BRPI0924536A2

BRPI0924536A2 - Método para produzir uma célula transgênica com teor de ácido gama-aminobutírico (gaba) aumentado, para aumentar o rendimento, molécula de ácido nucleico isolada, construção de ácido nucleico, vetor, célula hospedeira, processo para produzir um polipeptídeo, polipeptídeo, anticorpo, e, núcleo de célula, célula, núcleo de célula vegetal, célula vegetal, tecido vegetal, material de propagação, pólen, progênie, material coletado ou uma planta

Info

Publication number: BRPI0924536A2
Application number: BRPI0924536-7A
Authority: BR
Inventors: Astrid Blau; Volker Haake; Janneke Hendriks; Michael Manfred Herold; Beate Kamlage; Gunnar Plesch; Piotr Puzio; Florian Schauwecker; Hardy Schön; Oliver Thimm; Birgit Wendel
Original assignee: Basf Plant Science Gmbh
Priority date: 2008-10-23
Filing date: 2009-10-23
Publication date: 2015-08-11
Also published as: WO2010046471A3; AU2009306369A1; US20150291971A1; EP2350287A2; BRPI0919684A2; WO2010046471A2; CN104745624A; MX2011004269A; AR073969A1; US20110252509A1; DE112009002342T5; CN102203262A; CA2738105A1

Abstract

Método para produzir uma célula transgênica com teor de ácido gama-aminobutírico (gaba) aumentado, para aumentar o rendimento, molécula de ácido nucleico isolada, construção de ácido nucleico, vetor, célula hospedeira, processo para produzir um polipeptídeo, polipeptídeo, anticorpo, e, núcleo de célula, célula, núcleo de célula vegetal, célula vegetal, tecido vegetal, material de propagação, pólen, progênie, material coletado ou uma planta. Em geral, esta invenção diz respeito a um método para a produção de uma célula transgénica com teor de ácido gama-aminobutfrico aumentado (gaba) em comparação com uma célula do tipo selvagem não transformada correspondente.

Description

“MÉTODO PARA PRODUZIR UMA CÉLULA TRANSGÊNICA COM TEOR DE ÁCIDO GAMA-AMINOBUTÍRICO (GABA) AUMENTADO, PARA AUMENTAR O RENDIMENTO, MOLÉCULA DE ÁCIDO NUCLEICO ISOLADA, CONSTRUÇÃO DE ÁCIDO NUCLEICO, VETOR, CÉLULA HOSPEDEIRA, PROCESSO PARA PRODUZIR UM POLIPEPTÍDEO, POLIPEPTÍDEO, ANTICORPO, E, NÚCLEO DE CÉLULA, CÉLULA, NÚCLEO DE CÉLULA VEGETAL, CÉLULA VEGETAL, TECIDO VEGETAL, MATERIAL DE PROPAGAÇÃO, PÓLEN, PROGÊNIE, MATERIAL COLETADO OU UMA PLANTA” “Dividido do PI0919684-6, depositado em 23/10/2009” Esta invenção, em geral, diz respeito a um método para a produção de uma célula transgênica com teor de ácido gama-aminobutírico (GABA) aumentado em comparação com uma célula do tipo selvagem não transformada correspondente.

Em particular, esta invenção diz respeito a células vegetais e plantas com teor de ácido gama-aminobutírico (GABA) aumentado em comparação com um tipo selvagem não transformado correspondente. A invenção também trata de métodos de produção e avaliação e geração de tais células vegetais ou plantas. O ácido gama-aminobutírico é usado para intensificar c desenvolvimento de plantas especificadas, evitar o desenvolvimento de boloi pulveralento em uvas e suprime certas outras doenças vegetais. Serei humanos e animais nonnalmente ingerem ou metabolizam o ácido gama-aminobutírico em quantidades variáveis. O ácido gama-aminobutírico fo registrado (licenciado para venda) como desenvolvimento que intensifica c ingrediente ativo pesticida em 1998. O ácido gama-aminobutírico é um sina importante que ajuda a regular a disponibilidade mineral em plantas. O: minerais suportam os caminhos bioquímicos que controlam c desenvolvimento e a produção bem como os caminhos que direcionam í resposta da planta a uma variedade de tensões bióticas e abióticas. As necessidades minerais são especialmente altas durante períodos de tensão em certos estágios do desenvolvimento da planta. Os níveis de ácido garna-aminobutírico em plantas aumentam naturalmente nestes períodos. O ácido gama-aminobutírico (GABA), um aminoácido que não de proteína, é frequentemente acumulado em plantas seguindo os estímulos ambientais que também pode causar a produção de etileno. O GABA exógeno causa um aumento de até 14 vezes na taxa de produção de etileno após cerca de 12 horas. O GABA causa aumentos no acúmulo de mRNA de ACC sintase, níveis de ACC, níveis de mRNA de ACC oxidase e atividade de ACC oxidase. Os papéis possíveis de GABA como um transdutoi de sinal são sugeridos, ver Plant Physiol.l 15(1):129-35(1997). Ácido gama-aminobutírico (GABA), um aminoácido que nãc de proteína de quatro carbonos, é um componente significante livre do grupe de aminoácido na maioria dos organismos procarióticos e eucarióticos. Err plantas, a tensão inicia um. caminho de transdução de sinal, em que o Ca2^ citosólico aumentado ativa a atividade de glutamato descarboxilase dependente de Ca2+/calmodulina e síntese de GABA. Os níveis de H+ e dc substrato elevados também pode estimular a atividade de descarboxilase. C acúmulo de GABA provavelmente é mediado primariamente pela glutamatc descarboxilase. Evidência experimental suporta o envolvimento da síntese d< GABA na regulação do pH, armazenamento de nitrogênio, desenvolvimento < defesa de planta, bem como um osmólito compatível e um caminhe alternativo para a utilização de glutamato, ver Trends Plant Sei. 4(11):446 452(1999). O acúmulo de GABA rápido em resposta ao ferimento pod< desempenhar um papel na defesa vegetal contra insetos (Ramputh and Brown Plant Physiol. 111(1996): 1349-1352). O desenvolvimento de gam aminobutirato (GABA) como um agente de controle potencial na planta - sistemas de praga de invertebrado foram revistos em Shelp et al., Canadien Journal of Botany (2003) 81, 11, 1045-1048. Os autores descrevem que as evidências disponíveis indicam que o acúmulo de GABA em plantas em resposta à tensões bióticas e abióticas é mediado pela ativação de glutamato descarboxilase. Mais pesquisa aplicada, com base no fato que o GABA atua como um neurotransmissor inibidor em pragas de invertebrados, indica que o GABA ingerido interrompe o funcionamento nervoso e causa dano às larvas enroladoras de folha de faixa oblíqua e marcha ou herbivoria. pelo verme do broto do tabaco e as larvas enroladoras de folha de faixa oblíqua estimulam o acúmulo de GABA na soja e no tabaco, respectivamente. Além disso, os níveis elevados de GABA endógeno em tabaco geneticamente projetados detêm a alimentação pela larva do verme do broto do tabaco e infestação pelo nematodeo do no da raiz do norte. Portanto, o autor concluiu que as espécies de lavoura geneticamente modificadas tendo potencial de produção de GABA alto podem ser uma estratégia alternativa aos pesticidas químicos para. o controle de pragas de invertebrados.

Durante a reprodução de angiosperma, os grãos de pólen formam um tubo que navega através dos tecidos femininos ao micrópilo, que liberam esperma ao óvulo. In vitro, o GABA estimula o desenvolvimento dc tubo de pólen.

Muito do trabalho recente no GABA em plantas fo: concentrado em seu papel metabólico (Fait et al., Trends in Plant Sei., Vol 13, Nr. 1, pp 14-19, 2007) e em papéis de tensão/associados com praga e de sinalização (Bouche et al., Trends in Plant Sei., Vol. 9, Nr. 3, pp 110-115 2004). O acúmulo de GABA em tecidos vegetais e fluidos dí transporte são respostas a muitas tensões abióticas (Allan et al., J Exp Bot Vol. 59, No. 9, pp. 2555-2564, 2008). Beuve et al. (in PCE, 27, 1035-1046 2004) observou que o influxo de nitrato e de GABA foram positivament* correlacionados em experimentos de curto e longo prazo e que o GABA exógeno às raízes induziu um aumento significante de expressão de mRNA de RnNrt2 (transportador de nitrato).

Um outro método foi o uso de GABA para o estímulo do desenvolvimento vegetal pela aplicação de GABA à folhagem, caules e/ou raízes de plantas e uma solução de GABA de 1 a 5000 ppm, preferivelmente junto com uma fonte de carbono facilmente metabolizada (ácidos orgânicos, aminoácidos, carboídratos simples e misturas de aminoácidos ácidos orgânicos e carboídratos simples).

Embora o papel de GABA na célula ainda não seja entendido e os mecanismos de ação ainda não esclarecidos, devido a estes papéis fisiológicos e potencial agrobiotecnológico de GABA, existe uma necessidade para identificar genes de enzimas e outras proteínas envolvidas nc metabolismo de GABA.

Especialmente, existe uma necessidade para gerar linhas de plantas mutantes ou transgênicas com as quais modifica-se o teor de GABA nas plantas a fim de intensificar características de rendimento de planta.

Consequentemente, em uma primeira forma de realização, £ invenção diz respeito a um método para a produção de uma célula transgênicf com teor de ácido gama-aminobutírico (GABA) aumentado em comparação com uma célula do tipo selvagem não transformada correspondente pele aumento ou geração de uma ou mais atividades selecionadas do grupo qu« consiste de: proteína ribossômica 60S, Proteína permease de transportado ABC, acetiltransferase, proteína carreadora de acila, proteína At4g32480 proteína At5gl6650, proteína de ligação de ATP, proteína relacionada con autofagia, fator de resposta de auxina, fator de transcrição de auxina, proteín; bl003, proteína bl522, proteína b2739, proteína b3646, proteína B4025 permease de aminoácido de cadeia ramificada, proteína cinase dependente d cálcio, subunidade de citocromo c oxidase VIII, fator de alongamento Tc Proteína de captura de fator, fumarilacetoacetato hidrolase, geranilgeranil piro fosfato siníase, glicose desidrogenase, glicosil transferase, proteína de família induzida por harpina, homocitrato sintase, hidrolase, isocorismato sintase, Proteína transportadora do tipo MFS, beta-ceto-redutase microssômica, poligalacturonase, proteína íbsfatase, piruvato cinase, Subunidade de translocase de proteína independente de Sec, serina protease, tiorredoxina, proteína da família de tiorredoxina, regulador transcripcional, monooxigena.se de biossíntese de ubiquinona, e proteína YHR213W.

Consequentemente, em uma forma de realização, o método de acordo com a invenção diz respeito a um método, que compreende: fornecer uma célula ou organismo não humanos, um microorganismo, um animal não humano, tecido animal ou célula animal, preferivelmente, uma célula vegetal, um tecido vegetal, uma planta e aumentar ou gerar uma ou mais atividades selecionadas dc grupo que consiste de: proteína ribossômica 60S, Proteína permease de transportador ABC, acetiltransferase, proteína carreadora de acila, proteím At4g32480, proteína At5g 16650, proteína de ligação de ATP, proteína relacionada com autofagia, fator de resposta de auxina, fator de transcrição de auxina, proteína b!003, proteína bl522, proteína b2739, proteína b3646 proteína B4029, permease de aminoácido de cadeia ramificada, proteím cinase dependente de cálcio, subunidade de citocromo c oxidase VIII, fator de alongamento Tu, Proteína de captura de fator, fumarilacetoacetato hidrolase geranilgeranil pirofosfato sintase, glicose desidrogenase, glicosil transferase proteína de família induzida por harpina, homocitrato sintase, hidrolase isocorismato sintase, Proteína transportadora do tipo MFS, beta-ceto-redutas< microssômica, poligalacturonase, proteína fosfatase, piruvato cinase Subunidade de translocase de proteína independente de Sec, serina protease tiorredoxina, proteína da família de tiorredoxina, regulador transcripcional monooxigenase de biossíntese de ubiquinona, e proteína YHR213W., po exemplo, que confere um aumento de GABA no dito organismo e desenvolver a dita célula ou organismo não humano, um microorganismo, um animal não humano, tecido animal ou célula animal, preferivelmente uma célula vegetal, um tecido vegetal, uma planta sob condições que permitam a produção do teor de GABA aumentado e opcionalmente o GABA sintetizado pelo organismo é recuperado ou isolado.

Em uma outra forma de realização, a invenção fornece um método para a produção de uma célula transgênica com teor de ácido gama-aminobutírico (GABA) aumentado em comparação com uma célula do tipo selvagem não transformada correspondente que compreende pelo menos uma das etapas selecionadas do grupo que consiste de: (i) aumentar ou gerar a atividade de um polipeptídeo que compreende um polipeptídeo, uma sequência de consenso ou pelo menos um motivo de polipeptídeo como descrito na coluna 5 ou 7 da tabela II ou da tabela IV, respectivamente; (ií) aumentar ou gerar a atividade de um produto de expressãc de uma molécula de ácido nucleico que compreende um polinucleotídeo comc descrito na coluna 5 ou 7 da tabela I c (iii) aumentar ou gerar a atividade de um equivalente funciona de (i) ou (ii).

Em uma outra forma de realização, a invenção fornece uu método para a produção de uma célula transgênica com teor de ácido gama· aminobutíríco (GABA) aumentado em comparação com uma célula do tipc selvagem não transformada correspondente em que a expressão de pele menos uma molécula de ácido nucleico que compreende uma molécula de ácido nucleico selecionadas do grupo que consiste de: a) uma molécula de ácido nucleico que codifica o polipeptídet mostrado na coluna 5 ou 7 da tabela II; b) uma molécula de ácido nucleico mostrada na coluna 5 ou 1 da tabela I; c) uma molécula de ácido nucleico, que, como um resultado da degeneração do código genético, pode ser derivada de uma sequência de polipeptídeo descrita na coluna 5 ou 7 da tabela II e confere um teor de GABA aumentado em comparação com um célula vegetal do tipo selvagem não transformada correspondente, uma planta ou uma parte da mesma; d) uma molécula de ácido nucleico tendo pelo menos 30 % de identidade com a sequência de molécula de ácido nucleico de um polinucleotídeo que compreende uma molécula de ácido nucleico mostrada na coluna 5 ou 7 da tabela I e confere um teor de GABA aumentado em comparação com um célula vegetal do tipo selvagem não transformada correspondente, uma planta ou uma parte da mesma; e) uma molécula de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo tendo pelo menos 30 % de identidade com a sequência de aminoácido do polipeptídeo codificado pela molécula de ácido nucleico de (a} a (c) e tendo a atividade representada por uma molécula de ácido nucleico que compreende um polinucleotídeo como descrito na coluna 5 da tabela I e confere um teor de GABA aumentado em comparação com um célula vegeta do tipo selvagem não transformada correspondente, uma planta ou parte da mesma; f) molécula de ácido nucleico que hibridiza-se com uma molécula de ácido nucleico de (a) a (c) sob condições de hibridízaçãc estringentes e confere um teor de GABA aumentado em comparação com uii célula vegetal do tipo selvagem não transformada correspondente, uma planta ou parte da mesma; g) uma molécula de ácido nucleico que codifica un polipeptídeo que pode ser isolado com o auxílio de anticoipos monoclonais < policlonais feitos contra um polipeptídeo codificado por uma das molécula: de ácido nucíeico de (a) a (e) e tendo a atividade representada pela molécula de ácido nucíeico que compreende um polinucleotídeo como descrito na coluna 5 da tabela I; h) uma molécula de ácido nucíeico que codifica um polipeptídeo que compreende a sequência de consenso ou um ou mais motivos de polipeptídeo como mostrado na coluna 7 da tabela IV e preferivelmente tendo a atividade representada por uma molécula de ácido nucíeico que compreende um polinucleotídeo como descrito na coluna 5 da tabela II ou TV; i) uma molécula de ácido nucíeico que codifica um polipeptídeo tendo a atividade representada por uma proteína como descrito na coluna 5 da tabela II e confere um teor de GABA aumentado em comparação com um célula vegetal do tipo selvagem não transformada correspondente, uma planta ou parte da mesma; j) molécula de ácido nucíeico que compreende um polinucleotídeo, que é obtido pela amplificação de uma biblioteca de cDNA ou uma biblioteca genômica usando-se os iniciadores na coluna 7 da tabela III e preferivelmente tendo a atividade representada por uma molécula de ácido nucíeico que compreende um polinucleotídeo como descrito na coluna 5 da tabela II ou IV; e k) uma molécula de ácido nucíeico que é obtenível pela avaliação de uma biblioteca de ácido nucíeico adequada sob condições de hibridização estringentes com uma sonda que compreende uma sequência complementar de uma molécula de ácido nucíeico de (a) ou (b) ou com um fragmento deste, tendo pelo menos 15 nt, preferivelmente 20 nt, 30 nt, 50 nt, 100 nt, 200 nt ou 500 nt de uma molécula de ácido nucíeico complementar g uma sequência de molécula de ácido nucíeico caracterizada em (a) a (e) e que codifica um polipeptídeo tendo a atividade representada por uma proteína que compreende um polipepíídeo como descrito na coluna 5 da tabela II; é aumentado ou gerado.

Em uma outra forma de realização, a invenção fornece um método para a produção de uma célula transgênica com teor de ácido garaa-aminobutírico (GABA) aumentado em comparação com uma célula do tipo selvagem não transformada correspondente, em que a célula transgênica é uma célula vegetal, uma planta ou uma parte da mesma com teor de ácido gama-aminobutírico (GABA) aumentado em comparação com um tipo selvagem não transformado correspondente.

Em uma outra forma de realização, a invenção fornece um método para a produção de uma célula transgênica com teor de ácido gama-aminobutírico (GABA) aumentado em comparação com uma célula do tipo selvagem não transformada correspondente em que a célula vegetal transgênica, uma planta ou uma parte da mesma é derivada de uma plante monocotiledônea, uma planta dicotiledônea ou uma planta gimnosperma.

Em uma outra forma de realização, a invenção fornece uir método para a produção de uma célula transgênica com teor de ácido gama-aminobutírico (GABA) aumentado em comparação com uma célula do tipc selvagem não transformada correspondente em que a planta transgênica c selecionada do grupo que consiste de milho, trigo, centeio, aveia, triticale arroz, cevada, soja, amendoim, algodão, nabo de semente oleosa, incluindt canola e nabo de semente oleosa do inverno, milho, mandioca, pimenta girassol, linho, borragem, cártamo, linhaça, prímula, semente de colza, nabc silvestre, tagetes, plantas solanáceas, batata, tabaco, beringela, tomate espécies Vicia, ervilha, alfafa, café, cacau, chá, espécies Salix, palma oleosa coco, grama perene, lavouras de forragem e Arabidopsis thaliana.

Em uma outra forma de realização, a invenção fornece um; molécula de ácido nucleico isolada que compreende uma molécula de ácid< nucleico selecionadas do grupo que consiste de: a. uma molécula de ácido nucleico que codifica o polípeptídeo mostrado na coluna 5 ou 7 da tabela II B; b. uma molécula de ácido nucleico mostrada na coluna 5 ou 7 da tabela I B; c. uma molécula de ácido nucleico, que, como um resultado da degeneração do código genético, pode ser derivada de uma sequência de polípeptídeo descrita na coluna 5 ou 7 da tabela II e confere um teor de GABA aumentado em comparação com um célula vegetal do tipo selvagem não transformada correspondente, uma planta ou uma parte da mesma; d. uma molécula de ácido nucleico tendo pelo menos 30 % de identidade com a sequência de molécula de ácido nucleico de um polinucleotídeo que compreende uma molécula de ácido nucleico mostrada na coluna 5 ou 7 da tabela I e confere um teor de GABA aumentado em comparação com. um célula vegetal do tipo selvagem não transformada correspondente, uma planta ou uma parte da mesma; e. uma molécula de ácido nucleico que codifica urr polípeptídeo tendo pelo menos 30 % de identidade com a sequência dc aminoácido do polípeptídeo codificado pela molécula de ácido nucleico de (a" a (c) e tendo a atividade representada por uma molécula de ácido nucleico que compreende um polinucleotídeo como descrito na coluna 5 da tabela I t confere um teor de GABA aumentado em comparação com um célula vegeta do tipo selvagem não transformada correspondente, uma planta ou parte &< mesma; f. molécula de ácido nucleico que hibridiza-se com utní molécula de ácido nucleico de (a) a (c) sob condições de hibridizaçãc estringentes and confers teor de GABA aumentado em comparação com un célula vegetal do tipo selvagem não transformada correspondente, uma plant; ou parte da mesma; g. uma molécula de ácido nucleico que codifica un polipeptídeo que pode ser isolado com o auxílio de anticorpos monoclonais e policlonais feitos contra um polipeptídeo codificado por uma das moléculas de ácido nucleico de (a) a (e) e tendo a atividade representada pela molécula de ácido nucleico que compreende um polinucleotídeo como descrito na coluna 5 da tabela I; h. uma molécula de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo que compreende a sequência de consenso ou um ou mais motivos de polipeptídeo como mostrado na coluna 7 da tabela IV e preferivelmente tendo a atividade representada por uma molécula de ácido nucleico que compreende um polinucleotídeo como descrito na coluna 5 da tabela II ou IV; i. uma molécula de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo tendo a atividade representada por uma proteína como descrito na coluna 5 da tabela II e confere um teor de GABA aumentado em comparação com um célula vegetal do tipo selvagem não transformada correspondente, uma planta ou parte da mesma; j. molécula de ácido nucleico que compreende um polinucleotídeo, que é obtido pela amplificação de uma biblioteca de cDNA ou uma biblioteca genômica usando-se os iniciadores na coluna 7 da tabela III que não inicia em sua extremidade 5' com os nucleotídeos ATA e preferivelmente tendo a atividade representada por uma molécula de ácidc nucleico que compreende um polinucleotídeo como descrito na coluna 5 de tabela II ou IV; e k. uma molécula de ácido nucleico que é obtenível peb avaliação de uma biblioteca de ácido nucleico adequada sob condições dí hibridização estringentes com uma sonda que compreende uma sequênck complementar de uma molécula de ácido nucleico de (a) ou (b) ou com uh fragmento deste, tendo pelo menos 15 nt, preferivelmente 20 nt, 30 nt, 50 nt 100 nt, 200 nt ou 500 nt de uma molécula de ácido nuclelco complementar a uma sequência de molécula de ácido nucleico caracterizada em (a) a (e) e que codifica um polipeptídeo tendo a atividade representada por uma proteína que compreende um polipeptídeo como descrito na coluna 5 da tabela II. ;

Em uma outra forma de realização, a invenção fornece uma molécula de ácido nucleico, desse modo a molécula de ácido nucleico de acordo com (a) a (k) é pelo menos um ou mais nucleotídeos diferentes da sequência descrita na coluna 5 ou 7 da tabela I A e preferivelmente codifica uma proteína que difere pelo menos em um ou mais aminoácidos das sequências de proteína descrita na coluna 5 ou 7 da tabela II A.

Em uma outra forma de realização, a invenção fornece uma construção de ácido nucleico que confere a expressão da molécula de ácido nucleico descrita acima, que compreende um ou mais elementos reguladores.

Era uma outra forma de realização, a invenção fornece um vetor que compreende a dita molécula de ácido nucleico ou o dito ácidc nucleico.

Em uma outra forma de realização, a invenção fornece um:: célula hospedeira, que foi transformada estável ou transitoriamente com o dite vetor, a dita molécula de ácido nucleico ou o dito ácido nucleico construct t que mostra devido à transformação um teor de ácido gama-aminobutíricc aumentado (GABA) em comparação com um tipo selvagem não transformade correspondente.

Em uma outra forma de realização, a invenção fornece un processo para produzir um polipeptídeo, em que o polipeptídeo é expressadí no dito núcleo hospedeiro ou célula hospedeira como mencionado acima.

Em uma outra forma de realização, a invenção fornece un polipeptídeo produzido pelo processo como mencionado acima ou codificad* por uma molécula de ácido nucleico como mencionado acima desse modo < polipeptídeo distingue-se da sequência como mostrado na tabela II A por un ou mais aminoácidos Em uma outra forma de realização, a invenção fornece um anticoipo, que liga-se especificamente ao polipeptídeo produzido pelo processo como mencionado acima ou codificado por uma molécula de ácido nucleico como mencionado acima desse modo o polipeptídeo distingue-se da sequência como mostrado na tabela II A por um ou mais aminoácidos.

Em uma outra forma de realização, a invenção fornece um núcleo de célula, célula, núcleo de célula vegetal, tecido vegetal de célula vegetal, material de propagação, pólen, progênie, material coletado ou uma planta que compreende uma molécula de ácido nucleico como descrito acima ou o núcleo hospedeiro ou a célula hospedeira como descrito acima.

Em uma outra forma de realização, a invenção fornece um núcleo de célula de planta transgênica, célula de planta transgênica, planta transgênica ou parte da mesma como descrito acima derivada de uma planta monocotiledônea ou uma planta dicotiledônea.

Em uma outra forma de realização, a invenção fornece um núcleo de célula vegetal transgênica, célula de planta transgênica, planta transgênica ou parte da mesma como mencionado acima, em que a planta correspondente é selecionada do grupo que consiste de milho, trigo, centeio aveia, triticale, arroz, cevada, soja, amendoim, algodão, nabo de semente oleosa, incluindo canola e nabo de semente oleosa do inverno, mandioca pimenta, girassol, linho, borragem, cártamo, linhaça, prímula, semente de colza, nabo silvestre, tagetes, plantas solanáceas que compreendem batata tabaco, beringeia, tomate; espécies Vicia, ervilha, alfafa, café, cacau, chá espécies Salix, palma oleosa, coco, grama perene, lavouras de forragem c Arabidopsis thaliana.

Preferivelmente um núcleo de célula vegetal transgênica célula de planta transgênica, planta transgênica ou parte da mesma < selecionada do grupo que consiste de milho, soja, nabo de semente oleos; (incluindo canela e nabo de semente oleosa do inverno), algodão, trigo e arroz.

Em uma outra forma de realização, a invenção fornece uma planta transgênica compreende um ou mais de núcleos celulares vegetais ou células vegetais, progênie, semente ou pólen ou produzido por uma planta * transgênica como mencionado acima.

Em uma outra forma de realização, a invenção fornece uma planta transgênica, núcleo de célula de planta transgênica, célula de planta transgênica, planta compreende um ou mais de tais núcleos de célula de planta transgênica ou células vegetais, progênie, semente ou pólen derivade de ou produzido por uma planta transgênica como descrito acima, em que a dita planta transgênica, núcleo de célula de planta transgênica, célula de planta transgênica, planta compreende um ou mais de tais núcleos de célula de planta transgênica ou células vegetais, progênie, semente ou pólen e geneticamente homozigota para um transgene que confere rendimente aumentado em comparação com um célula vegetal do tipo selvagem nãc transformada correspondente, a planta transgênica ou uma parte deste.

Em uma outra forma de realização, a invenção fornece un processo para a identificação de um composto que confere um teor de ácidc gama-aminobutírico aumentado (GABA) em comparação com um tipe selvagem não transformado correspondente, que compreende as etapas: a) cultivar uma célula vegetal; uma planta ou uma parte d: mesma mantendo uma planta que expressa o polipeptídeo da invenção, qu< confere um rendimento aumentado sob condições de tensão em comparaçãc com um célula vegetal do tipo selvagem não transformada correspondente uma planta ou parte da mesma; uma planta do tipo selvagem nã< transfonnada ou uma parte da mesma e um sistema de leitura capaz d interagir com o polipeptídeo sob condições adequadas que permitam interação do polipeptídeo com o dito sistema de leitura na presença de un composto ου uma amostra que compreende uma pluralidade dos compostos e capaz de fornecer um sinal detectável em resposta à ligação de um composto ao dito polipeptídeo sob condições que permitam a expressão do dito sistema de leitura e do dito polipeptídeo que confere um rendimento aumentado sob condições de tensão em comparação com um célula vegetal do tipo selvagem não transformada correspondente, uma planta ou parte da mesma; uma planta do tipo selvagem não transformada ou uma parte da mesma ; b) identificar se o composto é um agonista eficaz pela detecção da presença ou ausência ou aumento de um sinal produzido pelo dito sistema de leitura.

Em uma outra forma de realização, a invenção fornece um método para a produção de uma composição agrícola que compreende as etapas do método descrito acima e formulação do composto identificadc acima em uma forma aceitável para uma aplicação 11a agricultura.

Em uma outra forma de realização, a invenção fornece um< composição que compreende uma molécula de ácido nucleico da invenção, c polipeptídeo da invenção, a dita construção de ácido nucleico, o dito vetor, c composto mencionado acima, o anticorpo da invenção e, opcionalmente un carreador agricolamente aceitável.

Em uma outra forma de realização, a invenção fornece un polipeptídeo isolado como descrito na tabela II, preferivelmente tabela II I que é selecionado de Arabidopsis thaliana, Azotobacter vinelandii, Brassic; napus, Escherichia coli, Physcomitrella patens, Saccharomyces cerevisiae Synechocystis sp. e/ou Thermus thermophilus .

Em uma outra forma de realização, a invenção fornece o us< de uma molécula de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo com atividade selecionada do grupo que consiste de proteína ribossômica 60S Proteína permease de transportador ABC, acetiltransferase, proteín carreadora de acila, proteína At4g32480, proteína At5gl6650, proteína d ligação de ATP, proteína relacionada com autofagia, fator de resposta de auxina, fator de transcrição de auxlna, proteína bl003, proteína Μ522, proteína b2739, proteína b3646, proteína B4029, peraiease de amínoácido de cadeia ramificada, proteína cinase dependente de cálcio, subunidade de citocromo c oxidase VIII, fator de alongamento Tu, Proteína de captura de fator, fumarilacetoacetato hidrolase, geranilgeranil pirofosfato sintase, glicose desidrogenase, glicosil transferase, proteína de família induzida por harpina, homocitrato sintase, hidrolase, isocorismato sintase, Proteína transportadora do tipo MFS, beta-ceto-redutase microssômica, poligalacturonase, proteína fosfatase, pimvato cinase, Subunidade de translocase de proteína independente de Sec, serina protease, tiorredoxina, proteína da família de tiorredoxina, regulador transcripcional, monooxigenase de biossíntese de ubiquinona, e proteína YHR213W para preparar uma célula, preferivelmente célula vegetal com teor de ácido gama-aminobutírico (GABA) aumentado em comparação com um tipo selvagem não transformado correspondente.

Em uma outra forma de realização, a invenção fornece o use de uma molécula de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo com ε atividade selecionada do grupo que consiste de proteína ribossômíca 60S Proteína permease de transportador ABC, acetiltransferase, proteím carreadora de acila, proteína At4g32480, proteína At5gl6650, proteína de ligação de ATP, proteína relacionada com autofagia, fator de resposta de auxina, fator de transcrição de auxina, proteína bl003, proteína Μ522 proteína b2739, proteína b3646, proteína B4029, permease de amínoácido de cadeia ramificada, proteína cinase dependente de cálcio, subunidade de citocromo c oxidase VIII, fator de alongamento Tu, Proteína de captura d< fator, fumarilacetoacetato hidrolase, geranilgeranil pirofosfato sintase, glicos< desidrogenase, glicosil transferase, proteína de família induzida por harpina homocitrato sintase, hidrolase, isocorismato sintase, Proteína transportador do tipo MFS, beta-ceto-redutase microssômica, poligalacturonase, proteín fosfatase, piruvato cinase, Subunidade de translocase de proteína independente de Sec, serina protease, tiorrcdoxina, proteína da família de tiorredoxina, regulador transcripcional, monooxigenase de biossíntese de ubiquinona, e proteína YHR213W como marcadores para a seleção de plants ou células vegetais com teor de ácido gama-aminobutírico (GABA) aumentado em comparação com um tipo selvagem não transformado correspondente.

Em uma outra forma de realização o método de acordo com a invenção é usado para produzir uma célula de planta transgênica, uma planta ou uma parte da. mesma com teor de ácido gama-aminobutírico (GABA) aumentado em comparação com um tipo selvagem não transformado correspondente que é derivado de uma planta monocotiledônea, uma planta dicotiledônea ou uma planta gímnosperma. A presente invenção fornece métodos para a produção de células de plantas transgênicas ou plantas com teor de ácido gama- aminobutírico (GABA) aumentado em comparação com um tipo selvagem não transformado correspondente e que pode mostrar tolerância aumentada à tensão ambiental e/ou rendimento aumentado e/ou produção de biomassa em comparação com uma célula vegetal do tipo selvagem ou de partida correspondente (não transformada) correspondente pelo aumento ou geraçãc de uma ou mais das ditas atividades mencionadas acima. A presente invenção fornece métodos para a produção de células de plantas transgênicas ou plantas com teor de ácido gama- aminobutírico (GABA) aumentado em comparação com um tipo selvagerr não transformado correspondente e com uma resistência à tensão abióticí aumentada em comparação com uma célula vegetal do tipo selvagem ou de partida correspondente (não transformada) correspondente pelo aumento oi geração de uma ou mais das ditas atividades mencionadas acima. A presente invenção fornece métodos para a produção de células de plantas transgênicas ou plantas com teor de ácido gama- aminobutírico (GABA) aumentado em comparação com um tipo selvagem não transformado correspondente e com um influxo de nitrato aumentado em comparação com uma célula vegetal do tipo selvagem ou de partida correspondente (não transformada) correspondente pelo aumento ou geração de uma ou mais das ditas atividades mencionadas acima. A presente invenção fornece métodos para a produção de células de plantas transgênicas ou plantas com teor de ácido gama- aminobutírico (GABA) aumentado em comparação com um tipo selvagem não transformado correspondente e com um desenvolvimento de planta aumentado em comparação com uma célula vegetal do tipo selvagem ou de partida correspondente (não transformada) correspondente pelo aumento ou geração de uma ou mais das ditas atividades mencionadas acima. O ácido gama-aminobutírico intensifica a absorção de nutrientes pelas raízes e folhas de modo que os níveis de nutrientes da planU sejam mais altos do que aqueles atingidos usando-se nutrientes apenas Quando as plantas são submetidas a tensão e a absorção de nutriente e limitada, o ácido gama-aminobutírico pode facilitar a utilização de nutriente desse modo intensificando-se o desenvolvimento durante a tensão e/ou sol condições de crescimento e de cultivo sub-ótimas de plantas.

Consequentemente, em uma forma de realização, a presente invenção fornece um método para a produção de uma planta com rendimentc aumentado em comparação com uma planta do tipo selvagem correspondente que compreende pelo menos a etapa seguinte: aumentar ou gerar uma ou mai; atividades selecionadas do grupo que consiste de proteína ribossômica 60S Proteína permease de transportador ABC, acetiltransferase, proteím carreadora de acila, proteína At4g32480, proteína At5gl6650, proteína de ligação de ΛΤΡ, proteína relacionada com autofagia, fator de resposta d< auxina, fator de transcrição de auxina, proteína b!003, proteína bl522 proteína b2739, proteína b3646, proteína B4029, permease de aminoácido de cadeia ramificada, proteína cinase dependente de cálcio, subumdade de citocromo c oxidase VIII, fator de alongamento Tu, Proteína de captura de fator, fumarilacetoacetato hidrolase, geramlgeranil pirofosfato sintase, glicose desidrogenase, glicosil transferase, proteína de família induzida por harpina, homocitrato sintase, hidrolase, isocorismato sintase, Proteína transportadora do tipo MFS, beta-ceto-redutase microssômica, poiigalacturonase, proteína fosfatase, piruvato cinase, Subumdade de translocase de proteína independente de Sec, serina protease, tiorredoxina, proteína da família de tiorredoxina, regulador transcripcional, monooxigenase de biossíntese de ubiquinona e proteína YHR213W. “Rendimento” como descrito aqui refere-se, em uma forma de realização, ao rendimento coletável de uma planta. O rendimento de uma planta pode depender da lavoura vegetal específica de interesse bem como sua aplicação pretendida (tal como produção de alimento, produção nutricional, produção de alimento processado, produção de biocombustível, biogás, ou álcool ou semelhante) de interesse em cada caso particular. Desta maneira, cm uma forma de realização, o rendimento é calculado como índice de coleta (expressado como uma razão do peso das partes coletáveis respectivas divididas pela bomassa total), o peso das partes coletáveis por área (acre, metro quadrado ou semelhante); e outros.

Preferivelmente, as características de rendimentc intensificadas ou melhoradas de uma planta descrita neste de acordo com coir a presente invenção podem ser atingidas na ausência ou presença d« condições de tensão. O significado de “rendimento” é, desta maneira principalmente dependente da lavoura de interesse e a aplicação pretendida < é entendido que a pessoa habilitada entenderá, em cada caso particular o que < entendido a partir das circunstâncias do relatório escritivo.

Para os propósitos do relatório descritivo da presente invenção, “rendimento” intensificado ou aumentado refere-se a um ou mais parâmetros de rendimento selecionados do grupo que consiste de rendimento de biomassa, rendimento de biomassa seca, rendimento de biomassa seca aérea, rendimento de biomassa seca do subsolo, rendimento de biomassa de peso fresco, rendimento de biomassa de peso fresco aéreo, rendimento de biomassa de peso fresco subterrâneo; rendimento intensificado de partes coletadas, peso seco ou fresco ou ambos, também aéreo ou subterrâneo ou ambos; rendimento intensificado de frutos de lavoura, peso seco ou fresco ou ambos, aéreo ou subterrâneo ou ambos e preferivelmente rendimento intensificado de sementes, peso seco ou fresco ou ambos, aéreo ou subterrâneo ou ambos. O termo “rendimento” como usado neste, em geral, refere-se a um produto mensurável de uma planta, particularmente uma lavoura. O rendimento e aumento no rendimento (em comparação corr uma planta de origem ou do tipo selvagem) podem, ser medidos de diversas maneiras. É entendido que uma pessoa habilitada será capaz de aplicar c significado correto em vista das formas de realização particulares, a lavoura particular relacionada e o propósito ou aplicação específicos.

Em uma forma de realização, um aumento no rendimentc refere-se ao rendimento de biomassa aumentado e/ou um rendimento d( semente aumentado.

Em uma forma de realização, “rendimento” refere-se e rendimento de biomassa, por exemplo, a rendimento de biomassa de pese seco e/ou rendimento de biomassa de peso fresco. Rendimento de biomassi refere-se às partes aéreas ou subterâneas de uma planta, dependendo da circunstâncias específicas (condições de teste, lavoura específica de interesse aplicação de interesse e outros). Em uma forma de realização, o rendiment< de biomassa refere-se As partes aéreas e subterrâneas. O rendimento d' biomassa pode ser calculado como peso fresco, peso seco ou uma bas ajustada por umidade. O rendimento da biomassa pode ser calculado em uma base vegetal ou em relação a uma área de superfície (por exemplo, rendimento de biomassa por acre/ metro quadrado/ou semelhante).

Em uma outra forma de realização, “rendimento” refere-se ao rendimento de semente que pode ser medido por um ou mais dos seguintes parâmetros: número de sementes ou número de sementes enchidas (por planta ou por área (acre/ metro quadrado/ou semelhante)); taxa de enchimento de semente (razão entre número de sementes enchidas e número total de sementes); número de flores por planta; biomassa de semente ou peso de sementes totais (por planta ou por área (acre/metro quadrado/ou semelhante); peso de semente milhar (TKW; extrapolado a partir do número de sementes enchidas contadas e seu peso total; um aumento em TKW pode ser causado por um tamanho de semente aumentado, um peso de semente aumentado, um tamanho de embrião aumentado e/ou um endosperma aumentado). Outros parâmetros que permitem medir o rendimento de semente também são conhecidos na técnica. O rendimento de semente em um peso seco ou em uma base de peso fresco ou tipicamente em uma base ajustada por umidade, poi exemplo, em 15,5 por cento de umidade. O dito rendimento aumentado de acordo com a presente invenção pode ser tipicamente atingido por intensificação ou promoção, eix comparação com uma planta de origem ou do tipo selvagem, uma ou niah características relacionadas com o rendimento a planta. Tais características relacionadas com o rendimento de uma planta, a melhora que resulta nc rendimento aumentado compreende, sem limitação, o aumento da capacidade de rendimento intrínseco de uma planta, eficiência de uso de nutriente melhorado e/ou tolerância à tensão aumentada.

Consequentemente, em uma forma de realização, í característica relacionada com o rendimento que confere um aumento de rendimento da planta é um aumento da capacidade de rendimento intrínsece de uma planta e podem ser, por exemplo, manifestados pcía melhora do rendimento de semente específico (intrínseco) (por exemplo, em termos de tamanho de semente/grão aumentado, número dc espigas aumentado, número de semente aumentado por espiga, melhora de enchimento de semente, melhora da composição de semente, melhoras de embrião e/ou endosperma ou semelhante); modificação e melhora de desenvolvimento inerente e mecanismos de desenvolvimento de uma planta (tal como altura da planta, taxa de desenvolvimento de planta, número de vagem, posição de vagem na planta, número de intemodos, incidência de quebra de vagem, eficiência de nodulação e fixação de nitrogênio, eficência de assimilação de carbono, melhora de vigor/vigor precoce de muda, eficência intensificada de germinação (sob condições com tensão ou sem tensão), melhora ηε arquitetura da planta, modificações do ciclo celular, modificações de fotossíntese, várias modificações de caminho de sinalização, modificação de regulação de transcrição, modificação de regulação de tradução, modificação de atividades de enzima e outros); e/ou semelhante.

Consequentemente, em. uma forma de realização, £ característica relacionada com o rendimento que confere um aumento dc rendimento da planta é uma melhora ou aumento de tolerância à tensão dc uma planta e pode ser, por exemplo, manifestado pela melhora ou aumento dc uma tolerância da planta contra tensão, particularmente tensão abiótica. Nc presente pedido, tensão abiótica refere-se, em geral, a condições ambientai: abióticas, uma planta é tipicamente confrontada com, incluindo condições qu< são tipicamente referidas como condições de “tensão abiótica” que incluem mas não limitado a, secura (tolerância à secura pode ser atingida como un resultado de eficiência de uso de água melhorada), calor, temperaturas baixa e condições de frio (tais como condições de frio e congelantes), salinidade tensão osmótica, tonalidade, densidade vegetal alta, tensão mecânica, tensãi oxidativa e outros.

Consequentemente, em uma forma de realização, o dito rendimento aumentado de acordo com a presente invenção pode ser tipicamente atingida pela intensificação ou melhora, em comparação corn uma planta de patida ou do tipo selvagem não transformada, uma ou mais características relacionadas com o rendimento de uma planta. Tais características relacionadas com o rendimento de uma planta que resulta no rendimento aumentado compreende, sem limitação, o aumento da capacidade de rendimento intrínseco de uma planta, eficiência de uso de nutriente melhorado e/ou tolerância à tensão aumentada, por exemplo, uma tolerância à secura aumentada e/ou tolerância à temperatura baixa.

Em uma forma de realização a resistência e/ou tolerância à tensão abiótica refere-se à resistência à tensão por água, especialmente sob condições de tensão transitória e abiótica repetitiva, preferivelmente secura cíclica.

Desta maneira, cm uma forma de realização da presente invenção, um rendimento de planta aumentado é mediado pelo aumento da “eficiência de uso de nutriente de uma planta”, por exemplo, pela melhora da eficiência do uso de nutrientes que inclui, mas não limita-se a, fósforo, potássio e nitrogênio.

Uma eficiência de uso de nutriente aumentado é, em uma forma de realização, uma absorção de nitrogênio intensificada, assimilação acúmulo ou utilização. Estes processos complexos são associados com £ absorção, translocação, assimilação e redistribuição de nitrogênio na planta.

Por exemplo, existe uma necessidade quanto a plantas que sãc capazes de uma absorção de nitrogênio mais eficiente de modo que meno: nitrogênio seja requerido para o desenvolvimento e, portanto resulta no níve melhorado de rendimento sob deficiência de nitrogênio ou condiçõe limitantes de nitrogênio. Além disso, rendimentos mais altos podem se obtidos com níveis comentes ou padrão de fornecimento ou absorção d nitrogênio.

Consequentemente, em uma forma de realização da presente invenção, o rendimento da planta é aumentado aumentando-se a absorção de nitrogênio de uma planta ou parte da mesma. Desta maneira, além disso é um objetivo deste invenção fornecer uma planta, que apresenta uma absorção de nitrogênio intensificada e/ou apresentam, sob condições de fornecimento de nitrogênio limitado, um rendimento aumentado, em comparação com uma planta do tipo selvagem correspondente.

Consequentemente, em uma forma de realização, a presente invenção diz respeito a um método para aumentar o rendimento, que compreende as seguintes etapas: (a) medir o teor de N no solo e (b) determinar se o teor de N no solo é ótimo ou subótimo para o desenvolvimento de uma planta de origem ou do tipo selvagem, poi exemplo, uma lavoura e (cl) desenvoler uma planta da invenção no dito solo, se o teoi de N for subótimo para o desenvolvimento da planta de origem ou do tipc selvagem planta de origem ou do tipo selvagem ou (c2) desenvolver uma planta da invenção no solo e comparar c rendimento com o rendimento de uma planta original ou do tipo selvagen padrão e selecionar e desenvolver a planta, que mostra o rendimento mai: alto, se o teor de N for ótimo para a planta de origem ou do tipo selvagem.

Em uma outra forma de realização da presente invenção, < rendimento é aumentado aumentando-se as tolerâncias à tensão da planta.

Em geral, o termo “tolerância aumentada à tensão” pode se definido como sobrevivência de planta e/ou produção de rendimento mai alto, sob condições de tensão em comparação com uma planta de do tip< selvagem ou de partida não transformada.

Durante seu ciclo de vida, uma planta é, em geral, confrontad com. uma diversidade de condições ambientais. Quaisquer tais condições, que podem, sob certas circunstâncias, ter um impacto no rendimento da planta, são referidos aqui como condição de “tensão”. As tensões ambientais podem ser, em geral, divididas em tensões bióticas e abióticas (ambientais). As condições de nutriente não favoráveis algumas vezes também são referidas como “tensão ambiental”. A presente invenção também considera soluções para este tipo de tensão ambiental, por exemplo, referindo-se à eficiência de uso de nutriente aumentado.

Em uma forma de realização preferida da presente invenção, o rendimento de planta é aumentado pelo aumento das tolerâncias de tensão abiótica de uma planta ou parte da mesma.

Para os propósitos do relatório descritivo da presente invenção. O termo “tolerância intensificada à tensão abiótica”, “resistência intensificadg à tensão ambiental abiótica”, “tolerância intensificada à tensão ambiental”, “adaptação melhorada à tensão ambiental” e outras variações e expressões similares em seu significado são usados de maneira íntercambeável e referem-se, sem limitação, a uma melhora na tolerância a uma ou mais tensões ambientais abióticas como descrito aqui e em comparação com uma planta de origem ou do tipo selvagem correspondente ou uma parte da mesma. O termo tolerância a tensões abióticas refere-se, por exemplo tolerância à temperatura baixa, tolerância à secura, tolerância ao calor tolerância à tensão por sal e outros. A tolerância à tensão em plantas como temperatura baixa tolerância de tensão por secura, calor e sal pode ter um tema comun importante para o desenvolvimento de planta, isto é, a disponibilidade d água. As plantas são tipicamente opostas durante seu ciclo de vida condições de teor de água ambiental reduzido. As estratégias de proteção sã' similares àquelas de tolerância ao frio.

Consequentemente, em uma forma de realização da present Invenção, a dia característica relacionada com o rendimento diz respeito a uma eficêncla de uso de água aumentada de uma planta da invenção e/ou uma tolerância aumentada às condições de secura de urna planta, da. Invenção.

Em uma forma de realização da presente invenção tensão por secura significa qualquer tensão convencional que leva a uma falta de água em plantas ou redução do fornecimento de às plantas, incluindo uma tensão secundária por temperatura baixa e/ou tensão por sal e/ou primária durante a secura ou calor, por exemplo, desecação etc.

De acordo com a presente invenção, em uma forma de realização, tolerância aumentada a condições de secura pode ser determinadr e quantificada de acordo com o seguinte método: As plantas transformadas são desenvolvidas individualmente em vasos em uma câmara de desenvolvimento (York Industriekãlte GmbH Mannheim, Germany). A germinação é induzida. No caso as plantas sãc Arabidopsis thaliana, as sementes semeadas são mantidas a 4o C, no escuro por 3 dias a fim de induzir a germinação. Subsequentemente, as condições sãc mudadas por 3 dias de temperatura 20° Cl 6o C clia.'noite com ciclo de 16/8 1 dia-noite a 150 pE/m2s. Subsequentemente, as plantas são desenvolvidas sol condições de desenvolvimento padrão. No caso, as plantas são Arabidopsi thaliana, as condições de desenvolvimento padrão são: fotoperíodo de 16 h d luz e 8 h de escuro, 20° C, umidade relativa de 60 % e uma densidade d fluxo de fótons de 200 μΕ. As plantas são desenvolvidas e cultivadas até esta desenvolverem folhas. No caso, as plantas são Arabidopsis thaliana estas sã irrigadas diariamente até estas terem aproximadamente 3 semanas de idade. ( começo naquele período de secura foi imposto pela retirada de água. Após ε plantas do tipo selvagem não transformadas apresentarem sintomas visuais d dano, a avaliação começa e as plantas são registradas quanto a sintomas d secura e produção de biomassa em comparação com plantas do tipo selvagei ou vizinhas por 5 a 6 dias em sucessão.

Em uma forma de realização, a resistência à secura, aumentada refere-se à resistência a ciclos de secura, significando períodos altemantes e secura e re-irrigação. A tensão repetitiva é aplicada às plantas sem levar à dessecação.

Na presente invenção, a tolerância intensificada à secura cíclica pode, por exemplo e preferivelmente, ser determinada de acordo com o seguinte método: As plantas transformadas são desenvolvidas em vasos em um câmara de desenvolvimento (por exemplo, York, Marmlieim, Germany). No caso as plantas são Arabidopsis thaliana, o solo é preparado como uma mistura 1:1 (v/v) de solo rico em nutriente (GS90, Tantau, Wansdorf, Germany) e areia de quartzo. Os vasos (6 cm de diâmetro) são preenchidos com esta mistura e colocados em bandejas. A água é adicionada às bandejas para deixar a mistura de solo absorver a quantidade apropriada de água dc procedimento de semeadura (dia 1) e subsequentemente, as sementes dc plantas de A. thaliana transgênicas e seus controles do tipo selvagem sãc semeadas em vasos. Então, a bandeja enchida é coberta com uma tampe transparente em uma câmara de desenvolvimento pré-esfriada (4o C a 5 o C) e escurecida. A estratificação é estabelecida por um período de 3 dias no escure de 4o C a 5o C ou, altemativamente por 4 dias no escuro a 4o C. A germinaçãc de sementes e o desenvolvimento é iniciado em uma condição de desenvolvimento de 20° C, 60 % de umidade relativa, 16 h de fotoperíodo t iluminação com luz fluorescente em 200 pmol/m2s. As coberturas sãc removidas de 7 a 8 após a semeadura. A seleção BASTA pode ser realizad; no dia 10 ou dia 11 (9 ou 10 dias após a semadura) pela pulverização do: vasos com mudas a partir da parte superior. No experimento padrão, um; solução de 0,07 % (v/v) de concentrado de BASTA (183 g/1 de glufosinato amônio) em água de torneira é pulverizado uma vez ou, altemativamente uma solução a 0,02 % (v/v) de BASTA é pulverizada três vezes. As plantas di controle do tipo selvagem são pulverizadas com água de torneira apenas (em vez de pulverização de BASTA dissolvido em água de torneira) mas são, de outra maneira, tradados de maneira idêntica. As plantas são individualizadas de 13 a 14 dias após a semeadura pela remoção do excesso de mudas e deixando uma muda no solo. Os eventos transgênicos e as plantas de controle do tipo selvagem são uniformemente distribuídas na câmara. O fornecimento de água por todo o experimento é limitado e as plantas são submetidas a ciclos de secura e re-irrigação. A irrigação é realizada no dia 1 (antes da semeadura), dia 14 ou dia 15, dia 21 ou dia 22 e, finalmente, dia 27 ou dia 28. Para medir a produção de biomassa, o peso fresco de planta é determinado um dia após a irrigação final (dia 28 ou dia 29) cortando-se os brotos e pesando-os. Além da pesagem, a informação fenotípica é adicionada no caso de plantas que diferem do controle do tipo selvagem. As plantas estão no estágio anterir ao florescimento e anterior ao desenvolvimento de inflorescêncía quando coletadas. Os valores significamos para a signiftcância estatística das mudanças de biomassa são calculados pele aplicação do teste t de ‘student’ (parâmetros: variação desigual de dme extremidades).

Consequentemente, em uma forma de realização da invenção a resistência ao frio aumentada manifesta-se e um aumento de biomassa d< planta transgêníca da invenção em comparação com um controle do tipc selvagem sob a condição de tensão de secura cíclica.

Consequentemente, em uma forma de realização, a presents invenção diz respeito a um método para aumentar o rendimento, qu< compreende as seguintes etapas: (a) determinar se o fornecimento de água na área para o plantã é ótimo ou sub-ótimo para o desenvolvimento de uma planta de origem ou d' tipo selvagem, por exemplo, uma lavoura e/ou determinação dos sintoma visuais de dano de plantas em desenvolvimento na área para o plantio e (bl) desenvolver a planta da invenção no dito solo, se o fornecimento de água for subótimo para o desenvolvimento de uma planta dc origem ou do tipo selvagem a ou sintomas visuais de secura puderem ser observados em um padrão, planta de origem ou do tipo selvagem que se desenvolve na área ou (b2) desenvolver uma planta da invenção no solo e comparar o rendimento com o rendimento de uma planta de origem ou do tipo selvagem padrão e selecionar e desenvolver a planta, que mostra o rendimento mais alto, se o fornecimento de água for ótimo para a planta de origem ou do tipo selvagem.

Os sintomas visuais de dano que começam de um ou de qualquer combinação de dois, três ou mais das seguintes características: definhamento amarelamento da folha c) perda de turgor, que resulta na queda das folhas ou ramos e flores, d) queda e/ou desprcendimento de folhas ou agulhas, e) as folhas são verdes mas folhas levemente anguladas n: direção do solo em comparação com os controles, f) lâminas das folhas começam a dobrar (ondular) para dentro, g) senescência prematura de folhas ou agulhas, h) perda de clorofila nas folhas ou agulhas e/ou amarelamento.

Em uma outra forma de realização da presente invenção, dit; característica relacionada com o rendimento de uma planta da invenção é um: tolerância aumentada a condições de calor da dita planta.

Em uma outra forma de realização da presente invenção, dit característica relacionada com o rendimento de uma planta da invenção é um tolerância à temperatura baixa aumentada da dita planta, por exemplo, qu compreende tolerância ao congelamento e/ou tolerância ao frio.

As temperaturas baixas influenciam em um excesso de processos biológicos. Estes retardam ou inibem quase todos os processos metabólicos e celulares. Á resposta das plantas à temperatura baixa é um determinante importante de sua faixa ecológica. O problema de cópia com temperaturas baixas é exarcebado pela necessidade de prolongar a estação de desenvolvimento além do verão curto encontrado em latitudes ou altitudes altas. A maioria das plantas envolveu estratégias adaptativas para a sua proteção contra temperaturas baixas. Em geral, a adaptação à temperatura baixa pode ser dividida à tolerância ao esfriamento e tolerância ao congelamento. A tolerância ao esfriamento é naturalmente encontrada em. espécies de zonas temperadas ou boreais e permite a sobrevivência e um desenvolvimento intensificado em temperaturas baixa mas não congelantes. As espécies de zonas tropicaus e subtropicais são sensíveis ao frio e frequentemente apresentam definhamento, clorose ou necrose. desenvolvimento diminuído e ainda morte em tempraturas em torno de 10o C durante um ou mais estágios de desenvolvimento. Consequentemente, “tolerância ao frio” melhorada ou intensificada ou variações deste refere-se. aqui, à adaptação melhorada à temperaturas baixas mas não congelantes ene tomo de 10° C, preferivelmente temperaturas entre 1 e 18° C, mais preferivelmente 4 a 14° C e mais preferido 8 a 12° C; a seguir denominadí “temperatura de esfriamento”. A tolerância ao congelamento permite a sobrevivêncií próximo a zero à temperaturas particularmente subzero. Acredita-se que iste seja promovido por um processo denominado aclimação ao frio que ocorr< em temperaturas baixas, mas não congelantes e fornece tolerância a< congelamento aumentada em temperaturas subzero. Além disso, a maioria da espécies de regiões temperadas têm ciclos de vida que são adaptados à mudanças sasonais de temperatura. Para aquelas plantas, as temperaturas baixas também podem desempenhar um papel Importante no desenvolvimento de planta através do processo de estratificação e vernalização. Torna-se óbvio que uma distinção de corte claro entre ou definição de tolerância ao esfriamento e tolerância ao congelamento é difícil e que os processos podem ser sobrepostos ou interconectados. A “tolerância ao congelamento” melhorada ou intensificada ou variações destes refere-se aqui à adaptação melhorada à temperaturas próximas ou abaixo de zero, isto é, preferivelmente temperaturas abaixo de 4o C, mais preferivelmente abaixo de 3 ou 2o C e particularmente preferido em ou abaixo de 0 (zero) ° C ou abaixo de -4o C ou ainda temperaturas extremamente baixas abaixo de -10° C ou mais baixas; a seguir, denominada “temperatura congelante”. “Adaptação melhorada” à tensão ambiental como, poi exemplo, temperaturas congelantes e/ou esfriamento refere-se aqui, a um desempenho de planta melhorado que resulta em um rendimento aumentado partícularmente com respeito a uma ou mais das características relacionadas como rendimento como definido em mais detalhes acima.

Consequentemente, a planta da invenção pode em uma fonru de realização apresentar um desenvolvimento de muda precoce após £ exposição a temperaturas baixas em comparação com uma do tipo selvagerr ou de rogem sensível ao congelamento, melhora em uma outra forma dc realização, as taxas de germinação de semente. O processo de germinação d< semente depende fortemente da temperatura ambiental e as propriedades da: sementes determinam o nível de atividade e desempenho durante ; germinação e a emergência da muda quando está sendo exposta à temperatur; baixa. O método da invenção além disso fornece em uma forma de realizaçã< uma planta que mostra, sob condição de esfriamento um atraso reduzido d< desenvolvimento de folha.

Em uma forma de realização o método da invenção diz respeito a uma produção de uma lavoura superior tolerante, por exemplo, milho, feijão, arroz, soja, algodão, tomate, banana, pepino ou batata por que a maioria das lavouras são sensíveis ao congelamento.

Na presente invenção, tolerância intensificada a temperatura baixa pode, por exemplo e preferivelmente, ser determinada de acordo com o seguinte método: As plantas transformadas são desenvolvidas em potes em uma câmara de desenvolvimento (por exemplo, York, Mannheim, Germany). No caso, as plantas são Arabidopsis thaliana, as suas sementes são semeadas em vasos contendo uma mistura 3,5:1 (v:v) de solorico em nutriente (GS90, Tanta u. Wansdorf, Germany) e areia. As plantas são desenvolvidas sol: condições de desenvolvimento padrão. No caso, as plantas são Arabidopsis thaliana, as condições de desenvolvimento padrão são: a estratifícação é estabelecida por um período de 3 dias no escuro de 4o C a 5o C; A germinação de sementes e o desenvolvimento e em um fotoperíodo de 16 h de luz, opcionalmente luz fluorescente de 150 a 200 pmol/m2s e 8 h de escuro 20° C, 60 % de umidade relativa e uma densidade de fluxo de fótons de 20C pmol/m2s. A seleção BASTA pode ser realizada no dia 9 após a semeadun pela pulverização dos vasos com mudas a partir do topo. Portanto, mm solução a 0,07 % (v/v) de BASTA concentrada (183 g/1 glifosinato-amônio em água de torneira é pulverizada. As plantas de controle do tipo selvagen são pulverizadas com água de torneira apenas (em vez de pulverizar con BASTA dissolvido em água de torneira) mas são, de outra maneira identicamente tratados. As plantas são desenvolvidas e cultivadas. No caso, a; plantas são Arabidopsis thaliana, estas são irrigadas dia sim dia não. Após 9 ; 10 dias ou após 12 a 13 dias, as plantas são individualizadas. Frio (po exemplo, esfriamento de 11 a 12° C) é aplicado 14 dias ou 14 a 16 dias apó semeadura até o final do experimento. Após um período de desenvolvimenã total de 29 a 31 ou 35 a 37 dias, as plantas são coletadas e classificadas pelo peso fresco das partes aéreas das plantas, no caso de Arabidopsis preferivelmente as rosetas.

Consequentemente, em uma forma de realização, a presente invenção diz respeito a um método para aumentar o rendimento, que compreende as seguintes etapas: (a) determinar, se a temperatura na área para o plantio é ótima ou subótima para o desenvolvimento de uma planta de origem ou do tipe selvagem, por exemplo, uma lavoura e (bl) desenvolvimento de uma planta da invenção no dito solo: se a temperatura for subótima baixa para o desenvolvimento de uma planta de origem ou do tipo selvagem que se desenvolve na área ou (b2) desenvolver a planta da invenção no solo e comparar c rendimento com o rendimento de uma planta de origem ou do tipo selvagem padrão e selecionar e desenvolver a planta que mostra o rendimento mais alto se a temperatura for ótima para a planta de origem ou do tipo selvagem.

Em uma forma de realização da invenção, o termo “tensãc abiótica” abrange ainda a ausência de tensão abiótica substancial. Na presente invenção, o aumento de biomassa pode, por exemplo e preferivelmente, se: determinado de acordo com o seguinte método: As plantas transformadas são desenvolvidas em vasos em um; câmara de desenvolvimento (por exemplo, York, Mannheim, Germany). Nc caso as plantas são Arabidopsis thaliana, as suas sementes são, por tano semeadas em vasos contendo uma mistura 3,5:1 (v:v) de solo rico en nutriente (GS90, Tantau, Wansdorf, Germany) e opcionalmente areia d< quartzo.

As plantas são desenvolvidas sob condições d< desenvolvimento padrão.

Os vasos são preenchidos com mistura de solo e colocados en bandejas. Água é adicionada às bandejas para para deixar a mistura de solo absorver quantidade apropriada de água para o procedimento de semeadura. No caso, as plantas são Arabidopsis thaliana, as sementes para as plantas de A. thaliana. transgênicas e seus controles do tipo selvagem não transgênicos são semeados em potes (6 cm de diâmetro). Então, a bandeja enchida é coberta com uma tampa transparente e transferida a uma câmara de desenvovimento pré-esfriada (4o C a 5o C) e escurecida. A estratificação é estabelecida por um período de 3 a 4 dias no escuro de 4o C a 5o C. A germinação e o desenvolvimento das sementes é iniciado em uma condição de desenvolvimento de 20° C, 60 % de umidade relativa, 16 h de fotoperíodo e iluminação com luz fluorescente em aproximadamente 170 pmol/m2s. As coberturas são removidas de 7 a 8 dias após a semeadura. A seleção BASTA é realizada no dia 10 ou dia 11 (9 ou 10 dias após a semeadura) pela pulverização do vasos com mudas a partir do topo. No experimento padrão, uma solução de 0,07 % (v/v) de concentrado de BASTA (183 g/1 de glifosmato-amônio) em água de torneira é pulverizado uma vez, e alternativamente, uma solução de 0,02 % (v/v) de BASTA é pulverizada três vezes. As plantas de controle do tipo selvagem são pulverizadas com água de torneira apenas (em vez de pulverizadas com BASTA dissolvido em água de torneira) mas são, de outra maneira, tratados identicamente. As plantas sãc individualizadas de 13 a 14 dias após a semeadura pela remoção do excessc de mudas e deixando uma muda no solo. Os eventos transgênicos e as plantai de controle do tipo selvagem são uniformemente distribuídas na câmara. A irrigação é realizada a cada dois dias após a remoção da; coberturas em um experimento padrão ou, altemalivamente, todo dia. Parí medir o desempenho de biomassa, o peso fresco da planta foi determinado nc período de coleta (24 a 29 dias após a semeadura) cortando-se os brotos < pesando-os. As plantas estão no estágio anterior ao florescimento e anterior ac desenvolvimento de inflorescência quando coletadas. As planta transgênica: são, em comparação com as plantas de controle do tipo selvagem nãc transgênicas, coletadas no mesmo dia. Os valores de signifícância para a signíficância estatística das mudanças de biomassa podem ser calculados pela aplicação do teste t de ‘student’ (parâmetros: variância desigual de duas extremidades). A produção de biomassa pode ser medida pesando-se as rosetas das plantas. O aumento de biomassa pode ser calculado como razão dc peso médio para plantas transgênicas em comparação com o peso médio de plantas de controle do tipo selvagem a partir do mesmo experimento.

Em uma outra forma de realização da presente invenção, : característica relacionada com o rendimento também pode ser tolerância i salinidade aumentada (tolerância ao sal), tolerância à tensão osmótica tolerância à mudança de coloração aumentada, tolerância aumentada a um: densidade de planta alta, tolerância aumentada a tensões mecânicas e/oi tolerância aumentada à tensão oxidativa.

Consequentemente, em. uma forma de realização da present* invenção, o rendimento é aumentado pela melhora de uma ou mais da características relacionadas com. o rendimento como definido neste.

Desta maneira, a presente invenção fornece um método para ; produção de uma planta transgênica que apresenta uma eficiência de uso d nutriente aumentada em comparação com um uma origem correspondente 01 planta do tipo selvagem, pelo aumento ou geração de uma ou mais atividade selecionadas do grupo que consiste de proteína ribossômica 60S, Proteín permease de transportador ABC, acetiltransferase, proteína carreadora d acila, proteína At4g32480, proteína At5gl6650, proteína de ligação de ATF proteína relacionada com autofagia, fator de resposta de auxina, fator d transcrição de auxina, proteína Μ003, proteína bl522, proteína b273Ç proteína b3646, proteína B4029, permease de aminoácido de cadei ramificada, proteína cinase dependente de cálcio, subunidade de citocromo oxidase VIII, fator de alongamento Tu, Proteína de captura de fator, fumarilacetoacetato hidrolase, geranilgeranil pirofosfato sintase, glicose desidrogenase, glicosil transferase, proteína de família induzida por harpina, homocitrato sintase, hidrolase, isocorismato sintase, Proteína transportadora do tipo MFS, beta-ceto-redutase microssômica, poligalacturonase, proteína fosfatase, piruvato cinase, Subunidade de translocase de proteína independente de Sec, serina protease, tiorredoxina, proteína da família de tiorredoxina, regulador transcripcional, monooxigenase de biossíntese de ubiquinona, e proteína YHR213 W (“atividades”).

Em uma outra forma de realização, a presente invenção fornece um método para a produção de uma planta que apresenta uma resistência à tensão aumentada, particularmente resistência à tensão abiótica, em comparação com um uma origem correspondente ou planta do tipo selvagem, pelo aumento ou geração de uma ou mais das ditas atividades.

Em uma outra forma de realização, a resistência à tensão abiótica atingida de acordo com os métodos da presente invenção e mostrado por uma planta transgênica da invenção; é a tolerância à temperatura baixa aumentada, particularmente tolerância aumentada ao congelamento.

Desta maneira, em uma forma de realização adicional da presente invenção, um método é fornecido para a produção de uma planta transgênica; progênies, sementes e/ou pólen derivado de tal planta; cada um apresentando uma absorção de nitrogênio aumentada e uma tolerância à temperatura baixa aumentada, particularmente tolerância ao congelamento, em comparação com um célula vegetal do tipo selvagem não tran sformadc correspondente ou planta, pelo aumento ou geração de uma ou mais das ditas atividades.

Além disso, em uma forma de realização, a presente invençãc fornece uma planta transgênica que apresenta uma ou mais características relacionadas com o rendimento aumentado em comparação com uma céluh vegetal ou planta não transformada do tipo selvagem ou do tipo selvagem correspondente, pelo aumento ou geração de uma ou mais atividades selecionada do grupo mencionado acima de atividades.

Além disso, a presente invenção diz respeito a um método para a produção de uma planta com rendimento aumentado em comparação com uma planta do tipo selvagem, correspondente que compreende pelo menos uma das etapas selecionadas do grupo que consiste de: (i) aumentar ou gerar a atividade de um polipeptídeo que compreende um polipeptídeo, uma sequência de consenso ou pelo menos urr motivo de polipeptídeo como descrito na coluna 5 ou 7 da tabela II ou de tabela IV, respectivamente; (ii) aumentar ou gerar a atividade de um produto de expressar de uma molécula de ácido nucleico que compreende um polinucleotídeo comc descrito na coluna 5 ou 7 da tabela I e (iii) aumentar ou gerar a atividade de um equivalente funciona de (i) ou (ii).

Em uma forma de realização, o aumento ou geração da dit; uma ou mais atividades são conferidos por uma ou mais sequências de ácidc nucleico que compreende um polinucleotídeo selecionado do grupo com< mostrado na tabela I, coluna 5 ou 7. Consequentemente, o aumento oi geração da dita uma ou mais atividades é, por exemplo, conferido por um o\ mais produtos de expressão da dita molécula de ácido nucleico, por exemplo proteínas. Consequentemente, na presente invenção descrita acima, o aumentí ou geração da dita uma ou mais atividades é, por exemplo, conferida por um; ou mais proteínas cada uma compreendendo um polipeptídeo selecionado d< grupo como descrito na tabela II, colunas 5 e 7.

Desta maneira, em uma forma de realização, a presená invenção fornece um método para a produção de uma planta que apresent; rendimento aumentado em comparação com um uma origem correspondem ou planta do tipo selvagem, pelo aumento ou geração de uma ou mais atividades selecionadas do grupo que consiste de proteína ribossômica 60S, Proteína permease de transportador ABC, acetiltransferase, proteína carreadora de acila, proteína At4g32480, proteína At5gl6650, proteína de ligação de ATP, proteína relacionada com autofagia, fator de resposta de auxina, fator de transcrição de auxina, proteína bl003, proteína bl522, proteína b2739, proteína b3646, proteína B4029, permease de aminoácido de cadeia ramificada, proteína cinase dependente de cálcio, subunidade de citocromo c oxidase VIII, fator de alongamento Tu, Proteína de captura de fator, fumarilacetoacetato hidrolase, geranilgeranil pirofosfato sintase, glicose desidrogenase, glicosil transferase, proteína de família induzida por harpina. homocitrato sintase, hidrolase, isocorismato sintase, Proteína transportadora do tipo MFS, beta-ceto-redutase microssômica, poligalacturonase, proteína fosfatase, piruvato cinase, Subunidade de translocase de proteína independente de Sec, serina protease, tiorredoxina, proteína da família de tiorredoxina, regulador transcripcional, monooxigenase de biossíntese de ubiquinona, e proteína YHR213W, que é conferido por uma ou mais sequências de ácido nucleico que compreende um polinucleotídeo selecionadc do grupo como mostrado na tabela I, coluna 5 ou 7 ou por uma ou mais proteínas cada uma compreendendo um polipeptídeo codificado por uma oi mais sequências de ácido nucleico selecionado do grupo como mostrado m tabela I, coluna 5 ou 7 ou por uma ou mais proteínas cada ume compreendendo um polipeptídeo selecionado do grupo como descrito m tabela II, colunas 5 e 7. Como mencionado, o aumento de rendimento podí ser mediado por uma ou mais características relacionadas com o rendimento Desta maneira, o método da invenção diz respeito à produção de uma plants que apresenta a dita uma ou mais características relacionadas com c rendimento.

Desta maneira, a presente invenção fornece um método para ; produção de uma planta que apresenta uma eficiência de uso de nutriente aumentada, por exemplo, absorção de nitrogênio, resistência à tensão aumentada particularmente resistência à tensão abiótica, eficência de uso de água aumentado e/ou uma resistência à tensão aumentada, particularmente resistência à tensão abiótica, tolerância à temperatura baixa particular ou tolerância à aridez ou um rendimento intrínseco aumentado.

Além disso, a presente invenção diz respeito a um método para a produção de uma planta com rendimento aumentado em comparação com um uma origem correspondente ou planta do tipo selvagem a transgênica, que compreende (a) aumentar ou gerar, em um núcleo de célula vegetal, uma célula vegetal, uma planta ou parte da mesma, uma ou mais atividade; selecionadas do grupo que consiste de proteína ribossômica 60S, Proteína permease de transportador ABC, acetiltransferase, proteína carreadora ck acila, proteína At4g32480, proteína AtSgl 6650, proteína de ligação de ATP proteína relacionada com autofagia, fator de resposta de auxina, fator d< transcrição de auxina, proteína bl003, proteína bl522, proteína b2739 proteína b364ó, proteína B4029, permease de aminoácido de cadei; ramificada, proteína cinase dependente de cálcio, subunidade de citocromo < oxidase VIII, fator de alongamento Tu, Proteína de captura de fator fumarilacetoacetato hidrolase, geranilgeranil pirofosfato sintase, glicos» desidrogenase, glicosil transferase, proteína de família induzida por harpina homocitrato sintase, hidrolase, isocorismato sintase, Proteína transportador; do tipo MFS, beta-ceto-redutase microssômica, poligalacturonase, proteín fosfatase, piruvato cinase, Subunidade de translocase de proteín independente de Sec, serina protease, tiorredoxina, proteína da família d tiorredoxina, regulador transcripcional, monooxigenase de biossíntese d ubiquinona, e proteína YHR213 W e (b) cultivar ou desenvolver uma célula vegetal, uma planta ou parte da mesma sob condições que permitam o desenvolvimento de uma célula vegetal, uma planta ou a parte da mesma e (c) recuperar uma planta que apresenta rendimento aumentado em comparação com um. planta original ou do tipo selvagem não transformada correspondente; (d) e opcional mente, selecionar uma planta ou uma parte da mesma, que apresenta rendimento aumentado em comparação com um célula vegetal do tipo selvagem não transformada correspondente, a planta transgênica ou uma parte da mesma que apresente sintomas visuais de deficiência e/ou morte.

Além disso, foi um objetivo da presente invenção fornecei uma célula vegetal e/ou uma planta com tolerância intensificada a tensãc ambiental abiótica e/ou que apresenta sob condições de tensão ambiental abiótica, um rendimento aumentado, em comparação com um tipo selvagem não transformado correspondente ou célula vegetal e/ou planta de partida.

Foi observado que este objetivo é atingido pelo fomecimentc de uma célula, célula vegetal e/ou planta de acordo com a presente invençãt descrita neste.

Em uma forma de realização da presente invenção, esta; características são atingidas por um processo para uma tolerânci; intensificada à tensão ambiental abiótica em uma célula, preferivelmente ; partir de um organismo ativo fotossintético, preferivelmente uma planta, en comparação com um organismo ativo fotossintético do tipo selvagem ou d partida correspondente (não transformado).

