BRPI0906094B1

BRPI0906094B1 - composto

Info

Publication number: BRPI0906094B1
Application number: BRPI0906094-4A
Authority: BR
Inventors: Weir-Torn Jiaang; Yu-Sheng Chao; Ting-Yueh Tsai; Tsu Hsu
Original assignee: National Health Research Institutes
Priority date: 2008-03-05
Filing date: 2009-02-25
Publication date: 2019-11-12
Also published as: CA2717518A1; JP5586484B2; EP2252582B1; KR101634656B1; RU2494094C2; HK1149261A1; RU2010140627A; KR20100129754A; TWI385163B; AU2009222198B2; EP2252582A2; TW200938530A; BRPI0906094A2; EP2252582A4; WO2009111239A3; AU2009222198A1; BRPI0906094B8; ZA201006329B; ES2515194T3; JP2011513410A

Abstract

composto a presente invenção refere-se aos compostos de pirrolidina descritos e aos métodos para sua utilização para a inibição de dipeptidil peptidase iv e o tratamento de diabetes tipo ii.

Description

O presente pedido reivindica a prioridade ao Pedido de Patente Norte-americano n°. 61/033.877, depositado em 05 de março de 2008, cujo conteúdo é aqui incorporado a título de referência em sua totalidade.

ANTECEDENTES

A dipeptidil peptidase IV (DPP-IV), um membro da família da prolil peptidase, divide determinados dipeptídeos na penúltima posição dos amino términos das proteínas. Contribui para a rápida degradação do peptídeo 1 do tipo glucagon (GLP-1), um hormônio do tubo digestivo produzido pelas células L endócrinas intestinais em resposta à ingestão de alimento.

O GLP-1, por sua vez, inibe a secreção de glucagon e estimula a liberação de insulina dependente de glicose do pâncreas (Zander M, et al. Lancet 2002, 359:824-830). Foi mostrado que a inibição da DPP-IV resultou na secreção intensificada de insulina, reduziu os níveis de glicose no plasma e incrementou a função das células β pancreáticas (Pederson R.A., et al. Diabetes 1998, 47:1253-1258; e Ahren B, et al. Diabetes Care 2002, 25:869-875). Os inibidores de DPPIV são, portanto, candidatos de drogas para o diabetes tipo II.

Os estudos recentes indicam que os inibidores de DPP-IV eram inibidores potenciais da dipeptidil peptidase VIII (DPP-VIII), outro membro da família da prolil peptidase, e que a inibição de DPP-VIII resultou em efeitos colaterais, por exemplo, toxicidade e trombocitopenia (Diabetes, 2005, 54:2988-2994). Desse modo, os inibidores de DPP-IV, como os candidatos de droga do diabetes tipo II, possuem, preferivelmente, quase nenhuma atividade inibitória contra a DPP-VIII.

Petição 870190094436, de 20/09/2019, pág. 14/48

2/27

DESCRIÇÃO RESUMIDA DA INVENÇÃO

A presente invenção é baseada em uma descoberta surpreendente que um grupo de compostos de pirrolidina inibe a DPP-IV.

Um aspecto da presente invenção refere-se aos compostos de pirrolidina da fórmula (I) mostrados abaixo:

I em que cada um de R¹, R², R³, R⁴, R⁵ e R⁶, independentemente, são H, halo, nitro, ciano, amino, hidróxi, alquila, haloalquila, alcóxi, arilcxi, aralquila, ciclila, heterociclila, arila ou heteroarila; R⁷ é alquilaou heteroarila e R⁸ é H ou alquila; ou R⁷ e R⁸, juntamente com o átomo de nitrogênio, a que são unidos, formam um anel monocíclico ou bicíclico de três a dez membros, saturado ou insaturado, opcionalmente substituído por halo, CN, NO₂ ,. OR', alquila, arila, heteroarila, haloalquila, hidroxialquila, alcoxialquila, -C(O)R', -SR', -S(O)R',

S(O)₂R', -NR'R, -C(O)OR', -C(O)NR'R, -OC(O)R', -NR'C(O)R, -NR'C (O) OR ou -R'C(O)NRR ' ; cada um de R', R e R ' , independentemente, é H, alquila ou arila; cada um de m e n, independentemente, é 0, 1, 2 ou 3; e X é NR^a, em que R^a é H, alquila ou arila.

Os compostos da fórmula (I) podem ter adicionalmente uma ou mais das seguintes características: X é NH; m é 1; n é 1; cada um de R¹ e R² é H; cada um de R³ e R⁴ é alquila (por exemplo, metila); cada um de R⁵ e R⁶ é H; e R⁷ e R⁸ . são alquila, em que R⁷ e R.⁸, juntamente com o átomo de nitrogênio a que são unidos, formam um anel monocíclico ou bicíclico de três a dez membros, saturado ou insaturado, opcionalmente substituído por halo, CN, NO₂, -OR', alquila,

3/27 arila, heteroarila, haloalquila, hidroxialquila, alcoxialquila, -C(O)R' , -SR⁷, -S(Ó)R', -S(O)₂R', -NR'R, C(O)OR', -C(O)NR’R, -OC(O)R', -NR'C(O)R, -NR'C(0)OR' OU R'C (O) NRR ' ; cada um de R', R e R ' , independentemente, é H, alquila ou arila. Os exemplos de anel mencionado anteriormente incluem, mas sem ficar a eles limitados, pirrolidinila, tiazolidinila, piperidinila, morfolinila, tiomorfolinila, piperizinila, 1,2,3,6-tetraidropiridinila, isoindolinila e 7-azabiciclo[2.2.1]heptan-7-ila substituídas ou não-substituídas.

Outro aspecto da presente invenção refere-se aos compostos de pirrolidina da fórmula (II) mostrados abaixo:

R⁷

R¹ O ^{K h}

II em que R¹ é H ou CN; cada um de R², R³, R⁴, independentemente, é H, halo, nitro, ciano, amino,

R⁵ e R⁶, hidróxi, alquila, haloalquila, hidroxialquila, alcoxialquila, alcóxi, arilóxi, aralquila,

R⁷ é ciclila, heterociclila, arila ou heteroarila;

H, alquila, hidroxialquila ou alcoxialquila;

CR^aR^a' , NR^a,

1, 2,

3, 4

0, 1 ou 2 ;

O ou

S, em que independentemente, é H, halogênio, S ou CR^b(NR^b,R^b' cada um de R^a

R^a' , em que cada alquila ou . um de R^b, arila;

Rr^b' é O,

R^b , independentemente, são H, alquila ou arila.

Os compostos da fórmula podem ter adicionalmente uma ou mais das seguintes características:

CR^aR^a' ; R¹ é CN; X é CH(NH₂);

cada um de R³ e independentemente, é H ou alquila; cada R⁷ é alquila (por exemplo,

R⁴, um de R⁵ e R⁶ é H; e metila), hidroxialquila (por exemplo, hidroximetila) ou alcoxialquila (por exemplo, metoximetila).

4/27

São mostrados abaixo os compostos exemplificadores da presente invenção:

5/27

O termo alquila refere-se, na presente invenção, a um hidrocarboneto linear ou ramificado, contendo um a dez átomos de carbono. Os exemplos de grupos alquila incluem, mas sem ficar a eles limitados, metila, etila, n-propila, ipropila, n-butila, i-butila e t-butila.

