BRPI0812875B1 - "in vitro method to indemnify whether or not an individual is under risk of development of severe sepsis, and, test kit - Google Patents

Description

“MÉTODO IN VITRO PARA .IDENTIFICAR SE OU NÃO UM INDIVÍDUO ESTÁ SOB RISCO DE DESENVOLVIMENTO DE SÉPSIS SEVERA, E, KIT DE TESTE” Campo da invenção A invenção refere-se à diagnose de suscetibilidade ao e à prevenção de desenvolvimento de sépsis severa.

Fundamentos da invenção Sépsis é uma resposta inflamatória sistêmica à infecção, que causa falência de órgãos e morte em casos severos. Ela é uma causa cada vez mais comum de morbidez e de mortalidade, particularmente em indivíduos idosos, imunocompromeddos, e críticamente doentes. Tem sido relatado que sépsis é a causa mais comum de morte em unidade de terapia intensiva nâo-coronariana (Bone RC et aí. ; Chest 1992 Jun; 101(6):1644-55). Ela ocorre em 1.-2% de todas as hospitalizações e taxas de mortalidade variam de 20% para sépsis a 40% para sépsis severa a >60% para choque séptico (uma subcategoria de sépsis severa) (Leibovici; Ann Intern Med 1991; 114(8):703, Martin et ai N Engl J Med. 2003 Abr 17:348(16):1546-54). A definição clínica de sépsis é a presença de duas ou mais das seguintes condições: (1) febre (temperatura >38°C) ou hipotermia (temperatura <36°C); (2) batimento cardíaco >90 batidas por minuto; (3) taxa respiratória >20 respirações por minuto ou PaC02 <32 mmHg; e (4) contagem de células brancas do sangue >12 (x 109 células/L) ou <4 (xlO9 células/L), ao mesmo tempo como infecção confirmada ou suspeita.

Condições (1) a (4) são conhecidas como os critérios de SIRS ("Severe Inflammatory Response Syndrome", Síndrome de Resposta Inflamatória Severa) (Bone RC et al.; Chest. 1992 Jun; 101(6):1644-55) e são um padrão internacional reconhecido para diagnose de inflamação severa. Um indivíduo exibindo dois ou mais dos critérios de SIRS sem uma infecção confirmada ou suspeita é classificado como tendo SIRS não-associada à infecção. A definição clínica de sépsis severa é sépsis como definida acima, associada com anormalidades de perfusão, disfimção de órgão ou hipotensão induzida por sépsis. Hipotensão induzida por sépsis é definida como uma pressão sanguínea sistólica de <90 mmHg ou uma redução de <40 mmHg a partir da linha base na ausência de outras causas de hipotensão. Anormalidades de perfusão podem incluir, mas não são limitadas a hipoperfusão, acidose lática, oligúria, ou uma alteração aguda em estado mental. Sépsis severa inclui como uma subcategoria a condição de choque séptico. Esta condição é especificamente definida pela presença de hipotensão induzida por sépsis não obstante renovação de fluido adequada juntamente com a presença de anormalidades de perfusão. Indivíduos que estão recebendo agentes vasopressores ou inotrópicos podem não ser hipotensivos no momento que são medidas as anormalidades de perfusão.

Para o tratamento de sépsis severa, diagnose antes do início dos sintomas mais (hipotensão, disfimção de órgão ou hipoperfusão) com a instituição de tratamento adequado é de máxima importância para um resultado bem (Rivers E et al. . N Engl J Med 2001; 345(19): 1368-77). Por exemplo, Kumar et al. mostraram que mortalidade estava correlacionada com o número de horas após o início de hipotensão induzida por sépsis antes de ser dado o primeiro (Kumar et al. . Crit Care Med 2006;34(6): 1589-96). Um marcador clínico ou biológico confiável para determinar tão cedo quanto possível se um indivíduo está sob risco de desenvolvimento de sépsis severa é necessário para o atraso antes da instituição do tratamento.

Sumário da invenção Proteína ligante de heparina (HBP, CAP37, Azurocidina) é um homólogo de serina protease inativa de 37 kDa negativamente carregada, de cadeia única exibindo 44% de identidade de sequência com elastase de neutrófilo de humano. A estrutura tridimensional de HBP tem sido publicada (Iversen et al. Nat Struct Biol. 1997 Apr; 4(4):265-8). Está contida nos grânulos azurofílicos de neutrófilos de (Lindmark et al., J Leukoc Biol 1999; r 66(4):634-43). E uma proteína multifuncional que tem sido mostrado que induz vazamento vascular pela alteração do balanço Ca do citoesqueleto de vaso (Gautam et al., Nature Medicine 2001; 7(10):1123-7). Tem sido mostrado que a proteína-M de estreptococos de grupo A (GAS) em complexo com fibrinogênio induz liberação de HBP por estimulação do receptor de integrina-B2 de neutrófilos (Herwald et al., Cell 2004; 116(3):367-79). LPS também pode induzir liberação HBP por um mecanismo desconhecido (Rasmussen et al., FEBS Lett 1996; 390(1):109 12). A sequência HBP está publicamente disponível (por exemplo como número de acesso a NCBI de NP 001691 REGION: 27.248) e é reproduzida abaixo como SEQ ID NO: 1 Os níveis de HBP em indivíduos exibindo um ou mais dos critérios SIRS não têm sido previamente investigados. Os inventores têm mostrado pela primeira vez que os níveis HBP estão aumentados em indivíduos que subsequentemente desenvolvem sépsis. Níveis de HBP são aumentados em até 12 horas antes de ser registrada a hipotensão induzida por sépsis, mas rapidamente diminuem se terapia for instituída. Os inventores também têm mostrado pela primeira vez a razão de HBP/Contagem de células brancas do sangue (WBC) está elevada em indivíduos que subsequentemente desenvolvem sépsis severa.