Em uma outra forma de realização, a “tolerância intensificad a tensão ambiental” em um organismo ativo fotossintético significa que organismo ativo fotossintético, preferivelmente uma planta, quand confrontado com condições de tensão total abióticas como mencionado acirm por exemplo, como condições de temperatura baixa incluindo temperature frias e congelantes, apresentar um rendimento intensificado, por exemplo, um rendimento como mencionado acima, por exemplo, um redento de semente ou rendimento de biomassa, em comparação com um organismo ativo fotossintético do tipo selvagem ou de partida correspondente (não transformado).

Em uma forma de realização deste, o termo “tolerância intensificada à tensão ambiental abiótica” em um organismo ativo fotossintético significa que o organismo ativo fotossintético, preferivelmente uma planta, quando confrontado com condições de tensão total abióticas como condições de temperatura baixa incluindo temperaturas frias e congelantes, apresenta um rendimento de biomassa seca intensificado em comparação com um organismo ativo fotossintético tipo selvagem não transformado correspondente.

Em uma forma de realização deste, o termo “tolerância intensificada à tensão ambiental abiótica” em um organismo ative fotossintético significa que o organismo ativo fotossintético, preferivelmente uma planta, quando confrontado com condições de tensão total abiótica? como condições de temperatura baixa incluindo temperaturas frias t congelantes, apresenta um rendimento de biomassa seca aérea intensificade em comparação com um organismo ativo fotossintético tipo selvagem nãc transformado correspondente.

Em uma forma de realização deste, o termo “tolerânci; intensificada à tensão ambiental abiótica” em um organismo ativ< fotossintético significa que o organismo ativo fotossintético, preferivelmenti uma planta, quando confrontado com condições de tensão total abiótica como condições de temperatura baixa incluindo temperaturas frias congelantes, apresenta um rendimento intensificado de biomassa seca d< subsolo em comparação com um organismo ativo fotossintético tipo selvager não transformado correspondente.

Em uma outra forma de realização deste, o termo “tolerância intensificada à tensão ambiental abiótica” em um organismo ativo fotos sintético significa que o organismo ativo fotossíntético, preferivelmente uma planta, quando confrontado com condições de tensão total abióticas como condições de temperatura baixa incluindo temperaturas frias e congelantes, apresenta um rendimento de peso fresco intensificado de biomassa em comparação com um organismo ativo fotossíntético tipo selvagem não transformado correspondente.

Em uma forma de realização deste, o termo “tolerância intensificada à tensão ambiental abiótica” em um organismo ativo fotossíntético significa que o organismo ativo fotossíntético, preferivelmente uma planta, quando confrontado com condições de tensão total abióticas como condições de temperatura baixa incluindo temperaturas frias e congelantes, apresenta um rendimento de biomassa de peso fresco aéreo intensificado em comparação com um organismo ativo fotossíntético tipe selvagem não transformado correspondente.

Em uma forma de realização deste, o termo “tolerânck intensificada à tensão ambiental abiótica” em um organismo ative fotossíntético significa que o organismo ativo fotossíntético, preferível mentí uma planta, quando confrontado com condições de tensão total abiótica; como condições de temperatura baixa incluindo temperaturas frias < congelantes, apresenta um rendimento de biomassa de peso fresco subterrânei intensificado em comparação com um organismo ativo fotossíntético tip' selvagem não transformado correspondente.

Em uma outra forma de realização deste, o termo “tolerânci intensificada à tensão ambiental abiótica” em um organismo ativ fotossíntético significa que o organismo ativo fotossíntético, preferivelment uma planta, quando confrontado com condições de tensão total abiótica como condições de temperatura baixa incluindo temperaturas frias conge]antes, apresenta ura rendimento intensificado de partes coletadas de uma planta em comparação com um organismo ativo fotossintético tipo selvagem não transformado correspondente.

Em uma forma de realização deste, o teimo “tolerância intensificada à tensão ambiental abiótica” em um organismo ativo fotossintético significa que o organismo ativo fotossintético, preferivelmente uma planta, quando confrontado com condições de tensão total abióticas como condições de temperatura baixa incluindo temperaturas frias e congelantes, apresenta um rendimento intensificado de partes secas coletadas de uma planta em comparação com um organismo ativo fotossintético tipo selvagem não transformado correspondente.

Em uma forma de realização deste, o termo “tolerância intensificada à tensão ambiental abiótica” em um organismo ativo fotossintético significa que o organismo ativo fotossintético, preferivelmente uma planta, quando confrontado com condições de tensão total abióticas como condições de temperatura baixa incluindo temperaturas frias e congelantes, apresenta um rendimento intensificado de partes aéreas secas coletadas dc uma planta em comparação com um organismo ative fotossintético tipo selvagem não transformado correspondente.

Em uma forma de realização deste, o termo “tolerânci; intensificada à tensão ambiental abiótica” em um organismo ativ< fotossintético significa que o organismo ativo fotossintético, preferivelment uma planta, quando confrontado com condições de tensão total abiótica como condições de temperatura baixa incluindo temperaturas frias congelantes, apresenta um rendimento intensificado de partes seca subterrâneas coletadas de uma planta em comparação com um organism ativo fotossintético tipo selvagem não transformado correspondente.

Em uma outra forma de realização deste, o termo “tolerânci intensificada à tensão ambiental abiótica” em um organismo ativ fotossintético significa que o organismo ativo fotossintético, preferivelmente uma planta, quando confrontado com condições de tensão total abióticas como condições de temperatura baixa incluindo temperaturas frias e congelantes, apresenta um rendimento intensificado de partes coletadas de peso fresco de uma planta em comparação com um organismo ativo fotossintético tipo selvagem não transformado correspondente.

Em uma forma de realização deste, o termo “tolerância intensificada à tensão ambiental abiótica” em um organismo ativo fotossintético significa que o organismo ativo fotossintético, preferivelmente uma planta, quando confrontado com condições de tensão total abióticas como condições de temperatura baixa incluindo temperaturas frias e congelantes, apresenta um rendimento intensificado de partes aerias coletadas de peso fresco de uma planta em comparação com um organismo ativo fotossintético tipo selvagem não transformado correspondente.

Em uma forma de realização deste, o termo “tolerância intensificada à tensão ambiental abiótica” em um organismo ative fotossintético significa que o organismo ativo fotossintético, preferivelmente uma planta, quando confrontado com condições de tensão total abiótica; como condições de temperatura baixa incluindo temperaturas frias <. congelantes, apresenta um rendimento intensificado de underground parte: coletadas de peso fresco de uma planta em comparação com um organisrm ativo fotossintético tipo selvagem não transformado correspondente.

Em uma outra forma de realização, o termo “tolerânci intensificada à tensão ambiental abiótica” em um organismo ativ< fotossintético significa que o organismo ativo fotossintético, preferivelment uma planta, quando confrontado com condições de tensão total abiótica como condições de temperatura baixa incluindo temperaturas frias congelantes, apresenta um rendimento intensificado de os frutos de lavoui em comparação com um organismo ativo fotossintético tipo selvagem nã transformado correspondente.

Em uma forma de realização deste, o termo “tolerância intensificada à tensão ambiental abiótica” em um organismo ativo fotossintético significa que o organismo ativo fotossintétíco, preferivelmente uma planta, quando confrontado com condições de tensão total abióticas como condições de temperatura baixa incluindo temperaturas frias e congelantes, apresenta um rendimento intensificado de os frutos frescos de lavoura em comparação com um organismo ativo fotossintético tipo selvagem não transformado correspondente.

Em uma forma de realização deste, o termo “tolerância intensificada à tensão ambiental abiótica” em um organismo ativo fotossintético significa que o organismo ativo fotossintético, preferivelmente uma planta, quando confrontado com condições de tensão total abióticas como condições de temperatura baixa incluindo temperaturas frias e congelantes, apresenta um rendimento intensificado de os frutos secos de lavoura em comparação com um organismo ativo fotossintético tipo selvagem não transformado correspondente.

Em uma forma de realização deste, o teimo “tolerâncií intensificada à tensão ambiental abiótica” em um organismo ativx fotossintético significa que o organismo ativo fotossintético, preferivelmenb uma planta, quando confrontado com condições de tensão total abiótica como condições de temperatura baixa incluindo temperaturas frias < congelantes, apresenta um peso de grão seco intensificado em comparaçã· com um organismo ativo fotossintético tipo selvagem não transformadi correspondente.

Em uma outra forma de realização, o termo “tolerânci intensificada à tensão ambiental abiótica” em um organismo ativ fotossintético significa que o organismo ativo fotossintético, preferivelment uma planta, quando confrontado com condições de tensão total abióticr como condições de temperatura baixa incluindo temperaturas frias e congelantes, apresenta um rendimento intensificado de sementes em comparação com um organismo ativo fotossintético tipo selvagem não transformado correspondente.

Em uma forma de realização deste, o termo “tolerância intensificada à tensão ambiental abiótica” em um organismo ativo fotossintético significa que o organismo ativo fotossintético, preferivelmente uma planta, quando confrontado com condições de tensão total abióticas conto condições de. temperatura baixa incluindo temperaturas frias e congelantes, apresenta um rendimento intensificado de peso fresco de sementes em comparação com um organismo ativo fotossintético tipc selvagem não transformado correspondente.

Em. uma forma de realização deste, o termo “tolerâncií intensificada à tensão ambiental abiótica” em um organismo ativ< fotossintético significa que o organismo ativo fotossintético, preferivelmente uma planta, quando confrontado com condições de tensão total abiótica como condições de temperatura baixa incluindo temperaturas frias congelantes, apresenta um rendimento intensificado de sementes secas er comparação com um. organismo ativo fotossintético tipo selvagem nã transformado correspondente.

Em uma outra forma de realização da presente invenção, este características são atingidas por um processo para um rendimento aumentad sob condições de tensão ambiental, particularmente tensão ambiental abiótic; em um organismo ativo fotossintético, preferivelmente uma planta, ei comparação com um organismo ativo fotossintético do tipo selvagem ou ( partida (não transformado) correspondente.

Em uma forma de realização deste, o termo “rendimen aumentado” significa que o organismo ativo fotossintético, especialmen uma planta, apresenta um rendimento aumentado, por exemplo, apreser: uma taxa de desenvolvimento aumentado, sob condições de tensão ambiental abiótica, em comparação com o organismo ativo fotossintético do tipo selvagem correspondente.

Uma taxa de desenvolvimento aumentada pode ser refletida por inter alia ou confere uma produção de biomassa aumentada da planta total ou uma produção de biomassa aumentada das partes aéreas de uma planta ou por uma produção de biomassa aumentada das partes subterrâneas de uma planta ou por uma produção de biomassa aumentada de partes de uma planta, como caules, folhas, flores, frutos e/ou sementes.

Em uma forma de realização deste, o rendimento aumentado inclui rendimentos de fruto superiores, rendimentos de semente superiores, produção de material fresco superior e/ou produção de material seca superior.

Em uma outra forma de realização deste, o termo “rendimento aumentado” significa que o organismo ativo fotossintético, preferivelmente planta, apresenta um desenvolvimento prolongado sob condições de tensão ambiental abiótica, as em comparação com o organismo ativo fotossintético tipo selvagem, não transformado correspondente. A desenvolvimento prolongado compreende sobrevivência e/ou desenvolvimento continuado dc organismo fotossintético ativo, preferivelmente planta, no momento quandc organismo ativo fotossintético do tipo selvagem não transformado apre sentí sintomas visuais de deficiência e/ou morte.

Em uma outra forma de realização deste, o termo “rendimentc aumentado” significa que o organismo ativo fotossintético, preferivelmenb planta, apresenta um teor de ácido gama-aminobutírico aumentado (GABA em comparação com um tipo selvagem não transformado correspondente.

Em uma outra forma de realização preferida um organism fotossintético ativo, especialmente uma planta, apresenta rendiment aumentado sob condições de tensão ambiental abiótica, por exemplo, um planta, apresenta uma tolerância intensificada à tensão ambiental abiótica o uma outra característica relacionada com o rendimento.

Em uma outra forma de realização esta invenção satisfaz a necessidade de identificar novos genes únicos capazes de conferir um rendimento aumentado, por exemplo, uma tolerância intensificada à tensão ambiental abiótica ou uma outra característica relacionada com o rendimento, ao organismo ativo fotossintético, preferivelmente plantas, na expressão ou super-expressão de genes endógenos e/ou exógenos.

Em uma outra forma de realização deste, esta invenção satisfaz a necessidade de identificar novos genes únicos capazes de conferir um rendimento aumentado, por exemplo, uma tolerância intensificada à tensão ambiental abiótica ou uma outra característica relacionada com o rendimento, ao organismo ativo fotossintético, preferivelmente plantas, na expressão ou super-expressão de genes endógenos.

Em uma outra forma de realização deste esta invenção satisfas a necessidade de identificar novos genes únicos capazes de conferir utr rendimento aumentado, por exemplo, unia tolerância intensificada à tensãc ambiental abiótica ou uma outra característica relacionada com o rendimento ao organismo ativo fotossintético, preferivelmente plantas, na expressão oi super-expressão de genes exógenos.

Em uma outra forma de realização esta invenção satisfaz ; necessidade de identificar novos genes únicos capazes de conferir um tolerância intensificada à tensão ambiental abiótica em combinação com uri aumento de rendimento ao organismo ativo fotossintético, preferivelment plantas, na expressão ou super-expressão de genes endógenos e/ou exógenos.

Consequentemente, a presente invenção diz respeito a ur método para produzir, por exemplo, um organismo ativo fotossintétic transgênico ou uma parte deste ou uma célula vegetal, uma planta ou um parte da mesma, por exemplo, para a geração de uma tal planta, coi rendimento aumentado, por exemplo, com uma característica relacionada coi o rendimento aumentado, por exemplo, eficiência de uso de nutriente aumentado, capacidade de rendimento intrínseco aumentado e/ou tolerância à tensão aumentada, preferivelmente resistência à tensão por água, especialmente sob condições de tensão transitória e abiótica repetitiva, preferivelmente característica relacionada com secura cíclica e/ou tolerância a temperatura baixa e/ou uma outra característica relacionada com rendimento aumentado em comparação com um correspondente por exemplo organismo ativo fotossintético do tipo selvagem não transformado ou uma parte deste ou uma célula vegetal, uma planta ou parte da mesma, que compreende (a) aumentar ou gerar uma ou mais atividades selecionadas do grupo que consiste de proteína ribossômica 60S, Proteína permease de transportador ABC, acetiltransferase, proteína carreadora de acila, proteína At4g32480, proteína At5g 16650, proteína de ligação de ATP, proteína relacionada com autofagia, fator de resposta de auxina, fator de transcrição de auxina, proteína b!003, proteína bl522, proteína b2739, proteína b3646 proteína B4029, permease de aminoácido de cadeia- ramificada, proteíru cinase dependente de cálcio, subunidade de citocromo c oxidase VIII, fator d« alongamento Tu, Proteína de captura de fator, fumarilacetoacetato hidrolase geraniígeranil pirofosfato sintase, glicose desidrogenase, glicosil transferase proteína de família induzida por harpina, homocitrato sintase, hidrolase isocorismato sintase, Proteína transportadora do tipo MFS, beta-ceto-redutas microssômica, poligalacturonase, proteína fosfatase, pimvato cinase Subunidade de translocase de proteína independente de Sec, serina protease tiorredoxina, proteína da família de tiorredoxina, regulador transcripciona monooxigenase de biossíntese de ubiquinona, e proteína YHR213W em ui organismo ativo fotossintético ou uma parte deste, por exemplo, a célu1 vegetal, uma planta ou parte da mesma, e (b) desenvolver o organismo ativo fotossintético ou uma par deste, por exemplo, a célula vegetal, uma planta ou uma parte da mesma sob condições que permitam o desenvolvimento de um organismo fotossintético ativo ou uma parte deste, preferivelmente uma célula vegetal, uma planta ou parte da mesma, com rendimento aumentado, por exemplo, com uma característica relacionada com o rendimento aumentado, por exemplo tolerância intensificada à tensão ambiental abiótica, eficiência de uso de nutriente aumentado, tolerância à secura aumentada e/ou uma outra característica relacionada com o rendimento aumentado em comparação com um correspondente, por exemplo, organismo ativo fotossintético do tipo selvagem não transformado ou uma parte deste, preferivelmente uma céluk vegetal, uma planta ou parte da mesma.

Em uma forma de realização a presente invenção diz respeito í um método para produzir, por exemplo, um organismo ativo fotossintéticc transgênico ou uma parte deste, preferivelmente uma célula vegetal, um; planta ou uma parte da mesma com rendimento aumentado, por exemplo, con uma característica relacionada com o rendimento aumentado, por exempli tolerância intensificada à tensão ambiental abiótica, eficiência de uso d' nutriente aumentado, tolerância à secura aumentada e/ou uma outr característica relacionada com o rendimento aumentado em comparação cor um correspondente por exemplo, organismo ativo fotossintético do tip selvagem não transformado ou uma parte deste, preferivelmente uma célul vegetal, uma planta ou parte da mesma, que compreende (a) aumentar ou gerar uma ou mais atividades selecionadas d grupo que consiste de: proteína ribossômica 60S, Proteína peraiease c transportador ABC, acetiltransferase, proteína carreadora de acila, proteír At4g32480, proteína At5g 16650, proteína de ligação de ATP, proteír relacionada com autofagia, fator de resposta de auxina, fator de transcrição c auxina, proteína Μ003, proteína bl522, proteína b2739, proteína b364 proteína B4029, permease de aminoácido de cadeia ramificada, proteíi cinase dependente de cálcio, subunidade de citocromo c oxídase VIII, fator de alongamento Tu, Proteína de captura de fator, fumarilacetoacetato hidrolase, geranilgeranil pirofosfato sintase, glicose desidrogenase, glicosil transferase, proteína de família induzida por harpina, homocitrato sintase, hidrolase, isocorismato sintase, Proteína transportadora do tipo MFS, beta-ceto-redutase microssômica, poligalacturonase, proteína fosfatase, piruvato cinase, Subunidade de translocase de proteína independente de Sec, serina protease, tiorredoxina, proteína da família de tiorredoxina, regulador transcripcional, monooxigenase de biossíntese de ubiquinona, e proteína YHR213W em um organismo ativo fotossintético ou uma parte deste, preferivelmente uma célula vegetal, uma planta ou parte da mesma, (b) desenvolver o organismo ativo fotossintético ou uma parte deste, preferivelmente uma célula vegetal, uma planta ou uma parte da mesma junto com por exemplo, organismo ativo fotossintético do tipo selvagem 01 uma parte deste, preferivelmente uma planta, sob condições de tensãc ambiental abiótica (c) selecionar o organismo fotossintético ativo ou uma partí deste, preferivelmente uma célula vegetal, uma planta ou parte da mesma com rendimento aumentado, por exemplo, com uma característica relacionad; com o rendimento aumentado, por exemplo tolerância intensificada à tensã< ambiental abiótica, eficiência de uso de nutriente aumentado, tolerância ; secura aumentada e/ou uma outra característica relacionada com o rendimenb aumentado, em comparação com um correspondente, e.g organismo ativí fotossintético do tipo selvagem não transformado ou uma parte deste preferivelmente uma célula vegetal, uma planta ou parte da mesma, após, po exemplo, o organismo ativo fotossintético do tipo selvagem não transformad ou uma parte deste, preferivelmente uma célula vegetal, uma planta ou part da mesma, apresentam sintomas visuais de deficiência e/ou morte.

As condições de clima e de cultura para plantas pode st classificada em mega-ambientes de acordo com o usado por CIMMYT para guiar seus programas de criação em trigo e milho. Um mega-ambiente é uma área geográfica contígua não necessariamente ampla com tensões bióticas e abióticas similares e requerimentos de sistema de lavoura. De fato, um mega-ambiente é definido por fatores de produção de lavoura (temperatura, chuva, luz do sol, latitude, elevação, características do solo e doenças), preferências do consumidor (a cor do grão e como este deve ser usado) e hábito de desenvolvimento de trigo.

Para CIMMYT, os pesquisadores identificaram seis megaambientes para trigos da primavera e três de cada para trigo facultativo e de inverno.

Tais niega-ambientes são praticáveis para cada espécie vegeta incluindo lavouras.

Em uma forma de realização a presente invenção fornece um; célula de planta transgênica, uma planta ou uma parte da mesma con rendimento aumentado sob condições de desenvolvimento sub-ótimas en comparação com um célula vegetal do tipo selvagem não transformad; correspondente, uma planta ou parte da mesma.

Tais condições de desenvolvimento sub-ótimas podem ser, po exemplo, mega-ambientais com baixo nível de chuva, como, por exemplo, o mega-ambientes de trigo ME1, ME4, ME4A, ME4B, ME4C, ME5, ME5B ME6, ME6B, ME9, ME12 ou o mega-ambiente respectivo para as espécie vegetais específicas para as espécies vegetais específicas.

Tais mega-ambientes são praticáveis para cada condição d desenvolvimento sub-ótima, temperatura ou disponibilidade de nutriente. A fim de comparar o rendimento de plantas da mesma espéci em correlação com as condições ambientais, o parâmetro de rendiment potencial é significante. O rendimento potencial é definido como rendimento de uma planta quando desenvolve-se em ambientes ao qual esta adaptada, com nutrientes e água não limitantes e com pragas, doenças, ervas daninhas, tempestades e outras tensões eficientemente controladas. Nesta forma de realização “Rendimento” refere-se à massa de produto em coleta final.

Sob condições de campo, o rendimento potencial não será atingido. Entretanto, este é um parâmetro que define as condições de cultivo ótimas em um mega-ambiente porque apenas sob condições ótimas o rendimento potencial será atingido.

Era uma forma de realização sub-ótima, a condição de desenvolvimento é qualquer condição que não corresponda à condiçãc respectiva onde o rendimento potencial pode ser atingido.

Em uma forma de realização, as condições de desenvolvimento ótimas, incluindo disponibilidade de nutriente, sãc condições selecionadas do grupo que consiste de condições climáticas e ambientais, incluindo a descartabilídade de como fo predominantemente em 50, 25, 20, 15, 10 ou 5 anos em um período de 3, 6 12 meses ou um período de cultivo nos mega-ambientes conhecidos com< Região do Cinturão do Trigo na austrália Ocidental, cinturão do milho no E.U.A. (compreendendo pelo menos um dos estados de lowa, Indiana Illinois, Ohio, South Dakota, Nebraska, Kansas, Minnesota, Wisconsir Michigan, Missouri e Kentucky),as condições climáticas e ambientais com foram predominantes nos últimos 50, 25, 20, 15, 10 ou 5 anos em um períod de 3, 6, 12 meses ou um período de cultivo nos mega-ambientes com mencionado para milho e trigo por CIMMYT.

Em uma forma de realização, a invenção diz respeito a ui método para aumentar o rendimento por acre ou por área cultivada qu compreende as etapas: realizar uma análise de condições ambientais para medir nível de nutrientes (incluindo água) disponível no solo ou na chuva por cicl de cultivo, comparar o resultado com o valor da condição respectiva com o valor sob a condição de desenvolmento ótima, cultivar uma planta da classe / gêneros respectivos de acordo com a invenção no caso de pelo menos uma condição medida desviar por 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 35 %, 40 %, 45 %, 50 %, 60 %, 70 %, 80 %, 90 %, 100 % ou mais do valor sob condição de desenvolvimento ótima.

Em uma forma de realização, a invenção diz respeito a um método para aumentar o rendimento por acre em mega ambientes que compreende as etapas: realizar uma análise de solo para medir o nível de nutrientes disponível no solo, comparar o resultado com o valor necessariamente para atingb o rendimento potencial de uma classe / gêneros de uma planta cultivar uma planta da classe / gêneros respectivos de acordo com a invenção no caso pelo menos um nutriente é limitado.

Uma forma de realização da invenção diz respeito a un método para aumentar o rendimento por acre em mega ambientes qu< compreende as etapas: Medir a precipitação em um período de tempo de pelo meno; uma geração de planta, Comparar com o valor para atingir o rendimento potencial d< uma classe / gêneros de uma planta, cultivar uma planta da classe / gêneros respectivos de acordi com a invenção no caso da precipitação ser diminuída.

Em uma forma de realização, a invenção diz respeito a ur método para aumentar o rendimento por acre em mega ambientes qu compreende as etapas: Medir os períodos de tempo entre as chuvas em um período d tempo de pelo menos uma geração de planta, Comparar com o valor para atingir o rendimento potencial de uma classe / gêneros de uma planta e cultivar uma planta da classe / gêneros respectivos de acordo com a invenção, no caso da estação de seca é aumentado.

Compreende/que compreende e suas variações gramaticais quando usadas neste relatório descritivo devem especificar a presença de características estabelecidas, números inteiros, etapas ou componentes ou grupos destes, mas não impedem a presença ou a adição de uma ou mais outras características, números inteiros, etapas, oponentes ou grupos destes.

De acordo com. a invenção, o termo “célula vegetal” ou o termo “organismo” como entendido neste diz respeito sempre a uma célula vegetal ou uma organela destes, preferivelmente um plastídeo, mais preferivelmente cloroplasto.

Como usado neste, “planta” é entendido incluir não apenas uma planta total mas também uma parte da mesma, isto é, uma ou mais células ou tecidos, incluindo, por exemplo, folhas, ramos, brotos, raízes, flores, frutos e sementes.

Surpreendentemente foi observado que a expressãc transgênica de uma proteína como mostrado na tabela II, coluna 3 em umz planta, tal como Axabidopsis thaliana C24 por exemplo, conferiu uma céluh vegetal transgênica, uma planta ou uma parte da mesma com teor de GABA aumentado em comparação com um célula vegetal do tipo selvagem nãc transformada correspondente, uma planta ou uma parte da mesma.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, ; atividade do molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo d< Saccharomyces cerevisiae que compreende um ácido nucleico SEQ ID N°: 4í ou polipeptídeo SEQ ID N°: 43, respectivamente é aumentado ou gerado, po exemplo, se uma atividade de uma molécula de ácido nucleico ou un polipeptídeo que compreende um ácido nucieico ou poíipeptídeo ou a sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, como descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como uma molécula de ácido nucieico SEQ ID N°: 42 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 43, respectivamente é aumentado ou gerado ou se uma atividade “Proteína de captura de fator” é aumentado ou gerado em uma célula vegetal, planta ou parte da mesma um teor de GABA aumentado em comparação com um célula vegetal do tipo selvagem não transformada correspondente, uma planta ou uma parte da mesmas é conferido.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, a atividade da molécula de ácido nucieico ou um polipeptídeo de Arabidopsis thaliana que compreende um ácido nucieico SEQ ID N°: 654 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 655, respectivamente é aumentado ou gerado, por exemplo, se uma atividade de uma molécula de ácido nucieico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucieico ou polipeptídeo ou a sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, como descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7 m mesma linha respectiva como uma molécula de ácido nucieico SEQ ID N° 654 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 655, respectivamente é aumentado oi gerado ou se uma atividade “regulador transcripcional” é aumentado oi gerado em uma célula vegetal, planta ou parte da mesma um teor de GAB/ aumentado em comparação com um célula vegetal do tipo selvagem nãí transformada correspondente, uma planta ou uma parte da mesmas < conferido.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, a atividade d; molécula de ácido nucieico ou um polipeptídeo de Arabidopsis thaliana qu< compreende um ácido nucieico SEQ ID N°: 706 ou polipeptídeo SEQ ID N° 707, respectivamente é aumentado ou gerado, por exemplo, se uma atividad· de uma molécula de ácido nucieico ou um polipeptídeo que compreende un ácido nucieico ou polipeptídeo ou a sequência de consenso ou o motivo di polipeptídeo, como descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como uma molécula de ácido nucleico SEQ ID N°: 706 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 707, respectivamente é aumentado ou gerado ou se uma atividade “proteína fosfatase” é aumentado ou gerado em uma célula vegetal, planta ou parte da mesma um teor de GABA aumentado em comparação com um célula vegetal do tipo selvagem não transformada correspondente, uma planta ou uma parte da mesmas é conferido.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, a atividade da molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo de Arabidopsis thaliana que compreende um ácido nucleico SEQ ID N°: 751 ou polipeptídeo SEQ TD N°: 752, respectivamente é aumentado ou gerado, por exemplo, se uma atividade de urna molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico ou polipeptídeo ou a sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, como descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7 ηε mesma linha respectiva como uma molécula de ácido nucleico SEQ ID N° 751 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 752, respectivamente é aumentado or gerado ou se uma atividade “piruvato cinase” é aumentado ou gerado em ume célula vegetal, planta ou parte da mesma um teor de GABA aumentado eir comparação com um célula vegetal do tipo selvagem não transformada correspondente, uma planta ou uma parte da mesmas é conferido.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, £ atividade da molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo de Arabidopsi: thaliana que compreende um ácido nucleico SEQ ID N°: 1156 oi polipeptídeo SEQ ID N°: 1157, respectivamente é aumentado ou gerado, po exemplo, se uma atividade de uma molécula de ácido nucleico ou un polipeptídeo que compreende um ácido nucleico ou polipeptídeo ou ; sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, como descrito na tabela 1 II ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como uma molécula de ácid< nucleico SEQ ID N°: 1156 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 1157 respectivamente é aumentado ou gerado ou se uma atividade “proteína da família de tiorredoxina” é aumentado ou gerado em uma célula vegetal, planta ou parte da mesma um teor de GABA aumentado em comparação com um célula vegetal do tipo selvagem não transformada correspondente, uma planta ou uma parte da mesmas é conferido.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, a atividade da molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo de Arabidopsis thaliana que compreende um ácido nucleico SEQ ID N°: 1510 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 1511, respectivamente é aumentado ou gerado, por exemplo, se uma atividade de uma molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico ou polipeptídeo ou a sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, como descrito na tabela I. II ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como uma molécula de ácidc nucleico SEQ ID N°: 1510 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 1511, respectivamente é aumentado ou gerado ou se uma atividade “proteína de família induzida por harpina” é aumentado ou gerado em uma célula vegetal planta ou parte da mesma um teor de GABA aumentado em comparação corr um célula vegetal do tipo selvagem não transformada correspondente, umí planta ou uma parte da mesmas é conferido.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, ; atividade da molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo de Arabidopsi; thaliana que compreende um ácido nucleico SEQ ID N°: 1598 oi polipeptídeo SEQ ID N°: 1599, respectivamente é aumentado ou gerado, po exemplo, se uma atividade de uma molécula de ácido nucleico ou un polipeptídeo que compreende um ácido nucleico ou polipeptídeo ou sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, como descrito na tabela ] II ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como uma molécula de ácid nucleico SEQ ID N°: 1598 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 1591 respectivamente é aumentado ou gerado ou se uma atividade “glicos transferase” é aumentado ou gerado em uma célula vegetal, planta ou parte da mesma um teor de GABA aumentado em comparação com um célula vegetal do tipo selvagem não transformada correspondente, uma planta ou uma parte da mesmas é conferido.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, a atividade da molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo de Arabidopsis thaliana que compreende um ácido nucleico SEQ ID N°: 1670 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 1671, respectivamente é aumentado ou gerado, por exemplo, se uma atividade de uma molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico ou polipeptídeo ou a sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, como descrito na tabela I. II ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como uma molécula de ácidc nucleico SEQ ID N°: 1670 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 167b respectivamente é aumentado ou gerado ou se uma atividade “fator de resposta de auxina" é aumentado ou gerado em uma célula vegetal, planta oi parte da mesma um teor de GABA aumentado em comparação com um céluk vegetal do tipo selvagem não 'transformada correspondente, uma planta or uma parte da mesmas é conferido.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, £ atividade da molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo de Arabidopsh thaliana que compreende um ácido nucleico SEQ ID N°: 1874 oi polipeptídeo SEQ ID N°: 1875, respectivamente é aumentado ou gerado, poi exemplo, se uma atividade de uma molécula de ácido nucleico ou un polipeptídeo que compreende um ácido nucleico ou polipeptídeo ou í sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, como descrito na tabela I II ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como uma molécula de ácidt nucleico SEQ ID VIo: 1874 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 1875 respectivamente é aumentado ou gerado ou se uma atividade “proteín; At4g32480” é aumentado ou gerado em uma célula vegetal, planta ou parte d; mesma um teor de GABA aumentado em comparação com um célula vegetal do tipo selvagem não transformada correspondente, uma planta ou uma parte da mesmas é conferido.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, a atividade da molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo de Arabidopsis lhaliana que compreende um ácido nucleico SEQ ID N°: 1936 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 1937, respectivamente é aumentado ou gerado, por exemplo, se uma atividade de uma molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico ou polipeptídeo ou a sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, como descrito na tabela I. II ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como uma molécula de ácido nucleico SEQ ID N°: 1936 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 1937: respectivamente é aumentado ou gerado ou se uma atividade “proteína cinase dependente de cálcio” é aumentado ou gerado em uma célula vegetal, plante ou parte da mesma um teor de GABA aumentado em comparação com un célula vegetal do tipo selvagem não transformada correspondente, uma plante ou uma parte da mesmas é conferido.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, í atividade da molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo de Arabidopsi: thaliana que compreende um ácido nucleico SEQ ID N°: 2492 oi polipeptídeo SEQ ID N°: 2493, respectivamente é aumentado ou gerado, po: exemplo, se uma atividade de uma molécula de ácido nucleico ou un polipeptídeo que compreende um ácido nucleico ou polipeptídeo ou ; sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, como descrito na tabela 1 II ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como uma molécula de ácidi nucleico SEQ ID N°: 2492 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 2493 respectivamente é aumentado ou gerado ou se uma atividade “proteín At5gl6650” é aumentado ou gerado em uma célula vegetal, planta ou parte d mesma um teor de GABA aumentado em comparação com um célula vegete do tipo selvagem não transformada correspondente, uma planta ou uma parte da mesmas é conferido.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, a atividade da Azotobacter vinelandii molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico SEQ ID N°: 2553 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 2554, respectivamente é aumentado ou gerado, por exemplo, se uma atividade de uma molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico ou polipeptídeo ou a sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, como descrito na tabela I. II ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como uma molécula de ácido nucleico SEQ ID N°: 2553 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 2554. respectivamente é aumentado ou gerado ou se uma atividade “fator de alongamento Tu” é aumentado ou gerado em uma célula vegetal, planta or parte da mesma um teor de GABA aumentado em comparação com um céluk vegetal do tipo selvagem não transformada correspondente, uma planta oi uma parte da mesmas é conferido.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, £ atividade da Azotobacter vinelandii molécula de ácido nucleico ou un polipeptídeo que compreende um ácido nucleico SEQ ID N°: 3408 oi polipeptídeo SEQ ID N°: 3409, respectivamente é aumentado ou gerado, po: exemplo, se uma atividade de unia molécula de ácido nucleico ou un polipeptídeo que compreende um ácido nucleico ou polipeptídeo ou ; sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, como descrito na tabela 1 II ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como uma molécula de ácid< nucleico SEQ ID N°: 3408 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 340S respectivamente é aumentado ou gerado ou se uma atividade “Proteín permease de transportador ABC” é aumentado ou gerado em uma célul vegetal, planta ou parte da mesma um teor de GABA aumentado er comparação com um célula vegetal do tipo selvagem não transformad correspondente, uma planta ou uma parte da mesmas é conferido.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, a atividade da Azotobacter vinelandii molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico SEQ ID N°: 3564 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 3565, respectivamente é aumentado ou gerado, por exemplo, se uma atividade de uma molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico ou polipeptídeo ou a sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, como descrito na tabela I. II ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como uma molécula de ácidc nucleico SEQ ID N°: 3564 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 3565; respectivamente é aumentado ou gerado ou se uma atividade “hidrolase” e aumentado ou gerado em uma célula vegetal, planta ou parte da mesma um teor de GABA aumentado em comparação com um célula vegetal do tipc selvagem não transformada correspondente, uma planta ou uma parte dz mesmas é conferido.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, ê atividade da Azotobacter vinelandii molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico SEQ ID N°: 3728 oi polipeptídeo SEQ ID N°: 3729, respectivamente é aumentado ou gerado, poi exemplo, se uma atividade de uma molécula de ácido nucleico ou un polipeptídeo que compreende um ácido nucleico ou polipeptídeo ou ; sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, como descrito na tabela I II ou I V, coluna 7 na mesma linha respectiva como uma molécula de ácidc nucleico SEQ ID N°: 3728 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 3729 respectivamente é aumentado ou gerado ou se uma atividads “fumarilacetoacetato hidrolase” é aumentado ou gerado em uma célul; vegetal, planta ou parte da mesma um teor de GABA aumentado en comparação com um célula vegetal do tipo selvagem não transformad. correspondente, uma planta ou uma parte da mesmas é conferido.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, a atividade do Escherichia coli molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico SEQ ID N°: 4068 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 4069, respectivamente é aumentado ou gerado, por exemplo, se uma atividade de uma molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico ou polipeptídeo ou a sequência de consensc ou o motivo de polipeptídeo, como descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7 ηε mesma linha respectiva como uma molécula de ácido nucleico SEQ ID N° 4068 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 4069, respectivamente é aumentado ο i gerado ou se uma atividade “glicose desidrogenase” é aumentado ou geradc em uma célula vegetal, planta ou parte da mesma um teor de GAB4 aumentado em comparação com um célula vegetal do tipo selvagem nãc transformada correspondente, uma planta ou uma parte da mesmas t conferido.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, í atividade do Esclierichia coli molécula de ácido nucleico ou um polipeptídec que compreende um ácido nucleico SEQ ID N°: 4176 ou polipeptídeo SEC ID N°: 4177, respectivamente é aumentado ou gerado, por exemplo, se um; atividade de uma molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo qu< compreende um ácido nucleico ou polipeptídeo ou a sequência de consens* ou o motivo de polipeptídeo, como descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7 n; mesma linha respectiva como uma molécula de ácido nucleico SEQ ID N° 4176 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 4177, respectivamente é aumentado oi gerado ou se uma atividade “serina protease” é aumentado ou gerado em um; célula vegetal, planta ou parte da mesma um teor de GABA aumentado en comparação com um célula vegetal do tipo selvagem não transformad correspondente, uma planta ou uma parte da mesmas é conferido.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, atividade do Escherichia coli molécula de ácido nucleico ou um polipeptíde que compreende um ácido nucleico SEQ ID N°: 4364 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 4365, respectivamente é aumentado ou gerado, por exemplo, se uma atividade de uma molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico ou polipeptídeo ou a sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, como descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como uma molécula de ácido nucleico SEQ ID N°: 4364 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 4365, respectivamente é aumentado ou gerado ou se uma atividade “proteína de ligação de ATP” é aumentado ou gerado em uma célula vegetal, planta ou parte da mesma um teor de GABA aumentado em comparação com um célula vegetal do tipo selvagem não transformada correspondente, uma planta ou uma parte da mesmas é conferido.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, a atividade do Escherichia coli molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico SEQ ID N°: 4717 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 4718, respectivamente é aumentado ou gerado, por exemplo, se uma atividade de uma molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico ou polipeptídeo ou a sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, como descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7 ηε mesma linha respectiva como uma molécula de ácido nucleico SEQ ID N° 4717 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 4718, respectivamente é aumentado oi gerado ou se lima atividade “isocorismato sintase” é aumentado ou gerado en uma célula vegetal, planta ou parte da mesma um teor de GABA aumentadc em comparação com um célula vegetal do tipo selvagem não transformadí correspondente, uma planta ou uma parte da mesmas é conferido.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, í atividade do Escherichia coli molécula de ácido nucleico ou um polipeptídec que compreende um ácido nucleico SEQ ID N°: 4864 ou polipeptídeo SEÇ ID N°: 4865, respectivamente é aumentado ou gerado, por exemplo, se uim atividade de uma molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico ou polipeptídeo ou a sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, como descrito na tabela I, ΤΪ ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como uma molécula de ácido nucleico SEQ ID N°: 4864 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 4865, respectivamente é aumentado ou gerado ou se uma atividade “Proteína transportadora do tipo MFS” é aumentado ou gerado em uma célula vegetal, planta ou parte da mesma um teor de GABA aumentado em comparação com um célula vegetal do tipc selvagem não transformada correspondente, uma planta ou uma parte da mesmas é conferido.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, ε atividade do Escherichia coli molécula de ácido nucleico ou um polipeptídec que compreende um ácido nucleico SEQ ID N°: 4903 ou polipeptídeo SEÇ ID N°: 4904, respectivamente é aumentado ou gerado, por exemplo, se urm atividade de uma molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico ou polipeptídeo ou a sequência de consensc ou o motivo de polipeptídeo, como descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7 m mesma linha respectiva como uma molécula de ácido nucleico SEQ ID N° 4903 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 4904, respectivamente é aumentado oi gerado ou se uma atividade “proteína M003” é aumentado ou gerado em um; célula vegetal, planta ou parte da mesma um teor de GABA aumentado en comparação com um célula vegetal do tipo selvagem não transformad; correspondente, uma planta ou uma parte da mesmas é conferido.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, ; atividade do Escherichia coli molécula de ácido nucleico ou um polipeptídei que compreende um ácido nucleico SEQ ID N°: 4909 ou polipeptídeo SE( ID N°: 4910, respectivamente é aumentado ou gerado, por exemplo, se um atividade de uma molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo qu compreende um ácido nucleico ou polipeptídeo ou a sequência de consens ou o motivo de polipeptídeo, como descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como uma molécula de ácido nucleico SEQ ID N°: 4909 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 4910, respectivamente é aumentado ou gerado ou se uma atividade “proteína bl522” é aumentado ou gerado em uma célula vegetal, planta ou parte da mesma um teor de GABA aumentado em comparação com um célula vegetal do tipo selvagem não transformada correspondente, uma planta ou uma parte da mesmas é conferido.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, a atividade do Escherichia coli molécula de ácido nucleico ou um polipeptídec que compreende um ácido nucleico SEQ ID N°: 4954 ou polipeptídeo SEC ID N°: 4955, respectivamente é aumentado ou gerado, por exemplo, se uma atividade de uma molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico ou polipeptídeo ou a sequência de consensc ou o motivo de polipeptídeo, como descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7 m mesma linha respectiva como uma molécula de ácido nucleico SEQ ID N° 4954 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 4955, respectivamente é aumentado oi gerado ou se uma atividade “proteína b2739” é aumentado ou gerado em um; célula vegetal, planta ou parte da mesma um teor de GABA aumentado en comparação com um célula vegetal do tipo selvagem não transformad correspondente, uma planta ou uma parte da mesmas é conferido.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, atividade do Escherichia coli molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico SEQ ID N°: 5121 ou polipeptídeo SEC ID N°: 5122, respectivamente é aumentado ou gerado, por exemplo, se um atividade de uma molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo qu compreende um ácido nucleico ou polipeptídeo ou a sequência de consens ou o motivo de polipeptídeo, como descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7 n mesma linha respectiva como uma molécula de ácido nucleico SEQ ID Nc 5121 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 5122, respectivamente é aumentado o gerado ou se uma atividade “proteína b3646” é aumentado ou gerado em uma célula vegetal, planta ou parte da mesma um teor de GABA aumentado em comparação com um célula vegetal do tipo selvagem não transformada correspondente, uma planta ou uma parte da mesmas é conferido.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, a atividade do Escherichia coli molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico SEQ ID N°: 5319 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 5320, respectivamente é aumentado ou gerado, por exemplo, se uma atividade de uma molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico ou polipeptídeo ou a sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, como descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como uma molécula de ácido nucleico SEQ ID N°: 5319 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 5320, respectivamente é aumentado or gerado ou se uma atividade “proteína B4029” é aumentado ou gerado em uitu célula vegetal, planta ou parte da mesma um teor de GABA aumentado en: comparação com um célula vegetal do tipo selvagem não transformada correspondente, uma planta ou uma parte da mesmas é conferido.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, ; atividade do Escherichia coli molécula de ácido nucleico ou um polipeptídec que compreende um ácido nucleico SEQ ID N°: 5387 ou polipeptídeo SEÇ ID N°: 5388, respectivamente é aumentado ou gerado, por exemplo, se um; atividade de uma molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo qu< compreende um ácido nucleico ou polipeptídeo ou a sequência de consensc ou o motivo de polipeptídeo, como descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7 n; mesma linha respectiva como uma molécula de ácido nucleico SEQ ID N° 5387 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 5388, respectivamente é aumentado oi gerado ou se uma atividade “acetiltransferase” é aumentado ou gerado en uma célula vegetal, planta ou parte da mesma um teor de GABA aumentad· em comparação com um célula vegetal do tipo selvagem não transformad correspondente, uma planta ou uma parte da mesmas é conferido.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, a atividade do Physcomitrella patens molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico SEQ ID N°: 5458 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 5459, respectivamente é aumentado ou gerado, por exemplo, se uma atividade de uma molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico ou polipeptídeo ou a sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, como descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como uma molécula de ácido nucleico SEQ ID N°: 5458 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 5459, respectivamente é aumentado ou gerado ou se uma atividade “proteína carreadora de acila” é aumentado ou gerado em uma célula vegetal, planta ou parte da mesma um teor de GABA aumentado em comparação com um céluh vegetal do tipo selvagem não transformada correspondente, uma planta ot uma parte da mesmas é conferido.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, í atividade do Synechocystis sp. molécula de ácido nucleico ou urr polipeptídeo que compreende um ácido nucleico SEQ ID N°: 6041 oi polipeptídeo SEQ ID N°: 6042, respectivamente é aumentado ou gerado, po: exemplo, se uma atividade de uma molécula de ácido nucleico ou un polipeptídeo que compreende um ácido nucleico ou polipeptídeo ou ; sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, como descrito na tabela I II ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como uma molécula de ácid< nucleico SEQ ID N°: 6041 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 6042 respectivamente é aumentado ou gerado ou se uma atividade “geranilgerani pirofosfato sintase” é aumentado ou gerado em uma célula vegetal, planta oi parte da mesma um teor de GABA aumentado em comparação com um célul vegetal do tipo selvagem não transformada correspondente, uma planta o uma parte da mesmas é conferido.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, a atividade do Thermus thermophilus molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico SEQ ID N°: 6469 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 6470, respectivamente é aumentado ou gerado, por exemplo, se uma atividade de uma molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico ou polipeptídeo ou a sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, como descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como uma molécula de ácido nucleico SEQ ID N°: 6469 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 6470, respectivamente é aumentado ou gerado ou se uma atividade “Subunidade de transi ocase de proteína independente de Sec” é aumentado ou gerado em uma célula vegetal, planta ou parte da mesma um teor de GABA aumentado err comparação com um célula vegetal do tipo selvagem não transformada correspondente, uma planta ou uma parte da mesmas é conferido Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, a atividade dc Thermus thermophilus molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico SEQ ID N°: 6739 ou polipeptídeo SEQ ΪΓ N°: 6740, respectivamente é aumentado ou gerado, por exemplo, se um; atividade de uma molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico ou polipeptídeo ou a sequência de consensf ou o motivo de polipeptídeo, como descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7 n; mesma linha respectiva como uma molécula de ácido nucleico SEQ ID N° 6739 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 6740, respectivamente é aumentado oi gerado ou se uma atividade “homocitrato sintase” é aumentado ou gerado en uma célula vegetal, planta ou parte da mesma um teor de GABA aumentad< em comparação com um célula vegetal do tipo selvagem não transformad correspondente, uma planta ou uma parte da mesmas é conferido.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, atividade do molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo d Saccharomyces cerevisiae que compreende um ácido nucleico SEQ ID N°: 7510 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 7511, respectivamente é aumentado ou gerado, por exemplo, se uma atividade de uma molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico ou polipeptídeo ou a sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, como descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como uma molécula de ácido nucleico SEQ ID N°: 7510 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 7511, respectivamente é aumentado ou gerado ou se uma atividade “poligalactuiOnase” é aumentado ou gerado em uma célula vegetal, planta ou parte da mesma um teor de GABA aumentado em comparação com um célula vegetal do tipo selvagem não transformada correspondente, uma planta ou uma parte da mesmas é conferido.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, a atividade do molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo de Saccharomyces cerevisiae que compreende um ácido nucleico SEQ ID N° 7633 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 7634, respectivamente é aumentado ot gerado, por exemplo, se uma atividade de uma molécula de ácido nucleico oi um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico ou polipeptídeo ou t sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, como descrito na tabela I II ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como uma molécula de ácidc nucleico SEQ ID N°: 7633 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 7634 respectivamente é aumentado ou gerado ou se uma atividade “tiorredoxina” ( aumentado ou gerado em uma célula vegetal, planta ou parte da mesma un teor de GABA aumentado em comparação com um célula vegetal do tip< selvagem não transformada correspondente, uma planta ou uma parte d; mesmas é conferido.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, , atividade do Brassica napus molécula de ácido nucleico ou um polipeptíde< que compreende um ácido nucleico SEQ ID N°: 53 ou polipeptídeo SEQ II Ν°: 54, respectivamente é aumentado ou gerado, por exemplo, se uma atividade de uma molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico ou polipeptídeo ou a sequência de consensc ου o motivo de polipeptídeo, como descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7 m mesma linha respectiva como uma molécula de ácido nucleico SEQ ID N°: 53 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 54, respectivamente é aumentado ou gerado oi se uma atividade “piruvato cinase” é aumentado ou gerado em uma céluh vegetal, planta ou parte da mesma um. teor de GABA aumentado err comparação com um célula vegetal do tipo selvagem não transformadí correspondente, uma planta ou uma parte da mesmas é conferido.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, í atividade do molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo áí Saccharomyces cerevisiae que compreende um ácido nucleico SEQ ID N° 7137 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 7138, respectivamente é aumentado oi gerado, por exemplo, se uma atividade de uma molécula de ácido nucleico oi um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico ou polipeptídeo ou ; sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, como descrito na tabela I II ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como uma molécula de ácid< nucleico SEQ ID N°: 7137 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 7138 respectivamente é aumentado ou gerado ou se uma atividade “beta-ceto redutase microssômica” é aumentado ou gerado em uma célula vegetal, plant; ou parte da mesma um teor de GABA aumentado em comparação com un célula vegetal do tipo selvagem não transformada correspondente, uma plant ou uma parte da mesmas é conferido.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, atividade do molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo d Saccharomyces cerevisiae que compreende um ácido nucleico SEQ ID Nc 7208 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 7209, respectivamente é aumentado o gerado, por exemplo, se uma atividade de uma molécula de ácido nucleico o um polipeptideo que compreende um ácido nucleico ou polipcptídeo ou a sequência de consenso ou o motivo de polipeptideo, como descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como uma molécula de ácido nucleico SEQ ID N°: 7208 ou polipeptideo SEQ ID N°: 7209, respectivamente é aumentado ou gerado ou se urna atividade “permease de aminoácido de cadeia ramificada “ é aumentado ou gerado em uma célula vegetal, planta ou parte da mesma um teor de GABA aumentado em comparação com um célula vegetal do tipo selvagem não transformada correspondente, uma planta ou uma parte da mesmas é conferido.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, a atividade do molécula de ácido nucleico ou um polipeptideo de Saccharomyces cerevisiae que compreende um ácido nucleico SEQ ID N°: 7274 ou polipeptideo SEQ ID N°: 7275, respectivamente é aumentado ou gerado, por exemplo, se uma atividade de uma molécula de ácido nucleico ou um polipeptideo que compreende um ácido nucleico ou polipeptideo ou a sequência de consenso ou o motivo de polipeptideo, como descrito na tabela 1 II ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como uma molécula de ácidc nucleico SEQ ID N°: 7274 ou polipeptideo SEQ ID N°: 7275 respectivamente é aumentado ou gerado ou se uma atividade “monooxigenase de biossíntese de ubiquinona “ é aumentado ou gerado em uma célula vegetal planta ou parte da mesma um teor de GABA aumentado em comparação corr um célula vegetal do tipo selvagem não transformada correspondente, um; planta ou uma parte da mesmas é conferido. Consequentemente, em um; forma de realização, no caso, a atividade do molécula de ácido nucleico oi um polipeptideo de Saccharomyces cerevisiae que compreende um ácidc nucleico SEQ ID N°: 7489 ou polipeptideo SEQ ID N°: 7490 respectivamente é aumentado ou gerado, por exemplo, se uma atividade d< uma molécula de ácido nucleico ou um polipeptideo que compreende un ácido nucleico ou polipeptideo ou a sequência de consenso ou o motivo d polipeptídeo, como descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como uma molécula de ácido nucleico SEQ ID N°: 7489 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 7490, respectivamente é aumentado ou gerado ou se uma atividade “proteína YHR213W” é aumentado ou gerado em uma célula vegetal, planta ou parte da mesma um teor de GABA aumentado em comparação com um célula vegetal do tipo selvagem não transformada correspondente, uma planta ou uma parte da mesmas é conferido.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, a atividade do molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo de Saccharomyces cerevisiae que compreende um ácido nucleico SEQ ID N°: 8239 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 8240, respectivamente é aumentado ou gerado, por exemplo, se uma atividade de uma molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico ou polipeptídeo ou a sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, como descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como uma molécula de ácido nucleico SEQ ID N°: 8239 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 8240, respectivamente é aumentado ou gerado ou se uma atividade “proteína ribossômica 60S” é aumentado ou gerado em uma célula vegetal, planta ou parte da mesma um teor de GABA aumentado em comparação com um célula vegetal do tipo selvagem não transformada correspondente, uma planta ou uma parte da mesmas é conferido.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, ε atividade do molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo de Saccharomyces cerevisiae que compreende um ácido nucleico SEQ ID N° 8397 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 8398, respectivamente é aumentado ou gerado, por exemplo, se uma atividade de uma molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico ou polipeptídeo ou ε sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, como descrito na tabela I II ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como uma molécula de ácidc nucleico SEQ ID N°: 8397 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 8398, respectivamente é aumentado ou gerado ou se uma atividade “proteína relacionada com autofagia” é aumentado ou gerado em uma célula vegetal, planta ou parte da mesma um teor de GABA aumentado em comparação com um célula vegetal do tipo selvagem não transformada correspondente, uma planta ou uma parte da mesmas é conferido.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, a atividade do molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo de Saccharomyces cerevisiae que compreende um ácido nucleico SEQ ID N°: 8227 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 8228, respectivamente é aumentado or gerado, por exemplo, se uma atividade de uma molécula de ácido nucleico oi um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico ou polipeptídeo ou £ sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, como descrito na tabela I II ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como uma molécula de ácidc nucleico SEQ ID N°: 8227 ou polipeptídeo SEQ ID N°; 8228 respectivamente é aumentado ou gerado ou se uma atividade “subunidade dc citocromo c oxidase VIU” é aumentado ou gerado em uma célula vegetal planta ou parte da mesma um teor de GABA aumentado em comparação con um célula vegetal do tipo selvagem não transformada correspondente, um; planta ou uma parte da mesmas é conferido.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, ; atividade do molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo d< Saccharomyces cerevisiae que compreende um ácido nucleico SEQ ID N° 8423 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 8424, respectivamente é aumentado o\ gerado, por exemplo, se uma atividade de uma molécula de ácido nucleico oi um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico ou polipeptídeo ou ; sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, como descrito na tabela I II ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como uma molécula de ácidc nucleico SEQ ID N°: 8423 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 8424 respectivamente é aumentado ou gerado ou se uma atividade “permease de aminoácido de cadeia ramificada “ é aumentado ou gerado em uma célula vegetal, planta ou parte da mesma um teor de GABA aumentado em comparação com um célula vegetal do tipo selvagem não transformada correspondente, uma planta ou uma parte da mesmas é conferido.

Em uma outra forma de realização, uma tolerância aumentada à tensão ambiental abiótica e/ou característica relacionada com o rendimento aumentado, em particular tolerância à temperatura baixa aumentada, em comparação com uma planta do tipo selvagem não modificada, por exemplo, não transformada correspondente é conferido se uma atividade de um polipeptídeo que compreende um polipeptídeo mostrado na SEQ ID N° 2493 ou codificado por uma molécula de ácido nucleico que compreende uma molécula de ácido nucleico mostrado na SEQ ID N° 2492 ou um homólogo da dita molécula de ácido nucleico ou polipeptídeo, é aumentado ou gerado. Por exemplo, a atividade de uma molécula de ácido nucleico correspondente ou um polipeptídeo derivado de Arabidopsis thaliana é aumentado ou gerado, preferivelmente que compreende uma molécula de ácido nucleico mostrado na SEQ ID N° 2492 ou polipeptídeo mostrado na SEQ ID N° 2493. respectivamente ou um homólogo deste. Por exemplo, uma tolerância aumentada à tensão ambiental abiótica, em particular tolerância à temperatura baixa aumentada, em comparação com uma planta do tipo selvagem nãc modificada, por exemplo, não transformada correspondente é conferido se uma atividade “proteína At5g 16650" ou se uma atividade de uma molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico ot polipeptídeo ou a sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7, a mesma linha respectiva como SEÇ ID N°: 2492 ou SEQ ID N°: 2493, respectivamente, é aumentado ou geradc em uma planta ou parte da mesma. Preferivelmente, o aumento ocorre citoplásmico.

Particularmente, um aumento de rendimento de 1,05 vez a 1,075 vez, por exemplo, mais pelo menos 100 % deste, sob condições de temperatura baixa é conferido em comparação com uma correspondente planta não modificada, por exemplo, não transformada.

Em uma outra forma de realização, uma tolerância aumentada à tensão ambiental abiótica e/ou característica relacionada com o rendimento aumentado, em particular tolerância à temperatura baixa aumentada, em comparação com uma planta do tipo selvagem não modificada, por exemplo, não transformada correspondente é conferido se uma atividade de um polipeptídeo que compreende um polipeptídeo mostrado na SEQ ID N° 7138 ou codificado por uma molécula de ácido nucleico que compreende uma molécula de ácido nucleico mostrado na SEQ ID N° 7137, ou um homólogo da dita molécula de ácido nucleico ou polipeptídeo, é aumentado ou gerado. Por exemplo, a atividade de uma molécula de ácido nucleico correspondente ou um polipeptídeo derivado de Saccharomyces cerevisiae é aumentado ou gerado, preferivelmente que compreende uma molécula de ácido nucleico mostrado na SEQ ID N° 7137 ou polipeptídeo mostrado na SEQ ID N° 7138. respectivamente, ou um homólogo deste. Por exemplo, uma tolerância aumentada à tensão ambiental abiótica, em particular tolerância à temperatura baixa aumentada, em comparação com uma planta do tipo selvagem nãc modificada, por exemplo, não transformada correspondente é conferido se uma atividade “beta-ceto-redutase microssômica” ou se uma atividade de uma molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácidc nucleico ou polipeptídeo ou a sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7, a mesma linha respectiva como SEQ ID N°: 7137 ou SEQ ID N°: 7138, respectivamente, é aumentade ou gerado em uma planta ou parte da mesma. Preferivelmente, o aumente ocorre citoplásmico.

Particularmente, um aumento de rendimento de 1,05 vez £ 1,068 vez, por exemplo mais pelo menos 100 % deste, sob condições de temperatura baixa é conferido em comparação com uma correspondente planta não modificada, por exemplo, não transformada.

Em uma outra forma de realização, uma tolerância aumentada à tensão ambiental abiótica e/ou característica relacionada com o rendimento aumentado, em particular tolerância à temperatura baixa aumentada, em comparação com uma planta do tipo selvagem não modificada, por exemplo, não transformada correspondente é conferido se uma atividade de um polipeptídeo que compreende um polipeptídeo mostrado na SEQ ID N° 7205 ou codificado por uma molécula de ácido nucleico que compreende uma molécula de ácido nucleico mostrado na SEQ TD N° 7208, ou um homologe da dita molécula de ácido nucleico ou polipeptídeo, é aumentado ou gerado Por exemplo, a atividade de uma molécula de ácido nucleico correspondente ou um polipeptídeo derivado de Saccharomyces cerevisiae é aumentado oi gerado, preferivelmente que compreende uma molécula de ácido nucleicc mostrado na SEQ ID N° 7208 ou polipeptídeo mostrado na SEQ ID N° 7209 respectivamente, ou um homólogo deste. Por exemplo, uma tolerânch aumentada à tensão ambiental abiótica, em particular tolerância à temperatur; baixa aumentada, em comparação com uma planta do tipo selvagem nã< modificada, por exemplo, não transformada correspondente é conferido s< uma atividade “permease de aminoácído de cadeia ramificada “ ou se um; atividade de uma molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo qu< compreende um ácido nucleico ou polipeptídeo ou a sequência de consens< ou o motivo de polipeptídeo, descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7, a mesm. linha respectiva como SEQ ID N°: 7208 ou SEQ ID N°: 7205 respectivamente, é aumentado ou gerado em uma planta ou parte da mesmr Preferivelmente, o aumento ocorre citoplásmico.

Particularmente, um aumento de rendimento de 1,05 vez 1,206 vez, por exemplo mais pelo menos 100 % deste, sob condições d temperatura baixa é conferido em comparação com uma correspondente planta não modificada, por exemplo, não transformada.

Em uma outra forma de realização, uma tolerância aumentada à tensão ambiental abiótica e/ou característica relacionada com o rendimento aumentado, em particular tolerância à temperatura baixa aumentada, em comparação com uma planta do tipo selvagem não modificada, por exemplo, não transformada correspondente é conferido se uma atividade de um polipeptídeo que compreende um polipeptídeo mostrado na SEQ ID N° 824C ou codificado por uma molécula de ácido nucleico que compreende ums molécula de ácido nucleico mostrado na SEQ ID N° 8239, ou um homologe da dita molécula de ácido nucleico ou polipeptídeo, é aumentado ou gerado Por exemplo, a atividade de uma molécula de ácido nucleico correspondente ou um polipeptídeo derivado de Saccharomyces cerevisiae é aumentado 01 gerado, preferivelmente que compreende uma molécula de ácido nucleicc mostrado na SEQ ID N° 8239 ou polipeptídeo mostrado na SEQ ID N° 8240 respectivam ente, ou um homólogo deste. Por exemplo, uma tolerâncú aumentada à tensão ambiental abiótica, em particular tolerância à temperatur; baixa aumentada, em comparação com uma planta do tipo selvagem nãt modificada, por exemplo, não transformada correspondente é conferido s< uma atividade “proteína ribossômica 6 OS” ou se uma atividade de um; molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácid< nucleico ou polipeptídeo ou a sequência de consenso ou o motivo d polipeptídeo, descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7, a mesma linha respectiv como SEQ ID N°: 8239 ou SEQ ID N°: 8240, respectivamente, é aumentadi ou gerado em uma planta ou parte da mesma. Preferivelmente, o aument ocorre citoplásmico.

Particularmente, um aumento de rendimento de 1,05 vez 1,230 vez, por exemplo mais pelo menos 100 % deste, sob condições d temperatura baixa é conferido em comparação com uma correspondent planta não modificada, por exemplo, não transformada.

Em uma outra forma de realização, uma tolerância aumentada à tensão ambiental abiótica e/ou característica relacionada com o rendimento aumentado, em particular tolerância à temperatura baixa aumentada, em comparação com uma planta do tipo selvagem não modificada, por exemplo, não transformada correspondente é conferido se uma atividade de um polipeptídeo que compreende um polipeptídeo mostrado na SEQ ID N° 8424 ou codificado por uma molécula de ácido nucleico que compreende uma molécula de ácido nucleico mostrado na SEQ ID N° 8423, ou um homólogo da dita molécula de ácido nucleico ou polipeptídeo, é aumentado ou gerado. Por exemplo, a atividade de uma molécula de ácido nucleico correspondente ou um polipeptídeo derivado de Saccharomyces cerevisiae é aumentado ou gerado, preferivelmente que compreende uma molécula de ácido nucleico mostrado na SEQ ID N° 8423 ou polipeptídeo mostrado na SEQ ID N° 8424, respectivamente, ou um homólogo deste. Por exemplo, uma tolerância aumentada à tensão ambiental, abiótica, em particular tolerância à temperatura baixa aumentada, em comparação com uma planta do tipo selvagem nãc modificada, por exemplo, não transformada correspondente é conferido se uma atividade “permease de aminoácido de cadeia ramificada “ ou se ume atividade de uma molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico ou polipeptídeo ou a sequência de consensc ou o motivo de polipeptídeo, descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7, a mesma linha respectiva como SEQ ID N°: 8423 ou SEQ ID N°: 8424 respectivamente, é aumentado ou gerado em uma planta ou parte da mesma Preferivelmente, o aumento ocorre citoplásmico.

Particularmente, um aumento de rendimento de 1,05 vez ; 1,206 vez, por exemplo mais pelo menos 100 % deste, sob condições d< temperatura baixa é conferido em comparação com uma correspondenfi planta não modificada, por exemplo, não transformada.

Em uma outra forma de realização, uma tolerância aumentada à tensão ambiental abiótica e/ou característica relacionada com o rendimento aumentado, em particular rendimento intrínseco aumentado, em comparação com uma planta do tipo selvagem não modificada, por exemplo, não transformada correspondente é conferido se uma atividade de um polipeptídeo que compreende um polipeptídeo mostrado na SEQ ID N° 7209 ou codificado por uma molécula de ácido nucleico que compreende uma molécula de ácido nucleico mostrado na SEQ ID N° 7208, ou um homólogo da dita molécula de ácido nucleico ou polipeptídeo, é aumentado ou gerado. Por exemplo, a atividade de uma molécula de ácido nucleico correspondente ou um polipeptídeo derivado de Saccharomyces cerevisiae é aumentado ou gerado, preferivelmente que compreende uma molécula de ácido nucleico mostrado na SEQ ID N° 7208 ou polipeptídeo mostrado na SEQ ID N° 7209, respectivamente, ou um homólogo deste. Por exemplo, uma tolerância aumentada à tensão ambiental abiótica e/ou característica relacionada com. c rendimento aumentado, cm particular rendimento intrínseco aumentado, en: comparação com uma planta do tipo selvagem não modificada, por exemplo não transformada correspondente é conferido se uma atividade “permease dc aminoácido de cadeia ramificada “ ou se uma atividade de uma molécula dc ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico o\ polipeptídeo ou a sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7, a mesma linha respectiva como SEC ID N°: 7208 ou SEQ ID N°: 7209, respectivamente, é aumentado ou gerad< em uma planta ou parte da mesma. Preferivelmente, o aumento ocom citoplásmico.

Particularmente, um aumento de rendimento de 1,05 vez 1,522 vez, por exemplo mais pelo menos 100 % deste, sob condições padrãc por exemplo, na ausência de deficiência de nutriente e/ou condições de tensã é conferido em comparação com um controle correspondente, por exemple uma planta não modificada, por exemplo, não transformada.

Por exemplo, uma tolerância aumentada à tensão ambiental abiótica e/ou característica relacionada com o rendimento aumentado, em particular rendimento intrínseco aumentado, em comparação com uma planta do tipo selvagem não modificada, por exemplo, não transformada correspondente é conferido se uma atividade “permease de aminoácido de cadeia ramificada “ ou se uma atividade de uma molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico ou polipeptídeo ou a sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7, a mesma linha respectiva como SEQ ID N°: 7208 ou SEQ ID N°: 7209, respectivamente, é aumentado ou gerado em uma planta ou parte da mesma. Preferivelmente, o aumento ocorre plastídico.

Particularmente, um aumento de rendimento de 1,05 vez a 1,232 vez, por exemplo mais pelo menos 100 % deste, sob condições padrão, por exemplo, na ausência de deficiência de nutriente e/ou condições de tensão é conferido em comparação com um controle correspondente, por exemplo, uma planta não modificada, por exemplo, não transformada.

Em uma outra forma de realização, uma tolerância aumentada à tensão ambiental abiótica e/ou característica relacionada com o rendimentc aumentado, em particular rendimento intrínseco aumentado, em comparaçãc com uma planta do tipo selvagem não modificada, por exemplo, nãc transformada correspondente é conferido se uma atividade de um polipeptídec que compreende um polipeptídeo mostrado na SEQ ID N° 8240 ou codificadc por uma molécula de ácido nucleico que compreende uma molécula de ácidc nucleico mostrado na SEQ ID N° 8239, ou um homólogo da dita molécula àt ácido nucleico ou polipeptídeo, é aumentado ou gerado. Por exemplo, í atividade de uma molécula de ácido nucleico correspondente ou un polipeptídeo derivado de Saccharomyces cerevisiae é aumentado ou gerado preferivelmente que compreende uma molécula de ácido nucleico mostradc na SEQ ID N° 8239 ou polipeptídeo mostrado na SEQ ID N° 8240, respectivamente, ou um homólogo deste. Por exemplo, uma tolerância aumentada à tensão ambiental abiótica e/ou característica relacionada com o rendimento aumentado, em particular rendimento intrínseco aumentado, em comparação com urna planta do tipo selvagem não modificada, por exemplo, não transformada correspondente é conferido se uma atividade “proteína ribossômica 60S” ou se uma atividade de uma molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico ou polipeptídeo ou a sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7, a mesma linha respectiva como SEQ ID N°: 8239 ou SEQ ID N°: 8240, respectivamente, é aumentado ou gerado em uma planta ou parte da mesma. Preferivelmente, o aumento ocorre citoplásmico. Particularmente, um aumento de rendimento de 1,05 vez a 1,546 vez, poi: exemplo mais pelo menos 100 % deste, sob condições padrão, por exemplo, na ausência de deficiência de nutriente e/ou condições de tensão é conferido em comparação com um controle correspondente, por exemplo, uma planta não modificada, por exemplo, não transformada.

Em uma outra forma de realização, uma tolerância aumentada à tensão ambiental abiótica e/ou característica relacionada com o rendimentc aumentado, em particular rendimento intrínseco aumentado, em comparaçãc com uma planta do tipo selvagem não modificada, por exemplo, nãc transformada correspondente é conferido se uma atividade de um polipeptídec que compreende um polipeptídeo mostrado na SEQ ED N° 8398 ou codificadc por uma molécula de ácido nucleico que compreende uma molécula de ácidc nucleico mostrado na SEQ ID N° 8397, ou um homólogo da dita molécula ds ácido nucleico ou polipeptídeo, é aumentado ou gerado. Por exemplo, í atividade de uma molécula de ácido nucleico correspondente ou un polipeptídeo derivado de Saccharomyces cerevisiae é aumentado ou gerado preferivelmente que compreende uma molécula de ácido nucleico mostradt na SEQ ID N° 8397 ou polipeptídeo mostrado na SEQ ID N° 8398, respectivamente, ou um homólogo deste. Por exemplo, uma tolerância aumentada à tensão ambiental abiótica e/ou característica relacionada com o rendimento aumentado, em particular rendimento intrínseco aumentado, em comparação com uma planta do tipo selvagem não modificada, por exemplo, não transformada correspondente é conferido se uma atividade “proteína relacionada com autofagia” ou se uma atividade de uma molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico ou polipeptídeo ou a sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo. descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7, a mesma linha respectiva como SEÇ ID N°: 8397 ou SEQ ID N°: 8398, respectivamente, é aumentado ou geradc em uma planta ou parte da mesma. Preferivelmente, o aumento ocorre citoplásmico.

Particularmente, um aumento de rendimento de 1,05 vez í 1,399 vez, por exemplo mais pelo menos 100 % deste, sob condições padrão por exemplo, na ausência de deficiência de nutriente e/ou condições de tensa» é conferido em comparação com um controle correspondente, por exemplo uma planta não modificada, por exemplo, não transformada.

Em uma outra forma de realização, uma tolerância aumentad à tensão ambiental abiótica e/ou característica relacionada com o rendiment» aumentado, em particular rendimento intrínseco aumentado, em comparação com uma planta do tipo selvagem não modificada, por exemplo, não transformada correspondente é conferido se uma atividade de um polipeptídeo que compreende um polipeptídeo mostrado na SEQ ID N° 8424 ou codificad por uma molécula de ácido nucleico que compreende uma molécula de ácid nucleico mostrado na SEQ ID N° 8423, ou um homólogo da dita molécula d ácido nucleico ou polipeptídeo, é aumentado ou gerado. Por exemplo, atividade de uma molécula de ácido nucleico correspondente ou ui polipeptídeo derivado de Saccharomyces cerevisiae é aumentado ou geradc preferivelmente que compreende uma molécula de ácido nucleico mostrado na SEQ ID N° 8423 ou polipeptídeo mostrado na SEQ ID N° 8424. respectivamente, ou um homólogo deste.

Por exemplo, uma tolerância aumentada à tensão ambienta] abiótica e/ou característica relacionada com o rendimento aumentado, em particular rendimento intrínseco aumentado, em comparação com uma planta do tipo selvagem não modificada, por exemplo, não transformada correspondente é conferido se uma atividade “permease de aminoácido de cadeia ramificada “ ou se uma atividade de uma molécula de ácido nucleicc ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico ou polipeptídeo ou a sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, descrito na tabela I, II or IV, coluna 7, a mesma linha respectiva como SEQ ID N°: 8423 ou SEQ TE N°: 8424, respectivamente, é aumentado ou gerado em uma planta ou parte ds mesma. Preferivelmente, o aumento ocorre citoplásmico.

Particularmente, um aumento de rendimento dc 1,05 vez ε 1,522 vez, por exemplo mais pelo menos 100 % deste, sob condições padrão, por exemplo, na ausência de deficiência de nutriente e/ou condições de tensãc é conferido em comparação com um controle correspondente, por exemplo uma planta não modificada, por exemplo, não transformada.

Por exemplo, uma tolerância aumentada à tensão ambienta abiótica e/ou característica relacionada com o rendimento aumentado, eu particular rendimento intrínseco aumentado, em comparação com uma plante do tipo selvagem não modificada, por exemplo, não transformadí correspondente é conferido se uma atividade “permease de aminoácido de cadeia ramificada” ou se uma atividade de uma molécula de ácido nucleico oi um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico ou polipeptídeo ou í sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, descrito na tabela I, II oi IV, coluna 7, a mesma linha respectiva como SEQ ID N°: 8423 ou SEQ IE N°: 8424, respectivamente, é aumentado ou gerado em uma planta ou parte dí mesma. Preferivelmente, o aumento ocorre plastídico.

Em uma outra forma de realização, uma tolerância aumentada à tensão ambiental abiótica e/ou característica relacionada com o rendimento aumentado, em particular resistência à secura aumentada, preferivelmente secura cíclica, em comparação com uma planta do tipo selvagem não modificada, por exemplo, não transformada correspondente é conferido se uma atividade de um polipeptídeo que compreende um polipeptídeo mostrado na SEQ ID N° 7209 ou codificado por uma molécula de ácido nucleico que compreende uma molécula de ácido nucleico mostrado na SEQ ID N° 7208. ou um. homólogo da dita molécula de ácido nucleico ou polipeptídeo, é aumentado ou gerado. Por exemplo, a atividade de uma molécula de ácidc nucleico correspondente ou um polipeptídeo derivado de Saccharomyces cerevisiae é aumentado ou gerado, preferivelmente que compreende ume molécula de ácido nucleico mostrado na SEQ ID N° 7208 ou polipeptídec mostrado na SEQ ID N° 7209, respectivamente, ou um homólogo deste. Poi exemplo, uma tolerância aumentada à tensão ambiental abiótica e/ot característica relacionada com o rendimento aumentado, em parti culai resistência aumentada à secura, preferivelmente secura cíclica, err comparação com uma planta do tipo selvagem não modificada, por exemplo não transformada correspondente é conferido se uma atividade “permease de aminoácido de cadeia ramificada “ ou se uma atividade de uma molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico oi polipeptídeo ou a sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo descrito na tabela 1, II ou IV, coluna 7, a mesma linha respectiva como SEf ID N°: 7208 ou SEQ ID N°: 7209, respectívamente, é aumentado ou gerado em uma planta ou parte da mesma. Preferivelmente, o aumento ocorre plastídico.

