BRPI0814252B1

BRPI0814252B1 - composição farmacêutica aquosa estável compreendendo natalizumabe, dose unitária, e seringa pré-cheia

Info

Publication number: BRPI0814252B1
Authority: BR
Inventors: Maloney Kevin
Original assignee: Biogen Idec Inc; Biogen Ma Inc
Priority date: 2007-06-14
Filing date: 2008-06-13
Publication date: 2019-12-10
Also published as: EP2170390A2; CA2690382A1; AR067011A1; IL202648B; WO2008157356A2; PL2170390T3; US20130017193A1; MX2020005214A; CN103977404A; PT2170390T; MX2009013593A; US9533044B2; EP2170390B1; NZ595526A; US20120134989A1; EA020456B1; BRPI0814252A8; NZ582436A; BRPI0814252A2; AU2008266051A2

Abstract

composição farmacêutica aquosa compreendendo natalizumab a presente invenção refere-se às formulações do anticorpo de ligação vla-4.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para “COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA AQUOSA ESTÁVEL COMPREENDENDO NATA-LIZUMABE, DOSE UNITÁRIA, E SERINGA PRÉ-CHEIA”.

A REFERÊNCIA CRUZADA A PEDIDO RELACIONADO

Este pedido reivindica prioridade ao Pedido U.S. n° de série 60/944.0076, depositado em 14 de junho de 2007, os conteúdos totais do qual estão, por meio disto, incorporado por referência.

ANTECEDENTES A presente invenção refere-se à esclerose múltipla (EM) é uma das doenças mais comuns do sistema nervoso central. Atualmente, mais de 2,5 milhões de pessoas ao redor do mundo têm (EM).

SUMÁRIO A invenção é baseada, em parte, no desenvolvimento de formulações contendo altas concentrações de anticorpo de ligação VLA-4. Algumas modalidades são adequadas para liberar a um indivíduo, como um ser humano, por exemplo, um paciente humano, por liberação subcutânea (SC) ou intramuscular (IM). As formulações são também adequadas para administração intravenosa (IV), por exemplo, quando diluída em uma matriz de infusão aceitável (como solução salina normal). O anticorpo de ligação VLA-4 pode ser natalizumab, por exemplo, e a faixa de concentração do anticorpo entre cerca de 120 mg/mL a 190 mg/mL. As formulações promovem um efeito terapêutico para um distúrbio inflamatório imune ou autoimune. Por exemplo, a formulação pode fornecer um efeito terapêutico para um distúrbio inflamatório do sistema nervoso central (SNC), de como, a esclerose múltipla (MS).

Em um aspecto, a invenção exibe uma composição farmacêutica aquosa, com, por exemplo, uma composição farmacêutica aquosa estável, contendo um anticorpo de ligação VLA-4 EM UMA concentração de aproximadamente 120 a aproximadamente190 mg/mL (por exemplo, a uma concentração de aproximadamente 135 mg/mL, aproximadamente 140 mg/mL, aproximadamente 150 mg/mL, aproximadamente 160 mg/mL, ou aproximadamente 165 mg/mL), e um tampão de fosfato tendo aproximadamente pH 5.5 a aproximadamente pH 6.5. Em algumas modalidades, a con- centração doanticorpo de ligação VLA-4 é de aproximadamente 130 mg/mL a aproximadamente 180 mg/mL ou aproximadamente 140 mg/mL a aproximadamente 160 mg/ml_. Em uma modalidade, uma concentração de anticorpo de ligação VLA-4 é maior que aproximadamente 150 mg/mL, por e-xemplo, este está em uma faixa maior que aproximadamente 150 mg/mL a aproximadamente 190 mg/mL. Em uma modalidade, a concentração de anticorpo de ligação VLA-4 é aproximadamente 150 mg/mL.

Em uma modalidade, o anticorpo de ligação VLA-4 é um anticorpo monoclonal humanizado, como, por exemplo, o natalizumab. Em outra modalidade, o anticorpo de ligação VLA-4 uma variação de natalizumab. Por exemplo, algumas modalidades, a região variável da cadeia curta do anticorpo tem uma sequência de aminoácido que se difere por um ou mais aminoácidos, mas não mais que 2, 3, 4, 5, ou 6 resíduos de aminoácido de uma região variável da cadeia curta de natalizumab, e/ou a região variável da cadeia longa tem uma sequência de aminoácido que se difere por um ou mais resíduos de aminoácidos, mas não mais que 2, 3, 4, 5, ou 6 resíduos de a-minoácidos da região variável de uma cadeia longa de natalizumab. Em algumas modalidades, algumas ou todas as diferenças são mudanças conser-vativas.

Em outra modalidade, o anticorpo de ligação VLA-4 tem um ou ambas as regiões variáveis de cadeia curta tendo a sequência de aminoáci-dos de SEQ ID NO:7 em U.S. Patent No. 5.840.299, que está incluído por referência neste, e uma região variável de cadeia longa tendo a sequência de aminoácidos de SEQ ID NO:11 em U.S. Patent No. 5.840.299. Em outras modalidades, o anticorpo VLA-4 é uma variação de um ou mais anticorpos. Por exemplo, em algumas modalidades, a regição variável da cadeia curta do anticorpo tem uma sequência de aminoácidos que se difere por um ou mais resíduos de aminoácidos, mas não mais que 2, 3, 4, 5, ou 6 resíduos de aminoácidos da região variável da cadeia curta de natalizumab, e/ou a região variável da cadeia longa tem uma sequência de aminoácidos que se difere por um ou mais resíduos de aminoácidos, mas não mais que 2, 3, 4, 5, ou 6 resíduos de aminoácidos da região variável da cadeia longa de natali- zumab. Patent No. 5.840.299, e/ou a região variável da cadeia longa tem uma sequência de aminoácido que se difere por um ou mais resíduos de aminoácidos, mas não mais que 2, 3, 4, 5, ou 6 resíduos de aminoácidos definida por SEQ ID NO: 11 em U.S. Patent No. 5.840.299.

Em outra modalidade ainda, o anticorpo de ligação VLA-4 tem um ou ambas as sequências de aminoácios de cadeia curta de SEQ ID NO: 1 na tabela 1-1, e uma sequência de aminoácidos da cadeia longa de SEQ ID NO:2 na tabela 1-2. Em outra modalidade, o anticorpo VLA-4 é uma variação de um desses anticorpos. Por exemplo, algumas modalidades, a cadeia curta do anticorpo tem uma sequência de aminoácido que se difere por um ou mais aminoácidos, mas não mais que 2, 3, 4, 5, ou 6 resíduos de a-minoácidos de uma sequência de SEQ ID NO:1, e/ou a cadeia longa de um anticorpo tem uma sequência de aminoácido que se difere por um ou mais resíduos de aminoácidos, mas não mais que 2, 3, 4, 5, ou 6 resíduos de a-minoácidos de uma sequência de SEQ ID NO:2.

Uma "diferença”na sequência de aminoácidos, com usado neste contexto, significa uma diferença na identidade de aminoácido (por exemplo, uma substituição de um aminoácido diferente de um aminoácido em SEQ ID NO:7 ou 11 referido acima) ou uma exclusão ou inserção. Uma diferença pode ser, por exemplo, em uma região da estrutura, um CDR, uma articulação, ou uma região constante. Uma diferença pode ser interna ou no final da sequência de proteína. Em algumas modalidades, algumas ou todas as diferenças são mudanças conservadoras quando comparadas à enumeração da sequência.

Em algumas modalidades, o pH da composição é aproximadamente 6.0±0.5 (por exemplo, aproximadamente 5.0+0.5, aproximadamente 6.0±0.5, aproximadamente 7.0±0.5), e a composição de tampão de fosfato está entre aproximadamente 5 mM e aproximadamente 30 mM (por exemplo, aproximadamente 10 mM, aproximadamente 15 mM, aproximadamente 20 mM, aproximadamente 25 mM). Em outra modalidade, a nova composição compreende um sal, como o cloreto de sódio, em uma concentração entre aproximadamente 100 mM e aproximadamente 200 mM (por exemplo, aproximadamente 120 mM, 140 mM, 160 mM, 180 mM). Em outra modalidade, a composição compreende cloridrato L-arginina, ou glicerol. Em outra modalidade, a nova composição compreende um aminoácido, como uma glicina, em uma concentração entre aproximadamente 200 mM e aproximadamente 300 mM (por exemplo, aproximadamente 220 mM, 240 mM, 260 mM, 280 mM). Em outra modalidade, a composição contém um excipiente farmaceuticamente aceitável, com um tensoativo, como um polissorbato 80, em uma quantidade de aproximadamente 0.001% a aproximadamente 2.0%, aproximadamente 0.004% to aproximadamente 0.4%, aproximadamente 0.008 a aproximadamente 0.2%, aproximadamente 0.02% to aproximadamente 0.08% (p/v) (por exemplo, aproximadamente 0.01%, aproximadamente 0.02%, aproximadamente 0.03%, aproximadamente 0.04%, aproximadamente 0.05%, aproximadamente 0.06%, aproximadamente 0.07%, aproximadamente 1%, aproximadamente 1.5%).

Em algumas modalidades, a composição inclui glicerol, e não contém, de forma substancial, nenhum cloridrato L-arginina, ou cloreto de sódio. Em outras modalidades, a composição inclui cloridrato de L-arginina, mas não contém, de forma substancial, nenhum glicerol ou cloreto de sódio (além do tampão de fosfato e do e do cloridrato de L-arginina). Em outras modalidades, a composição include cloreto de sódio, mas nenhum glicerol ou cloridrato de L-arginina, de forma substancial.

Em algumas modalidades, a formulação do anticorpo inclui um tampão de histidina, por exemplo, em vez de um tampão de fosfato, e o tampão de histidina é aproximadamente pH 5 a aproximadamente pH 7 (por exemplo, aproximadamente pH 5.5 ± 0.5, pH 6 ± 0.5, ou pH 6.5 ± 0.5). A composição de tampção de histidina aproximadamente 10 mM e aproximadamente 30 mM (por exemplo, aproximadamente 15 mM, aproximadamente 20 mM, aproximadamente 25 mM). A formulação tampão de histidina também include aproximadamente 200 mM a aproximadamente 300 mM glicerol (por exemplo, aproximadamente 240 mM, aproximadamente 250 mM, aproximadamente 260 mM, aproximadamente 270 mM, aproximadamente 280 mM glicerol), e polissorbato 80 a aproximadamente 0.001% a aproximada- mente 2.0% (p/v) (por exemplo, aproximadamente 0.02%, aproximadamente 0.03%, aproximadamente 0.04%, aproximadamente 0.05%, aproximadamente 0.06%, aproximadamente 0.07%, aproximadamente 1%, aproximadamente 1.5%). A formulação histidina include opcionalmente aproximadamente 5 mM a aproximadamente 15 mM L-metionina(por exemplo, aproximadamente 10 mM L-metionina).

Em uma modalidade, uma composição aqui apresentada contém 140 mg/mL a 160 mg/mL natalizumab, 5 mM a 15 mM de tampão de fosfato de sódio, 130 mM a 150 mM cloreto de sódio, e 0.01% to 0.1% (p/v) polissorbato 80, a pH 6 ± 0.5. Em outra modalidade, a composição contém 140 mg/mL a 160 mg/mL natalizumab, 5 mM to 15 mM tampão de fosfato de sódio, 250 mM a 300 mM glicerol, e 0.01% a 0.1% (p/v) polissorbato 80, a pH 6 ± 0.5. Em ainda outra modalidade, a composição contém 140 mg/mL a 160 mg/mL natalizumab, 5 mM a 15 mM tampão de fosfato de sódio, 150 mM a 170 mM cloridrato L-arginina, e 0.01% a 0.1% (p/v) polissorbato 80, a pH 6 ±0.5.

Em uma modalidade, a composição aqui apresentada é um líquido.

Em outra modalidade, a composição é estável por pelo menos 12 meses (por exemplo, pelo menos 24, 30, 36 meses), a uma temperatura de aproximadamente 2°C a aproximadamente 8°C (por exemplo, aproximadamente 5°C). Em outra modalidade, a composição é estável por pelo menos 2, 3, 4, 5, 6, ou 7 dias (por exemplo, a pelo menos uma semana ou 12 ou 14 dias), a temperatura ambiente (aproximadamente 20-30°C, como a-proximadamente 25°C).

Em outra modalidade ainda, a composição é adequada para administração SC ou IM. Em outra modalidade ainda, a composição é adequada para administração IV.

Em outro aspecto, a invenção apresenta um método de preparação de uma composição aquosa, como uma composição aquosa estável, que inclui aproximadamente 120 a aproximadamente 190 mg/mL anticorpo de ligação VLA-4 e polissorbato em um tampão de fosfato. O método inclui expressar o anticorpo em cultura de célula, passando o anticorpo através de pelo menos uma etapa de purificação por cromatografia, passando o anticorpo através de pelo menos duas etapas de ultrafiltrações/diafiltrações em tampão de fosfato, passando o anticorpo através de pelo menos uma etapa de ultrafiltraçãoem tampão de fosfato, e ajustando a concentração do anticorpo, por exemplo, abaixo, a aproximadamente 120 mg/ml_ to aproximadamente 190mg/mL, adicionando polissorbato e/ou tampão de fosfato. Em uma modalidade, o anticorpo de ligação VLA-4 é natalizumab, e em outra modalidade o polissorbato é polissorbato 80. The concentração do anticorpo pode ser, por exemplo, aproximadamente 135 mg/mL a aproximadamente 165 mg/mL, por exemplo, aproximadamente 150 mg/mL. Em algumas modalidades, o tampão de fosfato inclui outro excipiente como o glicerol, cloridrato de L-arginina, ou o cloreto de sódio. Aformulação final tem um pH de aproximadamente 5 a aproximadamente 7,por exemplo, de aproximadamente 5.5 a aproximadamente 6.5.

Em outro aspecto, a invenção apresenta um dispositivo de liberação projetado para ou adequado para a administração de SC ou IM, onde o dispositivo de liberação é embalado com ou contém uma dose única de uma composição aqui descrita, por exemplo, uma composição contendo uma formulação concentrada de natalizumab adequado para a administração SC ou IM. Em uma modalidade, a dose única é aproximadamente 100 mg a aproximadamente 450 mg (por exemplo, aproximadamente 120 mg a aproximadamente 350 mg; aproximadamente 150 mg, aproximadamente 200 mg, aproximadamente 250 mg, aproximadamente 300 mg).4 mg/kg e aproximadamente 3.0 mg/kg anticorpo de ligação VLA-4 ou fragmento deste por kg de peso corporal humano. Em outra modalidade, a dose única é aproximadamente 0.25 mL a aproximadamente 1.5 mL (por exemplo, aproximadamente 0.5 mL, aproximadamente 0.75 mL, aproximadamente 1.0 mL).

Em uma modalidade, uma dose única é aproximadamente 300 mg natalizumab, e em outra modalidade, a dose única é dividida em frações, como em duas metades, cada metade contendo aproximadamente 150 mg de um anticorpo de ligação VLA-4. Em modalidade ainda, natalizumab é administrado a um paciente como um regime. Em uma modalidade, é administrado ao paciente aproximadamente 300 mg de natalizumab uma vez por mês, por exemplo, pela administração de doses em sequência de 150 mg de natalizumab. Em uma modalidade alternativa, é administrado ao paciente aproximadamente 300 mg de natalizumab por mês, administrada por uma primeira dose de 150 mg natalizumab, depois uma segunda dose de 150 mg natalizumab aproximadamente duas semanas depois. A invenção apresenta métodos que otimizam o suprimento de uma formulação líquida altamente concentrada de um anticorpo de ligação VLA-4, por exemplo, natalizumab, a um paciente.

Em uma modalidade, o método permite um aumento gradual na concentração do anticorpo fornecido. Isto permite o início da concentração de anticorpos e pode permitir o monitoramento do paciente quanto à tolerância, às reações e similares, enquanto a concentração é aumentada. Por e-xemplo, o método pode começar por proporcionar natalizumab para o paciente em um ou mais inicial ou concentrações relativamente baixas seguidas, fornecendo natalizumab para o paciente em uma concentração final superior. Exemplos de formulações para a concentração inicial terão tipicamente uma concentração de anticorpos inferiores a 80%, 70%, 50%, 30%, 20% ou 10% da concentração final superior. As concentrações iniciais podem ser, por exemplo, 20 mg/mL, 30 mg/ml, ou 40 mg/ml. As concentrações finais serão, por exemplo, aproximadamente 120 mg/mL para cerca de 190 mg/ml (por exemplo, aproximadamente 135 mg/ml, aproximadamente 140 mg/ml, aproximadamente 150 mg/ml, aproximadamente 160 mg/ml, ou aproximadamente 165 mg/mL). Em algumas modalidades, o paciente receberá uma ou múltiplas administrações a uma ou várias concentrações iniciais. Por e-xemplo, em uma modalidade, o paciente receberá concentrações crescentes ao longo de um número de administrações. Em algumas modalidades, o paciente receberá 2, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8 administrações a uma ou mais concentrações iniciais antes de atingir a concentração final. Por exemplo, o paciente receberá uma ou mais administrações a uma primeira concentração inicial, e uma ou mais administrações a uma segunda concentração mais elevada. Em algumas modalidades, o paciente é avaliado após uma ou mais administrações para os sintomas, incluindo sintomas adversos. Em algumas modalidades, o paciente é administrado por uma formulação com um aumento da concentração de natalizumab só depois de determinar que o paciente não tem uma reação adversa inaceitável para a administraçaõ anterior.

Em uma modalidade, o método permite um aumento gradual da dosagem de anticorpos fornecidos (como dosagem utilizada aqui refere-se à quantidade de anticorpos fornecidos em um ou em cada um de um número definido de pequeno porte, por exemplo, 2, administrações). Isto permite o início da dose e pode permitir o acompanhamento do paciente para a tolerância, as reações adversas, e similares, enquanto a dose é aumentada. Por exemplo, o método pode começar por fornecer natalizumab para o paciente em um ou mais iniciais ou doses relativamente baixas seguidas de natalizumab proporcionando ao paciente, na dose final e superior. Doses iniciais típicas podem ser, por exemplo, 80%, 70%, 50%, 30%, 20% ou 10% ou menos da dose final superior. Dosagens finais típicas irão variar de acordo com a frequência de administração, uma vez que a administração do estado estacionário tenha sido alcançado. Por exemplo, algumas modalidades incluem dosagens final entre 75 mg e 500 mg (por exemplo, 100 mg, 150 mg, 200 mg, 250 mg, 300 mg, 350 mg, 400 mg, 450 mg) (estas doses podem ser típicas de aproximadamente administração mensal). Outras modalidades incluem dosagens final entre 50 mg e 250 mg (por exemplo, 75 mg, 100 mg, 150 mg, 200 mg) (estas dosagens são típicas de administração de duas em duas semanas). Outras modalidades incluem dosagens final entre 25 mg e 150 mg (por exemplo, 50 mg, 75 mg, 100 mg, 125 mg) (estas dosagens são típicas de administração semanal). Em algumas modalidades, o paciente receberá uma ou uma pluralidade de administrações, uma ou uma pluralidade de doses iniciais. Por exemplo, em uma modalidade, o paciente receberá doses crescentes sobre um número de administrações. Em algumas modalidades, o paciente receberá 2, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8 administrações a uma ou mais doses iniciais antes de atingir a dose final. Por exemplo, o paciente receberá uma ou mais administrações a uma primeira dose inicial, e uma ou mais administrações, com uma segunda dose inicial mais elevada. Em algumas modalidades, o paciente é avaliado após uma ou mais administrações para os sintomas, incluindo sintomas adversos. Em algumas modalidades, é administrada ao paciente uma dose maior de natalizumab só depois de determinar que o paciente não tem uma reação adversa inaceitável para a dose anterior. A invenção também inclui kits, por exemplo, pacotes de adesão, para implementar um início de concentração ou dosagem. Em uma modalidade, o paciente, ou um profissional de saúde, é equipado com um kit ou um pacote inicial de formulações natalizumab, incluindo pacotes de concentrações crescentes ou doses de natalizumab. O paciente ou o profissional de saúde com um pacote inicial é instruído a auto-administrar ou administrar um primeiro, por exemplo, uma dosagem baixa, ou a mais baixa ou concentração de natalizumab, e esperar um período de tempo designado. Se o doente apresentar ou apresentar poucos efeitos colaterais, o paciente ou o profissional de saúde é instruído a auto-administrar ou administrar uma segunda formulação, por exemplo, uma concentração maior, por exemplo, a próxima concentração ou dosagem mais elevada. O paciente ou profissional da saúde é instruído a continuar o aumento passo a passo nas doses ou concentrações até a dosagem ou concentração desejada ser alcançada. O paciente ou profissional da saúde pode ser instruído a manter a auto-administração ou a administração da formulação final a intervalos regulares por um período de tempo especificado.

