BRPI0904690A2 - processo e equipamento de coloração utilizado em bacteriologia - Google Patents

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    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
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Abstract

PROCESSO E EQUIPAMENTO DE COLORAçãO UTILIZADO EM BACTERIOLOGIA. A presente invenção se refere a um processo de coloração, utilizado em bacteriologia, capaz de padronizar, facilitar e agilizar o procedimento de coloração de Oram, evitando variações em seu processo. Ainda mais, se refere a um equipamento capaz de realizar dito processo. O processo compreende distintas etapas de colocação, com diferentes reagentes e tempos de contato com as lâminas de amostra. O equipamento compreende bombas peristálticas para o fornecimento de cada reagente, sensores para indicar a presença da lâmina, switches para indicar o tempo em que as bombas ficaram em funcionamento, um motor junto com um conjunto de engrenagens externas para fazer com que a lâmina se locomova para os processos de coloração, ventoinha para o auxílio de secagem da lâmina após o processo, botões para acionamentos e ligação de circuito e as lâmpadas para indicações de máquina em uso e falta de reagente, bem como tanque de escoamento de reagente.

Description

"PROCESSO E EQUIPAMENTO DE COLORAÇÃO UTILIZADO EMBACTERIOLOGIA"
A presente invenção se refere a um processo decoloração, utilizado em bacteriologia, capaz de padronizar,facilitar e agilizar o procedimento de coloração de Gram, evitandovariações em seu processo.
Ainda mais, se refere a um equipamento capaz derealizar dito processo.
INTRODUÇÃO
A maioria das colorações utilizadas embacteriologia tem por finalidade o diagnóstico presuntivo rápidodo processo infeccioso e também a prévia avaliação da qualidade daamostra.
A coloração de Gram é o método bacterioscópicomais importante e mais utilizado atualmente na bacteriologia e suafinalidade é a classificação de microrganismos com base em suascaracterísticas tintoriais, tamanho, forma e arranjo celular.
As bactérias são classificadas basicamente emdois grandes grupos: Gram-positivas e Gram-negativas.
No que diz respeito às característicastintoriais, as bactérias Gram-positivas coram-se em azul arroxeadoe as bactérias Gram-negativas coram-se em rosa.
A detecção de microrganismos na amostra é de sumaimportância, uma vez que pode indicar uma terapia antimicrobianadirecionada a um determinado grupo de patógenos e, também, anecessidade da realização de cultura com finalidade diagnosticae/ou epidemiológica.PROCESSO DE COLORAÇÃO
Para determinar o mecanismo envolvido no métodode coloração, vários conceitos têm sido apresentados, tais como:
- As bactérias Gram-positivas e Gram-negativaspossuiriam diferentes afinidades com o corante primário cristal devioleta;
A existência de diferentes graus depermeabilidade na parede dos microrganismos Gram-positivos e Gram-negativos.
Tanto a espessura da parede celular, quanto àsdimensões dos espaços intersticiais, por exemplo, "diâmetro doporo", parecem ser determinantes do resultado final da coloraçãode Gram.
Segundo esse conceito, quando as estruturascelulares são cobertas pelo Cristal Violeta, todas se coram emroxo. Após este processo a lâmina recebe uma solução limpante pararemover o excesso de Cristal Violeta. Com a adição do lugol,também chamado de mordente, ocorre a formação do completo iodo-pararosanilina. Esta reação tem a propriedade de fixar o coranteprimário nas estruturas coradas. Algumas estruturas perdem a corvioleta rapidamente, quando se aplica um agente descorante, comoálcool etilico (solução descolorante), enquanto outras perdem suacor mais lentamente ou não perdem a cor. A fucsina/ safranina coraas estruturas que foram descoradas.
As bactérias que têm a parede celular compostapor mureina (peptideoglicano-peptideo de ácido n-acetil murâmico) ,durante o processo de descoloração com álcool etilico, retém ocorante. Já as bactérias com parede celular compostapredominantemente por ácidos graxos (lipopolissacarideos elipoproteinas) perdem o complexo iodo-pararosanilina, assumindo acor do corante de fundo.
DESCRIÇÃO DO ESTADO DA TÉCNICA
Os processos de coloração conhecidos da técnicaatual apresentam alguns inconvenientes.
