,

R9 representa um grupo alquila C1-6 opcionalmente substituído

e

X representa O, S ou NH.

Com respeito aos compostos acima, “opcionalmente

substituído” refere-se a grupo alquila opcionalmente substituído linear, ramificado ou cíclico tal como metila, etila, propila ou cicloexila; um grupo hidroxila; um grupo ciano; um grupo alcóxi tal como metóxi ou etóxi; um grupo amino opcionalmente substituído, tal como amino, metilamino ou 20 dimetilamino; um grupo acila opcionalmente substituído tal como acetila ou propionila; um grupo carboxila; um grupo arila opcionalmente substituído, tal como fenila ou naftila; um grupo heteroarila opcionalmente substituído tal como piridinila, tiazolila, imidazolila ou pirazila; um grupo heterocicloalquila saturado ou insaturado opcionalmente substituído, tal como piperazinila ou 25 morfonila; um grupo carbamoíla opcionalmente substituído; um grupo amido opcionalmente substituído; um átomo halogênio, tal como cloro, flúor ou bromo; um grupo nitro; um grupo sulfona opcionalmente substituído; um grupo sulfonilamido opcionalmente substituído; um grupo oxo; um grupo uréia e um grupo alquenila linear, ramificado ou cíclico opcionalmente substituído, tal como etenila, propenila ou cicloexenila.

Os exemplos do grupo heteroarila como R incluem um grupo

heteroarila monocíclico de 5 a 7 membros tendo de 2 a 8 átomos de carbono e contendo de 1 a 4 heteroátomos que consistem de átomos de oxigênio, átomos 5 de nitrogênio ou átomos de enxofre e um grupo heteroarila policíclico que compreende dois ou mais tais compostos monocíclicos idênticos ou diferentes fundidos juntos, exemplos do grupos heteroarila monocíclicos e policíclicos sendo pirrol, furila, tienila, imidazolila, tiazolila, piridila, pirazila, indolila, quinolila, isoquinolila e tetrazolila.

Em uma forma de realização, um inibidor de PDE7 útil na

invenção tem a fórmula:

Composto 1.

A atividade do Composto 1 na inibição que seleciona PDEs é

descrita nos Exemplos 1 e 2. A eficácia do Composto 1 no modelo de Parkinson MPTP é descrita nos Exemplos 5 e 6.

15

Em outras formas de realização, os inibidores de PDE7 úteis nos métodos da invenção têm as fórmulas: η OH

Em uma outra forma de realização, um inibidor de PDE7 útil nos métodos da invenção tem a fórmula:

Composto 2

A atividade do Composto 2 na inibição que seleciona PDEs é descrita nos Exemplos 1 e 2. A eficácia do Composto 2 no modelo de Parkinson MPTP é descrita no Exemplo 7.

Em outras formas de realização, os inibidores de PDE7 úteis nos métodos da invenção têm as fórmulas: A preparação dos compostos acima é descrita em EP 1 454 897, WO 2003/053975 e US 20050148604.

Em uma outra forma de realização, os inibidores de PDE7 úteis nos métodos da invenção são selecionados daqueles compostos no geral e especificamente divulgados em US 2002/0198198, WO 2002/076953, WO 2002/074754, WO 2006/092691, Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters

14 (2004) 4623-4626 e Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 14 (2004) 4627-4631, cada um expressamente incorporado neste por referência em sua totalidade. Em uma forma de realização, os inibidores de PDE7 úteis nos métodos da invenção têm as fórmulas: Χ2Χ'

I

X

~ir JL X

Y^Z ''^x; 'Y' 'Z1 '^4 'N' 'Z1 .

Os substituintes para os compostos acima são definidos como

segue:

(a) X1, X2, X3 e X4 são os mesmos ou diferentes e são selecionados de:

N, contanto que não mais do que dois dos grupos Xi, X2, X3 e

X4 representem simultaneamente um átomo de nitrogênio ou,

C-R1, em que R1 é selecionado de:

Qi ou

alquila inferior, alquenila inferior ou alquinila inferior, estes 10 grupos sendo não substituídos ou substituídos por um ou diversos grupos Q2;

o grupo X5-R5 em que,

X5 é selecionado de: uma ligação simples,

alquileno inferior, alquenileno inferior ou alquinileno inferior; 15 opcionalmente interrompidos por 1 ou 2 heteroátomos escolhidos de O, S, S(=0), SO2 ou N, os átomos de carbono destes grupos sendo não substituídos ou substituídos por um ou diversos grupos, idênticos ou diferentes, selecionados de SR6, OR6, NR6R7, =O, =S ou =NR6 em que R6 e R7 são os mesmos ou diferentes e são selecionados de hidrogênio ou alquila inferior, e 20 R5 é selecionado de arila, heteroarila, cicloalquila

opcionalmente interrompidos por C(=0) ou com 1, 2 ou 3 heteroátomos escolhidos de O, S, S(=0), SO2 ou N, cicloalquenila opcionalmente interrompidos por C(=0) ou com 1, 2 ou 3 heteroátomos escolhidos de O, S, S(=0), SO2 ou N ou um grupo bicíclico, estes grupos sendo não substituídos 25 ou substituídos por um ou diversos grupos selecionados de Q3, heteroarila ou alquila inferior opcionalmente substituído por Q3; em que Q1, Q2 e Q3 são os mesmos ou diferentes e são selecionados de:

hidrogênio, halogênio, CN, NO2, SO3H, P(=0)(0H)2, OR2, OC(O)R2, C(=0)0R2, SR2, S(O)R2, NR3R4, Q-R2, Q-NR3R4, NR2-QNR3R4 ou NR3-Q-R2 em que Q é selecionado de C(=NR), C(O), C(=S) ou SO2, R é selecionado de hidrogênio ou alquila inferior e R2, R3 e R4 são os mesmos ou diferentes e são selecionados de:

hidrogênio, alquila inferior opcionalmente interrompidos por C(O), (CH2)n-arila, (CH2)n-heteroarila, (CH2)n-cicloalquila opcionalmente interrompidos por C(=0) ou com 1 ou 2 heteroátomos escolhidos de O, S, S(=0), SO2 ou N, em que n é um número inteiro selecionado de 0, 1, 2, 3 ou 4;

estes grupos sendo não substituídos ou substituídos por um ou diversos grupos selecionados de alquila inferior, halogênio, CN, CH3, SO3H, 15 SO2CH3, CF3, C(O)NHSO2CH3, OR6, COOR6, C(O)R6, NR6R7, C(O)NR6R7 ou SO2NR6R7, em que R6 e R7 são os mesmos ou diferentes e são selecionados de hidrogênio ou alquila inferior opcionalmente substituído por um ou dois grupos selecionados de OR, COOR ou NRR8 em que R e R8 são hidrogênio ou alquila inferior e,

R6 e R7 e/ou, R3 e R4, junto com o átomo de nitrogênio ao qual

estão ligados, podem formar um anel heterocíclico de 4 a 8 membros, que pode conter um ou dois heteroátomos selecionados de O, S, S(O), SO2 ou N e que pode ser substituído por,

um anel heterocíclico de 4 a 8 membros, que pode conter um ou dois heteroátomos selecionados de O, S ou N e que pode ser substituído por um alquila inferior ou,

um alquila inferior opcionalmente substituído por OR’, NR’R”, C(0)NR’R” ou COOR5 em que R’ e R” são os mesmos ou diferentes e são selecionados de H, alquila inferior opcionalmente substituído por OR ou COOR em que R é hidrogênio ou alquila inferior eR’e R” junto com o átomo de nitrogênio ao qual estão ligados, podem formar um anel heterocíclico de 4 a 8 membros, que pode conter um ou dois heteroátomos selecionados de O, S ou N ou,

(b) X é O, S ou NR9, em que R9 é selecionado de hidrogênio,

CN, OH, NH2, alquila inferior, alquenila inferior ou alquinila inferior, estes grupos sendo não substituídos ou substituídos por cicloalquila opcionalmente interrompidos por 1 ou 2 heteroátomos escolhidos de O, S, S(=0), SO2 ou N, cicloalquenila opcionalmente interrompidos por 1 ou 2 heteroátomos 10 escolhidos de O, S, S(=0), SO2 ou N, arila, heteroarila, ORi0 ou NRi0Ri i em que Rio e Rn são os mesmos ou diferentes e são selecionados de hidrogênio ou alquila inferior;

(c) Y é selecionado de O, S ou N-Rj2, em que Ri2 é selecionado de hidrogênio, CN, OH, NH2, alquila inferior, alquenila inferior

ou alquinila inferior, estes grupos sendo não substituídos ou substituídos por cicloalquila opcionalmente interrompidos por 1 ou 2 heteroátomos escolhidos de O, S, S(=0), SO2 ou N, cicloalquenila opcionalmente interrompidos por 1 ou 2 heteroátomos escolhidos de O, S, S(=0), SO2 ou N, arila, heteroarila, ORi0 ou NRi0Ri i em que Rjo e R1, são os mesmos ou diferentes e são 20 selecionados de hidrogênio ou alquila inferior;

(d) Z é escolhidos de CH-NO2, O, S ou NR]3 em que Ri3 é selecionado de hidrogênio, CN, OH, NH2, arila, heteroarila, cicloalquila opcionalmente interrompidos por um ou diversos heteroátomos escolhidos de O, S, S(=0), SO2 ou N, cicloalquenila opcionalmente interrompidos por um

ou diversos heteroátomos escolhidos de O, S, S(=0), SO2 ou N, C(=0)R14, C(=0)NR14Ri5, 0R]4 ou alquila inferior, não substituído ou substituído por um ou diversos grupos que são os mesmos ou diferentes e que são selecionados 0R]4 ou NR14Rj5;

Ri4 e R15 sendo independentemente selecionados de hidrogênio ou alquila inferior ou, R14 e R15, junto com o átomo de nitrogênio ao qual estão ligados, podem formar um anel heterocíclico de 4 a 8 membros que pode conter um ou dois heteroátomos escolhidos de O, S ou N e que pode ser substituído por um alquila inferior;

(e) Z1 é escolhidos de H, CH3 ou NR16Rn em que Ri6 e R17 são

os mesmos ou diferentes e são selecionados de hidrogênio, CN, arila, heteroarila, cicloalquila opcionalmente interrompidos por um ou diversos heteroátomos escolhidos de O, S, S(=0), SO2 ou N, cicloalquenila opcionalmente interrompidos por um ou diversos heteroátomos escolhidos de 10 O, S, S(=0), SO2 ou N, C(O)Ri4, C(O)NR14R15, OR14 ou alquila inferior não substituído ou substituído por um ou diversos grupos selecionados de ORi4 ou NR14R15,

Ri4 e R15 sendo escolhidos de hidrogênio ou alquila inferior, e, Ri4 e Ri5 e/ou Rj6 e R,7, junto com o átomo de nitrogênio ao qual estão ligados, podem formar um anel heterocíclico de 4 a 8 membros que pode conter um ou dois heteroátomos escolhidos de O, S ou N e que pode ser substituído por um alquila inferior;

(f) A é um ciclo selecionado de:

K A1-A2 /a2'A>5

A'-« A1 /

■ ’ ’ * ou *

em que

Ai, A2, A3, A4, A5 e A6 são os mesmos ou diferentes e são

selecionados de O, S, C, C(O), SO, SO2 ou NRis em que R18 é selecionado de hidrogênio, arila, heteroarila, cicloalquila opcionalmente interrompidos por um ou diversos heteroátomos escolhidos de O, S, S(O), SO2 ou N, cicloalquenila opcionalmente interrompidos por um ou diversos heteroátomos escolhidos de O, S, S(O), SO2 ou N, alquila inferior não substituído ou substituído por arila, heteroarila, cicloalquila opcionalmente interrompidos por um ou diversos heteroátomos escolhidos de

O, S, S(O), SO2 ou N, cicloalquenila opcionalmente interrompidos por um ou diversos heteroátomos escolhidos de O, S, SO=O), SO2 ou N, CN, NR19R20, C(O)NR19R20, OR19, C(O)R19 ou C(O)OR19 em que R19 e R20 são idênticos ou diferentes e são selecionados de hidrogênio ou alquila inferior;

* representa o átomo de carbono que é dividido entre o ciclo A e o ciclo de cadeia principal contendo X e/ou Y;

cada átomo de carbono do ciclo A é não substituído ou

substituído por 1 ou 2 grupos, idênticos ou diferentes, selecionados de alquila inferior opcionalmente substituído por OR21, NR2jR22, COOR21 ou CONR21R22, haloalquila inferior, CN, F, =0, SO2NR19R20, OR19, SR19, C(O)OR19, C(O)NR19R20 ou NR19R20 em que R19 e R20 são idênticos ou 15 diferentes e são selecionados de hidrogênio ou alquila inferior opcionalmente substituído por OR21, NR21R22, COOR21 ou CONR21R22, em que R21 e R22 são idênticos ou diferentes e são selecionados de hidrogênio ou alquila inferior, e R19 e R20 e/ou, R2I e R22, junto com o átomo de nitrogênio ao qual estão ligados, podem formar um anel heterocíclico de 4 a 8 membros;

dois átomos do ciclo A, que não são adjacentes, podem ser

ligados por uma cadeia de 2, 3 ou 4 átomos de carbono que podem se rinterrompidos por 1 heteroátomo escolhido de O, S ou N; contanto que não mais do que dois dos grupos A1, A2, A3, A4, A5 e A6 representem simultaneamente um heteroátomo e suas formas tautoméricas, suas formas racêmicas, seus

isômeros e seus derivados farmaceuticamente aceitáveis.

Com respeito aos compostos acima, halogênio inclui flúor, cloro, bromo e iodo. Os halogênios preferidos são F e Cl. Alquila inferior inclui cadeias de carbono retas e ramificadas tendo de 1 a 6 átomos de carbono. Os exemplos de tais grupos alquila incluem metila, etila, isopropila e terc-butila. Alquenila inferior inclui radicais de hidrocarboneto retos ou ramificados tendo de 2 a 6 átomos de carbono e pelo menos uma ligação dupla. Os exemplos de tais grupos alquenila são etenila, 3-buten-l-ila, 2- 5 etenilbutila e 3-hexen-l-ila. Alquinila inferior inclui radicais de hidrocarboneto retos ou ramificados tendo de 2 a 6 átomos de carbono e pelo menos uma ligação tripla. Os exemplos de tais grupos alquinila são etinila, 3- butin-l-ila, propinila, 2-butin-l-ila e 3-pentin-l-ila. Haloalquila inferior inclui um alquila inferior como definido acima, substituído por um ou diversos 10 halogênios. Um exemplo de haloalquila é trifluorometila. Arila é entendido referir-se a um carbociclo aromático contendo entre 6 e 10 átomos de carbono. Um exemplo de um grupo arila é fenila. Heteroarila inclui ciclos aromáticos que tem de 5 a 10 átomos do anel, de 1 a 4 dos quais são independentemente selecionados do grupo que consiste de O, S e N. Os 15 Grupos heteroarila representativos têm 1, 2, 3 ou 4 heteroátomos em um anel aromático de 5 ou 6 membros. Os exemplos de tais grupos são tetrazol, piridila e tienila. O cicloalquila representativo contém de 3 a 8 átomos de carbono. Os exemplos de tais grupos são ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, cicloexila, cicloeptila e ciclooctila. O termo “interrompido” 20 significa que em uma cadeia de estrutura principal, um átomo de carbono é substituído por um heteroátomo ou um grupo como definido aqui. Por exemplo, em “cicloalquila ou cicloalquenila opcionalmente interrompidos por C(=0) ou com 1 heteroátomo escolhido de O, S, S(=0), SO2 ou N”, o termo “interrompido” significa que C(=0) ou um heteroátomo pode 25 substituir um átomo de carbono do anel. O exemplo de tais grupos são morfolina ou piperazina. Cicloalquenila inclui cicloalquila de 3 a 10 membros contendo pelo menos uma ligação dupla. Os anéis heterocíclicos incluem heteroarila como definido acima e cicloalquila ou cicloalquenila, como definido acima, interrompidos por 1, 2 ou 3 heteroátomos escolhidos de O, S, 10

S(==0), SO2, ou N. Os substituintes bicíclicos referem-se a dois ciclos, que são os mesmos ou diferentes e que são escolhidos de arila, anel heterocíclico, cicloalquila ou cicloalquenila, fundidos juntos para formar os ditos substituintes bicíclicos. Um exemplo de um substituinte bicíclico é indolila.

Em uma forma de realização, um inibidor de PDE7 útil nos métodos da invenção tem a fórmula:

Composto 3

A atividade do Composto 3 na inibição que seleciona PDEs é descrita nos Exemplos 1 e 2. A eficácia do Composto 3 no modelo de Parkinson MPTP é descrita no Exemplo 7.

Em outras formas de realização, os inibidores de PDE7 úteis nos métodos da invenção têm as fórmulas: A preparação dos compostos acima é descrita em US 2002/0198198, WO 2002/076953, WO 2002/074754, WO 2006/092691, Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 14 (2004) 4623-4626 e Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 14 (2004) 4627-4631.

Em uma outra forma de realização, os inibidores de PDE7

úteis nos métodos da invenção são selecionados daqueles compostos no geral e especificamente divulgados em EP 1 193 261, WO 2002/28847, US 20030045557, Patente US N0 7,122,565, Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 14 (2004) 4607-4613 e Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 14 10 (2004) 4615-4621, cada um expressamente incorporado neste por referência em sua totalidade. Em uma forma de realização, os inibidores de PDE7 úteis nos métodos da invenção têm a fórmula: N-N

Rs-^Y^N

Ri .

Os substituintes para os compostos acima são definidos como

segue:

Y é S ou 0;

Ri é alquila CrCiO, alquenila C2-Ci0, alquinila C2-CiO, cicloalquila, cicloalquenila, heterociclo, arila ou um grupo policíclico; cada um opcionalmente substituído por um ou diversos grupos Xi-R4, idênticos ou diferentes, em que Xj é uma ligação simples, alquileno inferior, alquenileno C2-C6, cicloalquileno, arileno ou heterociclo bivalente e R4 é:

(1) H, =O, NO2, CN, halogênio, haloalquila inferior, alquila inferior, bioéstere de ácido carboxílico;

(2) COOR5, C(O)R5, C(=S)R5, SO2R5, SOR5, SO3R5, SR5,

OR5;

(3) C(=0)NR7R8, C(=S)NR7R8, C(OH-NO2)NR7R8, C(=NCN)NR7R8, C(=N-S02NH2)NR7R8, C(=NR7)NHR8, C(=NR7)R8,

C(=NR9)NHR8, C(=NR9)R8, SO2NR7R8 ou NR7R8, em que R7 e R8 são os mesmos ou diferentes e são selecionados de OH, R5, R6, C(=0)NR5R<s, C(=0)R5, SO2R5, C(=NR9)NHR10, C(=NR9)Rio, C(OH-NO2)NR9Ri0, C(=NS02NH2)NR9Rio, C(=N-CN)NR9Ri0 ou C(=S)NR9R10;

R2 é alquila inferior, alquenila C2-CiO, alquinila C2-C1O, cicloalquila, cicloalquenila, heterociclo, arila; cada um opcionalmente substituído por um ou diversos grupos que são os mesmos ou diferentes e que são selecionados de:

(1) H, bioéstere de ácido carboxílico, haloalquila inferior,

halogênio,

(2) COOR5, OR5, SO2R5, (3) SO2NR11Ri2, C(zO)NR11R12, NR11R12, em que R11 e R12 são os mesmos ou diferentes e são selecionados de OH, R5, R6, C(zO)NR5R6, C(=0)R5, SO2R5, C(^S)NR9R10, C(CH-NO2)NR9R10, C(=N-CN)NR9R10, C(=N-SO2NH2)NR9R10, C(=NR9)NHR10 ou C(=NR9)R10;

R3 é X2-R53, em que X2 é uma ligação simples or, um grupo

selecionado de C1-C4 alquileno, alquenileno C2-C6, alquinileno C2-C6, cada um opcionalmente substituído por um ou diversos grupos que são os mesmos ou diferentes e que são selecionados de:

(1) H, alquila C1-C3, cicloalquila C3-C4, arila, heterociclo, =O,

CN,

(2) OR5, =NR5 ou

(3) NR13R14, em que R13 e R14 são os mesmos ou diferentes e são selecionados de R5, R6, C(O)NR5R6, C(=0)R5, SO2R5, C(=S)NR9R10, C(OHNO2)NR9R10, C(=NR9)NHR10 ou C(=NR9)R10;

R53 é cicloalquila, cicloalquenila, arila, heterociclo ou um

grupo policíclico; cada um opcionalmente substituído por um ou diversos grupos X3-R17 em que X3 é uma ligação simples, alquileno inferior, alquenileno C2-C6, alquinileno C2-C6, cicloalquileno, arileno, heterociclo bivalente ou um grupo policíclico bivalente e R17 é:

(1) H, =0, NO2, CN, haloalquila inferior, halogênio, bioéstere

de ácido carboxílico, cicloalquila,

(2) COOR5, C(O)R5, C(=S)R5, SO2R5, SOR5, SO3R5, SR5,

OR5;

(3) C(O)NR15R16, C(=S)NR15R16, C(=N-CN)NR15R16, C(=NS02NH2)NR15R16, C(OH-NO2)NR15R16, SO2NR15Ri6,

C(=NR15)NHR16, C(=NR15)R16, C(=NR9)NHR16, C(=NR9)R16 OU NR15R16 em que R15 e R16 são os mesmos ou diferentes e são selecionados de OH, R5, R6, C(O)NR5R6, C(O)R5, SO2R5, C(=S)NR9R10, C(OH-NO2)NR9R10, C(=NCN)NR9R10, C(=N-SO2NH2)NR9R10, C(=NR9)NHR10 ou C(=NR9)R,o, (4) heterociclo opcionalmente substituído por um ou diversos

grupos R5;

em que R5 e R6 são os mesmos ou diferentes e são selecionados de H, alquila inferior, alquenila C2-C6, alquinila C2-C6, X4-

cicloalquila, X4-cicloalquenila, X4-arila, X4-heterociclo ou X4-grupo policíclico, em que X4 é uma ligação simples, alquileno inferior ou alquenileno C2-C6; cada um opcionalmente substituído por um ou diversos grupos que são os mesmos ou diferentes e selecionados de halogênio, =O, COOR20, CN, OR20, O-alquila inferior opcionalmente substituído por OR20, 10 C(=0)-alquila inferior, haloalquila inferior,

^18 X5-<

R19

em que X5 é uma ligação simples ou alquileno inferior e R18, R19 e R20, são os mesmos ou diferentes e são selecionados de H ou alquila inferior;

X6-heterociclo, X6-arila, X6-cicloalquila, X6-cicloalquenila ou 15 X6-grupo policíclico, em que X6 é uma ligação simples ou alquileno inferior, estes grupos sendo opcionalmente substituídos por um ou diversos grupos, idênticos ou diferentes, selecionados de halogênios, COOR21, OR21 ou (CH2)nNR21R22 em que n é 0, 1 ou 2 e R21 e R22 são os mesmos ou diferentes e são selecionados de H ou alquila inferior;

R9 é selecionado de H, CN, OH, alquila inferior, O-alquila

inferior, arila, heterociclo, SO2NH2 ou

X5-<

R19

em que X5 é uma ligação simples ou alquileno inferior e R18 e R19 são os mesmos ou diferentes e são selecionados de H ou alquila inferior; Ri0 é selecionado de hidrogênio, alquila inferior, ciclopropila ou heterociclo ou seus derivados farmaceuticamente aceitáveis.

Com respeito aos compostos acima, arila refere-se a um carbociclo insaturado, compreendendo exclusivamente átomos de carbono na

estrutura cíclica, cujo número está entre 5 e 10, incluindo fenila, naftila ou tetraidronaftila. Heterociclo refere-se a um monociclo não saturado ou saturado contendo entre 1 e 7 átomos de carbono na estrutura cíclica e pelo menos um heteroátomo na estrutura cíclica, tal como nitrogênio, oxigênio ou enxofre, preferivelmente de 1 a 4 heteroátomos, idênticos ou diferentes, 10 selecionados de nitrogênio, enxofre e átomos de oxigênio. Os heterociclos adequados incluem morfolinila, piperazinila, pirrolidinila, piperidinila, pirimidinila, 2- e 3-furanila, 2- e 3-tienila, 2-piridila, 2- e 3-piranila, hidroxipiridila, pirazolila, isoxazolila, tetrazol, imidazol, triazol e outros. Os grupos policíclicos incluem pelo menos dois ciclos, idênticos ou diferentes, 15 selecionados de grupos arila, heterociclo, cicloalquila, cicloalquenila fundidos juntos para formar o dito grupo policíclico tal como 2- e 3-benzotienila, 2- e 3-benzofuranila, 2-indolila, 2- e 3-quinolinila, acridinila, quinazolinila, indolila, benzo[l,3]dioxolila e 9-tioxantanila. Os Grupos bicíclicos referem-se a dois ciclos, que são os mesmos ou diferentes e que são escolhidos de arila, 20 heterociclo, cicloalquila ou cicloalquenila, fundidos juntos para formar os ditos grupos bicíclicos. Halogênio refere-se a flúor, cloro, bromo ou iodo. O alquila inferior refere-se a um alquila que é linear ou ramificado e contém 1 a

6 átomos de carbono. Os exemplos de grupos alquila inferior incluem metila, etila, propila, butila, isopropila, terc-butila, isobutila, n-butila, pentila, hexila e 25 outros. Alquenila refere-se a uma cadeia de átomo de carbono insaturada linear ou ramificada, que compreende uma ou diversas ligações duplas, preferivelmente uma ou duas ligações duplas. Alquinila refere-se a uma cadeia de átomo de carbono insaturada linear ou ramificada, que compreende uma ou diversas ligações triplas, preferivelmente uma ou duas ligações triplas. Haloalquila inferior refere-se a um alquila inferior substituído por um ou diversos halogênios; os grupos haloalquila preferidos inferior incluem grupos perhaloalquila, tais como CF3. Cicloalquila refere-se a nanocarbociclo saturado contendo de 3 a 10 átomos de carbono; incluindo ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, cicloexila e cicloeptila. Cicloalquenila refere-se a nanocarbociclo não saturado contendo de 3 a 10 átomos de carbono. Os exemplos de cicloalquenila adequado são 3-cicloexeno e 3-cicloeptene. Bioéstere de ácido carboxílico tem o significado clássico; os bioésteres de ácido carboxílico comuns são tetrazol-5-ila, C(=0)N(H)0H, isoxazol-3-ila, hidroxitiadiazolila, sulfonamido, sulfonilcarboxamido, ácido fosfônico, fosfonamido, ácido fosfínico, ácidos sulfônico, acil sulfonamido, mercaptoazol, acil cianamidas.

^CH3

A atividade do Composto 4 na inibição de diversos PDEs é descrita nos Exemplos 1 e 2. A eficácia do Composto 4 no modelo de Parkinson MPTP é descrita no Exemplo 7.

Em outras formas de realização, os inibidores de PDE7 úteis nos métodos da invenção têm as fórmulas: A preparação dos compostos acima é descrita em EP 1 193 261, WO 02/28847, US 20030045557, USPatent No. 7,122,565, Bioorganic

& Medicinal Chemistry Letters 14 (2004) 4607-4613 e Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 14 (2004) 4615-4621.

Em uma outra forma de realização, os inibidores de PDE7 úteis nos métodos da invenção são selecionados daqueles compostos no geral e especificamente divulgados em WO 2004/111054, US 20060128728 e US 20070270419, cada um expressamente incorporado neste por referência em sua totalidade. Em uma forma de realização, os inibidores de PDE7 úteis nos métodos da invenção têm as fórmulas:

Os substituintes para os compostos acima são definidos como

segue:

R1 é um grupo cicloalquila C3.8 substituído ou não substituído ou terc-butilum grupo; R2 é um átomo de hidrogênio ou grupo alquila Ci_3;

R3 é um grupo: NR5R6, C(=0)R7 ou S(O)0-IR8;

R4 é um átomo de hidrogênio ou grupo alcoxila C 1.3 que é não substituído ou substituído por um ou mais átomos de flúor;

R5 e R6 são os mesmos ou diferentes um do outro, um átomo

de hidrogênio, grupo alquila Ci.6 substituído ou não substituído, grupo acila substituído ou não substituído, grupo heterocicloalquila substituído ou não substituído e anel de heterocicloalquila substituído ou não substituído formado com um átomo de nitrogênio que está ligando R5 e R6;

R7 é um grupo: OR9 ou NR5R6;

R8 é um átomo de hidrogênio, um átomo halogênio, um grupo: NR5R6, grupo alquila Ci„6 substituído ou não substituído ou grupo arila substituído ou não substituído;

R9 é um átomo de hidrogênio ou grupo alquila Ci„6 substituído ou não substituído ou sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis destes.

Com respeito aos compostos acima, o termo “grupo alquila C1-C3” inclui um grupo alquila de cadeia reta ou ramificada tendo de 1 a 3 átomos de carbono. O termo “grupo cicloalquila C3-C8” inclui um grupo cicloalquila tendo de 3 a 8 átomos de carbono, tal como ciclopropila, 20 ciclobutila, ciclopentila, cicloexila e ciclooctila. O termo grupo “grupo heterocicloalquila” é grupo heterocíclico de 3 a 7 membros contendo os mesmos ou diferentes 1 a 4 heteroátomos, tais como átomos de oxigênio, nitrogênio ou enxofre e os exemplos incluem pirrolidinila, piperidinila, piperazinila, homopiperazinila, tetraidrofurila, tetraidropiranila, morfolinila e 25 azetidinila. O termo “grupo alcóxi C1-C3” significa grupo alcóxi tendo de 1 a 3 átomos de carbono. O termo “grupo acila” significa grupo acila tendo de 1 a 8 átomos de carbono. 0 termo “grupo arila” é grupo fenila, naftila, bifenila, tendo de 6 a 12 átomos de carbono e o termo “grupo heteroarila” é grupo monocíclico ou policíclico de 5 a 7 membros deste contendo 2 a 8 átomos de carbono e os mesmos ou diferentes 1 a 4 heteroátomos, tal como átomos de oxigênio, nitrogênio, enxofre. Os exemplos incluem pirrol, furila, tienila, imidazolila, tiazolila, pirazinila, indolila, quinolinila, isoquinolinila, tetrazolila, piridinila, pirazolil piridazinila e pirimidinila. Os exemplos de 5 substituinte adequado de “grupo alquila CrC6 substituído ou não substituído” incluem grupo hidroxila e átomo halogênio e exemplos de substituinte adequado de “grupo acila substituído ou não substituído” incluem átomo halogênio e grupo nitro. Além disso, os exemplos de substituinte adequado de “grupo arila substituído ou não substituído” incluem alquila Ci-C3, átomo 10 halogênio, grupo amino, grupo acila, grupo amida, grupo hidroxila, grupo acilamino, grupo carboxila e grupo sulfonila. Os exemplos de substituinte adequado de “grupo cicloalquila C3-Cg substituído ou não substituído” é alquila CrC3, grupo hidroxila e grupo oxo e exemplos de substituinte adequado de “grupo heterocicloalquila substituído ou não substituído” podem 15 incluir grupo carbóxi, grupo acila, grupo alcóxi, grupo amino, grupo alquilamino, grupo acilamino, grupo hidroxila, grupo oxo, grupo etilenodióxi, grupo metila, grupo etila e grupo hidroxietila.

Em outras formas de realização, os inibidores de PDE7 úteis nos métodos da invenção têm as fórmulas: \

L N' A preparação dos compostos acima é descrita em WO 2004/111054, US 20060128728 e US 20070270419.

Em uma outra forma de realização, os inibidores de PDE7 úteis nos métodos da invenção são selecionados daqueles compostos no geral e especificamente divulgados em Patente US N0 6,903,109, US 20040082578, WO 2003/088963 e US 20060154949, cada um expressamente incorporado neste por referência em sua totalidade. Em uma forma de realização, os inibidores de PDE7 úteis nos métodos da invenção têm a fórmula: R4 . Os substituintes para os compostos acima são definidos como

segue:

(a) Ri é selecionado do grupo que consiste de:

(i) COR5, em que R5 é selecionado de H, alquila de cadeia reta ou ramificada Ci_8 opcionalmente substituído, arila opcionalmente substituído

e arilalquila opcionalmente substituído; em que os substituintes no grupo alquila, arila e arilalquila são selecionados de alcóxi Ci„8, fenilacetilóxi, hidróxi, halogênio, p-tosilóxi, mesilóxi, amino, ciano, carboalcóxi ou NR20R21 em que R20 e R2] são independentemente selecionados do grupo que consiste

de hidrogênio, alquila de cadeia reta ou ramificada Ci_8, cicloalquila C3.7, benzila ou arila;

(ii) COOR6, em que R6 é selecionado de H, alquila de cadeia reta ou ramificada C].8 opcionalmente substituído, arila opcionalmente substituído e arilalquila opcionalmente substituído; em que os substituintes no

grupo alquila, arila e arilalquila são selecionados de alcóxi Ci_8, fenilacetilóxi, hidróxi, halogênio, p-tosilóxi, mesilóxi, amino, ciano, carboalcóxi ou NR20R21 em que R20 e R21 são independentemente selecionados do grupo que consiste de hidrogênio, alquila de cadeia reta ou ramificada Ci_8, cicloalquila C3.7, benzila ou arila;

(iii) ciano;

(iv) um lactona ou lactam formados com R4;

(v) CONR7R8 em que R7 e R8 são independentemente selecionados de H, alquila de cadeia reta ou ramificada Ci.8, cicloalquila C3.7, trifluorometila, hidróxi, alcóxi, acila, alquilcarbonila, carboxila, arilalquila, arila, heteroarila e heterociclila; em que os grupos alquila, cicloalquila, alcóxi, acila, alquilcarbonila, carboxila, arilalquila, arila, heteroarila e heterociclila pode ser substituído por carboxila, alquila, arila, arila substituído, heterociclila, substituído heterociclila, heteroarila, heteroarila substituído, ácido hidroxâmico, sulfonamida, sulfonila, hidróxi, tiol, alcóxi ou arilalquila;

opcionalmente substituído, arila opcionalmente substituído, heteroarila

opcionalmente substituído, cicloalquila C3.7 opcionalmente substituído,

heterociclila opcionalmente substituído, em que o heterociclila é 1,3- dioxolano

(c) R3 é de um a quatro grupos independentemente selecionados do grupo que consiste de:

(i) hidrogênio, halo, alquila de cadeia reta ou ramificada Ci.8, arilalquila, cicloalquila C3.7, alcóxi Ci.g, ciano, carboalcóxi Ci-4,

trifluorometila, C]_g alquilsulfonila, halogênio, nitro, hidróxi, trifluorometóxi, carboxilato Ci.8, arila, heteroarila e heterociclila;

(ii) NRi0Ri 1 em que Ri0 e Rn são independentemente selecionados de H, alquila de cadeia reta ou ramificada Ci_8, arilalquila, cicloalquila C3.7, carboxialquila, arila, heteroarila ou heterociclila ou Ri0 e Rn

quando juntos com o nitrogênio ao qual estão ligados formam um grupo heterociclila ou heteroarila;

10

ou R7 e R8 quando juntos com o nitrogênio ao qual estão ligados formam um grupo heterociclila ou heteroarila;

(vi) um éster carboxílico ou bioéstere de ácido carboxílico incluindo grupos heteroarila opcionalmente substituídos;

(b) R2 é selecionado do grupo que consiste de alquila

15

ou furano ou R2 é (iii) NR12CORi3 em que R12 é selecionado de hidrogênio ou alquila e R13 é selecionado de hidrogênio, alquila, alquila substituído, alcoxila C1.3, carboxialquila, R30R31N(CH2)p, R30R3iNCO(CH2)p, arila, arilalquila, heteroarila ou heterociclila ou R12 e R13 quando juntos com o grupo carbonila 5 formam um grupo heterociclila contendo carbonila, em que R30 e R31 são independentemente selecionados de H, OH, alquila e alcóxi e p é um número inteiro de 1 a 6, em que o grupo alquila pode ser substituído por carboxila, alquila, arila, arila substituído, heterociclila, substituído heterociclila, heteroarila, heteroarila substituído, ácido hidroxâmico, sulfonamida, sulfonila, 10 hidróxi, tiol, alcóxi ou arilalquila;

(d) R4 é selecionado do grupo que consiste de (i) hidrogênio,

(ii) alquila de cadeia reta ou ramificada C^3, (iii) benzila e (iv) NR13R14, em que R13 e R14 são independentemente selecionados de hidrogênio e alquila C^6; em que os grupos alquila Ci_3 e benzila são opcionalmente substituídos

por um ou mais grupos selecionados de cicloalquila C3_7, alcóxi C^8, ciano, carboalcóxi C1 _4, trifluorometila, alquila Cj_8 sulfonila, halogênio, nitro, hidróxi, trifluorometóxi, carboxilato Ci_8, amino, NR13Ri4, arila e heteroarila e

(e) X é selecionado de S e O;

e suas formas de sais, ésteres e de pró-medicamentos farmaceuticamente aceitáveis.