De acordo com a invenção é portanto fornecido um método para identificar se ou não um indivíduo está sob risco de desenvolvimento de sépsis severa, cujo método compreende HBP no indivíduo e deste modo determinar se ou o indivíduo está sob risco de desenvolvimento de sépsis severa. O método da invenção pode adicionalmente medir a WBC ou a contagem de neutrófilos (NC) em um indivíduo, calcular a razão de HBP/WBC ou A razão de HBP/NC respectivamente, e deste modo determinar se ou não o indivíduo está sob risco de desenvolvimento de sépsis severa. O método da invenção assim pode medir a HBP em um indivíduo e calcular o nível de HBP/WBC ou a razão de HBP/NC em um indivíduo, e deste modo determinar se ou não o indivíduo está sob risco de desenvolvimento de sépsis severa. A invenção adicionalmente fornece: um agente para a detecção de HBP para uso na determinação de se ou não um indivíduo está sob risco de desenvolvimento de sépsis severa; um kit de teste para uso em um método para determinar se ou não um indivíduo está sob risco de desenvolvimento de sépsis severa, cujo kit compreende um agente para a detecção de HBP em um indivíduo; um método para reduzir o risco de um indivíduo desenvolver sépsis severa compreendendo: (i) determinar se ou não um indivíduo está sob risco de desenvolvimento de sépsis severa usando um método da invenção; e (ii) administrar a um indivíduo identificado em (i) como sob risco, uma quantidade terapeuticamente eficaz de um agente adequado para o tratamento de infecção e/ou fluidos intravenosos.

Descrição das figuras Figura 1 mostra a concentração de HBP (Figura la), razões de HBP/WBC (Figura lb), níveis de CRP (Figura lc), níveis de IL-6 (Figura ld) e níveis de lactato (Figura le) no grupo de sépsis severa (n=51), grupo de sépsis (n=95), grupo de infecção sem SIRS (n=44) e grupo de infecção com SIRS (n=12). Linha dentro de caixa: média; bordas de caixa: quartis (Ql, Q3); hastes: faixa de valores; x e o: valores discrepantes identificados pelo número do paciente. Linhas representando valores de ponto de corte para nível de HBP de 20 ng/ml e razão de HBP/WBC de 2 para Figuras la e lb respectivamente Figura 2 mostra uma curva de ROC para o nível de HBP e/ou a razão de HBP/WBC, o nível de HBP, a razão de HBP/WBC, lactato, contagem de células brancas do sangue, CRP, e IL-6. A linha reta de 0,0 a 1,1 é uma linha de referência. Segmentos diagonais são produzidos por traços e pontos.

Figura 3 mostra a razão de HBP/WBC(Figura 3a) ou a concentração de HBP (Figura 3b) para cada indivíduo (n=51) no grupo de sépsis severa, plotada contra o tempo desde a coleta da primeira amostra de plasma relativa ao momento da pressão sanguínea (indicada pela seta em 0 h). Círculos vazios Figura 3a representam pacientes que caíram abaixo do nível de ponto de corte da razão HBP/WBC mas classificados acima de um nível de ponto de corte de concentração de HBP. Círculos vazios em Figura 3b representam pacientes que caíram abaixo do nível de ponto de corte de concentração de HBP mas classificados acima do nível de ponto de corte da razão de HBP/WBC.

Figura 4 mostra a mudança em razão de HBP/WBC em amostras de plasma consecutivas tiradas de 16 pacientes com sépsis severa durante 96 horas (Figura 4a) e de 7 pacientes com sépsis, infecção sem SIRS ou sem infecção durante mais de 72 horas (Figura 4b). Cada linha representa um paciente individual.

Descrição detalhada da invenção Diagnose A presente invenção refere-se a um método para identificar se ou não um sujeito está sob risco de desenvolvimento de sépsis severa. A invenção portanto se refere à diagnose de suscetibilidade de um indivíduo à sépsis severa. O indivíduo sob teste é tipicamente suspeito de estar sob risco de desenvolvimento de sépsis severa. O indivíduos é tipicamente um mamífero. O mamífero é tipicamente um humano ou um mamífero doméstico tal como um cavalo, uma vaca, uma ovelha, um cão ou um gato. O indivíduo é preferivelmente um humano. O indivíduo pode ser suspeito de estar sob risco de desenvolvimento de sépsis severa porque tem uma infecção confirmada ou suspeita, e/ou exibe um ou mais, ou dois ou mais, dos critérios de SIRS. Os critérios de SIRS são: (1) febre (temperatura >38°C) ou hipotermia (temperatura <36°C); (2) batimento cardíaco >90 batidas por minuto; (3) taxa respiratória >20 respirações por minuto ou PaC02 <32 mmHg; e (4) contagem de células brancas do sangue >12 (xlO9 células/L) ou <4 (xlO9 células/L). A infecção confirmada ou suspeita é tipicamente uma ou mais de uma infecção bacteriana, parasítica ou fungica. Uma infecção bacteriana pode ser causada por uma ou mais bactérias Gram-negativas ou Gram-positivas. As uma ou mais bactérias Gram-negativas podem ser selecionadas de Escherichia coli, Klebsiella spp. (tipicamente K. pneumoniae ou K.oxytoca), Enterobacter spp (tipicamente E. cloacae ou E. aerogenes), Bordetella spp. (tipicamente B. bronchiseptica, B. pertussis ou B. parapertussis), Chlamydia spp. (tipicamente C. trachomatisj, Legionella spp. (tipicamente L. pneumophilia), Pseudemonas spp. (tipicamente P. aeruginosa), Mycoplasma spp. (tipicamente M. pneumoniae), Haemophilus influenza, Serratia marcescens, Proteus mirabilis, Acinetobacter baumannii, Stenotrophomonas maltophilia e Neisseria meningitidis (tipicamente de sorogrupo A, B, C, Η, I, K, L, X, Y, Z, 29E ou W135). As uma ou mais bactérias Gram-positivas podem ser selecionadas de Staphylococcus spp. (tipicamente S. aureus ou Staphylococci negativos para coagulasej, Streptococcus spp. (tipicamente S. pneumoniae ou S. pyogenes) e Enterococcus spp. (tipicamente E. faecium ou E .faecalis). Uma infecção fungica pode ser causada por um ou mais fungos selecionados de Candida albicans, Candida tropicalis, Candida parapsilosis, Candida krusei, Candida glabrata e Aperigillus fumigatus. A infecção confirmada ou suspeita pode afetar qualquer parte do corpo. Exemplos típicos incluem uma infecção que afeta os pulmões; o trato respiratório, o fígado; os rins; o trato urinário; a pele (cutânea ou subcutânea); o coração; o estômago; os intestinos; o sangue; os ossos; as articulações ou qualquer combinação dos mesmos. A infecção confirmada ou suspeita pode ser meningite. A infecção pode ser confirmada por práticas diagnosticas conhecidas na arte, por exemplo cultura microbiana de amostras tiradas do indivíduo, teste de antígeno de urina ou outras amostras de fluido tiradas do indivíduo (especialmente para infecções de S. pneumoniae e Legionella sp.) ou análise por PCR (especialmente para pneumonia atípica causada por infecção bacteriana e.g. Mycoplasma, Legionella, Chlamydia, e B. pertussis). Mais recentemente têm sido desenvolvidas técnicas de multiplex PCR que permitem o teste simultâneo para múltiplas infecções fungicas e bacterianas. A infecção pode ser suspeitada por causa da presença de um ou mais dos seguintes sintomas: febre mais alta do que 38°C; calafrios; dor; uma sensibilidade ou dor contínua; sentimento geral de fadiga; sudoreses noturnas; e um ferimento ou uma incisão com vermelhidão associada, calor, sudorese ou dor, que exsuda um fluido que é branco, amarelado ou esverdeado. A presente invenção pode ser usada para confirmar suscetibilidade em um indivíduo com um ou mais fatores de risco adicionais e/ou um ou mais predisposições para o desenvolvimento de sépsis severa. Fatores de risco que aumentam a suscetibilidade para desenvolver sépsis severa tipicamente incluem qualquer fator que aumenta a suscetibilidade à infecção. Estes fatores podem incluir um sistema imune enfraquecido (i.e. o indivíduo está imunocomprometido), ou a presença em um paciente hospitalizado de uma linha intravenosa, um ferimento cirúrgico, um dreno cirúrgico, ou um sítio de decomposição de pele conhecido como úlcera de decúbito ou escaras. Um indivíduo diabético é mais propenso ao desenvolvimento de sépsis severa. O método diagnóstico da invenção pode ser realizado conjuntamente com outro teste genético ou ensaio para refinar a predição do risco.