Em uma modalidade, o paciente recebe a formulação altamente concentrada de anticorpo de ligação VLA-4 pré-embalada em um dispositivo de liberação adequado, como uma seringa.

Em outro aspecto, a invenção apresenta um método, por exemplo, de instruir um paciente com necessidade de uma terapia de anticorpo de ligação VLA-4, a como administrar uma formulação descrita. Outro método, por exemplo, um método de tratamento, inclui (i) fornecer ao paciente com pelo menos duas doses unitárias de uma formulação altamente concentrada de anticorpo de ligação VLA-4, e (ii) instruir o paciente a auto-administrar a unidade de doses por via subcutânea ou intramuscular, por exemplo, uma dose de cada vez.

Em uma modalidade, o paciente tem uma doença inflamatória, tal como a esclerose múltipla. Em outras modalidades, o paciente tem, por exemplo, asma (por exemplo, asma, alergia), um distúrbio artrítico (por e-xemplo, artrite reumatóide, artrite psoriática), por exemplo (diabetes, diabetes tipo I), um distúrbio fibrótico (por exemplo, fibrose pulmonar, mielofibrose, cirrose hepática, glomerulonefrite proliferativa mesangial, glomerulonefrite crescente, nefropatia diabética, fibrose intersticial renal), ou um distúrbio inflamatório intestinal (por exemplo, doença de Crohn, colite ulcerativa).

Outro aspecto, a invenção possui uma dose única de uma formulação concentrada de anticorpo de ligação VLA 4 aqui descrito, onde a dose única é de cerca de 0,25 mL por exemplo, a cerca de 1,5 mL (cerca de 0,5 mL, cerca de 0,75 mL, ou cerca de 1,0 mL). Em uma modalidade, uma dose única é de cerca de 100 mg para cerca de 450 mg (por exemplo, cerca de 150 mg, 160 mg, 180 mg, 200 mg, 250 mg, 300 mg, ou cerca de 350 mg).

Em outro aspecto, a invenção possui uma dose única de uma formulação aquosa de anticorpo de ligação VLA-4, onde a administração da dose única para um ser humano vai liberar entre cerca de 1,4 mg e 3,0 mg cerca de anticorpo de ligação VLA-4 ou seus fragmentos por kg do peso do corpo para o ser humano.

Em outro aspecto, a invenção apresenta um método de tratamento de um paciente por administração ao paciente de uma composição contendo um anticorpo VLA-4 obrigatório em uma formulação adequada para administração SC ou IM. Em uma modalidade, o paciente tem uma doença inflamatória, como a esclerose múltipla, asma, artrite reumatóide, diabetes ou doença de Crohn. Em outra modalidade, a composição é administrada como uma posologia Em outra modalidade, o método inclui ainda a seleção de um paciente adequado para o tratamento com a composição. Um paciente adequado para o tratamento, por exemplo, tem demonstrado um sinal ou sintoma indicativo de início da doença, como um sinal ou sintoma indicativo de MS. Em outra modalidade, o método compreende ainda a administração ao paciente de um segundo agente terapêutico, por exemplo, um agente trombolítico, um agente neuroprotetor, um agente antiinflamató-rio, um esteroide, uma citocina ou um fator de crescimento.

Em outro aspecto, a invenção apresenta um método de avaliar um paciente determinando se este reúne um critério pré-selecionado, e se preenche o critério pré-selecionado de aprovação, fornecendo, prescrevendo ou administrando uma formulação de anticorpo de ligação VLA-4 para o paciente aqui descrito. Em uma modalidade, o critério pré-selecionado é a não adaptação do paciente em responder adequadamente a um tratamento alternativo ou posologia anterior, por exemplo, para o tratamento da esclerose múltipla. Em outra modalidade, o critério pré-selecionado é a ausência de quaisquer sinais ou sintomas de leucoencefalopatia multifocal progressiva (PML), ou a ausência de diagnóstico da PML. Em outra modalidade, o critério é descrito no USSN 60/836, 530, arquivado em 9 de agosto de 2006, por meio deste incorporado por referência, que descreve os métodos e sistemas de distribuição de fármacos.

Em outro aspecto, a invenção apresenta um método de instruir um receptor sobre a administração de uma formulação altamente concentrada de natalizumab. O método inclui instruir o receptor (por exemplo, um usuário final, paciente, médico, farmácia de varejo ou atacado, distribuidor, ou o departamento de farmácia em um hospital, enfermagem ou HMO) que o medicamento deve ser administrado a um paciente por via subcutânea ou intramuscular.

Em outro aspecto, é fornecido o método de distribuição de uma composição aqui descrita. A composição contém uma formulação altamente concentrada de natalizumab e é adequada para a via subcutânea ou intramuscular ou intravenosa. O método inclui fornecer a um receptor (por exemplo, um usuário final, paciente, médico, farmácia de varejo ou atacado, distribuidor, ou o departamento de farmácia em um hospital, enfermagem ou HMO) com um pacote contendo doses unitárias suficiente do medicamento para tratar uma paciente, por pelo menos, 6, 12, 24 ou 36 meses.

Em outro aspecto, a invenção apresenta um método para avaliar a qualidade de uma embalagem ou lote de embalagens (por exemplo, para determinar se está expirado) de uma composição aqui descrita contendo uma quantidade muito concentrada de anticorpo VLA-4. O método inclui a avaliação se o pacote está no prazo de validade. O prazo de validade é de pelo menos 6, 12, 24, 36 ou 48 meses, por exemplo, maior do que 24 ou 36 meses, a partir de um evento pré-selecionado, tais como fabricação, ensaio, ou embalagem. Em algumas modalidades, a decisão ou o passo é tomado como um resultado da análise, por exemplo, o anticorpo no pacote é usado ou descartado, classificado, selecionado, liberado ou retido, expedido, transferido para uma nova localização, lançado no comércio, vendido, ou colocado à venda, retirado do comércio ou não mais colocado à venda, dependendo do prazo de validade do produto.

Em outro aspecto, a invenção apresenta um pacote contendo, no mínimo, 2 doses unitárias de uma composição aquosa contendo uma quantidade muito concentrada de anticorpo VLA-4. Em uma modalidade, todas as doses unitárias contêm a mesma quantidade de anticorpos, e em outras modalidades, existem doses unitária de duas ou mais intensidades, ou duas ou mais formulações diferentes, por exemplo, tendo intensidades ou propriedades de liberação diferentes). Em uma modalidade, pelo menos uma dose contém cerca de 100 mg para cerca de 450 mg de anticorpo de ligação VLA-4, por exemplo, cerca de 100 mg, 200 mg, 250 mg, 300 mg, 350 mg, ou cerca de 400 mg de anticorpo VLA-4.

Em outro aspecto, a invenção inclui um método de instruir um receptor sobre a administração de uma formulação aquosa contendo anticorpo VLA-4. O método inclui instruir o receptor (por exemplo, um usuário final, paciente, médico, farmácia de varejo ou atacado, distribuidor, ou o departamento de farmácia em um hospital, enfermagem ou HMO) que o anticorpo deve ser administrado a um paciente antes do fim do prazo de validade. O prazo de validade é de pelo menos 6, 12, 18, 24, 36 ou 48 meses, por exemplo, maior do que 18, 24 ou 36 meses, a partir de um evento, tais como fabricação, ensaio, ou embalagem. Em uma modalidade, o beneficiário re- cebe também uma fonte de anticorpos, por exemplo, uma oferta de doses unitárias.

Em outro aspecto, a invenção apresenta a utilização de um método ou sistema descrito no PCT/US2007/075577 (publicado como WO/2008/021954), com uma formulação aqui descrita. As modalidades incluem um método de distribuição de uma formulação aqui descrita, monitorando ou controlando a fornecimento de uma formulação aqui descrita para uma farmácia, centro de infusão, ou paciente, acompanhando um ou mais pacientes, selecionando de pacientes, ou elaborando ou apresentando dados sobre a utilização de uma formulação descrita PCT/US2007/075577 (publicado como WO/2008/021954), é por meio deste incorporado por referência.

Em outro aspecto, a invenção apresenta um método de seleção de um paciente para o tratamento com uma formulação aqui descrita para um distúrbio aqui descrito, tal como a esclerose múltipla. O método inclui: seleção ou fornecimento a um paciente que foi tratado pela administração intravenosa de um anticorpo de ligação VLA-4, por exemplo, natalizumab e fornecimento ou a administração de uma formulação aqui descrita para o paciente, por conseguinte, tratando o paciente.

Em outro aspecto, a invenção apresenta um método de análise de um produto ou um processo, por exemplo, um processo de fabricação. O método inclui fornecer uma formulação aquosa de uma composição de anticorpo de ligação VLA-4 altamente concentrados, por exemplo, feita por um processo aqui descrito, e fornecer uma avaliação da formulação, avaliando um parâmetro de solução, tal como a cor (por exemplo, incolor a ligeiramente amarelo ou incolor a amarelo), visibilidade (por exemplo, transparente a ligeiramente opalecente ou translúcido a opalecente), ou viscosidade (por exemplo, entre cerca de 5 cP e 30 cP (por exemplo, 10 cP, 20 cP), quando medido em temperatura ambiente, tais como a 20°C-30°C, por exemplo, 25°C). A avaliação pode incluir uma avaliação de um ou mais parâmetros de solução. Opcionalmente, uma determinação se o parâmetro de solução a-tende a um critério pré-selecionado é determinada, por exemplo, se o critério pré-selecionado está presente, ou está presente em um intervalo pré-selecionado, é determinada, assim, analisando o processo.

Em uma modalidade, a avaliação do processo inclui uma medida da estabilidade da formulação de anticorpos anti-VLA-4. A estabilidade da formulação de anticorpos pode ser medida, por exemplo, pela formação de agregados, que é analisada, por exemplo, pelo tamanho de exclusão da cromatografia líquida de alta pressão (HPLC), pela cor, visibilidade, viscosidade ou como aqui descrito. A formulação pode ser determinada a ser estável e, portanto, aceitável para posterior processamento ou distribuição, se a mudança em um parâmetro de ensaio for menos do que aproximadamente 10%, 5%, 3%, 2%, 1%, 0,5%, 0,05%, ou 0,005% ou menos, durante um período predefinido de tempo e, opcionalmente, a uma dada temperatura. Em uma modalidade, um líquido altamente concentrado de formulação anticorpo anti-VLA-4 é estável por 1, 2, 3, 4 ou 5 dias ou mais na temperatura ambiente (por exemplo, a aproximadamente 18°C, 19°C e 20°C, 21 °C, 22°C, 23°C, 24°C, ou 25°C).

Em uma modalidade, o método inclui, ainda, a comparação do valor definido com um valor de referência, para, assim, analisar o processo de fabricação.

Em uma modalidade, o método inclui ainda a manutenção do processo de fabricação baseado, pelo menos em parte, mediante a análise. Em uma modalidade, o método inclui, ainda, alterar o processo de produção baseado na análise.

Em outra modalidade o método inclui a avaliação de um processo, por exemplo, processo de fabricação de produtos, uma formulação a-quosa altamente concentrada de anticorpo de ligação VLA-4 feita por um processo selecionado, que inclui fazer uma determinação sobre o processo baseado em um método ou análise aqui descrito. Em uma modalidade, o método inclui ainda a manutenção ou alteração do processo de fabricação baseado, pelo menos em parte, no método ou na análise. Assim, em outra modalidade a parte que a avalia não utiliza o método ou a análise aqui des- crita, mas apenas se baseia em resultados que são obtidos por um método ou por uma análise aqui descritos.

Em outra modalidade o método inclui a comparação entre duas ou mais preparações em um método de monitoração ou do controle contínuo da variação do lote ou comparação de uma preparação para um padrão de referência.

Em ainda outra modalidade, o método pode ainda incluir uma tomada de decisão, por exemplo, para classificar, selecionar, aceitar ou rejeitar, liberar ou recusar, o processo em um medicamento, enviar, mudar par um local diferente, formular, rotular, embalar, liberar no comércio, vender ou oferecer a preparação à venda, baseado, pelo menos em parte, pela determinação.

Em outro aspecto, a invenção apresenta um método de armazenamento, distribuição ou utilização de uma formulação de anticorpo de ligação VLA-4, por exemplo, uma formulação natalizumab, aqui descrita. O método inclui: primeiro, armazenar a formulação por um primeiro período, a uma temperatura baixa, por exemplo, menos de 18°C, por exemplo, acima do congelamento, mas à temperatura igual ou abaixo de 15°C, 10°C ou 4°C; segundo, armazenar a formulação por um segundo período a uma temperatura maior, por exemplo, sem refrigeração ou em temperatura ambiente, por exemplo, entre 18°C e 25°C, em que o supracitado segundo período não seja superior a 24, 48, 72 ou 96 horas, e onde, em algumas modalidades, o segundo período termina com a administração ao paciente ou o descarte da formulação.

Em outro aspecto, a invenção apresenta um método de armazenamento, distribuição ou utilização de uma formulação de anticorpo de ligação VLA-4, por exemplo, uma formulação natalizumab, aqui descrita. O método inclui: armazenar a formulação, primeiro, a uma temperatura baixa, por exemplo, menos de 18°C, por exemplo, acima de zero, mas igual ou inferior a 15°C, 10°C ou 4°C; possibilitar a formulação de um receptor, por e-xemplo, um usuário final, por exemplo, um paciente ou profissional de saúde; opcionalmente, instruindo o usuário final que a formulação pode ser ar- mazenada, em seguida, a uma temperatura maior, por exemplo, sem refrigeração ou em temperatura ambiente, por exemplo, entre 18°C e 25 °C, e após o recebimento pelo destinatário, a formulação para armazenar até 24, 48, 72 ou 96 horas à segunda temperatura.

Em outro aspecto, a invenção apresenta um método de instruir uma entidade, por exemplo, uma farmácia, um distribuidor, ou um usuário final, por exemplo, um paciente ou um profissional da saúde, como armazenar, distribuir ou utilizar uma formulação anticorpo de ligação VLA-4, por e-xemplo, uma formulação natalizumab, aqui descrita. O método inclui: instruir a entidade de que a formulação deve ser armazenada primeira, a uma temperatura baixa, por exemplo, menos de 18°C, por exemplo, acima do congelamento, mas igual ou abaixo de 15°C, 10°C, ou 4°C, por um primeiro período, em que se estende até a formulação ser fornecida a um usuário final ou até dentro de 24, 48, 72 ou 96 horas antes da administração a um paciente, e instruir a entidade que a formulação pode ser depois armazenada a uma temperatura a uma temperatura maior, por exemplo, sem refrigeração ou em temperatura ambiente, por exemplo, entre 18°C e 25°C durante um segundo período, quando este não for superior a 24, 48, 72 ou 96 horas, instruindo, dessa forma, uma entidade.

Em outro aspecto, a invenção apresenta um método de armazenamento, distribuição ou utilização de uma formulação de anticorpo de ligação VLA-4, por exemplo, uma formulação natalizumab, aqui descrita. O método inclui: armazenar a formulação, primeiro, a uma temperatura baixa, por exemplo, menos de 18°C, por exemplo, acima de zero, mas igual ou inferior a 15°C, 10°C ou 4°C; e armazenar depois a formulação a uma temperatura maior, por exemplo, sem refrigeração ou em temperatura ambiente, por exemplo, entre 18°C e 25°C por não mais que 24, 48, 72 ou 96 horas.

Em outro aspecto, a invenção apresenta um método de avaliação, tal como o de avaliar a qualidade de uma formulação aquosa de anticorpo de ligação VLA-4 altamente concentrado, por exemplo, em um controle de qualidade ou análise de especificação de lançamento. O método inclui fornecer uma formulação aquosa de uma formulação de anticorpos para um parâmetro de solução, tal como a cor (por exemplo, incolor a ligeiramente amarelo ou incolor a amarelo), visibilidade (por exemplo, transparente a ligeiramente opalecente ou translúcido a opalecente), ou viscosidade (por exemplo, entre cerca de 5 cP e 30 cP quando medido em temperatura ambiente, tais como a 20°C-30°C, por exemplo, 25°C). A avaliação pode incluir uma avaliação de um ou mais parâmetros acima. Opcionalmente, o método inclui também a determinação se o parâmetro de solução atende um critério pré-selecionado, por exemplo, se o critério pré-selecionado está presente, ou está presente em um intervalo pré-selecionado. Se o parâmetro da solução observada está dentro de um intervalo pré-selecionado de valores, ou cumpre o padrão-ctério pré-selecionado, então, a preparação é selecionada, como para as embalagens, uso, venda e lançamentos no comércio, descarte, etc Em outro aspecto, a invenção apresenta um método de cumprimento de uma exigência regulamentar, por exemplo, uma exigência de pós-aprovação de uma agência reguladora, por exemplo, o FDA. O método inclui fornecer uma formulação aquosa de uma formulação de anticorpos para um parâmetro de solução, tal como a cor (por exemplo, incolor a ligeiramente amarelo ou incolor a amarelo), visibilidade (por exemplo, transparente a ligeiramente opalecente ou translúcido a opalecente), ou viscosidade (por exemplo, entre cerca de 5 cP e 30 cP quando medido em temperatura ambiente, tais como a 20°C-30°C). A exigência de pós-aprovação pode incluir uma medida de mais um dos parâmetros acima. O método também inclui, eventualmente, determinar se o parâmetro da solução observada possui o critério pré-selecionado ou se o parâmetro está dentro de um intervalo previamente definido; opcionalmente, recordando o valor ou resultado da análise, ou se comunicando com a agência, por exemplo, transmitindo o valor ou o resultado à agência reguladora.

