BRPI0813814B1 - Método e kit para a identificação de um evento elite em amostras biológicas, par de iniciadores, sonda específica, métodos para a confirmação de pureza de semente, triagem de sementes quanto à presença do evento elite, determinação do estado de zigosidade de uma planta, material de planta ou semente compreendendo o evento elite e detecçãodo evento elite e produção da semente ou planta de algodão - Google Patents

Método e kit para a identificação de um evento elite em amostras biológicas, par de iniciadores, sonda específica, métodos para a confirmação de pureza de semente, triagem de sementes quanto à presença do evento elite, determinação do estado de zigosidade de uma planta, material de planta ou semente compreendendo o evento elite e detecçãodo evento elite e produção da semente ou planta de algodão Download PDF

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Trolinder Linda
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(54) Título: MÉTODO E KIT PARA A IDENTIFICAÇÃO DE UM EVENTO ELITE EM AMOSTRAS BIOLÓGICAS, PAR DE INICIADORES, SONDA ESPECÍFICA, MÉTODOS PARA A CONFIRMAÇÃO DE PUREZA DE SEMENTE, TRIAGEM DE SEMENTES QUANTO À PRESENÇA DO EVENTO ELITE, DETERMINAÇÃO DO ESTADO DE ZIGOSIDADE DE UMA PLANTA, MATERIAL DE PLANTA OU SEMENTE COMPREENDENDO O EVENTO ELITE E DETECÇÃO DO EVENTO ELITE E PRODUÇÃO DA SEMENTE OU PLANTA DE ALGODÃO (51) lnt.CI.: C12N 15/82; C12Q 1/68 (30) Prioridade Unionista: 11/06/2007 EP 07 075460.1, 13/06/2007 US 60/934,431,18/06/2007 EP 07 075485.8 (73) Titular(es): BAYER CROPSCIENCE NV (72) Inventor(es): LINDA TROLINDER; SOFIE MOENS; VEERLE ΗΑΒΕΧ; DIMITRI PAELINCK; EVELIEN BERGHMAN (85) Data do Início da Fase Nacional: 10/12/2009
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Relatório Descritivo da Patente de Invenção para
MÉTODO E KIT PARA A IDENTIFICAÇÃO DE UM EVENTO ELITE EM AMOSTRAS BIOLÓGICAS, PAR DE INICIADORES, SONDA ESPECÍFICA, MÉTODOS PARA A CONFIRMAÇÃO DE PUREZA DE SEMENTE, TRIAGEM DE SEMENTES QUANTO À PRESENÇA DO EVENTO ELITE, DETERMINAÇÃO DO ESTADO DE ZIGOSIDADE DE UMA PLANTA, MATERIAL DE PLANTA OU SEMENTE COMPREENDENDO O EVENTO ELITE E DETECÇÃO DO EVENTO ELITE E PRODUÇÃO DA SEMENTE OU PLANTA DE ALGODÃO.
Campo da Invenção [001] A presente invenção se refere a sementes, material de planta e plantas de algodão transgênicas, caracterizados por conter um evento de transformação específico, particularmente pela presença de um gene que codifica uma proteína que confere resistência a inseto, em uma localização específica no genoma do algodão. As plantas de algodão da invenção combinam o fenótipo de resistência a inseto com um desempenho agronômico, estabilidade genética e adaptabilidade a diferentes experiências genéticas equivalentes a linha de algodão não-transformada na ausência de insetos. Esta invenção ulteriormente provê métodos e kits para a identificação da presença de material de planta compreendendo especificamente evento de transformação EE-GH6 nas amostras biológicas.
Antecedentes da Invenção [002] A expressão fenotípico de um transgene em uma planta é determinada tanto pela estrutura do próprio gene quanto por sua localização no genoma da planta. Ao mesmo tempo a presença do transgene (em um DNA exógeno) em diferentes localizações no genoma
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2/45 influenciará o fenótipo total da planta de diferentes modos. A introdução agronomicamente ou industrial mente bem sucedida de uma característica comercial mente interessante em uma planta por manipulação genética pode ser um procedimento comprido dependente de outros fatores diferentes. A transformação e regeneração real de plantas geneticamente transformadas são apenas a primeira de uma série de etapas de seleção, que incluem caracterização genética extensa, reprodução e avaliação nas experiências de campo, finalmente levando à seleção de um evento elite.
[003] Fibra de algodão é o único produto têxtil importante mundialmente. Cerca de 80 milhões de acres de algodão são coletados anualmente no globo. Algodão é a quinta maior colheita nos U.S. em termos de produção de acreage, com mais de 15 milhões de acres plantados em 2000.
[004] A espécie de inseto mais prejudicial que se alimenta com algodão são Helicoverpa zea (minhoca do milho ou lagarta do algodão), Helicoverpa armigera (lagarta americana) Heliothis virescens (gorgulho de botão de tabaco) e Helicoverpa punctigera.
[005] A identificação inequívoca de um evento elite está se tornando de modo crescente importante em virtude de um evento elite discussões no Novel Food/Feed, segregação de produtos de GMO e de não-GMO e a identificação de material de propriedade. De modo ideal, tal método de identificação é tão rápido quanto simples, sem a necessidade de uma instalação de laboratório extensiva. Além do mais, o método proveria resultados que permitem determinação inequívoca do evento elite sem interpretação de expert, mas que favoreceu sob escrutínio de expert se necessário. Ferramentas específicas para o uso na identificação de evento elite EE-GH6 nas amostras biológicas são descritas aqui.
[006] EE-GH6 foi identificado como um evento elite a partir de
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3/45 uma população de plantas de algodão transgênicas no desenvolvimento de algodão resistente ao inseto (Gossypium hirsutum) compreendendo um gene que codifica uma proteína de cristal inseticida de Bacillus thuringiensis. As plantas de algodão transgênicas contêm um gene quimérico que codifica uma proteína de cristal inseticida de Bt (como descrito na WO 02/057664) sob controle de um promotor expressável por planta.
[007] Plantas de algodão compreendendo um gene de resistência a inseto foram descritas na técnica. No entanto, nenhuma técnica anterior descreve, ensina ou sugere a presente invenção.
Sumário da Invenção [008] A presente invenção se refere a uma semente ou planta de algodão transgênico, suas células e tecidos, compreendendo, estavelmente integrados em seu genoma, um pacote de expressão que compreende um gene de resistência a inseto compreendendo a sequência de codificação do gene de cry2Ae (como descrito no exemplo
1.1 aqui), que é resistente a inseto e, na ausência de pressão de inseto, tem um desempenho agronômico que é substancialmente equivalente à linha isogênica não-transgênica. Sob pressão de inseto, a planta terá um fenótipo agronômico superior em comparação com a planta não-transgênica.
[009] De acordo com a presente invenção a semente ou planta de algodão, suas células e tecidos compreendem evento elite EEGH6.
[010] Mais especificamente, a presente invenção se refere a uma semente, planta de algodão transgênica, suas células e tecidos, cujo DNA genômico é caracterizado pelo fato de que, quando analisado em um protocolo de identificação de PCR como descrito aqui, usando-se dois iniciadores dirigidos para a região de flanqueamento 5' ou 3' de EE-GH6 e o DNA exógeno, respectivamente, fornece um fragmento
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4/45 que é específico para EE-GH6. Os iniciadores podem ser dirigidos contra a região de flanqueamento 5' dentro de SEQ ID NO: 1 ou SEQ ID NO:11 e o DNA exógeno respectivamente tais como os iniciadores compreendendo ou que consistem na sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 5 e SEQ ID NO: 7 respectivamente, e fornecem um fragmento de DNA de entre 100 e 700 pb, de preferência de cerca de 197 pb. Os iniciadores podem também ser dirigidos contra a região de flanqueamento 3' dentro de SEQ ID NO: 2 e o DNA exógeno respectivamente tais como os iniciadores compreendendo ou que consistem na sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 4 e SEQ ID NO: 3 respectivamente, e fornecem um fragmento de DNA de entre 100 e 700 pb, de preferência de cerca de 189 pb.
[011] A semente de referência compreendendo o evento elite da invenção foi depositada na ATCC sob o número de acesso PTA-8398. Uma concretização da invenção é a semente compreendendo o evento elite EE-GH6 deposistada na ATTC número de acesso PTA-8398, que se desenvolverá para dar uma planta de algodão resistente a insetos, particularmente Helicoverpa sp. ou Heliothis sp. A semente da ATCC número de depósito PTA-8398, é uma porção de semente que consiste em pelo menos cerca de 95% de homozigoto de sementes transgênicas para o transgene, compreendendo o evento elite da invenção, que se desenvolverá para dar plantas resistentes a inseto, pelo que as plantas são também plantas tolerantes a glufosinato. A semente pode ser semeada e as plantas em desenvolvimento podem ser tratadas com glufosinato como que descrito aqui para se obter 100% de plantas tolerantes a glufosinato, compreendendo o evento elite da invenção. A invenção ulteriormente se refere a células, tecidos, progênie, e descendentes de uma planta compreendendo o evento elite da invenção desenvolvido a partir da semente depositada no ATCC tendo número de acesso PTA-8398. A invenção ulteriormente se refere a
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5/45 plantas obteníveis por propagação de e/ou reprodução com uma planta de algodão compreendendo o evento elite da invenção desenvolvido a partir de a semente depositado no ATCC tendo número de acesso
PTA-8398. A invenção também se refere a plantas de algodão compreendendo o evento elite EE-GH6.
[012] A invenção ulteriormente se refere a um método para a identificação de uma planta transgênica, ou suas células e tecidos, compreendendo o evento elite EE-GH6, método esse que é baseado por identificação da presença de sequências de DNA de caracterização ou aminoácidos codificados por tais sequências de DNA na planta transgênica, células ou tecidos. De acordo com uma concretização preferida da invenção, tais sequências de DNA de caracterização são sequências de 15 pb, de preferência 20 pb, mais de preferência 30 pb ou mais que compreendem que compreendem o sítio de inserção do evento, isto é, tanto uma parte de DNA exógeno quanto uma parte do genoma de algodão (ou a região de flanqueamento 5' ou 3') contígua com o mesmo, permitindo identificação específica do evento elite.
[013] A presente invenção ulteriormente se refere a métodos para a identificação do evento elite EE-GH6 nas amostras biológicas, métodos esses que são baseados nos iniciadores ou sondas que especificamente reconhecem a região de flanqueamento 5' e/ou 3' de EEGH6.
[014] Mais especificamente, a invenção se refere a um método compreendendo da ampliação de uma sequência de um ácido nucleico presente nas amostras biológicas, usando-se uma reação de cadeia de polimerase com pelo menos dois iniciadores, um dos quais reconhece a região de flanqueamento 5' ou 3' de EE-GH6, ou outro que reconhece uma sequência dentro do DNA exógeno, de preferência para se obter um fragmento de DNA de entre 100 e 500 pb. Os iniciadores podem reconhecer uma sequência dentro da região de flanqueaPetição 870170080020, de 20/10/2017, pág. 13/103
6/45 mento 5' de EE-GH6 (SEQ ID NO:1, da posição 1 até a posição 140 ou SEQ ID NO:11 da posição 1 até a posição 463) ou dentro da região de flanqueamento 3' de EE-GH6 (complemento de SEQ ID NO:2 da posição 113 até a posição 438) e uma sequência dentro do DNA exógeno (complemento de SEQ ID NO:1 da posição 141 até 192 ou SEQ ID NO:2 da posição 1 até a posição 112), respectivamente. O iniciador que reconhece a região de flanqueamento pode compreender a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:7 e o iniciador que reconhece uma sequência dentro do DNA exógeno pode compreender a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:5 descrita aqui. O iniciador que reconhece a região de flanqueamento 3' pode compreender a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:3 ou SEQ ID NO:6 e o iniciador que reconhece uma sequência dentro do DNA exógeno podem compreender a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:4 descrita aqui [015] A presente invenção mais especificamente se refere a um método para a identificação do evento elite EE-GH6 nas amostras biológicas, método esse que compreende ampliação de uma sequência de um ácido nucleico presente em uma amostra biológica, usando-se uma reação de cadeia de polimerase com dois iniciadores tendo a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:3 e SEQ ID NO:4 respectivamente, para se obter um fragmento de DNA de cerca de 189 pb ou com dois iniciadores tendo a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:5 e SEQ ID NO:7 respectivamente, para se obter um fragmento de DNA de cerca de 197 pb.
[016] A presente invenção ulteriormente se refere às sequências de flanqueamento específicas de EE-GH6 descritas aqui, que podem ser usadas para desenvolver a identificação específica métodos para EE-GH6 nas amostras biológicas. Tais sequências de flanqueamento específicas podem também ser usadas como material de controle de referência nos ensaios de identificação. Mais particularmente, a invenPetição 870170080020, de 20/10/2017, pág. 14/103
7/45 ção se refere às regiões de flanqueamento 5' e ou 3' de EE-GH6 que podem ser usadas para o desenvolvimento de sondas e iniciadores específicos como ulteriormente descritos aqui. Também adequado como material de referência são moléculas de ácido nucleico, de preferência de cerca de 180-200 pb, compreendendo a sequência que pode ser ampliada por iniciadores tendo a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:7 e SEQ ID NO:5 ou de SEQ ID NO:4 e SEQ ID NO:3. [017] A invenção ulteriormente se refere a métodos de identificação para a presença de EE-GH6 nas amostras biológicas com base no uso de tais sondas ou iniciadores específicos. Iniciadores podem consistir em uma sequência de nucleotídeos de 17 a cerca de 200 nucleotídeos consecutivos selecionados da sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:1 de nucleotídeo 1 até o nucleotídeo 140 ou SEQ ID NO:11 da posição 1 até a posição 463 ou o complemento da sequência de nucleotídeos de SEQ ID 2 de nucleotídeo 113 até o nucleotídeo 438) combinada com iniciadores que consistem de uma sequência de nucleotídeos de 17 a cerca de 200 nucleotídeos consecutivos selecionados do complemento da sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:1 de nucleotídeo 141 até o nucleotídeo 192 ou a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:2 de nucleotídeo 1 até o nucleotídeo 112. Iniciadores podem também compreender essas sequências de nucleotídeos localizadas em sua extremidade 3' extrema, e ulteriormente compreendem sequências não-relacionadas ou sequências derivadas das sequências de nucleotídeos mencionadas, mas compreendendo mal emparelhamentos.
[018] A invenção ulteriormente se refere um kits para a identificação do evento elite EE-GH6 nas amostras biológicas, os ditos kits compreendendo pelo menos um iniciador ou sonda que especificamente reconhece a região de flanqueamento 5' ou 3' de EE-GH6 ou a re-estruturação específica dentro da sequência de DNA exógeno no
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EE-GH6.
[019] O kit da invenção pode compreender, além de um iniciador que especificamente reconhece a região de flanqueamento 5' ou 3' de EE-GH6, um segundo iniciador que especificamente reconhece uma sequência dentro do DNA exógeno EE-GH6, para o uso em um protocolo de identificação de PCR. Os kits da invenção podem compreender pelo menos dois iniciadores específicos, um dos quais reconhece uma sequência dentro da região de flanqueamento 5' de EE-GH6, e o outro que reconhece uma sequência dentro do DNA exógeno. O iniciador que reconhece a região de flanqueamento de 5' pode compreender a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:3 e o iniciador que reconhece o transgene pode compreender a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:4 ou qualquer outro iniciador ou combinação de iniciadores como descrito aqui.
[020] A invenção ulteriormente se refere a um kit para a identificação do evento elite EE-GH6 nas amostras biológicas, o dito kit compreendendo os iniciadores de PCR tendo a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:3 e SEQ ID NO:4 para o uso no protocolo de identificação de PCR EE-GH6 descrito aqui.
[021] A invenção também se refere a um kit para a identificação do evento elite EE-GH6 nas amostras biológicas, kit esse que compreende uma sonda específica tendo uma sequência que corresponde (ou é complementar a) uma sequência tendo entre 80% e 100% de identidade de sequência com uma região específica EE-GH6. De preferência, a sequência da sonda corresponde a uma região específica compreendendo parte da região de flanqueamento 5' ou 3' de EE-GH6. Mais de preferência a sonda específica tem (ou é complementar a) uma sequência tendo entre 80% e 100% de identidade de sequência a uma sequência entre nucleotídeo 120 a 160 de SEQ ID NO:1 ou SEQ ID NO:2 de nucleotídeo 102 a 123.
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9/45 [022] De acordo com um outro aspecto da invenção, sequências de DNA são descritas compreendendo o sítio de inserção do evento e comprimento suficiente de polinucleotídeos tanto do DNA genômico do algodão e do DNA exógeno (transgene), de modo que seja útil como iniciador ou sonda para a detecção de EE-GH6. Tais sequências podem compreender pelo menos 9 nucleotídeos do DNA genômico do algodão e um número similar de nucleotídeos do DNA exógeno (transgene) EE-GH6 com as mesmas em cada lado do sítio de inserção respectivamente. Mais de preferência, tais sequências de DNA compreendem pelo menos 9 nucleotídeos do DNA genômico do algodão e um número similar de nucleotídeos do DNA exógeno contíguo com o sítio de inserção na SEQ ID NO: 1 ou SEQ ID NO: 2.
[023] Os métodos e kits incluídos pela presente invenção podem ser usados para diferentes finalidades tais como, mas não-limitadas às seguintes: para identificar a presença ou a ausência de EE-GH6 em plantas, material de planta ou em produtos tais como, mas nãolimitados a alimento ou produtos alimentícios (frescos ou processados) compreendendo ou derivados de material de planta; adicionalmente ou alternativamente, os métodos e kits da presente invenção podem ser usados para identificar material de planta transgênica para as finalidades de segregação entre material transgênico e não-transgênico; adicionalmente ou alternativamente, os métodos e kits da presente invenção podem ser usados para determinar a qualidade (isto é, percentagem de material puro) de material de planta compreendendo EE-GH6. [024] A invenção ulteriormente se refere às regiões de flanqueamento 5' e/ou 3' de EE-GH6 bem como as sondas e iniciadores específicos desenvolvidos a partir das sequências de flanqueamento 5' e/ou 3' de EE-GH6.
[025] A invenção também se refere a DNA genômico obtido a partir de plantas compreendendo o evento elite EE-GH6. Tal DNA gePetição 870170080020, de 20/10/2017, pág. 17/103
10/45 nômico pode ser usado como material de referência de controle nos ensaios de identificação aqui descritos.
Breve Descrição dos Desenhos [026] Os seguintes exemplos, não se destinam a limitar a invenção a concretizações específicas descritas, podem ser entendidos em combinação com a figura anexa, incorporada aqui por referência, em que:
figura 1: representa esquematicamente a relação entre os iniciadores e sequências de nucleotídeos citados. Barra preta: DNA exógeno; barra preta listrada: re-estruturação no DNA exógeno específica para EE-GH6; barra clara: DNA de origem de planta; barra clara listrada: pré-inserção de deleção de alvo; setas: iniciadores de oligonucleotídeo, as figuras sob as barras representam posições de nucleotídeo; (c) se refere a complemento da sequência de nucleotídeos indicada; NA: não-aplicável.
figura 2: representa resultados obtidos pelo protocolo de identificação de PCR desenvolvido para EE-GH6. Sequência de carregamento do gel: Raia 1: Padrão de peso molecular (padrão de PM de 100 pb); raias 2 a 5: amostras de DNA oriundas de plantas de algodão compreendendo o evento transgênico EE-GH6; raias 6 e 7: amostras de DNA oriundas de plantas de algodão transgênicas não compreendendo o evento elite EE-GH6, mas compreendendo um gene de resistência a inseto similar; raia 8: nenhum controle de DNA de modelo; raia 9: padrão de peso molecular.
figura 3: representa resultados obtidos pelo protocolo de PCR de classificação de zigosidade desenvolvido para EE-GH6. Sequência de carregamento do gel: Raia 1: Padrão de peso molecular (padrão de PM de 100 pb); raias 2 e 3: amostras de DNA oriundas de plantas de algodão compreendendo o evento transgênico EE-GH6 na forma homozigota; raias 4 a 6: amostras de DNA oriundas de plantas
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11/45 de algodão compreendendo o evento transgênico EE-GH6 na forma heterozigota; raia 7: amostra de DNA de controle oriunda de planta de algodão selvagem; raia 8: nenhum controle de DNA de modelo; raia 9:
padrão de peso molecular.
Descrição Detalhada [027] A incorporação de uma molécula de DNA recombinante no genoma da planta tipicamente resulta da transformação de uma célula ou tecido. O sítio particular da incorporação é usualmente devido a integração aleatória.