O termo alcoxi refere-se a uma O-alquila. O termo alcoxialquila refere-se a um grupo alquila substituído por um ou mais grupos alcóxi.

termo haloalquila refere-se a um grupo alquila substituído por um ou mais grupos halo. O termo hidroxialquila refere-se a um grupo alquila substituído por um ou mais grupos hidróxi.

termo arila refere-se a um carbono 6 monocíclico, carbono 10 bicíclico, sistema de anel aromático tricíclico do carbono 14 em que cada anel pode ter 1 a 4 substituintes. Os exemplos de grupos arila incluem, mas sem ficar, a. eles limitados, fenila, naftila e antracenila. Q termo ariloxi refere-se a uma 0-arila. O termo aralquila refere-se a um grupo alquila substituído por um grupo arila.

O termo ciclila. refere-se a um . grupo hidrocarboneto cíclico parcialmente insaturado e saturado que tem três a doze carbonos. Os exemplos de grupos ciclila incluem, mas sem ficar a eles limitados, ciclopropila, ciclobutila,. ciclopentila, ciclopentenila, cicloexila,

6/27 cicloexenila, cicloeptila e ciclooctila.

O termo heteroarila refere-se a um sistema de anel de cinco a oito membros monocíclico, de oito a doze membros bicíclico ou de onze a catorze membros tricíclico aromático que tem um ou mais heteroátomos (tais como O, N ou S) . Os exemplos de grupos heteroarila incluem piridila, furila, imidazolila, benzimidazolila, pirimidinila, o tienila, quinolinila, indolila e tiazolila. O termo heteroaralquila refere-se a um grupo alquila substituído por um grupo heteroarila.

termo heterociclila refere-se a um sistema de anel de cinco a oito membros monocíclico, de oito a doze membros bicíclico ou de onze a catorze membros tricíclico não-aromático que tem um ou mais heteroátomos (tais como 0, N ou S) . Os exemplos de grupos heterociclila incluem, mas ' sem ficar a eles limitados, piperazinila, pirrolidinila, dioxanila, morfolinila e tetraidrofuranila.

Alquila, ciclila, heterociclila, arila, heteroarila, aralquila, heteroaralquila, alcóxi e arilóxi mencionados na presente invenção incluem porções substituídas e não-substituídas. Os exemplos de substituintes incluem, mas sem ficar a eles limitados, halo, hidroxila, amino, ciano, nitro, mercapto,. alcoxicarbonila, amido, carbóxi, alcanossulfonila, alquilcarbonila, carbamide, carbamila, carboxila, tioureido, tiocianato, sulfonamido, alquila, alquenila, alquinila, alquilóxi, arila, heteroarila, ciclila, heterociclila, em que alquila, alquenila, alquinila, alquilóxi, arila, ciclila, heteroarila e heterociclila podem ser adicionalmente substituídas.

anel monocíclico mencionado na presente invenção é substituído ou não-substituído, mas não pode ser fundido com outro anel aromático ou não-aromático.

Os compostos de pirrolidina descritos acima incluem

7/27 seus sais e pró-drogas f arrhaceuticamente aceitáveis, se aplicável. Tal sal pode ser formado entre um grupo iônico positivamente carregado em um composto de pirrolidina (por exemplo, amônio) e em um contra-íon negativamente carregado (por exemplo, trifluoroacetato). Do mesmo modo, um grupo iônico negativamente carregado em um composto de pirrolidina (por exemplo, carboxilato) também pode formar um sal com um contra-íon positivamente carregado (por exemplo, sódio, potássio, cálcio ou magnésio). Os compostos de pirrolidina podem conter uma ligação dupla não-aromática e um ou mais centros assimétricos. Desse modo, podem ocorrer como misturas racêmicas, enantiômeros únicos, diastereômeros individuais, misturas diastereoméricas e formas isoméricas cis ou tráns. Todas tais formas isoméricas são contempladas. .

Os compostos de pirrolidina descritos acima podem ser utilizados para inibir a DPP-IV. Conseqüentemerite,. outro aspecto da presente invenção refere-se a um método .para inibir a DPP-IV com um ou mais dos compostos de.pirrolidina. Como a inibição da DPP-IV resulta em níveis reduzidos' de glicose no sangue e na secreção intensificada de insulina, os compostos da presente invenção também podem ser utilizados para tratar o diabetes tipo II. Desse modo, a presente invenção engloba adicionalmente um método para o tratamento do diabetes .tipo II pela administração a um indivíduo com necessidade do mesmo de uma quantidade eficaz de um ou mais compostos de. pirrolidina. ,

Também está dentro do âmbito da. presente invenção uma composição farmacêutica que contém um ou„ mais, dos compostos de. pirrolidina descritos acima, .bem como a utilização da composição para o tratamento do diabetes tipo II e para a manufatura de um medicamento para o tratamento mencionado acima.

Detalhes de muitas realizações da invenção são

8/27 apresentados na descrição detalhada e. nas reivindicações abaixo. Outras características, objetivos e vantagens da invenção ficarão evidentes a partir da descrição detalhada e das reivindicações. , . .

DESCRIÇÃO DETALHADA • Os compostos de pirrolidina da presente, invenção podem se-r sintetizados pelos métodos bem conhecidos no estado da_; técnica. Os métodos exemplificadores para a sintetização destes compostos são mostrados nos Esquemas 1 a 3 abaixo.

w + w=amina

Esquema 1

(i)HOBt EDC, CHjCIj. rt.

(i)TFA, rt.

TFA

D

O esquema 1 ilustra uma via sintética para os compostos da fórmula (I) . O material de partida (A) é um β aminoácido N-protegido. Reage com a amina (W) na presença de um agente de acoplamento, por exemplo, N-(3 dimetilaminopropil)-N-etilcarbodiimida (EDC), seguido pela desproteção, para obter a amida (B) , que tem um grupo amino livre. A amida é acoplada então com a pirrolidina (C) para formar o composto desejado (D) . O β-aminoácido N-protegido (A) e a pirrolidina (C) podem ser preparados pelos métodos conhecidos. Vide, por exemplo, J. Med. Chem. 2006, 49, 373;

9/27

J, Med. Chem. 1988, 31,

92; J. Med. Chem. 2002, 45, 2362; e

Bioorg. Med. Chem. 2004, 12, 6053.

Esquema 2

N

O Esquema 2 ilustra uma via sintética para os compostos da fórmula (II). Neste esquema, o composto initial é o ácido dicarboxílico amino-substituído (K) , em que· um grupo amino e um de dois grupos carbóxi são protegidos’. O composto (K) é acoplado com uma amina para prover o composto L, que é hidrolisado para se obter o ácido (M). O ácido (M) é acoplado com a L-prolinamida para prover o composto (Ν)ύ O composto (N) é desidratado seguido pela remoção do giupo amino protegido para se obter o produto desejado (O). Ãlguns compostos utilizados na síntese acima podem ser preparados \ pelos métodos bem conhecidos no estado da técnica. Vide, por exemplo, Bioorg. Med. Chem. 2004, 12, 6053.

Os esquemas acima são providos somente para finalidades ilustrativas. Um elemento, versado na técnica poderia sin,tetizar todos os compostos de pirrolidina da presente invenção através de uma via mostrada nos esquemas com ou sem modificações. As transformações químicas sintéticas e as metodologias dos grupos protetores (proteção e desproteção) úteis na sintetização dos compostos . de pirrolidina.aplicáveis são conhecidas no estado da técnica e incluem, por exemplo,, aquelas descritas em R. Larock, Comprehensive Organic Transformations, VCH Publishers (1989);

10/27

T. W. Greene e P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3^a Ed., John Wiley and Sons (1999); L. Fieser e M. Fieser, Fieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1994); e L. Paquette, ed. , Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis, John Wiley and Sons (1995) e edições subseqüentes dos mesmos.

