BRPI0812835B1 - Combinações e produtos contendo um agente inibidor de vegf e do irinotecano. - Google Patents

Abstract

combinações antitumorais contendo um agente inibidor de vegf e do irinotecano. a presente invenção refere-se a combinações antitumorais constituídas de inibidor de vegf associadas ao irinotecano terapeuticamente úteis no tratamento das doenças neoplásicas.

Description

COMBINAÇÕES E PRODUTOS CONTENDO UM AGENTE INIBIDOR DE VEGF E DO IRINOTECANO.

[001] A presente invenção refere-se às combinações de um inibidor de VEGF e de um agente quimiotóxico de classe dos inibidores de topoisomerase úteis no tratamento das doenças neoplásicas.

[002] Os inibidores de VEGF que são inibidores do fator de crescimento vascular endotelial são na maioria dos casos produtos biológicos escolhidos dentre os receptores solúveis, os antissensos, os aptâmeros de RNA e os anticorpos. Os inibidores de topoisomerase úteis no tratamento das doenças neoplásicas conhecidas são escolhidos dentre as camptotecinas, das quais a CPT 11, o toporecano e o piridobenzoindol. A presente combinação visa, em particular, o tratamento do câncer do cólon ou do estômago.

[003] A descrição e o preparo do inibidor do VEGF utilizado, de preferência, na invenção que é uma proteína quimera VEGF-Trap é descrita no pedido de patente WO00/753 19. Há várias formas de realização da proteína quimera.

[004] A forma de realização correspondente ao VEGF-Trap é aquela descrita na figura 24 (sequência). O VEGF Trap utilizado na invenção é uma proteína de fusão, compreendendo a sequência sinal do VEGFR1 fundida no domínio Ig D2 do receptor VEGFR1, ela própria fundida no domínio Ig D3 do receptor VEGFR2 fundida por sua vez no domínio Fc de IgG1 ainda denominada VEGFR1R2-FcΔC ou o FI1D2.Flk1D3.FcΔC1.

[005] Geralmente, as doses de VEGF Trap utilizadas no homem, que dependem dos fatores próprios ao indivíduo a tratar, estão compreendidas entre 1 e 10 miligramas por quilo, quando a administração é feita por via subcutânea ou por via intravenosa.

[006] Dentre os inibidores de topoisomerase prefere-se utilizar o irinotecano ainda conhecido sob a denominação comum de CPT-11.

[007] O irinotecano é geralmente utilizado por via intravenosa a uma dose compreendida entre 100 mg/m2 e 500 mg/m2, segundo o esquema de administração. Utiliza-se, por exemplo, uma dose de 150 mg/m2 para um esquema hebdomadário e uma dose compreendida entre 200 e 400 mg/m2 para um esquema a cada três semanas.

[008] Foi descrito em um artigo de H Hurwitz, L Fehrenbacher, W Novotny, T Cartwright, J Hainsworth, W Heim, J Berlin, A Baron, S Griffing, E Holmgren, N Ferrara, G Fyfe, B Rogers, R Ross, KKabbinavar publicado em "The New England Journal of Medecine" um teste clínico provando uma melhor taxa de sobrevida, quando da utilização da combinação de bevacizumab com o irinotecano, o 5FU e a leucoveurina em relação à mesma combinação não contendo o bevacizumab. Nada prova nesse teste clínico que a melhoria da taxa de sobrevida provém da combinação do irinotecano com o bevacizumab, ela pode também provir das combinações do 5FU ou da leucovorina com o bevacizumab ou pode provir da quádrupla combinação. Ora, conforme é conhecido que cada um dos agentes anticancerígenos oferece ao lado de seu efeito terapêutico dos efeitos secundários tóxico, parece oportuno limitar ao máximo sua presença sobretudo quando o mesmo efeito pode ser obtido na ausência de pelo menos um dentre eles. Por outro lado, esse artigo não prova nenhum efeito sinérgico no sentido de Corbett, isto é, um efeito que não pode ser obtido com cada um dos elementos da combinação utilizado sozinho em sua dose máxima tolerada.

[009] O VEGF Trap é um receptor solúvel criado pela fusão do segundo domínio do VEGFR-1 com o terceiro domínio Ig do VEGFR-2 em seguida fundido na parte Fc de uma IgG1 humana. Como o receptor VEGFR-1, o aflibercept (VEGF Trap) tem uma afinidade muito elevada pelo VEGF-A com um KD de 0,5 picoM. A ligação de elevada afinidade do VEGF Trap com o VEGF-A com um KD de 0,5 picoM. A ligação de alta afinidade do VEGF Trap com o VEGF-A chega à formação de um complexo que impede o VEGF-A de se fixar e ativar seus receptores na superfície das células.

