BRPI0918966B1 - Composto inibidor de protease, composição farmacêutica compreendendo dito composto e uso terapêutico do mesmo - Google Patents

Composto inibidor de protease, composição farmacêutica compreendendo dito composto e uso terapêutico do mesmo Download PDF

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Magnus Nilsson
Pia Kahnberg
Bertil Samuelsson
Urszula Grabowska
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Abstract

composto inibidor de protease, composição farmacêutica compreendendo dito composto e uso terapêutico do mesmo compostos da fórmula ii: em que r1 e r2 são independentemene h, f ou ch3; ou r1 forma uma ligação etinila e r2 é h ou c3-c6 cicloalquila, o qual é opcionalmente substituído com um ou dois substituintes independentemente selecionados de metila, cf3, ome ou halo; r3 é c1-c3 alquila ou c3-c6 cicloalquila, um dos quais é opcionalmente substituído com um ou dois metila e/ou um flúor, trifluorometila ou metóxi, quando r3 é c3-c6 cicloalquila, este pode ser, alternativamente, gem substituído com flúor; r4 é metila ou flúor; m é 0,1 ou 2; e é uma ligação, ou tiazolila, opcionalmente substituído com metila ou flúor; a1 é ch ou n, a2 é cr6r7 ou nr6, desde que pelo menos um de a1 e a2 compreenda n; r6 é h, c1-c4 alquila, c1-c4 haloalquila, c1-c3 alquil-o-c1-c3 alquila, ou quando a2 é c, r6 também pode ser c1-c4 alcóxi ou f; r7 é h, c1-c4 alquila ou f, ou um sal farmaceuticamente aceitável, n-óxido ou hidrato dos mesmos, têm utilidade no tratamento de doenças caracterizadas por expressão ou ativação inadequada de catepsina k, tais como osteoporose, osteoartrite, artrite reumatóide ou metástases ósseas.

Description

“COMPOSTO INIBIDOR DE PROTEASE, COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA COMPREENDENDO DITO COMPOSTO E USO TERAPÊUTICO DO MESMO”
Campo da Invenção [001] Esta invenção refere-se a inibidores de cisteína proteases, especialmente aqueles da superfamília da papaína. A invenção fornece novos compostos úteis na profilaxia ou tratamento de distúrbios decorrentes do desequilíbrio de proteases fisiológicas, tais como catepsina K.
Descrição da Técnica Relacionada [002] A superfamília da papaína de cisteína proteases é amplamente distribuída em diversas espécies, incluindo mamíferos, invertebrados, protozoários, plantas e bactérias. Uma variedade de enzimas catepsinas de mamíferos, incluindo catepsinas B, F, H, K, L, O e S, foi atribuída a esta superfamília, e a regulação inadequada da sua atividade implicou em uma série de distúrbios metabólicos, incluindo artrite, distrofia muscular, inflamação, glomerulonefrite, e invasão de tumor. Catepsinas patogênicas, tais como enzimas, incluem gengivite bacteriana, malária falcípara I, II, III e seguintes e cisteína proteases por pneumocistose carini, Tripanossoma brucei e crusis, Critídia fusiculata, Esquistossoma spp.
[003] A regulação inadequada de catepsina K tem implicado em uma série de distúrbios, incluindo osteoporose, doenças gengivais, tais como gengivite e periodontite, doença de Paget, hipercalcemia de doença óssea metabólica e maligna. Tendo em vista os níveis elevados nos condroclastos de osteoartrite sinovial, a catepsina K implica em doenças caracterizadas por excesso de cartilagem ou degradação da matriz, tais como osteoartrite e artrite reumatóide.
[004] É provável que o tratamento de distúrbios ósseos e cartilaginosos, tais como osteoartrite e osteoporose, irá exigir administração ao longo da vida de um inibidor de catepsina K, muitas vezes a uma população de pacientes dentro ou próxima da fase geriátrica. Isso gera invulgarmente altas exigências sobre a
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2/79 facilidade de administração de drogas destinadas a tais distúrbios. Por exemplo, tentativas estão em andamento para prolongar os regimes de dosagem das drogas para osteoporose atuais da classe de bisfosfonato para regimes de administração semanais ou mais longos para auxiliar na complacência. No entanto, mesmo com doses melhoradas, outros efeitos colaterais dos bisfosfonatos permanecem. Os bisfosfonatos bloqueiam as imperfeições ósseas ao invés de atenuá-las como faz o inibidor de catepsina K. Para ossos saudáveis, é importante manter o processo de remodelação que os bisfosfonatos bloqueiam completamente. Além disso, os bisfosfonatos têm uma meia-vida muito longa no osso, por isso, se efeitos como osteonecrose da mandíbula se manifestarem, é impossível remover o bisfosfonato do osso. Em contraste, inibidores de catepsina K têm tipicamente um início rápido e modo de ação fora da taxa, o que significa que se um problema for identificado, o tratamento pode ser interrompido e não haverá acúmulo do inibidor na matriz óssea.
[005] Há, portanto, um desejo por drogas alternativas para osteoporose e osteoartrite com propriedades farmacocinéticas e/ou farmacodinâmicos superiores.
[006] O pedido de patente internacional nQ. W02008/007107 revela compostos da fórmula:
Ra Rb
Rd em que Rd é um anel monocíclico substituído, Rc é alquila ou cicloalquila ramificada e Ra e Rb são uma variedade de grupos, incluindo H, metila, etila, éter, tioéter, amina, sulfonato etc. Os únicos compostos que são preparados têm H ou metóxi nesta posição.
[007] Há ainda a necessidade na técnica para inibidores potentes de catepsina K. De benefício particular, são inibidores de catepsina K, que apresentam seletividade para catepsina K sobre outras catepsinas (por exemplo, seletividade
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3/79 sobre catepsina S e/ou catepsina L). Inibidores potentes de catepsina K que demonstram propriedades, como alta permeabilidade e/ou perfis metabólicos vantajosos podem vir a ser de grande valia em um ambiente clínico. Indicações relacionadas da catepsina K, tais como osteoporose ou artrite pressupõem períodos prolongados de administração e, por conseguinte, é desejável que os compostos apresentem toxicidade ou genotoxicidade mínima.
Breve Descrição da Invenção [008] De acordo com a presente invenção, é fornecido um composto de fórmula II:
R1 em que
R1 e R2 são independentemente H, F ou CH3; ou
R1 forma uma ligação etinila e R2 é H ou C3-C6 cicloalquila, que é opcionalmente substituída com um ou dois substituintes independentemente selecionados de metila,CF3, OMe ou halo;
R3 é C1-C3 alquila ou C3-C6 cicloalquila, um dos quais é opcionalmente substituído com um ou dois de metila e/ou um flúor, trifluorometila ou metóxi, quando R3 é C3-C6 cicloalquila, este eventualmente pode ser gem substituído com flúor;
R4 é metila ou flúor; m é 0, 1 ou 2;
E é tiazolila, opcionalmente substituído com metila ou flúor;
Ai é CH ou N,
A2 é CR6R7 ou NR6, desde que pelo menos um de A1 e A2compreenda N;
R6 é H, C1-C4 alquila, C1-C4 haloalquila, C1-C3 alquil-O-Cr-Cs alquila, ou
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4/79 quando A2 é C, R6 também pode ser C1-C4 alcóxi ou F;
R7 é H, Ci-C4alquila ou F ou um sal farmaceuticamente aceitável, N-óxido ou um hidrato do mesmo.
[009] Será apreciado que os compostos da invenção podem existir como hidratos, tais como os das fórmulas parciais:
Figure BRPI0918966B1_D0001
Figure BRPI0918966B1_D0002
e a invenção se estende a todas as formas alternativas.
[010] Em certas modalidades da invenção, R1 e R2 são ambos H, ambos metila ou, de preferência, ambos F.
[011] Em outras modalidades da invenção, R1, juntamente com a olefina descrita na Fórmula II, define uma ligação etinila, por exemplo, acetileno, quando R2 é H.
[012] Em outras modalidades da invenção, R1, juntamente com a olefina descrita na Fórmula II, define uma ligação etinila e R2 é uma porção cicloalquila, tal como ciclopentila, de preferência, ciclobutila e, mais preferivelmente, ciclopropila. O cicloalquila é opcionalmente substituído em qualquer posição, incluído a posição 1 com 1, em que a valência permite a seleção de 2 substituintes a partir de metila, OMe, halo (como flúor) ou CF3.
[013] Uma modalidade da invenção define assim compostos da fórmula:
Figure BRPI0918966B1_D0003
Figure BRPI0918966B1_D0004
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5Π$ em que A2, n, Ai, E, R4, m e R3 são como definidos acima ou qualquer um dos nomeados definidos abaixo e R é H, metila, CF3, OMe ou halo, tal como flúor, localizado em quaisquer das posições 1,2 ou 3.
[014] Adequadamente, R3 é Ci-Csalquila ou C3-C6 cicloalquila, um dos quais é opcionalmente substituído com um ou dois de metila e/ou um flúor, trifluorometila ou metóxi.
[015] Valores representativos para cicloalquila para R3 incluem ciclopropila, ciclobutila e especialmente ciclopentila ou cicloexila, um deles sendo substituído com flúor ou gem flúor. Gem flúor na posição 2 de um ciclopropila, posição 3 de ciclobutila ou ciclopentila ou posição 4 de ciclopropila muitas vezes é conveniente. Gem-flúor na posição 4 de cicloexila é também muitas vezes conveniente.
[016] Em uma modalidade da invenção, R3 representa a cadeia lateral de leucina. Em uma segunda modalidade da invenção, R3 representa a cadeia lateral de isoleucina. Em uma terceira modalidade da invenção, R3 representa a cadeia lateral de ciclohexilglicina. Em uma quarta modalidade da invenção, R3 representa a cadeia lateral de ciclopentilglicina. Em uma quinta modalidade da invenção, R3 representa a cadeia lateral de O-metiltreonina. Em uma quinta modalidade da invenção, R3 representa a cadeia lateral de 4-fluoroleucina. Em uma sexta modalidade da invenção, R3 representa a cadeia lateral de 3-metoxivalina.
[017] Valores atualmente preferenciais de R3 incluem os incorporados pelas estruturas parciais:
Figure BRPI0918966B1_D0005
e, especialmente,
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6/79 [018] Em uma modalidade da invenção, m representa 2. De interesse particular, são os compostos em que m representa 1. Ainda outras modalidades da invenção têm m como 0, especialmente quando tiazolila adjacente é substituído com Me ou, de preferência, F.
R4 representa adequadamente metila ou flúor, especialmente flúor. Se m é 2, é atualmente preferível que cada R4 seja o mesmo.
[019] Quando m representa 1, R4 é adequadamente posicionado como mostra a estrutura parcial:
Figure BRPI0918966B1_D0006
[020] Como definido acima, E é tiazolila, que é opcionalmente substituído com metila ou, mais preferencialmente, por flúor. A orientação preferencial do anel tiazolila é:
Figure BRPI0918966B1_D0007
em que R5 é H, metila ou flúor.
[021] O anel contendo Ai e A2 é um anel contendo nitrogênio, saturado, de 5 ou 6 átomos de anel. Anéis representativos, assim, incluem pirrolidin-1 -ila, pirrolidin-
3-ila, piperazin-1-ila, piperidin-4-ila e piperidin-1-ila. O anel é convenientemente substituído, por exemplo, com alquila ou haloalquila, tipicamente metila ou propila ou trifluormetila. Alternativamente, 0 anel é substituído com um éter, tal como metoximetila ou metoxietila. Quando A2 é carbono, 0 anel pode, alternativamente,
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7/79 ser substituído com alcóxi, tal como metóxi ou flúor, especialmente gem-flúor.
[022] Uma modalidade favorecida da invenção tem a fórmula lia:
R1
Figure BRPI0918966B1_D0008
em que
R1 e R2 são independentemente H, F ou CH3; ou
R1 forma uma ligação etenila e R2 é H, C3-C6 cicloalquila, opcionalmente substituído com um ou dois substituintes selecionados de Me, CF3, OMe ou halo (tal como flúor);
R3 é C2-C6 alquila ou C3-C6 cicloalquila ramificada, um dos quais é substituído com halo ou trifluorometila;
R4 é metila ou flúor; m é 0 ou 1 ou 2;
R5 é H metila, ou flúor;
R6 é C1-C4 alquila;
ou um sal farmaceuticamente aceitável, N-óxido ou um hidrato do mesmo (coletivamente referidos aqui como compostos da invenção).
R5 é preferencialmente flúor, especialmente quando m for 0. Os nomeados restantes são conforme definidos acima em relação à Fórmula II. Referências à fórmula II abaixo são compreendidas para incluir modalidades correspondentes da fórmula lia.
[023] Modalidades representativas da fórmula II, em que a porção -C=CR1R2 é acetileno, incluem:
N-[1-(6-etinil-3-oxo-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4-carbonil)-3-metil-butil]-4-[2(4- metil-piperazin-1 -il)-tiazol-4-il]-benzamida;
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8/79
N-[1-(6-etinil-3-oxo-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4-il)-1-ciclohexil-2-oxo-etil]-4[2(4-metil-piperazin-1-il)-tiazol-4-il]-benzamida;
N-[1-(6-etinil-3-oxo-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4-il)-1-ciclopentil-2-oxo-etil]-4[2-(4-metil-piperazin-1-il)-tiazol-4-il]-benzamida;
N-[1-(6-etinil-3-oxo-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4-carbonil)-2-metil-butil]-4-[2(4- metil-piperazin-1 -il)-tiazol-4-il]-benzamida;
N-[1-(6-etinil-3-oxo-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4-carbonil)-3-metil-butil]-4-[5metil-2-(4-metil-piperazin-1-il)-tiazol-4-il]-benzamida;
N-[1-(6-etinil-3-oxo-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4-il)-1-ciclohexil-2-oxo-etil]-4[5- metil-2-(4-metil-piperazin-1 -il)-tiazol-4-il]-benzamida;
N-[1-(6-etinil-3-oxo-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4-il)-1-ciclohexil-2-oxo-etil]-4[5- metil-2-(4-metil-piperazin-1 -il)-tiazol-4-il]-benzamida;
N-[1-(6-etinil-3-oxo-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4-carbonil)-2-metil-butil]-4-5metil-2-(4-metil-piperazin-1-il)-tiazol-4-il]-benzamida;
N-[1-(6-etinil-3-oxo-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4-carbonil)-3-metil-butil]-4-[5fluoro-2-(4-metil-piperazin-1-il)-tiazol-4-il]-benzamida;
N-[1-(6-etinil-3-oxo-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4-il)-1-ciclohexil-2-oxo-etil]-4[5- fluoro-2-(4-metil-piperazin-1 -il)-tiazol-4-il]-benzamida;
N-[1-(6-etinil-3-oxo-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4-il)-1-ciclopentil-2-oxo-etil]-4[5-fluoro-2-(4-metil-piperazin-1-il)-tiazol-4-il]-benzamida
N-[1-(6-etinil-3-oxo-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4-carbonil)-2-metil-butil]-4-[5fluoro-2-(4-metil-piperazin-1-il)-tiazol-4-il]-benzamida;
N-[1-(6-etinil-3-oxo-hexahidro-furof[3,2-b]pirrol-4-carbonil)-3-metil-buti]-3fluoro-4-[2-(4-metil-piperazin-1-il)-tiazol-4-il]-benzamida;
N-[1-(6-etinil-3-oxo-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4-il)-1-ciclohexil-2-oxo-etil]-3fluoro-4-[2-(4-metil-piperazin-1-il)-tiazol-4-il]-benzamida;
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9/79
N-[1-(6-etinil-3-oxo-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4-il)-1-ciclopentil-2-oxo-etil]-3fluoro-4-[2-(4-metil-piperazin-1-il)-tiazol-4-il]-benzamida;
N-[1-(6-etinil-3-oxo-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4-carbonil)-2-metil-butil]-3fluoro-4-[2-(4-metil-piperazin-1-il)-tiazol-4-il]-benzamida e sais farmaceuticamente aceitáveis, N-óxidos e hidratos dos mesmos.
[024] Modalidades representativas adicionais de fórmula II, em que R1 e R2 são metila, incluem:
N-[1-(6-(dimetilvinil)-3-oxo-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4-carbonil)-3-metilbutil]-4-[2-(4-metil-piperazin-1-il)-tiazol-4-il]-benzamida;
N-[1-(6-(dimetilvinil)-3-oxo-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4-il)-1-ciclohexil-2-oxoetil]-4-[2-(4-metil-piperazin-1-il)-tiazol-4-il]-benzamida;
N-[1-(6-(dimetilvinil)-3-oxo-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4-il)-1-ciclopentil-2-oxoetil]-4-[2-(4-metil-piperazin-1-il)-tiazol-4-il]-benzamida;
N-[1-(6-(dimetilvinil)-3-oxo-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4-carbonil)-2-metilbutil]-4-[2-(4-metil-piperazin-1-il)-tiazol-4-il]-benzamida;
N-[1-(6-(dimetilvinil)-3-oxo-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4-carbonil)-3-metilbutil]-4-[5-metil-2-(4-metil-piperazin-1-il)-tiazol-4-il]-benzamida;
N-[1-(6-(dimetilvinil)-3-oxo-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4-il)-1-ciclohexil-2-oxoetil]-4-[5-metil-2-(4-metil-piperazin-1-il)-tiazol-4-il]-benzamida;
N-[1-(6-(dimetilvinil)-3-oxo-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4-il)-1-ciclohexil-2-oxoetil]-4-[5-metil-2-(4-metil-piperazin-1-il)-tiazol-4-il]-benzamida;
N-[1-(6-(dimetilvinil) -3-oxo-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4-carbonil)-2metilbutil]-4-5-metil-2-(4-metil-piperazin-1-il)-tiazol-4-il]-benzamida;
N-[1-(6-(dimetilvinil)-3-oxo-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4-carbonil)-3-metilbutil]-4-[5-fluoro-2-(4-metil-piperazin-1-il)-tiazol-4-il]-benzamida;
N-[1-(6-(dimetilvinil)-3-oxo-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4-il)-1-ciclohexil-2-oxoetil]-4-[5-fluoro-2-(4-metil-piperazin-1-il)-tiazol-4-il]-benzamida;
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N-[1-(6-(dimetilvinil)-3-oxo-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4-il)-1-ciclopentil-2-oxoetil]-4-[5-fluoro-2-(4-metil-piperazin-1-il)-tiazol-4-il]-benzamida
N-[1-(6-(dimetilvinil)-3-oxo-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4-carbonil)-2-metilbutil]-4-[5-fluoro-2-(4-metil-piperazin-1-il)-tiazol-4-il]-benzamida;
N-[1-(6-(dimetilvinil)-3-oxo-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4-carbonil)-3-metilbutil]-3- fluoro-4-[2-(4-metil-piperazin-1-il)-tiazol-4-il]-benzamida;
N-[1 -(6-(dimetilvinil)-3-oxo-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4-il)-1-ciclohexil-2-oxoetil]-3-fluoro-4-[2-(4-metil-piperazin-1-il)-tiazol-4-il]-benzamida;
N-[1-(6-(dimetilvinil)-3-oxo-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4-il)-1-ciclopentil-2-oxoetil]-3-fluoro-4-[2-(4-metil-piperazin-1-il)-tiazol-4-il]-benzamida;
N-[1-(6-(dimetilvinil)-3-oxo-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4-carbonil)-2-metilbutil]-3-fluoro-4-[2-(4-metil-piperazin-1-il)-tiazol-4-il]-benzamida e sais farmaceuticamente aceitáveis, N-óxidos e hidratos dos mesmos.
