BRPI0923273B1 - Anitumor agent and methods for production and stabilization - Google Patents

Description

AGENTE ANTITUMOR E MÉTODOS PARA SUA PRODUÇÃO E ESTABILIZAÇÃO. A invenção refere-se aos medicamentos, mais especificamente aos medicamentos antitumorais baseados em uma solução aquosa de compostos de platina que podem ser usados no tratamento de tumores malignos, e também aos métodos para sua produção e estabilização.

Entre os fármacos antitumorais amplamente aplicados na prática médica, um dos mais eficazes é baseado em uma solução aquosa de um complexo de monômeros de Cisplatina. Os ions de platina atuam como agente ativo nestas drogas, coordenado com os portadores ligantes que são absorvidos pelas células tumorais praticamente cora a mesma intensidade daqueles outros normais. É por isso que as drogas contendo Cisplatina são notórias não somente pela alta atividade antitumoral, mas também pela alta toxicidade. Não menos ativa, mas muito menos tóxicas são as drogas antitumorais baseadas em uma solução aquosa de um complexo polimérico de platina com ácido desoxirribonucléico (Pt-DNA), representando um produto de reação de cisplatina e DNA, onde um dos transportadores ligantes dos ions de platina é um nucleotideo incorporado na estrutura de espirais de dois filamentos das macromoléculas de DNA, intensamente absorvido apenas pelas células tumorais de rápida reprodução e, conseqüentemente, as drogas antitumorais que contém ligações Pt-DNA afetam tecidos tumorais com alto grau de seletividade com danos insignificantes nos tecidos normais [Treatment of nonresectable tumors of organs of an abdominal cavity. S.A.Shalimov, etc. 1998, p. 103]. 0 complexo monomérico de Cisplatina e o complexo polimérico Pt-DNA, que são substâncias básicas das drogas, não são suficientemente solúveis e são quimicamente instáveis na água. Portanto, os aditivos farmacêuticos são adicionados aos medicamentos baseados em suas soluções aquosas. Como aditivos eles usam sais farmacologicamente aceitáveis, reguladores de pH e outros agentes de estabilização, de preferência aqueles que à custa da sua própria atividade biológica mostrada simultaneamente com a capacidade de obtenção da solubilidade e estabilidade química da substância básica, possibilita fornecer eficácia ao tratamento e melhor tolerância.

Uma droga antitumoral conhecida é baseada em uma solução aquosa dos derivados de platina com poliânion de ácido desoxirribonucléico in si tu (Pt-DNA) (substância ativa) que inclui macromoléculas de Pt-DNA não-associadas com o tamanho máximo de medida de 0,05 a 0,15 microns, cloreto de sódio, citrato de sódio, cloreto de amônio e fluorouracil na forma de sal de sódio (substância auxiliar) na proporção dos componentes em uma solução aquosa, peso em %: Pt -DNA - 0,130 a 0,153 cloreto de sódio - 0,080 a 0,090 citrato de sódio - 0,040 a 0,053 cloreto de amônio - 0,015 a 0,018 fluorouracil na forma de sal de sódio- 0,025 a 0,370 [ver o pedido de patente ucraniana W 70456, publicado em 15/10/2004, requerentes Shalimov S.O., Voltchenskova II, Maidanevitch NM].

Como as pesquisas têm mostrado, a solução aquosa de uma droga conhecida tem pH de 6,5 a 7,5 e densidade de 1,0012 a 1,0016 g/sm3 na qual as moléculas não-associadas do composto Pt-DNA tem maior atividade antitumoral, e fluorouracil tem capacidade de fortalecer essa atividade e reduzir a toxicidade dos derivados de platina, se a substância recebida é mantida na faixa de temperaturas acima de 35°C. Reduzir a temperatura faz com que as moléculas das bases do Pt-DNA entrem em interações intramoleculares de caráter cooperativo mais intensamente do que nas interações intermoleculares com ânions relacionados com fluorouracil de sal de sódio. Conseqüentemente, as estruturas espaciais das moléculas de Pt-DNA são condensadas de forma irreversível. A Condensação das estruturas intramoleculares que contêm átomos muito pequenos de platina com densidade de 21,45 g/sm3, leva à redução do tamanho das estruturas espaciais das moléculas de Pt-DNA de tal forma que sua densidade de fluido excede a densidade da solução, e é definida pela gravidade, sob a forma de deposição.