Em outro aspecto, a invenção apresenta um método de fabricação de um lote de uma formulação aquosa de anticorpo VLA-4 tendo uma propriedade pré-selecionada, por exemplo, reunindo uma especificação liberada, exigência de etiqueta, ou exigência compendial, tal como uma proprie- dade aqui descrita. O método inclui fornecer uma preparação de anticorpos de teste e analisar a preparação de anticorpos de teste de acordo com um método descrito aqui; determinar se a preparação de anticorpos de teste satisfaz um critério pré-selecionado, por exemplo, ter uma relação pré-selecionada com um valor de referência, por exemplo, um ou mais valores de referência descritos aqui, e selecionando a preparação de anticorpos de teste para fazer um lote do produto.

Em outro aspecto, a invenção apresenta vários lotes de uma formulação aquosa de anticorpo de ligação VLA-4, no qual um ou mais parâmetros de solução (por exemplo, um valor ou um parâmetro de solução determinado por um método descrito aqui), para cada lote varia menos que uma variação pré-selecionada de um valor ou critério de referência pré-selecionado, tal como um intervalo ou critério descrito neste documento. Em algumas modalidades, um ou mais parâmetros para um ou mais lotes de uma formulação de anticorpos, é determinado e um ou mais lotes selecionados como resultado da determinação. Algumas incorporações incluem comparar os resultados da determinação de um valor pré-selecionado ou critério, por exemplo, um padrão de referência. Outras modalidades incluem o ajuste da dose do lote a ser administrado, por exemplo, com base no resultado da determinação do valor ou parâmetro.

Em outro aspecto, a invenção apresenta um método de um ou mais: fornecimento de um relatório a uma entidade de recepção de relatório, avaliação de uma amostra de uma formulação aquosa de anticorpo de ligação VLA-4 para o cumprimento de um padrão de referência, por exemplo, um requisito do FDA, buscando a indicação de outra parte que uma preparação do anticorpo de ligação VLA-4 atenda a alguns requisitos predefinidos, ou apresente informações sobre a elaboração de um anticorpo de ligação VLA-4 para outra parte. Algumas entidades receptoras ou outras partes incluem um governo, por exemplo, o governo dos E.U.A., por exemplo, uma agência governamental, por exemplo, o FDA. O método inclui um ou mais (ou todos) dos seguintes passos para fazer e/ou testar uma formulação a-quosa de anticorpo VLA-4 em um primeiro país, por exemplo, os E.U.A.; en- viar pelo menos uma alíquota da amostra para fora do primeiro país, por e-xemplo, enviando-o para fora dos Estados Unidos, para um segundo país; preparar, ou receber um relatório que inclui dados sobre a estrutura de preparação de anticorpo de ligação VLA-4, por exemplo, dados relacionados a uma estrutura e/ou cadeia descrita aqui, tal como dados gerados por um ou mais dos métodos descritos neste documento e fornecer esse relatório a uma entidade receptora de relatório.

Em uma modalidade, a entidade receptora de relatório pode determinar se um pré-requisito ou valor de referência pré-determinado está de acordo com os dados e, opcionalmente, com uma resposta recebida da entidade receptora de relatório, tal como por um fabricante, distribuidor ou vendedor de uma formulação aquosa de anticorpo VLA-4. Em uma modalidade, após o recebimento da aprovação do relatório da entidade beneficiária, a preparação de anticorpo de ligação VLA-4 é selecionada, embalada ou colocada à venda.

Em outro aspecto, a invenção apresenta um método para avaliar uma formulação aquosa de anticorpo VLA-4. O método inclui a recepção de dados no que diz respeito à presença ou nível de ligação de anticorpo VLA-4, por exemplo, em que os dados foram elaborados por um ou mais métodos aqui descritos, fornecendo um registro que inclui os dados supracitados e, opcionalmente um identificador para um lote de anticorpo VLA-4; submetendo o registro supracitado a um responsável pela decisão, por exemplo, uma agência governamental, tal como o FDA; opcionalmente, recebendo um comunicado do responsável pela decisão; eventualmente, decidindo sobre a liberação ou comercialização do lote de anticorpo de ligação VLA-4 baseado no comunicado do responsável pela decisão. Em uma modalidade, o método inclui ainda a liberação da amostra.

Exemplos de formulações incluem o seguinte: 1. Natalizumab em 125-175 mg/ml, ou 140-160 mg/ml, por e-xemplo, 150 mg/ml; tampão fosfato de sódio em 1-100 mM, 5-20 mM, ou de 5-50 mM, por exemplo, 10 mM; cloreto de sódio a 50-200 mM, 100-180 mM, ou 120-160 mM, por exemplo, 140 mM; polissorbato 80% de 0,01-0,12, 0,02-0,08%, ou 0,02-0,06%, por exemplo, 0,04% (P/v), e pH 6.0 ± 1,0, por exemplo, 6.0 ± 0,5; 2. Natalizumab em 125-175 mg/mL ou 140-160 mg/ml, por e-xemplo, 150 mg/ml; 10 mM tampão de fosfato de sódio; 140 mM cloreto de sódio; 0,04% (p/v), polissorbato 80 e pH 6.0 ±0,5; 3. 150 mg/mL Natalizumab; tampão de fosfato de sódio em 1-100 mM, 5-20 mM, ou de 5-50 mM, por exemplo, 10 mM; 140 mM cloreto de sódio; 0,04% (P/v), polissorbato 80 e pH 6.0 ±0,5; 4. 150 mg/mL Natalizumab; 10 mM tampão de fosfato de sódio; cloreto de sódio a 50-200 mM, 100-180 mM, ou 120-160 mM, por exemplo, 140 mM; 0,04% (p/v), polissorbato 80 e pH 6.0 ± 0,5; 5. 150 mg/mL Natalizumab; 10 mM tampão de fosfato de sódio; 140 mM cloreto de sódio; polissorbato 80% de 0,01-0,12, 0,02-0,08%, ou 0,02-0,06%, por exemplo, 0,04% (P/v), e pH 6.0 ±0,5; 6. 150 mg/mL Natalizumab; 10 mM tampão de fosfato de sódio; 140 mM cloreto de sódio; 0,04% (p/v), polissorbato 80 e pH 6.0 ± 1,0, por exemplo, 6.0 ± 0,5; e 7. 150 mg/mL Natalizumab; 10 mM tampão de fosfato de sódio; 140 mM cloreto de sódio; 0,04% (P/v), polissorbato 80 e pH 6.0 ±0,5;

Em algumas modalidades, nenhuma das formulações acima de 1-7 podem ser essencialmente livres de um aminoácido, por exemplo, arginina e glicina, ou glicerol. Métodos e composições aqui descritos podem ser usados onde a presença, a distribuição ou a quantidade, de uma ou mais estruturas na mistura podem conter ou afetar a atividade biológica. Os métodos também são úteis a partir de uma atividade estrutura potencial, para avaliar e assegurar a equivalência biológica.

Uma formulação de anticorpo de ligação VLA-4 "altamente concentrada" como utilizada aqui, refere-se a uma formulação aquosa estável contendo entre cerca de 120 mg/mL a cerca de 190 mg/ml (por exemplo, cerca de 120 mg/ml, 130 mg/ml, 140 mg/ml, 150 mg/ml, 160 mg/ml, 170 mg/ml, 180 mg/ml, 190 mg/mL) anticorpo de ligação VLA-4, como natalizumab. "Adequado para administração de SC ou IM" significa que a administração da composição de um sujeito, como um ser humano, terá um efeito terapêutico, como o de melhorar um ou mais sintomas no sujeito. O termo "tratamento" refere-se administração de uma terapia em uma quantidade, forma e/ou o modo eficaz de melhorar a condição, sintoma ou parâmetro associado com um distúrbio ou para impedir a progressão de uma doença, quer para um grau de significância estatística ou para um grau detectável para um versado na técnica. Uma quantidade, forma ou modalidade eficaz pode variar dependendo do sujeito e pode ser adaptada para o sujeito.

Uma formulação "estável" de anticorpo de ligação VLA-4 apresenta pouco ou nenhum sinal de um ou mais de agregado, fragmento, dea-midação, oxidação, ou mudança de atividade biológica durante um período prolongado de tempo, por exemplo, 12 meses, 24 meses, 36 meses ou mais. Por exemplo, em uma modalidade, menos de 10% da composição é agregada, fragmentada, ou oxidada. Agregação, precipitação e/ou desnaturação podem ser avaliadas por métodos conhecidos, como o exame visual da cor e da limpidez, ou por dispersão de luz UV ou cromatografia de exclusão de tamanho. A capacidade da proteína para manter sua atividade biológica pode ser avaliada através da detecção e quantificação de formas quimicamente alteradas do anticorpo. Alteração de tamanho (por exemplo, corte), que pode ser avaliado através de cromatografia por exclusão de tamanho, SDS-PAGE e/ou dessorção ionização a laser matriz-assistida/hora do voo de es-pectrometria de massa (MALDI/TOF MS), ou mapeamento de peptídeo-endoproteinase do anticorpo tratado, por exemplo. Outros tipos de alteração química incluem alteração de carga (por exemplo, ocorrendo como resultado de deaminação), que pode ser avaliada por cromatografia de troca iônica, por exemplo. Um anticorpo "mantém sua atividade biológica" em uma formulação farmacêutica, se a atividade biológica do anticorpo em um determinado momento está dentro de aproximadamente 10% da atividade biológica apresentada no momento que a formulação farmacêutica foi preparada conforme determinado em um ensaio de antígeno de ligação, por exemplo.

Um "anticorpo de ligação VLA-4" refere-se a um anticorpo que se liga a uma integrina VLA-4, como a subunidade a4 da integrina VLA-4, e pelo menos parcialmente, inibe uma atividade de VLA 4, especialmente um atividade de ligação de uma integrina VLA-4 ou uma atividade de sinalização, por exemplo, a capacidade de transdução do sinal mediado por VLA 4. Por exemplo, um anticorpo de ligação VLA 4 pode inibir a ligação de VLA-4 para um ligante cognato de VLA 4, por exemplo, uma proteína da superfície celular, tal como VCAM 1, ou a um componente de matriz extracelular, como fibronectina ou osteopontina. Um anticorpo de ligação VLA 4 pode se ligar quer a subunidade alfa-4 ou a subunidade betai, ou a ambos. Em uma mo- dalidade, o anticorpo se liga ao epitopo betai do alpha4. Um anticorpo de ligação VLA 4 pode se ligar ao VLA 4 com um Kd de menos de aproximadamente 10-6, 10-7, 10-8, 10-9, ou 10-10 Μ. O VLA -4 também é conhecido como alpha4/beta1 e CD29/CD49b.

Conforme utilizado aqui, o termo "anticorpo" refere-se a uma proteína que inclui pelo menos uma região variável de imunoglobulina, por exemplo, uma sequência de aminoácidos que proporciona um domínio variável da imunoglobulina ou sequência de imunoglobulina de domínio variável. Por exemplo, um anticorpo pode incluir uma região variável de cadeia longa (H) (abreviado aqui como VH), e uma luz (L) na região de cadeia variável (abreviado aqui como VL). Em outro exemplo, um anticorpo inclui duas regiões variáveis de cadeia longa (H) e duas regiões variáveis da cadeia leve (L). O termo "anticorpo" engloba antígeno de fragmentos de anticorpos de ligação (por exemplo, anticorpos de cadeia única, fragmentos Fab, F (ab ') 2 fragmentos, fragmentos Fd, fragmentos Fv e fragmentos DAB), bem como anticorpos completos, por exemplo, imunoglobulinas intactas de tipos de IgA, IgG, IgE, IgD, IgM (bem como seus subtipos). As cadeias certas de imunoglobulina podem ser dos tipos kappa ou lambda. Em uma modalidade, o anticorpo é glicosilado. Um anticorpo pode ser funcional para o anticorpo cito-toxicidade dependente e/ou a citotoxicidade mediada, ou pode ser não-funcional para uma ou ambas dessas atividades.

As regiões VH e VL podem ser subdividida em regiões de hiper-variabilidade, denominado "regiões determinantes de complementariedade" (CDR), intercaladas com regiões que são mais conservadas, denominadas "regiões de estrutura" (FR). A extensão dos FRs e CDRs tem sido precisamente definidas (vide, Kabat, EA, e outros (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242; e Chothia, C. e outros (1987) J. Mol. Biol. 196:901-917). as definições de Kabat são utilizadas aqui. Cada VH e VL é tipicamente composta por três CDRs e quatro FRS, organizadas a partir de amino-terminus a carboxil-terminal, na seguinte ordem: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4.

Um "sequência de imunogloina de domínio variável" refere-se a um domínio de domínio variável ou constante de moléculas de imunoglobulina. Domínios imunoglobulina geralmente contêm duas folhas beta formadas por cerca de sete cepas beta, e uma ligação de dissulfeto conservada (vide, por exemplo, AF Williams e AN Barclay 1988 Ann. Rev Immunol. 6:381-405).

Conforme utilizado aqui, uma "sequência de imunoglobina de domínio variável" refere-se a uma sequência de aminoácidos que pode formar a estrutura de um domínio variável da imunoglobulina. Por exemplo, a sequência pode incluir a totalidade ou parte da sequência de aminoácidos de um domínio de ocorrência natural variável. Por exemplo, a sequência pode omitir uma, duas ou mais N-ou C-terminal de aminoácidos, aminoácidos internos, pode incluir um ou mais inserções ou aminoácidos terminais adicionais, ou pode incluir outras alterações. Em uma modalidade, um polipeptídeo que inclui uma sequência de domínio variável da imunoglobulina se pode associar com outra sequência de domínio variável da imunoglobulina para formar uma estrutura meta vinculativa (ou sítio de ligação de antígeno), por exemplo, uma estrutura que interage com VLA 4. A cadeia VH ou VL do anticorpo pode ainda incluir a totalidade ou parte de uma região constante de cadeia longa ou leve, para assim formar, respectivamente, uma cadeia longa ou leve de imunoglobulina. Em uma modalidade, o anticorpo é um tetrâmero de duas cadeias longas de imuno-globulinas e duas cadeias certas de imunoglobulina. As cadeias longas e leves de imunoglobulinas podem ser ligadas por pontes de dissulfeto. A região constante da cadeia longa normalmente inclui três domínios constantes, CH1, CH2 e CH3. A região constante de cadeia curta geralmente inclui um domínio CL. A região variável das cadeias longas e leves contém um domínio de ligação que interage com um antígeno. As regiões constantes dos anticorpos normalmente mediam a ligação dos anticorpos aos tecidos de acolhimento ou de fatores, incluindo várias células do sistema imunológico (por exemplo, células efetoras) e o primeiro componente (CLq) do sistema clássico de complemento.

Uma ou mais regiões de um anticorpo podem ser humanas, eficazmente humanas, ou humanizadas. Por exemplo, uma ou mais das regiões variáveis podem ser humanas ou eficazmente humanas. Por exemplo, um ou mais dos CDRs, por exemplo, HC CDR1, HC CDR2, HC CDR3, LC CDR1, LC CDR2, e LC CDR3, podem seres humanos em cadeia (HC, pesado; LC, cadeia curta). Cada uma das cadeias certas CDRs pode ser humana. HC CDR3 pode ser humana. Uma ou mais das regiões de estrutura podem ser humanas, por exemplo, FR1, FR2, FR3, e FR4 do HC ou LC. Em uma modalidade, todas as regiões da estrutura são humanas, por exemplo, derivado de uma célula somática humana, por exemplo, uma célula hemato-poiética, que produz imunoglobulinas ou células não hematopoiéticas. Em uma modalidade, as sequências são sequências germinais humanas, por exemplo, codificadas por um ácido nucleico germilina. Uma ou mais regiões constantes de um anticorpo podem ser humanas, eficazmente humanas, ou humanizadas. Em outra modalidade, pelo menos, 70, 75, 80, 85, 90, 92, 95 ou 98% das regiões de estrutura (por exemplo, FR1, FR2, e FR3, coletivamente, ou FR1, FR2, FR3, e FR4, coletivamente ) ou o anticorpo inteiro pode ser humano, eficazmente humano, ou humanizado. Por exemplo, FR1, FR2, e FR3 coletivamente podem ser de pelo menos 70, 75, 80, 85, 90, 92, 95, 98 ou 99% idênticos a uma sequência humana codificada por um segmento de linha germinal humana.

Uma região variável da imunoglobulina "eficazmente humana" é uma região variável da imunoglobulina que inclui um número suficiente de posições de estrutura de aminoácidos humanos tais que a região variável da imunoglobulina não provoque uma resposta imunogênica em humanos normais. Um anticorpo "eficazmente humano" é um anticorpo que inclui um número suficiente de posições de aminoácidos humanos de modo que o anticorpo não provoque uma resposta imunogênica em humanos normais.

Uma região variável da imunoglobulina "humanizada" é uma região variável da imunoglobulina que é modificada de tal forma que a forma modificada produza menos de uma resposta imune em um ser humano do que a forma não-modificada, por exemplo, é modificada para incluir um nú- mero suficiente de posições de estruturas de aminoácidos humanos tais que a região variável da imunoglobulina não provoque uma resposta imunogênica em humanos normais. Descrições das "imunoglobulinas humanizadas" incluem, por exemplo, Patente U.S. N 0 6.407.213 e Patente U.S. No. 5.693.762. Em alguns casos, imunoglobulinas humanizadas podem incluir um aminoácido não-humano em uma ou mais posições de estrutura aminoácidos. A totalidade ou parte de um anticorpo pode ser codificado por um gene de imunoglobulina ou um segmento da mesma. Exemplos de genes de imunoglobulina humana incluem genes região constante kappa, lambda, alfa (lgA1 e lgA2), gama (lgG1, lgG2, lgG3, lgG4), delta, epsilon e mu, assim como a imunoglobulina miríade de genes da região variável. O comprimento total da imunoglobulina de "cadeia curta" (cerca de 25 Kd ou 214 aminoácidos) é codificado por um gene de região variável no terminal NH2 (cerca de 110 aminoácidos) e um kappa ou lambda gene constante na região terminal COOH. O comprimento total da imunoglobulina de "cadeia longa" (cerca de 50 Kd ou 446 aminoácidos), é igualmente codificado por um gene de região variável (cerca de 116 aminoácidos) e um dos outros referidos genes de região constante, por exemplo, gama (codificação sobre 330 aminoácidos). O termo "fragmento de ligaçãoa antígeno" de um comprimento total do anticorpo refere-se a um ou mais fragmentos de um anticorpo de comprimento total que retêm a capacidade de se ligar especificamente a um alvo de interesse, por exemplo, VLA 4. Exemplos de fragmentos de ligação inserida no termo "fragmento de ligação antígeno" de um anticorpo de comprimento total incluem (i) um fragmento Fab, um fragmento monovalente constituído pelo VL, VH, CL e domínios CH1, (ii) A (F ab ') 2 fragmento, um fragmento de bivalentes, incluindo dois fragmentos Fab ligados por uma ponte dissulfeto na região da articulação, (iii) um fragmento Fd consiste na VH e domínios CH1, (iv) um fragmento Fv consiste na VL e VH domínios de um único braço de um anticorpo, (v) um fragmento dAb (Ward e outros, (1989) Nature 341:544-546), que consiste em um domínio VH; e (vi) uma região determinante complementaridade (CDR) isolada que mantém a funcionalidade. Além disso, embora os dois domínios do fragmento Fv, VL e VH, sejam codificados por genes diferentes, que podem ser unidos, utilizando métodos de recombinação, por um linker sintético que permite se tornarem uma única cadeia de proteína em que as regiões pares VL e VH formam moléculas monovalente conhecidas como cadeia única Fv (scFv). Vide, por exemplo, Bird e outros (1988) Science 242:423-426, e Huston e outros (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883.