Em uma forma de realização alternativa, R1, R3 e R4 são como acima e R2 é NR15R16, onde R15 e R16 são independentemente selecionados de hidrogênio, alquila de cadeia reta ou ramificada Ci_8, arilalquila, cicloalquila C3_7, arila, heteroarila e heterociclila ou R15 e R16 quando juntos com o 25 nitrogênio ao qual estão ligados formam um grupo heterociclila ou heteroarila.

Com respeito aos compostos acima, “alquila” refere-se a alquila de cadeia reta, cíclica e ramificada. O grupo alquila pode ser opcionalmente substituído por um ou mais grupos, tais como halogênio, OH, CN, mercapto, nitro, amino, alquila CrC8, alcoxila CrC8, alquiltio CrC8, alquila CrC8 amino, di(alquila CrC8)amino, (mono-, di-, tri- e per-) haloalquila, formila, carbóxi, alcoxicarbonila, alquila CrC8 CO-O-, alquila CrC8 CONH-, carboxamida, ácido hidroxâmico, sulfonamida, sulfonila, tiol, arila, 5 aril(CrC8)alquila, heterociclila e heteroarila. O termo “bioisostere” é definido como “grupos ou moléculas que têm propriedades químicas e físicas que produzem propriedades biológicas amplamente similares”. (Burger’s Medicinal Chemistry and Drug Discovery, Μ. E. Wolff, ed. Quinta Edição, Vol. 1, 1995, Pg. 785). O termo “acila” como usado neste, usado sozinho ou

como parte de um grupo de substituinte, significa um radical orgânico tendo de 2 a 6 átomos de carbono (cadeia ramificada ou reta) derivada de um ácido orgânico pela remoção do grupo hidroxila. “Arila” ou “Ar,” usado sozinho ou como parte de um grupo de substituinte, é um radical aromático carbocíclico incluindo, mas não limitado a, fenila, 1- ou 2-naftila e outros. O radical 15 aromático carbocíclico pode ser substituído pela substituição independente de

1 a 5 dos átomos de hidrogênio destes com halogênio, OH, CN, mercapto, nitro, amino, alquila CrC8, alcoxila CrC8, alquiltio C1-C8, alquila CrC8 amino, di(alquila CrC8)amino, (mono-, di-, tri- e per-) halo-alquila, formila, carbóxi, alcoxicarbonila, alquila CrC8 CO-O-, alquila C1-C8 CO-NH- ou 20 carboxamida. Os radicais arila ilustrativos incluem, por exemplo, fenila, naftila, bifenila, fluorofenila, difluorofenila, benzila, benzoiloxifenila, carboetoxifenila, acetilfenila, etoxifenila, fenoxifenila, hidroxifenila, carboxifenila, trifluorometilfenila, metoxietilfenila, acetamidofenila, tolila, xilila, dimetilcarbamilfenil e outros. O termo “heteroarila” refere-se a um 25 radical totalmente insaturado cíclico tendo de cinco a dez átomos do anel dos quais um átomo do anel é selecionado de S, O e N; 0 a 2 átomos do anel são heteroátomos adicionais independentemente selecionados de S, O e N e os átomos remanescentes do anel são carbono. O radical pode ser pode ser unido ao resto da molécula por intermédio de qualquer um dos átomos do anel. Os termos “heterociclo,” “heterocíclico” e “heterociclo” refere-se a um grupo cíclico total ou parcialmente saturado opcionalmente substituído que é, por exemplo, um sistema de anel monocíclico de 4 a 7 membros, bicíclico de 7 a

11 membros ou tricíclico de 10 a 15 membros, que tem pelo menos um 5 heteroátomo em pelo menos um átomo de carbono contendo o anel. Cada anel do grupo heterocíclico pode ter 1, 2 ou 3 heteroátomos selecionados de átomo de nitrogênios, átomos de oxigênio e átomos de enxofre, onde os heteroátomos de nitrogênio e enxofre também podem ser opcionalmente oxidados. Os átomos de nitrogênio podem ser opcionalmente quatemizados.

O grupo heterocíclico pode ser ligado a qualquer heteroátomo ou átomo de carbono.

Em outras formas de realização, os inibidores de PDE7 úteis nos métodos da invenção têm as fórmulas: A preparação dos compostos acima é descrita na Patente US N0 6.903.109, US 20040082578, WO 2003/088963 e US 20060154949.

Em uma outra forma de realização, os inibidores de PDE7 úteis nos métodos da invenção são selecionados daqueles compostos no geral 5 e especificamente divulgados em Patente US N0 6,958,328, WO 2002/085894 e US 20030212089, cada um expressamente incorporado neste por referência em sua totalidade. Estes inibidores de PDE7 têm a mesma fórmula como aquela descrita acima (por exemplo, Patente US N0 6,903,109), exceto que R1 não é um éster carboxílico ou bioéstere de ácido carboxílico. A preparação destes compostos é descrita na Patente US N0 6,958,328, US 20030212089 e WO 2002/085894.

Em uma outra forma de realização, os inibidores de PDE7 5 úteis nos métodos da invenção são selecionados daqueles compostos no geral e especificamente divulgados em WO 2006/004040 e EP 1 775 298, cada um expressamente incorporado neste por referência em sua totalidade. Em uma forma de realização, os inibidores de PDE7 úteis nos métodos da invenção têm a fórmula:

/

Ri

Os substituintes para os compostos acima são definidos como

segue:

Ri grupo alquila C3.8 substituído ou não substituído, grupo cicloalquila substituído ou não substituído ou grupo heterocicloalquila substituído ou não substituído (por exemplo, cicloexila, cicloeptila ou tetraidropiranila);

R2 é um átomo de hidrogênio ou grupo alquila C 1.3 substituído ou não substituído (por exemplo, metila);

R3 é um átomo de hidrogênio, grupo alquila C1.3 substituído ou não substituído, ou um átomo halogênio e R4 é grupo arila substituído ou não substituído, grupo

heteroarila substituído ou não substituído ou um grupo CONR5R6 ou CO2R7, em que R5 e R6 são os mesmos ou diferentes um do outro, um átomo de hidrogênio; grupo alquila Ci_6 substituído ou não substituído que pode ser substituído por um átomo halogênio, grupo arila substituído ou não substituído, grupo heteroarila substituído ou não substituído, grupo heterocicloalquila substituído ou não substituído, grupo cicloalquila substituído ou não substituído, um grupo NR7CORs, COR8, NR9Ri0; grupo cicloalquila substituído ou não substituído; grupo heterocicloalquila substituído ou não substituído; grupo arila substituído ou não substituído;

grupo heteroarila substituído ou não substituído ou grupo heterociclila substituído ou não substituído em que o anel é formado junto com o átomo de nitrogênio que liga R5 e R6;

em que R7 é um átomo de hidrogênio ou grupo alquila Ci_3 substituído ou não substituído;

em que R8 é grupo heterocicloalquila substituído ou não

substituído ou um grupo OH, OR7 ou NR9Ri0;

em que R9 e Ri0 são os mesmos ou diferentes um do outro, um átomo de hidrogênio; grupo alquila Q.3 substituído ou não substituído, grupo heterocicloalquila substituído ou não substituído; substituído ou não 15 substituído acila; um grupo SO2R7 ou grupo heterocicloalquila substituído ou não substituído em que o anel é formado junto com o átomo de nitrogênio que liga R5 e R6;

ou seus sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis.

Com respeito aos compostos acima, o termo “grupo 20 cicloalquila” significa grupo cicloalquila tendo de 3 a 8 átomos de carbono. O termo “grupo heterocicloalquila” pode ser grupo heterocíclico monocíclico ou policíclico de 3 a 7 membros contendo os mesmos ou diferentes 1 a 4 heteroátomos, tais como átomos de oxigênio, nitrogênio ou enxofre. O termo “grupo arila” pode ser grupo de hidrocarboneto aromático, que consiste de 25 anel de mono-benzeno ou que liga ou anel de benzeno condensado, tal como fenila, naítila, bifenila e outros um grupo dicíclico ou tricíclico, que consiste de anel de benzeno condensado com cicloalquila ou anel heterocíclico, tal como 1,2,3,4-tetraidronafitaleno, 2,3-diidroindeno, indolina, coumarona e outros. O termo “grupo heteroarila” pode ser grupo heteroarila monocíclico de 5 a 7 membros ou grupo heteroarila policíclico e tendo de 2 a 8 átomos de carbono com 1 a 4 heteroátomos, tais como átomos de oxigênio, nitrogênio, enxofre, em que o grupo heteroarila policíclico tem o sistema de anel condensado pela mesma ou diferente heteroarila monocíclica ou anel de 5 benzeno um ao outro; ou grupo policíclico que consistiu de grupo heteroarila condensado com anel de cicloalquila ou heterocicloalquila. Os exemplos de substituintes adequados da presente invenção podem incluir grupo alquila C1- C8 cíclico de cadeia reta, ramificada, que pode ser substituído por um ou mais metila, etila, propila, isopropila, n-butila, t-butila, cicloexila, cicloeptila, 10 metoximetila, hidroximetila, trifluorometila, grupo alcóxi Ci-C3, átomo halogênio e grupo hidroxila; grupo hidroxila; grupo ciano; grupo alcóxi substituído ou não substituído, tal como metóxi, grupo etóxi; grupo amino que pode ser substituído pelo grupo alquila CpC6 ou grupo acila tal como amino, metilamino, etilamino, dimetilamino, acilamino e outros; grupo carboxílico;

grupo éster substituído ou não substituído; grupo fosfato; grupo sulfônico; grupo arila substituído ou não substituído; grupo heteroarila substituído ou não substituído; grupo heterocicloalquila saturado ou não saturado que pode ser substituído; grupo carbamoíla substituído ou não substituído; grupo amida substituído ou não substituído; grupo tioamida substituído ou não substituído; 20 átomo halogênio; grupo nitro; grupo sulfona substituído ou não substituído; grupo sulfonilamida substituído ou não substituído; grupo oxo; grupo uréia substituído ou não substituído; grupo alquenila cíclico de cadeia reta ou ramificada, tal como etenila, propenila, cicloexenil e outros.

Em outras formas de realização, os inibidores de PDE7 úteis nos métodos da invenção têm as fórmulas: iOr

O

1O^

A preparação dos compostos acima é descrita em EP 1 775 298 e WO 2006/004040.

Em uma outra forma de realização, os inibidores de PDE7 úteis nos métodos da invenção são selecionados daqueles compostos no geral 5 e especificamente divulgados em WO 2004/111053 e US 20060128707, cada um expressamente incorporado neste por referência em sua totalidade. Em uma forma de realização, os inibidores de PDE7 úteis nos métodos da invenção têm as fórmulas: Ν\

Õ R1 O

Os substituintes para os compostos acima são definidos como

segue:

A é N ou CR4;

B é N ou CH;

Ri é grupo cicloalquila C3-8 substituído ou não substituído ou

terc-butilum grupo;

R2 é um átomo de hidrogênio ou grupo alquila Ci_6;

R3 é um átomo de hidrogênio; grupo nitro; grupo ciano; um átomo halogênio; grupo heteroarila; grupo alquila Ci.6 substituído ou não substituído; grupo alquenila C2.6 substituído ou não substituído; grupo heterocicloalquila saturado ou insaturado que é substituído ou não substituído; um grupo: NR5R6, C(0)R7, SO2R7, ORg5 NRgCOR7, NR8SO2R7;

R4 é um átomo de hidrogênio ou grupo alcóxi C1^ que é não substituído ou substituído por um ou mais átomos de flúor;

R5 e R6 são os mesmos ou diferentes um do outro, um átomo

de hidrogênio; grupo alquila Ci_6 substituído ou não substituído; grupo acila substituído ou não substituído; ou grupo heterocicloalquila substituído ou não substituído;

R7 é um átomo de hidrogênio; grupo alquila Ci^ substituído ou não substituído; grupo heterocicloalquila substituído ou não substituído; OH; OR8 ou NR5R6;

R8 é um átomo de hidrogênio, grupo alquila C 1.6 substituído ou não substituído; ou grupo heterocicloalquila substituído ou não substituído;

ou seus sais ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis.

Com respeito aos compostos acima, o termo “grupo alquila Ci-Cô” refere-se a um grupo alquila de cadeia reta ou ramificada tendo de 1 a

6 átomos de carbono e o termo “grupo alquenila C2-C6” refere-se a um grupo alquenila de cadeia reta ou ramificada tendo de 2 a 6 átomos de carbono. O termo “grupo cicloalquila” refere-se a um grupo cicloalquila tendo de 3 a 8 5 átomos de carbono tal como ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, cicloexila, cicloeptila e ciclooctila. O termo “grupo heterocicloalquila” é grupo heterocíclico de 3 a 7 membros contendo os mesmos ou diferentes 1 a 4 heteroátomos tal como átomos de oxigênio, nitrogênio ou enxofre e os exemplos incluem piperidinila, pirrolidinila, piperazinila, tetraidrofurila, 10 tetraidropiranila, morfolinila, azetidinila e homopiperazinila. O termo “grupo heteroarila” é grupo monocíclico ou policíclico de 5 a 7 membros destes contendo 2 a 8 átomos de carbono e os mesmos ou diferentes 1 a 4 heteroátomos tal como átomos de oxigênio, nitrogênio ou enxofre. Os exemplos incluem pirrol, furila, tienila, imidazolila, tiazolila, pirazinila, 15 indolila, quinolinila, isoquinolinila, tetrazolila, piridinila, pirazolila, piridazinila e pirimidinila. O “átomo halogênio” inclui flúor, cloro, bromo e iodo. Os exemplos de substituinte adequado de “grupo alquila Ci-C6 substituído ou não substituído”, “grupo cicloalquila C3-Cg substituído ou não substituído”, “grupo alquenila substituído ou não substituído”, “grupo 20 heterocicloalquila substituído ou não substituído” e “grupo acila substituído ou não substituído” incluem um grupo alquila de cadeia reta ou ramificada ou substituído ou não substituído, tal como metila, etila, propila, isopropila, nbutila, terc-butila, grupo cicloalquila substituído ou não substituído tal como ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, cicloexila e cicloeptila; grupo hidroxila; 25 grupo ciano; grupo alcóxi, tal como metóxi e etóxi; grupo amino substituído ou não substituído tal como amino, metilamino, etilamino e dimetilamino; grupo acila substituído ou não substituído tal como acetila e propionila; grupo arila substituído ou não substituído; grupo heteroarila substituído ou não substituído; grupo heterocicloalquila saturado ou insaturado que é substituído ou não substituído; grupo carbamoíla substituído ou não substituído; grupo amida substituído ou não substituído; átomo halogênio; grupo nitro; grupo sulfona substituído ou não substituído; grupo oxo; grupo uréia; um grupo alquila de cadeia reta ou ramificada ou cíclico que é substituído ou não substituído tal como etenila, propenila e cicloexenila.

Em outras formas de realização, os inibidores de PDE7 úteis nos métodos da invenção têm as fórmulas:

A preparação dos compostos acima é descrita em US 20060128707 e WO 2004/111053.

Em uma outra forma de realização, os inibidores de PDE7 úteis nos métodos da invenção são selecionados daqueles compostos no geral e especificamente divulgados em Patente US N0 6,617,357, US 20020156064 e Molecular Pharmacology, 66:1679-1689, 2004, cada um expressamente incorporado neste por referência em sua totalidade. Em uma forma de realização, os inibidores de PDE7 úteis nos métodos da invenção têm a fórmula: Os substituintes para os compostos acima são definidos como

segue:

Ri é NRaRb onde Ra e Rb são independentemente H ou alquila C i.6 ou representa um anel de 5 a 7 membros compreendido de carbono ou carbono e um ou mais heteroátomos adicionais selecionados de O, N ou S;

R2 é H, alquila Ci.8, alquila C^3-Ar, alquila Ci.3.cicloalquila C3-6, alquenila C2.8, alquenila C2-4-Ar ou alquenila C2-4-cicloalquila C3.6, em que Ar é fenila substituído ou não substituído;

R3 é NO2, halo, CN, C(O)OR7, CORi ou NRaRb onde Ra e Rb são independentemente H ou alquila C^6;

R4 é H, Oalquila Ci_6, halo, C(O)NRaRb, C(O)OR7, alquila C1.8, OCHF2, CH2OR8, alquila C,_3-Ar ou CH2NHC(O)CH3;

R5 é H, halo ou alquila;

R^ é alquila Ci.8, Oalquila Ci-4 ou halo;

R7 é hidrogênio ou um éster ou grupo formador de amida;

R8 é hidrogênio ou alquila Ci.6;

ou um sal ou solvato deste farmaceuticamente aceitável.

CH3

.SO2N(CH3)2

NO2

A preparação dos compostos acima é descrita em Patente US

N0 6,617,357, US 20020156064 e Molecular Pharmacology, 66:1679-1689, Em uma outra forma de realização, os inibidores de PDE7 úteis nos métodos da invenção são selecionados daqueles compostos no geral e especificamente divulgados em Patente US N0 6,852,720, EP 1 348 433 e WO 2003/082277, cada um expressamente incorporado neste por referência em sua totalidade. Em uma forma de realização, os inibidores de PDE7 úteis nos métodos da invenção têm a fórmula:

arila e heteroarila, aqueles grupos sendo opcionalmente substituídos por um ou mais grupos, idênticos ou diferentes, selecionados independentemente um do outro de halogênio, trifluorometila, nitro, ciano, oxo, NR4R5, CO2R4, CONR4R5, OR4, S(O)nR4, S(O)nNR4R5, tetrazolila e alquila (CpC6) que é opcionalmente substituído por 1 a 3 grupos, idênticos ou diferentes, selecionados independentemente um do outro de OR4, NR4R5 e CO2R4; em que n é um número inteiro de 0 a 2 inclusive, R4 e R5 são idênticos ou diferentes e, independentemente um do outro são um átomo de hidrogênio ou um grupo da fórmula XpRa, em que Xi é uma ligação simples ou um grupo alquileno (CrC6) e Ra é um grupo selecionado de alquila (CrC6), cicloalquila, heterocicloalquila, arila e heteroarila,

R2 é um grupo selecionado de alquila (Cj-C6), alquenila (C2- C6), alquinila (C2-C6), arila e cicloalquila,

R3 é um grupo selecionado de cicloalquila, heterocicloalquila, arila e heteroarila, estes grupos sendo opcionalmente substituídos por um ou mais grupos, idênticos ou diferentes, selecionados independentemente um do

segue:

Ri é um grupo selecionado de cicloalquila, heterocicloalquila, outro de halogênio, nitro, ciano, trifluorometila, oxo, alquila (CrC6), OR6, NR6R7, COR6, CO2R6, CONHOH, CONR6R7, S(O)mR6, S(O)mNR6R7, NR6COR7, NR6SO2R7, N(SO2R7)2, NR6CONR7R8, C(=NCN)NR6R7, NR8C(^NCN)NR6R7 e tetrazolila opcionalmente substituído por um alquila (CrC4), em que m é um número inteiro de O a 2 inclusive, R6 e R7 são idênticos ou diferentes e independentemente um do outro são um átomo de hidrogênio ou um grupo da fórmula X2Rb, em que X2 é uma ligação simples ou um grupo alquileno (CrC6), Rb é um grupo selecionado de alquila (CrC6), cicloalquila, heterocicloalquila, arila e heteroarila, estes grupos sendo opcionalmente substituídos por 1 a 3 grupos, idênticos ou diferentes, selecionados independentemente um do outro de hidróxi, alcóxi (CrC6), alquila (CrC6), amino, monoalquila (CrC6) amino, dialquila (CrC6) amino (cada alquil amino sendo idêntico ou diferente, independentemente um do outro), carbóxi, (CrC6) alcoxicarbonila e benzila e R8 representa um átomo de hidrogênio ou um grupo alquila (CrC6);

úteis nos métodos da invenção são selecionados daqueles compostos no geral e especificamente divulgados em Patente US N0 6,753,340, US 20030191167, EP 1 348 701 e WO 2003/082839, cada um expressamente incorporado neste por referência em sua totalidade. Em uma forma de realização, os inibidores de PDE7 úteis nos métodos da invenção têm a fórmula:

20

uma forma racêmica destes, um isômero destes, um N-óxido destes ou um ácido farmaeuticamente aceitável ou sal de base deste.

A preparação dos compostos acima é descrita na Patente US N0 6,852,720, EP 1 348 433 e WO 2003/082277.

Em uma outra forma de realização, os inibidores de PDE7 Os substituintes para os compostos acima são definidos como

segue:

Ria é um grupo selecionado de hidrogênio, alquila (Ci-C6) e arilalquila (Ci-C6),

5 Rib é um grupo selecionado de cicloalquila, heterocicloalquila,

arila e heteroarila, aqueles grupos sendo opcionalmente substituídos por um ou mais grupos, idênticos ou diferentes, selecionados independentemente um do outro de halogênio, trifluorometila, nitro, ciano, oxo, NR4R5, CO2R4, CONR4R5, OR4, S(O)nR4, S(O)nNR4R5, tetrazolila e alquila (C1-C6) que é 10 opcionalmente substituído por 1 a 3 grupos, idênticos ou diferentes, selecionados independentemente um do outro de OR4, NR4 R5 e CO2R4, em que n é um número inteiro de O a 2 inclusive, R4 e R5 são idênticos ou diferentes e independentemente um do outro são um átomo de hidrogênio ou um grupo da fórmula XrRa, em que Xi é uma ligação simples ou um grupo 15 alquileno (Ci-C6) e Ra é um grupo selecionado de alquila (Ci-C6), cicloalquila, heterocicloalquila, arila e heteroarila,

R2 é um grupo selecionado de alquila (Ci-C6), alquenila (C2- C6), alquinila (C2-C6), arila e cicloalquila,

R3 é um grupo selecionado de cicloalquila, heterocicloalquila, 20 arila e heteroarila, estes grupos sendo opcionalmente substituídos por um ou mais grupos, idênticos ou diferentes, selecionados independentemente um do outro de halogênio, nitro, ciano, trifluorometila, oxo, alquila (CrC6), OR6, NR6R7, COR6, CO2R6, CONHOH, CONR6R7, S(O)mR6, S(O)mNR6R7, NR6COR7, NR6SO2R7, N(SO2R7)2, NR6CONR7R8, C(=NCN)NR6R7, 25 NR8C(=N-CN)NR6R7 e tetrazolil opcionalmente substituído por um alquila (CrC4), em que m é um número inteiro de 0 a 2 inclusive, R6 e R7 são idênticos ou diferentes e independentemente um do outro são um átomo de hidrogênio ou um grupo da fórmula X2-Rb, em que X2 é uma ligação simples ou um grupo alquileno (CrC6), Rb é um grupo selecionado de alquila (CrC6), cicloalquila, heterocicloalquila, arila e heteroarila, estes grupos sendo opcionalmente substituído por 1 a 3 grupos, idênticos ou diferentes, selecionados independentemente um do outro de hidróxi, alcóxi (Ci-C6), alquila (Ci-C6), amino, mono alquilamino (C1-C6), dialquila (CrC6) amino (cada alquil amino sendo idênticos ou diferentes, independentemente um do outro), carbóxi, (C1-C6) alcoxicarbonila e benzila e Rg é um átomo de hidrogênio ou um grupo alquila (C1-C6) ou uma forma racêmica destes, um isômero destes, um N-óxido destes ou um ácido farmaeuticamente aceitável ou sal de base deste.

A preparação destes compostos é descrita em Patente US N0 6.753.340, US 20030191167, EP 1 348 701 e WO 2003/082839.

Em uma outra forma de realização, os inibidores de PDE7 úteis nos métodos da invenção são selecionados daqueles compostos no geral e especificamente divulgados em Patente US N0 6,849,638, US 20030119829 e WO 2002/088138, ada um expressamente incorporado neste por reference em sua totalidade. Em uma forma de realização, os inibidores de PDE7 úteis nos métodos da invenção têm a fórmula:

segue:

R1 e R2 são independentemente selecionados do grupo que consiste de hidrogênio, alquila de 1 a 8 átomos de carbono, alquenila de 2 a 8 átomos de carbono, alquinila de 2 a 8 átomos de carbono, cicloalquila de 3 a 7 átomos de carbono, heterociclo totalmente saturado de 2 a 6 átomos de carbono e 1 a 2 heteroátomos selecionados de NH, S e O, arila de 6 a 12 átomos de carbono, que pode ser substituído por alquila de 1 a 6 átomos de carbono, alquenila de 2 a 6 átomos de carbono, alquinila de 2 a 6 átomos de carbono, alcóxi de 1 a 6 átomos de carbono, halogênio, haloalquila de 1 a 6 átomos de carbono e diversos átomos halogênios até o nível perhalo, haloalcóxi de 1 a 6 átomos de carbono e diversos átomos halogênios até o nível perhalo, arila de 6 a 12 átomos de carbono ou heteroarila de 4 a 11 5 átomos de carbono e 1, 2 heteroátomos selecionados de N, S e O, heteroarila de 4 a 11 átomos de carbono e 1 a 2 heteroátomos selecionados de N, S e O, que pode ser substituído por alquila de 1 a 6 átomos de carbono, alquenila de 2 a 6 átomos de carbono, alquinila de 2 a 6 átomos de carbono, alcóxi de 1 a 6 átomos de carbono, halogênio, haloalquila de 1 a 6 átomos de carbono e 10 diversos átomos halogênios até o nível perhalo, haloalcóxi de 1 a 6 átomos de carbono e diversos átomos halogênios até o nível perhalo, arila de 6 a 12 átomos de carbono ou heteroarila de 4 a 11 átomos de carbono e 1 a 2 heteroátomos selecionados de N, S e O e R4-R5 ou Ri e R2 combinam para formar, junto com o átomo de nitrogênio ao qual estão ligados, um anel 15 saturado de 5 a 7 membros que pode conter de 1 a 2 heteroátomos adicionais selecionados do grupo que consiste de NH, NR8, S e O ou combinam para formar, junto com o átomo de nitrogênio ao qual estão ligados, um anel insaturado de 5 a 7 membros que pode conter 1 a 2 heteroátomos adicionais selecionados do grupo que consiste de N, S e O,

em que o dito anel saturado ou insaturado pode ser substituído

por 1 a 2 substituintes selecionados do grupo que consiste de OH, alquila de 1 a 6 átomos de carbono, alquenila de 2 a 6 átomos de carbono, alquinila de 2 a

6 átomos de carbono, cicloalquila de 3 a 7 átomos de carbono, heterociclo totalmente saturado de 2 a 6 átomos de carbono e 1 a 2 heteroátomos 25 selecionados de NH, S e O, halogênio, haloalquila de 1 a 2 átomos de carbono e diversos átomos halogênios até o nível perhalo, alcóxi de 1 a 6 átomos de carbono, haloalcóxi de 1 a 6 átomos de carbono e diversos átomos halogênios até o nível perhalo e R9-R10 ou

R1 e R2 combinam para formar, junto com o átomo de nitrogênio ao qual estão ligados, um anel saturado bicíclico de 8 a 10 membros;

R3 é selecionado do grupo que consiste de NH, S, S(=0)2 e O;

R4 é selecionado de alquila de 1 a 8 átomos de carbono, 5 alquenila de 2 a 8 átomos de carbono, alquinila de 2 a 8 átomos de carbono, C(=C), S(O)2 e C(=0)0;

R5 é selecionado de hidrogênio, OH, alquila de 1 a 8 átomos de carbono, alquenila de 2 a 8 átomos de carbono, alquinila de 2 a 8 átomos de carbono, alcóxi de 1 a 8 átomos de carbono, arila de 6 a 12 átomos de carbono, que pode ser substituído por alquila de 1 a 6 átomos de carbono, alquenila de 2 a 6 átomos de carbono, alquinila de 2 a 6 átomos de carbono, alcóxi de 1 a 6 átomos de carbono, halogênio, haloalquila de 1 a 6 átomos de carbono e diversos átomos halogênios até o nível perhalo, haloalquila de 1 a 6 átomos de carbono e diversos átomos halogênios até o nível perhalo, arila de 6 a 12 átomos de carbono e heteroarila de 4 a 11 átomos de carbono e 1 a 2 heteroátomos selecionados de N, S e O, heteroarila de 4 a 11 átomos de carbono e 1 a 2 heteroátomos selecionados de N, S e O, que pode ser substituído por alquila de 1 a 6 átomos de carbono, alquenila de 2 a 6 átomos de carbono, alquinila de 2 a 6 átomos de carbono, alcóxi de 1 a 6 átomos de carbono, halogênio, haloalquila de 1 a 6 átomos de carbono e diversos átomos halogênios até o nível perhalo, haloalcóxi de 1 a 6 átomos de carbono e diversos átomos halogênios até o nível perhalo, arila de 6 a 12 átomos de carbono e heteroarila de 4 a 11 átomos de carbono e 1 a 2 heteroátomos selecionados de N, S e O, cicloalquila de 3 a 7 átomos de carbono, heterociclo totalmente saturado de 2 a 6 átomos de carbono e 1 a 2 heteroátomos selecionados de NH, SeOe NR6R?,

R6 e R7 são independentemente selecionados de hidrogênio, alquila de 1 a 8 átomos de carbono, alquenila de 2 a 8 átomos de carbono e alquinila de 2 a 8 átomos de carbono ou R6 e R7 combinam junto com o átomo de nitrogênio ao qual estão ligados para formar um anel insaturado de 5 a 7 membros que pode conter de 1 a 2 heteroátomos adicionais selecionados de N, S e O ou para formar um anel saturado de 5 a 7 membros que pode conter de 1 a 2 heteroátomos adicionais selecionados de NH, S e O;

5 R8 é selecionado de alquila de 1 a 8 átomos de carbono,

alquenila de 2 a 8 átomos de carbono, alquinila de 2 a 8 átomos de carbono, Ri 1-R12, cicloalquila de 3 a 7 átomos de carbono, heterociclo totalmente saturado de 2 a 6 átomos de carbono e 1 a 2 heteroátomos selecionados de NH, S e O, arila de 6 a 12 átomos de carbono, que pode ser substituído por 10 alquila de 1 a 6 átomos de carbono, alquenila de 2 a 6 átomos de carbono, alquinila de 2 a 6 átomos de carbono, alcóxi de 1 a 6 átomos de carbono, halogênio, haloalquila de 1 a 6 átomos de carbono e diversos átomos halogênios até o nível perhalo, haloalcóxi de 1 a 6 átomos de carbono e diversos átomos halogênios até o nível perhalo, arila de 6 a 12 átomos de

carbono ou heteroarila de 4 a 11 átomos de carbono e 1 a 2 heteroátomos selecionados de N, S e O, heteroarila de 4 a 11 átomos de carbono e 1 a 2 heteroátomos selecionados de N, S e O, que pode ser substituído por alquila de 1 a 6 átomos de carbono, alquenila de 2 a 6 átomos de carbono, alquinila de 2 a 6 átomos de carbono, alcóxi de 1 a 6 átomos de carbono, halogênio, 20 haloalquila de 1 a 6 átomos de carbono e diversos átomos halogênios até o nível perhalo, haloalcóxi de 1 a 6 átomos de carbono e diversos átomos halogênios até o nível perhalo, arila de 6 a 12 átomos de carbono ou heteroarila de 4 a 11 átomos de carbono e 1 a 2 heteroátomos selecionados de N, S e O;

R9 é selecionado de alquila de 1 a 8 átomos de carbono,

alquenila de 2 a 8 átomos de carbono e alquinila de 2 a 8 átomos de carbono, R10 é selecionado de OH, arila de 6 a 12 átomos de carbono, que pode ser substituído por alquila de 1 a 6 átomos de carbono, alquenila de 2 a 6 átomos de carbono, alquinila de 2 a 6 átomos de carbono, alcóxi de 1 a 6 átomos de carbono, halogênio, haloalquila de 1 a 6 átomos de carbono e diversos átomos halogênios até o nível perhalo, haloalcóxi de 1 a 6 átomos de carbono e diversos átomos halogênios até o nível perhalo, arila de 6 a 12 átomos de carbono ou heteroarila de 4 a 11 átomos de carbono e 1 a 2 heteroátomos 5 selecionados de N, S e O e heteroarila de 4 a 11 átomos de carbono e 1 a 2 heteroátomos selecionados de N, S e O, que pode ser substituído por alquila de 1 a 6 átomos de carbono, alquenila de 2 a 6 átomos de carbono, alquinila de 2 a 6 átomos de carbono, alcóxi de 1 a 6 átomos de carbono, halogênio, haloalquila de 1 a 6 átomos de carbono e diversos átomos halogênios até o 10 nível perhalo, haloalcóxi de 1 a 6 átomos de carbono e diversos átomos halogênios até o nível perhalo, arila de 6 a 12 átomos de carbono ou heteroarila de 4 a 11 átomos de carbono e 1 a 2 heteroátomos selecionados de N, S e O;

Rn é selecionado de alquila de 1 a 8 átomos de carbono, alquenila de 2 a 8 átomos de carbono e alquinila de 2 a 8 átomos de carbono e

Ri2 é selecionado de cicloalquila de 3 a 7 átomos de carbono, heterociclo totalmente saturado de 2 a 6 átomos de carbono e 1 a 2 heteroátomos selecionados de NH, S e O, arila de 6 a 12 átomos de carbono, que pode ser substituído por alquila de 1 a 6 átomos de carbono, alquenila de 20 2 a 6 átomos de carbono, alquinila de 2 a 6 átomos de carbono, alcóxi de 1 a 6 átomos de carbono, halogênio, haloalquila ofl-6 átomos de carbono e diversos átomos halogênios até o nível perhalo, haloalcóxi de 1 a 6 átomos de carbono e diversos átomos halogênios até o nível perhalo, arila de 6 a 12 átomos de carbono ou heteroarila de 4 a 11 átomos de carbono e 1 a 2 25 heteroátomos selecionados de N, S e O e heteroarila de 4 a 11 átomos de carbono e 1 a 2 heteroátomos selecionados de N, S e O, que pode ser substituído por alquila de 1 a 6 átomos de carbono, alquenila de 2 a 6 átomos de carbono, alquinila de 2 a 6 átomos de carbono, alcóxi de 1 a 6 átomos de carbono, halogênio, haloalquila de 1 a 6 átomos de carbono e diversos átomos halogênios até o nível perhalo, haloalcóxi de 1 a 6 átomos de carbono e diversos átomos halogênios até o nível perhalo, arila de 6 a 12 átomos de carbono ou heteroarila de 4 a 11 átomos de carbono e 1 a 2 heteroátomos selecionados de N, S e O;

e seus sais farmaceuticamente aceitáveis.