Assim, os ânions de fluorouracil são mais propensos a reagir com os prótons da solução do que nos baseados no Pt- DNA e, conseqüentemente, passam para uma condição de moléculas neutras de sua própria base, cuja solubilidade em água é limitada, que se ajusta na forma de cristais e se dissolve com o aumento da temperatura. A sedimentação das substâncias ativas e auxiliares provoca redução da sua concentração na solução do agente, redução da sua atividade antitumoral, aumenta a força terapêutica e limita sua exclusividade de uso em aplicações locais e infusões intra-abdominais, excluindo a infusão intra-arterial, intravenosa e uma forma de administração intersticial. A base de fluorouracil é conhecida por ser usada como fragmento estrutural de tegafur - precursor de fluorouracil no organismo - para preparação da composição antitumor contendo tegafur e uracil na razão molar de 1:4 [ver patente US 5534513, IPC 7 A61K 31/505, requerente: TAIHO PHARMACEUTICAL_CO LTD (JP) , publicada em 09/07/1996] . A uréia é conhecida por ser utilizada como diurético, queratolítico, um agente redutor da pressão intracraniana e intra-ocular [M.M.Turkevich. Pharmaceutical chemistry, 1973, p. 45], e também como excipiente, acrescentada às formas farmacêuticas sólidas de administração peroral.

Altas concentrações de uréia e aumento do pH para mais de 11 são conhecidos por serem utilizados para desenrolar as fitas condensadas do DNA de cadeia dupla natural [A.Lenindzher. Biochemistry, 1976, p. 737]. O hidróxido de sódio é conhecido por ser usado em farmácia para controlar o pH de soluções de agentes terapêuticos. Além disso, sabe-se que sob a influência das elevadas concentrações de uréia e em pH> 11,0 as fitas condensadas do DNA de cadeia dupla natural se desespiralizam [A.Lenindzher. Biochemistry, 1976, p. 737] .

No entanto, em fontes especificas nada é dito sobre a aplicação de uracil, uréia e hidróxido de sódio, como agentes de prevenção de condensações intramoleculares de cadeias condensadas de compostos de metais com o DNA. Não se sabe também sobre a aplicação de uréia nas formas de dosagens farmacêuticas para administração parenteral. As faixas de concentração efetiva e a taxa da substância ativa de fluorouracil e sais em uma solução aquosa do fármaco aqui pleiteado, correspondem aos índices especificados no desenvolvimento de uma droga bem conhecida para infusões intra-abdominais, intravenosa e infusão intra-arterial, que são mantidas à temperatura entre 35 a 40°C. As faixas de concentração de uracil e uréia são determinadas pela razão molar de fluorouracil, uracil e uréia de 1:1:1. As faixas de concentração de hidróxido de sódio são limitadas por baixo, com valor de pH que exclui a possibilidade de protonação do fluorouracil, e limitadas acima pelos requisitos farmacêuticos. Não existe outra maneira conhecida se obter uma droga antitumoral através da manutenção das fibras do DNA durante 16 a 26 horas em solução de citrato de sal que contém cloreto de sódio e citrato de sódio, dissolvendo fibras na mistura mecânica e aquecendo a solução de DNA para 70 a 90°C, introduzindo gradualmente a solução de citrato de sal de cis-diclorodiaminoplatina (DDP) aquecida a mesma temperatura para a solução de DNA aquecida, além de uma solução aquosa de sal de sódio de fluorouracil para a mistura e um controle termostático de mistura das soluções de DNA e DDP em 70 a 90°C durante 15 a 20 minutos [ver a patente Ucraniana N* 70 456, publicada em 15/10/2004, requerentes: Shalimov S.O., Voltchenskova I.I., Maidanevitch N.M.]. A adição de uma solução aquosa de sal de sódio de fluorouracil para mistura de soluções de DNA e DDP antes do controle termostático não promove a intensificação das interações intermoleculares das moléculas de Pt-DNA com as moléculas relacionadas da solução e enfraquecimento das interações intramoleculares de caráter cooperativo nelas e não exclui a possibilidade de interação dos ânions de fluorouracil com os prótons da solução a temperaturas inferiores a 35°C. E assim, a forma bem conhecida, não impede a condensação intramolecular irreversível das estruturas espaciais do Pt-DNA e não interfere na protonação dos ânions de fluorouracil na solução da droga. Para evitar estes fenômeno é necessário executar operações tecnológicas adicionais na introdução da droga na solução de componentes que elevaria seu pH bem como a densidade antes do controle termostático. Além disso, é possível usar o agente antitumoral recebido pela forma bem conhecida, somente a temperatura de 35 a 37°C enquanto o declínio da temperatura diminui a atividade do agente. Adicionalmente, a alta temperatura de um agente dificulta o seu armazenamento, transporte e utilização.