Os compostos de pirrolidina obtidos desse modo podem ser adicionalmente purificados pela cromatografia de coluna, pela cromatografia líquida de alto desempenho ou pela cristalização.

A presente invenção abrange um método para inibir a DPP-IV pelo contato com uma quantidade eficaz de um ou mais dos compostos de pirrolidina descritos acima. A presente invenção também engloba um método para o tratamento do diabetes tipo II pela administração a um indivíduo - com necessidade do mesmo de uma quantidade eficaz de um ou mais dos compostos de pirrolidina descritos acima. O termo tratamento refere-se à aplicação ou à administração.' do composto de pirrolidina a um indivíduo que sofre de diabètes tipo II, que tem um sintoma do diabetes tipo II ou uma predisposição ao diabetes tipo II, com a. finalidade de curar, sarar, mitigar, aliviar, alterar, remediar, melhorar, superar ou afetar a doença, o sintoma ou a predisposição. Uma quantidade eficaz refere-se à quantidade do composto de pirrolidina que é requerida para conferir o efeito desejado no... indivíduo. As quantidades eficazes variam, ’como reconhecido pelos elementos versados na técnica, dependendo da via. de administração, da utilização do excipiente e da possibilidade de co-utilização com outros tratamentos terapêuticos, tais como a utilização de outros agentes ativos.

Para praticar o método de tratamento da presente invenção, uma composição que tem um ou mais dos compostos de pirrolidina descritos acima pode ser administrada parenteralmente, oralmente, nasalmente, retalmente, topicamente ou bucalmente. O termo parenteral, tal· como utilizado na presente invenção, refere-se à injeção subcutânea, intracutânea, intravenosa, intramuscular, intraarticular, intra-arterial, intrassinovial, intraesterhal, intratecal, intralesional ou intracranial, bem como qualquer técnica apropriada de infusão.

Uma composição injetável estéril pode ser uma solução ou uma suspensão parenteralmente aceitável em um diluente ou em um solvente não-tóxico, tal como uma solução em 1,3-butanodiol. Entre os veículos e solventes aceitáveis que podem ser empregados estão o manitol e a água. Álém disso, os óleos fixos são empregados convencionalmente · comq um solvente ou meio de suspensão (por exemplo, monoj ou diglicerídeos sintéticos). Os ácidos graxos, tais como o ácido oléico e os seus derivados de glicerídeo, são úteis na preparação dos injetáveis, assim como os óleos farmaceuticamente aceitáveis naturais, tais como o azeite de oliva ou o óleo de rícino, especialmente em suas versões polioxietiladas. Estas soluções ou suspensões oleosas também podem conter um diluente ou um dispersante de álcool de cadeia longa, carboximetil celulose ou agentes de dispersão similares. Outros tensoativos geralmente utilizados tais como Tweens ou Spans ou outros agentes de emulsificação ou intensificad.ores da _; bipdisponibilidade que são utilizados geralmente na manufatura de formas de dosagem farmaceuticamente aceitáveis sólidas, liquidas, ou outras formas de dosagem também podem ser utilizados para a finalidade de produção de formulações.

Uma composição para a administração oral. pode ser qualquer forma de dosagem oral aceitável, incluindo cápsulas, comprimidos, emulsões e suspensões, dispersões e soluções

12/27 aquòsas. No caso de comprimidos, os carreadorés geralmente utilizados -incluem a lactose e o amido · de milho. Agentes lubrificantes, tais como o estearato de magnésio, também’ são tipicamente’ adicionados. Para a administração oral em uma forma de cápsula, os diluentes úteis incluem a lactose e o amidó dé milho seco. Quando as suspensões ou emulsões aquòsas são administradas oralmente, o ingrediente ativo pode * ser suspenso ou dissolvido em uma fase oleosa combinada com òs agentes de emulsificação ou suspensão. Caso desejado, determinados agentes adoçantes, flavorizantes ou corantes podem ser adicionados.

Uma composição nasal em aerossol ou para inalação pode ser preparada de acordo com as técnicas bem conhecidas no estado da técnica de formulação farmacêutica. Por. exemplo, tal composição pode ser preparada como uma solução em solução salina, empregando álcool benzílico ou outros conservantes apropriados, promotores de absorção para intensif ic.ar a biodisponibilidade, fluorocarbonos e/ou outros agentes-.de solubilização ou de dispersão conhecidos no estado ç da técnica. Uma composição que tem um composto de pirrolidina atiyo também pode ser administrada na forma de supositórios para a administração retal.

. 0 . carreador na composição farmacêutica deve ser aceitável no sentido de que é compatível com o ingrediente ativo da composição (e preferivelmente, capaz de estabilizar o ingrediente, ativo.) e não deletério ao indivíduo a’ ser tratado. Um ou mai.s agentes solubilizantes podem... ser utilizados como excipientes farmacêuticos, para a .aplicação de um composto de pirrolidina ativo. Os exemplos de outros carreadores incluem óxido de silício coloidal, estearato de magnésio,, celulose, lauril sulfato de sódio e D&C Yellow # 10. .

Os compostos de pirrolidina da presente invenção

13/27 podem ser utilizados sozinhos ou conjuntamente com outra droga para o tratamento do diabetes tipo II. Os exemplos de drogas para o diabetes incluem, mas sem ficar a eles limitados, um secretagogo de insulina (sulfonilureias ou meglitinidas) , um sensibilizador de insulina (tiazolidinedionas) , uma biguanida ou um inibidor de cxglicosidase.

Os compostos de pirrolidina da presente invenção podem ser preliminarmente selecionados por meio de um ensaio in vitro quanto a uma ou mais de suas atividades desejadas, por exemplo, inibindo a DPP-IV. Os compostos que demonstram atividades elevadas na seleção preliminar podem ser adicionalmente selecionados quanto à sua eficácia por meio de ensaios in vivo. Por exemplo, um composto de teste pode ser administrado a um animal (por exemplo, um modelo/ de camundongo) que tem o diabetes tipo II e seus efeitos terapêuticos são então atingidos. Com base nos resultados, uma faixa de dosagem e uma via de administração apropriada também podem ser determinadas.

Os exemplos específicos abaixo devem ser interpretados como meramente ilustrativos e não limitadores do restante da descrição de qualquer maneira. Sem elaboração adicional, acredita-se que o elemento versado na técnica pode, com base nesta descrição, utilizar a presente invenção em sua extensão mais completa. Todas as publicações aqui citadas são incorporadas a título de referência em sua totalidade.

Exemplo 1: Síntese de (2S,4S)-1-[2-(1,l-dimetil-3oxo-3-pirrolidin-l-il-propilamino)-acetil]-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo (composto 1) (1) Preparação de ácido 3-amino-3-metil-l-: pirrolidin-1-il-butan-1-ona trifluoroacético

A uma mistura de ácido 3 -(ter-butoxicarbonilamino)

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3-metilbutanóico (0,87 g, 4 mmol), a pirrolidina (0,28 g, 4 mmol) e hidrato de 1-hidroxibenzotriazol (hidrato de HOBt, 0,54 g, 4 mmol) em CH₂C1₂ (10 ml) foi adicionado cloridreto de N-etil-N'-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida (EDC, 0,77 g, 4 mmol). A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente por doze horas, diluída com CH₂C1₂ (40 ml) e lavada com bicarbonate de sódio aquoso saturado. (20 ml) , ácido cítrico aquoso 0,5 N (20 ml) e salmoura (20 ml) . A camada orgânica foi separada, secada sobre sulfato de magnésio, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para resultar em um óleo viscoso bruto. O óleo bruto foi purificado por meio de cromatografia de evaporação (gel de silica, 40% de acetato de etila/hexanos) para se obter a amina N-Boc-protegida (1,03 g) como um óleo incolor.