[025] Modalidades preferidas adicionais de fórmula II, em que R1 e R2 são F incluem:
N-[1-(6-(difluorovinil)-3-oxo-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4-carbonil)-3-metilbutil]-4-[2-(4-metil-piperazin-1-il)-tiazol-4-il]-benzamida;
N-[1-(6-(difluorovinil)-3-oxo-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4-il)-1-ciclohexil-2-oxoetil]-4-[2-(4-metil-piperazin-1-il)-tiazol-4-il]-benzamida;
N-[1-(6-(difluorovinil)-3-oxo-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4-il)-1-ciclopentil-2oxo- etil]-4-[2-(4-metil-piperazin-1-il)-tiazol-4-il]-benzamida;
N-[1-(6-(difluorovinil)-3-oxo-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4-carbonil)-2-metilbutil]-4- [2-(4-metil-piperazin-1 -il)-tiazol-4-il]-benzamida;
N-[1-(6-(difluorovinil)-3-oxo-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4-carbonil)-3-metilbutil]-4-[5-metil-2-(4-metil-piperazin-1-il)-tiazol-4-il]-benzamida;
N-[1-(6-(difluorovinil)-3-oxo-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4-il)-1-ciclohexil-2-oxoetil]-4-[5-metil-2-(4-metil-piperazin-1-il)-tiazol-4-il]-benzamida;
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N-[1-(6-(difluorovinil)-3-oxo-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4-il)-1-ciclohexil-2-oxoetil]-4-[5-metil-2-(4-metil-piperazin-1-il)-tiazol-4-il]-benzamida;
N-[1-(6-(difluorovinil)-3-oxo-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4-carbonil)-2-metilbutil]-4-5-metil-2-(4-metil-piperazin-1-il)-tiazol-4-il]-benzamida;
N-[1-(6-(difluorovinil)-3-oxo-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4-carbonil)-3-metilbutil]-4-[5-fluoro-2-(4-metil-piperazin-1-il)-tiazol-4-il]-benzamida;
N-[1 -(6-(difluorovinil)-3-oxo-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4-il)-1 -ciclohexil-2oxo-etil]-4-[5-fluoro-2-(4-metil-piperazin-1-il)-tiazol-4-il]-benzamida;
N-[1-(6-(difluorovinil)-3-oxo-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4-il)-1-ciclopentil-2oxo- etil]-4-[5-fluoro-2-(4-metil-piperazin-1-il)-tiazol-4-il]-benzamida
N-[1-(6-(difluorovinil)-3-oxo-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4-carbonil)-2-metilbutil]-4- [5-fluoro-2-(4-metil-piperazin-1 -il)-tiazol-4-il]-benzamida;
N-[1-(6-(difluorovinil)-3-oxo-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4-carbonil)-3-metilbutil]-3- fluoro-4-[2-(4-metil-piperazin-1-il)-tiazol-4-il]-benzamida;
N-[1-(6-(difluorovinil)-3-oxo-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4-il)-1-ciclohexil-2-oxoetil]-3-fluoro-4-[2-(4-metil-piperazin-1-il)-tiazol-4-il]-benzamida;
N-[1 -(6-(difluorovinil)-3-oxo-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4-il)-1 -ciclopentil-2oxo- etil]-3-fluoro-4-[2-(4-metil-piperazin-1-il)-tiazol-4-il]-benzamida;
N-[1-(6-(difluorovinil)-3-oxo-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4-carbonil)-2-metilbutil]-3- fluoro-4-[2-(4-metil-piperazin-1-il)-tiazol-4-il]-benzamida um sal farmaceuticamente aceitável, N-óxido e hidratos dos mesmos.
[026] Modalidades preferidas adicionais de fórmula II, em que R1 é uma ligação etinila e R2 é ciclopropila, incluem:
N-[1-(6-(ciclopropiletinil)-3-oxo-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4-carbonil)-3-metilbutil]-4-[2-(4-metil-piperazin-1-il)-tiazol-4-il]-benzamida;
N-[1-(6-(ciclopropiletinil)-3-oxo-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4-il)-1-ciclohexil-2oxo-etil]-4-[2-(4-metil-piperazin-1-il)-tiazol-4-il]-benzamida;
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N-[1-(6-(ciclopropiletinil)-3-oxo-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4-il)-1-ciclopentil-2oxo-etil]-4-[2-(4-metil-piperazin-1-il)-tiazol-4-il]-benzamida;
N-[1-(6-(ciclopropiletinil)-3-oxo-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4-carbonil)-2-metilbutil]-4-[2-(4-metil-piperazin-1-il)-tiazol-4-il]-benzamida;
N-[1-(6-(ciclopropiletinil)-3-oxo-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4-carbonil)-3-metilbutil]-4-[5-metil-2-(4-metil-piperazin-1-il)-tiazol-4-il]-benzamida;
N-[1-(6-(ciclopropiletinil)-3-oxo-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4-il)-1-ciclohexil-2oxo-etil]-4-[5-metil-2-(4-metil-piperazin-1-il)-tiazol-4-il]-benzamida;
N-[1-(6-(ciclopropiletinil)-3-oxo-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4-il)-1-ciclohexil-2oxo-etil]-4-[5-metil-2-(4-metil-piperazin-1-il)-tiazol-4-il]-benzamida;
N-[1-(6-(ciclopropiletinil)-3-oxo-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4-carbonil)-2-metilbutil]-4-5-metil-2-(4-metil-piperazin-1-il)-tiazol-4-il]-benzamida;
N-[1-(6-(ciclopropiletinil)-3-oxo-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4-carbonil)-3-metilbutil]-4-[5-fluoro-2-(4-metil-piperazin-1-il)-tiazol-4-il]-benzamida;
N-[1 -(6-(ciclopropiletinil)-3-oxo-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4-il)-1 -ciclohexil2- oxo-etil]-4-[5-fluoro-2-(4-metil-piperazin-1-il)-tiazol-4-il]-benzamida;
N-[1-(6-(ciclopropiletinil)-3-oxo-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4-il)-1-ciclopentil-2oxo-etil]-4-[5-fluoro-2-(4-metil-piperazin-1-il)-tiazol-4-il]-benzamida;
N-[1-(6-(ciclopropiletinil)-3-oxo-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4-carbonil)-2-metilbutil]-4-[5-fluoro-2-(4-metil-piperazin-1 -il)-tiazol-4-il]-benzamida;
N-[1-(6-(ciclopropiletinil)-3-oxo-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4-carbonil)-3-metilbutil]-3-fluoro-4-[2-(4-metil-piperazin-1-il)-tiazol-4-il]-benzamida;
N-[1-(6-(ciclopropiletinil)-3-oxo-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4-il)-1-ciclohexil-2oxo-etil]-3-fluoro-4-[2-(4-metil-piperazin-1-il)-tiazol-4-il]-benzamida;
N-[1-(6-(ciclopropiletinil)-3-oxo-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4-il)-1-ciclopentil-2oxo-etil]-3-fluoro-4-[2-(4-metil-piperazin-1-il)-tiazol-4-il]-benzamida;
N-[1-(6-(ciclopropiletinil)-3-oxo-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4-carbonil)-2-metil
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13/79 butil]-3-fluoro-4-[2-(4-metil-piperazin-1-il)-tiazol-4-il]-benzamida um sal farmaceuticamente aceitável, N-óxidos e hidratos dos mesmos.
[027] A definição de Ci-c alquila de R6 ou R7 destina-se a incluir tanto porções alquila ramificadas e não ramificadas contendo entre um e n átomos de carbono no total. Exemplos de tais grupos R6 ou R7 são: metila, etila, propila (npropila e isopropila), butila (n-butila, isobutila, terc-butila e sec-butila). Um grupo R6 de interesse particular é metila. Um segundo grupo R6 de interesse particular é propila (principalmente n-propila). Como R3 é opcionalmente substituído com um ou dois grupos metila, esta porção também pode definir uma cadeia alquila ramificada de até 5 átomos C.
[028] Em algumas modalidades da invenção, Ai é N.
[029] Aspectos adicionais da invenção incluem uma composição farmacêutica compreendendo um composto como definido acima e um veículo farmaceuticamente aceitável ou respectivo diluente.
[030] Um aspecto adicional da invenção é a utilização de um composto, tal como definido acima, na fabricação de um medicamento para o tratamento de doenças mediadas por catepsina K, tais como:
osteoporose, doenças da gengiva (tais como gengivite e periodontite), doença de Paget, hipercalcemia maligna, doença óssea metabólica, doenças caracterizadas por excesso de cartilagem ou degradação da matriz (tais como osteoartrite e artrite reumatóide), cânceres de osso, incluindo neoplasia, dor (especialmente dor crônica).
[031] Além disso, é fornecido um método para o tratamento ou prevenção de
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14/79 um distúrbio mediado por catepsina K compreendendo a administração de uma quantidade segura e eficaz de um composto da invenção com a finalidade de tratar ou prevenir a dita doença, que é mediada por catepsina K.
[032] Também é fornecido um composto da invenção para o tratamento ou prevenção de um distúrbio mediado por catepsina K.
[033] Além disso, é fornecido como um aspecto da invenção, novos intermediários (como descritos aqui), que podem ser úteis na preparação dos compostos da invenção.
[034] Em particular, é fornecido um composto da fórmula:
RI
Figure BRPI0918966B1_D0009
ou um derivado N-protegido do mesmo (por exemplo, Boc, CBz, ou Fmoc protegido). Também é fornecido pela invenção um análogo protegido de 1,3dioxolano correspondente e seus derivados N-protegidos (por exemplo, Boc- CBz, ou Fmoc protegido). Modalidades especialmente favorecidas deste bloco de construção têm ambos R1 e R2 como flúor, ou ambos metila ou a porção de C=C(R1)R2 é acetileno ou ciclopropiletileno.
[035] Um novo intermediário adicional da invenção tem a fórmula:
Figure BRPI0918966B1_D0010
ou o análogo protegido de 1,3-dioxolano correspondente, em cada caso, em que a função N é opcionalmente protegida com um grupo de proteção convencional, tal como Boc, CBz ou Fmoc.
[036] Os compostos da invenção podem formar sais que formam um aspecto adicional da invenção. Sais farmaceuticamente aceitáveis adequados de compostos
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15/79 da Fórmula II incluem sais de ácidos orgânicos, principalmente ácidos carboxílicos, incluindo, mas não limitado a, acetato, trifluoroacetato, lactato, gluconato, citrato, tartarato, maleato, malato, pantotenato, isotionato, adipato, alginato, aspartato, benzoato, butirato, digluconato, ciclopentanato, glucoheptanato, glicerofosfato, oxalato, heptanoato, hexanoato, fumarato, nicotinato, palmoato, pectinato, 3fenilpropionato, picrato, pivalato, proprionato, tartarato, lactobionato, pivolato, camforato, undecanoato e succinato, ácidos sulfônicos orgânicos, tais como metanossulfonato, etanossulfonato, 2-hidroxietano sulfonato, camforsulfonato, 2naftalenossulfonato, benzenossulfonato, p-clorobenzenossulfonato e ptoluenossulfonato; e ácidos inorgânicos, tais como cloridrato, bromidrato, iodidrato, sulfato, bissulfato, hemisulfato, tiocianato, persulfato, ácidos fosfórico e sulfônico.
[037] Os compostos da invenção podem, em alguns casos, ser isolados como o hidrato. Hidratos são geralmente preparados por recristalização a partir de uma mistura de solvente aquoso/orgânico, utilizando solventes orgânicos, tais como dioxina, tetrahidrofurano ou metanol. Hidratos também podem ser gerados in situ pela administração da cetona correspondente a um paciente.
[038] Os N-óxidos de compostos da invenção podem ser preparados por métodos conhecidos para aqueles ordinariamente versados na técnica. Por exemplo, N-óxidos podem ser preparados por tratamento de uma forma não oxidada do composto da invenção com um agente oxidante (por exemplo, ácido trifluoroperacético, ácido permaléico, ácido perbenzóico, ácido peracético, ácido meta-cloroperoxibenzóico, ou semelhantes) em um solvente orgânico inerte adequado (por exemplo, um hidrocarboneto halogenado, tal como diclorometano) em aproximadamente 0 °C. Alternativamente, os N-óxidos dos compostos da invenção podem ser preparados a partir do N-óxido de um material de partida adequado.
[039] Exemplos de N-óxidos da invenção incluem aqueles com as estruturas
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16/79 parciais:
ο ο
Figure BRPI0918966B1_D0011
R5 R5 [040] Compostos da invenção na forma oxidada podem ser preparados a partir de N-óxidos dos compostos correspondentes da invenção por tratamento com um agente de redução (por exemplo, enxofre, dióxido de enxofre, trifenil fosfina, borohidreto de lítio, borohidreto de sódio, bicloreto de fósforo, tribrometo, ou semelhantes) em um solvente orgânico inerte adequado (por exemplo, acetonitrila, etanol, dioxano aquoso, ou semelhantes) de 0 a 80 QC.
[041] Deve-se notar que as posições de radicais em qualquer porção molecular utilizada nas definições podem estar em qualquer lugar em tal porção, uma vez que é quimicamente estável.
[042] Radicais usados nas definições das variáveis incluem todos os isômeros possíveis, salvo indicação em contrário. Por exemplo, butila inclui t-butila, Ibutila, n-butila etc.
[043] Quando nenhuma variável ocorre mais de uma vez em qualquer componente, cada definição é independente.
[044] Salvo menção ou indicação em contrário, a designação química de um composto compreende a mistura de todas as formas isoméricas estereoquimicamente possíveis, cujo composto pode possuir. A referida mistura pode conter todos os diastereômeros e/ou enantiômeros da estrutura básica molecular do referido composto. Todas as formas estereoquimicamente isoméricas dos compostos da presente invenção tanto na forma pura ou misturada com os outros se destinam a ser adotadas no escopo da presente invenção.
[045] Formas estereoisoméricas puras dos compostos e intermediários,
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17/79 como aqui mencionados, são definidas como isômeros substancialmente livres de outras formas enantioméricas ou diastereoméricas da mesma estrutura básica molecular dos referidos compostos ou intermediários. Em particular, o termo estereoisomericamente puro refere-se a compostos ou intermediários tendo um excesso estereoisômérico de pelo menos 80% (isto é, mínimo de 90% de um isômero e máximo de 10% dos outros possíveis isômeros) até um excesso estereoisômérico de 100% (isto é, 100% de um isômero e nenhum do outro), mais em particular, compostos intermediários tendo um excesso estereoisômérico de 90% até 100%, ainda mais em particular com um excesso estereoisômérico de 94% até 100%, e mais em particular, tendo um excesso estereoisômérico de 97% até 100%. Os termos enantiomericamente puros e diastereoisomericamente puro devem ser entendidos de forma semelhante, mas levando em conta o excesso enantiomérico, e o excesso diastereomérico, respectivamente, da mistura em questão.
[046] Compostos da invenção podem ser preparados como estereoisômeros individuais reagindo uma mistura racêmica do composto com um agente de resolução opticamente ativo para formar um par de compostos diastereoisoméricos, separando os diastereoisômeros e recuperando o enantiômero opticamente puro. Enquanto a resolução de enantiômeros pode ser realizada utilizando derivados diastereoméricos covalentes de compostos da Fórmula II, complexos dissociáveis são preferidos (por exemplo, cristalina; sais diastereoisoméricos). Diastereômeros têm diferentes propriedades físicas (por exemplo, pontos de fusão, pontos de ebulição, solubilidade, reatividade etc.) e podem ser facilmente separados tirando vantagem dessas diferenças. Os diastereoisômeros podem ser separados por cromatografia, por exemplo, HPLC ou, preferencialmente, através de técnicas de separação/resolução baseadas em diferenças de solubilidade. O enantiômero opticamente puro é então recuperado, juntamente com o agente de resolução, por qualquer meio prático que não resulte em racemização. Uma descrição mais
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18/79 detalhada das técnicas aplicáveis à resolução de estereoisômeros de compostos a partir de sua mistura racêmica pode ser encontrada em Jean Jacques Andre Collet, Samuel H. Wilen, Enantiômeros, Eacematos e Resoluções, John Wiley & Sons, Inc. (1981).
[047] Os compostos de fórmula Il ou qualquer subgrupo de fórmula Il, conforme aqui definido, incluem radioisótopos ou compostos radiomarcados, em que um ou mais dos átomos é substituído por um isótopo daquele átomo, ou seja, um átomo com o mesmo número atômico como, mas com uma massa atômica diferente, o(s) normalmente encontrado(s) na natureza. Exemplos de isótopos que podem ser incorporados em compostos de fórmula I ou qualquer subgrupo de fórmula I incluem, mas não estão limitados a, isótopos de hidrogênio, tais como 2H e 3H (também denotados D para deutério e T para trítio, respectivamente), carbono, tal como 11C, 13C e 14C, nitrogênio, tal como 13N e 15N, oxigênio, tal como 150, 17O e 18O, fósforo, tal como 31P e 32P, enxofre, como 35S, flúor, tal 18F, cloro, tal como 36CI, bromo, tal como 75Br, 76Br, 77Br e 82Br, e iodo, tal como 1231, 1241, 125I e 131I.
[048] A escolha do isótopo incluído em um composto isótopo marcado vai depender da aplicação específica do composto. Por exemplo, para ensaios de distribuição de tecido de droga ou substrato, compostos em que um isótopo radioativo, tal como 3H ou 14C é incorporado, em geral, será mais útil. Para aplicações de rádio-imagem, por exemplo, tomografia por emissão de pósitrons (PET), um isótopo emissor de pósitrons, tal como 11C, 18F, 13N ou 15O será útil. A incorporação de um isótopo pesado, tal como deutério, ou seja, 2H, pode proporcionar maior estabilidade metabólica a um composto de fórmula I ou qualquer subgrupo de fórmula I, que pode resultar em, por exemplo, um aumento na meiavida in vivo do composto ou redução dos requisitos de dosagem.
[049] Para comodidade sintética, geralmente será preferível que os compostos de fórmula Il estejam no estado isotópico natural.
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19/79 [050] Compostos isotopicamente rotulados de fórmula I ou qualquer subgrupo de fórmula Il podem ser preparados por processos similares aos descritos nos Esquemas e / ou exemplos aqui abaixo usando o reagente isotopicamente marcado ou material de partida adequado em vez de reagente de nãoisotopicamente marcado ou matérias de partida correspondentes, ou por técnicas convencionais conhecidas por aqueles versados na técnica.
[051] Será apreciado que a invenção estende-se a pró-drogas, solvatos, complexos e outras formas liberando um composto da invenção in vivo.
[052] Embora seja possível o agente ativo ser administrado isoladamente, é preferível apresentá-lo como parte de uma formulação farmacêutica. Tal formulação incluirá o agente ativo acima definido, juntamente com um ou mais veículos/excipientes farmaceuticamente aceitáveis e, opcionalmente, outros ingredientes terapêuticos. O veículo(s) deve ser aceitável, no sentido de ser compatível com os outros ingredientes da formulação e não prejudiciais ao destinatário.