Como usado aqui, cerca de refere-se ao prazo de 0,1% a 5% do valor dado (por exemplo, dentro de 5%, 3%, 2%, 1%, 0,5%, 0,1% acima ou abaixo do valor determinado. Sempre que os montantes e outros valores designados são fornecidos aqui, o desvio é permitido dentro dos padrões farmaceuticamente aceitavéis.

Algumas vantagens são fornecidas por incorporações da invenção. Em alguns casos, é difícil fazer formulações de alta concentração de proteínas, por exemplo, anticorpos, para uso em composições farmacêuticas. Métodos de preparar tais formulações são aqui apresentados. Composições farmacêuticas que contêm altas concentrações de proteína, por e-xemplo, de anticorpos anti-VLA-4, pode ser útil para a administração ao longo de um tempo mais curto. A formulação de alta concentração, por exemplo, de anticorpos anti-VLA-4, também pode ser administrada por métodos simplificados (por exemplo, via subcutânea).

Os detalhes de uma ou mais modalidades da invenção são estabelecidos nos desenhos anexos e na descrição abaixo. Outras características, objetos e vantagens da invenção serão aparentes a partir da descrição e dos desenhos e, a partir das reivindicações.

DESCRIÇÃO DOS DESENHOS A FIGURA 1 mostra o nível dos agregados solúveis em pré e pós-agitação de uma natalizumab em uma concentração de 150 mg/ml em várias formulações. HCN = 20 mM de histidina, 240 mM de glicerol 0,04% (P/v) de polissorbato 80, pH 6, e PST: HOL = 20 mM de histidina, 240 mM de glicerol, 0,04% (p/v) de polissorbato 80, pH 6. PCN = 20 mM de fosfato, glicina 240 mM, 0,02% (P/v), polissorbato 80, pH 6. PST = 20 mM de fosfato, 140 mM de NaCl, 0,02% (P/v) de polissorbato 80, pH 6. A FIGURA 2 mostra a absorvência UV em solução a 340 nm, pré e pós-agitação do natalizumab em uma concentração de 150 mg/ml em formulações, como descrito na FIGURA 1. A FIGURA 3 mostra a relação entre os vários níveis de agregação e de polissorbato 80 de natalizumab (150 mg/ml) na formulação HOL (HOL = 20 histidina mM, 240 mM de glicerol, pH 6, polissorbato 80 é uma variável do experimento). A FIGURA 4 mostra a agregação percentual ao longo do tempo para natalizumab (150 mg/mL) armazenados a 40°C em várias formulações, como descrito na FIGURA 1. A FIGURA 5 mostra a agregação percentual ao longo do tempo para natalizumab (150 mg/mL) armazenada em frascos entre 2-8° C em várias formulações, como descrito na FIGURA 1. A FIGURA 6 mostra o percentual de oxidação da metionina ao longo do tempo para natalizumab (150 mg/mL) armazenados entre 2-8°C e 40°C em várias formulações, como descrito na FIGURA 1. FIGURA 7 mostra a porcentagem de oxidação de metionina como uma função do livre excipiente limpador para natalizumab (150 mg/mL) ao longo de 6 meses. A FIGURA 8 mostra as taxas de fragmentação para natalizumab em concentrações diferentes e em várias formulações em função do tempo (8 semanas).

DESCRIÇÃO DETALHADA

Formulações estáveis de anticorpo de ligação VLA-4 altamente concentrados são úteis para administração via subcutânea (SC), intramuscular (IM) ou intravenosa (IV) administração. As formulações apresentadas na invenção contêm de cerca de 120 mg/mL para cerca de 190 mg/mL anticorpo de ligação VLA-4, como natalizumab.

Composições farmacêuticas As composições aqui descritas são formuladas como composições farmacêuticas. O anticorpo de ligação VLA-4 (por exemplo, natalizumab) pode ser fornecido, por exemplo, em uma solução tamponada com uma concentração entre cerca de 120 mg/ml e 190 mg/EG (mL, entre cerca de 120 mg/ml e cerca de 180 mg/mL, entre cerca de 140 mg/ml e cerca de 160 mg/ml, entre cerca de 135 mg/ml e cerca de 165 mg/ml, por exemplo, cerca de 120 mg/ml, 130 mg/ml, 135 mg/ml, 140 mg/ml, 150 mg/ml, 160 mg/ml, 165 mg/ml, 170 mg/ml, 180 mg/ml, 190 mg/mL). Em uma modalidade, o anticorpo de ligação VLA-4 (por exemplo, natalizumab) é fornecido em uma solução tamponada com uma concentração superior a 150 mg/mL e inferior a 190 mg/mL. Em outra modalidade, a formulação é preparada em uma concentração mais elevada (por exemplo, 170 mg/ml a 190 mg/ml), e em seguida diluída de volta para a concentração desejada (por exemplo, 135 mg/ml a 165 mg/mL). Por exemplo, a formulação pode ser preparada com uma concentração de anticorpos, por exemplo, 175 mg/ml, 180 mg/ml ou 185 mg/ml, e em seguida diluída de volta a uma concentração desejada para a administração, por exemplo, 140 mg/ml, 145 mg/mL, 150 mg/ml, 155 mg/ml, ou 160 mg/mL. A composição pode ser armazenada a 2-8° C (por exemplo, 4°C, 5°C, 6°C, 7°C).

Em uma modalidade, os anticorpos de ligação VLA-4 podem ser formulados com materiais excipientes, como 160 mM cloridrato de L-arginina (% a ± 10), um tampão de fosfato (por exemplo, hepta-fosfato de sódio dibásico e fosfato de sódio monobásico) e polissorbato 80, onde o teor de sódio total não excede 60 mM. Em outra modalidade, os anticorpos de ligação VLA-4 podem ser formulados com 275 mM de glicerol (% a ± 10), um tampão de fosfato (por exemplo, hepta-fosfato de sódio dibásico e fosfato de sódio monobásico ou outros sais de fosfato) e polissorbato 80, e é substancialmente isento de cloreto de sódio. Em outra modalidade, o anticorpo de ligação VLA-4 podem ser formulados com 140 mM de cloreto de sódio (% a ± 10), um tampão de fosfato, e polissorbato 80. Exemplos de formulações que incluem tampões de fosfato são apresentados a seguir, por exemplo, em exemplos 8, 9, 10, 11 e 12.

Em uma modalidade, o anticorpo de ligação VLA-4 pode ser formulado com matérias excipientes, como o glicerol a 240 mM (± 10%), um tampão de histidina, polissorbato 80, e, opcionalmente, L-metionina. Exemplos de formulações que incluem tampões de histidina são apresentados a seguir, por exemplo, os exemplos 13 e 14.

Tampões de fosfato são conhecidos na técnica e incluem, por exemplo, soluções aquosas de fosfato de sódio dibásico (anidro), heptafos-fato de sódio dibásico di-hidratado, fosfato de sódio dibásico, fosfato de sódio monobásico anidro, fosfato de sódio monobásico, fosfato de sódio mo-nobásico di-hidratado, fosfato de sódio tribásico anidro, ou dodeca-hidrato de fosfato de sódio tribásico, levados para o pH adequado. Tampões de fosfato também incluem, por exemplo, fosfato de potássio, fosfato dibásico anidro, ou fosfato de potássio tribásico, levados para o pH adequado.

Tampões de histidina são conhecidos na técnica e incluem, por exemplo, soluções aquosas de D-histidina, mono-hidrato de monocloreto de d-histidina, DL-histidina, Mono-hidrato de monocloreto, L-histidina, ou monocloreto de L-histidina monohidratada Monocloreto, trouxe para o bom pH com ácido clorídrico ou hidróxido de sódio, ou outro ácido ou base versados na técnica.

Normalmente, uma composição farmacêutica inclui um veículo farmaceuticamente aceitável. Conforme utilizado aqui, um veículo "farmaceuticamente aceitável" inclui qualquer e todos os solventes, meios de dispersão, revestimentos, agentes antibacterianos e antifúngicos, isotônicos e agentes retardantes de absorção, e similares que são fisiologicamente compatíveis.

Um "sal farmaceuticamente aceitável" refere-se a um sal que retém a atividade biológica desejada do anticorpo e não transmite quaisquer efeitos toxicológicos indesejáveis (vide, por exemplo, Berge, SM, e outros (1977) J. Pharm. Sci. 66:1-19). Exemplos de tais sais incluem sais de adição de ácido e sais de adição de base. Sais de adição de ácido incluem os derivados de ácidos inorgânicos tóxicos, como ácido clorídrico, ácido nítrico, fosfórico, sulfúrico, bromídrico, iodídrico, e similares, bem como de ácidos orgânicos tóxicos como o mono- e dicarboxílicos alifáticos, fenil-substituídos ácidos alcanoicos, ácidos hidróxi-alcanoicos, ácidos aromáticos, alifáticos e ácidos sulfônicos aromáticos, aminoácidos livres, similares. Sais de adição de base incluem os derivados de metais alcalinos, como sódio, potássio, magnésio, cálcio e similares, bem como de aminas orgânicas não-tóxicas, tais como N, N'-dibenziletilenodiamina, N-metil-glucamina, cloroprocaína, colina, dietanolamina, etilenodiamina, procaína e similares.

Normalmente os agentes fisiologicamente compatíveis, tais como aminoácidos livres, sais de cloridrato, sais de sódio, potássio ou sais de aminoácidos livres são usados como excipientes em formulações farmacêuticas para promover a estabilidade do anticorpo. As esta formulações podem incluir aditivos, como o glicerol, polióis: manitol, sorbitol e outros, bem como os açúcares (por exemplo, sacarose), para promover a estabilidade.

As formulações aqui apresentadas podem incluir um excipiente farmaceuticamente aceitável, tal como um tensoativo, por exemplo, polissorbato 80, monoestearato de glicerina, estearato de lauromacrogol, ou oleato sorbitano. Em uma modalidade, as formulações aqui descrita incluem cerca de 0,01% (p/v) a cerca de 0,1% (p/v), polissorbato 80, por exemplo, cerca de 0,2% ou 0,04% de polissorbato 80.

Composições farmacêuticas contendo anticorpos de ligação VLA-4 altamente concentrados estão na forma de uma solução líquida (por exemplo, soluções injetáveis e infusíveis). Essas composições podem ser administradas por um modo parenteral (por exemplo, subcutânea, intraperitoneal ou intramuscular). As frases "administração parenteral" e "administrada parenteralmente" como utilizadas aqui significam modos de administração além da administração enteral e tópica, geralmente por injeção, e inclui a administração subcutânea ou intramuscular, bem como a intravenosa, in-tracapsular, intraorbital, injeção intracardíaca, intradérmica, intraperitonial transtraqueal, subcuticular, subcapsular, subaracnoide, intraspinal, peridural e intrasternal e infusão. Em uma modalidade, as formulações aqui descritas são administradas via subcutânea.

Composições farmacêuticas são estéreis e estáveis nas condições de fabricação e armazenagem. A composição farmacêutica também pode ser testada para garantir o cumprimento das normas reguladoras e da indústria para a administração.

Uma composição farmacêutica contendo uma quantidade muito concentrada de anticorpo de ligação VLA 4 pode ser formulada como uma solução, microemulsão, dispersão, lipossomas, ou outra estrutura ordenada adequada para alta concentração de anticorpos. Soluções estéreis injetáveis podem ser preparadas pela incorporação de um agente aqui descrito na quantidade necessária em um solvente adequado, com uma ou uma combinação dos ingredientes acima enumerados, se necessário, seguido de esterilização filtrada. Geralmente, as dispersões são preparadas incorporando um agente aqui descrito em um veículo estéril que contém um meio de dispersão de base e os ingredientes necessários diferentes daqueles enumerados acima. A fluidez de uma solução adequada pode ser mantida, por e-xemplo, pelo uso de um revestimento, como lecitina, pela manutenção do tamanho de partícula necessária no caso de dispersão e pelo uso de tensoativos. A absorção prolongada de composições injetáveis pode ser provocada pela inclusão na composição de um agente retardante de absorção, por e-xemplo, sais monoestearato e gelatina.

Em algumas modalidades, os parâmetros que descrevem as formulações, por exemplo, os parâmetros que podem aparecer no rótulo do produto, são caracterizados. Tais parâmetros incluem, por exemplo, a cor (normalmente incolor a ligeiramente amarelo ou incolor a amarelo), clareza (normalmente transparente a ligeiramente opalescente, ou limpar a opales-cente) e viscosidade (normalmente entre cerca de 5 cP e 30 cP quando medido a temperatura ambiente, como em 20° C a 30°C). Tais parâmetros podem ser medidos por métodos versados na técnica. Por exemplo, a clareza pode ser medida utilizando padrões comercialmente disponíveis de opalescência (disponível em, por exemplo, HunterLab Associates, Inc. (Reston, VA)). Métodos exemplários incluem, por exemplo, estudos de agregação, estudos de oxidação, estudos de fragmentação, estudos sialilação, estudos de ponto isoelítrico, estudos de metade de anticorpos, de ponto isoelítrico, estudos de metade de anticorpos, estudos de paridade de cadeia curta e longa e nálise da estrutura secundária (por exemplo, por dieroísmo circular) desnaturação térmica (por exemplo, por dieroísmo circular da calorimetria de varredura diferencial), ambiente triptofano (por exemplo, por fluorescência) dobra de IgG (por exemplo, por dieroísmo circular aromático (por exemplo, por especttodotometria a UV-Vis).

Em algumas modalidades, a estabilidade das formulações de anticorpos é analisada. Métodos de Fazer Formulações de Anticorpo Formulações contendo formulações de anticorpo ligando VI_A-4 podem ser feitas como descrito no Pedido US Publicado 2005/0053598, modificadas para acomodar concentrações altas de anticorpo (por exemplo, concentrações de cerca de 75 mg/mL a aproximadamente 190 mg/mL, 100 mg/mL a aproximadamente 180 mg/mL, aproximadamente 120 mg/mL a a-proximadamente 170 mg/mL, 135 mg/mL a aproximadamente 165 mg/mL). O processo pode ser alterado como seria conhecido de um versado na técnica, mas geralmente seguiría um procedimento como o seguinte. Obtém-se uma ampola de um banco de célula de trabalho contendo células que fazem o anticorpo ou a proteína de interesse. Preparar-se um inóculo. Cultiva-se ou fermenta-se as células do inóculo com alimentações adicionais conforme seja necessário. Coletar/clarificar as células por centrifugação e/ou filtração. Isto pode ser feito, por exemplo, concentrando as células 10 vezes por, por exemplo, filtração por enrolamento espiral. Filtração intermediária, tal como por um filtro de 2pm, é seguida, por exemplo, por cromatografia de afinidade, tal como por uma proteína A Sefarose Fast Flow® e, então, eluição reversa. A composição contendo anticorpo, então, recebe um tratamento a baixo pH, tal como pH 3,6-3,7. A mistura recebe, então, uma filtração viral seguida de uma etapa de concentração/diafiltração. A composição ainda é purificada por, por exemplo, cromatografia de troca aniônica, tal como DEAE Sefarose Fast Flow®. Esta etapa pode ser executada múltiplas vezes. Deste ponto, a composição é concentrada, então, ainda mais e, então, purificada, por exemplo, através de cromatografia de filtração de gel, tal como por um sistema Sephacryl S300HR®. A composição contendo anticorpo ainda pode ser concentrada caso assim desejado. A formulação final é produzida adicionando tampão e polissorbato e concentrando o anticorpo novamente por um processo de ultrafiltração. A formulação de anticorpo resultante pode ser testada para controle de qualidade e liberada pela garantia da qualidade (QA). Uma formulação de anticorpo pode ser produzida de acordo com quaisquer dos métodos exemplificados na Tabela 1 abaixo. Por exemplo, a formulação que contém um anticorpo de ligação VLA-4, tal como natalizumab, pode ser produzida pelo processo seguinte. Uma grande batelada de cultura de célula, tal como 5.000 a 20.000 litros (por exemplo, 5.000; 10.000; 15.000; 20.000 litros) é inoculada, cultivada, alimentada, coletada e clarificada como versado na técnica. O material clarificado é purificado, por exemplo, por cromatografia, inativação viral e filtração viral. Ultrafiltração/diafiltração (UF/DF) do material clarificado resulta em um intermediário de processo de fosfato. O intermediário de processo de fosfato pode ser armazenado a 2-8°C, por exemplo, para processamento futuro, tal como através de métodos para concentrar mais a proteína. Para fazer a formulação final, polissorbato e tampão (como descrito neste) são acrescentados ao intermediário de processo de fosfato para alcançar a concentração final de anticorpo desejada. Em uma alternativa, a formulação final é criada contradiluindo o intermediário de processo de fosfato em tampão até uma concentração final desejada, por exemplo, uma baixa concentração tal como 20 mg/mL Polissorbato é adicionado tipicamente durante a etapa de diluição final.

Em uma modalidade, a formulação de anticorpo de ligação VLA-4 é produzida em uma formulação de histidina, como descrito acima, exceto que o intermediário de processo de fosfato sofre pelo menos um segundo processo de UF/DF e, opcionalmente, pelo menos um processo de UF adicional em um tampão de formulação de histidina como descrito neste, até uma concentração final desejada, tal como entre aproximadamente 75 mg/mL e 190 mg/mL, por exemplo, aproximadamente 75 mg/mL a aproximadamente 190 mg/mL, por exemplo, 75 mg/mL, 100 mg/mL, 125 mg/mL, 135 mg/mL, 150 mg/mL, 165 mg/mL, 180 mg/mL, 190 mg/mL. Em uma al- ternativa, a formulação de anticorpo em tampão de histidina é trazida a uma concentração final maior que uma concentração desejada. Então, a formulação final é criada através de contradiluição em tampão de formulação de histidina até uma concentração de proteína desejada. Polissorbato é adicionado tipicamente durante a etapa de diluição final.

Em outra modalidade, a formulação de anticorpo é produzida em uma formulação de fosfato, como descrito acima, exceto que o intermediário de processo de fosfato sofre pelo menos um segundo processo de UF/DF e, opcionalmente, pelo menos um processo de UF adicional em um tampão de formulação de fosfato como descrito neste, até uma concentração final desejada, tal como entre aproximadamente 75 mg/mL e 190 mg/mL, por exemplo, aproximadamente 75 mg/mL a aproximadamente 190 mg/mL, por exemplo, 75 mg/mL, 100 mg/mL, 125 mg/mL, 135 mg/mL, 150 mg/mL, 165 mg/mL, 180 mg/mL, 190 mg/mL. Em uma alternativa, a formulação de anticorpo em tampão de fosfato é trazida a uma concentração final maior que a concentração desejada e a formulação final é criada contradilu-indo em tampão de fosfato até a concentração desejada. Polissorbato é adicionado tipicamente durante a etapa de diluição final.