A preparação destes compostos é descrita na Patente US N0 6.849.638, US 20030119829 e WO 2002/088138.

Em uma outra forma de realização, os inibidores de PDE7 úteis nos métodos da invenção são selecionados daqueles compostos no geral 10 e especificamente divulgados em US 2005222138 e WO 2003/064389, cada um expressamente incorporado neste por referência em sua totalidade. Em uma forma de realização, os inibidores de PDE7 úteis nos métodos da invenção têm a fórmula:

R

Os substituintes para os compostos acima são definidos como

segue:

Ri e R2 são, cada um, independentemente, (1) átomo de hidrogênio ou (2) alquila Ci_8 ou

Ri e R2 podem, quando juntos com o átomos de carbono ao qual estão ligados, formar Cicl,

em que R] e R2 não representam átomo de hidrogênio no

mesmo período;

Z é (I) CR3R4, (2) O, (3) S ou (4) uma ligação; R3 e R4 são, cada um, independentemente, (1) átomo de hidrogênio, (2) alquila Ci.8, (3) alcóxi C1^ ou (4) hidróxi ou

R3 e R4 podem, quando juntos com o átomos de carbono ao qual estão ligados formam Cicl ou C(O);

R5 e R6 são, cada um, independentemente, (1) átomo de

hidrogênio ou (2) alquila Ci_8 ou

R5 e R6 podem, quando juntos com o átomos de carbono ao qual estão ligados paa formar Cicl;

Cicl, que é representado por R1 e R2, R3 e R4, R5 e R6 é, cada um, independentemente, (1) cicloalquila C3-IO ou (2) hétero-anel monocíclico de 3 a 10 membros que compreende 1 a 2 de heteroátomos selecionados de oxigênio, nitrogênio e enxofre e Cicl pode ser substituído por Ri0;

R1O é (1) alquila C1^, (2) alcóxi Ci_8, (3) hidróxi, (4) COORn, (5) oxo, (6)S02R12 ou (7) COR13;

R11 é átomo de hidrogênio ou alquila C1^;

Ri 2 e R13 são (1) alquila C1^ ou (2) fenila que pode ser substituído por alquila Ci_8;

R7 e R^ são, cada um, independentemente, (1) átomo de hidrogênio, (2) alquila Ct_8, (3) alcóxi C1^, (4) hidróxi, (5) ciano, (6) átomo 20 halogênio, (7) COOR14, (8) CONR15R16, (9) CiC2, (10) alquenila C2.8, (11) alquinila C2_8, (12) NR51R52, (13) nitro, (14) formila, (15) acila C2_8, (16) alquila C1^ substituído por hidróxi, alcóxi C^8, CiC2, NR51R52 OuNR53-CiC2, (17) NR54COR55, (18) NR56SO2R57, (19) SO2NR58R59, (20) alquenila C2.8 substituído por COOR14, (21) CH=N-OH, (22) alquileno C1.8-NR60-(alquileno 25 C1.8)-R6i, (23) alquiltio C1^, (24) alquila C^8 substituído por 1 a 3 de átomo halogênio, (25) alcóxi C1^ substituído por 1 a 3 de átomo halogênio, (26) alcóxi Cp8 substituído por CiC2, (27) O-CiC2, (28) OSO2R65 ou (29) CH=NOR137;

R14 é átomo de hidrogênio ou alquila C1^; Ri5 e Ri6 são, cada um, independentemente átomo de hidrogênio ou alquila Ci_8;

R51e R52, Rsse Rsçsão, cada um, independentemente, átomo de hidrogênio ou alquila Q.g; R53, R54, R56 e R6O são, cada um, independentemente, átomo de hidrogênio ou alquila Ci_8; R55 é átomo de hidrogênio, alquila Ci.g ou alcóxi Ci_g; R57 é alquila Ci.8;

R6I é NR62R63 ou hidróxi;

R62 e R63 são, cada um, independentemente, átomo de hidrogênio ou alquila Ci_8;

R65 é alquila Ci_8;

Ri37 é alquila Ci.8;

(a seguir este é abrviado como anel) é CiC2 em que

o grupo que liga-se à carbonila é carbono;

R7, R8 e Cic2 representado por anel são, cada um, independentemente, (1) (fundido ou espiro)carboanel C3-I5 mono-, bi- ou tricíclico ou (2) (fundido ou espiro)heteroanel de 3 a 15 membros mono-, bi- ou tri-cíclico que compreende 1 a 4 de heteroátomos selecionados de oxigênio, nitrogênio e enxofre;

Cic2 pode ser substituído por 1 a 5 de Ri7OuRi7,;

Ri7 é (1) alquila Ci_8, (2) alquenila C2_8, (3) alquinila C2_8, (4) 20 alcóxi Ci_8, (5) alquiltio Ci_8, (6) hidróxi, (7) átomo halogênio, (8) nitro, (9) oxo, (10) carbóxi, (11) formila, (12) ciano, (13) NRi8Rjg, (14) fenila, fenóxi ou feniltio, que pode ser substituído por 1 a 5 de R20, (15) alquila Ci_8, alquenila C2_8, alcóxi Ci.8 ou alquiltio Ci_8, que pode ser substituído por 1 a 5 de R21 (16) OCOR22, (17) CONR23R24, (18) SO2NR25R26 (19) COOR27, (20) 25 COCOOR28, (21) COR29, (22) COCOR30, (23) NR31COR32, (24) SO2R33, (25) NR34SO2R35 ou (26) SOR64; Ri 8 e Ri9, R31 e R34 são, cada um, independentemente, átomo de hidrogênio ou alquila Cu8; R20 e R21 são alquila Cj.g, alcóxi C1^, hidróxi, átomo halogênio, nitro ou COOR36;

R22 e R64 são, cada um, independentemente alquila C(_8;

R23, R24, R25 e R26 são, cada um, independentemente átomo de hidrogênio, alquila Q.g ou fenila;

R27, R28, R29, R30, R32, R33 e R35 são (1) alquila Ci_8, (2) alquenila C2_8, (3) alquila Ci„8 substituído por 1 a 5 de R37, (4) difenilmetila, (5) trifenilmetila, (6) CiC3, (7) alquila Ci_8 ou alquenila C2-S substituído por CiC3,

(8) alquila Cj.8 substituído por O-CiC3, S-CiC3 ou SO2-CiC3;

R36 é átomo de hidrogênio ou alquila C^8;

R37 é alcóxi Cι-g, alquiltio Ci_8, benzilóxi, átomo halogênio, nitro ou COOR38;

R38 é átomo de hidrogênio, alquila Ci_8 ou alquenila C2„8;

Cic3 é (1) (fundidi ou espiro)carboanel C3-15 mono-, bi- ou tricíclico ou (2) (fundido ou espiro)heteroanel de 3 a 15 membros mono-, bi- ou tri-cíclico que compreende de 1 a 4 heteroátomos selecionados de oxigênio, nitrogênio e enxofre; CiC3 pode ser substituído por 1 a 5 de R39;

R39 é (1) alquila Ci_8, (2) alquenila C2_8, (3) alquinila C2.8, (4) alcóxi Ci_8, (5) alquiltio Ci.8, (6) hidróxi, (7) átomo halogênio, (8) nitro, (9) oxo, (10) ciano, (11) benzila, (12) benzilóxi, (13) alquila Ci_8, alcóxi Ci_8 ou alquiltio C^8 substituído por 1 a 5 de R40, (14) fenila, fenóxi, feniltio, fenilsulfonila ou benzoil que pode ser substituído por 1 a 5 de R4j, (15) OCOR42, (16) SO2R43, (17) NR44COR45, (18) SO2NR46R47, (19) COOR48 ou (20) NR49R5O;

R40 é átomo halogênio;

R4I é alquila Ci_8, alcóxi C]_8, átomo halogênio ou nitro;

R42, R43 e R45 são alquila Ci_8; R44 e R48 são átomo de hidrogênio ou alquila Ci_8;

R46 e R47, R49 e R50 são, cada um, independentemente, átomo de hidrogênio ou alquila Ci_8;

Rir é (I) SH, (2) NR66CHO, (3) Cic5, (4) alquila Cj.g, 5 alquenila C2-8 ou alquinila C2-s substituído por Cic5, (5) CO-(NH-resíduo de aminoácido-CO)n-OH, (6) NR67CONR68R69, (7) CONR70NR7iR72, (8) CONR73OR74, (9) CONR75COR76, (10) C(S)NR77R78, (11) CONR79C(S)COOR80, (12) NRsjCOCOOR^, (13) NR83COOR84, (14) CONR85C(S)R86, (15) OCOR87, (16) SOR88, (17) CONRs9R90, (18) 10 SO2NR91R92, (19) COOR93, (20) COCOOR94, (21) COR95, (22) COCOR96, (23) NR97COR98, (24) SO2R99, (25) NR100SO2R101 ou (26) NR102Ri03;

n é um número inteiro de 1 ou 2;

R66, R73, R755 R77, R79, Rs 1, R-83, Rss, R975 Rioo e R102 são átomo de hidrogênio ou alquila Ci_8;

R67 e R68, R70 e R7I são, cada um, independentemente, átomo de

hidrogênio ou alquila C1^8; R89 e R91 são (1) átomo de hidrogênio, (2) alquila C1-8, (3) fenila ou (4) alquila Q.g substituído por ciano ou C^8 alcóxi;

Rio3 é CiC6;

R69, R72, R74, R76, R78, R80, Rs2, Rr45 Rg6> Rs7, Rss, R90 e R92 são (1) átomo de hidrogênio, (2) alquila Ci_8, (3) alquenila C2.8, (4)

alquinila C2.8, (5) alquila Ci_8 substituído por 1 a 5 de R104, (6) difenilmetila,

(7) trifenilmetila, (8) Cic6, (9) alquila Ci_8 ou alquenila C2.8 substituído por CiC6 ou (10) alquila Ci_8 substituído por O-CiC6, S-Cic6 ou SO2-Cic6;

Rio4 é (1) alcóxi Ci_8, (2) alquiltio Ci_8, (3) benzilóxi, (4) átomo halogênio, (5) nitro, (6) COORio5, (7) ciano, (8) NR106R107, (9) NiogCORio9, (10) hidróxi, (11) SH, (12) SO3H, (13) S(O)OH, (14) OSO3H, (15) alquenilóxi C2.8, (16) alquinilóxi C2.8, (17) CORn o, (18) SO2Ri 11 ou (19) alcóxi Ci-8 ou alquiltio Ci_g substituído por hidróxi;

Ri05 é átomo de hidrogênio, alquila Ci_8 ou alquenila C2.8; R-106 e R107 são, cada um, independentemente, átomo de hidrogênio ou alquila C^8;

Rios é átomo de hidrogênio ou alquila C]_8;

R109 e R111 são alquila Ci_8;

Rno é alquila Cj.g ou átomo halogênio;

R93, R94, R95, R96, R98, R99 e R101 são (1) alquinila C2-8, (2) alquila Ci_8 substituído por R12S que pode ser substituído por 1 a 4 de R29, (3) CiC8, (4) alquila Ci_8 ou alquenila C2_8 substituído por CiC8 ou (5) alquila Ci_8 substituído por O-CiC8, S-CiC8 ou SO2-CiC8; Rj28 é (1) ciano, (2) NRi06Ri07, 10 (3) NRiO8COR1O9, (4) hidróxi, (5) SH, (6) SO3H, (7) S(O)OH, (8) OSO3H, (9) alquenilóxi C2-8, (10) alquinilóxi C2.8, (11) CORno, (12) SO2R111 ou (13) alcóxi Ci-B ou alquiltio Q.g substituído por hidróxi;

Ri29 tem o mesmo significado como Rj04;

Cic5 e Cic6 pode ser substituído por 1 a 5 de Rj12;

Ri I2 e (1) alquila Ci_8, (2) alquenila C2_g, (3) alquinila C2.8, (4)

alcóxi C1-S, (5) alquiltio C1^, (6) hidróxi, (7) átomo halogênio, (8) nitro, (9) oxo, (10) ciano, (11) benzila, (12) benzilóxi, (13) alquila Ci_8, alcóxi C}.8 ou alquiltio C^8 substituído por 1 a 5 de (14) fenila, fenóxi, feniltio ou benzoila, que pode ser substituído por 1 a 5 de (15) CORn5, (16) S02Rn6, (17) 20 NRn7COR118, (18) SO2NR119R120, (19) COOR^l, (20) NR122R123, (21) CORi24, (22) CONR125R126, (23) SH, (24) alquila Ci.8 substituído por hidróxi ou NR]27-benzoila ou (25) Cic7;

Rn3 é átomo halogênio;

Ri14 é alquila C]_8, alcóxi C]_8, átomo halogênio ou nitro;

R115, R116 e RU8são alquila Cj.8;

Ri 17, R1215 R124 e Rn7 são átomo de hidrogênio ou alquila Ci_8;

Ri 19 e Ri20, R122 e Rj23, Ri25 e R126 são, cada um, independentemente, átomo de hidrogênio ou alquila Ci_8;

Cic7 pode ser substituído por 1 a 5 grupos selecionados de (1) alquila C]„8, (2) alcóxi Ci.8, (3) átomo halogênio ou (4) nitro; Cic8 pode ser substituído por Ruo e este ainda pode ser substituído por 1 a 4 de Ri31;

Ri30 é (I) COR124, (2) CONR125R126, (3) SH, (4) alquila Cw substituído por hidróxi ou NRnybenzoila ou (5) Cic7;

R131 tem o mesmo significado como Rn2'

Cic5, CiCó, Cic7 e CiC8 são (1) (fundido ou espiro)carboanel C3.i5 mono-, bi- ou tri-cíclico ou (2) (fundido ou espiro)heteroanel de 3 a 15 membros mono-, bi- ou tri-cíclico que compreende 1 a 4 dos heteroátomos selecionados de 1 a 4 de oxigênio, nitrogênio ou enxofre;

em que quando Ri7- é Cic5, Cic5 não é fenila que pode ser substituído por 1 a 5 selecionados de alquila Ci_8, alcóxi Ci_8, hidróxi, átomo halogênio, nitro, COOH ou COO(alquila Ci.8); em que Cic7 não é fenila;

Cic4 é (1) carboanel monocíclico C5.7 ou (2) heteroanel monocíclico de 5 a 7 membros que compreende 1 a 2 de heteroátomos selecionados de oxigênio, nitrogênio e enxofre; (abreviado como linha tracejada a seguir;) e (abreviado como linha tracejada b a seguir;) são (1) uma ligação ou (2) uma ligação dupla;

R9 (1) ausente ou (2) é átomo de hidrogênio; em que

quando a linha tracejada A é uma ligação, linha tracejada B é uma ligação dupla e R9 está ausente,

quando a linha tracejada A é uma ligação dupla, linha tracejada B é uma ligação e R9 é átomo de hidrogênio e R6 está ausente, e 2- (3,3 -dimetil-3,4-diidro-(2H)-isoquinolin-1 -ilideno)-1 -feniletan-1 -ona é

excluído ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.

A preparação destes compostos é descrita em US 2005222138 e WO 2003/064389. Em uma outra forma de realização, os inibidores de PDE7 úteis nos métodos da invenção são selecionados daqueles compostos no geral e especificamente divulgados em WO 2003/057149, expressamente incorporado neste por referência em sua totalidade. Em uma forma de 5 realização, os inibidores de PDE7 úteis nos métodos da invenção têm a fórmula:

x

Os substituintes para os compostos acima são definidos como

segue:

(I) X é selecionado de halogênio e NRjR2,

(2) Y é selecionado de NR3, S e O, com a condição de que Y

não é S quando X é Cl,

(3) Ri e R2 são independentemente selecionados de hidrogênio, alquila de 1 a 8 átomos de carbono, alquenila de 2 a 8 átomos de carbono, alquinila de 2 a 8 átomos de carbono, cicloalquila de 3 a 7 átomos de carbono, policicloalquila de 5 a 9 átomos de carbono, heterocicloalquila de 2 a 6 átomos de carbono e 1 a 2 heteroátomos selecionados de NH, S e O, arila de 6 a 12 átomos de carbono, que pode ser substituído por alquila de 1 a 6 átomos de carbono, alquenila de 2 a 6 átomos de carbono, alquinila de 2 a 6 átomos de carbono, alcóxi de 1 a 6 átomos de carbono, halogênio, haloalquila de 1 a 6 átomos de carbono e diversos átomos halogênios até o nível perhalo, haloalcóxi de 1 a 6 átomos de carbono e diversos átomos halogênios até o nível perhalo, arila de 6 a 12 átomos de carbono ou heteroarila de 4 a 11 átomos de carbono e 1 a 2 heteroátomos selecionados de N, S e O, heteroarila de 4 a 11 átomos de carbono e 1 a 2 heteroátomos selecionados de N, S e O, que pode ser substituído por alquila de 1 a 6 átomos de carbono, alquenila de 2 a 6 átomos de carbono, alquinila de 2 a 6 átomos de carbono, alcóxi de 1 a 6 átomos de carbono, halogênio, haloalquila de 1 a 6 átomos de carbono e diversos átomos halogênios até o nível perhalo, haloalcóxi de 1 a 6 átomos de carbono e diversos átomos halogênios até o nível perhalo, arila de 6 a 12 átomos de carbono ou heteroarila de 4 a 11 átomos de carbono e 1 a 2 5 heteroátomos selecionados de N, S e O e R4R5 ou Ri e R2 combinam para formar, junto com o átomo de nitrogênio ao qual estão ligados, um anel saturado monocíclico de 5 a 7 membros, que opcionalmente contém 1 a 2 heteroátomos adicionais selecionados do grupo que consiste de NH, NR6, S e O, ou combinam para formar, junto com o átomo de nitrogênio ao qual estão 10 ligados, um anel saturado policíclico fundido de 6 a 10 membros, que contém opcionalmente 1 a 2 heteroátomos adicionais selecionados do grupo que consiste de NH, NR6, S e O ou combinam para formar, junto com o átomo de nitrogênio ao qual estão ligados, um anel saturado de 5 a 7 membros, que contém opcionalmente 1 a 2 heteroátomos adicionais selecionados do grupo 15 que consiste de N, S e O, em que o dito anel saturado monocíclico, anel saturado policíclico ou anel insaturado pode ser substituído por 1 a 2 substituintes selecionados do grupo que consiste de OH, alquila de 1 a 6 átomos de carbono, alquenila de 2 a 6 átomos de carbono, alquinila de 2 a 6 átomos de carbono, cicloalquila de 3 a 7 átomos de carbono, 20 heterocicloalquila de 2 a 6 átomos de carbono e 1 a 2 heteroátomos selecionados de NH, S e O, halogênio, haloalquila de 1 a 2 átomos de carbono e diversos átomos halogênios até o nível perhalo, alcóxi de 1 a 6 átomos de carbono, haloalcóxi de 1 a 6 átomos de carbono e diversos átomos halogênios até o nível perhalo e R7R8,

(4) R3 é selecionado de hidrogênio, alquila de 1 a 8 átomos de

carbono, alquenila de 2 a 8 átomos de carbono, alquinila de 2 a 8 átomos de carbono, cicloalquila de 3 a 7 átomos de carbono e heteroarila de 4 a 11 átomos de carbono e 1 a 2 heteroátomos selecionados de N, S e O, que pode ser substituído por alquila de 1 a 6 átomos de carbono, alquenila de 2 a 6 átomos de carbono, alquinila de 2 a 6 átomos de carbono, alcóxi de 1 a 6 átomos de carbono, halogênio, haloalquila de 1 a 6 átomos de carbono e diversos átomos halogênios até o nível perhalo, haloalcóxi de 1 a 6 átomos de carbono e diversos átomos halogênios até o nível perhalo, arila de 6 a 12 5 átomos de carbono ou heteroarila de 4 a 11 átomos de carbono e 1 a 2 heteroátomos selecionados de N, S e O,

(5) R4 é selecionado de alquila de 1 a 8 átomos de carbono, alquenila de 2 a 8 átomos de carbono, alquinila de 2 a 8 átomos de carbono, C(=0), S(=0)2 e C(=0)0,

(6) R5 é selecionado de hidrogênio, OH, alquila de 1 a 8

átomos de carbono, alquenila de 2 a 8 átomos de carbono, alquinila de 2 a 8 átomos de carbono, alcóxi de 1 a 8 átomos de carbono, tióxi de 1 a 8 átomos de carbono, arila de 6 a 12 átomos de carbono, que pode ser substituído por alquila de 1 a 6 átomos de carbono, alquenila de 2 a 6 átomos de carbono, 15 alquinila de 2 a 6 átomos de carbono, alcóxi de 1 a 6 átomos de carbono, halogênio, haloalquila de 1 a 6 átomos de carbono e diversos átomos halogênios até o nível perhalo, haloalcóxi de 1 a 6 átomos de carbono e diversos átomos halogênios até o nível perhalo, arila de 6 a 12 átomos de carbono ou heteroarila de 4 a 11 átomos de carbono e 1 a 2 heteroátomos 20 selecionados de N, S e O, heteroarila de 4 a 11 átomos de carbono e 1 a 2 heteroátomos selecionados de N, S e O, que pode ser substituído por alquila de 1 a 6 átomos de carbono, alquenila de 2 a 6 átomos de carbono, alquinila de 2 a 6 átomos de carbono, alcóxi de 1 a 6 átomos de carbono, halogênio, haloalquila de 1 a 6 átomos de carbono e diversos átomos halogênios até o 25 nível perhalo, haloalcóxi de 1 a 6 átomos de carbono e diversos átomos halogênios até o nível perhalo, arila de 6 a 12 átomos de carbono ou heteroarila de 4 a 11 átomos de carbono e 1 a 2 heteroátomos selecionados de N, S e O, cicloalquila de 3 a 7 átomos de carbono, heterocicloalquila de 2 a 6 átomos de carbono e 1 a 2 heteroátomos selecionados de NH, SeOe NR9R10, (7) R6 e R7 são independentemente selecionados de alquila de

1 a 8 átomos de carbono, alquenila de 2 a 8 átomos de carbono e alquinila de

2 a 8 átomos de carbono,

(8) R8 é selecionado de OH, arila de 6 a 12 átomos de carbono, que pode ser substituído por alquila de 1 a 6 átomos de carbono, alquenila de

2 a 6 átomos de carbono, alquinila de 2 a 6 átomos de carbono, alcóxi de 1 a 6 átomos de carbono, halogênio, haloalquila de 1 a 6 átomos de carbono e diversos átomos halogênios até o nível perhalo, haloalcóxi de 1 a 6 átomos de carbono e diversos átomos halogênios até o nível perhalo, arila de 6 a 12 10 átomos de carbono ou heteroarila de 4 a 11 átomos de carbono e 1 a 2 heteroátomos selecionados de N, S e O e heteroarila de 4 a 11 átomos de carbono e 1 a 2 heteroátomos selecionados de N, S e O, que pode ser substituído por alquila de 1 a 6 átomos de carbono, alquenila de 2 a 6 átomos de carbono, alquinila de 2 a 6 átomos de carbono, alcóxi de 1 a 6 átomos de 15 carbono, halogênio, haloalquila de 1 a 6 átomos de carbono e diversos átomos halogênios até o nível perhalo, arila de 6 a 12 átomos de carbono ou heteroarila de 4 a 11 átomos de carbono e 1 a 2 heteroátomos selecionados de N, S e O;

(9) R9 e Rio são independentemente selecionados de hidrogênio, alquila de 1 a 8 átomos de carbono, alquenila de 2 a 8 átomos de

carbono e alquinila de 2 a 8 átomos de carbono ou R9 e Rjo combinam junto com o átomo de nitrogênio ao qual estão ligados para formar um anel insaturado de 5 a 7 membros que pode conter de 1 a 2 heteroátomos adicionais selecionados de N, S e O ou para formar um anel saturado de 5 a 7 25 membros que pode conter de 1 a 2 heteroátomos adicionais selecionados de NH, NR11, S eO;

(10) Ri é selecionado de alquila de 1 a 8 átomos de carbono, alquenila de 2 a 8 átomos de carbono e alquinila de 2 a 8 átomos de carbono e seus sais farmaceuticamente aceitáveis. A preparação destes compostos é descrita em WO 2003/057149.

Em uma outra forma de realização, os inibidores de PDE7 úteis nos métodos da invenção são selecionados daqueles compostos no geral e especificamente divulgados em US 20030092721, Patente US N0 7,022,849, 5 WO 2002/102315 e US 2006116516, cada um expressamente incorporado neste por referência em sua totalidade. Em uma forma de realização, os inibidores de PDE7 úteis nos métodos da invenção têm a fórmula:

R1

Os substituintes para os compostos acima são definidos como

segue:

R1 é H ou alquila;

R2 é (a) heteroarila ou heterociclo, cada um dos quais pode ser opcionalmente substituído por um a três grupos Tl, T2, T3 ou (b) arila fundida a um heteroarila ou anel heterociclo em que o sistema de anel combinado pode ser opcionalmente substituído por um a três grupos Tl, T2, T3;

L é (a) OR4, C(O)R4, C(O)OR4, SR4, NR3R4, C(O)NR3R4, NR3SO2R41,, halogênio, nitro ou haloalquila; ou (b) alquila, arila, heteroarila, heterociclo ou cicloalquila qulquer um dos quais pode ser opcionalmente substituído por um a três grupos Tia, T2a e/ou T3a;

Y1, Y2 e Y3 são independentemente (a) hidrogênio, halo ou

OR4a ou (b) alquila, alquenila ou alquinila, qualquer um dos quais pode ser opcionalmente substituído por um a três grupos Tlb, T2b e/ou T3b;

R3 e R4 são independentemente H, alquila, alquenila, arila, (aril) alquila, heteroarila, (heteroaril) alquila, cicloalquila, (cicloalquil) alquila, heterociclo ou (heterociclo) alquila, qualquer um dos quais pode ser opcionalmente substituído por um a três grupos Tia, T2a e/ou T3a; ou R3 e R4 junto com o átomo de nitrogênio ao qual estão ligados podem combinar para formar um anel heterociclo de 4 a 8 membros opcionalmente substituído por um a três grupos Tia, T2a e/ou T3a;

Rta é hidrogênio, alquila, alquenila, arila, heteroarila, (aril) alquila, (heteroaril) alquila, heterociclo, (heterociclo) alquila, cicloalquila ou (cicloalquil) alquila, qualquer um dos quais pode ser opcionalmente substituído por um a três grupos Tlb, T2b e/ou T3b;

Rib é alquila, alquenila, arila, (aril) alquila, heteroarila, (heteroaril) alquila, cicloalquila, (cicloalquil) alquila, heterociclo ou (heterociclo) alquila, qualquer um dos quais pode ser opcionalmente substituído por um a três grupos Tia, T2a e/ou T3a;

Z é N ou CH;

Tl-lb, T2-2b e T3-3b são, cada um, independentemente;

(1) hidrogênio ou T6, onde T6 é (i) alquila, (hidróxi)alquila, (alcóxi)alquila, alquenila, alquinila, cicloalquila, (cicloalquil)alquila,

cicloalquenila, (cicloalquenil)alquila, arila, (aril)alquila, heterociclo, (heterociclo)alquila, heteroarila ou (heteroaril)alquila; (ii) um grupo (i) que é por si só substituído por um ou mais dos mesmos ou diferentes grupos (i); ou (iii) um grupo (i) ou (ii) que é independentemente substituído por um ou mais dos seguintes grupos (2) a (13) da definição de Tl-lb, T2-2b e T3-3b;

(2) -OH ou -OT6;

(3) -SH ou -ST6;

(4) -C(O)tH, -C(0)tT6 ou -0-C(0)T6, onde t é 1 ou 2;

(5) -SO3H, -S(0)tT6 ou S(0)tN(T9)T6;

(6) halo;

(7) ciano;

(8) nitro;

(9) -T4-NT7T8;

(10) -T4-N(T9)-T5 -NT7T8; (11) -Τ4-Ν(Τ10)-Τ5-Τ6;

(12) -Τ4-Ν(Τ10)-Τ5-Η e

(13) oxo;

Τ4 e Τ5 são, cada um, independentemente uma ligação simples, Tl lS(0)tT12-, T11C(0)T12-, T11C(S)T12, T110T12, T11ST12, Tl IOC(O)T 12, Tl IC(O)OTl2, TllC(=NT9a)T12 ou Tl IC(O)C(O)Tl2;

T7, T8, T9, T9ae TlO são:

(1) cada um independentemente hidrogênio ou um grupo fornecido na definição de T6 ou (2) T7 e T8 podem, juntos, alquileno ou alquenileno,

completar um anel saturado ou insaturado de 3 a 8 membros junto com os átomos ao qual estão ligados, cujo anel é não substituído ou substituído por um ou mais grupos listados na descrição de Tl-lb, T2-2b e T3-3b ou

(3) T7 ou T8, junto com T9, pode ser alquileno ou alquenileno completar um anel saturado ou insaturado de 3 a 8 membros junto com os

átomos de nitrogênio ao qual estão ligados, cujo anel é não substituído ou substituído por um ou mais grupos listados na descrição de Tl-lb, T2-2b e T3-3b ou

(4) T7 e T8 ou T9 e TlO junto com o átomo de nitrogênio ao qual estão ligados podem combinar para formar um grupo N=CTl3T14 onde

Tl3 e Tl4 são, cada um, independentemente H ou um grupo fornecido na definição de T6; e Tll e T12 são, cada um, independentemente uma ligação simples, alquileno, alquenileno ou alquinileno.

A preparação destes compostos é descrita em US 20030092721, Patente US N0 7.022.849, WO 2002/102315 e US 2006116516.

Em uma outra forma de realização, os inibidores de PDE7 úteis nos métodos da invenção são selecionados daqueles compostos no geral e especificamente divulgados em Patente US N0 6,838,559, US 20030100571 e WO 2002/102314, cada um expressamente incorporado neste por referência em sua totalidade. Em uma forma de realização, os inibidores de PDE7 úteis nos métodos da invenção têm as fórmulas:

I ri Y

R, e R.