[053] As formulações incluem aquelas adequadas para administração retal, nasal tópica (incluindo bucais e sublinguais), vaginal ou parenteral (incluindo subcutânea, intramuscular, endovenosa e intradérmica), mas de preferência a formulação é uma formulação oral. As formulações podem ser convenientemente apresentadas em forma de dosagem única, por exemplo, comprimidos e cápsulas de liberação prolongada, e podem ser preparadas por qualquer método conhecido na técnica de farmácia.
[054] Tais métodos incluem a etapa de associar o agente ativo acima definido com um veículo. Em geral, as formulações são preparadas por uniforme e íntima associação do agente ativo com veículos líquidos ou veículos sólidos finamente divididos ou ambos, e, em seguida, se necessário molde do produto. A invenção se estende a métodos para preparar uma composição farmacêutica
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20/79 compreendendo trazer um composto de Fórmula II ou seu sal farmaceuticamente aceitável em conjunto ou em associação com um veículo ou veículo farmaceuticamente aceitável. Se a fabricação de formulações farmacêuticas envolve a mistura íntima dos excipientes farmacêuticos e do ingrediente ativo na forma de sal, então muitas vezes é preferível usar excipientes que sejam não-básicos na natureza, ou seja, ácidos ou neutros.
[055] Formulações para administração oral na presente invenção podem ser apresentadas como unidades discretas, tais como cápsulas, comprimidos ou tabletes, cada uma contendo uma quantidade predeterminada de um agente ativo; como um pó ou em grânulos; como uma solução ou uma suspensão do agente ativo em uma solução aquosa líquida ou um líquido não aquoso; ou como uma emulsão óleo em água líquida em emulsão, ou uma emulsão líquida de água em óleo e como um bolo etc.
[056] No que se refere a composições para a administração oral (por exemplo, tabletes e cápsulas), o termo veículo adequado inclui veículos, tais como excipientes comuns, por exemplo agentes de ligação, por exemplo, xarope, acácia, gelatina, sorbitol, tragacanto, polivinilpirrolidona (povidona), metilcelulose, etilcelulose, carboximetilcelulose de sódio, hidroxipropil-metilcelulose, sacarose e amido; excipientes e veículos, por exemplo, amido de milho, gelatina, lactose, sacarose, celulose microcristalina, caulim, manitol, fosfato de dicálcio, cloreto de sódio e ácido algínico; e lubrificantes, tais como estearato de magnésio, estearato de sódio e outros estearatos metálicos, estearato de glicerina, ácido esteárico, fluido de silicone, talco, ceras, óleos e sílica coloidal. Agentes aromatizantes, tais como hortelã-pimenta, óleo de gaultéria, aroma de cereja ou semelhantes também podem ser usados. Pode ser desejável adicionar um corante para tornar a dosagem facilmente identificável. Os tabletes podem ser revestidos por métodos conhecidos na técnica.
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21/79 [057] Um comprimido pode ser feito por moldagem ou compressão, opcionalmente com um ou mais ingredientes acessórios. Tabletes comprimidos podem ser preparados por compressão em uma máquina adequada do agente ativo em uma forma de fluxo livre, tal como um pó ou em grânulos, opcionalmente misturado com um aglutinante, lubrificante, diluente inerte, conservante, agente ativo de superfície ou de dispersão. Tabletes moldados podem ser feitos por moldagem em uma máquina apropriada de uma mistura do composto em pó umedecido com um diluente líquido inerte. Os tabletes podem ser opcionalmente revestidos ou marcados e podem ser formulados de modo a proporcionar liberação lenta e controlada do agente ativo.
[058] Outras formulações adequadas para administração oral incluem losangos que compreendem o agente ativo em uma base aromática, geralmente sacarose e acácia ou tragacanto; pastilhas compreendendo o agente ativo em uma base inerte, tal como gelatina e glicerina, ou sacarose e acácia; e enxaguantes bucais compreendendo o agente ativo em um veículo líquido adequado.
[059] A dosagem adequada para os compostos ou formulações da invenção dependerá da indicação e do paciente e é facilmente determinada por testes em animais convencionais. Dosagens fornecendo concentrações intracelulares (para inibição de proteases fisiológicas da superfamília da papaína) da ordem de 0,01 -100 uM, de preferência, 0,01-10 uM, tal como 0,1-25 uM, normalmente são desejáveis e alcançáveis.
[060] Os compostos da invenção são preparados por uma variedade de soluções e produtos químicos de fase sólida.
[061] Os compostos são geralmente preparados como blocos de construção que refletem as porções P1, P2 e P3 do inibidor de produto final. Sem, de modo nenhum, desejar se limitar pela teoria, ou a imputação de tentativas de modos de ligação de variáveis específicas, os conceitos teóricos P1, P2 e P3, como usados
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22/79 neste documento, são fornecidos apenas por conveniência e têm substancialmente seus significados de Schlecter & Berger convencionais e designam as porções do inibidor que são conhecidos por preencher subsítios S1, S2 e S3, respectivamente, da enzima, em que S1 é adjacente ao sítio de divagem e S3 remoto a partir do sítio de divagem. Compostos definidos pela Fórmula II se destinam a estar no escopo da invenção, independentemente do modo de ligação.
[062] Genericamente, o bloco de construção P1 terá a seguinte fórmula:
Figure BRPI0918966B1_D0012
Figure BRPI0918966B1_D0013
em que
R1 e R2 são como definido acima, os dois grupos Rb definem um cetal, tal como o bis metil cetal ou, em conjunto, definem um cetal cíclico, tal como 1,3dioxolano;
e Rc é um grupo de proteção hidroxila. Menos comumente, Rc é H ou representa a função ceto do inibidor do produto final nos casos em que o bloco de construção P1 como a cetona é alongado com P2 e P3.
[063] W005/066180 descreve a preparação de intermediários para os blocos de construção P1 acima, incluindo:
Figure BRPI0918966B1_D0014
Figure BRPI0918966B1_D0015
[064] A primeira etapa na síntese de compostos da invenção é tipicamente a preparação em solução de um bloco de construção P1 funcionalizado. O Esquema 1 ilustra uma rota para um intermediário de 6-aldeído conveniente.
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Figure BRPI0918966B1_D0016
i) Periodinano Dess-Martin, DCM, ii) trimetilortoformiato, pTs, MeOH, iii) Pd(OH)2, H2, MeOH; iv) B0C2O, 10 % NazCOs, v) Periodinano Dess-Martin, DCM; vi) 1 ) CH3PPh3Br, KOtBu, THF; vii) 1) 9-BBN-H, THF, 2) NaBO3, H2O, THF; viii) Periodinano Dess-Martin, DCM.
Esquema 1 [065] O álcool bicíclico departida (1a) pode ser preparado como descrito no W005/066180. A oxidação da função hidroxila, por exemplo, com periodinano DessMartin seguido pela transformação da função ceto fornecida em um dimetil cetal efetuada pelo tratamento com trimetil ortoformiato na presença de um ácido como ácido p-toluenosulfônico fornece 0 cetal (1b). A remoção dos grupos de proteção benzila e CBZ efetuada, por exemplo, por hidrogenólise usando um catalisador, como Pd(OH)2 ou similar, seguida de proteção boc da amina livre fornecida fornece 0 álcool (1c). A oxidação do álcool livre fornecido usando, por exemplo, periodinano Dess-Martin em um solvente como diclorometano seguido por uma reação de Wittig usando brometo de metil trifenilfosfínio na presença de KOt.Bu ou semelhante prevê a olefina (1d). Hidroxilação da dupla ligação efetuada, por exemplo, pelo tratamento com 9-BBN-H, fornece 0 álcool primário (1e) que posteriormente pode ser oxidado ao aldeído correspondente (1f) usando qualquer método de oxidação adequado, tal como tratamento com periodinano Dess-Martin ou semelhante.
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24Π§ [066] Esquema 2 ilustra um processo típico de um bloco de construção P1 de 6-acetileno com início a partir do intermediário de 6-aldeído do Esquema 1.
Figure BRPI0918966B1_D0017
Figure BRPI0918966B1_D0018
Figure BRPI0918966B1_D0019
1h
i) CBq, PPh3 CH2CI2, 0 °C, |i) nBuLi, THF, -7SC [067] O bloco de construção de acetileno C-6 1 h é preparado como indicado no Esquema 2. Essencialmente, o acetileno 1 h é facilmente preparado a partir do precursor de aldeído 1f pela metodologia Corey-Fuchs de 2 etapas através do correspondente 1,1-dibromoolefina 1g. O aldeído 1f é tratado com trifenilfosfinacarbondibrometo, por exemplo, gerado a partir de Ph3PCH2Cl2 e CBu, a 0 °C para gerar dibromoalqueno 1g. O tratamento subseqüente do dibrometo em um solvente orgânico, tal como THF à temperatura reduzida, normalmente com -78 QC com n-butil lítio fornece no trabalho de acompanhamento, o acetileno 1 h, em geral, em bom rendimento. Uma variedade de grupos de N-proteção convencionais pode ser usada em vez do grupo Boc mostrado aqui. Além disso, o dimetilcetal pode ser substituído por uma série de grupos de proteção de cetona padrão, incluindo cetais cíclicos, ou, menos comumente, o bloco de construção podería ser construído com a funcionalidade ceto ativa no local, antes do acoplamento.
Figure BRPI0918966B1_D0020
1) PPhs, CF2Br2j DMF
2) Zn
Figure BRPI0918966B1_D0021
h [068] Compostos de fórmula II, em que R1 e/ou R2 definem um substituinte de fluorovinila são preparados pela adição de um haleto de fluorometila, tal como
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25/79 dibromodifluorometano a uma solução de trifenilfosfina em um solvente orgânico, tal como DMF, por exemplo, a 0 QC sob atmosfera inerte. A solução é agitada por um período curto de tempo (por exemplo, 0,5 hora) e depois o aldeído 1f e pó de zinco são adicionados lentamente. Depois de uma hora à temperatura ambiente, a reação pode ser resfriada bruscamente por adição de NaHCOs aquoso para produzir um bloco de construção P1 1 h’ protegido (representado acima o N-Boc e dimetil acetal, mas outros grupos de proteção convencionais podem ser considerados).
Figure BRPI0918966B1_D0022
1f 1h [069] Compostos de fórmula II, em que R1 e/ou R2 definem um substituinte de vinil metilado, podem ser preparados por uma reação de Wittig. Por exemplo, potássio te/f- butóxido é adicionado a uma suspensão de um alquila ativada, tal como iodeto de trifenilfosfônio isopropílico em éter dietílico. Após aprox. 2 h, aldeído 1 f, dissolvido em um solvente, tal éter dietílico, é adicionado à solução. Após agitação (por exemplo, 1 h) a reação pode ser resfriada bruscamente com cloreto de amônio aquoso para produzir o bloco de construção de vinila 1h” (ilustrado acima como o dimetilvinila). Embora o esquema tenha sido retratado com os grupos de proteção de N-Boc e dimetil acetal, será evidente que outros grupos de proteção convencionais podem ser considerados.
Figure BRPI0918966B1_D0023
[070] Compostos de fórmula I, em que R2 é um grupo cicloalquila
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26/79 opcionalmente substituído, podem ser preparados por alquilação do bloco de construção etinila correspondente. No exemplo acima, 1h é tratado com uma base forte, por exemplo, amida de sódio, para obter o acetileto, que é subseqüentemente reagido com o haleto de cicloalquila adequado para produzir o bloco de construção de 1h” (no exemplo acima, cloreto de ciclopropila, mas outras cicloalquilas ativadas irão também ser eficazes).
[071] Alternativamente, a função de acetileno pode ser prorrogada por reação com CICH2CH2Br seguido de tratamento com uma base para formar um anel ciclopropila. Embora o esquema tenha sido retratado com os grupos de proteção NBoc e dimetil acetal, será evidente que outros grupos de proteção convencionais podem ser considerados.
[072] Normalmente, para obter o composto final, os blocos de construção P1 apropriados, tais como 1h, 1h’, 1h ou 1h’’’, são N-desprotegidos de uma forma convencional, como o tratamento com cloreto de acetila em metanol para remover um grupo de proteção N-Boc. Com a amina livre subseqüente, o resíduo de P2 é introduzido, por exemplo, através de BocP2-OH usando as condições de acoplamento padrão, tais como HATU, DIPEA em DMF. A proteção de terminal Boc é novamente removida com cloreto de acetila em metanol e o resíduo P3 introduzido através de P3-OH usando condições de acoplamento padrão, tais como HATU, DIPEA em DMF. Finalmente, a proteção de dimetilcetal é removida com TFA para gerar o composto final necessário.
[073] Alongamento é normalmente realizado na presença de um agente de acoplamento apropriado, por exemplo, hexafluorofosfato de benzotriazol-1iloxitrispirrolidinofosfônio (PiBOP), hexafluorofosfato de O-benzotriazol-l-il-N,N,N',N'tetrametilurônio (HBTU), hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il)-1,1,3,3tetrametil-urônio (HATU), cloridrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (EDC), ou 1,3-diciclohexil carbodiimida (DCC), opcionalmente na presença de L
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27/79 hidroxibenzotriazol (HOBT), e uma base, tal como N,N-diisopropiletilamina, trietilamina, N-metilmorfolina, e semelhantes. A reação é tipicamente realizada entre 20 e 30 °C, de preferência, em cerca de 25 °C, e necessita de 2 a 24 horas para ser concluída. Solventes de reação adequados são solventes orgânicos inertes, tais como solventes orgânicos halogenados (por exemplo, cloreto de metileno, clorofórmio etc.), acetonitrila, N, N-dimetilformamida, solventes etéreos, tais como tetrahidrofurano, dioxano, e semelhantes.
[074] Alternativamente, a etapa de acoplamento de alongamento acima pode ser realizada convertendo primeiro o bloco de construção P3/P2 em um derivado de ácido ativo, tal como éster de succinimida e, em seguida, reagindo com a amina P1. A reação requer tipicamente 2-3 horas para ser concluída. As condições utilizadas nesta reação dependem da natureza do derivado de ácido ativo. Por exemplo, se é um derivado do cloreto de ácido, a reação é realizada na presença de uma base apropriada (por exemplo, trietilamina, diisopropiletilamina, piridina, e semelhantes). Solventes de reação adequados são solventes orgânicos polares, tais como acetonitrila, N, N-dimetilformamida, diclorometano ou quaisquer misturas adequadas dos mesmos.
[075] O bloco de construção P2 é tipicamente um aminoácido N-protegido, tal como L-leucina, L-isoleucina, O-metil-L-treonina, L-3-hidroxivalina, 4fluoroleucina, ciclopentilglicina L ou L-ciclohexilglicina e P3 normalmente é composto por um grupo de nivelamento, tal como um derivado de ácido benzóico com, por exemplo, a porção N-alquil-piperazinil-E já introduzida ou fornecida com os mesmos Synthon na posição para.
[076] Os blocos de construção individuais adequadamente protegidos podem ser previamente preparados e posteriormente acoplados, de preferência, na seqüência P2+P1 P2-P1, seguido por ácido N-alquilpiperazinil-E-benzóico*+P2P1 N-alquilpiperazinil-E-benzoato-P2-P1, em que * denota uma forma ativa, a fim
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28/79 de minimizar racemização em P2.
[077] Acoplamento entre dois aminoácidos, um aminoácido e um peptídeo, ou dois fragmentos de peptídeo pode ser realizado através dos procedimentos de acoplamento padrão, tais como o método de azida, método de anidrido de ácido carbônico-carboxílico misto (cloroformiato de isobutila), método de carbodiimida (diciclohexilcarbodiimida, diisopropilcarbodiimida ou carbodiimida solúvel em água), método de éster ativo (éster de p-nitrofenila, imido éster de N-hidroxissuccínico), método K do reagente de Woodward, método de carbonildiimidazol, reagentes de fósforo ou métodos de oxidação-redução. Alguns desses métodos (especialmente o método de carbodiimida) podem ser potencializados pela adição de 1hidroxibenzotriazol ou 4-DMAP. Estas reações de acoplamento podem ser realizadas tanto em solução (fase líquida) ou em fase sólida.
[078] Mais explicitamente, a etapa de acoplamento envolve o acoplamento de um “dehydrative” de uma carboxila livre de um reagente com o grupo amino livre do outro reagente na presença de um agente de acoplamento para formar uma ligação de amida de acoplamento. Descrições dos agentes de acoplamento são encontradas em livros didáticos gerais de química de peptídeo, por exemplo, M. Bodanszky Química de Peptídeo, 2â ed rev., Springer-Verlag, Berlin, Alemanha, (1993), a seguir simplesmente denominada Bodanszky, o conteúdo do que é incorporado por referência. Exemplos de agentes de acoplamento adequados são N,N'diciclohexilcarbodiimida, 1-hidroxibenzotriazol na presença de N,N'diciclohexilcarbodiimida ou N-etil-N'-[(3-dimetilamino)propil]carbodiimida. Um agente de acoplamento prático e útil é hexafluorofosfato de (benzotriazol-i-iloxi)tris(dimetilamino)fosfônio disponível comercialmente, por si só ou na presença de 1hidroxibenzotriazol ou 4-DMAP. Outro agente de acoplamento prático e útil é tetrafluoroborato de 2-(IH-benzotriazol-1 -il)-N,N,N',N'-tetrametilurônio comercialmente disponível. Ainda outro agente de acoplamento prático e útil é
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29/79 hexafluorofosfato de O-(7-azabenzotriazol-1-il) - N, N, N',N'-tetrametilurônio disponível comercialmente.
[079] A reação de acoplamento é realizada em um solvente inerte, por exemplo, acetonitrila, diclorometano, ou dimetilformamida. Um excesso de uma amina terciária, por exemplo, diisopropiletilamina, N-metilmorfolina, N metilpirrolidina ou 4-DMAP é adicionado para manter a mistura de reação a um pH de cerca de 8. A temperatura de reação, geralmente, varia entre 0 °C e 50 °C e o tempo de reação varia geralmente entre 15 min. e 24 h.
[080] Os grupos funcionais dos constituintes aminoácidos não-naturais, em geral, devem ser protegidos durante as reações de acoplamento para evitar a formação de ligações indesejadas. Os grupos de proteção que podem ser utilizados estão listados em Greene, Grupos de Proteção em Química Orgânica, John Wiley & Sons, Nova Iorque (1981) e Os peptídeos: Análise, Síntese, Biologia, Vol. 3, Academic Press, Nova Iorque (1981), doravante designado simplesmente como Greene, as divulgações dos quais são aqui incorporados por referência.
[081] O grupo alfa-carboxila do resíduo C-terminal é normalmente protegido como um éster que pode ser clivado para dar o ácido carboxílico. Grupos de proteção que podem ser usados incluem: 1) ésteres de alquila, tais como metila, trimetilsilila e t-butila, 2) ésteres de aralquila, tais como benzila e benzila substituída, ou 3) ésteres que pode ser clivados por meios básicos moderados ou redutores moderados, tais como ésteres de tricloroetila e fenacila.