Particularmente, um aumento de rendimento de 1,05 vez a 1,351 vez, por exemplo mais pelo menos 100 % deste, é conferido em comparação com um controle correspondente, por exemplo, uma planta nãc modificada, por exemplo, não transformada.

Em uma outra forma de realização, uma tolerância aumentadr à tensão ambiental abiótica e/ou característica relacionada com o rendimente aumentado, em particular resistência à secura aumentada, preferivelmente ciclo seco, em comparação com uma planta do tipo selvagem não modificada, por exemplo, não transformada correspondente é conferido se uma atividade de um polipeptídeo que compreende um polipeptídeo mostrado na SEQ ID Nc 8424 ou codificado por uma molécula de ácido nucleico que compreende unic molécula de ácido nucleico mostrado na SEQ ID N° 8423, ou um homologe da dita molécula de ácido nucleico ou polipeptídeo, é aumentado ou gerado Por exemplo, a atividade de uma molécula de ácido nucleico correspondente ou um polipeptídeo derivado de Saccharomyces cerevisiae é aumentado oi gerado, preferivelmente que compreende uma molécula de ácido nucleicc mostrado na SEQ ID N° 8423 ou polipeptídeo mostrado na SEQ ID N° 8424 respectivamente, ou um homólogo deste. Por exemplo, uma tolerâncu aumentada à tensão ambiental abiótica e/ou característica relacionada com c rendimento aumentado, em particular resistência a secura aumentada preferivelmente secura cíclica, em comparação com uma planta do tipe selvagem não modificada, por exemplo, não transformada correspondente e conferido se uma atividade “permease de aminoácido de cadeia ramificada’ ou se uma atividade de uma molécula de ácido nucleico ou um polipeptídec que compreende uni ácido nucleico ou polipeptídeo ou a sequência d< consenso ou o motivo dc polipeptídeo, descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7 a mesma linha respectiva como SEQ ÍD N°: 8423 ou SEQ ID N°: 8424. respectivamente, é aumentado ou gerado em uma planta ou parte da mesma. Preferivelmente, o aumento ocorre plastídico.

Particularmente, um aumento de rendimento de 1,05 vez ε 1,351 vez, por exemplo mais pelo menos 100 % deste, é conferido eix comparação com um controle correspondente, por exemplo, uma planta nãc modificada, por exemplo, não transformada. para os propósitos da invenção, como uma regra, o plural e pretendido abranger o singular e vice versa. A não ser que especificado de outra maneira, os termos “polinucleotídeos”, “ácido nucleico” e “molécula de ácido nucleico” estão, de maneira intercabeável, no presente contexto. A não ser que especificado de outra maneira, os termos “peptídeo”, “polipeptídeo” e “proteína” estão, de maneira intercabeável no presente contexto. O termo “sequência” pode dizei respeito a polinucleotídeos, ácidos nucleicos, moléculas de ácido nucleico peptídeos, polipeptídeos e proteínas, dependendo do contexto em que o terme “sequência” é usado. Os termos “gene(s)”, “polinucleotídeo”, “sequência dc ácido nucleico”, “sequência de nucleotídeo” ou “moléculas de ácido nucleico’ como usado neste refere-se a uma forma polimérica de nucleotídeos dc qualquer comprimento, ribonucleotídeos ou desoxiribonucleotídeos. O: termos referem-se apenas à estrutura primária da molécula.

Desta maneira, os termos “gene(s)”, “polinucleotídeo” “sequência de ácido nucleico”, “sequência de nucleotídeo” ou “moléculas d< ácido nucleico” como usado neste inclui DNA e/ou RNA de filamento duplo < simples. Estes também incluem tipos conhecidos de modificações, po exemplo, metilação, “coberturas”, substituições de um ou mais do: nucleotídeos de ocorrência natural com um análogo. Preferivelmente, ; sequência de DNA ou RNA compreende uma sequência codificadora qu< codifica o polipeptídeo definido neste.

Uma “sequência codifícadora” é uma sequência de nucleotídeo, que é transcrita em um RNA, por exemplo, ura RNA regulador, tal como um mi RNA, um ta-siRNA, molécula de cossupressão, um RNAi, uma ribozima, etc ou em um mRNA que é traduzido em um polipeptídec quando colocado sob o controle de sequências reguladoras apropriadas. As fronteiras da sequência codificadora são determinadas por um códon de inícic de tradução no terminal 5’ e um códon de interrupção de tradução no termina 3’. Uma sequência codifícadora pode incluir, mas não é limitada a mRNA: cDNA, sequências de nucleotídeo recombinantes ou DNA genômico enquanto os íntrons também podem estar presentes sob certas circunstâncias.

Como usado no presente contexto uma molécula de ácidc nucleico também pode abranger a sequência não traduzida localizada m extremidade 3’ e na 5’ da região do gene codificador, por exemplo pele menos 500, preferivelmente 200, especialmente preferível 100, nucleotídeo: da sequência a montante da extremidade 5’ da região codifícadora e pele menos 100, preferivelmente 50, especialmente preferível 20, nucleotídeos d; sequência a jusante da extremidade 3’ da região do gene codificador. Ne evento, por exemplo, a tecnologia anti-sentido, RNAi, snRNA, dsRNA siRNA, miRNA, ta-siRNA, molécula de co-supressão, ribozima etc. é nsad; nas regiões codificadoras bem como as regiões 5’- e/ou 3’ podem se vantajosamente usadas.

Entretanto, é frequentemente vantajoso escolher a regiã< codifícadora para os propósitos de clonagem e expressão. “Polipeptídeo” refere-se a um polímero de aminoácid< (sequência de aminoácido) e não refere-se a uma comprimento específico d; molécula. Desta maneira, os peptídeos e os oligopeptídeos estão incluído dentro da definição de polipeptídeo. Este termo também refere-se a ou inclu as modificações pós-tradução do polipeptídeo, por exemplo, glicosilações acetilações, fosforilações e outros. Incluídos dentro da definição estão, po exemplo, polipeptídeos contendo um. ou mais análogos de um aminoácido (incluindo, por exemplo, aminoácidos não naturais, etc.), polipeptídeos com ligações substituídas, bem como outras modificações conhecidas na técnica, tanto de ocorrência natural quanto de ocorrência não natural. O termo “Tabela I” como usado neste relatório descritivo deve ser adotado para especificar o conteúdo da Tabela I A e Tabela I B. O termo “Tabela II” usado neste relatório descritivo deve ser adotado para especificai o conteúdo da Tabela II A e Tabela II B. O termo “Tabela I A” usado neste relatório descritivo deve ser adotado para especificar o conteúdo da Tabela 1 A. O termo “Tabela I B” usado neste relatório descritivo deve ser adotadc para especificar o conteúdo da Tabela I B. O termo “Tabela II A” usado neste relatório descritivo deve ser adotado para especificar o conteúdo da tabela II A. O teimo “Tabela II B” usado neste relatório descritivo deve ser adotadc para especificar o conteúdo da Tabela II B. Em uma forma de realizaçãc preferida, o termo “Tabela I” significa Tabela I B. Em uma forma, de realização preferida, o termo “Tabela II” significa Tabela II B. O termo “compreende” ou “que compreende” e suas variações gramaticais quando usadas neste relatório descritivo devem ser tomadas parí especificar a presença de características estabelecidas, números inteiros t etapas ou componentes ou grupos destes, mas não para impedir a presença oi adição de uma ou mais outras características, números inteiros, etapas componentes ou grupos destes.

De acordo com a invenção, uma proteína ou polipeptídeo terr uma “atividade de uma proteína como mostrado na tabela II, coluna 3” se suí atividade de novo ou sua expressão aumentada direta ou indiretamente leva í e confere um teor de GABA aumentado em comparação com um tipc selvagem não transformado correspondente e a proteína têm as atividade: mencionadas acima de uma proteína como mostrado na Tabela II, coluna 3 Por todo o relatório descritivo, a atividade ou preferivelmente a atividadí biológica de uma tal proteína ou polipeptídeo ou uma molécula de ácido nucleico ou sequência que codifica tal proteína ou polipeptídeo é idêntica ou similar se este ainda tiver a atividade biológica ou enzimática de uma proteína como mostrado na tabela II, coluna 3 ou que tenha pelo menos 10 % da atividade enzimática original, preferivelmente 20 %, particularmente preferível 30 %, mais particularmente preferível 40 % em comparação com uma proteína como mostrado na tabela II, coluna 3 ou 5. O termo “aumentado”, “elevado”, “extendido”, “intensificado”, “melhorado” ou “amplificado” diz respeito a uma mudança correspondente de uma propriedade em uma planta, um organismo, uma parte de um organismo tal como um tecido, semente, raiz, folha, flor, etc. ou em uma célula e são intercambeáveis. Preferivelmente, a atividade total no volume é aumentada ou intensificada nos casos se o aumento ou intensificação for relacionado com o aumento ou intensificação de uma atividade de um produto genético, independente se a quantidade de produto genético ou a atividade específica do produto enético ou ambos for aumentada ou intensificada ou se a quantidade, estabilidade ou eficácia de tradução da sequência de ácido nucleico ou gene que codifica quanto ao produto genético for aumentada ou intensificada. O termo “aumento” diz respeito a uma mudança correspondente de uma propriedade de um organismo ou em uma parte de uma planta, um organismo, tal como um tecido, semente, raiz, folha, flor etc. ou em uma célula. Preferivelmente, a atividade total no volume é aumentada nos casos onde o aumento diz respeito ao aumento de uma atividade de um produto genético, independente se a quantidade de produto genético ou s atividade específica do produto genético ou ambas forem aumentadas or geradas ou se a quantidade, estabilidade, ou eficácia de tradução da sequencb de ácido nucleico ou gene que codifica quanto ao produto genético foren aumentados.

Sob “mudança de uma propriedade” é entendido que a atividade, nível de expressão ou quantidade de um produto genético ou o teor de metabólito é mudada em um volume específico com relação a um volume correspondente de um controle, referência ou tipo selvagem,incluindo a nova criação de uma atividade ou expressão. O termo “aumento” inclui a mudança da dita propriedade apenas em partes do indivíduo da presente invenção, por exemplo, a modificação pode ser observada no compartimento de uma célula, como uma organela ou em uma parte de uma planta, como tecido, semente, raiz, folha, flor etc. mas não é detectável se o indivíduo total, isto é, a célula ou a planta completos, for testado.

Consequentemente, o termo “aumento” significa que a atividade específica de uma enzima, bem coroo a quantidade de um compostc ou metabólito, por exemplo, de um polipeptídeo, uma molécula de ácidc nucleico da invenção ou um mRNA ou DNA codificador, pode ser aumentada em um volume. O termo “tipo selvagem”, “controle” ou “referência” sãc intercambeáveis e podem ser uma célula ou uma parte de organismos, tais como uma organela, tal como uma organela semelhante a um cloroplasto or um tecido ou um organismo, em particular uma planta, que não fo: modificada ou tratada de acordo com o processo descrito neste de acordo corr a invenção. Consequentemente, a célula ou uma parte de organismos, ta como uma organela semelhante a um cloroplasto ou um tecido ou un organismo, em particular uma planta usada como o tipo selvagem, controle oi referência corresponde à célula, organismo, planta ou parte da mesma tantc quanto possível e está em qualquer outra propriedade mas no resultado dt processo da invenção como idêntico ao assunto de objetivo da invençãc quando possível. Desta maneira, o controle ou referência do tipo selvagen são tratados de maneira idêntica quando possível, dizendo que apena: condições ou propriedades devem ser diferentes não influenciando à qualidade da propriedade testada.

Preferivelmente, qualquer comparação é realizada sob condições análogas. O termo “condições análogas” significa que todas as condições tais como, por exemplo, cultura ou condições de desenvolvimento, teor e água do solo, temperatura, umidade ou ar ou solo circundantes, condições de ensaio (tal como composição de tampão, temperatura, substratos, cepa de patogênio, concentrações e outros) são mantidas idênticos entre os experimentos a serem comparados. A “referência”, “controle” ou “tipo selvagem” é, preferivelmente um indivíduo, por exemplo, uma organela, uma célula, um tecido, um organismo, em particular uma planta, que não foi modificada ou tratada de acordo com o processo da invenção descrito aqui e é em qualquei outra propriedade tão similar ao assunto de objetivo da invenção quantc possível. A referência, controle ou tipo selvagem está em seu genoma. transcriptoma, proteoma ou metaboloma tão similar quanto possível ac indivíduo da presente invenção. Preferivelmente, o termo célula, tecido oi organismo de “referência” “controle” ou “tipo selvagem”, em particulai planta, diz respeito a uma organela, célula, tecido ou organismo, em partícula] planta, que são quase geneticamente idênticos à organela, célula, tecido 01 organismo, em particular planta, da presente invenção ou uma parte da rnesim preferivelmente 95 %, mais preferidos são 98 %, ainda mais preferidos sãc 99,00 %, em particular 99,10 %, 99,30 %, 99,50 %, 99,70 %, 99,90 %, 99,9S %, 99,999 % ou mais. Mais preferivelmente a “referência”, “controle” oi “tipo selvagem” é um indivíduo, por exemplo, uma organela, mna célula, un tecido, um organismo, que são geneticamente idênticos ao organismo, célul; ou organela usadas de acordo com o processo da invenção exceto que ( responsável ou atividade que confere moléculas de ácido nucleico ou ( produto genético codificado por estes são melhorados, manipulados, trocado: ou introduzidos de acordo com o processo inventivo.

No caso, um controle, referência ou tipo selvagem que difere do objetivo da presente invenção apenas por não ser indivíduo do processo da invenção não pode ser fornecido, um controle, referência ou tipo selvagem pode ser um organismo em que a causa para a modulação de uma atividade que confere o teor de GABA aumentado em comparação com um tipo selvagem não transformado correspondente ou expressão de molécula de ácido nucleico da invenção como descrito aqui foí desligado, por exemplo, pelo nocaute de uma expressão de produto genético responsável, por exemplo, pela inibição anti-sentido, pela inativação de um ativador ou agonista, pela inativação de um inibidor ou antagonista, pela inibição através da adição de anticorpos inibidores, pela adição de compostos ativos como, por exemplo, hormônios, pela introdução de mutantes dominantes negativos, etc. Um produto genético pode ser, por exemplo, nocauteado pela introdução de mutação de ponto de inativação, que leva a uma inibição de atividade enzima ti ca ou uma desestabilização ou uma inibição da capacidade de ligaçãc a cofatores etc.

Consequentemente, o indivíduo de referência preferido é c indivíduo de partida do presente processo da invenção. Preferivelmente, ε referência e o assunto de objetivo da invenção são comparados após ε padronização e a normalização, por exemplo, à quantidade de RN A, DNA, or proteína ou atividade ou expressão total de genes de referência, como geneí de manutenção, tais como ubiquitina, actina ou proteínas ribossomais. O aumento ou modulação de acordo com esta invenção pode ser constitutivo, por exemplo, devido a uma expressão transgênicí permanente estável ou a uma mutação estável no gene endógenc correspondente que codifica uma molécula de ácido nucleico da invenção oi a uma modulação da expressão ou do comportamento de um gene que confen à expressão do polipeptídeo da invenção ou transitório, por exemplo, devido í uma transformação transitória ou adição temporária de um modulador, tal como um agonista ou antagonista ou indutível, por exemplo, após a transformação com uma construção indutível que carrega uma molécula de ácido nucleico da invenção sob o controle de um promotor indutível e adição do indutor, por exemplo, tetraciclina ou como descrito a seguir. O aumento na atividade do polipeptídeo aumenta em uma célula, um tecido, uma organela, um órgão ou um organismo ou uma parte da mesma preferivelmente a pelo menos 5 %, preferivelmente a pelo menos 20 % ou pelo menos 50 %, especialmente preferível pelo menos 70 %, 80 %, 90 % ou mais, muito especialmente preferível são pelo menos 200 %, 300 % ou 400 %, mais preferivelmente são pelo menos 500 % ou mais em comparação com o controle, referência ou tipo selvagem.

Em uma forma de realização o termo aumento significa c aumento em quantidade com relação ao peso do organismo ou parte deste (p/p).

Em uma forma de realização o aumento na atividade de polipeptídeo aumenta em uma organela, tal como um plastídeo. A atividade específica de um polipeptídeo codificado por um; molécula de ácido nucleico da presente invenção ou do polipeptídeo d presente invenção pode ser testado como descrito nos exemplos. Er particular, a expressão de uma proteína em questão em uma célula, pc exemplo, uma célula vegetal em comparação com um controle é um teste fác e pode ser realizado como descrito no estabelecimento da técnica. O termo “aumento” inclui, que um composto ou uma atividac é introduzida em uma célula ou um compartimento subcelular ou organela c novo ou que o composto ou a atividade não foi detectável antes, em outn palavras é “gerado”.

Consequentemente, a seguir, o termo “aumenta” també: compreende o termo “gerar” ou “estimular”. A atividade aumentai manifesta-se por si só em um teor de GABA aumentado em comparação com um célula vegetal do tipo selvagem não transformada correspondente, plant£ ou parte da mesma . A sequência de Ymr052w de Saccharomyces cerevisiae, po: exemplo, como mostrado na coluna 5 da tabela I, [sequências d< Saccharomyces cerevisiae foram publicadas em Goffeau et al., Science 27^ (5287), 546-547, 1996, as sequências de Escherichia coli foram publicada em Blattner et al., Science 277 (5331), 1453-1474 (1997) e sua atividade < publicada descrita como Proteína de captura de fator.

Consequentemente, em uma forma de realização, o process' da presente invenção compreende aumentar ou gerar a atividade de ur produto genético com a atividade de uma “Proteína de captura de fator” d Saccharomyces cerevisiae ou seu equivalente funcional ou seu homólogo, pc exemplo, o aumento de (a) um produto genético de um gene que compreende um molécula de ácido nucleico como mostrado na coluna 5 da tabela I e send descrito na mesma linha respectiva como o dito Ymr052w ou um equivalem funcional ou um homólogo deste como mostrado descrito na coluna 7 c tabela I, preferivelmente um homólogo ou equivalente funcional com mostrado descrito na coluna 7 da tabela I B e sendo descrito na mesma linl respectiva como o dito Ymr052w ou (b) um polipeptídeo que compreende um polipeptídeo, un sequência de consenso ou um motivo de polipeptídeo como mostrado descri na coluna 5 da tabela II e sendo descrito na mesma linha respectiva como dito Ymr052w ou um equivalente funcional ou um homólogo deste cor descrito na coluna 7 da tabela II ou IV, preferivelmente um homólogo < equivalente funcional como descrito na coluna 7 da tabela II B e sen descrito na mesma linha respectiva como o dito Ymr052w, como mencionado neste, para o um teor de GABA aumenta em comparação com um tipo selvagem não transformado correspondente como mencionado.

Consequentemente, em uma forma de realização, a molécuk cuja atividade deve ser aumentada no processo da invenção é o produtc genético com uma atividade descrita como uma “Proteína de captura d( fator”, preferivelmente esta é a molécula da seção (a) ou (b) deste parágrafo. A sequência de Atlg43850 de Arabidopsis thaliana, po: exemplo, como mostrado na coluna 5 da tabela I, [sequências d< Saccliaromyces cerevisiae foram publicadas em Goffeau et al., Science 27* (5287), 546-547, 1996, as sequências de Escherichia colí foram publicada em Blattner et al., Science 277 (5331), 1453-1474 (1997) e sua atividade < publicada descrita como regulador transcripcional.

Consequentemente, em uma forma de realização, o process* da presente invenção compreende aumentar ou gerar a atividade de ur produto genético com a atividade de uma “regulador transcripcionar’ d Arabidopsis thaliana ou seu equivalente funcional ou seu homólogo, pc exemplo, o aumento de (a) um produto genético de um gene que compreende um molécula de ácido nucleico como mostrado na coluna 5 da tabela I e send descrito na mesma linha respectiva como o dito Atlg43850 ou ui equivalente funcional ou um homólogo deste como mostrado descrito r. coluna 7 da tabela I, preferivelmente um homólogo ou equivalente funcion; como mostrado descrito na coluna 7 da tabela I B e sendo descrito na mesrr linha respectiva como o dito Atlg43850 ou (b) um polipeptídeo que compreende um polipeptídeo, uir sequência de consenso ou um motivo de polipeptídeo como mostrado descrii na coluna 5 da tabela II e sendo descrito na mesma linha respectiva como dito Atlg43850 ou um equivalente funcional ou um homólogo deste corr descrito na coluna 7 da tabela II ou IV, preferivelmente um homólogo c equivalente funcional como descrito na coluna 7 da tabela II B e sendc descrito na mesma linha respectiva como o dito Atlg43S50, como mencionado neste, para o um teor de GABA aumentado em comparação com um tipo selvagem não transformado correspondente como mencionado.

Consequentemente, em uma forma de realização, a molécuh cuja atividade deve ser aumentada no processo da invenção é o produte genético com uma atividade descrita como uma “regulador transcripcional” preferivelmente esta é a molécula da seção (a) ou (b) deste parágrafo. A sequência de At2g28890 de Arabidopsis thaliana, po exemplo, como mostrado na coluna 5 da tabela I, [sequências d Saccharomyces cerevisiae foram publicadas em Goffcau et ah, Science 27 (5287), 546-547, 1996, as sequências de Escherichia coli foram publicada em Blattner et al., Science 277 (5331), 1453-1474 (1997) e sua atividade publicada descrita como proteína fosfatase.

Consequentemente, em uma forma de realização, o process da presente invenção compreende aumentar ou gerar a atividade de ut produto genético com a atividade de uma “proteína fosfatase” de Arabidops: thaliana ou seu equivalente funcional ou seu homólogo, por exemplo, aumento de (a) um produto genético de um gene que compreende uir molécula de ácido nucleico como mostrado na coluna 5 da tabela I e senc descrito na mesma linha respectiva como o dito At2g28890 ou u: equivalente funcional ou um homólogo deste como mostrado descrito r coluna 7 da tabela I, preferivelmente um homólogo ou equivalente funcion como mostrado descrito na coluna 7 da tabela I B e sendo descrito na mesn linha respectiva como o dito At2g28890 ou (b) um polipeptídeo que compreende um polipeptídeo, un sequência de consenso ou um motivo de polipeptídeo como mostrado descri na coluna 5 da tabela II e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito At2g28890 ou um equivalente funcional ou um homólogo deste como descrito na coluna 7 da tabela II ou IV, preferivelmente um homólogo ou equivalente funcional como descrito na coluna 7 da tabela II B e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito At2g28890, como mencionado neste, para o um teor de GABA aumentado em comparação com um tipo selvagem não transformado correspondente como mencionado.

Consequentemente, em uma forma de realização, a molécula cuja atividade deve ser aumentada no processo da invenção é o produtc genético com uma atividade descrita como uma “proteína fosfatase”. preferivelmente esta é a molécula da seção (a) ou (b) deste parágrafo. A sequência de At3g04050 de Arabidopsis thaliana, poi exemplo, como mostrado na coluna 5 da tabela I, [sequências de Saccharomyces cerevisiae foram publicadas em Goffeau et al., Science 27^ (5287), 546-547, 1996, as sequências de Escherichia coli foram publicadas em Blattner et al., Science 277 (5331), 1453-1474 (1997) e sua atividade e publicada descrita como piruvato cinase.

Consequentemente, em uma forma de realização, o processe da presente invenção compreende aumentar ou gerar a atividade de un produto genético com a atividade de uma “piruvato cinase” de Arabidopsis thaliana ou seu equivalente funcional ou seu homólogo, por exemplo, ( aumento de (a) um produto genético de um gene que compreende um; molécula de ácido nucleico como mostrado na coluna 5 da tabela I e send( descrito na mesma linha respectiva como o dito At3g04050 ou un equivalente funcional ou um homólogo deste como mostrado descrito n; coluna 7 da tabela I, preferivelmente um homólogo ou equivalente funciona como mostrado descrito na coluna 7 da tabela I B e sendo descrito na mesm; linha respectiva como o dito At3g04050 ou (b) um polipeptídeo que compreende uni polipeptídeo, uma sequência de consenso ou um motivo de polipeptídeo como mostrado descrito na coluna 5 da tabela II e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito At3g04050 ou um equivalente funcional ou um homólogo deste como descrito na coluna 7 da tabela II ou IV, preferivelmente um homólogo ou equivalente funcional como descrito na coluna 7 da tabela II B e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito At3g04050, como mencionado neste, para o um teor de GABA aumentadc em comparação com um tipo selvagem não transformado correspondente como mencionado.

Consequentemente, em uma forma de realização, a molécuk cuja atividade deve ser aumentada no processo da invenção é o produtc genético com uma atividade descrita como uma “piruvato cinase” preferivelmente esta é a molécula da seção (a) ou (b) deste parágrafo. A sequência de At3g08710 de Arabidopsis thaliana, po: exemplo, como mostrado na coluna 5 da tabela I, [sequências d< Saccharomyces cerevisíae foram publicadas em Goffeau et al., Science (5287), 546-547, 1996, as sequências de Escherichia coli foram publicada em Blattner et al., Science 277 (5331), 1453-1474 (1997) e sua atividade . publicada descrita como proteína da família de tiorredoxina.

Consequentemente, em uma forma de realização, o process< da presente invenção compreende aumentar ou gerar a atividade de ur produto genético com a atividade de uma “proteína da família d tiorredoxina” de Arabidopsis thaliana ou seu equivalente funcional ou se homólogo, por exemplo, o aumento de (a) um produto genético de um gene que compreende um molécula de ácido nucleico como mostrado na coluna 5 da tabela I e send descrito na mesma linha respectiva como o dito At3g08710 ou ui equivalente funciona] ou um homólogo deste como mostrado descrito n? coluna 7 da tabela I, preferivelmente um homólogo ou equivalente funciona como mostrado descrito na coluna 7 da tabela ϊ B e sendo descrito na mesrm linha respectiva como o dito At3g08710 ou (b) um polipeptídeo que compreende um polipeptídeo, um; sequência de consenso ou um motivo de polipeptídeo como mostrado descritt na coluna 5 da tabela II e sendo descrito na mesma linha respectiva como c dito At3g08710 ou um equivalente funcional ou um homólogo deste comí descrito na coluna 7 da tabela II ou IV, preferivelmente um homólogo oi equivalente funcional como descrito na coluna 7 da tabela II B e send< descrito na mesma linha respectiva como o dito At3g08710, como mencionado neste, para o um teor de GABA aumentad< em comparação com um tipo selvagem não transformado correspondem· como mencionado.

Consequentemente, em uma forma de realização, a molécul cuja atividade deve ser aumentada no processo da invenção é o produti genético com uma atividade descrita como uma “proteína da família d tiorredoxina”, preferivelmente esta é a molécula da seção (a) ou (b) dest parágrafo. A sequência de At3gl 1650 de Arabidopsis thaliana, po exemplo, como mostrado na coluna 5 da tabela I, [sequências d Saccharomyces cerevisiae foram publicadas em Goffeau et al., Science 27 (5287), 546-547, 1996, as sequências de Escherichia coli foram publicada em Blattner et al., Science 277 (5331), 1453-1474 (1997) e sua atividade publicada descrita como proteína de família induzida por harpina.

Consequentemente, em uma forma de realização, o process da presente invenção compreende aumentar ou gerar a atividade de ur produto genético com a atividade de uma “proteína de família induzida pc harpina” de Arabidopsis thaliana ou seu equivalente funcional ou se homólogo, por exemplo, o aumento de (a) um produto genético de um gene que compreende uma molécula de ácido nucleico como mostrado na coluna 5 da tabela 1 e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito At3gll650 ou um equivalente funcional ou um homólogo deste como mostrado descrito na coluna 7 da tabela I, preferivelmente um homólogo ou equivalente funcional como mostrado descrito na coluna 7 da tabela I B e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito At3gl 1650 ou (b) um polipeptídeo que compreende um polipeptídeo, uma sequência de consenso ou um motivo de polipeptídeo como mostrado descritc na coluna 5 da tabela II e sendo descrito na mesma linha respectiva como c dito At3gll650 ou um equivalente funcional ou um homólogo deste comc descrito na coluna 7 da tabela II ou IV, preferivelmente um homólogo oi equivalente funcional como descrito na coluna 7 da tabela II B e sendc descrito na mesma linha respectiva como o dito At3gl 1650, como mencionado neste, para o um teor de GABA aumentadc em comparação com um tipo selvagem não transformado correspondente como mencionado.

Consequentemente, em uma forma de realização, a molécul; cuja atividade deve ser aumentada no processo da invenção é o produh genético com uma atividade descrita como uma “proteína de família induzid; por harpina”, preferivelmente esta é a molécula da seção (a) ou (b) dest parágrafo. A sequência de At3g27540 de Arabidopsis thaliana, po exemplo, como mostrado na coluna 5 da tabela I, [sequências d Saccharomyces cerevisiae foram publicadas em Goffeau et al., Science 27· (5287), 546-547, 1996, as sequências de Escherichia coli foram publicada em Blattner et al., Science 277 (5331), 1453-1474 (1997) e sua atividade publicada descrita como glicosil transferase.

Consequentemente, em urna forma de realização, o processo da presente invenção compreende aumentar ou gerar a atividade de ura produto genético com a atividade de uma “glicosil transferase” de Arabidopsis thaliana. ou seu equivalente funcional ou seu homólogo, por exemplo, o aumento de (a) um produto genético de um gene que compreende uma molécula de ácido nucleico como mostrado na coluna 5 da tabela I e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito At3g27540 ou um equivalente funcional ou um homólogo deste como mostrado descrito na coluna 7 da tabela I, preferivelmente um homólogo ou equivalente funcional como mostrado descrito na coluna 7 da tabela I B e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito At3g27540 ou (b) um polipeptídeo que compreende um polipeptídeo, um; sequência de consenso ou um motivo de polipeptídeo como mostrado descrik na coluna 5 da tabela II e sendo descrito na mesma linha respectiva como < dito At3g27540 ou um equivalente funcional ou um homólogo deste com< descrito na coluna 7 da tabela II ou IV, preferivelmente um homólogo o equivalente funcional como descrito na coluna 7 da tabela II B e send descrito na mesma linha respectiva como o dito At3g27540, como mencionado neste, para o um teor de GABA aumentad em comparação com um tipo selvagem não transformado correspondem como mencionado.

Consequentemente, em uma forma de realização, a molécu cuja atividade deve ser aumentada no processo da invenção é o produ genético com uma atividade descrita como uma “glicosil transferase preferivelmente esta é a molécula da seção (a) ou (b) deste parágrafo. A sequência de At3g61830 de Arabidopsis thaliana, p exemplo, como mostrado na coluna 5 da tabela I, [sequências Saccharomyces cerevisiae foram publicadas em Goffeau et al., Science 2 (5287), 546-547, 1996, as sequências de Escherichia coli foram publicadas em Blattner et al., Science 277 (5331), 1453-1474 (1997) e sua atividade é publicada descrita como fator de resposta de auxina.

Consequentemente, era uma forma de realização, o processo da presente invenção compreende aumentar ou gerar a atividade de um produto genético com a atividade de uma “fator de resposta de auxina” de Arabidopsis thaliana ou seu equivalente funcional ou seu homólogo, por exemplo, o aumento de (a) um produto genético de uni gene que compreende uma molécula de ácido nucleico como mostrado na coluna 5 da tabela I e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito At3g61830 ou um equivalente funcional ou um homólogo deste como mostrado descrito ra coluna 7 da tabela I, preferivelmente um homólogo ou equivalente funciona como mostrado descrito na coluna 7 da tabela I B e sendo descrito na mesm; linha respectiva como o dito At3g61830 ou preferivelmente um. produn genético de um gene que compreende uma molécula de ácido nucleico comí mostrado na coluna 5 da tabela I, linha 42 e codificando quanto a um “fator d transcrição de auxina” ou (b) um polipeptídeo que compreende um polipeptídeo, um sequência de consenso ou um motivo de polipeptídeo como mostrado descrit na coluna 5 da tabela II e sendo descrito na mesma linha respectiva como dito At3g61830 ou um equivalente funcional ou um homólogo deste corr descrito na coluna 7 da tabela II ou IV, preferivelmente um homólogo c equivalente funcional como descrito na coluna 7 da tabela II B e senc descrito na mesma linha respectiva como o dito At3g61830 < preferivelmente um polipeptídeo que compreende um polipeptídeo con mostrado na coluna 5 da tabela II, linha 42 e codificando quanto a um “fat de transcrição de auxina”, como mencionado neste, para o um teor de GABA aumenta em comparação com um íipo selvagem não transformado correspondente como mencionado.

Consequentemente, em uma forma de realização, a molécula cuja atividade deve ser aumentada no processo da invenção é o produto genético com uma atividade descrita como uma “fator de resposta de auxina”, preferivelmente esta é a molécula da seção (a) ou (b) deste parágrafo. A sequência de At4g32480 de Arabidopsis thaliana, por exemplo, como mostrado na coluna 5 da tabela I, [sequências de Saccharomyces cerevisiae foram publicadas em Goffeau et aL, Science 274 (5287), 546-547, 1996, as sequências de Escherichia coli foram publicadas em Blattner et aL, Science 277 (5331), 1453-1474 (1997) e sua atividade é publicada descrita como proteína At4g32480.

Consequentemente, em uma forma de realização, o processo da presente invenção compreende aumentar ou gerar a atividade de um produto genético com a atividade de uma “proteína At4g32480” de Arabidopsis thaliana ou seu equivalente funcional ou seu homólogo, por exemplo, o aumento de (a) um produto genético de um gene que compreende uma molécula de ácido nucleico como mostrado na coluna 5 da tabela I e sendc descrito na mesma linha respectiva como o dito At4g32480 ou uix equivalente funcional ou um homólogo deste como mostrado descrito ηε coluna 7 da tabela I, preferivelmente um homólogo ou equivalente funciona como mostrado descrito na coluna 7 da tabela I B e sendo descrito na mesrm linha respectiva como o dito At4g32480 ou (b) um polipeptídeo que compreende um polipeptídeo, um; sequência de consenso ou um motivo de polipeptídeo como mostrado descritc na coluna 5 da tabela II e sendo descrito na mesma linha respectiva como i dito At4g32480 ou um equivalente funcional ou um homólogo deste com< descrito na coluna 7 da tabela II ou IV, preferivelmente um homólogo o equivalente funcional como descrito na coluna 7 da tabela II B e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito At4g32480, como mencionado neste, para o um teor de GABA aumentado em comparação com um tipo selvagem não transformado correspondente como mencionado.

Consequentemente, em uma forma de realização, a molécula cuja atividade deve ser aumentada no processo da invenção é o produto genético com uma atividade descrita como uma “proteína At4g32480”, preferivelmente esta é a molécula da seção (a) ou (b) deste parágrafo. A sequência de At4g35310 de Arabidopsis thaliana, por exemplo, como mostrado na coluna 5 da tabela I, [sequências de Saccharomyces cerevisiae foram publicadas em Goffeau et al., Science 274 (5287), 546-547, 1996, as sequências de Escherichia coli foram publicadas em Blatiner et al., Science 277 (5331), 1453-1474 (1997) e sua atividade é publicada descrita como proteína cinase dependente de cálcio.

Consequentemente, em uma forma de realização, o processe da presente invenção compreende aumentar ou gerar a atividade de un produto genético com a atividade de uma “proteína cinase dependente dí cálcio” de Arabidopsis thaliana ou seu equivalente funcional ou sei homólogo, por exemplo, o aumento de (a) um produto genético de um gene que compreende um< molécula de ácido nucleico como mostrado na coluna 5 da tabela I e sende descrito na mesma linha respectiva como o dito At4g35310 ou un equivalente funcional ou um homólogo deste como mostrado descrito n; coluna 7 da tabela Ϊ, preferivelmente um homólogo ou equivalente funciona como mostrado descrito na coluna 7 da tabela I B e sendo descrito na mesm linha respectiva como o dito At4g35310 ou (b) um polipeptídeo que compreende um polipeptídeo, um sequência de consenso ou um motivo de polipeptídeo como mostrado descrit na coluna 5 da tabela II e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito At4g35310 ou um equivalente funcional ou um homólogo deste como descrito na coluna 7 da tabela II ou IV, preferivelmente um homólogo ou equivalente funcional como descrito na coluna 7 da tabela II B e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito At4g35310, como mencionado neste, para o um teor de GABA aumentado em comparação com um tipo selvagem não transformado correspondente como mencionado.

Consequentemente, em uma forma de realização, a molécula cuja atividade deve ser aumentada no processo da invenção é o produto genético com uma atividade descrita como uma “proteína cinase dependente de cálcio”, preferivelmente esta é a molécula da seção (a) ou (b) deste parágrafo. A sequência de At5g 16650 de Arabidopsis thaliana, poi exemplo, como mostrado na coluna 5 da tabela I, [sequências dc Saccharomyces cerevisiae foram publicadas em Goffeau et ah, Science 27^ (5287), 546-547, 1996, as sequências de Escherichia coli foram publicada: em Blattner et ah, Science 277 (5331), 1453-1474 (1997) e sua atividade < publicada descrita como proteína At5g 16650.

Consequentemente, em uma forma de realização, o process» da presente invenção compreende aumentar ou gerar a atividade de ur produto genético com a atividade de uma “proteína At5gl6650” d Arabidopsis thaliana ou seu equivalente funcional ou seu homólogo, pc exemplo, o aumento de (a) um produto genético de um gene que compreende um molécula de ácido nucleico como mostrado na coluna 5 da tabela I e send descrito na mesma linha respectiva como o dito At5gl6650 ou ui equivalente funcional ou um homólogo deste como mostrado descrito r coluna 7 da tabela I, preferivelmente um homólogo ou equivalente funcion como mostrado descrito na coluna 7 da tabela I B e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito At5gló650 ou (b) um polipeptídeo que compreende um polipeptídeo, uma sequência de consenso ou um motivo de polipeptídeo como mostrado descrito na coluna 5 da tabela XI e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito At5gl6650 ou um equivalente funcional ou um homólogo deste como descrito na coluna 7 da tabela II ou IV, preferivelmente um homólogo ou equivalente funcional como descrito na coluna 7 da tabela II B e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito At5g 16650, como mencionado neste, para o um teor de GABA aumentado em comparação com um tipo selvagem não transformado correspondente como mencionado.

Consequentemente, em. uma forma de realização, a molécula cuja atividade deve ser aumentada no processo da invenção é o produtc genético com uma atividade descrita como uma “proteína AtSgl 6650” preferivelmente esta é a molécula da seção (a) ou (b) deste parágrafo. A. sequência de AvinDRAFT J2344 de Azotobacter vinelandii por exemplo, como mostrado na coluna 5 da tabela I, [sequências dt Saccharomyces cerevisiae foram publicadas em Goffeau et al., Science 2Ί1 (5287), 546-547, 1996, as sequências de Escherichia coli foram publicada em Blattner et al., Science 277 (5331), 1453-1474 (1997) e sua atividade < publicada descrita como fator de alongamento Tu.

Consequentemente, em uma forma de realização, o process· da presente invenção compreende aumentar ou gerar a atividade de ur produto genético com a atividade de uma “fator de alongamento Tu” d Azotobacter vinelandii ou seu equivalente funcional ou seu homólogo, pc exemplo, o aumento de (a) um produto genético de um gene que compreende urr molécula de ácido nucleico como mostrado na coluna 5 da tabela I e send descrito na mesma linha respectiva como o dito AvinDRAFT_ 2344 ou um equivalente funcional ou um homólogo deste como mostrado descrito na coluna 7 da. tabela I, preferivelmente um homólogo ou equivalente funcional como mostrado descrito na coluna 7 da tabela I B e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito AvinDRAFT 2344 ou (b) um polipeptídeo que compreende um polipeptídeo, urna sequência de consenso ou um motivo de polipeptídeo como mostrado descrito na coluna 5 da tabela II e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito AvinDRAFT 2344 ou um equivalente funcional ou um homólogo deste como descrito na coluna 7 da tabela II ou IV, preferivelmente um homólogo ou equivalente funcional como descrito na coluna 7 da tabela II B e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito AvinDRAFT 2344, como mencionado neste, para o um teor de GABA aumentado em comparação com um tipo selvagem não transformado correspondente como mencionado.

Consequentemente, em uma forma de realização, a molécuh cuja atividade deve ser aumentada no processo da invenção é o produte genético com uma atividade descrita como uma “fator de alongamento Tu” preferivelmente esta é a molécula da seção (a) ou (b) deste parágrafo. A sequência de AvinDRAFT 2521 de Azotobacter vinelandii por exemplo, como mostrado na coluna 5 da tabela I, [sequências d Saccharomyces cerevisiae foram publicadas em Goffeau et al., Science 27· (5287), 546-547, 1996, as sequências de Escherichia coli foram publicada em Blattner et al., Science 277 (5331), 1453-1474 (1997) e sua atividade publicada descrita como Proteína permease de transportador ABC.

Consequentemente, em uma forma de realização, o process da presente invenção compreende aumentar ou gerar a atividade de ui produto genético com a atividade de uma “Proteína permease de transportad< ABC” de Azotobacter vinelandii ou seu equivalente funcional ou se homólogo, por exemplo, o aumento de (a) um produto genético de um gene que compreende uma molécula de ácido nuclcico como mostrado na coluna 5 da tabela I c. sendo descrito na mesma linha respectiva corno o dito AvInDRAFT_2521 ou um equivalente funcional ou um homólogo deste como mostrado descrito na coluna 7 da tabela I, preferivelmente um homólogo ou equivalente funcional como mostrado descrito na coluna 7 da tabela I B e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito AvinDRAFT 2521 ou (b) um polipeptídeo que compreende um. polipeptídeo, uma sequência de consenso ou um motivo de polipeptídeo como mostrado descrito na coluna 5 da tabela II e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito Avin.DRAFT_2521 ou um equivalente funcional ou um homólogo deste como descrito na coluna 7 da tabela II ou IV, preferivelmente um homólogo ou equivalente funcional como descrito na coluna 7 da tabela II B e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito AvinDRAPTJ2521, como mencionado neste, para o um. teor de GABA aumentado em comparação com um tipo selvagem não transformado correspondente como mencionado.

Consequentemente, em uma forma de realização, a molécuk cuja atividade deve ser aumentada no processo da invenção é o produto genético com uma atividade descrita como uma “Proteína permease d< transportador ABC”, preferivelmente esta é a molécula da seção (a) ou (b deste parágrafo. A sequência de AvinDRAFT_5103 de Azotobacter vinelandi: por exemplo, como mostrado na coluna 5 da tabela I, [sequências d Saccharomyces cerevisiae foram publicadas em Goffeau et ah, Science 27 (5287), 546-547, 1996, as sequências de Escherichia coli foram publicada em Blattner et al., Science 277 (5331), 1453-1474 (1997) e sua atividade publicada descrita como hidrolase.

Consequentemente, em uma forma de realização, o processo da presente invenção compreende aumentar ou gerar a atividade de um produto genético com a atividade de uma “hidrolase” de Azotobacter vinelandii ou seu equivalente funcional ou seu homólogo, por exemplo, o aumento de (a) um produto genético de um gene que compreende uma molécula de ácido nucleico como mostrado na coluna 5 da tabela I e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito AvinDRAFT 5103 ou um equivalente funcional ou um homólogo deste como mostrado descrito na coluna 7 da tabela I, preferivelmente um homólogo ou equivalente funcional como mostrado descrito na coluna 7 da tabela I B e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito AvinDRAFT 5103 ou (b) um polipeptídeo que compreende um polipeptídeo, uma sequência de consenso ou um motivo de polipeptídeo como mostrado descrito na coluna 5 da tabela II e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito AvinDRAFT 5103 ou um equivalente funcional ou um homólogo deste como descrito na coluna 7 da tabela II ou IV, preferivelmente um homólogo ou equivalente funcional como descrito na coluna 7 da tabela II B e sendc descrito na mesma linha respectiva como o dito AvinDRAFTS103, como mencionado neste, para o um teor de GABA aumentadc em comparação com um tipo selvagem não transformado correspondente como mencionado.

Consequentemente, em uma forma de realização, a molécul: cuja atividade deve ser aumentada no processo da invenção é o produtc genético com uma atividade descrita como uma “hidrolase”, preferivelmenti esta é a molécula da seção (a) ou (b) deste parágrafo. A sequência de AvinDRAFT_5292 de Azotobacter vinelandii por exemplo, como mostrado na coluna 5 da tabela I, [sequências d Saccharomyces cerevisiae foram publicadas em Goffeau et al., Science 21· (5287), 546-547, 1996, as sequências de Escherichia coli foram publicadas em Blattner et al., Science 277 (5331), 1453-1474 (1997) e sua atividade é publicada descrita como fumarilacetoacetato hidrolase.

Consequentemente, em uma forma de realização, o processo da presente invenção compreende aumentar ou gerar a atividade de um produto genético com a atividade de uma “fumarilacetoacetato hidrolase” de Azotobacter vinelandii ou seu equivalente funcional ou seu homólogo, por exemplo, o aumento de (a) um produto genético de um gene que compreende uma molécula de ácido nucleico como mostrado na coluna 5 da tabela I e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito AvinDRAFT 5292 ou um equivalente funcional ou um homólogo deste como mostrado descrito na coluna 7 da tabela I, preferivelmente um homólogo ou equivalente funcional como mostrado descrito na coluna 7 da tabela I B e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito AvinDRAFf_5292 ou (b) um polipeptídeo que compreende um polipeptídeo, uma sequência de consenso ou um motivo de polipeptídeo como mostrado descrito na coluna 5 da tabela Π e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito AvinDRAFT 5292 ou um equivalente funcional ou um homólogo deste como descrito na coluna 7 da tabela II ou IV, preferivelmente um homólogo ou equivalente funcional como descrito na coluna 7 da tabela II B e sendc descrito na mesma linha respectiva como o dito AvinDRAFT__5292, como mencionado neste, para o um teor de GABA aumentado em comparação com um tipo selvagem não transformado correspondente como mencionado.

Consequentemente, em uma forma de realização, a molécuh cuja atividade deve ser aumentada no processo da invenção é o produtc genético com uma atividade descrita como uma “fumarilacetoacetatc hidrolase”, preferivelmente esta é a molécula da seção (a) ou (b) destt parágrafo. A sequência de B0124 de Escherichia coíi, por exemplo, como mostrado na coluna 5 da tabela I, [sequências de Saccharomyces cerevisiae foram publicadas em Goffeau et al., Science 274 (5287), 546-547, 1996, as sequências de Escherichia coli foram publicadas em Blattner et al., Science 277 (5331), 1453-1474 (1997) e sua atividade é publicada descrita como glicose desidrogenase.

Consequentemente, em uma forma de realização, o processo da presente invenção compreende aumentar ou gerar a atividade de um produto genético com a atividade de uma “glicose desidrogenase” de Escherichia coli ou seu equivalente funcional ou seu homólogo, por exemplo, o aumento de (a) um produto genético de um gene que compreende uma molécula de ácido nucleico como mostrado na coluna 5 da tabela 1 e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito BOI24 ou um equivalente funcional ou um homólogo deste como mostrado descrito na coluna 7 da tabela I, preferivelmente um homólogo ou equivalente funcional comc mostrado descrito na coluna 7 da tabela I B e sendo descrito na mesma linhc respectiva como o dito BOI24 ou (b) um polipeptídeo que compreende um poiipeptídeo, urm sequência de consenso ou um motivo de polipeptídeo como mostrado deseritc na coluna 5 da tabela II e sendo descrito na mesma linha respectiva como < dito B0124 ou um equivalente funcional ou um homólogo deste comc descrito na coluna 7 da tabela II ou IV, preferivelmente um homólogo o\ equivalente funcional como descrito na coluna 7 da tabela II B e sendc descrito na mesma linha respectiva como o dito BOI24, como mencionado neste, para o um teor de GABA aumentad* em comparação com um tipo selvagem não transformado correspondent como mencionado.

Consequentemente, em uma forma de realização, a molécula cuja atividade deve ser aumentada no processo da invenção é o produto genético com uma atividade descrita como uma “glicose desidrogenase”, preferivelmente esta é a molécula da seção (a) ou (b) deste parágrafo. A sequência de BOI61 de Escherichia coli, por exemplo, como mostrado na coluna 5 da tabela Ϊ, [sequências de Saccharomyces cerevisiae foram publicadas em Goffeau et al., Science 274 (5287), 546-547, 1996, as sequências de Escherichia coli foram publicadas em Blattner et al., Science 277 (5331), 1453-1474 (1997) e sua atividade é publicada descrita como serina protease.

Consequentemente, em uma forma de realização, o processo da presente invenção compreende aumentar ou gerar a atividade de um produto genético com a atividade de uma “serina protease” de Escherichia coli ou seu equivalente funcional ou seu homólogo, por exemplo, o aumento de (a) um produto genético de um gene que compreende uma molécula de ácido nucleico como mostrado na coluna 5 da tabela I e sendc descrito na mesma linha respectiva como o dito BOI61 ou um equivalente funcional ou um homólogo deste como mostrado descrito na coluna 7 dí tabela I, preferivelmente um homólogo ou equivalente funcional come mostrado descrito na coluna 7 da tabela I B e sendo descrito na mesma linh; respectiva como o dito BOI61 ou (b) um polipeptídeo que compreende um polipeptídeo, um; sequência de consenso ou um motivo de polipeptídeo como mostrado descrit na coluna 5 da tabela II e sendo descrito na mesma linha respectiva como < dito BOI61 ou um equivalente funcional ou um homólogo deste com descrito na coluna 7 da tabela II ou IV, preferivelmente um homólogo o equivalente funcional como descrito na coluna 7 da tabela II B e send descrito na mesma linha respectiva como o dito BOI61, como mencionado neste, para o um teor de GABA aumentado em comparação com um tipo selvagem não transformado correspondente como mencionado.

Consequentemente, em uma forma de realização, a molécula cuja atividade deve ser aumentada no processo da invenção é o produto genético com uma atividade descrita como uma “serina protease”, preferivelmente esta é a molécula da seção (a) ou (b) deste parágrafo. A sequência de B0449 de Escherichia coli, por exemplo, como mostrado na coluna 5 da tabela I, [sequências de Saccharomyces cerevisiae foram publicadas em Goffeau et al., Science 274 (5287), 546-547, 1996, as sequências de Escherichia coli foram publicadas em Blattner et al., Science 277 (5331), 1453-1474 (1997) e sua atividade é publicada descrita como proteína de ligação de Λ TF.

Consequentemente, em uma forma de realização, o processe da presente invenção compreende aumentar ou gerar a atividade de uir produto genético com a atividade de uma “proteína de ligação de ATP” dc Escherichia coli ou seu equivalente funcional ou seu homólogo, por exemplo o aumento de (a) um produto genético de um gene que compreende um; molécula de ácido nucleico como mostrado na coluna 5 da tabela I e send< descrito na mesma linha respectiva como o dito B0449 ou um equivalent funcional ou um homólogo deste como mostrado descrito na coluna 7 d tabela I, preferivelmente um homólogo ou equivalente funcional com mostrado descrito na coluna 7 da tabela I B e sendo descrito na mesma linh respectiva como o dito B0449 ou (b) um polipeptídeo que compreende um polipeptídeo, um sequência de consenso ou um motivo de polipeptídeo como mostrado descrit na coluna 5 da tabela II e sendo descrito na mesma linha respectiva como dito B0449 ou um equivalente funcional ou um homólogo deste com descrito na coluna 7 da tabela II ou IV, preferivelmente um homólogo ou equivalente funcional como descrito na coluna 7 da tabela Π B e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito B0449, como mencionado neste, para o um teor de GABA aumentado em comparação com um tipo selvagem não transformado correspondente como mencionado.

Consequentemente, em uma forma de realização, a molécula cuja atividade deve ser aumentada no processo da invenção é o produto genético com uma atividade descrita como uma “proteína de ligação de ATP”, preferivelmente esta é a molécula da seção (a) ou (b) deste parágrafo. A sequência de B0593 de Escherichia coli, por exemplo, como mostrado na coluna 5 da tabela I, [sequências de Saccharomyces cerevisiae foram publicadas em Goffeau et al., Science 274 (5287), 546-547, 1996, as sequências de Escherichia coli foram publicadas em Blattner et al., Science 277 (5331), 1453-1474 (1997) e sua atividade é publicada descrita como isocorismato sintase.

Consequentemente, em uma forma de realização, o processo da presente invenção compreende aumentar ou gerar a atividade de um produto genético com a atividade de uma “isocorismato sintase” de Escherichia coli ou seu equivalente funcional ou seu homólogo, por exemplo, o aumento de (a) um produto genético de um gene que compreende uma molécula de ácido nucleico como mostrado na coluna 5 da tabela I e sendc descrito na mesma linha respectiva como o dito B0593 ou um equivalente funcional ou um homólogo deste como mostrado descrito na coluna 7 da tabela I, preferivelmente um homólogo ou equivalente funcional comc mostrado descrito na coluna 7 da tabela I B e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito BÜ593 ou (b) um polipeptídeo que compreende um polipeptídeo, uma sequência de consenso ou um motivo de polipeptídeo como mostrado descrito na coluna 5 da tabela II e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito B0593 ou um equivalente funcional ou um homólogo deste como descrito na coluna 7 da tabela II ou IV, preferivelmente um homólogo ou equivalente funcional como descrito na coluna 7 da tabela II B e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito B0593, como mencionado neste, para o um teor de GABA aumentado em comparação com um tipo selvagem não transformado correspondente como mencionado.

Consequentemente, em uma forma de realização, a molécula cuja atividade deve ser aumentada no processo da invenção é o produto genético com uma atividade descrita como uma “isocorismato sintase”, preferivelmente esta é a molécula da seção (a) ou (b) deste parágrafo. A sequência de B0898 de Escherichia coli, por exemplo, como mostrado na coluna 5 da tabela I, [sequências de Saccharomyces cerevisiae foram publicadas em Goffcau et ah, Science 274 (5287), 546-547, 1996, as sequências de Escherichia coli foram publicadas em Blattner et ah, Science 277 (5331), 1453-1474 (1997) e sua atividade é publicada descrita como Proteína transportadora do tipo MFS.

Consequentemente, em uma forma de realização, o processe da presente invenção compreende aumentar ou gerar a atividade de um produto genético com a atividade de uma “Proteína transportadora do tipe MFS” de Escherichia coli ou seu equivalente funcional ou seu homólogo, poi exemplo, o aumento de (a) um produto genético de um gene que compreende unu molécula de ácido nucleico como mostrado na coluna 5 da tabela I e sende descrito na mesma linha respectiva como o dito B0898 ou um equivalente funcional ou um homólogo deste como mostrado descrito na coluna 7 dí tabela I, preferivelmente um homólogo ou equivalente funcional comc mostrado descrito na coluna 7 da tabela I B e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito B0898 ou (b) um polipeptídeo que compreende um polipeptídeo, uma sequência de consenso ou um motivo de polipeptídeo como mostrado descrito na coluna 5 da tabela II e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito B0898 ou um equivalente funcional ou um homólogo deste como descrito na coluna 7 da tabela II ou IV, preferivelmente um homólogo ou equivalente funcional como descrito na coluna 7 da tabela II B e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito B0898, como mencionado neste, para o um teor de GABA aumentado em comparação com urri tipo selvagem não transformado correspondente como mencionado.

Consequentemente, em uma forma de realização, a molécula cuja atividade deve ser aumentada no processo da invenção é o produto genético com uma atividade descrita como uma “Proteína transportadora do tipo MFS”, preferivelmente esta é a molécula da seção (a) ou (b) deste parágrafo. A sequência de B1003 de Escherichia coli, por exemplo, como mostrado na coluna 5 da tabela I, [sequências de Saccharomyces cerevisiae foram publicadas em Goffeau et al., Science 274 (5287), 546-547, 1996, as sequências de Escherichia coli foram publicadas em Blattner et ah, Science 277 (5331), 1453-1474 (1997) e sua atividade é publicada descrita comc proteína bl003.

Consequentemente, em uma forma de realização, o processe da presente invenção compreende aumentar ou gerar a atividade de urr produto genético com a atividade de uma “proteína bl003” de Escherichh coli ou seu equivalente funcional ou seu homólogo, por exemplo, o aumente de (a) um produto genético de um gene que compreende um; molécula de ácido nucleico como mostrado na coluna 5 da tabela I e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito BI003 ou um equivalente funcional ou um homólogo deste como mostrado descrito na coluna 7 da tabela I, preferivelmente um homólogo ou equivalente funcional como mostrado descrito na coluna 7 da tabela I B e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito B1003 ou (b) um polipeptídeo que compreende um polipeptídeo, uma sequência de consenso ou um motivo de polipeptídeo como mostrado descrito na coluna 5 da tabela II e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito BI003 ou um equivalente funcional ou um homólogo deste como descrito na coluna 7 da tabela II ou IV, preferivelmente um homólogo ou equivalente funcional como descrito na coluna 7 da tabela II B e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito BI 003, como mencionado neste, para o um teor de GABA aumentado em comparação com um tipo selvagem não transformado correspondente como mencionado.

Consequentemente, em uma forma de realização, a molécula cuja atividade deve ser aumentada no processo da invenção é o produto genético com uma atividade descrita como uma “proteína bl003”: preferivelmente esta é a molécula da seção (a) ou (b) deste parágrafo. A sequência de BI522 de Escherichia coli, por exemplo, comc mostrado na coluna 5 da tabela I, [sequências de Saccharomyces cerevisiae foram publicadas em Goffeau et al., Science 274 (5287), 546-547, 1996, as sequências de Escherichia coli foram publicadas em Blattner et al., Science 277 (5331), 1453-1474 (1997) e sua atividade é publicada descrita comc proteína bl522.

Consequentemente, em uma forma de realização, o processe da presente invenção compreende aumentar ou gerar a atividade de un produto genético com a atividade de uma “proteína bl522” de Escherichi; coíi ou seu equivalente funcional ou seu homólogo, por exemplo, o aumento de (a) um produto genético de um gene que compreende uma molécula de ácido nucleico como mostrado na coluna 5 da tabela I e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito BI522 ou um equivalente funcional ou um homólogo deste como mostrado descrito na coluna 7 da tabela 1, preferivelmente um homólogo ou equivalente funcional como mostrado descrito na coluna 7 da tabela I B e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito BI522 ou (b) um polipeptídeo que compreende um polipeptídeo, uma sequência de consenso ou um motivo de polipeptídeo como mostrado descrito na coluna 5 da tabela II e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito BI522 ou um equivalente funcional ou um homólogo deste como descrito na coluna 7 da tabela II ou IV, preferivelmente um homólogo ou equivalente funcional como descrito na coluna 7 da tabela II B e sende descrito na mesma linha respectiva como o dito B1522, como mencionado neste, para o um teor de GABA aumentade em comparação com um tipo selvagem não transformado correspondente como mencionado.

Consequentemente, em uma forma de realização, a molécul; cuja atividade deve ser aumentada no processo da invenção é o produt< genético com uma atividade descrita como uma “proteína b!5225' preferivelmente esta é a molécula da seção (a) ou (b) deste parágrafo. A sequência de B2739 de Escherichia coli, por exemplo, com mostrado na coluna 5 da tabela I, [sequências de Saccharomyces cerevisia foram publicadas em Goffeau et al., Science 274 (5287), 546-547, 1996, a sequências de Escherichia coli foram publicadas em Blattner et al., Scienc 277 (5331), 1453-1474 (1997) e sua atividade é publicada descrita com proteína b2739.

Consequentemente, em uma forma de realização, o processo da presente invenção compreende aumentar ou gerar a atividade de um produto genético com a atividade de uma “proteína b2739” de Escherichia coli ou seu equivalente funcional ou seu homólogo, por exemplo, o aumento de (a) um produto genético de um gene que compreende uma molécula de ácido nucleico como mostrado na coluna 5 da tabela I e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito B2739 ou um equivalente funcional ou um homólogo deste como mostrado descrito na coluna 7 da tabela I, preferivelmente um homólogo ou equivalente funcional como mostrado descrito na coluna 7 da tabela I B e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito B2739 ou (b) um polipeptídeo que compreende um polipeptídeo, uma sequência de consenso ou um motivo de polipeptídeo como mostrado descrito na coluna 5 da tabela II e sendo descrito na mesma linlia respectiva como o dito B2739 ou um equivalente funcional ou um homólogo deste como descrito na coluna 7 da tabela II ou IV, preferivelmente um homólogo ol equivalente funcional como descrito na coluna 7 da tabela II B e sendc descrito na mesma linha respectiva como o dito B2739, como mencionado neste, para o um teor de GABA aumentadt em comparação com um tipo selvagem não transformado correspondente como mencionado.

Consequentemente, em uma forma de realização, a molécul cuja atividade deve ser aumentada no processo da invenção é o produt genético com uma atividade descrita como uma “proteína b2739’ preferivelmente esta é a molécula da seção (a) ou (b) deste parágrafo. A sequência de B3646 de Escherichia coli, por exemplo, com mostrado na coluna 5 da tabela I, [sequências de Saccharomyces cerevisis foram publicadas em Goffeau et al., Science 274 (5287), 546-547, 1996, í sequências de Escherichia coli foram publicadas em Blattner et al., Science 277 (5331), 1453-1474 (1997) e sua atividade é publicada descrita como proteína b3646.

Consequentemente, em uma forma de realização, o processo da presente invenção compreende aumentar ou gerar a atividade de um produto genético com a atividade de uma “proteína b3646” de Escherichia coli ou seu equivalente funcional ou seu homólogo, por exemplo, o aumento de (a) um produto genético de um gene que compreende uma molécula de ácido nucleico como mostrado na coluna 5 da tabela I e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito B3646 ou um equivalente funcional ou um homólogo deste como mostrado descrito na coluna 7 da tabela I, preferivelmente um homólogo ou equivalente funcional como mostrado descrito na coluna 7 da tabela I B e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito B3646 ou (b) um polipeptídeo que compreende um polipeptídeo, uma sequência de consenso ou um motivo de polipeptídeo como mostrado descrito na coluna 5 da tabela II e sendo descrito na mesma linha respectiva como c dito B3646 ou um equivalente funcional ou um homólogo deste comc descrito na coluna 7 da tabela II ou IV, preferivelmente um homólogo oi equivalente funcional como descrito na coluna 7 da tabela II B e send( descrito na mesma linha respectiva como o dito B3646, como mencionado neste, para o um teor de GABA aumcntadi em comparação com um tipo selvagem não transformado correspondent como mencionado.

Consequentemente, em uma forma de realização, a molécul cuja atividade deve ser aumentada no processo da invenção é o produt genético com uma atividade descrita como uma “proteína b3646: preferivelmente esta é a molécula da seção (a) ou (b) deste parágrafo. A sequência de B4029 de Escherichia coli, por exemplo, como mostrado na coluna 5 da tabela I, [sequências de Saccharomyces cerevisiae foram publicadas em Goffeau et al., Science 274 (5287), 546-547, 1996, as sequências de Escherichia coli foram publicadas em Blaítner et ah, Science 277 (5331), 1453-1474 (1997) e sua atividade é publicada descrita como proteína B4029.

Consequentemente, em uma forma de realização, o processo da presente invenção compreende aumentar ou gerar a atividade de um produto genético com a atividade de uma “proteína B4029” de Escherichia coli ou seu equivalente funcional on seu homólogo, por exemplo, o aumento de (a) um produto genético de um gene que compreende uma molécula de ácido nucleico como mostrado na coluna 5 da tabela I e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito B4029 ou um equivalente funcional ou um homólogo deste como mostrado descrito na coluna 7 áz tabela I, preferivelmente um homólogo ou equivalente funcional comc mostrado descrito na coluna 7 da tabela I B e sendo descrito na mesma Iinlu respectiva como o dito B4029 ou (b) um polípeptídeo que compreende um polipeptídeo, um; sequência de consenso ou um motivo de polipeptídeo como mostrado descrih na coluna 5 da tabela II e sendo descrito na mesma linha respectiva como < dito B4029 ou um equivalente funcional ou um homólogo deste corm descrito na coluna 7 da tabela II ou IV, preferivelmente um homólogo o equivalente funcional como descrito na coluna 7 da tabela II B e send descrito na mesma linha respectiva como o dito B4029, como mencionado neste, para o um teor de GABA aumentad em comparação com um tipo selvagem não transformado correspondem como mencionado.

Consequentemente, em uma forma de realização, a molécu cuja atividade deve ser aumentada no processo da invenção é o produto genético com uma atividade descrita como uma “proteína B4029”, preferivelmente esta é a molécula da seção (a) ou (b) deste parágrafo. A sequência de B4256 de Escherichia coli, por exemplo, como mostrado na coluna 5 da tabela I, [sequências de Saccharomyces cerevisiae foram publicadas em Goffeau et al., Science 274 (5287), 546-547, 1996, as sequências de Escherichia coli foram publicadas em Blattner et. ah, Science 277 (5331), 1453-1474 (1997) e sua atividade é publicada descrita como acetiltransferase.

Consequentemente, em uma forma de realização, o processo da presente invenção compreende aumentar ou gerar a atividade de um produto genético com a atividade de uma “acetiltransferase” de Escherichia coli ou seu equivalente funcional ou seu homólogo, por exemplo, o aumento de (a) um produto genético de um gene que compreende uma molécula de ácido nucleico como mostrado na coluna 5 da tabela I e sende descrito na mesma linha respectiva como o dito B4256 ou um equivalente funcional ou um homólogo deste como mostrado descrito na coluna 7 d< tabela I, preferivelmente um homólogo ou equivalente funcional comc mostrado descrito na coluna 7 da tabela ÍBe sendo descrito na mesma linh; respectiva como o dito B4256 ou (b) um polipeptídeo que compreende um polipeptídeo, um; sequência de consenso ou um motivo de polipeptídeo como mostrado descrit na coluna 5 da tabela II e sendo descrito na mesma linha respectiva como < dito B4256 ou um equivalente funcional ou um homólogo deste com descrito na coluna 7 da tabela II ou IV, preferivelmente um homólogo o equivalente funcional como descrito na coluna 7 da tabela II B e send descrito na mesma linha respectiva como o dito B4256, como mencionado neste, para o um teor de GABA aumentad em comparação com um tipo selvagem não transformado correspondente como mencionado.

Consequentemente, em uma forma de realização, a molécula cuja atividade deve ser aumentada no processo da invenção é o produto genético com uma atividade descrita como uma “acetiltransferase”, preferivelmente esta é a molécula da seção (a) ou (b) deste parágrafo. A sequência de C PP034008079R de Physcomítrella patens, por exemplo, como mostrado na coluna 5 da tabela I, [sequências de Saccharomyces cerevisiae foram publicadas em Goffeau et al., Science 274 (5287), 546-547, 1996, as sequências de Escherichia coli foram publicadas em Blattner et al., Science 277 (5331), 1453-1474 (1997) e sua atividade é publicada descrita como proteína carreadora de acila.

Consequentemente, em uma forma de realização, o processo da presente invenção compreende aumentar ou gerar a atividade de um produto genético com a atividade de uma “proteína carreadora de acila” de Physcomítrella patens ou seu equivalente funcional ou seu homólogo, por exemplo, o aumento de (a) um produto genético de um gene que compreende unu molécula de ácido nucleico como mostrado na coluna 5 da tabela I e sendc descrito na mesma linha respectiva como o dito CPP034008079R ou un equivalente funcional ou um homólogo deste como mostrado descrito n; coluna 7 da tabela I, preferivelmente um homólogo ou equivalente funciona como mostrado descrito na coluna 7 da tabela I B e sendo descrito na mesm; linha respectiva como o dito C_PP034008079R ou (b) um polipeptídeo que compreende um polipeptídeo, um sequência de consenso ou um motivo de polipeptídeo como mostrado descrit na coluna 5 da tabela II e sendo descrito na mesma linha respectiva como dito C_PP034008079R ou um equivalente funcional ou um homólogo dest como descrito na coluna 7 da tabela IT ou IV, preferivelmente um homólog ou equivalente funcional como descrito na coluna 7 da tabela II B e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito CJ7P034008079R, como mencionado neste, para o um teor de GABA aumentado em comparação com um tipo selvagem não transformado correspondente como mencionado.

Consequentemente, em uma forma de realização, a molécula cuja atividade deve ser aumentada no processo da invenção é o produto genético com uma atividade descrita como uma “proteína carreadora de acila”, preferivelmente esta é a molécula da seção (a) ou (b) deste parágrafo. A sequência de Slr0739 de Synechocystis sp., por exemplo, como mostrado na coluna 5 da tabela I, [sequências de Saccharomyces cerevisiae foram publicadas em Goffeau et al., Science 274 (5287), 546-547 1996, as sequências de Escherichia coli foram publicadas em Blattner et al. Science 277 (5331), 1453-1474 (1997) e sua atividade é publicada descrití como geranilgeranil pirofosfato sintase.

Consequentemente, em uma forma de realização, o processe da presente invenção compreende aumentar ou gerar a atividade de un produto genético com a atividade de uma “geranilgeranil pirofosfato sintase5 de Synechocystis sp. ou seu equivalente funcional ou seu homólogo, po exemplo, o aumento de (a) um produto genético de um gene que compreende um molécula de ácido nucleico como mostrado na coluna 5 da tabela I e send descrito na mesma linha respectiva como o dito Slr0739 ou um equivalent funcional ou um homólogo deste como mostrado descrito na coluna 7 d tabela I, preferivelmente um homólogo ou equivalente funcional com mostrado descrito na coluna 7 da tabela I B e sendo descrito na mesma linh respectiva como o dito Slr0739 ou (b) um polipeptídeo que compreende um polipeptídeo, um sequência de consenso ou um motivo de polipeptídeo como mostrado descrit na coluna 5 da tabela II e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito Slr0739 ou um equivalente funcional ou um homólogo deste como descrito na coluna 7 da tabela II ou IV, preferivelmente um homólogo ou equivalente funcional como descrito na coluna 7 da tabela II B e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito Slr0739, como mencionado neste, para o um teor de GABA aumentado em comparação com um tipo selvagem não transformado correspondente como mencionado.

Consequentemente, em uma forma de realização, a molécula cuja atividade deve ser aumentada no processo da invenção é o produto genético com uma atividade descrita como uma “geranil geram 1 pirofosfato sintase”, preferivelmente esta é a molécula da seção (a) ou (b) deste parágrafo. A sequência de TTC0019 de Thermus thermophilus, por exemplo, como mostrado na coluna 5 da tabela I, [sequências de Saccharomyces cerevisiae foram publicadas em Goffeau et al., Science 274 (5287), 546-547, 1996, as sequências de Escherichia coli foram publicadas em Blattner et al., Science 277 (5331), 1453-1474 (1997) e sua atividade é publicada descrita como Subunidade de translocase de proteína independente de Sec.

Consequentemente, em uma forma de realização, o processt da presente invenção compreende aumentar ou gerar a atividade de un produto genético com a atividade de uma “Subunidade de translocase d< proteína independente de Sec” de Thermus thermophilus ou seu equivalent funcionai ou seu homólogo, por exemplo, o aumento de (a) um produto genético de um gene que compreende um molécula de ácido nucleico como mostrado na coluna 5 da tabela I e send descrito na mesma linha respectiva como o dito TTC0019 ou um equivalent funcional ou um homólogo deste como mostrado descrito na coluna 7 d tabela I, preferivelmente um homólogo ou equivalente funcional como mostrado descrito na coluna 7 da tabela I B e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito TTC0019 ou (b) um polipcptídeo que compreende um polipcptídeo, uma sequência de consenso ou um motivo de polipeptídeo como mostrado descrito na coluna 5 da tabela II e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito TTC0019 ou um equivalente funcional ou um homólogo deste como descrito na coluna 7 da tabela II ou IV, preferivelmente um homólogo ou equivalente funcional como descrito na coluna 7 da tabela II B e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito TTC0019, como mencionado neste, para o um teor de GABA aumentado em comparação com um tipo selvagem não transformado correspondente como mencionado.

Consequentemente, em uma forma de realização, a molécula cuja atividade deve ser aumentada no processo da. invenção é o produto genético com uma atividade descrita como uma “Subunidade de translocase de proteína independente de Sec”, preferivelmente esta é a molécula da seçãc (a) ou (b) deste parágrafo. A sequência de TTC1550 de Thermus thermophilus, poi exemplo, como mostrado na coluna 5 da tabela I, [sequências dt Saccharomyces cerevisiae foram publicadas em Goffeau et al., Science ΊΊ1 (5287), 546-547, 1996, as sequências de Escherichia colí foram publicada; em Blattner et al., Science 277 (5331), 1453-1474 (1997) e sua atividade < publicada descrita como homocitrato sintase.

Consequentemente, em uma forma de realização, o process< da presente invenção compreende aumentar ou gerar a atividade de un produto genético com a atividade de uma “homocitrato sintase” de Theirnu thermophilus ou seu equivalente funcional ou seu homólogo, por exemplo, ■ aumento de (a) um produto genético de um gene que compreende uma molécula de ácido nucleico como mostrado na coluna 5 da tabela 1 e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito TTC1550 ou um equivalente funcional ou um homólogo deste como mostrado descrito na coluna 7 da tabela I, preferivelmente um homólogo ou equivalente funcional como mostrado descrito na coluna 7 da tabela I B e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito TTC1550 ou (b) um polipeptídeo que compreende um polipeptídeo, uma sequência de consenso ou um motivo de polipeptídeo como mostrado descrito na coluna 5 da tabela II e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito TTC1550 ou um equivalente funcional ou um homólogo deste como descrito na coluna 7 da tabela II ou IV, preferivelmente um homólogo ου equivalente funcional como descrito na coluna 7 da tabela II B e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito TTC1550, como mencionado neste, para o um teor de GABA aumentado em comparação com um tipo selvagem não transformado correspondente como mencionado.

Consequentemente, em uma forma de realização, a molécuh cuja atividade deve ser aumentada no processo da invenção é o produtc genético com uma atividade descrita como uma “homocitrato sintase” preferivelmente esta é a molécula da seção (a) ou (b) deste parágrafo. A sequência de Yjrl53w de Saccharomyces cerevisiae, po: exemplo, como mostrado na coluna 5 da tabela I, [sequências d< Saccharomyces cerevisiae foram publicadas em Goffeau et ah, Science 27-(5287), 546-547, 1996, as sequências de Escherichia coli foram publicada em Blattner et al., Science 277 (5331), 1453-1474 (1997) e sua atividade publicada descrita como poligalacturonase.