Os substituintes para os compostos acima são definidos como

segue:

Ri é H ou alquila;

R2 é (a) heteroarila ou heterociclo, cada um dos quais pode ser opcionalmente substituído por um a três grupos Tl, T2, T3; (b) arila substituído por um a três grupos Tl, T2, T3 contanto que pelo menos um de 10 Tl, T2, T3 seja outro que não H; ou (c) arila fundido a um heteroarila ou anel heterociclo em que o sistema de anel combinado pode ser opcionalmente substituído por um a três grupos Tl, T2, T3;

Y é alquila, alquenila, alquinila, cicloalquila, arila, heterociclo, heteroarila, (aril)alquila ou (heteroaril) alquila qualquer um dos quais pode ser opcionalmente substituído por um a três grupos Tia, T2a, T3a;

J é (a) hidrogênio, halo ou OR* ou (b) alquila, alquenila, alquinila, arila, heteroarila, heterociclo ou cicloalquila qualquer um dos quais pode ser opcionalmente substituído por um a três grupos Tlb, T2b, T3b;

Z é (a) OR4, SR4, NR3R4, NR3SO2R4a halogênio, nitro, haloalquila; ou (b) alquila, arila, heteroarila, heterociclo ou cicloalquila qualquer um dos quais pode ser opcionalmente substituído por um a três grupos Tlc, T2c, T3c;

R3 é H, alquila, alquenila, arila, (aril)alquila, heteroarila, (heteroaril)alquila, cicloalquila, (cicloalquil)alquila, heterociclo ou (heterociclo)alquil qualquer um dos quais pode ser opcionalmente, independentemente substituído onde a valência permite um a três grupos Tlc, T2c, T3c;

R4 é alquila, alquenila, arila, (aril)alquila, heteroarila, (heteroaril)alquila, cicloalquila, (cicloalquil)alquila, heterociclo ou (heterociclo)alquil qualquer um dos quais pode ser opcionalmente, independentemente substituído onde a valência permite um a três grupos Tld, T2d ou T3d ou

R3 e R4 junto com o átomo de nitrogênio ao qual estão ligados podem combinar para formar um heterociclo de anel de 4 a 8 membros opcionalmente substituído por um a três grupos Tlc, T2c ou T3c;

R4a é hidrogênio, alquila, alquenila, arila, heteroarila, (aril)alquila, (heteroaril)alquila, heterociclo, (heterociclo)alquila, cicloalquila ou (cicloalquil)alquila qualquer um dos quais pode ser opcionalmente substituído por um a três grupos Tld, T2d ou T3d;

Tl, Tia, Tlb, Tlc, Tld, T2, T2a, T2b, T2c, T2d, T3, T3a,

T3b, T3c e T3d (a seguir abreviado como Tl-ld, T2-2d e T3-3d) são independentemente

(1) hidrogênio ou T6, onde T6 é

(a) alquila, (hidróxi) alquila, (alcóxi) alquila, alquenila, alquinila, cicloalquila, (cicloalquil) alquila, cicloalquenila, (cicloalquenil)

alquila, arila, (aril) alquila, heterociclo, (heterociclo) alquila, heteroarila ou (heteroaril) alquila;

(b) um grupo (a) que é por si só substituído por um ou mais dos mesmos ou diferentes grupos (a) ou

(c) um grupo (a) ou (b) que é independentemente substituído

por um ou mais (preferivelmente 1 a 3) dos seguintes grupos (2) a (13) da definição de Tl-ld, T2-2d e T3-3d,

(2) OH ou OT6,

(3) SH ou ST6, (4) C(0)t H, C(0)t T6 ou 0C(0)T6, onde t é 1 ou 2;

(5) S03 H, S(0)t T6 ou S(0)t N(T9)T6,

(6) halo,

(7) ciano,

(8) nitro,

(9) T4NT7 T8,

(10) T4N(T9)-T5NT7 T8,

(11) T4N(T10)-T5-T6,

(12) T4N(T10)-T5H,

(13) oxo,

T4 e T5 são, cada um, independentemente uma ligação simples, Tl l-S(0)rT12, Tl 1-C(0)-T12,

Tl 1-C(S)-T12, T11-0-T12, -T11S-T12, -Tl IOC(O)-T 12, Tl I-(O)O-T 12, -Tl lC(=NT9a)-T12 ou Ti i-C(0)-C(0)-T12;

T7, T8, T9, T9a e TlO são

(1) cada um independentemente hidrogênio ou um grupo fornecido na definição de T6 ou

(2) T7 e T8 podem ser, juntos, alquileno ou alquenileno, completar um anel saturado ou insaturado de 3 a 8 membros junto com os

átomos ao qual estão ligados, cujo anel é não substituído ou substituído por um ou mais grupos listados na descrição de Tl-ld, T2-2d e T3-3d ou

(3) T7 ou T8, junto com T9, pode ser alquileno ou alquenileno completa um anel saturado ou insaturado de 3 a 8 membros junto com o átomo de nitrogênios ao qual estão ligados, cujo anel é não substituído ou

substituído por um ou mais grupos listados na descrição de Tl-ld, T2-2d e T3-3d ou

(4) T7 e T8 ou T9 e TlO junto com o átomo de nitrogênio ao qual estão ligados podem combinar para formar um grupo N=CT 13 Tl4 onde

Tl3 e T14 são, cada um, independentemente H ou um grupo fornecido na definição de T6 e

Tll e Tl2 são, cada um, independentemente uma ligação simples, alquileno, alquenileno ou alquinileno.

A preparação destes compostos é descrita em Patente US N0 6.838.559, US 20030100571 e WO 2002/102314.

Em uma outra forma de realização, os inibidores de PDE7

úteis nos métodos da invenção são selecionados daqueles compostos no geral e especificamente divulgados em Patente US N0 7.087.614, US 20030162802 e WO 2002/192313, cada um expressamente incorporado neste por referência

alcóxi e X2 éalquila;

Z é halogênio, haloalquila, oxazolila, NR3aR4a, C(O)-N(H)alquileno-COOH ou fenila que é não substituído ou substituído por heteroarila, COtH ou COtT6;

R3a é hidrogênio ou alquila;

R4a é alquila, alcóxi, (heteroaril) alquila não substituído ou substituído, heterociclo não substituído ou substituído, (heterociclo) alquila não substituído ou substituído ou (aril) alquila em que o grupo arila é substituído por um ou dois grupos Tl e/ou T2 e/ou ainda substituído por um

em sua totalidade. Em uma forma de realização, os inibidores de PDE7 úteis nos métodos da invenção têm a fórmula:

z

Os substituintes para os compostos acima são definidos como

segue:

O X2

Ria é hidrogênio ou alquila; R2a é

W é S; Xi é grupo T3 ou R3a e R4aJunto com o átomo de nitrogênio ao qual estão ligados combinam para formar um anel heterociclo não substituído ou substituído;

R5a é um (heteroaril) alquila não substituído ou substituído ou (aril) alquil em que o grupo arila é substituído por um ou dois grupos Tl e/ou T2 e/ou ainda substituído por um grupo T3; ou R5a e R6iJunto com o átomo de nitrogênio ao qual estão ligados combinam para formar um anel heterociclo não substituído ou substituído; R6a é hidrogênio ou alquila; J é hidrogênio ou alquila; Tl e T2 são independentemente alcóxi, alcoxicarbonila, heteroarila, SO3H ou SO2Rga onde R8a é alquila, amino, alquilamino ou dialquilamino ou Tl e T2 junto com o anel arila ao qual estão ligados combinam para formar um anel bicíclico; T3 é H, alquila, halo, haloalquila ou ciano; télou2eT6é alquila, haloalquila, cicloalquila, alcóxi ou heteroarila.

A preparação destes compostos é descrita em Patente US N0 7.087.614, US 20030162802 e WO 2002/192313.

Em uma outra forma de realização, os inibidores de PDE7 úteis nos métodos da invenção são selecionados daqueles compostos no geral e especificamente divulgados em US 20030104974, WO 2002/088080 e WO 2002/088079, cada um expressamente incorporado neste por referência em sua totalidade. Em uma forma de realização, os inibidores de PDE7 úteis nos métodos da invenção têm as fórmulas:

Os substituintes para os compostos acima são definidos como

segue:

Ri é H ou alquila; R2 é heteroarila opcionalmente substituído ou 4-arila substituído; R3 é hidrogênio ou alquila; R4 é alquila, (aril)alquila opcionalmente substituído, (heteroaril)alquila opcionalmente substituído, heterociclo opcionalmente substituído ou (heterociclo)alquila opcionalmente podem combinar para formar um anel heterociclo opcionalmente substituído;

R5 é alquila, (aril)alquila opcionalmente substituído ou (heteroaril)alquila

opcionalmente substituído e R6 é hidrogênio ou alquila.

Em uma forma de realização relacionada, inibidores de PDE7

úteis nos métodos da invenção têm a fórmula:

Z

substituído; Z é halogênio, alquila, alquila substituído, haloalquila ou NR3aR4a; R3a é hidrogênio ou alquila; R4a é alquila, (heteroaril) alquila opcionalmente substituído, heterociclo opcionalmente substituído, (heterociclo) alquila opcionalmente substituído ou (aril) alquila em que o grupo arila é substituído por um ou dois grupos Tl e T2 e opcionalmente ainda substituído por um grupo T3; ou R3a e R4a junto com o átomo de nitrogênio ao qual estão ligados podem combinar para formar um anel heterociclo opcionalmente substituído; R5a é (aril) alquila em que o grupo arila é substituído por um ou dois grupos Tl e T2 e opcionalmente ainda substituído por um grupo T3; R6a é hidrogênio ou alquila; R7a é hidrogênio ou alquila; Tl e T2 são independentemente alcóxi, alcoxicarbonila, heteroarila ou SO2Rsa onde R8a é alquila, amino, alquilamino ou dialquilamino ou Tl e T2 junto com o átomos ao qual estão ligados podem combinar para formar um anel (por exemplo, benzodioxol); T3 é H, alquila, halo, haloalquila ou ciano.

Em uma outra forma de realização relacionada, os inibidores de PDE7 úteis nos métodos da invenção têm a fórmula:

substituído ou R3 e R4 junto com o átomo de nitrogênio ao qual estão ligados

R1a

em que Rla é H ou alquila; R2a é heteroarila opcionalmente em que Rlb é H ou alquila; R2b é heteroarila opcionalmente substituído; R3b é H ou alquila; R4b é (aril)alquila opcionalmente substituído; R5b é H, alquila ou C(O)(CH2)vOYR^b, onde Y é uma ligação ou C(O), R^b é hidrogênio ou alquila e v é um número inteiro de O a 2; J1 e J2 são independentemente alquileno C1-13 opcionalmente substituído, contanto que J1 e J2 não sejam ambos maiores do que C2 alquileno; X4 e X5 são substituintes opcionais ligados a quaisquer átomos de carbono disponíveis em um ou ambos de J1 e J2, independentemente selecionados de hidrogênio, OR7, NR8R9, alquila, alquila substituído, alquenila, alquenila substituído, alquinila, alquinila substituído, cicloalquila, cicloalquila substituído, arila, arila substituído, heterocicloalquila ou heteroarila; R7 é hidrogênio, alquila, alquila substituído, alquenila, alquinila, cicloalquila, cicloalquila substituído, C(0)alquila, C(0)alquila substituído, C(0)cicloalquila, C(O) cicloalquila substituído, C(0)arila, C(0)arila substituído, C(0)0-alquila, C(0)0-alquila substituído, C(0)heterocicloalquila, C(0)heteroarila, arila, arila substituído, heterocicloalquila e heteroarila e R8 e R9 são independentemente selecionados do grupo que consiste de hidrogênio, alquila, alquila substituído, cicloalquila, cicloalquila substituído, alquenila, alquinila, C(O) alquila, C(O) alquila substituído, C(O) cicloalquila, C(0)cicloalquila substituído, C(0)arila, C(0)arila substituído, C(O)O alquila, C(O)O alquila substituído, C(O) heterocicloalquila, C(O) heteroarila, S(0)2alquila, S(O)2 alquila substituído, S(O)2 cicloalquila, S(O)2 cicloalquila substituído, S(0)2arila, S(0)2arila substituído, S(O)2 heterocicloalquila, S(O)2 heteroarila, arila, arila substituído, heterocicloalquila e heteroarila ou R8 e R9 quando juntos com o átomo de nitrogênio ao qual estão ligados complete an heterocicloalquila opcionalmente substituído ou anel de heteroarila. Em uma outra forma de realização relacionada, os inibidores de PDE7 úteis nos métodos da invenção têm a fórmula:

NR3cR4c

I „ *5

R1 C

em que Ric é H ou alquila; R2c é heteroarila opcionalmente substituído; Ric é H ou alquila; R2c é (aril)alquila opcionalmente substituído e 5 X4 e X5 são substituintes opcionais ligados a quaisquer átomos de carbono disponíveis em um ou ambos de Jj e J2, independentemente selecionados de hidrogênio, OR7, NR8R9, alquila, alquila substituído, alquenila, alquenila substituído, alquinila, alquinila substituído, cicloalquila, cicloalquila substituído, arila, arila substituído, heterocicloalquila ou heteroarila.

A preparação destes compostos é descrita em US

20030104974, WO 2002/088080 e WO 2002/088079.

Em uma outra forma de realização, os inibidores de PDE7 úteis nos métodos da invenção são selecionados daqueles compostos no geral e especificamente divulgados em US 20030092908 e WO 2002/087513, cada 15 um expressamente incorporado neste por referência em sua totalidade. Em uma forma de realização, os inibidores de PDE7 úteis nos métodos da invenção têm a fórmula:

rí A ^/N_R!

N N vU2 k

Os substituintes para os compostos acima são definidos como

segue:

R^ hidrogênio ou alquila;

R2 é (a) heteroarila ou heterociclo, cada um dos quais pode ser opcionalmente substituído por um a três grupos Tl, T2, T3; (b) arila substituído por um a três grupos Tl, T2, T3 contanto que pelo menos um de Tl, T2, T3 é outro que não H; ou (c) arila fundido a um heteroarila ou anel heterociclo em que o sistema de anel combinado pode ser opcionalmente substituído por um a três grupos Tl, T2, T3;

Zé NR3R4, NR3SO2R4a, OR4, SR4, haloalquila ou halogênio;

R3 e R4 são independentemente H, alquila, alquenila, arila, (aril)alquila, heteroarila, (heteroaril)alquila, cicloalquila, (cicloalquil)alquila, heterociclo ou (heterociclo)alquila qualquer um dos quais pode ser opcionalmente, independentemente substituído onde a valência permite um a

IO três grupos Tia, T2a ou T3a ou

R3 e R4 podem, quando juntos com o átomo de nitrogênio ao qual estão ligados para formar um heterociclo ou anel de heteroarila opcionalmente substituído independentemente onde a valência permite um a três grupos Tia, T2a ou T3a;

R4a é alquila, alquenila, arila, (aril)alquila, heteroarila,

(heteroaril)alquila, cicloalquila, (cicloalquil)alquila, heterociclo ou (heterociclo)alquil qualquer um dos quais pode ser opcionalmente, independentemente substituído onde a valência permite um a três grupos Tia, T2a ou T3a;

R3b e R4b são independentemente H, alquila, alquenila, arila,

(aril)alquila, heteroarila, (heteroaril)alquila, cicloalquila, (cicloalquil)alquila, heterociclo ou (heterociclo)alquila;

R5 e

(1) hidrogênio ou ciano;

(2) alquila, alquenila, alquinila, cicloalquila,

(cicloalquil)alquila, arila, (aril)alquila, heterociclo, (heterociclo)alquila, heteroarila ou (heteroaril)alquila, qualquer um dos quais pode ser opcionalmente, independentemente substituído onde a valência permite um a três grupos Tlb, T2b ou T3b ou (3) C(O)R6, C(O)OR6, C(O)-C(O)OR ou SO2R6a;

R6 é H, alquila, alquenila, NR3bR4b, heterociclo, (heterociclo)alquila, (hidróxi)alquila, (alcóxi)alquila, (arilóxi)alquila, (NR3bR4b)alquila, heteroarila, arila ou (aril)alquila, qualquer um dos quais pode ser opcionalmente, independentemente substituído onde a valência permite uma a três grupos Tlb, T2b ou T3b;

R6a é alquila, alquenila, NR3bR4b, heterociclo, (heterociclo)alquila, (hidróxi)alquila, (alcóxi)alquila, (arilóxi)alquila, (NR3bR4b)alquila, heteroarila, arila ou (aril)alquila, qualquer um dos quais pode ser opcionalmente, independentemente substituído onde a valência permite um a três grupos Tlb, T2b ou T3b;

Ji e J2 são independentemente alquileno C^3 opcionalmente substituído, contanto que Jj e J2 não sejam ambos maiores do que alquileno C2 e

Tl-lb, T2-2b e T3-3b são, cada um, independentemente

(1) hidrogênio ou T6, onde T6 é (i) alquila, (hidróxi)alquila, (alcóxi)alquila, alquenila, alquinila, cicloalquila, (cicloalquil)alquila, cicloalquenila, (cicloalquenil)alquíla, arila, (aril) alquila, heterociclo, (heterociclo)alquila, heteroarila ou (heteroaril)alquila; (ii) um grupo (i) que é

por si só substituído por um ou mais dos mesmos ou diferentes grupos (i); ou (iii) um grupo (i) ou (ii) que é independentemente substituído por um ou mais (preferivelmente 1 a 3) dos seguintes grupos (2) a (13) da definição de Tl-lb, T2-2b e T3-3b,

(2) OH ou 0T6,

(3) SH ou ST6,

(4) C(O)tH, C(0)tT6 ou 0C(0)T6, onde t é 1 ou 2,

(5) SO3H, S(0)tT6 ou S(0)tN(T9)T6,

(6) halo,

(7) ciano, (8) nitro,

(9) T4-NT7T8,

(10) T4-N(T9)-T5-NT7T8,

(11) T4-N(T10)-T5-T6,

(12) T4-N(T10)-T5H,

(13) oxo,

T4 e T5 são, cada um, independentemente (1) uma ligação simples, (2) Tl 1-S(0)t-T12, (3) Tl 1-C(0)-T12, (4) Tl 1-C(S)-T12, (5) -Tll

O-T12, (6) T11-S-T12, (7) Tl l-0-C(0)-T12, (8) Tl I-C(O)-O-Tl2, (9) Tl ΙΙΟ C(=NT9a)-T12 ou (10) Tl I-C(O)-C(O)-Tl2,

T7, T8, T9, T9a e TIO,

(1) são, cada um, independentemente hidrogênio ou um grupo fornecido na definição de T6 ou

átomos ao qual estão ligados, cujo anel é não substituído ou substituído por um ou mais grupos listados na descrição de Tl-lb, T2-2b e T3-3b ou

átomos de nitrogênio ao qual estão ligados, cujo anel é não substituído ou substituído por um ou mais grupos listados na descrição de Tl-lb, T2-2b e T3- 3b ou

(4) T7 e T8 ou T9 e TlO junto com o átomo de nitrogênio ao qual estão ligados podem combinar para formar um grupo N=CTl 3T14 onde

T13eT14 são, cada um, independentemente H ou um grupo fornecido na definição de T6 e

A preparação destes compostos é descrita em US 20030092908 e WO 2002/087513.

Em uma outra forma de realização, os inibidores de PDE7 úteis nos métodos da invenção são selecionados daqueles compostos no geral e especificamente divulgados em US 20040127707 e WO 2002/085906, cada 5 um expressamente incorporado neste por referência em sua totalidade. Em uma forma de realização, os inibidores de PDE7 úteis nos métodos da invenção têm a fórmula:

R5

Os substituintes para os compostos acima são definidos como

segue:

R1 é l-2C-alcóxi ou l-2C-alcóxi que é completa ou

predominantemente substituído por flúor,

R2 é flúor, bromo ou cloro,

R3 e R4 são ambos hidrogênio ou ou juntos formam uma ligação adicional,

R5 é R6, CmH2m-R7, CnH2n-C(O)R8, CH(R9)2, CpH2p-Y-arill,

Ri2

OU K-26?

em que

R6 l-8C-alquila, 3-10C-cicloalquila, 3-7C-cicloalquilmetila, 3- 7C-alquenila, 3-7C-alquinila, fenil-3-4C-alquenila, 7-10C-policicloalquila, 20 naftila, piridila, pirazinila, piridazinila, pirimidila, quinazolinila, quinoxalinila, cinnolinila, isoquinolinila, quinolinila, indanila, indazolila, benzoxazolila, benzotiazolila, oxazolila, tiazolila, N-metilpiperidila, tetraidropiranila, 6-metil-3-trifluorometil-piridin-2-ila, 1,3,4-trimetil

1 H-pirazolo[3,4-b]piridin-6-ila, 3 -tiofen-2-il[ 1,2,4]-tiadiazol-5 -ila, 1,1-

dióxido-tetraidrotiofen-3-ila, l-oxo-l,3-diidro-isobenzofuran-5-ila, ácido 4- (4-il-but-l-óxi)benzóico ou um radical fenila não substituído ou substituído por R^i e/ou R62, em que

R6I é hidroxila, l-4C-alquila, 1-4C-alcóxi, nitro, ciano, halogênio, carboxila, hidroxicarbonil-l-4C-alquila, l-4C-alcóxi carbonila, 5 hidróxi-1-4C- alquila, amino, mono- ou di-l-4C-alquilamino, 1-4Calquilcarbonilamino, aminocarbonila, mono- ou di-l-4C-alquilaminocarbonila, aminosulfonila, mono- ou di-l-4C-alquilaminosulfonila, 4- metilfenilsulfonamido, imidazolila; tetrazol-5-ila, 2-(l-4C-alquil)tetrazol-5- ila ou 2-benziltetrazol-5-ila e 10 R62 é l-4C-alquila, l-4C-alcóxi, nitro ou halogênio,

R7 é hidroxila, halogênio, ciano, nitro, nitróxi(0-N02), carboxila, carboxifenilóxi, fenóxi, l-4C-alcóxi, 3-7C-cicloalcóxi, 3-7Ccicloalquilmetóxi, l-4C-alquilcarbonila, l-4C-alquilcarbonilóxi, 1-4Calquilcarbonilamino, l-4C-alcoxicarbonila, aminocarbonila, mono- ou di-1- 15 4C-alquilaminocarbonila, amino, mono- ou di-l-4C-alquilamino ou um piperidila não substituído ou substituído por R7I e/ou R72, piperazinila, pirrolidinila ou radical morfolinila, em que

R7I é hidroxila, l-4C-alquila, hidróxi-l-4C-alquila ou 1-4Calcoxicarbonila e

R72 é l-4C-alquila, carboxila, aminocarbonila ou 1-4C

alcoxicarbonila,

R8 é um fenila não substituído ou substituído por R8i e/ou R82, naftila, fenantrenila ou radical antracenila, em que

R8I é hidroxila, halogênio, ciano, 1-4C-alquila, l-4C-alcóxi, carboxila, aminocarbonila, mono- ou di-l-4C-alquilaminocarbonila, 1-4Calquilcarbonilóxi, l-4C-alcoxicarbonila, amino, mono- ou di-l-4Calquilamino, l-4C-alquilcarbonilamino ou l-4C-alcóxi que é completa ou predominantemente substituído por flúor e

R82 é hidroxila, halogênio, l-4C-alquila, l-4C-alcóxi ou 1-4Calcóxi que é completa ou predominantemente substituído por flúor,

R9 é CqH2q fenila,

Y é uma ligação ou O (oxigênio),

Arilaj é um fenila não substituído, naftila, piridila, pirazinila,

piridazinila, pirimidinila, quinazolinila, quinoxalinila, cinnolinila, isoquinolila, quinolila, coumarinila, benzimidazolila, benzoxazolila, benzotiazolila, benzotriazolila, N-benzosucciniinidila, imidazolila, pirazolila, oxazolila, tiazolila, furila, tienila, pirrolila, um radical 2-(l-4C-alquil)-tiazol4-ila ou um radical fenila substituído por Rjo e/ou R11, em que 10 R1O é hidroxila, halogênio, nitro, ciano, 1 -4C-alquila,

trifluorometila, l-4C-alcóxi, carboxila, hidroxicarbonil-l-4C-alquila, 1-4Calquilcarbonilóxi, l-4C-alcoxicarbonila, amino, mono- ou di-l-4Calquilamino, l-4C-alquilcarbonilamino, aminocarbonila, mono- ou di-l-4Calquilamino-carbonila, imidazolila ou tetrazolila e R11 é hidroxila, halogênio, nitro, l-4C-alquila ou l-4C-alcóxi,

C(O)R17, C(O)-(CH2)rR18, (CH2)r(O)-R19, Hetarill, Aril2 ou Aril3-MCalquila, Rj4 é l-4C-alquila, 5-dimetilaminonaftalin-l-ila, N(R20)R21, fenila ou fenila substituído por R22 e/ou R23, R15 é N(R20)R21, Ri6 é N(R2o)R21,

piridila, 4-etilpiperazin-2,3-dion-l-ila, 2-oxo-imidazolidin-l-ila ou N(R20)R2I, R18 é N(R20)R21, R19 é N(R20)R21, fenila, fenila substituído por R22 e/ou R23 25 e/ou R24, R20 e R21 são, independentemente um do outro hidrogênio, 1-7Calquila, 3-7C-cicloalquila, 3-7C-cicloalquilmetila ou fenila ou R2O e R21 junto e com a inclusão do átomo de nitrogênio ao qual estes são ligados, formam um anel de 4-morfolinila, 1-pirrolidinil-anel, 1-piperidinil-anel, 1-

m é um número inteiro de 1 a 8, n é um número inteiro de 1 a 4, p é um número inteiro de 1 a 6, q é um número inteiro de 0 a 2,

R12 é um radical da fórmula (a)

em que R13 é S(O)2-R14, S(O)2-(CH2)r-R15, (CH2)s-S(O)2R16,

R17 é 1-4C-alquila, hidroxicarbonil-l-4C-alquila, fenila, hexaidroazepino-anel ou um 1-piperazinil-anel da fórmula (b)

\^^5

em que R25 é pirid-4-ila, pirid4-ilmetila, l-4C-alquildimetilamino, dimetilaminocarbonilmetila, N-metil-piperidin-4-ila, 4- morfolino-etila ou tetraidrofuran-2-ilmetil-, R22 é halogênio, nitro, ciano, 5 carboxila, 1-4C-alquila, trifluorometila, l-4C-alcóxi, l-4C-alcoxicarbonila, amino, mono- ou di-l-4C-alquilamino, aminocarbonil 1-4Calquilcarbonilamino ou mono- ou di-l-4C-alquilaminocarbonila, R23 é halogênio, amino, nitro, l-4C-alquila ou l-4C-alcóxi, R24 é halogênio,

Hetaril1 é pirimidin-2-ila, tieno-[2,3-d]pirimidin-4-ila, 1-metillH-pirazolo-[3,4-d]pirimidin-4-ila, tiazolila, imidazolila ou furanila, Aril2 is piridila, fenila ou fenila substituído por R22 e/ou R23, Aril3 é piridila, fenila, fenila substituído por R22 e/ou R23, 2-oxo-2H-chromen-7-ila ou 4-(l,2,3- tiadiazol-4-il)fenila,

r é um número inteiro de 1 a 4, s é um número inteiro de 1 a 4,

R26 é um radical da fórmula (c)

em que R27 é C(O)R2S, (CH2)t-C(O)R29, (CH2)uR3O, Aril4, Hetaril2, fenilprop-l-en-3-ila ou 1 -metilpiperidin-4-ila, R28 hidrogênio, 1-4Calquila, OR31, furanila, indolila, fenila, piridila, fenila substituído por R34 e/ou R35 ou piridila substituído por R36 e/ouR37, R29 é N(R32)R33, R3O é N(R32)R33, tetraidrofuranila ou piridinila, R31 é l-4C-alquila,

R32 é hidrogênio, l-4C-alquila, 3-7C-cicloalquila ou 3-7Ccicloalquilmetila, R33 é hidrogênio, 1-4C-alquila, 3-7C-cicloalquila ou 3-7Ccicloalquilmetila ou

R32 e R33 junto e com a inclusão do átomo de nitrogênio ao qual estes são ligados, formam um 4-morfolinil-, 1-pirrolidinil-, 1-piperidinilou 1-hexaidroazepinil-anel,

Aril4 é fenila, piridila, pirimidinila, fenila substituído por R34 e/ou R35, piridila substituído por R36 e/ou R37, R34 é halogênio, nitro, 1-4Calquila, trifluorometila ou l-4C-alcóxi, R35 é halogênio ou l-4C-alquila, R36 é halogênio, nitro, l-4C-alquila, trifluorometila ou l-4C-alcóxi, R37 é halogênio ou 1-4C-alquila,

Hetaril2 é indol-4-ila, 2-metil-quinolin-4-ila, 5-cloro-6-oxo-lfenil-l,6-diidro-piridazin-4-ila, 3-fenil-l,2,4-tiadiazol-5-ila ou 3-o-tolil-1,2,4- tiadiazol-5-ila,

té um número inteiro de 1 a 4, u é um número inteiro de 1 a 4,

v é um número inteiro de 1 a 2,

X é -C(O)- ou -S(0)2- e os sais destes compostos.

A preparação destes compostos é descrita em US 20040127707 e WO 2002/085906.

Em uma outra forma de realização, os inibidores de PDE7

úteis nos métodos da invenção são selecionados daqueles compostos no geral e especificamente divulgados em Patente US N0 6.818.651, US 20040044212 e WO 2002/040450, cada um expressamente incorporado neste por referência em sua totalidade. Em uma forma de realização, os inibidores de PDE7 úteis

nos métodos da invenção têm a fórmula:

ArH

Os substituintes para os compostos acima são definidos como

segue:

Ri indica hidrogênio e R2 indica flúor, cloro, bromo, ciano, trifluorometila ou fenóxi ou Ri indica hidrogênio, flúor, cloro, bromo, trifluorometila ou ciano e R2 indica hidrogênio, R’ e R” ambos indicam hidrogênio ou juntos representam uma ligação e Ar representa um radical fenila das fórmulas IIa, IIb ou IIc

‘4

em que R3 indica hidrogênio, hidroxila, nitro, amino, carboxila, aminocarbonila, l-4C-alcóxi, trifluorometóxi, l-4C-alcoxicarbonila ou monoou di-l-4C-alquilaminocarbonila,

R4 representa l-4C-alquila, naftalenila, 5-dimetilamino naftalen-1-ila, fenileten-2-ila, 3,5-dimetilisoxazol-4-ila, 5-cloro-3- metilbenzo[b]tiofen-2-ila, 6-cloro-imidazo[2,lb]-tiazol-5-ila ou representa um radical fenila ou tiofeno que é não substituído ou é substituído por um ou mais 10 radicais idênticos ou diferentes selecionados do grupo halogênio, ciano, 1-4Calquila, trifluorometila, l-4C-alcóxi que é substituído total ou principalmente por flúor, l-4C-alcóxi, l-4C-alquilcarbonilamino, l-4C-alcoxicarbonila, fenilsulfonila ou isoxazolila, ou

um hidrato, solvato, sal, hidrato de um sal ou solvato de um sal

deste.

A preparação destes compostos é descrita em Patente US N0 6,818,651, US 20040044212 e WO 2002/040450.

Em uma outra forma de realização, os inibidores de PDE7 úteis nos métodos da invenção são selecionados daqueles compostos no geral 20 e especificamente divulgados em WO 2002/040449, expressamente incorporados neste por referência em sua totalidade. Em uma forma de realização, os inibidores de PDE7 úteis nos métodos da invenção têm a fórmula: R"

R3 R4

Os substituintes para os compostos acima são definidos como

segue:

Ri indica hidrogênio e R2 indica flúor, cloro, bromo, ciano, trifluorometila ou fenóxi ou Ri indica hidrogênio, flúor, cloro, bromo, trifluorometila ou

ciano e R2 indica hidrogênio,

R’ e R” ambos indicam hidrogênio ou juntos representam uma

ligação,

R3 indica hidrogênio, hidroxila, nitro, amino, carboxila, aminocarbonila, 1 -4C-alcóxi, trifluorometóxi, 1 -4C-alcoxicarbonila ou monoou di-l-4C-alquilaminocarbonila e R4 indica C(O)-X-R5, N(H)-C(O)-R6 ou N(H)-C(0)-N(H)-R2, em que

X indica O ou N(H),

R5 indica hidrogênio, l-4C-alquila, 3-7C-cicloalquilmetila, 15 6,6-dimetilbiciclo[3,3,l]hept-2-ila, 3-7C-alquinila, 1-4C- alquilcarbonil- 1- 4C-alquila, aminocarbonil-l-4C-alquila, furan-2-ilmetila, 2-piridin-2-ilet-lila, 2-piridin-3-ilmetila, N-metilpiperidin-3-ila, 1-benzilpiperidin-4-ila, morfolin-4-il-et-2-ila, morfolin-4-il-et-l-ila, 2-benzo[l,3]dioxol-4- il-et-l-ila, croman-4-ila, l-metoxicarbonil-2-indol-3-il-et-l-ila, 1,3-bis

metoxicarbonilprop-1-ila, l-metoxicarbonil-3-metilsulfanil-et-l-ila, 1- metoxicarbonil-2-tiazol-2-il-et-l-ila ou 4-metiltiazol-5-il-et-2-ila ou representa um radical benzil-, fenil-et-l-ila ou l-metoxicarbonil-2-fenil-et-2-il radical que é não substituído ou substituído por um ou mais radicais selecionados do grupo halogênio, trifluorometila e fenila, R6 indica 2,4-diclorofenoximetila, 2-tert-butoxicarbonilaminoet-l-ila, l-acetilpiperidin-4-ila, Arl ou Ar2-CH=CH-,

onde Arl representa 3-clorofenila, 4-trifluorometoxifenila, 3- fenoxifenila, indol-5-ila, 2-metilpiridin-5-ila, quinolin-6-ila ou 2-benzotiazol6-ila, Ar2 representa fiiran-2-ila, furan-3-ila, tiofen-2-ila, indol-3-ila, 3- trifluorometilfenila, 3-metoxifenila ou piridin-3-ila,

R7 representa l-4C-alquila, 3-7C-alquenila, 3-7C-cicloalquila,

l-etoxicarbonil-2-fenil-et-l-ila, tiofen-2-ilet-l-ila ou um radical fenila que é não substituído ou substituído por um ou mais radicais selecionados do grupo halogênio, ciano, l-4C-alquila, trifluorometila, l-4C-alquiltio, l-4C-alcóxi, 1- 4C-alcóxi que é total ou predominantemente substituído por flúor, 1-4Calquilcarbonila e fenóxi, ou um sal deste.

A preparação destes compostos é descrita em WO

2002/040449.

Em uma outra forma de realização, os inibidores de PDE7

úteis nos métodos da invenção são selecionados daqueles compostos no geral e especificamente divulgados em WO 2001/098274, expressamente incorporado neste por referência em sua totalidade. Em uma forma de realização, os inibidores de PDE7 úteis nos métodos da invenção têm a fórmula:

R1 R2 \^/ ^

R3^ NCHGk^W^S02NHR4

z.Y*x

Os substituintes para os compostos acima são definidos como

segue:

W, X, Y e Z, que podem ser os mesmos ou diferentes, cada um representa um átomo de nitrogênio ou um grupo C(R5) [em que R5 é um hidrogênio ou átomo halogênio ou um grupo alquila, haloalquila, alcóxi, haloalcóxi, hidróxi, -NO2 ou -CN] contanto que dois ou mais de W, X, Y e Z sejam grupos C(R5);

Ri, R2 e R3, que podem ser os mesmos ou diferentes, cada um é um átomo ou grupo -Li(Alki)rL2(R6)s em que L1 e L2, que podem ser os mesmos ou diferentes, é, cada um, ligação covalente ou um átomo ou grupo ligador, r é zero ou o número inteiro I, Alkj é uma cadeia alifática ou heteroalifática, s é um número inteiro de 1, 2 ou 3 e R6 é um hidrogênio ou átomo halogênio ou um grupo selecionado de alquila, -OR7 [onde R7 é um átomo de hidrogênio ou um grupo alquila opcionalmente substituído], -SR7, NR7R8 [onde R8 é como já definido por R7 e pode ser o mesmo ou diferente], grupo -NO2, CN, CO2R7, SO3H, S(O)R7, SO2R7, OCO2R7, CONR7R8, OCONR7R8, CSNR7R8, OCR7, OCOR7, N(R7)COR8, N(R7)CSR8, S(O)NR7R8, SO2NR7R8, N(R7)SO2R8, N(R7)CON(R8)(R9) [onde R9 é um átomo de hidrogênio ou um grupo alquila opcionalmente substituído], N(R7)CSN(R8)(R9), N(R7)SO2N(R8)(R9), C(R7)=NO(R8), cicloalifático, heterocicloalifático, arila ou heteroarila]; contanto que um ou mais de Ri, R2 ou R3 seja um outro substituinte que não um átomo de hidrogênio;

R4 representa um grupo fenila opcionalmente substituído, 1- ou 2-naftila, piridila, pirimidinila, piridazinila ou pirazinila e os seus sais, solvatos, hidratos e N-óxidos.