Tipicamente, o indivíduo não tem uma doença associada à inflamação crônica e/ou não exibe sintomas que estejam especificamente associados com tais doenças. Exemplos de tais doenças incluem aterosclerose, mal de Alzheimer, asma, artrite reumatóide, osteoartrite, e doenças inflamatórias do intestino tal como doença de Crohn, Colite ulcerativa, Síndrome do intestino irritável e doença inflamatória intestinal. Se o indivíduo tem uma doença associada à inflamação crônica, ele adicionalmente tem uma infecção confirmada ou suspeita como definida acima e/ou exibe um ou mais, ou dois ou mais, dos critérios de SIRS.

Tipicamente, o indivíduo não tem sépsis severa ou não exibe sintomas que levariam a uma diagnose de sépsis severa. Tipicamente tais sintomas incluem anormalidades de perfusão, disíunção de órgão ou hipotensão induzida por sépsis. Hipotensão induzida por sépsis é definida como uma pressão sanguínea sistólica de <90 mmHg ou uma redução de <40 mmHg a partir da linha base na ausência de outras causas de hipotensão. Anormalidades de perfusão podem incluir, mas não são limitadas a hipoperfusão, acidose lática, oligúria, ou uma alteração aguda em estado mental. Sépsis severa inclui como uma subcategoria a condição de choque séptico. Esta condição é especificamente definida pela presença de hipotensão induzida por sépsis não obstante renovação de fluido adequada juntamente com a presença de anormalidades de perfusão. Indivíduos que estão recebendo agentes vasopressores ou inotrópicos podem não ser hipotensivos no momento que são medidas as anormalidades de perfusão. A presente invenção envolve medir o nível de HBP em um indivíduo. Tipicamente o nível de HBP é medido pela determinação da concentração de HBP em uma amostra de fluido tirada do indivíduo. De acordo com a presente invenção, um nível aumentado de HBP comparado com o nível ou a concentração de linha bane indica que o indivíduo é suscetível a ou está sob risco de desenvolvimento de sépsis severa. O nível de linha base é tipicamente o nível de HBP em um indivíduo que é suspeito em estar sob risco de desenvolvimento de sépsis severa mas não subsequentemente desenvolve sépsis severa. Por exemplo os inventores têm mostrado que, quando o nível de HBP é medido por determinação da concentração de HBP em uma amostra de plasma tirada de um indivíduo, indivíduos que desenvolvem sépsis não-severa têm uma concentração média de HBP de cerca de 8,5 ng/ml, indivíduos que têm uma infecção confirmada ou suspeita mas exibem um ou menos dos critérios de SIRS têm uma concentração média de HBP de cerca de 6,5 ng/ml, e indivíduos que exibem dois ou mais critérios de SIRS na ausência de infecção têm uma concentração média de HBP de cerca de 9 ng/ml. A concentração média de HBP para todas as categorias de indivíduos que são suspeitos de estarem sob risco de desenvolvimento de sépsis severa mas não subsequentemente desenvolvem sépsis severa é cerca de 8 ng/ml.

Na presente invenção, em uma amostra de fluido tirada de um indivíduo uma concentração aumentada de HBP associada com suscetibilidade aumentada à ou ao risco de desenvolvimento de sépsis severa é tipicamente maior do que cerca de 15 ng/ml, ou maior do que cerca de 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 ou 24 ng/ml. A concentração aumentada de HBP associada com suscetibilidade aumentada à ou ao risco de desenvolvimento de sépsis severa é preferivelmente maior do que cerca de 20 ng/ml.

De acordo com a presente invenção, o aumento na concentração ou no nível de HBP associado(a) com suscetibilidade aumentada à ou ao risco de desenvolvimento de sépsis severa é pelo menos 2 vezes, 2,5 vezes ou 3 vezes em relação à concentração ou ao nível de linha base. O aumento em concentração ou nível de HBP associado com a suscetibilidade aumentada à ou ao risco de desenvolvimento de sépsis severa é preferivelmente pelo menos 2,5 vezes em relação à concentração ou ao nível de linha base. A presente invenção pode portanto também envolver avaliação da razão de HBP/contagem de células brancas do sangue (WBC) para determinar o risco de desenvolvimento de sépsis severa.