Consequentemente, em uma forma de realização, o process da presente invenção compreende aumentar ou gerar a atividade de ur produto genético com a atividade de uma “poligal acíuronase” de Saccharomyces cerevisiae ou seu equivalente funcional ou seu homólogo, por exemplo, o aumento de (a) um produto genético de um gene que compreende uma molécula de ácido nucleico como mostrado na coluna 5 da tabela I e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito Yjrl53w ou um equivalente funcional ou um homólogo deste como mostrado descrito na coluna 7 da tabela I, preferivelmente um homólogo ou equivalente funcional como mostrado descrito na coluna 7 da tabela I B e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito Yjrl53w ou (b) um polipeptídeo que compreende um polipeptídeo, uma sequência de consenso ou um motivo de polipeptídeo como mostrado descrito na coluna 5 da tabela II e sendo descrito na mesma linha respectiva como c dito Yjrl53w ou um equivalente funcional ou um homólogo deste comc descrito na coluna 7 da tabela II ou IV, preferivelmente um homólogo ot equivalente funcional como descrito na coluna 7 da tabela II B e sendc descrito na mesma linha respectiva como o dito Yjrl53w, como mencionado neste, para o um teor de GABA aumentad< em comparação com um tipo selvagem não transformado correspondentf como mencionado.

Consequentemente, em uma forma de realização, a molécul; cuja atividade deve ser aumentada no processo da invenção é o produti genético com uma atividade descrita como uma “poligalacturonase’' preferivelmente esta é a molécula da seção (a) ou (b) deste parágrafo. A sequência de Ylr043c de Saccharomyces cerevisiae, pc exemplo, como mostrado na coluna 5 da tabela I, [sequências d Saccharomyces cerevisiae foram publicadas em Goffeau et al., Science 27 (5287), 546-547, 1996, as sequências de Escherichia coli foram publicads em Blattner et al., Science 277 (5331), 1453-1474 (1997) e sua atividade publicada descrita como tiorredoxina.

Consequentemente, em uma forma de realização, o processo da presente invenção compreende aumentar ou gerar a atividade de um produto genético com a atividade de uma “tiorredoxina” de Saccbaromyces cerevisiae ou seu equivalente funcional ou seu homólogo, por exemplo, o aumento de (a) um produto genético de um gene que compreende uma molécula de ácido nucleico como mostrado na coluna 5 da tabela I e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito Ylr043c ou um equivalente funcional ou um homólogo deste como mostrado descrito na coluna 7 da tabela I, preferivelmente um homólogo ou equivalente funcional como mostrado descrito na coluna 7 da tabela I B e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito Ylr043c ou (b) um polipeptídeo que compreende um polipeptídeo, ume sequência de consenso ou um motivo de polipeptídeo como mostrado descritc na coluna 5 da tabela II e sendo descrito na mesma linha respectiva como c dito Ylr043c ou um equivalente funcional ou um homólogo deste comt descrito na coluna 7 da tabela II ou IV, preferivelmente um homólogo oi equivalente funcional como descrito na coluna 7 da tabela II B e send< descrito na mesma linha respectiva como o dito Ylr043c, como mencionado neste, para o um teor de GABA aumentad em comparação com um tipo selvagem não transformado correspondent como mencionado.

Consequentemente, em uma forma de realização, a molécul cuja atividade deve ser aumentada no processo da invenção é o produt genético com uma atividade descrita como uma “tiorredoxina preferivelmente esta é a molécula da seção (a) ou (b) deste parágrafo. A sequência de 5134080l_CANOLA de Brassica napus, p< exemplo, como mostrado na coluna 5 da tabela I, [sequências c Saccharomyces cerevisiae foram publicadas em Goffeau et al., Science 274 (5287), 546-547, 1996, as sequências de Escheríchia coli foram publicadas em Blattner et al., Science 277 (5331), 1453-1474 (1997) e sua atividade é publicada descrita como piruvato cinase.

Consequentemente, em uma fonna de realização, o processo da presente invenção compreende aumentar ou gerar a atividade de um produto genético com a atividade de uma “piruvato cinase” de Brassica napus ou seu equivalente funcional ou seu homólogo, por exemplo, o aumento de (a) um produto genético de um gene que compreende uma molécula de ácido nucleico como mostrado na coluna 5 da tabela I e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito 51340801 CANOLA ou um equivalente funcional ou um homólogo deste como mostrado descrito na coluna 7 da tabela I, preferivelmente um homólogo ou equivalente funcional como mostrado descrito na coluna 7 da tabela I B e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito 5134080l_CANOLA ou (b) um polipeptídeo que compreende um polipeptídeo, ume sequência de consenso ou um motivo de polipeptídeo como mostrado descritc na coluna 5 da tabela II e sendo descrito na mesma linha respectiva como c dito 51340801_CANOLA ou um equivalente funcional ou um homologe deste como descrito na coluna 7 da tabela II ou IV, preferivelmente un homólogo ou equivalente funcional como descrito na coluna 7 da tabela II B < sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito 51340801CANOLA, como mencionado neste, para o um teor de GABA aumentad< em comparação com um tipo selvagem não transformado correspondent como mencionado.

Consequentemente, em uma forma de realização, a molécul cuja atividade deve ser aumentada no processo da invenção é o produt-genético com uma atividade descrita como uma “piruvato cinase’ preferivelmente esta é a molécula da seção (a) ou (b) deste parágrafo. A sequência de Ybrl59w de Saccharomyces cerevisiae, por exemplo, como mostrado na coluna 5 da tabela I, [sequências de Saccharomyces cerevisiae foram publicadas em Goffeau et al., Science 274 (5287), 546-547, 1996, as sequências de Escherichía coli foram publicadas em Blattner et ai., Science 277 (5331), 1453-1474 (1997) e sua atividade é publicada descrita como beta-ceto-redutase microssômica.

Consequentemente, em uma forma de realização, o processo da presente invenção compreende aumentar ou gerar a atividade de um produto genético com a atividade de uma “beta-ceto-redutase microssômica” de Saccharomyces cerevisiae ou seu equivalente funcional ou seu homólogo, por exemplo, o aumento de (a) um produto genético de um gene que compreende uma molécula de ácido nucleico como mostrado na coluna 5 da tabela I e sendc descrito na mesma linha respectiva como o dito Ybrl59w ou um equivalente funcional ou um homólogo deste como mostrado descrito na coluna 7 dr tabela I, preferivelmente um homólogo ou equivalente funcional comt mostrado descrito na coluna 7 da tabela I B e sendo descrito na mesma liiiln respectiva como o dito Ybrl59w ou (b) um polipeptídeo que compreende um polipeptídeo, um; sequência de consenso ou um motivo de polipeptídeo como mostrado descrih na coluna 5 da tabela II e sendo descrito na mesma linha respectiva como < dito Ybrl59w ou um equivalente funcional ou um homólogo deste com· descrito na coluna 7 da tabela II ou IV, preferivelmente um homólogo o equivalente funcional como descrito na coluna 7 da tabela II B e send descrito na mesma linha respectiva como o dito Ybrl59w, como mencionado neste, para o um teor de GABA aumentad em comparação com um tipo selvagem não transformado correspondent como mencionado.

Consequentemente, em uma forma de realização, a molécu cuja atividade deve ser aumentada no processo da invenção é o produto genético com uma atividade descrita como uma “beta-ceto-redutase microssômica”, preferivelmente esta é a molécula da seção (a) ou (b) deste parágrafo. A sequência de YDR046C de Saccharomyces cerevisiae, por exemplo, como mostrado na coluna 5 da tabela I, [sequências de Saccharomyces cerevisiae foram publicadas em Goffeau et al., Science 274 (5287), 546-547, 1996, as sequências de Escherichia coli foram publicadas em Blattner et al., Science 277 (5331), 1453-1474 (1997) e sua atividade é publicada descrita como permease de aminoácido de cadeia ramificada.

Consequentemente, em uma forma de realização, o processo da presente invenção compreende aumentar ou gerar a atividade de um produto genético com a atividade de uma “permease de aminoácido de cadeia ramificada “ de Saccharomyces cerevisiae ou seu equivalente funcional ou seu homólogo, por exemplo, o aumento de (a) um produto genético de um gene que compreende uma molécula de ácido nucleico como mostrado na coluna 5 da tabela I e sendc descrito na mesma linha respectiva como o dito YDR046C ou um equivalente funcional ou um homólogo deste como mostrado descrito na coluna 7 de tabela I, preferivelmente um homólogo ou equivalente funcional comc mostrado descrito na coluna 7 da tabela I B e sendo descrito na mesma linln respectiva como o dito YDR046C ou (b) um polipeptídeo que compreende um polipeptídeo, unn sequência de consenso ou um motivo de polipeptídeo como mostrado descrití na coluna 5 da tabela II e sendo descrito na mesma linha respectiva como c dito YDR046C ou um equivalente funcional ou um homólogo deste comc descrito na coluna 7 da tabela II ou IV, preferivelmente um homólogo oi equivalente funcional como descrito na coluna 7 da tabela II B e send< descrito na mesma linha respectiva como o dito YDR046C, como mencionado neste, para o um teor de GABA aumentado em comparação com um tipo selvagem não transformado correspondente como mencionado.

Consequentemente, em uma forma de realização, a molécula cuja atividade deve ser aumentada no processo da invenção é o produto genético com uma atividade descrita como uma “permease de aminoácido de cadeia ramificada preferivelmente esta é a molécula da seção (a) ou (b) deste parágrafo. A sequência de YGR255C de Saccharomyces cerevisiae, por exemplo, como mostrado na coluna 5 da tabela I, [sequências de Saccharomyces cerevisiae foram publicadas em Goffeau et a!., Science 274 (5287), 546-547, 1996, as sequências de Escherichia coli foram publicadas em Blattner et al., Science 277 (5331), 1453-1474 (1997) e sua atividade é publicada descrita como monooxigenase de biossíntese de ubiquinona .

Consequentemente, em uma forma de realização, o processe da presente invenção compreende aumentar ou gerar a atividade de un: produto genético com a atividade de uma “monooxigenase de biossíntese de ubiquinona” de Saccharomyces cerevisiae ou seu equivalente funcional oi seu homólogo, por exemplo, o aumento de (a) um produto genético de um gene que compreende urat molécula de ácido nucleico como mostrado na coluna 5 da tabela I e sende descrito na mesma linha respecti va como o dito YGR255C ou um equivalenti funcional ou um homólogo deste como mostrado descrito na coluna 7 d< tabela I, preferivelmente um homólogo ou equivalente funcional comc mostrado descrito na coluna 7 da tabela I B e sendo descrito na mesma linh; respectiva como o dito YGR255C ou (b) um polipeptídeo que compreende um polipeptídeo, um; sequência de consenso ou um motivo de polipeptídeo como mostrado descrit< na coluna 5 da tabela II e sendo descrito na mesma linha respectiva como < dito YGR255C ou um equivalente funcional ou um homólogo deste como descrito na coluna 7 da tabela II ou IV, preferivelmente um homólogo ou equivalente funcional como descrito na coluna 7 da tabela II B e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito YGR255C, como mencionado neste, para o um teor de GABA aumentado em comparação com um tipo selvagem não transformado correspondente como mencionado.

Consequentemente, em uma forma de realização, a molécula cuja atividade deve ser aumentada no processo da invenção é o produto genético com uma atividade descrita como uma “monooxigenase de biossíntese de ubiquinona “, preferivelmente esta é a molécula da seção (a) ou (b) deste parágrafo. A sequência de YHR213W de Saccharomyces cerevisiae, por exemplo, como mostrado na coluna 5 da tabela I, [sequências de Saccharomyces cerevisiae foram publicadas em Goffeau et al., Science 274 (5287), 546-547, 1996, as sequências de Escherichia coli foram publicadas em Blattner et al, Science 277 (5331), 1453-1474 (1997) e sua atividade é publicada descrita como proteína YHR213 W.

Consequentemente, em uma forma de realização, o processe da presente invenção compreende aumentar ou gerar a atividade de uir produto genético com a atividade de uma “proteína YHR213W” de Saccharomyces cerevisiae ou seu equivalente funcional ou seu homólogo, po3 exemplo, o aumento de (a) um produto genético de um gene que compreende um? molécula de ácido nucleico como mostrado na coluna 5 da tabela I e sende descrito na mesma linha respectiva como o dito YHR213W ou un equivalente funcional ou um homólogo deste como mostrado descrito m coluna 7 da tabela I, preferivelmente um homólogo ou equivalente funciona como mostrado descrito na coluna 7 da tabela I B e sendo descrito na mesm; linha respectiva como o dito YHR213W ou (b) um polipeptídeo que compreende um polipeptídeo, uma sequência de consenso ou um moti vo de polipeptídeo como mostrado descrito na coluna 5 da tabela II e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito YHR213W ou um equivalente funcional ou um homólogo deste como descrito na coluna 7 da tabela II ou IV, preferivelmente um homólogo ou equivalente funcional como descrito na coluna 7 da tabela II B e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito YHR213W, como mencionado neste, para o um teor de GABA aumentado em comparação com um tipo selvagem não transformado correspondente como mencionado.

Consequentemente, em uma forma de realização, a molécula cuja atividade deve ser aumentada no processo da invenção é o produto genético com uma atividade descrita como uma “proteína YHR213W”. preferivelmente esta é a molécula da seção (a) ou (b) deste parágrafo. A sequência de YPL249C-A de Saccharomyces cerevisiae, poi exemplo, como mostrado na coluna 5 da tabela I, [sequências de Saccharomyces cerevisiae foram publicadas em Goffeau et al., Science 71Δ (5287), 546-547, 1996, as sequências de Escherichia coli foram publicadas em Blattner et ah, Science 277 (5331), 1453-1474 (1997) e sua atividade e publicada descrita como proteína ribossômica 60S.

Consequentemente, em uma forma de realização, o processe da presente invenção compreende aumentar ou gerar a atividade de un produto genético com a atividade de uma “proteína ribossômica 60S” de Saccharomyces cerevisiae ou seu equivalente funcional ou seu homólogo, po: exemplo, o aumento de (a) um produto genético de um gene que compreende um: molécula de ácido nucleico como mostrado na coluna 5 da tabela I e sende descrito na mesma linha respectiva como o dito YPL249C-A ou un equivalente funcional ou um homólogo deste como mostrado descrito na coluna 7 da tabela I, preferivelmente um homólogo ou equivalente funcional como mostrado descrito na coluna 7 da tabela I B e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito YPL249C-A ou (b) um polipeptídeo que compreende um polipeptídeo, uma sequência de consenso ou um motivo de polipeptídeo como mostrado descrito na coluna 5 da tabela II e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito YPL249C-A ou um equivalente funcional ou um homólogo deste como descrito na coluna 7 da tabela II ou IV, preferivelmente um homólogo ou equivalente funcional como descrito na coluna 7 da tabela II B e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito YPL249C-A, como mencionado neste, para o um teor de GABA aumentado em comparação com um tipo selvagem não transformado correspondente como mencionado.

Consequentemente, em uma forma de realização, a molécuh cuja atividade deve ser aumentada no processo da invenção é o produto genético com uma atividade descrita como uma “proteína ribossômica 60S” preferivelmente esta é a molécula da seção (a) ou (b) deste parágrafo. A sequência de YPR185W de Saccharomyces cerevisiae, poi exemplo, como mostrado na coluna 5 da tabela I, [sequências de Saccharomyces cerevisiae foram publicadas em Goffeau et al., Science 2ΊΑ (5287), 546-547, 1996, as sequências de Escherichia coli foram publicadas em Blattner et al., Science 277 (5331), 1453-1474 (1997) e sua atividade e publicada descrita como proteína relacionada com autofagia .

Consequentemente, em uma forma de realização, o processe da presente invenção compreende aumentar ou gerar a atividade de un produto genético com a atividade de uma “proteína relacionada coir autofagia” de Saccharomyces cerevisiae ou seu equivalente funcional ou sei homólogo, por exemplo, o aumento de (a) um produto genético de um gene que compreende uma molécula de ácido nucleico como mostrado na coluna 5 da tabela I e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito YPR185W ou um equivalente funcional ou um homólogo deste como mostrado descrito na coluna 7 da tabela I, preferivelmente um homólogo ou equivalente funcional como mostrado descrito na coluna 7 da tabela I B e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito YPR185W ou (b) um polipeptídeo que compreende um polipeptídeo, uma sequência de consenso ou um motivo de polipeptídeo como mostrado descrito na coluna 5 da tabela II e sendo descrito na mesma linha respectiva como c dito YPR185W ou um equivalente funcional ou um homólogo deste comc descrito na coluna 7 da tabela II ou IV, preferivelmente um homólogo oi. equivalente funcional como descrito na coluna 7 da tabela II B e sendc descrito na mesma linha respectiva como o dito YPR18SW, como mencionado neste, para o um teor de GABA aumentadc em. comparação com um tipo selvagem não transformado correspondente como mencionado.

Consequentemente, em uma forma de realização, a molécub cuja atividade deve ser aumentada no processo da invenção é o produtc genético com uma atividade descrita como uma “proteína relacionada con autofagia”, preferivelmente esta é a molécula da seção (a) ou (b) deste parágrafo. A sequência de Ylr395c de Saccharomyces cerevisiae, po exemplo, como mostrado na coluna 5 da tabela I, [sequências d< Saccharomyces cerevisiae foram publicadas em Goffeau et al., Science 27* (5287), 546-547, 1996, as sequências de Escherichia coli foram publicada em Blattner et ah, Science 277 (5331), 1453-1474 (1997) e sua atividade < publicada descrita como subunidade de citocromo c oxidase VIII.

Consequentemente, em uma forma de realização, o process* da presente invenção compreende aumentar ou gerar a atividade de um produto genético com a atividade de uma “subunidade de citocromo c oxidase VIU” de Saccharomyces cerevisiae ou seu equivalente funcional ou seu homólogo, por exemplo, o aumento de (a) um produto genético de um gene que compreende uma molécula de ácido nucleico como mostrado na coluna 5 da tabela I e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito Ylr395c ou um equivalente funcional ou um homólogo deste como mostrado descrito na coluna 7 da tabela I, preferivelmente um homólogo ou equivalente funcionai como mostrado descrito na coluna 7 da tabela I B e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito Ylr395c ou (b) um polipeptídeo que compreende um poiipeptídeo, uma sequência de consenso ou um motivo de polipeptídeo como mostrado descrito na coluna 5 da tabela II e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito Ylr395c ou um equivalente funcional ou um homólogo deste como descrito na coluna 7 da tabela II ou IV, preferivelmente um homólogo ou equivalente funcional como descrito na coluna 7 da tabela II B e sendc descrito na mesma linha respectiva como o dito Ylr395c, como mencionado neste, para o um teor de GABA aumentado em comparação com um tipo selvagem não transformado correspondente como mencionado.

Consequentemente, em uma forma de realização, a molécula cuja atividade deve ser aumentada no processo da invenção é o produto genético com uma atividade descrita como uma “subunidade de citocromo c oxidase VIII”, preferivelmente esta é a molécula da seção (a) ou (b) deste parágrafo. A sequência de YDR046C2 de Saccharomyces cerevisiae por exemplo, como mostrado na coluna 5 da tabela I, [sequências de Saccharomyces cerevisiae foram publicadas em Goffeau et al., Science 27^ (5287), 546-547, 1996, as sequências de Escherichia coli foram publicadas em Blattner et al., Science 277 (5331), 1453-1474 (1997) e sua atividade é publicada descrita como permease de aminoácido de cadeia ramificada .

Consequentemente, em uma forma de realização, o processo da presente invenção compreende aumentar ou gerar a atividade de um produto genético com a atividade de uma “permease de aminoácido de cadeia ramificada “ de Saccharomyces cerevisiae ou seu equivalente funcional ou seu homólogo, por exemplo, o aumento de (a) um produto genético de um gene que compreende uma molécula de ácido nucleico como mostrado na coluna 5 da tabela I e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito YDR046C 2 ou um equivalente funcional ou um homólogo deste como mostrado descrito na coluna 7 da tabela I, preferivelmente um homólogo ou equivalente funcional como mostrado descrito na coluna 7 da tabela I B e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito YDR046C2 ou (b) um polipeptídeo que compreende um polipeptídeo, uma sequência de consenso ou um motivo de polipeptídeo como mostrado descrito na coluna 5 da tabela II e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito YDR046C__2 ou um equivalente funcional ou um homólogo deste como descrito na coluna 7 da tabela II ou IV, preferivelmente um homólogo ou equivalente funcional como descrito na coluna 7 da tabela II B e sendo descrito na mesma linha respectiva como o dito YDR046C 2, como mencionado neste, para o um teor de GABA aumentadc em comparação com um tipo selvagem não transformado correspondente como mencionado.

Consequentemente, em uma forma de realização, a moléculs cuja atividade deve ser aumentada no processo da invenção é o produtc genético com uma atividade descrita como uma “permease de aminoácido de cadeia ramificada preferivelmente esta é a molécula da seção (a) ou (b" deste parágrafo.

Além disso, foi observado que aumentar ou gerar a atividade de um gene mostrado na Tabela XIII, por exemplo, uma molécula de ácido nucleico derivado de uma molécula de ácido nucleico mostrado na Tabela XIII em A. thaliana conferiu tolerância à tensão aumentada, por exemplo, tolerância à temperatura baixa aumentada, em comparação com o controle do tipo selvagem. Desta maneira, em uma forma de realização, uma molécula de ácido nucleico indicado na Tabela XIII ou seu homólogo as indicado na Tabela I ou um produto de expressão é usado no método da presente invenção para aumentar a tolerância à pressão, por exemplo, aumento da temperatura baixa, de uma planta em comparação com o controle do tipo sel vagem.

Além disso, foi observado que aumentar ou gerar a atividade de um gene mostrado na Tabela XII, por exemplo, uma molécula de ácido nucleico deri vado de uma molécula de ácido nucleico mostrado na Tabela XII em A. thaliana conferiu tolerância à tensão aumentada, por exemplo, tolerância à tensão de ciclo aumentado, em comparação com o controle do tipo selvagem. Desta maneira, em uma forma de realização, uma molécula de ácido nucleico indicado na Tabela XII ou seu homólogo as indicado na Tabela I ou mn produto de expressão é usado no método da presente invenção para aumentar a tolerância à pressão, por exemplo, aumento de tolerância de secura de ciclo, de uma planta em comparação com o controle do tipo selvagem.

Além disso, foi observado que aumentar ou gerar a atividade de um gene mostrado na Tabela XI, por exemplo, uma molécula de ácidc nucleico derivado de uma molécula de ácido nucleico mostrado na Tabela XI em A. thaliana conferiu aumento no rendimento intrínseco, por exemplo, biomassa aumentada sob condições padrão, por exemplo, biomass^ aumentada sob condições sem deficiência ou sem tensão, em comparaçãc com o controle do tipo selvagem. Desta maneira, em uma forma de realização, uma molécula de ácido nucleico indicado na Tabela XI ou seu homólogo como indicado na Tabela I ou um produto de expressão é usado no método da presente invenção para aumentar o rendimento intrínseco, por exemplo, para aumentar o rendimento sob condições padrão, por exemplo, aumento de biomassa sob condições sem deficiência ou sem tensão, de uma planta em comparação com o controle do tipo selvagem.

Surpreendentemente, foi observado que aumentar ou gerar de pelo menos um gene que confere uma atividade selecionada do grupo que consiste de: proteína ribossômica 60S, Proteína permease de transportador ABC, acetiltransferase, proteína carreadora de acila, proteína At4g32480. proteína At5gl6650, proteína de ligação de ATP, proteína relacionada com autofagia, fator de resposta de auxina, fator de transcrição de auxina, proteína Μ003, proteína Μ522, proteína b2739, proteína b3646, proteína B4029. permease de aminoácido de cadeia ramificada, proteína cinase dependente de cálcio, subunidade de citocromo c oxidase VIII, fator de alongamento Tu. Proteína de captura de fator, fumarilacetoacetato hidrolase, geranilgeranil pirofosfato sintase, glicose desidrogenase, glicosil transferase, proteína de família induzida por harpina, homocitrato sintase, hidrolase, isocorismatc sintase, Proteína transportadora do tipo MFS, beta-ceto-redutase microssômica, poligalacturonase, proteína fosfatase, piruvato cinase. Subunidade de translocase de proteína independente de Sec, serina protease. tiorredoxina, proteína da família de tiorredoxina, regulador transcripcional. monooxigenase de biossíntese de ubiquinona, e proteína YHR213W ou de um gene que compreende uma sequência de ácido nucleico descrito na coluna 5 da tabela I em Arabidopsis thaliana conferiu um teor de GABA aumentadc em comparação com um tipo selvagem não transformado correspondente.

Foi observado que aumentar ou gerar a atividade de um produto genético com a atividade de uma “Proteína de captura de fator’ codificado por um gene que compreende uma sequência de ácido nucleicc SEQ ID N°: 42 em Arabidopsis thaliana conferiu um rendimento aumentado preferivelmente um aumento no teor e GABA em comparação com o controle do tipo selvagem entre 1,1 % e 12,35 -vezes como mostrado nos Exemplos.

Foi observado que aumentar ou gerar a atividade de uu produto genético com a atividade de uma “regulador transcripcionaf codificado por um gene que compreende uma sequência de ácido nucleicc SEQ ID N°: 654 em Arabidopsis thaliana conferiu um rendimento aumentado preferivelmente um aumento no teor e GABA em comparação com o controb do tipo selvagem entre 1,1 % e 5.47 -vezes como mostrado nos Exemplos.

Foi observado que aumentar ou gerar a atividade de un produto genético com a atividade de uma “proteína fosfatase” codificado po: um gene que compreende uma sequência de ácido nucleico SEQ ID N°: 70( em Arabidopsis thaliana conferiu um rendimento aumentado, preferivelmenfi um aumento no teor e GABA em comparação com o controle do tipc selvagem entre 1,1 % e 12,21 -vezes como mostrado nos Exemplos.

Foi observado que aumentar ou gerar a atividade de un produto genético com a atividade de uma “pimvato cinase” codificado por un gene que compreende uma sequência de ácido nucleico SEQ ID N°: 751 en Arabidopsis thaliana conferiu um rendimento aumentado, preferivelmente un aumento no teor e GABA em comparação com o controle do tipo selvagen entre 1,1 % e 26,89 -vezes como mostrado nos Exemplos.

Foi observado que aumentar ou gerar a atividade de un produto genético com a atividade de uma “proteína da família d< tiorredoxina” codificado por um gene que compreende uma sequência di ácido nucleico SEQ ID N°: 1156 em Arabidopsis thaliana conferiu un rendimento aumentado, preferivelmente um aumento no teor e GABA en comparação com o controle do tipo selvagem entre 1,1 % e 3.64 -vezes com< mostrado nos Exemplos.

Foi observado que aumentar ou gerar a atividade de un produto genético com a atividade de uma “proteína de família induzida poi harpina” codificado por um gene que compreende uma sequência de ácidc nucleico SEQ ID N°: 1510 em Arabidopsis thaliana conferiu um rendimentc aumentado, preferivelmente um aumento no teor e GABA em comparaçãc com o controle do tipo selvagem entre 1,1 % e 3,21 -vezes como mostradc nos Exemplos.

Foi observado que aumentar ou gerar a atividade de un produto genético com a atividade de uma “glicosil transferase” codificado poi um gene que compreende uma sequência de ácido nucleico SEQ ID N°: 159Ê em Arabidopsis thaliana conferiu um rendimento aumentado, preferivelmente um aumento no teor e GABA em comparação com o controle do tipc selvagem entre 1,1 % e 4,27 -vezes como mostrado nos Exemplos.

Foi observado que aumentar ou gerar a atividade de un produto genético com a atividade de uma “fator de resposta de auxina’ codificado por um gene que compreende uma sequência de ácido nucleicc SEQ ID N°: 1670 em Arabidopsis thaliana conferiu um rendimentc aumentado, preferivelmente um aumento no teor e GABA em comparaçãc com o controle do tipo selvagem entre 1,1 % e 16,46 -vezes como mostradc nos Exemplos.

Foi observado que aumentar ou gerar a atividade de un produto genético com a atividade de uma “proteína At4g32480” codificadc por um gene que compreende uma sequência de ácido nucleico SEQ ID N° 1874 em Arabidopsis thaliana conferiu um rendimento aumentado preferivelmente um aumento no teor e GABA em comparação com o controle do tipo selvagem entre 1,1 % e 7,44 -vezes como mostrado nos Exemplos.

Foi observado que aumentar ou gerar a atividade de un produto genético com a atividade de uma “proteína cinase dependente de cálcio” codificado por um gene que compreende uma sequência de ácidc nucleico SEQ ID N°: 1936 em A~abidopsis thaliana conferiu um rendimentc aumentado, preferivelmente um aumento no teor e GABA em comparação com o controle do tipo selvagem entre 1,1 % e 5,40 -vezes como mostrado nos Exemplos.

Foi observado que aumentar ou gerar a atividade de um produto genético com a atividade de uma “proteína At5gl6650” codificado por um gene que compreende uma sequência de ácido nucleico SEQ ID N°: 2492 em Arabidopsis thaliana conferiu um rendimento aumentado, preferivelmente um aumento no teor e GABA em comparação com o controle do tipo selvagem entre 1,1 % e 3,07 - vezes como mostrado nos Exemplos.

Foi observado que aumentar ou gerar a atividade de um produto genético com a atividade de uma “fator de alongamento Tu” codificado por um gene que compreende uma sequência de ácido nucleico SEQ ID N°: 2553 em Arabidopsis thaliana conferiu um rendimento aumentado, preferivelmente um aumento no teor e GABA em comparação com. o controle do tipo selvagem entre 1,1 % e 6,42 -vezes como mostrade nos Exemplos.

Foi observado que aumentar ou gerar a atividade de um produto genético com a atividade de uma “Proteína permease de transportadoi ABC” codificado por um gene que compreende uma sequência de ácidc nucleico SEQ ID N°: 3408 em Arabidopsis thaliana conferiu um rendimente aumentado, preferivelmente um aumento no teor e GABA em comparaçãc com o controle do tipo selvagem entre 1,1 % e 1,99 -vezes como mostrade nos Exemplos.

Foi observado que aumentar ou gerar a atividade de un produto genético com a atividade de uma “hidrolase” codificado por um gem que compreende uma sequência de ácido nucleico SEQ ID N°: 3564 en Arabidopsis thaliana conferiu um rendimento aumentado, preferivelmente un aumento no teor e GABA em comparação com o controle do tipo selvagen entre 1,1 % e 10,13 -vezes como mostrado nos Exemplos.

Foi observado que aumentar ou gerar a atividade de um produto genético com a atividade de uma “fumarilacetoacctato hidrolase” codificado por um gene que compreende uma sequência de ácido nucleico SEQ ID N°: 3728 em Arabidopsis thaliana conferiu um rendimento aumentado, preferivelmente um aumento no teor e GABA em comparação com o controle do tipo selvagem entre 1,1 % e 14,56 -vezes como mostrado nos Exemplos.

Foi observado que aumentar ou gerar a atividade de um produto genético com a atividade de uma “glicose desidrogenase” codificado por um gene que compreende uma sequência de ácido nucleico SEQ ID N°: 4068 em Arabidopsis thaliana conferiu um rendimento aumentado, preferivelmente um aumento no teor e GABA em comparação com o controle do tipo selvagem entre 1,1 % e 4,07 -vezes como mostrado nos Exemplos.

Foi observado que aumentar ou gerar a atividade de um produto genético com a atividade de uma “serina protea.se” codificado por um gene que compreende uma sequência de ácido nucleico SEQ ID N°: 4176 em Arabidopsis thaliana conferiu um rendimento aumentado, preferivelmente um aumento no teor e GABA em comparação com o controle do tipo selvagem entre 1,1 % e 16,31 -vezes como mostrado nos Exemplos.

Foi observado que aumentar ou gerar a atividade de um produto genético com a atividade de uma “proteína de ligação de ATP’ codificado por um gene que compreende uma sequência de ácido nucleicc SEQ ID N°: 4364 em Arabidopsis thaliana conferiu um rendimente aumentado, preferivelmente um aumento no teor e GABA em comparaçã( com o controle do tipo selvagem entre 1,1 % e 15,36 -vezes como mostrad( nos Exemplos.

Foi observado que aumentar ou gerar a atividade de un produto genético com a atividade de uma “isocorismato sintase” codificada por um gene que compreende uma sequência de ácido nucleico SEQ ID Nc 4717 em Arabidopsis thaliana conferiu um rendimento aumentado, preferivelmente um aumento no teor e GABA em comparação com o controle do tipo selvagem entre 1,1 % e 3,59 -vezes como mostrado nos Exemplos.

Foi observado que aumentar ou gerar a atividade de um produto genético com a atividade de uma “Proteína transportadora do tipo MFS” codificado por um gene que compreende uma sequência de ácido nucleico SEQ ID N°: 4864 em Arabidopsis thaliana conferiu um rendimento aumentado, preferivelmente um aumento no teor e GABA em comparação com o controle do tipo selvagem entre 1,1 % e 175,83 -vezes como mostrado nos Exemplos.

Foi observado que aumentar ou gerar a atividade de um produto genético com a atividade de uma “proteína bl003” codificado por um gene que compreende uma sequência de ácido nucleico SEQ ID N°: 4903 em Arabidopsis thaliana conferiu um rendimento aumentado, preferivelmente um aumento no teor e GABA em comparação com o controle do tipo selvagem entre 1,1 % e 9,49 -vezes como mostrado nos Exemplos.

Foi observado que aumentar ou gerar a atividade de un produto genético com a atividade de uma “proteína bl522” codificado por un gene que compreende uma sequência de ácido nucleico SEQ ID N°: 4909 en Arabidopsis thaliana conferiu um rendimento aumentado, preferivelmente un aumento no teor e GABA em comparação com o controle do tipo selvagen entre 1,1 % e 22.61 -vezes como mostrado nos Exemplos.

Foi observado que aumentar ou gerar a atividade de un produto genético com a atividade de uma “proteína b2739” codificado por un gene que compreende uma sequência de ácido nucleico SEQ ID N°: 4954 en Arabidopsis thaliana conferiu um rendimento aumentado, preferivelmente un aumento no teor e GABA em comparação com o controle do tipo selvagen entre 1,1 % e 14,55 -vezes como mostrado nos Exemplos.

Foi observado que aumentar ou gerar a atividade de un produto genético com a atividade de uma “proteína b3646” codificado por um gene que compreende uma sequência de ácido nucleico SEQ ID N°: 5121 em Arabidopsis thaliana conferiu um rendimento aumentado, preferivelmente um aumento no teor e GABA em comparação com o controle do tipo selvagem entre 1,1 % e 3,02 -vezes como mostrado nos Exemplos.

Foi observado que aumentar ou gerar a atividade de um produto genético com a atividade de uma “proteína B4029” codificado por um gene que compreende uma sequência de ácido nucleico SEQ ID N°: 5319 em Arabidopsis thaliana conferiu um rendimento aumentado, preferivelmente um aumento no teor e GABA em comparação com o controle do tipo selvagem entre 1,1 % e 77,37 -vezes como mostrado nos Exemplos.

Foi observado que aumentar ou gerar a atividade de um produto genético com a atividade de uma “acetiltransferase” codificado por um gene que compreende uma sequência de ácido nucleico SEQ ID N°: 5387 em Arabidopsis thaliana conferiu um rendimento aumentado, preferivelmente um aumento no teor e GABA em comparação com o controle do tipo selvagem entre 1,1 % e 3,19 -vezes como mostrado nos Exemplos.

Foi observado que aumentar ou gerar a atividade de um produto genético com a atividade de uma “proteína carreadora de acilar codificado por um gene que compreende uma sequência de ácido nucleicc SEQ ID N°: 5458 em Arabidopsis thaliana conferiu um rendimentc aumentado, preferivelmente um aumento no teor e GABA em comparaçãc com o controle do tipo selvagem entre 1,1 % e 3,02 -vezes como mostradc nos Exemplos.

Foi observado que aumentar ou gerar a atividade de un produto genético com a atividade de uma “geranilgeranil pirofosfato sinta.se' codificado por um gene que compreende uma sequência de ácido nucleic< SEQ ID N°: 6041 em Arabidopsis thaliana conferiu um rendimenti aumentado, preferivelmente um aumento no teor e GABA em comparação com o controle do tipo selvagem entre 1,1 % e 3,55 -vezes como mostrado nos Exemplos.

Foi observado que aumentar ou gerar a atividade de um produto genético com a atividade de uma “Subunidade de transiocase de proteína independente de Sec” codificado por um gene que compreende uma sequência de ácido nucleico SEQ ID N°: 6469 em Arabidopsis thaliana conferiu um rendimento aumentado, preferivelmente um aumento no teor e GABA em comparação com o controle do tipo selvagem entre 1,1 % e 7,25 -vezes como mostrado nos Exemplos.

Foi observado que aumentar ou gerar a atividade de urr produto genético com a atividade de uma “homocitrato sintase” codificadc por um gene que compreende uma sequência de ácido nucleico SEQ ID N° 6739 em Arabidopsis thaliana conferiu um rendimento aumentado preferivelmente um aumento no teor e GABA em comparação com o controh do tipo selvagem entre 1,1 % e 2,93 -vezes como mostrado nos Exemplos.

Foi observado que aumentar ou gerar a atividade de un produto genético com a atividade de uma “poligalacturonase” codificado po: um gene que compreende uma sequência de ácido nucleico SEQ ID 151o: 751< em Arabidopsis thaliana conferiu um rendimento aumentado, preferivelmente um aumento no teor e GABA em comparação com o controle do tip< selvagem entre 1,1 % e 6,77 -vezes como mostrado nos Exemplos.

Foi observado que aumentar ou gerar a atividade de un produto genético com a atividade de uma “tiorredoxina” codificado por un gene que compreende uma sequência de ácido nucleico SEQ ID N°: 7633 en Arabidopsis thaliana conferiu um rendimento aumentado, preferivelmente ur aumento no teor e GABA em comparação com o controle do tipo selvagei: entre 1,1 % e 2,10 -vezes como mostrado nos Exemplos.

Foi observado que aumentar ou gerar a atividade de ur produto genético com a atividade de uma “piruvato cinase” codificado por ur gene que compreende uma sequência de ácido nucleico SEQ ID N°: 53 em Arabidopsis thaliana conferiu um rendimento aumentado, preferivelmente um aumento no teor e GABA em comparação com o controle do tipo selvagem entre 1,1 % e 3,22 -vezes como mostrado nos Exemplos.

Foi observado que aumentar ou gerar a atividade de um produto genético com a atividade de uma “beta-ceto-redutase microssômica” codificado por um gene que compreende uma sequência de ácido nucleico SEQ ID N°: 7137 em Arabidopsis thaliana conferiu um rendimento aumentado, preferivelmente um aumento no teor e GABA em comparação com o controle do tipo selvagem entre 1,1 % e 2,23 -vezes como mostrado nos Exemplos.

Foi observado que aumentar ou gerar a atividade de um produto genético com a atividade de uma “permease de aminoácido de cadek ramificada” codificado por um gene que compreende uma sequência de ácido nucleico SEQ ID N°: 7208 em Arabidopsis thaliana conferiu um rendimento aumentado, preferivelmente um aumento no teor e GABA em comparação com o controle do tipo selvagem entre 1,1 % e 48.39 -vezes como mostrado nos Exemplos.

Foi observado que aumentar ou gerar a atividade de un produto genético com a atividade de uma “monooxigenase de biossíntese d< ubiquinona “ codificado por um gene que compreende uma sequência d< ácido nucleico SEQ ID N°: 7274 em Arabidopsis thaliana conferiu un rendimento aumentado, preferivelmente um aumento no teor e GABA en comparação com o controle do tipo selvagem entre 1,1 % e 31,94 -veze; como mostrado nos Exemplos.

Foi observado que aumentar ou gerar a atividade de un produto genético com a atividade de uma “proteína YFIR213W” codificadi por um gene que compreende uma sequência de ácido nucleico SEQ ID N° 7489 em Arabidopsis thaliana conferiu um rendimento aumentadc preferivelmente um aumento no teor e GABA em comparação com o controle do tipo selvagem entre 1,1 % e 7,79 -vezes como mostrado nos Exemplos.

Foi observado que aumentar ou gerar a atividade de um produto genético com a atividade de uma “proteína ribossômica 60S” codificado por um gene que compreende uma sequência de ácido nucleico SEQ ID N°: 8239 em Arabídopsis thaliana conferiu um rendimento aumentado, preferivelmente um aumento no teor e GABA em comparação com o controle do tipo selvagem entre 1,1 % e 6,64 -vezes como mostrado nos Exemplos.

Foi observado que aumentar ou gerar a atividade de um produto genético com a atividade de uma “proteína relacionada com autofagia” codificado por um gene que compreende uma sequência de ácido nucleico SEQ ID N°: 8397 em Arabídopsis thaliana conferiu um rendimento aumentado, preferivelmente um aumento no teor e GABA em comparaçãc com o controle do tipo selvagem entre 1,1 % e 47,89 -vezes como mostrado nos Exemplos.

Foi observado que aumentar ou gerar a atividade de urr produto genético com a atividade de uma “subunidade de citocromo c oxidase VIII” codificado por um gene que compreende uma sequência de ãcidc nucleico SEQ ID N°: 8227 em Arabídopsis thaliana conferiu um rendimentc aumentado, preferivelmente um aumento no teor e GABA em comparaçã< com o controle do tipo selvagem entre 1,1 % e 131,19 -vezes como mostradi nos Exemplos.

Foi observado que aumentar ou gerar a atividade de un produto genético com a atividade de uma “permease de aminoácido de cadei; ramificada” codificado por um gene que compreende uma sequência de ácid< nucleico SEQ ID N°: 8423 em Arabídopsis thaliana conferiu um rendiment aumentado, preferivelmente um aumento no teor e GABA em comparaçã' com o controle do tipo selvagem entre 1,1 % e 48.39 -vezes como mostrad lios Exemplos.

Desta maneira, de acordo com o método da invenção foi um teor de GABA aumentado em uma célula vegetal, planta ou uma parte da mesma em comparação com um tipo de controle ou selvagem pode ser atingido.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, a atividade de um polipeptídeo de acordo com o polípeptídeo SEQ ID N°: 43 ou codificado por uma molécula de ácido nucleico que compreende um ácido nucleico SEQ ID N°: 42 ou um homólogo da dita molécula de ácido nucleico ou polipeptídeo, por exemplo, se uma atividade de uma molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico ou polipeptídeo ou a sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, como descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como uma molécula de ácido nucleico SEQ ID N°: 42 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 43, respectivamente é aumentado ou gerado ou se uma atividade “Proteína de captura de fator” é aumentado ou gerado em um organismo, preferivelmente um teor de GABA aumentado em comparação com o tipo selvagem é conferido no dito organismo.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, ε atividade de um polipeptídeo de acordo com o polipeptídeo SEQ ID N°: 65 i ou codificado por uma molécula de ácido nucleico que compreende um ácidc nucleico SEQ ID N°: 654 ou um homólogo da dita molécula de ácid< nucleico ou polipeptídeo, por exemplo, se uma atividade de uma molécula di ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico o' polipeptídeo ou a sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, com descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como um molécula de ácido nucleico SEQ ID N°: 654 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 65 f respectivamente é aumentado ou gerado ou se uma atividade “reguladc transcripcional” é aumentado ou gerado em um organismo, preferivelmen! um teor de GABA aumentado em comparação com o tipo selvagem é conferido no dito organismo.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, a atividade de um poíipeptídeo de acordo com o polipeptídeo SEQ ID N°: 707 ou codificado por uma molécula de ácido nucleico que compreende um ácido nucleico SEQ ID N°: 706 ou um homólogo da dita molécula de ácido nucleico ou polipeptídeo, por exemplo, se uma atividade de uma molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico ou polipeptídeo ou a sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, como descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como uma molécula de ácido nucleico SEQ ID N°: 706 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 707, respectivamente é aumentado ou gerado ou se uma atividade “proteína fosfatase” é aumentado ou gerado em um organismo, preferivelmente um teoi de GABA aumentado em comparação com o tipo selvagem é conferido no dito organismo.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, a atividade de um polipeptídeo de acordo com o polipeptídeo SEQ ID N°: 752 ou codificado por uma molécula de ácido nucleico que compreende um ácidc nucleico SEQ ID N°: 751 ou um homólogo da dita molécula de ácidc nucleico ou polipeptídeo, por exemplo, se uma atividade de uma molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico oi polipeptídeo ou a sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, comc descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como um< molécula de ácido nucleico SEQ ID N°: 751 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 752 respectivamente é aumentado ou gerado ou se uma atividade “piruvate cinase” é aumentado ou gerado em um organismo, preferivelmente um teor d( GABA aumentado em comparação com o tipo selvagem é conferido no dite organismo.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, ; atividade de um polipeptídeo de acordo com o polipeptídeo SEQ ID N°: 1157 ou codificado por uma molécula de ácido nucleico que compreende um ácido nucleico SEQ ID N°: 1156 ou um homólogo da dita molécula de ácido nucleico ou polipeptídeo, por exemplo, se uma atividade de uma molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico ou polipeptídeo ou a sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, como descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como uma molécula de ácido nucleico SEQ ID N°: 1156 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 1157, respectivamente é aumentado ou gerado ou se uma atividade “proteína da família de tiorredoxina,, é aumentado ou gerado em um organismo, preferivelmente um teor de GABA aumentado em comparação com o tipo selvagem é conferido no dito organismo.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, s atividade de um polipeptídeo de acordo com o polipeptídeo SEQ ID N°: 1511 ou codificado por uma molécula de ácido nucleico que compreende um ácidc nucleico SEQ ID N°: 1510 ou um homólogo da dita molécula de ácidc nucleico ou polipeptídeo, por exemplo, se uma atividade de uma molécula dc ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico oi polipeptídeo ou a sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, comí descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como um; molécula de ácido nucleico SEQ ID N°: 1510 ou polipeptídeo SEQ ID Nc 1511, respectivamente é aumentado ou gerado ou se uma atividade “proteín de família induzida por harpina” é aumentado ou gerado em um organismc preferivelmente um teor de GABA aumentado em comparação com o tip selvagem é conferido no dito organismo.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, atividade de um polipeptídeo de acordo com o polipeptídeo SEQ ID N°: 159 ou codificado por uma molécula de ácido nucleico que compreende um ácié nucleico SEQ ID N°: 1598 ou um homólogo da dita molécula de ácic nucleico ou polipeptídeo, por exemplo, se uma atividade de uma molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico ou polipeptídeo ou a sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, como descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como uma molécula de ácido nucleico SEQ ID N°: 1598 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 1599, respectivamente é aumentado ou gerado ou se uma atividade “glicosil transferase” é aumentado ou gerado em um organismo, preferivelmente um teor de GABA aumentado em comparação com o tipo selvagem é conferido no dito organismo.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, a atividade de um polipeptídeo de acordo com o polipeptídeo SEQ ID N°; 1671 ou preferivelmente SEQ ID NO: 8590 ou codificado por uma molécula de ácido nucleico que compreende um ácido nucleico SEQ ID N°: 1670 oi preferivelmente SEQ ID NO: 8589 ou um homólogo da dita molécula de ácido nucleico ou polipeptídeo, por exemplo, se uma atividade de unu molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácidc nucleico ou polipeptídeo ou a sequência de consenso ou o motivo d< polipeptídeo, como descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7 na mesma linh; respectiva como uma molécula de ácido nucleico SEQ ID N°: 1670 oi polipeptídeo SEQ ID N°: 1671, respectivamente é aumentado ou gerado ou s< uma atividade “fator de resposta de auxina” ou “fator de transcrição d< auxina” resp. é aumentado ou gerado em um organismo, preferivelmená um teor de GABA aumentado em comparação com o tipo selvagem < conferido no dito organismo.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, , atividade de um polipeptídeo de acordo com o polipeptídeo SEQ ID N°: 187: ou codificado por uma molécula de ácido nucleico que compreende um ácid' nucleico SEQ ID N°: 1874 ou um homólogo da dita molécula de ácid nucleico ou polipeptídeo, por exemplo, se uma atividade de uma molécula d ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico ou polipeptídeo ou a sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, como descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como uma molécula de ácido nucleico SEQ ID N°: 1874 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 1875, respectivamente é aumentado ou gerado ou se uma atividade “proteína At4g32480” é aumentado ou gerado em um organismo, preferivelmente um teor de GABA aumentado em comparação com o tipo selvagem é conferido no dito organismo.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, a atividade de um polipeptídeo de acordo com o polipeptídeo SEQ ID N°: 1937 ou codificado por uma molécula de ácido nucleico que compreende um ácido nucleico SEQ ID N°: 1936 ou um homólogo da dita molécula de ácido nucleico ou polipeptídeo, por exemplo, se uma atividade de uma molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico ot polipeptídeo ou a sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, comc descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como umt molécula de ácido nucleico SEQ ID N°: 1936 ou polipeptídeo SEQ ID N° 1937, respectivamente é aumentado ou gerado ou se uma atividade “proteín; cinase dependente de cálcio” é aumentado ou gerado em um organismc preferivelmente um teor de GABA aumentado em comparação com o tip selvagem é conferido no dito organismo.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, atividade de um polipeptídeo de acordo com o polipeptídeo SEQ ID N°: 249 ou codificado por uma molécula de ácido nucleico que compreende um ácid nucleico SEQ ID N°: 2492 ou um homólogo da dita molécula de ácic nucleico ou polipeptídeo, por exemplo, se uma atividade de uma molécula c ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico c polipeptídeo ou a sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, con descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como un molécula de ácido nucleico SEQ ID N°: 2492 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 2493, respectivamente é aumentado ou gerado ou se uma atividade “proteína At5g 16650” é aumentado ou gerado em um organismo, preferivelmente um teor de GABA aumentado em comparação com o tipo selvagem é conferido no dito organismo.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, a atividade de um polipeptídeo de acordo com o polipeptídeo SEQ ID N°: 2554 ou codificado por uma molécula de ácido nucleico que compreende um ácido nucleico SEQ ID N°: 2553 ou um homólogo da dita molécula de ácido nucleico ou polipeptídeo, por exemplo, se uma atividade de uma molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico ou polipeptídeo ou a sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, como descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como uma molécula de ácido nucleico SEQ ID N°: 2553 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 2554, respectivamente é aumentado ou gerado ou se uma atividade “fator de alongamento Tu” é aumentado ou gerado em um organismo, preferivelmente um teor de GABA aumentado em comparação com o tipo selvagem é conferido no dito organismo.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, ê atividade de um polipeptídeo de acordo com o polipeptídeo SEQ ID N°: 3401; ou codificado por uma molécula de ácido nucleico que compreende um ácidc nucleico SEQ ID N°: 3408 ou um homólogo da dita molécula de ácidc nucleico ou polipeptídeo, por exemplo, se uma atividade de uma molécula d< ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico oi polipeptídeo ou a sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, comí descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como um; molécula de ácido nucleico SEQ ID N°: 3408 ou polipeptídeo SEQ ID N° 3409, respectivamente é aumentado ou gerado ou se uma atividade “Proteín permease de transportador ABC” é aumentado ou gerado em um organismc preferivelmente um teor de GABA aumentado em comparação com o tipo selvagem é conferido no dito organismo.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, a atividade de um polipeptídeo de acordo com o polipeptídeo SEQ ID N°: 3565 ou codificado por uma molécula de ácido nucleico que compreende um ácido nucleico SEQ ID N°: 3564 ou um homólogo da dita molécula de ácido nucleico ou polipeptídeo, por exemplo, se uma atividade de uma molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico ou polipeptídeo ou a sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, como descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como uma molécula de ácido nucleico SEQ ID N°: 3564 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 3565, respectivamente é aumentado ou gerado ou se uma atividade “hidrolase” é aumentado ou gerado em um organismo, preferivelmente um teor de GABA aumentado em comparação com o tipo selvagem é conferido no dito organismo.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, ε atividade de um polipeptídeo de acordo com o polipeptídeo SEQ ID N°: 372Ç ou codificado por uma molécula de ácido nucleico que compreende um ácídc nucleico SEQ ID N°: 3728 ou um homólogo da dita molécula de ácidc nucleico ou polipeptídeo, por exemplo, se uma atividade de uma molécula d( ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico or polipeptídeo ou a sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, comí descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como um; molécula de ácido nucleico SEQ ID N°: 3728 ou polipeptídeo SEQ ID N° 3729, respectivamente é aumentado ou gerado ou se uma atividad' “fumarilacetoacetato hidrolase” é aumentado ou gerado em um organismo preferivelmente um teor de GABA aumentado em comparação com o tip< selvagem é conferido no dito organismo.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, atividade de um polipeptídeo de acordo com o polipeptídeo SEQ ID N°: 4069 ou codificado por uma molécula de ácido nucleico que compreende um ácido nucleico SEQ ID N°: 4068 ou um homólogo da dita molécula de ácido nucleico ou polipeptídeo, por exemplo, se uma atividade de uma molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico ou polipeptídeo ou a sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, como descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como uma molécula de ácido nucleico SEQ ID N°: 4068 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 4069, respectivamente é aumentado ou gerado ou se uma atividade “glicose desidrogenase” é aumentado ou gerado em um organismo, preferivelmente um teor de GABA aumentado em comparação com o tipo selvagem é conferido no dito organismo.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, a atividade de um polipeptídeo de acordo com o polipeptídeo SEQ ID N°: 4177 ou codificado por uma molécula de ácido nucleico que compreende um ácidc nucleico SEQ ID N°: 4176 ou um homólogo da dita molécula de ácidc nucleico ou polipeptídeo, por exemplo, se uma atividade de uma molécula dc ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico oi polipeptídeo ou a sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, com· descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como um molécula de ácido nucleico SEQ ID N°: 4176 ou polipeptídeo SEQ ID Nc 4177, respectivamente é aumentado ou gerado ou se uma atividade “serin protease” é aumentado ou gerado em um organismo, preferivelmenl um teor de GABA aumentado em comparação com o tipo selvagem conferido no dito organismo.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, atividade de um polipeptídeo de acordo com o polipeptídeo SEQ ID N°: 43< ou codificado por uma molécula de ácido nucleico que compreende um ácã nucleico SEQ ID N°: 4364 ou um homólogo da dita molécula de áci< nucleico ou polipeptídeo, por exemplo, se uma atividade de uma molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico ou polipeptídeo ou a sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, como descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como uma molécula de ácido nucleico SEQ ID N°: 4364 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 4365, respectivamente é aumentado ou gerado ou se uma atividade “proteína de ligação de ATP” é aumentado ou gerado em um organismo, preferivelmente um teor de GABA aumentado em comparação com o tipo selvagem é conferido no dito organismo.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, a atividade de um polipeptídeo de acordo com o polipeptídeo SEQ ID N°: 4718 ou codificado por uma molécula de ácido nucleico que compreende um ácido nucleico SEQ ID N°: 4717 ou um homólogo da dita molécula de ácido nucleico ou polipeptídeo, por exemplo, se uma atividade de uma molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico ou polipeptídeo ou a sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, como descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como uma molécula de ácido nucleico SEQ ID N°: 4717 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 4718, respectivamente é aumentado ou gerado ou se uma atividade “isocorismato sintase” é aumentado ou gerado em um organismo, preferivelmente um teor de GABA aumentado em comparação com o tipc selvagem é conferido no dito organismo.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, ε atividade de um polipeptídeo de acordo com o polipeptídeo SEQ ID N°: 486í ou codificado por uma molécula de ácido nucleico que compreende um ácidc nucleico SEQ ID N°: 4864 ou um homólogo da dita molécula de ácidc nucleico ou polipeptídeo, por exemplo, se uma atividade de uma molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico oi polipeptídeo ou a sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, comc descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como uma molécula de ácido nucleíco SEQ ID N°: 4864 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 4865, respectivamente é aumentado ou gerado ou se uma atividade “Proteína transportadora do tipo MFS” é aumentado ou gerado em um organismo, preferivelmente um teor de GABA aumentado em comparação com o tipo selvagem é conferido no dito organismo.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, a atividade de um polipeptídeo de acordo com o polipeptídeo SEQ ID N°: 4904 ou codificado por uma molécula de ácido nucleíco que compreende um ácido nucleico SEQ ID N°: 4903 ou um homólogo da dita molécula de ácido nucleíco ou polipeptídeo, por exemplo, se uma atividade de uma molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico ou polipeptídeo ou a sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, corne descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como unir molécula de ácido nucleico SEQ ID N°: 4903 ou polipeptídeo SEQ ID N° 4904, respectivamente é aumentado ou gerado ou se uma atividade “proteím bl003” é aumentado ou gerado em um organismo, preferivelmente um teor de GABA aumentado em comparação com o tipo selvagem c conferido no dito organismo.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, í atividade de um polipeptídeo de acordo com o polipeptídeo SEQ ID N°: 491( ou codificado por uma molécula de ácido nucleico que compreende um ácidc nucleico SEQ ID N°: 4909 ou um homólogo da dita molécula de ácidc nucleico ou polipeptídeo, por exemplo, se uma atividade de uma molécula d< ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico oi polipeptídeo ou a sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, com< descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como um molécula de ácido nucleico SEQ ID N°: 4909 ou polipeptídeo SEQ ID Nc 4910, respectivamente é aumentado ou gerado ou se uma atividade “proteín bl522” é aumentado ou gerado em um organismo, preferivelmente um teor de GABA aumentado em comparação com o tipo selvagem é conferido no dito organismo.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, a atividade de um polipeptídeo de acordo com o polipeptídeo SEQ ID N°: 4955 ou codificado por uma molécula de ácido nucleico que compreende um ácido nucleico SEQ ID N°: 4954 ou um homólogo da dita molécula de ácido nucleico ou polipeptídeo, por exemplo, se uma atividade de uma molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico ou polipeptídeo ou a sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, como descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como uma molécula de ácido nucleico SEQ ID N°: 4954 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 4955, respectivamente é aumentado ou gerado ou se uma atividade “proteína b2739” é aumentado ou gerado em um organismo, preferivelmente uni teor de GABA aumentado em comparação com o tipo selvagem e conferido no dito organismo.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, < atividade de um polipeptídeo de acordo com o polipeptídeo SEQ ID N°: 512Í ou codificado por uma molécula de ácido nucleico que compreende um ácidc nucleico SEQ ID N°: 5121 ou um homólogo da dita molécula de ácidc nucleico ou polipeptídeo, por exemplo, se uma atividade de uma molécula di ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico oi polipeptídeo ou a sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, conv descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como um molécula de ácido nucleico SEQ ID N°: 5121 ou polipeptídeo SEQ ID Nc 5122, respectivamente é aumentado ou gerado ou se uma atividade “proteín b3646” é aumentado ou gerado em um organismo, preferivelment um teor de GABA aumentado em comparação com o tipo selvagem conferido no dito organismo.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, a atividade de um polipeptídeo de acordo com o polipeptídeo SEQ ID N°: 5320 ou codificado por uma molécula de ácido nucleico que compreende um ácido nucleico SEQ ID N°: 5319 ou um homólogo da dita molécula de ácido nucleico ou polipeptídeo, por exemplo, se uma atividade de uma molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico ou polipeptídeo ou a sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, como descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como uma molécula de ácido nucleico SEQ ID N°: 5319 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 5320, respectivamente é aumentado ou gerado ou se uma atividade “proteína B4029” é aumentado ou gerado em um organismo, preferivelmente um teor de GABA aumentado em comparação com o tipo selvagem é conferido no dito organismo.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, a atividade de um polipeptídeo de acordo com o polipeptídeo SEQ ID N°: 53S8 ou codificado por uma molécula de ácido nucleico que compreende um ácidc nucleico SEQ ID N°: 5387 ou um homólogo da dita molécula de ácidc nucleico ou polipeptídeo, por exemplo, se uma atividade de uma molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico or polipeptídeo ou a sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, comc descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como um; molécula de ácido nucleico SEQ ID N°: 5387 ou polipeptídeo SEQ ID N° 5388, respectivamente é aumentado ou gerado ou se uma atividad< “acetiltransferase” é aumentado ou gerado em um organismo, preferivelmentf um teor de GABA aumentado em comparação com o tipo selvagem < conferido no dito organismo.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, ; atividade de um polipeptídeo de acordo com o polipeptídeo SEQ ID N°: 545' ou codificado por uma molécula de ácido nucleico que compreende um ácid< nucleico SEQ ID N°: 5458 ou um homólogo da dita molécula de ácido nucleico ou polipeptídeo, por exemplo, se uma atividade de uma molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende uiu ácido nucleico ou polipeptídeo ou a sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, como descrito na tabela I, 11 ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como uma molécula de ácido nucleico SEQ ID N°: 5458 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 5459, respectivamente é aumentado ou gerado ou se uma atividade “proteína carreadora de adia’1 é aumentado ou gerado em um organismo, preferivelmente um teor de GABA aumentado em comparação com o tipo selvagem é conferido no dito organismo.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, a atividade de um polipeptídeo de acordo com o polipeptídeo SEQ ID N°: 6042 ou codificado por uma molécula de ácido nucleico que compreende um ácido nucleico SEQ ID N°: 6041 ou um homólogo da dita molécula de ácido nucleico ou polipeptídeo, por exemplo, se uma atividade de uma molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico ot polipeptídeo ou a sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, comc descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como ume molécula de ácido nucleico SEQ ID N°: 6041 ou polipeptídeo SEQ ID N° 6042, respectivamente é aumentado ou gerado ou se uma atividade “geranilgeranil pirofosfato sintase” é aumentado ou gerado em um organismo preferivelmente um teor de GABA aumentado em comparação com o tipe selvagem é conferido no dito organismo.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, ; atividade de um polipeptídeo de acordo com o polipeptídeo SEQ ID N°: 647( ou codificado por uma molécula de ácido nucleico que compreende um ácid< nucleico SEQ ID N°: 6469 ou um homólogo da dita molécula de ácidi nucleico ou polipeptídeo, por exemplo, se uma atividade de uma molécula di ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico oi polipeptídeo ou a sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, como descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como uma molécula de ácido nucleico SEQ ID N°: 6469 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 6470, respectivamente é aumentado ou gerado ou se uma atividade “Subunidade de translocase de proteína independente de Sec” é aumentado ou gerado em um organismo, preferivelmente um teor de GABA aumentado em comparação com o tipo selvagem é conferido no dito organismo.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, a atividade de um polipeptídeo de acordo com o polipeptídeo SEQ ID N°: 6740 ou codificado por uma molécula de ácido nucleico que compreende um ácido nucleico SEQ ID N°: 6739 ou um homólogo da dita molécula de ácido nucleico ou polipeptídeo, por exemplo, se uma atividade de uma molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico oi polipeptídeo ou a sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, comí descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como um: molécula de ácido nucleico SEQ ID N°: 6739 ou polipeptídeo SEQ ID N° 6740, respectivamente é aumentado ou gerado ou se uma atividad “homocitrato sintase” é aumentado ou gerado em um organismc preferivelmente um teor de GABA aumentado em comparação com o tip selvagem é conferido no dito organismo.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, atividade de um polipeptídeo de acordo com o polipeptídeo SEQ ID N°: 751 ou codificado por uma molécula de ácido nucleico que compreende um ácid nucleico SEQ ID N°: 7510 ou um homólogo da dita molécula de ácid nucleico ou polipeptídeo, por exemplo, se uma atividade de uma molécula c ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico c polipeptídeo ou a sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, con descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como un molécula de ácido nucleico SEQ ID N°: 7510 ou polipcptídco SEQ ID N°: 7511, respectivamente é aumentado ou gerado ou se uma atividade “poligalacturonase” é aumentado ou gerado em um organismo, preferivelmente um teor de GABA aumentado em comparação com o tipo selvagem é conferido no dito organismo.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, a atividade de um polipeptídeo de acordo com o polipeptídeo SEQ ID N°: 7634 ou codificado por uma molécula de ácido nucleico que compreende um ácido nucleico SEQ ID N°: 7633 ou um homólogo da dita molécula de ácido nucleico ou polipeptídeo, por exemplo, se uma atividade de uma molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico ou polipeptídeo ou a sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, como descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como uma molécula de ácido nucleico SEQ ID N°: 7633 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 7634, respectivamente é aumentado ou gerado ou se uma atividade “tiorredoxina” é aumentado ou gerado em um organismo, preferivelmente um teor de GABA aumentado em comparação com o tipo selvagem é conferidc no dito organismo.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, ε atividade de um polipeptídeo de acordo com o polipeptídeo SEQ ID N°: 54 oi codificado por uma molécula de ácido nucleico que compreende um ácidc nucleico SEQ ID N°: 53 ou um homólogo da dita molécula de ácido nucleicc ou polipeptídeo, por exemplo, se uma atividade de uma molécula de ácidc nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico oi polipeptídeo ou a sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, comc descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como um; molécula de ácido nucleico SEQ ID N°: 53 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 54 respectivamente é aumentado ou gerado ou se uma atividade “piruvatt cinase” é aumentado ou gerado em um organismo, preferivelmente um teor d< GABA aumentado em comparação com o tipo selvagem é conferido no dito organismo.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, a atividade de um polipeptídeo de acordo com o polipeptídeo SEQ ID N°: 7138 ou codificado por uma molécula de ácido nucleico que compreende um ácido nucleico SEQ ID N°: 7137 ou um homólogo da dita molécula de ácido nucleico ou polipeptídeo, por exemplo, se uma atividade de uma molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico ou polipeptídeo ou a sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, como descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como uma molécula de ácido nucleico SEQ ID N°: 7137 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 7138, respectivamente é aumentado ou gerado ou se uma atividade “beta-ceto-redutase microssômica” é aumentado ou gerado em um organismo, preferivelmente um teor de GABA aumentado em comparação com o tipc selvagem é conferido no dito organismo.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, ; atividade de um polipeptídeo de acordo com o polipeptídeo SEQ ID N°: 720S ou codificado por uma molécula de ácido nucleico que compreende um ácidc nucleico SEQ ID N°: 7208 ou um homólogo da dita molécula de ácidc nucleico ou polipeptídeo, por exemplo, se uma atividade de uma molécula dc ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico oi polipeptídeo ou a sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, comc descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como um; molécula de ácido nucleico SEQ ID N°: 7208 ou polipeptídeo SEQ ID N° 7209, respectivamente é aumentado ou gerado ou se uma atividade “permeas* de aminoácido de cadeia ramificada “ é aumentado ou gerado em un organismo, preferivelmente um teor de GABA aumentado em comparaçã* com o tipo selvagem é conferido no dito organismo.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, atividade de um polipeptídeo de acordo com o polipeptídeo SEQ ID N°: 7275 ou codificado por uma molécula de ácido nucleico que compreende um ácido nucleico SEQ ID N°: 7274 ou um homólogo da dita molécula de ácido nucleico ou polipeptídeo, por exemplo, se uma atividade de uma molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico ou polipeptídeo ou a sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, como descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como uma molécula de ácido nucleico SEQ ID N°: 7274 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 7275, respectivamente é aumentado ou gerado ou se uma atividade “monooxigenase de biossíntese de ubiquinona “ é aumentado ou gerado em um organismo, preferivelmente um teor de GABA aumentado em comparaçãc com o tipo selvagem é conferido no dito organismo.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, í atividade de um polipeptídeo de acordo com o polipeptídeo SEQ ID N°: 749( ou codificado por uma molécula de ácido nucleico que compreende um áeidc nucleico SEQ ID N°: 7489 ou um homólogo da dita molécula de ácid< nucleico ou polipeptídeo, por exemplo, se uma atividade de uma molécula d< ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico oi polipeptídeo ou a sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, com< descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como um; molécula de ácido nucleico SEQ ID N°: 7489 ou polipeptídeo SEQ ID N° 7490, respectivamente é aumentado ou gerado ou se uma atividade “proteín YHR213W” é aumentado ou gerado em um organismo, preferivelment um teor de GABA aumentado em comparação com o tipo selvagem conferido no dito organismo.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, atividade de um polipeptídeo de acordo com o polipeptídeo SEQ ID N°: 824 ou codificado por uma molécula de ácido nucleico que compreende um ácid nucleico SEQ ID N°: 8239 ou um homólogo da dita molécula de ácid nucleico ou polipeptídeo, por exemplo, se uma atividade de uma molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico ou polipeptídeo ou a sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, como descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como uma molécula de ácido nucleico SEQ ID N°: 8239 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 8240, respectivamente é aumentado ou gerado ou se uma atividade “proteína ribossômica 60S” é aumentado ou gerado em um organismo, preferivelmente um teor de GABA aumentado em comparação com o tipo selvagem é conferido no dito organismo.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, a atividade de um polipeptídeo de acordo com o polipeptídeo SEQ ID N°: 8398 ou codificado por uma molécula de ácido nucleico que compreende um ácido nucleico SEQ ID N°: 8397 ou um homólogo da dita molécula de ácido nucleico ou polipeptídeo, por exemplo, se uma atividade de uma molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico ou polipeptídeo ou a sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, comc descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como uma molécula de ácido nucleico SEQ ID N°: 8397 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 8398, respectivamente é aumentado ou gerado ou se uma atividade “proteínt relacionada com autofagia” é aumentado ou gerado em um organismo preferivelmente um teor de GABA aumentado em comparação com o tipc selvagem é conferido no dito organismo.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, £ atividade de um polipeptídeo de acordo com o polipeptídeo SEQ ID N°: 8221 ou codificado por uma molécula de ácido nucleico que compreende um ácidt nucleico SEQ ID N°: 8227 ou um homólogo da dita molécula de ácidc nucleico ou polipeptídeo, por exemplo, se uma atividade de uma molécula d< ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico oi polipeptídeo ou a sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, com< descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como uma molécula de ácido nucleico SEQ ID N°: 8227 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 8228, respectivamente é aumentado ou gerado ou se uma atividade “subunidade de citocromo c oxidase VIU” é aumentado ou gerado em um organismo, preferivelmente um teor de GABA aumentado em comparação com o tipo selvagem é conferido no dito organismo.

Consequentemente, em uma forma de realização, no caso, a atividade de um polipeptídeo de acordo com o polipeptídeo SEQ ID N°: 8424 ou codificado por uma molécula de ácido nucleico que compreende um ácido nucleico SEQ ID N°: 8423 ou um homólogo da dita molécula de ácido nucleico ou polipeptídeo, por exemplo, se uma atividade de uma molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo que compreende um ácido nucleico ou polipeptídeo ou a sequência de consenso ou o motivo de polipeptídeo, como descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7 na mesma linha respectiva como uma molécula de ácido nucleico SEQ ID N°: 8423 ou polipeptídeo SEQ ID N°: 8424, respectivamente é aumentado ou gerado ou se uma atividade “permease de aminoácido de cadeia ramificada “ é aumentado ou gerado em um organismo, preferivelmente um teor de GABA aumentado em comparação com o tipo selvagem é conferido no dito organismo. O termo “expressão” refere-se à transcrição e/ou tradução dt um segmento de gene ou gene codogênico. Como uma regra, o produte resultante é um mRNA ou uma proteína. Entretanto, os produtos de expressãc também podem incluir RNAs funcionais tais como, por exemplo, antissentido ácidos nucleicos, tRNAs, snRNAs, rRNAs, RNAi, siRNA, ribozimas etc. / expressão pode ser sistêmica, local ou temporal, por exemplo, limitado ; certos tipos celulares, tecidos, órgãos ou organelas ou períodos de tempo.