A preparação destes compostos é descrita no WO

2001/098274.

Em uma outra forma de realização, os inibidores de PDE7 úteis nos métodos da invenção são selecionados daqueles compostos no geral 25 e especificamente divulgados em WO 2001/074786, expressamente incorporado neste por referência em sua totalidade. Em uma forma de realização, os inibidores de PDE7 úteis nos métodos da invenção têm a fórmula: Os substituintes para os compostos acima são definidos como segue:

Ri representa um grupo arila ou heteroarila;

A, B, P e E, que podem ser os mesmos ou diferentes, cada um representa um átomo de nitrogênio ou um grupo C(R2) [em que R2 é um hidrogênio ou átomo halogênio ou um grupo alquila, haloalquila, alcóxi, haloalcóxi, hidróxi, -NO2 ou -CN] contanto que dois ou mais de A, B, D e E sejam grupos C(R2); X representa um átomo de oxigênio ou de enxofre ou um grupo N(R3) em que R3 é um átomo de hidrogênio ou um grupo alquila;

Q, R, S e T, que podem ser os mesmos ou diferentes, cada um representa um átomo de nitrogênio ou um grupo C(R4) [em que R4 é um átomo ou grupo -Li(Alki)rL2(R5)s em que L, e L2, que podem ser os mesmos ou diferentes, é, cada um, uma ligação covalente ou um átomo ou grupo ligador, r é zero ou o número inteiro 1, alquila é uma cadeia alifática ou heteroalifática, s é um número inteiro de 1, 2 ou 3 e R5 é um hidrogênio ou átomo halogênio ou um grupo selecionado de alquila, OR6 [onde R6 é um átomo de hidrogênio ou um grupo alquila opcionalmente substituído], SR6, NR6R7 [onde R7 é como já definido por R6 e pode ser o mesmo ou diferente], NO2, CN, CO2R6, SO3H, S(O)R6, SO2R6, OCO2R6, CONR6R7, OCONR6R7, CSNR7R7, OCR6, OCOR6, N(R6)COR7, N(R6)CSR7, S(O)NR6R7, SO2NR6R7, N(R6)SO2R7; N(R6)CON(R7)(R8) [onde R8 é um átomo de hidrogênio ou um grupo alquila opcionalmente substituído], N(R6)CSN(R7)(R8), N(R6)SO2N(R7)(R8), C(R6)=NO(R7) cicloalifático, heterocicloalifático, arila ou grupo heteroarila] contanto que dois ou mais de Q, R, S e T sejam grupos C(R4) e os seus sais, solvatos, hidratos e N-óxidos.

A preparação destes compostos é descrita em WO

2001/074786. Em uma outra forma de realização, os inibidores de PDE7 úteis nos métodos da invenção são selecionados daqueles compostos no geral e especificamente divulgados em WO 2000/068230, expressamente incorporado neste por referência em sua totalidade. Em uma forma de 5 realização, os inibidores de PDE7 úteis nos métodos da invenção têm a fórmula:

O

Os substituintes para os compostos acima são definidos como

segue:

X-Y-Z representa NR4-C=N ou N=C-NR4;

Ri representa H, alquila, cicloalquila, cicloalquilalquila,

arilalquila, heteroarilalquila ou heterocicloalquila;

R2Tepresenta OR8, NR8R9, SRi3, alquila ou CF3;

R3 representa halogênio, alquila, CF3 ou OR8;

R4, que pode ser ligado a X ou Z, é um resísuo selecionado de

em a ligação ocorre através de qualquer posição no anel

saturado, contanto que a ligação não esteja em uma posição adjacente a V e o anel saturado possa ser substituído em qualquer posição com um ou mais R6;

A, B, D e E são os mesmos ou diferentes e cada um representa ClnRs, N ou N-O; V representa O, S, NR7 ou C(L1mRi4)(L2nRi4);

QeW são os mesmos ou diferentes e cada um representa

CLnR5 ou N; T representa O, S ou NR7;

I 2

LeL são os mesmos ou diferentes e cada um representa

C(R15)2;

m e n são os mesmos ou diferentes e cada um representa 0, 1,

2, 3, 4 ou 5;

os R5S são os mesmos ou diferentes e cada um representa H, halogênio, alquila, cicloalquila, OR8, NR8R9, CO2Rio, CONR1 iRi2, CONHOH, SO2NR11R12, SON11R12, COR13, SO2R13, SOR13, SR13, CF3, NO2 ou CN;

Ró representa H, alquila, cicloalquila, OR8, NR8R9, CO2R1O,

CONR11R12, SO2NR11R12, SON11R12, COR13, SO2R13, SOR13, SR13, CF3, CN ou =O;

R7 representa H ou alquila;

R8 representa H, alquila, cicloalquila, cicloalquilalquila, arila, arilalquila, heteroarila, heteroarilalquila, heterociclo ou heterocicloalquila;

R9 representa R8 ou alquilcarbonila, alcoxicarbonila, alquilsulfonila, cicloalquilcarbonila, cicloalcoxicarbonila, cicloalquilsulfonila, cicloalquilalquilcarbonila, cicloalquilalcoxicarbonila,

cicloalquilalquilsulfonila, arilcarbonila, arilsulfonila, heteroarilcarbonila, heteroarilsulfonila, heterociclocarbonila, heterociclosulfonila,

arilalquilcarbonila, arilalcoxicarbonila, arilalquilsulfonila,

heteroarilalquilcarbonila, heteroarilalcoxicarbonila, heteroarilsulfonila, heterociclo-alquilcarbonila, heterocicloalcoxicarbonila ou

heterocicloalquilsulfonila; ou NR8R9 representa um anel heterocíclico, tal como morfolina;

R1O representa H, alquila, cicloalquila, cicloalquilalquila, arilalquila, heteroarilalquila ou heterocicloalquila;

R11 e R12 são os mesmos ou diferentes e são, cada um, R8 ou NR11R12Tepresenta um anel heterocíclico, tal como morfolina; Ri 3 representa alquila, cicloalquila, cicloalquilalquila, arila, arilalquila, heteroarila, heteroarilalquila, heterociclo ou heterocicloalquila;

os Ri4S são os mesmos ou diferentes e são, cada um, selecionados de H alquila, cicloalquila, OR8, NR8R9, CO2Rio, CONRi 1R12, CONHOH, SO2NR11R12, SON11R12, COR13, SO2R13, SOR13, SR13, CF3, NO2 e CN, contanto que quando tanto m quanto n representa 0, se um R14 for OR8, NR8R9 ou SR13, o outro não será OR8, NR8R9 ou SR13 e R15 representa H, alquila ou F ou um sal farmaceuticamente aceitável deste.

A preparação destes compostos é descrita em WO

2000/068230, incorporado neste por referência em sua totalidade.

Em uma outra forma de realização, os inibidores de PDE7 úteis nos métodos da invenção são selecionados daqueles compostos no geral e especificamente divulgados em US 20040106631, EP 1 400 244 e WO 15 2004/026818, cada um expressamente incorporado neste por referência em sua totalidade. Em uma forma de realização, os inibidores de PDE7 úteis nos métodos da invenção têm a fórmula:

Os substituintes para os compostos acima são definidos como

segue:

m é 1, 2 ou 3; R1 é metila, cloro, bromo ou fluoro; R2 é -Ql

Q2-Q3-Q4 ou alquila (C1-C6), a dita alquila (C1-C6) é substituída por um a três OR4, COOR4, NR4R5, NRC(O)R4, C(O)NR4R5 ou SO2NR4R5;

R4 é alquila (CrC6) substituído por um a três F, CN, S(=0)R6, SO3H, SO2R6, SRS, C(O)-NH-SO2-CH3, C(O)R7, NR5C(O)R7, NR5SO2R6, C(=0)NR7R8, 0-C(=0)NR7R8 ou SO2NR7R8; R5 é H ou alquila (CrC6) opcionalmente substituído por um a três F, CN, S(=0)R6, SO3H, SO2R6, SRS, C(O)-NH-SO2-CH3, C(=0)R7, NR5C(zO)R7, NR5SO2R6, C(O)NR7R8, O-C(O)NR7R8 ou SO2NR7R8 ou o dito alquila (CrC6) é (1) substituído por um a três OC(O)R4a, SR4a, S(O)R3,

C(=NR9)R4a, C(^NR9)-NR4aR5a, NR-C(=NR9)-NR4aR5a, NRCOOR4a, NRC(^O)NR4aR5a, NR-SO2-NR4aR5a, NR-C(=NR9)-R4a ou NR-SO2-R3; e

(2) opcionalmente substituído por um ou dois OR4a, COOR4a, C(O)-R4a, NR4aR5a, NRC(O)R4a, C(=0)NR4R5a ou SO2NR4aR5a;

R9 é H, CN, OH, OCH3, SO2CH3, SO2NH2 ou alquila (C1-C6) e

R3 é alquila (CrC6) opcionalmente substituído por um a três F, CN, S(O)R6, SO3H, SO2R6, C(O)-NH-SO2-CH3, OR7, SRS, COOR7, C(O)R7, OC(O)NR7R8, NR7R8, NR5C(O)R7, NR5SO2R6, C(O)NR7R8 ou SO2NR7R8;

R4a e R5a são os mesmos ou diferentes e são H ou alquila (C1- C6) opcionalmente substituído por um a três F, CN, S(=0)R6, SO3H, SO2R6, C(O)-NH-SO2-CH3, OR7, SR7, COOR7, C(O)R7, O-C(O)NR7R8, NR7R8,

NR5C(O)R7, NR5SO2R6, C(O)NR7R8 ou SO2NR7R8;

1 2 Q é uma ligação simples ou alquileno (CrC6); Q é um

heterociclila de 4 a 6 membros saturado que compreende um ou dois O ou N;

Q3 é alquileno (CrC6); Q4 é um heterociclila de 4 a 8 membros, aromático ou

não aromático, que compreende 1 a 4 O, S, S(O), SO2 ou N, o dito

heterociclila sendo opcionalmente substituído por um a três OR, NRR5, -CN

ou alquila (CrC6);

R é H ou alquila (CrC6);

R6 é alquila (CrC6) opcionalmente substituído por um ou dois

OR5;

R7 e R8 são os mesmos ou diferentes e são H ou alquila (CrC6) opcionalmente substituído por um ou dois OR5;

R9 é H, CN, OH, OCH3, SO2CH3, SO2NH2 ou alquila (C1-C6); R’ é H ou alquila (CrC6) e R” é H ou alquila (CrC6);

2 1

contanto que (1) o átomo de Q ligado a Q é um átomo de carbono e (2) o átomo de Q4 ligado a Q3 é um átomo de carbono;

ou uma forma racêmica, isômero, derivado deste farmaceuticamente aceitável.

A preparação destes compostos é descrita em US 20040106631, EP 1 400 244 e WO 2004/026818.

Em uma outra forma de realização, os inibidores de PDE7 úteis nos métodos da invenção são selecionados daqueles compostos no geral 10 e especificamente divulgados em Patente US N0 6.936.609 e US 20040249148, cada um expressamente incorporado neste por referência em sua totalidade. Em uma forma de realização, os inibidores de PDE7 úteis nos métodos da invenção têm a fórmula:

Ri

R2 .

Os substituintes para os compostos acima são definidos como

segue:

R1 representa arila (C6-C10), que é opcionalmente substituído de maneira idêntica ou diferente pelos radicais selecionados do grupo que consiste de halogênio, formila, carbamoila, ciano, hidroxila, trifluorometila, trifluorometóxi, nitro, alquila (CrC6) ou alcóxi (C1-C6) e opcionalmente por 20 um radical da fórmula SO2NRSR6, em que R5 e R6 independentemente um do outro indicam hidrogênio ou alquila (C1-C6) ou NR5R6 indica heterociclila de

4 a 8 membros, ligado por intermédio de um átomo de nitrogênio, opcionalmente substituído de maneira idêntica ou diferente pelos radicais selecionados do grupo que consiste de oxo, halogênio, alquila (C1-C6) e acila (C1-C6),

N

AtrN-/ R2 representa um radical de hidrocarboneto saturado ou parcialmente insaturado tendo de I a 10 átomos de carbono,

R3 representa metila ou etila,

A representa O, S ou NR7, em que R7 indica hidrogênio ou alquila (CrC6) opcionalmente substituído por alcóxi (CrC3),

E representa um ligação ou alcanodiila (CrC3),

R4 representa arila (C6-Ci0) ou heteroarila de 5 a 10 membros, onde arila e heteroarila são opcionalmente substituídos de maneira idêntica ou diferente por radicais selecionados do grupo que consiste de halogênio, 10 formila, carboxila, carbamoila, -SO3H, aminosulfonila, ciano, hidroxila, trifluorometila, trifluorometóxi, nitro, alquila (CrC6), alcóxi (CrC6), 1,3- dioxa-propano-l,3-diila, alquiltio (CrC6), alquilsulfinila (CrC6) e alquilsulfonila (CrC6), -NR8R9 e opcionalmente, heteroarila ou fenila, 5 a 6 membros substituído por metila 15 em que R8 e R9 independentemente um do outro indicam

hidrogênio, alquila (CrC6) ou acila (CrC6) ou sal deste.

A preparação destes compostos é descrita na Patente US N0

úteis nos métodos da invenção são selecionados daqueles compostos no geral e especificamente divulgados em WO 2006/092692, expressamente incorporados neste por referência em sua totalidade. Em uma forma de realização, os inibidores de PDE7 úteis nos métodos da invenção têm as fórmulas:

6.936.609 e US 20040249148.

Em uma outra forma de realização, os inibidores de PDE7

(CH2)n

25

em que n é um número inteiro de 1 a 4 e quando existirem estereocentros, cada centro pode ser independentemente R ou S. A preparação destes compostos é descrita em WO

2006/092692.

Em uma outra forma de realização, os inibidores de PDE7 úteis nos métodos da invenção são selecionados daqueles compostos no geral 5 e especificamente divulgados em US 2006229306 e WO 2004/065391, cada um expressamente incorporado neste por referência em sua totalidade. Em uma forma de realização, os inibidores de PDE7 úteis nos métodos da invenção têm a fórmula:

Os substituintes para os compostos acima são definidos como segue: Ri e R2 cada um

(1) independentemente representa:

(a) um átomo de hidrogênio;

(b) um grupo selecionado de grupos alquila, alquenila e alquinila, em que cada grupo alquila, alquenila e alquinila é, de maneira

independente opcionalmente substituído por um ou mais substituintes selecionados de átomo halogênios, grupos hidróxi, alcóxi, arilóxi, alquiltio, hidroxicarbonila, alcoxicarbonila, mono- and di-alquilaminoacila, oxo, amino e mono- e di-alquilamino ou

(c) um grupo da fórmula (CH2)nR6, em que n é um número inteiro de 0 a 4 e R6 representa um grupo cicloalquila ou cicloalquenila;

(2) Ri e R2 formam, junto com o átomo de nitrogênio ao qual estão ligados, um anel de 3 a 8 membros que compreende de 1 a 4 heteroátomos selecionados de nitrogênio, oxigênio e enxofre, cujo anel é saturado ou insaturado e opcionalmente substituído por um ou mais

substituintes selecionados de átomos halogênios, grupos alquila, hidróxi, alcóxi, acila, hidroxicarbonila, alcoxicarbonila, alquilenodióxi, amino, monoe di-alquilamino, mono- e di-alquilaminoacila, nitro, ciano e trifluorometila;

R3 é um grupo da fórmula (CH2)n-G, em que n é um número inteiro de 0 a 4 e

G representa um arila monocíclico ou bicíclico ou grupo heteroarila que compreende de zero a quatro heteroátomos cujo grupo é opcionalmente substituído por um ou mais substituintes selecionados de:

(1) átomo halogênios;

(2) alquila e alquileno grupos, em que cada grupo alquila e alquileno é independentemente substituído opcionalmente por um ou mais

substituintes selecionados de átomos halogênios e

(3) grupos fenila, hidróxi, hidroxialquila, alcóxi, alquilenodióxi, arilóxi, alquiltio, amino, mono- and di-alquilamino, acilamino, nitro, acila, hidroxicarbonila, alcoxicarbonila, ciano, difluorometóxi e trifluorometóxi;

R4 representa um átomo de hidrogênio, um grupo alquila ou

arila.

A preparação destes compostos é descrita em US 2006229306 e WO 2004/065391.

Outros compostos úteis nos métodos da invenção incluem 20 derivados de imidazopiridina (WO 2001/34601), derivados de diidropurina (WO 2000/68203), derivados de pirrol (WO 2001/32618), derivados de benzotiopiranoimidazolona (DE 19950647), compostos heterocíclicos (WO 2002/87519), derivados de guanina (Bioorg. Med. Chem. Lett. 11:1081, 2001) e derivados de benzotienotiadiazina (Eur. J. Med. Chem. 36:333, 2001). A 25 divulgação de cada pedido de patente publicado e artigo de jornal listado acima é expressamente incorporado neste por referência em sua totalidade.

Inibidores de Polipeptídeo ou Peptídeo

Em algumas formas de realização, o agente inibidor de PDE7 compreende inibidores de polipeptídeo ou de pepetídeo PDE7 isolados, incluindo inibidores de peptídeo naturais isolados e inibidores de peptídeo sintéticos que inibe atividade de PDE7. Como usado neste, o termo “inibidores de polipeptídeo ou de pepetídeo PDE7 isolados” refere-se a polipeptídeos ou peptídeos que inibe a clivagem dependente de PDE7 de 5 cAMP pela ligação ao PDE7, competindo com o PDE7 pela ligação a um substrato e/ou interação direta com PDE7 para inibir a clivagem dependente de PDE7 de cAMP, que são substancialmente puros e são essencialmente isentos de outras substâncias com as quais estes podem ser encontrados em estado natural até o ponto prático e apropriado para seu uso pretendido.

Os inibidores de peptídeo foram usados de maneira bem

sucedida in vivo para interferir com as interações proteína-proteína e locais catalíticos. Por exemplo, os inibidores de peptídeo para as moléculas de adesão estruturalmente relacionadas com LFA-I foram recentemente aprovados para o uso clínico em coagulopatias (Ohman, E.M., et al., 15 European Heart J. 16:50-55, 1995). Os peptídeos lineares curtos (< 30 aminoácidos) foram descritos prevenindo ou interferindo com a adesão dependente de integrina (Murayama, O., et al., J. Biochem. 120:445-51, 1996). Os peptídeos mais longos que variam em comprimento de 25 a 200 resíduos de aminoácido, também foram usados de maneira bem sucedida para 20 bloquear a adesão dependente de integrina (Zhang, L., et al., J. Biol. Chem. 271(47):29953-57, 1996). No geral, os inibidoresd e peptídeo mais longos tem afinidades mais altas e/ou higher affinities e/ou off-rates menores do que os peptídeos mais curtos e podem ser, portanto, inibidores mais potentes. Os inibidores de peptídeo cíclico também foram mostrados ser inibidores 25 eficazes de integrinas in vivo para o tratamento de doença inflamatória humana (Jackson, D.Y., et al., J. Med. Chem. 40:3359-68, 1997). Um método de produzir os peptídeos cíclicos envolvem a síntese de peptídeos em que os aminoácidos terminais do peptídeo são cisteínas, desse modo permitindo que o peptídeo exista em uma forma cíclica pela ligação de bissulfeto entre os aminoácidos terminais, que foi mostrado melhorar a afinidade e a vida média in vivo para o tratamento de neoplasmas hematopoiéticos (por exemplo, Patente US N0 6,649,592 concedida a Larson).

Inibidores de Peptídeo PDE7 Sintético Os peptídeos inibidores de PDE7 úteis nos métodos da

invenção são exemplificados por seqüências de aminoácido que imitam as regiões alvo importantes para a atividade de enzima PDE7, tal como o domínio catalítico de PDE7. PDE7A e PDE7B têm uma identidade de 70 % no domínio catalítico. (Hetman, J.M., et al., PNAS 97(l):472-476, 2000.) o 10 domínio catalítico de PDE7A1 e de resíduos de aminoácido 185 a 456 da SEQ ID N°: 2. O domínio catalítico de PDE7A2 é do resíduo de aminoácido 211 a 424 de SEQ ID N°: 4. O domínio catalítico de PDEB é do resíduo de aminoácido 172 a 420 da SEQ ID N°: 6. Os peptídeos inibidores úteis na prática dos métodos da invenção variam em tamanho de cerca de 5 15 aminoácidos a cerca de 250 aminoácidos. Também pode-se usar a modelagem molecular e o projeto molecular racional para gerar e avaliar quanto aos peptídeos que imitam a estrutura molecular das regiões catalíticas de PDE7 e inibem a atividade de enzima de PDE7. As estruturas moleculares usadas para a modelagem incluem as regiões de CDR de anticorpos monoclonais anti20 PDE7. Os métodos para identificar peptídeos que ligam-se a um alvo particular são bem conhecidos na técnica. Por exemplo, a impressão molecular pode ser usada para de novo construção de estruturas macromoleculares, tais como peptídeos que ligam-se a uma molécula particular. Ver, por exemplo, Shea, K.J., “Molecular Imprinting of Sinthetic 25 Network Polymers: The De Novo Synthesis of Macromolecular Binding and Catalytic Sties,” TRIP 2(5):[sem números de páginas], 1994.

Como um exemplo ilustrativo, um método de preparação de imitações de PDE7 que ligam peptídeos é como segue. Os monômeros funcionais de uma região de ligação de um anticorpo anti-PDE7 que apresenta inibição de PDE7 (o padrão) são polimerizados. O padrão é então removido, seguido pela polimerização e uma segunda classe de monômeros no vazio deixado pelo padrão, para fornecer uma nova molécula que apresenta uma ou mais propriedades desejadas que são similares ao padrão. Além da preparação 5 dos peptídeos desta maneira, outras moléculas de ligação de PDE7 que são agentes inibidores de PDE7, tais como polissacarídeos, nucleosídeos, medicamentos, nucleoproteínas, lipoproteínas, carboidratos, glicoproteínas, esteróides, lipídeos e outros materiais biologicamente ativos, também podem ser preparados. Este método é útil para projetar uma ampla variedade de 10 imitações biológicas que são mais estáveis do que suas contrapartes naturais porque estes são tipicamente preparados pela polimerização de radical livre de monômeros funcionais, resultando em um composto com uma cadeia principal não biodegradável.

Os peptídeos inibidores de PDE7 podem ser preparados 15 usando-se as técnicas bem conhecidas na técnica, tal como a técnica sintética de fase sólida inicialmente descrita por Merrifield em J. Amer. Chem. Soc. 85:2149-2154, 1963. A síntese automatizada pode ser atingida, por exemplo, usando-se o sintetizador de peptídeo Applied Biosystems 43IA (Foster City, Calif.) de acordo com as instruções fornecidas pelo fabricante. Outras técnicas 20 podem ser observadas, por exemplo, em Bodanszky, M., et al., Peptide Sinthesis, segunda edição, John Wiley & Sons, 1976, bem como em outros trabalhos de referência conhecidos por aqueles habilitados na técnica. Os peptídeos também podem ser preparados usando-se as técnicas de engenharia genética padrão conhecidas por aqueles habilitados na técnica.

Um peptídeo inibidor de PDE7 candidato pode ser testado

quanto à capacidade de funcionar como um agente inibidor de PDE7 em um de diversos ensaios, incluindo, por exemplo, um ensaio de PDE7 fosfodiesterase como descrito no Exemplo 1.

Os Inibidores de Expressão de PDE7 Em algumas formas de realização dos métodos da invenção, o agente inibidor de PDE7 é um inibidor de expressão de PDE7 capaz de inibir clivagem de cAMP dependente de PDE7 (PDE7A, PDE7B ou both). Na prática desta forma de realização da invenção, inibidores de expressão de 5 PDE7 representativos incluem moléculas de ácido nucléico anti-sentido de PDE7 (tal como mRNA anti-sentido, DNA anti-sentido ou oligonucleotídeos anti-sentido), as ribozimas de PDE7 e moléculas de RNAi de PDE7.

As moléculas de RNA e DNA anti-sentido atua para bloquear diretamente a tradução do mRNA de PDE7 pela hibridização ao mRNA de PDE7 e evitando a tradução da proteína de PDE7. Uma molécula de ácido nucléico anti-sentido pode ser construída em diversas maneiras diferentes contanto que este é capaz de interferir com a expressão de PDE7. Por exemplo, uma molécula de ácido nucléico anti-sentido pode ser construída pela inversão da região codificadora (ou uma porção deste) de PDE7A1 cDNA (SEQ ID N°: 1), PDE7A2 cDNA (SEQ ID N°: 3) ou PDE7B cDNA (SEQ ID N°: 5) com relação à sua orientação normal para a transcrição para permitir a transcrição de seu complemento. Os métodos para projetar e administrar oligonucleotídeos anti-sentido são bem conhecidos na técnica e são descritos, por exemplo, em Mautino et al., Hum Gene Ther 13:1027-37, 2002 e Pachori et al., Hypertension 39:969-75, 2002, cada um dos quais é, dese modo, incorporado por referência.

A molécula de ácido nucléico anti-sentido é usualmente substancialmente idêntico a pelo menos uma porção do gene ou genes alvo. O ácido nucléico, entretanto, não necessita ser perfeitamente idêntica para inibir 25 a expressão. No geral, a homologia mais alta pode ser usada para compensar o uso de uma molécula de ácido nucléico anti-sentido mais curta. A identidade percentual mínima é tipicamente maior do que cerca de 65 %, mas uma identidade percentual mais alta pode exercer uma repressão mais eficaz de expressão da seqüência endógena. A identidade percentual substancialmente maior de mais do que cerca de 80 % tipicamente é preferido, embora cerca de 95 % para a identidade absoluta ser tipicamente mais preferida.

A molécula de ácido nucléico anti-sentido não necessita ter o mesmo intron ou exon padrão como o gene alvo e segmentos não codificadores do gene alvo pode ser igualmente eficaz atingindo a supressão anti-sentido da expressão de gene alvo como segmentos codificadores. Uma seqüência de DNA de pelo menos cerca de 8 ou so nucleotídeos pode ser usada como a molécula de ácido nucléico anti-sentido, embora uma seqüência mais longa é preferível. Na presente invenção, um exemplo representativo de um agente inibidor útil de PDE7 é uma molécula de ácido nucléico PDE7 anti-sentido que é pelo menos noventa por cento idêntico ao complemento de uma porção do PDE7A1 cDNA que consiste da seqüência de ácido nucléico apresentada na SEQ ID N°: I. Um outro exemplo representativo de um agente inibidor útil de PDE7 é uma molécula de ácido nucléico PDE7 anti-sentido que é pelo menos noventa porcento idêntico ao complemento de uma porção do PDE7A2 cDNA que consiste da seqüência de ácido nucléico apresentada na SEQ ID N°: 3. Um outro exemplo representativo de um agente inibidor útil de PDE7 é uma molécula de ácido nucléico de PDE7 anti-sentido que é pelo menos noventa porcento idêntico to the complement of a portion of the PDE7B cDNA que consiste da seqüência de ácido nucléico apresentado na SEQ ID N°: 5.

O alvejamento dos oligonucleotídeos anti-sentido para ligar PDE7 mRNA é um outro mecanismo que pode ser usado para reduzir o nível de síntese de proteína de PDE7. Por exemplo, a síntese de poligalacturonase e 25 o receptor de acetilcolina tipo 2 muscarina é inibido por oligonucleotídeos anti-sentido direcionado suas seqüências de mRNA respectivas (Patente US N0 5,739,119 concedida a Cheng e Patente US N0 5,759,829 concedida a Shewmaker). Além disso, os exemplos de inibição anti-sentido foram demonstradas com a ciclina de proteína nuclear, o gene de resistência de medicamento múltiplo (MDG1), ICAM-1, E-selectina, STK-1, receptor GABAa estriatal e EGF humano (ver, por exemplo, Patente US N0 5,801,154 concedida a Baracchini; Patente US N0 5,789,573 concedida a Baker; Patente US N0 5,718,709 concedida a Considine e Patente US N0 5,610,288 5 concedida a Reubenstein).

Um sistema foi descrito permitindo que um de habilidade comum para determinar quais oligonucleotídeos são úteis na invenção, que envolve testar quanto a locais adequados no mRNA alvo usando-se a clivagem de Rnase H como um indicador para a acessibilidade de sequêncis 10 com as transcrições. Scherr, M., et al., Nucleic Acids Res. 26:5079-5085, 1998; Lloyd, et al., Nucleic Acids Res. 29:3665-3673, 2001. Uma mistura de oligonucleotídeos anti-sentido que são complementares a certas regiões da transcrição de PDE7 é adicionada a extratos celulares que expressam PDE7 e hibridizado a fim de criar um local de RNAseH vulnerável. Este método pode 15 ser combinado com a seleção de seqüência assistida por computador que pode predizer a seleção de seqüência ótima para as composições anti-sentido com base em sua capacidade relativa para formar dímeros, grampos de cabelo ou outras estruturas secundárias que deve reduzir ou proibir a ligação específica que liga ao mRNA alvo em uma célula hospedeira. Esta análise de estrutura 20 secundária e as considerações de seleção de local alvo podem ser realizadas usando-se o software de análise de iniciador OLIGO (Rychlik, I., 1997) e o software de algoritmo BLASTN 2.0.5 (Altschul, S.F., et al., Nucl. Acids Res. 25:3389-3402, 1997). Os compostos anti-sentido direcionados na direção da seqüência alvo preferivelmente compreende de cerca de 8 a cerca de 50 25 nucleotídeos de comprimento. Os oligonucleotídeos anti-sentido que compreende de cerca de 9 a cerca de 35 ou mais nucleotídeos são particularmente preferidos. Os inventores abrangem todas composições de oligonucleotídeo na faixa de 9 a 35 nucleotídeos (isto é, aqueles de 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34 ou 35 ou mais bases de comprimento) são altamente preferidos para a prática de métodos com base em oligonucleotídeo anti-sentido da invenção. As regiões alvo altamente preferidas do PDE7 mRNA são aqueles que estão em ou próximos do códon de início de tradução AUG e aquelas seqüências 5 que são substancialmente complementar às regiões 5’ do mRNA, por exemplo, entre as regiões O e +10 da seqüência de nuceotídeo de gene PDE7 (SEQ ID N°: I, SEQID N°: 3, SEQ ID N°: 5).

O termo “oligonucleotídeo” como usado neste refere-se a um oligômero ou polímero de ácido ribonucléico (RNA) ou ácido 10 desoxiribonucléico (DNA) ou miméticos destes. Este termo também cobre aquelas oligonucleobases compostas de nucleotídeos de ocorrência natural, açúcares e ligações de intemucleosídeo covalente (cadeias principais) bem como oligonucleotídeos tendo modificações de ocorrência não natural. Estas modificações permitem a introdução de certas propriedades desejáveis que 15 não são oferecidas através dos oligonucleotídeos de ocorrência natural, tal como propriedades tóxicas reduzidas, estabilidade aumentada contra a degradação de nuclease e absorção celular intensificada. Em formas de realização ilustrativa, os compostos anti-sentido da invenção diferem do DNA natural pela modificação a cadeia principal de fosfodiéster para estender a 20 vida do oligonucleotídeo anti-sentido em que os substituintes de fosfato são substituídos por fosforotioatos. Também, uma ou ambas as extremidades do oligonucleotídeo pode ser substituído por um ou mais derivados de acridina que intercalam entre os pares de base adjacente entro de um filamento do ácido nucléico.

Uma outra alternativa ao anti-sentido é o uso de “interferência

de RNA” (RNAi). Os RNAs de filamento duplo (dsRNAs) pode provocar o silenciamento de gene em mamíferos in vivo. A função natural de RNAi e cosupressão parece ser a proteção do genoma contra a invasão pelos elementos genéticos móveis, tais como retrotransposons e vírus que produzem RNA ou dsRNA aberrante na célula hospedeira quando estes tomam-se ativos (ver, por exemplo, Jensen, J., et al., Nat. Genet. 21:209-12, 1999). A molécula de RNA de filamento duplo pode ser preparada pela sintetização de dois filamentos de RNA capazes de formar uma molécula de RNA de filamento duplo, cada um tendo um comprimento de cerca de 19 a 25 (por exemplo, 19 a 23 nucleotídeos). Por exemplo, uma molécula de dsRNA úteis nos métodos da invenção pode compreender o RNA que corresponde a uma porção de pelo menos um da SEQ ID N°: I, SEQ ID N°: 3, SEQ ID N°: 5 e seu complemento. Preferivelmente, pelo menos um filamento de RNA tem uma projeção 3’ de 1 a 5 nucleotídeos. Os filamentos de RNA sintetizados são combinadas sob condições que formam uma molécula de filamento duplo. A seqüência de RNA pode compreender pelo menos uma porção de 8 nucleotídeos de SEQ ID N0: I, SEQ ID N°: 3 ou SEQ ID N°: 5 com um comprimento total de 25 nucleotídeos ou menos. O projeto de seqüências de siRNA para um dado alvo está dentro da habilidade comum na técnica. Os serviços comerciais estão disponíveis projetando seqüência de siRNA e garantia de pelo menos 70 % de nocaute de expressão (Qiagen, Valencia, CA). Os PDE7 shRNAs e siRNAs exemplares são comercialmente disponíveis da Sigma-Aldrich Company (produto # SHDNA_-NM_002603; SASI_Hs01_00183420 a SASI_Hs01_00010490).

O dsRNA pode ser administrado como uma composição farmacêutica e realizada pelos métodos conhecidos, em que um ácido nucléico é introduzido em uma célula alvo desejada. Os métodos de transferência de gene comumente usados incluem fosfato de cálcio, DEAE25 dextrano, eletroporação, microinjeção e métodos virais. Tais métodos são explicados em Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Inc., 1993. As moléculas de ácido nucléico terapêuticas podem ser modificadas para cruzar a barreira sangue-cérebro. Por exemplo, foi demonstrado que um oligonucleotídeo anti-sentido de fosforotiolato direcionado na direção da região média Abeta de proteína precursora amilóide (APP) dada pela administração i.c.v. pode reverter os déficits de aprendizado e de memória em um modelo de camundongo com Alzheimer. Banks W.A. et al., Journal of Pharm. and Exp. Therapeutics, 297(3): 1113-1121, 2001.