Uma solução da amina acima em ácido trifluoroacético (TFA, 2 ml) foi agitada à temperatura ambiente por dez minutos e concentrada in vacuo para se obter para o ácido 3-amino-3-metil-l-pirrolidin-l-il-butan-l-ona trifluoroacético (1,08 g, rendimento total de 95%) como⁴. um óleo incolor que foi utilizado na etapa seguinte , sem purificação adicional.

(2) Preparação de (,2S, 4S)-1-[2-(1, l-dimetil-3-oxo3-pirrolidin^l-il-propilamino)-acetil]-4 -fluoro-pirrolidina2-carbonitrilo (composto 1)

A uma solução agitada de ácido 3-amino-3-metil-lpirrolidin-l-il-butan-l-ona trifluoroacético (0,28 g, 1 mmol) em THF anidro (5 ml) foi adicionado carbonato de potássio (0,55 g, 4 mmol) . Após agitação à temperatura ambiente por uma hora,, a mistura .foi filtrada através de um chumaço de Celite e enxaguada com acetato de etila (5 ml) . Ao material filtrado acima, foi adicionado (2S,4S)-1-(2-bromoacetil)-4fluoropirrolidina-2-carbonitrilo (0,12 g, 0,5 mmol) . e a mistura, de reação foi agitada, à temperatura ambiente sob

15/27 nitrogênio por doze horas. A maior parte do solvente foi removida sob pressão reduzida e. o resíduo foi dividido entre CH₂Cl-2 (20 ml) e H₂O (5 ml) . A camada aquosa foi extraída adicionalmente com CH₂C1₂ (10 ml) . As camadas orgânicas combinadas foram secadas sobre sulfato de. magnésio, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para resultar em um óleo viscoso bruto. O óleo bruto foi purificado por meio' de cromatografia (gel de silica, 4 a 10% de gradiente de CH₃OH/CH₂C1₂) para se obter o composto 1 (0,12 g, rendimento total de 74%) como um sólido branco.

NMR (CDC1₃, 300 MHz, δ) : (2/1 mistura de rotômeros de amida trans/cis) 5,53 (d, J = 9,0 Hz, 1/3H) , 5,49 (t, J = 3,3 Hz, 1/3H), 5,40 (t, J = 3,3 Hz, 1/6H), 5,32 (t, J = .3,3 Hz, 1/3H) , 5,22 (t, J = 3,3 Hz, 1/6H) , 4,95 ,.(d, J = 9,0 Hz, 2/3H) , 4,04 - 3,52 (m, 2H) , 3,48 - 3,39 (m, . 6H) ,

2,70 (t, J = 15,9 Hz, 1/3H) , 2,62 (t, J = 15,9 Hz, . 2/3H) ,

2,44 - 2,26 (m, 3H, singlet sobreposto em 2,39), 1,98 - 1,79 (m, 4H) , 1,22 (s, 6H) ;

MS. (ES⁺) m/z calculado para Ci_SH₂₅FISÍ4O₂ : 324,-39;

encontrado: 325,2 (M+H), 347,2 (M+Na).

Exemplo 2 : Síntese de (2S,4S)-1-[2-(1,l-dimetil-3morfolin-4-il-3-oxo-propílamino)-acetil]-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo (composto 2)

O composto 2 foi preparado de uma maneira similar àquela descrita no Exemplo 1..

NMR (CDCI3, 300 MHz, δ): (2/1 de mistura de rotômeros de amida trans/cis) 5,50 (t, J = 3,3 Hz, 1/3H), 5,42 (t, J = 3,3 Hz, 1/6H), 5,38 (d, J = 9,0 Hz, 1/3H), 5,32 (t, J = 3,3 Hz, 1/3H)., 5,23. (t, J = 3,3 Hz, 1/6H) , 4,94 (d, J = 9,0 Hz, 2/3H) , 4,12 - 3,35 (m, 12H, singlet sobreposto em 3,41), 2,70. (t, J = 15,6 Hz, 1/3H) , 2,65 (t, J = 15,6 Hz, 2/3H) , 2,50 - 2,18 (m, 3H) , 1,20. .(s, 6H) ;

MS (ES⁺) m/z calculado para Ci₆H₂₅FN₄O3 : 340,39;

16/27 encontrado: 341,2 (M+H), 363,2 (M+Na).

Exemplo 3: Síntese de 3-[2-((2S,4S)-2-ciano-4fluoro-pirrolidin-l-il)-2-oxo-etilamino]-3-metil-N-piridin-3il-butiramida (composto 3)

O composto 3 foi preparado de uma maneira similar àquela descrita no Exemplo 1.

^TH NMR (CDC1₃, 300 MHz, δ) : (3/1 mistura de rotômeros de amida trans/cis) 11,12 (brs, 3/4H), 11,01 (brs,

1/4H),	8,66 - 8,63	(m, 1H) , 8,28 (d,	J = 45 Hz, 1H), 8,22 -
8,14 (	[m, 1H) , 7,26	- 7,21 (m, 1H),	5,53 (t, J = 3,3	Hz,
3/8H),	5,46 (t, J	= 3,3 Hz, 1/8H) ,	5,36 (t, J = 3,3	Hz,
3/8H),	5,29 (t, J	= 3,3 Hz, 1/8H) ,	4,98 (d, J = 9,3	Hz,
3/4H),	4,80 (d, J =	9,3 Hz, 1/4H), 3,	97 - 3,61 (m, 2H),	3,46
(idem,	J. = 16,8 Hz,	2H) , 2,79 (t, J	= 15,3 Hz, 1/4H),	2,71
(t, J	= 15,3 Hz,	3/4H) , 2,50 - 2,	39 (m, 3H, sobrepôs 0

singlet 2 2,45, 2,44), 1,26 (s, 3H), 1,24 (s, 3H);

MS (ES⁺) m/z calculado para Ci₇H₂₂FN₅O₂: 347,39; encontrado: 348,2 (M+H), 370,2 (M+Na).

Exemplo 4: Síntese de (2S,4S)-4-fluoro-l-{2-[3-((r) 3-hidroxi-pirrolidin-l-il)-1,l-dimetil-3-oxo-propilamino]acetil}-pirrolidina-2-carbonitrilo (composto 4)

O composto 4 foi preparado de uma maneira similar àquela descrita no Exemplo 1.

NMR (CDCI3, 300 MHz, δ): (2/1 mistura de rotômeros de amida trans/cis) 5,50 (t, J = 3,3 Hz, 1/3H) , 5,40 (t, J = 3,3 Hz, 1/6H), 5,38 (d, J = 9,0 Hz, 1/3H), 5,32 (t,.J = 3,3 Hz, 1/3H),5,23 (t, J = 3,3 HZ, 1/6H), 4,94 (d, J = 9,0 Hz, 2/3H) , 4,47 - 4,21 (m, 1H),.3,99 - 3,22 (m, 8.H) , 2,84..(brs, oh), 2,69 (t, J = 15,3 Hz, 1/3H) , 2,61 (t, J = 15,3 Hz, 2/3H) , 2,50 - 2,15 (m, 3H) , 2,04-1,89 .(m, 2H). , 1,21 (s, 3H), .1,18 (s, 3H);

MS (ES⁺) m/z calculado para Ci₆H₂₅FN₄O3 : 340,39;

encontrado: 341,2 (M+H), 363,2 (M+Na).