[082] O grupo alfa-amino de cada aminoácido a ser acoplado é normalmente N-protegido. Qualquer grupo de proteção conhecido na técnica pode ser usado. Exemplos desses grupos incluem: 1) grupos acila, tais como formila, trifluoracetila, fthalilal e p-toluenossulfonila; 2) grupos carbamato aromáticos, tais como benziloxicarbonila (CBZ ou Z) e benziloxicarbonilas substituídos, e 9fluorenilmetiloxicarbonila (Fmoc); 3) grupos carbamato alifáticos, tais como
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30/79 tercbutiloxicarbonila (Boc), etoxicarbonila, diisopropilmetoxi-carbonila, e alliloxicarbonila; 4) grupos alquil carbamato cíclicos, tais como ciclopentiloxicarbonila e adamantiloxicarbonila; 5) grupos alquila, tais como trifenilmetila e benzila; 6) trialquilsilila, tal como trimetilsilila; e 7) grupos contendo tiol, tais como feniltiocarbonila e ditiassuccinoíla. O grupo de proteção alfa-amino preferido é tanto Boc ou Fmoc. Muitos derivados de aminoácidos devidamente protegidos para a síntese de peptídeo estão disponíveis comercialmente.
[083] O grupo de proteção alfa-amino é normalmente clivado antes da etapa de acoplamento seguinte. Quando o grupo Boc é utilizado, os métodos de escolha são ácido trifluoroacético, puro ou em diclorometano, ou HCI em dioxano ou em acetato de etila. O sal de amônio resultante é então neutralizado, quer antes do acoplamento ou in situ, com soluções básicas, tais como tampões aquosos ou aminas terciárias, em diclorometano ou acetonitrila ou dimetilformamida. Quando o grupo Fmoc é usado, os reagentes de escolha são piperidina ou piperidina substituída em dimetilformamida, mas quaisquer aminas secundárias podem ser usadas. A desproteção é realizada a uma temperatura entre 0 °C e a temperatura ambiente, geralmente 20 a 22 °C.
[084] Uma vez que a seqüência de inibidor é concluída, quaisquer grupos de proteção remanescentes são removidos, cuja maneira é ditada pela escolha de grupos de proteção. Estes procedimentos são bem conhecidos por aqueles versados na técnica.
[085] Blocos de construção P2 na forma de L-aminoácidos N-protegidos estão prontamente disponíveis comercialmente, por exemplo, L-leucina, Lisoleucina, L-ciclohexilglicina, O-metil-L-treonina e outros estão disponíveis comercialmente com uma série de variantes de grupos de proteção, tais como CBz, Boc ou Fmoc. Outras variantes de R3 são facilmente preparadas a partir de matérias-primas disponíveis comercialmente. Por exemplo, compostos em que R3 é
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C(CHS)2OCH3 podem ser preparados reagindo ácido (S)-(+)-2-amino-3-hidroxi-3metilbutanóico protegido com CBz com 3,3-dimetoxi-hexahidro-furo(3,2 b) pirrol para formar a unidade desejada P2-P1. O álcool de cadeia lateral P2 pode agora ser metilado usando metiliodeto sob condições de hidreto de sódio convencional, imidazol, THF para obter ο P2 desejado, sem racemização substancial do centro alfa. Esta porção P2-P1 agora pode ser realizada através da síntese, como aqui descrito, ou seja, remoção e acoplamento de CBz.
[086] WO05/565299 descreve a preparação de um bloco de construção gama-fluoroleucina P2. Uma síntese alternativa de Fmoc e blocos de construção de N-Boc-gammafluoroleucina é mostrada em Truong et al Syn. Lett. 2005 nQ 8, 12781280.
[087] A preparação de blocos de construção P3 é descrita em
W005/066180, W008/007114 ou facilmente preparados por métodos análogos. Por exemplo, o Esquema E abaixo mostra a preparação de um bloco de construção P3,
Figure BRPI0918966B1_D0024
I. HOAc, Br2, RT, 2h, 55% de rendimento, li. KF, 18-coroa-6, CH3CN, 90 QC, h, 31% de rendimento; iii. HOAc, Br2, 45 QC, 4h, 100% de rendimento; iv. 4metilpiperazina-1-carbotioamida, etanol, 70 QC, 2h, 74% de rendimento, v. LiOH, THF, H2O, RT, 16 h, 79% de rendimento.
Esquema E
Síntese de ácido 4-[5-fluoro-2-(4-metil-piperazin-1 -il)-tiazol-4-il]-benzóico [088] O material de partida, 4-acetibenzoato de metila, é disponível
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32/79 comercialmente. Brominação na exposição à cetona é alcançada com bromo em ácido acético para fornecer o metil éster de ácido 4-(2-bromo-acetil)-benzóico desejado. O tratamento subseqüente de metil éster de ácido 4-(2-bromo-acetil)benzóico com fluoreto de potássio, na presença de 18-coroa-6 a 90 °C, fornece metil éster de ácido 4-(2-bromo-acetil)-benzóico, após cromatografia de coluna. Brominações repetidas na posição α à cetona é alcançada com bromo em ácido acético para fornecer o metil éster de ácido 4-(2-bromo-2-fluoro-acetil)benzóico desejado. Formação do tiazol é normalmente realizada por aquecimento de metil éster de ácido 4-(2-bromo-2-fluoro-acetil)benzóico com 4-metilpiperazina-1carbotioamida a 70 °C por 2 horas. Durante o resfriamento, o metil éster de ácido 4[5-fluoro-2-(4-metil-piperazin-1 -il)-tiazol-4-il]benzóico desejado precipita-se. Desproteção do metil éster é realizada usando uma solução de hidróxido de lítio e o ácido desejado, o ácido 4-[5-fluoro-2-(4-metil-piperazin-1-il)-tiazol-4-il]-benzóico é geralmente obtido em bom rendimento na forma de sal de dicloridrato no funcionamento com ácido clorídrico.
[089] O termo grupo de N-proteção ou N-protegido, como aqui utilizado, refere-se aos grupos destinados a proteger o N-terminal de um aminoácido ou peptídeo, ou para proteger um grupo amino contra reações indesejáveis durante os procedimentos sintéticos. Grupos de N-proteção comumente usados são divulgados em Greene, Grupos de Proteção em Síntese Orgânica (John Wiley & Sons, Nova Iorque, 1981), que é incorporado aqui por referência. Grupos de N-proteção incluem grupos acila, tais como formila, acetila, propionila, pivaloíla, t-butilacetila, 2cloroacetila, 2-bromoacetila, trifluoracetila, tricloroacetila, ftalila, o-nitrofenoxiacetila, α-clorobutirila, benzoíla, 4- clorobenzoíla, 4-bromobenzoíla, 4-nitrobenzoíla, e semelhantes; grupos sulfonila, tais como benzenossulfonila, p-toluenossulfonila, e semelhantes, grupos de formação de carbamato, tais como benziloxicarbonila, pclorobenziloxicarbonila, p-metoxibenziloxicarbonila, p-nitrobenziloxicarbonila, 2Petição 870190076983, de 09/08/2019, pág. 40/90
33/79 nitrobenziloxicarbonila, p-bromobenziloxicarbonila, 3,4-dimetoxibenziloxicarbonila, 4metoxibenziloxicarbonila, 2-nitro-4,5-dimetoxibenziloxicarbonila, 3,4,5trimetoxibenziloxicarbonila, 1 -(p-bifenilil)-1 -metiletoxicarbonila, a,a-dimetil-3,5dimetoxibenziloxicarbonila, benzidriloxicarbonila, t-butoxicarbonila, diisopropilmetoxicarbonila, isopropiloxicarbonila, etoxicarbonila, metoxicarbonila, alliloxicarbonila, 2,2,2-tricloroetoxicarbonila, fenoxicarbonila, 4-nitrofenoxicarbonila, fluorenil-9-metoxicarbonila, ciclopentiloxicarbonila, adamantiloxicarbonila, ciclohexiloxicarbonila, feniltiocarbonila, e semelhantes; grupos alquila, tais como benzila, trifenilmetila, benziloximetila e semelhantes; e grupos silila, tais como trimetilsilila e semelhantes. Grupos de N-proteção favoráveis incluem formila, acetila, benzoíla, pivaloíla, t-butilacetila, fenilsulfonila, benzila (bz), t-butoxicarbonila (BOC) e benziloxicarbonila (Cbz).
[090] Grupos de proteção hidróxi e/ou carbóxi também são amplamente revistos em Greene ibid e incluem éteres, tais como metila, éteres de metila substituídos, tais como methoximetila, metiltiometila, benziloximetila, t-butoximetila, 2-metoxietoximetila e semelhantes, éteres de silila, tais como trimetilsilila (TMS), tbutildimetilsilila (TBDMS), tribenzilsilila, trifenilsilila, t-butildifenilsilil triisopropil silila e similares, éteres de etila substituídos, tais como 1-etoximetila, 1-metil-1-metoxietila, t-butila, alila, benzila, p-metoxibenzila, difenilmetila, trifenilmetila e similares, grupos aralquila, tais como tritila e pixila (derivados de 9-hidroxi-9-fenilxanteno, especialmente cloreto). Grupos de proteção de éster hidróxi incluem ésteres, tais como formato, benzilformato, cloroacetato, metoxiacetato, fenoxiacetato, pivaloato, adamantoato, mesitoato, benzoato e semelhantes. Grupos de proteção de carbonato hidróxi incluem metil vinila, alila, cinamila, benzila e semelhantes.
Descrição Detalhada das Modalidades [091] Várias modalidades da invenção serão agora descritas por meio de ilustração apenas com referência aos Exemplos a seguir e Figura 1 que apresenta a
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34/79 concentração de plasma contra o tempo para camundongos C57BI machos oralmente administrados com um composto da invenção ou um composto da técnica anterior.
Exemplo de Referência 1
Um bloco de construção P3
Etapa a) 4-Cianopropiofenona
CN [092] Como descrito para a preparação de 4-cianoacetofenona (Synth. Commun 1994, 887-890), uma mistura de 4-bromopropiofenona (5.65 g, 26.4 mmol), Zn(CN)2 (1.80 g, 15.3 mmol) e Pd(PPh3)4 (2.95 g, 2.6 mmol) foi refluída a 80 0C em DMF desoxigenado (35 mL, armazenada em mais de peneiras moleculares 4Á, efervescida com Ar antes de utilização) por 18 horas. A mistura foi dividida entre tolueno (100 mL) e 2N NH4OH (100 mL). A fase orgânica foi extraída com 2N NH4OH (100 mL), lavada com NaCl aquoso saturado (2 x 100 mL), seca, e evaporada. Uma reação de escala de 10 mmol foi feita de forma semelhante e os produtos brutos foram combinados. Cromatografia Flash (sílica 330 g, éter de petróleo 6/1 - AcOEt) forneceu sólidos brancos (5.17 g, 89%).
[093] 1H RMN (CDCl3) δ ppm: 1.22 (t, 3H, J = 7.2 Hz), 3.00 (q, 2H, J = 7.3 Hz), 7.75 (d, 2H, J = 8.8 Hz), 8.03 (d, 2H, J = 8.4 Hz) [094] 13C RMN (CDCb) δ ppm: 7.8, 32.1, 116.1, 1 17.9, 128.3, 132.4, 139.7,
199.2
Etapa b) Ácido 4-Propionilbenzóico
COOH [095] 4-Cianopropiofenona (4.67 g, 29,3 mmol) foi refluído com 2N NaOH (90 mL, 180 mmol) e dioxano (90 mL) a 95 0C durante a noite. A mistura foi diluída com
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35/79 água (150 mL), lavada com éter (75 mL), acidificada a pH 2 com HCl concentrado, e extraída com éter (3 x 75 mL). A fase orgânica foi lavada com NaCl aquoso saturado (3 x 75 mL), seca, e evaporada para fornecer sólidos amarelos (5.12 g, 98%).
[096] 1H RMN (CDCl3 + CD3OD) δ ppm: 1.18 (t, 3H, J = 7.2 Hz), 2.99, (q, 2H, J = 7.1 Hz), 7.95 (d, 2H, J = 8.4 Hz), 8.08 (d, 2H, J = 8.8 Hz) [097] 13C RMN (CDCb) δ ppm: 7.9, 32.1, 127.7, 130.0, 134.0, 140.0, 168.0,
200.8
Etapa c) Metil 4-propionilbenzoato
Figure BRPI0918966B1_D0025
COOMe [098] O ácido benzóico acima (890 mg, 5 mmol), NaHCO3 (1.26 g, 15 mmol) e iodometano (935 pL., 15 mmol) em DMF (10 mL.) foram agitados durante a noite em temperatura ambiente. A mistura foi diluída com NaCl aquoso saturado (50 mL) e extraída com éter (3 x 50 mL). A fase orgânica foi lavada com água (50 mL), seca, e evaporada. Cromatografia Flash (sílica 90g, éter de petróleo 2/1 - AcOEt) forneceu sólidos brancos (744 mg, 77%).
[099] 1H RMN (CDCb) δ ppm: 1.24 (t, 3H, J = 7 Hz), 3.03 (q, 2H, J = 7 Hz), 3.95 (s, 3H), 8.0 e 8.12 (ABq, 4H)
Etapa d) Metil 4-(2-bromopropionil)benzoato
Figure BRPI0918966B1_D0026
[100] Metil 4-propionilbenzoato (744 mg, 3.87 mmol), tribromidrato de pirrolidona (1.98 g), e 2-pirrolidinona (380 mg, 4.5 mmol) em THF (38 mL) foram aquecidos a 50 0C sob nitrogênio por 3 horas. A mistura foi resfriada, filtrada, concentrada, e então, dissolvida novamente em éter (50 mL). A solução de éter foi lavada sucessivamente com água (20 mL), Na2S2O5 aquoso saturado (20 mL), NaCl aquoso saturado (20 mL) e água (20 mL), seca e evaporada para fornecer um óleo amarelo (1.025 g), que foi utilizado diretamente no acoplamento Hantzsch. Este
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36/79 material continha 91% da bromocetona desejada, 5% de cetona de partida, e 4% de
4-bromo-1-butanol, conforme determinado por 1H RMN.
[101] 1H RMN (CDCl3) δ ppm: 1.92 (d, 3H, J = 7 Hz), 3.96 (s, 3H), 5.28 (q, 1H, J = 7 Hz), 8.07 e 8.14 (ABq, 4H)
Etapa e) Éster metílico de ácido 4-[2-(4-íe/'c-Butoxicarbonilpiperazina-1-il)-5metiltiazol-4-il] benzóico
BocN
COOMe [102] Todos os α-bromocetona acima e terc-butil éster de ácido 4tionocarbonilpiperazina-1-carboxílico {J. Med. Chem., 1998, 5037-5054, 917 mg, 3.73 mmol) foram refluídos em 36 mL de THF a 70 0C por 2 h, sob N2. O precipitado foi filtrado e, o filtrado, evaporado para fornecer sólidos amarelos. Cromatografia em coluna Flash (sílica, éter de petróleo 5/1 - AcOEt) forneceu 624 mg de sólidos amarelos claros. Cromatografia do precipitado (sílica, éter de petróleo 2/1 - AcOEt) forneceu 32 mg a mais de composto. O rendimento total é de 44%.
[103] 1H RMN (CDCl3) δ ppm: 1.46 (s, 9H), 2.43 (s, 3H), 3.42, (m, 4H), 3.54 (m, 4H), 3.90 (s, 3H), 7.68 e 8.04 (ABq, 4H).
Etapa f) Ácido 4-[2-(4-íe/'c-Butoxicarbonilpiperazina-1-il)-5-metiltiazol-4-il] benzóico
BocN
COOH [104] O éster metílico acima (564 mg, 1.35 mmol) foi aquecido com 1.35 mL de 2N NaOH, 5 mL de THF, e 3.65 mL de água a 60 0C por 4 horas. A mistura de reação foi evaporada, derramada em 20 mL de NaCl aquoso saturado e 20 mL de CH2CL2 e, então acidificada a pH 3 com 5% de ácido cítrico, em um banho de gelo. As camadas foram separadas e a fase orgânica foi extraída adicionalmente com 2 x 10 mL de CH2CL2. As fases orgânicas foram combinadas, lavadas com água (10
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37/79 mL), secas, e evaporadas para fornecer sólidos amarelos claros (537 mg, 98%).
[105] 1H RMN (CDCl3) δ ppm: 1.48 (s, 9H), 2.47 (s, 3H), 3.47 (m, 4H), 3.57 (m, 4H), 7.74 e 8.12 (ABq, 4H).
[106] 13C RMN (CDCh) δ ppm: 12.6, 28.3, 42.8, 48.1, 80.3, 119.1, 127.8,
128.2, 130.1, 140.5, 145.6, 154.6, 167.2, 171.4.
[107] LCMS: (M + H)+ 404, (M - H)+ 402.
Etapa g) Ácido 4-[5-metil-2-(4-metil-piperazina-1 -il)-tiazol-4-il] benzóico
COOH [108] Terc-butil éster de ácido 4-[4-(4-carboxi-fenil)-5-metil-tiazol-2-il]piperazina-1-carboxílico (0.421 mmol) foi dissolvido em 4M HCl em 1,4-dioxano, e agitado em temperatura ambiente por 1 hora. O solvente foi então removido sob vácuo, e o resíduo de ácido 4-(5-metil-2-piperazina-1-il-tiazol-4-il)-benzóico foi suspenso em metanol (10 mL) e tratado com tampão de AcOH/AcONa (pH -5.5, 5 mL) e formaldeído (0.547 mmol). A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente por 1 hora, e então, tratada com NaCNBH3 (0.547 mmol) e agitada à temperatura ambiente durante a noite. O solvente foi então removido sob vácuo, e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna para dispor o composto do título (0.403 mmol, 95%).
[109] MS(ES) m/z 318 (100%, [M+H]+).
Exemplo de Referência 2
Um bloco de construção P3 alternativo
Sal HCl de ácido 3-Fluoro-4-[2-(4-metilpiperazina-1-il)-tiazol-4-il] benzóico
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38/79
Figure BRPI0918966B1_D0027
95%
Figure BRPI0918966B1_D0028
36%
Zn, AC2O, TFA Alil Cl, CoBr MeCN
Figure BRPI0918966B1_D0029
TMSCHN2 MeOH-PhMe 0 graus até temp. ambiente
Figure BRPI0918966B1_D0030
Figure BRPI0918966B1_D0031
Etapa a) Metil 4-bromo-3-fluorobenzoato [110] Ácido 4-Bromo-3-fluorobenzóico (2.46 g, 11.2 mmol) foi dissolvido em MeOH (9 mL) e tolueno (4 mL) e resfriado em um banho de gelo. (Trimetilsilil) diazometano (11 mL, 2,0 M em hexanos, 22 mmol) foi adicionado gota a gota até a cor amarela persistir. A solução foi agitada à temperatura ambiente por 40 minutos e então concentrada no vácuo. Um segundo grupo de ácido carboxílico (2.43 g) foi tratado de forma similar. O produto bruto de ambos os grupos foi combinado e submetido à cromatografia flash (sílica, pentano 5/1 - AcOEt), para fornecer o éster metílico como sólidos brancos (4.92 g, 95% de rendimento).
[111] 1H RMN (400 MHz, CDCh) delta ppm 7.77 (m, 1 H), 7.71 (m, 1 H), 7.64 (m, 1H), 3.93 (s, 3H).