Existe uma maneira conhecida de estabilização de uma droga antitumoral baseada em uma solução aquosa de Cisplatina com concentração de 0,1 a 1,0 mg/ml em que o uso do cloreto de sódio na quantidade 1 a 20 mg/ml, ácido clorídrico com pH de 2,0 a 3,0 e manitol (diurético) na quantidade de 2 a 150 mg/ml [Patente URSS 1192596 A, publicada em 15 de novembro de 1985]. São conhecidas soluções aquosas do composto de Pt-DNA estabilizado com cloreto de sódio e citrato de sódio (agente de anticoagulação do sangue) , nas quantidades correspondentes a razão molar da platina, fósforo do DNA, cloreto de sódio e citrato de sódio 4:6:30:3 [Patentes ucranianas 60,597, publicada em 15 de julho de 2005, 61,543, publicada em 15 de agosto de 2005; 66476 A, publicada em 17 de maio de 2004] .

No entanto, as drogas antitumorais mais eficazes e menos tóxicas baseadas em uma solução aquosa (derivativos) de Pt-DNA (derivativos) são composições descritas acima na patente ucraniana 70,456. Estas são estabilizadas com cloreto de sódio, citrato de sódio, cloreto de amônio (uma droga que causa a ação expectorante e reforço da ação diurética) e, adicionalmente, o agente de estabilização - sal de sódio de fluorouracil em relação aos componentes acima especificados na solução. 0 sal de sódio de fluorouracil reforça o efeito antitumoral e enfraquece os efeitos tóxicos da substância base, pois é capaz de atuar como modulador da ação farmacológica das macromoléculas de Pt-DNA no organismo e o estabilizador da concentração das macromoléculas de Pt-DNA na solução aquosa da droga.

No entanto, a solução aquosa de compostos Pt-DNA nas drogas conhecidas tem pH 6,5 a 7,5 em que o uso do sal de sódio de fluorouracil permite estabilizar a concentração de Pt-DNA na solução em uma temperatura acima de 35°C. A diminuição da temperatura promove o escoamento das macromoléculas de Pt-DNA compostas a partir da solução na forma de deposição e do sal de sódio de fluorouracil sob a forma de cristais da base de fluorouracil que provoca a redução da substância base e a concentração do agente de estabilização na solução da forma de dosagem farmacêutica da droga, influência negativamente sua atividade antitumoral e a eficácia terapêutica. Além disso, limita as suas condições de armazenamento e possibilidades de aplicação em aplicações locais e infusões intraperitoneais, excluindo infusões intravenosas e intra-arteriais, injeções endolinfáticas e forma de administração intersticial. Não há informações sobre o uso de fluorouracil, uracil e a base de uréia na forma de auto-atuação ou em mistura com um destes, ou sobre o uso de reguladores de pH como os agentes que interferem com a alocação de compostos macromoleculares de metais com o DNA das soluções. Também não há informações sobre o uso da uréia na forma de dosagem médica para administração parenteral.

As faixas de concentração efetiva e a relação da substância base e sais em solução aquosa estabilizada através do método pleiteado correspondem às concentrações e relações encontradas no desenvolvimento de um método conhecido tendo compostos de Pt-DNA em solução aquosa para infusões intraperitoneal, intravenosa e intra-arterial que têm pH 6,5 a 7,5 e são mantidos em temperatura de 35 a 40°C. As faixas de concentração de fluorouracil, uracil e a base de uréia são determinadas pela razão molar do nucleotídeo Pt-DNA. Fluorouracil, uracil e a base de uréia são 1: (6-12) : (0,6 a 1,2): (0,6 a 1,2). As faixas de concentração do regulador de pH são limitadas por baixo pelos valores que exclui a possibilidade de cristalização da base de fluorouracil, e limitadas por cima pelos requisitos farmacêuticos. O método de estabilização oferecido não permite que as macromoléculas de Pt-DNA e a base de fluorouracil escoem da solução, que por sua vez, oferece a possibilidade de obter drogas antitumorais com tal concentração dos componentes que não alteram suas formas de dosagens farmacêuticas na cura à temperatura dentro de uma faixa de 25 a 5°C por um longo período.

Com base no citado acima, existe uma gama específica de problemas a serem resolvidos por esta invenção.