[0010] Em comparação com o Avastin (ou bevacizumab) o VEGF-A Trap é um receptor solúvel, enquanto que o Avastin é um anticorpo dirigido contra o VEGF-A. O VEGF Trap tem uma afinidade para o VEGF-A muito superior àquela do Avastin e um perfil de seletividade diferente, pois o VEGF-A Trap se liga também aos outros ligantes dos receptores VEGFR1-2, isto é, ao PIGF (fator de crescimento placental) e ao VEGF-B. Outras partes, o VEGF Trap tem um peso molecular sensivelmente inferior àquele do Avastin (115 kDa pelo aflibercept versus 160 kDa pelo Avastin) mais favorável à penetração nos tumores sólidos.

[0011] Foi então descoberto, e é o que constitui o objeto da presente invenção, que a eficácia dos inibidores de VEGF pode ser consideravelmente melhorada, quando são administrados em associação com pelo menos uma substância terapeuticamente útil nos tratamentos anticancerígenos tendo um mecanismo de ação diferente daquele dos inibidores do VEGF.

[0012] Por outro lado, a atividade dos produtos, dependendo das doses utilizadas, é possível utilizar doses mais elevadas e aumentar a atividade, diminuindo os fenômenos de toxicidade ou retardando seu aparecimento, associando aos inibidores de VEGF, ou a seus análogos de outras substâncias terapeuticamente ativas dos fatores de crescimento de tipo hematopoiético, tais como o G-CSF ou o GM-CSF ou certas interleucinas.

[0013] Mais particularmente, a invenção se refere às associações de VEGF Trap com irinotecano.

[0014] A eficácia melhorada de uma combinação, segundo a invenção, pode ser colocada em evidência pela determinação do sinergismo terapêutico.

[0015] Uma combinação manifesta um sinergismo terapêutico se é terapeuticamente superior a um e a outro dos constituintes utilizados em sua dose ótima.

[0016] Para colocar em evidência a eficácia de uma combinação, pode ser necessário comparar a dose máxima tolerada da combinação na dose máxima tolerada de cada um dos constituintes isolados no estudo considerado. Essa eficácia pode ser quantificada, por exemplo, pelo log10 das células mortas que é determinado conforme a seguinte fórmula:
Log1 das células mortas = T-C (dias) / 3,32 X Td,
na qual T-C representa o prazo de crescimento das células que é o tempo médio, em dias, para que os tumores do grupo tratado (T) e os tumores do grupo de prova (C) tenham atingido um valor predeterminado (1g, por exemplo) e Td representa o tempo, em dias, necessário à duplicação do volume do tumor nos animais de prova [T.H. CORBETT et coll. Cancer, 40, 2660. 2680 (1977); F.M., SCHABEL et coll, Cancer Drug Development, Part B, Methods in Cancer Research, 17, 3-51, New-York, Academic Press Inc. (1979)]. Um produto é considerado como ativo, se log10 das células é superior ou igual a 0,7. Um produto é considerado como muito ativo, se o log10 das células mortas é superior a 2,8.

[0017] A combinação utilizada em sua dose máxima tolerada própria, na qual cada um dos constituintes estará presente em uma dose geralmente inferior ou igual em sua dose máxima tolerada, manifestará uma sinergia terapêutica, quando o log10 das células mortas for superior ao valor do log10 das células mortas do melhor constituinte quando é administrado sozinho, e notadamente de uma superioridade de pelo menos um log de células mortas.