Etapa b) Metil 4-acetoxi-3-fluorobenzoato [112] Cloreto de alila (105 pL, 1.28 mmol) e TFA (20 pL, 0.26 mmol) foram adicionados a uma suspensão de pó de zinco (480 mg, 7.34 mmol) e brometo de cobalto (II) anidro (96.6 mg, 0.44 mmol) em MeCN (4 mL), sob gás inerte. Após agitação em temperatura ambiente por 10 minutos, o brometo de arila (1.003 g, 4.30 mmol dissolvido em 5 mL de MeCN) de (a) foi adicionado, seguido por anidrido
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39/79 acético (0.45 mL, 4.79 mmol) e mais MeCN (1 mL) . A mistura foi agitada durante a noite, resfriada com 1 M HCl (20 mL) e, então, extraída com AcOEt (3 x 20 mL). A fase orgânica foi lavada sucessivamente com NaHCO3 aquoso saturado (20 mL) e NaCl saturada (2 x 20 mL), seca (Na2SO4) e concentrada. Cromatografia Flash (sílica, éter de petróleo 6/1 a 4/1 - AcOEt) forneceu brometo recuperado (161.1 mg, 16%) e a cetona desejada (sólidos brancos, 305.5 mg, 36%).
[113] RMN (CDCl3) δ ppm: 1H (400 MHz) 7.94-7.86 (m, 2H), 7.80 (dd, 1 H, J = 1 1.2, 1.6 Hz), 3.95 (s, 3H), 2.67 (d, 3H, J = 4.4 Hz); 19F (376 MHz) -109.2 (m); 13C (100 MHz) 195.4 (d , J = 3.7 Hz), 165.1 (d, J = 2.2 Hz), 161.6 (d, J = 255 Hz), 135.8 (d, J = 8.1 Hz), 130.7 (d, J = 2.9 Hz), 129.0 ( d, J = 14 Hz), 125.2 (d, J = 3.6 Hz),
117.9 (d, J = 26 Hz), 52.7 (s), 31.4 (d, J = 7.3 Hz).
Etapa c) Metil 4-(2 bromoacetoxi)-3-fluorobenzoato [114] THF (10 mL) e 2-pirrolidinona (91 pL, 1.20 mmol) foram adicionados a uma mistura de cetona de b) (198 mg, 1.01 mmol) e tribromidrato de pirrolidona (532 mg, 1.07 mmol). Após aquecimento a 60-65 0C por 2 horas, a mistura foi concentrada sob vácuo e, então, dividida entre AcOEt (20 mL) e NazSzOs saturado (10 mL). A fase aquosa foi extraída com AcOEt (10 mL). As fases orgânicas foram combinadas, lavadas com NaCl saturado (2 x 10 mL), secas (Na2SO4), e concentradas. Cromatografia Flash (sílica, éter de petróleo 7/1 - AcOEt) forneceu sólidos brancos (0.2634 g), contendo 84% do brometo desejado (como determinado pela integração de picos 19F RMN).
[115] RMN (CDCls) δ ppm: 1H (400 MHz) 7.93 (m, 1H), 7.88 (m, 1H), 7.79 (dd, 1H, J = 11.2, 1.6 Hz), 4.50 (d, 2H, J = 2.4 Hz), 3.94 (s, 3H); 19F (376 MHz) 108.4 (m).
Etapa d) Metil 3-fluoro-4-[2-(4-metilpiperazina-1-il)-tiazol-4-il]benzoato [116] EtOH (5,0 mL) foi adicionado à bromocetona acima (193 mg, 0.70 mmol) e amida de ácido 4-metil-piperazina-1-carbotióico (113 mg, 0.71 mmol) e a
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40/79 mistura foi aquecida a 70 0C por 2 horas e 15 minutos. Os precipitados foram filtrados, lavados com EtOH frio e secos sob vácuo e caracterizados. O procedimento foi repetido em uma escala maior para 1.75 g de bromocetona (6.36 mmol).
[117] RMN (1/1 CDCls- CD3OD) δ ppm: 1H (400 MHz) 8.20 (m, 1H), 7.86 (dd, 1H, J = 8.4, 1.6 Hz), 7.76 (dd, 1H, J = 1 1.4, 1.8 Hz), 7.38 (d, 1H, J = 2.4 Hz), 4.23 (br, 2H), 3.95, (s, 3H), 3.65 ( br, 4H), 3.32 (br, 2H), 2.98 (s, 3H); 19F (376 MHz) 114.0 (m). LCMS [M+H]+ = 336.
[118] Os precipitados de ambas as preparações foram combinados e suspensos em NaHCO3 saturado (50 mL). A mistura foi extraída com AcOEt. A fase orgânica foi lavada com água, seca (Na2SO4) e evaporada para fornecer o composto do título como sólidos creme (1,76 g).
Etapa e) Sal HCl de ácido 3-fluoro-4-[2-(4-metilpiperazina-1-il)-tiazol-4il)benzóico [119] O éster metílico (1.76 g, 5.25 mmol) de (d) foi aquecido a 80 0C com 6M HCl (40 mL) por 5.5 horas. Mais 6M HCl (10 mL) foi adicionado e a mistura foi aquecida a 90 0C por 1 hora 15 minutos. Após resfriamento, a mistura foi, então, evaporada sob vácuo e liofilizada da água para fornecer o produto final como sólidos creme em rendimento quantitativo. RMN (DMSO-d6) δ ppm: 1H (400 MHz) 1 1.60 (br, 1H), 8.18 (t, 1H, J = 8.0 Hz), 7.82 (dd, 1H, J = 8.4, 1.6 Hz), 7.72 (dd, 1H, J = 12.0, 1.6 Hz), 7.48 (d, 1H, J = 2.8 Hz), 4.1 1 (m, 2H), 3.58 (m, 2H), 3.49 (m, 2H), 3.19 (m, 2H), 2.80 (d, 3H, J = 4.4 Hz); 19F (376 MHz) -1 13.5 (m); 13C (100 MHz) 168.9, 166.0, 159.0 (d, J = 250 Hz), 143.4, 131.4 (d, J = 8 Hz), 129.8, 125.8 (d, J = 11 Hz), 125.6, 116.6 (d, J = 24 Hz), 111.1 (J = 15 Hz), 51.1 , 45.0, 41.9. LCMS [M+H]+ = 322.
Exemplo de Referência 3
6-aldeído-Intermediário
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41/79 ο
Figure BRPI0918966B1_D0032
Terc-butil éster de ácido 6-formil-3,3-dimetoxi-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4carboxílico
Etapa a
Figure BRPI0918966B1_D0033
Benzil éster de ácido (3as, 6aS)-6R-benziloxi-3-oxo-hexahidro-furo [3,2-b] pirrol-4-carboxílico (1a) [120] Reagente Dess-Martin (12.5 g, 30 mmol) foi dissolvido em DCM (250 mL). Benzil éster de ácido 6-benziloxi-3-hidroxi-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4carboxílico (preparado como descrito no WO05/066180) (7.4 g, 20 mmol) em DCM (50 mL) foi adicionado a uma solução agitada de oxidante em temperatura ambiente sob uma atmosfera de nitrogênio durante 45 minutos. Depois de uma agitação adicional de 90 minutos, a reação foi considerada completa por TLC. Na2S2O3 aquosa a 10% (200 mL) foi adicionada e a mistura foi agitada em temperatura ambiente por mais 15 minutos. O sistema de duas fases foi transferido para um funil de separação e extraído duas vezes com AcOEt (200 mL e 100 mL, respectivamente). As fases orgânicas combinadas foram lavadas uma vez com NaHCO3 aquoso saturado (100 mL) e água salgada (100 mL), secas em Na2SO4, filtradas e o solvente removido no vácuo, produzindo o composto do título do produto bruto como um óleo claro (7.69 g); ESI+, m/z: 368 (M + +1).
Etapa b
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Figure BRPI0918966B1_D0034
Benzil éster de ácido (3aS, 6aS)-6R-benziloxi-3,3-dimetoxi-hexahidro-furo [3,2-b] pirrol-4-carboxílico (1b) [121] O ceto derivado (1a) (7.6 g) foi dissolvido em metanol seco (100 mL). Trimetil ortoformiato (30 mL) e pTsOH (0.2 g) foram adicionados em temperatura ambiente sob uma atmosfera de nitrogênio. A mistura foi aquecida a 60 0C por 8 horas. Quando se considerou que a reação tinha alcançado a conclusão de acordo com TLC, ela foi resfriada em temperatura ambiente e concentrada no vácuo. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna em eluição de gel de sílica com acetato de etila-heptano (1:4), o qual forneceu o composto do título como um óleo claro (5.9 g, 71% em 2 etapas); ESI+, m/z: 382 (M + - OMe).
Etapa c
Figure BRPI0918966B1_D0035
(3aS, 6aS)-3,3-dimetoxi-hexahidro-furo[3 ,2-b] pirrol-6R-ol (1c) [122] Uma solução de composto (1 b) (2.5 g, 6.4 mmol) em metanol (60 mL) e Pd(OH)2 (0.7 g) foi agitada em temperatura ambiente sob atmosfera de H2 por 48 horas. Quando se considerou que a reação tinha alcançado a conclusão de acordo com TLC, a mistura foi filtrada e concentrada no vácuo para produzir o composto do título bruto como um óleo acastanhado (1.15 g); ESI+, m/z: 190 (M + +1).
Etapa d
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43/79
Figure BRPI0918966B1_D0036
Terc-butil éster de ácido (3aS, 6aS)-6R-hidroxi-3,3-dimetoxi-hexahidro-furo [3,2-b] pirrol-4-carboxílico (1d) [123] (1c) 3,3-dimetoxi-hexahidro-furo [3,2-b] pirrol-6-ol (2.80 g, 14.8 mmol) foi dissolvido em 75 mL de uma mistura de dioxano/água (2:1). Uma solução de 10% de Na2CO3 (25 mL) foi adicionada gota a gota a pH 9-9.5. A mistura foi resfriada a 0 0C em um banho de água gelada e anidrido Boc foi adicionado em uma porção. A reação foi agitada em temperatura ambiente durante a noite e o pH da mistura foi mantido em 9-9.5 pela adição de mais solução de 10% de Na2CO3, se necessário. A reação foi monitorada por TLC (50:50 acetato de etila: isohexano). Uma vez concluída, a mistura foi filtrada para eliminar os sais formados e o solvente foi evaporado no vácuo. A mistura aquosa foi extraída com 3 x 100 mL de AcOEt, as fases orgânicas combinadas foram lavadas com 100 mL de água e 100 mL de água salgada, secas em Na2SO4, filtradas e o solvente foi evaporado no vácuo para fornecer 3.79 g do carbamato do título como um óleo claro (89%), 94% puro (HPLC), ESI+, m/z: 312 (M++Na).
Etapa e
Figure BRPI0918966B1_D0037
Terc-butil éster de ácido 3,3-Dimetoxi-6-oxo-hexahidro-furo [3,2-b] pirrol-4carboxílico (1e) [124] Ao álcool (1e) (3.674 g, 12.70 mmol) dissolvido em DCM (80 mL), foi adicionado Dess-Martin Periodinano (7.00 g, 16.5 mmol) e a solução foi agitada por
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44/79 horas em temperatura ambiente. A reação foi então extinta pela adição de 10% de Na2S2Ü (aq) (150 mL) e a pasta resultante foi agitada por 15 minutos. A mistura foi transferida para um funil de separação e as fases foram separadas. A fase aquosa foi extraída em instantes com DCM e as fases orgânicas combinadas foram posteriormente lavadas duas vezes com solução NaHCO3 sat. e foram secas, filtradas e concentradas. O material bruto foi purificado por cromatografia em coluna (tolueno/acetato de etila 3:1) o qual forneceu o composto do título (2.882 g, 79%).
Etapa f
Figure BRPI0918966B1_D0038
Terc-butil éster de ácido 3,3-Dimetoxi-6-metileno-hexahidro-furo [3,2-b] pirrol-4-carboxílico (1f) [125] O composto 1e-ceto (1.10 g, 3.83 mmol) foi dissolvido em THF seco (30 mL) e a solução foi resfriada a 0 0C. Uma solução de brometo de metiltrifenilfosfônio (4.0 g, um 11.2 mmol) e KOtBu (1.17 g, 10.5 mmol) em THF seco (40 mL) foi adicionada em 3 alíquotas com duas horas de intervalo. Após 6 horas, a solução foi derramada em um funil de separação com éter etílico (70 mL) e extraída com 10% de ácido cítrico (aq)(2*40 mL). A fase orgânica foi lavada com NaHCO3 aquoso saturado (40 mL), seca com Na2SO4, filtrada e o solvente foi evaporado no vácuo. O produto bruto foi purificado por cromatografia flash (heptano: acetato de etila 4:1) o qual forneceu o composto do título (524 mg, 48%).
[126] 1H RMN (CDCl3, 400 MHz) δ 1.48 (s, 9H), 3.27 (s, 3H), 3.40 (d, 3H, J = 16.6), 3.57- 3.64 (m, 1H), 3.84 (d, 1H, J = 9.5), 3.92 (d, 1H, J = 16.3), 4.07- 4.25 (m, 1H), 4.35- 4.49 (m, 1 H), 4.98 (bs, 1H), 5.22 (d, 1H, J = 16.4), 5.34 (s, 1H).
Etapa g
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45/79
OH
Figure BRPI0918966B1_D0039
Terc-butil éster de ácido 6-Hidroximetil-3,3-dimetoxi-hexahidro-furo [3,2-b] pirrol-4-carboxílico (1g) [127] A olefina 1e (524 mg, 1.84 mmol) foi dissolvida em THF seco (70 mL). 9-BBN-H (0.5 M em THF) (7.34 mL, 3.67 mmol) foi adicionado e a solução foi agitada durante a noite. O solvente foi removido por evaporação rotatória e dissolvido novamente em THF (20 mL). MeOH (10 mL) foi lentamente adicionado à solução e, quando a evolução de gás cessou, H2O (20 mL) foi adicionado à solução seguido por NaBO3. A solução foi filtrada, após ter sido agitada por 18 horas e o filtrado foi diluído com AcOEt (70 mL) e lavado com água salgada (2*50 mL). A fase orgânica foi seca com Na2SO4, filtrada e o solvente foi evaporado no vácuo. O produto bruto foi purificado por cromatografia flash (heptano: acetato de etila 2:1) o qual forneceu o composto do título (477 mg, 86%).
[128] 1H RMN (CDCl3, 400 MHz) 51.47 (s, 9H), 2.09- 2.25 (m, 2H), 3.02- 3.20 (m, 1H), 3.29 (s, 3H), 3.39 (s, 3H), 3.65- 3.93 (m, 4H), 4.44 (d, 1H, J = 5.7), 4.704.84 (m, 1H).
Etapa h o
Figure BRPI0918966B1_D0040
Terc-butil éster de ácido 6-Formil-3,3-dimetoxi-hexahidro-furo [3,2-b] pirrol-4carboxílico (1h) [129] À uma solução do álcool 1g (370 mg, 1.22 mmol) dissolvido em DCM seco (10 mL) foi adicionado Dess Martin Periodinano (673 mg, 1.59 mmol). A reação
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46/79 foi agitada por 40 minutos e depois extinta pela adição de 10 mL de Na2S2Ü3: NaHCO3(sat) 1:1. A solução foi diluída com DCM (50 mL) e extraída com uma mistura 1:1 de 10% de Na2S2O3: NaHCO3(sat) (50 mL). A fase orgânica foi seca com Na2SO4, filtrada e evaporada. O produto bruto foi purificado por cromatografia flash (heptano: acetato de etila (2:1), o qual forneceu o composto do título (290 mg, 79%)).
[130] 1H RMN (CDCl3, 400 MHz) 51.47 (s, 9H), 2.90- 3.06 (m, 1H), 3.29 (s, 3H), 3.38 (s, 3H), 3.67- 3.85 (m, 2H), 3.88- 4.55 (m, 3H), 4.93- 5.19 (m, 1H), 9.64* e 9.80* (s, 1H). * Dois picos devido a rotâmeros.
Exemplo de Referência 4
Bloco de construção P1 6-acetileno
Figure BRPI0918966B1_D0041
Terc-butil éster de ácido 6-Etinil-3,3-dimetoxi-hexahidro-furo (3,2-b) pirrol-4carboxílico
Etapa a)
Figure BRPI0918966B1_D0042
[131] O aldeído do Exemplo de Referência 3 (318.3 mg, 1.06 mmol) em 6 mL de diclorometano (DCM) foi adicionado gota a gota a uma solução de CBr4 (700 mg, 2.11 mmol) e PPh3 (1.10 g, 4.19 mmol) em 10 mL de DCM, com resfriamento em um banho de gelo. Após agitação a 0 0C por 2 horas, a mistura foi diluída com 30 mL de iso-hexano e, então, filtrada através de uma coluna Celite curta. A coluna foi lavada com 20 mL de i-hexano, seguida por 3/1 i-hexano - DCM. O filtrado foi evaporado
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47/79 para fornecer sólidos amarelos claros. Cromatografia flash (sílica, 3/1 i-hexano AcOEt) forneceu composto 2 (339.5 mg, 70% de rendimento).
[132] 1H RMN (400 MHz, CDCl3) δ 6.55 (d, 1H, J = 8.8 Hz, HC=CBr2), 4.64 (br s, 1 H), 4.42 (d, 1H, J = 5.2 Hz), 4.10-3.90 (br m, 1 H), 3.85-3.65 (m, 2H), 3.37 (s, 3H, OMe), 3.29 (s, 3H, OMe), 3.00 (m, 1 H), 2.84 ( br s, 1 H).
Etapa b)
Figure BRPI0918966B1_D0043
[133] Solução de Butil-lítio (1.6M em hexanos, 1.50 mL) foi adicionada gota a gota a, -78 0C, a uma solução do dibromoalceno da etapa a (327.5 mg, 0.72 mmol) em 13 mL de THF. Após agitação a -78 0C por 1.75 horas, a reação foi extinta com 3 mL de aquosa saturada de NH4CL. A mistura de reação foi concentrada, e, então, dividida entre 30 mL de NaCl aquoso saturado e 30 mL de AcOEt. A fase aquosa foi extraída com 2 x 30 mL de AcOEt. As fases orgânicas foram combinadas, secas (Na2SO4), e evaporadas para fornecer um óleo amarelo. Cromatografia flash (sílica, 3/1 i-hexano - AcOEt) forneceu composto do título como sólidos brancos (161.7 mg, 67% de rendimento).
[133] 1 H RMN (500 MHz, CDCl3) δ 4.67 (br s, 1 H), 4.40 (br s, 1 H), 4.16-4.0 (br m, 1H), 3.88-3.74 (m, 2H), 3.37 (s, 3H, OMe), 3.29 (s, 3H, OMe), 3.16 ( br s, 1H), 2.81 (br s, 1 H, HC-CECH), 2.20 (d, 1 H, CHCH), 1.47 (s, 9H, tBu).