[028] O DNA introduzido para dentro do genoma da planta como um resultado da transformação de uma célula de planta ou tecido com um DNA recombinante ou transformação de DNA, e se originando tal transformação de DNA é aqui em seguida chamado de DNA exógeno compreendendo um ou mais transgenes. DNA da planta no contexto da presente invenção referirá-se a DNA que se origina da planta que é transformado. DNA de planta usualmente será encontrado no mesmo locus genômico na planta selvagem correspondente. O DNA exógeno pode ser caracterizado pelo locus e pela configuração no sítio de incorporação da molécula de DNA recombinante no genoma da planta. O sítio no genoma da planta onde um DNA recombinante foi inserido é também chamado do sítio de inserção ou sítio alvo. Inserção do DNA recombinante para dentro da região do genoma da planta chamado de pré-inserção de DNA de planta pode estar asssociada com uma deleção de DNA de planta, chamado de deleção de sítio alvo. Uma região de flanqueamento ou sequência de flanqueamento como usado aqui se refere a uma sequência de pelo menos 20 pb, de preferência pelo menos 50 pb, e até 5000 pb de DNA diferente do DNA introduzido, de preferência DNA a partir do genoma de planta que está localizado imediatamente a montante de e contíguo com ou imediatamente a jusante de e contíguo com o DNA exógeno.
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Procedimentos de transformação levando à integração aleatória do DNA exógeno resultará em transformantes com diferentes regiões de flanqueamento, que são características e únicas para cada transformante. Quando o DNA recombinante é introduzido para dentro de uma planta através de cruzamento tradicional, seu sítio de inserção no genoma da planta, ou suas regiões de flanqueamento em geral não serão mudadas. Uma região de inserção como usada aqui se refere à região que corresponde à região de pelo menos 40 pb, de preferência pelo menos 100 pb, e até 10000 pb, incluída pela sequência que compreende a montante e/ou a jusante de região de flanqueamento de um DNA exógeno no genoma da planta. Levando em consideração diferenças menores devido a mutações dentro de uma espécie, uma região de inserção reterá, no cruzamento com uma planta da mesma espécie, pelo menos 85%, de preferência 90%, mais de preferência 95%, e com mais preferência 100% de identidade de sequência com a sequência compreendendo a montante e a jusante da região de flanqueamentos do DNA exógeno na planta originalmente obtida a partir de transformação.
[029] Um evento é definido como um locus genético (artificial) que, como um resultado de engenharia genética, porta um transgene compreendendo pelo menos uma cópia de um gene de interesse. Os estados alélicos típicos de um evento são a presença ou a ausência do DNA exógeno. Um evento é caracterizado fenotipicamente pela expressão do transgene. No nível genético, um evento é parte da produção genética de uma planta. No nível molecular, um evento pode ser caracterizado pelo mapa de restrição (por exemplo, como determinado por Southern blotting), pelas sequências de flanqueamento a montante e/ou a jusante do transgene, a localização de marcadores moleculares e/ou a configuração molecular do transgene. Usualmente transformação de uma planta com uma transformação de DNA compreendendo
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13/45 pelo menos um gene de interesse leva a uma população de transformantes compreendendo uma multiplicidade de eventos separados, cada um dos quais é único.
[030] Um evento elite, como usado aqui, é um evento que é selecionado de um grupo de eventos, obtidos por transformação com a mesma transformação de DNA ou por retrocruzamento com plantas obtidas por tal transformação, com base na expressão e estabilidade do(s) transgene(s) e sua compatibilidade com ótimas características agronômicas da planta compreendendo-as. Assim os critérios para seleção de evento elite são um ou mais, de preferência dois ou mais, vantajosamente a totalidade dos seguintes:
a) que a presença do DNA exógeno não compromete outras características desejadas da planta, tais como aquelas que se relacionam com o desempenho agronômico ou valor comercial;
b) que o evento é caracterizado por uma configuração molecular bem definida que é estavelmente herdada e para que ferramentas apropriadas para a identidade de controle pode ser desenvolvida;
c) que o(s) gene(s) de interesse mostra(m) uma expressão fenotípica estável espacial e temporal, correta e apropriada, tanto em condição heterozigoto (ou hemizogoto) quanto homozigoto do evento, em um nível comercial mente aceitável em uma faixa de condições ambientais em que as plantas que portam o evento devem provavelmente ser exposto no uso agronômico normal.
[031] É preferido que o DNA exógeno está associado a uma posição no genoma da planta que permite progressão fácil em bases genéticas comerciais.
[032] O estado de um evento como um evento elite é confirmado por introgressão do evento elite em diferentes bases genéticas relevantes e concordância de observação de com um, dois ou a totalidade dos critérios, por exemplo, a), b) e c) acima.
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14/45 [033] Um evento elite assim se refere a um locus genético compreendendo um DNA exógeno, que responde aos critérios acima descritos. Uma planta, material de planta ou progênie tais como sementes podem compreender um mais eventos de elite em seu genoma.
[034] As ferramentas desenvolvidas para identificar um evento elite ou a planta, material de planta compreendendo um evento elite, ou produtos que compreendem material de planta compreendendo o evento elite são baseados nas características genômicas do evento elite, tais como, um mapa de restrição específica da região genômica compreendendo o DNA exógeno, marcadores moleculares ou a sequência da região de flanqueamento(s) do DNA exógeno.
[035] Uma vez que uma ou ambas as regiões de flanqueamento do DNA exógeno foram sequenciadas, iniciadores e sondas podem ser desenvolvidas que especificamente reconhecem essa (essas) sequência(s) no ácido nucleico (DNA ou RNA) de uma amostra a título de uma técnica de biologia molecular. Por exemplo, um método de PCR pode ser desenvolvido para identificar o evento elite nas amostras biológicas (tais como amostras de plantas, material de planta ou produtos compreendendo material de planta). Tal PCR é baseado por pelo menos dois iniciadores específicos um que reconhece uma sequência dentro da região de flanqueamento 5' ou 3' do evento elite e o outro que reconhece uma sequência dentro do DNA exógeno. Os iniciadores de preferência têm uma sequência de entre 15 e 35 nucleotídeos que sob condições de PCR otimizadas especificamente reconhecem uma sequência dentro da região de flanqueamento 5' ou 3' do evento elite e o DNA exógeno do evento elite respectivamente, de modo que um fragmento específico (fragmento de integração ou amplicon de discriminação) é ampliado a partir de uma amostra de ácido nucleico compreendendo o evento elite. Isso significa que apenas fragmento de integração direcionado, e nenhuma outra sequência no genoma da planta
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15/45 ou DNA exógeno, é ampliado sob condições de PCR otimizadas.
[036] Iniciadores de PCR adequados para a invenção podem ser os seguintes:
oligonucleotídeos que variam no comprimento de 17 nucleotídeos a cerca de 100 nucleotídeos, compreendendo a sequência de nucleotídeos de pelo menos 17 nucleotídeos consecutivos, de preferência 20 nucleotídeos consecutivos selecionados da sequência de flanqueamento 5' (SEQ ID NO:1 de nucleotídeo 1 até o nucleotídeo 140 ou SEQ ID NO:11 da posição 1 até a posição 463) em sua extremidade 3' (iniciadores que reconhecem sequências de flanqueamento 5'); ou oligonucleotídeos que variam no comprimento de 17 nucleotídeos a cerca de 200 nucleotídeos, compreendendo a sequência de nucleotídeos de pelo menos 17 nucleotídeos consecutivos, de preferência 20 nucleotídeos consecutivos, selecionados a sequência de flanqueamento 3' (complemento de SEQ ID NO:2 de nucleotídeo 113 até o nucleotídeo 438) em sua extremidade 3' (iniciadores que reconhecem sequências de flanqueamento 3'); ou oligonucleotídeos que variam no comprimento de 17 nucleotídeos a cerca de 200 nucleotídeos, compreendendo a sequência de nucleotídeos de pelo menos 17 nucleotídeos consecutivos, de preferência 20 nucleotídeos selecionados de sequências de DNA inseridas (complemento de SEQ ID NO:1 de nucleotídeo 141 até o nucleotídeo 192) em sua extremidade 3' (iniciadores que reconhece DNA exógeno) ou oligonucleotídeos que variam no comprimento de 17 nucleotídeos a cerca de 40 nucleotídeos, compreendendo a sequência de nucleotídeos de pelo menos 17 nucleotídeos consecutivos, de preferência 20 nucleotídeos selecionados das sequências de DNA inseridas (SEQ ID NO:2 de nucleotídeo 1 até o nucleotídeo 112).
[037] Os iniciadores podem naturalmente ser mais longos do que os 17 nucleotídeos consecutivos mencionados, e podem, por exemplo,
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16/45 ter um comprimento de 20, 21, 30, 35, 50, 75, 100, 150, 200 nucleotídeos ou ainda mais longo. Os iniciadores podem totalmente consistir em sequência de nucleotídeos selecionados das sequências de nucleotídeos mencionadas das sequências de flanqueamento e sequências de DNA exógeno. No entanto, as sequências de nucleotídeo dos iniciadores em sua extremidade 5' (isto é, do lado de fora dos 17 nucleotídeos consecutivos localizados 3') é menos crítica. Assim, a sequência 5' dos iniciadores pode consistir na sequência de nucleotídeos selecionada das sequências de flanqueamento ou DNA exógeno, quando apropriado, mas podem conter vários (por exemplo, 1, 2, 5, 10 desemparelhamentos). A sequência 5' dos iniciadores pode ainda totalmente consistir na sequência de nucleotídeos não relacionada com as sequências de flanqueamento ou DNA exógeno, por exemplo, a sequência de nucleotídeos que representa sítios de reconhecimento de enzima de restrição. Tais sequências não-relacionadas ou sequências de flanqueamento de DNA com desemparalhamentos de preferência não seriam maiores do que 100, mais de preferência não mais do que 50 ou 25 nucleotídeos.
[038] Além do mais, iniciadores adequados podem compreender ou consistir na sequência de nucleotídeos em sua da variação da extremidade 3' a região de união entre as sequências derivadas de DNA de planta e as sequências de DNA exógeno (localizadas nos nucleotídeos 140-141 na SEQ ID NO:1 e nucleotídeos 112-113 na SEQ ID NO:2) com a condição de que os 17 nucleotídeos consecutivos mencionados localizados 3' não são derivados exclusivamente das sequências de DNA exógeno ou sequências derivadas na SEQ ID NO:1 ou 2. [039] Estará também imediatamente claro pelo técnico versado que pares de iniciador de PCR adequadamente selecionados também não compreendem sequências complementares entre si.
[040] Para a finalidade da invenção, o complemento da sequênPetição 870170080020, de 20/10/2017, pág. 24/103
17/45 cia de nucleotídeos representada na SEQ ID No: X é a sequência de nucleotídeos que pode ser derivada da sequência de nucleotídeos representada por substituição dos nucleotídeos através de seu nucleotídeo complementar de acordo com as regras de Chargaffs (A<=>T; GOC) e leitura da sequência na direção 5' a 3', isto é, em direção oposta sequência de nucleotídeos representada.
[041] Exemplos de iniciadores adequados são as sequências de oligonucleotídeos de SEQ ID NO:7 (sequência de flanqueamento 5' que reconhece iniciadores), SEQ ID NO:5 (DNA exógeno que reconhece iniciadores para o uso com a sequência de flanqueamento 5' que reconhece iniciadores), SEQ ID NO:4 (DNA exógeno que reconhece iniciadores para o uso com a sequência de flanqueamento 3' que reconhece iniciadores), SEQ ID NO:3, SEQ ID NO:6 (sequência de flanqueamento 3' que reconhece iniciadores).
[042] Outros exemplos de iniciadores de oligonucleotídeo adequados compreendem em sua extremidade 3' as seguintes sequências ou consistem de tais sequências:
a. sequência de flanqueamento 5' que reconhece iniciadores:
a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:1 de nucleotídeo 111 até o nucleotídeo 130 a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:1 de nucleotídeo 104 até o nucleotídeo 123 a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:1 de nucleotídeo 106 até o nucleotídeo 125 a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:1 de nucleotídeo 112 até o nucleotídeo 130 a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:1 de nucleotídeo 103 até o nucleotídeo 123 a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:1 de nucleotíPetição 870170080020, de 20/10/2017, pág. 25/103
18/45 deo 109 até o nucleotideo 125 a sequência de nucleotídeos de SEQ deo 109 até o nucleotideo 130 a sequência de nucleotídeos de SEQ deo 113 até o nucleotideo 130 a sequência de nucleotídeos de SEQ deo 99 até o nucleotideo 116 a sequência de nucleotídeos de SEQ deo 102 até o nucleotideo 123 a sequência de nucleotídeos de SEQ deo 104 até o nucleotideo 125 a sequência de nucleotídeos de SEQ deo 108 até o nucleotideo 130 a sequência de nucleotídeos de SEQ deo 114 até o nucleotideo 130 a sequência de nucleotídeos de SEQ deo 100 até o nucleotideo 116 a sequência de nucleotídeos de SEQ deo 101 até o nucleotideo 123 a sequência de nucleotídeos de SEQ deo 103 até o nucleotideo 125 a sequência de nucleotídeos de SEQ deo 110 até o nucleotideo 129 a sequência de nucleotídeos de SEQ deo 109 até o nucleotideo 129 a sequência de nucleotídeos de SEQ deo 111 até o nucleotideo 129 a sequência de nucleotídeos de SEQ deo 108 até o nucleotideo 129 a sequência de nucleotídeos de SEQ
D NO:1 de nucleotíD NO:1 de nucleotíD NO:1 de nucleotíD NO:1 de nucleotíD NO:1 de nucleotíD NO:1 de nucleotíD NO:1 de nucleotíD NO:1 de nucleotíD NO:1 de nucleotíD NO:1 de nucleotíD NO:1 de nucleotíD NO:1 de nucleotíD NO:1 de nucleotíD NO:1 de nucleotíD NO:1 de nucleotíPetição 870170080020, de 20/10/2017, pág. 26/103
19/45 deo 112 até o nucleotídeo 129 a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:1 de nucleotídeo 107 até o nucleotídeo 129 a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:1 de nucleotídeo 113 até o nucleotídeo 129 a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:1 de nucleotídeo 287 até o nucleotídeo 306 a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:1 de nucleotídeo 288 até o nucleotídeo 306 a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:1 de nucleotídeo 289 até o nucleotídeo 306 a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:1 de nucleotídeo 290 até o nucleotídeo 306 a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:1 de nucleotídeo 264 até o nucleotídeo 281 a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:1 de nucleotídeo 265 até o nucleotídeo 281
b. Sequência de DNA exógeno que reconhece iniciadores para o uso com sequência de flanqueamento 5' que reconhece iniciadores:
o complemento da sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:1 de nucleotídeo 140 até o nucleotídeo 159 o complemento da sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:1 de nucleotídeo 140 até o nucleotídeo 158 o complemento da sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:1 de nucleotídeo 139 até o nucleotídeo 158 o complemento da sequência de nucleotídeos de SEQ ID
NO:1 de nucleotídeo 140 até o nucleotídeo 160 o complemento da sequência de nucleotídeos de SEQ ID
NO:1 de nucleotídeo 167 até o nucleotídeo 184
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20/45 o complemento da sequência de nucleotídeos de SEQ ID
NO:1 de nucleotídeo 136 até o nucleotídeo 157 o complemento da sequência de nucleotídeos de SEQ ID
NO:1 de nucleotídeo 139 até o nucleotídeo 157 o complemento da sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:1 de nucleotídeo 140 até o nucleotídeo 157 o complemento da sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:1 de nucleotídeo 139 até o nucleotídeo 159 o complemento da sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:1 de nucleotídeo 140 até o nucleotídeo 161 o complemento da sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:1 de nucleotídeo 140 até o nucleotídeo 156 o complemento da sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:1 de nucleotídeo 139 até o nucleotídeo 156 o complemento da sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:1 de nucleotídeo 136 até o nucleotídeo 158 o complemento da sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:1 de nucleotídeo 139 até o nucleotídeo 160 o complemento da sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:1 de nucleotídeo 139 até o nucleotídeo 155 o complemento da sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:1 de nucleotídeo 139 até o nucleotídeo 161
c. sequência de flanqueamento 3' que reconhece iniciadores:
o complemento da sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:2 de nucleotídeo 366 até o nucleotídeo 385 o complemento da sequência de nucleotídeos de SEQ ID
NO:2 de nucleotídeo 366 até o nucleotídeo 384 o complemento da sequência de nucleotídeos de SEQ ID
NO:2 de nucleotídeo 366 até o nucleotídeo 386
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21/45 o complemento da sequência de nucleotídeos de SEQ ID
NO:2 de nucleotídeo 366 até o nucleotídeo 383 o complemento da sequência de nucleotídeos de SEQ ID
NO:2 de nucleotídeo 366 até o nucleotídeo 387 o complemento da sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:2 de nucleotídeo 125 até o nucleotídeo 142 o complemento da sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:2 de nucleotídeo 366 até o nucleotídeo 382 o complemento da sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:2 de nucleotídeo 94 até o nucleotídeo 115
d. Sequência de DNA exógeno que reconhece iniciadores para o uso com sequência de flanqueamento 3' que reconhece iniciadores:
a sequência de nucleotídeos de SEQ deo 95 até o nucleotídeo 114 a sequência de nucleotídeos de SEQ deo 96 até o nucleotídeo 115 a sequência de nucleotídeos de SEQ deo 95 até o nucleotídeo 115 a sequência de nucleotídeos de SEQ deo 96 até o nucleotídeo 114 a sequência de nucleotídeos de SEQ deo 97 até o nucleotídeo 115 a sequência de nucleotídeos de SEQ deo 93 até o nucleotídeo 114 a sequência de nucleotídeos de SEQ deo 94 até o nucleotídeo 115 a sequência de nucleotídeos de SEQ deo 98 até o nucleotídeo 115 a sequência de nucleotídeos de SEQ
D NO:2 de nucleotíD NO:2 de nucleotíD NO:2 de nucleotíD NO:2 de nucleotíD NO:2 de nucleotíD NO:2 de nucleotíD NO:2 de nucleotíD NO:2 de nucleotíD NO:2 de nucleotíPetição 870170080020, de 20/10/2017, pág. 29/103
22/45 deo 92 até o nucleotídeo 114 a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:2 de nucleotídeo 93 até o nucleotídeo 115 a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:2 de nucleotídeo 98 até o nucleotídeo 114 a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:2 de nucleotídeo 99 até o nucleotídeo 115 [043] Como usado aqui, a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:Z da posição X até a posição Y indica a sequência de nucleotídeos incluindo ambos os pontos finais de nucleotídeo.
[044] De preferência, o fragmento ampliado tem um comprimento entre 50 e 500 nucleotídeos, tal como um comprimento entre 100 e 350 nucleotídeos. Os iniciadores específicos podem ter uma sequência que está entre 80 e 100% idêntica a uma sequência dentro da região de flanqueamento 5' ou 3' do evento elite e o DNA exógeno do evento elite, respectivamente, com a condição de que os desempareIhamentos ainda permitem identificação específica do evento elite com esses iniciadores sob condições de PCR otimizadas. A faixa de desemparelhamentos possíveis no entanto, pode facilmente ser determinada experimentalmente e é facilmente determinada e é conhecida por uma pessoa versada na técnica.
[045] Detecção de fragmentos de integração pode ocorrer de vários modos, por exemplo, via avaliação de tamanho depois da análise de gel. Os fragmentos de integração podem também ser diretamente sequenciados. Outros métodos específicos de sequência para a detecção de fragmentos de DNA ampliados são também conhecidos na técnica.
[046] Uma vez que a sequência dos iniciadores e sua localização relativa no genoma são únicos para o evento elite, ampliação do fragmento de integração ocorrerá apenas nas amostras biológicas comPetição 870170080020, de 20/10/2017, pág. 30/103
23/45 preendendo (o ácido nucleico de) o evento elite. De preferência quando do desempenho de um PCR para identificar a presença de EE-GH6 nas amostras desconhecidas, um controle é incluído de um conjunto de iniciadores com os quais um fragmento dentro de um gene governanta da espécie de planta do evento pode ser ampliado. Genes governantas são genes que são expressos na maioria dos tipos de célula e que tratavam com atividades metabólicas básicas comuns a todas as células. De preferência, o fragmento ampliado do gene governanta é um fragmento que é maior do que o fragmento ampliado de integração. Dependendo das amostras a serem analisadas, outros controles podem ser incluídos.
[047] Protocolos de PCR padrão são descritos na técnica, tal como no PCR Applications Manual (Roche Molecular Biochemicals, 2a Edição, 1999) e outras referências. As ótimas condições para o PCR, incluindo a sequência dos iniciadores específicos, é especificada em um protocolo de identificação de PCR para cada evento elite. É no entanto entendido que numerosos parâmetros no protocolo de identificação de PCR podem ser ajustados para condições de laboratório específicas, e podem ser modificados levemente para se obter resultados similares. Por exemplo, uso de um método diferente para a preparação de DNA pode exigir ajuste de, por exemplo, a quantidade de iniciadores, condições de anelamento e polimerase usados. Similarmente, a seleção de outros iniciadores podem ditar outras ótimas condições para o protocolo de identificação de PCR. Esses ajustes no entanto não estarão evidentes por uma pessoa versada na técnica, e são além do mais detalhados nos manuais de aplicação de PCR atuais tal como aquele citado acima.