Em outra modalidade, a formulação de anticorpo de ligação VLA-4 é produzida em uma formulação de fosfato, como descrito acima, exceto que um processo de UF/DF comercial para a formulação de fosfato é seguido e polissorbato adicionado para produzir uma formulação de anticorpo de ligação VLA-4 a uma concentração final desejada, tal como entre a-proximadamente 75 mg/mL e 190 mg/mL, por exemplo, aproximadamente 75 mg/mL a aproximadamente 190 mg/mL, por exemplo, 75 mg/mL, 100 mg/mL, 125 mg/mL, 135 mg/mL, 150 mg/mL, 165 mg/mL, 180 mg/mL, 190 mg/mL. Em uma alternativa, a formulação de anticorpo em tampão de fosfato é trazida a uma concentração final maior que a concentração desejada e, então, a formulação final é criada contradiluindo em tampão de formulação de fosfato até a concentração de proteína desejada. Polissorbato é adicionado tipicamente durante o processo de diluição final.

Tabela 1. Métodos de fazer formulações de anticorpo.

Os processos de UF/DF da Tabela 1 (por exemplo, UF/DF #1, UF/DF#2) são tipicamente processos de fluxo tangenciais que usam, por exemplo, cassetes de ultrafiltração de folha plana ou enrolada em espiral (com, por exemplo, 10 kD ou 30 KD de tamanho de poro) pra concentrar e diafiltrar o anticorpo. Tais processos são satisfatórios para concentrar o produto a 0 a 100 g/L, por exemplo, 30 g/L, 50 g/L, 80 g/L. Os processos de UF da Tabela 1 (por exemplo, UF #3) tipicamente usam cassetes de folha plana de canal aberto que são satisfatórios para concentrar o produto até, por e-xemplo, 0 a 300 g/L ou mais, tal como até 150 g/L, 200 g/L, 210 g/L, 220 g/L, 230 g/L ou 240 g/L. O processo de UF/DF comercial da Tabela 1 tipicamente usa uma primeira operação de UF/DF para diafiltrar o produto em um tampão de formulação e concentrar o produto a aproximadamente 5 g/L a 40 g/L (por exemplo, aproximadamente 10 g/L, aproximadamente 20 g/L, aproximadamente 30 g/L). Uma segunda operação de UF é tipicamente executada para concentrar mais o produto a aproximadamente 135 g/L a aproximadamente 185 g/L (por exemplo, aproximadamente 140 g/L, 150 g/L, 165 g/L).

Qualquer uma das formulações de anticorpo de ligação VLA-4 descritas neste pode ser empacotada em frascos assépticos como descrito no, por exemplo, Pedido US Publicado 2005/0053598 que é incorporado neste por referência. Por exemplo, as formulações podem ser empacotadas em, por exemplo, frascos de 3,0; 5,0 ou 20 mL de abastecimento. Produto de fármaco enchido é armazenado sob refrigeração a aproximadamente 2-8°C.

Em uma modalidade, a formulação final é embalada como um líquido em um frasco de abastecimento de 3,0 mL com um volume mínimo extraível de 1 mL Por exemplo, o frasco de abastecimento pode incluir aproximadamente 1,1 mL a aproximadamente 1,5 mL (por exemplo, aproximadamente 1,1 mL, aproximadamente 1,2 mL, aproximadamente 1,3 mL, aproximadamente 1,4 mL) de formulação de anticorpo. Em outra modalidade a formulação de anticorpo é embalada em uma seringa pré-cheia, em uma quantidade tal que 1 mL de solução seja injetado em um paciente mediante o uso, e a solução de 1 mL libera a quantidade desejada de anticorpo, por exemplo, 135 mg a 165 mg de natalizumab, por exemplo, 150 mg de natalizumab.

Natalizumab e Outros Anticorpos de Ligação VLA-4 Anticorpos adequados para uma formulação de anticorpo de ligação VLA-4 altamente concentrada descritos neste incluem natalizumab e anticorpo de ligação integrina a4. Natalizumab (nome USAN) tem o número de código de anticorpo AN 100226 e também é chamado "TYSABRI®" A sequência de aminoácido da cadeia curta e da cadeia longa de natalizumab antes de quaisquer modificações in vivo (por exemplo, fixação de aminoácidos) é mostrada na Tabela 1-1 e Tabela 1-2.

Tabela 1-1: Sequência de Cadeia curta de Natalizumab (SEQ ID NO:1) 10 20 30 40 50 1 DIQMTQSPSS LSASVGDRVT ITCKTSQDIN KYMAWYQQTP GKAPRLLIHY

51 TSALQPGIPS RFSGSGSGRD YTFTISSLQP EDIÂTYYCLQ YDNLWTFGQG

101 TKVEIKRTVA APSVFIFPPS DEQLKSGTAS WCLLNNFYP REAKVQWKVD

151 NALQSGNSQE SVTEQDSKDS TYSLSSTLTL SKADYEKHKV YACEVTHQGL

201 SSPVTKSFNR GEC

Tabela 1-2: Sequência de Cadeia longa de Natalizumab (SEQ ID NO:2) 10 20 30 40 50 í/VQLVQSGAE VKKPGASVKV SCKASGFNIK DTYIHWVRQA PGQRLEWMGR

IDPANGYTKY DPKFQGRVTI TADTSASTAY MELSSLRSED TAVYYCAREG

YYGNYGVYAM DYWGQGTLVT VSSASTKGPS VFPLAPCSRS TSESTAALGC

LVKDYFPEPV TVSWNSGALT SGVHTFPAVL QSSGLYSLSS WTVPSSSLG

TKTYTCNVDH KPSNTKVDKR VESKYGPPCP SCPAPEFLGG PSVFLFPPKP

KDTLMISRTP EVTCVWDVS QEDPEVQFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQFN

STYRWSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKG LPSSIEKTIS KAKGQPREPQ

VYTLPPSQEE MTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SRLTVDKSRW QEGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSLGK2 1 Glutamina ciclizada para Ácido piroGlutâmico 2 Lisina é removida pós-translacionalmente Natalizumab inibe a migração de leucócitos do sangue para o sistema nervoso central. Natalizumab liga a VLA-4 (também denominado (4(1) na superfície de células T ativadas e outros leucócitos mononucleares. Ele pode romper a adesão entre a célula T e as células endoteliais e, assim, prevenir a migração de leucócitos mononucleares pelo endotélio e para o parênquima. Como resultado, os níveis de citoquinas pró-inflamatórias também podem ser reduzidos.

Natalizumab pode diminuir o número de lesões de cérebro e recaídas clínicas em pacientes com recaída que remete à esclerose múltipla e esclerose múltipla secundária progressiva de recaída.

Natalizumab e anticorpos de ligação VLA-4 relacionados são descritos, por exemplo, na patente US 5.840.299. Anticorpos monoclonais 21.6 e HP1/2 são anticorpos monoclonais murinos exemplares que ligam VLA-4. Natalizumab é uma versão humanizada de anticorpo monoclonal murino 21.6 (vide, por exemplo, patente US 5.840.299). Uma versão humanizada de HP1/2 também foi descrita (vide, por exemplo, patente US 6.602.503). Vários anticorpos monoclonais de ligação VLA-4 adicionais, tais como HP2/1, HP2/4, L25 e P4C2 são descritos, por exemplo, na patente US 6.602.503; Sanchez-Madrid e outros, 1986 Eur. J. Immunol., 16:1343-1349; Hemler e outros, 1987 J. Biol. Chem. 2:11478-11485; Issekutz e Wykre-towicz, 1991, J. Immunol., 147: 109 (TA-2 mab); Pulido e outros, 1991 J. Biol. Chem., 266:10241-10245; e patente US 5.888.507).

Alguns anticorpos de ligação VLA-4 reconhecem epítopos da subunidade (4 que estão envolvidos na ligação a um ligante cognato, por exemplo, VCAM-1 ou fibronectina. Muitos de tais anticorpos inibem ligação de VLA-4 a ligantes de cognato (por exemplo, VCAM-1 e fibronectina).

Alguns anticorpos de ligação VLA-4 úteis podem interagir com VLA-4 em células, por exemplo, linfócitos, mas não causam agregação de célula. Porém, outros anticorpos de ligação VLA-4 foram observados como causando tal agregação. Ο HP1/2 não causa agregação de célula. O anticorpo monoclonal HP1/2 (Sanchez-Madrid e outros, 1986) tem uma potência extremamente alta, bloqueia a interação de VLA-4 com ambos VCAM1 e fibronectina e tem a especificidade para epitopo B em VLA-4. Este anticorpo e outros anticorpos específicos do epitopo B (tal como anticorpos de ligação de epitopo B1 ou B2; Pulido e outros, 1991, supra) representam uma classe de anticorpos de ligação VLA-4 que podem ser usados nas formulações e nos métodos descritos neste.

Um anticorpo de ligação VLA-4 exemplar tem um ou mais CDRs, por exemplo, todos o três HC CDRs e/ou todos os três LC CDRs de um anticorpo particular descrito neste, ou CDRs que são, em soma, pelo menos 80, 85, 90, 92, 94, 95, 96, 97, 98, 99% idênticos a um tal anticorpo, por exemplo, natalizumab. Em uma modalidade, os laços hipervariáveis H1 e H2 têm a mesma estrutura canônica que aqueles de um anticorpo descrito neste. Em uma modalidade, os laços hipervariáveis L1 e L2 têm a mesma estrutura canônica que aqueles de um anticorpo descrito neste.

Em uma modalidade, a sequência de aminoácido da sequência de domínio variável de HC e/ou LC é pelo menos 70, 80, 85, 90, 92, 95, 97, 98, 99 ou 100% idêntica àb sequência de aminoácido do domínio variável de HC e/ou LC de um anticorpo descrito neste, por exemplo, natalizumab. A sequência de aminoácido da sequência de domínio variável de HC e/ou LC pode diferir por pelo menos um aminoácido, mas não mais que dez, oito, seis, cinco, quatro, três ou dois aminoácidos da sequência correspondente de um anticorpo descrito neste neste, por exemplo, natalizumab. Por exemplo, as diferenças podem estar principalmente ou completamente nas regiões de estrutura.

As sequências de aminoácido das sequências de domínio variável de HC e LC podem ser codificadas por uma sequência de ácido nucleico que hibridiza sob condições de alta severidade em uma sequência de ácido nucleico descrita neste ou uma que codifica um domínio variável ou uma sequência de aminoácido descrita neste. Em uma modalidade, as sequências de aminoácido de uma ou mais regiões de estrutura (por exemplo, FR1, FR2, FR3 e/ou FR4) do domínio variável de HC e/ou LC são pelo menos 70, 80, 85, 90, 92, 95, 97, 98, 99 ou 100% idênticas para regiões de estrutura correspondentes dos domínios variáveis de HC e LC de um anticorpo descrito neste. Em uma modalidade, uma ou mais regiões de estrutura de cadeia longa ou leve (por exemplo, HC FR1, FR2 e FR3) são pelo menos 70, 80, 85, 90, 95, 96, 97, 98 ou 100% idênticas à sequência de regiões de estrutura correspondentes de um anticorpo de linha germinal humano. São executados cálculos de "homologia" ou "identidade de sequência" entre duas sequências (os termos são intercambiavelmente usados neste) como segue. As sequências estão alinhadas para propósitos de com- paração ótima (por exemplo, espaços podem ser introduzidos em uma ou ambas dentre uma primeira e uma segunda sequência de aminoácido ou ácido nucléico para ótimo alinhamento e sequências não homólogas podem ser desconsideradas para propósitos de comparação). O ótimo alinhamento é determinado como a melhor contagem que usa o programa GAP no pacote de software GCG com uma matriz de contagem Blossum 62 com uma penalidade de abertura de 12, uma penalidade de extensão de abertura de 4 e uma penalidade de abertura de mudança de estrutura de 5. Então, são comparados os resíduos de aminoácido ou nucleotídeos nas posições de aminoácido correspondentes ou posições de nucleotídeos. Quando uma posição na primeira sequência estiver ocupada pelo mesmo resíduo de aminoácido ou nucleotídeo que a posição correspondente na segunda sequência, então, as moléculas são idênticas naquela posição (como usada neste, "identi-dade”de aminoácido ou ácido nucléico é equivalente à "homologia”de aminoácido ou ácido nucléico). A identidade percentual entre as duas sequências é uma função do número de posições idênticas compartilhadas pelas sequências.

Como usado neste, o termo "hibridiza sob condições de severidade alta" descreve condições para hibridização e lavagem. Orientação para conduzir reações de hibridização pode ser encontrada em Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Filhos, N.Y. (1989), 6.3.1-6.3.6 que é incorporado para referência. Métodos aquosos e não aquosos são descritos nessa referência e qualquer um pode ser usado. Condições de hibridização de severidade alta incluem hibridização em 6X SSC a aproximadamente 45°C, seguida de uma ou mais lavagens em 0.2X SSC, 0.1% SDS a 65°C ou condições substancialmente semelhantes.

Administração As formulações de anticorpos de ligação VLA altamente concentradas aqui descritas podem ser administradas a um sujeito, por exemplo, um sujeito humano, por uma variedade de métodos, incluindo a administração subcutânea, intramuscular e intravenosa. Normalmente, a administração é por via subcutânea ou intramuscular. A formulação pode ser administrada como uma dose fixa ou em uma dose de mg/kg. Normalmente, a administração é em dose fixa. Por exemplo, a formulação é administrada em dose única fixa entre 75 mg e 500 mg (por exemplo, 100 mg, 150 mg, 200 mg, 250 mg, 300 mg, 350 mg, 400 mg, 450 mg) a cada 4 semanas (por exemplo, mensalmente), ou entre 50 mg e 250 mg (por exemplo, 75 mg, 100 mg, 150 mg, 200 mg) a cada duas semanas, ou entre 25 mg e 150 mg (por exemplo, 50 mg, 75 mg, 100 mg, 125 mg) uma vez por semana. A formulação também pode ser administrada em um bolo a uma dose entre 1 e 8 mg/kg, por exemplo, cerca de 6,0, 4,0, 3,0, 2,0, 1,0 mg/kg. As variações de doses modificadas incluem uma dose inferior a 500, 400, 300, 250, 200, 150 ou 100 mg/sujeito, em geral, para a administração de cada quatro semanas ou uma vez por mês. O anticorpo de ligação VLA 4 pode ser administrado, por exemplo, a cada três a cinco semanas, por exemplo, a cada quarta semana, ou mensal.

As posologias podem ser ajustadas para fornecer a resposta desejada, por exemplo, uma resposta terapêutica. A dose pode também ser escolhida para reduzir ou evitar a produção de anticorpos contra o anticorpo de ligação VLA 4, para obter uma saturação da subunidade a4 superior a 40, 50, 70, 75 ou 80% para atingir uma saturação da subunidade a4 inferior a 80%, 70 %, 60%, 50% ou 40% ou para evitar um aumento do nível de glóbulos brancos do sangue.

Em algumas modalidades, o agente ativo pode ser preparado com um veículo que protegerá o anticorpo contra a liberação rápida, tais como uma formulação de liberação controlada, incluindo implantes e sistemas de liberação microencapsulada. Os polímeros biocompatíveis e biodegradáveis podem ser utilizados, tais como acetato de vinil etileno, polianidri-dos, ácido poliglicólico, colágeno, poliortoésteres e ácido polilático. Muitos métodos para a preparação de tais formulações são patenteados ou de conhecimento geral. Vide, por exemplo, Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J.R. Robinson, ed., Marcei Dekker, Inc., New York, 1978.

As posologias podem ser ajustadas para fornecer a resposta desejada, por exemplo, uma resposta terapêutica. A "resposta terapêutica" é uma melhora na condição, sintoma ou parâmetro associado a um distúrbio, seja para um grau significante estatisticamente ou a um grau detectável para aqueles versados na técnica. A forma de unidade de dosagem ou "dose fixa", conforme aqui usada, refere-se às unidades fisicamente distintas adaptadas como as dosagens unitárias para os sujeitos a serem tratados; cada unidade contém uma quantidade pré-determinada de anticorpos ativos calculados para produzir o efeito terapêutico desejado, em associação com um veículo farmacêutico exigido e, opcionalmente, em associação com o outro agente.

Uma composição farmacêutica pode incluir uma "quantidade terapeuticamente eficaz" de um anticorpo de ligação VLA-4, por exemplo, natalizumab, aqui descrito. Tais quantidades eficazes podem ser determinadas com base no efeito do agente administrado, ou o efeito combinatório de um agente e um agente secundário, se mais de um agente é usado. A quantidade terapeuticamente eficaz de um agente também pode variar de acordo com fatores como o estado da doença, idade, sexo e peso do indivíduo, bem como a capacidade do anticorpo de obter uma resposta desejada pelo indivíduo, por exemplo, melhora de pelo menos um parâmetro de distúrbio, por exemplo, um parâmetro de esclerose múltipla, ou melhora de pelo menos um sintoma do distúrbio, por exemplo, esclerose múltipla. A quantidade terapeuticamente eficaz é também aquela em que qualquer efeito tóxico ou prejudicial da composição é compensado pelos efeitos benéficos terapeuticamente.

Dispositivos e Kits As formulações com uma concentração elevada de um anticorpo de ligação VI_A-4 (por exemplo, natalizumab) podem ser administradas com um dispositivo médico. O dispositivo pode ser projetado com ou ter características tais como a portabilidade, armazenamento de temperatura ambiente e facilidade de uso para que possa ser utilizado em situações de e-mergência, por exemplo, por um sujeito inexperiente ou pelo pessoal de e- mergência em campo, removido para instalações médicas e outros equipamentos médicos. O dispositivo pode incluir, por exemplo, uma ou mais caixas para o armazenamento de preparações farmacêuticas que incluem um anticorpo de ligação VLA-4 (por exemplo, natalizumab) e pode ser configurado para liberar uma ou mais doses unitárias do agente.

Por exemplo, a composição farmacêutica pode ser administrada com um dispositivo de administração transcutânea, como uma seringa, incluindo uma seringa hipodérmica ou múltiplas câmaras. Em uma modalidade, o dispositivo é uma seringa preenchida com agulha integral ou anexa. Em outras modalidades, o dispositivo é uma seringa preenchida sem a agulha anexa. A agulha pode ser empacotada com a seringa preenchida. Em uma modalidade, o dispositivo é um dispositivo de autoinjeção, por exemplo, uma seringa autoinjetora. Em outra modalidade, o dispositivo de injeção é uma caneta injetora. Em outra modalidade ainda, a seringa é uma seringa de agulha, seringa Luer Lock ou seringa Luer slip. Outros dispositivos de liberação adequados incluem "stents", catéteres, microagulhas e dispositivos im-plantáveis de liberação controlada. A composição pode ser administrada por via intravenosa com equipamento IV padrão, incluindo, por exemplo, tubos IV com ou sem filtros de linha. Em algumas modalidades, o dispositivo será uma seringa para uso na administração SC ou IM.