A técnica de coloração de Gram geralmenterespeita um protocolo de ações que a padroniza. Contudo, hávariantes nesse procedimento relacionadas aos tempos de execuçãoda coloração e à utilização de lavagem com água em dadas etapasque podem ou não interferir na visualização das estruturascoradas.
Um problema da técnica atual se refere ao fato deque o mesmo é realizado manualmente, ficando susceptível adiversos fatores externos que podem afetar o processo.
No processo manual, não há precisão no tempo decontato do reagente com a lâmina de coloração.
Por ser realizado manualmente, o processo ficadependente da intervenção de um operador para executá-lo. Porisso, pode ainda ocorrer a aplicação em excesso de reagente parauma única amostra, acarretando em desperdício de reagente ealteração nos resultados.
No processo manual conhecido da técnica atual,existe o contato direto do operador e lâmina no meio do processo.
Ainda mais, por se tratar de um processo manual,existe a possibilidade de erro na coloração e as lâminas saemúmidas ao final do processo de coloração.OBJETIVOS DA INVENÇÃO
O processo de coloração e o respectivoequipamento para realizá-lo têm como objetivo padronizar,facilitar e agilizar o procedimento de coloração de Gram evitandovariações em seu processo, padronizando o procedimento da seguintemaneira:
- Quantidade de cada corante na amostra;
- Quantidade de solução limpante na amostra;
- Quantidade de descorante na amostra;
- Tempo de contato do corante na amostra;
- Tempo de Contato do descorante na amostra;
- Tempo de término de cada amostra.
Evita-se assim a variação da técnica existente noprocesso manual. Desta forma, temos lâminas com coloraçãohomogêneas, melhorando a análise e diagnóstico das célulasanalisadas.
O processo de coloração da presente invenção érealizado por um equipamento, através do qual se obtém um tempopadronizado no contato do reagente com a lâmina.
Outra vantagem da presente invenção se refere aofato de que o processo depende apenas da alimentação das lâminasno equipamento de coloração por um operador, sendo que não hácontato do mesmo durante a execução do processo.
Ainda mais, o equipamento efetua a aplicaçãonecessária de reagente para cada amostra, evitando-se odesperdício de reagentes no processo.
Por se tratar de um processo automatizado, não háa possibilidade de erro na coloração, resultando em uma coloraçãohomogênea, sendo ainda que as lâminas saem secas ao final doprocesso de coloração.
DESCRIÇÃO RESUMIDA DOS DESENHOS
A figura 1 apresenta um diagrama de blocosindicando as etapas do processo de coloração da presente invenção,realizado a partir de um equipamento de coloração.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
A presente invenção se refere a um processo decoloração utilizado em bacteriologia, com o objetivo realizar acoloração de Gram, de forma automatizada, por meio de umequipamento para sua realização, sendo que dito processocompreende as seguintes etapas:
- alimentação do equipamento de coloração com okit para coloração Gram;
- preenchimento das tubulações do equipamento comos reagentes;
- introdução das lâminas a serem coradas no rolodo equipamento de coloração;
- primeira coloração das lâminas;
- remoção do excesso de reagente;
- segunda coloração das lâminas;
- descoloração das lâminas;
- terceira coloração das lâminas;
- deposição das lâminas já secas na gaveta delâminas.
0 processo de coloração é realizado por meio deum equipamento, composto por bombas peristálticas para ofornecimento de cada reagente, sensores para indicar a presença dalâmina, switches para indicar o tempo em que as bombas ficaram emfuncionamento, um motor junto com iam conjunto de engrenagensexternas para fazer com que a lâmina se locomova para os processosde coloração, ventoinha para o auxilio de secagem da lâmina após oprocesso, botões para acionamentos e ligação de circuito e aslâmpadas para indicações de máquina em uso e falta de reagente.
São cinco reagentes que compõem o Kit decoloração, utilizado pelo aparelho:
1. Cristal Violeta: Corante primário cora ocitoplasma de púrpura, independentemente do tipo de célula.
2. Solução de Limpeza: Possui apenas a finalidadede remoção de excesso de Cristal Violeta.
3. Solução de Iodo-Lugol : Mordente - aumenta aafinidade entre o violeta de cristal e a célula e forma com ocorante um complexo insolúvel dentro da célula.
4. Solução Descolorante - Álcool etilico, acetonaou ambos: solvente lipidico.
5. Solução de Safranina / Solução de Fucsina:Corante contrastante - safranina ou fucsina básica: cora ocitoplasma de vermelho das células gram-negativas que formadescoradas.