Em uma forma de realização, o processo da presente invençã< compreende uma ou mais das seguintes etapas a) estabilização da proteína que confere a expressa» aumentada de uma proteína codificada por uma molécula de ácido nucleico da invenção ou do polipeptídeo da invenção tendo a atividade mencionada neste selecionadas do grupo que consiste de proteína ribossômica 60S, Proteína permease de transportador ABC, acetiltransferase, proteína carreadora de acila, proteína At4g32480, proteína At5gl6650, proteína de ligação de ATP, proteína relacionada com autofagia, fator de resposta de auxina, fator de transcrição de auxina, proteína bl003, proteína Μ522, proteína b2739, proteína b3646, proteína B4029, permease de aminoácido de cadeia ramificada, proteína cinase dependente de cálcio, subunidade de citocromo c oxidase VIII, fator de alongamento Tu, Proteína de captura de fator, fumarilacetoacetato hidrolase, geranilgeranil pirofosfato sintase, glicose desidrogenase, glicosil transferase, proteína de família induzida por harpina, homocitrato sintase, hidrolase, isocorismato sintase, Proteína transportadora do tipo MFS, beta-ceto-redutase microssômíca, poíigalacturonase, proteína fosfatase, piruvato cinase, Subunidade de translocase de proteína independente de Sec, serina protease, tiorredoxina, proteína da família de tiorredoxina, regulador transcripcional, monooxigenase de biossíntese de ubiquinona, e proteína YIIR213W and conferindo um teor de GABA aumentado em comparação com um tipo selvagem não transformadc correspondente; b) estabilizar um mRNA que confere a expressão aumentadí de uma proteína codificada por uma molécula de ácido nucleico da invençãc ou seus homólogos ou de um mRNA que codifica o polipeptídeo da presenb invenção tendo a atividade mencionada neste selecionadas do grupo qu< consiste de proteína ribossômica 60S, Proteína penmease de transportado: ABC, acetiltransferase, proteína carreadora de acila, proteína At4g32480 proteína At5gl6650, proteína de ligação de ATP, proteína relacionada con autofagia, fator de resposta de auxina, fator de transcrição de auxina, proteín; b!003, proteína bl522, proteína b2739, proteína b3646, proteína B4029 permease de aminoácido de cadeia ramificada, proteína cinase dependente de cálcio, subunidade de citocromo c oxidase VIII, fator de alongamento Tu, Proteína de captura de fator, fumarilacetoacetato hidrolase, geranilgeranil pirofosfato sintase, glicose desidrogenase, glicosil transferase, proteína de família induzida por harpina, homocitrato sintase, hidrolase, isocorismato sintase, Proteína transportadora do tipo MFS, beta-ceto-redutase microssômica, poligalacturonase, proteína fosfatase, piruvato cinase. Subunidade de translocase de proteína independente de Sec, serina protease. tiorredoxina, proteína da família de tiorredoxina, regulador transcripcional. monooxigenase de biossíntese de ubiquinona, e proteína YHR213W anc conferindo um teor de GABA aumentado em comparação com um tipc selvagem não transformado correspondente; c) aumentar a atividade específica de uma proteína que confere a expressão aumentada de uma proteína codificada por uma molécula de ácido nucleico da invenção ou do polipeptídeo da presente invenção oi. diminuição da regulação inibidora do polipeptídeo da invenção; d) gerar ou aumentar a expressão de um fator de transcriçãc endógeno ou artificial que media a expressão de uma proteína que confere í expressão aumentada de uma proteína codificada por uma molécula de ácidc nucleico da invenção ou do polipeptídeo da invenção tendo a atividadí mencionada neste selecionadas do grupo que consiste de proteína ribossômicí 60S, Proteína permease de transportador ABC, acetiltransferase, proteím carreadora de acila, proteína At4g32480, proteína At5gl6650, proteína d( ligação de ATP, proteína relacionada com autofagia, fator de resposta d< auxina, fator de transcrição de auxina, proteína Μ003, proteína bl522 proteína b2739, proteína b3646, proteína B4029, permease de aminoácido d< cadeia ramificada, proteína cinase dependente de cálcio, subunidade d< citocromo c oxidase VIII, fator de alongamento Tu, Proteína de captura d< fator, fumarilacetoacetato hidrolase, geranilgeranil pirofosfato sintase, glicos< desidrogenase, glicosil transferase, proteína de família induzida por harpina, homocitrato sintase, hidrolase, isocorismato sintase, Proteína transportadora do tipo MFS, beta-ceto-redutase microssômica, poligalacturonase, proteína fosfatase, piruvato cinase, Subunidade de transi ocase de proteína independente de Sec, serina protease, tiorredoxina, proteína da família de tiorredoxina, regulador transcripcional, monooxigenase de biossíntese de ubiquinona, e proteína YHR213W and que confere um teor de GABA aumentado em comparação com um tipo selvagem não transformadc correspondente; e) estimular a atividade de uma proteína que confere í expressão aumentada de uma proteína codificada por uma molécula de ácidt nucleico de a presente invenção ou um polipeptídeo da presente invençãc tendo a atividade mencionada neste selecionadas do grupo que consiste dc proteína ribossômica 60S, Proteína permease de transportador ABC acetiltransferase, proteína carreadora de acila, proteína At4g32480, proteín< At5gl6650, proteína de ligação de ATP, proteína relacionada com autofagia fator de resposta de auxina, fator de transcrição de auxina, proteína bl003 proteína Μ522, proteína b2739, proteína b3646, proteína B4029, permease d< aminoácido de cadeia ramificada, proteína cinase dependente de cálcic subunidade de cítocromo c oxidase ΥΙΠ, fator de alongamento Tu, Protern de captura de fator, fumarilacetoacetato hidrolase, geranilgeranil pirofosfat< sintase, glicose desidrogenase, glicosil transferase, proteína de famíli induzida por harpina, homocitrato sintase, hidrolase, isocorismato sintase Proteína transportadora do tipo MFS, beta-ceto-redutase microssômice poligalacturonase, proteína fosfatase, piruvato cinase, Subunidade d translocase de proteína independente de Sec, serina protease, tiorredoxim proteína da família de tiorredoxina, regulador transcripcional, monooxigenas de biossíntese de ubiquinona, e proteína YHR213W and conferindo um tec de GABA aumentado em comparação com um tipo selvagem nã transformado correspondente pela adição de um ou mais fatores indutores exógenos aos organismos ou parte destes; f) expressar um gene transgênico que codifica uma proteína que confere a expressão aumentada de um polinucleotídeo codificado por uma molécula de ácido nucleico de a presente invenção ou um polipeptídeo da presente invenção, tendo a atividade mencionada neste selecionadas do grupo que consiste de proteína ribossômica 60S, Proteína permease de transportador ABC, acetiltransferase, proteína carreadora de acila, proteína At4g32480. proteína At5gl6650, proteína de ligação de ATP, proteína relacionada com autofagia, fator de resposta de auxina, fator de transcrição de auxina, proteína bl003, proteína bl522, proteína b2739, proteína b3646, proteína B4029. permease de aminoácido de cadeia ramificada, proteína cinase dependente de cálcio, subunidade de citocromo c oxidase VIII, fator de alongamento Tu. Proteína de captura de fator, fumarilacetoacetato hidrolase, geranilgerani] pirofosfato sintase, glicose desidrogenase, glicosil transferase, proteína de família induzida por harpina, homocitrato sintase, hidrolase, isocorismatc sintase, Proteína transportadora do tipo MFS, beta-ceto-redutase microssôrnica, poligalacturonase, proteína fosfatase, piruvato cinase Subunidade de translocase de proteína independente de Sec, serina protease tiorredoxina, proteína da família de tiorredoxina, regulador transcripcional monooxigenase de biossíntese de ubiquinona, e proteína YHR213W anc conferindo um teor de GABA aumentado em comparação com um tipc selvagem não transformado correspondente; e/ou g) aumentar o número de cópia de um gene que confere í expressão aumentada de uma molécula de ácido nucleico que codifica un polipeptídeo codificado por uma molécula de ácido nucleico da invenção ou c polipeptídeo da invenção tendo a atividade mencionada neste selecionadas dt grupo que consiste de proteína ribossômica 60S, Proteína permease d< transportador ABC, acetiltransferase, proteína carreadora de acila, proteíní At4g32480, proteína At5gl6650, proteína de ligação de ATP, proteína relacionada com autofagia, fator de resposta de auxina, fator de transcrição de auxina, proteína bl003, proteína bl522, proteína b2739, proteína b3646, proteína B4029, pennease de aminoácido de cadeia ramificada, proteína cinase dependente de cálcio, subunidade de citocromo c oxidase VIII, fator de alongamento Tu, Proteína de captura de fator, fumarilacetoacetato hidrolase, geranilgeranil pirofosfato sintase, glicose desidrogenase, glicosil transferase, proteína de família induzida por harpina, homocitrato sintase, hidrolase, isocorismato sintase, Proteína transportadora do tipo MFS, beta-ceto-redutase microssômica, poligalacturonase, proteína fosfatase, piruvato cinase, Subunidade de translocase de proteína independente de Sec, serina protease, tiorredoxina, proteína da família de tiorredoxina, regulador transcripcional, monooxigenase de biossíntese de ubiquinona, e proteína YHR213W and conferindo um teor de GABA aumentado em comparação com um tipo selvagem não transformado correspondente; h) aumentar' a expressão do gene endógeno que codifica o polipeptídeo da invenção ou seu homólogo pela adição de expressão positiva ou remoção de elementos de expressão negativos, por exemplo, a recombinação homóloga pode ser usada para introduzir elementos reguladores positivos como para plantas o intensificador 35S no promotor ou para remover os elementos repressores ou umas regiões reguladoras. Além disso os métodos de conversão genética podem ser usados para interromper os elementos repressores ou para intensificar a atividade de elementos positivos — os elementos positivos podem ser aleatoriamente introduzidos em plantas pela mutagênese de T-DNA ou transposon e linhas podem ser identificadas em que os elementos positivos foram integrados próximos a um gene d? invenção, cuja expressão é, desse modo, intensificada e/ou i) modular as condições de desenvolvimento de uma planta dc uma tal maneira, que a expressão ou atividade do gene que codifica a proteín; da invenção ou a proteína por si só é intensificada; j) seleção de organismos com, especialmente, atividade alta das proteínas da invenção a partir de recursos naturais ou de mutagenizados e sua criação nos organismos alvos, por exemplo, as lavouras de elite.

Preferivelmente, o dito mRNA é uma molécula de ácido nucleico da presente invenção e/ou a proteína que confere a expressão aumentada de uma proteína codificada por uma molécula de ácido nucleico da presente invenção sozinho ou ligado a urna sequência de ácido nucleico de trânsito ou sequência de ácido nucleico que codifica peptídeo de trânsito ou o polipeptídeo tendo a atividade mencionada neste, por exemplo, que confere um teor de GABA aumentado em comparação com um tipo selvagem não transformado correspondente após o aumento da expressão ou atividade do polipeptídeo codificado ou tendo a atividade de um. polipeptídeo tendo uma atividade como a proteína como mostrado na tabela 11 coluna 3 ou seus homólogos.

Em geral, a quantidade de mRNA ou polipeptídeo em ume célula ou um compartimento de um organismo correlaciona-se com í quantidade de proteína codificada e, desta maneira, com a atividade total d* proteína codificada no dito volume. A dita correlação não é sempre linear uma atividade no volume é dependente da estabilidade das moléculas ou < presença de ativação ou inibição de co-fatores. Além disso, as inibições d< produto e eduto de enzimas são bem conhecidos e descritos nos livros texto por exemplo, Stryer, Biochemistry.

Em geral, a quantidade de mRNA, polinucleotídeo 01 molécula de ácido nucleico em uma célula ou um compartimento de un organismo correlaciona-se com a quantidade de proteína codificada e, dest maneira, com a atividade total da proteína codificada no dito volume. A dit correlação nem sempre é linear, a atividade no volume é dependente d estabilidade das moléculas, a degradação das moléculas ou a presença d ativação ou inibição de co-fatores. Além disso, as inibições de produto e eduto de enzimas são bem conhecidos, por exemplo, Zinser et al. “Enzyminhibitoren’7Enzyme inhibitors”. A atividade das proteínas e/ou polipeptídeos codificados mencionados acima por uma molécula de ácido nucleico de a presente invenção pode ser aumentada de várias maneiras. Por exemplo, a atividade em um organismo ou em uma parte deste, como uma célula, é aumentada por intermédio do aumento do produto genético que aumenta o número de produto genético, por exemplo, pelo aumento da taxa de expressão, como a introdução de um promotor mais forte ou pelo aumento da estabilidade do mRNA expressado, desta maneira que aumenta a taxa de tradução e/ou aumento da estabilidade do produto genético, desta maneira, reduzindo as proteínas deterioradas. Além disso, a atividade ou rotação de enzimas pode ser influenciado de uma tal maneira que a redução ou aumento da taxa de reação ou uma modificação (redução ou aumento) da afinidade aos resultados de substrato, é atingida. Uma mutação no centro catalítico de um polipeptídeo da invenção, por exemplo, como enzima, pode modular a taxa de rotação da enzima, por exemplo, um nocaute de um aminoácido essencial pode levar a uma atividade reduzida ou completam ente de nocaute da enzima ou ε anulação ou mutação de locais de ligação de regulador pode reduzir ume regulação negativa como uma inibição de regeneração (ou uma inibição de substrato, se o nível de substrato também for aumentado). A atividade específica de uma enzima da presente invenção pode ser aumentada, tal que ε taxa de rotação é aumentada ou a ligação de um co-fator é melhorado. A melhora da estabilidade da codificação de mRNA ou a proteína também pode aumentar a atividade de um produto genético. O estímulo da atividade também está sob o escopo do termo “atividade aumentada”.

Além disso, a regulação das sequências de ácido nucleice mencionados acima pode ser modificada de modo que a expressão genética < aumentada. Isto pode ser atingido vantajosamente por meio de sequências reguladoras heterólogas ou pela modificação, por exemplo, mutação, as sequências reguladoras naturais que estão presentes. Os métodos vantajosos também podem ser combinados um com o outro.

Em geral, uma atividade de um produto genético em um organismo ou parte deste, em particular em uma célula vegetal ou organela de uma célula vegetal, uma planta, ou um tecido vegetal ou uma parte da mesma ou em um microorganismo pode ser aumentado pelo aumento da quantidade do mRNA codificador específico ou a proteína correspondente no dito organismo ou parte deste. “Quantidade de proteína ou mRNA” é entendido como significando o número de molécula de polipeptídeos ou moléculas de mRNA em um organismo, um tecido, uma célula ou um compartimento celular. “Aumento” na quantidade de uma proteína significa o aumento quantitativo aumento do número de molécula da dita proteína em um organismo, um tecido, uma célula ou um compartimento celular, tal como uma organela como um plastídeo ou mitocôndria ou parte da mesma - por exemplo por um dos métodos descritos a seguir — em comparação com um tipo selvagem, controle ou referência. O aumento no número de moléculas aumenta preferivelmente pelo menos 1 %, preferivelmente mais do que 10 %, mais preferivelmente ε 30 % ou mais, especialmente preferível 50 %, 70 % ou mais, muitc especialmente preferível 100 %, mais preferivelmente 500 % ou mais entretanto, uma expressão de novo também é relacionado como um indivíduc da presente invenção.

Uma modificação, isto é, um aumento, pode ser causado po: fatores endógenos ou exógenos. Por exemplo, um aumento na atividade en um organismo ou uma parte da mesma pode ser causada pela adição de un produto genético ou um precursor ou um ativador ou um agonista ao meio oi nutrição ou pode ser causado pela introdução dos ditos pacientes em un organismo, transitório ou estável. Além disso um tal aumento pode ser atingido pela introdução da sequência de ácido nucleico inventiva ou a proteína codificada no compartimento celular correto, por exemplo, no núcleo ou citoplasma respectivamente ou em plastídeos por transformação e/ou alvejamento.

Em uma forma de realização o aumento ou diminuição na tolerância e/ou resistência à tensão ambiental em comparação com um célula vegetal do tipo selvagem não transformada correspondente em uma planta ou uma parte da mesma, por exemplo, em uma célula, um tecido, um órgão, uma organela etc., é atingido pelo aumento do nível endógeno do polipeptídeo da invenção. Consequentemente, em uma forma de realização da presente invenção, a presente invenção diz respeito a um processo em que o número de cópias genéticas de um gene que codifica o polmucleotídeo ou molécula de ácido nucleico da invenção é aumentado. Além disso, o nível endógeno dc polipeptídeo da invenção pode, por exemplo, ser aumentado pela modificaçãc da regulação de transcrição ou tradução do polipeptídeo.

Em uma forma de realização, o teor de GABA aumentado m célula pode ser alterado pela mutagênese alvejada ou aleatória dos gene: endógenos da invenção. Por exemplo, a recombinação homóloga pode se usada para introduzir elementos reguladores positivos como para plantas < intensificador 35S no promotor ou para remover os elementos repressores da regiões reguladoras. Além disso, a conversão de gene como nos método descritos por Kochevenko and Willmitzer (Plant Physiol. 200: May; 132(1 ):174-84) e citações neste podem ser usadas para interromper o elementos repressores ou para intensificar a atividade de elemento reguladores positivos.

Além disso, os elementos positivos podem ser aleatoriament introduzidos em genomas (planta) pela mutagênese de T-DNA ou transposo e as linhas podem ser avaliadas, em que os elementos positivos sejai integrados próximos a um gene da invenção, para a expressão que é, desse modo, intensificada. A ativação dos genes vegetais por integrações aleatórias de elementos intensificadores foi descrita por Hayashi et al., 1992 (Science 258:1350-1353) ou Weigel et al., 2000 (Plant Physiol. 122, 1003-1013) e outros citados neste.

As estratégias genéticas reversas para identificar inserções (que eventualmente carregam os elementos de ativação) próximos aos genes de interesse foram descritos para vários casos, por exemplo, por exemplo, Krysan et al., 1999 (Plant Cell 1999, 11, 2283-2290); Sessions et al., 2002 (Plant Cell 2002, 14, 2985-2994); Young et al., 2001, (Plant Physiol. 2001, 125, 513-518); Koprek et al., 2000 (Plant J. 2000, 24, 253-263) ; Jeon et al., 2000 (Plant J. 2000, 22, 561-570) ; Tissícr et al., 1999 (Plant Cell 1999, 1L 1841-1852); Speulmann et al., 1999 (Plant Cell 1999,11, 1853-1866). Brieffy material de all plants of a large T-DNA or transposon mutagenized plani population is harvested and genomic DNA prepared. Then the genomic DNA is pooled following specific architectures as described por exemplo in Rrysar et al., 1999 (Célula vegetal 1999, 11, 2283-2290). Os grupos de DNA: genômicos são então avaliados pelas reações de PCR multiplex específica: que detectam a combinação do mutagene de inserção (por exemplo, T-DNA ou Transposon) e o gene de interesse. Portanto, as reações de PCR sã< realizadas nos grupos de DNA com combinações específicas de T-DNA oi iniciadores de fronteira de transposon e iniciadores específicos de. As regra gerais para o projeto de iniciador podem ser novamente adotadas de Krysan e al., 1999 (Plant Cell 1999, 11, 2283-2290). A Reavaliação de grupos e DNi de níveis mais baixos levaram à identificação de plantas individuais em que gene de interesse é ativado pelo mutagene de inserção. A intensificação de elementos reguladores positivos ou interrupção ou enfraquecimento de elementos reguladores negativos tambéi podem ser atingidos através das técnicas de mutagênese comum: A produçã de populações mutadas quimicamente ou por radiação em uma técnica comum e conhecida pelo trabalhador habilitado. Os métodos para plantas são descritos por Koomeef et al. 1982 e as citações neste e por Lightner and Gaspar em “Methods in Molecular Biology” Vol 82. Estas técnicas usualmente induzem mutações de ponto que podem ser identificadas em qualquer gene conhecido usando-se métodos tais como TILLING (Colbert et al. 2001).

Consequentemente, o nível de expressão pode ser aumento se os genes endógenos que codifica um polipeptídeo que confere uma expressão aumentada do polipeptídeo da presente invenção, em particular genes que compreende a molécula de ácido nucleico da presente invenção, sãc modificados por intermédio de uma recombinação homóloga, métodos Tilling ou conversão do gene. Também é possível adicionar como mencionado neste as sequências de alvejamento das sequências do ácido nucleico inventivo.

As sequências reguladoras preferivelmente em adição a umt sequência alvo ou parte deste pode ser operacionalmente ligado à regiãc codificadora de uma proteína endógena e controle de sua transcrição c tradução ou a estabilidade ou declínio do mRNA codificado ou a proteín; expressada. A fim de modificar e controlar a expressão, promotor, UTRs locais de união, sinais de processamento, locais de poliadenilação terminadores, intensificadores, repressores, locais de modificação pós transcripcional ou pós-traduzido podem ser mudados, adicionados oi melhorados. Por exemplo, a ativação dos genes vegetais pelas integraçõe aleatórias dos elementos intensificadores foram descritos por Hayashi et al 1992 (Science 258:1350-1353) ou Weigel et al., 2000 (Plant Physiol. 122 1003-1013) e outros citados neste. Por exemplo, o nível de expressão d proteína endógena pode ser modulado pela substituição do promotc endógeno com um promotor transgênico mais forte ou pela substituição d 3’UTR endógeno com um 3’UTR, que fornece mais estabilidade sem melhor da região codiflcadora. Ainda, a regulação transcripcional pode ser modulada pela introdução de um fator de transcrição artificial como descrito nos exemplos. Promotores alternativos, terminadores e UTR são descritos abaixo. A ativação de um polipeptídeo endógeno tendo atividade mencionada acima, por exemplo tendo a atividade de uma proteína como mostrado na tabela II, coluna 3 ou do polipeptídeo da invenção, por exemplo conferindo o conteúdo GABA aumentado como comparado a um tipo selvagem não transformado correspondente após o aumento da expressão ou atividade no citosol e/ou em uma organela semelhante ao plastídeo, também pode ser aumentado pela introdução de um fator de transcrição sintético, que liga-se próximo à região codifícadora do gene que codifica a proteína como mostrado na tabela II, coluna 3 e ativa sua transcrição. Uma proteína de dedo de zinco quimérica pode ser construída, que compreende um domínio de ligação de DNA específico e um domínio de ativação como as por exemplo o domínio VP16 do vírus simples do Herpes. O domínio de ligação específica pode ligar-se à região reguladora do gene que codifica a proteína como mostrado na tabela II, coluna 3. A expressão do fator de transcrição quimérico em um organismo, em particular em uma. planta, leva a uma expressão específica da proteína como mostrado na tabela II, coluna 3, ver por exemplo em W001/52620, ouiz, Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 2002, Vol. 99, 13290 ou Guan, Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 2002, Vol. 99, 13296.

Em uma outra forma de realização do processo de acordo com a invenção, organismos são usados em que um dos genes mencionados acima, ou um dos ácidos nucleicos mencionados acima, são mutados de uma maneira em que a atividade dos produtos genéticos codificados é menos influenciada pelos fatores celulares, ou não em todos, em comparação com as proteínas não mutadas. Por exemplo, o mecanismo de regulação bem conhecido da atividade enzimática são mecanismos de inibição de substrato ou regulação de regeneração. Os meios e técnicas para a introdução da substituição, anulações e adições de uma ou mais bases, nucleotídeos ou aminoácidos de uma sequência correspondente são descritos neste abaixo nos parágrafos correspondentes e as referências listadas neste, por exemplo em Sambrook et al., Molecular Cloning, Cold Spring Habour, NY, 1989. A pessoa habilitada na técnica será capaz de identificar os domínios de regulação e locais de ligação dos reguladores pela comparação da sequência da molécula do ácido nucleico da presente invenção ou um produto de expressão deste com o estado da técnica pelo software de computador significa que compreende os algoritmos para identificação dos locais de ligação e domínios de regulação ou pela introdução em uma molécula de ácido nucleico ou em uma proteína, sistematicamente mutações e ensaios para aquelas mutações que levarão a uma atividade específica aumentada ou uma atividade aumentada por volume, em particular por célula.

Pode ser portanto vantajoso expressar em um organismo ε molécula de ácido nucleico da invenção ou um polipeptídeo da invençãc derivado de um organismo relacionado evolucionariamente distante, como aí por exemplo usando um gene procariótico em um hospedeiro eucariótico como nestes casos o mecanismo de regulação da célula hospedeira não pode diminuir a atividade (célula ou específico) do gene ou seu produto d< expressão. A mutação é introduzida em uma tal maneira que o conteúdí GABA aumentado não é adversamente afetado.

Menos influência na regulação de um gene ou seu produto d< gene é entendido como significando uma regulação reduzida da atividad biológica ou enzimática levando a uma atividade celular ou específic aumentada do gene ou seu produto. Um aumento da atividade biológica 01 enzimática é entendido como significando uma atividade biológica o1 enzimática, que é aumentado por pelo menos 10 %, vantajosamente pel menos 20, 30 ou 40 %, especialmente vantajosamente por pelo menos 50, 6 ou 70 % em comparação com o organismo de partida. Este leva a um conteúdo GABA aumentado como comparado a um tipo selvagem não transformado correspondente. A invenção contanto que os métodos acima podem ser realizados tal que a tolerância à tensão é aumentada. Também é possível obter uma diminuição na tolerância à tensão. A invenção não é limitada a ácidos nucleicos específicos, polipeptídeos específicos, tipos celulares específicos, células hospedeiras específicas, condições específicas ou métodos específicos etc. tal como, mas pode variar e modificações numerosas e variações destes serão evidentes aquela pessoa habilitada na técnica. Também será entendido que a terminologia usada neste é para o propósito da descrição das formas de realização específicas apenas não é pretendido ser limitante. A presente invenção também diz respeito aos ácidos nucleicos isolados que compreende uma molécula de ácido nucleico selecionada do grupo que consiste de: a) uma molécula de ácido nucleico que codifica o polipeptídec mostrado na coluna 7 da tabela II B; b) uma molécula de ácido nucleico mostrada na coluna 7 de tabela I B; c) uma molécula de ácido nucleico, que, como um resultado de degeneração do código genético, pode ser derivado de uma sequência de polipeptídeo descrito na coluna 5 ou 7 da tabela II e confere um conteúdc GABA aumentado como comparado a um tipo selvagem não transformadc correspondente; d) uma molécula de ácido nucleico tendo pelo menos 30 % d( identidade com uma sequência da molécula de ácido nucleico de un polinucleotídeo que compreende a molécula de ácido nucleico mostrada n; coluna 5 ou 7 da tabela I e confere um conteúdo GABA aumentado comt comparado a um tipo selvagem não transformado correspondente; e) uma molécula de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo tendo pelo menos 30 % de identidade com a sequência de aminoácido do polipeptídeo codificado pela molécula de ácido nucleico de (a) a (c) e tendo a atividade representada pela molécula de ácido nucleico que compreende um polinucleotídeo como descrito na coluna 5 da tabela I e confere um conteúdo GABA aumentado como comparado a um tipo selvagem não transformado correspondente a célula vegetal, uma planta ou uma parte deste; f) uma molécula de ácido nucleico que híbrídiza com urm molécula de ácido nucleico de (a) a (c) sob condições de hibridizaçãc estringentes e confere um conteúdo GABA aumentado como comparado a un tipo selvagem não transformado correspondente a célula vegetal, uma plantí ou uma parte deste; g) uma molécula de ácido nucleico que codifica un polipeptídeo que pode ser isolado com a ajuda de anticorpos monoclonais 01 policlonais feitos contra um polipeptídeo codificado por uma das molécula; do ácido nucleico de (a) a (e) e tendo a atividade representada pela molécul; de ácido nucleico que compreende um polinucleotídeo como descrito n; coluna 5 da tabela I; h) uma molécula de ácido nucleico que codifica un polipeptídeo compreende a sequência consenso ou um ou mais motivos d polipeptídeos como mostrado na coluna 7 da tabela IV e preferivelment tendo a atividade representada pela molécula de ácido nucleico qu compreende um polinucleotídeo como descrito na coluna 5 da tabela II ou IV h) uma molécula de ácido nucleico que codifica ur polipeptídeo tendo a atividade representada pela proteína como descrito n coluna 5 da tabela II e confere um conteúdo GABA aumentado com comparado a um tipo selvagem não transfonnado correspondente a célul vegetal, uma planta ou uma parte deste; i) uma molécula de ácido nucleico que compreende um polinucleotídeo, que é obtido pela amplificação de uma biblioteca de cDNA ou uma biblioteca genômica usando os iniciadores na coluna 7 da tabela III e preferivelmente tendo a atividade representada pela proteína que compreende um polipeptídeo como descrito na coluna 5 da tabela II ou IV; e j) uma molécula de ácido nucleico que é obtido pela avaliação de uma biblioteca de ácido nucleico adequado sob condições de hibrídização estrigentes com uma sonda que compreende uma sequência complementar de uma molécula de ácido nucleico de (a) ou (b) ou com um fragmento deste, tendo pelo menos 15 nt, preferivelmente 20 nt, 30 nt, 50 nt, 100 nt, 200 nt ou 500 nt de uma molécula de ácido nucleico complementar a uma sequência da molécula de ácido nucleico caracterizada em (a) a (e) e que codifica um polipeptídeo tendo a atividade representada pela proteína que compreende um polipeptídeo como descrito na coluna 5 da tabela II; pelo qual a molécula de ácido nucleico de acordo com (a) a (j está pelo menos em um ou mais nucleotídeos diferentes a partir da sequênci; descrita na coluna 5 ou 7 da tabela I A e preferivelmente que codifica umi proteína que difere-se pelo menos em um ou mais aminoácidos da; sequências de proteína descrita na coluna 5 ou 7 da tabela II A.

Em uma forma de realização a invenção diz respeito homólogos das sequências anteriormente mencionadas, que pode ser isolad< vantajosamente a partir da levedura, fungos, vírus, algas, bactéria, tal com Acetobacter (subgen. Acetobacter) aceti; Aciditiobacillus ferrooxidans Acinetobacter sp.; Actinobacillus sp; Aeromonas salmonicida; Agrobacteriur tumefaciens; Aquifex aeolicus; Arcanobacterium pyogenes; Aster yellow phytoplasma; Bacillus sp.; Bifidobacterium sp.; Borrelia burgdorfer Brevibacterium linens; Brucella melítensis; Buchnera sp.; Butyrivibri fibrisolvens; Campylobacter jejuni; Caulobacter crescentus; Chlamydia sp Chlamydophila sp.; Clorobium limicola; Citrobacter rodentium; Clostridium sp.; Comamonas testosteroni; Corynebacterium sp.; Coxiella bumetii; Deinococcus radiodurans; Dichclobactcr nodosus; Edwardsiclla ictaluri; Enterobact er sp.; Erysipelothrix rhusiopathiae; Escherichia coli;

Flavobacterium sp.; Francisella tularensis; Frankia sp. Cpll; Fusobacterium nucleatum; Geobacillus stearothermophilus; Gluconobacter oxydans; Fíaemophilus sp.; Fíelicobacter pylori; Klebsiella pneumoniae; Lactobacillus sp.; Lactococcus lactis; Listeria sp.; Mannheimia haemolytica; Mesorhizobium loti; Metilophaga thalassica; Microcystis aeruginosa; Microscilla sp. PRE1; Moraxella sp. TA144; Mycobacterium sp.; Mycoplasma sp.; Neisseria sp.; Nitrosomonas sp.; Nostoc sp. PCC 7120; Novosphingobium aromaticivorans; Oenococcus oeni; Pantoea citrea: Pasteurella. multocida; Pediococcus pentosaceus; Phomiidium foveolarum; Phytoplasma sp.; Plectonema boryanum; Prevotella ruminicola;

Propionibacterium sp.; Proteus vulgaris; Pseudomonas sp.; Ralstonia sp.; Rhizobium sp.; Rhodococcus equi; Rhodothermus marinus; Rickettsia sp.: Riemerella anatipestifer; Ruminococcus flavefaciens; Salmonella sp. Selenomonas ruminantiurri; Serratia entomophila; Shigella sp.; Sinorhizobiun meliloti; Staphylococcus sp.; Streptococcus sp.; Streptomyces sp. Synechococcus sp.; Synechocystis sp. PCC 6803; Theraiotoga marítima Treponema sp.; Ureaplasma urealyticum; Vibrio cholerae; Vibric parahaemolyticus; Xylella fastidiosa; Yersinia sp.; Zymomonas mobilis preferivelmente Salmonella sp. ou Escherichia coli ou plantas preferivelmente a partir da leveduras tal como a partir do gênen Saccharomyces, Pichia, Candida, Hansenula, Torulopsis 01 Schizosaccharomyces ou plantas tal como Arabidopsis thaliana, milho, trigc centeio, aveia, triticale, arroz, cevada, soja, amendoim, algodão, borragerr girassol, linhaça, prímula, semente de colza, canola e nabo silvestre mandioca, pimenta, girassol, tagetes, plantas solanáceas tal como batate tabaco, berinjela e tomate, espécies Vicia, ervilha, alfalfa, plantas arbustivas tal como café, cacau, chá, espécies Salix, árvores tal como dendezeiro, coco, grama perne, tal como azevém e festuca e lavouras de forragem, tal como alfalfa e trevo e de abeto vermelho, pinheiro ou abeto por exemplo. Mais preferivelmente homólogos das sequências anteriormente mencionadas podem ser isolados de Saccharomyces cerevisiae, E. coli ou plantas, preferivelmente Brassica napus, Glycine max, Zea mays, algodão, ou Oryza sativa.

As proteínas (relacionadas a GABA) da presente invenção são preferivelmente produzidas pelas técnicas de DNA recombinantes. Por exemplo, a molécula de ácido nucleico que codifica a proteína é elonada em um vetor de expressão, por exemplo em um vetor binário, um vetor de expressão é introduzido em uma célula hospedeira, por exemplo o Arabidopsis thaliana NASC N906 de tipo selvagem ou qualquer outra célula vegetal como descrito nos exemplos ver abaixo e a proteína relacionada è tensão é expressada na dita células hospedeiras. Exemplos para vetores binários são pBIN19, pBTIOl, pBinAR, pGPTV, pCAMRTA, pBTB-HYG pBecks, pGreen ou pPZP (Hajukiewicz, P. et ah, 1994, Plant Mol. Biol., 25 989-994 and Hellens et al, Trends in Plant Science (2000) 5, 446-451.).

Em uma forma de realização a proteína (relacionada a GABA da presente invenção é preferivelmente produzida em um compartimento ds célula, mais preferivelmente nos plastídeos. Os meios de introduzir os ácido; nucleicos nos plastídeos e produzir as proteínas neste compartimento sã< conhecidos a uma pessoa habilitada na técnica e também foram descrito nesta aplicação.

Vantajosamente, as sequências de ácido nucleico de acord< com a invenção ou a construção do gene junto com pelo menos um gen repórter são clonados em um cassete de expressão, que é introduzida n organismo por intermédio de um vetor ou diretamente no genoma. Este gen repórter deve permitir fácil detecção por intermédio de um desenvolvimento, fluorescência, química, bioluminescência ou ensaio de resistência ou por intermédio de uma medição fotométrica. Exemplos de genes repórter que podem ser mencionados são genes resistentes à antibiótico ou herbicida, genes de hidrolase, genes de proteína de fluorescência, genes de bioluminescência, açúcar ou genes metabólicos de nucleotídeo ou genes de biossíntese tal como o gene Ura3, o gene Ilv2, o gene luciferase, o gene β-galactosidase, o gene gfp, o gene de fosfatase 2—desoxiglicose—6—fosfato, o gene. β-glucuronidase, gene β-lactamase, o gene · de fosfotransferase de neomicina, o gene de fosfotransferase de higromicina, um gene de sintase acetohidroxiácido mutado (AI JAS), também conhecido como gene acetolactato sintase (ALS), um gene para a enzima que metaboliza o D~ aminoácido ou o gene BASTA (= resistência dc glufosinato). Estes genes permitem facilmente a medição e quantificação da atividade de transcrição e consequentemente da expressão dos genes. Nesta maneira as posições do genoma podem ser identificadas que exibem diferenciação na produtividade.

Em uma forma de realização preferida uma construção de ácido nucleico, por exemplo um cassete de expressão, que compreende a montante, isto é na extremidade final de 5’ da sequência correspondente, um promotor e a jusante, isto é na extremidade final 3’, um sinal de poliadenilação e opcionalmente outros elementos reguladores que sãc operacionalmente ligados à intervenção da sequência codificadora com um dos ácidos nucleicos da SEQ ID N° como descrito na tabela I, coluna 5 e 7 Por uma ligação operável é significado a disposição sequencial do promotor sequência codificadora, terminador e opcionalmente outros elemento; reguladores em uma tal maneira que cada um dos elementos reguladore possa executar sua função em uma expressão da sequência correspondente m devida maneira. As sequências preferidas pela ligação operável são a sequências de alvejamento para garantir a localização subcelular no plastídcos. Entretanto, as sequências de alvejamento para garantir a localização subcelular na mitocôndria, no rctículo endoplásmico (~ ER), no núcleo, nos corpúsculos oleosos ou outros compartimentos também podem ser utilizados bem como promotores de tradução tal como a sequência guia 5’ no vírus de mosaico do tabaco (Gallie et al., Nucl. Acids Res. 15 (1987), 8693 -8711).

Uma construção de ácido nucleico, por exemplo um cassete de expressão pode, por exemplo, conter um promotor constitutivo ou um promotor específico por tecido (preferivelmente o promotor USP ou napina) o gene a ser expressado e o sinal de retenção ER. Para o sinal de retenção ER a sequência de aminoácido KDEL (lisina, ácido aspártico, ácido glutâmico. leucina) ou a sequência de aminoácido KKX (1 isina-1 isina-A-vtop, em que X significa cada outro aminoácido conhecido) é preferivelmente utilizado.

Para a expressão em um organismo hospedeiro, por exemple uma planta, um cassete de expressão é vantajosamente inserido em um vetoj tal como por meio do exemplo de um plasmídeo, um fago ou outro DNA qut permite a ótima expressão dos genes no organismo hospedeiro. Exemplos de plantas adequadas são: em E. coli séries pLG338, pACYCl84, pBRtal comc por exemplo pBR322, séries pUC tal como pUC18 ou pUC19, série: Ml 13mp, pKC30, pRep4, pHSl, pHS2, PPLc236, pMBL24, pLG200 pUR290, ρΓΝ-ΙΗ113-Β1, Xgtll ou pBdCI; em Streptomyces pIJlOl, pIJ364 pIJ702 ou pIJ361; em Bacillus pUBUO, pC194 ou pBD214; en Corynebacterium pSA77 ou pAJ667; em fungos pALSl, pIL2 ou pBB116 outros vetores fungicos vantajosos são descritos por Romanos, M.A. et al. [(1992), Foreign gene expression in yeast: a review “, Yeast 8: 423-488] e po van den Hondel, C.A.M.J.J. et al. [(1991), Heterologous gene expression i: filamentous fungi “bem como in More Gene Manipulations in Fungi [J. W Bennet & L.L. Lasure, eds., pp. 396-428: Academic Press: San Diego] e er Gene transfer systems and vector development for filamentous fungi“ [va den Hondel, C.A.M.J.J. & Punt, P.J. (1991) in: Applied Molecular Genetics of Fungi, Peberdy, J.F. et al., eds., pp. 1-28, Cambridge University Press: Cambridge], Os exemplos de promotores de levedura vantajosos são 2μΜ, pAG-1, YEp6, YEpl3 ou pEMBLYe23. Exemplos de promotores vegetais ou algas são pLGV23, pGHlac+, pBIN19, pAK2004, pVKH ou pDH51 (ver Schmidt, R. and Willmitzer, L., 1988). Os vetores identificados acima ou derivados dos vetores identificados acima são uma seleção menor dos plasmídeos possíveis. Os plasmídeos adicionais são bem conhecidos aquela pessoa habilitada na técnica e podem ser observados, por exemplo, in the book Cloning Vectors (Eds. Pouwels P.EL et al. Elsevier, Amsterdam-New York-Oxford, 1985, ISBN 0 444 904018). Os vetores vegetais adequados sãc descritos inter alia em, Methods in Plant Molecular Biology and Biotechnology “(CRC Press), Ch. 6/7, pp. 71-119. Os vetores vantajosos sãc conhecidos nos vetores shuttle ou vetores binários que repetem em E. coli e Agrobacterium.

Por vetores é entendido, com exceção dos plasmídeos todoí outros vetores conhecidos àquela pessoa habilitada na técnica tal como po: meio do exemplo fagos, viras tal como SV40, CM V, bacilovírus, adenovírus transposons, elementos IS, fasmídeos, fagomídeos, cosmídeos, DNA linear oi circular. Estes vetores podem ser repetidos automaticamente no organismx hospedeiro ou serem repetidos cromossomicamente, a repetiçã< cromossômica sendo preferida.

Ainda em uma forma de realização do vetor um cassete d expressão de acordo com a invenção também pode ser vantajoso introduzí d< nos organismos na forma de um DNA linear e ser introduzido no genoma d> organismo hospedeiro por meio da recombinação homóloga ou heterólogr Este DNA linear pode ser composto de um plasmídeo linearizado ou apena de um cassete de expressão como vetor ou como as sequências de ácid nucleico de acordo com a invenção.

Ainda em uma forma de realização vantajosa a sequência de ácido nucleico de acordo com a invenção também pode ser introduzida em um organismo por si próprio.

Se além disso à sequência de ácido nucleico de acordo com a invenção genes adicionais devem ser introduzidos no organismo, todos junto com um gene repórter em um vetor simples ou cada gene simples com um gene repórter em um vetor em cada caso pode ser introduzido no organismo, pelo qual os vetores diferentes podem ser introduzidos simultaneamente or sucessivamente. O vetor vantajosamente contém pelo menos uma cópia daí sequências de ácido nucleico de acordo com a invenção e/ou a cassete di expressão (= construção do gene) de acordo com a invenção. A invenção ainda fornece um vetor de expressão recombinanti isolado que compreende um ácido nucleico que codifica um polipeptídei como descrito na tabela II, coluna 5 ou 7, em que a expressão do vetor en uma célula hospedeira resulta na tolerância aumentada à tensão ambienta como comparado a uma variedade de tipo selvagem da célula hospedeira Como usado neste, o termo “vetor” refere-se a uma molécula de ácidi nucleico capaz de transportar outro ácido nucleico no qual este foi ligado. Ur tipo de vetor é um “plasmídeo,” que refere-se a um arco de DNA filament duplo circular em que os segmentos de DNA adicionais podem ser ligados Outro tipo de vetor é um vetor viral, em que os segmentos de DNA adicionai podem ser ligados no genoma viral. Certos vetores são capazes de replicaçã autônoma nas células hospedeiras em que estas são introduzidas (pc exemplo, vetores bacterianos tendo uma origem bacteriana da replicação vetores mamíferos epissomais). Outros vetores (por exemplo, vetore mamíferos não epissomais) são integrados no genoma das células hospedem ou uma organela na introdução nas células hospedeiras e portanto sã replicadas junto com o hospedeiro ou genoma de organela. Além disso, certc vetores são capazes de direcionar uma expressão dos genes em que estes são operacionalmente ligados. Tais vetores são referidos neste como “vetores de expressão.” Em geral, os vetores de expressão de utilidade nas técnicas de DNA recombinantes são frequentemente na forma de plasmídeos. Fia presente especificação, “plasmídeo” e “vetor” podem ser usados permutavelmente como o plasmídeo é na forma mais comum de vetor. Entretanto, a invenção é pretendida incluir outras tais foimas de vetores de expressão, tal como vetores virais (por exemplo, retrovírus defeituoso na replicação replication, adenovírus e vírus adeno associado), que serve as funções equivalentes.

Os vetores de expressão recombinantes da invenção compreendem um ácido nucleico da invenção em uma forma adequada para expressão do ácido nucleico nas células hospedeiras, significando que os vetores de expressão recombinantes incluem uma ou mais sequências reguladoras, selecionadas na base das células hospedeiras a serem usadas pela expressão, que é operacionalmente ligada à sequência de ácido nucleico a ser expressada. Como usado neste com relação a um vetor de expressão recombinante, “operacionalmente ligado” é pretendido significar que a sequência de nucleotídeo de interesse é ligado às sequências reguladoras em uma maneira permitindo a expressão da sequência de nucleotídeo (poi exemplo, em um sistema de transcrição/tradução in vitro ou nas células hospedeiras quando o vetor é introduzido nas células hospedeiras). O termc “sequência reguladora” é pretendida incluir promotores, intensificadores ( outros elementos de controle de expressão (por exemplo, sinais d< poliadenilação). Tais sequências reguladoras são descritas, por exemplo, en Goeddel, Gene Expression Technology: Methods in Enzymology 185 Academic Press, San Diego, CA (1990) and Gruber and Crosby, em: Method in Plant Molecular Biology and Biotechnology, eds. Glick and Thompsor Chapter 7, 89-108, CRC Press: Boca Raton, Florida, incluindo as referência neste. As sequências reguladoras incluem aquelas que a expressão constitutiv direta da sequência de nucleotídeo em muitos tipos de células hospedeiras e aquelas que a expressão da sequência de nucleotídeo direta apenas em certas células hospedeiras ou sob certas condições. Será apreciado por aquela pessoa habilitada na técnica que o projeto de um vetor de expressão pode depender em tais fatores como a escolha da célula hospedeira a ser transformada, o nível de expressão do polipeptídeo desejado, etc. Os vetores de expressão da invenção podem ser introduzidos nas células hospedeiras para produzir portanto polipeptídeos ou peptídeos, incluindo polipeptídeos ou peptídeos de íusão, codificados pelos ácidos nucleicos como descrito neste (por exemplo, Proteínas relacionadas ao GABA, formas mutantes de proteínas relacionadas ao GABA, polipeptídeos de fusão, etc.).

Os vetores de expressão recombinantes da invenção podem sei projetados pela expressão do polipeptídeo da invenção nas células vegetais, Por exemplo, os que codificados pelas proteínas relacionadas ao GABA podem ser expressados nas células vegetais (Ver Schmidt, R. and Willmitzer. L., 1988, High efficiency Agrobacterium tum efac iens - med iatec transformation of Arabidopsis thaliana leaf and cotyledon explants, Vegeta Cell Rep. 583-586; Plant Molecular Biology and Biotechnology, C Press Boca Raton, Florida, chapter 6/7, S.71-119 (1993); F.F. White, B. Jenes et al. Tecbniques for Gene Transfer, in: Plantas transgênicas, Vol. 1, Engineerinj and Utilization, eds. Kung und R. Wu, 128-43, Academic Press: 1993 Potrykus, 1991, Annu. Rev. Plant Physiol. Plant Molec. Biol. 42:205-225 < referências citadas neste). As células hospedeiras adequadas são divulgada ainda em Goeddel, Gene Expression Technology: Methods in Enzymolog; 185, Academic Press: San Diego, CA (1990). Altem ativam ente, o vetor d expressão recombinante pode ser transcrito transcribed and translated in vitrc por exemplo usando Sequências reguladoras do promotor T7 e polimerase T7 Expressão de polipeptídeos em procariotas é mai frequentemente realizado com os vetores contendo promotores constitutívc ou indutíveis que direciona a expressão dos polipeptídeos de fusão de não fusão. Vetores de fusão adicionam um número de aminoácidos a um polipeptídeo codificado neste, usualmente ao terminal amino do polipeptídeo recombinante mas também o terminal C ou fundidos dentro das regiões adequadas nos polipeptídeos. Tais vetores de fusão tipicamente servem três propósitos: 1) aumentar a expressão de um polipeptídeo recombinante; 2) aumentar a solubilidade de um polipeptídeo recombinante; e 3) ajudar a purificação de um polipeptídeo recombinante pela atuação como um. ligando na purificação por afinidade. Frequentemente, nos vetores de expressão de fusão, um local de divagem proteolítico é introduzido na junção da porção de fusão e o polipeptídeo recombinante capaz da separação do polipeptídeo recombinante a partir da porção de fusão subsequente pela purificação do polipeptídeo de fusão. Tais enzimas e suas sequências de reconhecimento cognatas, incluem Fator Xa, trombina e enterocinase.

Por meio do exemplo do cassete de expressão vegetal pode se: instalado no vetor de transformação pRT ((a) Toepfer et ah, 1993, Methodí Enzymol., 217: 66-78; (b) Toepfer et al. 1987, Nucl. Acids. Res. 15: 5890 ff.) Altemativamente, um vetor recombinante (= vetor ds expressão) também pode ser transcrito ou traduzido in vitro, por exemplo pele uso do promotor T7 e a polimerase T7 RNA.

Vetores de expressão utilizados nas procariota: frequentemente fazem uso dos sistemas indutíveis com ou sem proteínas d< fusão ou oligopeptídeo de fusão, em que estas fusões podem resultar tanto n; maneira de terminal N quanto de terminal C ou em outros domínios úteis d< uma proteína. Tais vetores de fusão usualmente tem os seguintes propósitos i.) aumentar a taxa de expressão de RNA; ii.) aumentar a taxa de síntese d proteína realizável; iii.) aumentar a solubilidade da proteína; iv.) ou par simplificar a purificação por meio de uma sequência de ligação utilizável pel cromatografia por afinidade. Os pontos de divagem proteolítica também sã frequentemente introduzidos por intermédio das proteínas de fusão, que permitem a ciivagem de uma porção da proteína de fusão e purificação. Tais sequências de reconhecimento pelas proteases são reconhecidas, por exemplo fator Xa, trombina e enterocinase. A fusão vantajosa típica e os vetores de expressão são pGEX [Pharmacia Biotech Inc; Smith, D.B. and Johnson, K.S. (1988) Gene 67: 31-40], pMAL (New England Biolabs, Beverly, MA) e pRIT5 (Pharmacia, Piscataway, NJ) no qual contém glutationa S-transferase (GST), proteína de ligação de maltose ou proteína A.

Em uma forma de realização, a sequência codificadora do polipeptídeo da invenção é clonado em um vetor de expressão pGEX para criar um vetor que codifica um polipeptídeo de fusão que compreende, dc terminal N ao terminal C, polipeptídeo X de local de ciivagem de trombina. C polipeptídeo de fusão pode ser purificado pela cromatografia por afinidade usando resina de glutationa-agarose. As proteínas recombinantes relacionadas ao GABA não fundidas ao GST podem ser recuperadas pela ciivagem dc polipeptídeo de fusão com trombina.

Outros exemplos de vetores de expressão E. coli são pTr< [Aniann et al., (1988) Gene 69:301-315] e vetores pET [Studier et al., Gem Expressíon Technology: Methods in Enzymology 185, Academic Press, Sai Diego, Califórnia (1990) 60-89; Stratagene, Amsterdam, The Netherlands]. A expressão do gene alvo a partir do vetor pTrc confia n transcrição de polimerase de RNA hospedeiro a partir de um promotor d fusão trp-lac híbrido. A expressão de gene alvo a partir do vetor pET ll· confia na transcrição de um promotor de fusão T7 gnlO-lac mediado por um polimerase de RNA viral co-expressada (T7 gnl). Esta polimerase viral fornecida pelas cepas hospedeiras BL21(DE3) ou HMS174(DE3) a partir d um profago residente 1 que abriga um gene T7 gnl sob o control transcripcional do promotor lacUV 5.

Em uma forma de realização preferida da presente invenção, as proteínas da invenção que intensificam o conteúdo GABA em uma célula, significando as proteínas relacionadas ao GABA são expressadas em plantas e células vegetais tal como células vegetais unicelulares (por exemplo algas) (Ver Falciatore et al., 1999, Marine Biotechnology 1(3):239-251 e referências neste) e as células vegetais a partir de plantas superiores (por exemplo, os espermatófitos, tal como plantas de lavoura). A molécula de ácido nucleico codificado pelas proteínas relacionadas ao GABA como descrito na tabela II, coluna 5 ou 7 podem ser “introduzidos” em uma célula vegetal por quaisquer meios, incluindo transfecção, transformação ou transdução, eletroporação, bombardeamento de partícula, agroinfecção e outros. Um método de transformação conhecido aquela pessoa habilitada na técnica é a imersão de uma planta de florescência em uma solução de Agrobacteria, em que a Agrobacteria contém o ácido nucleico da invenção, seguindo pela criação de gametas transformados.

Outros métodos adequados para a transformação or transfecção das células hospedeiras incluindo as células vegetais podem sei observados em Sambrook, et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual 2nd, ed., Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, 1989 e outros manuais de laboratório ta como Methods in Molecular Biology, 1995, Vol. 44, Agrobacteriun protocols, ed: Gartland and Davey, Humana Press, Totowa, New .Tersey Como a tolerância à tensão biótica e abiótica é um traço geral desejado se herdado em uma ampla variedade de plantas semelhantes ao milho, trigc centeio, aveia, triticale, arroz, cevada, soja, amendoim, algodão, semente d colza e canola, manihot, pimenta, girassol e tagetes, plantas solanácea semelhantes à batata, tabaco, berinjela, e tomate, espécies Vicia, ervilhr alfalfa, plantas de cerrado (café, cacau, chá), espécies Salix, árvore (dendezeiro, coco), gramas perenes e lavouras de forragem, estas plantas d lavoura também são preferidas as plantas alvos para uma engenharia genética como uma forma de realização adicional da presente invenção. As lavouras de forragem incluem, mas não são limitadas a, Wheatgj-ass, Canarygrass, Bromegrass, Wildrye Grass, Bluegrass, ouchardgrass, Alfafa, Salfoin, Birdsfoot Trefoil, Trevo Alsike, Trevo Vermelho e Trevo Doce.

Em uma forma de realização da presente invenção, transfecção de uma molécula de ácido nucleico codificada pelas proteínas relacionadas ao GABA como descrito na tabela II, coluna 5 ou 7 em uma planta é atingida pela transferência do gene mediado por Agrobacterium. A transformação mediada por Agrobacterium pode ser realizada usando por exemplo o GV3101 (pMP90) (Koncz and Schell, 1986, Mol. Gen. Genet. 204:383-396) ou cepa LBA4404 (Clontech) Agrobacterium tumefaciens. A transformação pode ser realizada pela transfomiação padrão e técnicas de regeneração (Deblaere et al., 1994, Nucl. Acids Res. 13:4777-4788; Gelvin, Stanton B and Schilperoort, Robert A, Plant Molecular Bíology Manual, 2° Ed. -Dordrecht : Kluwer Academic Publ., 1995. - in Sect., Ringbuc Zentrak Signatur: BT11-P ISBN 0-7923-2731-4; Glick, Bemard R.; Thompson, Johr E., Methods in Plant Molecular Bíology and Biotechnology, Boca Raton CRC Press, 1993 360 S., ISBN 0-8493-5164-2). Por exemplo, semente ώ colza pode ser transformada por intermédio de uma transformação d< cotiledônia ou hipocotila (Moloney et ah, 1989, Plant Cell Report 8:238-242 De Block et al., 1989, Plant Physiol. 91:694-701). O uso de antibióticos para; seleção vegetal e Agrobacterium depende do vetor binário e a cep; Agrobacterium usada para a transformação. A seleção de semente de colza normalmente realizada usando canamicina como marcador vegeta selecionável. A transferência do gene mediado pela Agrobacterium ao fla. pode ser realizada usando, por exemplo, uma técnica descrita por Mlynarov et ah, 1994, Vegetal Cell Report 13:282-285. Adicionalmente, transformação da soja pode ser realizada usando por exemplo uma técnic descrita na Patente Européia N°. 0424 047, Patente U.S. N°. 5.322.783, Patente Européia N°. 0397687, Patente U.S. N°. 5.376.543, ou Patente U.S. N°. 5.169.770. A T transformação do milho pode ser atingido pelo bombardeamento de partícula, absorção de DNA mediado pelo polietileno glicol ou por intermédio da técnica de fibra de carbeto de silício. (Ver, por exemplo, Freeling and Walbot “The maize handbook” Springer Verlag: New York (1993) ISBN 3-540-97826-7). Um exemplo especifico da transformação de milho é obervado na Patente U.S. N°. 5.990.387 e um exemplo específico da transformação de trigo pode ser obervado no Pedido PCT N°. WO 93/07256.

De acordo com a presente invenção, a molécula de ácido nucleico introduzida codificada pelas proteínas relacionadas ao GABA como descrito na tabela II, coluna 5 ou 7 podem ser mantidos na célula vegeta] estavelmente se este é incorporado em um réplicon autônomo nãc cromossômico ou integrado nos cromossomos vegetais ou genoma de organela. Λ1 ternativamente, o gene introduzido codifica ou proteínaí relacionadas ao GABA pode estar presente em um vetor de não replicaçãt extra cromossomal e transitoriamente expressado ou transitoriamente ativo.

Em uma forma de realização, um microorganismc recombinante homólogo pode ser criado em que o gene codificado pela; proteínas relacionadas ao GABA é integrado em um cromossomo, um vetor < preparado no qual contém pelo menos uma porção de uma molécula de ácid< nucleico codificada pelas proteínas relacionadas ao GABA como descrito n tabela II, coluna 5 ou 7 em que uma anulação, adição, ou substituição fc introduzido portanto alteram, por exemplo, funcionalmente rompem, a proteínas relacionadas ao gene GABA. Preferivelmente, as proteínas qu codificam o gene relacionados ao GABA é uma levedura ou uma E.coli. o um Physcomitrella patens, ou um Synechocystis ou um Thermu thermophilus ou um gene Brassica napus, mas este pode ser um homólogo partir do organismo relacionado ou planta ou ainda de uma fonte de inseto ou mamífero. O vetor pode ser projetado tal que, na recombinação homóloga, a molécula de ácido nucleico endógena que codifica pelas proteínas relacionadas ao GABA como descrito na tabela II, coluna 5 ou 7 é mutado ou de outra maneira alterado mas ainda codifica um polipeptídeo funcional (por exemplo, a região reguladora a montante pode ser alterada portanto alera a expressão das proteínas endógenas relacionadas ao GABA). Em uma forma de realização preferida a atividade biológica da proteína da invenção é aumentada na recombinação homóloga. Para criar um ponto de mutação por intermédio de uma recombinação homóloga, os híbridos de DNA-RNA podem ser usados em uma técnica conhecida como quimeraplastia (Cole-Strauss et al., 1999, Nucleic Acids research 27(5):1323-1330 and Kmiec, 1999 Gene therapy American Scientist. 87(3):240-247). Os procedimento de recombinação homóloga em Physcomitrella patens também são conhecidos na técnica e são considerados pelo uso deste.

Considerando o vetor de recombinação homóloga, a porção alterada da molécula do ácido nucleico codificada pelas proteínas relacionadas ao GABA como descrito na tabela II, coluna 5 ou 7 é flanqueadc por sua extremidade 5’ e 3’ por uma molécula de ácido nucleico adicional tk gene que codifica as proteínas relacionadas ao GABA permite £ recombinação homóloga ocorre entre o gene de proteína relacionada ac GABA exógeno realizado pelo vetor e um gene endógeno codificado pela: proteínas relacionadas ao GABA, em um microorganismo ou planta. C flanqueamento adicional da molécula de ácido nucleico codificada pela: proteínas relacionadas ao GABA é de comprimento suficiente pel; recombinação homóloga bem sucedida com o gene endógeno. Tipicamente diversas centenas de pares de base até quilobases do DNA de flanqueament< (quanto a extremidade 5’ quanto a extremidade 3’) são incluídos no vetoi Ver, por exemplo, Thomas, K.R. e Capecchi, M.R., 1987, Cell 51:503 par uma descrição dos vetores de recombinação homóloga ou Strepp et al., 1998, PNAS, 95 (8):4368-4373 para recombinação com base em cDNA em Physcomitrella patens). O vetor é introduzido em um microorganismo ou célula vegetal (por exemplo, por intermédio de um DNA mediado pelo polietileno glicol) e células em que o gene introduzido codifica as proteínas relacionadas ao GABA tem homologamente recombinado com o gene endógeno codificado pelas proteínas relacionadas ao GABA são selecionados usando técnicas conhecidas na técnica.

Se presente em um vetor de não replicação extra cromossoma] ou um vetor que é integrado em um cromossomo, a molécula de ácidc nucleico codificado pelas proteínas relacionadas ao GABA como descrito na tabela II, coluna 5 ou 7 preferivelmente reside em um cassete de expressãc vegetal. Um cassete de expressão vegetal preferivelmente contém sequências reguladoras capazes de conduzir a expressão do gene nas células vegetais qut são operacionalmente ligadas de modo que cada sequência possa executar sur função, por exemplo, terminação da transcrição pelos sinais d< poliadenilação. Os sinais de poliadenilação preferidos são aqueles qu< originam-se de Agrobacterium tumefaciens t-DNA tal como o gene : conhecido como sintase octopina de PTÍACH5 de plasmídeo Ti (Gielen et al. 1984, EMBO J. 3:835) ou equivalentes funcionais destes mas também todo outros terminadores funcionalmente ativos em plantas são adequados. Com< expressão do gene vegetal é frequentemente não mais limitado nos nívei transcripcionais, um cassete de expressão vegetal preferivelmente contén outras sequências operacionalmente ligadas semelhantes aos intensificadore de tradução tal como a sequência de extenuação contendo a sequência lide não traduzida 5’ a partir do vírus de mosáico do tabaco que intensifica polipeptídeo pela razão de RNA (Gallie et al., 1987, Nucl. Acids Researc 15:8693-8711). Exemplos de vetores de expressão vegetais incluem aquele detalhados em: Becker, D. et al., 1992, New plant binary vectors wit selectabie markers located proximal to the leít border, Plant Mol. Biol. 20: 1195-1197; and Bevan, M.W., 1984, Binary Agrobacterium vectors for plant transformation, Nucl. Acid. Res. 12:8711-8721; and Vectors for Gene Transfer in High Plants; in: Transgenic Plants, Vol. 1, Engineering and Utilization, eds.: Kung and R. Wu, Academic Press, 1993, S. 15-38. “Transformação” é definido neste como um processo para itnrodução do DNA heterólogo em uma célula vegetal, tecido vegetal, ou planta. Pode ocorrer sob condições artificiais ou naturais usando vários métodos bem conhecidos na técnica. A transformação pode confiar em qualquer método conhecido para a inserção da sequência de ácidos nucleicos estranhas nas células hospedeiras eucarióticas ou procarióticas. O método é selecionado com base nas células hospedeiras sendo transformado e pode incluir, mas não é limitado a, infecção viral, eletroporação, lipofecção e bombardeamento de partícula. Tais células "transformadas" incluem células estavelmente transformadas no qual o DNA inserido é capaz da replicação como um plasmídeo de replicação autônomo ou como parte do cromossomo hospedeiro. Estes também incluem as células que aleatoriamente expressam o DNA ou RNA inseridos por períodos limitados de tempo. As células vegetais transformadas, tecido vegetal, ou plantas são entendidos abranger não apenas o produto final de um processo de transformação, mas também a progênie transgênica destes.

Os termos "transformado," "transgênico," e "recombinante' refere-se a um organismo hospedeiro tal como uma bactéria ou planta em que uma molécula de ácido nucleico heteróloga foi introduzida. A molécula de ácido nucleico pode ser estavelmente integrada no genoma do hospedeiro oi da molécula de ácido nucleico também pode estar presente em uma moléculí extracromossomal. Uma tal molécula extracromossomai pode ser auto replicante. As células transformadas, tecidos, ou plantas são pretendido: abranger não apenas o produto final de um processo de transformação, ma, também a progênie transgênica destes. Um hospedeiro "não transformado," "não transgênico," ou "não recombinante" refere-se a um organismo de tipo selvagem, por exemplo, uma bactéria ou planta, que não contém a molécula heteróloga de ácido nucleico.

Uma "planta transgênica", como usado neste, refere-se a uma planta que contém uma sequência de nucleotídeo estranha inserida em seu genoma nuclear ou genoma organelar. Este abrange ainda as gerações de progênie isto é o Tl-, T2- e consecutivamente gerações ou BC1-, BC2- e consecutivamente geração bem como híbridos destes com plantas não transgênicas ou outras transgênicas. O organismo hospedeiro (= organismo transgênico) vantajosamente contém pelo menos uma cópia do ácido nucleico de acordo com a invenção e/ou da construção de ácido nucleico de acordo com a invenção.

Em princípio todas as plantas podem ser usadas comc organismo hospedeiro. As plantas transgênicas preferidas são, por exemplo selecionadas a partir da família Aceraceae, Anacardiaceae, Apiaceae Asteraceae, Brassicaceae, Cactaceae, Cucurbitaceae, Euphorbiaceae Fabaceae, Malvaceae, Nymphaeaceae, Papaveraceae, Rosaceae, Salicaceae Solanaceae, Arecaceae, Bromeliaceae, Cyperaceae, Iridaceae, Lilíaceae ouchidaceae, Gentianaceae, Labiaceae, Magnoliaceae, Ranunculaceae Carifolaceae, Rubiaceae, Scrophulariaceae, Caryophyllaceae, Ericaceae Polygonaceae, Violaceae, Juncaceae ou Poaceae e preferivelmente de um; planta selecionada a partir do grupo das famílias Apiaceae, Asteraceae Brassicaceae, Cucurbitaceae, Fabaceae, Papaveraceae, Rosaceae, Solanaceae Liliaceae ou Poaceae. Preferidas são as plantas de lavoura tal como planta vantajosamente selecionadas do grupo do gênero amendoim, óleo de sement de colza, canola, girassol, cártamo, oliva, gergelim, avelã, amêndoa, abacate louro, abóbora, linhaça, soja, pistache, borragem, milho, trigo, centeio, aveia: sorgo e painço, triticale, arroz, cevada, mandioca, batata, beterraba de açúcar, berinjela, alfalfa e gramas perenes e plantas de forragem, dendezeiro, vegetais (brassicas, vegetais de raiz, vegetais tubérculos, vegetais leguminosos, vegetais frutíferos, vegetais de cebola, vegetais foihosos e vegetais com caule), trigo-mouro, alcachofra de Jemsalem, feijão-fava, ervillraca, lentilha, feijão anão, lupin, trevo e alfafa para apenas alguns destes mencionados.

Em uma forma de realização da invenção as plantas transgênicas são selecionadas a partir do grupo que compreende milho, soja, óleo de semente de colza (incluindo canola e óleo de semente de colza do inverno), algodão, trigo e arroz.

Em uma forma de realização preferida, a planta hospedeira é selecionada a partir das famílias Aceraceae, Anacardiaceae, Apiaceae, Asteraceae, Brassicaceae, Cactaceae, Cucurbitaceae, Euphorbiaceae. Fabaceae. Malvaceae, Nymphaeaceae, Papaveraceae, Rosaceae, Salicaceae. Solanaceae, Arecaceae, Bromeíiaceae, Cyperaceae, Iridaceae, Liliaceae. ouchidaceae, Gentianaceae, Labiaceae, Magnóliaceae, Ranunculaceae Carifolaceae, Rubiaceae, Scrophulariaceae, Caryophyllaceae, Ericaceae Poíygonaceae, Violaceae, Juncaceae ou Poaceae e preferivelmente a partir dí planta selecionada do grupo das famílias Apiaceae, Asteraceae, Brassicaceae Cucurbitaceae, Fabaceae, Papaveraceae, Rosaceae, Solanaceae, Liliaceae 01 Poaceae. Preferidas são as plantas de lavouras e em plantas particulare mencionadas acima neste como plantas hospedeiras tal como as famílias e < gênero mencionado acima por exemplo as espécies preferidas Anacardiur, occidentale, Calendula ojficinalis, Carthamus tinctorius, Cichorium intybui. Cynara scolymus, Helianthus annus, Tagetes lúcida, Tagetes erecta, Tagete tenuifolia; Daucus carota\ Corylus avellana, Corylus colurna, Borag officinalis; Brassica napus, Brassica rapa ssp., Sinapis arvensis Brassic juncea, Brassica juncea var. juncea, Brassica juncea var. crispifolu Brassica juncea var. foliosa, Brassica nigra, Brassica sinapioide, Melanosinapis communis, Brassica oleracea, Arabidopsis thaliana, Anana comosus, Ananas arianas, Bromelia comosa, Carica papaya, Cannabis salive, Ipomoea batatus, Ipomoea pandurata, Convolvulus batatas, Convolvulus tiliaceus, Ipomoea fastigiata, Ipomoea tiliacea, Ipomoea triloba, Convolvulus panduratus, Beta vulgaris, Beta vulgaris var. altíssima, Beta vulgaris var. vulgaris, Beta marítima, Beta vulgaris var. perennis, Beta vulgaris var. conditiva, Beta vulgaris var. esculenta, Cucurbita maxima, Cucurbita mixta, Cucurbita pepo, Cucurbita moschata, Olea europaea, Manihot utilissima, Janipha manihot,, Jatropha manihot., Manihot aipil, Manihot dulcis, Manihot manihot, Manihot melanobasis, Manihot esculenta, Ricinus communis, Pisum sativum, Pisum arvense, Pisum humile, Medicago sativa, Medicago fale ata, Medicago varia, Glycine max Dolichos soya, Glycíne gracilis, Glycine. hispida, Phaseolus max, Soya hispida, Soya max, Cocos nucifera, Pelargonium grossularioid.es, Oleum cocoas, Laurus nobilis, Persec americana, Arachis hypogaea, Linum usitatissimum, Linum humile, Linurr. austríacum, Linum bienne, Linum angus tifo lium, Linum catharticum, Linurt flavum, Linum grandiflorum, Adenolinum grandiflorum, Linum lewisii, Linun narbonense, Linum perenne, Linum perenne var. lewisii, Linum pratense Linum trigynum, Punica granatum, Gossypium hirsutum, Gossypiun arboreum, Gossypium barbadense, Gossypium herbaceum, Gossypiun thurberi, Musa nana, Musa acuminata, Musa paradisíaca, Musa spp., Elaei guineensis, Papaver orientale, Papaver rhoeas, Papaver dubium, Sesamur indicum, Piper aduncum, Piper amalago, Piper angustifolium, Piper auritun. Piper betei, Piper cubeba, Piper longum, Piper nigrum, Piper retrofractun Artanthe adunca, Artanthe elongata, Peperomia elongata, Piper elongatun Steffensia elongata, Hordeum vulgare, Hordeum jubatum, Hordeui murinum, Hordeum secalinum, Hordeum distichon Hordeum aegicera, Hordeum hexastichon, Hordeum hexastichum, Hordeum irregulare, Hordeui sativum, Hordeum secalinum, Avena sativa, Avena fatua, Avena byzantim Avena fatua var. sativa, Avena hybrida, Sorghum bicolor, Sorghum halepense, Sorghum saccharatum, Sorghum vulgare, Andropogon drummondii, Holcus bicolor, Holcus sorghum, Sorghum aethíopícum, Sorghum arundinaceum, Sorghum caffrorum, Sorghum cernuum, Sorghum dochna, Sorghum drummondii, Sorghum durra, Sorghum guineense, Sorghum lanceolatum, Sorghum nervosum, Sorghum saccharatum, Sorghum subglabrescens, Sorghum verticilliflorum, Sorghum vulgare, Holcus halepensis, Sorghum miliaceum niíllet. Panicum militaceum, Zea mays, Triticum aestivum, Triticum durum, Triticum turgidum, Triticum hybernum, Triticum macha, Triticum sativum ou Triticum vulgare, Cofea spp., Coffea arabica, Coffea canephora, Coffea liberica, Capsicum annuum, Capsícum annuum var. glabriusculum, Capsicum frutescens, Capsicum annuum, Nicotíana tabacum, Solanum tuberosum, Solanum melongena, Lycopersicor, esculentum, Lycopersicon lycopersicum., Lycopersicon pyriforme, Solanum integrifolium, Solanum. lycopersicum Theobroma cacau ou Camellia sinensis.

Anacardiaceae tal como o gênero Pistacia, Mangifera Anacardium por exemplo as espécies Pistacia vera [pistache, Pistazíe] Mangifer indica [Mango] ou Anacardium occidentale [cajueiro]; Asteraceai tal como o gênero Calendula, Carthamus, Centaurea, Cichorium, Cynara Helianthus, Lactuca, Localta, Tagetes, Valeriana por exemplo as espécie Calendula officinalis [cravo-de-defunto], Carthamus tinctorius jcártamo Centaurea cyanus [lóio], Cichorium intybus [margarida azul], Cynar scolymus [alcachofra], Helianthus annus [girassol], Lactuca sativa, Lactuc crispa, Lactuca esculenta, Lactuca scariola L. ssp. sativa, Lactuca scariola 1 var. integrata, Lactuca scariola L. var. integrifolia, Lactuca sativa subsj romana, Localta communis, Valeriana locusta [alface], Tagetes lucidt Tagetes erecta ou Tagetes tenuifolia [cravo-de-defunto]; Apiaceae tal como gênero Daucus por exemplo as espécies Daucus carota [cenoura]; Betulace; tal como o gênero Corylus por exemplo as espécies Corylus avellana c Coiylus colurna [avelã]; Boraginaceae tal como o gênero Borago por exemplo as espécies Borago officinalis [borragem]: Brassicaceae tal como o gênero Brassica, Melanosinapis, Sinapis, Arabadopsis por exemplo as espécies Brassica napus, Brassica rapa ssp. [canola, óleo de semente de colza, nabo silvestre], Sinapis arvensis Brassica juncea, Brassica juncea var. juncea, Brassica juncea. var. crispifolia. Brassica juncea var. foliosa, Brassica nigra, Brassica sinapioides, Melanosinapis communis [mostarda], Brassica oleracea [beterraba de forragem] ou Arabidopsis thaliana; Bromeliaceae tal como o gênero Anana, Bromelia por exemplo as espécies Anana comosus, Ananas ananas or Bromelia comosa [abacaxi]; Caricaceae tal como o gênero Carica por exemplo as espécies C.arica papaya [mamão]; Caimabaceae tal como o gênero Cannabis por exemplo as espécies Cannabis sative [cânhamo], Convolvulaceae tal como o gênero Ipomea, Convolvulus por exemplo as espécies Ipomoea batatus, Ipomoea pandurata, Convolvulus batatas, Convolvulus tiliaceus, Ipomoea fastigiata, Ipomoea tiliacea, Ipomoec triloba ou Convolvulus panduratus [batata doce, Man of the Earth, batat< selvagem], Chenopodiaceae tal como o gênero Beta, isto é as espécies Beti vulgaris, Beta vulgaris var. altíssima, Beta vulgaris var. Vulgaris, Bete marítima, Beta vulgaris var. perennis, Beta vulgaris var. conditiva ou Beü vulgaris var. esculenta [beterraba de açúcar]; Cucurbitaceae tal como i gênero Cucubita por exemplo as espécies Cucurbita maxima, CucurbiU mixta, Cucurbita pepo ou Cucurbita moschata [abóbora]; Elaeagnaceae tr como o gênero Elaeagnus por exemplo as espécies Olea europaea [oliva Ericaceae tal como o gênero Kalmia por exemplo as espécies Kalmia latifolic Kalmia angustifolia, Kalmia microphylla, Kalmia polifolia, Kalmi occidentalis, Cistus chamaerhodendros ou Kalmia lúcida [louro americam louro de ampla folhagem, arbusto de algodão, colher de pau, louro de ovelh; louro alpino, louro do pântano, louro do pântano ocidental, louro do brejo Euphorbiaceae tal como o gênero Manihot, Janipha, Jatropha, Ricinus p< exemplo as espécies Manihot utilissima, Janipha manihot,, Jatropha manihotManihot aipíl, Manihot dulcis, Manihot manihot, Manihot melanobasis, Manihot esculenta [mandioca, araruta, tapioca, mandioca] ou Ricinus communis [mamona, arbusto de óleo de mamona, planta de óleo de mamona, Palma Christi, Wonder Tree |; Fabaceae tal como o gênero Pisum, Albizia, Cathormion, Feuillea, Inga, Pithecolobium, Acacia, Mimosa, Medicajo, Glycine, Dolichos, Phaseolus, Soja por exemplo as espécies Pisum sativum, Pisum arvense, Pisum humile [ervilha], Albizia berteriana, Albizia julibrissin, Albizia lebbeck, Acacia berteriana, Acacia littoralis, Albizia berteriana, Albizzia berteriana, Cathormion berteriana, Feuillea berteriana, Inga fragrans, Pithecellobium berterianum, Pithecellobium fragrans, Pithecolobium berterianum, Pseudalbizzia berteriana, Acacia julibrissin, Acacia nemu, Albizia nemu, Feuilleea julibrissin, Mimosa julibrissin, Mimosa speciosa, Sericanrda julibrissin, Acacia lebbeck, Acacia macrophylla, Albizia lebbek, Feuilleea lebbeck, Mimosa lebbeck, Mimosa speciosa [campeche ilegítimo, árvore de seda, noz indiana oriental], Medicago sativa, Medicago falcata, Medicago varia [alfalfa] Glycine max Dolichos soya, Glycine gracilis, Glycine hispida, Phaseolus max, Soya hispida or Soya max [soja] Geraniaceae tal como o gênero Pelargonium, Cocos, Oleum por exemplo a; espécies Cocos nucifera, Pelargonium grossularioides ou Oleum cocou [coco]; Gramineae tal como o gênero Saccharum por exemplo as espécie; Saccharum officinarum; Juglandaceae tal como o gênero Juglans, Wallia po exemplo as espécies Juglans regia, Juglans aüanthifolia, Juglan sieboldiana, Juglans cinerea, Wallia cinerea, Juglans bixbyi, Juglan californica, Juglans hindsii, Juglans intermedia, Juglans jamaicensis, Juglan major, Juglans microcarpa, Juglans nigra ou Wallia nigra [noz, noz pretí noz comum, noz persa, noz branca, nogueira branca, noz preta]; Lauraceae t; como o gênero Persea, Laurus por exemplo as espécies de louro Lauri nobilis [louro, louro, louro doce], Persea americana Persea americam Persea gratíssima ou Persea persea [abacate]; Leguminosae tal como o gênero Arachis por exemplo as espécies Arachis hypogaea [amendoim]; Linaceae tal como o gênero Linum, Adenolinum por exemplo as espécies Linum usitatissimum, Linum humile. Linum austriacum, Linum bienne, Linum angustifolium, Linum catharticum, Linum flavum, Linum grandiflorum, Adenolinum grandiflorum, Linum lewisii, Linum narbonense, Linum perenne, Linum perenne var. lewisii, Linum pratense ou Linum trigynum [linho, linhaça]; Lythrarieae tal como o gênero Punica por exemplo as espécies Puníca granatum [pomegranate]; Malvaceae tal como o gênero Gossypium por exemplo as espécies Gossypium hirsutum, Gossypium arboreum, Gossypium barbadense, Gossypium herbaceum ou Gossypium thurber\ [algodão]; Musaceae tal como o gênero Musa por exemplo as espécies Musc nana, Musa acuminata, Musa. paradisíaca, Musa spp. [banana.]; Onagraceat tal como o gênero Camissonia, Oenothera por exemplo as espécies Oenotherc biennis ou Camissonia brevipes [prímula, evening prímula]; Palmae tal com< o gênero Elacis por exemplo as espécies Elaeis guineensis [óleo de palma] Papaveraceae tal como o gênero Papaver por exemplo as espécies Papave orientale, Papaver rhoeas, Papaver dubium [papoula, papoula orienta, papoula de milho, papoula de campo, papoula de shirley, shirley de campe headed de cabeça longa, papoula leguminosa longa]; Pedaliaceae tal como gênero Sesamum por exemplo as espécies Sesamum indicum [gergelim Piperaceae tal como o gênero Piper, Artanthe, Peperomia, Steffensia p( exemplo as espécies Piper aduncum, Piper amalago, Piper angustifoliur, Piper auritum, Piper betei, Piper cubeba, Piper longum, Piper nigrum, Pipt retrofractum, Artanthe adunca, Artanthe elongata, Peperomia elongat Piper elongatum, Steffensia elongata. [pimenta de caiena, pimenta selvageir Poaceae tal como o gênero Hordeum, Secale, Avena, Sorghum, Andropogo Holcus, Panicum, ouyza, Zea, Triticum por exemplo as espécies Hordet, vulgare, Hordeum jubatum, Hordeum murinum, Hordeum secalinu Hordeum distichon Hordeum aegiceras, Hordeum hexastichon., Hordeum hexastichum, Hordeum irregulare, Hordeum sativum, Hordeum secaiinum [cevada, cevada de pérola, cevada de capim rabo-de-raposa, cevada de parede, cevada de campina], Secale cereale [centeio], Avena sativa, Avena fatua, Avena byzantina, Avena fatua var. sativa, Avena hybrida [aveia], Sorghum bicolor, Sorghum halepense, Sorghum saccharatum, Sorghum vulgare, Andropogon drummondii, Holcus bicolor, Holcus sorghum, Sorghum aethiopicum, Sorghum arundinaceum, Sorghum caffrorum,. Sorghum cernuum, Sorghum dochna, Sorghum drummondii, Sorghum durra, Sorghum guineense, Sorghum lanceolatum, Sorghum nervosum, Sorghum saccharatum, Sorghum subglabrescens, Sorghum verticilliflorum, Sorghum vulgare, Holcui halepensis, Sorghum miliaceum millet, Panicum militaceum [Sorgo, painço] ouyza sativa, ouyza latifolia [arroz], Zea mays [milho] Triticum aestivum. Triticum durum, Triticum turgidum, Triticum hybernum, Triticum macha Triticum sativum ou Triticum vulgare [trigo, pão de trigo, trigo comum] Proteaceae tal como o gênero Macadamia por exemplo as espécie; Maçada mia intergrifolia [macadamia]; Rubiaceae tal como o gênero Coffe; por exemplo as espécies Cofea spp., Coffea arabica, Coffea canephora 01 Coffea. liberica [café]; Scrophulariaceae tal como o gênero Verbascum po exemplo as espécies Verbascum blattaria, Verbascum chaixii, Verbascur densiflorum, Verbascum lagurus, Verbascum longifolium, Verbascur lychnitis, Verbascum nigrum, Verbascum olympicum, Verbascum phlomoide: Verbascum phoenicum, Verbascum pulverulentum ou Verbascum thapsb [verbasco, verbasco de mariposa branca, verbasco frondoso de urtig; verbasco florido denso, verbasco de prata, verbasco frondoso longo, verbasc branco, verbasco escuro, verbasco grego, verbasco laranja, verbasco púrpur; verbasco branco, verbasco extenso]; Solanaceae tal como o gênero Capsicun Nicotiana, Solanum, Lycopersicon por exemplo as espécies Capsicu annuum, Capsicum annuum var. glabriusculum, Capsicum frutesce} [pimenta], Capsicum annuum [páprica], Nicotiana tabacum, Nicotiana alaía, Nicotiana attenuata, Nicotiana glauca, Nicotiana langsdorffti, Nicotiana obtusifolia, Nicotiana quadrivalvis, Nicotiana repanda, Nicotiana rústica,, Nicotiana sylvestris [tabaco], Solanum tuberosum [batata], Solanum melongena [berinjela] (Lycopersicon esculentum, Lycopersicon lycopersicum., Lycopersicon pyriforme, Solanum integrifolium ou Solanum lycopersicum [tomate]; Sterculiaceae tal como o gênero Theobroma por exemplo as espécies Theobroma cacau [cacau]; Theaceae tal como o gênero Camellia por exemplo as espécies Camellia sinensis) [chá]. A introdução dos ácidos nucleicos de acordo com a invenção, um cassete de expressão ou o vetor nos organismos, plantas por exemplo, podem a princípio ser feitos por todos dos métodos conhecidos aquela pessoa habilitada na técnica. A introdução das sequências de ácido nucleico são o aumento dos organismos recombinantes ou transgênicos. A não ser de outra maneira especificada, os termos “polinucleotídeos”, “ácido nucleico” e “molécula de ácido nucleico” comc usado neste são permutáveis. A não ser de outra maneira especificada, oí termos “peptídeo”, “polípeptídeo” e “proteína” são permutáveis no presente contexto. O termo “sequência” pode relacionar aos polinucleotídeos, ácido nucleicos, molécula de ácidos nucleicos, peptídeos, polipeptídeos e proteínas dependendo do contexto em que o termo “sequência” é usado. Os termo ”genes”, "polinucleotídeos”, ”sequência de ácido nucleico”, "sequência d nucleotídeo”, ou "molécula de ácido nucleico” como usado neste refere-se uma forma polimérica de nucleotídeos de qualquer compri menti ribonucleotídeos ou desoxiribonucleotídeos. Os termos refere-se apenas estrutura primária da molécula.