[048] Alternativamente, iniciadores específicos podem ser usados para ampliar um fragmento de integração que pode ser usado como uma sonda específica para a identificação de EE-GH6 nas amostras
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24/45 biológicas. O contato de ácido nucleico de uma amostra biológica, com a sonda, sob condições que permitem hibridização da sonda com seu fragmento correspondente no ácido nucleico, resulta na formação de um ácido nucleico/híbrido de sonda. A formação desse híbrido pode ser detectada (por exemplo, marcação do ácido nucleico ou sonda), pelo que a formação desse híbrido indica a presença de EE-GH6. Tais métodos de identificação com base na hibridização com uma sonda específica (ou em um veículo de fase sólida ou em solução) foram descritos na técnica. A sonda específica é de preferência uma sequência que, sob condições otimizadas, hibridiza especificamente para dar uma região dentro da região de flanqueamento 5' ou 3' do evento elite e de preferência também compreendendo parte do DNA exógeno contíguo com a mesma (aqui em seguida chamado de região específica). De preferência, a sonda específica compreende uma sequência de entre 50 e 500 pb, de preferência de 100 a 350 pb que é pelo menos 80%, de preferência entre 80 e 85%, mais de preferência entre 85 e 90%, especial mente de preferência entre 90 e 95%, com mais preferência entre 95% e 100% idêntica (ou complementar) à sequência de nucleotídeos de uma região específica. De preferência, a sonda específica compreenderá uma sequência de cerca de 15 a cerca de 100 nucleotídeos idênticos contíguos (ou complementar) a uma região específica do evento elite.
[049] Oligonucleotídeos adequados como iniciadores de PCR para a detecção do evento elite EE-GH6 pode também ser usado para desenvolver um protocolo à base de PCR para determinar o estado de zigosidade do evento elite. Para esse fim, dois iniciadores que reconhecem o locus selvagem são projetados de tal modo que eles sejam dirigidos em direção entre si e tenham o sítio de inserção localizado entre os iniciadores. Esses iniciadores podem ser iniciadores especificamente que reconhecem as sequências de flanqueamento 3' e 5'
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25/45 contidas dentro de SEQ ID NO:1 (SEQ ID NO:11) ou SEQ ID NO:2, respectivamente. Esses iniciadores podem também ser iniciadores especificamente que reconhecem as sequência de flanqueamento 3' ou 5' (tal como um iniciador tendo a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:7 ou SEQ ID 6). Esse conjunto de iniciadores, juntamente com um terceiro iniciador complementar a sequências de DNA transformantes (tal como um iniciador tendo a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:5) permitem ampliação de PCR diagnóstico simultânea do locus específico EE-GH6, bem como do locus selvagem. Se a planta for homozigoto para o locus transgênico ou locus selvagem correspondente, o PCR de diagnóstico dará origem a um único produto de PCR típico, de preferência típico no comprimento, para ou o locus transgênico ou locus selvagem. Se a planta for hemizogoto para o locus transgênico, dois produtos de PCR específicos de locus aparecerão, refletindo tanto a ampliação do locus transgênico quanto selvagem.
[050] Além do mais, métodos específicos de detecção para evento elite EE-GH6 que diferem de métodos de ampliação à base de PCR podem também ser desenvolvidos usando-se a informação de sequência específica de evento elite provida aqui. Tais métodos de detecção alternativos incluem métodos de detecção de ampliação de sinal linear com base em divagem invasiva de estruturas de ácido nucleico particulares, também conhecidas como tecnologia Invader®, (como descrito por exemplo, na patente de U.S. no. 5.985.557 Invasive Cleavage of Ácido nucleicos, 6.001.567 Detection de Ácido nucleico Sequences by Invader Directed Cleavage, incorporadas aqui por referência). Para esse fim, a sequência alvo pode hibridizar com primeiro oligonucleotídeo de ácido nucleico marcado compreendendo a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:1 de nucleotídeo 141 até o nucleotídeo 148 ou seu complemento ou a dita sonda de ácido nucleico marcada compreendendo a sequência de nucleotídeos de SEQ ID
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N0:2 de nucleotídeo 95 até o nucleotídeo 112 ou seu complemento e é ulteriormente hibridizado com um segundo oligonucleotídeo de ácido nucleico compreendendo a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:1 de nucleotídeo 123 até o nucleotídeo 140 ou seu complemento ou a dita sonda de ácido nucleico marcada compreendendo a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:2 de nucleotídeo 113 até o nucleotídeo 130 ou seu complemento, em que a primeira e segunda sobreposição de oligonucleotídeo por pelo menos um nucleotídeo. A estrutura duplex ou triplex que é produzida por essa hibridização permite divagem de sonda seletiva com uma enzima (Cleavase®) levando a sequência alvo intacta. A sonda marcada clivada é subsequentemente detectada, potencialmente via uma etapa intermediária resultando em outra ampliação de sinal.
[051] Um kit como usado aqui se refere a um conjunto de reagentes para a finalidade de desempenho do método da invenção, mais particularmente, a identificação do evento elite EE-GH6 nas amostras biológicas ou a determinação do estado de zigosidade de material de planta contendo EE-GH6. Mais particularmente, uma concretização preferida do kit da invenção compreende pelo menos um ou dois iniciadores específicos, como descrito acima para a identificação do evento elite, ou três iniciadores específicos para a determinação do estado de zigosidade. Opcionalmente, o kit pode ulteriormente compreender qualquer outro reagente descrito aqui no protocolo de identificação de PCR. Alternativamente, de acordo com uma outra concretização dessa invenção, o kit pode compreender uma sonda específica, como descrito acima, que especificamente hibridiza com ácido nucleico das amostras biológicas para identificar a presença de EE-GH6 ali. Opcionalmente, o kit pode ulteriormente compreender qualquer outro reagente (tal como, mas não-limitado, a tampão de hibridização, rótulo) para a identificação de EE-GH6 nas amostras biológicas, usando-se a
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27/45 sonda específica.
[052] O kit da invenção pode ser usado, e seus componentes podem ser especificamente ajustados, para as finalidades de controle de qualidade (por exemplo, pureza de lotes de semente), detecção da presença ou da ausência do evento elite no material de planta ou material compreendendo ou derivado de material de planta, tal como mas, não-limitado, a alimento ou produtos alimentícios.
[053] Como usado aqui, identidade de sequência com relação às sequências de nucleotídeos (DNA ou RNA), se refere ao número de posições com nucleotídeos idênticos divididos pelo número de nucleotídeos na mais curta das duas sequências. O alinhamento das duas sequências de nucleotídeos é realizado pelo algoritmo Wilbur e Lipmann (Wilbur e Lipmann, 1983, Proc. Nat. Acad. Sei. USA 80:726) usando-se um tamanho de janela de 20 nucleotídeos, um comprimento de letra de 4 nucleotídeos, e uma lacuna de 4. Interpretação e análise auxiliada por computador dos dados de sequência, incluindo alinhamento de sequência como descrita acima, pode, por exemplo, ser convenientemente realizado usando-se um pacote de software de análise de sequência do Genetics Computer Group (GCG, University of Wisconsin Biotechnology center). Sequências são indicadas como essencialmente similares quando tais sequências têm uma identidade de sequência de pelo menos cerca de 75%, particularmente pelo menos cerca de 80%, mais particularmente pelo menos cerca de 85%, totalmente particularmente cerca de 90%, especialmente cerca de 95%, mais especialmente cerca de 100%. Está claro que quando sequências de RNA são ditas serem essencialmente similares e têm um certo grau de identidade de sequência com sequências de DNA, timidina (T) na sequência de DNA é considerada igual a uracila (U) na sequência de RNA.
[054] O termo iniciador como usado aqui inclui qualquer ácido
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28/45 nucleico que é capaz de inicializar a síntese de ácido nucleico nascente um processo dependente de modelo, tal como PCR. Tipicamente, iniciadores são oligonucleotídeos de 10 a 30 nucleotídeos, mas sequências mais longas podem ser empregadas. Iniciadores podem ser providos em forma de fio duplo, embora a forma de fio único seja preferida. Sondas podem ser usadas como iniciadores, mas são projetados para se ligarem a DNA ou RNA alvo e não precisem ser usados em um processo ampliação.
[055] O termo que reconhece como usado aqui quando referindo-se a iniciadores específicos, se refere ao fato de que os iniciadores específicos especificamente hibridizar para uma sequência de ácidos nucleicos no evento elite sob as condições indicadas no método (tais como as condições do protocolo de identificação de PCR), pelo que a especificidade é determinada pela presença de controles positivos e negativos.
[056] O termo hibridização como usado aqui quando referindose a sondas específicas, referem-se ao fato de que a sonda se liga a uma região específica na sequência de ácidos nucleicos do evento elite sob condições rigorosas padrão como usado aqui se refere às condições para a hibridização descrita aqui ou às condições de hibridização convencionais como descrita por Sambrook e outros, 1989 (Molecular Cloning: A Laboratory Manual, segunda Edição, Cold Spring Harbour Laboratory Press, NY) que, por exemplo, pode compreender as seguintes etapas: 1) imobilização de fragmentos genômicos de DNA de planta em um filtro, 2) pré-hibridização do filtro por 1 a 2 horas a 42Ό em 50% de formamida, 5 X SSPE, 2 X reagente de Denhardfs e 0,1% de SDS, ou por 1 a 2 horas a 68Ό em 6 X SSC, 2 X reagente de Denhardfs e 0,1% de SDS, 3) adição da sonda de hibridização que foi marcada, 4) incubação por 16 a 24 horas, 5) lavagem do filtro por 20 min a temperatura ambiente em 1X SSC, 0,1% de SDS, 6) lavagem
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29/45 do filtro três vezes por 20 min cada a 68Ό em 0,2 X SSC, 0,1% de
SDS, e 7) exposição do filtro por 24 a 48 horas a película de raios X a 70Ό com uma intensificação de triagem.
[057] Como usado aqui, uma amostra biológica é uma amostra de uma planta, material de planta ou produtos compreendendo material de planta. O termo planta destina-se a incluir tecidos de planta de algodão (Gossypium hirsitum), em qualquer estágio de maturidade, bem como quaisquer células, tecidos, ou órgãos tirados ou derivados de qualquer tal planta, incluindo sem limitação, quaisquer sementes, folhas, tronco, flores, raízes, células simples, gametas, culturas de células, culturas de tecidos ou protoplastos. Material de planta, como usado aqui se refere a material que é obtido ou derivado de uma planta. Produtos compreendendo material de planta referem-se a alimento, produtos alimentícios ou outros produtos que são produzidos usandose material de planta ou podem ser contaminados por material de planta. É entendido que, no contexto da presente invenção, tais amostras biológicas são testadas quanto à presença de ácidos nucleicos específicos para EE-GH6, implicando a presença de ácidos nucleicos nas amostras. Assim os métodos mencionados aqui para a identificação de evento elite EE-GH6 nas amostras biológicas, referem-se a uma identificação nas amostras biológicas de ácido nucleicos que compreendem o evento elite.
[058] Como usado aqui compreendendo deve ser interpretado como a especificação da presença das características afirmadas, números inteiros, etapas, reagentes ou componentes como mencionados, mas não exclui a presença ou adição de uma ou mais características, números inteiros, etapas ou componentes, ou seus grupos. Assim, por exemplo, um ácido nucleico ou proteína compreendendo uma sequência de nucleotídeos ou aminoácidos, podem compreender mais nucleotídeos ou aminoácidos do que realmente citados, isto é, ser imPetição 870170080020, de 20/10/2017, pág. 37/103
30/45 plantada em um ácido nucleico ou proteína maior. Um gene quimérico compreendendo uma sequência de DNA que é funcionalmente ou estruturalmente definida, pode compreender sequências de DNA adicionais, etc.
[059] A presente invenção também se refere ao desenvolvimento de um evento elite EE-GH6 no algodão para as plantas compreendendo esse evento, a progênie obtida a partir dessas plantas e as células de planta, ou material de planta derivado desse evento. Plantas compreendendo o evento elite EE-GH6 foram obtidas como descrito no exemplo 1.
[060] Plantas de algodão ou material de planta compreendendo EE-GH6 podem ser identificadas de acordo com o protocolo de identificação de PCR descrito para EE-GH6 no exemplo 2. Resumidamente, DNA genômico de algodão presente na amostra biológica é ampliado por PCR usando-se um iniciador que especificamente reconhece uma sequência dentro da sequência de flanqueamento 3' ou 5' de EE-GH6 tal como o iniciador com a sequência de SEQ ID NO: 3, e um iniciador que reconhece uma sequência no DNA exógeno, tal como o iniciador com a sequência de SEQ ID NO: 4. iniciadores de DNA que ampliam parte de uma sequência de algodão endógena são usados como controle positivo para a ampliação por PCR. Se na ampliação por PCR, o material fornece um fragmento do tamanho esperado, o material contém material de planta oriunda da planta de algodão que contém evento elite EE-GH6.
[061] Plantas que contêm EE-GH6 são caracterizadas por sua resistência a inseto, bem como por sua tolerância a glufosinato. Plantas que contêm EE-GH6 são também caracterizadas por ter características agronômicas que são comparáveis com variedades comercialmente disponíveis de algodão nos US, na ausência de pressão de inseto. Foi observado que a presença de um DNA exógeno na região de
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31/45 inserção do genoma da planta de algodão descrito aqui, confere particularmente características moleculares e fenotípicas interessantes às plantas compreendendo esse evento.
[062] Os seguintes exemplos descrevem a identificação de evento elite EE-GH6 e o desenvolvimento de ferramentas para a identificação específica do evento elite EE-GH6 nas amostras biológicas.
[063] A não ser que de outra maneira afirmado nos exemplos, todas as técnicas recombinantes são realizadas de acordo com protocolos padrão como descritos em Sambrook J e Russell DW (eds.) (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3a Edição, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York e in Ausubel FA, Brent R, Kingston RE, Moore DD, Seidman JG, Smith JA e Struhl K (eds.) (2006) Current Protocols in Molecular Biology. John Wiley & Sons, New York. [064] Referências e materiais padrão são descritos in Cray RDD (ed.) (1993) Molecular Plant Biology LabFax, BIOS Scientific Publishers Ltd., Oxford e Blackwell Scientific Publications, Oxford e in Brown TA, (1998) Molecular Biology LabFax, 2a Edição, Academic Press, San Diego. Materiais e métodos padrão para a reação de cadeia de polimerases (PCR) podem ser encontrados em McPherson MJ e Moller SG (2000) PCR (The Basics), BIOS Scientific Publishers Ltd., Oxford e em PCR Applications Manual, 3a Edição (2006), Roche Diagnostics GmbH, Mannheim ou www.roche-appliedscience.com [065] Na descrição e exemplos, referência é feita para as seguintes sequências:
SEQ ID NO:1: sequência de nucleotídeos compreendendo uma região de flanqueamento 5' de EE-GH6
SEQ ID NO:2: sequência de nucleotídeos compreendendo uma região de flanqueamento 3' de EE-GH6 SEQ ID NO:3: iniciador GHI058
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SEQ ID N0:4: SEQ ID N0:5: SEQ ID N0:6: SEQ ID N0:7: SEQ ID N0:8: SEQ ID N0:9:
iniciador GHI059 iniciador DPA286 iniciador NEL115 iniciador NEL117 iniciador 1 para a ampliação de fragmento de controle iniciador 2 para a ampliação de fragmento de controle
SEQ ID NO:10: sequência de nucleotídeos da sequência alvo genômica de planta antes da inserção de EE-GH6
SEQ ID NO:11: sequência de nucleotídeos compreendendo uma região de flanqueamento 5' de EE-GH6 (comprimento)
Exemplos
1. Identificação de Evento elite EE-GH6 [066] Algodão resistente a inseto foi desenvolvido por transformação de algodão com um vector compreendendo a sequência de codificação de um gene de cry2Ae modificado operavelmente ligado a um peptídeo de trânsito da subunidade pequena da Rubisco sob o controle de um promotor 35Sdo vírus do mosaico da couve-flor.
[067] Evento elite EE-GH6 foi selecionado com base em um procedimento de seleção extenso com base na boa expressão e estabilidade do gene de resistência a inseto e sua compatibilidade com ótimas características agronômicas tais como altura da planta, altura para o nódulo, retenção de casulo, resistência, vigor, comprimento de fibra, resistência da fibra e fibra de algodão fornecidas foram avaliados.
[068] O evento selecionado foi introduzido para dentro de diferentes bases genéticas comerciais, e resultados de experiências de campo em diferentes localizações foram comparadas. Plantas foram desafiadas com pestes de inseto usando-se diferentes tratamentos. Plantas exibiam bom controle de inseto.
[069] Além do mais, o evento tinha morfologia de casulo, flor e
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33/45 folha normal, excelente fertilidade e não mostrava nenhuma suscetibilidade a inseto anormal ou doença em múltiplas bases genéticas. Durante a introdução em múltiplas bases genéticas nenhum problema anômalo ou anormalidades foram observados.
2. Identificação da Região de Flanqueamentos de Evento elite EE-GH6 [070] A sequência das regiões que flanqueiam o DNA exógeno no evento elite EE-GH6 foi determinada usando-se o método de PCR interlaçado assimétrico térmico (TAIL-) descrito por Liu e outros (1995, Planta J. 8(3):457-463) onde possível. Esse método utiliza três iniciadores aninhados em reações sucessivas juntamente com um iniciador degenerado arbitrário mais curto de modo que as eficácias de ampliação relativas de produtos específicos e não específicos podem ser termicamente controlados. Os iniciadores específicos foram selecionado para o anelamento para a borda do DNA exógeno e com base em suas condições de anelamento. Uma pequena quantidade (5 pl) de produtos de PCR não purificados, secundário e terciários foram analisados em um gel de agarose de 1%. O produto de PCR terciário foi purificado e foi sequenciado.
2.1. Região de Flanqueamento (51) à Direita [071] O fragmento identificado como compreendendo a região de flanqueamento 5' foi sequenciado (SEQ ID NO:1). A sequência entre nucleotídeo 1 e 140 corresponde a DNA de planta, enquanto a sequência entre nucleotídeo 141 e 192 corresponde a DNA exógeno. Um fragmento mais longo compreendendo a região de flanqueamento 5' foi também sequenciado (SEQ ID NO:11). A sequência entre nucleotídeo 1 e nucleotídeo 463 corresponde a DNA de planta, enquanto a sequência entre nucleotídeo 464 e 555 corresponde a DNA exógeno.
2.2. Região de Flanqueamento (31) à Esquerda [072] O fragmento identificado compreendendo a região de flanqueamento 3' obtido pelo método de TAIL-PCR foi sequenciado (SEQ
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ID N0:2). A sequência entre nucleotídeo 1 e 112 corresponde a DNA exógeno, enquanto a sequência entre nucleotídeo 113 e 438 corresponde a DNA de planta.
2.3. Identificação da pré-inserção de DNA de Planta [073] Pré-inserção de DNA de planta foi ampliada por ampliação de PCR usando-se oligonucleotídeos NEL115 (SEQ ID NO:6) e NEL117 (SEQ ID NO:7). A sequência de nucleotídeos do fragmento ampliado foi identificada (SEQ ID NO: 10). A região entre posições de nucleotídeos 141 e 148 foi identificada como sendo redisposta (deleção de sítio alvo) quando comparada com as sequências de nucleotídeos derivadas de planta nas regiões de flanqueamento 5' e 3' do evento elite EE-GH6.