Exemplo de Referência 5
Acoplamento & desproteção típicos de P1/P2
Etapa a)
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Figure BRPI0918966B1_D0044
[134] Cloreto de acetila (0.51 mL) foi adicionado gota a gota a uma solução do alcino terminal do Exemplo de Referência 4 (153 mg, 0.514 mmol) em MeOH (4.6 mL), refrigerado em um banho de gelo. A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente durante a noite e, então, evaporada. Boc-Leu-OH - H2O (145 mg, 0.58 mmol) foi adicionado e a mistura foi co-evaporada de DMF, então, dissolvida novamente em 5 mL de DMF, e resfriada em um banho de gelo. DIEA (0.36 mL, 2.1 mmol) foi adicionado, seguido por HATU (220 mg, 0.578 mmol). Após a agitação a 0 0C por 15 minutos, a mistura foi agitada em temperatura ambiente por 3 horas e, em seguida, concentrada. A mistura foi dissolvida em 20 mL de AcOEt, lavada sucessivamente com NaHCO3 aquoso saturado (10 mL) e NaCl aquoso saturado (2 x 10 mL), seca (Na2SO4), e evaporada para fornecer um óleo amarelomarrom. Cromatografia flash (sílica, 1/1 i-hexano - AcOEt) forneceu composto do título (213 mg, quantitativo).
[135] HPLC-MS: pico único, massa 411 [M+H]+, temperatura ambiente = 3,15 minutos (declive de 5 a 99% de B em 3 minutos, em seguida, 100% de B por
1,5 minutos) [136] Método - Fluxo: 0.8 mL/min, UV = 210-400 nm, ACE C8 3 x 50 mm, Fases móveis A: 10 mM NH4Ac em 90% de H2O, B: 10 mM NH4Ac em 90% de MeCN
Etapa b
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Figure BRPI0918966B1_D0045
[137] Desproteção boc do composto da etapa a) (0.514 mmol) foi feita assim como para Exemplo de Referência 4 acima para fornecer o sal HCl do título. O sal foi dissolvido em CH2Cl2 e dividido em três porções, evaporadas separadamente para fornecer 0.17 mmol por amostra.
Exemplo de Referência 6
Um bloco de construção P3 alternativo
Figure BRPI0918966B1_D0046
ooo
Figure BRPI0918966B1_D0047
Figure BRPI0918966B1_D0048
[138] i. AcOH, bromo, temperatura ambiente, 2 horas, 55% de rendimento, ii. KF, acetonitrila, 18-coroa-6, 90 0C, 16 horas, 31% de rendimento; iii. AcOH, bromo, 45 0C, 4 horas, 100% de rendimento; iv. Amida de ácido 4-metil-piperazina-1carbotióico, Δ, 2 horas, 74% de rendimento; LiOH, temperatura ambiente, 16 horas, 100% de rendimento.
Disponibilidade de matérias-prima - [139] Metil 4-acetilbenzoato está disponível de Aldrich; amida de ácido 4metil-piperazina-1-carbotióico - 11 fornecedores encontrados em SciFinder (talvez, Produtos Chem Pur Ltd na Alemanha sejam os mais convenientes).
Etapa a) Éster metílico de ácido 4-(2-Bromo acetil)-benzóico
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Figure BRPI0918966B1_D0049
[140] À uma solução de éster metílico de ácido 4-acetil-benzóico (8.4 mmol) em ácido acético (20 mL) foi adicionado bromo (8.4 mmol). A reação foi agitada em temperatura ambiente por 2 horas, durante tal período a cor vermelha desapareceu e um precipitado branco se formou. O produto foi coletado por filtração e lavado com metanol/ água fria (200 mL 1:1) para produzir um pó branco (55%). 1H RMN (400MHz, CDCl3) 3.98 (3H, s), 4.20 (2H, s), 8.02 (2H, d, J = 8Hz), 8.18 (2H, d, J =
8Hz).
Etapa b) Éster metílico de ácido 4-(2-Fluoro-acetil)-benzóico
Figure BRPI0918966B1_D0050
[141] À uma suspensão de fluoreto de potássio (3.11 mmol) em acetonitrila, (1 mL) foi adicionado 18-coroa-6 (0.1 mmol) e a reação foi aquecida a 90 0C por 30 minutos. Ácido 4-(2-Bromo-acetil)-benzóico (1.56 mmol) foi adicionado e a reação aquecida a 90 0C por 16 horas. A reação foi diluída com água (10 mL) e extraída com acetato de etila (3 x 20 mL). O produto foi purificado em eluição de sílica com 515% de acetato de etila em iso-hexano para produzir sobre a concentração no vácuo das frações desejadas, o produto do título como um sólido branco (31%). 1H RMN (400MHz, CDCl3) 3.98 (3H, s), 5.55 (2H, d, J = 50 Hz), 7.95 (2H, d, J = 8Hz), 8.18 (2H, d, J = 8Hz).
Etapa c) Éster metílico de ácido 4-(2-Bromo-2-fluoro-acetil)-benzóico
Figure BRPI0918966B1_D0051
o [142] À uma suspensão de ácido 4-(2-fluoro-acetil)-benzóico (1.19 mmol) em
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51/79 ácido acético (5 mL) foi adicionado bromo (1.19 mmol). A reação foi aquecida a 45 0C por 4 horas, durante tal período, uma solução verde se formou. A reação foi concentrada no vácuo e azeotropada duas vezes com tolueno para produzir o composto do título como um sólido verde (100%). O produto foi utilizado bruto na próxima etapa. 1H RMN (400MHz, CDCl3) 3.98 (3H, s), 7.04 (1 H, s), 8.05-8.10 (4H,
m).
Etapa d) Éster metílico de ácido 4-[5-Fluoro-2-(4-metil-piperazina-1-il)-tiazol4-il] benzóico
Figure BRPI0918966B1_D0052
[143] Éster metílico de ácido 4-(2-Bromo-2-fluoro-acetil)-benzóico (1.18 mmol) e amida de ácido 4-metil-piperazina-1-carbotióico (1.18 mmol) foram dissolvidos em etanol (10 mL). A reação foi aquecida em refluxo por 2 horas. A reação foi resfriada em temperatura ambiente fazendo o produto se precipitar. O produto foi coletado por filtração e lavado com etanol frio. O produto foi fornecido a um preparo de bicarbonato de sódio aquoso para produzir o composto do título como um óleo incolor (74%). MS (ES+) 337 (M+H, 100%).
Etapa f)
Dicloridrato de ácido
4-[5-Fluoro-2-(4-metil-piperazina-1-il)-tiazol-4-il]benzóico
Figure BRPI0918966B1_D0053
[144] À uma solução de éster metílico de ácido 4-[5-fluoro-2-(4-metilpiperazina-1-il)-tiazol-4-il]-benzóico (0.43 mmol) em tetraidrofurano/água (2.5 mL,
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4:1) foi adicionado hidróxido de lítio (0.5 mmol). A reação foi agitada em temperatura ambiente por 16 horas. A reação foi concentrada no vácuo e ácido clorídrico (2N, 3 mL) foi adicionado fazendo o produto se precipitar como um sólido branco. O produto foi coletado por filtração para produzir o produto do título como um sólido branco (79%). MS (ES+) 322 (M+H, 100%).
Exemplo de Referência 7
Um bloco de construção P1 alternativo
Figure BRPI0918966B1_D0054
Compound 7-1 Compound 7-2 Compound 7-3
Etapa a) Oxidação de álcool 7-1.
[145] Uma solução de composto 7-1 (0.85 g, 2.8 mmol) (veja Exemplo de Referência 3 etapa g) em CH2Cl2 seco (15 mL) foi purgada com argônio por 30 minutos. Dess-Martin periodinano (1.78 g, 4.2 mmol) foi adicionado a 0 0C e a mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente por 2 horas. Quando se considerou que a reação tinha alcançado a conclusão, a reação foi extinta com solução de 10% de Na2S2O3. A mistura de reação foi diluída com CH2Cl2 (30 mL), e, então, lavada, por sua vez, com solução saturada de Na2S2O3 (2 x 50 mL), e solução saturada de bicarbonato de sódio (2 x 50 mL). A camada orgânica foi então seca em sulfato de sódio anidro, filtrada e o cone filtrado no vácuo em temperatura ambiente. O aldeído de produto bruto 7-2 (0.75 g, bruto) foi utilizado na próxima etapa sem purificação adicional. TLC: AcOEt: pet éter 1:1 Rf = 0.5.
Etapa b) Reação de Wittig com composto 7-2.
[146] À uma solução agitada de iodeto de isopropiltrifenilfosfônio (6.48 g,
0.015mol) (co-evaporada com tolueno seco antes do início da reação) em THF seco
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53/79 (20 mL) foi adicionada uma solução de n-BuLi (10.7 mL, 0.0172 mol, 1.6 M em hexano) a -10 0C sob atmosfera de nitrogênio e adicionalmente agitada a 0 0C por 1 hora. A cor da mistura de reação lentamente mudou para a cor laranja escuro. Uma solução de composto 2 (0.75 g, 0.0025 mol) e cloreto de lítio anidro (~1.5 mg) em THF seco (20 mL) foi adicionada lentamente à mistura de reação a 0 0C sob uma atmosfera de nitrogênio. A mistura de reação foi agitada por mais 30 minutos mantendo a mesma temperatura, e, então, lentamente aquecida em temperatura ambiente e agitada por mais 30 minutos. A mistura de reação foi, então, extinta com solução saturada de cloreto de amônio (20 mL). O produto bruto foi extraído com AcOEt (2 x 30ml) e a camada orgânica foi lavada com água salgada (50 mL) e seca em sulfato de sódio anidro. O solvente foi removido no vácuo e o produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna (alumina neutra, 1% de AcOEt eluente em pet éter) para fornecer composto puro 7.3 (0.19 g, rendimento de 21% em duas etapas).
Exemplo de Referência 8
Um bloco de construção P1-P2 alternativo
Figure BRPI0918966B1_D0055
HATU, DIEA
DMF, O-rt, 12h [147] A reação inicial foi realizada em uma forma semelhante à relatada pelo Exemplo de Referência 5, mas ao invés de utilizar 4 (0.2 g, 0.67 mmol) em MeOH seco (15 mL) e cloreto de acetila (0.66 mL) para obter o composto de amina Bocdesprotegido, o mesmo foi então tratado com glicina Boc-ciclopentil (0.17 g, 0.7 mmol), HATU (0.27 g, 0.7 mmol) e DIEA (0.45 mL, 2.6 mmol) em DMF seco (7 mL) para obter o composto do título puro [0.195 g, rendimento de 68%]. Sistema TLC:
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AcOET: pet éter 1:1 v/v, Rf = 0,4
Exemplo de Referência 9
Composto de sonda para a viabilidade de dihalovinil P1
Br
Figure BRPI0918966B1_D0056
[148] Este composto testa a viabilidade sintética e biológica de um produto final de dihalovinila P1. Será apreciado que introdução de 6-difluorovinila pela reação de Wittig correspondente do Exemplo de Referência 3 é trivial, e que preparação de um produto final biologicamente ativo oferece confiança de que os compostos de difluorvinila reivindicados também são sinteticamente estáveis e ativos.
Br (1) AcCI, MeOH (2) Boc-Leu-OH
HATU, DIEA.DMF
CBr4, PPh3
CH„CL. 0°C
Figure BRPI0918966B1_D0057
Br
9-5
97.5/2.5 TFA-water (v/v) (1) AcCI, MeOH (2) RCOOH, HATU, DIEA, DMF
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55/79
Etapa a)
Br
Figure BRPI0918966B1_D0058
[149] O aldeído 9-1 (318.3 mg, 1.06 mmol) (veja Exemplo de Referência 3) em 6 mL de diclorometano (DCM) foi adicionado gota a gota a uma solução de CBr4 (700 mg, 2.11 mmol) e Ph3P (1.10 g, 4.19 mmol) em 10 mL de DCM, com resfriamento em um banho de gelo. Após agitação a 0 0C por 2 horas, a mistura foi diluída com 30 mL de iso-hexano e, então, filtrada através de uma coluna Celite curta. A coluna foi lavada com 20 mL de i-hexano, seguida por 3/1 i-hexano - DCM. O filtrado foi concentrado no vácuo para fornecer sólidos amarelos. Cromatografia flash (sílica, 3/1 i-hexano - AcOEt) forneceu composto 9-2 (339.5 mg, 70% de rendimento).
[150] 1H RMN (400 MHz, CDCh) δ 6.55 (d, 1H, J = 8.8 Hz, HC=CBr2), 4.64 (br s, 1H), 4.42 (d, 1H, J = 5.2 Hz), 4.10-3.90 (br m, 1H), 3.85-3.65 (m, 2H), 3.37 (s, 3H, OMe), 3.29 (s, 3H, OMe), 3.00 (m, 1 H), 2.84 ( br s, 1H).
[151] Rf (TLC 1/1 isohexano - AcOEt) 0.79.
[152] HPLC-MS: íon cluster [M+Na]+ 478 (8%), 480 (15%), 482 (7%), temperatura ambiente = 3.56 minutos (declive de 5 a 99% de B em 3 minutos, em seguida, 100% de B por 1.5 minuto)
Etapa b)
Br
Figure BRPI0918966B1_D0059
.0 O /
[153] Cloreto de acetila (0.18 mL) foi adicionado gota a gota a uma solução
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56/79 de dibromoalceno 9-2 (81.7 mg, 0.179 mmol) em MeOH (1.62 mL), refrigerado em um banho de gelo. A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente durante a noite e, então, evaporada. Boc-Leu-OH - H2O (50 mg, 0.20 mmol), HATU (75 mg, 0.20 mmol), 1.8 mL de DMF e, por último, DIEA (125 pL, 0.72 mmol) foram adicionados. Após agitação em temperatura ambiente por 5.5 horas, a mistura foi concentrada no vácuo e, então dividida entre AcOEt e NaHCO3 aquoso saturado. A fase orgânica foi lavada duas vezes com NaCl aquoso saturado, seca (Na2SO4), e concentrada no vácuo. Cromatografia flash (sílica, 3/1 isohexano - AcOEt) forneceu composto 9-3 como um sólido branco (86.3 mg, 85% de rendimento).
[154] Rf (TLC 1/1 isohexano -AcOET) 0.54.
[155] HPLC-MS: massa 571 [M+H]+; temperatura ambiente = 3.75 minutos 96% (declive de 5 a 99% de B in 3 minutos, em seguida, 100% de B por 1.5 minuto) [156] Método - Fluxo: 0.8 mL/min, UV=210-400 nm, ACE C8 3 x 50 mm; Fases móveis A : 10 mM NH4Ac em 90% de H2O, B: 10 mM NH4Ac em 90% de MeCN
Etapa c)
Br
Figure BRPI0918966B1_D0060
[157] Desproteção boc do composto 9-3 (86.3 mg, 0.15 mmol) foi feita assim como para 9-2 acima para fornecer o sal HCl de amina. DMF (1.5 mL) foi adicionado a uma mistura do sal de amina, bromidrato de ácido 4-[2-(4-metil-1-piperazinil)-4tiazolil]-benzóico (65 mg, 0.17 mmol) e HATU (65 mg, 0.17 mmol) com resfriamento em um banho de gelo. DIEA (120 pL, 0.69 mmol) foi adicionado. Após agitação em temperatura ambiente por 3 horas, 20 mL, AcOEt foi adicionado e, então, a mistura foi lavada com 1 M NaHCO3 (10 mL), seguida por NaCl aquoso saturado. A fase orgânica foi seca (Na2SO4) e concentrada no vácuo para fornecer produto bruto.
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Cromatografia flash (silica, CH2CL2-MeOH 100/1 a 100/4), forneceu o produto desejado como um sólido amarelo pálido (65.7 mg, 58% de rendimento).
[158] HPLC-MS: massa 756 [M+H]+; temperatura ambiente = 3.83 minutos (5 a 99% de B in 3 minutos, em seguida 100% de B por 1.5 minuto) e temperatura ambiente= 4.07 min (30 a 80% de B in 3 minutos, em seguida, 100% de B por 1.5 minuto) 96% puro em dois declives.
Etapa d)
Br
Br [159] O cetal 9-4 (65.7 mg, 0.087 mmol) foi agitado com 1.0 mL de 97.5/2.5 (v/v) de TFA-H2O por 4 horas e 20 minutos, e, então, extinto com uma suspensão aquosa de NaHCO3. A mistura foi extraída com AcOEt. A fase orgânica foi lavada com NaCl aquoso saturado, seca (Na2SO4), e concentrada no vácuo. Purificação por HPLC semi-prep. forneceu cetona 9-5 como um sólido branco (12.6 mg).
[160] 1H RMN (500 MHz, CDCta) 2 rotômeros, maior: δ 7.90 e 7.81 (ABq, 4H, fenila), 6.91-6.87 (2H, tiazol e NH), 6.67 (d, 1 H, HC=CBr2), 5.05 (td, 1H, Leu CHa), 4.85 (m, 1H, ponte bicíclica HCO), 4.74 (d, 1H, ponte bicíclica HCN), 4.32 e 3.42 (cada 1H, NCH2 bicíclico), 4.18 e 4.00 (ABq, 2H, OCH2), 3.59 (4H, piperazina CH2N-tiazol), 3.25 (1H, Br2C = CH-CH), 2.56 (4H, piperazina CHpNMe), 2.37 (s, 3H, NMe), 1.80-1.54 (d, 3H, CH2CH Me2), 1.04 (d, 3H, CHMe2), 0.94 (d, 3H, CHMe2).
[161] LC-UV/MS: massa molecular monoisotópica 709.1 Da, pureza >94% [162] (Coluna: ACE C8 50 x 3.0 mm, partículas 3pm; Fases A móveis: 10 mM NH4Ac, B: 10 mM NH4Ac em 90% de MeCN; declive: 30-70% de B em 10 minutos, seguido por uma lavagem por 2 minutos em 100% de B; Fluxo: 0,8 mL/min, Detecção: UV @ 210-400 nm e ESI-MS)
Exemplo 1
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Figure BRPI0918966B1_D0061
N-[1-6-(etinil-3-oxo-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4-carbonil)-3-metil-butil]-4-[2(4-metil-piperazina-1 -il) tiazol-4-il]-benzamida
Etapa a)
Figure BRPI0918966B1_D0062
[163] DMF (2 mL) foi adicionado a uma mistura de bromidrato de ácido 4-[2(4-metil-1-piperazinil)-4-tiazolil]-benzóico (73.9 mg, 0.19 mmol), o composto do Exemplo de Referência 5 (0.17 mmol) e HATU (73.4 mg, 0.19 mmol) com resfriamento em um banho de gelo. DIEA (0.12 mL, 0.69 mmol) foi adicionado. Após agitação em temperatura ambiente por 2.5 horas, a mistura foi concentrada, dissolvida novamente em 20 mL de AcOEt e, então lavada com 10 mL de NaHCO3 aquoso saturado. A fase aquosa foi extraída com 10 mL de AcOEt. As fases orgânicas foram combinadas, lavadas com NaCl aquoso saturado (2 x 15 mL), secas (Na2SO4) e evaporadas para fornecer produto bruto. Cromatografia flash inicial (sílica 40-63 pm, 5-8% de MeOH em AcOEt) forneceu material purificado, o qual foi submetido a uma segunda cromatografia (gel de sílica YMC 6 nm S - 50 pm, 1-5% de MeOH em CH2Cl2) para fornecer composto do título como sólidos amarelos claros (50.1 mg, 49% de rendimento).