Deste modo, os termos "genes”, "polinucleotídeos "sequência de ácido nucleico”, "sequência de nucleotídeo”, ou "molécula ( ácido nucleicos" como usado neste incluem DNA e RNA fílamentado simpl e duplo. Estes também incluem tipos conhecidos de modificações, por exemplo, meíilação, “revestimento”, substituições de uma ou mais bases de nucleotídeos de ocorrência natural com um análogo. Preferivelmente, a sequência de DNA ou RN A da invenção que compreende uma sequência codificadora que codifica o polipeptídeo definido neste.

Uma “sequência codificadora” é uma sequência de nucleotídeo, que é transcrita em mRNA e/ou traduzida em um polipeptídeo quando colocado sob o controle das sequências reguladoras apropriadas. Os limites da sequência codificadora são determinados por um códon de interrupção de tradução no terminal 55 e um códon de interrupção de tradução no terminal 3’. Uma sequência codificadora pode incluir, mas não é limitada a mRNA, cDNA, sequência de nucleotídeos recombinante ou DNA genômico, enquanto os íntrons podem estar presentes também sob certas circunstâncias. A transferência dos genes estranhos no genoma de uma planta é denominado transformação. O procedimento destes métodos descritos na transformação e regeneração das plantas a partir do tecido vegetal ou células vegetais são utilizados para transformação estável ou transitório. Os métodoí adequados são a transformação de protoplasto pela absorção de DNh induzido por poli(etileno glicol), o método “biolístico” usando o gene nãc pode ser referido como o método de bombardeamento de partícula eletroporação, a incubação das embriões secos na solução de DNA microinjeção e transferência do gene mediada por Agrobacterium. Os dito métodos são descritos por meio do exemplo no B. Jenes et al., Techniques fo Gene Transfer, in: Transgenic Plants, Vol. 1, Engineering and Utilization, eds S.D. Kung and R. Wu, Academic Press (1993) 128-143 and in Potryku Annu. Rev. Plant Physiol. Plant Molec. Biol. 42 (1991) 205-225). Os ácido nucleicos ou a construção a ser expressada é preferivelmente clonado em ur vetor que é adequado para a transformação de Agrobacterium tumefacien: por exemplo pBinl9 (Bevan et al., Nucl. Acids Res. 12 (1984) 8711). . agrobactéria transformada por um tal vetor pode então ser usada na maneira conhecida pela transformação das plantas, em particular de plantas de lavora tal como por meio do exemplo plantas de tabaco, por exemplo por folhas machucadas por banho ou folhas cortadas em uma solução agrobacteriana e então cultivadas no meio adequado. A transformação das plantas por meio de Agrobacterium tumefaciens é descrito, por exemplo, por Hõfgen and Willmitzer in Nucl. Acid Res. (1988) 16, 9877 ou é conhecido inter alia de F.F. White, Vectors for Gene Transfer in hight plants; in transgenic plants, Vol. 1, Engineering and Utilization, eds. S.D. Ktmg and R. Wu, Academic Press, 1993, pp. 15-38. A agrobactéria transformada por um vetor de expressão de acordo com a invenção pode provavelmente ser usado na maneira conhecida para a transformação de plantas tal como plantas testadas semelhantes Arabidopsis ou plantas de lavoura tal como lavouras de cereais, milho, aveias, centeio, cevada, trigo, soja, arroz, algodão, beterraba de açúcar, canola girassol, linho, cânhamo, batata, tabaco, tomate, cenoura, páprica, óleo dt semente de colza, tapioca, mandioca, araruta, tagetes, alfafa, alface e vária: árvores, espécies de noz e videira, em particular de plantas de lavour; contendo óleo tal como soja, amendoim, planta de óleo de mamona, girassol milho, algodão, linho, óleo de semente de colza, coco, dendezeiro, cártami (Carthamus tinctorius) ou grão de cacau, por exemplo pelas folha machucadas por banho ou folhas cortadas em uma solução agrobacteriana então cultivada no meio adequado.

As células vegetais geneticamente modificadas podem se regeneradas por todos os métodos conhecidos por aquela pessoa habilitada n técnica. Os métodos apropriados podem ser observados nas publicaçõe referidas acima por S.D. Kung and R. Wu, Potrykus ou Hõfgen an Willmitzer.

Consequentemente, um aspecto adicional da invenção d respeito um organismo transgênico transformado por pelo menos uma sequência de ácido nucleico, cassete de expressão ou vetor de acordo com a invenção bem como células, culturas celulares, tecidos, partes — tal como, por exemplo, folhas, raiz, etc. no caso de organismos vegetais— ou material reprodutivo a partir de tais organismos. Os termos “organismo hospedeiro”, “células hospedeiras”, “organismo recombinante (hospedeiro)” e “células transgênicas (hospedeira)” são usados neste permutavelmente. E claro que estes termos relacionam não apenas ao organismo hospedeiro particular ou a célula alvo particular mas também aos descendentes ou descendentes potenciais destes organismos ou células. Desde então, devido a mutação ou efeitos ambientais certas modificações podem aumentar nas gerações sucessivas, estes descendentes não necessitam ser idênticos com a célula parental mas contudo ainda são abrangidos pelo termo como usado neste.

Para os propósitos da invenção “transgênico” ot “recombinante” significam com relação por exemplo a uma sequência de ácido nucleico, um cassete de expressão (= construção do gene, construção dc ácido nucleico) ou um vetor contendo a sequência de ácido nucleico d< acordo com a invenção ou um organismo transformado pelas sequências di ácido nucleico, cassete de expressão ou vetor de acordo com a invenção toda estas construções produzidas pelos métodos de engenharia genética em que a) a sequência de ácido nucleico descrito na tabela I, coluna ou 7 ou seus derivados ou partes destes ou b) uma sequência de controle genético funcionalmente ligado sequência de ácido nucleico descrita sob (a), por exemplo a sequência c controle genético da extremidade 3’- e/ou 5’- tal como um promotor c terminador, ou c) (a) e (b) não são observados em seu ambiente genético, natural ou foram modiflcadi pelos métodos de engenharia genética, em que a modificação pode por me do exemplo ser uma substituição, adição, anulação, inversão ou inserção de um ou mais resíduos de nucleotídeos bases. O ambiente genético natural significa o local cromossomal ou genômico natural no organismo de origem ou dentro do organismo hospedeiro ou presença em uma biblioteca genômica. No caso de uma biblioteca genômica o ambiente genético natural da sequência de ácido nucleico é preferivelmente retido pelo menos em parte. Os limites ambientais da sequência de ácido nucleico pelo menos em um lado e tem um comprimento da sequência de pelo menos 50 bp, preferivelmente pelo menos 500 bp, particularmente preferivelmente pelo menos 1.000 bp, mais particularmente preferivelmente pelo menos 5.000 bp. Um cassete de expressão de ocorrência natural— por exemplo uma combinação de ocorrência natural do promotor natural da sequência de ácido nucleico de acordo com a invenção com o delta-8-desatura.se correspondente, d.elta-9-elongase e/ot gene delta-5-desaturase - volta em um cassete de expressão transgênicc quando o último é modificado pelos métodos não naturais, sintético: (artificiais) tal como por meio do exemplo uma mutagenação. Os método: apropriados são descritos por meio do exemplo em U.S. 5.565.350 ou WC 00/15815.

Organismo adequados ou organismo hospedeiros pelo ácid< nucleico, cassete de expressão ou vetor de acordo com a invenção sã vantajosamente à princípio em todos os organismos, que são adequados para expressão dos genes recombinantes como descrito acima. Os exemple adicionais que podem ser mencionados são plantas tal como Arabidopsi: Asteraceae tal como Calendula ou plantas de lavoura tal como soj; amendoim, planta de óleo de mamona, girassol, linho, milho, algodão, linhr óleo de semente de colza, coco, dendezeiro, cártamo (Carthamus tinctoriu; ou grão de cacau.

Em uma forma de realização da invenção as plant; hospedeiras para o ácido nucleico, cassete de expressão ou vetor de acorc com a invenção são selecionados a partir do grupo que compreende milho, soja, óleo de semente de colza (incluindo canola e óleo de semente de colza do inverno), algodão, trigo e anoz.

Ainda um objetivo da invenção diz respeito ao uso de uma construção de ácido nucleico, por exemplo um cassete de expressão, contendo sequências de DNA que codifica os polipeptídeos mostrados na tabela II ou sequências de DNA que hibridizam também para a transformação das células vegetais, tecidos ou partes das plantas.

Desta maneira, dependendo da escolha do promotor, as sequências mostradas na tabela I podem ser expressadas especificamente nas folhas, nas sementes, os nódulos, em raízes, no caule ou outras partes da planta. Aquelas plantas transgênicas que super produzem as sequências como descritas na tabela I, o material reprodutivo deste, junto com a célula vegetal, tecidos ou partes destes são um objetivo adicional da presente invenção.

Um cassete de expressão ou as sequências de ácido nucleicc ou construção de acordo com a invenção contendo as sequências de acorde com tabela I pode, além disso, também ser utilizada pela transformação do: organismos identificados por meio do exemplo acima tal como bactéria leveduras, fungos filamentosos e plantas.

Dentro da estrutura da presente invenção, conteúdo GAB/ aumentado significa, por exemplo, o traço artificialmente adquirido d conteúdo GABA aumentado, concentração, atividade devido a supe expressão funcional da sequência de polipeptídeos da tabela II codificado pel molécula de ácidos nucleicos correspondente como descrito na tabela coluna 5 ou 7 e/ou homólogos nos organismos de acordo com a invençã· vantajosamente nas plantas transgênicas de acordo com a invenção, e: comparação com as plantas iniciais não geneticamente modificada pe menos pela duração de pelo menos uma geração vegetal.

Uma expressão constitutiva das sequências de polipeptídeo < tabela II codificado pela molécula de ácido nucleico correspondente como descrito na tabela I, coluna 5 ou 7 e/ou homólogos é, além disso, vantajoso. De outra maneira, entretanto, uma expressão indutível também pode parecer desejável. A expressão das sequências de polipeptídeo da invenção pode ser direcionada ao citoplasma ou as organelas preferivelmente os plastídeos das células hospedeiras, preferivelmente as células vegetais. A eficiência da expressão das sequências da tabela II codificada pela molécula de ácido nucleico correspondente como descrito na tabela I, coluna 5 ou 7 e/ou homólogos podem ser determinados, por exemplo, in vitro pela propagação de meristema de broto. Além disso, uma expressão das sequências da tabela II codificado pela molécula de ácido nucleico correspondente como descrito na tabela I, coluna 5 ou 7 e/ou homólogos modificados na natureza e nível e seu efeito no desempenho dos caminhos metabólicos podem ser testados nas plantas testadas nos ensaios de estufa.

Um objetivo adicional da invenção que compreendí organismos transgênicos tal como plantas transgênicas transformadas por un cassete de expressão contendo as sequências como descrito na tabela I, eolun; 5 ou 7 de acordo com a invenção ou sequências de DNA que hibridizan também, bem como células transgênicas, tecido, partes e material d reprodução de tais plantas. A preferência particular é dado neste caso a plantas de lavoura transgênica tal como por meio do exemplo cevada, trigc centeio, aveias, milho, soja, arroz, algodão, beterraba de açúcar, óleo d semente de colza e canola, girassol, linho, cânhamo, cardo, batata, tabac< tomate, tapioca, mandioca, araruta, alfafa, alface e várias árvores, noz espécies de videira.

Em uma forma de realização da invenção as plant; transgênicas transformadas por um cassete de expressão contendo ; sequências como descrito na tabela I, coluna 5 ou 7 de acordo com a invençí ou sequências de DNA que hibridizam também são selecionados a partir < grupo que compreende milho, soja, óleo de semente de colza (incluindo canola e óleo de semente de colza de inverno), algodão, tiãgo e arroz.

Para os propósitos da invenção as plantas são plantas mono e dicotiledônias, musgos ou algas.

Uma purificação adicional de acordo com a invenção são as plantas transgênicas como descrito acima no qual contém uma sequência de ácido nucleico ou construção de acordo com a invenção ou um cassete de expressão de acordo com a invenção.

Entretanto, transgênica também significa que os ácidos nucleicos de acordo com a invenção são localizados em sua posição natural no genoma de um organismo, mas que a sequência foi modificada em comparação com a sequência natural e/ou que as sequências reguladoras das sequências naturais foram modificadas. Preferivelmente, transgêmco/recombinante será entendido como significar a transcrição dos ácidos nucleicos da invenção e mostrar na tabela I, ocorre em uma posição não natural no genoma, isto é diz a expressão dos ácidos nucleicos é homólogo ou, preferivelmente, heterólogo. Esta expressão pode sei transitoriamente ou de uma sequência integrada estavelmente no genoma. O termo “plantas transgênicas” usado de acordo com é invenção também refere-se à progênie de uma planta transgênica, po: exemplo ο T), T2, T3 e gerações de plantas subsequentes ou o BCi, BC2, BC e gerações vegetais subsequentes. Deste modo, as plantas transgênicas di acordo com a invenção podem ser aumentados e por si só ou cruzados con outros indivíduos a fim de obter as plantas transgênicas adicionais de acord com a invenção. As plantas transgênicas também podem ser obtidas pel propagação das células vegetais transgênicas vegetativamente. A present invenção também diz respeito ao material vegetal transgênico, que pode se derivado de uma população vegetal transgênica de acordo com a invençãt Tais materiais incluem as células vegetais e certos tecidos, órgãos e partes c plantas em todas as suas manifestações, tal como sementes, folhas, anteras, fibras, tubérculos, raízes, pêlos radiculares, caule, embrião, calo, cotiledônea, pecíolos, material coletado, tecido vegetal, tecido reprodutivo e culturas celulares, que são derivados da planta transgênica atual e/ou pode ser usada para conduzir cerca de planta transgênica.

Qualquer planta transformada obtida de acordo com a invenção pode ser usada em um esquema de geração convencional ou na propagação da planta in vitro para produzir mais plantas transformadas com as mesmas características e/ou pode ser usado para introduzir as mesmas características em outras variedades da mesma ou espécies relacionadas. Tais plantas são partes da invenção. As sementes obtidas a partir das plantas transformadas também geneticamente contém a mesma característica e são partes da invenção. Como mencionado acima, a presente invenção está a princípio aplicável para qualquer planta e lavoura que pode ser transformada com qualquer um dos métodos de transformação conhecidos àquela pessoa habilitada na técnica.

Os promotores vegetais vantajosamente indutíveis são poi meio do exemplo do promotor PRP1 [Ward et ah, Plant.Mol. Biol.22(1993). 361-366], um promotor indutível por benzenossulfonamida (EP 388 186), um promotor indutível por tetraciclina [Gatz et ah, (1992) Plant J. 2,397-404], um promotor indutível por ácido salicílico (WO 95/19443), um prornotoi indutível por ácido abscísico (EP 335 528) e um promotor indutível por etano ou cicloexanona (W093/21334). Outros exemplos de promotores vegetai; que podem ser vantajosamente usados são os promotores de FBPast citosólico de batata, o promotor ST-LSI de batata (Stockhaus et ah, EMBO J 8 (1989) 2445-245), o promotor de fosforibosil pirofosfato amidotransferas· de Glicina max (ver também número de acessão de banco de gene U87999 ou um promotor específico não dieno como descrito em EP 249 676. i vantagem particular são aqueles promotores que garantem a expressão m início precoce da tensão ambiental provável por exemplo à aridez ou resfriamento.

Em uma forma de realização os promotores específicos por semente podem ser usados por plantas monocotiledônias ou dicotiledônias.

Em princípio todos os promotores naturais com suas sequências de regulação podem ser usados provavelmente aqueles nomeados acima por um cassete de expressão de acordo com a invenção e o método de acordo com a invenção. Em e acima deste, promotores sintéticos também podem ser vantajosamente usados.

Na preparação de um cassete de expressão vários fragmentos de DNA podem ser manipulados a fim de obter uma sequência de nucleotídeo, que proveitosamente lê na direção correta e é equipado com uma estrutura, de leitura correta. Para conectar os fragmentos de DNA (~ ácidos nucleicos de acordo com a invenção) a um outro elemento regulador ou adaptadores ou ligadores podem ser ligados aos fragmentos. O promotor e as regiões terminadoras podem sei provavelmente fornecidas na direção da transcrição com um ligador ou poliligador contendo um ou mais pontos de restrição para a inserção deste sequência. Geralmente, o ligador tem 1 a 10, principalmente 1 a 8 preferivelmente 2 a 6, pontos de restrição. Em geral o tamanho do ligador de região reguladora é menor do que 100 bp, frequentemente menos do que 6( bp, mas pelo menos 5 bp. O promotor pode ser tanto natural quanto homólogt bem como estranho ou heterólogo ao organismo hospedeiro, por exemplo ; planta hospedeira. Na direção da transcrição da extremidade 5’-3’ de un cassete de expressão contém o promotor, uma sequência de DNA que mostr; a tabela I c uma região para a terminação de transcrição. As regiões d< terminação diferentes podem ser trocadas por um outro em qualquer maneir desej ada.

Também como usado neste, os termos “ácido nucleico” “molécula de ácido nucleico” são pretendidos incluir moléculas de DNA (por exemplo, cDNA ou DNA genômico) e moléculas de RNA (por exemplo, mRNA) e análogos de DNA ou RNA gerado usando análogos de nucleotídeos. Este termo também abrange a sequência não traduzida localizada na extremidade tanto de 3’ quanto 5’ da região codifícadora do gene: pelo menos cerca de 1000 nucleotídeos da sequência a montante a partir da extremidade 5’ da região codifícadora e pelo menos cerca de 200 nucleotídeos da sequência a jusante a partir da extremidade 3’ da região codifícadora do gene. A molécula de ácido nucleico pode ser filamentado simples ou filamentado duplo, mas preferivelmente é DNA filamentado duplo.

Uma molécula de ácido nucleico “isolada” é um que é substancialmente separado a partir de outra molécula de ácidos nucleicos, que está presente na fonte natural do ácido nucleico. Aquele significa outra molécula de ácidos nucleicos estão presentes em uma quantidade menos dc que 5 % com base no peso da quantidade do ácido nucleico desejado preferivelmente menos do que 2 % em peso, mais preferivelmente menos dc que 1 % em peso, mais preferivelmente menos do que 0,5 % em peso Preferivelmente, um ácido nucleico “isolado” é livre de algumas daí sequências que naturalmente flanqueiam o ácido nucleico (isto é, sequênciaí localizadas na extremidade 5’ e 3’ do ácido nucleico) no DNA genômico dc organismo a partir do qual o ácido nucleico é derivado. Por exemplo, en várias formas de realização, a proteína relacionada à tensão isolada que codifica a molécula de ácido nucleico pode conter menos do que cerca de t kb, 4 kb, 3 kb, 2 kb, 1 kb, 0,5 kb ou 0,1 kb da sequência de nucleotídeos que naturalmente flanqueiam uma molécula de ácido nucleico no DNA genômice da célula de que o ácido nucleico é derivado. Além disso, uma molécula d( ácido nucleico “isolada”, tal como uma molécula de cDNA, pode ser livre df algum do material celular com o qual é naturalmente associado, ou meio di cultura quando produzida pelas técnicas recombinantes, ou precursores químicos ou outra químicas quando quimicamente sintetizados. A molécula de ácido nucleico da presente invenção, por exemplo, a molécula de ácido nucleico que codifica uma proteína relacionada ao GABA ou uma porção deste que confere a tolerância e/ou resistência à tensão ambiental e produção de biomassa aumentada em plantas, pode ser isolado usando técnicas biológicos moleculares padrão e a informação da sequência fornecida neste. Por exemplo, uma proteína relacionada à tensão Arabidopsis thaliana que codifica cDNA pode ser isolados de uma biblioteca de c-DNA A. thaliana ou uma proteína relacionada à tensão Synechocystis sp., Brassica napus, Glycine max, Zea mays ou Oryza sativa que codifica cDNA pode ser isolado de uma biblioteca de c-DNA Synechocystis sp., Brassica napus, Glycine max, Zea mays ou Oryza sativa respectivamente usando toda.-ou porção de uma das sequências mostradass na tabela I. Além disso, t molécula de ácido nucleico abrange todos ou porção de uma das sequências da tabela I pode ser isolada pela reação de cadeia de polimerase usandc iniciadores de oligonucleotídeos projetadas com base nesta sequência. Poi exemplo, mRNA pode ser isolado das células vegetais (por exemplo, pele procedimento de extração guanidínio-tiocianato de Chirgwin et al., 197c Biochemistry 18:5294-5299) e cDNA pode ser preparado usando transcriptas< reversa (por exemplo, transcriptase reversa de Moloney MLV, disponível d< Gibco/BRL, Bethesda, MD; ou transcriptase reversa de AMV, disponível d< Seikagaku America, Inc., St. Petersburg, FL). Os iniciadores di oligonucleotídeos sintéticos para amplificação de reação de cadeia di polimerase pode ser projetados com base em uma da sequência d nucleotídeos mostrada na tabela I. A molécula de ácido nucleico da invençãi pode ser amplificada usando cDNA ou, altemativamente, DNA genômicc como um modelo e os iniciadores apropriados de oligonucleotídeos de acord com técnicas de amplificação de PCR padrão. A molécula de ácido nucleic deste modo amplificado pode ser clonado em um vetor apropriado e caracterizado pela análise da sequência de DNA. Além disso, oligonucleotídeos correspondentes às proteínas relacionadas à sequência de nucleotídeo de codifica GABA pode ser preparado pelas técnicas sintéticas padrão, por exemplo, usando um sintetizador de DNA automático.

Em uma forma de realização preferida, uma molécula de ácido nucleico isolada da invenção que compreende uma da sequência de nucleotídeos mostrada na tabela I que codifica as proteínas relacionadas ao GABA (isto é, a “região codificadora”), bem como sequências não traduzidas da extremidade de 5’ e sequências não traduzidas da extremidade de 3 \ Além disso, a molécula de ácido nucleico da invenção pode compreender apenas uma porção da região codifícadora de uma das sequências do ácido nucleico da tabela I, por exemplo, um fragmento que pode ser usado como uma sonda ou iniciadora ou um fragmento que codifica uma porção biologicamente ativa das proteínas relacionadas ao GABA.

Porções das proteínas codificadas pela proteínas relacionadas ao GABA que codifica a molécula de ácidos nucleicos da invenção sãc preferivelmente porções biologicamente ativas descritas neste. Como usadc neste, o termo “porção biologicamente ativo de” proteínas relacionadas ac GABA é pretendida incluir uma porção, por exemplo, um domínio/motivo, áz proteína relacionada ao GABA que participa no aumento de GABA e preferivelmente no uso da eficiência de nutriente intensificado ou tolerância ε tensão e/ou resposta de resistência em uma planta. Para determinar se as proteínas relacionadas ao GABA, ou a porção biologicamente ativa destes resulta no aumento de GABA e preferivelmente na tolerância à tensãc aumentada ou uso da eficiência de nutriente em uma planta, uma análise dt metabólito de uma planta compreende as proteínas relacionadas ao GABé1 podem ser realizada. Tais métodos de análise são bem conhecidos aqueh pessoa habilitada na técnica, como detalhado nos exemplos. Mai: especificamente, os fragmentos de ácido nucleico codificam uma porção biologicamente ativa das proteínas relacionadas ao GABA pode ser preparados pelo isolamento de uma porção de uma das sequências do ácido nucleico da tabela I que expressa a porção codificada das proteínas relacionadas ao GABA ou peptídeo (por exemplo, pela expressão recombinante in vitro) e avaliação da atividade da porção codificada das proteínas relacionadas ao GABA ou peptídeo. A porção biologicamente ativa de uma proteína relacionada ao GABA é abrangida pela presente invenção e inclui os peptídeos que compreendem uma sequência de aminoácido derivada da sequência de aminoácido de uma proteína relacionada ao GABA codificada pelo gene, ou a sequência de aminoácido de uma proteína homóloga a uma proteína relacionada ao GABA, que inclui poucos aminoácidos do que uma proteínas relacionadas ao GABA de comprimento total ou a proteína de comprimento total que é homóloga a uma proteína relacionada ao GABA e exibe pele menos alguma atividade biológica ou enzimática de uma proteína relacionada ao GABA. Tipicamente, a porção biologicamente ativa (por exemplo peptídeos que são, por exemplo, 5, 10, 15, 20, 30, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 50 100 ou mais aminoácidos em comprimento) compreendem um domínio oi motivo com pelo menos uma atividade de uma proteína relacionada ac GABA. Além disso, outras porções biologicamente ativas em que outra.* regiões da proteína são anuladas, pode ser preparadas pelas técnica: recombinantes e avaliadas por uma ou mais das atividades descritas neste Preferivelmente, as porções biologicamente ativas de uma proteím relacionada ao GABA incluem um ou mais domínios/motivos selecionados oi porções destes tendo atividade biológica. O termo "porção ativa biológica" ou "atividade biológica' significa um polipeptídeo como descrito na tabela II, coluna 3 ou uma porçã< do dito polipeptídeo que ainda tem pelo menos 10 % ou 20 % preferivelmente 20 %, 30 %, 40 % ou 50 %, especialmente preferivelmente 60 %, 70 % ou 80 % da atividade biológica ou enzimática da enzima de partida ou natural ou proteína.

No processo de acordo com a invenção a sequência de ácidos nucleicos podem ser usados, que, se apropriado, contém bases de nucleotídeos modificados, não naturais ou sintéticos, que podem ser incorporados no DNA ou RNA. As ditas bases modificadas, não naturais ou sintéticas podem aumentar por exemplo a estabilidade da molécula do ácido nucleico dentro e for a de uma célula. A molécula de ácidos nucleicos da invenção pode conter as mesmas modificações como anteriormente mencionadas Como usado no presente contexto o termo “molécula de ácido nucleico” também podem abranger a sequência não traduzida localizada na extremidade final 3’ e na extremidade final de 5’ da região de gene codificadora, por exemplo pelo menos 500, preferivelmente 200. especialmente preferivelmente 100, nucleotídeos da sequência a montante άε extremidade final 5’ da região codificadora e pelo menos 100 preferivelmente 50, especialmente preferivelmente 20, nucleotídeos dε sequência a jusante na extremidade final 3’ da região do gene codificadora. Έ frequentemente vantajoso apenas escolher a região codificadora pan clonagem e propósitos da expressão.

Preferivelmente, a molécula de ácido nucleico usada nc processo de acordo com a invenção ou a molécula de ácido nucleico dt invenção é uma molécula de ácido nucleico isolada.

Um polinucleotídeo “isolado” ou molécula de ácido nucleico s separada a partir de outros polinucleotídeos ou molécula de ácidos nucleicos que estão presentes na fonte natural da molécula do ácido nucleico. Um; molécula de ácido nucleico isolada pode ser um fragmento cromossomal di diversos kb, ou preferivelmente, apenas uma molécula que compreende ; região codificadora do gene. Consequentemente, uma molécula de ácidi nucleico isolada da invenção pode compreender regiões cromossomais, que são adjacentes na extremidade final 5’ e 3’ ou ainda regiões cromossomais adjacentes, mas preferivelmente que não compreende tais sequências que naturalmente flanqueiam a sequência da molécula de ácido nucleico no contexto genômico ou cromossomal no organismo do qual uma molécula de ácido nucleico origina-se (por exemplo sequências que são adjacentes as regiões que codificam a extremidade final 5’- e 3’-UTRs da molécula do ácido nucleico). Em várias formas de realização, a molécula de ácido nucleico isolada usada no processo de acordo com a invenção pode, por exemplo compreender menos do que aproximadamente 5 kb, 4 kb, 3 kb, 2 kb, 1 kb, 0,5 kb ou 0,1 kb sequência de nucleotídeos que naturalmente flanqueiam uma molécula de ácido nucleico no DNA. genômico da célula de que a molécula de ácido nucleico origina-se. A molécula de ácidos nucleicos usada no processo, poi exemplo o polinucleotídeo da invenção ou de uma parte deste pode sei isolado usando técnicas padrão moleculares-biológicas e a informação de sequência fornecida neste. Também, por exemplo uma sequência homologe ou regiões da sequência conservada, homóloga no nível de DNA oi aminoácido pode ser identificado com a ajuda de algoritmos de comparação O formador pode ser usado como as fontes de hibridização sob as técnicas dt hibridização padrão (por exemplo aquelas descritas em Sambrook et al. Molecular Cloning: A Laboratory Manual. 2o Ed., Cold Spring Harbo Laboratory, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, ΝΎ 1989) para isolamento da sequência de ácidos nucleicos adicional útil nest processo. A molécula de ácido nucleico que abrange uma sequênci completa da molécula do ácidos nucleicos usada no processo, por exemplo i polinucleotídeo da invenção, ou uma parte deste pode ser adicionalment isolado pela reação de cadeia de polimerase, iniciadores de oligonucleotídeo com base nesta sequência ou nas partes destes sendo usados. Por exemplo, a molécula de ácido nucleico compreende uma sequência completa ou parte deste pode ser isolado pela reação de cadeia de polimerase usando iniciadores de oligonucleotídcos que foram gerados com base em muitas sequências. Por exemplo, mRNA pode ser isolado a partir das células (por exemplo por meio do método de extração de tiocianato de guanidínio de Chirgwin et al. (1979) Biochemistry 18:5294-5299) e cDNA pode ser gerado por meio de transcriptase reversa (por exemplo Moloney MLV transcriptase reversa, disponível de Gibco/BRL, Bethesda, MD, ou AMV transcriptase reversa, obtido de Seikagaku America, Inc., St.Petersburg, FL).

Os iniciadores de oligonucleotídeos sintéticos para ε amplificação, por exemplo como mostrado na tabela III, coluna 7, por meie da reação de cadeia de polimerase pode ser gerado na base de uma sequêncií mostrada neste, por exemplo a sequência mostrada na tabela I, colunas Sei ou as sequências derivadas da tabela II, colunas 5 e 7.

Além disso, é possível identificar o motivo ou domínio d< proteína conservada pela realização dos alinhamentos da sequência d< proteína com o polipeptídeo codificado pela molécula de ácidos nucleicos d.: presente invenção, em particular com as sequências codificadas pela molécul; de ácido nucleico mostrada na, coluna 5 ou 7 da tabela I, a partir do qual a regiões conservadas e por sua vez, iniciadores degenerados podem se derivados.

As regiões conservadas são aquelas, que mostram um variação muito menor no aminoácido na posição particular de diverso homólogos a partir da origem diferente. A sequência consenso e os motivo de polipeptídeos mostrados na coluna 7 da tabela IV são derivados dos dito alinhamentos. Além disso, é possível identificar as regiões a partir de vária organismos pela realização dos alinhamentos da sequência de proteína com polipeptídeo codificado pela ácido nucleico da presente invenção, er particular com as sequências que codifica a molécula de polipeptídeo mostrada na coluna 5 ou 7 da tabela II, a partir do qual as regiões conservadas e por sua vez, iniciadores degenerados podem ser derivados.

Em uma forma de realização vantajosa, no método da presente invenção a atividade de um polipeptídeo é aumentada compreendendo ou consistindo da sequência consenso ou um motivo de polipeptídeo mostrado na tabela IV coluna 7 e em uma outra forma de realização, a presente invenção diz respeito a um polipeptídeo que compreende ou que consiste da sequência consenso ou um motivo de polipeptídeo mostrada na tabela IV, coluna 7 considerando 20 ou menos, preferivelmente 15 ou 10, preferivelmente 9, 8, 7, ou 6, mais preferido 5 ou 4, ainda mais preferido 3, ainda mais preferido 2, ainda mais preferido 1, mais preferido 0 das posições de aminoácidos indicados podem ser substituídos por qualquer aminoácido. Em uma forma de realização não mais do que 15 %, preferivelmente 10 %, ainda mais preferido 5 %, 4 %, 3 %, ou 2 %, mais preferido 1 % ou 0 % da posição de aminoácido indicado por uma letra é substituído por outro aminoácido. Em uma forma de realização 20 ou menos, preferivelmente 15 ou 10, preferivelmente 9, 8, 7, ou 6, mais preferido 5 ou 4, ainda mais preferido 3, ainda mais preferido 2, ainda mais preferido 1, mais preferido 0 aminoácidos são inseridos na sequência consenso ou motivo de proteína.

A sequência consenso foi derivada de um alinhamentc múltiplo das sequências como listado na tabela II. As letras representam um código de aminoácido e indicam que os aminoácidos são conservados em pele menos 80 % das proteínas alinhadas, considerando a letra X stands pan aminoácidos, que não são conservados em pelo menos 80 % das sequência; alinhadas. A sequência consenso inicia com o primeiro aminoácide conservado no alinhamento e finais com o último aminoácido conservado ne alinhamento das sequências investigadas. O número de dados X indicam í distância entre os resíduos de aminoácidos conservados, por exemplo Y x(21,23)-F significa que a tirosina conservada e resíduos de fenilalanma no alinhamento são separados a partir de cada outro pelo mínimo de 21 e máximo de 23 resíduos de aminoácidos no alinhamento de todas as sequências investigadas.

Os domínios conservados foram identificados a partir de todas as sequências e são descritos usando uma subsérie de notação Prosite padrão, por exemplo o modelo Y~x(21,23)-[FW] significa que uma tirosina conservada é separada pelo mínimo de 21 e máximo de 23 de resíduos de aminoácidos a partir de fenilalanina ou triptofano. Os padrões tiveram que combinar pelo menos 80 % das proteínas investigadas.

Os padrões conservados foram identificados com a ferramenta de software MEME versão 3.5.1 ou manualmente. MEME foi desenvolvido por Timothy L. Bailey and Charles Elkan, Dept. of Computer Science and Engeneering, University of Califórnia, San Diego, USA e é descrito poi Timothy L. Bailey and Charles Elkan [Fitting a mixture model by expectatior maximizai ion to disco ver motifs in biopolymers, Proceedings of the Seconc International Confierence on Intelligent Systems for Molecular Biology, pp 28-36. AAAI Press, Menlo Park. Califórnia, 1994]. O código da fonte para c para o programa stand-é público disponível de San Diego Supercomputej center (http://meme.sdsc.edu).

Para identificação dos motivos comuns em todas as sequência! com a ferramenta software MEME, os seguintes ajustes foram usados: maxsize 500000, -nmotifs 15, -evt 0.001, -maxw 60, -distance le-3, -minisite: diversas sequências usadas para a análise. As sequências de entrada pari MEME foram sequências não alinhadas no formato Fasta. Outros parâmetro; foram usados no ajuste default nesta versão de software.

Os padrões Prosite para os domínios conservados foran gerados com a ferramenta de software Pratt versão 2.1 ou manualmente. Prat foi desenvolvido por Inge Jonassen, Dept. of Informatics, University o Bergen, Norway e é descrito por Jonassen et al. [I.Jonassen, J.F.Collins and D.G.Higgins, Finding flexible patterns in unaligned protein sequences, Protein Science 4 (1995), pp. 1587-1595; I.Jonassen, Efficient discovery of conserved pattem using a pattern graph, Submitted to CABIOS Febr. 1997]. O código da fonte (ANSI C) para o stand-alone program is public disponível, por exemplo em establisched Bioinformatic centers like EBI (European Bioinformatics Institute).

Para a geração dos padrões com a ferramenta de software Pratt, os ajustes seguintes foram usados: PL (comprimento de padrão máximo): 100, PN (Nr máximo de símbolos padrão): 100, PX (Nr máximo de x's consecutivos): 30, FN (Nr máximo de espaçadores flexíveis): 5, FL (flexibilidade máxima): 30, FP (produto Flex. Máxima): 10, ON (números padrões máximos): 50. As sequências de entrada para Pratt foram regiõe? distintas das sequências de proteína que exibem similaridade alta comc identificada a partir da ferramenta de software MEME. O número mínimo de sequências, que tiveram que combinar os padrões gerados (CM, Nr mínima das sequências a combinar) foi ajustado a pelo menos 80 % da sequência; fornecidas. Os parâmetros não mencionados foram usados nos ajustes default.

Os padrões Prosite dos domínios conservados podem se: usados para buscar as sequências de proteína combinando seu padrão. Vário: centros bioinformáticos estabelecidos fornecem os portais de internet público; para uso daqueles padrões na busca do banco de dados (por exemplo PII [Protein Information Resource, localizado a Georgetown FJniversity Medica Center] ou ExPASy [Expert Protein Analysis System]). Altemativamente, < software stand-alone é disponível, semelhante ao programa Fuzzpro, que parte do pacote do software EMBOSS. Por exemplo, o programa Fuzzpro nã< apenas permite buscar para um ponto de proteína-padrão exato mas tambér ajustar várias ambiguidades na busca realizada. O alinhamento foi realizado com o software ClustalW (versã 1.83) e é descrito por Thompson et al. [Thompson, J.D., Higgins, D.G. and Gibson, T.J. (1994) CLUSTAL W: improving the sensitivity of progressive multiple sequence alignment through sequence weighting, positions-specific gap penalties and weight matrix choice. Nucleic Acids research, 22:4673-4680], O código da fonte para o programa stand-alone é público disponível de European Molecular Biology Laboratory; Heidelberg, Germany. A análise foi realizada usando os parâmetros default de ClustalW vl.83 (penalidade de abertura de fenda: 10.0; penalidade de extensão de fenda: 0.2; matriz de proteína: Gonnet; pprotein/DNA endgap: -1; protein/DNA gapdist: 4).

Os inici adores degenerados podem ser então utilizados por PCR para a amplificação dos fragmentos de novas proteínas tendo atividade mencionada acima, por exemplo conferindo o conteúdo GABA aumentado como comparado a um tipo selvagem não transformado correspondente após o aumento da expressão ou atividade ou tendo a atividade de uma proteína como mostrado na tabela II, coluna 3 ou ainda homólogos funcionais dc polipeptídeo da invenção a partir de outros organi smos.

Estes fragmentos podem ser então utilizados como sonda de hibridização para o isolamento da sequência de gene completa. Como mm alternativa, as sequências 5’ e 3’ ausentes podem ser isoladas por meio de RACE-PCR. A molécula de ácido nucleico de acordo com a invenção pode ser amplificada usando cDNA ou, como uma alternativa, DNA genômice como modelo e iniciadores de oligonucleotídeos adequados, seguindo a: técnicas de amplificação de PCR padrão. A molécula de ácido nucleicc amplificada deste modo pode ser clonada em um vetor adequado < caracterizado por meio da análise da sequência de DNA. O oligonucleotídeos, que correspondem a um da molécula do ácidos nucleico usados no processo pode ser gerado pelo métodos da síntese padrão, po exemplo usando um sintetizador DNA automático.

As moléculas de ácidos nucleicos que são vantajosamente par o processo de acordo cora a invenção podem ser isoladas com base em sua homologia a uma molécula de ácidos nucleicos divulgado neste como as sequências ou parte deste como sonda de hibridização c seguindo as técnicas de hibridização padrão sob condições de hibridização estrigentes. Neste contexto, é possível usar, por exemplo, moléculas de ácidos nucleicos isoladas de pelo menos 15, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 60 ou mais nucleotídeos, preferivelmente de pelo menos 15, 20 ou 25 nucleotídeos em comprimento no qual hibridiza sob condições estringentes com as moléculas de ácidos nucleicos descritas acima, em particular com aquelas que abrangem a sequência de nucleotídeo da molécula de ácido nucleico usada no processo da invenção ou que codificam uma proteína usada em uma invenção ou da molécula do ácido nucleico da invenção. As moléculas de ácidos nucleicos com 30, 50, 100, 250 ou mais nucleotídeos também podem ser usadas. O termo “homologia” significa que as moléculas de ácidos nucleicos respectivas ou proteínas codificadas são funcionalmente e/ou estruturalmente equivalentes. As moléculas de ácidos nucleicos que sãc homólogas a uma molécula de ácidos nucleicos descritos acima e que sãc derivados das ditas moléculas de ácidos nucleicos são, por exemplo, variações da ditas moléculas de ácidos nucleicos que representam as modificações tende a mesma função biológica, em particular proteínas que codificam com í mesma ou substancialmente a mesma função biológica. Estes podem se: variações de ocorrência natural, tal como sequências de outras variedades d< plantas ou espécies, ou mutações. Estas mutações podem ocorre naturalmente ou podem ser obtidas pelas técnicas de mutagênese. A variações alélicas podem ser variantes alélicas de ocorrência natural ben como variantes sinteticamente produzidas ou geneticamente projetadas Estruturalmente os equivalentes podem, por exemplo, ser identificados pel· teste de ligação do dito polipeptídeo aos anticorpos ou predições com base er computador. Estruturalmente equivalente tem a característica imunológic similar, por exemplo que compreende os epítopos similares.

Pela “hibridização” é significado que tal molécula de ácidos nucleicos hibridiza sob condições de hibridização convencional, preferivelmente sob as condições estringentes tal como descrito, por exemplo, Sambrook (Molecular Cloning; A Laboratory Manual, 2nd Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (1989)) or in Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, N. Y. (1989), 6.3.1-6.3.6.

De acordo com a invenção, DNA bem como moléculas de RNA do ácido nucleico da invenção pode ser usado como sondas. Além disso, como modelo para a identificação dos ensaios Northern blot homólogos funcionais bem como ensaios Southern blot podem ser realizados. O ensaie Northern blot vantajosamente ainda fornece informações em tomo do produte do gene expressado: por exemplo modelo de expressão, ocorrência das etapas de processamento, tal como união e revestimento, etc. O ensaio Southern blo fornece a informação adicional cex*ca da localização cromossoma! c organização do gene que codifica o molécula de ácido nucleico da invenção.

Um exemplo não limitante preferido das condições d< hibridização estringentes são hibridizações em 6 x cloreto de sódio /citrato d< sódio (= SSC) em aproximadamente 45° C, seguido por um ou mais etapas d< lavagem em 0,2 x SSC, 0,1 % de SDS em 50 a 65° C, por exemplo a 50° C 55° C ou 60° C. O trabalhador habilitado conhece que estas condições d hibridização diferem como uma função do tipo de ácido nucleico e, po exemplo quando os solventes orgânicos estão presentes, com relação temperatura e concentração do tampão. A temperatura sob “condições d hibridização padrão” difere-se por exemplo como uma função do tipo d ácido nucleico entre 42° C e 58° C, preferivelmente entre 45° C e 50° C er um tampão aquoso com uma concentração de 0,1 x 0,5 x, 1 x, 2x, 3x, 4x or x SSC (pH 7,2). Se os solventes orgânicos estão presentes no tampã anteriormente mencionado, por exemplo 50 % de formamida, a temperatura sob condições padrão é aproximadamente 40° C, 42° C ou 45° C. As condições de hibridização para híbridos de DNArDNA são preferivelmente por exemplo 0,1 x SSC e 20° C, 25° C, 30° C, 35° C, 40° C ou 45° C, preferivelmente entre 30° C e 45° C. As condições de hibridização para os híbridos de DNAiRNA são preferivelmente por exemplo 0,1 x SSC e 30° C, 35° C, 40° C, 45° C, 50° C ou 55° C, preferivelmente entre 45° C e 55° C. As temperaturas de hibridização anterionnente mencionada são determinadas poi exemplo por um ácido nucleico aproximadamente 100 bp (= pares de base" em comprimento e um conteúdo G + C de 50 % na ausência da formamida. C trabalhador habilitado entende para determinar as condições de hibridizaçãc requeridas com a ajuda de livro-texto, por exemplo um mencionado acima, oi a partir do seguinte livro-texto: Sambrook et al., “Molecular Cloning”, Cole Spring Harbor Laboratory, 1989; Hamcs and Higgins (Ed.) 1985, “Nucleic Acids Hybridízation: A Practical Approach”, IRL Press at Oxford Universib Press, Oxford; Brown (Ed.) 1991, “Essential Molecular Biology: A Practica Approach”, IRL Press at Oxford University Press, Oxford.

Um exemplo adicional de uma tal hibridização estringente < hibridização a 4XSSC a 65° C, seguido pela lavagem em 0,1XSSC a 65° ( por uma hora. Alternativamente, uma condição de hibridização estringent exemplar está em 50 % de formamida, 4XSSC a 42° C. Além disso, a condições durante a etapa de lavagem podem ser seleciondas a partir da condições delimitadas pelas condições estringentes baixas (aproximadament 2X SSC a 50° C) e condições estringência alta (aproximadamente 0,2X SSC 50° C, preferivelmente a 65° C) (20X SSC: 0,3 M de citrato de sódio, 3M d NaCl, pH 7,0). Além disso, a temperatura durante a etapa de lavagem pod ser aumentada a partir de condições estringentes baixas em temperatur ambiente, aproximadamente 22° C, as condições de estringência alta ei aproximadamente 65° C. Tanto os parâmetros de concentração de sal quant temperatura pode ser cariado simultaneamente, ou em vez de um de dois parâmetros podem ser mantidos constantes enquanto apenas outro é variado. Desnaturantes, por exemplo formamida ou SDS, também pode ser utilizado durante a hibridização. Na presença de 50 % de formamida, hibridização é preferivelmente efetuada a 42° C. Fatores relevantes semelhantes i) comprimento de tratamento, ii) condições de sal, iii) condições detergentes, iv) DNAs competidores, v) temperatura e vi) seleção de sonda pode ser combinado caso a caso de modo que nem todas as possibilidades podem ser mencionadas neste.

Deste modo, em uma forma de realização preferida, Northern blots são pré-hibridizados com tampão Rothi-Hybri-Quick (Roth, Karlsmhc a 68° C por 2 horas. A hibridização com sonda rotulada radioativa é feit£ durante a noite a 68° C. As etapas de lavagem subsequente são realizadas £ 68° C com IxSSC.

Para os ensaios Southern blot a membrana é pré-hibridizad; com tampão Rothi-Hybri-Quick (Roth, Karlsruhe) a 68° C por 2 horas. / hibridização com sonda rotulada radioativa é conduzida durante a noite a 68' C. Subsequentemente o tampão de hibridização é descartado e o fxltr< curtamente lavado usando 2xSSC; 0,1 % de SDS. Após descarte o tampão d< lavagem 2xSSC; 0,1 % de tampão SDS é adicionado e incubado a 68° C po 15 minutos. Esta etapa de lavagem é realizada duas vezes seguindo por um; etapa de lavagem adicional usando IxSSC; 0,1 % SDS a 68° C por 1< minutos.

Alguns exemplos das condições para hibridização de DNi (ensaios Southern blot) e etapa de lavagem são mostrados mais acima: (1) Condições de hibridização podem ser selecionados, pc exemplo, a partir das seguintes condições: a) 4X SSC a 65° C, b) 6X SSC a 45° C, c) 6X SSC, 100 mg/ml de DNA de esperma de peixe fragmentado desnaturado a 68° C, d) 6X SSC, 0,5 % de SDS, 100 mg/ml de DNA de esperma de salmão desnaturado a 68° C, e) 6X SSC, 0,5 % de SDS, 100 mg/ml de DNA de esperma de salmão fragmentado desnaturado, 50 % de formamida a 42° C, f) 50 % de formamida, 4X SSC a 42° C, g) 50 % de (vol/vol) formamida, 0,1 % de albumina de soro bovino, 0,1 % de Ficoll, 0,1 % de polivinilpirrolidona, 50 mM de tampão de fosfato de sódio pH 6,5, 750 mM de NaCl, 75 mM de citrato de sódio a 42° C, h) 2X ou 4X SSC a 50° C (condição de estringência baixa), ou i) 30 a 40 % de formamida, 2X ou 4X SSC a 42° C (condição de estringência baixa). (2) Etapas de lavagem podem ser selecionadas, por exemplo, £ partir das seguintes condições: a) 0,015 M de NaCl/0,0015 M de citrato de sódio/0,1 % dc SDS a 50° C. b) 0,1X SSC a 65° C. c) 0,1X SSC, 0,5 % de SDS a 68° C. d) 0,lX SSC, 0,5 % de SDS, 50 % de formamida a 42° C. e) 0.2X SSC, 0,1 % SDS a 42° C. f) 2X SSC a 65° C (condição de estringência baixa).

Polipeptídeos tendo atividade mencionada acima, isto ■ conferindo o conteúdo GABA aumentado como comparado a um tip< selvagem não transformado correspondente, derivado a partir de outro organismos, podem ser codificados pelas outras sequências de DNA qu hibridizam as sequências mostradass na tabela T, colunas 5 e 7 sob condiçõe de hibridização relaxadas e no qual o código na expressão dos peptídeo conferindo o conteúdo GABA aumentado como comparado a um tip selvagem não transformado correspondente.

Ainda, algumas aplicações foram realizadas em condições de hibridização de estringência baixa, sem quaisquer consequências para a especificidade da hibridização. Por exemplo, uma análise Southern blot de DNA total deve ser sondada com uma molécula de ácido nucleico da presente invenção e lavada em estringência baixa (55° C em 2xSSPE, 0,1 % de SDS). A análise de hibridização deve revelar os uma origem simples de apenas os pofipeptídeos que codificam os genes da presente invenção ou saudo no processo da invenção, por exemplo tendo atividade anteriormente mencionado no aumento da tolerância e/ou resistência à tensão ambiental e a produção em massa como comparado a um tipo selvagem não transformado correspondente a célula vegetal, planta ou parte deste. Um exemplo adicional de tais condições de hibridização estringentes baixas é 4XSSC a 50° C ou hibridização com 30 a 40 % de formamida a 42° C. Tais moléculas compreendem aqueles que são fragmentos, análogos ou derivados do polipeptídeo da invenção ou usados no processo da invenção e difere-se, poi exemplo, por meio de aminoácido e/ou anulações de nucleotídeos, inserções, substituições, adições e/ou recombinações ou quaisquer outras modificações conhecidas na, técnica sozinho ou em combinação a partir da sequência ck aminoácidos descrita acima ou suas sequências de nucleotídeos subjacentes Entretanto, é preferido usar as condições de hibridização de estringência alta. A hibridização deve ser vantajosamente realizada com oi fragmentos de pelo menos 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35 ou 40 bp, vantajosamenU pelo menos 50, 60, 70 ou 80 bp, preferivelmente pelo menos 90, 100 ou 11 < bp. Mais preferivelmente são fragmentos de pelo menos 15, 20, 25 ou 30 bp Preferivelmente também são hibridizações com pelo menos 100 bp ou 200 mais especialmente preferivelmente pelo menos 400 bp em comprimento. En uma forma de realização especialmente preferida, a hibridização deve se realizada com a sequência de ácido nucleico inteira com as condiçõe descritas acima.

Os termos "fragmento”, "fragmento de uma sequência” ou “parte de uma sequência” significa uma sequência truncada da sequência original referida. A sequência truncada (ácido nucleico ou sequência de proteína) pode variar amplamente em comprimento; o tamanho mínimo sendo uma sequência do tamanho suficiente para fornecer uma sequência com pelo menos uma função comparável e/ou atividade da sequência original referida ou hibridização com uma molécula de ácido nucleico da invenção ou usada no processo da invenção sob condições estringentcs, enquanto o tamanho máximo não é crítico. Em algumas aplicações, o tamanho máximo usualmente não é substancialmente maior do que requerido para fornecer a atividade desejada e/ou funções da sequência original.

Tipicamente, a sequência de aminoácido trancada variará de cerca de 5 a cerca de 310 aminoáeidos em comprimento. Mais tipicamente, entretanto, a sequência terá um máximo de cerca de 250 aminoáeidos em comprimento, preferivelmente um máximo de cerca de 200 ou 100 aminoáeidos. É usualmente desejado para selecionar as sequências de pele menos cerca de 10, 12 ou 15 aminoáeidos, até um máximo de cerca de 20 oi 25 aminoáeidos. O termo “epítopo” diz respeito um local imunoreative específico dentro de um antígeno, também conhecido como determinante: antigênicos. Estes epítopos podem ser de um arranjo linear dos monômero: em uma composição polimérica- tal como aminoáeidos em uma proteína— oi consiste ou compreendem um complexo de estrutura mais secundária oi terciária. Aquela pessoa habilitada reconhecerá que os imunogênios (isto é substâncias capazes de eliciar uma resposta imune) são antígenos; entretante algum antígeno, tal como haptenos, não são imunogênios mas podem se feitos imunogênicos pela ligação a uma molécula carregada. O term “antígeno” inclui as referências a uma substância no qual um anticorpo pod ser gerado e/ou no qual um anticorpo é especifícamente imunoreativo.

Em uma forma de realização a presente invenção diz respeito a um epítopo do polipeptídeo da presente invenção ou usado no processo da presente invenção e confere um conteúdo GABA aumentado como comparado a um tipo selvagem não transformado correspondente. O termo “um ou diversos aminoácidos” diz respeito a pelo menos um aminoácido mas não mais do que diversos aminoácidos, que devem resultar em uma homologia de abaixo 50 % de identidade. Preferivelmente, a identidade é mais do que 70 % ou 80 %, mais preferido são 85 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 %, 94 % ou 95 %, ainda mais preferidos são 96 %, 97 %, 98 %, ou 99 % de identidade.

Ainda, a molécula de ácido nucleico da invenção que compreende a molécula de ácido nucleico, que é um complemento de uma das sequências de nucleotídeos da molécula de ácidos nucleicos mencionado acima ou uma porção deste. A molécula de ácido nucleico que e complementar a uma das sequências de nucleotídeos mostradas na tabela I colunas 5 e 7 é um que é suficientemente complementar a uma das sequências de nucleotídeos mostradas na tabela I, colunas 5 e 7 tal que pode hibridizai uma das sequências de nucleotídeos mostradas na tabela I, colunas 5 e 7 portanto formando um duplexo estável. Preferivelmente, a hibridização < realizada sob condições de hibridização estringentes. Entretanto, un complemento de uma das sequências divulgadas neste é preferivelmente un complemento da sequência deste de acordo com pares de bases das molécula de ácidos nucleicos bem conhecidos à pessoa habilitada. Por exemplo, a bases A e G suportam pares de base com as bases T e U ou C, resp. e vis versa. As modificações das bases podem influenciar o parceiro com par d bases. A molécula dc ácido nucleico da invenção que compreende sequência de nucleotídeo que é pelo menos cerca de 30 %, 35 %, 40 % ou 4 %, preferivelmente pelo menos cerca de 50 %, 55 %, 60 % ou 65 %, mais preferivelmente pelo menos cerca de 70 %, 80 %, ou 90 % e ainda mais preferivelmente pelo menos cerca de 95 %, 97 %, 98 %, 99 % ou mais homólogo a uma sequência de nucleotídeo mostrada na tabela I, colunas 5 e 7, ou uma porção destes e preferivelmente tem atividade mencionada acima, em particular tendo uma tolerância e/ou resistência à tensão ambiental e produção de biomassa aumentando a atividade após o aumento da atividade ou uma atividade de um produto do gene como mostrado na tabela II, coluna 3 por exemplo expressão no citsol ou uma organela tal como um plastídeo ou mitocôndria ou ambos, preferivelmente nos plastídeos.

Uma molécula de ácido nucleico da invenção que compreende a sequência de nucleotídeo que hibridiza, preferivelmente hibridiza sob as condições estringentes como definido neste, a uma das sequências de nucleotídeos mostradas na tabela I, colunas 5 e 7, ou uma porção destes e codifica uma proteína tendo atividade mencionada acima, por exemple conferindo um conteúdo GABA aumentado como comparado a um tipe selvagem não transformado correspondente por exemplo pela expressão nc citsol ou uma expression ou em uma organela tal como um plastídeo oi mitocôndria ou ambos, preferivelmente nos plastídeos e opcionalmente, £ atividade selecionada do grupo que consiste de: proteína ribossomal 60S proteína de permease transportador ABC, acetiltransferase, proteín; carreadora de acila, proteína At4g32480, proteína At5gl6650, proteína d< ligação ATP, proteína relacionada a Autofagia, fator de resposta de auxina fator de transcrição de auxina, proteína bl003, proteína bl522, proteín; b2739, proteína b3646, proteína B4029, permease de aminoácido de cadei; ramificada, cinase de proteína dependente de cálcio, subunidade VIII d' citocromo c oxidase, fator Tu de alojamento, proteína de detenção de fatoi fumarilacetoacetato hidrolase, geranilgeranil pirofosfato sintase desidrogenase glicose, glicosil transferase, proteína da família induzida pc grupo de cabelo, sintase homocitrato, hidrolase, sintase isocorismato, proteína transportador do tipo MFS, beta-queto-redutase microssomal, poligalacturonase, fosfatase de proteína, piruvato cinase, subunidade de translocase de proteína independente de Sec, serina protease, tioredoxina, proteína da família de tioredoxina, regulador transcripcional, ubiquinona biosíntese monooxigenase e proteína YHR213W.

Em toda parte do contexto desta aplicação a expressão das sequências de nucleotídeos compreendem a sequência de nucleotídeos mostrada na tabela I, colunas 5 e 7 ou da sequência de nucleotídeos que codificam uma proteína que compreende a sequência de polipeptídeos como mostrado na tabela II colunas 5 ou 7 nos plastídeos é especialmente preferido se estas sequências são mostradas na tabela I ou II na mesma linha como um ORF (coluna 3), pelo qual a tabela I, II, III ou IV mostram “plastídico” na coluna “alvo”.

Além disso, a molécula de ácido nucleico da invenção pode compreender apenas uma porção da região codificadora de uma das sequências mostradas na tabela I, colunas 5 e 7, por exemplo um fragmente que pode ser usado como uma sonda ou iniciador ou um fragmento que codifica uma porção biologicamente ativa do polipeptídeo da presente invenção ou de um polipeptídeo usado no processo da presente invenção, iste é tendo atividade mencionada acima, por exemplo que confere um aumente da tolerância e/ou resistência à tensão ambiental e produção de biomassE como comparado a um tipo selvagem não transformado correspondente í célula vegetal, planta ou parte deste se sua atividade é aumentada po: exemplo pela expressão no citsol ou em uma organela tal como um plastídec ou mitocôndria ou ambos, preferivelmente nos plastídeos. As sequências d< nucleotídeos determinadas a partir da clonagem da presente proteína d acordo com a invenção do gene codificado permite a geração de sondas ' iniciadores projetados para uso na identificação e/ou clonagem dc sei homólogo em outro tipos celular ou organismos. A sonda/iniciador tipicamente compreendem substancialmente os oligonucleotídeos purificados. O oligonucleotídeo tipicamente que compreende uma região da sequência de nucleotídeo que hibridiza sob as condições estringentes a pelo menos cerca de 12, 15 preferivelmente cerca de 20 ou 25, mais preferivelmente cerca de 40, 50 ou 75 nucleotídeos consecutivos de um filamento sentido de uma das sequências apresentadas, por exemplo, na tabela I, colunas 5 e 7, uma sequência anti-sentido de uma das sequências, por exemplo, apresentada na tabela I, colunas 5 e 7, ou mutantes de ocorrência natural deste. Os iniciadores com base em um nucleotídeo da invenção pode ser usado nas reações de PCR para clonar os homólogos do polipeptídeo da invenção ou do polipeptídeo usado no processo da invenção, por exemplo como os iniciadores descritos nos exemplos da presente invenção, por exemplo como mostrado nos exemplos. Um PCR com os iniciadores mostrados na tabela III, coluna 7 resultarão em um fragmento do produto do gene como mostrado na tabela II coluna 3.

As séries iniciadoras são permutáveis. A pessoa habilitada ηε técnica entenderá que para combinar os ditos iniciadores resultará no produte desejado, por exemplo em um clone de comprimento total ou uma sequêncií parcial. As sondas com base nas sequências da molécula do ácido nucleico d; invenção ou usadas no processo da presente invenção pode ser usadas par; detectar os transcritos ou sequências genômicas que codificam a mesma oi proteínas homólogas. A sonda ainda pode compreender um grupo de rótuh ligado deste, por exemplo o grupo de rótulo pode ser um radioisótopo, un composto fluorescente, uma enzima, ou um co-fator de enzima. Tais sonda podem ser usadas como parte de um kit de teste marcador genômico par. identificação das células que expressam um polipeptídeo da invenção oi usado no processo da presente invenção, tal como pela medição de um níve de um que codifica a molécula de ácido nucleico em uma amostra das célula' por exemplo, detectação dos níveis dc mRNA ou determinação, se um gene genômico compreende uma sequência do polinucleotídeo da invenção ou usado no processos da presente invenção foram mutados ou anulados. A molécula de ácido nucleico da invenção codifica um polípeptídeo ou porção deste que inclui uma sequência de aminoácido que é suficientemtente homólogo à sequência de aminoácido mostrada na tabela II, colunas 5 e 7 tal que a proteína ou porção deste mantém a capacidade de participar no aumento do conteúdo GABA e preferivelmente aumento no traço relacionado ao rendimento adicional como comparado a um tipo selvagem não transformado correspondente a célula vegetal, planta ou parte deste, em particular aumento da atividade como mencionado acima ou como descrito nos exemplos em plantas é compreendido.

Como usado neste, a linguagem “suficientemente homóloga’' refere-se as proteínas ou porções destes que tem a sequência de aminoácido:· que incluem um número mínimo de resíduos de aminoácidos equivalentes oi idênticos (por exemplo, um resíduo de aminoácido que tem uma cadeü secundária similar como um resíduo de aminoácido em uma das sequência; do polípeptídeo da presente invenção) a uma sequência de aminoácídc mostrada na tabela II, colunas 5 e 7 tal que a proteína ou porção deste é capa; de participar no aumento do conteúdo GABA como comparado a um tip< selvagem não transformado correspondente. Por exemplos tendo a atividads de uma proteína como mostrado na tabela II, coluna 3 e como descrito neste.

Em uma forma de realização, a molécula de ácido nucleico d presente invenção que compreende um ácido nucleico que codifica um porção da proteína da presente invenção. A proteína é pelo menos cerca de 3( %, 35 %, 40 %, 45 % ou 50 %, preferivelmente pelo menos cerca de 55 %, 6 %, 65 % ou 70 % e mais preferivelmente pelo menos cerca de 75 %, 80 %, 8 %, 90 %, 91 %, 92 %, 93 % ou 94 % e mais preferivelmente pelo menos cerc de 95 %, 97 %, 98 %, 99 % ou mais homólogo a uma sequência inteira d aminoácido da tabela II, colunas 5 e 7 e tendo atividade mencionada acima, por exemplo que confere um conteúdo GABA aumentado como comparado a um tipo selvagem não transformado correspondente por exemplo pela expressão no citsol ou em uma organela tal como um plastídeo ou mitocôndria ou ambos, preferivelmente nos plastídeos.

Porções de proteínas codificadas pela molécula de ácido nucleico da invenção são preferivelmente biologicamente ativas, preferivelmente tendo atividade anotada mencionada acima, por exemplo que confere um conteúdo GABA aumentado como comparado a um tipo selvagem não transformado correspondente a célula após o aumento da atividade.

Como mencionado neste, o termo “porção biologicamente ativa” é pretendida incluir uma porção, por exemplo, um domínio/motivo, que confere o conteúdo GABA aumentado como comparado a um tipo selvagem não transformado correspondente ou tem uma atividade imunológica tal que esta é liga-se a uma ligação de anticorpo especialmente ao polipeptídeo da presente invenção ou um polipeptídeo usado no processo da presente invenção para o conteúdo GABA aumentado como comparado a um tipc selvagem não transformado correspondente. A invenção ainda diz respeito a molécula de ácidos nucleicoí que difere-se de uma das sequências de nucleotídeos mostrada na tabela I A colunas 5 e 7 (e porção destes) devido a degeneração do código genético c deste modo codifica um polipeptídeo da presente invenção, em particular un polipeptídeo tendo atividade mencionada acima, por exemplo como aquela d( polipeptídeo descrito pela sequência mostrada na tabela II, colunas 5 e 7 ou o: homólogos funcionais. Vantajosamente, a molécula de ácido nucleico d; invenção que compreende, ou em uma outra forma de realização tem, ; sequência de nucleotídeo que codifica uma proteína que compreende, ou en uma outra forma de realização tendo, uma sequência de aminoácido mostrad na tabela II, colunas 5 e 7 ou os homólogos funcionais. Ainda em uma form de realização adicionai, a molécula de ácido nucleico da invenção codifica uma proteína de comprimento total que é substancialmente homóloga a uma sequência de aminoácido mostrada na tabela II, colunas 5 e 7 ou os homólogos funcionais. Entretanto, em uma forma de realização preferida, a molécula de ácido nucleico da presente invenção não consiste da sequência mostrada na tabela I, preferivelmente tabela IA, colunas 5 e 7.

Além disso, será apreciado por aquela pessoa habilitada na técnica que os polimorfismos da sequência de DNA que levam a mudança na sequência de aminoácidos podem existir dentro de uma população. Tal polimorfismo genético no gene que codifica o polipeptídeo da invenção ou que compreende a molécula de ácido nucleico da invenção pode existir entre indivíduos dentro de uma população devido a variação natural.

Como usado neste, os termos “gene” e “gene recombinante” refere-se a molécula de ácidos nucleicos que compreende uma estrutura de leitura de abertura que codifica o polipeptídeo da invenção ou que compreende a molécula de ácido nucleico da invenção ou que codifica c polipeptídeo usado no processo da presente invenção, preferivelmente a partir de uma planta de lavoura ou de um microorganismo útil para o método de invenção. Tais variações naturais podem tipicamente resultar na diferença de 1 a 5 % na sequência de nucleotídeo do gene. Qualquer e todas de taií variações de nucleotídeos e resultando no polimorfismo do aminoácido no; genes que codificam um polipeptídeo da invenção ou que compreendem umr molécula de ácido nucleico da invenção que são os resultados da variaçãc natural e que não alteram a atividade funcional como descrito são pretendido: estar dentro do escopo da invenção. A molécula de ácidos nucleicos correspondentes ao homólogos das variantes naturais de uma molécula de ácido nucleico d; invenção, que também pode ser um cDNA, pode ser isolado com base em su; homologia a uma molécula de ácidos nucleicos divulgada neste usando molécula de ácido nucleico da invenção, ou uma porção destes, como uma sonda de hibridização de acordo com as técnicas de hibridização padrão sob condições de hibridização estrigentes.

Consequentemente, em outra forma de realização, a molécula de ácido nucleico da invenção é pelo menos 15, 20, 25 ou 30 nucleotídeos em comprimento. Preferivelmente, este hibridiza sob as condições estringentes a uma molécula de ácido nucleico que compreende uma sequência de nucleotídeo da molécula do ácido nucleico da presente invenção ou usada no processo da presente invenção, por exemplo compreende uma sequência mostrada na tabela I, colunas 5 e 7. A molécula de ácido nucleico é preferivelmente pelo menos 20, 30, 50, 100, 250 ou mais nucleotídeos em comprimento. O termo “hibridiza sob as condições estringentes” é definido acima. Em uma forma de realização, o termo “hibridiza sob as condições estringentes” é pretendido descrever as condições para a hibridização e lavagem sob qual a sequência de nucleotídeos pelo menos 30 %, 40 %, 50 °/ ou 65 % idêntica a cada outra tipicamente permanece hibridizada a cadr outra. Preferivelmente, as condições são tal que as sequências pelo menos cerca de 70 %, mais preferivelmente pelo menos cerca de 75 % ou 80 % e ainda mais preferivelmente pelo menos cerca de 85 %, 90 % ou 95 % ou mah idênticas a cada outro tipicamente permanece hibridizado a cada outro.

Preferivelmente, molécula de ácido nucleico da invenção qu( hibridiza sob as condições estringentes a uma ssequência mostrada na tabela I colunas 5 e 7 corresponde a uma molécula de ácido nucleico de ocorrêncií natural da invenção. Como usado neste, uma molécula de ácido nucleico d< “ocorrência natural” refere-se a uma molécula de RNA ou DNA tendo ; sequência de nucleotídeo que ocorre na natureza (por exemplo, codifica um; proteína natural). Preferivelmente, a molécula de ácido nucleico codifica um; proteína natural tendo atividade mencionada acima, por exemplo conferindo tolerância e/ou resistência à tensão ambiental e aumento da produção de biomassa após aumentar a expressão ou atividade destes ou uma atividade de uma proteína da invenção ou usado no processo da invenção por exemplo pela expressão da sequência de ácido nucleico do produto do gene no citsol e/ou em uma organela tal como um plastídio ou mitocôndria, preferivelmente nos plastídeos.

Além disso as variantes de ocorrência natural das sequências do polipeptídeo ou molécula de ácido nucleico da invenção bem como do polipeptídeo ou molécula de ácido nucleico usada no processo da invenção que pode existir na população, o técnico habilitado ainda apreciará que as mudanças podem ser introduzidas pela mutação em uma sequência de nucleotídeo da molécula do ácido nucleico que codifica o polipeptídeo da invenção ou usado no processo da presente invenção, portanto levando a mudança na sequência de aminoácido do dito polipeptídeo codificado, sem alterar a capacidade funcional do polipeptídeo, preferivelmente nãc diminuindo a dita atividade.