De acordo com a presente invenção, uma razão de HBP/WBC aumentada comparada com a razão de linha base indica que o indivíduo é suscetível à ou está sob risco de desenvolvimento de sépsis severa. A razão de linha base é tipicamente a razão deHBP/WBC em um indivíduo que é suspeito em estar sob risco de desenvolvimento de sépsis severa mas não subsequentemente desenvolve sépsis severa. Quando a concentração de HBP em uma amostra de fluido é medida em ng/ml e a WBC em uma amostra de sangue é medida em número de células xl09/l, os inventores têm mostrado que, por exemplo, indivíduos que desenvolvem sépsis não-severa têm uma razão média de HBP/WBC de cerca de 0,7:1, indivíduos que têm uma infecção confirmada ou suspeita mas exibem um ou menos critérios de SIRS têm uma razão média de HBP/WBC de cerca de 0,85:1, e indivíduos que exibem dois ou mais critérios de SIRS na ausência de infecção têm uma razão média de HBP/WBC de cerca de 0.9:1. A razão média de HBP/WBC para todas as categorias de indivíduos que são suspeitos de estarem sob risco de desenvolvimento de sépsis severa mas subsequentemente não desenvolvem sépsis severa é cerca de 0,75:1.

Na presente invenção, quando a concentração de HBP em uma amostra de fluido é medida em ng/ml e a contagem WBC em uma amostra de sangue é medida em número de células xl09/l, uma razão aumentada de HBP/WBC associada com suscetibilidade aumentada à ou ao risco de desenvolvimento de sépsis severa é tipicamente maior do que cerca de 1,4:1, ou maior do que cerca de 1,5:1, 1,6:1, 1,7:1, 1,8:1, 1,9:1, 2,0:1, 2,1:1, 2,2:1, 2,3:1 ou 2,4:1. A razão aumentada de HBP/WBC associada com suscetibilidade aumentada à ou ao risco de desenvolvimento de sépsis severa é preferivelmente maior do que cerca de 2,0:1.

De acordo com a presente invenção, o aumento em razão de HBP/WBC associado com suscetibilidade aumentada à ou ao risco de desenvolvimento de sépsis severa é pelo menos 1,5 vezes, 2 vezes, 2,5 vezes ou 3 vezes em relação à razão de linha base. O aumento em razão de HBP/WBC associado com suscetibilidade aumentada à ou ao risco de desenvolvimento de sépsis severa é preferivelmente pelo menos 2,5 vezes em relação à razão de linha base.

Os presentes inventores têm determinado que a contagem média de neutrófilos (NC) em indivíduos suspeitos de estarem sob risco de desenvolvimento de sépsis severa é cerca de 80% da contagem de células brancas do sangue (WBC). A presente invenção também pode avaliar a razão de HBP/NC para determinar o risco de desenvolvimento de sépsis severa.

De acordo com a presente invenção, uma razão aumentada de HBP/NC comparada com a razão de linha base indica que um indivíduo é suscetível à ou ao risco de desenvolvimento de sépsis severa. A razão de linha base é tipicamente a razão de HBP/NC em um indivíduo que não tem uma infecção e/ou não exibe nenhuns dos critérios de SIRS. Quando a concentração de HBP em uma amostra de fluido é medida em ng/ml e a contagem NC em uma amostra de sangue é medida em número de células xl09/l, os inventores têm mostrado que, por exemplo, indivíduos que desenvolvem sépsis não-severa têm uma razão média de HBP/NC de cerca de 0,55:1, indivíduos que têm uma infecção confirmada ou suspeita mas exibem um ou menos critérios de SIRS têm uma razão média de HBP/NC de cerca de 0,65:1, e indivíduos que exibem dois ou mais critérios de SIRS na ausência de infecção têm uma razão média de HBP/NC de cerca de 0,7:1. A razão média de HBP/NC para todas as categorias de indivíduos que são suspeitos de estarem sob risco de desenvolvimento de sépsis severa mas subsequentemente não desenvolvem sépsis severa é cerca de 0,6:1.

Na presente invenção, quando a concentração de HBP em uma amostra de fluido é medida em ng/ml e a contagem NC em uma amostra de sangue é medida em número de células xl09/l, uma razão aumentada de HBP/NC associado com suscetibilidade aumentada à ou ao risco de desenvolvimento de sépsis severa é tipicamente maior do que cerca de 1,1:1, ou maior do que cerca de 1,2:1, 1,3:1, 1-4:1, 1,5:1, 1,6:1, 1,7:1, 1,8:1 ou 1,9:1. A razão aumentada de HBP/NC associada com suscetibilidade aumentada à ou ao risco de desenvolvimento de sépsis severa é preferivelmente maior do que cerca de 1,6:1.

De acordo com a presente invenção, o aumento em razão de HBP/NC associado com suscetibilidade aumentada à ou ao risco de desenvolvimento de sépsis severa é pelo menos 1.5 vezes, 2 vezes, 2.5 vezes ou 3 vezes em relação à razão de linha base. O aumento em razão de HBP/NC associado com suscetibilidade aumentada à ou ao risco de desenvolvimento de sépsis severa é preferivelmente pelo menos 2,5 vezes em relação à razão de linha base. A invenção é tipicamente realizada in vitro em uma amostra obtida do indivíduo. A amostra tipicamente compreende um fluido corporal do indivíduo. A amostra é preferivelmente uma amostra de sangue, plasma, soro, urina, fluido cerebroespinhal ou fluido de articulação. A amostra é mais preferivelmente uma amostra de sangue. A amostra é tipicamente processada antes de ser ensaiada, por exemplo por centrifugação. A amostra também pode ser tipicamente armazenada antes do ensaio, preferivelmente abaixo de-70°C. Métodos padrão conhecidos na arte podem ser usados para ensaiar o nível de HBP. Estes métodos tipicamente envolvem o uso de um agente para a detecção de HBP. O agente tipicamente se liga especificamente em HBP. O agente pode ser um anticorpo específico para HBP. Por específico, será entendido que o agente ou anticorpo se liga em HBP sem reatividade cruzada significativa com qualquer outra molécula, particularmente qualquer outra proteína. Por exemplo, um agente ou anticorpo específico para HBP não mostrará reatividade cruzada significativa com elastase de neutrófilo de humano. Reatividade cruzada pode ser avaliada por qualquer método adequado.