17/27

Exemplo 5: Síntese de (2S,4S)-4-fluorc-1-(2-(2metil-4- (4-.(metilsulfonil) piperazin-l-il) -4-oxobutan-2ilamino)acetil)pirrolidina-2-carbonitrilo (composto 5)

O composto 5 foi preparado de uma maneira similar 5 àquela descrita no Exemplo 1.

Exemplo 6: Síntese de (2S,4S)-4-fluoro-1-(2-(4((R)-3-fluoropirrolidin-l-il)-2-metil-4-oxobutan-2ilamino)acetil)pirrolidina-2-carbonitrilo (composto 6)

O composto 6 foi preparado de uma maneira similar àquela descrita no Exemplo 1.

¹H NMR (CDCI3, 300 MHz, δ) :	(3/1	de	mistura de
rotômeros de amida trans/cis) 5,50 (t,	J =	3,0	Hz, 3/8H),
5,41 (t, J = 3,0 Hz, 1/8H), 5,3 (t, J =	3, 0	Hz,	3/8H), 5,25

(t, J = 3,0 Hz, 1/8H), 5,23 (d, J = 9,3 Hz, 1/4H) , 4., 92 (d, . J = 9,3 Hz, 3/4H) , 4,00 - 3,40 (m, 8H, singlet sobreposto em

3,46), 3,31 - 3,20 (m, 4H) , 2,80 (s, 9/4H) , 2,7.8 (s, 3/4H) ,

2,69	(t, J =	15,	6 Hz, 1/4H) , 2,64 (t, J =. 15,6 Hz, 3/4H) ,
2,54	- 2,23	(m,	3H, singlet sobreposto em 2,51), 1,24 (s,
6Η) ;
2 0	MS	(ES⁺	) m/z calculado para Ci₇H28FN₅O₄S : 417,50;

encontrado: 418,2 (M+H), 440,1 (M+Na).

Exemplo 7 : Síntese de 3-[2-((2S,4S)-2-ciano-4fluoro-pirrolidin-l-il)-2-oxo-etilamino]-3-metil-N-(5-metiltiazol-2-il)-butiramida (composto 7)

O composto 7 foi preparado de uma maneira similar àquela descrita no Exemplo 1.

¹H . NMR .(CDC1₃, 300 MHz, δ).:· (3/1 mistura de rotôm.eros de amida trans/cis) 6,48 (s, 1H) , 5,53 (t, J _t- 3,3 Hz, 3/8H), 5,45 (t, J = 3,3 Hz, 1/8H) , 5,36 (t, J = 3,.3 Hz,

3/8H) , 5,32 (t, J = 3,3 Hz, 1/8H) , 4,89 (d, J = 9,0 Hz,

3/4H) , 4,87 (d, J= 9,0 Hz, 1/4H) , 4,12 - 3,63 (m, 2H) , 3,52 -.3,39 (m, 2H) , 2,75 (t, J = 15,6 Hz, 1/4H) , 2,70 (t, J =

15,6 Hz, 3/4H) , 2,60 - 2,26 (m, 6H, doublet sobreposto em

18/27

2,51, J = 2,4 Hz e urn singlet em 2,31), 1,25 (s, 3H) , 1,22 (s, 3H);

MS (ES⁺) m/z calculado para Ci₆H₂2FN₅O2S : 367,44;

encontrado: 368,1 (M+H) , 390,1 (M+Na).

Exemplo 8: Síntese de 3-[2-((2S,4S)-2-ciano-4fluoro-pirrolidin-l-il)-2-oxo-etilamino]-N-(6-metoxi-piridin-

3-il)-3-metil-butiramida (composto 8)

O composto 8 foi preparado de uma maneira similar àquela descrita no Exemplo 1.

^TH NMR (CDC1₃, 3 00 MHz, δ) : (3/1 de mistura de rotômeros de amida trans/cis) 10,76 (brs, 3/4H), 10,59 (brs, 1/4H) , 8,29 - 8,26 (m, 1H) , 7,96 (dd, J = 9,0, 3,0 Hz,1H) ,

6.70 (d, J = 9,0 Hz, 1H) , 5,54 (t, J = 3,6 Hz, 3/8H) ,5,46 (t, J = 3,6 Hz, 1/8H), 5,36 (t, J = 3,6 Hz, 3/8H), 5,29(t, J = 3,6 Hz, 1/8H) , 4,98 (d, J = 9,0 Hz, 3/4H) , 4,80' (d, J= 9,0

Hz, 1/4H), 4,13 - 3,55 (m, 5H, singlet sobreposto em 3,89),

3,45 (idem, J = 16,2 Hz, 2H) , 2,79 (t, J = 15,3 Hz, 1/4H) ,

2.71 (t, J = 15,3 Hz, 3/4H)., 2,49 - 2,23 (m, . 3H„ sobrepôs o singlet 2 em 2,44, 2,42), 1,26 (s, 3H) , 1,24 (sqlH);

MS (ES⁺) m/z calculado para Ci₈H₂₄FN₅O3 : 377,41;

encontrado: 378,2 (M+H), 400,1 (M+Na).

Exemplo 9: Síntese de (2S,4S)-l-{2-[3-(3,6-diidro2H-piridin-l-il)-1,l-dimetil-3-oxo-propilamino]-acetil}-4fluoro-pirrolidina-2-carbonitrilo (composto 9) composto 9 foi preparado de uma maneira similar àquela descrita no Exemplo 1.

¹H NMR (CDCI3, 300 MHz, δ).: . (2/1 de mistura de rotômeros de amida trans/cis) 5,89 - 5,77 (m,. 1H) , 5,69. 5,60 (m, 1H) , 5,49 (t, J = 3,3 Hz, 1/3H), 5,46 (d, J = 9,3 Hz, 1/3H), 5,40 (t, J = 3,3 Hz, 1/6H), 5,31 (t, J = 3,3 Hz, 1/3H) , 5,22 (t, J = 3,3 Hz, 1/6H) , 4,92 (d, J = 9,3 Hz, 2/3H) , 4,02-3,39 (m, 8H) , 2,6.7 (t, J = 15,3 Hz, 1/3H) , 2,61 (t, J = 15,3 Hz, 2/3H) , 2,48 - 2,12 (m, 5H) , .1,19 (s, -3H),

19/27

1,18 (s, 3H);

MS (ES⁺) m/z calculado para C17H25FN4O2: 336,40;

encontrado: 337,2 (M+H), 359,2 (M+Na).

Exemplo 10: Síntese' de (2S,4S)-1-[2-(1,l-dimetil-35 oxo-3-tiazolidin-3-il-propilamino)-acetil]-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo (composto 10)

O composto 10 foi preparado de uma maneiía similar àquela descrita no Exemplo 1.

^TH NMR (CDCI3, 300 MHz, δ) : (2/1 de mistura de rotômeros de amida trans/cis) 5,52 (t, J = 3,3 Hz, 1/3H),

5,43 (t, J = 3,3 Hz, 1/6H), 5,36 (t, J = 3,3 Hz, 1/3H), 5,33 (d, J = 9,0 Hz, 1/3H), 5,25 (t, J = 3,3 Hz, 1/6H), 4,96 (d, J = 9,0 Hz, 2/3H), 4,57 (s, 1H), 4,51 (s, 1H), 4,02 - 3,04 (m,

6H, singlet sobreposto em 3,43), 3,10 (t, J = 6,3 Hz, 1H) , 15 3,00 (t, J = 6,3 Hz, 1H) , 2,75 (t, J =. 15,6 Hz,. 1/3H) , 2,64 (t, J = 15,6 Hz, 2/.3H) , 2,51 - 2,24 (m, 3H, sobrepôs o singlet 2 em 2,47, 2,46), 1,23 (s, 6H);

MS (ES⁺) m/z calculado para Ci₅H₂3FN₄O₂S < 342,43; encontrado: 343,1 (M+H), 365,1 (M+Na).