[164] HPLC-MS: massa 596 [M+H]+, pico único, temperatura ambiente = 3.18 minutos (declive de 5 a 99% de B em 3 minutos, em seguida, 100% de B por
1.5 minuto)
Etapa b)
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Figure BRPI0918966B1_D0063
[165] O composto da etapa a) (50 mg, 0.0839 mmol) foi dissolvido em 10 mL de TFA: H2O (97.5: 2.5) e agitado por 4 horas. O solvente foi observado em um funil de separação, extraído com AcOEt e lavado com NaHCO3 aquoso saturado. A fase orgânica foi seca com Na2SO4, filtrada e evaporada. O produto bruto foi purificado HPLC semi-prep em uma coluna XBrideg Fenilaa 5 pm com fases A móveis (90:10 H2O: acetonitrila, 10 mM NH4Ac) e B (10:90 H2O: acetonitrila, 10 mM NH4Ac) variando de 25-60% de B. O produto foi obtido como um sólido branco em 62% de rendimento (29 mg). LRMS (M+H) 550.
[166] 1H RMN (CDCl3, 400 MHz): 0.95 (d, J = 6.4, 3H), 1.03 (d, J = 6.4, 3H), 1.57- 2.10 (m 4H), 2.37 (s, 3H), 2.60 - 2.54 (m, 4H), 3.17- 3.26 (m, 1H), 3.55- 3.64 (m, 5H), 4.07 (d, J = 17.1, 1H), 4.27 (d, J = 17.2, 1H), 4.50 (dd, J = 7.8, 9.9, 1H), 4.77 (d, J = 5.1, 1H), 4.91 (dd, J = 4.6, 4.6, 1H), 4.97- 5.06 (m, 1H), 6.85- 6.91 (m, 2H), 7.79 (d, J = 8.3, 2H), 7.89 (d, J = 8.4, 3H).
Exemplo 2
Figure BRPI0918966B1_D0064
N-[1-6-(etinil-3-oxo-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4-carbonil)-3-metil-butil]-4-[5fluoro-2-(4- metil-piperazina-1-il)tiazol-4-il]-benzamida
Etapa a)
Figure BRPI0918966B1_D0065
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60/79 [167] DMF (1.7 mL) foi adicionado a uma mistura de cloridrato de ácido 4-[5fluoro-2-(4-metil-1-piperazinil)-4-tiazolil]-benzóico (68.0 mg, 0.19 mmol), o composto do Exemplo de Referência 5 (0.17 mmol) e HATU (73.8 mg, 0.19 mmol) com resfriamento em um banho de gelo. DIEA (0.12 mL, 0.69 mmol) foi adicionado. Após agitação em temperatura ambiente para 2.75 horas, a mistura foi tratada assim como para Exemplo 1, para fornecer o análogo fluorotiazol bruto. Cromatografia flash (gel de sílica YMC, 1-3% de MeOH em CH2CL2) forneceu o composto do título como sólidos amarelos claros (62.8 mg, 60% de rendimento).
[168] HPLC-MS: massa 614 [M+H]+, pico único em UV, temperatura ambiente = 3.39 minutos (declive de 5 a 99% de B em 3 minutos, em seguida, 100% de B por 1.5 minuto)
Etapa b) [169] O composto da etapa a) (63 mg, 0.102 mmol) foi dissolvido em 10 mL de TFA: H2O (97.5: 2.5) e agitado por 4 horas. O solvente foi observado em um funil de separação, extraído com AcOEt e lavado com saturada de NaHCO3 (aq). A fase orgânica foi seca com Na2SO4, filtrada e evaporada. O produto bruto foi purificado por semi-HPLC semi-prep. em uma coluna de XBrideg Fenila 5 pm com fases A móveis (90:10 H2O: acetonitrila, 10 mM NH4Ac) e B (10:90 H2O: acetonitrila, 10 mM NH4Ac) variando de 25-60% de B. O produto foi obtido como um sólido branco em 46% de rendimento (26 mg). LRMS (M+H) 568.
[170] 1H RMN (CDCl3, 400 MHz): 0.95 (d, J = 6.4, 3H), 1.03 (d, J = 6.4, 3H), 1.58- 2.15 (m 4H), 2.37 (s, 3H), 2.61 - 2.48 (m, 4H), 3.18- 3.25 (m, 1H), 3.53- 3.42 (m, 4H), 3.60 (t, J = 10.5, 1H), 4.07 (d, J = 17.1, 1H), 4.27 (d, J = 17.2, 1H), 4.56 4.46 (m, 1H), 4.91 (t, J = 4.5, 1H), 4.96- 5.06 (m, 1H), 6.87 (d, J = 8.2, 1H), 7.81 (d, J
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61/79 = 8.4, 2H), 7.90 (t, J = 9.4, 2H).
Exemplo 3
Figure BRPI0918966B1_D0066
N-[1-6-(etinil-3-oxo-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4-carbonil)-3-metil-butil]-3fluoro-4-[2-(4-metil-piperazina-1-il)tiazol-4-il]-benzamida
Etapa a)
Figure BRPI0918966B1_D0067
[171] DMF (1.7 mL) foi adicionado a uma mistura de cloridrato de ácido 3fluoro-4-[2-(4-metil-1-piperazinil)-4-tiazolil]-benzóico (68.9 mg, 0.19 mmol), o composto do Exemplo de Referência 5 (0.17 mmol) e HATU (80 mg, 0.21 mmol) com resfriamento em um banho de gelo. DIEA (0.12 mL, 0.69 mmol) foi adicionado. Após agitação em temperatura ambiente por 3 horas, a mistura foi concentrada, dissolvida novamente em 30 mL de AcOEt, lavada sucessivamente com 15 mL de NaHCO3 aquoso saturado e, então, com 30 mL de NaCl aquoso saturado. A fase orgânica foi seca (Na2SO4) e, então, evaporada. Cromatografia flash (gel de sílica YMC, 1-3% de MeOH em CH2CL2) forneceu o composto do título como off-sólidos brancos (72.4 mg, 70% de rendimento).
[172] HPLC-MS: massa 614 [M+H]+, temperatura ambiente = 3.46 minutos (declive de 5 a 99% de B em 3 minutos, em seguida, 100% de B por 1.5 minuto.
Etapa b)
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Figure BRPI0918966B1_D0068
[173] O cetal da etapa a) (67 mg, 0.11 mmol) foi agitado com 1.10 mL de 97.5/2.5 (v/v) de TFA- H2O por 2 horas e, então, concentrado. A mistura foi diluída com AcOEt (10 mL), lavada com NaHCO3 aquoso saturado (5 mL), seguida por NaCl aquoso saturado (2 x 5 mL), seca (Na2SO4), e evaporada. O material bruto foi dissolvido em 2 mL de MeCN e 1 mL de H2O, e 0.9 mL desta solução foi purificado por HPLC semi-prep. para fornecer a cetona do composto do título como sólidos brancos (8.2 mg).
[174] 1H RMN (500 MHz, CDCh) 2 rotômeros δ 8.22 (m, 1H, Ph), 7.63-7.55 (m, 2H, Ph), 7.21 (m, 1H, tiazol), maior 6.91 e menor 6.87 (d, 1H, J = 8.0 e 7.5 Hz, NHC=O), menor 5.05 e maior 5.00 (m, 1H), 4.93 (m, 1H), 4.79 (d, 1H, J = 5.0 Hz), 4.48 (dd, 1H, J = 10.2, 7.7 Hz), 4.28 e 4.09 (ABq, cada 1H), 3.64-3.59 (m, 5H), 3.23 (m, 1H, HÇ-CECH), 2.58 (m, 4H), 2.38 (s, 3H, NMe), 2.35 (d, 1H, J = 2.0 Hz, CECH), 1.78-1.59 (m, 3H), 1.04 (d, 3H, J = 6.0 Hz), 0.96 (d, 3H, J = 6.5 Hz).
[175] LC-UV/MS: massa molecular monoisotópica 567.2 Da, 97.6% de pureza [176] (Coluna: ACE Cs 50 x 3,0 mm, partículas 3pm; Fases móveis A: 10 mM NH4Ac, B: 10 mM NH4Ac em 90% de MeCN; declive: 20-100% de B em 10 minutos, seguido de uma lavagem por 2 minutos em 100% ;
[177] Fluxo: 0.8 mL/min, Detecção: UV @ 210-400 nm e ESI-MS)
Exemplo 4
N-[1 -6-(dimetilvinil-3-oxo-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4-carbonil)-3-metil-butil]4-[5-fluoro-2-(4-metil-piperazina -1-il)tiazol-4-il]-benzamida
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Figure BRPI0918966B1_D0069
Figure BRPI0918966B1_D0070
[178] Cloreto de acetila (0.3 mL) foi adicionado gota a gota a uma solução gelada do composto 7-3 (103.4 mg, 0.316 mmol) (veja Exemplo de Referência 7) em metanol (2,9 mL). A solução foi agitada em temperatura ambiente durante a noite, e então concentrada no vácuo, co-evaporada duas vezes com CH2Cl2 e seca sob vácuo. Boc-L-leucina-H2O (96.2 mg, 0.386 mmol) e HATU (143 mg, 0.376 mmol) foram adicionados e a mistura foi resfriada em um banho de gelo. DMF (3.2 mL), seguido por DIEA (220 pL, 1.26 mmol) foram adicionados. A solução resultante foi agitada em temperatura ambiente por 6 horas. A mistura de reação foi concentrada no vácuo, dissolvida novamente em AcOEt (15 mL) e lavada sucessivamente com NaHCO3 aquoso saturado (10 mL) e NaCl aquoso saturado (10 mL). A fase orgânica foi seca (Na2SO4) e, em então, concentrada no vácuo para fornecer o material bruto. Cromatografia em coluna flash (sílica, 2/1 isohexano - AcOEt) forneceu composto 4i como sólidos brancos (127.8 mg, 92% de rendimento).
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64/79 [179] TLC Rf = 0,56 (1 /1 isohexano - AcOEt ) [180] LC-UV/MS temperatura ambiente = 1.98 minutos (pico único), massa 441 [M+H]+ (declive de 70 a 99% de B em 3 minutos, em seguida, 100% de B por 1.5 minuto (Método - Fluxo de 0.8 mL/min, UV = 210-400 nm, Phenomenex Gemini - NX 3pm C18 110 A 50 x 3,0 mm, Fases móveis A: 10 mM NH4Ac em H2O, B: 10 mM NH4Ac em 90/10 MeCN- H2O) [181] O composto 4-i (127.8 mg, 0.290 mmol) foi desprotegido conforme acima utilizando MeOH (2.7 mL) e cloreto de acetila (0.30 mL). O acoplamento do sal HCl de amina resultante (metade do material, 0.145 mmol) com cloridrato de ácido 4-[5-fluoro-2-(4-metil-1-piperazinil)-4-tiazolil]-benzóico (67.4 mg, 0.19 mmol) foi feito de forma semelhante ao da etapa de acoplamento Boc-Leu-OH, em DMF (2,0 mL) com HATU (69 mg, 0.18 mmol) e DIEA (115 pL, 0.66 mmol) por 3.5 horas. Após cromatografia em coluna flash do produto bruto (sílica, 2-5% de MeOH em CH2CL2), composto 4-ii foi obtido como sólidos amarelos pálidos (48.3 mg, 52% de rendimento).
[182] TLC Rf = 0.5 (9/1 CH2CL2 - MeOH) [183] LC-UV/MS temperatura ambiente = 2.41 minutos, 95q% puro, massa 644 [M+H]+ (declive de 70 a 99%de B em 3 minutos, em seguida, 100% de B por 1.5 minuto [184] À uma solução gelada do cetal 4-ii (41.3 mg, 0.064 mmol) em CH2CL2 (0.3 mL) foi adicionado gota a gota 0.65 mL de uma solução de TFA-água (97.5/2.5 v/v). A mistura de reação foi agitada por 30 minutos em temperatura ambiente e, então, substituída em um banho de gelo e extinta com NaHCO3 aquoso saturado (10 mL). A mistura foi extraída duas vezes com AcOEt (20 mL, 10 mL). As fases orgânicas foram combinadas, lavadas com NaCl aquoso saturado (10 mL), secas (Na2SO4), e concentradas no vácuo. Purificação por HPLC semi-prep. forneceu o composto do título final.
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65/79 [185] LC-UV/MS temperatura ambiente = 6.5 e 7.5 minutos (hidrato e cetona), 98% puro, massa molecular monoisotópica 597.3 Da (Método - Fluxo de 0,8 mL/min; UV = 210-400 nm e ESI-MS; Phenomenex Gemini-NX C18 50 x 3,0 mm, partículas 3 pm; Fases móveis A: 5 mM NH4Ac em H2O, B: 5 mM NH4Ac em MeCN, declive de 20-99% de B em 10 minutos, seguido por uma lavagem por 2 minutos em 100% de B)
Exemplo 5
N-[1-(6-etinil-3-oxo-hexahidro-furo[3,2-b]pirrol-4-il)-1-ciclopentil-2-oxo-etil]-4[5-fluoro-2-(4 -metil-piperazina-1 -il)-tiazol-4-il]-benzamida
Figure BRPI0918966B1_D0071
Etapa a)
Figure BRPI0918966B1_D0072
EDC.HCI, HOBt, NMM
DMF, O-rt, 12h [186] A reação foi realizada de forma semelhante como relatado no caso do Exemplo 3, mas utilizando o bloco de construção P1-P2 do Exemplo de Referência 8 (0.14 g, 0.33 mmol) em MeOH seco (15 mL), e cloreto de acetila (0.5 mL) foi utilizado para obter a amina desprotegida boc, a qual foi adicionalmente tratada com o sal HCl (0.132g, 0.33 mmol), HOBt (0.04 g, 0.3 mmol), EDC.HCl (0.117 g, 0.61 mmol) e NMM (0.11 mL, 1.0 mmol) em DMF seco (10 mL) para obter o composto
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66/79 puro 5-a [0.05 g, rendimento de 26%]. Sistema TLC: CHCI3: MeOH 9.5:0.5 v/v, Rf =
0.25.
Etapa b) tfa-h2o
97.5/2.5 (v/v)
O-rt
5-a
Example 5 [187] Desproteção de cetal 5-a (40.5 mg, 0.065 mmol) para a cetona do título foi conduzida assim como para o composto 3, utiIizando 0.65 mL da soIução TFAágua, com reação em temperatura ambiente por 2horas e 15 minutos. Purificação por HPLC semi-prep. forneceu 11 como sólidos amarelos pálidos (14.75 mg).
[188] LC-UV/MS temperatura ambiente = 5.3 e 6.0 minutos, (hidrato e cetona), 96.7% puro, massa molecular monoisotópica 579.2 Da (Método - Fluxo de 0.8 mL/min; UV = 210-400 nm e ESI-MS; Phenomenex Gemini-NX C18 50 x 3.0 mm, partículas 3 pm; Fases móveis A: 5 mM NH4AC em H2O, B: 5 mM NH4AC em MeCN, declive de 20-99% de B em 10 minutos, seguido por uma lavagem por 2 minutos em 100% de B)
Exemplos Biológicos
Determinação de atividade catalítica proteolítica de catepsina K [189] Ensaios convenientes para catepsina K são realizados utilizando enzima recombinante humana, tal como aquela descrita em PDB.
[190] ID BC016058 padrão; mRNA; HUM; 1699 BP.
DE catepsina K de Homo sapiens (picnodisostosis), mRNA (clone de cDNA MGC:23107 [191] RX MEDLINE;. RX PUBMED; 12477932.
[192] DR RZPD; IRALp962G1234.
[193] DR SWISS-PROT; P43235;
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67/79 [194] A catepsina K recombinante pode ser expressa em uma variedade de sistemas de expressão comercialmente disponíveis, incluindo E coli, Pichia e sistemas de Baculovírus. A enzima purificada é ativada pela remoção da prósequência por métodos convencionais.
[195] Condições de ensaio padrão para a determinação de constantes cinéticas utilizaram um substrato de peptídeo fluorogênico, tipicamente H-D-Ala-LeuLys-AMC, e foram determinadas a partir de 100 mM Mes/Tris, pH 7.0 contendo 1 mM EDTA e 10 mM 2-mercaptoetanol ou 100 mM fosfato de sódio, imM EDTA, 0.1% de PEG4000 pH 6.5 ou 100 mM acetato de sódio, pH 5.5 contendo 5 mM EDTA e 20 mM cisteína, em cada caso, opcionalmente, com um 1M DTT como estabilizante. A concentração de enzima utilizada foi 5 nM. A solução de substrato estoque foi preparada em 10 mM em DMSO. Triagens foram realizadas em uma concentração de substrato fixo de 60 pM e estudos cinéticos detalhados com diluições de duplicação de substrato de 250 pM. A concentração total de DMSO no ensaio foi mantida abaixo de 3%. Todos os ensaios foram conduzidos em temperatura ambiente. Fluorescência de produto (excitação em 390 nm, emissão em 460 nm) foi monitorada com um leitor de placas Fluoroskan Labsystems Ascent fluorescente. Curvas de progresso de produto foram geradas em 15 minutos após a geração de produto AMC.
Determinação de Ki de Catepsina S [196] O ensaio utiliza catepsina S humana expressa de baculovírus e os substratos fluorescentes boc-Val-Leu-Lys-AMC disponíveis a partir de Bachem em um formato de placa de 384 poços, no qual 7 compostos de teste podem ser testados em paralelo com um controle positivo compreendendo um comparador inibidor de catepsina S conhecido.
Diluições de substrato [197] 280pL/poço de 12.5% de DMSO são adicionados às linhas B - H de
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68/79 duas colunas de uma placa de polipropileno de 96 poços profunda. 70pL/poço de substrato é adicionado à linha A. 2 x 250pL/poço de tampão de ensaio (100mM fosfato de sódio, 100mM NaCl, pH 6.5) é adicionado à linha A, misturado, e diluído em dobro abaixo da placa para linha H.
Diluições Inibidoras [198] 100 pL/poço de tampão de ensaio é adicionado às colunas 2-5 e 7-12 de quatro linhas de uma placa de polipropileno de 96 poços de fundo V. 200pL/poço de tampão de ensaio é adicionado às colunas 1 e 6.
[199] O primeiro composto de teste preparado em DMSO é adicionado à coluna 1 da linha superior, geralmente em um volume para fornecer entre 10 e 30 vezes o bruto Ki estabelecido inicialmente. O bruto Ki é calculado a partir de uma corrida preliminar em que 10pL/poço de 1 mM-boc-VLK-AMC (1/10 diluição de 10 mM estoque em DMSO diluído em tampão de ensaio) é distribuído para as linhas B a H e 20 pL/poço para a linha A de uma placa de 96 poços de Microfluor™. 2 pL de cada 10mM de composto de teste é adicionado a um poço separado na linha A, colunas 1-10. Adição de 90pL de tampão de ensaio contendo 1 mM DTT e 2 nM catepsina S a cada poço de linhas B-H e 180 pL a linha A. Associação de linha A utilizando uma pipeta multicanal e dupla diluição para linha G. Associação de linha H e leitura no espectrofotômetro fluorescente. As leituras são dados Prisma ajustados à equação de inibição competitiva, estabelecendo S = 100 pM e Km = 100 pM para obter uma estimativa do Ki, até um máximo de 100 pM.
[200] O segundo composto de teste é adicionado à coluna 6 da linha superior, o terceiro, à coluna 1 da segunda linha, etc. Adição de 1pL de comparador a coluna 6 da linha inferior. Associação de coluna 1 e dupla diluição para coluna 5. Associação de coluna 6 e dupla diluição para coluna 10.