[0018] A eficácia das combinações sobre os tumores sólidos pode ser determinada experimentalmente da seguinte maneira:
os animais submetidos à experiência, geralmente ratos, são enxertados bilateralmente por via subcutânea com 30 a 60 mg de um fragmento de tumor humano HCT116 (BRATTAIN,M.G., FINE, W.D., KHALED, F.M., THOMPSON, J. e BRATTAIN, D.E., Heterogeneity of malignantcells from a human colonic carcinoma. Cancer Res., 1981, 41, 1751-1756) no dia 0. Os animais que portam os tumores são randomizados antes de serem submetidos aos diversos tratamentos e controles. No caso de tratamento de tumores da presente invenção, deixaram-se os tumores se desenvolver até um tamanho compreendido entre 48 e 294 mg, o que permitiu ter um tumor mediano por grupo compreendido entre 129 e 162 mg. Os animais que sofreram o tratamento com o VEGF Trap sozinhos apresentavam um peso compreendido entre 17,1 e 22,7 g, os animais que sofreram o tratamento com o irinotecano sozinho tinham um peso compreendido entre 17,5 e 22,3 g e aqueles que receberam a combinação tinham um peso compreendido entre 17,5 e 23,6 g. Animais portadores de tumores foram também submetidos aos mesmos tratamentos com o excipiente sozinho, a fim de poder dissociar o efeito tóxico do excipiente do efeito próprio da quimioterapia sobre o tumor. A quimioterapia começou no 12o dia após o enxerto tumoral. As injeções de VEGF Trap foram feitas por via subcutânea simultaneamente às injeções de irinotecano que foram feitas por via intravenosa, segundo uma dupla injeção diária. Essas injeções foram realizadas nos dias 12,15 e 18 após a implantação do tumor. Os diferentes grupos de animais são pesados três ou quatro vezes por semana até que a perda máxima de peso seja atingida, depois os grupos são pesados pelo menos uma vez por semana até o final do teste.

[0019] Os tumores são medidos duas ou três vezes por semana até que o tumor atinja aproximadamente 2 g ou até a morte do animal, se este sobreviver antes que o tumor atinja 2 g. Os animais são autopsiados, quando do sacrifício.

[0020] A atividade antitumoral é determinada em função dos diferentes parâmetros registrados.

[0021] A título de exemplos, são dados, nas tabelas seguintes, os resultados obtidos com combinações do VEGF Trap e do irinotecano utilizados em sua dose ótima.

[0022] A presente invenção se refere também aos kits de composições farmacêuticas contendo os produtos utilizados nas combinações segundo a invenção.

[0023] Os produtos que constituem a combinação podem ser administrados simultaneamente, separadamente ou de uma maneira aferida no tempo, de forma a se obter o máximo de eficácia da combinação; cada administração podendo ter uma duração variável que vai de uma administração total rápida a uma perfusão contínua.

[0024] Resulta daí que, no sentido da presente invenção, as combinações não são unicamente limitadas àquelas que são obtidas por associação física dos constituintes, mas também àquelas que permitem uma administração separada que pode ser simultânea ou aferida no tempo.

[0025] As composições, de acordo com a invenção, são, de preferência, as composições administráveis por via parenteral.

[0026] As composições para administração parenteral são geralmente soluções ou suspensões estéreis farmaceuticamente aceitáveis que podem eventualmente ser preparadas extemporaneamente no momento do uso. Para o preparo de soluções ou de suspensões não-aquosas podem ser utilizados óleos vegetais naturais, tais como o óleo de oliva, o óleo de sésamo, ou o óleo de parafina ou os ésteres orgânicos injetáveis, tais como o oleato de etila. As soluções estéreis aquosas podem ser constituídas de uma solução do produto na água. As soluções aquosas são convenientes para a administração venosa, à medida que o pH é convenientemente ajustado e que a isotonicidade é realizada, por exemplo, por uma quantidade suficiente de cloreto de sódio ou de glicose. A esterilização pode ser realizada por aquecimento ou por qualquer outro meio que não altera a composição. As combinações podem também se apresentar sob a forma de liposomas ou sob a forma de associação com suportes, tais como ciclodextrinas ou os polietileno glicóis.

[0027] Nas combinações, segundo a invenção, cuja aplicação dos constituintes pode ser simultânea, separada ou aferida no tempo, é particularmente vantajoso que a quantidade de derivado do VEGF Trap representa de 10 a 80 % em peso da combinação, esse teor podendo variar em função da natureza da substância associada, da eficácia buscada e da natureza do câncer a tratar.

[0028] As combinações, de acordo com a invenção, são particularmente úteis no tratamento dos cânceres do cólon e/ou do estômago. Em particular, elas podem apresentar a vantagem de poder utilizar os constituintes em doses nitidamente menores do que aquelas às quais são utilizadas sozinhas. O exemplo seguinte ilustra uma combinação, de acordo com a invenção.