Exemplo 11: Síntese de (2S,4S)-1-[2-(1,l-dimetil-3oxo-3-piperidin-l-il-propilamino)-acetil]-4-fluoropirrolidina-2-carbonitrilo (composto 11)

O .composto 11 foi preparado de uma maneira similar àquela descrita no Exemplo 1.

. ^ΧΗ NMR (ÇDCI3, 300 MHz, δ): (2/1 mistura de rotômeros de amida trans/cis) 5,48 (t, J = 3,3 Hz, 1/3H),

5,45 (d, J = 9,3 Hz, 1/3H), 5,39 (t, J = 3,3 Hz, 1/6H), 5,30 (t, J = 3,3 Hz, 1/3H) , 5,22 (t, J = 3.,3 Hz, 1/6H) , 4,93 (d, J = 9,3 Hz, 2/3H) , 4,00 - 3,35 (m, 8H) , 2,67 (t, J = 15,6 Hz,

1/3H) , 2,60 (t, J = 15,6 Hz, 2/3H) , 2,50 - 2,20 (m, 3H, singlet sobreposto em 2,41), 1,64 - 1,44 (m, 6H) , 1,18 (s, 6H) ; ..

MS. (ES⁺) m/z calculado para Ci₇H₂₇FN₄O₂: 338,42;

20/27 encontrado: 339,2 (M+H), 361,2 (M+Na).

Exemplo 12 : Síntese do ácido 4-{3-[2-((2S,4S)-25 ciano74-fluoro-pirrolidin-l-il)-2-oxo-etilamino]-3-metilbutiril}-pipérazina-l-carboxílico etil éster (composto 12)

0 composto 12 foi preparado	de	uma	maneira similar
àquela descrita no Exemplo 1.
^XH NMR (CDCI3, 300 MHz, δ	) :	(2/1	de	mistura de
rotômeros de amida trans/cis) 5,51 1	:t,	J =	3,3	Hz, 1/3H),
5,42 (t, J = 3,3 Hz, 1/6H), 5,36 (d,	j =	9,0	Hz,	1/3H), 5,34

(t, J = 3,3 Hz, 1/3H), 5,25 (t, J = 3,3 Hz, 1/6H), 4,96 (d, J = 9,0 Hz, 2/3H) , 4,16 (que, J = 6,9 Hz, 2H) , 4,19 - 3,38 (m,

12H) ,	2,72	(t, J =	15,3 Hz, 1/3H) , 2,65 (t, J =	15,3 Hz,
2/3H),	2,53	- 2,22	(m, 3H, sobrepôs 0 singlet 2	em 2,46,
2,43),	1,27	(t, J =	6,9 Hz, 3H), 1,22 (s, 6H).
	MS	(ES⁺)	m/z calculado para C19H30FN5O4:	411,47;

encontrado: 412,2 (M+H), 434,2 (M+Na).

Exemplo 13: Síntese de 3-[2-((2S,4S)-2-ciano-4fluoro-pirrolidin-l-il)-2-oxo-etilamino]-N-ciclopentil-3metil-butiramida (composto 13)

O composto 13 foi preparado de uma maneira similar àquela descrita no Exemplo 1.

¹H NMR (CDC1₃, 3 00 MHz, δ) : (4/1 mistura de rotômeros de amida trans/cis) 7,94 (d, J = 7,2 Hz, 4/5H) ,

7,59 (d, J = 7,2 Hz, 1/5H), 5,51 (t, J = 3,3 Hz, 2/5H), 5,4 (t, J = 3,3 Hz, 1/10H), 5,34 (t, J = 3,3 Hz, 2/5H), 5,25 (t,

J = 3,3 Hz, 1/10H), 5,02 (d, J = 9,0 Hz, 1/5H), 4,92 (d, J = 9,0 Hz, 4/5H) , 4,20 - 4,07 (m, 1H) , 4,03 - 3,27 (m, 4H) , 2,73 (t, J = 15,6 Hz, 1/5H), 2,65 (t, J = 15,6 Hz, 4/5H), 2,44 2,10 (m, 3H) , 1,91 - 1,82 (m, 2H) , 1,68 - 1,48 (m, 4H) , 1,43 30 - 1,31 (m, 2H), 1,15 (s, 6H).

MS (ES⁺) m/z calculado para C17H27FN4O2: 338,42;

encontrado: 339,4 (M+H), 361,4 (M+Na).

Exemplo 14 : Síntese de (2S,4S)-4-fluoro-1-{2-[3

21/27 ((S)-2-hidroximetil-pirrolidin-l-il)-1, 1-dimetil-3-oxopropilamino] -acetil}-pirrolidina-2-carbonitrilo (composto 14) composto 14 foi preparado de uma maneira similar àquela descrita no Exemplo 1.

^ΧΗ NMR (CDC1₃, 300 MHz, δ) : (2/1 mistura de rotômeros de amida trans/cis) 5,50 (t, J = 3,3 Hz, 1/3H) , 5,41 (t, J = 3,3 Hz, 1/6H), 5,37 (d, J = 9,3 Hz, 1/3H), 5,32 (t, J = 3,3 Hz, 1/3H), 5,22 (t, J = 3,3 Hz, 1/6H), 4,95 (d, J = 9,0 Hz, 2/3H) , 4,26 - 4,19 (m, 1H) , 4,03 - 3,37 (m, 8H, singlet sobreposto em 3,43), 2,70 (t, J = 15,6 Hz, 1/3H) , 2,63 (t, J= 15,6 Hz, 2/3H), 2,55 (brs, OH), 2,52 - 2,21 (m, 3H, singlet sobreposto em 2,42), 2,07 - 1,79 (m, 3H) , 1,69 1,57 (m, 1H) , 1,22 (s, 6H) ;

MS (ES⁺) m/z calculado para Ci7H₂7FN₄O₃: 354,42;

encontrado: 355,2 (M+H), 377,2 (M+Na).

Exemplo 15: Síntese de (2S,4S)-1-{2-[1,l-dimetil-3((R)-2-metil-pirrolidin-l-il)-3-oxo-propilamino]-acetil}-4fluoro-pirrolidina-2-carbonitrilo (composto 15) composto 15 foi preparado de uma maneira similar àquela descrita no Exemplo 1.

^XH NMR (CDCI3, 300 MHz, δ) : (2/1 mistura de rotômeros de amida trans/cis) 5,52 - 5,47 (m, 2/3H), 5,39 (t, J = 3,3 Hz, 1/6H) , 5,31 (t, J = 3,3 Hz, 1/3H) , 5,22 (t, J = 3,3 Hz, 1/6H) , 4,92 (d, J = 9,3 Hz, 2/3H), 4,19 - 3,31 ’ (m, 25 6H, singlet sobreposto em3,39), 2,78 - 2,19 (m, 5H) , 2,02

1,83 (m, 3H), 1,68 - 1,49 (m, 1H), 1,19 - 1,12 (m, 9H);

MS (ES⁺) m/z calculado para C17H27FN4O2: 338,42;

encontrado: 339,4 (M+H), 361,4 (M+Na).

Exemplo 16 : Síntese de (2S, 4S)-1-{2-[3-(1, 33 0 diidro-isoindol-2-il)-1,1-dimetil-3-oxo-propilamino]-acetil}-

4-fluoro-pirrolidina-2-carbonitrilo (composto 16) composto 16 foi preparado de uma maneira similar àquela descrita no Exemplo 1.