As composições farmacêuticas podem ser administradas com dispositivos médicos. Por exemplo, as composições farmacêuticas podem ser administradas com um dispositivo de injeção hipodérmica sem agulha, como os dispositivos descritos nas Patentes U.S. nos. 5.399.163, 5.383.851, 5.312.335, 5.064.413, 4.941.880, 4.790.824, ou 4.596.556. Exemplos de implantes e módulos bem conhecidos incluem: Patente US 4.487.603, que descreve uma bomba de micro-infusão implantável para a liberação de medicamentos em uma taxa controlada; a Patente U.S. no. 4.486.194, que descreve um dispositivo terapêutico para a administração de medicamentos a-través da pele; a Patente US 4.447.233, que descreve uma bomba de infusão de medicamentos para a liberação de medicamentos a uma taxa de infusão precisa; a Patente U.S. no. 4.447.224, que descreve um aparelho de infusão implantável de fluxo variável para a liberação contínua de medicamentos; a patente U.S. No. 4.439.196, que descreve um sistema de liberação de fármacos osmóticas com compartimentos multicâmaras; e a Patente U.S. no. 4.475.196, que descreve um sistema de liberação de fármacos os-móticos. A composição terapêutica também pode estar na forma de uma formulação de liberação biodegradável ou não biodegradável sustentada por via subcutânea ou intramuscular. Vide, por exemplo, a Pat. U.S. nos. 3.773.919 e 4.767.628 e Pedido PCT no. WO 94/15587. A administração contínua pode também ser alcançada através de uma bomba implantável ou externa. A administração também pode ser realizada de forma intermitente, por exemplo, uma injeção única diária, ou continuamente com uma dose baixa, por exemplo, uma formulação de libertação prolongada. O dispositivo de entrega pode ser modificado para ser perfeitamente adequado para a administração de um anticorpo de ligação VLA-4. Por exemplo, uma seringa pode ser siliconizada de forma que seja ideal para armazenamento e fornecimento de anticorpo anti-VLA-4. Naturalmente, muitos outros implantes, sistemas de liberação e os módulos também são conhecidos. A invenção também apresenta um dispositivo para administração de um primeiro e segundo agente. O dispositivo pode incluir, por exemplo, uma ou mais caixas para o armazenamento de preparações farmacêuticas e pode ser configurado para liberar doses unitárias dos primeiro e segundo agentes. Os primeiro e segundo agentes podem ser armazenados nos mesmos compartimentos ou separados. Por exemplo, o dispositivo pode combinar os agentes antes da administração. Também é possível utilizar dispositivos diferentes para administrar os primeiro e segundo agentes.

Um anticorpo de ligação VLA-4 (por exemplo, natalizumab) pode ser fornecido em um kit. Em uma modalidade, o kit inclui (a) um recipiente que contém uma composição que inclui uma alta concentração do anticorpo de ligação VLA-4, opcionalmente, (b) um recipiente que contém uma composição que inclui um segundo agente e, opcionalmente, (c) materiais informativos. O material informativo pode ser descritivo, de instrução, de marketing ou qualquer outro material que se relaciona com os métodos descritos neste documento e/ou o uso de agentes para o benefício terapêutico. Em uma modalidade, o kit inclui também um segundo agente. Por exemplo, o kit inclui um primeiro recipiente que contém uma composição que inclui o anticorpo de ligação VLA-4 e um segundo recipiente que inclui o segundo agente. Em uma modalidade, o kit inclui uma ou mais seringas de uso simples preenchidas com uma alta concentração de formulação de anticorpo líquida aqui descrito. O material informativo dos kits não está limitado na sua forma. Em uma modalidade, o material informativo pode incluir informações sobre a produção do anticorpo, concentração, data de validade, lote ou informação do local de produção e outros. Em uma modalidade, o material informativo refere-se a métodos de administração do anticorpo de ligação VLA-4 (por exemplo, natalizumab), por exemplo, em uma dose adequada, forma farmacêutica ou modo de administração (por exemplo, uma dose, forma farmacêutica ou modo de administração aqui descrito), para tratar um sujeito que tem uma doença inflamatória (por exemplo, MS), ou que esteja em risco de experimentar um episódio associado a uma doença inflamatória. A informação pode ser fornecida em uma variedade de formatos, incluindo texto impresso, material legível por computador, gravação de vídeo ou gravação de áudio ou informação que fornece um link ou endereço para material substantivo.

Além do agente, a composição do kit pode incluir outros ingredientes, tais como solvente ou tampão, um estabilizador ou um conservante. O agente pode ser fornecido em qualquer forma, por exemplo, líquido, seco ou liofilizado, e, substancialmente puro e/ou em forma estéril. Quando os agentes são fornecidos em uma solução líquida, a solução líquida é, por exemplo, uma solução aquosa. Quando os agentes são fornecidos como uma forma seca, a reconstituição é geralmente pela adição de um solvente apropriado. O solvente, por exemplo, água destilada ou tampão, opcionalmente pode ser fornecido no kit. O kit pode incluir um ou mais recipientes para a composição ou composições contendo os agentes. Em algumas modalidades, o kit contém recipientes separados, divisórias ou compartimentos para a composição e material informativo. Por exemplo, a composição pode estar contida em uma garrafa, frasco ou seringa, e o material informativo pode estar contido em uma luva de plástico ou pacotes. Em outras modalidades, os elementos separados do kit estão contidos dentro de um recipiente único e indivisível. Por exemplo, a composição está contida em uma garrafa, frasco ou seringa que foi anexado ao material informativo na forma de um rótulo. Em algumas modalidades, o kit inclui uma pluralidade (por exemplo, um pacote) de recipientes individuais, cada um contendo uma ou mais formas de dosagem unitárias (por exemplo, uma forma de dosagem aqui descrita) dos agentes. Os recipientes podem incluir uma combinação de dose única, por exemplo, uma unidade que inclui tanto o anticorpo de ligação VLA-4 (por exemplo, natalizumab) e o segundo agente, por exemplo, em uma proporção desejada. Por exemplo, o kit inclui uma pluralidade de seringas, ampolas, pacotes de papel alumínio, embalagens ou em dispositivos médicos, por exemplo, cada um contendo uma dose única da combinação. Os recipientes dos kits podem ser herméticos, impermeáveis (por exemplo, impermeáveis a mudanças na umidade ou evaporação) e/ou à prova de luz. O kit inclui opcionalmente um dispositivo adequado para a administração da composição, por exemplo, uma seringa ou outro dispositivo de liberação adequado. O dispositivo pode ser fornecido pré-carregado com um ou ambos os agentes ou pode ser vazio, mas apropriado para o carregamento.

Esclerose Múltipla As formulações com concentração alta de anticorpos de ligação VLA-4 adequadas para a administração SC ou IM são úteis para o tratamento de doenças inflamatórias, como esclerose múltipla (MS). A esclerose múltipla é uma doença do sistema nervoso central que é caracterizada por inflamação e perda da bainha de mielina.

Os pacientes com MS podem ser identificados por critérios que estabelecem um diagnóstico de MS clinicamente definida como estabelecido pelo seminário sobre diagnóstico de MS (Poser e outros Ann. Neurol. 13:227, 1983). Resumidamente, um indivíduo com MS clinicamente definida teve dois ataques e uma evidência clínica de duas lesões ou qualquer evidência clínica de uma lesão e evidência paraclínica de outra lesão separada. A MS definitiva também pode ser diagnosticada pela evidência de dois ataques e bandas oligoclonais de IgG no fluido cerebrospinal ou pela combinação de um ataque, evidência clínica de duas lesões e banda oligoclonal de IgG no fluido cerebrospinal. Os critérios de McDonald também podem ser usados para diagnosticar MS. (McDonald e outros, 2001, Recommended diagnostic criteria for multiple sclerosis: guidelines from the International Panei on the Diagnosis of Multiple Sclerosis, Ann Neurol 50:121-127). Os critérios de McDonald incluem o uso da evidência de MRI de comprometimento do CNS ao longo do tempo a serem utilizados no diagnóstico da esclerose múltipla, na ausência de diversos ataques clínicos. O tratamento eficaz da esclerose múltipla pode ser avaliado de diversas maneiras. Os seguintes parâmetros podem ser utilizados para aferir a eficácia do tratamento. Dois exemplos de critérios incluem: EDSS (escala de estado de deficiência prolongada), e a aparência de exacerbações em MRI (ressonância magnética). A EDSS é um meio para atingir o grau de deficiência clínica devido a MS (Kurtzke, Neurology 33:1444, 1983). Os oito sistemas funcionais são avaliados quanto ao tipo e gravidade da lesão neurológica. Resumidamente, antes do tratamento, os pacientes são avaliados quanto a falha nos seguintes sistemas: cerebelos, piramidais, tronco cerebral, sensoriais, intestino e bexiga, visuais, cerebrais e outros. Os acompanhamentos são realizados em intervalos definidos. A escala varia de 0 (normal) a 10 (morte devido a MS). A queda de uma etapa completa indica um tratamento eficaz (Kurtzke, Ann. Neurol. 36:573-79, 1994).

As exacerbações são definidas conforme o aparecimento de um novo sintoma que seja atribuível a MS e acompanhadas por uma anormalidade neurológica adequada nova (IFNB MS Study Group, supra). Além disso, a exacerbação deve durar pelo menos 24 horas e será precedida de estabilidade ou melhora de pelo menos 30 dias. Em resumo, os pacientes recebem um exame padrão neurológico pelos clínicos. As exacerbações são leves, moderadas ou graves, de acordo com as mudanças na Escala de ava- liação neurológica (Sipe e outros Neurology 34:1368, 1984). São determinadas a taxa anual de exacerbação e a proporção de pacientes livres de exacerbação. A terapia pode ser considerada eficaz se houver uma diferença estatisticamente significativa na taxa ou proporção de pacientes livres de exacerbação ou livres de recaída entre o grupo tratado e o grupo placebo para qualquer uma destas medidas. Além disso, o tempo para a primeira exacerbação e a duração da exacerbação também pode ser medido. A medida da eficácia da terapia a este respeito é a diferença estatisticamente significativa no tempo até à primeira exacerbação ou a duração e gravidade no grupo tratado em comparação ao grupo de controle. Um período livre de e-xacerbação ou livre de recaída superior a um ano, 18 meses ou 20 meses é particularmente significativo. A eficácia da administração de um primeiro agente e, opcionalmente, um segundo agente, também pode ser avaliada com base em um ou mais dos seguintes critérios: frequência de células T reativas com MBP determinada por diluição restrita, a resposta de proliferação de linhas de células T reativas com MBP e clones, os perfis de citocinas de linhas de células T e clones de MBP estabelecidos a partir de pacientes. A eficácia é indicada pela diminuição na frequência de células reativas, a redução na incorporação de timidina com peptídeo alterado em relação ao nativo e uma redução do TNF e IFN-a.

As medidas clínicas incluem a taxa de reincidência em um intervalo de um a dois anos e uma mudança no EDSS, incluindo o tempo de progressão da linha de base de uma unidade de 1,0 no EDSS que persiste por seis meses. Em uma curva de Kaplan-Meier, um atraso na progressão sustentada de deficiência mostra a eficácia. Outros critérios incluem uma mudança na área e volume de imagens em T2 na ressonância magnética e do número e volume de lesões determinadas por imagens realçadas por gado-línio. A ressonância magnética pode ser usada para medir lesões ativas usando imagens realçadas por gadolínio-DTPA (McDonald e outros Ann.

Neurol. 36:14, 1994) ou a localização e a extensão das lesões usando técnicas ponderadas em T2. Em resumo, são obtidas ressonâncias magnéticas de referência. O mesmo plano de imagem e a mesma posição do pacienie são utilizados em cada estudo posterior. O posicionamento e as sequências de imagens podem ser escolhidas para maximizar a detecção da lesão e facilitar o rastreamento da lesão. O mesmo posicionamento e as sequências de imagens podem ser usados em estudos posteriores. A presença, localização e extensão das lesões de MS podem ser determinadas por radiologistas. As áreas de lesões podem ser descritas e somadas parte por parte para a área total da lesão. Três análises podem ser feitas: a comprovação de novas lesões, a taxa de aparecimento de lesões ativas, variação percentual da área da lesão (Paty e outros Neurology 43:665, 1993). A melhora devido à terapia pode ser estabelecida por uma melhora estatisticamente significativa em um paciente em relação à linha de base ou em um grupo tratado versus um grupo placebo.

Alguns sintomas associados à esclerose múltipla, que podem ser tratados com os métodos descritos aqui, incluem neurite óptica, diplopia, nistagmo, dismetria ocular, oftalmoplegia internuclear, movimento e som de fosfenos, defeito pupilar aferente, paresia, monoparesia, paraparesia, hemi-paresia, quadraparesia, plegia, paraplegia, hemiplegia, tetraplegia, quadra-plegia, espasticidade, disartria, atrofia muscular, espasmos, cãibras, hipoto-nia, clonus, mioclonia, mioquimia, síndrome de pernas inquietas, pé caído, reflexos disfuncionais, parestesia, anestesia, neuralgia, dor neuropática e neurogênica, Hermitte, disfunção proprioceptiva, neuralgia do trigêmeo, ata-xia, tremor de intenção, dismetria, ataxia vestibular, vertigem, ataxia do discurso, distonia, disdiadococinesia, micção frequente, espasticidade da bexiga, flacidez da bexiga, dissinergia detrusor-esfincteriana, disfunção erétil, anorgasmia, frigidez, constipação, urgência fecal, incontinência fecal, depressão, disfunção cognitiva, demência, alterações de humor, labilidade e-mocional, euforia, síndrome bipolar, ansiedade, afasia, disfasia, cansaço, sintoma de Uhthoff, refluxo gastroesofágico e distúrbios do sono.

Cada caso de esclerose múltipla apresenta um dos diversos padrões de apresentação e curso subsequente. Mais comumente, a esclerose múltipla se manifesta primeiro como uma série de ataques seguidos por remissões completas ou parciais como a diminuição misteriosa de sintomas, que só retorna posteriormente depois de um período de estabilidade. Isso é chamado esclerose múltipla remitente-recorrente(RR). A esclerose múltipla primária progressiva (PP) é caracterizada por um declínio clínico gradual, sem remissão distinta, embora possa haver paralisação temporária ou alívios secundários dos sintomas. A esclerose múltipla secundária progressiva (SP) começa com um curso remitente-recorrente seguido por um curso posterior primário-progressivo. Raramente, os pacientes podem ter um curso progressivo-recorrente (PR) em que a doença tem um caminho progressivo pontuado por ataques agudos. Algumas vezes, PP, SP e PR são agrupados e chamados de esclerose múltipla crônica progressiva.

Alguns pacientes experimentam a esclerose múltipla maligna, definida como uma diminuição rápida e implacável, resultando na incapacidade significativa ou mesmo na morte logo após o início da doença. Este declínio pode ser detido ou desacelerado pela administração de uma terapia de combinação aqui descrita.

Além de ou antes dos estudos em humanos, um modelo animal pode ser usado para avaliar a eficácia do uso dos dois agentes. Um exemplo de modelo de animal para a esclerose múltipla é o modelo de camundongo com encefalite experimental autoimune (EAE), por exemplo, como descrito em (Tuohy e outros (J. Immunol. (1988) 141: 1126-1130), Sobel e outros (J. Immunol. (1984) 132: 2393-2401), e Traugott (Celi Immunol. (1989) 119: 114-129). Os camundongo podem ser administrados como um primeiro e segundo agente aqui descrito antes da indução de EAE. Então, os camundongo são avaliados por critérios característicos para determinar a eficácia da utilização de dois agentes no modelo.

Outros distúrbios As formulações e métodos aqui descritos aqui podem também ser utilizados para tratar outras doenças inflamatórias, imunes ou autoimu- nes, por exemplo, inflamação do sistema nervoso central (por exemplo, além da esclerose múltipla, meningite, neuromielite óptica, neurosarcoidose, vas-culite do SNC, encefalite e mieliíe transversa), rejeição de enxerto de órgãos ou tecidos, doença de hospedeiro versus enxerto, lesão aguda do SNC, por exemplo, acidente vascular cerebral ou lesão da medula espinhal, doença renal crônica, alergia, por exemplo, asma alérgica; diabetes tipo 1, doenças inflamatórias intestinais, por exemplo, doença de Crohn, colite ulcerativa, miastenia grave, fibromialgia, doenças artríticas, por exemplo, artrite reuma-toide, artrite psoriática; doenças inflamatórias/imunes da pele, por exemplo, psoríase, vitiligo, dermatite, líquen plano, lúpus eritematoso sistêmico, síndrome de Sjõgren; cânceres hematológicos, mieloma múltiplo, por exemplo, leucemia, linfoma, tumores sólidos, tal como, sarcomas ou carcinomas, por exemplo, do pulmão, mama, próstata, cérebro e distúrbios fibróticos, por e-xemplo,, fibrose pulmonar, mielofibrose, cirrose hepática, glomerulonefrite proliferativa mesangial, glomerulonefrite crescente, nefropatia diabética e fibrose intersticial renal.

Por exemplo, uma formulação contendo uma alta concentração do anticorpo de ligação VLA 4 (por exemplo, natalizumab) pode ser administrada por via subcutânea ou intramuscular para tratar destas e de outras doenças inflamatórias, imunes ou autoimunes.

Geração de Anticorpos Os anticorpos que se ligam ao VLA 4 podem ser gerados por imunização, por exemplo, usando um animal ou por métodos in vitro como phage display. Todo ou parte do VLA 4 pode ser usado como um imunóge-no. Por exemplo, a região extracelular da subunidade a-4 pode ser usada como um imunógeno. Em uma modalidade, os animais imunizados contêm células produtoras de imunoglobulinas com locais de imunoglobulina humanos ou parcialmente humanos ou naturais. Em uma modalidade, os animais não-humanos incluem, pelo menos, uma parte de um gene de imunoglobulina humana. Por exemplo, é possível projetar linhagens de camundongo deficientes na produção de anticorpos em camundongo com grandes fragmentos de locais de Ig humanos. Usando a tecnologia de hibridomas, os anticor- pos monoclonais com antígenos específicos derivados de genes com a especificidade desejada podem ser produzidos e selecionados. Vide, por e-xemplo, XenoMouse®, Green e outros Nature Genetics 7:13-21 (1994), E.U. 2003-0070185, E.U. Pat. No. 5.789.650, e WO 96/34096.

Os anticorpos não-humanos para VLA 4 também podem ser produzidos, por exemplo, por um roedor. O anticorpo não-humano pode ser humanizado, por exemplo, conforme descrito na Patente US N° 6.602.503, EP N° 239 400, E.U. Pat. No. 5.693.761, e Pat. U.S. No. 6.407.213. A EP 239 400 (Winter e outros) descreve a alteração de anticorpos por substituição (dentro de uma determinada região variável) de suas regiões determinantes de complementaridade (CDRs) de uma espécie com outras. Os anticorpos CDR substituídos podem ser menos propensos a provocar uma resposta imunológica em seres humanos, em comparação com os anticorpos quiméricos verdadeiros porque os anticorpos substituídos por CDR contêm muito menos componentes não-humanos. (Riechmann e outros, 1988, Nature 332, 323-327; Verhoeyen e outros, 1988, Science 239, 1534-1536). Normalmente, os CDRs de um anticorpo murino substituído nas regiões correspondentes em um anticorpo humano e pelo uso da tecnologia de ácido nucleico recombinante produzem sequências de codificação de anticorpos substituídos desejados. Os segmentos de genes da região humana constante do isotipo desejado (em geral, gama I para CH e kappa para CL) podem ser adicionados e os genes humanizados de cadeia longa e cusrta podem ser coexpressos em células de mamíferos para produzir anticorpos humanizados solúveis.