Um dos problemas consiste na criação de uma droga antitumoral, onde através da adição de uracil, uréia e hidróxido de sódio para um agente conhecido, pode-se alcançar a possibilidade de evitar a condensação intramolecular da substância básica e a protonização da substância auxiliar, evitando assim, a sedimentação e redução da sua concentração na solução na faixa de temperatura de 25 a 15°C, e alcançando o aumento da atividade antitumoral e eficácia terapêutica da droga e na expansão da sua aplicação. 0 segundo problema consiste em desenvolver um modo de obter uma droga antitumoral, onde através do uso de soluções aquosas de uracil, uréia e hidróxido de sódio sob condições tecnológicas correspondentes, chegaremos a atenuação da intensidade das interações intramoleculares de caráter cooperativo nas moléculas de Pt-DNA, por um lado. Por outro lado, teremos aumento da intensidade da interação de suas bases com as moléculas da solução, ou seja, com fluorouracil, uracil e uréia, o que dá uma possibilidade de obtenção de uma droga contendo a substância ativa Pt-DNA cujas moléculas não são condensadas enquanto cura a droga pronta para o uso em uma faixa de temperatura de 25 a 15°C, que por sua vez, evita a sedimentação das macromoléculas da solução. O terceiro problema consiste em encontrar o método de estabilização de drogas antitumorais baseada, em uma solução aquosa de compostos de platina com a discriminação aumentada da ação especificada e o aumento da eficácia terapêutica.

Os problemas vistos são resolvidos pela presente invenção. 0 primeiro problema é resolvido pelo fato da droga antitumoral baseada em uma solução aquosa dos derivados de platina com poliânion do ácido desoxirribonucléico in situ (Pt-DNA), que inclui macromoléculas de Pt-DNA não-associadas com o tamanho máximo de medida de 0,05 a 0,15 microns, cloreto de sódio, citrato de sódio, cloreto de amônio e fluorouracil na forma de sal de sódio, de acordo com a invenção conter adicionalmente uracil e uréia na razão molar de fluorouracil, uracil e uréia 1:1:1, na proporção dos componentes em uma solução aquosa, peso em %: Pt -DNA - 0,130 a 0,153 cloreto de sódio - 0,080 a 0,090 citrato de sódio - 0,040 a 0,053 cloreto de amônio - 0,015 a 0,018 fluorouracil na forma de sal de sódio - 0,025 a 0,370 uracil - 0,018 a 0,270 uréia - 0,010 a 0,144 e também hidróxido de sódio até obter pH 8,4 a 9,9. 0 segundo problema é resolvido através da manutenção das fibras do DNA durante 16 a 26 horas em uma solução de citrato de sal que contém cloreto de sódio e cloreto de citrato, dissolvendo as fibras na mistura mecânica e aquecendo-as na solução de DNA em 70 a 90 °C, com adição gradual da solução de citrato de sal de cis-diclorodiaminoplatina (DDP) aquecida à mesma temperatura para a solução de DNA aquecida, soluções DDP e DNA de controle termostático misturadas a 70 a 90°C durante 15 a 20 minutos e adição de uma solução aquosa de sal de sódio de fluorouracil para a mistura antes do controle termostático. De acordo com a invenção, antes do controle termostático com uma solução aquosa de sal de sódio de furaracil, devemos introduzir uma solução aquosa de uracil e uma solução de uréia em concentrações que correspondem a razão molar de fluorouracil, uracil e uréia de 1:1:1, e uma solução aquosa de hidróxido de sódio com pH 11,0 a 12,0, e assim a solução é levada a um pH 8,4 a 9,9 com densidade de 1,0054 a 1,0058 g/cm3. O método oferecido para obtenção de uma agente antitumor permite alcançar valores de pH aumentados e densidades da solução que exclui a possibilidade de interação do fluorouracil com os prótons da solução que, por sua vez, permite a obtenção da droga com macromoléculas de Pt-DNA que não são condensadas, com o tamanho máximo de medida de 0,05 a 0,15 microns, a droga está pronta para o uso em uma faixa de temperatura de cura de 25 a 15°C. Aumentando, assim, a densidade da solução evitando a sedimentação das macromoléculas provenientes da solução da droga.

Na prática, a droga antitumoral foi recebida da seguinte forma.

As fibras de DNA foram mantidas durante 16 a 26 horas em uma solução de citrato de sal, que contendo cloreto de sódio e citrato de sódio. Estas foram dissolvidas em uma mistura mecânica e a solução de DNA aquecida de 70 a 90°C. A solução de citrato de sal de cis-diclorodiaminoplatina (DDP) aquecida à mesma temperatura foi introduzida na solução de DNA aquecida. Então, uma solução aquosa do sal de sódio de fluorouracil foi adicionada à mistura. Além disto, simultaneamente com uma solução aquosa do sal de sódio de fluorouracil foi adicionada uma solução aquosa de uracil e uma solução aquosa de uréia em concentrações que correspondem a razão molar de fluorouracil, uracil e uréia 1:1:1, e uma solução aquosa de hidróxido de sódio com pH 11,0 a 12,0. Através da qual uma solução da droga foi trazida para pH 8,4 a 9,9 e a densidade de 1,0054 a 1,0058/cm3. Depois as misturas das soluções de DNA e DDP foram mantidas em temperaturas de 70 a 90°C durante 15 a 20 minutos.