22/27 ¹H NMR (CDC1₃, 300 MHz, δ) : (3/1 de mistura de rotômeros de amida trans/cis) 7,30 - 7,16 (m, 4H), 5,52 (d, J = 9,3 Hz, 1/4H), 5,50 (t, J = 3,3 Hz, 3/8H), 5,40 (t, J= 3,3 Hz, 1/8H), 5,31 (t, J = 3,3 Hz, 3/8H), 5,23 (t, J= 3,3 Hz, 1/8H) , 4,94 (d, J = 9 Hz, 3/4H) , 4,83 (s, 2H) , 4,78 (s, 2H) , 4,15 - 3,35 (m, 4H, sobrepôs 0 singlet em 3,45), 2,70 (t, <7 = 15,3 Hz, 1/4H), 2,64 (t, J = 15,3 Hz, 3/4H), 2,59 - 2,18 (m, 3H), 1,22 (s, 6H);

MS (ES⁺) m/z calculado para C₂₀H₂₅FN₄O₂ : 372,4;

encontrado: 373,2 (M+H), 395,2 (M+Na).

Exemplos 17 a 20: Síntese dos compostos 17 a 20 Os compostos 17 a 20 foram preparados de maneiras similares àquela descrita no Exemplo 1.

Exemplo 21: Síntese do ácido (2S)-1-[2-amino-5((S)-2-metoximetil-pirrolidin-l-il)-5-oxo-pentanoil]pirrolidina-2-carbonitrilo trifluoroacético (composto 21) (1) Preparação do ácido 2-ter-butoxicarbonilamino-

5-((S)-2-metoximetil-pirrolidin-l-il)-5-oxo-pentanóico metil éster

A uma mistura de ácido 4-(ter-butoxicarbonilamino)5-metoxi-5-oxopentanóico (1,05 g, 4 mmol), (S)-2(metoximetil)-pirrolidina (0,46 g, 4 mmol) e o hidrato de 1hidroxibenzotriazol (hidrato de HOBt, 0,54 g, 4 mmol) em CH₂C1₂ (10 ml) foi adicionado EDC (0,77 g, 4 mmol) . A mistura de reação foi agitada ã temperatura ambiente por doze horas, diluída com CH₂C1₂ (40 ml) , lavada seqüencialmente com bicarbonato de sódio aquoso saturado (20 ml) , ácido cítrico aquoso 0,5 N (20 ml) e salmoura (20 ml), secada sobre sulfato de magnésio, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para resultar em um óleo viscoso bruto. O óleo bruto foi purificado por cromatografia de evaporação (gel de silica, 50% de acetato de etila/hexanos) para se obter o composto de título (1,36 g, 95%) como um óleo incolor.

23/27 (2) Preparação do ácido 2-ter-butoxicarbonilamino-

5-((S)-2-metoximetil-pirrolidin-l-il)-5-oxo-pentanóico

A uma solução agitada de éster metílico de ácido 2ter-butoxicarbonilamino-5-((S)-2-metoximetil-pirrolidin-1il)-5-oxo-pentanóico (0,72 g, 2 mmol) em CH3OH (20 ml) foi adicionado hidróxido de sódio aquoso 2 N (20 ml) . Após agitação à temperatura ambiente por doze horas, a mistura foi acidifiçada pela adição de ácido clorídrico aquoso 6 N a 0°C ao pH = 4. A maior parte do metanol foi removida sob pressão reduzida e o resíduo foi dividido entre CH₂C1₂ (20 ml) e H₂O (20 ml) . A camada aquosa foi extraída adicionalmente com CH₂C1₂ (20 ml). As camadas orgânicas combinadas foram secadas sobre sulfato de magnésio, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para se obter o composto de título (0,54 g, 79%) como um sólido espumoso que foi utilizado na etapa seguinte sem purificação adicional.

(3) Preparação de 1-((S)-2-carbamoilpirrolidin-lil)-5-((S)-2-(metoximetil)pirrolidin-l-il)-1,5-dioxopentan-2ilcarbamato de ter-butila

A uma mistura de ácido 2-ter-butoxicarbonilamino-5((S)-2-metoximetil-pirrolidin-l-il)-5-oxo-pentanóico (0,34 g, 1 mmol), hidrato de L-prolinamida (0,11 g, 1 mmol) e HOBt (0,14 g, 1 mmol) em CH₂C1₂ (5 ml) foi adicionado EDC (0,19 g, 1 mmol). A mistura, de reação foi agitada à temperatíira ambiente por doze horas, diluída com CH₂C1₂ (20 ml) , lavada seqüencialmente com bicarbonato de sódio aquoso saturado (10 ml), 0,5 N de ácido cítrico aquoso (10 ml) e salmoura (10 ml), secada sobre sulfato de magnésio, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para se obter um óleo bruto viscoso. O óleo bruto foi purificado por meio de cromatograf ia de evaporação (gel de .silica, 2 a 8% de gradiente de CH3OH/ CH₂C1₂) para se obter o composto de título (0,36 g, 81%) como um sólido espumoso.

24/27 (4) Preparação do ácido (2S)-1-[2-amino-5-((S)-2metoximetil-pirrolidin-l-il)-5-oxo-pentanoil]-pirrolidina-2cárbonitrilo trifluoroacético (composto 21).

A uma mistura de 1-((S)-2-carbamoilpirrolidin-lil)-5-((S)-2-(métoximetil)pirrolidin-l-il)-1,5-dioxopentan-2ilcarbamato de ter-butila (0,36 g, 0,8 mmol) e de imidazol (0,68 g, 1 mmol) em piridina (4 ml) a -20°C foi adicionado cloreto de fosforila (0,32 g, 2,1 mmol). A pasta foi agitada a -20 °C por uma hora, aquecida à temperatura ambiente e concentrada in vacuo. 0 resíduo foi dividido entre CH2CI2 (10 ml) e ácido cítrico aquoso 0,5 N (10 ml). A camada aquosa foi extraída adicionalmente com CH₂C1₂ (10 ml) . As camadas orgânicas combinadas foram secadas sobre sulfato de magnésio, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para se obter um óleo amarelo pálido. O óleo bruto foi purificado por cromatografia de evaporação (gel de silica, 50% de acetato de etila/diclorometano) para a produção de um óleo incolor.

Uma solução do óleo acima em ácido trifluoroacético (TFA, 1 ml) foi agitada à temperatura ambiente por dez minutos e concentrada in vacuo para se obter o composto 21 (0,27 g, 77%) como um sólido espumoso.

MS (ES⁺) m/z calculado para Ci_SH₂₆N4O3 : 322,40;

encontrado: 323,6 (M+H), 345,6 (M+Na).

Exemplo 22: Síntese do ácido (2S) -1- [2-aminó'-5((S)-2-hidroximetil-pirrolidin-l-il)-5-oxo-pentanoil]pirrolidina-2-carbonitrilo trifluoroacético (composto 22) composto 22 foi preparado de uma maneira similar àquela descrita no Exemplo 21.

MS (ES⁺) m/z calculado para Ci₅H24N₄O₃ : 308,38 ;

encontrado: 309,1 (M+H), 331,1 (M+Na).

Exemplo 23 : Síntese do ácido (2S)-1-[2-amino-5((S)-2-metoximetil-pirrolidin-l-il)-3,3-dimetil-5-oxopentanoil]-pirrolidina-2-carbonitrilo trifluoroacético

25/27 (composto 23) composto 23 foi preparado de uma maneira similar àquela descrita no Exemplo 21.