3. Desenvolvimento de Protocolos de Identificação de Reação de Cadeia de Polimerase para EE-GH6
3.1. Iniciadores [074] Iniciadores específicos foram desenvolvidos que reconhecem sequências dentro do evento elite.
[075] Um iniciador foi desenvolvido que reconhece uma sequência dentro da região de flanqueamento 3' de EE-GH6. Um segundo iniciador foi então selecionado dentro da sequência do DNA exógeno de modo que os iniciadores variem uma sequência de cerca de 189 nucleotídeos. As seguintes iniciadores demonstraram dar resultados particularmente claros e reproduzíveis em uma reação de PCR no DNA EE-GH6:
GHI058: 5'- gAA.ATT.gCg.TgA.CTC.AAA.TTC.C -3' (SEQ ID NO: 3) (alvo: DNA de planta)
GHI059: 5'- ggT.TTC.gCT.CAT.gTg.TTg.AgC-3' (SEQ ID NO: 4) (alvo: enxerto de DNA) [076] Iniciadores que direcionam uma sequência endógena são de preferência incluídos no coquetel de PCR. Esses iniciadores serPetição 870170080020, de 20/10/2017, pág. 42/103
35/45 vem como um controle interno nas amostras desconhecidas e no controle positivo de DNA. Um resultado positivo com o par de iniciador endógeno (presença de um fragmento ampliado por PCR de 445 pb) demonstra que há amplo DNA de qualidade adequada na preparação genômica de DNA para um produto de PCR a ser gerado. Os iniciadores endógenos foram selecionados para reconhecer um gene governanta no algodão:
GHI001: 5'-AAC.CTA.ggC.TgC.TgA.Agg.AgC-3' GHI002: S^CAA.CTC.CTC.CAg.TCA.TCT.CCg-S'
3.2. Fragmentos Ampliados [077] Os fragmentos ampliados esperados na (SEQ ID NO: 8) (SEQ ID NO: 9) reação de PCR são:
Para o par inicidador GHI001-GHI002: 445 pb (controle endógeno)
Para o par inicidador GHI058-GHI059: 189 pb (Evento elite EEGH6)
3.3. DNA de Modelo [078] DNA de modelo foi preparado a partir de um furador de folha de acordo com Edwards e outros (Ácido nucleico Research, 19, p1349, 1991). Quando usando DNA preparado com outros métodos, uma experiência de teste utilizando diferentes quantidades de modelo seria feito. Usualmente 50 ng de DNA de modelo genômico fornecem os melhores resultados.
3.4. Controles Positivos e Negativos Apontados [079] Para evitar falsos positivos ou negativos, foi determinado que os seguintes controles positivos e negativos seriam incluídos em uma experiência com PCR:
- Controle de mistura principal (controle negativo de DNA).
Isso é uma PCR em que nenhum DNA é adicionado à reação. Quando o resultado esperado, nenhum produto de PCR, é observado isso indica que o coquetel de PCR não foi contaminado com DNA alvo.
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- um controle positivo de amostra de DNA (DNA genômico conhecido como contendo às sequências transgênicas). Ampliação bem sucedida desse controle positivo demonstra que a PCR foi realizada sob condições que permitem a ampliação das sequências alvo.
- um controle de DNA selvagem. Isso é uma PCR em que o DNA de modelo provido é DNA genômico preparado a partir de uma planta não-transgênica. Quando o resultado esperado, nenhuma ampliação de um produto de PCR de transgene mas a ampliação do produto de PCR endógeno, é observado isso indica que não há ampliação de base de transgene detectável em uma amostra de DNA genômico.
3.5. Condições de PCR [080] Ótimos resultados foram obtidos sob as seguintes condições:
- a mistura de PCR para 25 pl de reações contém:
2,5 μΙ de DNA de modelo
2,5 μΙ 10x tampão de ampliação (fornecido pelo fabricante com a polimerase de Taq)
0,5 μΙ de dNTP's a 10 mM
0,4 μΙ de GHI001 (10 pmols/μΙ)
0,4 μΙ de GHI002 (10 pmols/μΙ)
0,7 μΙ de GHI058 (10 pmols/μΙ)
0,7 μΙ de GHI059 (10 pmols/μΙ)
0,1 μΙ de polimerase de DNA de Taq (5 unidades/μΙ) água até 25 μΙ
- o perfil de termociclagem a ser seguido para ótimos resultados é os seguintes:
min a 95Ό
Seguido por: 1 min a 95Ό min a 57Ό min a 72Ό
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Para 5 ciclos
Seguido por: 30 seg a 92Ό sec. a 57Ό min a 72Ό
Para 25 ciclos
Seguido por: 10 minutos a 72Ό
3.6. Análise de Gel de Agarose [081] Para otimamente visualizar os resultados do PCR foi determinado que entre 10 e 20 μΙ das amostras de PCR seriam aplicadas sobre um gel de agarose de 1,5% (tampão de Tris-borato) com um padrão de peso molecular apropriado (por exemplo, padrão de PM de 100 pb PHARMACIA).
3.7. Validação dos Resultados [082] Foi determinado que dados oriundos de amostras de DNA de planta transgênica dentro de uma única experiência de PCR e um único coquetel de PCR não seriam aceitáveis a não ser 1) o controle positivo de DNA mostra os produtos de PCR esperados (fragmentos endógenos e transgênicos), 2) o controle negativo de DNA é negativo para a ampliação de PCR (nenhum fragmento) e 3) o controle de DNA selvagem mostra o resultado esperado (ampliação de fragmento endógeno).
[083] Quando a seguir o protocolo de identificação de PCR para EE-GH6 como descrito acima, raias que mostram quantidades visíveis dos produtos de PCR transgênicos e endógenos dos tamanhos esperados, indicam que a planta correspondente a partir da qual o DNA de modelo genômico foi preparado, herdou o evento elite EE-GH6. Raias que não mostram quantidades visíveis de qualquer um dos produtos de PCR transgênicos e que mostram quantidades visíveis do produto de PCR endógeno, indicam que a planta correspondente a partir da qual o DNA de modelo genômico foi preparado, não compreende o
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38/45 evento elite. Raias que não mostram quantidades visíveis dos produtos de PCR transgênicos e endógenos, indicam que a qualidade e/ou quantidade do DNA genômico não permitiram que um produto de PCR seja gerado. Essas plantas não podem ser classificadas. A preparação de DNA genômico seria repetida e uma nova experiência de PCR, com os controles apropriados, tinham de ser realizados.
3.8. Uso do Protocolo de Discriminação por PCR para Identificar EEGH6 [084] Antes da tentativa de triar desconhecidos, uma experiência de teste, com todos os controles apropriados, tinha de ser realizada. O protocolo desenvolvido podería exigir otimização para os componentes que podem diferir entre laboratórios (preparação de DNA de modelo, polimerase de DNA de Taq, qualidade dos iniciadores, dNTP's, termociclador, etc.).
[085] Ampliação da sequência endógena desempenha um papel chave no protocolo. Uma tem de alcançar PCR e condições de termociclagem que ampliam quantidades equimolares tanto da sequência endógeno quanto transgênica em um modelo de DNA genômico transgênico conhecidos. Sempre que o fragmento endógeno direcionado não é ampliado ou sempre que as sequências direcionadas não são ampliadas com as mesmas intensidades de marcação de brometo de etídio, como julgado por eletroforese de agarose, otimização das condições de PCR pode ser exigida.
[086] Material de folha oriunda de numerosas plantas de algodão, algumas das quais compreendendo EE-GH6 foram testadas de acordo com o protocolo descrito acima. Amostras oriundas de evento elite EEGH6 e oriundas selvagem de algodão foram tiradas como controles positivos e negativos, respectivamente.
[087] Figura 2 ilustra o resultado obtido com o protocolo de evento elite identificação de PCR 1 para EE-GH6 em numerosas amostras
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39/45 de planta de algodão. As amostras nas raias de 2 a 5 demonstraram conter o evento elite quando a tira de 189 pb é detectada, enquanto as amostras nas raias 6 e 7 não compreendem EE-GH6. Raias 6 e 7 compreendem outros eventos de elite de algodão (incluindo plantas compreendendo diferentes genes quiméricos de tolerância a inseto); raia 8 representa a amostra de controle negativo (água), e raias 1 e 9 representam o padrão de peso molecular (padrão de PM de 100 pb).
4. Uso de um Fragmento de Integração Específico como a Sonda para a Detecção de Material Compreendendo EE-GH6 [088] Um fragmento de integração específico EE-GH6 é obtido por ampliação de PCR usando-se iniciadores específicos GHI058 (SEQ ID NO:3) e GHI059 (SEQ ID NO:4) ou por síntese química e é marcado. Esse fragmento de integração é usado como uma sonda específica para a detecção de EE-GH6 nas amostras biológicas. Ácido nucleico é extraído a partir das amostras de acordo com procedimentos padrão. Esse ácido nucleico é então posto em contato com a sonda específica sob condições de hibridização que são otimizadas para permitir a formação de um híbrido. A formação do híbrido é então detectada para indicar a presença de ácido nucleico EE-GH6 na amostra. Opcionalmente, o ácido nucleico nas amostras é ampliado usando-se os iniciadores específicos antes do contato com a sonda específica. Alternativamente, o ácido nucleico é marcado antes do contato com a sonda específica ao invés do fragmento de integração. Opcionalmente, a sonda específica está ligada a um veículo sólido (tais como, mas não-limitados a filtro, tira ou contas), antes do contato com as amostras.
5. Protocolo para uma Determinação à Base de PCR do Estado de Zigosidade de Material de Planta Algodão EE-GH6
5.1. Iniciadores [089] Dois iniciadores que reconhecem as sequências de nucleoPetição 870170080020, de 20/10/2017, pág. 47/103
40/45 tídeos do locus selvagem antes da inserção do evento elite, foram criados de tal modo que eles são direcionados um ao outro e têm o sítio de inserção entre si. Esse conjunto de iniciadores, juntamente com um terceiro iniciador complementar a sequências de DNA exógenas e direcionadas em direção ao DNA de flanqueamento, permitem ampliação de PCR simultânea do locus EE-GH6 bem como do locus selvagem.
[090] Os seguintes iniciadores demonstraram dar resultados particularmente claros e reproduzíveis em uma reação de PCR de classificação de zigosidade no DNA EE-GH6:
NEL115 5'- ACT.gAT.ggC.TCA.ACg.gTT.AC-3' (SEQ ID NO: 6) (alvo: DNA de planta a montante de sequência de flanqueamento 5') DPA286 5'- gAT.CgC.CAT.ggA.gCC.ATT-3' (SEQ ID NO: 5) (alvo: inserção de DNA)
NEL117 5' - AAA.TCA.CAg.gCA.gAg.ggA.Ag-3' (SEQ ID NO: 7) (alvo: DNA de planta da sequência de flanqueamento 3')
5.2. Fragmentos Ampliados [091] Os fragmentos ampliados esperados na reação de PCR são:
Para o par inicidador GHI065 - GHI066: 451 pb (locus selvagem) Para o par inicidador GHI057 - GHI065: 197 pb (locus EE-GH6)
5.3. DNA de Modelo [092] DNA de modelo foi preparado a partir de um furador de folha de acordo com Edwards e outros (Ácido nucleico Research, 19, p1349, 1991). Quando usando DNA preparado com outros métodos, uma experiência de teste utilizando quantidades diferentes de modelo seria feita. Usualmente 50 ng de DNA de modelo genômico fornece os melhores resultados.
5.4. Controles Positivos e Negativos Atribuídos [093] Para evitar falsos positivos ou negativos, é aconselhável
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41/45 que os seguintes controles positivos e negativos sejam incluídos em uma experiência de PCR:
Controle de mistura principal (controle negativo de DNA). Isso é uma PCR em que no DNA é adicionado à reação. Quando o resultado esperado nos produtos PCR é observado isso indica que o coquetel de PCR não foi contaminado com DNA alvo.
um controle positivo de DNA (amostra de DNA genômico conhecido como contendo as sequências transgênicas). Ampliação bem sucedida para esse controle positivo demonstra que a PCR foi realizada sob condições que permitem para ampliação de sequências alvo.
A controle de DNA selvagem. Isso é uma PCR em que o DNA de modelo provido é DNA genômico preparado a partir de uma planta não-transgênica. Quando o resultado esperado, nenhuma ampliação de um produto de PCR de transgene mas ampliação do produto de PCR endógeno é observada, isso indica que não há ampliação de base de transgene detectável na amostra de DNA genômico.
5.5. Condições de PCR [094] Ótimos resultados foram obtidos sob as seguintes condições:
- a mistura de PCR para 25 pl de reações contém:
x μΙ de DNA de modelo (150 ng)
2,5 μΙ de 10x tampão de ampliação (fornecido pelo fabricante com a polimerase de Taq)
0,5 μΙ de 10 mM dNTP's 0,5 μΙ de NEL115(10 pmols/μΙ)
0,5 μΙ de NEL117(10 pmols/μΙ)
0,2 μΙ de DPA286 (10 pmols/μΙ)
0,1 μΙ de polimerase de DNA de Taq (5 unidades/μΙ) água até 25 μΙ
- o perfil de termociclagem a ser seguido para ótimos resultados é os
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42/45 seguintes:
min a 95“C
Seguido por: 1 min a 95Ό min a 57“C min a 72Ό Para 5 ciclos
Seguido por: 30 seg a 92Ό seg a 57Ό 1 min a 72Ό Para 25 ciclos
Seguido por: 10 minutos a 72Ό
5.6. Análise de Gel de Aqarose [095] Para otimamente visualizar os resultados do PCR foi determinado que entre 10 e 20 μΙ das amostras de PCR seriam aplicadas em um gel de agarose de 1,5% (tampão de Tris-borato) com um padrão de peso molecular apropriado (por exemplo, padrão de PM de 100 pb PHARMACIA).
5.7. Validação dos Resultados [096] Dados oriundos das amostras de DNA de planta transgênica dentro de uma única corrida de PCR e um única mistura principal de PCR não será aceitável a não ser que:
o controle positivo mostra dos produtos de PCR esperados (alvo ampliação de alvo transgênico) o controle de DNA selvagem mostra o resultado esperado (ampliação de alvo selvagem).
o controle negativo é negativo para a ampliação de PCR (nenhum fragmento).
[097] Raias que mostram quantidades visíveis do produto de PCR transgênico do tamanho esperado e que não mostram quantidades visíveis do produto de PCR selvagem, indicam que a planta corPetição 870170080020, de 20/10/2017, pág. 50/103
43/45 respondente a partir da qual o modelo de DNA genômico foi preparado, é homozigoto para o pacote de gene transgênico.
[098] Raias que mostram quantidades visíveis dos produtos de PCR selvagem e transgênico do tamanho esperado, indicam que a planta correspondente a partir da qual o DNA de modelo genômico foi preparado, é hemizogoto para o pacote de gene transgênico. Raias que não mostram quantidades visíveis do produto de PCR transgênico e que mostram quantidades visíveis do produto de PCR selvagem, indicam que a planta correspondente a partir da qual o DNA de modelo genômico foi preparado, não herdou a sequência transgênica analisada quanto a e é assim homozigota para o locus selvagem.
[099] Raias que não mostram quantidades visíveis de produtos de PCR selvagem e transgênico, indicam que a qualidade e/ou quantidade do DNA genômico não permitiu que um produto de PCR seja gerado. Essas plantas não podem ser classificadas. A preparação de DNA genômico seria repetida e uma nova experiência de PCR, com os controles apropriados, tem de ser realizados.
5.8. Uso do Protocolo de Classificação de Zigosidade para a Identificação do Estado de Zigosidade em Plantas contendo EE-GH6.
[0100] Figura 3 ilustra o resultado obtido com a PCR de classificação zigosidade para EE-GH6 em numerosas amostras de planta de algodão. As amostras nas raias 2-3 demonstraram conter o fragmento de PCR (197 pb) característico para o evento elite EE-GH6, enquanto as amostras nas raias de 4 a 7 continham o fragmento característico para a presença do locus selvagem. Raias de 4-6 continha ambos os fragmentos. Raias 2 e 3 portanto contêm EE-GH6 na forma de homozigoto, raias de 4 a 6 contêm EE-GH6 na forma de hemizogoto e raia 7 contém o locus selvagem na forma de homozigoto (azigoto para EEGH6). Raia 8 representa a amostra de controle negativo (água), e raias de 1 e 9 representam o padrão de peso molecular (padrão de PM
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44/45 de 100 pb).
6. Introdução de EE-GH6 em Cultivares preferidos [0101] Evento elite EE-GH6 é introduzido por retrocruzamento repetido em cultivares de algodão comercial tais como mas nãolimitados a FM5013, FM5015, FM5017, FM989, FM832, FM966 e FM958, FM989, FM958, FM832, FM991, FM819, FM800, FM960, FM966, FM981, FM5035, FM5044, FM5045, FM5013, FM5015, FM5017 ou FM5024.
[0102] É observado que a introdução do evento elite nesses cultivares não significativamente influenciam qualquer uma das características fenotípicas ou agronômicas desejáveis desses cultivares (nenhum obstáculo de ligação) enquanto expressão do transgene, como determinado pela tolerância a glufosinato, satisfaz níveis comercialmente aceitáveis do evento EE-GH6 como um evento elite.
[0103] Evento elite EE-GH6 pode ser vantajosamente combinado com outros eventos de elite disponíveis no mercado, particularmente outro evento elite gene de resistência a inseto para a finalidade de gerenciamento de resistência a inseto, tal como mas não-limitado ao evento 3006-210-23; (petição de afídio de USDA 03-036-02p) evento 281-24-236 (petição de afídio de USDA 03-036-01 p); evento MON158985 (petição de afídio de USDA 00-342-01 p); evento MON531 (petição de afídio de USDA 94-308-01 p), evento COT102 (=Syngenta vip3A) petição de afídio de USDA 03-155-01 p, evento EEGH5 descritos no pedido de patente EP 07075299.3. Evento elite EEGH6 pode também ser combinado com eventos de elite tolerantes a herbicida tais como evento MON1445 (petição de afídio de USDA 95045-01 p) ou evento MON88913 (petição de afídio de USDA 04-08601P).
[0104] Como usado nas reivindicações abaixo, a não ser que de outra maneira claramente indicada, o termo planta destina-se a incluPetição 870170080020, de 20/10/2017, pág. 52/103
45/45 ir tecidos de planta, em qualquer estágio de maturidade, bem como quaisquer células, tecidos, ou órgãos tirados de ou derivados de qualquer tal planta, incluindo sem limitação, quaisquer sementes, folhas, tronco, flores, raízes, células simples, gametas, culturas de células, culturas de tecidos ou protoplastos.
[0105] Semente de referência compreendendo o evento elite EEGH6 foi depositado como EE-GH6 na ATCC (10801 University Blvd., Manassas, VA 20110-2209) em 9 de abril de 2007, sob número de acesso de ATCC PTA-8398. Um nome alternativo para EE-GH6 é GBH119.
[0106] Como usado nas reivindicações abaixo, a não ser que de outra maneira claramente indicada, o termo planta destina-se a incluir planta tecidos, em qualquer estágio de maturidade, bem como quaisquer células, tecidos, ou órgãos tirados de ou derivados de qualquer tal planta, incluindo sem limitação, quaisquer sementes, folhas, tronco, flores, raízes, células simples, gametas, culturas de células, culturas de tecidos ou protoplastos.
[0107] A descrição acima da invenção destina-se a ser ilustrativa e não-limitante.
[0108] Várias mudanças ou modificações nas concretizações descritas podem ocorrer por aqueles versados na técnica. Essas podem ser feitas sem se afastar do espírito ou escopo da invenção.
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Claims (30)

  1. REIVINDICAÇÕES
    1. Método para a identificação de um evento elite em amostras biológicas, caracterizado pelo fato de que compreende:
    a) um DNA exógeno compreendendo a sequência que codifica um gene cry2Ae modificado operavelmente ligado a um peptídeo de trânsito da subunidade pequena da Rubisco sob o controle do promotor 35S do vírus do mosaico da couve flor;
    b) SEQ ID NO: 11, nucleotídeos 1-463 sendo a região de flanqueamento 5’ do dito evento elite e estando imediatamente a montante de e contíguo com o referido DNA exógeno, e nucleotídeos 464-555 de SEQ ID NO: 11 sendo DNA exógeno; e
    c) SEQ ID NO: 2, nucleotídeos 113-438 sendo a região de flanqueamento do dito evento elite e estando imediatamente a jusante à e contíguo com o dito DNA exógeno, e nucleotídeos 1-112 de SEQ ID NO: 2 sendo DNA exógeno;
    em que o dito evento elite é compreendido na semente de referência que foi depositada na ATCC sob o número de depósito PTA-8398, o dito método compreendendo amplificar um fragmento de DNA de entre 100 e 500 pb, o dito fragmento de DNA compreendendo a dita região de flanqueamento 5’ ou 3’ e o dito DNA exógeno contíguo com SEQ ID NO: 1 do nucleotídeo 120 ao 161 ou SEQ ID NO: 2 do nucleotídeo 92 ao 123, a partir de um ácido nucleico presente na dita amostra biológica utilizando uma reação em cadeia da polimerase com pelo menos dois iniciadores, um dos ditos iniciadores reconhecendo a região de flanqueamento 5’ do dito evento elite, a dita região de flanqueamento 5’ apresentando a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 1 do nucleotídeo 1 ao nucleotídeo 140 ou a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 11 da posição 1 a posição 463 ou a região de flanqueamento 3’ do dito evento elite, a dita região de
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  2. 2/15 flanqueamento 3’ apresentando a sequência de nucleotídeos do complemento de SEQ ID NO: 2 do nucleotídeo 113 ao nucleotídeo 438, o outro iniciador dos ditos iniciadores reconhecendo uma sequência dentro do DNA exógeno apresentando a sequência de nucleotídeo do complemento de SEQ ID NO: 1 do nucleotídeo 141 ao nucleotídeo 192 ou a sequência de nucleotídeo de SEQ ID NO: 2 do nucleotídeo 1 ao nucleotídeo 112.