Um anticorpo usado no método da invenção pode ser quer um anticorpo inteiro quer um seu fragmento que é capaz de se ligar em HBP. O anticorpo pode ser monoclonal. Um tal anticorpo inteiro é tipicamente um anticorpo que é produzido por qualquer método adequado conhecido na arte. Por exemplo, anticorpos policlonais podem ser obtidos por imunização de um mamífero, tipicamente um coelho ou um camundongo, com HBP sob condições adequadas e isolamento de moléculas de anticorpo de, por exemplo, do soro de dito mamífero. Anticorpos monoclonais podem ser obtidos por métodos recombinantes ou hibridoma. Métodos de hibridoma envolvem imunização de um mamífero, tipicamente um coelho ou um camundongo com HBP sob condições adequadas, então colheita de células de baço de dito mamífero e fusão delas com células de mieloma. A mistura de células fusionadas é então diluída e clones são crescidos das células parentais individuais. Os anticorpos secretados por clones diferentes são então testados para sua capacidade de se ligarem em HBP, e o clone mais produtivo e estável é então crescido em meio de cultura para um volume alto. O anticorpo secretado é colhido e purificado. Métodos recombinantes envolvem a clonagem em fago ou levedura de segmentos de gene de imunoglobulina diferentes para criar bibliotecas de anticorpos com sequências de aminoácidos ligeiramente diferentes. Aquelas sequências que produzem anticorpos que se ligam em HBP podem ser selecionadas e as sequências clonadas em, por exemplo, uma linhagem de célula bacteriana, para produção.

Tipicamente o anticorpo é um anticorpo de mamífero, tal como um anticorpo de primata, humano, roedor (e.g. camundongo ou rato), coelho, ovino, porcino, equino ou camelo. O anticorpo pode ser um anticorpo de camelídeo ou anticorpo de tubarão. O anticorpo pode ser um nanocorpo. O anticorpo pode ser qualquer classe ou isótipo de anticorpo, por exemplo IgM, mas é preferivelmente IgG. O fragmento de anticorpo inteiro que pode ser usado no método compreende um sítio de ligação de antígeno, e.g. fragmentos Fab ou F(ab)2. O anticorpo inteiro ou fragmento pode estar associado com outros grupos, tais como ligantes que podem ser usados para unir juntos 2 ou mais fragmentos ou anticorpos. Tais ligantes podem ser ligantes químicos ou podem estar presentes na forma de uma proteína de fusão com o fragmento ou anticorpo inteiro. Os ligantes assim podem ser usados para unir juntos anticorpos inteiros ou fragmentos que têm especificidades de ligação iguais ou diferentes, e.g. que podem ser ligar em polimorfismos iguais ou diferentes. O anticorpo pode ser um anticorpo biespecífico que é capaz de se ligar em dois antígenos diferentes, tipicamente quaisquer dois ou mais dos polimorfismos aqui mencionados. O anticorpo pode ser um 'diacorpo' formado pela união de dois domínios variáveis costas com costas. No caso no qual os anticorpos usados no método estão presentes em qualquer uma das formas acima que têm sítios de ligação de antígeno diferentes de especificidades diferentes então estas especificidades diferentes são tipicamente para polimorfismos em posições diferentes ou em proteínas diferentes. Em uma modalidade o anticorpo é um anticorpo quimérico compreendendo sequência de anticorpos naturais diferentes , por exemplo um anticorpo humanizado. Métodos para avaliar o nível de HBP tipicamente envolvem contatar uma amostra com um agente ou anticorpo capaz de se ligar especificamente em HBP. Tais métodos podem incluir ensaios com tira reativa e Ensaio Imunossorvente Ligado à Enzima ("Enzyme-linked Immunosorbant Assay", ELISA). Tipicamente tiras reativas compreendem um(a) ou mais anticorpos ou proteínas que especificamente se ligam em HBP. Se mais do que um anticorpo estiver presente, os anticorpos preferivelmente terão determinantes não-sobrepostos diferentes de tal modo que eles poderão se ligar em HBP simultaneamente. ELISA é um ensaio em fase sólida, heterogênea, que exige a separação de reagentes. ELISA é tipicamente realizado usando a técnica de sanduíche ou a técnica competitiva. A técnica de sanduíche exige dois anticorpos. O primeiro especificamente se liga em HBP e está ligado em um suporte sólido. O segundo anticorpo está ligado em um marcador, tipicamente um conjugado de enzima. Um substrato para a enzima é usado para quantificar o complexo de HBP-anticorpo e como consequência a quantidade de HBP em uma amostra. O ensaio de inibição competitiva de antígeno também tipicamente exige um anticorpo específico para HBP ligado em um suporte. Um conjugado de HBP-enzima é adicionado na amostra (contendo HBP) a ser ensaiada. Inibição competitiva entre o conjugado de HBP-enzima e HBP não marcada permite quantificação da quantidade de HBP em uma amostra. O suporte sólido para as reações de ELISA preferivelmente contêm cavidades. A presente invenção também utiliza métodos de medição de HBP que não compreendem anticorpos. Separação por Cromatografia Líquida de Desempenho Alto ("High Performance Liquid Chromatography", HPLC) e detecção por fluorescência é preferivelmente usada como um método de determinação do nível de HBP. Métodos e aparelho de HPLC como previamente descritos podem ser usados (Tsikas D et al. J Chromatogr B Biomed Sei Appl 1998; 705: 174-6). Separação durante HPLC é tipicamente realizada tendo por base o tamanho ou a carga. Antes da HPLC, aminoácidos endógenos e um padrão interno L-homo-arginina são tipicamente adicionados nas amostras de ensaio e estas são extraídas em fases em cartuchos CBA (Varian, Harbor City, CA). Aminoácidos dentro das amostras são preferivelmente derivados com o-ftalaldeído (OPA). A acurácia e a precisão do ensaio são preferivelmente determinadas dentro de amostras de controle de qualidade para todos os aminoácidos. Métodos padrão conhecidos na arte podem ser usados para medir a contagem de células brancas do sangue ou contagem de neutrófilos em um indivíduo. Tais métodos incluíam contagem automática ou manual. A invenção adicionalmente fornece um kit diagnóstico que compreende maio para medir um nível de HBP em um indivíduo e deste modo determinar se ou não o indivíduo está sob risco de desenvolvimento de sépsis severa. O kit tipicamente contém um ou mais anticorpos que especificamente se ligam em HBP. Por exemplo, o kit pode compreender um anticorpo monoclonal, um anticorpo policlonal, um anticorpo de cadeia única, um anticorpo quimérico, um anticorpo enxertado em CDR ou um anticorpo humanizado. O anticorpo pode ser uma molécula de imunoglobulina intacta ou um seu fragmento tal como um fragmento Fab, F(ab')2 ou Fv. Se mais do que um anticorpo estiver presente, os anticorpos preferivelmente têm determinantes não-sobrepostos diferentes de tal modo que eles podem se ligar em HBP simultaneamente. O kit pode adicionalmente compreender meio para a medição da contagem WBC em um indivíduo. O kit pode adicionalmente compreender um ou mais outros reagentes ou instrumentos que permitem que qualquer uma das modalidades do método acima mencionado sejam realizadas. Tais reagentes ou instrumentos incluem um ou mais dos seguintes: tampão adequado (tampões adequados) (soluções aquosas), meio para isolar HBP da amostra, meio para obter uma amostra de um indivíduo (tal como um vaso ou um instrumento compreendendo uma agulha) ou um suporte compreendendo cavidades sobre as quais são realizadas reações quantitativas. O kit pode, opcionalmente, compreender instruções para permitir que o kit seja usado no método da invenção ou detalhes relacionados com quais indivíduos o método pode ser realizado.