[201] Utilização de uma pipeta multi-estágio de 8 canais definida como 5 x 10 pL, distribuição de 10 pL/poço de substrato para a placa ensaio de 384 poços.
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69/79
Distribuição da primeira coluna da placa de diluição de substrato para todas as colunas da placa de ensaio a partir de linha A. O espaçamento de ponta da pipeta multicanal saltará corretamente linhas alternadas. Distribuição da segunda coluna para todas as colunas a partir de linha B.
[202] Utilização de uma pipeta multi-estágio de 12 canais definida como 4 x 10pL, distribuição de 10pL/poço de inibidor para a placa de ensaio de 384 poços. Distribuição da primeira linha da placa de diluição inibidora para linhas alternadas de placa de ensaio a partir de A1. O espaçamento de ponta da pipeta multicanal saltará corretamente colunas alternadas. Da mesma forma, distribuição da segunda, terceira e quarta linhas para colunas e linhas alternadas a partir de A2, B1 e B2, respectivamente.
[203] Associação de 20 mL de tampão de ensaio e 20 pL 1M DTT. Adição suficiente de catepsina S para fornecer concentração final de 2 nM.
[204] Utilização de um distribuidor, tal como um Multidrop 384, adição de 30 pL/poço a todos os poços da placa de ensaio e leitura em espectrofotômetro fluorescente, tal como um Ascent.
[205] Leituras fluorescentes (comprimentos de onda de excitação e emissão de 390nm e 460nm, respectivamente, definidos utilizando filtros passa-banda), refletindo a extensão de clivagem enzimática do substrato fluorescente, não obstante o inibidor, são taxas lineares ajustadas para cada poço.
[206] Taxas ajustadas para todos os poços e para cada inibidor são ajustadas à equação de inibição competitiva utilizando SigmaPlot 2000 para determinar valores de V, Km e Ki.
Ki de Catepsina L [207] O procedimento acima com as alterações seguintes é utilizado para a determinação de Ki para catepsina L.
[208] A enzima é catepsina L humana comercialmente disponível (por
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70/79 exemplo, Calbiochem). O substrato é o H-D-Val-Leu-Lys-AMC disponível de
Bahcem. O tampão de ensaio é 100mM acetato de sódio, 1mM EDTA, pH 5.5) O estoque DMSO (10mM em 100% de DMSO) é diluído a 10% em tampão de ensaio.
Enzima é preparada em concentração de 5nm em tampão de ensaio mais 1mM ditiotreitol imediatamente antes da utilização. 2 pL de 10mM inibidor confeccionado em 100% de DMSO é distribuído na linha A. 10pL de 50 μΜ de substrato (=1/200 diluição de 10mM estoque em DMSO, diluído em tampão de ensaio)
Estudos de Inibição [209] Inibidores potenciais são selecionados utilizando o ensaio acima com concentrações variáveis de composto de teste. Reações foram iniciadas pela adição de enzima para soluções de tampão de substrato e inibidor. Valores de Ki foram calculados de acordo com a equação 1.
FS lit (1) em que, vo é a velocidade da reação, V é a velocidade máxima, S é a concentração de substrato com constante de Michaelis de Km, e/é a concentração de inibidor.
[210] Os resultados são apresentados como:
A abaixo de 50 nanomolar
B 50-500 nanomolar
C 501-1000 nanomolar
D 1001-5000 nanomolar
E 5001-10000 nanomolar
F acima de 10000 nanomolar
TABELA 1
Exemplo Número de Ki de Ki de Ki de
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71/79
Teste Catepsina K Catepsina S Catepsina L
1 Teste 1 A F D
2 Teste 1 A F D
3 Teste 1 A F C
1 Teste 2 1.6 nM 25000 nM 2000 nM
2 Teste 2 1.1 nM 21000 nM 1700 nM
3 Teste 2 4 nM 22000 nM 1400 nM
4 - 2.7 nM 14500 nM 300 nM
5 - 0.6 nM 2900 nM 1170 nm
Ref. Ex.9 - 2.6 nM 6100 nM NA
[211] Os compostos de fórmula II são, portanto, inibidores potentes de catepsina K e também seletivos intimamente sobre as relacionadas catepsina S e L. O composto do Exemplo de Referência 9 oferece a confiança de que os compostos de difluorovinil correspondentes são também ativos e seletivos.
Estabilidade Metabólica [212] Os compostos da invenção e os exemplos comparativos indicados foram testados para estabilidade metabólica em um ensaio de citosol, no qual os compostos foram incubados com frações de citosol hepáticas humanas comercialmente disponíveis com o desaparecimento do composto monitorado por HPLC ou LC/MS. Frações de citosol de fígado humano agrupado são menos prováveis a representar indivíduos em isolamento do que sangue de um indivíduo particular, o qual pode ser mantido congelado, ao contrário de todo sangue. O ensaio de citosol, portanto, fornece uma plataforma de teste consistente como um guia para a estabilidade de um composto no ambiente in vivo, tal como quando exposto a todo sangue.
[213] Em suma, compostos de teste (2 pM) são incubados em citosol de fígado humano agrupado (Xenotech LLC Lenexa US, 1 mg/mL de proteína em 0.1M tampão de fosfato, pH 7.4) a 37 ° centígrados durante um período de uma hora. As
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72/79 incubações são iniciadas pela adição de co-fator 1mM NADPH. Sub-amostras temporárias foram coletadas em 0, 20, 40 e 60 minutos e precipitadas acidentalmente pela adição de 3 volumes de acetonitrila gelada. As amostras foram centrifugadas em baixa temperatura e os sobrenadantes foram separados e analisados por LC-MS-MS.
[214] Alternativamente, um ensaio de estabilidade análogo é realizado em todo sangue de ser humano ou macaco e/ou microssomas de fígado disponíveis comercialmente, tal como XEN 025.
TABELA 2
Exemplo Estrutura Clint Todo sangue ul/m/mg Clint HLM ul/m/mg
Exemplo Comparativo ____1 1 H o \ xk. 3 íi N ϊΓ Tf _ /> Η II H N ' χ<χ^ O O 9 49
Exemplo 1 ____1 jl H o \ /Ttx. xk ) < nX -'Pi _ /---\ Η II H N \ N. O O 3 16
[215] Exemplo comparativo 1 representa um composto comportando uma ligação carbono-carbono na posição 6 dentro do escopo de WO2008/007107 citado acima. Ele foi elaborado de uma forma fácil a partir de composto 1d (esquema 1).
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Assim, com o alceno exocíclico 1d em mãos, hidrogenação estereoseletiva do alceno com catalisador de Adams (dióxido de platina) em acetato de etila sob uma atmosfera de hidrogênio, prosseguiu-se com adição syn de hidrogênio. Este hidrogenação forneceu essencialmente um produto, ou seja, o isômero de metil C-6 (LCMS [M+H] = 288 achados) com estereoquímica R em bom rendimento. A seletividade facial vista aqui para a etapa de hidrogenação, é semelhante àquela relatada anteriormente na literatura para uma estrutura bicíclica intimamente relacionada (Srinivas et al, Synlett, 1999, 555-556). O tal bloco de construção preparado foi desprotegido, alongado e oxidado para a forma ceto ativa, assim como para os compostos da invenção exemplificados acima.
[216] Torna-se evidente a partir do Exemplo Comparativo 1 que um grupo metilz na posição 6 fornece um composto com valor Clint de todo sangue de 9 microgramas/ minuto/mg, representando um estimada meia-vida de todo sangue de pouco mais de uma hora. Em contraste, acetileno forneceu um valor Clint de 3, o qual representa uma calculada meia-vida de todo sangue de aproximadamente 4 horas. Nota-se também que as habilitações de microssoma HLM (representando a contribuição do fígado para metabolismo dos compostos respectivos) é significativamente maior para as espécies 6-metil do que para o composto da invenção, o qual acentuará ainda mais a melhor estabilidade da presente invenção. Estabilidade melhorada in vivo permite uma melhor distribuição do composto no corpo ao longo do dia, não obstante dosagem de QD ou BID. Isto é particularmente importante para indicações tais como osteoporose, em que variação diurna é significativa.
Permeabilidade [217] Este experimento mede transporte de inibidores através das células do canal gastroentérico humano. O ensaio utiliza as bem conhecidas células Caco-2 com um número de passagem entre 40 e 60.
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Transporte apical para basolateral [218] Geralmente cada composto será testado em 2-4 poços. Os poços basolaterais e apicais conterão 1.5 mL e 0.4 mL de tampão de transporte (TB), respectivamente, e a concentração padrão das substâncias testadas é 10 pM. Além disso, todas as soluções e buffers de teste conterão 1% de DMSO. Antes do experimento, as placas de transporte são pré-revestidas com meio de cultura contendo 10% de soro por 30 minutos para evitar a ligação não-específica a material plástico. Após 21 a 28 dias em cultura em suportes de filtro, as células estão prontas para experimentos de permeabilidade.
[219] Placa de transporte n° 1 compreende 3 linhas de 4 poços cada. Linha 1 é denominada Wash, linha 2 30 minutos e linha 3 60 minutos. Placa de transporte n° 2 compreende 3 linhas de 4 poços, uma denominada linha 4 90 minutos, linha 5 “120 minutos” e a linha restante não é nomeada.
[220] O meio de cultura dos poços apicais é removido e as inserções são transferidas para uma linha Wash (N° 1) em uma placa de transporte (placa n° 1) fora de 2 placas sem inserções, a qual foi preparada com 1.5 mL de tampão de transporte (HBSS, 25 mM HEPES, pH 7.4) nas linhas 1 a 5. Na seleção A^B. TB em poço basolateral também contém 1% de albumina de soro bovino.
[221] 0.5 mL de tampão de transporte (HBSS, 25 mM MES, pH 6.5) é adicionado às inserções e as monocamadas de célula equilibradas no sistema tampão de transporte por 30 minutos a 37 0C em um agitador polimix. Após serem equilibradas para o sistema buffer, o valor de resistência elétrica transepitelial (TEER) é medido em cada poço por um instrumento “chopstick” EVOM. Os valores de TEER estão geralmente entre 400 a 1000 Ω por poço (dependendo do número de passagem utilizado).
[222] O tampão de transporte (TB, pH 6.5) é removido do lado apical e a inserção é transferida para a linha de 30 minutos (N° 2) e 425 pL de TB puro (pH
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6.5). Incluindo, a substância de teste é adicionada ao poço (doador) apical. As placas são incubadas em um agitador polimix a 37 °C com uma velocidade baixa de agitação de aproximadamente 150 a 300 rpm.
[223] Após 30 minutos de incubação na linha 2, as inserções serão movidas para novos poços (receptores) basolaterais pré-aquecidos a cada 30 minutos; linha 3 (60 minutos), 4 (90 minutos) e 5 (120 minutos).
[224] 25 pL de amostras será coletado da solução apical após ~2 minutos e no final do experimento. Estas amostras representam amostras de doadores do início e do final do experimento.
[225] 300 pL será coletado dos poços (receptores) basolaterais em cada ponto de tempo programado e o valor posterior de TEER é medido no final do experimento. Para todas as amostras coletadas, acetonitrila será adicionado a uma concentração final de 50% nas amostras. As amostras coletadas serão armazenadas a -20 0C até análise por HPLC ou LC-MS.
Transporte basolateral para apical [226] Geralmente cada composto será testado em 2-4 poços. Os poços basolaterais e apical conterão 1.55 mL e 0.4 mL de TB, respectivamente, e a concentração padrão das substâncias testadas é 10 pM. Além disso, todas as soluções e buffers de teste conterão 1% de DMSO. Antes do experimento, as placas de transporte são pré-revestidas com meio de cultura contendo 10% de soro por 30 minutos para evitar ligação não-específica a material plástico.
[227] Após 21 a 28 dias em cultura em suportes de filtro, as células estão prontas para experimentos de permeabilidade. O meio de cultura dos poços apicais é removido e as inserções são transferidas para uma linha Wash (N° 1) em uma placa nova sem inserções (placa de Transporte).
[228] A placa de transporte compreende 3 linhas de 4 poços. Linha 1 é denominada wash e linha 3 é a “linha experimental. A placa de transporte foi
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76/79 previamente preparada com 1.5 mL de TB (pH 7.4) na linha wash n° 1 e com 1.55 mL de TB (pH 7.4), incluindo a substância de teste, na linha experimental N° 3 (lado doador).
[229] 0.5 mL de tampão de transporte (HBSS, 25 mM MES, pH 6.5) é adicionado às inserções na linha n° 1 e as monocamadas de célula são equilibradas no sistema tampão de transporte por 30 minutos, 37 0C em um agitador polimix. Após serem equilibradas para o sistema buffer, o valor de TEER é medido em cada poço por um instrumento “chopstick” EVOM.
[230] O tampão de transporte (TB, pH 6.5) é removido do lado apical e a inserção é transferida para linha 3 e 400 pL de TB puro, pH 6.5 é adicionado às inserções. Após 30 minutos, 250 pL é retirado do poço (receptor) apical e substituído por tampão de transporte puro. Posteriormente, 250 pL de amostras será retirado e substituído por tampão de transporte puro a cada 30 minutos até o final do experimento em 120 minutos e, finalmente, um valor posterior de TEER é medido no final do experimento. 25 pL de amostras é coletado do compartimento (doador) basolateral após ~2 minutos e no final do experimento. Estas amostras representam amostras de doadores do início e do final do experimento.
[231] Para todas as amostras coletadas, acetonitrila será adicionada a uma concentração final de 50% nas amostras. As amostras coletadas serão armazenadas a -20 0C até análise por HPLC ou LC-MS.
Cálculo [232] Determinação da fração cumulativa absorvida, FAcum, versus tempo.
FAcum é calculada a partir de:
Figure BRPI0918966B1_D0073
em que, Crí é a concentração receptora no final do intervalo i e Cdí é a concentração doadora no início do intervalo i. Uma relação linear deve ser obtida.
[233] A determinação de coeficientes de permeabilidade (Papp, cm/s) é
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77/79 calculada a partir de:
In (^-^) app (^-60) em que, k é a taxa de transporte (min-1) definida como a inclinação obtida por regressão linear de fração cumulativa absorvida (FAcum) como uma função do tempo (min), Vr é o volume na câmara receptora (ml), e A é a área do filtro (cm2).
Compostos de referência
Categoria de absorção em homem Marcadores % de absorção em homem
TRANSPORTE PASSIVO
Baixa (0-20%) Manitol Metotrexato 16 20
Moderada (21-75%) Aciclovir 30
Alta (76-100%) Propanolol Cafeína 90 100
TRANSPORTE ATIVO
Veículo de aminoácido L-fenilalanina 100
EFLUXO ATIVO
PGP-MDR1 Digoxina 30
[224] Maior permeabilidade através do tecido gastrintestinal é vantajosa na medida em que permite a utilização de uma dose menor para atingir níveis semelhantes de exposição a um composto menos permeável administrado em uma dose mais elevada. Uma dose baixa é vantajosa na medida em que minimiza o custo de suprimentos para uma dose diária, o qual é um parâmetro crucial em uma droga que é tomada por períodos prolongados de tempo.
[225] O composto do Exemplo 2 exibiu um valor papp de 9.1 x 10-6 cm/seg no ensaio Caco-2, enquanto que o composto da técnica anterior do Exemplo 2 de WO2008 007107 exibiu um valor papp de 2.7 x 10-6 cm/seg em um período de ensaio
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78/79 lado-a-lado. Neste sistema de ensaio, o possível composto da técnica anterior N((S)-1 -((3aS, 6R, 6aS)-6-metoxi-oxodihidro-2H-furo[3,2-b]pirrol-4(5H,6H,6aH)-il)-4metil-oxopentano-2-il)-4-(2-(4-metilpiperazina-1-il)tiazol-4-il)benzamida, o qual é citado na página 33 de WO2008/007107 (mas cuja preparação não é divulgada) exibe um valor papp de 0.9 x 10-6 cm/seg.
[226] Como regra geral, um valor papp em torno de 2 representa uma absorção in vivo de apenas 10-30%, enquanto que um valor papp próximo de 10, geralmente representará absorção completa.
[227] A diferença substancial em valores papp entre Exemplo 2 e o supramencionado Exemplo 2 da técnica anterior de WO2008 007107 correlaciona bem com experimentos PK de rato in vivo, como ilustrado na Figura 1. Os respectivos compostos foram administrados por via oral (60 pmol/kg em um veículo de 1% de Methocel A4C convencional. Como visto claramente na figura 1, a exposição in vivo (seja medida como Cmax ou AUC) foi muito maior para o composto da invenção do que para o composto da técnica anterior (Exemplo 2 de WO2008 007107). Nota-se que o gráfico tem uma escala logarítmica.
Mutagenicidade [228] O potencial mutagênico de compostos é convenientemente testado no Teste de Ames, geralmente realizado em uma variedade de cepas bacterianas, tais como Salmonela tifimurium TA100, TA102, TA1535, TA 1537, com e sem ativação de fração S9 do fígado, por exemplo, em concentrações de 30, 300 e 3000 ug/placa.
[229] Teste de Ames é facilmente disponível em um número de CROs em todo o mundo.
Abreviações
DMF dimetilformamida DCM diclorometano
TBDMS terc-butildimetilsilila RT temperatura ambiente
THF tetrahidrofurano Ac Acetil
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TLC cromatografia em camada fina DMAP dimetilaminopiridina
AcOEt acetato de etila uM micromolar [230] Todas as referências a que se refere o presente pedido, incluindo patentes e aplicações de patente, são incorporadas aqui por referência na medida do possível.
[231] Ao longo da especificação e das reivindicações que se seguem, a menos que o contexto exija o contrário, a palavra compreende e variações, tais como compreendem e compreendendo, significa a inclusão de um número inteiro indicado, etapa, grupo de números inteiros ou grupo de etapas, mas não a exclusão de qualquer outro número inteiro, etapa, o grupo de números inteiros ou grupo da etapas.

Claims (5)

  1. REIVINDICAÇÕES
    1. Composto CARACTERIZADO pelo fato de que apresenta a fórmula:
    Figure BRPI0918966B1_C0001
    ou um sal farmaceuticamente aceitável, hidrato ou N-óxido do mesmo.
  2. 2. Composição farmacêutica CARACTERIZADA pelo fato de que compreende um composto conforme definido na reivindicação 1, e um veículo ou diluente farmaceuticamente aceitável.
  3. 3. Uso de um composto conforme definido na reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de que é para a produção de um medicamento para o tratamento ou prevenção de doenças selecionadas apartir de: osteoporose; doenças da gengiva, tais como gengivite e periodontite; doença de Paget; hipercalcemia maligna; doença óssea metabólica; doenças relacionadas com excesso de cartilagem ou degradação da matriz, tais como osteoartrite e artrite reumatóide;
    câncer dos ossos, incluindo neoplasia; e dor, especialmente dor crônica.
  4. 4. Uso, de acordo com a reivindicação 3, CARACTERIZADO pelo fato de que é para a produção de um medicamento para o tratamento ou prevenção de osteoporose.
  5. 5. Uso, de acordo com a reivindicação 3, CARACTERIZADO pelo fato de que é para a produção de um medicamento para o tratamento ou prevenção de osteoartrite.
BRPI0918966A 2008-09-24 2009-09-24 composto inibidor de protease, composição farmacêutica compreendendo dito composto e uso terapêutico do mesmo BRPI0918966B8 (pt)

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