Por exemplo, as substituições de nucleotídeos levam a ιιιηε substituição de aminoácido em resíduo de aminoácidos “não essencial” pode ser feito em uma sequência da molécula do ácido nucleico da invenção oi usado no processo da invenção, por exemplo mostrada na tabela I, colunas 5 e 7.

Um resíduo de aminoácido “ não essencial” é um resíduo qm podem ser alterado a partir da sequência de tipo selvagem de um sem alterar ; atividade do dito polipeptídeo, considerando um resíduo de aminoácidx “essencial” é requerido por uma atividade como mencionado acima, po exemplo levando a um aumento na tolerância e/ou resistência à tensã< ambiental e produção de biomassa como comparado a um tipo selvagem nã< transformado correspondente a célula vegetal, planta ou parte deste em un organismo após um aumento da atividade do polipeptídeo. Outros resíduos d aminoácidos, entretanto, (por exemplo, aqueles que não são conservados ou apenas semi-conservados no domínio tendo a adita atividade) não pode ser essencial para a atividade e deste modo são provavelmente responsáveis pela alteração sem alterar a dita atividade.

Ainda, uma pessoa habilitada na técnica entenderá que o uso do códon entre organismos pode diferenciar. Portanto, podem adaptar-se ao uso do códon em uma molécula de ácido nucleico da presente invenção ao uso do organismo ou o compartimento celular por exemplo do plastídeo ou mitocôndria em que o polinucleotídeo ou polipeptídeo é expressado.

Consequentemente, a invenção diz respeito a molécula de ácidos nucleicos que codifica um polipeptídeo tendo atividade mencionade acima, em um organismos ou partes destes por exemplo pela expressão nc citsol ou em uma organela tal como um plastídeo ou mitocôndria ou ambos preferivelmente nos plastídeos que contém mudanças no resíduo de aminoácidos que não são essenciais para a dita atividade. Tais polipeptídeo; diferem-se na sequência de aminoácido a partir da sequência contida na; sequências mostradas na tabela II, colunas 5 e 7 já retém a dita atividade descrita neste. A molécula de ácido nucleico pode compreender um; sequência de nucleotídeo que codifica um polipeptídeo, em que c polipeptídeo que compreende uma sequência de aminoácido pelo menos cerc; de 50 % idêntico a uma sequência de aminoácido mostrada na tabela II colunas 5 e 7 e é capaz da participação na produção do conteúdo GAB/ aumentado como comparado a um tipo selvagem não transformadi correspondente a célula vegetal, planta ou parte deste após aumento de su atividade, por exemplo sua expressão por exemplo pela expressão no citsol o em uma organela tal como um plastídeo ou mitocôndria ou ambos preferivelmente nos plastídeos. Preferivelmente, a proteína codificada pel molécula de ácido nucleico é pelo menos cerca de 60 % idêntica à sequênci mostrada na tabela II, colunas 5 e 7, mais preferivelmente pelo menos cerc de 70 % idêntica a uma das sequências mostradas na tabela II, colunas 5 e 7, ainda mais preferivelmente pelo menos cerca de 80 %, 90 %, 95 % homólogo da sequência mostrada na tabela II, colunas 5 e 7 e mais preferivelmente pelo menos cerca de 96 %, 97 %, 98 %, ou 99 % idêntica à sequência mostrada na tabela II, colunas 5 e 7.

Para determinar a porcentagem da homologia (= identidade, usado neste permutavelmente) de duas sequências de aminoácidos ou duas moléculas de ácidos nucleicos, as sequências são escritas uma embaixo da outra para uma ótima comparação (por exemplo fendas podem ser inseridas na sequência de uma proteína ou de um ácido nucleico a fim de gerar um ótimo alinhamento com outra proteína ou outro ácido nucleico). O resíduo de aminoácidos ou molécula de ácidos nucleicos nas posições de aminoácidos correspondentes ou posições de nucleotídeos sãc então comparados. Se uma posição em uma sequência é ocupada pelo mesmo resíduo de aminoáeido ou a mesma molécula de ácido nucleico como z posição correspondente em outra sequência, as moléculas são homóloga? neste posição (isto é aminoáeido ou “homologia” de ácido nucleico comc usado no presente contexto correspondente ao aminoáeido ou “identidade” de ácido nucleico. A porcentagem da homologia entre as duas sequências é um< função do número de posições idênticas formadas pelas sequências (isto é °/ homologia = número de posições idênticas /número total de posições x 100) Os termos “homologia” e “identidade” são deste modo considerados comt sinônimos.

Para a determinação da porcentagem da homologi; (^identidade) de dois ou mais aminoácidos ou de duas ou mais sequências di nucleotídeos diversos programas de computador forma desenvolvidos. / homologia de duas ou mais sequências podem ser calculadas com po exemplo o software fasta, que presentemente foi usado na versão fasta 3 (W R. Pearson and D. J. Lipman (1988), Improved Tools for Biological Sequenc Comparison.PNAS 85:2444- 2448; W. R. Pearson (1 990) Rapid and Sensitive Sequence Comparison with FASTP and FASTA, Methods in Enzymology 183:63 - 98; W. R. Pearson and D. J. Lipman (1988) Improved Tools for Biological Sequence Comparison. PNAS 85:2444- 2448; W. R. Pearson (1990); Rapid and Sensitive Sequence Comparison with FASTP and FASTAMethods in Enzymology 183:63 — 98). Outro programa útil para o cálculo das homologias das sequências diferentes é o programa blast padrão, que é incluído no software Biomax pedant (Biomax, Munich, Federal Republic of Germany). Infelizmente, algumas vezes, este leva as resultados subótimos visto que o blast nem sempre inclui as sequências completas do indivíduo e em questão. Contudo como este programa é mais eficiente este pode ser usado pela comparação de um vasto número de sequências. Os seguintes ajustes são tipicamente usados para tais comparações das sequências: -p Program Name [String]; -d Database [String]; default = nr; -i Query File [File In]; default = stdin; -e Expectaíion value (E) [Real]; defaul· = 10.0; -m alignment view options: 0 = pairwise; 1 = query-anchored showinr identities; 2 = query-anchored no identities; 3 = flat query-anchored, shov identities; 4 = flat query-anchored, no identities; 5 = query-anchored nc identities and blunt ends; 6 — flat query-anchored, no identities and blun ends; 7 = XML Blast output; 8 = tabular; 9 tabular with comment line [Integer]; default = 0; -o BLAST report Output File [File Out] Optional default = stdout; -F Filter query sequence (DUST with blastn, SEG wit others) [String]; default = T; -G Co st to open a gap (zero invokes defaul behavior) [Integer]; default = 0; -E Cost to extend a gap (zero invokes defaul behavior) [Integer]; default = 0; -X X dropoff value for gapped alignment (i bits) (zero invokes default behavior); blastn 30, megablast 20, tblastx 0, a others 15 [Integer]; default = 0; -I Show GI's in deflines [T/F]; default = F; -Penalty for a nucleotide mismatch (blastn only) [Integer]; default = -3; ■ Reward for a nucleotide match (blastn only) [Integer]; default = 1; -v Number of database sequences to show onedine descriptions for (V) [Integer]; default = 500; -b Number of database sequence to show alignments for (B) [Integer]; default = 250; -f Threshold for extending hits, default if zero; blastp 11, blastn 0, blastx 12, tblastn 13; tblastx 13, megablast 0 [Integer]; default — 0; -g Perfom gapped alignment (not available with tblastx) [T/F]; default = T; -Q Query genetic code to use [Integer]; default = 1; -D DB Genetic code (for tblast[nx] only) [Integer]; default = 1; -a Number of processors to use [Integer]; default = 1; -O SeqAlign file [File Out] Optional; -J Believe the query delline [T/F]; default = F; -M Matrix [String]; default = BLOSUM62; -W Word size, default if zero (blastn 11, megablast 28, all others 3) [Integer]: default = 0; -z Effective length of the database (use zero for the real size] [Real]; default = 0; -K Number of best hits de a region to keep (off by default, if used a value of 100 is recommended) [Integer]; default — 0; -P 0 foi multiple hit, 1 for single hit [Integer]; default = 0; -Y Effective length of the search space (use zero for the real size) [Real]; default = 0; -S Query strandí to search against database (for blast[nx] e tblastx); 3 is both, 1 is top, 2 i: bottom [Integer]; default = 3; -T Produce HTML output [T/F]; default = F; -Restrict search of database to list of Gfs [String] Optional; ~U Use lower cas< filtering of FASTA sequence [T/F] Optional; default = F; -y X dropoff valia for ungapped extensions in bits (0.0 invokes default behavior); blastn 20 megablast 10, all others 7 [Real]; default = 0.0; -Z X dropoff value for fina gapped alignment in bits (0.0 invokes default behavior); blastn/megablast 50 tblastx 0, all others 25 [Integer]; default = 0; -R PSI-TBLASTN checkpoin file [File In] Optional; -n MegaBlast search [T/F]; default = F; -L Location o: query sequence [String] Optional; -A Multiple Hits window size, default i zero (blastn/megablast 0, all others 40 [Integer]; default = 0; -w Frame shi: penalty (OOF algorithm for blastx) [Integer]; default = 0; -t Length of th largest intron allowed in tblastn for linking HSPs (0 disables linking [Integerj; default = 0.

Os resultados de qualidade alta são atingidos pelo uso do algoritmo de Needleman and Wunsch or Smith and Waterman. Portanto os programas baseados nos ditos algoritmos são preferidos. Vantajosamente as comparações das sequências podem ser feitos com o programa PileUp (J. Mol. Evolution., 25, 351 (1987), Higgins et al., CABIOS 5, 151 (1989)) or preferivelmente com os programas “Gap” e “Needle”, que são ambos fundamentados nos algoritmos de Needleman and Wunsch (J. Mol. Biol. 48; 443 (1970)) e “BestFit”, que é fundamentado no algoritmo de Smith and Waterman (Adv. Appl. Math. 2; 482 (1981)). “Gap” e “BestFit” são partes da embalagem do software GCG (Genetics Computer Group, 575 Science Drive, Madison, Wisconsin, USA 53711 (1991); Altschul et al., (Nucleic Acids Res. 25, 3389 (1997)), “Needle” é parte de The European Molecular Biology Open Software Suite (EMBOSS) (Trends in Genetics 16 (6), 276 (2000)). Portanto preferivelmente os cálculos para determinar as porcetagens da homologia da sequência são feitas com os programas “Gap” ou “Needle” na faixa total das sequências. Os seguintes ajustes padrão para a comparação das sequências de ácidos nucleicos forma usados por “Needle”: matriz: EDNAFULL, Gap penalty: 10.0, Extend penalty: 0.5. Os seguintes ajustes padrão para a comparação da sequência de ácidos nucleicos foram usados por “Gap”: peso de fenda: 50, peso de fenda: 3, ponto médio: 10.000, erro médio: 0.000.

Por exemplo uma sequência, que tem 80 % de homologia com a sequência SEQ ID N°: 42 no nível do ácido nucleico é entendido comc significando uma sequência que, na comparação com a sequência SEQ ID N° 42 pelo programa acima “Needle” com a série de parâmetro acima, tem 80 °A de identidade.

Homologia entre dois polipeptídeos é entendido comc significado a identidade da sequência de aminoácido em cada caso dc comprimento de sequência total que é calculado pela expressão com a ajudí do programa acima “Needle” usando Matriz: EBLOSUM62, Gap _penalty: 8.0, Extend_penalty: 2.0.

Por exemplo uma sequência que tem 80 % de homología com a sequência SEQ 1D N°: 43 no nível de proteína é entendido como significando uma sequência que, na comparação com a sequência SEQ ID N°: 43 pelo programa acima “Needle” com a série do parâmetro acima, tem 80 % de identidade.

Os equivalentes funcionais derivados de um do polipeptídeos como mostrado na tabela II, colunas 5 e 7 de acordo com a invenção pela substituição, inserção ou anulação tem pelo menos 30 %, 35 %, 40 %, 45 % ou 50 %, preferivelmente pelo menos 55 %, 60 %, 65 % ou 70 % pela preferência pelo menos 80 %, especialmente preferivelmente pelo menos 85 % ou 90 %, 91 %, 92 %, 93 % ou 94 %, mais especialmente preferivelmente pelo menos 95 %, 97 %, 98 % ou 99 % de homologia com um dos polipeptídeos como mostrado na tabela II, colunas 5 e 7 de acordo com a invenção e são separados essencialmente pelas mesmas propriedades como c polipeptídeo como mostrado na tabela II, colunas 5 e 7.

Os equivalentes funcionais derivados da sequência de ácidc nucleico como mostrado na tabela I, colunas 5 e 7 de acordo com a invençãc pela substituição, inserção ou anulação tem pelo menos 30 %, 35 %, 40 %, 4i % ou 50 %, preferivelmente pelo menos 55 %, 60 %, 65 % ou 70 % peb preferência pelo menos 80 %, especialmente preferivelmente pelo menos 8: % ou 90 %, 91 %, 92 %, 93 % ou 94 %, mais especialmente preferivelment( pelo menos 95 %, 97 %, 98 % ou 99 % de homologia com um do: polipeptídeos como mostrado na tabela II, colunas 5 e 7 de acordo com ; invenção e codifica os polipeptídeos tendo essencialmente as mesma propriedades como o polipeptídeo como mostrado na tabela II, colunas 5 e 7. “Essencialmente as mesmas propriedades” de um equivalent funcional é acima todo entendido como significado que o equivalent funcional tem a atividade mencionada acima, por exemplo pela expressão no citsol ou em uma organela tal como um plastídeo ou mitocôndria ou ambos, preferivelmente nos plastídeos enquanto o aumento da proteína, atividade ou função do dito equivalente funcional em um organismo, por exemplo a microorgansimo, uma planta ou tecido vegetal ou animal, céluls vegetais ou animais ou parte das mesmas. A molécula de ácido nucleico que codifica uma sequência homóloga a uma sequência de proteína da tabela II, colunas 5 e 7 pode ser criada pela introdução de um ou mais substituições, adições ou anulações de nucleotídeos em uma sequência de nucleotídeo da molécula do ácido nucleico da presente invenção, em particular da tabela I, colunas 5 e 7 tal que uma ou mais substituições, adições ou anulações de aminoácidos são introduzidos na proteína codificada. As mutações podem ser introduzidas na sequência codificadora da tabela I, colunas 5 e 7 pelas técnicas padrão, tal comc mutagênese direcionada ao local e mutagênese mediada por PCR.

Preferivelmente, substituições de aminoácidos conservativos são feitos em um ou mais resíduo de aminoácidos não residuais preditos. Uma “substituição de aminoácido conservativo” é um em que o resíduo dc aminoácido é substituído com um resíduo de aminoácido tendo uma cadeií secundária similar. As famílias dos resíduos de aminoácidos tendo cadeia: secundárias similares foram definido na técnica. Estas famílias incluen aminoácidos com cadeias secundárias básicas (por exemplo, lisina, arginina histidina), cadeias secundárias ácidas (por exemplo, ácido aspártico, ácid< glutâmico), cadeias secundárias polares não carregadas (por exemplo, glicins asparagina, glutamina, serina, treonina, tirosina, cisteína), cadeias secundária não polares (por exemplo, alanina, valina, leucina, isoleucina, prolira fenilalanina, metionina, triptofano), cadeias secundárias ramificadas por bet (por exemplo, treonina, valina, isoleucina) e cadeias secundárias aromática (por exemplo, tirosina, fenilalanina, triptofano, histidina).

Deste modo, um resíduo de aminoácido não essencial predito em um polipeptídeo da invenção ou um polipeptídeo usado no processo da invenção é preferivelmente substituído com outro resíduo de aminoácido a partir da mesma família. Altemativamente, em outra forma de realização, as mutações podem ser introduzidas aleatórias todas ou partes de uma sequência codifícadora de uma molécula de ácido nucleico da invenção ou usado no processo da invenção, tal como pela mutagênese de saturação e os mutantes resultantes podem ser avaliados pela atividade descrita neste para identificar os mutantes que retém ou ainda tem atividade mencionada aumentada acima, por exemplo que confere um conteúdo GABA aumentado como comparado a um tipo selvagem não transformado correspondente . A seguinte mutagênese de uma das sequências mostradas neste, a proteína codificada pode ser recombinantemente expressada e a atividade da proteína pode ser determinada usando, por exemplo, ensaios descritos neste (ver Exemplos).

Uma homologia alta da molécula do ácido nucleico usada no processo de acordo com a invenção foi observada pelos seguintes entradas dos bancos de dados pela busca Gap.

Os homólogos das sequências de ácido nucleico usada, com a sequência mostrada na tabela I, colunas 5 e 7, compreendem também variantes alélicas com pelo menos aproximadamente 30 %, 35 %, 40 % ou 45 % de homologia, pela preferência pelo menos aproximadamente 50 %, 60 °A ou 70 %, mais preferivelmente pelo menos aproximadamente 90 %, 91 %, 9Ί %, 93 %, 94 % ou 95 % e ainda mais preferivelmente pelo meno; aproximadamente 96 %, 97 %, 98 %, 99 % ou mais homologia com uma da; sequências de nucleotídeos mostradas ou das sequências de ácidos nucleico: derivadas mencionadas acima ou seus homólogos, derivados ou análogos oi partes destes. As variantes alélicas abrangem em particular as variante: funcionais que podem ser obtidas pela anulação, inserção ou substituição d< nucleotídeos a partir das sequências mostradas, preferivelmente a partir da tabela I, colunas 5 e 7, ou a partir das sequências de ácidos nucleicos derivados, a intenção sendo, entretanto, que a atividade de enzima ou uma atividade biológica das proteínas resultantes sintetizadas vantajosamente retidas ou aumentadas.

Em outra forma de realização a molécula de ácido nucleico da invenção ou usado no processo da invenção que compreende as sequências mostradas na tabela I coluna 5 ou 7 e além disso as sequências não traduzidas de 5’ e/ou 3’ naturais ou partes destes.

Em uma forma de realização da presente invenção, a molécula de ácido nucleico da invenção ou usado no processo da invenção que compreende as sequências mostradas em qualquer uma da tabela T, colunas 5 e 7. É preferido que a molécula de ácido nucleico que compreende as little as possible outros nucleotídeos não mostrados em qualquer uma da tabela I, colunas 5 e 7. Em uma forma de realização, a molécula de ácido nucleico que compreende menos do que 500, 400, 300, 200, 100, 90, 80, 70, 60, 50 ou 40 nucleotídeos adicionais. Ainda em uma forma de realização, a molécula de ácido nucleico que compreende menos do que 30, 20 ou 10 nucleotídec adicionais. Em uma forma de realização, o uso da molécula de ácido nucleicc no processo da invenção é idêntica a uma sequências mostradas na tabela I colunas 5 e 7.

Também preferido é que uma molécula de ácido nucleic( usada no processo da invenção codifica um polipeptídeo compreende um: sequência mostrada na tabela II, colunas 5 e 7. Em uma forma de realização,; molécula de ácido nucleico codifica menos do que 150, 130, 100, 80, 60, 5C 40 ou 30 aminoácidos adicionais. Ainda em uma forma de realização, < polipeptídeo codificado que compreende menos do que 20, 15, 10, 9, 8, 7, ou 5 aminoácidos adicionais. Em uma forma de realização usada no process inventivo, o polipeptídeo codificado é idêntico a uma sequência mostrada n tabela II, colunas 5 c 7.

Em uma forma de realização, a molécula de ácido nucleico da invenção ou usada no processo codifica um polipeptídeo compreende uma sequência mostrada na tabela II, colunas 5 e 7 que compreende menos do que 100 nucleotídeo adicionais. Ainda em uma forma de realização, a dita molécula de ácido nucleico que compreende menos do que 30 nucleotídeos adicionais. Em uma forma de realização, a molécula de ácido nucleico usado no processo é idêntico a uma sequência codificadora das sequências mostradas na tabela I, colunas 5 e 7.

Polipeptídeos (= proteínas), que ainda tem a atividade essencial biológica ou enzimática do polipeptídeo da presente invenção que confere uma produção do conteúdo GABA aumentado como comparado a um tipo selvagem não transformado correspondente a célula vegetal, planta or parte deste isto é cuja atividade não é essencialmente não reduzido, sãc polipeptídeos com pelo menos 10 % ou 20 %, pela preferência 30 % ou 40 % especialmente preferivelmente 50 % ou 60 %, mais especialmentt preferivelmente 80 % ou 90 ou mais da atividade biológica de tipo selvagen ou atividade de enzima, vantajosamente, a atividade é essencialmente nãc reduzido em comparação com a atividade de um polipeptídeo mostrado n; tabela II, colunas 5 e 7 expressado sob condições idênticas.

Os homólogos da tabela I, colunas 5 e 7 ou das sequência derivadas da tabela II, colunas 5 e 7 também significa as sequência truncadas, cDNA, DNA ou RAIA filamentado simples da sequência de DNf codificada e não codificada. Os homólogos das ditas sequências também sã entendidos significar os derivados, que compreendem as regiões nã codificadoras tais como, por exemplo, UTRs, terminadores, intensificadore ou variantes promotores. Os promotores a montante das sequências d nucleotídeos estados podem ser modificados por uma ou mais substituiçõe: inserções e/ou anulações de nucleotídeos sem, entretanto, interferir com funcionalidade ou atividade dos promotores, a estrutura de leitura de abertura (= ORF) ou com a região reguladora 3’ tal como terminadores ou outras regiões reguladoras 3’, que são far away a partir do ORF. É além disso possível que a atividade dos promotores é aumentada pela modificação de sua sequência, ou que estes são substituídos completamente por mais promotores ativos, ainda promotores a partir de organismos heterólogos. Os promotores apropriados são conhecidos em uma pessoa habilitada na técnica e são mencionados neste abaixo.

Além disso, a uma molécula de ácidos nucleicos que codifica as proteínas relacionadas ao GABA descritas acima, outro aspecto da invenção pertence aos reguladores negativos de uma atividade da molécula de ácidos nucleicos selecionada do grupo de acordo com tabela I, coluna 5 e/ou 7, preferivelmente coluna 7. Os polinucleotídeos anti-sentido destes sãc considerados inibir a atividade de subregulação daqueles reguladores negativos especificamente ligam-se ao polinucleotídeo alvo e interferem cotr a transcrição, união, transporte, tradução, e/ou estabilidade do polinucleotídec alvo. Os métodos são descritos na técnica anterior para o alvejamento dc polinucleotídeo anti-sentido ao DNA cromossomal, a um transcrito de RN/ primário, ou a um inRNA processado. Preferivelmente, as regiões alvo: incluem locais de união, códons de iniciação de tradução, códons d< terminação de tradução e outras sequências dentro da estrutura de leitura d' abertura. O termo “anti-sentido,” para os propósitos da invenção, refere se a uma ácido nucleico que compreende um polinucleotídeo que suficientemente complementar a todas ou uma porção de um gene, transcrit primário, ou mRNA processado, de modo como para interferir com expressão do gene endógeno. Os polinucleotídeos “complementares” sã aqueles que são capazes de pares de base de acordo com o pape complementar Watson-Crick padrão. Especificamente, pares de base d purinas com purimidinas para formar uma combinação de pares de guanina com citosina (G:C) e pares de adenina com timina (A:T) No caso de DNA, ou pares de adenina com uracila (A:U) no caso de RNA. É entendido que dois polinucleotídeos podem hibridizar a cada outro ainda se estes não completamente complementam a cada outro, contanto que tem pelo menos uma região que é substancialmente complementar ao outro. O termo “ácido nucleico anti-sentido” inclui o RNA filamentado simples bem como cassete de expressão de DNA filamentado duplo que pode ser transcrito para produzir um RNA anti-sentido. Os ácidos nucleicos anti-sentido “ativos” são moléculas de RNA anti-sentido que são capazes de hibridizar seletivamente com um regulador negativo da atividade de uma molécula de ácidos nucleicos que codifica um polipeptídeo tendo pelo menos 80 % da identidade dt sequência com o polipeptídeo selecionado a partir do grupo de acordo cotr tabela II, coluna 5 e/ou 7, preferivelmente coluna 7. O ácido nucleico anti-sentido pode ser complementar a un filamento regulador negativo inteiro, ou apenas uma porção destes. Em umí forma de realização, a molécula de ácido nucleico anti-sentido é anti-sentid( em uma “região não codificadora” do filamento codificado da sequência d< nucleotídeo que codifica uma proteínas relacionada ao GABA. O term< “região não codificadora” refere-se as sequências da extremidade 5’ e 3’ qu< flanqueiam a região codificadora que não são traduzidas nos aminoácido (isto é, também referido como as regiões não traduzidas de extremidade d 5’e 3’). A molécula de ácido nucleico anti-sentido pode ser complementa apenas a uma porção da região não codificadora de proteínas relacionadas a> GABA mRNA. Por exemplo, o oligonucleotídeo anti-sentido pode se complementar à região circundante do local do início tradução das proteína relacionadas ao GABA mRNA. Um oligonucleotídeo anti-sentido pode se: por exemplo, cerca de 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 ou 50 nucleotídeos er comprimento. Tipicamente, as moléculas anti-sentido da presente invençã compreendem um RNA tendo 60 a 100 % da identidade de sequência com pelo menos 14 nucleotídeos consecutivos de uma região não codifícadora de um dos ácidos nucleicos da tabela I. Preferivelmente, a identidade de sequência será pelo menos 70 %, mais preferivelmente pelo menos 75 %, 80 %, 85 %, 90 %, 95 %, 98 % e mais preferivelmente 99 %.

Um ácido nucleico anti-sentido da invenção pode ser construído usando síntese química e reações de ligação enzimáticas usando procedimentos conhecidos na técnica. Por exemplo, um ácido nucleico anti-sentido (por exemplo, um oligonucleotídeo anti-sentido) pode ser quimicamente sintetizado usando nucleotídeos de ocorrência natural ou nucleotídeos diferentemente modificados projetados para aumentar a estabilidade biológica das moléculas ou aumentar a estabilidade física do duplexo formado entre os ácidos nucleicos sentidos e anti-sentidos, por exemplo, derivados de fosforotioato e nucleotídeos substituídos por acridina podem ser usados. Exemplos de nucleotídeos modificados que podem ser usados para gerar o ácido nucleico anti-sentido incluem 5-fluorouracila, 5-bromouracila, 5-clorouracila, 5-iodouracila, hipoxantina, xantina, 4-acetilcitosina, 5-(carboxiidroxilmetil) uracila, 5~carboximetilaminometil-2-tiouridina, 5-carboximetilaminometiluracila, diidrouracila, beta-D-galactosilqueosina, inosina, N6-isopenteniladenina, 1 -metilguanina, 1-metilinosina, 2,2-dimetilguanina, 2-metiladenina, 2-metilguanina, 3-metilcitosina, 5-metilcitosina, N6-adenina, 7-metilguanina, 5· metilaminometiluracila, 5-metoxiaminometil-2-tiouracila, beta-D manosilqueosina, 5 ’-metoxicarboximetiluracila, 5-metoxiuracila, 2-metiltio N6-isopenteniladenina, ácido uracil-5-oxiacético (v), wibutoxosina pseudouracila, queosina, 2-tiocitosina, 5-metil-2-tiouracila, 2-tiouracila, 4 tiouracila, 5-metiluracila, metiléster do ácido uracil-5- oxiacético, ácid< uracil-5-oxiacético (v), 5-metil-2-tiouracila, 3-(3-amino-3-N-2-carboxipropil uracila, (acp3)w e 2,6-diaminopurina. Altemativamente, o ácido nucleic< anti-sentido pode ser biologicamente produzido usando um vetor de expressão em que um ácido nucleico foi subclonado em uma orientação anti-sentido (isto é, RNA transcrito a partir do ácido nucleico inserido será de uma orientação anti-sentido a um ácido nucleico alvo de interesse, ainda descrito na seguinte subseção). Já em outra forma de realização, a molécula de ácido nucleico anti-sentido da invenção é uma molécula de ácido nucleico alfa-anomérica. Uma molécula de ácido nucleico alfa-anomérica forma híbridos filamentados duplos específicos com RNA complementar no qual, contrário as b-unidades usuais, os filamentos realizam paralelos a cada outro (Gaultier et ah, 1987. Nucleic Acids. Res. 15:6625-6641). A molécula de ácido nucleico anti-sentido também pode compreender um 2,-o-metilribonucleotídeo (inoue e1 aL, 1987, Nucleic Acids Res. 15:6131-6148) ou um análogo de RNA-DNA quimérico (Inoue et al., 1987, FEBS Lett. 215:327-330).

As moléculas de ácidos nucleicos anti-sentido da invenção sãc tipicamente administradas a uma célula ou in situ gerado tal que esta: híbridizam com ou ligam-se ao mRNA celular e/ou. DNA genômico. P hibridização podem ser pela complementaridade do nucleotídeo convenciona para formar um duplexo estável, ou, por exemplo, no caso de uma molécul; de ácido nucleico anti-sentido que liga-se aos duplexos de DNA, através d< interações específicas no sulco principal da hélice dupla. A molécula anti sentido pode ser modificada tal que esta especificamente liga-se a um recepto ou um antígeno expressado em uma superfície celular selecionada, po exemplo, pela ligação da molécula de ácido nucleico anti-sentido a ur peptídeo ou um anticorpo que liga-se a um receptor da superfície celular o antígeno. A molécula de ácido nucleico anti-sentido também pode ser liberad pelas células usando os vetores descritos neste. Para atingir as concentraçõe intracelulares suficientes das moléculas anti-sentido, as construções dc vetores em que a molécula de ácido nucleico anti-sentido é colocado sob controle de um promotor eucariótico, viral ou procariótica forte, (incluindo planta) são preferidos.

Como uma alternativa aos polinucleotídeos anti-sentido, ribozimas, polinucleotídeos sentidos, ou RNA filamentado duplo (dsRNA) podem ser usados para reduzir a expressão de um polipeptídeo que aumenta GABA da invenção. Para “ribozima” é significado uma enzima com base em RNA catalítico com atividade de ribonuclease que é capable de clivar um ácido nucleico filamentado simples, tal como um mRNA, no qual este tem uma região complementar. As ribozimas (por exemplo, ribozimas cabeça do martelo descritas em Haselhoff and Gerlach, 1988, Nature 334:585-591) pode ser usada para clivar cataliticamente o polipeptídeo que aumenta GABA da invenção dos transcritos de mRNA portanto inibindo a tradução do polipeptídeo que aumenta GABA da invenção mRNA. Uma ribozima tendo especificidade para um ácido nucleico que codifica um polipeptídeo que aumenta GABA da invenção pode ser projetado com base na sequência de nucleotídeo de um polipeptídeo que aumenta GABA da invenção cDNA. como divulgado neste ou na base de uma sequência heteróloga a ser isolada de acordo com os métodos ensinados neste invenção. Por exemplo, um derivado de um RNA Tetrahymena L-19 IVS pode ser construído no qual ε sequência de nucleotídeo do local ativo é complementar à sequência de nucleotídeo a ser clivada em uma proteína relacionada ao GABA ~mRN4 codificado. Ver, por exemplo, Patente U.S. N°. 4.987.071 e 5.116.742 to Ceei et al. Altemativamente, o polipeptídeo que aumenta GABA da invenção mRNA pode ser usado para selecionar um RNA catalítico tendo a atividad< de ribonuclease específica de um grupo de moléculas de RNA. Ver, po exemplo, Bartel, D. and Szostak, J.W., 1993, Science 261:1411-1418. En formas de realização preferidas, a ribozima conterá uma porção tendo pel· menos 7, 8, 9, 10, 12, 14, 16, 18 ou 20 nucleotídeos e mais preferivelmente ' ou 8 nucleotídeos, que tem 100 % de complementaridade a uma porção d RNA alvo. Os métodos para a fabricação de ribozimas são conhecidos aquela pessoa habilitada na técnica. Ver, por exemplo, Patente U.S. N°s. 6.025.167; 5.773.260; e 5.496.698. O termo “dsRNA,” como usado neste, refere-se aos híbridos de RNA que compreendem dois filamentos de RNA. Os dsRNAs podem ser lineares ou circulares na estrutura. Em uma fomia de realização preferida, dsRNA é específico para um polinucleotídeo que codifica o polipeptídeo de acordo com tabela II ou um polipeptídeo tendo pelo menos 70 % da identidade de sequência com um polipeptídeo de acordo com tabela II. Os RNAs de hibridização podem ser substancialmente ou completamente complementares. Para “substancialmente complementar,” é significado que quando dois RNAs de hibridização são alinhados de maneira ideal usando o programa BLAST como descrito acima, as porções de hibridização são pele menos 95 % complementares. Preferivelmente, o dsRNA será pelo menos 10C pares de bases em comprimento. Tipicamente, os RNAs de hibridização serãc de comprimento idênticos na projeção de extremidades 5’ ou 3’ e sem fendas Entretanto, dsRNAs tendo projeção de extremidades 5’ ou 3’ de até 10C nucleotídeos podem ser usados nos métodos da invenção. O dsRN A pode compreender ríbonucleotídeos ou análogos ck ribonucleotídeos, tal como resíduos de 2’-0-metil ribosila, ou combinaçõe: destes. Ver, por exemplo, Patente U.S. N°s. 4.130.641 e 4.024.222. Um ácidt poliriboinosínico de dsRNA: ácido poliribocitidílico é descrito na Patenf U.S. 4.283.393. Os métodos para a fabricação e uso de dsRNA sã< conhecidos na técnica. Um método que compreende a transcrição simultânei de dois filamentos de DNA complementares, in vivo, ou em uma mistura d' reação in vitro simples. Ver, por exemplo, Patente U.S. N°. 5.795.715. En uma forma de realização, dsRNA pode ser introduzido em uma planta oi célula vegetal diretamente pelos procedimentos de transformação padrãc Altemativamente, dsRNA pode ser expressado em uma célula vegetal pel transcrição de dois RNAs complementares.

Outros métodos para a inibição da expressão do gene endógeno, tal como formação de hélice tripla (Moser et al., 1987, Science 238:645-650 and Cooney et al., 1988, Science 241:456-459) e co-supressão (Napoli et al., 1990, The plant cell 2:279-289) são conhecidos na técnica. Os cDNAs de comprimento parcial ou total foram usados para a co-supressão dos genes vegetais endógenos. Ver, por exemplo. Patente U.S. N°s. 4.801.340, 5.034.323, 5.231.020 e 5.283.184; Vau der Kroll et al., 1990, The plant cell 2:291-299; Smith et al., 1990, Mol. Gen. Genetics 224:477-481 and Napoli et al., 1990, The plant cell 2:279-289.

Para a supressão sentido, é acredita que a introdução de um polinucleotídeo sentido bloqueia, a trasncrição do gene alvo correspondente. O polinucleotídeo sentido terá pelo menos 65 % da identidade de sequência com o gene vegetal alvo ou RNA. Preferivelmente, o percentual da identidade é pelo menos 80 %, 90 %, 95 % ou mais. O polinucleotídeo sentido introduzido não necessita ser comprimento total relativo ao gene ou transcrito alvo. Preferivelmente, o polinucleotídeo sentido terá pelo menos 65 % da identidade de sequência com pelo menos 100 nucleotídeos consecutivos de um dos ácidos nucleicos como descrito na tabela I. As regiões da identidade podem compreender íntrons e/ou éxons e regiões não traduzidas. C polinucleotídeo sentido introduzido pode estar presente na célula vegeta aleatória, ou pode ser estavelmente integrado em um cromossomo vegetal oi replicon extracromossomal.

Ainda, o objetivo da invenção é um vetor de expressão qu< compreende uma molécula de ácido nucíeico que compreende uma molécul; de ácido nucíeico selecionada do grupo que consiste de: a) a molécula de ácido nucíeico que codifica o polipeptíde< mostrado na coluna 5 ou 7 da tabela II; b) a molécula de ácido nucíeico mostrada na coluna 5 ou 7 d tabela I; c) a molécula de ácido nucleico, que, como um resultado da degeneração do código genético, pode ser derivada de uma sequência de polipeptídeo descrito na coluna 5 ou 7 da tabela II e confere um conteúdo GABA aumentado como comparado a um tipo selvagem não transformado correspondente; d) a molécula de ácido nucleico tendo pelo menos 30 % de identidade com uma sequência da molécula de ácido nucleico de uir polinucleotídeo que compreende a molécula de ácido nucleico mostrado ηε coluna 5 ou 7 da tabela I e confere um conteúdo GABA aumentado comc comparado a um tipo selvagem não transformado correspondente; e) a molécula de ácido nucleico que codifica um polipeptídec tendo pelo menos 30 % de identidade com a sequência de aminoácido dc polipeptídeo codificado pela molécula de ácido nucleico de (a) a (c) e tendo ε atividade representada pela molécula de ácido nucleico que compreende un polinucleotídeo como descrito na coluna 5 da tabela I e confere um conteúdc GABA aumentado como comparado a um tipo selvagem não transformado correspondente a célula vegetal, uma planta ou uma parte deste; í) molécula de ácido nucleico que hibridiza com uma molécul; de ácido nucleico de (a) a (c) sob condições de hibridização estrigentes < confere um conteúdo GABA aumentado como comparado a um tipo selvagen não transformado correspondente; g) a molécula de ácido nucleico que codifica um polipeptíde< que pode ser isolado com a ajuda de anticorpos monoclonais ou policlonai feitos contra um polipeptídeo codificado por uma das moléculas do ácid< nucleico de (a) a (e) e tendo a atividade representada pela molécula de ácidi nucleico que compreende um polinucleotídeo como descrito na coluna 5 d tabela I; h) a molécula de ácido nucleico que codifica um polipeptíde compreende a sequência consenso ou um ou mais motivos de polipeptídeos como mostrado na coluna 7 da tabela IV e preferivelmente tendo a atividade representada pela molécula de ácido nucleico que compreende um polinucleotídeo como descrito na coluna 5 da tabela II ou IV; h) a molécula de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo tendo a atividade representada pela proteína como descrito na coluna 5 da tabela II e confere um conteúdo GABA aumentado como comparado a um tipo selvagem não transformado correspondente; i) molécula de ácido nucleico que compreende um polinucleotídeo, que é obtido pela amplificação de uma biblioteca de cDNA ou uma biblioteca genômica usando os iniciadores na coluna 7 da tabela III e preferivelmente tendo a atividade representada pela proteína que compreende um polipeptídeo como descrito na coluna 5 da tabela II ou IV; e j) a molécula de ácido nucleico que é obtido pela avaliação de uma biblioteca de ácido nucleico adequado sob condições de hibridizaçãt estrigentes com uma sonda que compreende uma sequência complementar df uma molécula de ácido nucleico de (a) ou (b) ou com um fragmento deste tendo pelo menos 15 nt, preferivelmente 20 nt, 30 nt, 50 nt, 100 nt, 200 nt oi 500 nt de uma molécula de ácido nucleico complementar a uma sequência d; molécula de ácido nucleico caracterizada em (a) a (e) e que codifica un polipeptídeo tendo a atividade representada pela proteína que compreende un polipeptídeo como descrito na coluna 5 da tabela II; A invenção ainda fornece um vetor de expressão recombinant isolado que compreende uma proteína relacionada à tensão que codifica ácid nucleico como descrito acima, em que a expressão do vetor ou proteín relacionada à tensão que codifica ácido nucleico, respectivamente nas célula hospedeiras resultam no conteúdo GABA aumentado como comparado a tipo selvagem não transformado correspondente da célula hospedeira. Com usado neste, o termo “vetor” refere-se a uma molécula de ácido nucleic capaz de transportar outro ácido nucleico no qual este foi ligado. Um tipo de vetor é um “plasmídeo”, que refere-se a um arco de DNA filamentado duplo circular em que os segmentos de DNA adicionais podem ser ligados. Outro tipo de vetor é um vetor viral, em que segmentos de DNA adicionais podem ser ligados no genoma viral. Os tipos adicionais de vetores podem ser linearizados pela sequência de ácidos nucleicos, tal como transposons, que são partes de DNA que podem copiar e inserir por si só. Existem 2 tipos de transposons observados: transposons simples, conhecidos como sequências de inserção e transposons compostos, que podem ter diversos genes bem como os genes que são requeridos para a transposição.

Certos vetores são capazes da replicação autônoma nas células hospedeiras em que estas são introduzidas (por exemplo, vetores bacterianos tendo uma origem bacteriana da replicação e vetores mamíferos epissomais). Outros vetores (por exemplo, vetores mamíferos não epissomais) são integrados no genoma das células hospedeiras na introdução das células hospedeiras e portanto são replicados junto com o genoma hospedeiro. Além disso, certos vetores são capazes de direcionar a expressão dos genes no qual estes são operacionalmente ligados. Tais vetores são referidos neste comc “vetores de expressão”. Em geral, vetores de expressão de utilidade nas técnicas de DNA recombinantes são frequentemente na forma de plasmídeos Na presente especificação, “plasmídeo” e “vetor” podem ser usados permutavelmente como o plasmídeo e a fomia mais comumente usada de vetor. Entretanto, a invenção é pretendida incluir tais outras formas de vetores de expressão, tal como vetores virais (por exemplo, retrovírus defeituoso de replicação, adenovírus e vírus associado ao adeno), que servem as funçõe: equivalentes.

Um cassete de expressão vegetal preferivelmente contén sequências reguladoras capazes de conduzir a expressão do gene nas célula: vegetais e operacionalmente ligado de modo que cada sequência possí executar sua função, por exemplo, terminação da transcrição pelos sinais de poliadenilação. Os sinais de poliadenilação preferidos são aqueles que originam-se dc Agrobacterium tumefaciens T-DNA tal como o gene 3 conhecido como sintase octopina de PTÍACH5 de plasmídeo Ti (Gielen et ah, 1984 EMBO J. 3:835) ou equivalentes funcionais destes mas também todos outros terminadores funcionalmente ativos em plantas são adequados.

Como expressão do gene vegetal é frequentemente não mais limitado nos níveis transcripcionais, um cassete de expressão vegetal preferivelmente contém outras sequências operacionalmente ligadas semelhantes aos intensificadores de tradução tal como a sequência overdrive contendo a sequência lider não traduzida 5’ a partir do vírus de mosáico do tabaco intensificando a proteína por razão de RNA (Gallie et ah, 1987 Nucl. Acids Research 15:8693-8711). A expressão do gene vegetal será operacionalmente ligado a um promotor apropriado que confere a expressão do gene em tempo, maneira específica por célula ou tecido. Preferidos são os promotores que conduzem a expressão constitutiva (Benfey et ah, 1989 EMBO J. 8:2195-2202) semelhantes aquela derivada do vírus da planta semelhante a 35S CaMV (Franck et al,, 1980 Cell 21:285-294), o 19S CaMV (ver também Patente U.S. N°. 5352605 e Pedido PCX N°. WO 8402913) ou promotores vegetais semelhantes aqueles da subunidade Rubisco small descrita na Patente U.S. N°. 4.962.028.

As sequências reguladoras vantajosas adicionais são, por exemplo, incluídas nos promotores vegetais tal como CaMV/35S [Franck et al., Cell 21 (1980) 285 - 294], PRP1 [Ward et al., Plant. Mol. Biol. 22 (1993)], SSU, OCS, lib4, usp, STLS1, B33, LEB4, nos ou na ubiquitina. napina ou promotor de faseolina. Também vantajoso nesta conexão são os promotores indutíveis tal como os promotores descritos em EP-A-0 388 186 (benzil sulfonamida indutível), Plant J. 2, 1992: 397 - 404 (Gatz et ah, Tetraciclina indutível), EP-A-0 335 528 (ácido abscísico indutível) ou WO 93/21334 (etanol ou cicloexenol indutível). Os promotores vegetais úteis adicionais são os promotores FBPase cytosólicos ou promotor ST-LSI da batata (Stockhaus et al., EMBO J. 8, 1989, 2445), o promotor fosforibosil firofosfato amido transferase de Glicina max {gene bank accession N°. U87999) ou o promotor específico por noden descrito em EP-A-0 249 676. Os promotores vantajosos particularmente adicionais são promotores específicos por semente que podem ser usados pelas monocotiledônias ou dicotiledônias e são descritos em U.S. 5.608.152 (promotor napin de semente de colza), WO 98/45461 (promotor faseolin de Arobidopsis), U.S. 5.504.200 (promotor faseolin de Phaseolus vulgaris), WO 91/13980 (promotor Bce4 de Brassica) e Baeumlein et al., Plant J., 2, 2, 1992: 233-239 (promotor LEB4 de leguminosa). Tais promotores são úteis em dicotiledônias. Os seguintes promotores são úteis por exemplo em promotor de monocotiledônias Ipt-2- ou lpt-1- a partir da cevada (WO 95/15389 e WO 95/23230) ou promotoi hordeína a partir da cevada. Outros promotores úteis são descritos em WC 99/16890. É possível a princípio usar todos os promotores naturais con suas sequências reguladoras como aqueles mencionados acima para o nove processo. Também é possível e vantajoso além disso usar os promotore: sintéticos. A construção do gene também podem compreender os gene: adicionais que serão inseridos nos organismos e que são por exempE envolvidos na resistência à tensão e aumento da produção de biomassa. í possível e vantajoso inserir e expressar nos genes reguladores de organismo; hospedeiros tal como genes para induzidores, repressores ou enzimas qm intervem pela atividade enzimática na regulação, ou um ou mais ou todos o genes de um caminho bionsintético. Estes genes podem ser heterólogos oi homólogos em origem. Os genes inseridos podem ter seu promotor ou senã< será sob o controle do mesmo promotor como as sequências do ácido rmcleico da tabela I ou seus homólogos. A construção do gene vantajosamente que compreende, para a expressão de outros genes presentes, adicionalmente as sequências reguladoras do terminal 3' e/ou 5' para intensificar a expressão, que são selecionados para a ótima expressão dependendo do organismo hospedeiro selecionado e gene ou genes.

Estas sequências reguladoras são pretendidas fabricar a expressão do gene específica e expressão de proteína possível como mencionado acima. Este pode significar, dependendo do organismo hospedeiro, por exemplo que o gene é expressado ou super expressado apenas após a indução, ou que é imediatamente expressado e/ou super expressado.

As sequências reguladoras ou fatores podem além disse preferivelmente tem um efeito benéfico 11a expressão dos genes introduzidos e deste modo aumentar. É possível nesta maneira para os elementos reguladores serem vantajosamente intensificados no nível de transcrição pelo uso do? sinais de transcrição forte tal como promotores e/ou intensi.ficadores Entretanto, além disso, também é possível intensificar a tradução, poi exemplo, melhorar a estabilidade do rnRNA.

Outras sequências preferidas para uso no cassete de espressãc do gene vegetal são sequências de alvejamento necessários para direcionar ( produto do gene em seu compartimento celular apropriado (para revisão ve Kermode, 1996 Crit. Rev. Plant Sei. 15(4):285-423 e referências citada; neste) tal como o vacúolo, o núcleo, todos os tipos de plastídeos semelhante aos amiloplastos, cloroplastos, cromoplastos, o espaço extracelulai mitocôndria, o retículo endoplásmico, corpos oleosos, peroxissomas e outro compartimentos das células vegetais. A expressão do gene vegetal também pode ser facilitado po intermédio de um promotor indutível (para revisão ver Gatz, 1997 Annu. Re\ PJant Physiol. Plant Moí. Biol. 48:89-108). Promotores quimicamente indutíveis são especialmente adequados se a expressão do gene é desejado ocorrer em uma maneira específica por tempo.

Tabela VI lista diversos exemplos dos promotores que podem ser usados para regular a transcrição de uma proteína relacionada à tensão das sequências codificadas por ácido nucleico.

Tab. VI: Exemplos dos promotores indutíveis por tensão e específicos por tecido em plantas Outros promotores, por exemplo Super promotor (Ni et al Plant Journal 7, 1995: 661-676), promotor de Ubiquitina (Callis et al., J. Biol Chem., 1990, 265: 12486-12493; U.S. 5.510.474; U.S. 6.020.190; Kawallecl et al., Plant. Molecular Biology, 1993, 21: 673-684) ou promotor 34S (número de acessão GenBank M59930 e XI6673) foram similares úteis para a presente invenção e são conhecidos a uma pessoa habilitada na técnica.

Os promotores preferidos por estágio de desenvolvimento são preferivelmente expressados em certos estágios de desenvolvimento. Os promotores preferidos de órgão e tecido incluem aqueles que são preferivelmente expressados em certos tecidos ou órgãos, tal como folhas, raízes, sementes ou xilema. Exemplos de promotores preferidos de órgão e preferidos por tecido incluem, mas não são limitadas promotores preferidos por fruto, preferidos por óvulo, preferidos por tecido macho, preferidos poi semente, preferidos por tegumento, preferidos por tubérculo, preferidos poi talo, preferido por pericarpo e preferidos por folha, preferidos por mácula preferidos por pólen, preferidos por antera, preferidos por pétala, preferido: por sépala, preferidos por pedicelo, preferidos por síliqua, preferidos po: caule, preferidos por raiz e outros. Os promotores preferidos por semente sãc preferivelmente expressados durante o desenvolvimento de semente e/ox germinação. Por exemplo, promotores preferidos de semente podem se preferidos por embrião, preferidos por endosperma e preferidos po revestimento de semente. Ver Thompson et al., 1989, BioEssays 10:108 Exemplos dos promotores preferidos por semente incluem, mas não sã< limitadas a, celulose sintase (celA), Ciml, gama-zeina, globulina-1, milho 1' kD zeina (cZl 9B1) e outros.

Outros promotores úteis em um cassete de expressão d invenção incluem, mas não são limitadas a, proteína de proteína de ligação d clorofila principal a/b, promotores de histona, o promotor Ap3, o promotor d conglicina β, o promotor napin, o promotor de lectina soja, o promotor d zeina de milho 15kD, o promotor de zeina 22kD, o promotor de zeina 27kD, promotor g-zeína, a cera, promotores de diminuição 1, de diminuição 2 bronze, o promotor Zml3 (Patente U.S. N°. 5.086.169), os promotores d poligalacturonase de milho (PG) (Patente U.S. N°s. 5.412.085 e 5.545.546) e o promotor SGB6 (Patente U.S. N°. 5.470.359), bem como promotores sintéticos ou outros naturais.

Flexibilidade adicional no controle da expressão do gene em plantas pode ser obtido pelo uso dos domínios de ligação de DNA e elementos de resposta a partir das fontes heterólogas (isto é, domínios de ligação de DNA a partir das fontes não vegetais). Um exemplo de um tal domínio de ligação de DNA heteróloga é o domínio de ligação de DNA . (Brent and Ptashne, 1985, .Cell 43:729-736). A invenção ainda fornece um vetor de expressão recombínante que compreende um polipeptídeo que aumenta GABA da invenção da molécula de DNA da invenção clonado em um vetor de expressão em uma orientação anti-sentido. Isto é, a molécula de DNA é operacional mente ligada a uma sequência reguladora em uma maneira que permite a expressão (pela transcrição da molécula de DNA) de uma molécula de RNA que é anti-sentido a um polipeptídeo que aumenta GABA da invenção mRNA Sequências reguladoras operacionalmente ligadas a uma molécula de ãcidc nucleico clonada na orientação anti-sentido pode ser escolhido no qua direciona a expressão contínua da molécula de RNA anti-sentido em um: variedade dos tipos celulares. Por exemplo, promotores e/ou intensiflcadore: virais, ou sequências reguladoras podem ser escolhidos no qual direcionam < expressão de RNA anti-sentido específico por tipo celular, específico po: tecido ou constitutivo. O vetor de expressão anti-sentido pode ser na forma d< um plasmídeo recombínante, fagomídeo, ou vírus atenuado em que os ácido: nucleicos anti-sentido são produzidos sob o controle de uma região regulador; de eficiência alta. A atividade da região reguladora pode ser determinada pel< tipo celular em que o vetor é introduzido. Para um debate da regulação d; expressão do gene usando genes anti-sentido, ver Weintraub, H. et al., 1986 Antisense RNA as a molecular tool for genetic analysis, Reviews - Trends ii Genetics, Vol. 1(1) e Mol et a1., 1990, FEBS Letters 268:427-430.

Outro aspecto da invenção pertence ao polipeptídeo isolado que aumenta GABA da invenção e porções biologicamente ativas destes. Um polipeptídeo “isolado” ou “purificado” ou porção biologicamente ativa destes é livre de algum material celular quando produzido pelas técnicas de DNA recombinantes, ou precursores químicos ou outras químicas quando quimicamente sintetizados. A linguagem “substancialmente livre do material celular” inclui as preparações dos polipeptídeos que aumenta GAJBA da invenção em que o polipeptídeo é separado a partir de alguns componentes celulares das células em que este é naturalmente ou recombinantemente produzido. Em uma forma de realização, a linguagem “substancialmente livre do material celular” inclui as preparações de um polipeptídeo que aumenta GABA da invenção tendo menos do que cerca de 30 % (em peso seco) de material não polipeptídeo que aumenta GABA da invenção (também referidc neste como um “polipeptídeo de contaminação”), mais preferivelmente m.enos do que cerca de 20 % do material não polipeptídeo que aumenta GABA dc invenção, ainda mais preferivelmente menos do que cerca de 10 % dc material não polipeptídeo que aumenta GABA da invenção e mai: preferivelmente menos do que cerca de 5 % do material não polipeptídeo qu< aumenta GABA da invenção.

Quando o polipeptídeo que aumenta GABA da invenção oi porção biologicamente ativa deste é recombinantemente produzido, também i preferivelmente substancialmente livre do meio de cultura, isto é, meio d cultura representa menos do que cerca de 20 %, mais preferivelmente meno do que cerca de 10 % e mais preferivelmente menos do que cerca de 5 % d preparação do volume do polipeptídeo. A linguagem “substancialmente livr dos precursores químicos ou outros químicos” incluem preparações d polipeptídeo que aumenta GABA da invenção em que o polipeptídeo separado de precursores químicos ou outras químicas que são envolvidas n síntese do polipeptídeo. Em uma forma de realização, a linguagem “substancialmente livre dos precursores químicos ou outros químicos” incluem as preparações de um polipeptídeo que aumenta GABA da invenção tendo menos do que cerca de 30 % (em peso seco) dos precurosres químicos ou químicas de não polipeptídeo que aumenta GABA da invenção, mais preferivelmente menos do que cerca de 20 % precursores químicos ou químicas de não polipeptídeo que aumenta GABA da invenção, ainda mais preferivelmente menos do que cerca de 10 % precursores químicos ou químicas de não polipeptídeo que aumenta GABA da invenção e mais preferivelmente menos do que cerca de 5 % precursores químicos ou químicas de não polipeptídeo que aumenta GABA da invenção. Em formas de realização preferidas, polipeptídeos isolados, ou porções biologicamente ativas destes, perdem os polipeptídeos de contaminação a partir do mesmo organismo do qual o polipeptídeo que aumenta GABA da invenção é derivado. Tipicamente, tais polipeptídeos são produzidos pela expressão recombinante de, por exemplo, um polipeptídeo Saccharomyces cerevisiae. E.coli ou Brassica napus, Glycine max, Zea mays ou Oryza sativa q ut aumenta GABA da invenção em plantas outras do que Saccharomyces cerevisiae, E.coli, ou microorganismos tal como C. glutamicum, ciliatos algas ou fungos. A molécula de ácidos nucleicos, polipeptídeos, homólogos d< polipeptídeos, polipeptídeos de fusão, iniciadores, vetores e célula; hospedeiras descritas neste podem ser usados em um ou mais dos seguinte; métodos: identificação de Saccharomyces cerevisiae, E.coli or Brassicc napus, Glycine max, Zea mays ou Oryza sativa e organismos relacionados mapeamento dos genomas de organismos relacionados ao Saccharomyce. cerevisiae, E.coli', identificação e localização da sequência de interessi Saccharomyces cerevisiae, E.coli ou Brassica napus, Glycine max, Zea may ou Oryza sativa.', estudos evolucionários; detenninação das regiões requerida para a função no polipeptídeo que aumenta GABA da invenção; modulação de um polipeptídeo que aumenta a atividade GABA; modulação do metabolismo de uma ou mais funções celulares bases; modulação do transporte de transmembrana de um ou mais compostos bases; modulação de resistência à tensão; e modulação da expressão de polipeptídeo que aumenta os ácidos nucleicos GABA.

As moléculas de ácidos nucleicos da invenção também são úteis para os estudos estruturais de polipeptídeos e evolucionários. Os processos de transporte e metabólico em que as moléculas da invenção participate são utilizadas por uma ampla variedade de células procarióticas e eucarióticas; pela comparação da sequências da molécula do ácidos nucleicos da presente invenção aquelas enzimas similares codificadoras a partir de outros organismos, evolucionário relacionado dos organismos podem sei avaliados. Similarmente, uma tal comparação permite uma avaliação do qual as regiões da sequência são conservados e que não são, que podem ajudar ηε determinação daquelas regiões do polipeptídeo que são essenciais para c funcionamento da enzima. Este tipo de determinação é de valor para o; estudos projetados de polipeptídeo e podem dar uma indicação de que <: polipeptídeo pode tolerar nos termos de mutagênese sem função de perde.

Manipulação da molécula do ácidos nucleicos da invençãc pode resultar na produção de ter as diferenças funcionais a partir do tipc selvagem. Estes polipeptídeos podem ser melhorados na eficiência oi atividade, podem estar presentes em maiores números na célula do que i usual, ou podem ser diminuídos na eficiência ou atividade.

Existe um número de mecanismos pelo qual a alteração de un polipeptídeo que aumenta GABA da invenção da invenção pode diretament afetar a resposta a tensão e/ou tolerância à tensão. No caso de plantas qu expressam o polipeptídeo que aumenta GABA da invenção, transport aumentado pode levar ao sal melhorado e/ou divisão do soluto dentro d tecido ou órgão vegetal. Para aumentar o número ou uma atividade das moléculas transportadoras que exportam as moléculas iônicas a partir da célula, pode ser possível para afetar o sal e tolerância fria da célula. O efeito da modificação genética nas plantas, na tolerância à tensão pode ser avaliado pelo desenvolvimento da planta modificada sob menos do que as condições adequadas e então analisando as características de desenvolvimento e/ou metabolismo da planta. Tais técnicas de análise são bem conhecidas aquela pessoa habilitada na técnica e incluem peso seco, peso úmido, síntese de polipeptídeo, síntese de carboidrato, síntese de lipídeo, taxas de evapotranspiração, produção geral de planta e/ou lavoura, florescência, reprodução, ajuste de semente, desenvolvimento de raiz, taxas de respiração, taxas de fotosíntese, etc. (Pedidos of HPLC in Biochemistry in: Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology, vol. 17; Rehm et al., 1993 Biotechnology, vol. 3, Chapter III: Product recovery and purification, page 469-714, VCH: Weinheim; Belter, P.A. et al., 1988, Bioseparations: downstream processing for biotechnology, John Wiley and Sons; Kennedy, J.F. and Cabral, J.M.S., 1992, Recovery processes for biological materiais, John Wiley and Sons; Shaeiwitz, J.A. and Henry, J.D.. 1988, Biochemical separations, in: UlmamTs Encyclopedia of Industrial Chemistry, vol. B3, Chapter 11, page 1-27, VCH: Weinheim; and Dechow. F.J., 1989, Separation and purification techniques in biotechnology, Noyes Publications).

Por exemplo, vetores de expressão de levedura compreendem ácidos nucleicos divulgados neste, ou fragmentos destes, podem sei construídos e transformados em Saccharomyces cerevisiae usando protocolo: padrões. As células transgênicas resultantes podem então ser avaliados peh falha ou alteração de sua tolerância à aridez, sal e tensão fria. Similarmente os vetores de expressão vegetais compreendem os ácidos nucleico: divulgados neste, ou fragmentos destes, podem ser construídos i transformados em. uma célula vegetal apropriada tal como Arabidopsis, soja, nabo silvestre, milho, algodão, arroz, trigo, Medicago truncatida, etc., usando protocolos padrões. As células transgências resultantes e/ou plantas derivadas destes podem ser então submetidas ao ensaio pela falha ou alteração de sua tolerância à aridez, sal, tensão fria. A engenharia de um ou mais genes de bases de acordo com tabela I e codificada pelo polipeptídeo que aumenta GABA da invenção da tabela II da invenção também pode resultar no polipeptídeo que aumenta GABA da invenção tendo atividade alteradas que indiretamente impactam a resposta à tensão e/ou tolerância à tensão de algas, plantas, ciliatos, ou fungos, ou outros microorganismos semelhantes C. glutamicum.

Adicionalmente, as sequências divulgadas neste, oi fragmentos destes, podem ser usadas para gerar as mutanções por nocaute no; genomas de vários organismos, tal como bactéria, células de mamíferos células de levedura e células vegetais (Girke, T., 1998, The Plant Journa 15:39-48). As células nocaute resultantes éntão podem ser avaliadas por sut capacidade da tolerância as várias condições de tensão, sua resposta a vária: condições de tensão e o efeito do fenotipo e/ou genotipo de uma mutação Para. outros métodos da inativação do gene, ver Patente U.S. N°. 6.004.80-“Non-Chimeric Mutational Vectors” and Puttaraju et ah, 1999, Spliceosome mediated RNA tranv-splicing as a tool for gene therapy, Natun Biotechnology 17:246-252.

As estratégias da mutagênese mencionada acima para a proteínas relacionadas ao GABA resultando na resistência à tensão aumentad não são significados ser limitantes; as variações nestas estratégias ser prontamente aparente aquela pessoa habilitada na técnica. Usando tai estratégias e incorporando os mecanismos divulgados neste, o ácido nucleic e moléculas de polipeptídeo da invenção podem ser utilizados para gerr algas, ciliatos, plantas, fungos, ou outros microorganismos semelhantes C glutamicum que expressam as proteínas relacionadas ao ácido nucleico GABA mutadas e moléculas de polipeptídeo tal que a tolerância à tensão é melhorada. A presente invenção também fornece anticorpos que especificamente ligam-se a um polipeptídeo que aumenta GABA da invenção, ou uma porção destes, como codificado por um ácido nucleico descritos neste. Os anticorpos podem ser feitos por muitos métodos bem conhecidos (Ver, por exemplo Harlow and Lane, “Antibodies; A Laboratory Manual,” Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring líarbor, New York, (1988)). Brevemente, o antígeno purificado pode ser injetado em um animal em uma quantidade e intervalos suficientes para extrair uma resposta imune. Os anticorpos podem ser purificados diretamente, ou células do baço podem ser obtidas a partir do animal. As células podem então fundir com uma linha celular imortal e avaliadas pela secreção de anticorpo. Os anticorpos podem ser usados para avaliar as bibliotecas de clone do ácido nucleico para as células que secretair o antígeno. Aqueles clones positivos então podem ser submetidos à sequência Ver, por exemplo, Kelly et al., 1992, Bio/Technology 10:163-167 Bebbington et al., 1992, Bio/Technology 10:169-175.

As frases “seletivamente ligam-se” e “especificamente liga-se’ com o polipeptídeo refere-se a uma reação de ligação que é determinativo d; presença do polipeptídeo em uma população heterogênea dos polipeptídeos i outros biológicos. Deste modo, sob as codnições de imunoensaio projetados os anticorpos especificados ligam-se a um polipeptídeo particular não liga-s em uma quantidade significante a outros polipeptídeos presentes na amostre A ligação seletiva de um anticorpo sob tais condições podem requerir ur anticorpo que é selecionado para sua especificidade por um polipeptíde particular. Uma variedade dos formatos de imunoensaio pode ser usada par selecionar os anticorpos que selctivamente ligam-se com um polipeptíde particular. Por exemplo, imunoensaios ELISA de fase sólida sã rotineiramente usados para selecionar os anticorpos seletivamente imunoreativos com um polípeptídeo. Ver Harlow and Lane, “Antibodies, A i .aboratory Manual,” Cold Spring Harbor Publications, New York, (1988), para uma descrição dos formatos de imunoensaio e condições que devem ser usadas para determinar a ligação seletiva.

Em alguns exemplos, é desejável preparar os anticorpos monoclonais a partir vários hospedeiros. Uma descrição das técnicas para preparação de tais anticorpos monoclonais podem ser obervados em Stites et al., eds., “Basic and Clinicai Tmmunology,” (Lange Medicai Publications, Los Altos, Calif., Fourth Edition) e referências citadas neste e em Harlow and Lane, “Antibodies, A Laboratory Manual,” Cold Spring Harbor Publications, New York, (1988). A expressão do gene em plantas é regulada pela interação dos fatores de transcrição de proteína com a sequência de nucleotídeos específict dentro da região reguladora de um gene. Um exemplo dos fatores de transcrição são os polipeptídeos que contém os motivos de dedo de zincc (ZF). Cada módulo ZF é aproximadamente 30 aminoácidos long foldec around a zinc ion. O domínio de reconhecimento de DNA de uma proteína ΖΪ é uma estrutura α-helical that inserts into the major grove da hélice dupla d< DNA. O módulo contém três aminoácidos que ligam-se ao DNA com cad; aminoácido em contato com par de base simples na sequência de DNA alvc Os motivos ZF são dispostos em um maneira de repetição modular par formar uma série de dedos que reconhecem a sequência de DNA contínuE Por exemplo, a three-flngered ZF motif reconhecerão 9 bp de DNA. Centena de proteínas foram mostradas para conter os motivos ZF entre 2 e 37 Z' módulos em cada proteína (Isalan M, et al., 1998 Biochemistry 37(35):1202( 33; Moore M, et al., 2001 Proc. Nati. Acad. Sei. USA 98(4):1432-1436 an 1437-1441; Patentes U.S. 6007988 eU.S. 6013453). A região reguladora de um gene vegetal contém muití sequências de DNA (elementos de atuação cis) que serve como domínios de reconhecimento para os fatores de transcrição, incluindo proteínas ZF. Os domínios de reconhecimento similares nos genes diferentes permitem a expressão coordenada de diversos genes que codificam as enzimas em um caminho metabólico pelos fatores de transcrição comum. A variação nos domínios de reconhecimento entre os membros de uma família do gene facilitam as diferenças na expressão do gene dentro da mesma família do gene, por exemplo, entre tecidos e estágios do desenvolvimento e em resposta .. as condições ambientais.

As proteínas ZF típicas apenas não contém um domínio de reconhecimento de DNA mas também um domínio funcional que capacita a prtoeína ZF para ativar ou reprimir a transcrição de um gene específico. Experimentalmente, um domínio de ativação foi usado para ativar a transcrição do gene alvo (Patente U.S. 5789538 e Pedido de Patente W09519431), mas também é possível ligar um domínio repressor de transcrição ao ZF e portanto para inibir a transcrição (Pedidos de Patente WOOO/47754 e WO2001002019). Foi relatado que uma função enzimática tá como divagem do ácido nucleico pode ser ligada ao ZF (Pedido de Patente WO00/20622) A invenção fornece um método que permite uma pesso; habilitada na técnica isolar a região reguladora de uma ou mais bases proteíni relacionada à tensão que codifica genes a partir de genoma da célula vegetal < para projetar os fatores de transcrição de dedo de zinco ligados a um domínii funcional que interagirá c om a região reguladora do gene. A interação d proteína de dedo de zinco com o gene vegetal pode ser projetada em uma ts maneira de modo como para alterar a expressão do gene e preferivelment deste modo para conferir o conteúdo GABA aumentado.

Em particular, a invenção fornece um método de produção d uma planta transgênica com a proteína relacionada à tensão que codifica ácido nucleico, em que expressão do ácido nucleico na planta resulta na tolerância aumentada à tensão ambiental como comparado a uma planta de tipo selvagem que compreende: (a) transformar uma célula vegetal com um vetor de expressão que compreende uma proteína relacionada à tensão que codifica ácido nucleico e (b) gerar a partir da célula vegetal uma planta transgênica com um conteúdo GABA aumentado como comparado a uma planta de tipo selvagem. Para tal transformação vegetal, os vetores binários tal como pBinAR podem ser usados (Hõfgen and Willmitzer, 1990 Plant Science 66:221-230). Além disso vetores binários adequados são por exemplo pBIN19, pBHOl, pGPTV or pPZP (Ilajukiewicz, P. et al., 1994, Plant Mol. Biol., 25:989-994). A construção dos vetores binários pode ser realizada pela ligação do cDNA em T-DNA. A extremidade 5' ao cDNA de um promotoi vegetal ativa a transcrição do cDNA. Uma sequência de poliadenilação e localizada na extremidade 3' ao cDNA. A expressão específica por tecido pode ser atingida usando urr promotor específico por tecido como listado acima. Também, qualquer ouíir elemento promotor pode ser usado. Para a expressão constitutiva dentro d; planta total, o promotor CaMV 35S pode ser usado. A proteína expressad; pode ser alvejada a um compartimento celular usando um peptídeo sinal, po exemplo por plastídeos, mitocôndria ou retículo endoplásmico (Kermode 1996 Crit. Rev. Plant Sei. 4(15):285-423). O peptídeo de sinal é clonado n extremidade 5' da estrutura ao cDNA para atingir a localização celular d proteína de fusão. Adicionalmente, os promotores que são responsáveis pel tensão abiótica podem ser usados com, tal como o promotor Arabidopsi RD29A. Uma pessoa habilitada na técnica reconhecerá que o promotor usad deve ser operacionalmente ligado ao ácido nucleico tal que o promotor caus a transcrição do ácido nucleico que resulta na síntese de um mRNA qt codifica um polipeptídeo.

Os métodos laternativos de transfecção incluem a transferência direta de DNA no desenvolvimento das flores por intermédio da elctroporação ou transferência do gene mediada por Agrobactéria. A transformação da planta mediada por Agrobactéria pode ser realizada usando por exemplo a cepa GV3101 (pMP90) (Koncz and Schell, 1986 Mol. Gen. Genet. 204:383-396) ou LBA4404 (Ooms et al., Plasmid, 1982, 7: 15-29; Iloekema et al., Nature, 1983, 303: 179-180) Agrobacterium tumefaciens. A transformação pode ser realizada pelas técnicas de regeneração e transformação padrão (Deblaere et al., 1994 Nucl. Acids. Res. 13:4777-4788; Gelvin and Schilperoort, Plant Molecular Biology Manual, 2nd Ed. - Dordrecht : Kluwer Academic Publ., 1995. - in Sect., Ringbuc Zentrale Signatur: BT11-P ISBN 0-7923-2731-4; Glick, B R and Thompson, J E, Methods in Plant Molecular Biology and Biotechnology, Boca Raton : CRC Press, 1993. - 360 S., ISBN 0-8493-5164-2). Por exemplo, semente de colza pode ser transformada poi intermédio de uma transformação cotiledônia ou hípocotila (Moloney et ai.. 1989 plant cell Reports 8:238-242: De Block et al, 1989 Plant Physiol 91:694-701). O uso de antibióticos para agrobactéria e seleção vegeta depende do vetor binário e a cepa de agrobactéria usada para a transformação A seleção da semente de colza é normalmente realizada usando kanamicin; como marcador vegetal selecionável. A transferência do gene mediado po agrobactéria ao linho pode ser realizada usando, por exemplo, uma técnic; descrita por Mlynarova et al., 1994 plant cell Report 13:282-285 Adicionalmente, transformação de soja pode ser realizada usando po exemplo uma técnica descrita em Patente Européia N°. 0424 047, Patent U.S. N°. 5.322.783, Patente Européia N°. 0397 687, Patente U.S. Nc 5.376.543 ou Patente U.S. N°. 5.169.770. A transformação de milho pode se atingida pelo bombardeamento de partícula, absorção de DNA mediada pel polietileno glicol ou por intermédio da técnica de fibra de carboneto de silico (ver, por exemplo, Freeling and Walbot “The com handbook” Springt Verlag: New York (1993) ISBN 3-540-97826-7). Um exemplo específico da transformação de milho é obervado na Patente U.S. N°. 5.990.387 e um exemplo específico da transformação de trigo pode ser obervado no Pedido PCT N°. WO 93/07256. O desenvolvimento das plantas modificadas sob as condições à tensão e então avaliando as características de desenvolvimento e/ou atividade metabólica avalia o efeito da modificação genética em plantas no conteúdo GABA aumentado. Tais técnicas de análise são bem conhecidas aquela pessoa habilitada na técnica. Estas incluem próxima a avaliação (Rõmpp Lexikon Biotechnologie, Stuttgart/New York: Georg Thieme Verlag 1992, "screeníng" p. 701) peso seco, peso úmido, síntese de proteína, síntese de carboidrato, síntese de lipídeo, taxas de evapotranspiração, produção geral de planta e/ou lavoura, florescência, reprodução, ajuste de semente, desenvolvimento de raiz, taxas de respiração, taxas de fotosíntese, etc. (Pedidos of HPLC in Biochemistry iri: Laboratory Teehniques in Biochemistry and Molecular Biology, vol. 17; Rehm et al., 1993 Biotechnology, vol. 3, Chapter III: Product recovery and purification, pagt 469-714, VCH: Weinlieim; Belter, P.A. et al., 1988 Bioseparations downstream processing for biotechnology, John Wiley and Sons; Kennedy J.F. and Cabral, 1992 Recovery processes for biological materiais John Wiley and Sons; Shaeiwitz, J.A. and Hemy, J.D., 1988 Bioehemica separations, in: UlmamTs Encyclopedia of Industrial Chemistry, vol. B3 Chapter 11, page 1-27, VCH: Weinheim; and Dechow, F.J. (1989) Separatio: and purification teehniques in biotechnology, Noyes Publications).

Em uma forma de realização, a presente invenção diz respeit a um método para a identificação de um produto do gene que confere conteúdo GABA aumentado como comparado a um tipo selvagem nã transformado correspondente em uma célula de um organismo por exempl planta, compreende uma seguinte etapa: a) Contatar, por exemplo hibridizar, alguma ou todas as moléculas de ácidos nucleicos de uma amostra, por exemplo células, tecidos, plantas ou microorganismos ou uma biblioteca de ácido nucleico, que pode conter um gene candidato que codifica um produto do gene que confere conteúdo GABA aumentado, com uma molécula de ácido nucleico como mostrado na coluna 5 ou 7 da tabela I A ou B ou um homologo funcional deste; b) identificar as moléculas de ácidos nucleicos, que hibridiza sob as condições estringentès relaxadas com a dita molécula de ácido nucleico, em particular à sequência da molécula de ácido nucleico mostrada na coluna 5 ou 7 da tabela I e, opcionalmente, isolar o clone de cDNA de comprimento total ou clone genômico completo; c) identificar a molécula candidata de ácidos nucleicos ou c fragmento destes nas células hospedeiras, preferivelmente em uma célulr vegetal d) aumentar a expressão da molécula identificada de ácido: nucleicos nas células hospedeiras cujo conteúdo GABA aumentou com< desejado e) submeter ao ensaio o nível de conteúdo GABA aumentad das células hospedeiras; e f) identificar a molécula de ácido nucleico e seu produto d gene cuja expressão aumentada confere o conteúdo GABA aumentado ηε células hospedeiras comparadas ao tipo selvagem.