Terapia A presente invenção também se refere ao tratamento de um indivíduo identificado por um método da invenção como sob risco de desenvolvimento de sépsis severa. Assim, uma substância para uso na redução do risco de desenvolvimento de sépsis severa pode ser usada na manufatura de um medicamento para uso no tratamento de um indivíduo identificado por um método da invenção como sob risco de desenvolvimento de sépsis severa. A condição de um indivíduo identificado por um método da invenção como sob risco de desenvolvimento de sépsis severa pode ser portanto melhorada pela administração de uma tal substância. Sépsis pode ser assim prevenida.

Uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma substância útil para reduzir o risco de desenvolvimento de sépsis severa pode ser dada a um indivíduo identificado por um método da invenção como em necessidade da mesma. Substâncias adequadas para reduzir o risco de desenvolvimento de sépsis severa tipicamente incluem um ou mais antibióticos e/ou um ou mais fluidos intravenosos. Os um ou mais antibióticos são tipicamente antibióticos de amplo espectro. Os antibióticos de amplo espectro são tipicamente selecionados de um ou mais aminoglicosídeos, cefalosporinas, fluoroquinolonas, lincosamidas, macrolidas, penicilinas, sulfonamidas, ou tetraciclinas. Por exemplo, antibióticos adequados incluem, mas não são limitados a, Gentamicina, Canamicina Neomicina, Estreptomicina, Tobramicina, Cefazolina, Cefalexina, Cefapirina, Cefradina, Cefuroxima, Cefixima, Cefotaxima, Ceftazidima, Ceftizoxima, Ceftriaxona, Ciprofloxacina, Levofloxacina, Ofloxacina, Clindamicina, Azitromicina, Claritromicina, Eritromicina, Amoxicilina, Ampicilina, Ampicilina-Sulbactam, Cloxacilina, Dicloxacilina, Mezlocilina, Nafcilina, Oxacilina, Penicilina G Benzatina, Penicilina G Potássio, Penicilina G Procaína, Penicilina V Potássio, Piperacilina ,Ticarcilina, Ticarcilina-Clavulanato potássio, Pirimetamina-Sulfadoxina, Sulfadizina, Sulfisoxazol, Sulfmetoxazol, Trimetoprim-sulfametoxazol, Clortetraciclina, Doxiciclina, e Tetraciclina.

Uma substância útil para reduzir o risco de desenvolvimento de sépsis severa de acordo com a invenção é tipicamente formulada para administração na presente invenção com um diluente ou veículo farmaceuticamente aceitável. O diluente ou veículo farmacêutico pode ser, por exemplo, uma solução isotônica. Por exemplo, formas orais sólidas podem conter, juntamente com a substância ativa, diluentes, e.g. lactose, dextrose, sacarose, celulose, amido de milho ou amido de batata; lubrificantes, e.g. sílica, talco, ácido esteárico, estearato de magnésio ou de cálcio, e/ou poli(etileno-glicóis); agentes aglutinantes; e.g. amidos, goma arábica, gelatina, metil-celulose, carbóxi-metil-celulose ou poli(vinil-pirrolidona); agentes desintegrantes , e.g. amido, ácido algínico, alginatos ou amido-glicolato de sódio; misturas efervescentes; corantes; edulcorantes; agentes umectantes, tais como lecitina, polissorbatos, lauril-sulfatos; e, em geral, substâncias farmacologicamente inativas e não-tóxicas usadas em formulações farmacêuticas. Tais preparações farmacêuticas podem ser manufaturadas em maneira conhecida, por exemplo, por meio de misturação, granulação, formação de tabletes, revestimento de açúcar, ou processos de revestimento de filme.

Dispersões líquidas para administração oral podem ser xaropes, emulsões ou suspensões. Os xaropes podem conter veículos, por exemplo sacarose ou sacarose com glicerina e/ou manitol e/ou sorbitol.

Suspensões e emulsões podem conter como veículo, por exemplo uma goma natural, ágar, alginato de sódio, pectina, metil-celulose, carbóxi-metil-celulose, ou poli(vinil-álcool). As suspensões ou soluções para injeções intramusculares podem conter, juntamente com a substância ativa, um veículo farmaceuticamente aceitável, e.g. água estéril, azeite de oliva, oleato de etila, glicóis, e.g. propileno-glicol, e se desejada, uma quantidade adequada de cloridrato de lidocaína.

Soluções para administração intravenosa ou infusão podem conter como veículo, por exemplo, água estéril ou preferivelmente podem estar na forma de soluções salinas isotônicas, aquosas, estéreis.

Uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma substância usada na prevenção de sépsis severa é administrada a um paciente identificado de acordo com um método da invenção. A dose, por exemplo de um antibiótico, pode ser determinada de acordo com vários parâmetros, especialmente de acordo com a substância usada; a idade, o peso e a condição do paciente a ser tratado; a rota de administração; e o regime exigido. De novo, um médico será capaz de determinar a rota de administração e a dosagem exigidas para qualquer paciente particular. Uma dose diária típica é de cerca de 0,1 a 50 mg por kg de peso corporal, de acordo com a atividade do antibiótico específico, a idade, o peso e as condições do sujeito a ser tratado, e a frequência e rota de administração. Preferivelmente, níveis de dosagem diária são de 5 mg a 2 g. Aquela dose pode ser fornecida como uma dose única ou pode ser fornecida como doses múltiplas, por exemplo tomadas em intervalos regulares, por exemplo 2, 3 ou 4 doses administradas diariamente. O seguinte Exemplo ilustra a invenção: Exemplo 1. Métodos Participantes do estudo 202 pacientes adultos com infecção clinicamente suspeita foram inscritos em um estudo prospectivo no Infectious Disease Clinic, Lund University Hospital, Suécia, entre Março de 2006 e Abril de 2007. Critérios de inclusão foram febre> 38°C e tratamento com antibiótico por menos de 24 horas. Duração do tratamento com antibiótico, demografia, critérios de SIRS e pressão sanguínea sistólica (SBP) foram registrados na admissão, proteína C-reativa (CRP), lactato e contagem WBC foram analisados, e amostras de plasma para análise posterior de níveis de HBP, IL-6 foram obtidas dentro de 12 horas a partir da admissão. Em 20 pacientes amostras de plasma seriais foram obtidas por até 96 horas em paralelo com registro de critérios de SIRS e SBP. Após liberação, a diagnose final e mortalidade de 28 d foram registradas e os pacientes foram classificados de acordo com os critérios de SIRS (Bone etal., Chest 1992; 101(6): 1644-55). Sépsis severa (grupo 1) foi definida como a presença de sépsis e SBP < 90 mmHg ou uma queda de SBP de > 40 mmHg a partir da linha base 24 h da coleta das amostras de sangue, sépsis (grupo 2) foi definida como exibição de dois ou mais critérios de SIRS juntamente com uma infecção, não-sépsis (grupo 3) foi definida como exibição de um critério de SIRS juntamente com uma infecção, e não-infecção (grupo 4) foi definida como exibição de dois ou mais critérios de SIRS juntamente com uma diagnose final de não-infecção.

Diagnoses de infecção finais foram pneumonia (n=61), infecção do trato respiratório superior (n=35), infecção do trato urinário (n=3 8), infecção cutânea e subcutânea (n=29), endocardite (n=4), gastroenterite(n=12), ou outras infecções incluindo infecções tópicas (n=ll). Em 35 pacientes (17%) bacteriemia foi diagnosticada (17 com bactérias Gram-negativas e 18 com bactérias Gram-positivas). Diagnoses de não-infecção com exibição de dois ou mais critérios de SIRS foram embolia pulmonar e vasculite sistêmica. Amostras de sangue foram coletadas em tubos plásticos com citrato para plasma de 4 mL, imediatamente centrifugadas a 3000 rpm por 10 min, aliquotadas e armazenadas a -70°C até análise.

Análise de MBP, IL-6, CRP. lactato.WBC e razão de HBP/WBC A concentração de HBP (ng/ml) foi determinada per um ELISA de sanduíche como descrito em (Tapper et al. .; Blood 2002; 99(5): 1785-93). Amostras de plasma foram diluídas 1/40 em PBS e processadas em duplicatas. EBP recombinante de humana foi produzida e purificada como descrito em (Rasmussen et al.FEBS Lett 1996; 390(1): 109-12). Anticorpos monoclonais de camundongo (2F23A) e anti-soro de coelho (409A) para HBP recombinante foram preparados e purificados como descrito em (Lindmark et al.; J. Leukoc. Biol 1999; 66(4):634-43) e usados a 1/3000 e 1/7000 respectivamente. IgG de cabra anti-coelho conjugada com peroxidase de Bio-Rad Laboratories (Richmond, CA), foi usada a 1/3000. Uma razão de HBP/WBC foi calculada pela divisão da concentração de HBP (ng/ml) por WBC (xlO9 células/L). IL-6 foi medida com um kit de IL-6 de humano comercial (Quantikine, R&D Systems, UK), limite de detecção de 3pg/mL. Amostras de plasma foram diluídas 1/40. Análises de CRP e lactato foram realizadas em um Hitachi Modular-P com reagentes de Roche Diagnostics (Mannheim, Alemanha) de acordo com a descrição do fabricante exceto que as amostras para a análise de lactato foram tiradas de tubo com citrato para plasma em vez de tubos com oxalato-fluoreto.

Contagem de células brancas do sangue (WBC) foi medida em um Sysmex XE2100 de acordo com a descrição do fabricante (Sysmex).

Análise estatística Dados são apresentados como médias faixas de interquartis. Teste de significância foi realizado usando o teste de soma dos pontos de Mann -Whitney. Um valor-p bilateral < 0,05 foi considerado estatisticamente significativo. Curvas características de operação do receptor (ROC) (DeLong et al.; Biometrics 1988; 44(3): 837-45) e a área sob a curva (AUC) foram determinadas para HBP, razão de HBP/WBC, CRP, WBC e IL-6. Valores de AUC estão relatados com o intervalo de confiança de 95% (Cl 95%). Sensibilidades, especificidades, valores preditivos positivos e valores preditivos negativos foram calculados a partir de tabulações cruzadas. A taxa de probabilidade positiva e a taxa de probabilidade negativa também estão relatadas em Tabela 1. 2. Resultados Características dos participantes do estudo 202 pacientes que atenderam aos critérios de inclusão foram incluídos. Os pacientes foram classificados nos 4 seguintes grupos: 51 pacientes com sépsis severa (grupo 1), 95 pacientes com sépsis (grupo 2), 44 pacientes com não-sépsis (grupo 3) e 12 pacientes com não-infecção (grupo 4), idade média e razão de masculino/feminino dos 4 grupos foram 62 anos; 31/20, 57 anos; 42/53, 44 anos; 15/29, e 73 anos; 11/1 respectivamente.

Bacteriemia foi verificada em 22, 11, e 2 pacientes em grupos 1, 2, e 3 respectivamente.

Análise de níveis de HBP e razões de HBP/WBC em participantes do estudo Na admissão, níveis de HBP foram significativamente mais altos no grupo de sépsis severa (p < 0.0001) (Fig. Ia), com 42/51 pacientes ultrapassando um nível de ponto de corte de 20 ng/ml, em comparação com 1/95, 0/44 e 0/12 pacientes em grupo 2, grupo 3 e grupo 4, respectivamente. Também, pacientes no grupo de sépsis severa mostraram razões de HBP/WBC significativamente mais altas (p < 0,0001) em comparação com os outros grupos (Fig. lb). Uma razão de HBP/WBC acima de 2,0 foi encontrada em 44/51 pacientes no grupo de sépsis severa, 2/95 pacientes no grupo de sépsis, 0/44 pacientes no grupo de não-sépsis e 0/12 pacientes no grupo de não-infecção. Além disso, no grupo de sépsis severa 47/51 pacientes tiveram quer um nível de HBP plásmico > 20 ng/ml quer uma razão de HBP/WBC > 2,0, em comparação com 2/95 pacientes no grupo de sépsis e 0 pacientes nos 2 outros grupos (Tabela 1).