Ao ligar o equipamento, as lâminas começam a semovimentar, através de eixos de rosca sem fim que estão acopladosem um conjunto de engrenagens, sendo que em uma delas esta fixadoum motor AC de IRPM. Com a lâmina em movimento ela chega aoprimeiro ponto onde ativa o primeiro sensor de presença, a bombado primeiro reagente, Cristal Violeta, preenche a lâmina com oreagente. Após aproximadamente 1 minuto com o reagente em contatocom a lâmina esse reagente escorre por meio de um rasgo na mesa, esegue para a Solução Limpeza, que atua de forma continua durante apassagem da lâmina, apenas removendo o excesso do corante primárioe escorrendo por um outro rasgo na mesa, a lâmina segue então parao segundo reagente, o Lugol, que também preenche a lâmina poraproximadamente 1 minuto assim que o terceiro sensor de presença éativado. O reagente é novamente escorrido por meio de um rasgo namesa. Ao ativar o quarto sensor de presença, a bomba começa ainjetar Álcool Absoluto, de uma forma continua, atuando durantequase toda a passagem da lâmina.
Por último vem a Safranina, ou Fucsina, quetambém preenche a lâmina inteira só que o contato com a lâmina émenor, de apenas 30 segundos, ao ativar o quinto sensor depresença, que após isso também escorre através de um rebaixo namesa.
Cada um dos sensores acima da mesa funciona emsérie com o sensor de tempo de atuação na engrenagem, de modo queapenas quando ambos os sensores estão acionados, a placa decontrole da bomba envia o sinal para que a bomba seja acionada.
0 equipamento possui uma lâmpada de liga/desligaque é ligada em paralelo com o botão para ligar a máquina, de modoque acionando-se o botão e ligando-se a máquina a luz deveráacender sempre. Já a lâmpada de nivel é ligada em série com osensor da bandeja, que é ativado ou não através da mola de tração,de modo que quanto menos reagente há, mais leve a bandeja fica,acionando o sensor e ligando a lâmpada.
A alimentação das tubulações com reagentes éacionada por meio de uma tecla Pulso, sendo que a tensão irádireto para as placas e fará com que as bombas funcionem todas aomesmo tempo, preenchendo a mangueira com os reagentes e deixando amáquina pronta para atuar.
O equipamento conta com um sistema de transportedeslizante, com espirais de locomoção. São duas espirais paralelascom rotações opostas que locomovem a lâmina no decorrer da mesa,além de controlar o tempo de locomoção da lâmina.
A mesa abrange todo o espaço entre as espirais.Possui guias elevadas para facilitar o movimento da lâmina duranteo processo de coloração. Feita com liga de aço inoxidável e comdesign moldado para controle de entrada e saida dos reagentes.
O tanque de escoamento está localizado na partefrontal do aparelho, logo abaixo da mesa, tendo a função dearmazenar o excedente de reagente utilizado no processo.
O equipamento possui cinco bombas, uma para cadareagente. Cada bomba possui uma placa própria para controle defunções.
Os sensores de presença das lâminas são ativadospela própria lâmina quando esta chega a determinado ponto após otempo de espera programado. Eles atuam, liberando o reagente,sendo que cada bomba possui um sensor que fica localizado na partesuperior da mesa.
O equipamento compreende ainda um depósito delâminas que as armazena após o processo de coloração.

Claims (23)

1.) "PROCESSO DE COLORAÇÃO UTILIZADO EMBACTERIOLOGIA", caracterizado por compreender as seguintes etapas:- alimentação do equipamento de coloração com okit para coloração Gram;- preenchimento das tubulações do equipamento comos reagentes;- introdução das lâminas a serem coradas no rolodo equipamento de coloração;- primeira coloração das lâminas;- remoção do excesso de reagente;- segunda coloração das lâminas;- descoloração das lâminas;- terceira coloração das lâminas;- deposição das lâminas já secas na gaveta delâminas.
2.) "PROCESSO", de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de que o reagente utilizado na primeiraetapa de coloração das lâminas é o Cristal Violeta.
3.) "PROCESSO", de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de que o reagente utilizado na remoção deexcesso de reagente das lâminas é a Solução Limpante.
4.) "PROCESSO", de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de que o reagente utilizado na segundaetapa de coloração das lâminas é a solução Iodo-Lugol.