Ribozimas:

Em algumas formas de realização, um agente inibidor de PDE7y é uma ribozima que cliva especificamente o mRNA de um PDE7 alvo, tal como PDE7A, PDE7B ou ambos. As ribozimas que alvejam PDE7 podem ser utilizadas como agentes inibidores de PDE7 para diminuir a 10 quantidade e/ou atividade biológica de PDE7. As ribozimas são moléculas de RNA catalíticas que podem clivar as moléculas de ácido nucléico tendo uma seqüência que é completa ou parcialmente homóloga à seqüência da ribozima.

r

E possível projetar transgenes de ribozima que codificam as RNA ribozimas que especificamente forma pares com um RNA alvo e clivam a cadeia 15 principal de fosfodiéster em um local específico, desse modo, inativando funcionalmente o RNA alco. Na realização desta clivagem, a ribozima não é por si só alterada e é, desta maneira, capaz de reciclar e clivar outras moléculas. A inclusão de seqüências de ribozimas dentro de RNAs antisentido conferem atividade de clivagem de RNAnestes, desse modo, 20 aumentado a atividade das construções anti-sentido.

As ribozimas úteis na prática da invenção tipicamente compreendem uma região de hibridização de pelo menos cerca de nove nucleotídeos, que é complementar na seqüência de nucleotídeo a pelo menos parte do PDE7 mRNA alvo e uma região catalítica que é adaptada para a 25 clivagem do PDE7 mRNA alvo (ver, no geral, patente européia N0 0 321 201; WO 88/04300; Haseloff, J., et al., Nature 334:585-591, 1988; Fedor, M.J., et al., Proc. Natl. Acad. Sei. USA 87:1668-1672, 1990; Cech, T.R., et al., Ann. Rev. Biochem. 55:599-629, 1986).

As ribozimas podem ser alvejadas diretamente às células na forma de oligonucleotídeos de RNA que incorporam as seqüências de ribozima ou introduzidas na célula como um vetor de expressão que codifica

o RNA de ribozima desejado. As riboziams podem ser usadas e aplicadas da mesma maneira como para os polinucleotídeos anti-sentido.

RNA e DNA anti-sentido, ribozimas e moléculas de RNAi

úteis nos métodos da invenção pode ser preparadas por qualquer método conhecido na técnica para a síntese de moléculas de DNA e RNA. Estes incluem técnicas para sintetizar quimicamente oligodesoxirribonucleotídeos e oligorribonucleotídeos bem conhecidos na técnica, tal como por exemplo 10 síntese química de fosforamidita de fase sólida. Alternativamente, as moléculas de RNA podem ser geradas pela transcrição in vitro e in vivo de seqüências de DNA que codificam a molécula de RNA anti-sentido. Tais seqüências de DNA podem ser incorporadas em uma ampla variedade de vetores que incorporam os promotores de RNA polimerase adequados, tais 15 como os promotores de polimerase T7 ou SP6. Alternativamente, as construções de cDNA anti-sentido que sintetizam RNA anti-sentido constitutiva ou indutivelmente, dependente do promotor usado, pode ser introduzido estavelmente nas linhas celulares.

Várias modificações bem conhecidas das moléculas de DNA 20 podem ser introduzidas como uma média de aumento de estabilidade e de vida média. As modificações úteis incluem, mas não limitam-se à adição de seqüências de flanqueamento de ribonucleotídeos ou desoxirribonucleotídeos às extremidades 5’ e/ou 3’ da molécula ou o uso de fosforotioato ou 2’ Ometila no lugar daquelas ligações de fosfodiesterase dentro da cadeia principal 25 de oligodesoxirribonucleotídeo.

IV. MÉTODOS DE AVALIAÇÃO PARA INIBIDORES DE PDE7 ÚTEIS PARA O TRATAMENTO DE UMA ANORMALIDADE DE MOVIMENTO ASSOCIADA COM A PATOLOGIA DE UM DISTÚRBIO

DE MOVIMENTO NEUROLÓGICO Em um outro aspecto, os métodos são fornecidos para identificar um agente que inibe a atividade de PDE7 útil para o tratamento de uma anormalidade de movimento associado com a patologia de um distúrbio de movimento neurológico em um indivíduo mamífero em necessidade deste.

5 Os métodos deste aspecto da invenção compreendem: (a) determinar o IC5o para a atividade de inibição de PDE7 para uma pluralidade de cada uma das pluralidades dos agentes; (b) selecionar os agentes da pluralidade de agentes tendo um IC50 para a inibição da atividade de PDE7 de menos do que cerca de

1 μΜ; (c) determinando o IC50 para a inibição da atividade de PDE4 dos agentes tendo um IC5o para inibir a atividade de PDE7 de menos do que cerca de 1 μΜ; (d) identificar agentes úteis para o tratamento de um distúrbio de movimento selecionando-se os compostos tendo um IC50 para a inibição da atividade de PDE4 maior do que 10 vezes o IC50 para a inibição de PDE7 e (e) avaliar a atividade de compostos identificados em um ensaio de modelo de distúrbio de movimento neurológico, em que um agente que tem um IC50 para a inibição de PDE7 de menos do que cerca de 1 μΜ e um IC50 para a inibição da atividade de PDE4 maior do que 10 vezes o IC50 para a inibição da PDE7 e é determinado ser eficaz para o tratamento de pelo menos uma anormalidade de movimento em um ensaio de modelo é indicativo de um agente inibidor de PDE7 útil para o tratamento de uma anormalidade de movimento associado com a patologia de um distúrbio de movimento neurológico em um paciente mamífero.

Os agentes representativos que podem ser usados nas práticas dos métodos deste aspecto da invenção incluem moléculas que ligam-se a 25 PDE7 e inibem a atividade de enzima de PDE7 (tal como inibidores de molécula pequena ou peptídeos bloqueadores que ligam-se ao PDE7 e reduzem a atividade enzimática) e moléculas que diminuem a diminuição da expressão de PDE7 no nível transcripcional e/ou de tradução (tal como moléculas de ácido nucléico anti-sentido de PDE7, moléculas de RNAi específicas de PDE7 e ribozimas de PDE7), desse modo evitando que o PDE7 clive o cAMP.

V. Descrição de Definições de Composição Gerais

Em um aspecto, a invenção fornece um método de tratar a anormalidade de movimento associada com a patologia de um distúrbio de movimento neurológico que compreende administrar a um paciente em necessidade deste, uma quantidade de um agente inibidor de PDE7 eficaz para inibir a atividade enzimática de PDE7, em que tal inibição de atividade enzimática de PDE7 é o principal modo terapêutico de ação do inibidor de PDE7 no tratamento da anormalidade de movimento. Em algumas formas de realização do método, o distúrbio de movimento neurológico é tratável com um agonista do receptor de dopamina ou um precursor de um agonista do receptor de dopamina. Em algumas formas de realização do método, o distúrbio de movimento neurológico é selecionado do grupo que consiste de mal de Parkinson, Parkinsonismo Pós-Encefalítico, Distonia Responsiva à Dopamina, Síndrome de Shy-Drager, Distúrbio do Movimento do Membro Periódico (PLMD), Movimentos do Membro Periódicos no Sono (PLMS) e Síndrome da Pernas Inquietas (RLS).

Em outras formas de realização, o distúrbio de movimento neurológico é selecionado do grupo que consiste de síndrome de Tourrette, doença de Huntington (isto é, coréia de Huntington) e Parkinsonismo induzido por medicamento.

Para cada um dos compostos químicos inibidores de PDE7 úteis nos métodos da presente invenção, também, estereoisômeros e isômeros 25 geométricos possíveis estão incluídos. Os compostos incluem não apenas compostos racêmicos, mas também os isômeros oticamente ativos. Quando um agente inibidor de PDE7 é desejado como um enantiômero simples, este pode ser obtido pela resolução do produto final ou pela síntese estereoespecífica de material de partida isomericamente puro ou uso de um reagente auxiliar quiral, por exemplo, ver Ma, Z., et al., Tetrahedron: Asymmetry 8(6):883-888, 1997. Na resolução do produto final, um intermediário ou um material de partida podem ser atingidos por qualquer método adequado conhecido na técnica. Adicionalmente, em situações onde 5 os tautômeros dos compostos são possíveis, a presente invenção é pretendida incluir todas as formas tautoméricas dos compostos.

Os agentes inibidores de PDE7 que contém porções ácidas podem formar sais farmaceuticamente aceitáveis com cátions adequados. Os cátions farmaceuticamente aceitáveis adequados incluem cátions de metal alcalino (por exemplo, sódio ou potássio) e de metal alcalino terroso (por exemplo, cálcio ou magnésio). Os sais farmaceuticamente aceitáveis dos agentes inibidores de PDE7, que contém um centro básico, são sais de adição ácida formados com ácidos farmaceuticamente aceitáveis. Os exemplos incluem os sais de cloridreto, bromidreto, sulfato ou bissulfato, fosfato ou fosfato de hidrogênio, acetato, benzoato, succinato, fumarato, maleato, lactato, citrato, tartarato, gluconato, metanofulgonato, bezenossulfonato e ptoluenossulfonato. Na luz do precedente, qualquer referência aos compostos úteis nos métodos da invenção que aparece aqui é pretendido incluir agentes inibidores de PDE7, bem como os seus sais e solvatos farmaceuticamente aceitáveis.

Os compostos da presente invenção podem ser terapeuticamente administrados como o produto químico bruto, mas é preferível administrar os agentes inibidores de PDE7 como uma composição ou formulação farmacêuticas. Consequentemente, a presente invenção ainda 25 fornece as composições ou formulações farmacêuticas que compreendem um agente inibidor de PDE7 ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis, junto com um ou mais carregadores farmaceuticamente aceitáveis e, opcionalmente, outros ingredientes terapêuticos e/ou profiláticos. Os carregadores adequados são compatíveis com outros ingredientes da formulação e não nocivos ao seu receptor. Os compostos da presente invenção também podem ser carregados em um sistema de distribuição para fornecer a liberação sustentada ou entrada ou atividade intensificadas do composto, tal como um sistema lipossômico ou sistema de hidrogel para injeção, um sistema de micropartícula, nanopartícula 5 ou de micela para a liberação oral ou parenteral ou um sistema de cápsula em estágios para a liberação oral.

Em particular, um agente inibidor de PDE7 seletivo útil no método da presente é útil sozinho ou em combinação com um ou mais agentes terapêuticos adicionais, por exemplo: um agonista receptor de dopamina, um IO precursor de agonista receptor de dopamina, um outro agente dopaminérgico ou combinações dos precedentes. Os exemplos de agonistas dos receptores de dopamina e precursores incluem, por exemplo, levodopa (também referido como “L-dopa”), carbidopa, bromocriptina, pergolida, pramipexol, ropinirol cabergolina, apomorfma e lisurida. Outros agentes úteis na combinação com 15 um agente inibidor de PDE7 seletivo incluem medicações anticolinérgicas, tal como biperidenHCl, mesilato de benztropina, prociclidina e triexifenidila;

ΤΓϊνϊ TIvi

inibidores de monoamina oxidase B, tal como Eldepril , Atapril e

rTpir TlVi

Carbex e o amantadina agonista de NMDA (Symmetrel ).

Em uma forma de realização, um agente inibidor de PDE7 20 seletivo é útil em combinação com um ou mais agentes ou precursores terapêuticos adicionais de agentes terapêuticos que ativam o receptor de dopamina Dl e/ou aumentam a concentração de dopamina nos terminais do nervo nigroestriatal e/ou da fenda sináptica nigroestriatal. Tais agentes incluem L-dopa, agonistas de receptor de dopamina não seletivos, tais como 25 apomorfma, bromocriptina e pergolida e agentes seletivos Dl, tais como ABT-431, A86929 e SKF38393.

Em uma forma de realização, a invenção fornece um método de tratar uma anormalidade de movimento associada com a patologia of mal de Parkinson que compreende administração a um paciente em necessidade deste uma quantidade de um agente inibidor de PDE7 eficaz para inibir a atividade enzimática de PDE7, em que tal inibição de PDE7 é o modo terapêutico principal de ação do inibidor de PDE7 no tratamento da anormalidade de movimento. Como demonstrado nos Exemplos 5 a 7 neste, 5 os inibidores seletivos de PDE7 são úteis no tratamento de uma anormalidade de movimento associada com a patologia do mal de Parkinson. No contexto do mal de Parkinson, o tratamento inclui terapia sintomática para diminuir, aliviar, mascarar ou prevenir os sintomas de pelo menos uma anormalidade de movimento selecionada do grupo que consiste de tremor em repouso, rigidez, 10 bradicinesia ou deficiência de reflexos posturais.

Os compostos e as composições farmacêuticas adequadas para o uso na presente invenção incluem aqueles em que o ingrediente ativo é administrado em uma quantidade eficaz para atingir seu propósito pretendido. Mais especificamente, uma “quantidade terapeuticamente ativa” significa uma 15 quantidade eficaz para evitar o desenvolvimento de sintomas em ou para aliviar os sintomas existentes do paciente sendo tratado. A determinação das quantidades eficazes está bem dentro da capacidade daqueles habilitados na técnica, especialmente na luz da divulgação detalhada fornecida neste. Ainda é estimado que a quantidade de um composto da invenção requerida para o 20 uso no tratamento varia com a natureza da condição sendo tratada e com a idade e a condição do paciente e é ultimamente determinado pelo médico atendente. No geral, entretanto, as doses utilizadas por um tratamento humano estão tipicamente na faixa de 0,001 mg/kg a cerca de 100 mg/kg por dia.

Uma “dose terapeuticamente eficaz” refere-se àquela 25 quantidade do composto que resulta na realização do efeito desejável para tratar ou melhorar a anormalidade de movimento associada com a patologia de um distúrbio de movimento neurológico. A toxicidade e a eficácia terapêutica de tais compostos pode ser determinada pelo procedimento farmacêutico padrão em culturas celulares ou animais experimentais, por exemplo, para a determinação do LD50 (a dose letal a 50 % da população) e do ED50 (a dose terapeuticamente eficaz em 50 % da população).

Em uma forma de realização, uma dose terapeuticamente eficaz é uma quantidade de agente inibidor de PDE7 suficiente para inibir a 5 atividade de enzima PDE7 em uma célula neuronal. Em uma outra forma de realização dos métodos da invenção, uma dose terapeuticamente eficaz é uma quantidade de agente inibidor de PDE7 suficiente para inibir a atividade da enzima de PDE7 em neurônios estriatais. A determinação de uma dose eficaz de um agente inibidor de PDE7 suficiente para cruzar uma membrana celular 10 e inibir a atividade da enzima PDE7 dentro de uma célula pode ser determinada usando-se um ensaio celular para a inibição de PDE7, tal como descrito por Smith S.J. et al., Molecular Pharmacology 66(6): 1679-1689 (2004), desse modo incorporado por referência. A determinação de uma dose eficaz de um agente inibidor de PDE7 suficiente para inibir a atividade da 15 enzima PDE7 no estriado pode ser determinado usando-se um ensaio para medir o efeito de um agente inibidor de PDE em níveis de cAMP no estriado como descrito em Siuciak J. A. et al., Neuropharmacology 51: 386-396 (2006), desse modo incorporado por referência.

A razão de dose entre os efeitos tóxicos e efeitos terapêuticos é 20 o índice terapêutico, que é expressado como a razão entre LD50 e ED50. Os compostos que podem apresentar índices terapêuticos altos são preferidos. Os dados obtidos a partir de tal análise podem ser usados na formulação de uma faixa de dosagem para o uso em humanos. A dosagem de tais compostos preferivelmente está dentro de uma faixa de concentrações circulantes que 25 incluem a faixa de ED50 dependendo da forma de dosagem utilizada e da via de administração utilizada.

A toxicidade e a eficácia terapêutica de agentes inibidores de PDE7 podem ser determinados pelos procedimentos farmacêuticos padrão que utilizam modelos animais experimentais, tais como o modelo MPTP murino descrito nos exemplos de 5 a 7. Usando-se tais modelos animais, o NOAEL (nenhum nível de efeito adverso observado) e o MED (a dose eficaz mínima) pode ser determinada usando-se métodos padrão. A razão de dose entre os efeitos NOAEL e MED é a razão terapêutica que é expressada como 5 a razão NOAEL/MED. Os agentes inibidores de PDE7 que apresenta razões ou índices terapêuticos grandes são mais preferidos. Os dados obtidos a partir dos ensaios de cultura celular e estudos mínimos podem ser usados na formulação de uma faixa de dosagens para o uso em seres humanos. A dosagem do agente inibidor de PDE7 preferivelmente está dentro de 10 concentrações circulantes que incluem o MED com pouca ou nenhuma toxicidade. A dosagem pode variar dentro desta faixa dependendo da forma de dosagem utilizada e da via de administração utilizada.

Para qualquer formulação de composto, a dose terapeuticamente eficaz pode ser estimada usando-se modelos animais. Por 15 exemplo, a dose pode ser formulada em um modelo animal para atingir uma concentração de plsma circulante ou faixa do tecido cerebral que inclui o MED. Os níveis quantitativos do agente inibidor de PDE7 em plasma ou cérebro também podem ser medidos, por exemplo, como descrito no Exemplo

4 neste.

A formulação exata, via de administração e dosagem podem

ser escolhidas pelo médico individual em vista da condição do paciente. A quantidade e o intervalo de dosagem podem ser ajustados individualmente para fornecer os níveis de plasma da porção ativa que são suficientes para manter os efeitos terapêuticos.

A dose desejada pode ser convenientemente administrada em

uma dose simples ou como doses múltiplas administradas em intervalos apropriados, por exemplo, como duas, três, quatro ou mais sub-doses por dia. Na prática, o médico determina o regime de dosagem real que é mais adequado para um paciente individual e a dosagem varia com a idade, peso e resposta do paciente particular. As dosagens descritas acima são exemplares do caso médio, mas estes podem ser exemplos individuais em que as dosagens mais altas ou mais baixas são valorizadas e tais estão dentro do escopo da presente invenção.

5 As formulação da presente invenção podem ser administradas

de uma maneira padrão para o tratamento das doenças indicadas, tal como administração oral, parenteral, transmucosa (por exemplo, sublingual ou por intermédio da administração bucal), topical, transdérmica, retal, por intermédio de inalação (por exemplo, nasal ou inalação pulmonar profunda). 10 A administração parenteral inclui, mas não é limitada a intravenosa, intraarterial, intraperitoneal, subcutânea, intramuscular, intratecal e intra-articular. A administração parenteral também pode ser realizada usando-se uma técnica de alta pressão, tal como um sistema POWDERJECT™.

Em um outro aspecto, esta inenção fornece composições 15 farmacêuticas que compreende um agente inibidor de PDE7 para o tratamento de distúrbios do movimento neurológico, tal como mal de Parkinson, Parkinsonismo Pós-Encefalítico, Distonia Responsiva à Dopamina, Síndrome de Shy-Drager, Distúrbio do Movimento do Membro Periódico (PLMD), movimentos de membro periódicos no sono (PLMS), síndrome de Tourette ou 20 síndrome das pernas inquietas (RLS).

Para a administração bucal ou oral, a composição farmacêutica pode estar na forma de tabletes ou losengos formulados de maneira convencional. Por exemplo, tabletes e cápsulas para a administração oral pode conter excipientes convencionais, tais como agentes ligadores (por exemplo, 25 xarope, acácia, gelatina, sorbitol, tragacanto, mucilagem de amido ou polivinilpirrolidona), enchedores (por exemplo, lactose, açúcar, celulose microcristalina, amido de milho, fosfato de cálcio ou sorbitol), lubrificantes (por exemplo, estearato de magnésio, estearato, ácido esteárico, talco, polietileno glicol ou sílica), desintegrantes (por exemplo, amido de batata ou glicolato de amido de sódio) ou agentes umectantes (por exemplo, lauril sulfato de sódio). Os tabletes podem ser revestidos de acordo com os métodos bem conhecidos na técnica.

Alternativamente, os compostos da presente invenção pode ser incorporados nas preparações orais líquidas, tais como suspensões aquosas ou oleosas, soluções, emulsões, xaropes ou elixires, por exemplo. Além disso, as formulações contendo estes compostos podem ser apresentadas coo um produto seco para a constituição com água ou outros veículos adequados para o uso. Tais preparações líquidas podem conter aditivos convencionais, tais como agentes de suspensão, tais como xarope de sorbitol, metil celulose, xarope de glicose/açúcar, gelatina, hidroxietilcelulose, hidroxipropilmetilcelulose, carboximetil celulose, gel de estearato de alumínio e gorduras comestíveis hidrogenadas; agentes emulsificantes, tais como lecitina, monooleato de sorbitano ou acácia; veículos não aquosos (que pdoem incluir óleos comestíveis), tais como óleo de amêndoa, óleo de coco fracionado, ésteres oleosos, propileno glicol e álcool etílico e preservantes, tal como p-hidroxibenzoato de metila ou propila e ácido ascórbico.

Tais preparações também podem ser formuladas como supositórios, por exemplo, contendo bases de supositórios convencionais, tais 20 como manteiga de cacau ou oturos glicerídeos. As composições para inalação tipicamente podem ser fornecidas na forma de uma solução, suspensão ou emulsão que pode ser administrada como um pó seco ou na forma de um aerossol usando-se um propelente convencional, tal como diclorodifluorometano ou triclorofluorometano. Tipicamente as formulações 25 tópicas e transdérmicas compreendem veículos aquosos ou não aquoso convencionais, tal como gotas oculares, cremes, unguentos, loções, pastas ou na forma de emplastros, curativos ou membranas medicadas.

Adicionalmente, as composições da presente invenção podem ser formuladas para a administração parenteral pela injeção ou infusão contínuas. As formulações para injeção podem estar na forma de suspensões, soluções ou emulsões em veículos oleosos ou aquosos e pode conter agentes de formulação, tal como agentes de suspensão, estabilizantes e/ou dispersantes. Alternativamente, o ingrediente ativo pode estar na forma de pó 5 para a constituição com um veículo adequado (por exemplo, água isenta de hidrogênio estéril) antes do uso.

Uma composição de acordo com a presente invenção também pode ser formulada como uma preparação de depósito. Tais formulações de atuação longa podem ser administradas por implantação (por exemplo, 10 subcutânea ou intramuscular) ou por injeção intra-muscular. Consequentemente, os compostos da invenção podem ser formulados com materiais poliméricos ou hidrofóbicos adequados (por exemplo, uma emulsão em um óleo aceitável), As resinas trocadoras de íons ou como derivados escassamente solúveis (por exemplo, um sal solúvel econômico).

Desta maneira, a invenção fornece, em um outro aspecto, uma

composição farmacêutica que compreende um inibidor de PDE7, junto com diluentes ou carregador farmaceuticamente aceitáveis destes. A presente invenção ainda fornece um processo de preparar uma composição farmacêutica que compreende um inibidor de PDE7, cujo processo 20 compreende misturar um inibidor de PDE7, junto com um diluente ou carregador farmaceuticamente aceitáveis para este.

Barreira Sangue-Cérebro:

Em algumas formas de realização, o agente inibidor de PDE7 é adminsitrado a fim de passar através de ou desviar da barreira sangue-cérebro. 25 Preferivelmente, o agente inibidor, composto ou composição adminsitrados no método de tratamento podem passar através da barreira sangue-cérebro em quantidades suficientes e em uma taxa suficiente a fim de permitir o tratamento do distúrbio de movimento. Os métodos para deixar os agentes passarem através da barreira sangue-cérebro são conhecidos na técnica e incluem minimizar o tamanho do agente, fornecendo fatores hidrofóbicos que facilitam a passagem e a conjugação a uma molécula carregadora que tem permeabilidade substancial através da barreira sangue-cérebro.

Em algumas formas de realização, uma quantidade eficaz de 5 um agente inibidor de PDE7 é um quantidade que atinge uma concentração dentro do tecido cerebral em ou acima do IC5o para a atividade de um dado agente inibidor de PDE7. Em algumas formas de realização, o agente inibidor de PDE7 é administrado de uma maneira e dosagem que dá uma concentração de pico de cerca de 1, 1,5, 2, 2,5, 5, 10, 20 ou more vezes a concentração IC50 10 para a inibição do maior de PDE7A ou PDE7B.

Em alguns exemplos, um agente inibidor de PDE7 ou combinação de agentes é administrada por um procedimento cirúrgico que implanta um cateter ligado a um dispositivo de bomba. O dispositivo de bomba pode ser implantado ou extracorporalmente posicionado. A 15 administração de um agente inibidor de PDE7 pode estar em pulsos intermitentes ou como uma infusão contínua. Os dispositivos para injeção a áreas distintas do cérebro são conhecidos na técnica. Em certas formas de realização, o agente inibidor de PDE7 ou uma composição que compreende um agente inibidor de PDE7 é administrado localmente ao ventrículo do 20 cérebro, substância negra, estriado, locus ceruleus, nucleus basalis Meinert, núcleo pedunculopontine, córtex cerebral e/ou medula espinhal para injeção.

EXEMPLOS Exemplo 1

Este exemplo descreve um ensaio para a medição da potência dos inibidores PDE7 e demonstra a potência da inibição PDE7 de diversos agentes inibidores representativos de PDE7 úteis nos métodos da invenção.

Métodos:

Os compostos listados na Tabela 1 foram testados para a atividade inibidora em um ensaio de fosfodiesterase PDE7 realizado usando PDE7A recombinante humano e enzimas 7B expressados em um sistema baculoviral. A enzima PDE7A recombinante humana foi adquirida de BPS Bioscience (Catalog #60070), Número de Acessão Genbank NM_002603 (extremidade de 121 aminoácidos) com um terminal N GST tag, MW=66 kDa 5 expressado em um Baculovirus infectado pelo sistema de expressão da célula Sf9, com a atividade específica de 302 pmol/miiv^g. A enzima recombinante humana PDE7B foi adquirida de BPS Bioscience (Catalog #60071), Genbank Número de Acessão NM O18945 (extremidade de 107 aminoácidos), com um terminal N GST tag, MW=66 kDa expressado em um Baculovirus infectado 10 pelo sistema de expressão da célula Sf9, com a atividade específica of 53 pmol/min/^g.

TABELA 1: Compostos inibidores PDE7

Número ID Número de referência MW do composto OM69 1 353,42 OM056 2 353,42 OM955 3 310,78 OM956 4 330,45 Ensaio de atividade PDE7:

O método do ensaio usado foi um ensaio de proximidade da cintilação (SPA) (obtido de GE Healthcare, Código do produto TRKQ7100),

-3

com [ H]- cGMP como o substrato (SPA manual, Amersham Biosciences). Os PDE7A e PDE7B purificados humanos (obtidos de BPS Bioscience, San Diego, CA) foram diluídos e armazenados em uma solução contendo 25 mM de Tris-Cl (pH 8.0), 100 mM de NaCl, 0,05 % de Tween 20, 50 % de glicerol 20 e 3 mM de DTT. os ensaio PDE7 foram realizados na seguinte mistura de reação (concentrações finais): 50 mM de Tris-Cl (pH 8.0), 8,3 mM de MgCi2, 1,7 mM de EGTA, 0,5 mg/ml BSA, 5 % de DMSO (exceto pelo OM056 que foi em 2,5 % de DMSO) e 2 ng de PDE7A ou 0,2 ng de proteína recombinante PDE7B em um volume final de 0,1 mL.

Para a determinação de valores IC50 contra os ensaios PDE7A

ou PDE7B e foram realizados em duplicata em uma placa simples em outras concentrações do inibidor, com um inibidor PDE7 conhecido (BRL50481) como um controle positivo. As concentrações inibidoras variadas de 0,61 nM a 10.000 nM exceto no caso de OM056, para que a faixa seja de 0,24 nM a 4.000 nM. As reações foram iniciadas pela adição da enzima, incubadas por 5 20 minutos a 30° C e então terminadas pela adição de 50 μΐ de pérolas SPA contendo Zn2+.

A mistura foi agitada, deixada para assentar por 3 horas, então a produção de [3H]-5'AMP a partir do substrato foi quantificada pela contagem de cintilação em um contador de placa Wallac®. O resultado nos valores da rede cpm foram ajustados por quatro modelos de parâmetros logísticos usando Excel Solver®.

Resultados:

Os resultados do ensaio de inibição da enzima de fosfodiesterase PDE7 são resumidos abaixo na TABELA 2 e mostrado na FIGURAS 3 A a 6B.

TABELA 2: Valores de IC5o para os compostos inibidores representativos PDE7 com relação à inibição de PDE7A e PDE7B

Composto ID Número do PDE7A PDE7B Razão 7A/7B composto IC50 IC50 OM69 1 1,30 nM 4,8 nM* 3,69 OM056 2 5,67 nM 9,27 nM 1,63 OM955 3 51,8 nM 106 nM 2,05 OM956 4 140 nM 144 nM 1,03 *OM69 foi previamente submetido ao ensaio pelos inventores

__r

para a inibição da atividade de PDE7A e PDE7B. E notado com relação ao

valor IC50 para a inibição PDE7B com OM69 que no ensaio inicial, usando uma metodologia do ensaio diferente, o valor IC5o foi determinado a ser 96,9 nM. Em que o ensaio inicial, o sinal de fundamento (contagens por minuto) foi altamente relativo ao sinal máximo e o coeficiente Hill foi baixo, a descoberta que solicita em questão a confiança dos resultados do ensaio 25 inicial.

Os resultados dos ensaios mostrados acima na TABELA 2, indicando um valor IC50 para a inibição PDE7B com OM69 de 4,8 nM é acreditado ser um valor mais exato por exemplo, como mostrado na FIGURA 3B, o valor r para o ajuste aos 4 modelos da resposta-dosagem logístico do parâmetro é de 0,9988, como seria esperado para um inibidor competitivo simples. O valor IC50 para a inibição PDE7A com OM69 no trabalho do ensaio inicial foi de 3,5 nM, não consistente com o valor para a inibição PDE7A de 1,30 nM apresentado na Tabela 2.

As FIGURAS 3A, 4A, 5A e 6A são gráficos ilustrando uma atividade inibidora PDE7A (IC50) expressado como contagens por minuto ("CPM") versos a concentração dos agentes inibidores representativos de PDE7 OM69, OM955, OM956 e OM056, respectivamente, em uma faixa de concentração de 0,61 nM a 10,000 nM (por OM69, OM955 e OM956), ou uma faixa de concentração de 0,24 nM a 4,000 nM (por OM056).

As FIGURAS 3B, 4B, 5B e 6B são gráficos ilustrando a atividade inibidora PDE7B (IC50) expressado como contagens por minuto ("CPM") versos a concentração dos agentes inibidores representativos de PDE7 OM69, OM955, OM956 e OM056, respectivamente, em uma faixa de concentração de 0,61 nM a 10,000 nM (por OM69, OM955 e OM956), ou uma faixa de concentração de 0,24 nM a 4,000 nM (por OM056).

Estes resultados indicam que OM69 e OM056 inibem tanto PDE7A quanto PDE7B com alta potência, enquanto OM955 e OM956 inibem estas ambas enzimas com potência moderada. Os compostos OM69, OM056, OM955 e OM956 apresentam pequena ou nenhuma seletividade entre PDE7A e PDE7B.

Exemplo 2

Este exemplo descreve uma série de ensaios para a medição da seletividade dos inibidores PDE7 e demonstram que OM69 (composto 1), OM056 (composto 2), OM955 (composto 3) e OM956 (composto 4) cada seletividade inibe PDE7 em comparação a todas as outras enzimas de fosfodiesterase testadas. Estes ensaios inclui um representativo de cada família PDE com a exceção de PDE6.

Métodos:

A atividade de fosfodiesterase como medido por um ensaio de 5 proximidade da cintilação (SPA, GE Healthcare: Código do produto TRKQ7100) com [3H]- cAMP como o substrato por PDEs 3A, 4A, 8A, ou com [3H]-cGMP como o substrato por PDEs 1B, 2A, 5A, 9A, IOA e 11 A. Os PDE1B, PDE2A, PDE3A, PDE4A, PDE5A, PDE8A, PDE9A e PDEl 1A4 purificados humanos foram obtidos de BPS Bioscience, San Diego, CA. Os 10 PDElOA purificados de murino também foi obtido de BPS Biosciences. E notado que o PDElOA de murino exibe e a maneira inibidora que é indistinguível a partir de PDElO humano. Portanto, os resultados obtidos usando PDE10A de murino são acreditados ser representativo de PDE10 humano.

As enzimas PDE purificadas foram cada uma diluídas e

armazenadas em uma solução contendo 25 mM de Tris-Cl (pH 8.0), 100 mM de NaCl, 0,05 % de Tween 20, 50 % de glicerol e 3 mM de DTT. Os ensaios PDE foram realizados no seguinte coquetel de ensaios (concentrações finais de): 50 mM de Tris-Cl (pH 8.0), 8,3 mM de MgC12, 1,7 mM de EGTA, 0,5 20 mg/ml de BSA, 2,5 % de DMSO e entre 0,2 ng e 6 ng da proteína PDE (dependendo da atividade da enzima) em um volume final de 0,1 mL.

Os ensaios foram realizados em duplicatas em quatro concentrações (10 μΜ, 1,25 μΜ, 0,156 μΜ e 0,019 μΜ) dos inibidores PDE7 OM69 (composto 1), OM056 (composto 2), OM955 (composto 3) e OM956 25 (composto 4). As reações foram iniciadas pela adição da enzima, incubadas por 20 minutos a 30° C e então terminadas pela adição de 50 μΐ de pérolas SPA contendo Zn2+.

A mistura foi agitada e deixada para assentar por 3 horas. Então a produção de [3H]-AMP ou [3HJ-GMP a partir do substrato foi quantificada pela contagem de cintilação em um contador de placa Wallac®. O resultado dos valores de rede cpm foram ajustados por quatro modelos logísticos de parâmetros usando Excel Solver®. Para o cálculo das razões de seletividade, os valores IC50 obtidos com cada enzima foram divididos pelos valores IC50 obtidos com PDE7A no Exemplo 1.