Queen e outros, 1989 e WO 90/07861 descreveram um processo que inclui a escolha de regiões de estrutura humanas V por análise de computador para homologia de sequência de proteína ideal para a estrutura da região V do anticorpo murino original e modelagem da estrutura terciária da região V murina para visualizar resíduos de aminoácidos da estrutura que são susceptíveis a interação com os CDRs murinos. Estes resíduos de aminoácidos murinos são, então, sobrepostos à estrutura homóloga humana. Veja também a Pat. U.S. nos. 5.693.762, 5.693.761, 5.585.089 e 5.530.101.

Tempest e outros, 1991, Biotecnologia 9, 266-271, utiliza, como padrão, as estruturas da região V derivadas de NEWM e REI de cadeias longas e curtas, respectivamente, para o enxerto de CDR, sem a introdução radical de resíduos de rato. Uma vantagem de usar o método de Tempest e outros para construir anticorpos NEWM e REI com base em anticorpos humanizados é que as estruturas tridimensionais das regiões variáveis de NEWM e REI são conhecidas a partir da cristalografia de raio-X e, portanto, interações específicas entre os CDRs e resíduos da estrutura da região V podem ser modelados.

Os anticorpos não-humanos podem ser modificados para incluir as substituições que inserem sequências de imunoglobulina humana, por exemplo, os resíduos de aminoácidos humanos em posições específicas, por exemplo, em uma ou mais (como, pelo menos, cinco, dez, doze, ou todas) as seguintes posições: (no FR de domínio variável da cadeia curta) 4L, 35L, 36L, 38L, 43L, 44L, 58L, 46L, 62L, 63L, 64L, 65L, 66L, 67L, 68L, 69L, 70L, 71L, 73L, 85L, 87L, 98L, e/ou (no FR do domínio variável da cadeia longa) 2H, 4H, 24H, 36H, 37H, 39H, 43H, 45H, 49H, 58H, 60H, 67H, 68H, 69H, 70H, 73H, 74H, 75H, 78H, 91 Η, 92H, 93H, e/ou 103H (de acordo com a numeração Kabat). Vide, por exemplo, a Patente US N° 6.407.213.

Os anticorpos monoclonais totalmente humanos que se ligam ao VLA 4 podem ser produzidos, por exemplo, utilizando esplenócitos humanos in vitro, como descrito por Boerner e outros, 1991, J. Immunol., 147, 86-95. Eles podem ser preparados pelo repertório de clonagem, como descrito por Persson e outros, 1991, Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 88: 2432-2436 ou por Huang and Stollar, 1991, J. Immunol. Methods 141, 227-236; também a Patente US 5.798.230. Grande parte da literatura de "phage display" em humanos não-imunizados também pode ser utilizada para isolar anticorpos de alta afinidade que podem ser desenvolvidos como terapêutica humana usando a tecnologia de phage padrão (vide, por exemplo, Vaughan et al, 1996; Hoo-genboom e outros (1998) Immunotechnology 4:1-20; e Hoogenboom e outros (2000) Immunol Today 2:371-8; U.S. 2003-0232333).

Produção de anticorpos Os anticorpos podem ser produzidos em células procariotas e eucariotas. Em uma modalidade, os anticorpos (por exemplo, scFvs) são expressos em uma célula de levedura como Pichia (vide, por exemplo, Po-wers e outros (2001) J Immunol Methods. 251:123-35), Hanseula, or Sac-charomyces.

Em uma modalidade, os anticorpos, particularmente anticorpos de comprimento total, por exemplo, IgGs, são produzidos em células de mamíferos. Alguns exemplos de células hospedeiras de mamíferos para expressão recombinante incluem ovário de hamster chinês (células de CHO) (incluindo células dhfr- CHO, descrito no Urlaub e Chasin (1980) Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 77:4216-4220, usado com um marcador selecionável DHFR, por exemplo, conforme descrito em Mol (1982) Kaufman e Sharp. Biol. 159:601 621), linhas de células linfóciticas, por exemplo, células de mieloma NS0 e células de SP2 e células COS, K562, e uma célula de um animal transgênico, por exemplo, um mamífero transgênico. Por exemplo, a célula é uma célula epitelial mamária.

Além da sequência de ácido nucléico que codifica o domínio de imunoglobulina, os vetores de expressão recombinante podem transportar sequências de ácidos nucléicos, tais como as sequências que regulam a replicação do vetor nas células hospedeiras (por exemplo, origens de replicação) e genes marcadores selecionáveis. O gene marcador de seleção facilita a seleção das células hospedeiras em que o vetor foi introduzido (vide, por exemplo, a Pat. U.S. nos. 4.399.216, 4.634.665 e 5.179.017). Exemplos de genes marcadores de seleção incluem gene de redutase di-hidrofolato (DHFR) (para uso em células hospedeiras dhfr com a seleção/amplificação de metotrexato) e do gene neo (para a seleção de G418).

Em um exemplo de sistema para a expressão recombinante de um anticorpo (por exemplo, um anticorpo de comprimento total ou sua porção de ligação de antígeno), do mesmo um vetor de expressão recombinante de codificação, tanto o anticorpo de cadeia longa e o anticorpo de cadeia curta é introduzido em células CHO-dhfr por transfecção mediada por fosfato de cálcio. Dentro do vetor de expressão recombinante, os genes de anticor- pos de cadeia curta e cadeia longa são ligados a cada elemento reguiatório de promotor/intensificador (por exemplo, derivados de SV40, CMV, adenovírus e similares, tais como intensificador CMV/promotor AdMLP ou elemento reguiatório de promotor AdMLP/intensificador SV40) para conduzir altos níveis de transcrição dos genes. O vetor de expressão recombinante também carrega um gene DHFR, que permite a seleção de células CHO que foram transfectadas com o vetor usando a seleção/amplificação metotrexato. As células hospedeiras transformantes selecionadas são cultivadas para permitir que a expressão do anticorpo de cadeias curtas e longas e de anticorpos intactos seja recuperadas do meio de cultura. As técnicas de biologia molecular padrão são utilizadas para preparar o vetor de expressão recombinante, para transfecção das células hospedeiras, para seleção de transformantes, para cultura de células hospedeiras e para recuperar os anticorpos a partir do meio de cultura. Por exemplo, alguns anticorpos podem ser isolados por cromatografia de afinidade com uma proteína A ou proteína G. Por exemplo, os anticorpos de ligação VI_A-4 purificados, por exemplo, natalizumab, podem ser concentrados a aproximadamente 100 mg/mL a cerca de 200 mg/mL utilizando técnicas de concentração de proteína padrão.

Os anticorpos podem também incluir modificações, por exemplo, modificações que alteram a função Fc, por exemplo, para diminuir ou eliminar a interação com um receptor Fc ou com C1q ou ambos. Por exemplo, a região constante lgG1 humana pode ser transformada em um ou mais resíduos, por exemplo, um ou mais dos resíduos 234 e 237, por exemplo, de acordo com a numeração na Patente US N° 5.648.260. Outros exemplos de modificações incluem aqueles descritos na Patente US N° 5.648.260.

Para alguns anticorpos que incluem um domínio Fc, o sistema de produção de anticorpos pode ser projetado para sintetizar os anticorpos em que a região Fc é glicosilado. Por exemplo, o domínio Fc de moléculas IgG é glicosilada na asparagina 297 no domínio CH2. Esta asparagina é o local para modificação com os oligossacarídeos tipo biantennary. Esta glicosilação participa das funções de efeito mediadas por receptores Fcy e complementa C1q (Burton and Woof (1992) Adv. Immunol. 51:1-84; Jefferis e outros (1998) Immunol. Rev. 163:59-76). O domínio Fc pode ser produzido em um sistema de expressão de mamífero que glicosila o resíduo correspondente à asparagina 297. O domínio Fc também pode incluir outras modificações pós-translacionais eucarióticas.

Os anticorpos também podem ser produzidos por um animal transgênico. Por exemplo, a Patente US 5.849.992 descreve um método para expressão de um anticorpo na glândula mamária de um mamífero transgênico. Um transgene que inclui um promotor específico de leite e sequências de ácidos nucléicos de codificação do anticorpo de interesse, por exemplo, um anticorpo aqui descrito e uma sequência de sinais para a secreção é construído. O leite produzido pelas fêmeas dos mamíferos transgênicos inclui o anticorpo de interesse aqui secretado, por exemplo, um anticorpo aqui descrito. O anticorpo pode ser purificado a partir do leite, ou para algumas aplicações, usado diretamente.

Os anticorpos podem ser modificados, por exemplo, com uma fração que melhora a sua estabilização e/ou manutenção na circulação, por exemplo, no sangue, soro, linfa, lavado broncoalveolar ou de outros tecidos, por exemplo, pelo menos, 1,5, 2, 5, 10 ou 50 vezes.

Por exemplo, um anticorpo de ligação VLA 4 pode ser associado com um polímero, por exemplo, um polímero substancialmente não-antigênico, como um óxido polialquileno ou um óxido de polietileno. Os polímeros adequados variam substancialmente em peso. Polímeros com peso molecular médio variando de cerca de 200 a cerca de 35.000 daltons (ou cerca de 1.000 a cerca de 15.000 e 2.000 a cerca de 12.500) podem ser u-sados.

Por exemplo, um anticorpo de ligação VLA-4 pode ser conjugado com um polímero solúvel em água, por exemplo, um polímero hidrofílico de polivinila, por exemplo, polivinilálcool ou polivinilpirrolidona. Uma lista não-restrita de tais polímeros inclui homopolímeros de óxido de polialquileno como óxido de polietileno glicol (PEG) ou polipropileno glicóis, polióis polio-xietilenado, seus copolímeros e seus copolímeros em bloco, desde que a solubilidade em água dos copolímeros em bloco seja mantida. Os polímeros úteis adicionais incluem polioxialquilenos como polioxietileno, polioxipropile-no e copolímeros em bloco de polioxietileno e polioxipropileno (Pluronics); polimetacrilatos; carbômeros; polissacarídeos ramificados ou não- . ramificados que formam os monômeros de sacarídeos D-manose, D- e L-galactose, fucose, frutose, D-xilose, L-arabinose, ácido D-glucurônico, ácido siálico, ácido D-galacturônico, ácido D-manurônico (por exemplo, ácido poli-manurônico, ácido algínico), D-glucosamina, D-galactosamina, D-glicose e ácido neuramínico incluindo homopolissacarídeos e heteropolissacarídeos como a lactose, amilopectina, amido, amido de hidroxietila, amilose, sulfato de dextrano, dextrano, dextrina, glicogênio ou subunidade de polissacarídeo de ácido mucopolissacarídeo, por exemplo, ácido hialurônico; polímeros de álcoois de açúcar, como polissorbitol e polimannitol; heparina ou heparon.

Exemplos de segundos agentes Em alguns casos, as formulações aqui descritas, por exemplo, as formulações que contém uma alta concentração de anticorpo de ligação VLA-4 adequados para a administração SC ou IM, incluem um segundo a-gente, ou são administradas em combinação com uma formulação contendo um segundo agente.

Em uma aplicação, o anticorpo de ligação VLA-4 e o segundo agente são fornecidos como uma coformulação e a coformulação é administrada ao sujeito. É ainda possível, por exemplo, pelo menos 24 horas antes ou depois da administração do coformulação, administrar uma dose em separado da formulação de anticorpos altamente concentrados e, em seguida, uma dose de uma formulação contendo o segundo agente. Em outra aplicação, o anticorpo e o segundo agente são fornecidos como formulações distintas e a etapa de administração inclui administrar sequencialmente o anticorpo e o segundo agente. As administrações sequenciais podem ser fornecidas no mesmo dia (por exemplo, dentro de uma hora entre um e outro ou, no mínimo, 3, 6 ou 12 horas) ou em dias diferentes.

Geralmente, o anticorpo e o segundo agente são administrados como uma pluralidade de doses separadas no tempo. O anticorpo e o segundo agente são geralmente administrados de acordo com uma posologia. A posologia de um ou ambos pode ter uma periodicidade regular. A posologia para o anticorpo pode ter uma periodicidade diferente da posologia para o segundo agente, por exemplo, um pode ser administrado mais frequentemente do que outros. Em uma implementação, um dos anticorpos e o segundo agente são administrados uma vez por semana e os outros uma vez por mês. Em outra aplicação, um dos anticorpos e o segundo agente é administrado de forma contínua, por exemplo, durante um período de mais de 30 minutos, mas menos de 1, 2, 4 ou 12 horas e o outro é administrado como injeção. O anticorpo e o segundo agente pode ser administrado por qualquer método apropriado, por exemplo, por via subcutânea, intramuscular ou endovenosa.

Em algumas modalidades, cada um dos anticorpos e o segundo agente é administrado na mesma dosagem que cada um é receitado para monoterapia. Em outras modalidades, o anticorpo é administrado em uma dosagem que é igual ou inferior a uma quantidade necessária para a eficácia se for administrado sozinho. Da mesma forma, o segundo agente pode ser administrado em uma dosagem que seja igual ou inferior a uma quantidade necessária para a eficácia se for administrado sozinho.

Exemplos não-restritos de segundos agentes para tratamento de esclerose múltipla, em combinação com um anticorpo de ligação VLA-4 incluem: - interferons, por exemplo, o interferon beta-1a humano (por e-xemplo, AVONEX ou Rebif) e interferon beta-b (BETASERON®; beta interferon humano substituído na posição 17; Berlex/Chiron); acetato de glatiramer (também denominado Copolímero 1,-1; COPAXONE®; Teva Pharmaceutical Industries, Inc.); ■ Rituxan® (rituximab) ou outro anticorpo anti-CD20, por exemplo, que compete com liga um epitopo de sobreposição com rituximab; - mixtoxantrone (Novantrone ®, Lederle); * um quimioterápico, por exemplo, clabribina (LEUSTATIN ®), azatioprina (Imuran ®), ciclofosfamida (CYTOXAN®),ciclosporina-A, metotrexato, 4-aminopiridina e tizanidina; ■ um corticosteroide, por exemplo, metilprednisolona (MEDRO-NE®, Pfizer), prednisona; ■ uma imunoglobulina, por exemplo, Rituxan® (rituximabe); C-TLA4 Ig; alemtuzumab (MabCampath ®) ou daclizumab (um anticorpo que se liga CD25); ■ estatinas; - antagonistas TNF. O acetato de glatiramer é uma proteína formada por uma cadeia aleatória de aminoácidos - ácido glutâmico, lisina, alanina e tirosina (logo GLATiramero). Pode ser sintetizado na solução desses aminoácidos uma relação de aproximadamente 5 partes de alanina a 3 de lisina, 1,5 de ácido glutâmico e 1 de tirosina usando anidrido de ácido N-carboxiamino.

Os segundos agentes adicionais incluem anticorpos ou antagonistas de citocinas humanas ou outros fatores de crescimento, por exemplo, TNF, LT, IL 1, IL-2, IL 6, IL 7, IL 8, IL 12 IL 15, IL 16, IL 18, EMAP 11, GM CSF, FGF e PDGF. Além disso, os exemplos de segundos agentes incluem anticorpos para as moléculas da superfície celular, como CD2, CD3, CD4, CD8, CD25, CD28, CD30, CD40, CD45, CD69, CD80, CD86, CD90 ou seus ligantes. Por exemplo, daclizubmab é um anticorpo anti-CD25 que pode melhorar a esclerose múltipla.

Além disso, outros exemplos de anticorpos incluem anticorpos que fornecem uma atividade de um agente aqui descrito, por exemplo, um anticorpo que se envolve um receptor de interferon, por exemplo, um receptor de interferon beta. Normalmente, em implementações em que o segundo agente inclui um anticorpo que se liga a uma proteína alvo de outros VLA-4 ou outros que a integrina a-4, ou pelo menos um epitopo sobre VLA 4, com exceção dos reconhecidos pelos primeiros agentes.

Além disso, outros segundos agentes adicionais incluem: FK506, rapamicina, micofenolato mofetil, leflunomida, fármacos anti-inflamatórios não-esteróides (NSAIDS), por exemplo, os inibidores da fosfo-diesterase, agonistas de adenosina, antitrombóticos, complementam inibidores adrenérgicos, agentes que interferem com a sinalização por citocinas pró-inflamatórias como aqui descrito, IL-1 inibidores da enzima conversora (por exemplo, Vx740), anti-inibidores p7s, PSGL, TACE, inibidores de sinalização de células T tais como inibidores de cinase, inibidores de metalopro-teinases, sulfasalazina, azatloprina, 6 mercaptopurinas, inibidores da enzima conversora da angiotensina, receptores solúveis de citocinas e seus derivados, como aqui descrito, anti-inflamatórias (por exemplo, IL 4, IL 10, IL 13 e TGF).

Em algumas modalidades, o segundo agente pode ser usado para tratar um ou mais sintomas ou efeitos colaterais de MS. Tais agentes incluem, por exemplo, a amantadina, baclofeno, papaverina meclizina, hidroxizina, sulfametoxazol, ciprofloxacina, docusato, pemolina, dantroleno, a desmopressina, dexametasona, tolterodina, fenitoína, oxibutinina, bisacodil, venlafaxina, amitriptilina, metenamina, clonazepam, isoniazida, vardenafil, nitrofurantoína, psillium hidrofílico mucilóide, alprostadil, gabapentina, nor-triptilina, paroxetina, brometo de propantelina, modafinil, fluoxetina, fenazopiridina, metilprednisolona, carbamazepina, imipramina, diazepam, o sildenafil, bupropiona e sertralina. Diversos segundos agentes que são pequenas moléculas têm um peso molecular entre 150 e 5000 dáltons.

Exemplos de antagonistas TNF incluem anticorpos quiméricos, humanizados, humanos ou gerados in vitro (ou fragmentos de ligação de antígeno) ao TNF (por exemplo, TNF-α humano), tais como D2E7 (anticorpo TNF-α humano, Patente US 6.258.562; BASF), CDP-571/CDP-870/BAY-10-3356 (anticorpo anti-TNF-α humanizado; Celltech/Pharmacia),cA2 (anticorpo quimérico anti-TNF; REMICADE®, Centocor); fragmentos de anticorpos anti-TNF-α (por exemplo, CPD870); fragmentos solúveis de receptores TNF, por exemplo, p55 ou p75 receptores de TNF humano ou seus derivados, por exemplo, 75 kdTNFR-lgG (75 kD receptor TNF-lgG proteína de fusão, ENBREL®; Immunex; vide, por exemplo, Arthritis & Rheumatism (1994) vol. 37, S295, J. Invest. Med. (1996) vol. 44, 235A), p55 kdTNFR-lgG (55 kD receptor TNF-lgG proteína de fusão (LENERCEPT ™)); antagonistas da enzima, por exemplo, inibidores de enzima conversora TNF-alfa (TACE) (por exemplo, um derivado de ácido hidroxâmico alfa-sulfonila, WO 01/55112, e TACE inibidor N-hidroxiformamida GW 3333, -005 ou -022) e TNF-bp/s-TNFR (proteína de ligação TNF solúvel; vide, por exemplo, Arthritis & Rheumatism (1996) vo'. 39, No. 9 (suplemento), S284, Amer. J. Physiol. - Heart and Cir-culatory Physiology (1995) vol. 268, pp. 37-42).