Exemplos de obtenção de uma droga antitumoral são apresentados na Tabela 1, onde os exemplos de 1 a 3 se referem à droga pleiteada, e o exemplo 4 à droga conhecida.

Tabela 1 Símbolos da Tabela: NaCl - cloreto de sódio, Na3Cit -citrato de sódio, NaFu - fluorouracil sob a forma de sal de sódio, Ura - uracil, Uréia - Uréia.

Com os pesos molares de uracil de 112 g-mole, fluorouracil 153 g-mole, uréia 60 g-mole para o primeiro exemplo o número de moles de uracil é igual a 2,70/112 = 0,024; fluorouracil - 3,70/153 = 0,024; uréia - 1,44/60 = 0,024;

Para o segundo exemplo, o número das substâncias indicadas é igual a 0,016 e para o terceiro 0,0016. Assim, uma solução aquosa de uracil e uma solução aquosa de uréia foram introduzidas em concentrações correspondentes à razão molar de fluorouracil, uracil e uréia 1:1:1.

As características da droga pleiteada, dependendo das condições da sua obtenção foram comparadas com as características da droga conhecida. Os resultados são apresentados na Tabela 2, onde os exemplos de 1 a 3 se referem à droga pleiteada, e o exemplo 4 à uma droga conhecida.

Tabela 2 As diferenças entre as soluções aquosas da droga pleiteada e conhecida são provadas pelos diferentes valores de pH, que são definidos potenciometricamente e os diferentes valores de densidade definidos através do método do picnômetro. As diferenças, nas estruturas espaciais das moléculas de Pt-DNA, entre a droga conhecida e pleiteada, que são formadas em temperaturas inferiores a 35°C são provadas nos exemplos da tabela com os seus diferentes tamanhos nas estruturas moleculares que, de acordo com os dados submicroscópicos diferem uma das outras de 2 a 3 vezes. 0 tamanho das estruturas moleculares nos exemplos da droga pleiteada corresponde ao tamanho das macromoléculas individuais não-associadas da substância, o que confirma a ausência de condensação intramolecular das moléculas de Pt-DNA da droga mantidas em temperatura entre 25 a 15°C. A atividade antitumoral da droga conhecida e daquela pleiteada foi investigada pelo teste de citotoxicidade no modelo das células cultivadas recebidas de um material cirúrgico do paciente doente com oligodendroastrocitoma maligno do cérebro. As células foram cultivadas em uma mistura nutritiva da estrutura padrão: meio Eagle (40%), soro de bezerros embrionário (30 a 40%) , glicose (800 mg de %) , insulina (0,2 unidades/ml) em uma condição constante da composição do gás e temperatura de 36,5°C em uma câmara com temperatura regulada.

Quatro dias após a inoculação, durante o período de intenso crescimento das células da cultura de controle, estas foram tratadas com uma solução salina normal, e as células de culturas experimentais foram tratadas com as soluções da droga pleiteada e com a solução da droga conhecida, mantidas à temperatura de 25 a 15°C. 0 período de incubação após o tratamento das culturas foi de 24 horas. A atividade antitumoral foi estimada pela citotoxicidade que foi caracterizada pela comparação relativa com o controle da quantidade de células mortas. Os resultados do cálculo da quantidade relativa de células mortas são mostrados em porcentagem, e podem ser vistos na tabela 3, onde sob Ν' 1, existem indicadores do controle de cultura de células tratada por uma solução salina normal, sob números de 2 a 4 indicadores das células de culturas experimentais tratadas por soluções da droga pleiteada, sob o N* 5 - indicadores de células de culturas experimentais tratadas por uma solução da droga conhecida. Os dados da tabela 3 são apresentados sem dados sobre a concentração de sais de cloreto de sódio, citrato de sódio e cloreto de amônio.

Tabela 3 Os dados da tabela 3 mostram que na comparação entre a estimativa quantitativa da atividade antitumoral no teste de citotoxicidade, a droga pleiteada está na forma substancial superior aquela conhecida. Mantidas em temperatura idêntica de 15°C e colocadas em culturas com concentrações idênticas de derivados Pt-DNA 30 mkg/ml e fluorouracil 50 mkg/ml da droga conhecida causa a destruição de apenas 24,2% das células, enquanto que a droga pleiteada destrói 86,6%.