Similarmente, níveis de CRP, IL-6 e lactato também foram significativamente mais altos (p=0,003, p < 0,0001 , p < 0 ,0001) no grupo de sépsis severa embora houvesse uma sobreposição considerável entre os grupos (Fig. 1 c-e).

Análise de valor preditivo de nível de HBP e razão de HBP/WBC

Assumindo uma prevalência de 25 % de sépsis severa, como no presente estudo, as seguintes variáveis mostraram melhores especificidade, sensibilidade, valor preditivo positivo (PPV), vapor preditivo negativo (NPV), taxa de probabilidade positiva (PLR) e taxa de probabilidade negativa (NLR) em diagnose de sépsis severa em comparação com todos os níveis de ponte de corte diferentes de CRP e IL-6 calculados: - um nível de HBP > 20 ng/ml indica que os indivíduos desenvolverão sépsis severa; ou - uma razão de HBP/WBC >2,0 indica que os indivíduos desenvolverão sépsis severa; ou - quer um nível de HBP > 20 ng/ml quer uma razão de HBP/WBC >2,0 indica que os indivíduos desenvolverão sépsis severa Estas descobertas estão resumidas em Tabelas la, lb e lc, e são confirmadas pela curva ROC (figura 2). Análise estatística da curva ROC é mostrada em tabela 2. Nível de HBP e razão de HBP/WBC predizem sépsis severa antes do início de sintomas clínicos Em 20 dos 51 pacientes no grupo de sépsis severa o valor de HBP estava elevado até 12 h antes de SBP mais baixa ser alcançada (figuras 3a e 3b). Os níveis de HBP rapidamente diminuíram dentro de 24 h nos 11 pacientes que foram tratados com antibióticos e fluidos intravenosos adequados e que se recuperaram sem complicações. Em 5 casos onde os pacientes continuaram a estar circulatoriamente instáveis os níveis de HBP, contudo, permaneceram elevados 1 destes pacientes morreu dentro de 28 dias a partir da data de inclusão (Fig 4a).

No total 5 pacientes morreram, todos no grupo de sépsis severa e todos dentro de 1-4 dias após a coleta de amostra com HBP elevada. Os níveis de HBP permaneceram baixos abaixo de 20 ng/ml em 6 pacientes com sépsis e 1 paciente com não-sépsis que foram monitorados com amostragem serial (fig 4b). 20 pacientes no grupo de sépsis severa tiveram aumentados níveis de HBP ou razões de HBP/WBC na admissão mas SBP normal, indicando que estes indicadores são capazes de predizer sépsis severa antes de ser possível a diagnose clínica padrão. Isto é exemplificado por uma mulher de 70 anos de idade apresentando-se com uma história de 3 dia de febre, diarréia e vômito. O exame físico foi imperceptível exceto para febre de 38°C, pulsação de 100 mas SBP normal de 130 mm/Hg, e ela foi hospitalizada como uma tentativa de diagnose de gastroenterite. Ela recebeu 1.000 ml i.v. de fluido cristalóide. Seis horas mais tarde ela desenvolveu hipotensão severa com SBP de 70 mm/Hg, angústia respiratória e foi imediatamente transferida para UTI, onde ARDS (Adult Respiratory Distress Syndrome, Síndrome de Angústia Respiratória de Adulto) com coagulação intravascular disseminada devido à septicemia por E. coli foi mais tarde diagnosticada. Na admissão seu nível de HBP era 80 ng/ml e sua razão de HBP/WBC era 4,2.

Tabela la: Sensibilidade, especificidade, valor preditivo positivo, vapor preditivo negativo, taxa de probabilidade positiva e taxa de probabilidade negativa de variáveis testadas em diagnose de sépsis bacteriana severa Tabela lb: Sensibilidade e especificidade de níveis de ponto de corte diferentes de HBP em diagnose de sépsis bacteriana severa Tabela lc: Sensibilidade e especificidade de níveis de ponto de corte diferentes de razão de HBP/WBC em diagnose de sépsis bacteriana severa Tabela 2: Análise de curva ROC para variáveis testadas em diagnose de sépsis bacteriana severa REIVINDICAÇÕES

Claims (11)

1. Método in vitro para identificar se ou não um indivíduo está sob risco de desenvolvimento de sépsís severa, caracterizado pelo fato de compreender medir HBP (proteína ligante de beparina, CAP37, Azurocidina) em uma amostra de fluido tirada do indivíduo e deste modo determinar se ou não o indivíduo está sob risco de desenvolvimento de sépsis severa, em que um nível de HBP maior que 15 ng/ml na amostra é indicativo de um risco aumentado de desenvolver sépsis severa.

2. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que um nível ou concentração de HBP na amostra maior do que 20 ng/ml é indicativo de um risco aumentado de desenvolver sépsis severa.

3. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o nível ou a concentração de HBP na amostra de fluido está aumentado (a) em pelo menos 2,5 vezes em relação ao nível ou à concentração de linha base de HBP.

4. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que o indivíduo é suspeito de estar sob risco de desenvolvimento de sépsís severa.

5. Método de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que o indivíduo tem uma infecção confirmada ou suspeita e/ou exibe um ou mais dos critérios de SIRS,

6. Método de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que o indivíduo tem uma infecção confirmada ou suspeita e/ou exibe dois ou mais dos critérios de SIRS.

7. Método de acordo com a reivindicação 5 ou 6, caracterizado pelo fato de que a infecção confirmada ou suspeita afeta: os pulmões; o trato respiratório; o fígado; os rins; o trato urinário; a pele (cutânea e subeutânea); o coração; o estômago; os intestinos; o sangue; os ossos; as articulações ou qualquer combinação dos mesmos.

8. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações 4 a 7, caracterizado pelo fato de que o indivíduo está/é: imunocomprometido; um diabético; um paciente hospitalizado com uma linha intravenosa, um ferimento cirúrgico, um dreno cirúrgico ou uma escara; ou qualquer combinação dos mesmos.

9. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizado pelo fato de que o indivíduo é um mamífero.

10. Método de acordo com a reivindicação 9, caracterizado pelo fato de que o mamífero é um humano.

11. Kit de teste, caracterizado pelo fato de ser para uso em um método para determinar se ou não um indivíduo está sob risco de desenvolvimento de sépsis severa, compreendendo um agente para a detecção de HBP em um indivíduo.