    2. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o dito iniciador que reconhece a região de flanqueamento 5' consiste em uma sequência de nucleotídeos de 17 a 200 nucleotídeos consecutivos selecionados a partir da sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 1 do nucleotídeo 1 ao nucleotídeo 140 ou a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 11 da posição 1 a posição 463 ou o dito iniciador que reconhece a região de flanqueamento 3' do dito evento elite consiste em uma sequência de nucleotídeos de 17 a 200 nucleotídeos consecutivos selecionados a partir da sequência de nucleotídeos do complemento de SEQ ID NO: 2 do nucleotídeo 113 ao nucleotídeo 438, e o dito iniciador que reconhece uma sequência dentro do DNA exógeno consiste em 17 a 200 nucleotídeos consecutivos selecionados a partir da sequência de nucleotídeos do complemento de SEQ ID NO: 1 do nucleotídeo 141 ao nucleotídeo 192 ou a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 2 do nucleotídeo 1 ao nucleotídeo 112.
  3. 3. Método, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o dito iniciador que reconhece a região de flanqueamento 5' compreende em sua extremidade 3' uma sequência de nucleotídeos de pelo menos 17 nucleotídeos consecutivos selecionados a partir da sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 1 do nucleotídeo 1 ao nucleotídeo 140 ou o dito iniciador que reconhece a região de flanqueamento 3' do dito evento elite compreende em sua
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    3/15 extremidade 3' uma sequência de nucleotídeos de pelo menos 17 nucleotídeos consecutivos selecionados a partir da sequência de nucleotídeos do complemento de SEQ ID NO: 2 do nucleotídeo 113 ao nucleotídeo 438, e o dito iniciador que reconhece uma sequência dentro do DNA exógeno compreende em sua extremidade 3' pelo menos 17 nucleotídeos consecutivos selecionados da sequência de nucleotídeos do complemento de SEQ ID NO: 1 do nucleotídeo 141 ao nucleotídeo 192 ou a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 2 do nucleotídeo 113 ao nucleotídeo 438.
  4. 4. Método, de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que os ditos iniciadores compreendem a sequência de SEQ ID NO: 5 e SEQ ID NO: 7, respectivamente.
  5. 5. Método, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo fato de que compreende a amplificação de um fragmento de cerca de 197 pb usando um protocolo de identificação por PCR específico para o dito evento elite ou utilizando iniciadores compreendendo a sequência de SEQ ID NO: 5 e SEQ ID NO: 7.
  6. 6. Kit para a identificação do evento elite, como definido na reivindicação 1, em amostras biológicas, caracterizado pelo fato de que compreende dois iniciadores capazes de amplificar um fragmento de DNA compreendendo a dita região de flanqueamento 5’ ou 3’ e o dito DNA exógeno contíguo com SEQ ID NO: 1 do nucleotídeo 120 ao 161 ou SEQ ID NO: 2 do nucleotídeo 92 ao 123, o dito kit compreendendo um iniciador que reconhece a região de flanqueamento 5' do dito evento elite, a dita região de flanqueamento 5' apresentando a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 1 do nucleotídeo 1 ao nucleotídeo 140 ou a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 11 da posição 1 a posição 463 ou um iniciador que reconhece a região de flanqueamento 3' do dito evento elite, a dita região de flanqueamento 3' apresentando a sequência de nucleotídeos
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    4/15 do complemento de SEQ ID NO: 2 do nucleotídeo 113 ao nucleotídeo 438, e um iniciador que reconhece uma sequência dentro do DNA exógeno, o dito DNA exógeno apresentando a sequência de nucleotídeos do complemento de SEQ ID NO: 1 do nucleotídeo 141 ao nucleotídeo 192 ou a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 2 do nucleotídeo 1 ao nucleotídeo 112.
  7. 7. Kit, de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que o dito iniciador que reconhece a região de flanqueamento 5' consiste em uma sequência de nucleotídeos de 17 a 200 nucleotídeos consecutivos selecionados a partir da sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 1 do nucleotídeo 1 ao nucleotídeo 140 ou a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 11 da posição 1 a posição 463 ou o dito iniciador que reconhece a região de flanqueamento 3' do dito evento elite consiste em uma sequência de nucleotídeos de 17 a 200 nucleotídeos consecutivos selecionados a partir da sequência de nucleotídeos do complemento de SEQ ID NO: 2 do nucleotídeo 113 ao nucleotídeo 438, e o dito iniciador que reconhece uma sequência dentro do DNA exógeno consiste em 17 a 200 nucleotídeos consecutivos selecionados a partir da sequência de nucleotídeos do complemento de SEQ ID NO: 1 do nucleotídeo 141 ao nucleotídeo 192 ou da sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 2 do nucleotídeo 1 ao nucleotídeo 112.
  8. 8. Kit, de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que o dito iniciador que reconhece a região de flanqueamento 5' compreende em sua extremidade 3' uma sequência de nucleotídeos de pelo menos 17 nucleotídeos consecutivos selecionados a partir da sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 1 do nucleotídeo 1 ao nucleotídeo 140 ou da sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 11 da posição 1 a posição 463 ou o dito iniciador que reconhece a região de flanqueamento 3' do dito evento elite compreende em sua
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    5/15 extremidade 3' a sequência de nucleotídeos de pelo menos 17 nucleotídeos consecutivos selecionados a partir da sequência de nucleotídeos do complemento de SEQ ID NO: 2 do nucleotídeo 113 ao nucleotídeo 438, e o dito iniciador que reconhece uma sequência dentro do DNA exógeno compreende em sua extremidade 3' pelo menos 17 nucleotídeos consecutivos selecionados a partir da sequência de nucleotídeos do complemento de SEQ ID NO: 1 do nucleotídeo 141 ao nucleotídeo 192 ou da sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 2 do nucleotídeo 1 ao nucleotídeo 112.
  9. 9. Kit, de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que compreende um iniciador que consiste em uma sequência de SEQ ID NO: 5 e um iniciador que consiste em uma sequência de SEQ ID NO: 7.
  10. 10. Par de iniciadores adequado para o uso na detecção específica de um evento elite, como definido na reivindicação 1, e capaz de amplificar um fragmento de DNA compreendendo a dita região de flanqueamento 5’ ou 3’ e o dito DNA exógeno contíguo com SEQ ID NO: 1 do nucleotídeo 120 ao 161 ou SEQ ID NO: 2 do nucleotídeo 92 ao 123, caracterizado pelo fato de que compreende um iniciador apresentando uma sequência que, sob condições de detecção otimizadas reconhece especificamente uma sequência dentro da região de flanqueamento 5' ou 3' do dito evento elite, a dita região de flanqueamento 5' apresentando a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 1 do nucleotídeo 1 ao nucleotídeo 140 ou a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 11 da posição 1 a posição 463 e a dita região de flanqueamento 3' apresentando a sequência de nucleotídeos do complemento de SEQ ID NO: 2 do nucleotídeo 113 ao nucleotídeo 438, e compreendendo um iniciador apresentando uma sequência que, sob condições de detecção otimizadas reconhece especificamente uma sequência dentro do DNA exógeno do dito
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    6/15 evento elite, o dito DNA exógeno apresentando a sequência de nucleotídeo do complemento de SEQ ID NO: 1 da posição 141 a 192 ou a sequência de nucleotídeo de SEQ ID NO: 2 da posição 1 a posição 112.
  11. 11. Par de iniciadores, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que apresenta uma sequência que, sob condições de detecção otimizadas reconhece especificamente uma sequência dentro da região de flanqueamento 5’ ou 3’ do dito evento elite consiste na sequência de nucleotídeos de 17 a 200 nucleotídeos consecutivos selecionados a partir da sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 1 do nucleotídeo 1 ao nucleotídeo 140 ou a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:11 da posição 1 até a posição 463 ou uma sequência de nucleotídeos de 17 a 200 nucleotídeos consecutivos selecionados a partir da sequência de nucleotídeos do complemento de SEQ ID NO:2 do nucleotídeo 113 ao nucleotídeo 438.
  12. 12. Par de iniciadores, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que apresenta uma sequência que, sob condições de detecção otimizadas reconhece especificamente uma sequência dentro da região de flanqueamento 5’ ou 3’ do dito evento elite que compreende em sua extremidade 3' uma sequência de nucleotídeos de pelo menos 17 nucleotídeos consecutivos selecionados a partir da sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:1 do nucleotídeo 1 ao nucleotídeo 140 ou a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:11 da posição 1 a posição 463 ou uma sequência de nucleotídeos de pelo menos 17 nucleotídeos consecutivos selecionados da sequência de nucleotídeos do complemento de SEQ ID NO:2 do nucleotídeo 113 ao nucleotídeo 438.
  13. 13. Par de iniciadores, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que apresenta uma sequência que, sob condições de detecção otimizadas reconhece especificamente uma
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    7/15 sequência dentro da região de flanqueamento 3’ do dito evento elite que compreende em sua extremidade 3' a sequência de SEQ ID NO:3.
  14. 14. Par de iniciadores, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que apresenta uma sequência que, sob condições de detecção otimizadas reconhece especificamente uma sequência dentro da região de flanqueamento 5’ do dito evento elite que compreende em sua extremidade 3' a sequência de SEQ ID NO:7.
  15. 15. Método para identificação de um evento elite, de acordo com a reivindicação 1, em amostras biológicas, caracterizado pelo fato de que compreende a detecção de uma região específica para o dito evento elite, a dita região compreendendo a dita região de flanqueamento 5’ ou 3’ e o dito DNA exógeno contíguo com SEQ ID NO: 1 do nucleotídeo 120 ao 161 ou SEQ ID NO: 2 do nucleotídeo 92 ao 123, com uma sonda específica, em que o método compreende a hibridização de um ácido nucleico de amostras biológicas com a dita sonda específica, em que a sequência da dita sonda específica reconhece especificamente parte da sequência de flanqueamento 5’ ou a sequência de flanqueamento 3’ do dito evento elite e a sequência do DNA exógeno contíguo com isto, em que a dita região de flanqueamento 5’ apresenta a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 1 do nucleotídeo 1 ao nucleotídeo 140 ou a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 11 da posição 1 a posição 463 e o DNA exógeno contíguo com isto apresenta a sequência de nucleotídeos do complemento de SEQ ID NO: 1 do nucleotídeo 141 ao nucleotídeo 192, e a dita região de flanqueamento 3’ apresenta a sequência de nucleotídeos do complemento de SEQ ID NO: 2 do nucleotídeo 113 ao nucleotídeo 438, e o DNA exógeno contíguo com isto apresenta a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 2 do nucleotídeo 1 ao nucleotídeo 112.
  16. 16. Método, de acordo com a reivindicação 15,
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    8/15 caracterizado pelo fato de que a dita sonda específica apresenta a sequência de SEQ ID NO:1 do nucleotídeo 120 a 161 ou com a SEQ
    ID NO:2 do nucleotídeo 92 a 123, ou o complemento total das ditas sequências.
  17. 17. Kit para a identificação do evento elite, como definido na reivindicação 1, em amostras biológicas, caracterizado pelo fato de que compreende uma sonda específica, capaz de hibridizar especificamente à uma região específica do dito evento elite, a dita região compreendendo a dita região de flanqueamento 5’ ou 3’ e o dito DNA exógeno contíguo com SEQ ID NO: 1 do nucleotídeo 120 ao 161 ou SEQ ID NO: 2 do nucleotídeo 92 ao 123, em que a dita sonda específica reconhece especificamente uma sequência compreendendo parte da sequência de flanqueamento 5’ ou a sequência de flanqueamento 3’ do dito evento elite e a sequência do DNA exógeno contíguo com isto, em que a dita região de flanqueamento 5’ apresenta a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 1 do nucleotídeo 1 ao nucleotídeo 140 ou a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 11 da posição 1 a posição 463 e o DNA exógeno contíguo com isto apresenta a sequência de nucleotídeos do complemento de SEQ ID NO: 1 do nucleotídeo 141 ao nucleotídeo 192, e a dita região de flanqueamento 3’ apresenta a sequência de nucleotídeos do complemento de SEQ ID NO: 2 do nucleotídeo 113 ao nucleotídeo 438, e o DNA exógeno contíguo com isto apresenta a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 2 do nucleotídeo 1 ao nucleotídeo 112.
  18. 18. Kit, de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que a dita sonda específica apresenta a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:1 do nucleotídeo 130 ao 151 ou SEQ ID NO:2 do nucleotídeo 102 ao 123, ou o complemento total das ditas sequências.
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    9/15
  19. 19. Sonda específica para identificação de um evento elite, como definido na reivindicação 1, em amostras biológicas, caracterizada pelo fato de que reconhece especificamente uma sequência compreendendo parte da sequência de flanqueamento 5’ ou a sequência de flanqueamento 3’ do dito evento elite e a sequência do DNA exógeno contíguo com SEQ ID NO: 1 do nucleotídeo 120 ao 161 ou SEQ ID NO: 2 do nucleotídeo 92 ao 123, em que a dita região de flanqueamento 5’ apresenta a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 1 do nucleotídeo 1 ao nucleotídeo 140 ou a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 11 da posição 1 a posição 463 e o DNA exógeno contíguo com isto apresenta a sequência de nucleotídeos do complemento de SEQ ID NO: 1 do nucleotídeo 141 ao nucleotídeo 192, e a dita região de flanqueamento 3’ apresenta a sequência de nucleotídeos do complemento de SEQ ID NO: 2 do nucleotídeo 113 ao nucleotídeo 438, e o DNA exógeno contíguo com isto apresenta a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 2 do nucleotídeo 1 ao nucleotídeo 112.
  20. 20. Sonda, de acordo com a reivindicação 19, caracterizada pelo fato de que apresenta a sequência de SEQ ID NO:1 do nucleotídeo 120 ao 161 ou SEQ ID NO:2 do nucleotídeo 92 ao 123, ou o complemento total das ditas sequências.
  21. 21. Método para a confirmação da pureza da semente, caracterizado pelo fato de que compreende a detecção de uma região específica para o evento elite, como definido na reivindicação 1, a dita região específica compreendendo a dita região de flanqueamento 5’ ou 3’ e o dito DNA exógeno contíguo com SEQ ID NO: 1 do nucleotídeo 120 ao 161 ou SEQ ID NO: 2 do nucleotídeo 92 ao 123, com
    a) um iniciador específico que reconhece especificamente a região de flanqueamento 5' ou 3' do dito evento elite e um iniciador específico reconhecendo uma sequência dentro do DNA exógeno; ou
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    10/15 com
    b) uma sonda específica que reconhece especificamente parte da sequência de flanqueamento 5’ ou a sequência de flanqueamento 3’ do dito evento elite e a sequência do DNA exógeno contíguo com isto, em amostras de semente, em que a dita região de flanqueamento 5’ ou 3’ e o dito DNA exógeno apresentam a sequência, como defina na reivindicação 1 ou 15.
  22. 22. Método para a triagem de sementes quanto à presença do evento elite, como definido na reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que compreende a detecção de uma região específica para o evento elite, a dita região específica compreendendo a dita região de flanqueamento 5’ ou 3’ e o dito DNA exógeno contíguo com SEQ ID NO: 1 do nucleotídeo 120 ao 161 ou SEQ ID NO: 2 do nucleotídeo 92 ao 123, com
    a) um iniciador específico que reconhece especificamente a região de flanqueamento 5' ou 3' do dito evento elite e um iniciador específico reconhecendo uma sequência dentro do DNA exógeno; ou com
    b) uma sonda específica que reconhece especificamente parte da sequência de flanqueamento 5’ ou a sequência de flanqueamento 3’ do dito evento elite e a sequência do DNA exógeno contíguo com isto, em amostras de lotes de semente, em que a dita região de flanqueamento 5’ ou 3’ e o dito DNA exógeno apresentam a sequência, como defina na reivindicação 1 ou 15.
  23. 23. Método para a determinação do estado de zigosidade de uma planta, material de planta ou semente compreendendo o evento elite, como definido na reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que compreende a amplificação de fragmentos de DNA de entre
    Petição 870180057066, de 02/07/2018, pág. 19/46
    11/15
    100 e 500 pb a partir de um ácido nucleico presente nas ditas amostras biológicas usando uma reação em cadeia da polimerase com pelo menos três iniciadores, em que um primeiro iniciador que reconhece especificamente a região de flanqueamento 5' do dito evento elite, a dita região de flanqueamento 5' apresentando a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:1 do nucleotídeo 1 ao nucleotídeo 140, ou a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:11 da posição 1 a posição 463, um segundo iniciador que reconhece especificamente a região de flanqueamento 3' do dito evento elite, a dita região de flanqueamento 3' apresentando a sequência de nucleotídeos do complemento de SEQ ID NO:2 do nucleotídeo 113 ao nucleotídeo 438, o terceiro dos ditos iniciadores reconhecendo uma sequência dentro do DNA exógeno apresentando a sequência de nucleotídeos do complemento de SEQ ID NO:1 do nucleotídeo 141 ao nucleotídeo 192 ou a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:2 do nucleotídeo 1 ao nucleotídeo 112, em que o dito primeiro e o dito segundo iniciador amplificam um fragmento de DNA entre 100 e 500 pb a partir do DNA de pré-inserção da planta, e em que o dito primeiro e o dito terceiro iniciador, ou o dito segundo e o dito terceiro iniciador, amplificam um fragmento de DNA entre 100 e 500 pb compreendendo a dita região de flanqueamento 5’ ou 3’ e o dito DNA exógeno contíguo com SEQ ID NO: 1 do nucleotídeo 120 ao 161 ou SEQ ID NO: 2 do nucleotídeo 92 ao 123.
  24. 24. Método, de acordo com a reivindicação 23, caracterizado pelo fato de que o dito primeiro iniciador compreende a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:7, o dito segundo iniciador compreende a sequência de SEQ ID NO:6 e o dito terceiro iniciador compreende a sequência de SEQ ID NO:5.
  25. 25. Método de detecção da presença do evento elite, como definido na reivindicação 1, em amostras biológicas através da
    Petição 870180057066, de 02/07/2018, pág. 20/46
    12/15 detecção da região específica compreendendo a dita região de flanqueamento 5’ ou 3’ e o dito DNA exógeno contíguo com SEQ ID NO: 1 do nucleotídeo 120 ao 161 ou SEQ ID NO: 2 do nucleotídeo 92 ao 123, através de hibridização com uma sonda de ácido nucléico marcada substancialmente complementar em que a razão de sonda: ácido nucléico alvo é amplificada através da reciclagem da sequência de ácido nucléico alvo, o referido método sendo caracterizado pelo fato de que compreende:
    a) hibridização da dita sequência de ácido nucléico alvo com um primeiro oligonucleotídeo de ácido nucléico compreendendo a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:1 do nucleotídeo 141 ao nucleotídeo 158 ou seu complemento ou o dito primeiro oligonucleotídeo de ácido nucléico compreendendo a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:2 do nucleotídeo 95 ao nucleotídeo 112 ou seu complemento;
    b) hibridização da dita sequência de ácido nucléico alvo com um segundo oligonucleotídeo de ácido nucléico compreendendo a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:1 do nucleotídeo 123 ao nucleotídeo 140 ou seu complemento ou a dita sonda de ácido nucléico marcada compreendendo a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO:2 do nucleotídeo 113 ao nucleotídeo 130 ou seu complemento, em que o dito primeiro e segundo oligonucleotídeo se sobrepõem por pelo menos um nucleotídeo e em que ou o dito primeiro ou segundo oligonucleotídeo é marcado para ser a dita sonda de ácido nucléico marcada;
    c) clivagem de apenas a sonda marcada dentro do duplex sonda:sequência de ácidos nucleicos alvo com uma enzima que causa a clivagem seletiva da sonda que resulta na dissociação do duplex, deixando a sequência alvo intacta;
    d) reciclagem da sequência de ácido nucléico alvo por
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    13/15 repetição das etapas (a) a (c); e
    e) detecção da sonda marcada clivada, desse modo determinando a presença da dita sequência de ácido nucleico alvo.
  26. 26. Método para a produção de uma semente ou planta de algodão compreendendo o evento elite, como definido na reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que compreende cruzar uma planta transgênica de algodão ou células, partes, semente ou progênie da mesma compreendendo o dito evento elite em seu genoma, a semente de referência compreendendo o dito evento depositada no ATCC sob número de depósito PTA-8398, com outra planta de algodão que não é tolerante ao glufosinato, e plantar a semente obtida a partir do dito cruzamento, e selecionar plantas compreendendo o dito evento elite através de:
    a) tratar as plantas em crescimento com glufosinato para obter 100% de plantas tolerantes ao glufosinato compreendendo o dito evento elite; ou
    b) identificar plantas compreendendo o dito evento elite usando o método, como definido na reivindicação 1 ou 15.