Assim, a droga oferecida mantém a sua atividade antitumoral e alta eficácia terapêutica, mesmo em temperaturas de 25 a 15°C o que simplifica consideravelmente seu armazenamento, transporte e utilização. A droga oferecida pode ser utilizada em diferentes formas farmacêuticas. A droga antitumoral pleiteada foi usada em tratamento clínico dos tumores primários e metastáticos do pulmão, rins, peritoneal e pleuras, órgãos digestivos e sarcomatose do sistema locomotor, em formas de dosagem para a administração intravenosa, intra-arterial e intra-abdominal, na terapia de lesões tumorais da cabeça, pescoço e pele - em formas farmacêuticas para administração local na forma de aplicações; em tumores cerebrais - intersticialmente com implantação intraoperacional do reservatório Ommaya na remoção de um tumor removido cirurgicamente. A experiência da aplicação clínica da droga pleiteada demonstrou que a utilização de suas formas de dosagem tanto para aplicação intra-abdominal quanto local, e para a administração intravenosa, intra-arterial e intersticial, aumenta a eficácia da quimioterapia, que se expressa no aumento da esperança de vida e na melhoria da qualidade de vida dos pacientes durante o curso do tratamento e por um longo período de tempo. Ao mesmo tempo, por conseqüência, nenhum desenvolvimento clínico ou laboratorial importante foram observados nos pacientes. O próximo problema (terceiro) é resolvido pela invenção pleiteada quando apresenta um método de estabilização dos agentes antitumorais, baseado em uma solução aquosa (composto) dos derivados de platina com o ácido desoxirribonucléico (Pt-DNA) . De acordo com este método, é usado uma mistura de base fluorouracil com uracil e uréia na razão molar de nucleotídeos Pt-DNA, base de fluorouracil, uracil e uréia, 1: (6-12:(0,6 a 1,2: (0,6 a 1,2), como agente de estabilização adicionais ao diminuir a concentração de prótons na solução a 8,4 a 9,9.

Além disso, são usados compostos de platina com o ácido desoxirribonucléico (Pt-DNA) na concentração de 1,30 a 1,53 mg/ml, contendo cloreto de sódio no volume de 0,80 a 0,90 mg/ml, citrino de sódio no volume de 0,40 a 0,53 mg/ml, cloreto de amônio no volume de 0,15 a 0,18 m/ml e agente de estabilização adicional, de acordo com a invenção, e utilização de complexo Pt-DNA cujas moléculas não partiram de solução com menos do que 35°C.

Como parte da droga, as macromoléculas de Pt-DNA podem conter um dos DNA, atribuídos a partir de fontes naturais ou sintetizadas por meio de métodos de engenharia genética com a massa molecular, não limitada a 0,3 a 20 milhões de Dalton.

Para aumentar o pH da solução da droga para 8,4 a 9,9 também foi usado hidróxido de sódio ou hidróxido de potássio ou hidróxido de amônio, ou qualquer outro regulador de pH farmaceuticamente aceitável. A forma declarada de estabilização foi utilizada na tecnologia de obtenção de drogas antitumorais listadas na tabela 4, que diferem entre si com suas naturezas de DNA, seguindo para os compostos de Pt-DNA. TABELA 4 Símbolos na Tabela: A - adenina, T - timina, G guanina, C - citosina.

Na prática, o método de estabilização de drogas antitumorais foi realizado da seguinte forma. A solução aquosa do agente de estabilização adicional contendo uma mistura de base de fluorouracil com uracil e uréia foi inserida na solução aquosa contendo composto de Pt-DNA, cujas moléculas não partiram da solução com menos do que 35°C, cloreto de sódio, citrino de sódio e cloreto de amônio. Simultaneamente, juntamente com a solução aquosa do agente estabilizador foram introduzidos em uma solução aquosa do regulador pH, contendo hidróxido de sódio com pH até 11 a 12, com a ajuda dos quais a solução do agente-alvo foi trazida até o pH de 8,4 a 9,9.

As condições específicas do método de estabilização de drogas antitumorais, representadas na tabela 4, com a indicação das quantidades de componentes iniciais da solução da substância básica, na solução do agente de estabilização adicional e na solução reguladora de pH são apresentadas na tabela 5, onde exemplos de 1 a 9 se refere ao método pleiteado, e os exemplos 10 e 11 - para o método conhecido.

Tabela 5 Símbolos na Tabela: NaCl - cloreto de sódio; Na3Cit -citrino de sódio; NHC1 - cloreto de amônio; NaFu - sal de sódio de f luorouracil; Fu - base de f luorouracil; Ura -uracil; Uréia - uréia; NaOH - hidróxido de sódio.

As características do método pleiteado, dependendo das condições da sua implementação e a temperatura de cura da droga foram comparadas com as características do método conhecido pelos dados apresentados na tabela 6, onde exemplos de 1 a 9 se referem ao método reivindicado, e os exemplos 10 e 11 ao método conhecido.