5.) "PROCESSO", de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de que a solução descolorante utilizada nadescoloração das lâminas é o álcool etilico, acetona ou ambos.
6.) "PROCESSO", de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de que o reagente utilizado na terceiraetapa de coloração das lâminas é a solução de safranina oufucsina.
7.) "PROCESSO", de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de que o reagente da primeira coloraçãodas lâminas fica em contato com as mesmas por 1 minuto.
8.) "PROCESSO", de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de que o reagente da segunda coloração daslâminas fica em contato com as mesmas por 1 minuto.
9.) "PROCESSO", de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de que o reagente da terceira coloraçãodas lâminas fica em contato com as mesmas por 30 segundos.
10.) "PROCESSO", de acordo com a reivindicação 1,caracterizado pelo fato de que a secagem das lâminas se dá pormeio de um sistema de secagem composto por ventoinha, quedireciona o fluxo de ar, funcionando de modo continuo.
11.) "EQUIPAMENTO PARA A COLORAÇÃO DE LÂMINAS",caracterizado por compreender bombas peristálticas para ofornecimento de cada reagente, sensores para indicar a presença dalâmina, switches para indicar o tempo em que as bombas ficaram emfuncionamento, um motor junto com um conjunto de engrenagensexternas para fazer com que a lâmina se locomova para os processosde coloração, ventoinha para o auxilio de secagem da lâmina após oprocesso, botões para acionamentos e ligação de circuito e aslâmpadas para indicações de máquina em uso e falta de reagente,bem como tanque de escoamento de reagente.
12.) "EQUIPAMENTO", de acordo com a reivindicação- 11, caracterizado pelo fato de que as lâminas se movimentamatravés de eixos de rosca sem fim que estão acoplados em umconjunto de engrenagens.
13.) "EQUIPAMENTO", de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que cada um dos sensores acima damesa funciona em série com o sensor de tempo de atuação naengrenagem, de modo que apenas quando ambos os sensores estãoacionados, a placa de controle da bomba envia o sinal para que abomba seja acionada.
14.) "EQUIPAMENTO", de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de que a alimentação das tubulaçõescom reagentes é acionada por meio de uma tecla Pulso, sendo que atensão vai direto para as placas e faz com que as bombas funcionemtodas ao mesmo tempo, preenchendo a mangueira com os reagentes edeixando a máquina pronta para atuar.
15.) "EQUIPAMENTO", de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo fato de compreender um sistema detransporte deslizante, com espirais de locomoção, com duasespirais paralelas com rotações opostas que locomovem a lâmina nodecorrer da mesa, além de controlar o tempo de locomoção dalâmina.
16.) "EQUIPAMENTO", de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que a mesa abrange todo o espaçoentre as espirais, possuindo guias elevadas para facilitar omovimento da lâmina durante o processo de coloração.
17.) "EQUIPAMENTO", de acordo com a reivindicação 16, caracterizado pelo fato de que dita mesa é feita com liga deaço inoxidável e com design moldado para controle de entrada esaída dos reagentes.
18.) "EQUIPAMENTO", de acordo com a reivindicação-11, caracterizado pelo fato de que o tanque de escoamento estálocalizado na parte frontal do aparelho, logo abaixo da mesa,armazenando o excedente de reagente utilizado no processo.
19.) "EQUIPAMENTO", de acordo com a reivindicação-11, caracterizado pelo fato de compreender cinco bombas, uma paracada reagente, sendo que cada bomba possui uma placa própria paracontrole de funções.
20.) "EQUIPAMENTO", de acordo com a reivindicação-11, caracterizado pelo fato de que os sensores de presença daslâminas são ativados pela própria lâmina quando esta chega adeterminado ponto após o tempo de espera programado.
21.) "EQUIPAMENTO", de acordo com a reivindicação-11, caracterizado pelo fato de compreender um depósito de lâminasque as armazena após o processo de coloração.
22.) "EQUIPAMENTO", de acordo com a reivindicação-11, caracterizado pelo fato de compreender uma lâmpada deliga/desliga que é ligada em paralelo com o botão para ligar amáquina.
23.) "EQUIPAMENTO", de acordo com a reivindicação-11, caracterizado pelo fato de compreender uma lâmpada de nívelligada em série com o sensor da bandeja, que é ativado ou nãoatravés da mola de tração, de modo que quanto menos reagente há,mais leve a bandeja fica, acionando o sensor e ligando a lâmpada.
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