  27. 27. Método para a produção de uma semente ou planta de algodão compreendendo o evento elite, como definido na reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que compreende cruzar a planta transgênica, semente, células, partes ou progênie de algodão, como definidas na reivindicação 26, cujo DNA genômico, quando analisado utilizando um protocolo de identificação específico para o dito evento de elite com dois iniciadores compreendendo a sequência de nucleotídeos de SEQ ID NO: 5 e SEQ ID NO: 7, respectivamente, fornece um fragmento de DNA de cerca de 197 pb, com outra planta de algodão que não é tolerante ao glufosinato, e plantar a semente obtida a partir do dito cruzamento, e selecionar plantas compreendendo o dito evento elite através de:
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    14/15
    a) tratar as plantas em crescimento com glufosinato para obter 100% de plantas tolerantes ao glufosinato compreendendo o dito evento elite; ou
    b) identificar plantas compreendendo o dito evento elite usando o método, como definido na reivindicação 1 ou 15.
  28. 28. Método para a produção de uma semente ou planta de algodão compreendendo o evento elite, como definido na reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que compreende cruzar uma planta de algodão ou uma parte da mesma, ou semente obtida a partir da mesma, planta esta obtida a partir da semente compreendendo o dito evento elite depositada no ATCC sob número de depósito PTA-8398 ou derivados a partir da mesma, com outra planta de algodão que não é tolerante ao glufosinato, e plantar a semente obtida a partir do dito cruzamento, e selecionar plantas compreendendo o dito evento elite através de:
    a) tratar as plantas em crescimento com glufosinato para obter 100% de plantas tolerantes ao glufosinato compreendendo o dito evento elite; ou
    b) identificar plantas compreendendo o dito evento elite usando o método, como definido na reivindicação 1 ou 15.
  29. 29. Método para a produção de uma semente ou planta de algodão compreendendo o evento elite, como definido na reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que compreende cruzar uma planta de algodão ou semente, células ou tecidos da mesma compreendendo o dito evento elite em seu genoma, obtido por propagação de e/ou reprodução com uma planta de algodão crescida a partir da semente depositada no ATCC sob número de depósito PTA-8398, com outra planta de algodão que não é tolerante ao glufosinato, e plantar a semente obtida a partir do dito cruzamento, e selecionar plantas compreendendo o dito evento elite através de:
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    15/15
    a) tratar as plantas em crescimento com glufosinato para obter 100% de plantas tolerantes ao glufosinato compreendendo o dito evento elite; ou
    b) identificar plantas compreendendo o dito evento elite usando o método, como definido na reivindicação 1 ou 15.
  30. 30. Método para a produção de uma semente ou planta de algodão compreendendo o evento elite, como definido na reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que compreende cruzar uma planta transgênica, célula ou tecido de algodão compreendendo o dito evento elite, produzida a partir da semente de algodão compreendendo o dito evento elite que foi depositada na ATCC sob número de depósito PTA8398, com outra planta de algodão que não é tolerante ao glufosinato, e plantar a semente obtida a partir do dito cruzamento, e selecionar plantas compreendendo o dito evento elite através de:
    a) tratar as plantas em crescimento com glufosinato para obter 100% de plantas tolerantes ao glufosinato compreendendo o dito evento elite; ou
    b) identificar plantas compreendendo o dito evento elite usando o método, como definido na reivindicação 1 ou 15.
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    1/3
    SEQ ID No 10
    2/3
    CM σ>
    3/3
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Families Citing this family (355)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101680000B (zh) * 2007-06-11 2014-06-11 拜尔作物科学公司 包含优良事件ee-gh6的抗虫棉花植物及其鉴定方法
EA022553B1 (ru) 2010-01-22 2016-01-29 Байер Интеллектуэль Проперти Гмбх Применение комбинации биологически активных веществ, набор и средство, содержащие комбинацию биологически активных веществ, для борьбы с вредителями животного происхождения и способ улучшения использования продукционного потенциала трансгенного растения
CN103119169B (zh) 2010-06-09 2018-11-20 拜尔作物科学公司 植物基因组改造中常用的在核苷酸序列上修饰植物基因组的方法和工具
SG190295A1 (en) 2010-11-29 2013-06-28 Bayer Ip Gmbh Alpha,beta-unsaturated imines
AP3519A (en) 2010-12-01 2016-01-11 Bayer Ip Gmbh Use of fluopyram for controlling nematodes in crops and for increasing yield
EP2460407A1 (de) 2010-12-01 2012-06-06 Bayer CropScience AG Wirkstoffkombinationen umfassend Pyridylethylbenzamide und weitere Wirkstoffe
CN102331442B (zh) * 2010-12-29 2013-06-12 河南农业大学 一种快速评价转基因抗虫棉抗蚜效果的方法
US20140017684A1 (en) * 2010-12-29 2014-01-16 Dow Agrosciences Llc Methods to determine zygosity in a bulked sample
CN102175720B (zh) * 2010-12-29 2012-12-05 河南农业大学 一种快速检测转基因抗蚜棉的方法
WO2012120105A1 (en) 2011-03-10 2012-09-13 Bayer Cropscience Ag Use of lipochito-oligosaccharide compounds for safeguarding seed safety of treated seeds
CN103491785A (zh) 2011-03-23 2014-01-01 拜耳知识产权有限责任公司 活性化合物组合
JP2014512358A (ja) 2011-04-08 2014-05-22 バイエル・インテレクチユアル・プロパテイー・ゲー・エム・ベー・ハー 殺菌剤ヒドロキシモイル−テトラゾール誘導体
EA029682B1 (ru) 2011-04-22 2018-04-30 Байер Интеллекчуал Проперти Гмбх Комбинации активных соединений, содержащие производное соединение (тио)карбоксамида и фунгицидное соединение
EP2720543B1 (en) 2011-06-14 2018-08-22 Bayer CropScience AG Use of an enaminocarbonyl compound in combination with a biological control agent
US9265252B2 (en) 2011-08-10 2016-02-23 Bayer Intellectual Property Gmbh Active compound combinations comprising specific tetramic acid derivatives
AU2012299691B2 (en) * 2011-08-22 2015-01-29 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Methods and means to modify a plant genome
EP2561759A1 (en) 2011-08-26 2013-02-27 Bayer Cropscience AG Fluoroalkyl-substituted 2-amidobenzimidazoles and their effect on plant growth
JP6002225B2 (ja) 2011-09-12 2016-10-05 バイエル・インテレクチュアル・プロパティ・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツングＢａｙｅｒ Ｉｎｔｅｌｌｅｃｔｕａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｙ ＧｍｂＨ 殺菌性４−置換−３−｛フェニル［（ヘテロシクリルメトキシ）イミノ］メチル｝−１，２，４−オキサジアゾール−５（４ｈ）−オン誘導体
CN103929956B (zh) 2011-09-16 2017-02-22 拜耳知识产权有限责任公司 酰基磺酰胺用于改善植物产量的用途
MX362112B (es) 2011-09-16 2019-01-07 Bayer Ip Gmbh Uso de fenilpirazolin-3-carboxilatos para mejorar el rendimiento de las plantas.
EP2755484A1 (en) 2011-09-16 2014-07-23 Bayer Intellectual Property GmbH Use of 5-phenyl- or 5-benzyl-2 isoxazoline-3 carboxylates for improving plant yield
WO2013050410A1 (en) 2011-10-04 2013-04-11 Bayer Intellectual Property Gmbh RNAi FOR THE CONTROL OF FUNGI AND OOMYCETES BY INHIBITING SACCHAROPINE DEHYDROGENASE GENE
CN103958531B (zh) 2011-11-21 2016-12-28 拜耳知识产权有限责任公司 杀真菌剂n‑[(三取代的甲硅烷基)甲基]‑羧酰胺衍生物
CA2857438A1 (en) 2011-11-30 2013-06-06 Bayer Intellectual Property Gmbh Fungicidal n-bicycloalkyl and n-tricycloalkyl (thio)carboxamide derivatives
IN2014CN04325A (pt) 2011-12-19 2015-09-04 Bayer Cropscience Ag
US9556158B2 (en) 2011-12-29 2017-01-31 Bayer Intellectual Property Gmbh Fungicidal 3-[(pyridin-2-ylmethoxyimino)(phenyl)methyl]-2-substituted-1,2,4-oxadiazol-5(2H)-one derivatives
JP5976837B2 (ja) 2011-12-29 2016-08-24 バイエル・インテレクチュアル・プロパティ・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツングＢａｙｅｒ Ｉｎｔｅｌｌｅｃｔｕａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｙ ＧｍｂＨ 殺菌性３−［（１，３−チアゾール−４−イルメトキシイミノ）（フェニル）メチル］−２−置換−１，２，４−オキサジアゾール−５（２ｈ）−オン誘導体
BR102013001764B1 (pt) * 2012-01-23 2022-03-22 Dow Agrosciences Llc Método de detecção do evento de algodão pdab4468.19.10.3 em uma amostra que compreende dna de algodão
US9551024B2 (en) 2012-01-23 2017-01-24 Dow Agrosciences Llc Cotton event pDAB4468.18.07.1 detection method
PL2806740T3 (pl) 2012-01-25 2018-07-31 Bayer Intellectual Property Gmbh Kombinacje związków czynnych zawierające fluopyram, Bacillus i środek do zwalczania biologicznego
EP2806739A1 (en) 2012-01-25 2014-12-03 Bayer Intellectual Property GmbH Active compound combinations containing fluopyram and biological control agent
CA2865300C (en) 2012-02-27 2021-02-16 Bayer Intellectual Property Gmbh Active compound combinations containing a thiazoylisoxazoline and a fungicide
WO2013139949A1 (en) 2012-03-23 2013-09-26 Bayer Intellectual Property Gmbh Compositions comprising a strigolactame compound for enhanced plant growth and yield
EP2836489B1 (en) 2012-04-12 2016-06-29 Bayer Cropscience AG N-acyl-2-(cyclo) alkylpyrrolidines and piperidines useful as fungicides
JP2015516396A (ja) 2012-04-20 2015-06-11 バイエル・クロップサイエンス・アーゲーＢａｙｅｒ Ｃｒｏｐｓｃｉｅｎｃｅ Ａｇ Ｎ−シクロアルキル−ｎ−［（三置換シリルフェニル）メチレン］−（チオ）カルボキサミド誘導体
JP6109295B2 (ja) 2012-04-20 2017-04-05 バイエル・クロップサイエンス・アクチェンゲゼルシャフト Ｎ−シクロアルキル−ｎ−［（ヘテロシクリルフェニル）メチレン］−（チオ）カルボキサミド誘導体
EP2662362A1 (en) 2012-05-09 2013-11-13 Bayer CropScience AG Pyrazole indanyl carboxamides
EP2662370A1 (en) 2012-05-09 2013-11-13 Bayer CropScience AG 5-Halogenopyrazole benzofuranyl carboxamides
EP2662360A1 (en) 2012-05-09 2013-11-13 Bayer CropScience AG 5-Halogenopyrazole indanyl carboxamides
JP6262208B2 (ja) 2012-05-09 2018-01-17 バイエル・クロップサイエンス・アクチェンゲゼルシャフト ピラゾールインダニルカルボキサミド類
EP2662361A1 (en) 2012-05-09 2013-11-13 Bayer CropScience AG Pyrazol indanyl carboxamides
CN104364236B (zh) 2012-05-09 2018-01-16 拜尔农作物科学股份公司 5‑卤代吡唑二氢茚基甲酰胺
EP2662364A1 (en) 2012-05-09 2013-11-13 Bayer CropScience AG Pyrazole tetrahydronaphthyl carboxamides
EP2662363A1 (en) 2012-05-09 2013-11-13 Bayer CropScience AG 5-Halogenopyrazole biphenylcarboxamides
AR091104A1 (es) 2012-05-22 2015-01-14 Bayer Cropscience Ag Combinaciones de compuestos activos que comprenden un derivado lipo-quitooligosacarido y un compuesto nematicida, insecticida o fungicida
PT2854547T (pt) 2012-05-30 2018-11-16 Bayer Cropscience Ag Composição que compreende um agente de controlo biológico e trifloxistrobina
AR091201A1 (es) 2012-05-30 2015-01-21 Bayer Cropscience Ag Composicion que comprende un agente de control biologico y un fungicida
MX356530B (es) 2012-05-30 2018-06-01 Bayer Cropscience Ag Composicion que comprende un agente de control biologico y un fungicida seleccionado de inhibidores de la biosintesis de aminoacidos o proteinas, inhibidores de la produccion de atp e inhibidores de la sintesis de la pared celular.
NZ701724A (en) 2012-05-30 2016-11-25 Bayer Cropscience Ag Compositions comprising a biological control agent and an insecticide
US9386773B2 (en) 2012-05-30 2016-07-12 Bayer Cropscience Ag Compositions comprising a biological control agent and a fungicide from the group consisting of inhibitors of the respiratory chain at complex I or II
WO2013178658A1 (en) 2012-05-30 2013-12-05 Bayer Cropscience Ag Compositions comprising a biological control agent and an insecticide
PT2854548T (pt) 2012-05-30 2018-12-06 Bayer Cropscience Ag Composição compreendendo um agente de controlo biológico e um fungicida selecionado a partir de metalaxilo e metalaxil-m
EP3300603A3 (en) 2012-05-30 2018-06-27 Bayer CropScience Aktiengesellschaft Composition comprising a biological control agent and a fungicide
EP2879493B1 (en) 2012-07-31 2018-09-19 Bayer CropScience AG Pesticidal compositions comprising a terpene mixture and flupyradifurone
MY196630A (en) 2012-09-14 2023-04-23 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Hppd Variants and Methods of use
EP2719280A1 (en) 2012-10-11 2014-04-16 Bayer CropScience AG Use of N-phenylethylpyrazole carboxamide derivatives or salts thereof for resistance management of phytopathogenic fungi
UA114648C2 (uk) 2012-10-19 2017-07-10 Байєр Кропсайнс Аг Спосіб обробки рослин проти грибів, стійких до фунгіцидів, із застосуванням карбоксамідних або тіокарбоксамідних похідних
WO2014060518A1 (en) 2012-10-19 2014-04-24 Bayer Cropscience Ag Method of plant growth promotion using carboxamide derivatives
EA026839B1 (ru) 2012-10-19 2017-05-31 Байер Кропсайенс Аг Комбинации активных соединений, содержащие карбоксамидные соединения
EP2908642B1 (en) 2012-10-19 2022-02-23 Bayer Cropscience AG Method for enhancing tolerance to abiotic stress in plants by using carboxamide or thiocarboxamide derivatives
EP2735231A1 (en) 2012-11-23 2014-05-28 Bayer CropScience AG Active compound combinations
CA2892712A1 (en) 2012-11-30 2014-06-05 Bayer Cropscience Ag Ternary fungicidal and pesticidal mixtures
WO2014082950A1 (en) 2012-11-30 2014-06-05 Bayer Cropscience Ag Ternary fungicidal mixtures
WO2014083088A2 (en) 2012-11-30 2014-06-05 Bayer Cropscience Ag Binary fungicidal mixtures
CN104837351A (zh) 2012-11-30 2015-08-12 拜耳作物科学股份公司 二元杀真菌或杀虫混合物
UA117819C2 (uk) 2012-11-30 2018-10-10 Байєр Кропсайєнс Акцієнгезелльшафт Подвійні пестицидні і фунгіцидні суміші
BR112015012781A2 (pt) 2012-12-03 2018-06-26 Bayer Cropscience Ag composição compreendendo agentes de controle biológico
WO2014086764A2 (en) 2012-12-03 2014-06-12 Bayer Cropscience Ag Composition comprising a biological control agent and a fungicide
MX2015006631A (es) 2012-12-03 2015-08-05 Bayer Cropscience Ag Composicion que comprende un agente de control biologico y un insecticida.
US9867377B2 (en) 2012-12-03 2018-01-16 Bayer Cropscience Ag Composition comprising a biological control agent and an insecticide
WO2014086749A2 (en) 2012-12-03 2014-06-12 Bayer Cropscience Ag Composition comprising a biological control agent and an insecticide
WO2014086753A2 (en) 2012-12-03 2014-06-12 Bayer Cropscience Ag Composition comprising biological control agents
WO2014086747A2 (en) 2012-12-03 2014-06-12 Bayer Cropscience Ag Composition comprising a biological control agent and a fungicide
CN105163589A (zh) 2012-12-03 2015-12-16 拜耳作物科学股份公司 包括生物防治剂及杀真菌剂的组合物
AR093909A1 (es) 2012-12-12 2015-06-24 Bayer Cropscience Ag Uso de ingredientes activos para controlar nematodos en cultivos resistentes a nematodos
AR093996A1 (es) 2012-12-18 2015-07-01 Bayer Cropscience Ag Combinaciones bactericidas y fungicidas binarias
EP2935218A1 (en) 2012-12-19 2015-10-28 Bayer CropScience AG Difluoromethyl-nicotinic- tetrahydronaphtyl carboxamides
BR112015018676A2 (pt) 2013-02-11 2017-07-18 Bayer Cropscience Lp composições que compreendem gougerotina e um agente de controle biológico
CA2898725A1 (en) 2013-02-11 2014-08-14 Bayer Cropscience Lp Compositions comprising a streptomyces-based biological control agent and an insecticide
MX2015010260A (es) 2013-02-11 2016-04-04 Bayer Cropscience Lp Composicion que comprenden un agente de control biologico y un fungicida.