Tabela 6 As diferenças nas características do método pleiteado e conhecido são provadas pelas diferentes faixas de valores do pH, medido pela via potenciometrica, e ausência da dependência de temperatura das concentrações da substância base e do agente de estabilização adicional, controlada pela análise quantitativa dos métodos. As diferenças nas concentrações que surgem em temperatura inferior a 35°C no método conhecido, são provadas nos exemplos da tabela com a redução da concentração do composto de Pt-DNA de 1,50 mg/ml a 1,04 mg/ml, ou seja, 30,7% e Na Fu de 1,89 mg/ml a 1,47 mg/ml, ou seja, 22% em solução aquosa da droga mantidos a 15°C.

Quando a droga foi mantida em temperatura próxima de 10°C a concentração diminuiu para Pt-DNA de 1,48 mg/ml a 0,63 mg/ml, ou seja, já em 57,4%, e para NaFu de 1,82 mg/ml a 1,19 mg/ml, ou seja, por 34,4%. As concentrações da substância base e do agente de estabilização adicional nos exemplos do método pleiteado, correspondem às concentrações nas soluções mantidas em temperaturas acima de 35°C o que confirma a possibilidade do método fornecer condições em que macromoléculas de Pt-DNA e moléculas baseadas em fluorouracil não partem de solução de manter o produto alvo na faixa de temperatura de 25 a 5°C. A atividade antitumoral, em que os métodos pleiteados e conhecidos de estabilização de droga, são capazes de proporcionar, foi estudada em ensaio de citotoxicidade sobre o modelo das células do astrocitoma anaplásico do cérebro humano adaptado para o cultivo. As células foram mantidas em meio de cultura Eagle com a adição de soro embrionário de bezerro, glicose no soro embrionário, e insulina, em condições constantes da composição do gás e a temperatura de 36,5°C na câmara com temperatura regulada. No período de intenso crescimento das células da cultura de controle, estas foram tratadas com uma solução salina normal, e as células de culturas experimentais foram tratadas com soluções de drogas estabilizadas pelos métodos pleiteados e conhecidos, que foram preliminares mantidas à temperatura de 10°C. A atividade antitumoral foi estimada pela citotoxicidade que foi caracterizada pela sua comparação relativa com o controle da quantidade de células perdidas 24 horas após terem sido tratadas com a droga. Os resultados do cálculo da quantidade relativa das células perdidas em percentagem são apresentados na tabela 7, onde sob N* 1, existem indicadores do controle de cultura de células tratadas com uma solução salina normal, sob os números 2 a 5 -Indicadores de culturas experimentais tratadas com soluções das drogas estabilizadas pelo método pleiteado, sob o número 6 - Indicadores de culturas experimentais tratadas com soluções das drogas estabilizadas por meio do método conhecido.

Tabela 7 Dados da Tabela 7 comprovam que na comparação entre a avaliação quantitativa da atividade antitumoral no teste de citotoxicidade pelo método pleiteado de estabilização é essencialmente superior ao método conhecido. Mantidas à temperaturas idênticas de 10 °C e aplicadas em volumes idênticos de 0,02 ml, com quantidades idênticas de 1,48 mg/ml de Pt-DNA em temperatura acima de 35°C as soluções aquosas da droga estabilizada por meio do método conhecido, cria concentração da substância básica de apenas 12,6 mg/1 após ser introduzida no meio de cultivo no volume de 1 litro, causando destruição de apenas 32,2%, enquanto que soluções aquosas da droga estabilizada pelo método pleiteado, após ser introduzida no meio de cultivo produz concentração de Pt-DNA de 29,6 mg/1, o que provoca a destruição de 80,4 a 82,1% das células.

Assim, o método oferecido de estabilização proporciona o aumento do efeito específico do composto de Pt-DNA e aumento sua eficácia terapêutica, mesmo em temperaturas de 25 a 5°C, bem como prevê condições de armazenamento expandida das drogas e uma gama mais ampla de sua aplicação, através da utilização dos compostos de platina com o ácido desoxirribonucléico (Pt-DNA) cujas macromoléculas não partiram da solução à temperatura inferior a 35°C em detrimento do uso da mistura baseada em fluorouracil com uracil e uréia, bem como às custas do uso da solução com baixa concentração de prótons.

As drogas antitumorais estabilizadas pelo método pleiteado podem ser usadas em diferentes formas farmacêuticas. A experiência da aplicação clínica das drogas antitumorais estabilizadas pelo método pleiteado tem mostrado que a sua utilização em formas de dosagem tanto para meio de introdução intraperitoneal quanto local; e para intravenosa, intra-arterial, endolinfática e intersticial, aumentam a eficiência do tratamento dos tumores primários e metastáticos localizados na cabeça, pescoço, pulmão, rins, órgãos digestivos e áreas do sistema locomotor. 0 aumento da eficácia é expressa no aumento da expectativa de vida e na melhoria da qualidade de vida dos pacientes, tanto durante o curso do tratamento quanto ao longo do período de tempo após o tratamento. Ao mesmo tempo, por consequência nenhum desenvolvimento clínico ou laboratorial importante foram observados nos pacientes.