Além do segundo agente, também é possível liberar ainda outros agentes ao sujeito. No entanto, em algumas modalidades, nenhuma proteína ou nenhum anticorpo biológico, que não seja o anticorpo de ligação VLA-4 e o segundo agente são administrados ao sujeito como uma composição farmacêutica. O anticorpo de ligação VLA 4 e o segundo agente podem ser os únicos agentes que são entregues por injeção. Em modalidades em que o anticorpo de ligação VLA e o segundo agente são proteínas recombinantes, o anticorpo de ligação VLA 4 e o segundo agente podem ser os únicos agentes recombinantes administrados ao sujeito ou pelo menos os únicos agentes recombinantes que modulam as respostas imunes e inflamatórias. Em ainda outras modalidades, o anticorpo de ligação VLA 4 sozinho é o único agente biológico ou recombinante administrado somente ao um sujeito.

Todas as referências e publicações incluídas neste documento são incorporadas para referência. Os exemplos a seguir não são destinados a ser restritos.

EXEMPLOS

Exemplo 1. Resumo do desenvolvimento da formulação intravenosa: armazenamento e estabilidade estrutural. Os experimentos foram realizados para determinar a estabilidade de armazenamento de uma formulação de natalizumab contendo 20 mg/ml em natalizumab em 10 mM de fosfato, 140 mM de cloreto de sódio, 0,02 de polissorbato 80 com pH 6. As taxas de variação da estabilidade durante o armazenamento da formulação foram calculadas para diferentes conjuntos de condições de armazenamento de dados (2 -8°C por 24 meses; 25°C por 12 meses; 40°C por 3 meses) . Os seguintes parâmetros foram utilizados para avaliar as taxas de variação de estabilidade em relação ao ponto de tempo inicial: percentual de agregação, a porcentagem de oxidação do resíduo de aminoácido de metionina 255, porcentagem de meio-anticorpo presente, porcentagem de H + L, a porcentagem de fragmentação, percentual de sialilação e porcentagem de isoformas com um baixo ponto isoelétrico (Pl). Os resultados dos ensaios de desenvolvimento da formulação de estabilidade no armazenamento são apresentados na Tabela 2. Estes resultados também fornecem uma base para estudos de estabilidade de formulações contendo concentrações mais elevadas de anticorpos.

Tabela 2-20 mg/mL da formulação: a estabilidade de armaze-namento._____________________________________ 1 Taxa calculada usando dados em tempo real de 24 meses. 2 Taxa calculada usando conjunto de dados de 12 meses. 3 Taxa calculada usando conjunto de dados de 3 meses. N/C - Nenhuma mudança, N/D -não-determinado. Várias técnicas biofísicas foram utilizadas para avaliar a estabilidade estrutural dos 20 mg/mL de formulação de natalizumab, incluindo a estrutura de acompanhamento de proteína secundária, por meio de calori-metria diferencial de varredura (DSC), monitoramento do ambiente de resíduos de triptofano através da fluorescência de triptofano com um espectrofo-tômetro de fluorescência, o acompanhamento da estrutura terciária da IgG vezes através de dicroísmo circular no UV distante, e acompanhamento do ambiente de resíduos aromáticos via espectrofotometria UV e visível. A estabilidade estrutural de 20 mg/mL da formulação foi otimizada, em parte, através do acompanhamento da Tm (ponto médio da curva de derretimento térmico) durante as experiências de fusão térmica de um calorímetro diferencial de varredura (Microcal, Amherst, MA) . O excesso de entalpia necessária para derreter a proteína em relação ao tampão de controle foi monitorado e os dados foram analisados por computador. A fluorescência de triptofano, conhecida por ser sensível à estabilidade estrutural, foi monitorada por espectrofotometria de UV em temperaturas crescentes para otimizar as condições de formulação. Novamente, a espectrofotometria de UV foi utilizada na região UV para medir a dobra IgG. Seis picos foram monitorados, e o segunda derivado do espectro UV-Vis de 230-320 nm foram calculados de forma a acompanhar o ambiente dos resíduos aromáticos como uma medida da estabilidade estrutural em várias formulações.

Os resultados de estudos estruturais realizados para avaliar a estabilidade do natalizumab a 20 mg/mL são apresentados na Tabela 3. Os estudos adicionais têm mostrado que natalizumab passa por nucleação heterogênea durante o bombeamento com bombas de pistões. Nenhuma mudança na qualidade de anticorpos foi observada após múltiplos ciclos de congelamento/descongelamento e os anticorpos se mantiveram estáveis após a agitação prolongada em frascos de 2-3 dias (dados apresentados no Exemplo 2). A natalizumab passa por agregação, oxidação e desaminação em presença de luz intensa e estresse e também é sensível à oxidação catalisada de metal quando armazenado em contato com aço inoxidável por longos períodos de tempo.

Tabela 3-20 mg/mL da formulação: estabilidade de armazena-mento._____________________________________________________________________ Exemplo 2: Experimentos de estabilidade acelerado de 150 mg/mL de formulações. Para determinar uma formulação adequada para concentrações mais elevadas de natalizumab, que seriam úteis para a administração subcutânea ou intramuscular, em particular, os experimentos de estabilidade acelerada foram realizados com 150 mg/mL de natalizumab em várias formulações. As formulações de teste foram submetidas à agitação em frascos de vidro tipo I USP/EP por vários dias em temperatura ambiente (cerca de 25° C). As formulações utilizadas em estudos de agregação são as seguintes. HCN = 20 mM de histidina, 240mM de glicina, pH 6. HOL = 20 mM de histidina 240 mM de glicerol, pH 6. PCN = 20 mM de fosfato, 240 mM de glicina, pH 6. PST = 20 mM de fosfato, 140 mM de NaCl, pH 6. As formulações de HOL e HCN possuem um adicional de 0,04% (p/v) de polissorbato 80 (p/v). As formulações de PCN e PST possuem um adicional de 0,02% (p/v) de polissorbato 80, exceto quando estão sendo testadas como uma variável de estabilidade (Experimento 3 abaixo). A cromatografia por exclusão de tamanho (SEC) foi usado para medir o percentual de agregação antes e depois da agitação.

Os níveis de agregados solúveis antes e após a agitação são mostrados na FIGURA 1. A porcentagem de agregados solúveis foi medida por SEC e a menor mudança na porcentagem de agregados solúveis foi observada na formulação de HOL (20 mM histidina, 240 mM glicerol, 0,04% (p/v) polissorbato 80, pH 6).

Os testes de estabilidade acelerada foram realizados como descrito acima e também foram monitoradas por absorbância UV para detecção de agregados. Um espectrofotômetro UV foi usado para monitorar a presença de agregados pré- e pós-agitação, medindo a absorvância a 340 nm para soluções de natalizumab em uma concentração de 150 mg/ml em HCN, HOL, PCN, PST e tampões, como descrito acima, em um espectrofotômetro UV/Vis com 1 centímetro de comprimento de via.

Os resultados do estudo de absorbância UV de agregação de natalizumab (150 mg/ml) em várias formulações pré e pós-agitação podem ser visto na FIGURA 2. As formulações de histidina (HOL e HCN) estavam mais estáveis sob estas condições, como evidenciado pela redução da absorvância a 340 nm, indicando menor agregação. Os precipitados insolúveis foram observados nas formulações de fosfato após o armazenamento durante 1 mês a 40°C, mas não foram observados nas formulações de histidina. A tabela 4 compara os atributos de estabilidade de 20 mg/ml e 150 mg/mL de formulações. Os resultados indicam que 20 mg/mL e 150 mg/mL de formulações são igualmente estáveis. _____________Tabela 4 - Atributos de estabilidade a 20 mg/ml e 150 mg/ml __ Exemplo 3. O polissorbato-80 tem um efeito solubilizante sobre natalizumab. Os efeitos solubilizadores de polissorbato-80 níveis em natalizumab a 20 mg/ml e 150 mg/mL foram investigados. O polissorbato-80 foi adicionado em diferentes concentrações (p/v) a 20 mg/ml e 150 mg/mL de natalizumab em tampão HOL. Os testes de estabilidade acelerada foram realizados ao agitar os materiais, como descrito acima, durante 8 semanas a 40°C. O percentual de agregação foi medido pela SEC, como descrito no exemplo acima. O efeito dos níveis de polissorbato-80 na estabilidade do natalizumab durante a agitação é mostrado na FIGURA 3, que mostra os dados para natalizumab a 135-165 mg/mL. O nível mínimo de polissorbato-80 de estabilidade durante os experimentos de agitação é de aproximadamente 0,03% (p/v) de 150 mg/mL de natalizumab e 0,02% (p/v) de 20 mg/mL de natalizumab. Assim, o polissorbato-80 preferencial de concentração varia de acordo com a concentração de anticorpos.

Exemplo: 4. Armazenamento a longo prazo do natalizumab em diferentes temperaturas. A estabilidade de 150 mg/mL de natalizumab em várias formulações e entre 2 -8° C e a 40° C foi avaliada através da medição do percentual de agregação através de cromatografia de exclusão por tamanho conforme descrito no Exemplo 2 acima. Natalizumab (150 mg/ml) estava em tampões de HCN, HOL, PCN, ou PST conforme descrito no Exemplo 2 acima. Os dados para natalizumab armazenados a 40° C foram coletados ao longo de cinco meses; o natalizumab armazenado entre 2 -8° C foi recolhido durante vinte e quatro meses.

Os resultados dos efeitos da estabilidade de formulações diferentes de natalizumab (150 mg/ml) para armazenagem a 40° C são mostrados na FIGURA 4; os resultados para 2 -8° C de armazenamento são mostrados na FIGURA 5. A uma concentração de 150 mg/mL, natalizumab na formulação PST (20 mM de fosfato, 140 mM de NaCl, 0,02% (P/v) de polissorbato 80, pH 6) agregou a pelo menos 40°C. Não foi observada diferença significativa na agregação quando o anticorpo foi armazenado a 2 -8°C por vinte e quatro meses. Estes dados demonstraram que a concentração elevada de natalizumab na formulação PST é particularmente estável.

Exemplo 5. Oxidação de metionina do natalizumab reduzida em formulações de fosfato A tendência de resíduos de metionina para oxidar em várias formulações de natalizumab (150 mg/ml), e os efeitos protetores de metionina livre (10 mM ) foram estudados por caracterização UV-HPLC de mapas de peptídeos de endoLysC. O Natalizumab (150 mg/mL) foi armazenado entre 2 -8° C e a 40°C por até vinte e quatro meses nas formulações de his- tidina e fosfato (HOL, HCN, PST, e PCN, conforme descrito no Exemplo 2). Os resultados, expressos em percentual de metioninas oxidadas, são mostrados na FIGURA 6. Para as formulações de fosfato, a oxidação de metioninas em natalizumab a 150 mg/ml foi significativamente reduzida e ocorreu a uma taxa mais baixa em ambas as faixas de temperatura, em comparação com as formulações de histidina.

Os efeitos anti-oxidantes de metionina livre em excesso (L-Met) nas formulações de histidina, como HOL, foram observados quando comparados com as formulações livres de metionina para natalizumab (150 mg/mL) armazenadas a 40° C durante um período de seis meses (FIGURA 7). A percentagem de oxidação de metionina foi quantificada conforme descrito acima. Assim, a formulação de natalizumab em 150 mg/ml em tampão fosfato teve maior proteção contra a oxidação da metionina e reduziu o número de excipientes necessários para a estabilidade a 150 mg/mL.

Exemplo 6. Taxa de fragmentação maior em tampões de histidina do que em tampões de fosfato. A taxa de fragmentação de natalizumab (20 mg/ml, 50 mg/mL, 75 mg/ml e 150 mg/ml) em várias formulações (HOL: 20 mM de histidina, 240 mM de glicerol, 0,04% (p/v) de polissorbato 80, pH 6, e PST: 20 mM de fosfato, 140 mM de NaCl, 0,02% (P/v) de polissorbato 80, pH 6) foi comparado com o tempo de 8 semanas. A fragmentação foi quantificada através da medição da percentagem de meio-anticorpo por não reduzir eletroforese capilar GelChip.

Os resultados dos estudos de fragmentação, que medem a porcentagem de meio-anticorpos ara natalizumab em quatro diferentes concentrações (20 mg/ml, 50 mg/mL, 75 mg/ml e 150 mg/ml) e em duas formulações diferentes (HOL : 20 mM de histidina, 240 mM de glicerol 0,04% (P/v) de polissorbato 80, pH 6, e PST: 20 mM de fosfato, 140 mM de NaCl, 0,02% (P/v) de polissorbato 80, pH 6) são mostrados na FIGURA 8. A taxa de clivagem é mais baixo do que em fosfato em formulações de histidina. O ambiente de formulação de histidina é mais reduzido do que o ambiente de formulação de fosfato (com base no potencial redox).

Exemplo 7. Exemplos de formulações de natalizumab adequados para a administração por via subcutânea ou intramuscular. Tendo em conta os experimentos acima, as formulações à base de fosfato foram determinadas para serem ideais em composições natalizumab altamente concentradas adequadas para administração de SC ou IM. As composições também podem ser diluídas e utilizadas para a administração IV. Os experimentos acima indicam que natalizumab é menos suscetível à oxidação quando armazenada em formulações de fosfato, tais como o PST e o PCN, do que quando armazenada nas formulações de histidina HOL e HCN. Portanto, a metionina livre normalmente não é exigida nas formulações de fosfato para evitar a oxidação do natalizumab (vide exemplo 5). A taxa de frag- \ mentação do natalizumab na formulação PST de fosfato também foi observada por ser menor do que na formulação de histidina HOL (vide Exemplo 6). Estabilidade de longa duração foi melhor apresentada nas formulações de fosfato PST e PCN do que nas formulações de histidina HOL e HCN.

Em algumas modalidades, cada um dos componentes das formulações fornecidas abaixo podem variar a 10%.

Exemplo: 8.

Exemplos de Formulação 150 mg/mL de natalizumab 10 mM de tampão de fostafo de sódio 140 mM de cloreto de sódio 0,04% (p/v) de polissorbato 80 pH ajustado para pH 6,0 ± 0,5 Exemplo: 9.

Exemplos de Formulação 150 mg/mL de natalizumab; 10 mM de tampão de fostafo de sódio 275 mM glicerol 0,04% (p/v) de polissorbato 80 pH ajustado para pH 6,0 ± 0,5 Exemplo 10.

Exemplos de Formulação 150 mg/mL de natalizumab; 10 mM de tampão de fostafo de sódio 160 mM de cloridrato de L-arginina 0,04% (p/v) de polissorbato 80 pH ajustado para pH 6,0 ± 0,5 Exemplo: 11 Exemplos de Formulação 150 mg/mL de natalizumab; 10 mM de tampão de fostafo de sódio 9% (P/v) de sacarose 0,04% (p/v) de polissorbato 80 pH ajustado para pH 6,0 ± 0,5 EXEMPLO 12 Exemplos de Formulação 150 mg/mL de natalizumab; 10 mM de tampão de fostafo de sódio 9% (p/v) de sorbitol 0,04% (p/v) de polissorbato 80 pH ajustado para pH 6,0 ± 0,5 Exemplo 13.

Exemplos de Formulação 150 mg/mL de natalizumab; 20 mM L-histidina 240 mM glocerol 10 MM L-metionina 0,04% (p/v) de polissorbato 80 pH ajustado para pH 6,0 ± 0,5 Exemplo 14.

Exemplos de Formulação 150 mg/mL de natalizumab; 20 mM L-histidina 240 mM glocerol 0,04% (p/v) de polissorbato 80 pH ajustado para pH 6,0 ± 0,5 Exemplo: 15 Dados de estabilidade. A formulação acima prevista no exemplo 8 foi armazenada em uma seringa de agulha e os dados de estabilidade foram medidos em vários pontos do tempo. Estes dados estão resumidos nos quadros abaixo e indicam que a formulação, quando armazenada em uma seringa a 5° C é estável durante pelo menos 18 a 24 meses.

Formulação 150 mg/mL de natalizumab; 10 mM de tampão de fosfato de sódio 0,04% (p/v) de polissorbato 80 pH ajustado para pH 6,0 ± 0,5 Agregados: Tempo, meses % de agregados durante o armazenamento a 5 ° C 0 0,7 1 0,7 2 0,7 3 0,7 6 0,8 8 0,9 12 1,0 18 1,1 Potência: Tempo, meses Potência relativa a 25° C 0 100 8 101 12 97 Isoformas pl menores: Tempo, meses % de isoformas pl menores durante o armazenamento a 5° C 0 15,2 1 15,4 2 15,1 3 15,6 6 13,5 8 13,3 12 15,0 Pureza (% de cadeias certas + pesadas): Tempo, meses % de H + L durante o armazenamento a 5° C 0 100 1 100 2 100 3 100 8 98,8 12 100 Diversas modalidades da invenção foram descritas. No entanto, ficará entendido que várias modificações podem ser feitas sem se afastar do conteúdo e escopo da invenção. Desta forma, outras modalidades estão dentro do escopo das seguintes reivindicações.

REIVINDICAÇÕES

Claims

1. Composição farmacêutica aquosa estável para administração subcutânea ou intramuscular a um indivíduo, caracterizada pelo fato de que a composição compreende natalizumabe a uma concentração de 120 a 190 mg/mL, um tampão fosfato a uma concentração de 5 mM a 30 mM, cloreto de sódio a uma concentração entre 100 mM e 200 mM, e polissorbato 80 em uma quantidade 0,01% a 0,1% (p/v), em que a composição tem um pH de 5,5 a 6,5, e em que o natalizumabe compreende a sequência de aminoácido de cadeia leve de SEQ ID NO: 1 e a sequência de aminoácido de cadeia pesada de SEQ ID NO: 2.

2. Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o tampão fosfato é um tampão fosfato de sódio.

3. Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o cloreto de sódio está presente a 140 mM.

4. Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o natalizumabe está presente em uma concentração de 150 mg/mL.

5. Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a composição compreende o natalizumabe a uma concentração de 140 a 160 mg/mL, tampão fosfato de sódio a uma concentração de 5 a 15 mM, cloreto de sódio a uma concentração de 130 a 150 mM, e um polisorbato 80 em uma quantidade de 0,01% a 0,1% (p/v), e em que a composição apresenta um pH de 5,5 a 6,5.

6. Composição de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a composição compreende natalizumabe a uma concentração de 150 mg/mL, tampão fosfato de sódio a uma concentração de 10 mM, cloreto de sódio a uma concentração de sódio 140 mM, e um polisorbato 80 em uma quantidade de 0,04% (p/v), e em que a composição apresenta um pH de 5,5 a 6,5.

7. Composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 5 a 6, caracterizada pelo fato de que é para uso como um medicamento.

8. Dose unitária, caracterizada pelo fato de que é uma dose unitária da composição como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 6, em que a dose unitária é de 0,25 a 1,5 mL.

9. Seringa pré-cheia, caracterizada pelo fato de que compreende a composição como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 6, em que a composição está na forma de uma solução líquida.

10. Seringa pré-cheia de acordo com a reivindicação 9, caracterizada pelo fato de que contém uma dose unitária de 0,25 a 1,5 mL da referida composição.