EXEMPLO

[0029] Preparam-se, segundo a técnica habitual, para a administração subcutânea, ampolas de 1 cm3, contendo 25 mg de VEGF Trap que são diluídas em um tampão de fosfato a 5mM, citrato de sódio a 5 mM, cloreto de sódio a 100 mM, polissorbato 20 e sacarose a 20 %. O volume de administração por rato é de 0,1 ml. O VEGF Trap é administrado uma vez por dia, nos dias 12, 15 e 18 após a implantação do tumor.

[0030] Prepara-se segundo a técnica habitual, para a administração intravenosa 0,3 ml por rato a partir de uma solução comercial a 20 mg/ml de irinotecano a diluir com dextrose a 5 % na água.

[0031] Essas soluções são administradas simultaneamente, após diluição conveniente.

[0032] O tratamento com o irinotecano é repetido duas vezes por dia com 4 horas de intervalo, nos dias 12, 15 e 18, após a implantação do tumor.

[0033] Os resultados do teste estão reunidos na tabela anexada.

[0034] Tempo de duplicação do tumor = 3,2 dias.

[0035] Abreviaturas utilizadas: (T-C) prazo de crescimento do tumor, Ick = log de células mortas.

[0036] Foi observada uma toxicidade pelo irinotecano sozinho nas doses de 52,4, 32,5 e 20,2 mg/kg/ injeção devido a uma morte na dosagem de 52,4 e uma perda de peso superior a 20 % para as duas dosagens inferiores. Assim, a dose máxima tolerada pelo irinotecano foi de 12,5 mg/kg/inj (dose total injetada de 75,0 mg/kg). A dose de 12,5 mg/kg/injeção foi encontrada ativa com um Ick de 1,8.

[0037] Para o VEGF Trap o produto foi bem tolerado em todas as dosagens testadas e foi descoberto ativo com um Ick de 1,7 a 40 mg/kg/administração e 25 mg/kg/administração. A dose inferior de 10 mg/kg/administração é também ativa com um Ick de 1,3. A dose de 2,5 mg/kg/administração é inativa.

[0038] Para a combinação de irinotecano a 32,5 mg/kg/administração independentemente da dose de VEGF Trap, a combinação foi considerada tóxica com uma perda de peso de 18 % próxima da toxicidade. A dose inferior de 20,2 mg/kg/inj de irinotecano com 40 mg/kg de VEGF Trap foi considerada como a dose máxima tolerada. Essa dose apresentou um Ick de 3,0 julgada muito ativa. O mesmo nível de atividade foi encontrado com as doses inferiores de VEGF Trap como 25, 10, 2,5 mg/kg/administração (Ick de 2,9, 3,0 e 2,9 respectivamente).

[0039] O irinotecano a 12,5 mg/kg/inj associado ao VEGF Trap a 40 mg/kg/administração é ativo com um Ick de 2,7. Essa atividade antitumoral é mantida com 25 e 10 mg/kg de VEGF Trap (Ick de 2,9 e 2,7, respectivamente). A combinação com 2,5 mg/kg/administração de VEGF Trap tem uma atividade de 2,0 Ick.

[0040] Em conclusão, a atividade da combinação de VEGF Trap com o irinotecano mostra um efeito sinergístico com um log de células mortas de 3,0, à dose máxima tolerada da combinação, que corresponde a mais de 1 log de células mortas comparada à atividade de cada um dos compostos utilizados sozinhos que apresenta um log de células mortas de 1,8 e 1,7 (para o irinotecano a 12,5 mg/kg/injeção e VEGF Trap a 40 mg/kg/adminis-tração, respectivamente). Uma atividade antitumoral é mantida em vários níveis de doses abaixo da dose máxima tolerada da combinação.

Claims (5)

1. Combinações, caracterizadas pelo fato de que contêm VEGF Trap com irinotecano, terapeuticamente úteis no tratamento de câncer colorretal.
2. Combinações de acordo com a reivindicação 1, caracterizadas pelo fato de que contêm de 10 a 80 % em peso de VEGF Trap.
3. Combinações de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizadas pelo fato de que VEGF Trap é administrado em uma dose entre 1 e 10 microgramas por quilo.
4. Combinações de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizadas pelo fato de que irinotecano é administrado em uma dose entre 100 mg/m2 e 500 mg/m2.
5. Produtos, caracterizados pelo fato de que contêm VEGF Trap e irinotecano no tratamento de câncer colorretal, como preparações combinadas, como definidas na reivindicação 1, para uso simultâneo, separado ou sequencial na terapia anticancerígena.