REIVINDICAÇÕES

Claims (9)

1. Preparação farmacêutica aquosa baseada em uma solução aquosa dos derivados de platina com poliânion do ácido desoxirribonucléico, macromoléculas de Pt-DNA não-associadas com o tamanho máximo de medida de 0,05 a 0,15 microns, cloreto de sódio, citrato de sódio, cloreto de amônio e fluorouracil na forma de sal de sódio, CARACTERIZADA pelo fato de adicionalmente conter uracil e uréia na razão molar de fluorouracil, uracil e uréia 1:1:1, na proporção dos componentes em uma solução aquosa, peso em Pt -DNA - 0,130 a 0,153 cloreto de sódio - 0,080 a 0,090 citrato de sódio - 0,040 a 0,053 cloreto de amônio - 0,015 a 0,018 fluorouracil na forma de sal de sódio - 0,025 a 0,370 uracil - 0,018 a 0,270 uréia - 0,010 a 0,144 e também hidróxido de sódio até obter pH 8,4 a 9,9, a densidade da solução é 1,0054-1,0058 g/cm3.

2. Método para obtenção da preparação farmacêutica aquosa através da manutenção das fibras do DNA durante 16 a 26 horas em uma solução de citrato de sal que contém cloreto de sódio e cloreto de citrato, dissolvendo fibras na mistura mecânica e aquecendo a solução de DNA em 70 a 90°C, com adição gradual da solução de citrato de sal de cis-diclorodiaminoplatina (DDP) aquecida a mesma temperatura para a solução de DNA aquecida, soluções DDP e DNA de controle termostático misturadas a 70 a 90°C durante 15 a 20 minutos e adição de uma solução aquosa de sal de sódio de fluorouracil para a mistura antes do controle termostático; o método sendo CARACTERIZADO pelo fato de que antes do controle termostático uma solução aquosa de uracil e uma solução aquosa de uréia em concentrações que correspondem a razão molar de fluorouracil, uracil e uréia de 1:1:1, e uma solução aquosa de hidróxido de sódio com pH 11,0 a 12,0 também são adicionadas simultaneamente com uma solução aquosa de sal de sódio de fluorouracil, depois que a solução da droga é levada a um pH 8,4 a 9,9 com densidade de 1,0054 a 1,0058 g/cm3.

3. Método para estabilizar uma preparação farmacêutica aquosa para uso como droga antitumoral baseado em uma solução aquosa dos derivados de platina com ácido desoxirribonucléico (Pt-DNA), o método sendo CARACTERIZADO pelo fato de utilizar uma mistura da base de fluorouracil, uracil e uréia na razão molar dos nucleotideos Pt-DNA, base de fluorouracil, uracil e uréia, 1:(6 a 12):(0,6 a 1,2):(0,6 a 1,2) como agente estabilizador adicional ao diminuir a concentração de prótons na solução de 8,4 a 9,9.

4. Método de acordo com a reivindicação 3, CARACTERIZADO pelo fato de que a concentração do complexo de Pt-DNA é 1,30 a 1,53 mg/ml.

5. Método de acordo com a reivindicação 3, CARACTERIZADO pelo fato de que a preparação farmacêutica aquosa também contém cloreto de sódio na quantidade de 0,80 a 0,90 mg/ml.

6. Método de acordo com a reivindicação 3, CARACTERIZADO pelo fato de que a droga também contém citrato de sódio na quantidade de 0,40 a 0,53 mg/ml.

7. Método de acordo com a reivindicação 3, CARACTERIZADO pelo fato de que a preparação farmacêutica aquosa também contém cloreto de amônio na quantidade de 0,15 a 0,18 mg/ml.

8. Método de acordo com a reivindicação 3, CARACTERIZADO pelo fato de que a preparação farmacêutica aquosa um DNA terapêutico aceitável recuperado de fontes naturais ou sintéticas por meio de métodos de engenharia genética com massa molar de 0,3 a 20 megadalton.

9. Método de acordo com a reivindicação 3, CARACTERIZADO pelo fato de trazer o pH da preparação farmacêutica aquosa para 8,4 a 9,9, também é usado hidróxido de sódio ou hidróxido de potássio ou hidróxido de amônio, ou qualquer outro regulador de pH farmacologicamente aceitável.