BR112015021651B1 (pt) 2013-03-07 2021-12-28 Bayer Cropscience Lp Molécula de ácido nucleico recombinante, cassete de expressão, célula hospedeira de bactéria, polipeptídeo recombinante, composição e métodos para aplicação dos mesmos
US9554573B2 (en) 2013-04-19 2017-01-31 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Binary insecticidal or pesticidal mixture
WO2014170345A2 (en) 2013-04-19 2014-10-23 Bayer Cropscience Ag Method for improved utilization of the production potential of transgenic plants
TW201507722A (zh) 2013-04-30 2015-03-01 Bayer Cropscience Ag 做為殺線蟲劑及殺體內寄生蟲劑的ｎ－（２－鹵素－２－苯乙基）－羧醯胺類
WO2014177514A1 (en) 2013-04-30 2014-11-06 Bayer Cropscience Ag Nematicidal n-substituted phenethylcarboxamides
US9770022B2 (en) 2013-06-26 2017-09-26 Bayer Cropscience Ag N-cycloalkyl-N-[(bicyclylphenyl)methylene]-(thio)carboxamide derivatives
RU2685723C1 (ru) 2013-12-05 2019-04-23 Байер Кропсайенс Акциенгезелльшафт Производные n-циклоалкил-n-{ [2-(1-замещенный циклоалкил)фенил]метилен} -(тио)карбоксамида
EP3077377B1 (en) 2013-12-05 2020-01-22 Bayer CropScience Aktiengesellschaft N-cycloalkyl-n-{[2-(1-substitutedcycloalkyl)phenyl]methylene}-(thio)carboxamide derivatives
EP2885970A1 (en) 2013-12-21 2015-06-24 Bayer CropScience AG Fungicide compositions comprising compound I, at least one succinate dehydrogenase (SDH) inhibitor and at least one triazole fungicide
WO2015138394A2 (en) 2014-03-11 2015-09-17 Bayer Cropscience Lp Hppd variants and methods of use
WO2015160620A1 (en) 2014-04-16 2015-10-22 Bayer Cropscience Lp Compositions comprising ningnanmycin and an insecticide
WO2015160619A1 (en) 2014-04-16 2015-10-22 Bayer Cropscience Lp Compositions comprising ningnanmycin and a fungicide
WO2015160618A1 (en) 2014-04-16 2015-10-22 Bayer Cropscience Lp Compositions comprising ningnanmycin and a biological control agent
RU2016143352A (ru) * 2014-04-28 2018-05-28 ДАУ АГРОСАЙЕНСИЗ ЭлЭлСи Трансформация гаплоидной кукурузы
EP3081085A1 (en) 2015-04-14 2016-10-19 Bayer CropScience AG Method for improving earliness in cotton
US10214510B2 (en) 2015-04-13 2019-02-26 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft N-cycloalkyl-N-(biheterocyclylethylene)-(thio)carboxamide derivatives
CN106191218B (zh) * 2015-05-04 2019-05-07 中国农业科学院生物技术研究所 耐草甘膦转基因陆地棉bg2-7的检测方法及侧翼序列
CN106191219B (zh) * 2015-05-04 2019-06-11 中国农业科学院生物技术研究所 一种耐草甘膦转基因陆地棉bg2-7的检测方法及侧翼序列
EP3097782A1 (en) 2015-05-29 2016-11-30 Bayer CropScience Aktiengesellschaft Methods for controlling phytopathogenic nematodes by combination of fluopyram and biological control agents
CN105009731B (zh) * 2015-06-30 2017-11-07 华中农业大学 玉米考种方法及其系统
JP6873979B2 (ja) 2015-09-11 2021-05-19 バイエル・クロップサイエンス・アクチェンゲゼルシャフト Ｈｐｐｄ変異体および使用方法
US9992943B2 (en) 2016-04-11 2018-06-12 Bayer Cropscience Lp Cotton variety ST 4949GLT
US10010041B2 (en) 2016-04-11 2018-07-03 Bayer Cropscience Lp Cotton variety ST 4848GLT
US10448611B2 (en) 2016-04-11 2019-10-22 Basf Agricultural Solutions Seed, Us Llc Cotton variety FM 1911GLT
US11085050B2 (en) 2016-04-20 2021-08-10 Basf Agricultural Solutions Seed, Us Llc Elite event EE-GH7 and methods and kits for identifying such event in biological samples
US20190159451A1 (en) 2016-07-29 2019-05-30 Bayer Cropscience Aktiengesellschaft Active compound combinations and methods to protect the propagation material of plants
BR112019010476A2 (pt) 2016-11-23 2019-09-10 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC molécula de ácido nucleico recombinante, vetor, célula hospedeira, planta transgênica, semente transgênica, polipeptídeo recombinante, composição, método para controlar uma população de pragas, para matar pragas, para produzir um polipeptídeo, planta ou célula vegetal, método para proteger uma planta contra uma praga, para aumentar o rendimento em uma planta, uso e produto primário
EP3555056A1 (en) 2016-12-19 2019-10-23 Basf Se Substituted oxadiazoles for combating phytopathogenic fungi
WO2018136604A1 (en) 2017-01-18 2018-07-26 Bayer Cropscience Lp Bp005 toxin gene and methods for its use
US11286498B2 (en) 2017-01-18 2022-03-29 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Use of BP005 for the control of plant pathogens
US20170150691A1 (en) 2017-02-13 2017-06-01 Bayer Cropscience Lp Cotton variety st 5020glt
US20170150692A1 (en) 2017-02-13 2017-06-01 Bayer Cropscience Lp Cotton variety fm 1953gltp
WO2018153730A1 (en) 2017-02-21 2018-08-30 Basf Se Substituted oxadiazoles for combating phytopathogenic fungi
CA3055317A1 (en) 2017-03-07 2018-09-13 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Hppd variants and methods of use
AU2018247768A1 (en) 2017-04-07 2019-10-03 Basf Se Substituted oxadiazoles for combating phytopathogenic fungi
WO2018188962A1 (en) 2017-04-11 2018-10-18 Basf Se Substituted oxadiazoles for combating phytopathogenic fungi
CA3061009A1 (en) 2017-04-21 2018-10-25 Bayer Cropscience Lp Method of improving crop safety
WO2018202487A1 (en) 2017-05-04 2018-11-08 Basf Se Substituted 5-(haloalkyl)-5-hydroxy-isoxazoles for combating phytopathogenic fungi
WO2018202491A1 (en) 2017-05-04 2018-11-08 Basf Se Substituted trifluoromethyloxadiazoles for combating phytopathogenic fungi
WO2018219797A1 (en) 2017-06-02 2018-12-06 Basf Se Substituted oxadiazoles for combating phytopathogenic fungi
WO2018234139A1 (en) 2017-06-19 2018-12-27 Basf Se 2-[[5-(trifluoromethyl)-1,2,4-oxadiazol-3-yl]aryloxy](thio)acetamides for combating phytopathogenic fungi
BR112020001585A2 (pt) 2017-07-27 2020-08-11 Basf Se usos de uma composição e método para controlar plantas prejudiciais em uma cultura de campo tolerante a glufosinato
WO2019025250A1 (en) 2017-08-04 2019-02-07 Basf Se SUBSTITUTED TRIFLUOROMETHYLOXADIAZOLES FOR COMBATING PHYTOPATHOGENIC FUNGI
WO2019038042A1 (en) 2017-08-21 2019-02-28 Basf Se SUBSTITUTED TRIFLUOROMETHYLOXADIAZOLES FOR THE CONTROL OF PHYTOPATHOGENIC FUNGI
EP3684761A1 (en) 2017-09-18 2020-07-29 Basf Se Substituted trifluoromethyloxadiazoles for combating phytopathogenic fungi
WO2019068811A1 (en) 2017-10-06 2019-04-11 Bayer Aktiengesellschaft COMPOSITIONS COMPRISING FLUOPYRAM AND TIOXAZAFENE
WO2019083810A1 (en) 2017-10-24 2019-05-02 Basf Se IMPROVING HERBICIDE TOLERANCE FOR 4-HYDROXYPHENYLPYRUVATE DIOXYGENASE (HPPD) INHIBITORS BY NEGATIVE REGULATION OF HPPD EXPRESSION IN SOYBEANS
US20210032651A1 (en) 2017-10-24 2021-02-04 Basf Se Improvement of herbicide tolerance to hppd inhibitors by down-regulation of putative 4-hydroxyphenylpyruvate reductases in soybean
WO2019101511A1 (en) 2017-11-23 2019-05-31 Basf Se Substituted trifluoromethyloxadiazoles for combating phytopathogenic fungi
WO2019121143A1 (en) 2017-12-20 2019-06-27 Basf Se Substituted cyclopropyl derivatives
WO2019137995A1 (en) 2018-01-11 2019-07-18 Basf Se Novel pyridazine compounds for controlling invertebrate pests
CN111669972A (zh) 2018-01-29 2020-09-15 巴斯夫农业公司 新农业化学制剂
WO2019154665A1 (en) 2018-02-07 2019-08-15 Basf Se New pyridine carboxamides
CA3088722A1 (en) 2018-02-07 2019-08-15 Basf Se New pyridine carboxamides
WO2019166257A1 (en) 2018-03-01 2019-09-06 BASF Agro B.V. Fungicidal compositions of mefentrifluconazole
WO2019219464A1 (en) 2018-05-15 2019-11-21 Basf Se Substituted trifluoromethyloxadiazoles for combating phytopathogenic fungi
WO2019224092A1 (en) 2018-05-22 2019-11-28 Basf Se Pesticidally active c15-derivatives of ginkgolides
JP2021525774A (ja) 2018-06-04 2021-09-27 バイエル アクチェンゲゼルシャフトＢａｙｅｒ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ 除草活性二環式ベンゾイルピラゾール
EP3613736A1 (en) 2018-08-22 2020-02-26 Basf Se Substituted glutarimide derivatives
EP3628158A1 (en) 2018-09-28 2020-04-01 Basf Se Pesticidal mixture comprising a mesoionic compound and a biopesticide
JP7443357B2 (ja) 2018-10-23 2024-03-05 ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピア 三環式の殺有害生物化合物
EP3643705A1 (en) 2018-10-24 2020-04-29 Basf Se Pesticidal compounds
EP3670501A1 (en) 2018-12-17 2020-06-24 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole compounds as fungicides
HRP20230770T8 (hr) 2019-01-11 2024-01-05 Basf Se Kristalni oblici 1-(1,2-dimetilpropil)-n-etil-5-metil-n-piridazin-4-il-pirazol-4-karboksamida
EP3696177A1 (en) 2019-02-12 2020-08-19 Basf Se Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests
CA3139524A1 (en) 2019-05-10 2020-11-19 Bayer Cropscience Lp Active compound combinations
EP3975718A1 (en) 2019-05-29 2022-04-06 Basf Se Mesoionic imidazolium compounds and derivatives for combating animal pests
EP3769623A1 (en) 2019-07-22 2021-01-27 Basf Se Mesoionic imidazolium compounds and derivatives for combating animal pests
WO2020244970A1 (en) 2019-06-06 2020-12-10 Basf Se New carbocyclic pyridine carboxamides
WO2020244969A1 (en) 2019-06-06 2020-12-10 Basf Se Pyridine derivatives and their use as fungicides
MX2021014864A (es) 2019-06-06 2022-01-18 Basf Se N-(pirid-3-il)carboxamidas fungicidas.
EP3766879A1 (en) 2019-07-19 2021-01-20 Basf Se Pesticidal pyrazole derivatives
CA3147858A1 (en) 2019-07-22 2021-01-28 Bayer Aktiengesellschaft 5-amino substituted pyrazoles and triazoles as pest control agents
US12610949B2 (en) 2019-07-23 2026-04-28 Bayer Aktiengesellschaft Heteroaryl-triazole compounds as pesticides
PH12022550166A1 (en) 2019-07-23 2022-11-14 Bayer Ag Novel heteroaryl-triazole compounds as pesticides
CA3149206A1 (en) 2019-08-01 2021-02-04 Bayer Cropscience Lp Method of improving cold stress tolerance and crop safety
EP3701796A1 (en) 2019-08-08 2020-09-02 Bayer AG Active compound combinations
US20220403410A1 (en) 2019-09-26 2022-12-22 Bayer Aktiengesellschaft Rnai-mediated pest control
WO2021063736A1 (en) 2019-10-02 2021-04-08 Basf Se Bicyclic pyridine derivatives
KR20220070282A (ko) 2019-10-02 2022-05-30 바이엘 악티엔게젤샤프트 지방산을 포함하는 활성 화합물 조합물
WO2021063735A1 (en) 2019-10-02 2021-04-08 Basf Se New bicyclic pyridine derivatives
EP4041393B1 (en) 2019-10-09 2026-04-08 Bayer Aktiengesellschaft Novel heteroaryl-triazole compounds as pesticides
PY2062533A (es) 2019-10-09 2021-10-05 Bayer Ag Nuevos compuestos de heteroarilo-triazol como pesticidas
CN114555628A (zh) 2019-10-14 2022-05-27 巴斯夫农业种子解决方案美国有限责任公司 新颖抗虫基因和使用方法
AU2020367523A1 (en) 2019-10-14 2022-04-28 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Novel insect resistant genes and methods of use
KR20220098170A (ko) 2019-11-07 2022-07-11 바이엘 악티엔게젤샤프트 동물 해충 방제를 위한 치환된 술포닐 아미드
WO2021097162A1 (en) 2019-11-13 2021-05-20 Bayer Cropscience Lp Beneficial combinations with paenibacillus
TW202134226A (zh) 2019-11-18 2021-09-16 德商拜耳廠股份有限公司 作為殺蟲劑之新穎雜芳基-三唑化合物
EP4061131A1 (en) 2019-11-18 2022-09-28 Bayer Aktiengesellschaft Active compound combinations comprising fatty acids
TW202136248A (zh) 2019-11-25 2021-10-01 德商拜耳廠股份有限公司 作為殺蟲劑之新穎雜芳基-三唑化合物
UY39058A (es) 2020-01-31 2021-08-31 Pairwise Plants Services Inc Suppresión de la respuesta de evasión a la sombra en plantas
US20230148601A1 (en) 2020-02-18 2023-05-18 Bayer Aktiengesellschaft Novel heteroaryl-triazole compounds as pesticides
EP3708565A1 (en) 2020-03-04 2020-09-16 Bayer AG Pyrimidinyloxyphenylamidines and the use thereof as fungicides
WO2021209490A1 (en) 2020-04-16 2021-10-21 Bayer Aktiengesellschaft Cyclaminephenylaminoquinolines as fungicides
US20230212600A1 (en) 2020-04-16 2023-07-06 Pairwise Plants Services, Inc. Methods for controlling meristem size for crop improvement
BR112022021264A2 (pt) 2020-04-21 2023-02-14 Bayer Ag Derivados heterocíclicos fundidos substituídos por 2-(het)aril como pesticidas
CN115443267B (zh) 2020-04-28 2025-09-05 巴斯夫欧洲公司 杀害虫化合物
EP3903581A1 (en) 2020-04-28 2021-11-03 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors i
EP3903584A1 (en) 2020-04-28 2021-11-03 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors iv
EP3903582A1 (en) 2020-04-28 2021-11-03 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors ii
EP3903583A1 (en) 2020-04-28 2021-11-03 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors iii
CN115915941B (zh) 2020-05-06 2025-07-15 拜耳公司 作为杀真菌化合物的吡啶（硫代）酰胺
TWI891782B (zh) 2020-05-06 2025-08-01 德商拜耳廠股份有限公司 作為殺蟲劑之新穎雜芳基三唑化合物
BR112022023012A2 (pt) 2020-05-12 2022-12-20 Bayer Ag (tio)amidas de triazina e pirimidina como compostos fungicidas
EP3909950A1 (en) 2020-05-13 2021-11-17 Basf Se Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests
BR112022023550A2 (pt) 2020-05-19 2023-01-03 Bayer Cropscience Ag (tio)amidas azabicíclicas como compostos fungicidas
BR112022024489A2 (pt) 2020-06-02 2023-01-31 Pairwise Plants Services Inc Métodos para o controle do tamanho do meristema para melhora da cultura agrícola
CN115803320B (zh) 2020-06-04 2025-07-15 拜耳公司 作为新的杀真菌剂的杂环基嘧啶类和杂环基三嗪类
MX2022015625A (es) 2020-06-10 2023-01-11 Bayer Ag Heterociclos sustituidos con azabiciclilo como nuevos fungicidas.
EP3945089A1 (en) 2020-07-31 2022-02-02 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors v
WO2021249800A1 (en) 2020-06-10 2021-12-16 Basf Se Substituted [1,2,4]triazole compounds as fungicides
AR122661A1 (es) 2020-06-17 2022-09-28 Pairwise Plants Services Inc Métodos para el control del tamaño del meristemo para la mejora de cultivos
CN116157017A (zh) 2020-06-18 2023-05-23 拜耳公司 作为杀菌剂用于作物保护的3-(哒嗪-4-基)-5,6-二氢-4h-1,2,4-噁二嗪衍生物
CA3187291A1 (en) 2020-06-18 2021-12-23 Bayer Aktiengesellschaft Composition for use in agriculture
WO2021255089A1 (en) 2020-06-19 2021-12-23 Bayer Aktiengesellschaft 1,3,4-oxadiazole pyrimidines and 1,3,4-oxadiazole pyridines as fungicides
UY39275A (es) 2020-06-19 2022-01-31 Bayer Ag 1,3,4-oxadiazol pirimidinas como fungicidas, procesos e intermediarios para su preparación, métodos de uso y usos de los mismos
BR112022025692A2 (pt) 2020-06-19 2023-02-28 Bayer Ag 1,3,4-oxadiazóis e seus derivados como fungicidas
UY39276A (es) 2020-06-19 2022-01-31 Bayer Ag Uso de compuestos de 1,3,4–oxadiazol–2–ilpirimidina para controlar microorganismos fitopatógenos, métodos de uso y composiciones.
EP3929189A1 (en) 2020-06-25 2021-12-29 Bayer Animal Health GmbH Novel heteroaryl-substituted pyrazine derivatives as pesticides
US20230247994A1 (en) 2020-07-02 2023-08-10 Bayer Aktiengesellschaft Heterocyclene derivatives as pest control agents
EP3960727A1 (en) 2020-08-28 2022-03-02 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors vi
EP3939961A1 (en) 2020-07-16 2022-01-19 Basf Se Strobilurin type compounds and their use for combating phytopathogenic fungi
WO2022017836A1 (en) 2020-07-20 2022-01-27 BASF Agro B.V. Fungicidal compositions comprising (r)-2-[4-(4-chlorophenoxy)-2-(trifluoromethyl)phenyl]-1- (1,2,4-triazol-1-yl)propan-2-ol
EP3970494A1 (en) 2020-09-21 2022-03-23 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors viii
WO2022033991A1 (de) 2020-08-13 2022-02-17 Bayer Aktiengesellschaft 5-amino substituierte triazole als schädlingsbekämpfungsmittel
WO2022053453A1 (de) 2020-09-09 2022-03-17 Bayer Aktiengesellschaft Azolcarboxamide als schädlingsbekämpfungsmittel
WO2022058327A1 (en) 2020-09-15 2022-03-24 Bayer Aktiengesellschaft Substituted ureas and derivatives as new antifungal agents
EP3974414A1 (de) 2020-09-25 2022-03-30 Bayer AG 5-amino substituierte pyrazole und triazole als schädlingsbekämpfungsmittel
WO2022089969A1 (en) 2020-10-27 2022-05-05 BASF Agro B.V. Compositions comprising mefentrifluconazole
WO2022090071A1 (en) 2020-11-02 2022-05-05 Basf Se Use of mefenpyr-diethyl for controlling phytopathogenic fungi
WO2022090069A1 (en) 2020-11-02 2022-05-05 Basf Se Compositions comprising mefenpyr-diethyl
WO2022106304A1 (en) 2020-11-23 2022-05-27 BASF Agro B.V. Compositions comprising mefentrifluconazole
US20240043431A1 (en) 2020-12-14 2024-02-08 Basf Se Sulfoximine Pesticides
EP3915971A1 (en) 2020-12-16 2021-12-01 Bayer Aktiengesellschaft Phenyl-s(o)n-phenylamidines and the use thereof as fungicides
WO2022129188A1 (en) 2020-12-18 2022-06-23 Bayer Aktiengesellschaft 1,2,4-oxadiazol-3-yl pyrimidines as fungicides
WO2022129190A1 (en) 2020-12-18 2022-06-23 Bayer Aktiengesellschaft (hetero)aryl substituted 1,2,4-oxadiazoles as fungicides
WO2022129196A1 (en) 2020-12-18 2022-06-23 Bayer Aktiengesellschaft Heterobicycle substituted 1,2,4-oxadiazoles as fungicides
EP4262394A1 (en) 2020-12-18 2023-10-25 Bayer Aktiengesellschaft Use of dhodh inhibitor for controlling resistant phytopathogenic fungi in crops
EP4036083A1 (de) 2021-02-02 2022-08-03 Bayer Aktiengesellschaft 5-oxy substituierte hetereozyklen, als schädlingsbekämpfungsmittel
EP4291641A1 (en) 2021-02-11 2023-12-20 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for modifying cytokinin oxidase levels in plants
EP4043444A1 (en) 2021-02-11 2022-08-17 Basf Se Substituted isoxazoline derivatives
CN117203227A (zh) 2021-02-25 2023-12-08 成对植物服务股份有限公司 用于修饰植物中根结构的方法和组合物
BR112023019400A2 (pt) 2021-03-30 2023-12-05 Bayer Ag 3-(hetero)aril-5-clorodifluorometil-1,2,4-oxadiazol como fungicida
BR112023019788A2 (pt) 2021-03-30 2023-11-07 Bayer Ag 3-(hetero)aril-5-clorodifluorometil-1,2,4-oxadiazol como fungicida
AU2022270888A1 (en) 2021-05-03 2023-11-09 Basf Se Additives for enhancing the pesticidal effectiveness of pesticidal microorganisms
US20240254121A1 (en) 2021-05-06 2024-08-01 Bayer Aktiengesellschaft Alkylamide substituted, annulated imidazoles and use thereof as insecticides
EP4337661A1 (de) 2021-05-12 2024-03-20 Bayer Aktiengesellschaft 2-(het)aryl-substituierte kondensierte heterocyclen-derivate als schädlingsbekämpfungsmittel
EP4091451A1 (en) 2021-05-17 2022-11-23 BASF Agro B.V. Compositions comprising mefentrifluconazole
KR20240008857A (ko) 2021-05-18 2024-01-19 바스프 에스이 살진균제로서의 신규한 치환된 피리딘
EP4341257A1 (en) 2021-05-18 2024-03-27 Basf Se New substituted quinolines as fungicides
JP2024519815A (ja) 2021-05-18 2024-05-21 ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピア 殺菌剤としての新規な置換ピリジン
AR126172A1 (es) 2021-06-17 2023-09-27 Pairwise Plants Services Inc Modificación de factores de transcripción de la familia de factores reguladores del crecimiento en soja
UY39827A (es) 2021-06-24 2023-01-31 Pairwise Plants Services Inc Modificación de genes de ubiquitina ligasa e3 hect para mejorar los rasgos de rendimiento
CN117794358A (zh) 2021-07-01 2024-03-29 成对植物服务股份有限公司 用于增强根系发育的方法和组合物
EP4119547A1 (en) 2021-07-12 2023-01-18 Basf Se Triazole compounds for the control of invertebrate pests
AU2022321882A1 (en) 2021-08-02 2024-02-15 Basf Se (3-pirydyl)-quinazoline
WO2023019188A1 (en) 2021-08-12 2023-02-16 Pairwise Plants Services, Inc. Modification of brassinosteroid receptor genes to improve yield traits
AU2022326207A1 (en) 2021-08-13 2024-02-15 Bayer Aktiengesellschaft Active compound combinations and fungicide compositions comprising those
PY2270221A (es) 2021-08-17 2023-03-20 Pairwise Plants Services Inc Métodos y composiciones para modificar genes de histidina quinasa receptores de citoquinina en plantas
EP4140986A1 (en) 2021-08-23 2023-03-01 Basf Se Pyrazine compounds for the control of invertebrate pests
WO2023025682A1 (en) 2021-08-25 2023-03-02 Bayer Aktiengesellschaft Novel pyrazinyl-triazole compounds as pesticides
EP4140995A1 (en) 2021-08-27 2023-03-01 Basf Se Pyrazine compounds for the control of invertebrate pests
MX2024002276A (es) 2021-08-30 2024-03-07 Pairwise Plants Services Inc Modificacion de genes de peptidasa de union a ubiquitinaen plantas para mejorar rasgos de rendimiento.