Resultados:

A TABELA 3 mostra os resultados dos ensaios de seletividade com os quatro compostos inibidores PDE7 submetidos ao ensaio contra o painel de PDEs testados. Os valores na TABELA 3 são mostrados nas unidades de seletividade do dobra por PDE7A versos os outros PDEs e foram determinados por dividir o valor IC50 contra o PDE indicado pelo valor IC50 contra PDE7A no Exemplo I. Deste modo, por exemplo, o valor de 342 vezes por OM955 com PDEIB significa que OM955 é 342 vezes menos potente como um inibidor de PDEIB em comparação ao PDE7A. Os números mostrado no parêntese são valores IC50 contra PDE7A de vários compostos do Exemplo I. Os valores de seletividade de dobra forneceu na TABELA 3 como "maior do que" as situações refletem em que a maior concentração do composto inibiu o alvo da enzima apenas levemente (isto é, menor do que 50 %) e maiores concentrações devem ser usadas porque o composto tomar-se insolúvel na mistura de ensaio. Como um resultado, apenas o mínimo estima que a seletividade deve ser gerada. TABELA 3: Seletividade de PDE7A dos compostos inibidores PDE7

representativos.

Alvo OM69 OM056 OM955 OM956 (Composto 1) (Composto 2) (Composto 3) (Composto 4) Seletividade de Seletividade de Seletividade Seletividade de dobra dobra de dobra dobra PDElB 29.1608 >1750 342 >71 PDE2A 11.100 5670 209 546 PDE3A 8170 >1750 >192 >71 PDE4A 6500 942 113 >71 PDE5A 4630 3300 355 >71 PDE7A 1 1 1 1 (1,30 nM) (5,67 nM) (51,8 nM) (140 nM) PDE7B 3,7 1,6 2,0 1,0 PDE8A >7700 >1750 >192 >71 PDE9A >7700 >1750 >192 >71 PDE10A 1050 428 379 106 PDEllA 7070 2600 >192 >71 Debate dos Resultados:

Como mostrado acima na TABELA 3, os agentes inibidores representativos de PDE7 OM69, OM056, OM955 e OM956 todos são selecionados pelo PDE7A e PDE7B em comparação ao PDE1B, PDE2A, PDE3A, PDE4A, PDE5A, PDE8A, PDE9A, PDElOA e PDEl IA.

Como mostrado na TABELA 3, OM69 (composto 1) é um potente inibidor tanto de PDE7A (IC50 =1,3 nM) quanto de PDE7B (IC50 = 4,8 nM), apresenta maior do que 1000 vezes a seletividade para a inibição da enzima PDE7A em comparação aos outros PDEs e a 250 vezes a seletividade para a inibição da enzima PDE7B em comparação aos outros PDEs.

Como ainda mostrado na TABELA 3, OM056 (composto 2) é um potente inibidor tanto de PDE7A (IC50 — 5,7 nM) quanto de PDE7B (IC50 15 = 9,27), apresenta mais do que 400 vezes a seletividade para a inibição da enzima PDE7A em comparação aos outros PDES e a maior do que 200 vezes a seletividade para a inibição da enzima PDE7B em comparação aos outros PDEs.

Como ainda mostrado na TABELA 3, OM955 (composto 3) é um inibidor moderadamente potente tanto de PDE7A (IC50 = 51,8 nM) quanto de PDE7B (IC50 = 106 nM) e apresenta mais do que 100 vezes a seletividade para a inibição da enzima PDE7A em comparação aos outros PDEs e maior do que 50 vezes a seletividade para a inibição da enzima PDE7B em comparação com os outros PDEs.

Também como mostrado na TABELA 3, OM956 (composto 4)

é um inibidor moderadamente potente tanto de PDE7A (IC50 = 140 nM) quanto de PDE7B (IC50 = 144 nM) e apresenta mais do que 71 vezes a seletividade para a inibição das enzimas PDE7A e PDE7B em comparação aos outros PDEs.

Estes resultados, são tirados juntos com os resultados descritos

nos exemplos 4 a 7,que demonstra que a inibição da atividade PDE7 é necessária e suficiente para o melhoramento em anomalias de movimento observado após a administração destes compostos no modelo de camundongo MPTP. Além disso, o uso de inibidores seletivos de PDE7 antes do que 15 inibidores não seletivos de PDE fornece a vantagem de menor toxicidade, porque estes não significantemente inibirão os PDEs conhecidos por causar os efeitos indesejáveis, tal como PDE3 e PDE4.

Exemplo 3

Este exemplo descreve um método para a avaliação da estabilidade metabólica dos inibidores PDE7 e a capacidade dos inibidores PDE7 por dividir no cérebro do camundongo in vivo.

Protocolo do teste animal

Cepa de camundongo: C57BL/6J macho adulto; reprodutores retirados, idade entre 7 a 9 meses (Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME, USA), alojado individualmente.

Administração do composto: Cada inibidor PDE7 (OM69 (composto 1), OM056 (composto 2), OM955 (composto 3) e OM956 (composto 4)) foi dissolvido em um veículo que consiste de DMSO, 0,03 M de ácido fosfórico e Tween 80 (5:95:0.2) e injetado por intermédio da via intraperitoneal em uma dosagem de 10 mg/kg.

Coleção de amostras sanguíneas e do cérebro: Justo antes de coletar os tecidos, os camundongos foram anestesiados com avertina. As amostras totais do cérebro ou plasma foram coletadas a partir de três animais 5 por período de tempo em 15 minutos, 30 minutos, 60 minutos, 120 minutos e 240 minutos após a injeção. As amostras de sangue foram coletadas pelo sangramento retro-orbital. O plasma foi preparado e as células vermelhas foram removidas pela centrifugação. Os camundongos foram submetidos a perfusão com solução salina para remover o sangue contaminado. Os cérebros 10 foram removidos e rapidamente congelados em nitrogênio líquido para análise subsequente. As amostras de plasma e do cérebro foram armazenadas a -80° C ou em gelo seco e a concentração do composto foi determinado pela análise LC/MS/MS como os seguintes:

O tecido total do cérebro foi homogenizado usando um Mini15 Beaddeater-8TM (BioSpec Products, Bartlesville, OK). As amostras de Plasma ou do cérebro homogenizado foram precipitadas com acetonitrila e filtradas em formatos de 96 reservatórios usando placas de filtração de mícron Captiva® 0.20 (Varian Corp, Lake Forest, CA). Os filtrados foram evaporados sob nitrogênio por secura a 50° C e foram então reconstituídos pela análise LC-MS. 20 As medições quantitativas para o composto inibidor nas

amostras de plasma e do cérebro foram obtidos usando um espectrômetro de massa Thermo Ultra triple quadrupole (Thermo Fisher Scientific, San Jose, CA), utilizando a íonização de eletropulverização no modo de monitoramento de reação múltipla da aquisição dos dados. Os extratos de amostra foram 25 injetados em uma coluna 2,1 x 30 mm embalada por cromatografia líquida de alta pressão Xterra C18-MS (HPLC) (Waters Corp, Milford, MA). A fase móvel eluindo-se do composto a partir da coluna HPLC foi aplicada usando um sistema de bombeamento quartenário Thermo Surveyor MS Plus HPLC (Thermo Fisher Scientific, San Jose, CA) e um autoinjetor HTC PAL (LEAP Technologies, Chapei Hill, NC).

Resultados:

Os dados na concentração do tecido de OM69 (composto 1), OM056 (composto 2), OM955 (composto 3) e OM956 (composto 4) foram coletadas a partir de 3 camundongos por ponto do período e média. A FIGURA 7 graficamente ilustra a concentração de plasma, a concentração do cérebro e a razão do cérebro/plasma do composto OM69 (composto 1) em 240 minutos do período do curso. Como mostrado na FIGURA 7, dentro dos primeiros 15 minutos da exposição, OM69 foi detectado em plasma (51 ng/g) e tecido do cérebro (25 ng/g). Os níveis de pico foram vistos em 30 minutos pós injeção IP (plasma 59 ng/g e cérebro 44 ng/g) após que tanto os níveis de plasma quanto o cerebral cairam rapidamente. Em todos os pontos do período, quando tanto os níveis do plasma quanto o cerebral foram maior do que o limite inferior da quantidade no ensaio LC/MS/MS (2 ng/g), as razões cerebrais e de plasma foram de 45 a 75 %.

Usando o método descrito pelo composto OM69, uma razão foi calculada da exposição total no cérebro (área sob a curva: AUC) dividida pela exposição total no plasma para cada composto testado. Os resultados são mostrados abaixo na TABELA 4. Os valores da razão maiores do que "1" 20 indicam que o composto foi concentrado no cérebro. Os valores que são mostrados como ">1" indicam que os níveis dos compostos já foram altos no cérebro pelo período da primeira medição ser tirada. Como um resultado, a razão de 1 representa um mínimo estima nestes casos.

TABELA 4: Razão cerebral/Plasma dos compostos inibidores de PDE7.

Composto Razão de exposição total do cérebro / exposição total do plasma OM69 (composto 1) 0,78 OM056 (composto 2) 1,8 OM955 (composto 3) >1 OM956 (composto 4) >1 Debate dos Resultados:

Os dados mostrados na FIGURA 7 sugerem que OM69 (composto 1) atinja as concentrações no cérebro de 44 ng/g, que converte a 124 nM em 30 minutos após a injeção de uma dosagem de 1 mg/kg.

Assumindo a linearidade da absorção e distribuição uniforme do cérebro, as dosagens de 0,1 mg/kg por um camundongo deve ser esperado para produzir as concentrações máximas de 12,4 nM, que é suficiente para atingir a inibição PDE7 no cérebro com base nos valores de IC50 1,3 nM e 4,8 nM relatados no Exemplo I. Os cálculos análogos para os três outros compostos testados no 10 modelo MPTP (como descrito no Exemplos 5 a 7), produziu os seguintes resultados para as concentrações máximas do cérebro em dosagens e pontos de tempo em que a eficácia foi observada: OM955: 241 nM a 0,5 mg/kg; OM956: 328 nM a 0,5 mg/kg; e OM056: 71 nM a 0,5 mg/kg. Em cada caso, é notado que estes níveis são pelo menos 2 vezes em excesso do maior dos 15 valores IC50 dos compostos para inibir o PDE7A ou PDE7B.

Exemplo 4

Este exemplo demonstra que o inibidor representativo PDE7 OM69 (composto 1) não interage significantemente com os alvos mal de Parkinson conhecidos.

Métodos:

Um inibidor representativo PDE7, OM69 (composto 1) foi testado contra um painel dos alvos do mal de Parkinson conhecidos para determinar se existe evidência da interação com quaisquer dos alvos testados.

Ensaios:

1. Ensaio de enzima de caquechol-O-Metiltransferase (COMT)

O Caquechol-O-Metiltransferase (COMT) foi submetido ao ensaio como descrito em Zurcher, G. et al., J. Neurochem 38:191-195, 1982, com as seguintes modificações. A fonte de COMT foi isolado a partir do fígado do porco. O substrato foi de 3 mM de Caquechol + S-Adenosil-L■2 [metil- HJmetionina. O controle do veículo foi de 1 % de DMSO. O composto OM69 foi testado em 10 μΜ no tampão de incubação (100 mM de fosfato de potássio, 10 mM de MgCj2, 3 mM de DTT contendo 12 U/ml de ADA, pH 7.4). A reação foi pré-incubada por 15 minutos a 37° C, a enzima COMT foi adicionada e a reação foi incubada por 60 minutos a 37° C. O [3HJ-Guaiacol foi contado e quantificado. O composto de referência do controle positivo 3,5- Dinitrocatechol foi realizado neste ensaio, com um valor IC50 histórico de 0,31 μΜ.

2. Ensaio da enzima de Monoamina Oxidase MAO-B

A Monoamina Oxidase MAO-B foi submetida ao ensaio como descrito em Urban, P. et al., FEBS Lett 286(1-2): 142-146, 1991, com as seguintes modificações. O MAO-B recombinante humano foi isolado a partir de células Hi5 de insetos. O substrato foi 50 μΜ de Kynuramina. O controle do veículo foi de 1 % de DMSO. O composto OM69 foi testado a 10 μΜ no tampão de incubação (100 mM de fosfato de potássio, pH 7,4) no experimento 1. No experimento 2, o composto OM69 foi testado a 10 μΜ e 1 μΜ. A reação foi pré-incubada por 15 minutos a 37° C, enzima MAO-B foi adicionada e a reação foi incubada por 60 minutos a 37° C. A quantificação espectrofluorimétrica de 4-hidroxiquinolina foi realizado. O composto de referência do controle positivo R(-)-Deprenil foi realizado neste ensaio, com um valor de IC50 histórico de 5,3 nM.

3. Hidroxilase do ensaio de enzima de tirosina

A Hidroxilase de tirosina foi submetida ao ensaio como descrito em Roskoski, R., Jr. et al., J. Biochem 218:363-370 (1993) com as seguintes modificações. A Hidroxilase de tirosina foi isolada a partir do cérebro do rato Wistar. O substrato foi 100 μΜ L-[3,5-3H]Tirosina + LTirosina. O controle do veículo foi 1 % de DMSO. O composto OM69 foi testado a 10 μΜ no tampão de incubação (125 mM de MES, pH 6.0, 0,5 mg/ml de Catalase, 12,5 mM de DTT, 0,5 mM (6R)-5,6,7,8- Tetraidrobiopterina). A reação foi pré-incubada por 15 minutos a 37° C. A enzima de Hidroxilase de tirosina foi adicionada e a reação foi incubada por 20 minutos a 37° C. [3Hj-H2O foi quantificada. O composto de referência de controle positivo α-Metil-L-P-Tirosina foi realizado neste ensaio, com um 5 valor IC50 histórico de 20 μΜ.

4. ensaio de ligação do radioligando de Dopamina D1

Um ensaio de ligação do radioligando de Dopamina D) foi realizado como descrito em Dearry, A. et al., Nature 347:72-76, 1990, com as seguintes modificações. O receptor de Dopamina Dl recombinante humana 10 foi expressada nas células CHO. O ligando usado no ensaio foi de 1,4 nM [3H] SCH-23390. O ligando não específico foi 10 μΜ (+)-butaclamol. O controle do veículo foi de 1 % de DMSO. O composto OM69 foi testado a 10 pM no tampão de incubação (50 mM de Tris-HCL, pH 7.4, 1,4 mM de ácido ascórbico, 0,001 % de BSA, 150 mM de NaCl). A reação foi incubada por 2 15 horas a 37° C. a ligação do radioligando foi quantificada. O composto de referência do controle positivo R(+)-SCH-23390 foi realizado neste ensaio, com um valor IC5o histórico de 1,4 nM.

5. Ensaio de ligação do radioligando de Dopamina D21

Um ensaio de ligação do radioligando de Dopamina D2l foi 20 realizado como descrito em Grandy, D.K. et al., PNAS 86:9762-9766, 1989, com as seguintes modificações. O receptor de Dopamina D2l recombinante humano foi expressado em células CHO. O ligando usado no ensaio foi de 0,16 nM [3H]-espiperona. O ligando não específico foi 10 μΜ de Haloperidol. O controle do veículo foi 1 % de DMSO. O composto OM69 foi testado a 10 25 μΜ no tampão de incubação (50 mM de Tris-HCL, pH 7.4, 1,4 mM de ácido ascórbico, 0,001 % de BSA, 150 mM de NaCl). A reação foi incubada por 2 horas a 25° C.A ligação do radioligando foi quantificada. O composto de referência do controle positivo espiperona foi realizado neste ensaio, com um valor IC50 histórico de 0,26 nM. 6. Ensaio de ligação do radioligando de Dopamina D3

Um ensaio de ligação do radioligando de Dopamina D3 foi realizado como descrito em Sokoloff, P. et al., Nature 347:146-151, 1990, com as seguintes modificações. O receptor de Dopamina D3 recombinante humano foi expressado em células CHO. O ligando usado no ensaio foi de 0,7

3 i ^

nM [ H]-espiperona. O ligando não específico foi de 25 μΜ S(-)Sulpirida. O controle do veículo foi de 1 % de DMSO. O composto OM69 foi testado a 10 μΜ no tampão de incubação (50 mM de Tris-HCL, pH 7.4, 1,4 mM de ácido ascórbico, 0,001 % de BSA, 150 mM de NaCl). A reação foi incubada por 2 10 horas a 37° C. A ligação do radioligando foi quantificada. O composto de referência do controle positivo espiperona foi realizado neste ensaio, com um valor de IC50 histórico de 0,36 nM.

7. Ensaio da ligação do radioligando de Dopamina D4 2

Um ensaio de ligação do radioligando de Dopamina D4 2 foi 15 realizado como descrito em Van tol, H.H.M. et al., Nature 350:610-614, 1991, com as seguintes modificações. O receptor de Dopamina D4 2 recombinante humana foi expressado em células CHO-K I. O ligando usado no ensaio foi de 0,5 nM [3H]-espiperona. O ligando não específico foi 10 μΜ Halperidol. O controle do veículo foi de 1 % de DMSO. O composto OM69 foi testado a 10 20 μΜ no tampão de incubação (50 mM de Tris-HCL, pH 7.4, 1,4 mM de ácido ascórbico, 0,001 % de BSA, 150 mM de NaCl). A reação foi incubada por 2 horas a 25° C. A ligação do radioligando foi quantificada. O composto de referência do controle positivo espiperona foi realizado neste ensaio, com um valor IC50 histórico de 0,5 nM.

8. Ensaio da ligação do radioligando de Dopamina D5

Um ensaio de ligação do radioligando de Dopamina D5 foi realizado como descrito em Sunahara, R.K. et al., Nature 350:614-619, 1991, com as seguintes modificações. O receptor de Dopamina D5 recombinante humano foi expressado em células CHO. O ligando usado no ensaio foi de 2 nM [3H]-SCH-23390. O ligando não específico foi 10 μΜ de Flupentixol. O controle do veículo foi de 1 % de DMSO. O composto OM69 foi testado a 10 μΜ no tampão de incubação (50 mM de Tris-HCL, pH 7.4, 1,4 mM de ácido ascórbico, 0,001 % de BSA, 150 mM de NaCl). A reação foi incubada por 2 5 horas a 37° C. A ligação do radioligando foi quantificada. O composto de referência do controle positivo R(+)-SCH23390 foi realizado neste ensaio, com um valor de IC50 histórico de 1,5 nM.

9. Ensaio da ligação do radioligando de Gabapentina

Um ensaio de ligação do radioligando de Gabapentina foi 10 realizado como descrito em Gee, N.S. et al., J. Biol. Chem. 271 (10):5768- 5776, 1996, com as seguintes modificações. A Gabapentina foi obtida de córtex cerebral do rato Wistar. O ligando usado no ensaio foi de 0,02 μΜ [ H] Gabapentina. O ligando não específico foi de 100 μΜ de Gabapentina. O controle do veículo foi 1 % de DMSO. O composto OM69 foi testado a 10 15 μΜ no tampão de incubação (10 mM de HEPES, pH 7.4). A reação foi incubada por 30 minutos a 25° C. Uma ligação do radioligando foi quantificada. O composto de referência da Gabapentina de controle positivo foi realizada neste ensaio, com um valor IC50 histórico de 0,04 μΜ.

10. Ensaio de ligação do radioligando do transportador de Dopamina (DAT)

Um ensaio de ligação do radioligando do transportador de Dopamina (DAT) foi realizado como descrito em Giros, B. et al., Trends Pharmacol Sci 14:43-49, 1993, com as seguintes modificações. O DAT recombinante humano foi expressado em células CHO-Kl. O ligando usado 25 no ensaio foi de 0,15 nM [125I]-RTI-55. O ligando não específico foi de 10 μΜ de Nomifensina. O controle do veículo foi 1 % de DMSO. O composto OM69 foi testado a 10 μΜ no tampão de incubação (50 mM de Tris-HCL, pH

7.4, 100 mM de NaCl, 1 μΜ de Leupeptina, 10 μΜ de PMSF). A reação foi incubada por 3 horas a 4o C. A ligação do radioligando foi quantificada. O composto de referência do controle positivo GBR-12909 foi realizado neste ensaio, com um valor IC50 histórico de 1,7 nM.

11. Ensaio da ligação do radioligando do receptor de

Adenosina A2A

Um ensaio de ligação do radioligando do receptor de

Adenosina A2A foi realizado como descrito em Varani, K. et al., Br. J. Pharmacol. 117:1693-1701, 1996, com as seguintes modificações. O receptor A2a recombinante humano foi expressado em células HEK-293. O ligando

o

usado no ensaio foi de 0,05 μΜ [ H]CGS-21680. O ligando não específico foi de 50 μΜ de NECA. O controle do veículo foi 1 % de DMSO. O composto OM69 foi testado a 10 μΜ no tampão de incubação (50 mM de Tris-HCL, pH

7.4, 10 mM de MgCj2, 1 mM de EDTA, 2 U/mL de Adenosina Deaminase). A reação foi incubada por 90 minutos a 25° C. A ligação do radioligando foi quantificada. O composto de referência do controle positivo CGS-21680 foi realizado neste ensaio, com um valor IC50 histórico de 0,13 μΜ.

Resultados:

Os resultados dos ensaios descritos acima são resumidos abaixo na TABELA 5.

A quantidade de OM69 usada no ensaio é indicada nos parênteses na coluna rotulada "OM69." Os resultados são apresentados em termos da inibição percentual da ligação do ligando a, ou atividade enzimática ao alvo. Os controles positivos foram incluídos em cada ensaio como indicado, como um controle no desempenho dos ensaios. TABELA 5: Nível de inibição dos alvos do mal de Parkinson conhecidos

Agente inibidor PDE7 com representativo OM69 (Composto 1)

Alvo OM69 Controle postivo (Composto 1) IC50 IC50 esperado observado Catecol-O- 19,0% 0,31 μΜ 0,606 μΜ Metiltransferase (COMT) (10,0 μΜ) Monoamina 49,0 % 5,3 nM 6,69 nM Oxidase MAO-B (Exp (10,0 μΜ) #1) Monoamina 67,0 % 5,3 nM 9,96 nM Oxidase MAO-B (Exp (10,0 μΜ) #2) Monoamina Oxidase 27,0 % 5,3 nM 9,96 nM MAO-B (Exp #2) (1,0 μΜ) Tirosina 4,0 % 20 μΜ 20,2 μΜ Hidroxilase (10,0 μΜ) Dopamina Di -5,0 % 1,4 nM 1,83 nM (10,0 μΜ) Dopamina D2L 4,0 % 0,26 nM 0,277 nM (10,0 μΜ) Dopamina D3 -13,0% 0,36 nM 0,774 nM (10,0 μΜ) Dopamina D42 -16,0% 0,5 nM 0,441 nM (10,0 μΜ) Dopamina D5 4,0 % 1,5 nM 2,31 nM (10,0 μΜ) Gabapentina 15,0% 0,04 μΜ 0,0796 μΜ (10,0 μΜ) Transportador de 18,0% 1,7 nM 0,975 nM Dopamina (DAT) (10,0 μΜ) Receptor de Adenosina 41,0% 0,13 μΜ 0,0924 μΜ A2A (10,0 μΜ) Debate dos resultados:

Os resultados mostrados na TABELA 5 demonstra ainda que uma concentração que é 2000 vezes maior do que este IC50 por PDE7B, o inibidor representativo PDE7 OM69 não substancialmente inibem COMT, hidroxilase de tirosina, o transportador de Dopamina, o receptor de gabapentina, ou quaisquer dos sub-tipos de receptores de dopamina.

Com relação ao resultado do receptor de Adenosina A2A, embora os resultados na TABELA 5 mostra que OM69 inibiu a ligação aos receptores A2A por 41 % em uma concentração de 10 μΜ, é acreditado que A2a não é um alvo de OM69 por pelo menos as seguintes razões. Como mostrado no Exemplo 3, ο OM69 atingi os níveis que atingi no cérebro do camundongo de 30 a 60 ng/g após uma dosagem de 1 mg/kg. Os farmacocinéticos lineares que assumem, então uma dosagem de 0,1 mg/kg, 5 que é altamente eficaz no modelo do camundongo MPTP, como demonstrados nos Exemplos 5 e 6, produziria os níveis no cérebro de 3 a 6 ng/g, que é equivalente de 3 a 6 ng/ml ou 8,5 a 17 nM. Nesta concentração, usando um valor conservativo de IC50 por OM69 de 10 μΜ, a ocupação percentual de receptores A2A seria apenas de cerca de 0,17 %. Portanto, a 10 conclusão é que A2A não é um alvo por OM69.

Com relação ao ensaio MAO-B, uma inibição de porcentagem de 27 % em uma concentração de 1 μΜ indicaria um valor IC5o de aproximadamente 2,7 μΜ. Portanto, se OM69 estão presentes no cérebro em uma concentração de 17 nM (como debatido no parágrafo prévio), inibiria 15 MAO-B pelo menor do que 0,7 %. Portanto, a conclusão é que MAO-B não é um alvo por OM69.

Exemplo 5

Avaliação farmacológica de um composto inibidor PDE7 representativo no

modelo MPTP do mal de Parkinson.

Neste exemplo, o agente inibidor PDE7 representativo, OM69

(composto 1), foi avaliado em um estudo inicial no modelo do camundongo MPTP do mal de Parkinson.

Protocolo de teste animal

Cepa de camundongo: C57BL/6J machos adultos; reprodutores retirados, idade entre 7 a 9 meses (Jackson Laboratory, Bar Harbor, ME, USA), alojado individualmente.

Manuseio: Os animais foram manuseados diariamente por 2 semanas antes da injeção a fim de lhes fazer responsáveis pelo teste de comportamento. Todos os camundongos foram mantidos em um ciclo de escuro/claro de 12 horas padrão e dando um acesso ad libitum a comida de laboratório e água.

Administração MPTP: Os camundongos receberam 2 injeções subcutâneas de metilfeniltetraidropiridina ("MPTP") em uma dosagem de 15 5 mg/kg (base livre) com a 10 a 12 horas de intervalos entre as injeções. Os camundongos de controle (grupos de lesões falsos) foram administrados por solução salina em vez de MPTP.

Administração do composto inibidor PDE7\ sete dias após MPTP ou administração de solução salina, OM69 foi administrados por 10 camundongos. Para cada dosagem, um estoque de IOOx do composto OM69 foi preparado em 100 % de DMSO e subsequentemente diluído 100x em solução salina tamponado por fosfato (PBS). Então 100 μι desta solução IX foi administrado por intermédio da injeção intraperitoneal (IP).

Foi previamente determinado a partir dos estudos farmacocinéticos que OM69 é lavado por camundongos dentro de 12 horas, deste modo a dosagem de vários compostos testados nos dias conservativos foi usado para maximizar a informação que deve ser obtido de cada grupo dos animais lesionados.

Comprimento do passo: antes da injeção com MPTP ou 20 solução salina, os animais foram pré-treinados para andar através de uma folha limpa de papel em sua gaiola de origem sem interrupção. Para a determinação do comprimento do avanço, os animais tem sua pata dianteira colocada em tinta preta e comprimento das etapas da pata dianteira durante o caminhar normal (apenas em uma linha reta) como medido. Os animais foram 25 imediatamente colocado de volta em sua gaiola na finalização da tarefa. O comprimento do passo foi determinado pela medição da distância entre cada etapa no mesmo lado do corpo, medindo a partir do dedo médio do meio da primeira etapa ao calcanhar da segunda etapa. Uma média de pelo menos quatro etapas limpas foi calculada. Protocolo experimental

Os camundongos machos reprodutores retirados (12 a 15 por grupo, -48-60 animais totais) foram tratados com solução salina ou 2 x 15 mg/kg MPTP (12 solução salina; 36 MPTP) para induzir um estado 5 Parkinsoniano (perda neuroquímica de Dopamina com os déficits de comportamento correspondentes). Um mapa de fluxo esquematicamente ilustrado o protocolo é mostrado na FIGURA 8.

Como mostrado na FIGURA 8, em um dia de comprimento do avanço em linha de base como medido e então os camundongos foram tratados com MPTP (n=9) ou com a solução salina como um controle (n=10). No oito dia de comprimento do avanço como medido novamente e o valor de controle pelo comprimento do avanço foi derivado do comprimento do avanço dos animais tratados por solução salina. Seguindo esta medição para as primeiras medições com L-dopa (5 mg/kg) ou OM69 (0,1 mg/kg) foram administrados no dia oito, como mostrado na FIGURA 8. O comprimento do passo foi então medido para cada animal de 20 minutos após dosagem. Nenhum L-dopa (5 mg/kg) ou OM69 (0,1 mg/kg) alterado no comprimento do avanço dos camundongos tratados por solução salina. A dosagem com os tratamentos mostrados na FIGURA 8 foi realizado em dias sucessivos, com comprimento do avanço medido 20 minutos após cada dosagem. Como mencionado acima, este foi previamente determinado a partir dos estudos farmacocinéticos que OM69 é lavado nos camundongos dentro de 12 horas após a dosagem, de modo que o teste do comprimento do avanço realizado 20 minutos após a dosagem foi acreditado ser medido o efeito de apenas os compostos administrados no dia de tratamento.

Como mostrado na FIGURA 8, no dia oito dos animais do Grupo 1 foram tratados com L-dopa (5 mg/kg) e animais de grupo 2 foram tratados com OM69 (0,1 mg/kg). No dia nove dos animais do Grupo 1 foram tratados com L-dopa (1 mg/kg) e animais do grupo 2 foram tratados com ΟΜ69 (0,01 mg/kg). No dia dez o tratamento dos grupos foram cruzados em e dos animais do Grupo 1 foram tratados com OM69 (0,01 mg/kg) e animais do grupo 2 foram tratados com L-dopa (1 mg/kg).

Como ainda mostrado na FIGURA 8, para os estudos de combinação, todos os camundongos no Grupo 1 e grupo 2 foram combinados. No dia 11 seguindo a administração MPTP, todos os animais no grupo 1 e grupo 2 (n=9) foram tratados com a combinação de L-dopa (1 mg/kg) e OM69 (0,01 mg/kg), com o teste de comprimento do avanço realizado 20 minutos após a dosagem. No dia 12 seguindo a administração MPTP, todos os animais no grupo 1 e grupo 2 (n=9) foram tratados com a combinação de Ldopa (1 mg/kg) e OM69 (0,03 mg/kg) com o teste de comprimento do avanço realizado 20 minutos após a dosagem. Nestes estudos de combinações realizados no dia Ile dia 12, a média dos dados de comprimento do avanço a partir de dois de nove animais não foi contável por causa destes dois animais realizados antes do que caminhar em uma velocidade normal, ou este mantém o início e interrupção antes do que caminhar continuamente. Portanto, estes dois animais foram excluídos e apenas os sete animais remanescentes (n=7) foram contados para os estudos de combinação.

Aumento do comprimento do passo O modelo MPTP usado neste exemplo é um modelo de

camundongo no geral aceitado de PD que é esperado por aqueles habilitados na técnica como sendo preditivo para PD em humanos (Tillerson, J.L. et al., Exp. Neurol. 178(l):80-90, 2002; Tillerson, J.L. et al., J. Neurosci Methods 123(2): 189-200, 2003).

Para avaliar e comparar os efeitos de OM69 e L-dopa nestas

dosagens, os dados a partir dos camundongos com a dosagem equivalente foi vertido. Deste modo, a média do comprimento do avanço por animais tratados com L-dopa (1 mg/kg) foi determinado usando as medições obtidas de todos os nove animais. Similarmente, a média do comprimento do avanço para os animais tratados com OM69 (0,01 mg/kg) foi determinado usando as medições obtidos de todos os nove animais. Os resultados do estudo MPTP descrito neste exemplo são fornecidos nas FIGURAS 9 a 11.

As FIGURAS 9 a 11 são gráficos bar ilustrando os resultados

5 do teste do comprimento do avanço da pata pintada. Este demonstra que o inibidor representativo PDE7 OM69 (composto 1) aumenta o comprimento do avanço em camundongos lesionados MPTP e não deste modo em dosagens inferiores significantemente em comparação ao L-dopa.

Como mostrado nas FIGURAS 9 e 11, o tratamento dos camundongos com MPTP diminui seu comprimento do avanço como medido a partir dos rastros deixados pelas patas dos camundongos tingidas, em comparação com os controles de solução salina. Ver FIGURA 9 (#1 versus #4) e FIGURA 11 (#1 versus #2).

Como mostrado na FIGURAS 9 e 10, o tratamento dos camundongos tratados por MPTP com L-dopa aumenta seu comprimento do avanço em uma maneira dependente de dosagem. Ver FIGURA 9 (#4 versus #5 e #6) e FIGURA 10 (#1 versus #2 e #6).

Este não foi esperadamente determinado que o inibidor representativo PDE7 OM69 (composto 1), quando administrado IP em 0,1 20 mg/kg, tem o mesmo efeito para aumentar o comprimento do avanço nos camundongos tratados por MPTP como uma dosagem de 50 vezes mais alta de L-dopa (5 mg/kg). Como mostrado na FIGURA 9, nas concentrações mencionadas acima, tanto L-dopa (#5) quanto OM69 (#7) totalmente restaurado no comprimento do avanço que é visto sem tratamento MPTP (#1). 25 Estes resultados demonstram a descoberta supreendente que ο OM69 (composto 1), um inibidor representativo PDE7 útil no método da invenção, é eficaz para aumentar o comprimento do avanço em camundongos MPTP em uma dosagem significantemente inferior em comparação ao L-dopa.

Como mostrado nas FIGURAS 9 a 11, em dosagens inferiores de L-dopa (1 mg/kg) (ver FIGURA 9, #6; FIGURA 10, #2) ou OM69 (0,01 mg/kg) (ver FIGURA 9 #8; FIGURA 10, #3) existe apenas um pequeno efeito observado no comprimento do avanço de camundongos tratados por MPTP. Entretanto, quando estas dosagens inferiores de OM69 e L-dopa foram

administrados em combinação, o aumento no comprimento do avanço direciona com relação ao efeito maior do que a soma do aumento visto a partir do medicamento sozinho. Ver FIGURA 9, #9 e FIGURA 10 #4. Estes resultados demonstram que a administração do inibidor representativo PDE7 OM69 (composto 1) é eficaz para aumentar o comprimento do avanço em 10 camundongos lesionados MPTP em uma dosagem significantemente inferior em comparação ao L-dopa e é portanto útil nos métodos da invenção direcionados ao tratamento de uma anormalidade de movimento associado com a patologia de um distúrbio de movimento tal como mal de Parkinson.