MS (ES⁺) m/z calculado para C18H30N4O3: 350,46;

encontrado: 351,6 (M+H), 373,7 (M+Na).

Exemplo 24: Síntese do ácido (2S)-1-[2-amino-5((R)-2-metil-pirrolidin-l-il)-5-oxo-pentanoil]-pirrolidina-2carbonitrilo trifluoroacético (composto 24)

O composto 24 foi preparado de uma maneira similar àquela descrita no Exemplo 21.

MS (ES⁺) m/z calculado para C18H30N4O3: 292,38;

encontrado: 293,6 (M+H), 315,6 (M+Na).

Exemplo 25: Síntese do ácido (2S)-1-(2-amino^5((S)-2-(hidroximetil)pirrolidin-l-il)-3,3-dimetil-5oxopentanoil)pirrolidina-2-carbonitrilo trifluoroacético (composto 25)

O composto 25 foi preparado de uma maneira similar àquela descrita no Exemplo 21.

Exemplo 26

A DPP-IV foi purificada a partir de soro humano e células de inseto de uma maneira similar àquela descrita em Biochemistry, 2006, 45:7006-7012.

A DPP-VIII foi purificada a partir de células sfa infectadas com baculovírus de uma maneira similar àqüfela descrita em J. Biol. Chem. 2006, 28:138653-138662.

A pureza da DPP-IV ou da DPP-VIII foi verificada por SDS-PAGE, seguida pelo tingimento com azul de Commassie ou pelo tingimento com prata. As concentrações de DPP-IV e de DPP-VIII foram medidas pelo método Bradford utilizando BSA como o padrão (Anal. Biochem. 1976, 72:248-254.)

Os compostos 1 a 24 foram testados quanto a seu efeito inibitório na DPP-IV como segue: Para cada composto, oito diluições em série (concentrações finais de 0,0046 a 10

26/27 pmol/l) foram preparadas e utilizadas. Quarenta μΐ de DPP-IV em Tris (40 mM, pH 8,3) foram incubados corn 10 μΐ do composto de teste em Tris contendo 1% de DMSO em uma incubadora a 37°C à temperatura ambiente por dez minutos. Cinqüenta μΐ de GliPro-7-amino-4-metilcoumarina (concentração final: 150 μΜ) foram adicionados à solução e incubados a 37°C por uma hora. A liberação de 7-amino-4-metilcoumarina foi monitorada continuamente em um fluorômetro de placa com 96 cavidades (Victor² V) , e os dados foram gravados no ponto final da reação de inibição. Os valores IC₅₀ foram calculados com base nos resultados.

Similarmente, os compostos 1 a 24 foram testados quanto a seu efeito inibitório sobre a DPP-VIII. A DPP-VIII em PBS (137 mM de NaCl, 2,7 mM de KC1, 1,4 mM de KH₂PO₄, 4,3 mM de Na₂HPO₄, pH 7,4) foi incubada com 1 μΐ do compostcí de teste em DMSO a 37°C por dez minutos. Meio μΐ de Gli-Propara-nitroanilida foi adicionado (concentração final: 2,5 mM) . A solução resultante foi incubada a 37 °C por 30 a 45 minutos. As reações foram monitoradas e medidas a um OD de 4 05 nm. Os valores IC₅₀ foram calculados com base nos resultados.

Todos os compostos de teste exibiram valores IC₅₀baixos ao inibir a DPP-IV (do soro humano ou das células, de inseto) e valores IC₅₀ elevados ao inibir a DPP-VIII (das células sfa infectadas com baculovírus). Alguns dos compostos de teste exibiram uma relação muito elevada entre o valor IC₅₀ ao inibir a DPP-VIII e o valor IC₅₀ ao inibir a DPP-IV, por .exemplo, 10 0 o.u mais ainda. Desse modo, todos os compostos 1 a 24 têm seletividade elevada ao inibir a DPP-VI em relação à inibição da DPP-VIII.

OUTRAS REALIZAÇÕES

Todas as características descritas neste relatório descritivo podem ser combinadas em qualquer combinação. Cada

27/27 característica daqui descrita pode ser substituída por uma característica alternativa que sirva a uma finalidade igual, equivalente ou similar. Desse modo, a menos que indicado expressamente de outra maneira, cada característica descrita 5 é somente um exemplo de uma série genérica de características equivalentes ou similares.

A partir da descrição acima, o elemento versado na técnica pode facilmente verificar as características essenciais da presente invenção e, sem que se desvie do 10 caráter e âmbito da mesma, pode fazer várias alterações e modificações na invenção para adaptar a mesma a várias utilizações e condições. Por exemplo, compostos estruturalmente análogos aos compostos de pirrolidina da presente invenção também podem ser produzidos, selecionados 15 quanto a suas atividades inibitórias contra a DPP-IV e para o tratamento da diabetes tipo II e utilizados para praticar a presente invenção. Desse modo, outras realizações também estão dentro das reivindicações.

Claims

REIVINDICAÇÕES caracterizado por apresentar a seguinte fórmula:

NR^?R^a

CN O na qual cada um de

R¹, R²

R³, R⁴, R⁵ e R⁶, é

H;

cada um de

R³ e R⁴ é alquila Ci-Cio;

R⁷ alquila tiazolil opcionalmente substituído com metila ou piridil opcionalmente substituído com metóxi;

e R⁸ é H ou alquila Ci-Cio; ou R⁷ e R⁸, juntamente com o átomo de nitrogênio ao qual são ligados, formando um anel monocíclico saturado de 5 ou 6 membros que opcionalmente contém um átomo de S

O ou N no anel, um anel de 6 membros monocíclico insaturado ou um anel bicíclico insaturado de 9 membros, cada um dos anéis saturados ou insaturados sendo opcionalmente substituídos por halo, -OR', ΟΗ₂ΟΗ, CH2OCH3,

C(O)R', -S(O)₂R’ ou -C(O)OR’, sendo

H ou alquila Ci-Cio;

cada um de m e n él; e

NH.

COMPOSTO de acordo com a reivindicação 1 caracterizado por cada um de

R³ e R⁴ ser metila.

COMPOSTO de acordo com a reivindicação 1 caracterizado por R? e Rs, juntamente com o átomo de N ao qual são ligados formar um anel monocíclico saturado de ou 6 membros que opcionalmente contém um átomo de S ou N adicional, um anel monocíclico insaturado de 6 membros anel bicíclico insaturado de 9 membros, cada um dos ou um anéis saturados e insaturados, opcionalmente sendo substituído por halo, -OR’, CH2OH, CH2OCH3, -C(O)R', -S(O)₂R’ ou -0(0) OR', sendo H ou alquila C1-C10.

Petição 870190094436, de 20/09/2019, pág. 15/48
2/2

COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por cada um de R⁷ e R⁸ ser alquila Ci-Cio.

5.

COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelos compostos serem um dos compostos 1-20.
6. COMPOSTO, caracterizado por apresentar a seguinte fórmula:

na qual

R¹ é CN;

R², R⁵ e R⁶, é H;

cada um de R³ e R⁴, independentemente, H ou alquila Ci-Cio;

R⁷ é H, alquila Ci-Cio, CH₂OH ou CH₂OCH₃;

m é 5 ;

n é 1 ;

W éCH₂; e

X é CH (NH₂) .

7 . COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 6, caracterizado por cada um de R³ e R⁴ ser H. 8 . COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 6, caracterizado por cada um de R³ e R⁴ ser alquila Ci-Cio. 9. COMPOSTO, de acordo com a reivindicação 6,

caracterizado pelo composto ser um dos compostos 21-25.