EP4144739A1 (de) 2021-09-02 2023-03-08 Bayer Aktiengesellschaft Anellierte pyrazole als schädlingsbekämpfungsmittel
AR126938A1 (es) 2021-09-02 2023-11-29 Pairwise Plants Services Inc Métodos y composiciones para mejorar la arquitectura de las plantas y los rasgos de rendimiento
EP4151631A1 (en) 2021-09-20 2023-03-22 Basf Se Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests
US12540332B2 (en) 2021-09-21 2026-02-03 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for reducing pod shatter in canola
AR127236A1 (es) 2021-10-04 2024-01-03 Pairwise Plants Services Inc Métodos para mejorar la fertilidad de la flor y el rendimiento de semillas
EP4413022A2 (en) 2021-10-07 2024-08-14 Pairwise Plants Services, Inc. Methods for improving floret fertility and seed yield
WO2023072671A1 (en) 2021-10-28 2023-05-04 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors ix
WO2023072670A1 (en) 2021-10-28 2023-05-04 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors x
CN118541353A (zh) 2021-11-03 2024-08-23 拜耳公司 作为杀真菌化合物的双(杂)芳基硫醚(硫代)酰胺
EP4441049A1 (en) 2021-11-30 2024-10-09 Bayer Aktiengesellschaft Bis(hetero)aryl thioether oxadiazines as fungicidal compounds
EP4194453A1 (en) 2021-12-08 2023-06-14 Basf Se Pyrazine compounds for the control of invertebrate pests
AR127904A1 (es) 2021-12-09 2024-03-06 Pairwise Plants Services Inc Métodos para mejorar la fertilidad de floretes y el rendimiento de semillas
EP4198033A1 (en) 2021-12-14 2023-06-21 Basf Se Heterocyclic compounds for the control of invertebrate pests
EP4198023A1 (en) 2021-12-16 2023-06-21 Basf Se Pesticidally active thiosemicarbazone compounds
AR128372A1 (es) 2022-01-31 2024-04-24 Pairwise Plants Services Inc Supresión de la respuesta de evitación de la sombra en las plantas
WO2023148028A1 (en) 2022-02-01 2023-08-10 Globachem Nv Methods and compositions for controlling pests
WO2023148031A1 (en) 2022-02-01 2023-08-10 Globachem Nv Methods and compositions for controlling pests in cotton
US20250197358A1 (en) 2022-02-17 2025-06-19 Basf Se Pesticidally active thiosemicarbazone compounds
PY2314419A (es) 2022-03-02 2023-09-25 Pairwise Plants Services Inc Modificación de genes del receptor de brasinoesteroides para mejorar rasgos de rendimiento
EP4238971A1 (en) 2022-03-02 2023-09-06 Basf Se Substituted isoxazoline derivatives
US20260043040A1 (en) 2022-03-31 2026-02-12 Pairwise Plants Services, Inc. Early flowering rosaceae plants with improved characteristics
AU2023251095A1 (en) 2022-04-07 2024-10-17 Monsanto Technology Llc Methods and compositions for improving resistance to fusarium head blight
CN119278208A (zh) 2022-04-21 2025-01-07 成对植物服务股份有限公司 用于改善产量性状的方法和组合物
PY2331827A (es) 2022-05-02 2023-11-08 Pairwise Plants Services Inc Métodos y composiciones para mejorar el rendimiento y la resistencia a enfermedades
CA3256572A1 (en) 2022-05-03 2023-11-09 Bayer Aktiengesellschaft USE OF (5S)-3-[3-(3-CHLORO-2-FLUOROPHENOXY)-6-METHYLPYRIDAZIN-4-YL]-5-(2-CHLORO-4-METHYLBENZYL)-5,6-DIHYDRO-4H-1,2,4-OXADIAZINE TO COMBAT UNDESIRABLE MICROORGANISMS
JP2025516326A (ja) 2022-05-03 2025-05-27 バイエル、アクチエンゲゼルシャフト （５ｓ）－３－［３－（３－クロロ－２－フルオロフェノキシ）－６－メチルピリダジン－４－イル］－５－（２－クロロ－４－メチルベンジル）－５，６－ジヒドロ－４ｈ－１，２，４－オキサジアジンの結晶形態
UY40255A (es) 2022-05-05 2023-11-15 Pairwise Plants Services Inc Métodos y composiciones para modificar la arquitectur radicular y/o mejorar los rangos de rendimient
UY40326A (es) 2022-06-27 2023-12-29 Pairwise Plants Services Inc Métodos y composiciones para modificar el escape a la sombra en plantas
CA3259677A1 (en) 2022-06-29 2024-01-04 Pairwise Plants Services, Inc. METHODS AND COMPOSITIONS FOR REGULATING MERISTEMUM SIZE TO IMPROVE CROP PRODUCTION
EP4547693A1 (en) 2022-06-29 2025-05-07 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for controlling meristem size for crop improvement
CA3263381A1 (en) 2022-08-02 2024-02-08 Basf Se PYRAZOLO PESTICIDE COMPOUNDS
WO2024030984A1 (en) 2022-08-04 2024-02-08 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for improving yield traits
AR130164A1 (es) 2022-08-11 2024-11-13 Pairwise Plants Services Inc Métodos y composiciones para controlar el tamaño del meristema para la mejora de los cultivos
US20240090466A1 (en) 2022-09-08 2024-03-21 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for improving yield characteristics in plants
EP4342885A1 (en) 2022-09-20 2024-03-27 Basf Se N-(3-(aminomethyl)-phenyl)-5-(4-phenyl)-5-(trifluoromethyl)-4,5-dihydroisoxazol-3-amine derivatives and similar compounds as pesticides
WO2024068520A1 (en) 2022-09-28 2024-04-04 Bayer Aktiengesellschaft 3-(hetero)aryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide
WO2024068518A1 (en) 2022-09-28 2024-04-04 Bayer Aktiengesellschaft 3-heteroaryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide
WO2024068517A1 (en) 2022-09-28 2024-04-04 Bayer Aktiengesellschaft 3-(hetero)aryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide
WO2024068519A1 (en) 2022-09-28 2024-04-04 Bayer Aktiengesellschaft 3-(hetero)aryl-5-chlorodifluoromethyl-1,2,4-oxadiazole as fungicide
EP4295688A1 (en) 2022-09-28 2023-12-27 Bayer Aktiengesellschaft Active compound combination
EP4361126A1 (en) 2022-10-24 2024-05-01 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors xv
EP4619393A1 (en) 2022-11-16 2025-09-24 Basf Se Substituted benzodiazepines as fungicides
WO2024104815A1 (en) 2022-11-16 2024-05-23 Basf Se Substituted benzodiazepines as fungicides
CN120202194A (zh) 2022-11-16 2025-06-24 巴斯夫欧洲公司 作为杀真菌剂的取代的四氢苯并二氮杂䓬
EP4619399A1 (en) 2022-11-16 2025-09-24 Basf Se New substituted tetrahydrobenzoxazepine
EP4385326A1 (en) 2022-12-15 2024-06-19 Kimitec Biogorup Biopesticide composition and method for controlling and treating broad spectrum of pests and diseases in plants
EP4638759A2 (en) 2022-12-19 2025-10-29 BASF Agricultural Solutions US LLC Insect toxin genes and methods for their use
EP4389210A1 (en) 2022-12-21 2024-06-26 Basf Se Heteroaryl compounds for the control of invertebrate pests
WO2024165343A1 (en) 2023-02-08 2024-08-15 Basf Se New substituted quinoline compounds for combatitng phytopathogenic fungi
WO2024173622A1 (en) 2023-02-16 2024-08-22 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for modifying shade avoidance in plants
UY40661A (es) 2023-03-02 2024-10-15 Pairwise Plants Services Inc Métodos y composiciones para modificar la evitación de la sombra en plantas
UY40664A (es) 2023-03-09 2024-10-15 Pairwise Plants Services Inc Modificación de genes de la vía de señalización de brasinoesteroide para mejorar rasgos de rendimien
CN120957986A (zh) 2023-03-17 2025-11-14 巴斯夫欧洲公司 用于对抗植物病原性真菌的取代的吡啶基/吡嗪基二氢苯并硫氮杂䓬化合物
EP4455137A1 (en) 2023-04-24 2024-10-30 Basf Se Pyrimidine compounds for the control of invertebrate pests
EP4702006A1 (en) 2023-04-26 2026-03-04 Basf Se Use of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors xvi
PY2439028A (es) 2023-05-18 2025-06-18 Monsanto Technology Llc Métodos y composiciones para mejorar las características de rendimiento de las plantas
EP4467535A1 (en) 2023-05-25 2024-11-27 Basf Se Lactam pesticidal compounds
WO2025008227A1 (en) 2023-07-05 2025-01-09 Basf Se Substituted pyridyl/pyrazinyl dihydropyrrolotriazine compounds for combatting phytopath-ogenic fungi
WO2025008447A1 (en) 2023-07-05 2025-01-09 Bayer Aktiengesellschaft Composition for use in agriculture
WO2025008446A1 (en) 2023-07-05 2025-01-09 Bayer Aktiengesellschaft Composition for use in agriculture
CN121464139A (zh) 2023-07-05 2026-02-03 巴斯夫欧洲公司 用于对抗植物病原性真菌的取代的喹啉基/喹喔啉基二氢吡咯并三嗪化合物
EP4488273A1 (en) 2023-07-06 2025-01-08 Basf Se Triazole compounds for the control of invertebrate pests
EP4488270A1 (en) 2023-07-06 2025-01-08 Basf Se Triazole compounds for the control of invertebrate pests
EP4488269A1 (en) 2023-07-06 2025-01-08 Basf Se Triazole compounds for the control of invertebrate pests
AR133164A1 (es) 2023-07-18 2025-09-03 Pairwise Plants Services Inc Métodos y composiciones para modificar la arquitectura radicular en plantas
AR133310A1 (es) 2023-07-27 2025-09-17 Pairwise Plants Services Inc Métodos y composiciones para modificar rasgos de rendimiento de las plantas
WO2025026738A1 (en) 2023-07-31 2025-02-06 Bayer Aktiengesellschaft 6-[5-(ethylsulfonyl)-1-methyl-1h-imidazol-4-yl]-7-methyl-3-(pentafluoroethyl)-7h-imidazo[4,5-c]pyridazine derivatives as pesticides
EP4501112A1 (en) 2023-08-01 2025-02-05 Globachem NV Plant defense elicitors
KR20260042262A (ko) 2023-08-01 2026-03-30 글로바켐 엔브이 살충 혼합물
CN121693501A (zh) 2023-08-09 2026-03-17 拜耳公司 作为新的杀菌剂的哒嗪-4-基噁二嗪
WO2025031668A1 (en) 2023-08-09 2025-02-13 Bayer Aktiengesellschaft Azaheterobiaryl-substituted 4,5-dihydro-1h-2,4,5-oxadiazines as novel fungicides
CN121646590A (zh) 2023-08-09 2026-03-10 巴斯夫欧洲公司 用于对抗植物病原性真菌的新型取代的苯并氧氮杂䓬吡啶甲腈化合物
WO2025031843A1 (en) 2023-08-09 2025-02-13 Basf Se New substituted benzoxazine picolinonitrile compounds for combatting phytopathogenic fungi
WO2025064734A1 (en) 2023-09-21 2025-03-27 Pairwise Plants Services, Inc. Early flowering black raspberry plants with improved characteristics
WO2025068226A2 (en) 2023-09-29 2025-04-03 Basf Se Methods for protecting plants using mixtures comprising sulfur and selected terpenes
AU2024358155A1 (en) 2023-10-09 2026-04-16 Basf Se Fungicidal mixture comprising substituted quinazolyl quinolines
WO2025078181A1 (en) 2023-10-09 2025-04-17 Basf Se Fungicidal mixture comprising substituted pyridines
CN122003403A (zh) 2023-10-11 2026-05-08 拜耳公司 作为新杀菌剂的哒嗪-3-酮-4-基噁二嗪
WO2025080600A1 (en) 2023-10-11 2025-04-17 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for improving crop yield traits
WO2025098876A1 (en) 2023-11-10 2025-05-15 Bayer Aktiengesellschaft Active compound combinations having insecticidal/acaricidal properties
WO2025098875A1 (en) 2023-11-10 2025-05-15 Bayer Aktiengesellschaft Active compound combinations having insecticidal/acaricidal properties
WO2025098874A1 (en) 2023-11-10 2025-05-15 Bayer Aktiengesellschaft Active compound combinations having fungicidal/insecticidal/acaricidal properties
WO2025131902A1 (en) 2023-12-21 2025-06-26 Basf Se Methods for protecting plants using mixtures comprising sulfur, selected terpenes and phosphites.
EP4574819A1 (en) 2023-12-22 2025-06-25 Basf Se Diazinone compounds for the control of invertebrate pests
WO2025168620A1 (en) 2024-02-07 2025-08-14 Bayer Aktiengesellschaft Heteroaryl-substituted 4,5-dihydro-1h-2,4,5-oxadiazines as novel fungicides
WO2025178902A1 (en) 2024-02-22 2025-08-28 Pairwise Plants Services, Inc. Methods and compositions for improving yield characteristics in plants
WO2025180964A1 (en) 2024-03-01 2025-09-04 Basf Se New substituted benzoxazepine compounds for combatting phytopathogenic fungi
WO2025186065A1 (en) 2024-03-05 2025-09-12 Bayer Aktiengesellschaft Heteroaryl-substituted (aza)quinoxaline derivatives as pesticides
WO2025190927A1 (en) 2024-03-14 2025-09-18 Bayer Aktiengesellschaft Active compound combinations having insecticidal/acaricidal properties
WO2025211272A1 (en) 2024-04-04 2025-10-09 Nihon Nohyaku Co., Ltd. Pesticidal mixtures comprising an ethylsulfone compound
EP4640052A1 (en) 2024-04-24 2025-10-29 Basf Se Mixtures of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors with at least one further pesticide i
WO2025223904A1 (en) 2024-04-24 2025-10-30 Basf Se Mixtures of strobilurin type compounds for combating phytopathogenic fungi containing an amino acid substitution f129l in the mitochondrial cytochrome b protein conferring resistance to qo inhibitors with at least one further pesticide i
EP4652843A1 (en) 2024-05-21 2025-11-26 Kimitec Biogroup S.L Biopesticide composition, procedure of obtain thereof, and method for controlling and treating broad spectrum of pests in plants
EP4652842A1 (en) 2024-05-21 2025-11-26 Kimitec Biogroup S.L Biopesticide composition, procedure of obtain thereof, and method for controlling and treating broad spectrum of pests, diseases and weeds in plants
WO2025257122A1 (en) 2024-06-12 2025-12-18 Bayer Aktiengesellschaft Active compound combinations having insecticidal/acaricidal properties
WO2025257121A1 (en) 2024-06-12 2025-12-18 Bayer Aktiengesellschaft Active compound combinations having insecticidal/acaricidal properties
WO2026002763A1 (en) 2024-06-26 2026-01-02 Basf Se Pesticidal mixtures and applications of beauveria bassiana and dimpropyridaz
WO2026010930A1 (en) 2024-07-05 2026-01-08 BASF Agricultural Solutions Seed US LLC Use of axmi277 for the control of rotylenchulus reniformis nematode pests
WO2026012814A1 (en) 2024-07-10 2026-01-15 Basf Se Compositions and methods to enhance crop yield and plant health
WO2026021911A1 (en) 2024-07-23 2026-01-29 Basf Se New substituted benzothiazine pyridine compounds for combatting phytopathogenic fungi
WO2026021912A1 (en) 2024-07-23 2026-01-29 Basf Se New substituted benzothiazine pyridine compounds for combatting phytopathogenic fungi
WO2026021909A1 (en) 2024-07-23 2026-01-29 Basf Se New substituted benzothiazine pyridine compounds for combatting phytopathogenic fungi
WO2026021910A1 (en) 2024-07-23 2026-01-29 Basf Se New substituted benzothiazine pyridine compounds for combatting phytopathogenic fungi
WO2026027375A1 (de) 2024-07-29 2026-02-05 Bayer Aktiengesellschaft Hydroxy-dihydropyridinon carboxamide als schädlingsbekämpfungsmittel
WO2026037853A1 (en) 2024-08-14 2026-02-19 Basf Se Benzoxazole derivatives as pesticidal compounds
WO2026041702A1 (en) 2024-08-21 2026-02-26 Basf Se Benzoxazole derivatives as pesticidal compounds
EP4710766A1 (en) 2024-09-11 2026-03-18 Basf Se Mixtures of ambruticin with at least one further pesticide
WO2026057375A1 (en) 2024-09-11 2026-03-19 Basf Se Mixtures of ambruticin with at least one further pesticide
EP4721566A1 (en) 2024-10-07 2026-04-08 Kimitec Biogroup S.L Microbial composition based on bacillus infantis strain for agricultural use
WO2026082481A1 (en) 2024-10-17 2026-04-23 Bayer Aktiengesellschaft Active compound combinations having insecticidal/acaricidal properties
WO2026082514A1 (en) 2024-10-18 2026-04-23 Basf Se Pesticidal mixtures and applications of dimpropyridaz
WO2026093251A1 (en) 2024-10-28 2026-05-07 Basf Se Pesticidal compounds and uses thereof

Family Cites Families (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FI933131A0 (fi) 1993-07-08 1993-07-08 Sunds Defibrator Woodhandling Skaersystem, skaer, styrdel och fyllningsdel foer maskin anvaend i flishuggning samt foerfarande foer bytning av skaer
US5985557A (en) 1996-01-24 1999-11-16 Third Wave Technologies, Inc. Invasive cleavage of nucleic acids
US6008438A (en) * 1998-03-17 1999-12-28 Agripio Seeds, Inc. Cotton cultivar DP 2379
US6395485B1 (en) * 2000-01-11 2002-05-28 Aventis Cropscience N.V. Methods and kits for identifying elite event GAT-ZM1 in biological samples
PT1988099E (pt) * 2001-01-09 2013-01-31 Bayer Cropscience Nv Proteínas inseticidas de bacillus thuringiensis
MXPA03006130A (es) * 2001-01-09 2005-02-14 Bayer Bioscience Nv Proteinas insecticidas novedosas de bacillus thuringiensis.
US6818807B2 (en) * 2001-08-06 2004-11-16 Bayer Bioscience N.V. Herbicide tolerant cotton plants having event EE-GH1
US20030208789A1 (en) * 2002-05-03 2003-11-06 Stefan Jansens Wound-inducible expression in plants
KR101152465B1 (ko) * 2003-05-02 2012-07-04 다우 아그로사이언시즈 엘엘씨 옥수수 이벤트 ｔｃ1507 및 그의 검출 방법
CN101184847B (zh) 2005-06-02 2015-02-25 先正达参股股份有限公司 表达cry1ab的杀昆虫转基因棉ce43-67b
WO2006128568A2 (en) * 2005-06-02 2006-12-07 Syngenta Participations Ag T342-142, insecticidal transgenic cotton expressing cry1ab
AU2006254491A1 (en) * 2005-06-02 2006-12-07 Syngenta Participations Ag CE44-69D , insecticidal transgenic cotton expressing CRY1AB
WO2006128569A2 (en) * 2005-06-02 2006-12-07 Syngenta Participations Ag 1143-14a, insecticidal transgenic cotton expressing cry1ab
BRPI0614338B1 (pt) * 2005-08-08 2018-01-02 Bayer Cropscience Nv Processos para a identificação de um evento elite em amostras biológicas, para a confirmação da pureza das sementes, para a seleção de sementes em relação à presença do dito evento elite, para a determinação do status de zigosidade de uma planta, material de planta ou semente que compreende o dito evento elite, para detecção da presença do dito evento elite, e para a produção de uma planta ou de uma semente de algodão que compreende o dito evento elite, bem como kits para a identificação do dito evento elite, par de iniciadores adequado para uso na detecção específica do mesmo, e sonda específica para a identificação do dito evento elite
CN101680000B (zh) * 2007-06-11 2014-06-11 拜尔作物科学公司 包含优良事件ee-gh6的抗虫棉花植物及其鉴定方法

Also Published As

Publication number Publication date
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