Exemplo 6

Avaliação farmacológica de um composto inibidor PDE7 representativo no modelo MPTP do mal de Parkinson: estudo confírmador

Neste exemplo, um inibidor representativo PDE7, OM69 (composto 1), foi avaliado no modelo do camundongo MPTP do mal de Parkinson. Este estudo foi projetado para confirmar as descobertas no Exemplo 5 e para fornecer a prova estatística dos efeitos de OM69.

Protocolo do teste animal.

Manuseio: animais alojados diariamente por 2 semanas antes

da injeção, a fim de lhes fazer responsáveis pelo teste de comportamento. Todos os camundongos foram mantidos em um ciclo de escuro/claro de 12 horas padrão e dão acesso ad libitum à comida de laboratório e água.

Administração MPTP: Os camundongos MPTP receberam 2 injeções subcutâneas de metilfeniltetraidropiridina ("MPTP") em uma dosagem de 15 mg/kg (base livre) com 10 a 12 horas de intervalo entre injeções. Os camundongos de controle (grupos de lesões falsos) foram administradas por solução salina em vez de MPTP.

5 Administração OM69 (composto 1): sete dias após MPTP /

administração de solução salina, OM69 foi administrado por camundongos. Para cada dosagem, um estoque de IOOx de OM69 foi preparado em 100 % de DMSO e subsequentemente diluído IOOx em solução salina tamponado por fosfato (PBS). Então 100 μΐ. desta solução IX foi administrado intraperitoneamente (IP).

Comprimento do passo: antes da injeção com MPTP ou solução salina, os animais foram pré-treinados para andar através de uma folha limpa de papel em sua gaiola de origem sem interrupção. Para a determinação do comprimento do avanço, os animais tem suas patas 15 dianteiras colocado na tinta preta e o comprimento das etapas das patas dianteiras durante o caminhar normal (em uma linha reta apenas) como medido. Os animais foram imediatamente colocados de volta em sua gaiola na finalização da tarefa. Comprimento do passo foi determinado pela medição da distância entre cada etapa no mesmo lado do corpo, medindo do dedo meio do 20 pé da primeira etapa ao calcanhar da segunda etapa. Uma média de pelo menos quatro etapas limpas foi calculada.

Análise estatística

Os dados foram analisados usando software Prism 4.0. os grupos foram analisados por uma maneira ANOVA e teste Student-Newman25 Keuls post hoc quando apropriado. A significância foi considerado atingir em p < 0,05. Os grupos de tratamento no gráfico do comprimento do avanço que são estatisticamente diferente são indicados pelas letras na Tabela 6. Os grupos que parte da letra não é estatisticamente diferente; os grupos que não parte de uma letra é significantemente diferente a partir de cada outros. Protocolo experimental:

Os camundongos machos reprodutores retirados (28 animais totais) foram tratados com 2 x 15 mg/kg MPTP (12 de solução salina; 36 MPTP) para induzir um estado Parkinsoniano (perda neuroquímica de Dopamina com os déficits de correspondentes correspondentes). Um mapa de fluxo esquematicamente ilustrando o protocolo é mostrado na FIGURA 12. No dia 1 de comprimento do avanço em linha de base como medido e então todos os camundongos foram tratados com MPTP ou solução salina. No dia 8 o comprimento do avanço como medido novamente e então os animais tratados por MPTP foram divididos aleatoriamente dois grupos de quatorze. Como descrito em Exemplo 5, a dosagem com os tratamentos sucessivos indicado na FIGURA 12 ocorrido nos dias consecutivos e em cada caso o comprimento do avanço como medido 20 minutos após a dosagem. Os valores "n" dentro dos boxes no mapa de fluxo indicam o número de animais para que os dados úteis foi obtido em que dia (ocasionalmente, poucos animais faltaram o desempenho de caminhar na tarefa).

No dia 9, dos animais do Grupo 1 foram tratados com OM69 (0,01 mg/kg) e grupo 2 foram tratados com L-dopa (1 mg/kg). No dia 10, os animais do Grupo 1 foram tratados com OM69 (0,03 mg/kg) e o grupo 2 20 foram tratados com L-dopa (5 mg/kg). No dia 11, os animais do Grupo 1 foram tratados com OM69 (0,05 mg/kg) e o grupo 2 foram tratados com OM69 (0,1 mg/kg). No dia 12, o grupo 1 foi tratado com OM69 (0,07 mg/kg).

À seguir, para os estudos de combinação, os dois grupos foram combinados. No dia 14, todos os animais foram tratados tanto com L-dopa (1 mg/kg) quanto OM69 (0,01 mg/kg). No dia 15, todos os animais foram tratados com L-dopa (1 mg/kg) em combinação com uma dosagem mais alta de OM69 (0,03 mg/kg).

Resultados:

Os resultados destes estudos são resumidos abaixo na TABELA 6, em que o comprimento do avanço dos camundongos tratados por MPTP tratado com L-dopa em duas dosagens diferentes, OM69 (composto 1) em cinco dosagens diferentes e a combinação de L-dopa e OM69 são comparados aos camundongos de controle não tratados e os camundongos 5 tratados por MPTP recebido no medicamento. A FIGURA 18 ilustra uma subsérie destes dados.

TABELA 6: Comprimento do Passo em

camundongos lesionados por MPTP

Tratamento Comprimento do Número de animais Designação da letra passo (cm) MÉDIA que realizam a ± SEM tarefa de maneira bem sucedida Nenhum tratamento 7,21 ±0,06 28 A MPTP 5,68 ± 0,09 25 B 1 mg/kg L-DOPA 5,78 ± 0,09 13 B mg/kg L-DOPA 7,29 ± 0,07 14 A 0,01 mg/kg OM69 5,77 ±0,17 11 B 0,03 mg/kg OM69 5,93 ±0,14 14 B 0,05 mg/kg OM69 6,38 ±0,14 13 C 0,07 mg/kg OM69 6,65 ±0,18 13 C 0,1 mg/kg OM69 7,23 ± 0,07 14 A 1 mg/kg L-DOPA + 6,81 ±0,07 26 C 0,03 mg/kg OM69 1 mg/kg L-DOPA + 7,26 ± 0,04 25 A 0,05 mg/kg OM69 Debate dos Resultados:

Comparação de OM69 a L-dopa:

Referindo-se à TABELA 6, neste experimento, MPTP causa uma diminuição significante no comprimento do avanço (letra "B" versos "A"). Tratamento com 1 mg/kg de L-dopa não resulta em um aumento significante no comprimento do avanço, mas o tratamento com 5 mg/kg de L15 dopa retoma ao comprimento do avanço para controlar os valores (não lesionados) ("A" versos "A"). O tratamento com baixas doses de OM69 (0,01 mg/kg ou 0,03 mg/kg) também não aumenta o comprimento do avanço, mas o tratamento com dosagens intermediárias resultou em um aumento estatisticamente significante (p<0,05) no comprimento do avanço ("C" versos "B"). O tratamento com uma dosagem maior (0,1 mg/kg) de OM69 também resultou em um aumento estatiscamente significante (p<0,05) no comprimento do avanço e, além disso, retomar o comprimento do avanço para controlar os valores (não lesionados) ("A" versos "A"). Estes resultados 5 demonstram que o composto inibidor PDE7 OM69 é um eficaz como L-dopa na restauração do comprimento do avanço em camundongos tratados por MPTP e, além disso, é aproximadamente 50 vezes mais potente do que Ldopa.

OM69 e L-dopa administrados em combinação:

Duas dosagens de combinações de OM69 com L-dopa também

foram testados neste experimento. A primeira combinação (1 mg/kg de Ldopa mais 0,03 mg/kg OM69) causando um aumento estatisticamente significante (p<0,05) no comprimento do avanço de 1,13 cm, que foi maior do que a soma de aumentos não significantes com aqueles agentes sozinhos naquelas dosagens (0,35 cm). A segunda combinação (1 mg/kg de L-dopa mais 0,05 mg/kg OM69) também resultou no aumento estatisticamente significante (p<0,05) no comprimento do avanço e, além disso, retoma o comprimento do avanço para controlar os valores (não lesionados) ("A" versos "A"), a magnitude deste aumento (1,58 cm) foi maior estatisticamente significado (p<0,0001) do que a soma do aumento com 0,05 mg/kg OM69 mais o aumento não significante com 1 mg/kg de L-dopa (0,8 cm), como representado pela barra de aditivo teórico no lado da pata dianteira direita do mapa na FIGURA 18. Estes resultados fortemente sugerem que o composto inibidor PDE7 OM69 e L-dopa interage em uma maneira aditiva maior do que corrigir o comprimento do avanço dos camundongos tratados por MPTP.

Exemplo 7

Avaliação farmacológica de um painel dos compostos inibidores

PDE7representativos no modelo MPTP do mal de Parkinson

Neste exemplo, um painel dos agentes inibidores representativos de PDE7 foram avaliados no modelo do camundongo MPTP do mal de Parkinson a fim de testar a hipótese que a inibição de PDE7 melhorará os sintomas do Parkinsoniano neste modelo a não ser da estrutura química particular do inibidor usado e que portanto, a inibição de PDE7 é suficiente para o melhoramento observado no comprimento do avanço.

Protocolo de teste de animal.

Cepa de camundongo: C57BL/6J machos adultos; reprodutores retirados, idade entre 7 a 9 meses Charles River Laboratories, Wilmington, MA), alojado individualmente. Três grupos de 35 camundongos foram testados em séries uma semana a parte.

Manuseio: Os animais foram manuseados diariamente por 2 semanas antes da injeção, a fim de lhes fazer responsáveis pelo teste de comportamento. Todos os camundongos foram mantidos em um ciclo de escuro/claro de 12 horas padrão e dão acesso ad libitum à comida de laboratório e água.

Administração MPTP: Os camundongos receberam 2 injeções subcutâneas de metilfeniltetraidropiridina ("MPTP") em uma dosagem de 15 mg/kg (base livre) com 10 a 12 horas de intervalo entre as injeções. Os camundongos de controle (grupos de lesões falsos) foram administrados por solução salina em vez de MPTP.

Comprimento do passo: antes da injeção com MPTP ou solução salina, os animais foram pré-treinados para andar através de uma folha limpa de papel em sua gaiola de origem sem interrupção. Para a avaliação do comprimento do avanço, os animais tem suas patas dianteiras 25 colocadas na tinta preta e o comprimento das passos das patas dianteiras durante o caminhar normal (em uma linha reta apenas) como medido. Os animais foram imediatamente colocados de volta em sua gaiola no término da tarefa. O comprimento do passo foi determinado pela medição da distância entra cada etapa no mesmo lado do corpo, medindo a partir do meio do dedo do pé da primeira etapa ao calcanhar da segunda etapa. Um média de pelo menos quatro etapas limpas foram calculadas. A lista para este experimento foi como segue:

Semana 0 - trinamento para a terafa de andar: (pelo menos 4

5 sessões)

Dia 1 - coletar o passo de linha de base Dia 2a - coletar o passo da 2a linha de base Dia 2b - injeções de MPTP Dia 7 - coletar e avaliar para o déficit de passo Dia 8a - coletar passos do 2o déficit

Dia 8b - começar processos dos compostos Dia 9 avançado - dosagens diferentes dos compostos foram administrados em dias sucessivos.

Administração do composto: por causa da ampla variação na 15 solubilidade aquosa entre estes compostos, um número de formulações diferentes foram requeridas. O L-dopa foi administrado em 100 μΐ de solução salina tamponada por fosfato. Para os animais tratados com L-dopa, o inibidor de dopa descarboxilase benserazida (100 μΐ, de uma solução de 12,5 mg/kg) foi administrado 15 minutos antes para o tratamento com L-dopa a fim de 20 minimizar a destruição de L-dopa no sangue periférico. OM955 (composto 3) e OM056 (composto 2) foram administrados em 200 μΐ de dimetil acetamida: polietileno glicol 400:0,03M de ácido metanossulfônico (DMA:PEG:MSA-10 %:40 %:50 %). OM956 (composto 4) foi administrado em 200 μΐ de 0,03 M de ácido tartárico (TA). As FIGURAS 13A e 13B mostram que nenhum 25 destes veículos, quando administrados por si só, alteram o comprimento do avanço em camundongos tratados por MPTP. Portanto, o tratamento dos efeitos observados são devido unicamente ao composto inibidor PDE7s por si mesmos. Para cada composto testado, os experimentos preliminares foram realizados para identificar as dosagens mais eficazs no modelo MPTP. Em alguns casos, este foi observado que as dosagens maiores do que as dosagens ótimas não produz o aumento significante no comprimento do avanço. Este fenômeno "excedido" também foi observado com L-dopa em camundongos tratados por MPTP em que as dosagens inferiores melhoram a hipoatividade 5 enquanto as dosagens mais altas induzem as discinesias ou movimentos não controlados (Lundblad M. et al., Exp Neurol.l94(l):66-75 (2005); Pearce R.K. et al., Mov Disord. 10(6):731-40 (1995); Fredriksson, A. et al, Pharmacol-Toxicol. 67(4): 295-301 (1990)).

Protocolo experimental:

Os camundongos machos reprodutivos retirados foram

tratados com solução salina ou 2 x 15 mg/kg MPTP para induzir um estado Parkinsoniano (perda neuroquímica de Dopamina com déficits de comportamento correspondentes). No dia um do comprimento do avanço em linha de base como medido e então os camundongos foram tratados com 15 MPTP ou com solução salina como um controle. No dia oito o comprimento do avanço como medido novamente e o valor de controle para o comprimento do avanço foi derivado do comprimento do avanço de animais tratados com solução salina. Os animais foram então divididos aleatoriamente para os grupos de tratamentos. O composto OM955 (composto 3) foi testado a 0,1 20 mg/kg, a 0,5 mg/kg e a 0,1 mg/kg em combinação com 1 mg/kg de L-dopa. O composto OM956 (composto 4) foi testado a 0,1 mg/kg e 0,5 mg/kg. O composto OM056 (composto 2) foi testado a 0,05 mg/kg, 0,1 mg/kg, 0,5 mg/kg e 1 mg/kg.

Resultados:

Os resultados deste estudo são mostrados na FIGURAS 14 a

17. FIGURA 14 mostra que OM955 em uma dosagem de 0,5 mg/kg causa um melhoramento estatisticamente significante no comprimento do avanço de camundongos tratados por MPTP (p<0,005 comparados ao grupo MPTP). Tanto em 20 minutos quanto em uma hora após a injeção, o comprimento do avanço é totalmente restaurado aquele de animais não lesionados. As FIGURAS 15A a C demonstram que a combinação de OM955 e L-dopa exercem maior do que efeitos aditivos para restaurar o comprimento do avanço. As FIGURAS 15A e 15B mostram, respectivamente, que as dosagens baixas de L-dopa (1 mg/kg) ou 5 OM955 (0,1 mg/kg) não aumentam o comprimento do avanço quando administrado sozinho. Entretanto, a FIGURA 15C mostra que quando estas dosagens baixas são dadas juntos, o comprimento do avanço é completamente restaurado aquele de animais não lesionados (p<0,005 comparados ao grupo MPTP).

A FIGURA 16 mostra que OM956, também em uma dosagem de

0,5 mg/kg, causa um aumento estatisticamente significante (p<0,01 comparado ao grupo MPTP) no comprimento do avanço de animais tratados por MPTP. A FIGURA 17 mostra que OM056 na dosagem inferior de 0,05 mg/kg também causa um aumento estatisticamente significante (p<0,05 comparado ao grupo MPTP) no comprimento do avanço de animais tratados por MPTP.

Os resultados neste exemplo mostra que três compostos inibidores diferentes PDE7s, que são estruturalmente não relacionados a cada outro e estruturalmente não relacionado ao OM69, todos causam a mesma completa recuperação do comprimento do avanço em animais tratados por MPTP que foi 20 observado com OM69 (como descrito no Exemplos 5 e 6). Porque apenas propriedades comuns conhecidas destes compostos é sua capacidade de inibir PDE7 e porque um destes compostos (OM69) foi testado para a interação com outros alvos do mal de Parkinson conhecidos e não observado interagir significantemente com estes, é concluído que a atividade inibidora PDE7 é tanto 25 necessária quanto suficiente para o melhoramento no comprimento do avanço relatado com estes compostos.

Enquanto as formas de realização ilustrativas foram ilustradas e descritas, será apreciado que várias mudanças podem ser feitas neste sem separar a partir do espírito e escopo da invenção.

Claims

1. Método de tratamento de uma anormalidade de movimento associado com a patologia de um distúrbio de movimento neurológico, caracterizado pelo fato de que compreende administrar a um paciente em necessidade desta quantidade de um agente inibidor PDE7 eficaz para inibir a atividade enzimática de PDE7 em que tal inibição da atividade enzimática PDE7 é o modo terapêutico principal da ação do inibidor PDE7 no tratamento da anormalidade de movimento.

2. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o distúrbio do movimento neurológico é tratável com um agonista ou precursor receptor de dopamina de um agonista receptor de dopamina.

3. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o distúrbio do movimento neurológico é selecionado do grupo que consiste de mal de Parkinson, Parkinsonismo pós-encefalítico, Distonia responsiva à dopamina, síndrome Shy-Drager, distúrbio de movimento periódico do membro (PLMD), movimentos periódicos do membro no sono (PLMS), síndrome de Tourette e síndrome das pernas inquietas (RLS).

4. Método de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que o distúrbio do movimento neurológico é o mal de Parkinson.

5. Método de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que a anormalidade de movimento é pelo menos uma de tremor em repouso, rigidez, bradicinesia ou deficiência de reflexos posturais.

6. Método de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que o distúrbio do movimento neurológico é síndrome das pernas inquietas (RLS).

7. Método de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que o distúrbio do movimento neurológico são movimentos periódicos do membro no sono (PLMS).

8. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o agente inibidor PDE7 tem um IC5o para a inibição de PDE7A e/ou atividade PDE7B de menos do que cerca de 1 μΜ.

9. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o agente inibidor PDE7 tem um IC50 para a inibição de PDE7A e/ou atividade PDE7B de menos do que cerca de 100 nM.

10. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o agente inibidor PDE7 tem um IC50 para a inibição da atividade PDElB maior do que 5 vezes o menor do IC5o para a inibição da atividade PDE7A e o IC50 para a inibição da atividade PDE7B.

11. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o agente inibidor PDE7 tem um IC50 para a inibição da atividade PDE10 maior do que 5 vezes o menor do IC50 para a inibição da atividade PDE7A e o IC50 para a inibição da atividade PDE7B.

12. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o agente inibidor PDE7 tem um IC50 para a inibição da atividade PDE3 maior do que 10 vezes o menor do IC50 para a inibição da atividade PDE7A e o IC50 para a inibição da atividade PDE7B.

13. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o agente inibidor PDE7 tem um IC5o para a inibição da atividade PDE3 e PDE4 maior do que 10 vezes o menor do IC50 para a inibição da atividade PDE7A e o IC50 para a inibição da atividade PDE7B.

14. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o agente inibidor PDE7 tem um IC50 para a inibição da atividade PDE 4 e PDE 8 maior do que 10 vezes o menor do IC50 para a inibição da atividade PDE7A e o IC50 para a inibição da atividade PDE7B.

15. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o agente PDE7 tem um IC50 para a inibição da atividade PDE1, PDE2, PDE3, PDE 4, PDE 8, PDE10 e PDEl 1 maior do que 10 vezes o menor do IC50 para a inibição da atividade PDE7A e o IC50 para a inibição da atividade PDE7B.

16. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o agente inibidor PDE7 é um inibidor seletivo PDE7 para o qual o menor do IC5o para a inibição da atividade PDE7A e o IC50 para a inibição da atividade PDE7B é menor do que um décimo o IC50 que o agente tem para a inibição da atividade de qualquer outra enzima PDE a partir das famílias de enzimas PDEl-6 e PDE8-11.

17. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o agente inibidor PDE7 é um inibidor altamente seletivo PDE7 para o qual o menor do IC50 para a inibição da atividade PDE7A e o IC50 para a inibição da atividade PDE7B é menor do que um quinquagésimo IC50 que o agente tem para a inibição da atividade de qualquer outra enzima PDE a partir das famílias das enzimas PDE1-6 e PDE8-11.

18. Método de acordo com a reivindicação 2 ou 3, caracterizado pelo fato de que o agente inibidor PDE7 é um agente inibidor PDE7 para o qual o menor do IC50 para a inibição da atividade PDE7A e o IC50 para a inibição da atividade PDE7B é menor do que metade do IC50 que o agente tem para a inibição da atividade em outros alvos moleculares (i) conhecido por estar envolvido com a patologia do distúrbio seletivo do movimento neurológico ou (ii) em que outros medicamentos que são terapeuticamente eficazes para tratar a ação do distúrbio.

19. Método de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que o agente inibidor PDE7 é um agente inibidor PDE7 para o qual o menor do IC50 para a inibição da atividade PDE7A e o IC5o para a inibição da atividade PDE7B é menor do que metade do IC50 que o agente tem para a inibição da atividade em outros alvos moleculares (i) conhecido por estar envolvido com a patologia do mal de Parkinson ou (ii) em que outros medicamentos que são terapeuticamente eficazes para tratar a ação do mal de Parkinson.

20.Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o agente inibidor PDE7 é um agente inibidor PDE7 para o qual o menor do IC50 para a inibição da atividade PDE7A e o IC5o para a inibição da atividade PDE7B é menor do que é menor do que metade do IC50 que o agente tem para a inibição da atividade em outros alvos moleculares conhecidos por serem associados com o caminho de sinalização de dopamina.

21. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o agente inibidor PDE7 tem um peso molecular de menos do que cerca de 450 g/mol.

22. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o agente inibidor PDE7 é administrado em conjunção com um agente dopaminérgico ou um precursor de um agente dopaminérgico.

23. Método de acordo com a reivindicação 22, caracterizado pelo fato de que o agente dopaminérgico é levodopa (L-dopa).

24. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o agente inibidor PDE7 é administrado em conjunção com um agente terapêutico ou precursor de um agente terapêutico que ativa o receptor de Dopamina Dl e/ou aumenta a concentração de Dopamina nos terminais do nervo nigroestriatal e/ou o fenda sináptica nigroestriatal.

25. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o agente inibidor PDE7 é capaz de cruzar a barreira cérebro/sangue.

26. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o agente inibidor PDE7 é:

27. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o agente inibidor PDE7 é: <formula>formula see original document page 189</formula>

28. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o agente inibidor PDE7 é: <formula>formula see original document page 189</formula>

29. Método de acordo com a reivindicação 29, caracterizado pelo fato de que o agente inibidor PDE7 é: <formula>formula see original document page 189</formula>

30. Método para identificação de um agente que inibe a atividade PDE7 útil para o tratamento de uma anormalidade de movimento associado com a patologia de um distúrbio do movimento neurológico em um indivíduo mamífero em necessidade deste, caracterizado pelo fato de que compreende: (a) determinar o IC50 para a inibição de PDE7A e/ou atividade PDE7B para cada um de uma pluralidade de agentes; (b) selecionar os agentes a partir da pluralidade dos agentes tendo um IC50 para a inibição de PDE7A e/ou atividade PDE7B de menos do que cerca de 1 μΜ; (c) determinar o IC50 para a inibição da atividade PDE4 dos agentes tendo um IC50 para a inibição da atividade PDE7 de menos do que cerca de 1 μΜ; (d) identificar os agentes úteis para o tratamento de um distúrbio de movimento pela seleção dos compostos tendo um IC50 para a inibição da atividade PDE4 maior do que 10 vezes o menor do IC50 para a inibição da atividade PDE7A e 0 IC50 para a inibição da atividade PDE7B; e (e) avaliar a atividade dos compostos identificados em um ensaio modelo do distúrbio de movimento neurológico em que um agente que tem um IC50 pela inibição da atividade PDE7A e/ou PDE7B de menos do que cerca de 1 μΜ e um IC50 para a inibição da atividade PDE4 maior do que 10 vezes o menor do IC50 para a inibição da atividade PDE7A e o IC50 para a inibição da atividade PDE7B; e é determinado a ser eficaz para tratar pelo menos uma anormalidade de movimento em um ensaio modelo é indicativo de um agente inibidor PDE7 útil para o tratamento de uma anormalidade de movimento associado com a patologia de um distúrbio de movimento neurológico em um indivíduo mamífero.

31. Método de acordo com a reivindicação 30, caracterizado pelo fato de que o distúrbio do movimento neurológico é tratável com um agonista ou precursor receptor de dopamina de um agonista receptor de dopamina.

32. Método de acordo com a reivindicação 30, caracterizado pelo fato de que o distúrbio do movimento neurológico é selecionado do grupo que consiste do mal de Parkinson, Parkinsonismo pós-encefalítico, Distonia responsiva à dopamina, síndrome Shy-Drager, distúrbio de movimento periódico do membro (PLMD), movimentos periódicos do membro no sono (PLMS), síndrome de Tourette e síndrome das pernas inquietas (RLS).

33. Método de acordo com a reivindicação 32, caracterizado pelo fato de que o distúrbio do movimento neurológico é o mal de Parkinson.

34. Método de acordo com a reivindicação 32, caracterizado pelo fato de que o distúrbio do movimento neurológico é a síndrome das pernas inquietas (RLS).

35. Método de acordo com a reivindicação 32, caracterizado pelo fato de que o distúrbio do movimento neurológico é o movimento periódico do membro no sono (PLMS).

36. Método de acordo com a reivindicação 30, caracterizado pelo fato de que a etapa do método ainda compreende administrar o agente inibidor PDE7 em conjunção com um agente terapêutico ou precursor de um agente terapêutico que ativa o receptor de Dopamina Dl e/ou aumenta a concentração de Dopamina nos terminais do nervo nigroestriatal e/ou a fenda sináptica nigroestriatal no distúrbio do ensaio do modelo do movimento neurológico e identifica os agentes inibidores PDE7 que produz maior do que efeito aditivo com relação a pelo menos uma anormalidade de movimento quando administrado em combinação com o agonista receptor de dopamina.

37. Método de acordo com a reivindicação 30, caracterizado pelo fato de que ainda compreende determinar o IC5o para a inibição de PDE3 dos agentes tendo um IC50 para a inibição da atividade PDE7A e/ou PDE7B menor do que cerca de 1 μΜ e identificar os agentes úteis para o tratamento de um distúrbio de movimento pela seleção de composto(s) tendo um IC50 para a inibição da atividade PDE3 maior do que 10 vezes o menor do IC50 para a inibição da atividade PDE7A e o IC50 para a inibição da atividade PDE7B.

38. Método de acordo com a reivindicação 30, caracterizado pelo fato de que ainda compreende determinar o IC50 para a inibição de PDE5 dos agentes para o qual o menor do IC50 para a inibição da atividade PDE7A e o IC50 para a inibição da atividade PDE7B é menor do que cerca de 1 μΜ e identificar os agentes úteis para o tratamento um distúrbio de movimento pela seleção dos compostos tendo um IC50 para a inibição da atividade PDE5 maior do que 10 vezes o menor do IC50 para a inibição da atividade PDE7A e o IC50 para a inibição da atividade PDE7B.

39. Método de tratamento de uma anormalidade de movimento associado com a patologia de um distúrbio de movimento neurológico, caracterizado pelo fato de que compreende administrar a um paciente em necessidade deste uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto químico que é um inibidor PDE7, o composto químico distinguido pelo fato de que: (i) o composto químico tem um IC50 para a inibição da atividade PDE7A e/ou PDE7B de menos do que cerca de 1 μΜ; e (ii) o composto químico tem um IC50 para a inibição de PDE 3 maior do que 10 vezes o menor do IC50 para a inibição da atividade PDE7A e oIC50 para a inibição da atividade PDE7B.

40. Método de acordo com a reivindicação 39, caracterizado pelo fato de que o distúrbio do movimento neurológico é tratável com um agonista ou precursor receptor de dopamina de um agonista receptor de dopamina.

41. Método de acordo com a reivindicação 39, caracterizado pelo fato de que o distúrbio do movimento neurológico é selecionado do grupo que consiste do mal de Parkinson, Parkinsonismo pós-encefalítico, Distonia responsiva à dopamina, síndrome Shy-Drager, distúrbio de movimento periódico do membro (PLMD), movimentos periódicos do membro no sono (PLMS), síndrome de Tourette e síndrome das pernas inquietas (RLS).

42. Método de acordo com a reivindicação 41, caracterizado pelo fato de que o distúrbio do movimento neurológico é o mal de Parkinson.

43. Método de acordo com a reivindicação 42, caracterizado pelo fato de que a anormalidade de movimento e pelo menos uma do tremor em repouso, rigidez, bradicinesia, ou deficiencia de reflexos posturais.

44. Metodo de acordo com a reivindica9a0 41, caracterizado pelo fato de que 0 disturbio do movimento neurologico e a s1ndr0me das pemas inquietas (RLS).

45. Metodo de acordo com a reivindica9a0 41, caracterizado pelo fato de que 0 disturbio do movimento neurologico e 0 movimento periodico do membro no sono (PLMS).

46. Metodo de acordo com a reivindica9a0 39, caracterizado pelo fato de que 0 composto quimico tem um IC50 para a inibi9a0 da atividade PDE7A e/ou PDE7B de menos do que cerca de 100 nM.

47. Metodo de acordo com a reivindica9a0 39, caracterizado pelo fato de que 0 composto quimico tem um IC50 para a inibi9a0 da atividade PDElB maior do que 5 vezes 0 menor do IC50 para a inibi9a0 da atividade PDE7A e 0 IC50 para a inibi9a0 da atividade PDE7B.

48. Metodo de acordo com a reivindica9a0 39, caracterizado pelo fato de que 0 composto quimico tem um IC50 para a inibi9a0 da atividade PDElO maior do que 5 vezes 0 menor do IC50 para a inibi5a0 da atividade PDE7A e 0 IC50 para a inibi^k> da atividade PDE7B.

49. Metodo de acordo com a reivindica9a0 39, caracterizado pelo fato de que 0 composto quimico tem um IC50 para a inibi5a0 da atividade PDE4 maior do que 10 vezes 0 menor do ICsp para a inibi9a0 da atividade PDE7A e 0IC50 para a inibi9a0 da atividade PDE7B.

50. Metodo de acordo com a reivindica9a0 39, caracterizado pelo fato de que 0 composto quimico tem um IC50 para a inibi9a0 da atividade PDE8 maior do que 10 vezes 0 menor do IC50 para a inibi5a0 da atividade PDE7A e 0IC50 para a inibi9a0 da atividade PDE7B.

51. Metodo de acordo com a reivindica^ao 39, caracterizado pelo fato de que 0 composto quimico tem um IC50 para a inibi9a0 da atividade PDEl, PDE2, PDE3, PDE4, PDE8 e PDEl 1 maior do que 10 vezes o menor do IC50 para a inibição da atividade PDE7A e o IC50 para a inibição da atividade PDE7B.

52. Método de acordo com a reivindicação 39, caracterizado pelo fato de que o composto químico é um composto químico para o qual o menor do IC50 para a inibição da atividade PDE7A e o IC50 para a inibição da atividade PDE7B é menor do que um décimo o IC50 que o composto tem para a inibição da atividade de qualquer outra enzima PDE a partir das famílias das enzimas PDE1-6 e PDE8-11.

53. Método de acordo com a reivindicação 39, caracterizado pelo fato de que o composto químico é um composto químico para o qual o menor do IC50 para a inibição da atividade PDE7A e o IC50 para a inibição da atividade PDE7B é menor do que um quinquagésimo IC50 que o composto tem para a inibição da atividade de qualquer outra enzima PDE a partir das famílias das enzimas PDE1 -6 e PDE8-11.

54. Método de acordo com a reivindicação 41, caracterizado pelo fato de que o composto químico é um composto químico para o qual o menor do IC50 para a inibição da atividade PDE7A e o IC50 para a inibição da atividade PDE7B é menor do que metade do IC50 que o agente tem para a inibição da atividade em outros alvos moleculares conhecidos a serem envolvidos com a patologia dos distúrbios selecionados do movimento neurológico ou em que outros medicamentos que são terapeuticamente eficazes para tratar a ação do distúrbio.

55. Método de acordo com a reivindicação 42, caracterizado pelo fato de que o composto químico tem um IC50 para a inibição da atividade PDE7 que é menor do que metade do IC50 que o agente tem para a inibição da atividade em outros alvos moleculares conhecido a serem envolvidos com a patologia do mal de Parkinson ou em que outros medicamentos que são terapeuticamente eficazes para tratar a ação do mal de Parkinson.

56.Método de acordo com a reivindicação 39, caracterizado pelo fato de que o composto químico é um composto químico para o qual o menor do IC50 para a inibição de PDE7A e o IC50 para a inibição de PDE7B é menor do que metade do IC50 que o agente tem para a inibição da atividade em outros alvos moleculares conhecidos por serem associados com o caminho de sinalização de dopamina.

57.Método de acordo com a reivindicação 39, caracterizado pelo fato de que o composto químico é administrado em conjunção com um agente dopaminérgico ou um precursor de um agente dopaminérgico.

58. Método de acordo com a reivindicação 57, caracterizado pelo fato de que o agente dopaminérgico é levodopa (L-dopa).

59.Método de acordo com a reivindicação 39, caracterizado pelo fato de que o composto químico é administrado em conjunção com um agente terapêutico ou precursor de um agente terapêutico que ativa o receptor de Dopamina Dl e/ou aumenta a concentração de Dopamina nos terminais do nervo nigroestriatal e/ou a fenda sináptica nigroestriatal.

60.Método de acordo com a reivindicação 39, caracterizado pelo fato de que o composto químico tem um peso molecular de menos do que cerca de 450 g/mol.

61. Método de acordo com a reivindicação 39, caracterizado pelo fato de que o composto químico é capaz de cruzar a barreira cérebro/sangue.

62.Método de acordo com a reivindicação 39, caracterizado pelo fato de que o composto químico é: <formula>formula see original document page 195</formula>

63. Método de acordo com a reivindicação 39, caracterizado pelo fato de que o composto químico é: <formula>formula see original document page 196</formula>

64. Método de acordo com a reivindicação 39, caracterizado pelo fato de que o composto químico é: <formula>formula see original document page 196</formula>

65. Método de acordo com a reivindicação 39, caracterizado pelo fato de que o composto químico é: <formula>formula see original document page 196</formula>

66. Método de tratamento de uma anormalidade de movimento associado com a patologia de um distúrbio neurológico, caracterizado pelo fato de que compreende administrar a um paciente em necessidade deste uma quantidade de um agente inibidor PDE7 eficaz para inibir a atividade enzimática de PDE7 em que tal inibição da atividade enzimática PDE7 é o modo terapêutico principal da ação do inibidor PDE7 no tratamento da anormalidade de movimento.