As condições de hibridização relaxadas são: Após c procedimentos de hibridização padrão as etapas de lavagem podem s< realizadas em condições de estringência baixa a média usualmente com : condições de lavagem de 40° a 55° C e as condições salinas entre 2xSSC 0,2xSSC com 0,1 % de SDS em comparação as condições de lavage estringentes como por exemplo 60° a 68° C com 0,1 % SDS. Exempl adicionais podem ser obervados nas referências listadas acima para as condições de hibridização estringentes. Usualmente as etapas de lavagem são repetidas com a estringência aumentadas e comprimento até uma razão de sinal útil para o ruído ser detectado e depende em muitos fatores como o alvo, por exemplo sua pureza, conteúdo GC, tamanho etc, uma sonda, por exemplo seu comprimento, é uma sonda de RNA ou DNA, condições salinas, temperatura de hibridização ou lavagem, tempo de hibridização ou lavagem etc.

Em outra forma de realização, a presente invenção diz respeito a um método para identificação de um produto do gene da expressão que confere um conteúdo GABA aumentado em uma célula, compreende as seguintes etapas: a) identificar uma molécula de ácido nucleico em um organismo, que é pelo menos 20 %, preferivelmente 25 %, mais preferivelmente 30 %, ainda mais preferido são 35 %, 40 % ou 50 %, ainch mais preferido são 60 %, 70 % ou 80 %, mais preferido são 90 % ou 95 % oi mais homólogos a uma molécula de ácido nucleico que codifica uma proteín: compreende uma molécula de polipeptídeo como mostrado na coluna 5 ou ' da tabela II ou que compreende uma sequência consenso ou um motivo d polipeptídeo como mostrado na coluna 7 da tabela IV ou sendo modificad por uma molécula de ácido nucleico que compreende um polinucleotíde como mostrado na coluna 5 ou 7 da tabela I ou um homólogo deste com descrito neste , por exemplo por intermédio da busca da homologia em ui banco de dados; b) Intensificar a expressão da molécula identificada de ácidc nucleicos nas células hospedeiras; c) submeter o ensaio no nível do conteúdo GABA aumentai nas células hospedeiras; e d) identificar as células hospedeiras, em que a expressí intensificada confere o conteúdo GABA aumentado nas células hospedeiras comparadas ao tipo selvagem.

Ainda, a molécula de ácido nucleico divulgada neste, em particular a molécula de ácido nucleico mostrada na coluna 5 ou 7 da tabela I A ou B, pode ser sufi cientemente homóloga as sequências das espécies relacionadas tal que estas molécula de ácidos nucleicos podem servir como os marcadores para a construção de um mapa genômico no organismo relacionado ou pelo mapeamento de associação. Além disso a variação natural nas regiões genômicas correspondentes aos ácidos nucleicos divulgados neste, em particular a molécula de ácido nucleico mostrada na coluna 5 ou 7 da tabela I A ou B, ou homólogos destes podem levar a variação na atividade da proteína divulgado neste, em particular as proteínas que compreendem os polipeptídeos como mostrado na coluna 5 ou 7 da tabela II A ou B ou compreendem a sequência consenso ou o motivo de polipeptídeo comc mostrado na coluna 7 da tabela IV e seus homólogos e na consequência m variação natural no conteúdo de GABA.

Na conseqüência da variação natural eventualmente tambén existem na forma ou mais variantes alélicas ativas prontamente levam a un aumento relativo no conteúdo GABA. As variantes diferentes da molécul; dos ácidos nucleicos divulgadas neste, em particular o ácido nucleico qu< compreende a molécula de ácido nucleico como mostrado coluna 5 ou 7 d tabela I A ou B, que corresponde aos níveis de concentração de GAB7 diferentes podem ser identificados e usados pela geração assistida pel· marcador pelo conteúdo GABA aumentado.

Consequentemente, a presente invenção diz respeito a ur método para a geração de plantas pelo conteúdo GABA aumentado, qu compreende a) selecionar uma primeira variedade vegetal com conteúd GABA aumentado com base na expressão aumentada de um ácido nucleic da invenção como divulgado neste, em particular de uma molécula de ácido nucleico que compreende uma molécula de ácido nucleico como mostrado na coluna 5 ou 7 da tabela IAouB ou um polípeptídeo que compreende um polipeptídeo como mostrado na coluna 5 ou 7 da tabela II A ou B ou que compreende uma sequência consenso ou um motivo de polipeptídeo como mostrado na coluna 7 da tabela IV, ou um homólogo deste como descrito neste; b) Associar o nível da concentração GABA com o nível de expressão ou a estrutura genômica de um gene que codifica o dito polipeptídeo ou a dita molécula de ácido nucleico; c) Cruzar a primeira variedade de plantas com uma segunda variedade da planta, que signifícantemente difere-se neste nível de cocnentraç-ão GABA e e) Identificar, que uma das variedades de progênie teve níveis aumentados da concentração GABA pelo nível de expressão do dite polipeptídeo ou molécula de ácido nucleico ou a estrutura genômica dof genes que codificam o dito polipeptídeo ou molécula de ácido nucleico d< invenção.

Em uma forma de realização, o nível de expressão do gene d' acordo com a etapa (b) é aumentada. Já em outra forma de realização da invenção diz respeito a un processo para identificação de um composto que confere o conteúdo GABr aumentado como comparado a um tipo selvagem não transformad correspondente em uma célula vegetal, uma planta ou uma parte deste, um planta ou uma parte deste, compreende as etapas: a) cultivar uma célula vegetal; uma planta ou uma parte dest mantendo a expressão da planta do polipeptídeo como mostrado na coluna ou 7 da tabela II ou sendo codificado por uma molécula de ácido nucleico qi compreende um polinucleotídeo como mostrado na coluna 5 ou 7 da tabela ou um homólogo deste como descrito neste ou um polmucleotídeo que codifica o dito polipeptídeo e que confere um conteúdo GABA aumentado como comparado a um tipo selvagem não transformado correspondente e fornece um sistema de leitura capaz de interagir com o polipeptídeo sob as condições adequadas que permitem a interação do polipeptídeo com seu sistema de leitura na presença de um composto químico ou uma amostra que compreende uma pluralidade dos compostos químicos e capazes de fornecer um sinal detectável na resposta à ligação de um composto químico ao dito polipeptídeo sob as condições que permitem a expressão do dito sistema de leitura e da proteína como mostrado na coluna 5 ou 7 da tabela II ou sendo codificado por uma molécula de ácido nucleico que compreende um polinucleotídeo como mostrado na coluna 5 ou 7 da tabela I ou um homologe deste como descrito neste; e b) identificar se o composto químico é um agonista efetive para detectar a presença ou ausência ou diminuição ou aumento de um sina produzido pelo dito sistema de leitura. O dito composto pode ser quimicamente sintetizado oi microbiologicamente produzido e/ou compreendido em, por exemplo amostras, por exemplo, extratos celulares de, por exemplo, plantas, animai ou microorganismos, por exemplo patogênios. Além disso, os dito compostos podem ser conhecidos na técnica mas até aqui não conhecidos serem capazes de suprimir o polipeptídeo da presente invenção. A mistura d reação pode ser um extrato livre de célula ou pode compreender uma cultur de tecido ou de célula. As apresentações adequadas para o processo par identificação de um composto da invenção são conhecidas por uma pesso habilitada na técnica e são, por exemplo, geralmente descritos em Alberts < al., Molecular Biology cell, third edition (1994), em particular Chapter 17. C compostos podem ser, por exemplo, adicionados à mistura de reação, meio c cultura, injetado na célula ou pulverizado na planta.

Se uma amostra que contém um composto é identificada no processo, então é possível isolar o composto a partir da amostra original identificada como contendo um composto capaz de ativar ou aumentar a produção de rendimento sob condição da tensão abiótica transitória ou repetitiva como comparado a um tipo selvagem não transformado correspondente, ou um ainda pode subdividir a amostra original, por exemplo, se este consiste de uma pluralidade dos compostos diferentes, de modo para reduzir o número de substâncias diferentes por amostra e repetir o método com as subdivisões da amostra original. Dependendo da complexidade das amostras, as etapas descritas acima podem ser realizada diversas vezes, preferivelmente até a amostra identificada de acordo com o dito processe apenas compreender um número limite de ou apenas uma substância Preferivelmente a dita amostra que compreende as substâncias daí propriedades químicas similares e/ou físicas e mais preferivelmente as dita: substâncias são idênticas. Preferivelmente, o composto identificado de acorde com um método descrito acima ou derivado é ainda formulado em uma form; adequada para a aplicação na geração vegetal ou célula vegetal e cultura di tecido.

Os compostos que podem ser testados e identificados d acordo com os ditos processos podem ser bilbiotecas de expressão, pc exemplo, bibliotecas de expressão de cDNA, peptídeos, proteínas, ácido nucleicos, anticorpos, compostos orgânicos menores, hormônio: peptidomiméticos, PNAs ou outros (Milner, Nature Medicine 1 (1995), 87Ç 880; Hupp, Cell 83 (1995), 237-245; Gibbs, Cell 79 (1994), 193-198 referências citadas supra). Os ditos compostos também podem ser derivade funcionais ou análogos dos inibidores conhecidos ou ativadores. Os métode para a preparação dos derivados químicos e análogos são bem conhecidt àquela pessoa habilitada na técnica e são descritos em, por exemplo, Beilstei: Handbook of Organic Chemistry, Springer edition New York Inc., 175 Fif Avenue, New York:, N.Y. 10010 U.S.A. and Grganic Synthesis, Wiley, New York, USA. Além disso, os ditos derivados e análogos podem ser testados por seus efeitos de acordo com os métodos conhecidos na técnica. Além disso, os peptidomímétícos e/ou computador ajuda o projeto dos derivados apropriados e análogos podem ser usados, por exemplo, de acordo com os métodos descritos acima. A célula ou tecido que podem ser utilizados no processo preferivelmente é uma célula hospedeira, célula vegetal ou tecido vegetal da invenção descrito nas formas de realização mais acima.

Deste modo, ainda em uma forma de realização a invenção diz respeito a um composto obtido ou identificado de acordo com um métodc para a identificação de um agonista da invenção o dito composto sendo un antagonista do polipeptídeo da presente invenção.

Consequentemente, em uma forma de realização, a presentt invenção ainda diz respeito a um composto identificado pelo método para ; identificação de um composto da presente invenção.

Em uma forma de realização, a invenção diz respeito a un anticorpo especificamente reconhece o composto ou agonista da present invenção. A invenção também diz respeito a uma composiçã diagnostica que compreende pelo menos uma das moléculas de ácido nucleicos mencionadas acima, molécula de ácido nucleico anti-sentidc RNAi, snRNA, dsRNA, siRNA, miRNA, ta-síRNA, molécula de cc supressão, ribozima, vetores, proteínas, anticoipos ou compostos da invençã e opcionalmente meios adequados para a detecção. A composição diagnostica da presente invenção é adequac para o isolamento de mRNA a partir da célula e contactam o mRNA de moc obtido com uma sonda que compreende uma sonda de ácido nucleico coir descrito acima sob condições de hibridização, detecção da presença de mRN hibridizado a uma sonda e portanto detectando a expressão da proteína i célula. Ainda métodos da detecção da presença de uma proteína de acordo com a presente invenção compreende imunotécnícas bem conhecidas na técnica, por exemplo ensaio imunoabsorvente ligado por enzima. Além disso, é possível usar uma molécula de ácidos nucleícos de acordo com a invenção como marcadores moleculares ou iniciadores na geração da planta. Os meios adequados para a detecção são bem conhecidos a uma pessoa habilitada na técnica, por exemplo tampões e soluções e soluções para ensaios de hibridização, por exemplo as soluções e tampões mencionados acima, adicionais e meios para Southern-, Western-, Northern- etc. blots, como por exemplo descrito em Sambrook et al. são conhecidos. Em uma forma de realização a composição dignósticacontém os iniciadores PCR projetados para detectar especificamente a presença ou o nível da expressão da molécula do ácido nucleico a ser reduzida no processo da invenção, por exemplo da molécula do ácido nucleico da invenção, ou para descriminar entre as variantes diferentes ou alelos da molécula do ácido nucleico da invenção ou cuja atividade será reduzida no processo da invenção.

Em outra forma de realização, a presente invenção diz respeito a um kit que compreende a molécula de ácido nucleico, o vetor, as células hospedeiras, o polipeptídeo, ou o anti-sentido, RNAi, snRNA, dsRNA, siRNA, miRNA, ta-siRNA, molécula de co-supressão, ou moléculade ribozima, ou a molécula viral de ácido nucleico, o anticorpo, a célula vegetal a planta ou tecido vegetal, a parte coletável, o material de propagação e/ou c composto e/ou agonista identificado de acordo com um método da invenção.

Os compostos do kit da presente invenção podem se: embalados nos recipientes tais como frascos, opcionalmente com/em tampõe; e/ou solução. Se apropriado, um ou mais do ditos componentes podem se embalados em um e no mesmo recipiente. Adicionalmente 01 altemativamente, um ou mais dos ditos componentes devem ser absorvidos um suporte sólido como, por exemplo um filtro de nitrocelulose, uma placa d vidro, um chip, ou uma membrana de náilon ou ao reservatório de uma placa microtituladora. O kit pode ser usado por quaisquer métodos descritos neste e formas de realização, por exemplo para a produção das células hospedeiras, plantas transgênicas, composições farmacêuticas, detecção das seqüências homólogas, identificação de antagonistas ou agonistas, como alimento ou alimentação ou como um suplemento destes ou como suplemento para o tratamento das plantas, etc.

Ainda, o kit pode compreender as instruções para o uso do kit para quaisquer uma das ditas formas de realização.

Em uma forma de realização o dito que ainda compreende uma molécula de ácido nucleico que codifica uma ou mais das proteínas anteriormente mencionadas, e/ou um anticorpo, um vetor, as células hospedeiras, um ácido nucleico anti-sentido, uma célula vegetal ou tecidc vegetal ou uma planta. Em outra forma de realização o dito que compreende os miciadores PCR para detectar e discriminar uma molécula de ácidc nucleico a ser reduzida no processo da invenção, por exemplo da molécula dc ácido nucleico da invenção.

Ainda em uma forma de realização, a presente invenção di; respeito a um método para a produção de uma composição agricultura fornecendo uma molécula de ácido nucleico para o uso de acordo com un processo da invenção, a molécula de ácido nucleico da invenção, o vetor d invenção, o anti-sentido, RNAi, snRNA, dsRNA, siRNA, miRJNA, ta-siRJNA molécula de co-supressão, ribozima, ou anticorpo da invenção, a molécul viral de ácido nucleico da invenção, ou o polipeptídeo da invenção o compreende uma etapa do método de acordo com a invenção para identificação do dito composto ou agonista; e formulação de uma molécula d ácido nucleico, o vetor ou o polipeptídeo da invenção ou o agonista, o composto identificado de acordo com os métodos ou processos da presenl invenção ou com uso das substâncias principais da presente invenção em um forma aplicável como composição agricultural vegetal.

Em outra forma de realização, a presente invenção diz respeito a um método para a produção da composição de cultura vegetal que compreende as etapas do método da presente invenção; e formulação do composto identificado na forma aceitável como composição agricultural.

Sob “aceitável como a composição agriculturar’ é entendido, tal que uma composição está em entendídmento com as leis que regulam o conteúdo dos fungicidas, nutrientes vegetais, herbicidas, etc. Preferivelmente tal composição está dentro de qualquer dano para as plantas protegidas e os animais (humanos incluídos) alimentados destes. O efeito da modificação genética nas células hospedeiras ηε produção do ácido gama-aminobutírico pode ser determinado pele desenvolvimento dos microorganismos modificados ou planta modificada sol condições adequadas (tal como aquelas descritas acima) e analisar o meie e/ou os componentes celulares para a produção elevada do ácido gama aminobutírico. Estas técnicas analíticas são conhecidas por aquele trabalhado habilitado e compreende a espectroscopia, cromalogralia de camada fina vários tipos de métodos de tingimento, métodos enzimáticos < microbiológicos e cromatograíía analítica tal como cromatografia líquida d desempenho alto (ver, por exemplo, Ullman, Encyclopedia of Industrie Chemistry, Vol. A2, p. 89-90 and p. 443-613, VCH: Weinheim (1985) Fallon, A., et al., (1987) “Pedidos of HPLC in Biochemistry“ in: Laborator Techniques in Biochemistry and Molecular Biology, Vol. 17; Rebm et a (1993) Biotechnology, Vol. 3, Chapter III: “Product recovery an purification“, p. 469-714, VCH: Weinheim; Belter, P.A., et al. (198É Bioseparations: downstream processing for Biotechnology, John Wiley an Sons; Kennedy, J.F. e Cabral, J.M.S. (1992) Recovery processes fc biological Materials, John Wiley and Sons; Shaeiwitz, J.A. e Henry, J.I (1988) Biochemical Separations, in: Ullmaimfs Encyclopedia of Industri Chemistry, Vol. B3; Chapter 11, p. 1-27, VCH: Weinheim; and Dechow, F.J. (1989) Separation and purification teclmiques in biolechnology, Noyes Publications). O ácido gama-aminobutírico pode ser por exemplo detectado vantajosamente por intermédio de métodos de separação HPLC, LC ou GC. A detecção não ambígua para a presença do ácido gama-aminobutírico contendo os produtos pode ser obtida pela análise os organismos recombinantes usando métodos padrões analíticos: LC, LC-MS, MS ou TLC). O material a ser analisado pode ser rompido pela sonificação, trituração ou trituração de vidro, nitrogênio líquido e cozimento, ou potr intermédio de outros métodos aplicáveis. O GABA pode ser isolado e purificado. A detecção nãc ambigua para a presença de um ácido gama-aminobutírico pode ser obtidí pela análise dos organismos recombinantes usando métodos padrão analítico LC, LC-MSMS ou TLC, como descrito. A quantidade total produzida nc organismo por exemplo em leveduras usadas no processo inventivo pode se: analisada por exemplo de acordo com os seguintes procedimentos O material como levedura, E. coli ou plantas a serem analisadas podem se rompidas pela sonificação, trituração em uma trituração de vidro, nitrogênii líquido e trituração ou por intermédio de outros métodos aplicáveis O material vegetal é inicialmente homogenizado mecanicamente pel trituração em um pilão e almofariz para fabricar mais acessoa a extraçãc Um pré-tratamento de amostra típico consiste de uma extração de lipídeo tofi usando tais solventes orgânicos polares como acetona ou álcool com metanol, ou éteres, saponificação, separação entre fases, separação da epifas não polar a partir de mais derivados hipofásico polares e cromatografia.

Para a análise, a liberação do solvente e remoção da alíquoi podem ser acompanhados com um sistema robótico que compreende uir válvula injetora simples Gilson 232XL and a 402 2S1V diluter [Gilson, In USA, 3000 W. Beltline Highway, Middleton, WI]. Para saponificação, 3 i: de 50 % de solução hidro-etanólico do hidróxido de potássio (4 água - 1 etanol) pode ser adicionado a cada frasco, seguido pela adição de 3 ml de octanol. O tratamento de saponificação pode ser conduzido em temperatura ambiente com os frascos mantendo em um agitador horizontal IKA HS 501 [Labworld-onlme, Inc., Wilmington, NC] por quinze horas a 250 movimentos/minutos, seguido por uma fase estacionária de aproximadamente uma hora.

Seguindo a saponificação, o sobrenadante pode ser diluído com 0,17 ml de metanol. A adição de metanol pode ser conduzido sob pressão para garantir a homogeneidade da amostra. Usando uma seringa de 0,25 ml, uma alíquota 0,1 ml pode ser removida e transferida aos frascos HPLC para análise.

Para a análise HPLC, um Hewlett Pack.ard 1100 HPLC. completo com uma bomba quartenária, sistema de desgaseificação à vácuo válvula de injeção de seis vias, autoamostrador regulado de temperatura coluna em um detector Photodiode Array pode ser usado [Agilen Technologies disponível através Ultra Scientific Inc., 250 Smith Street, Nortl Kingstown, RI]. A coluna pode ser Waters YMC30, 5-mícron, 4,6 x 250 mn com uma coluna de proteção do mesmo material [Waters, 34 Maple Street Milford, MA]. Os solventes para a fase móvel pode ser 81 metanol: 4 água 15 tetraidrofurano (THF) estabilizado com 0,2 % de BHT (2,6-di-terc-butil~4 metilfenol). As injeções foram 20 Dl. A separação podem ser isocrática a 30 C com uma taxa de fluxo de 1,7 ml/minuto. As respostas de pico podem se medidas pela absorbância a 447 nm.

Se requerido e desejado, as etapas de cromatografla adicioní com uma resina adequada pode seguir. Vantajosamente, o ácido ganie aminobutírico ainda pode ser purificado com um RTHPLC denominad< Como misturas de eluente de acetonitrila/água ou clorofórmio/acetonitrf podem ser usados. Se necessário, estas etapas de cromtografia pode s< repetida, usando outras ou resinas de cromatografia idênticas. O trabalhador habilitado é familiar com a seleção da resina de cromtaografla adequada e o uso mais efetivo para uma molécula particular a ser purificada, abreviações; GC-MS, cromatografia líquida de gás /espectrometria de massa; TLC, cromatografia de camada fina. A identidade e pureza dos compostos isolados podem ser determinados pela técnica antes da técnica. Esta abrange a cromatografia líquido de desempenho alto (HPLC), cromatografia de gás (GC), métodos espectroscópicos, espectrometria de massa (MS), métodos de fingimento, cromatografia de camada fina, NIRS, ensaios de enzima ou ensaios microbiológicos. Estes métodos analíticos são colecionados em: Patek et al. (1994) Appl. Environ. Microbiol. 60:133-140; Malakhova et al. (1996) Biotekhnologiya 11 27-32; and Schmidt et al. (1998) Bioprocess Engineer. 19:67-70. Ulmann's Encyclopedia of Industrial Chemistry (1996) Bd. A27. VCEI Weinheim, pp. 89-90, pp. 521-540, pp. 540-547, pp. 559-566, 575-581 and pp. 581-587; Michal, G (1999) Biochemical Pathways: An Atlas ol Biochemistry and Molecular Riology, John Wiley and Sons; Fallon, A. et al (1987) Pedidos of HPLC in Biochemistry in: Laboratory Techniques ir Biochemistry and Molecular Biology, vol. 17. O ácido gama-aminobutírico obtido no processo é adequadt como o material de partida para a síntese dos produtos adicionais de valor Por exemplo, este pode ser usado em combinação com cada outro ou sozinh< para a produção de farmacêuticos, gêneros alimentícios, alimentos de origen animal ou cosméticos. Consequentemente, a presente invenção diz respeito a< método para a produção de farmacêuticos, gêneros alimentícios, alimentos d origem animal, nutrientes ou cosméticos que compreendem as etapas d processo de acordo com a invenção, incluindo o isolamento da composição d ácido gama-aminobutírico produzido ou o GABA produzido se desejado e formulação do produto com um carreador farmacêutico adequado o formulação do produto em uma forma aceitável para uma aplicação na agricultura. Ainda em uma forma de realização de acordo com a invenção é o uso do ácido gama-aminobutírico produzido no processo ou dos organismos transgênicos nos alimentos de origem animal, gêneros alimentícios, remédios, suplementos alimentares, cosméticos ou farmacêuticos ou para a produção do ácido gama-aminobutírico por exemplo após isolamento do GABA ou sem, por exemplo in situ, no organismo usado para o processo para a produção de GABA.

As plantas da invenção, por exemplo tendo um conteúdo GABA aumentado, tem uma absorção de nitrogênio aumentada. Adicionalmente estas plantas tem um aumento da assimilação de nitrogênio e utilização, preferivelmente na disposição de nitrogênio baixo e/ou privação dt nitrogênio.

Em uma forma de realização da presente invenção, um;: absorção de nitrogênio intensificado leva a uma eficiência do uso d< nitrogênio aumentado. Uma eficiência do uso de nitrogênio aumentado aind; está em uma forma de realização de uma absorção de nitrogênio intensificado assimilação e utilização, Em uma forma de realização da presente invenção, um aberção de nitrogênio aumentado leva a uma produção vegetal aumentadr Deste modo urna produção aumentada é mediada pelo aumento da “eficiênci do uso de nitrogênio de uma planta”.

Em uma forma de realização as plantas da invenção mostrai um conteúdo GABA aumentado e uma absorção de nitrogênio aumentadi Em uma forma de realização estas plantas tem adicionalmente uir assimilação e utilização de nitrogênio aumentado, preferivelmente r disposição de nitrogênio baixa e/ou privação de nitrogêni Em uma forma de realização das plantas da invenção mostram um conteúc GABA aumentado e eficiência do uso de nitrogênio aumentad Em uma forma de realização das plantas da presente invenção tem um conteúdo GABA aumentado e produção vegetal aumentada.

Ainda em uma forma de realização, uma tolerância aumentada a tensão abiótica ambiental e/ou característica relacionada ao rendimento aumentado, em particular eficiência do uso de nutriente aumentado, preferivelmente eficiência do uso de nitrogênio, comparado a um correspondente não modificado, por exemplo uma planta de tipo selvagem não transformada é conferida se uma atividade de um polipeptídeo compreende um polipeptídeo mostrado na SEQ ID N°. 43, ou codificado por uma molécula de ácido nucleico que compreende a molécula de ácido nucleico mostrada na SEQ ID N°. 42, ou um homólogo da dita molécula de ácido nucleico ou polipeptídeo, é aumentada ou gerada. Por exemplo, a atividade da molécula de ácido nucleico correspondente ou um polipeptídec derivado de Saccharomyces cerevisiae é aumentada ou gerada, preferivelmente que compreende a molécula de ácido nucleico mostrada ηε SEQ ID N°. 42 ou polipeptídeo mostrado na SEQ ID N°. 43, respectivamente ou um homólogo deste. Por exemplo urna tolerância aumentada a tensãc ambiental abiótica e/ou característica relacionada ao rendimento aumentado em particular eficiência do uso de nutriente aumentado, preferi velmentf eficiência do uso de nitrogênio, comparado a um correspondente nã< modificado, por exemplo uma planta de tipo selvagem não transformada i conferida se uma atividade “Proteína de captura de fator ” ou se a atividade d uma molécula de ácido nucleico ou um polipeptídeo compreende um ácid nucleico ou polipeptídeo ou a sequência consenso ou o motivo d polipeptídeo, descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7, mesma linha respectiv como SEQ ID N°.: 42 ou SEQ ID N°.: 43, respectivamente, é aumentada o gerada em uma planta ou parte deste. Preferivelmente, o aumento ocorr citoplásmico.

Particularmente, um aumento do rendimento de 1,05—vezes 1,28- vezes, por exemplo mais pelo menos 100 % destes, é conferido comparado a um controle correspondente, por exemplo uma planta de tipo selvagem, não transformada, por exemplo não modificada.

Ainda em uma forma de realização, uma tolerância aumentada a tensão ambiental abiótica e/ou característica relacionada ao rendimento aumentado, em particular eficiência do uso de nutriente aumentado, preferivelmente eficiência do uso de nitrogênio, comparado a um correspondente não modificado, por exemplo uma planta de tipo selvagem não transformada é conferida se uma atividade de um polipeptídeo compreende um polipeptídeo mostrado na SEQ ID N°. 7138, ou codificado por uma molécula de ácido nucleico que compreende a molécula de ácido nucleico mostrada na SEQ ID N°. 7137, ou um homólogo da dita molécula de ácido nucleico ou polipeptídeo, é aumentada ou gerada. Por exemplo, a atividade da molécula de ácido nucleico correspondente ou um polipeptídec derivado de Saccharomyces cerevisiae é aumentada ou gerada preferivelmente que compreende a molécula de ácido nucleico mostrada nt SEQ ID N°. 7137 ou polipeptídeo mostrado na SEQ ID N°. 7138 respectivamente, ou um homólogo deste. Por exemplo uma tolerâncu aumentada a tensão ambiental abiótica e/ou característica relacionada a( rendimento aumentado, em particular eficiência do uso de nutrient< aumentado, preferivelmente eficiência do uso de nitrogênio, comparado a un correspondente não modificado, por exemplo uma planta de tipo selvagen não transformada é conferida se uma atividade “beta-queto-redutas microssomal” ou se a atividade de uma molécula de ácido nucleico ou ur polipeptídeo compreende um ácido nucleico ou polipeptídeo ou a sequênci consenso ou o motivo de polipeptídeo, descrito na tabela I, II ou IV, coluna Ί mesma linha respectiva como SEQ ID N°.: 7137 ou SEQ ID N°.: 7131 respectivamente, é aumentada ou gerada em uma planta ou parte deste Preferivelmente, o aumento ocorre citoplásmico.

Particularmente, um aumento do rendimento de 1,05 vezes a 1,38 vezes , por exemplo mais pelo menos 100 % destes, é conferido comparado a um controle correspondente, por exemplo uma planta de tipo selvagem, não transformada, por exemplo não modificada.

Ainda em uma forma de realização, uma tolerância aumentada a tensão ambiental abiótica e/ou característica relacionada ao rendimento aumentado, em particular eficiência do uso de nutriente aumentado, preferivelmente eficiência do uso de nitrogênio, comparado a um correspondente não modificado, por exemplo uma planta de tipo selvagem não transformada é conferida se uma atividade de um polipeptídeo compreende um polipeptídeo mostrado na SEQ ID N°. 8240, ou codificado por uma molécula de ácido nucleico que compreende a molécula de ácido nucleico mostrada na SEQ ID N°. 8239, ou um homólogo da dita molécula de ácido nucleico ou polipeptídeo, é aumentada ou gerada. Por exemplo, ε atividade da molécula de ácido nucleico correspondente ou um polipeptídec derivado de Saccharomyces cerevisiae é aumentada ou gerada preferivelmente que compreende a molécula de ácido nucleico mostrada m SEQ ID N°. 8239 ou polipeptídeo mostrado na SEQ ID N°. 8240 respectivamente, ou um homólogo deste. Por exemplo uma tolerânci: aumentada a tensão ambiental abiótica e/ou característica relacionada a< rendimento aumentado, em particular eficiência do uso de nutrient aumentado, preferivelmente eficiência do uso de nitrogênio, comparado a un correspondente não modificado, por exemplo uma planta de tipo selvager não transformada é conferida se uma atividade “proteína ribossomal 60S” o se a atividade de uma molécula de ácido nucleico ou um polipeptíde compreende um ácido nucleico ou polipeptídeo ou a sequência consenso ou motivo de polipeptídeo, descrito na tabela I, II ou IV, coluna 7, mesma linb respectiva como SEQ ID N°.: 8239 ou SEQ ID N°.: 8240, respectivamente, aumentada ou gerada em uma planta ou parte deste. Preferivelmente, aumento ocorre citoplásmico.

Particularmente, um aumento do rendimento de 1,05 vezes a 1,223 vezes, por exemplo mais pelo menos 100 % destes, é conferido comparado a um controle correspondente, por exemplo uma planta de tipo selvagem, não transformada, por exemplo não modificada.

Ainda em uma forma de realização, uma tolerância aumentada a tensão ambiental abiótica e/ou característica relacionada ao rendimento aumentado, em particular eficiência do uso de nutriente aumentado, preferivelmente eficiência do uso de nitrogênio, comparado a um correspondente não modificado, por exemplo uma planta de tipo selvagem não transformada é conferida se uma atividade de um polipeptídeo compreende um polipeptídeo mostrado na SEQ ID N°. 8228, ou codificados por uma molécula de ácido nucleico que compreende a molécula de ácidc nucleico mostrada na SEQ ID N°. 8227, ou um homólogo da dita molécula de ácido nucleico ou polipeptídeo, é aumentada ou gerada. Por exemplo, ε atividade da molécula de ácido nucleico correspondente ou um polipeptídeo derivado de Sacchaxomyces cerevisiae é aumentada ou gerada preferivelmente que compreende a molécula de ácido nucleico mostrada n; SEQ ID N°. 8227 ou polipeptídeo mostrado na SEQ ID N°. 8228 respectivamente, ou um homólogo deste. Por exemplo uma tolerânci; aumentada a tensão ambiental abiótica e/ou característica relacionada a< rendimento aumentado, em particular eficiência do uso de nutrient aumentado, preferivelmente eficiência do uso de nitrogênio, comparado a ur correspondente não modificado, por exemplo uma planta de tipo selvager não transformada é conferida se uma atividade “subunidade VIII de citocrom c oxidase” ou se a atividade de uma molécula de ácido nucleico ou ur polipeptídeo compreende um ácido nucleico ou polipeptídeo ou a sequênci consenso ou o motivo de polipeptídeo, descrito na tabela I, II ou IV, coluna ' mesma linha respectiva como SEQ ID N°.: 8227 ou SEQ ID N°.: 822! respectivamente, é aumentada ou gerada em uma planta ou parte deste. Preferivelmente, o aumento ocorre citoplásmico.

Particularmente, um aumento do rendimento de 1,05 vezes a 1,56 vezes, por exemplo mais pelo menos 100 % destes, é conferido comparado a um controle correspondente, por exemplo uma planta de tipo selvagem, não transformada, por exemplo não modificada.

Foi observado que o aumento ou geração da atividade de um gene mostrado na tabela X, por exemplo a molécula de ácido nucleico derivada da molécula de ácido nucleico mostrada na tabela X em A. thaliana confere a eficiência do uso de nutriente aumentado, preferivelmente eficiência do uso de nitrogênio, comparado ao controle de tipo selvagem. Deste modo, em uma forma de realização, a molécula de ácido nucleico indicada na tabela X ou seu homólogo como indicado na tabela I ou um produto de expressão é usado no método da presente invenção, eficiência do uso de nutriente aumentado, preferivelmente eficiência do uso de nitrogênio, da plante comparada ao controle de tipo selvagem.

Em uma forma de realização da invenção o NUE intensificadc é determinado e quantificado de acordo com os seguintes métodos: Procedimento 1: Produção de biomassa nas placas de ágar: Para avaliação das plantas transgênicas uma facilidade d< cultura específica é usada. For hígh-throughputpurposes plants são avaliado pela produção de biomassa nas placas de ágar com fornecimento limitado d nitrogênio (adaptado de Estelle and Somerville, 1987). This screenm pipeline consiste de dois níveis. As linhas transgênicas são submetidas a nível subsequente se a produção de biomassa for significantemente melhorad em comparação as plantas de tipo selvagem. Com cada nível o número d replicados e estringência estatística foi aumentado.

Para a semeadura, as sementes, que podem ser armazenadas n refrigerador (a -20° C), podem ser removidas a partir dos tubos Eppendorf com a ajuda de um palito de dente e transferidas nas placas de ágar mencionadas acima, com o fornecimento limitado de nitrogênio (0,05 mM de KNO3). No total, aproximadamente 15 a 30 sementes podem scr distribuídas horizontamente em cada placa (12 x 12 cm).

Após as sementes serem semeadas, as placas são submetidas à estratificação por 2~4 dias no escuro a 4o C. Após a estratiflcação, as plantas testadas são desenvolvidas por 22 a 25 dias no ritmo de 16 horas de luz, 8 horas de escuro a 20° C, uma umidade atmosférica de 60 % e uma concentração de CO2 de aproximadamente 400 ppm. As fontes de luz a serem usadas geram uma luz parecida ao espectro de cor solar com uma intensidade • 'y » de luz de aproximadamente 100 μΕ/nTs. Após 10 a 11 dias as plantas sãc individualizadas. O desenvolvimento melhorado sob as condições limitadas de nitrogênio é avaliada pela produção d.e biomassa de brotos e raízes daí plantas transgênicas em comparação as plantas de controle de tipo selvagen: após 20 a 25 dias de desenvolvimento.

As linhas transgênicas mostram uma produção de biomassí aumentada signi 11 cante em comparação as plantas de tipo selvagem que sãe submetidas ao experimento seguinte do nível subsequente: Produção de biomassa no solo: As sementes de Arabidopsis thaliana foram semeadas em pote contendo uma mistura 1:1 (v/v) do solo desprovido de nutrient (“Einheitserde Typ 0”, 30 % clay, Tantau, Wansdorf Germany) e areia. G germinação é induzida por quatro dias no período a 4o C, no escure Subsequentemente as plantas são desenvolvidas sob condições d desenvolvimento padrão (fotoperíodo por 16 horas de luz e 8 horas de escure 20° C, 60 % de umidade relativa e uma densidade defluxo de fóton de 20 μΕ/m s). As plantas são desenvolvidas e cultivadas, inter alia estas sã submetidas à água a cada seungod dia com uma solução desprovida c nutriente N. A solução desprovida de nutriente N por exemplo contém água inferior Após 9 a 10 dias as plantas são individualizadas. Após um total de tempo de 29 a 31 dias as plantas são coletadas e taxadas pelo pese fresco das partes aeriais das plantas. O aumento de biomassa pode ser medide como razão do peso fresco das partes aeriais da planta de transgene respectivg e a planta de tipo sel vagem não transgênica.

Procedimento 2: O procedimento 2 pode ser realizado semelhante at procedimento 1, entretanto, a avaliação das placas de ágar é omitida e unií avaliação de um nível no solo é realizado.

Em toda parte da mesma aplicação, várias publicações sã< referenciadas. As descobertas de todas estas publicações e aquelas referência citadas dentro destas publicações em sua totalidade são portanto, incorporada por referência nesta aplicação a fim de totalmente descrever o estado d técnica cuja a invenção pertence.

Também deve ser entendido que o precedente diz respeito formas de realização preferidas da presente invenção e que mudança numerosas e variações podem ser feitas sem divergir a partir do escopo d invenção. A invenção ainda é ilustrada pelos seguintes exemplos, que sã construídas em muitas maneiras como limitante. Pelo contrário, é claramenl entendido que outras várias formas de realização, modificações e equivalente destes, que, após a leitura da descrição neste, pode sugerir àquela pessoa habilitada na técnica sem divergir a partir do espírito da presente invenção e/ou o escopo das reivindicações.

Exemplo 1 Projeto de plantas Arabidopsis pela expressão de genes da presente invenção.

Exemplo la Clonagem das sequências inventivas como mostrado na tabela I, coluna 5, para a expressão em plantas. A não ser de outra maneira especificado, os métodos padrãc descritos em Sambrook et al., Molecular Cloning: A laboratory manual, Cole Spring Harbor 1989, Co kl Spring Harbor Laboratory Press são usados.

As sequências inventivas como mostrado na tabela I, coluna 5 foram amplificados por PCR como descrito no protocol do Pfu Ultra, Pfi Turbo ou Herculase DNA polimerase (Stratagene). A composição para o protocol do Pfu Ultra, Pfu Turbo oi Herculase DNA polimerase foi como segue: 1 x tampão de PCR (Stratagene] 0,2 mM de cada dNTP, 100 ng de DNA genômico de Saccharomyce cerevisiae (cepa S288C; Research Genetics, Inc., now Invitrogen] Bscherichia coli (cepa MG 1655; E.coli Genetic Stock Center), Synechocysti sp. (cepa PCC6803), Azotobacter vinelandii (cepa N.R. Smith,16), Thermu thermophilus (HB8) ou 50 ng de cDNA de vários tecidos e estágios d desenvolvimento de Arabidopsis thaliana (ecotipo Columbia), Physcomitrell patens, Glycine max (variedade Resnick) ou Zea mays (variedade B73, Mol' Al 88), iniciador avançado 50 pmol, iniciador reverse 50 pmol, com ou sem M de Betaína, 2,5 u Pfu Ultra, Pfu Turbo ou Herculase DNA polimerase.

Os ciclos de amplificação foram como segue: 1 ciclo de 2 a 3 minutos de 94 a 95° C, depois 25 a 36 ciclc com 30 a 60 segundos de 94 a 95° C, 30 a 45 segundos de 50 a 60° C e de 21 a 480 segundos a 72° C, seguido por 1 ciclo de 5 a 10 minutos a 72° C, depois 4 a 16° C — preferivelmente para Saccharomyces cerevisiae; Escherichia coli, Synechocystis sp., Azotobacter vinelandii, Thermus thermophilus .

No caso de Arabidopsis thaliana, Brassica napus, Glycine max, Oiyza sativa, Physcomitrella patens, Zea mays os ciclos de amplificação foram como segue: 1 ciclo com 30 segundos a 94° C, 30 segundos a 61° C, 15 minutos a 72° C, depois 2 ciclos com 30 segundos a 94° C, 30 segundos a 60° C, 15 minutos a 72° C, depois 3 ciclos com 30 segundos a 94° C, 30 segundos a 59° C, 15 minutos a 72° C, depois 4 ciclos com 30 segundos a 94° C, 30 segundos a 58c C, 15 minutos a 72° C, depois 25 ciclos com 30 segundos a 94° C, 30 segundos a 57c C, 15 minutos a 72° C, depois 1 ciclo com 10 minutos a 72° C, depois finalmente 4 a 16° C. O RNA foi gerado com o RNeasy Plant Kit de acordo com un protocol padrão (Qiagen) e Supersript II Reverse Transkriptase foi usado par: a produção de um cDNA de filamento duplo de acordo com um protocol· padrão (Invitrogen).

Os pares de iniciadores específicos de ORF para os genes ; serem expressados são mostrados na tabela III, coluna 7. As seguinte sequências adaptadoras foram adicionadas a iniciadores específicos de ORJ de Saccharomyces cerevisiae para os propósitos de clonagem: i) iniciador avançado: 5-GGAATTCCAGCTGACCACC-3" SEQ ID N°: 1 ii) iniciador reverso: 5'-GATCCCCGGGAATTGCCATG-3' SEQ IDN°: 2 As sequências adapatadoras permitem a clonagem do ORF nos vários vetores contendo um adaptador de Resgen, ver tabela, coluna E da tabela VII.

As seguintes sequências adaptadoras a iniciadores específicos de ORF de Saccharomyces cerevisiae, Escherichia coli, Synechocystis sp., Azotobacter vinelandii, Thermus thermophilus, Arabidopsis thaliana, Brassica napus ou Physcomitrella patens para os propósitos de clonagem: iii) iniciador avançado:5'-TTGCTCTTCC- 3" SEQ IDN°:3 nu) miciador reverso:5 -TTGCTCTTCG-3 SEQ ID N°: 4 As sequências adaptadoras permitem a clonagem do ORF nos vários vetores contendo um adaptador Colic, ver coluna E da tabela VIL

Portanto para a amplificação e clonagem de Saccharomyces cerevisiae SEQ ID N°: 42, um iniciador que consiste da sequência aptadora i e a sequência específica de ORF SEQ ID N°: 48 e um segundo iniciador qm consiste da sequência aptadora ii) e a sequência específica de ORF SEQ IE N°: 49 ou um iniciador que consiste da sequência aptadora iii) e a sequênci: específica de ORF SEQ ID N°: 48 e um segundo iniciador que consiste d; sequência aptadora iiii) e a sequência específica de ORE' SEQ ID N°: 4' foram usados.

Para a amplificação e clonagem de Echerichia coli SEQ ID Nc 4068, um iniciador que consiste da sequência aptadora iii) e a sequênci específica de ORF SEQ ID N°: 4160 e um segundo iniciador que consiste d sequência aptadora iiii) e a sequência específica dc ORF SEQ ID N°: 416 foram usados.

Para a amplificação e clonagem de Synechocystis sp. SEQ TT N°: 6041, um iniciador que consiste da sequência aptadora iii) e a sequênci específica de ORF SEQ ID N°: 6461 e um segundo iniciador que consiste da sequência aptadora iiii) e a sequência específica de ORF SEQ ID N°: 6462 foram usados.

Para a amplificação e clonagem de Azotobacter vinelandii SEQ ID N°: 2553, um iniciador que consiste da sequência aptadora iii) e a sequência específica de ORF SEQ ID N°: 3397 e um segundo iniciador que consiste da sequência aptadora iiii) e a sequência específica de ORF SEQ ID N°: 3398 foram usados.

Para a amplificação e clonagem de Thermus thermophilus SEQ ID N°: 6469, um iniciador que consiste da sequência aptadora iii) e a sequência específica de ORF SEQ ID N°: 6735 e um segundo iniciador que consiste da sequência aptadora iiii) e a sequência específica de ORF SEQ ID N°: 6736 foram usados.

Para a amplificação e clonagem de Arabidopsis thaliana SEQ ID N°: 654, um iniciador que consi.ste da sequência aptadora iii) e a sequência específica de ORF SEQ ID N°: 694 e um segundo iniciador que consiste da sequência aptadora iiii) e a sequência específica de ORF SEQ ID N°: 695 foram usados.

Para a amplificação e clonagem de Brassica napus SEQ ID N° 53, um iniciador que consiste da sequência aptadora iii) e a sequênci; específica de ORF SEQ ID N°: 649 e um segundo iniciador que consiste dí sequência aptadora iiii) e a sequência específica de ORF SEQ ID N°: 65( foram usados.

Para a amplificação e clonagem de Physcomitrella patens SEC ID N°: 5458, um iniciador que consiste da sequência aptadora iii) e ; sequência específica de ORF SEQ ID N°: 6038 e um segundo iniciador qu consiste da sequência aptadora iiii) e a sequência específica de ORF SEQ II N°: 6039 foram usados.

Seguindo estes exemplos, cada sequência divulgada na tabel í, preferivelmente coluna 5, pode ser clonada fundindo-se as sequências adaptadoras às sequências iníciadoras específicas respectivas comodivulgado na tabela III, coluna 7 usando os vetores respectivos mostrados na tabela VII.

Tabela VIL Visão geral dos vetores diferentes usados para a clonagem dos ORFs, sua listagem SEQ IDs (coluna A), seus nomes de vetores (coluna B), os promotores que estes contém para a expressão do ORFs (coluna C), a coluna de sequência de alvejamento artificial adicional D), a sequência adaptadora (coluna E), um tipo de expressão conferido pelo promotor mencionado na coluna C (coluna F) e o número da figura (coluna G).

Exemplo lb) Construção de vetores binários para a expressão não alvejad; de proteínas. A expressão “não alvejada” neste contexto, significa qn nenhuma sequência de alvejamento adicional foi adicionada ao ORF a se expressado.

Para a expressão não alvejada em, preferivelmente, tecido verdes, os seguintes vetores binários foram usados para a clonagem pMTX155, VC-MME220-1 qcz e VC-MME221-lqcz.

Para a expressão constitutiva de ORFs de Saccharomyces cerevisiae preferivelmente em tecidos verdes o promotor de 35S intensificado (Big35S) (Comai et al., Plant Mol Biol 15, 373-383 (1990)) no contexto do vetor pMTX155 foi usado.

Para a expressão constitutiva de ORFs de Echerichia coli preferivelmente em tecidos verdes um promotor artificial A(ocs)3AmasPmas (Super promoter) (Ni et al,. Plant Journal 7, 661 (1995), WO 95/14098) no contexto do vetor VC-MME220-lqcz foi usado.

Para a expressão constitutiva preferivelmente em tecidos verdes e sementes o promotor de PcUbi de parsley (Kawalleck et al., Plant. Molecular Biology, 21, 673 (1993), WO 2003/102198) foi usado no contexto do vetor VC-MME221-lqcz para ORFs de Saccharomyces cerevisiae, Echerichia coli, Synechocystis sp., Azotobacter vinelandii, Thermus thermophilus, Arabidopsis thaliana, Brassica napus, Glycine rnax, Oryza sativa, Physcomitrella patens ou Zea mays.

Exemplo I c) Construção de vetores binários para expressão alvejada plastídica de proteínas Amplificação da sequência alvej adora de plastídeo do gene FNR de Spinacia oleracea e construção de vetor para a expressão alvejada de plastídeo em tecidos verdes preferenciais ou preferencial em semente. A fim de amplificar a sequência de alvejamento do gene FNR de S. oleracea, o DNA genômico foi extraído a partir de folhas de 4 semanas de idade de plantas de S. oleracea (DNeasy Plant Mini Kit, Qiagen, Hilden). O gDNA foi usado como o padrão para um PCR.

Para oermitir a clonagem da sequência de trânsito no vetoi vector VC-MME489-1QCZ, uma sequência de reconhecimento de enzima de restrição EcoRI foi adicionado tanto a iniciador avançado quanto reverso visto que para a clonagem no vetor VC-MME220-lqcz e VC-MME221 -1 qc; uma sequência de reconhecimento de enzima de restrição Pmel foi adicionado ao iniciador avançado e um iocal Ncol foi adicionado ao iniciador reverso.

FNRSEcoResgenATA gAA TTC gCA TA A ACT TAT CTT CAT AgT TgC C SEQ ID N°: 5 FNR3EcoResgenATA gAA TTC AgA ggC gAT CTg ggC

CCT SEQ ID N°: 6 FNR5PmeColicATA gTT TA A ACg CAT AAA CTT A TC TTC ATA gTT gCC SEQ ID N°: 7 FNR3NcoCo]icATA CCA Tgg AAg AgC AAg Agg CgA TCT

ggg CCC T SEQ ID N°: 8 A sequência resultante SEQ ID N°: 28 amplificada do DNA de espinafre genômico, compreendeu um 5'UTR (bp 1-165) e a regiãc codificadora (bp 166-273 and 351-419). A sequência codificadora e interrompida por uma sequência intrônica de bp 274 abp 350: gcataaacttatcttcatagttgccactccaatttgctccttgaatctcctccacccaatacat aatccactcctccatcaccc acttcactactaaatcaaacttaactctgtttttctctctcctcctttcatttcttattcttccaatc atcgtactccgccatgaccac cgctgtcaccgccgctgtttctttcccctctaccaaaaccacctctctctccgcccgaagc tcctccgtcatttcccctgaca aaatcagctacaaaaaggtgattcccaatttcactgtgttttttattaataatttgttattttgat gatgagatgattaatttgggt gctgcaggttcctttgtactacaggaatgtatctgcaactgggaaaatgggacccatcag ggcccagatcgcctct (SEQ ID N°: 28) O fragmento de PCR derivado com os iniciadore FNRSEcoResgen e FNR3EcoResgen foi digerido com EcoRI e ligado no vetor VC-MME489-1QCZ que foi digerido com EcoRI. A orientação correta da sequência alvej adora de FNR foi testada pelo scquenciamento. O vetor gerado nesta etapa de ligação foi VC-MME354-1QCZ. O fragmento de PCR derivado com os iniciadores FNR5PmeCol ic e FNR3NcoColic· foi digerido com Pmel e Ncol e ligado no vetor VC-MME220-lqcz e VC-MME221-lqcz que foi digerido com Smal e Ncol. O vetor gerado nesta etapa de ligação foi VC-MME432-lqcz e pMTX447korrp.

Para a expressão constitutiva alvejada plastídica preferivelmente em tecidos verdes um promotor artificial A(ocs)3AmasPmas (Super promotor) (Ni et ai.. Planl Journal 7, 661 (1995), WO 95/14098) foi usado no contexto do vetor VC-MME354-1QCZ para ORFs a partir de Saccharomyces cerevisiae e no contexto do vetor VC-MME432-lqcz pare ORFs a partir de Escherichia coli, resultando na fusão “in-frame” d£ sequência alvejadora de FNR com os ORFs.

Para a expressão constitutiva alvejada plastídica preferivelmente em tecidos verdes e sementes, o promotor PcUbi foi usado nc contexto do vetor pMTX447korrp para ORFs de Saccharomyces cerevisiae Echerichia coli, Synechocystis sp., Azotobacter vinelandii, Thernru: thermophilus, Arabidopsis thaliana, Brassica napus, Glycine max, Oryzí sativa, Physcomitrella patens ou Zea mays, resultando na fusão “in-frame” dí sequência alvejadora de FNR com os ORFs.

Exemplo ld) Clonagem de sequências inventivas como mostrado na tabel; I, coluna 5 e 7 nos vetores de expressão diferentes.

Para a clonagem, os ORFs de S. cerevisiae em vetore contendo uma sequência adaptadora de Resgen, o DNA do vetor respectiv» foi tratado com a enzima de restrição Ncol. Para a clonagem de ORFs d Saccharomyces cerevisiae em vetores contendo uma sequência adaptadora Colic, o DNA do vetor respectivo foi tratado coma as enzimas de restrição PacI e Ncol seguindo o protocolo padrão (MBI Fermentas). Para a clonagem de ORFs de Escherichia coli, Synechocystis sp., Azotobacter vinelandii, Thermus thermophilus, Arabidopsis thaliana, Brassica napus, Glycine max, Oryza sativa, Physcomitrella patens, ou Zea mays, o DNA do vetor foi tratado com as enzimas de restrição PacI e Ncol seguindo o protocolo padrão (MBI Fermentas). Em todos os casos, a reação foi interrompida pela inativação a 70° C por 20 minutos e purificado em colunas and purified over QIAquick ou NucleoSpin Extract II seguindo o protocolo padrão (Qiagen ou Macherey-Nagel).

Então, o produto de PCR que representa o ORF amplificado com as sequências adaptadoras respectivas e o DNA do vetor foram tratados com T4 DNA polimerase de acordo com um protocolo padrão (MBI Fermentas) para a produção de projeções de filamento duplo com os parâmetros de 1 unidade de T4 DNA polimerase a 37° C por 2 a 10 minutos para o vetor e 1 a 2 u de T4 DNA polimei'ase de 15 a 17° C por 10 a 60 minutos para o produto de PCR representante. A reação foi interrompida pela adição de tampão com alto teoi de sal e purificado em colunas QIAquick ou NucleoSpin Extract II seguindo c protocolo padrão (Qiagen ou Macherey -Nagel).

De acordo com este exemplo a pessoa habilitada é capaz de clonar todas as sequências divulgadas na tabela I, preferivelmente coluna 5.

Exemplo le) Transformação de Planta Aproximadamente 30 a 60 ng de vetor preparado e umr quantidade definida de amplificado preparado foram misturados e hibridizados a 65° C por 15 minutos seguido por 37° C 0,1° C/l segundo seguido por 37° C 10 minutos, seguido por 0,1 ° C/l segundo, depois 4 a 10' c.

As construções ligadas foram transformadas no mesmo vaso de reação pela adição de células E. coli. competentes (cepa DH5alfa) e incubação por 20 minutos de Io C seguido por um choque de calor por 90 segundos a 42° C e esfriamento de 1 a 4o C. Então, meio completo (SOC) foi adicionado e a mistura foi incubada por 45 minutos a 37° C. A mistura total foi subsequentemente colocada em uma placa de ágar com 0,05 mg/ml de canamicina e incubado durante a noite a 37° C. 0 resultado da etapa de clonagem foi verificado pela amplificação com a ajuda de iniciadores que ligam-se a montante e a jusante do local de integração, deste modo, permitindo a amplificação da inserção. As amplificações foram realizadas como descrito no protocolo de Taq DNA polimerase (Gibco-BRL).

Os ciclos de amplificação foram como segue: 1 ciclo de 1 a 5 minutos de 94° C, seguido por 35 ciclos de cada caso 15 a 60 segundos a 94° C, 15 a 60 segundos de 50 a 66° C e de 5 a 15 minutos a 72° C, seguido por 1 ciclo de 10 minutos a 72° (', depois 4 a 16o C.

Diversas colônias foram verificadas, mas apenas a colônia para a qual um produto de PCR do tamanho esperado foi detectado, foi usada nas seguintes etapas.

Uma porção desta colônia positiva foi transferida em urr recipiente de reação com meio completo (UB) suplementado com canamiciní e incubado durante a noite a 37° C. A preparação de plasmídeo foi realizada emo especificado nc protocolo padrão Qiaprep ou NucleoSpin Multi-96 Plus (Qiagen oi Macherey-N age 1). A geração de plantas transgênicas que expressam SEQ ID N° 42 ou qualqur ontra sequência divulgada na tabela I, preferivelmente coluna 5 1 a 5 ng do DNA de plasmídeo isolado foi transformado por electroporação ou transformação em células competentes de Agrobacterium tumefaciens, da cepa strain GV 3101 pMP90 (Koncz and Schell, Mol. Gen. Gent. 204, 383 (1986)). A seguir, meio completo, (YEP) foi adicionado e a mistura foi transferida em um recipiente de reação fresco por 3 horas a 28° C. A seguir, toda a mistura de reação foi colocada em placas de ágar YEP suplementadas com os antibióticos respectivos, por exemplo, rifampicina (0,1 mg/ml), gentamicina (0,025 mg/ml e canamicina (0,05 mg/ml) e incubado por 48 horas a 28° C.

As agrobactérias que contêm a construção de plasmídeo foram usadas para a transformação de plantas.

Uma colônia foi retirada da placa de ágar com a ajuda de uma ponta de pipeta e absorvida em 3 ml de meio TB líquido, que também continha antibióticos adequados como descrito acima. A pré-cultura fo: desenvolvida por 48 horas a 28° C e 120 rpm. 400 ml de meio LB contendo os mesmos antibióticos comc acima foram usados para a cultura principal. A pré-cultura foi transferida m cultura principal. Esta foi desenvolvida por 18 horas a 28° C e 120 rpm. Após a centrifugação a 4.000 rpm, o grânulo foi recolocado em suspensão no meie de infiltração (meio MS, 10 % de sacarose). A fim de desenvolver as plantas para transformação, placa: (Piki Saat 80, verdes, fornecidas com um fundo de tela, 30 x 20 x 4,5 cm, d< Wiesauplast, Kunststofftechnik, Germany) foram enchidas até a metade con um substrato GS 90 (standard soil, Werkverband E.V., Germany). As placa: foram irrigadas durante a noite com solução Proplant a 0,05 % (Chimac Apriphar, Belgium). Sementes de Arabidopsis thaliana C24 (Nottinghan Arabidopsis Stock Centre, UK; NASC Stock N906) foram espalhadas sobre ; placa, aproximadamente 1.000 sementes por placa. As placas foram coberta com uma tampa e colocadas na instalação de estratificação (8 h, 11 < pmoI/m2s 1, 22° C; 16 h, escuro, 6o C). Após 5 dias, as placas foram colocadas na câmara de ambiente controlado de dia curto (8 h, 130 pmol/m2sl, 22° C; 16 h, escuro, 20° C), onde estas permaneceram por aproximadamente 10 dias ate as primeiras folhas verdadeiras terem se formado.

As mudas foram transferidas a vasos contendo um mesmo substrato (Teku pots, 7 cm, LC series, fabricado por Põppelmann GmbH & Co, Germany). Cinco plantas foram puncionadas em cada vaso. Os vaos foram depois retomados na câmara de ambiente controlado de dia curto para a planta continuar o desenvolvimento.

Após 10 dias, as plantas foram transferidas na cabine da estufa (iluminação complementar, 16 h, 340 pE/m2s, 22° C; 8 h, escuro, 20° C), onde estas foram deixadas desenvolver por 17 days.

Para a transformação, plantas de Arabidopsis de seis semanas de idade, que teve o florescimento iniciado foram imersos por 10 segundos na suspensão agrobacteríana descrita acima que foi previamente tratada com 10 μΐ Silwett L77 (Crompton S.A., Osi Specialties, Switzerland). O método em questão é descrito por Clough J.C. and Bent A.F. (Plant J. 16, 735 (1998)).

As plantas foram subsequentemente colocadas por 18 horas em uma câmara úmida. A seguir, os vasos foram retornados à estufa para as plantas continuarem a se desenvolver. As planta permaneceram na estufa poi outras 10 semanas até as sementes estarem prontas para a colheita.

Dependendo do marcador de resistência usado para a seleçãc das plantas transformadas, as sementas coletadas foram plantadas na estufa c submetidas a uma seleção por pulverização ou ainda primeiro esterilizadas t depois desenvolvida em placas de ágar complementadas com o agente d< seleção respectivo. Visto que o vetor continha o gene bar como o marcador d< resistência, as mudas foram pulverizadas quatro vezes em um intervalo de 2 ; 3 dias com 0,02 % de BASTA® e as plantas transformadas foram deixada fixar semente.

As sementes das plantas de A. tbaliana transgênicas forama rmazenadas no congelador (a -20° C).

Exemplo 2 Material vegetal para a análise bíoanalítica Para as análises bioanalíticas das plantas transgênicas, as últimas são desenvolvidas em uma instalação de cultura específica. Para este fim, o substrato de GS-90 foi introduzido na máquina de colocação nos vasos (Laible System GmbH, Singen, Germany) e preenchidos nos potes. A seguir, 35 potes foram combinados em uma placa e tratados com Proplant. Para o tratamento, 15 ml de Proplant foram absorvidos em 10 1 de água de torneira (solução a 0,15 %). Esta quantidade foi suficiente para o tratamento de aproximadamente 280 vasos. Os vasos foram colocados na solução de Proplant e adicionalmente irrigados por cima. 3 1 de solução de Proplant (0,15 %) para 210 vasos. Estes foram usados dentro de cinco dias.

Para a semeadura, as sementes, que foram armazenadas nc refrigerador (a -20° C) foram dispersadas dos tubos de Eppendorf nos vasos No total, aproximadamente de 5 a 10 sementes foram distribuídas no meio dc vaso.

Após as sementese serem semadas, as placas com os vaso: foram cobertos com a colocação de tampas plásticas e colocadas na câmara ds estratificação por 4 dias no escuro a 4o C. A umidade foi de aproximadamenti 90 %. Após a estratificação, as plantas de teste foram desenvolvidas por 22 23 dias em um ritmo de 16 h de luz, 8 h de escuro a 20° C, uma umidad atmosférica de 60 % e uma concentração de C02 de aproximadamente 40* ppm. As fontes de luz usadas foram lâmpadas Powerstar HQI-T 250 W/I Daylight da Osram, que geram uma luz parecida com o espectro de cor sola com uma intensidade de luz de aproximadamente 220 E/m2/s-l. A seleção de plantas transgênicas foi dependente do marcadc de resistência usado. No caso do gene bar como as mudas de marcador de resistência foram pulverizadas três vezes nos dias 8 a 10 após a semeadura com 0,02 % de BASTA®, Bayer CropScience, Gemiany, Leverkusen. A resistência das plantas foi diminuída quando estas atingiram a idade de 14 dias. As plantas, que se desenvolveram melhor no centro do vaso foram consideradas as plantas alvos. Todas as plantas remanescentes foram removidas cuidadosamente com a ajuda de pinças metálicas e descartadas.

Durante seu desenvolvimento, as plantas receberam irrigação de cima com água destilada e irigação de baixo nos sulcos de colocação. Uma vez que as plantas desenvolvidas atingiram, a idade de 23 ou 24 dias, estas foram coletadas.

Exemplo 3 Análise metabólica de plantas transformadas As modificações identificadas de acordo com a invenção, nc teor dos metabóíitos descritos acima, foram identificados pelo seguinte procedimento. a) amostragem, a armazenamento das amostras a amostragem foi realizada diretamente na câmara de ambiente controlado. As plantas foram cortadas usando-se tesouras de laboratóric pequenas, pesadas rapidamente em escalas de laboratório, transferidas a un dedal de extração pré-esfriado e colocadas em um suporte de alumíni< esfriado por nitrogênio líquido. Se requerido, o dedal de extração pode se armazenado em um congelador a -80° C. O tempo que passa entre o corte d; planta ao congelamento desta em nitrogênio líquido aumentou não mais d< que 10 a 20 segundos. b) Liofilização Durante o experimento, foi tomado o cuidado de que as planta permaneceram no estado de congelamento profundo (temperaturas < -40° C ou foram isentadas de água por liofilização até o primeiro contato com o solventes. O suporte de alumínio com as amostras de plantas nos dedais de extração foi colocado na instalação de liofilização pré-esfriada (—40° C). A temperatura inicial durante a fase de secagem principal foi de —35° C e a pressão foi de 0,120 mbar. Durante a fase de secagem, os parâmetros foram alterados seguindo um programa de pressão e temperatura. A temperatura final após 12 horas foi de +30° Cea pressão final foi de 0,001 a 0,004 mbar. Após a bomba de vácuo e a máquina de refrigeração serem desligadas, o sistema foi pulverizado com ar (secado por intermédio de um tubo de secagem) ou argônio. c) Extração Imediatamente após o mecanismo de liofilização sei pulverizado, os dedais de extração com o material vegetai liofilizado foram transferidos nos cartuchos de extração de 5 ml do dispositivo ASE (Accelerated Solvent Extractor ASE 200 com Solvent Controller anc AutoASE software (DIONEX)).

As posições de 24 amostras de um dispositivo A.SE (Accelerated Solvent Extractor ASE 200 com Solvent Controller anc AutoASE software (DIONEX)) foram enchidas com amostras de plantas incluindo algumas amostras para testar o controle de qualidade.

As substâncias polares foram extraídas com aproximadament.< 10 ml de metanol/água (80/20, v/v) em T = 70° C e p = 140 bar, fase d< aquecimento de 5 minutos, extração estática de 1 minuto. As substâncias mai lipofílicas foram extraídas com aproximadamente 10 ml d metanol/diclorometano (40/60, v/v) em T = 70° C e p = 140 bar, fase d aquecimento de 5 minutos, extração estática de 1 minuto. As duas misturas d solvente foram extraídas nos mesmos tubos de vidro (tubos de centrífuga, 5' ml, equipados com uma tampa de rosca e septo perfurável para o AS1 (DIONEX)). A solução foi tratada com padrões internos disponíveis comerciais, tais como ribitol, L-glicina-2,2-d2, L-alanina-2,3,3,3-d4, metionina-d3, Arginina_(13C), Triptofan-d5 e α-metüglucopiranosida e nonadecanoaío de metila, undecanoato de metila, tridecanoato de mcüla, pentadecanoato de metila, nonacosanoato de metila. O extrato total foi tratado com 8 ml de água. O resíduo sólido da amostra d eplanta e a luva de extração foram descartados. O extrato foi agitado e depois centrifugado por 5 a 10 minutos pelo menos 1400 g a fim de acelerar a separação de fase. 1 ml do sobrenadante metanol/fase aquosa (“fase polar”, incolor) foi removido pela análise de GC adicional e 1 ml foi removido para a análise LC. O remanescente do metanol/fase aquosa foi descartada. 0,5 ml da fase orgânica (“fase de lipídeo”, verde escuro) foi removido para a análise de GC adiciona] e 0,5 ml foi removido para a análise LC. Todas as porções removidas foram evaporadas até a secura usando-se o evaporador a vácuo por infravermelho IP Dancei* (Hettich). A temperatura máxima durante o processo de evaporaçãc não excedeu 40° C. A pressão no mecanismo não foi menor do que 10 mbar.

d) O processamento do lipídeo e da fase polar para a análise de LC/MS ou LC/MS/MS O extrato de lipídeo que foi evaporado até a secur; foiabsorvido na fase móvel. O extrato polar, que foi evaporado até a secur: foi absorvido na fase móvel.

e) análise de LC-MS A parte LC foi realizada em um sistema de LCMí comercialmente disponível da Agilent Technologies, USA. Para extrato polares 10 μΐ não injetados no sistema em uma taxa de fluxo de 200pl/minutc A coluna de separação (Cl 8 de Fase Reversa) foi mantida a 15 ° C durante cromatografia. Para os extratos de lipídeo 5 μΐ são injetados no sistema er uma taxa de fluxo de 200 μΐ/niinuto. A coluna de separação (Fase Revers Cl8) foi mantida a 30° C. O HPLC foi realizado com a elução de gradiente. A análise espectrométrica de massa foi realizada em um instrumento de pólo quádruplo triplo Applied Biosysíems API 4000 com fonte de pulverização de turbo íon. Para os extratos polares o instrumnto mede em modo de íon negativo no modo MRM e modo de varredura total de 100-1000 amu. Para os extratos de lipídeo o instrumento mede em modo de íon positivo em varredura total de modo de 100 a 1000 amu. A análise de MS analysís é descrita em mais detalhes na publicação de patente número WO 03/073464 (Walk and Dostler).

f) Derivatização da fase de lipídeo para a análise de GC/MS

Para a transmetanólise, uma mistura de 140 μΐ de clorofórmio, 37 μΐ de ácido clorídrico (37 % em peso de HCL em água), 320 μΐ de metanol e 20 μΐ de tolueno foram, adicionados ao extrato evaporado. O recipiente foi selado firmemente e aquecido por 2 horas a 100° C, com agitação. A solução foi subsequentemente evaporada até a secura. O resíduo foi secado completamente. A metoximação dos grupos carbonila foi realziada pela reação com cloridreto de metoxiamina (5 mg/ml em piridina, 100 Líll por 1,5 horas ε 60° C) em um recipiente selado firmemente. 20 μΐ de uma solução de ácidos graxos de cadeia reta de número ímpar (solução de cada 0,3 mg/ml de ácidos graxos de 7 a 25 átomos de carbono e cada 0,6 mg/mL de ácidos graxos con 27, 29 e 31 átomos de carbono em 3/7 (v/v) piridina/tolueno) foran adicionados como padrões de tempo. Finalmente, a derivatização com 100 μ de N-metil-N-(trimetilsilil)-2,2,2-trifluoroacetamida (MSTFA) foi realizadí por 30 minutos a 60° C, novamente no recipiente selado firmemente. C volume final antes da injeção no GC foi de 220 μΐ.

g) Derivatização da fase polar para a análise de GC/MS A metoximação dos grupos carbonila foi realizada pela reaçã< com cloridreto de metoxiamina (5 mg/ml em piridina, 50 Dl por 1,5 horas 60° C) em um recipiente firmemente selado. 10 μΐ de uma solução de ácidos graxos de cadeia reta de número ímpar (solução de cada 0,3 mg/mL de ácidos graxos de 7 a 25 átomos de carbono e cada 0,6 mg/ml de ácidos graxos com 27, 29 e 31 átomos de carbono em 3/7 (v/v) piridina/tolueno foram adicionados como padrões de tempo. Finalmente, a derivatização com 50 μΐ de N-metil-N-(trimetilsilyl)-2,2,2-trifluoroacetamida (MSTFA) foi realizada por 30 minutos a 60° C, novamente no recipiente firmemente selado. O volume final antes da injeção no GC foi de 110 μΐ.

h) Análise GC-MS

Os sistemas GC-MS consistem de um Agilent 6890 GC ligado a um Agilent 5973 MSD. Os autoamostradores são CompiPal ou GCPal de CTC. Para a análise de colunas de separação de capilar comercial usual (30 m x 0,25 mm x 0,25 μηι) com fases estacionárias de poli-metil-siloxano diferentes contendo de 0 % a até 35 % de porções aromáticas, dependendo dos materiais de amostra analisados e frações da etapa de sepração de fase. são usados (por exemplo: DB-lms, HP-5ms, DB-XLB, DB-35ms, Agilent Technologies). Até 1 μ! do volume final é injetado sem divisão e o programa de temperatura do forno é iniciado a 70° C e finalizado a 340° C com taxas de aquecimento diferentes dependendo do material da amostra e fração da etaps de sepração de fase a fim de atingir uma separação cromatográfíca suficiente e número de varreduras dentro de cada pico de analito. As condições padrãc de GC-MS usuais, por exemplo, fluxo constante com 1 a 1,7 ml/minutc nominal e hélio como o gás da fase móvel são usados. A ionização é realizad; pelo impacto de elétron com 70 eV, varredura dentro de uma faixa de m/z d( 15 a 600 com taxas de varredura de 2,5 a 3 varreduras/segundo e condições d< ajusta padrão.

Exemplo 4:Análise de dados da Análise metabólica de planta transformadas i) As amostras foram medidas em séries individuais de 20 a 2 amostras de plantas ou sementes cada (também referido como sequências), cada sequência contendo pelo menos 5 plantas do tipo selvagem ou amostras de sementes como controle. As amostras de semente foram de plantas individuais. A área de pico de cada analito foi dividida pela área de pico do padrão interno respectivo. Os dados foram padronizados para o peso fresco estabelecido para a planta ouamostra de semente, respectivamente. Os valores calculados deste modo foram relacionados com o grupo de cotnrole do tipo selvagem sendo dividido pela média dos dados correspondentes do grupo de controle do tipo selvagem da mesma sequência. Os valores obtidos foram conferidos como razão em peso, estes são comparáveis entre as sequências e indicam como a concentração de analito no mutante difere em relação ao controle do tipo selvagem. Os controles apropriados foram realizados antes de provar que o vetor e o procedimento de transformação, por si só não tem influência significante na composição metabólica das plantas. Portanto, as mudanças descritas em comparação com os tipos selvagens foram causadas pela construção introduzida dos genes. Pelo menos 3 a 5 linhas independentes foram analisadas em dois experimentos independentes para cada construção. Tabela. VIII aumento de GABA (razão em peso) em A. Thaliana transgênica.

Exemplo 5 Projeto de plantas de alfafa com a produção de produtc químico fino aumentada pela expressão de ácidos nucleicos da invenção ε partir de Saccharomyces cerevisiae, E. coli ou outros organismos.

Um clone regenerador de alfafa (Medicago sativa) é transformado usando-se o método de (McKersie et al., Plant Physiol 119 839(1999)). A regeneração e a transformação de alfafa é dependente dc genotipo e portanto uma planta regeneradora é requerida. Os métodos parí obter plantas regeneradoras foram descritos. Por exemplo, estas podem se; selecionadas do cultivar Rangelander (Agriculture Canada) ou qualquer outr; variedade de alfafa comercial como descrito by Brown D.C.W. and Atanasso^ A. (Plant Cell Tissue Organ Culture 4, 111(1985)). Altemativamente, í variedade RA3 (University of Wisconsin) é selecionada para o uso na cultur; de tecido (Walker et al., Am. J. Bot. 65, 654 (1978)).

Os explantes de pecíolo são co-cultivados com uma cultur; durante a noite de Agrobacterium tumefaciens C58C1 pMP90 (McKersie e a 1., Plant Physiol 119, 839(1999)) ou LBA4404 contendo um vetor binário. Muitos sistemas de vetor binário diferentes foram descritos para a transformação de planta (por exemplo An G., em Agrobacterium Protocols, Methods in Molecular Biology, Vol 44, pp 47-62, Gartland K.M.A. and Davey M.R. eds. Humana Press, Totowa, New Jersey). Muitos são fundamentados no vetor pBIN 19 descrito por Bevan (Nucleic Acid Research. 12, 8711 (1984)) que inclui cassete de expressão genética vegetal flanueado pelas sequências defronteira direita e esquerda do plasmídeo Ti de Agrobacterium tumefaciens. Um cassete de expressão genética vegetal consiste de pelo menos dois genes — um gene marcador de seleção e um promotor vegetal que regula a transcrição e um promotor vegetal que regula a transcrição do cDNA ou DNA genômico do gene característico. Vários genes marcadores de seleção podem ser usados incluindo o gene de Arabídopsis que codifica uma enzima de sintase de acetoidróxi ácido mutado (AHAS) enzyme (Patentes US 5.7673.666 e 6.225.105). Similarmente, vários promotores podem ser usados para regular o gene característico que fornece regulaçãc constitutiva, de desenvolvimento, de tecido ou ambiental de transcriçãc genética. Neste, o promotor 34S (número de Acessão GenBank M59930 c XI6673) é usado para fornecer a expressão constitutiva do gem característico.

Os explantes são cocultivados por 3 dias no escuro em meio de indução de SH contendo 288 mg/L de Pro, 53 mg/L de tioprolina, 4,35 g/L de K2S04 e 100 pm acetosiringinona. Os explantes são lavados em meio de Murashige-Skoog de concentração média (Murashige and Skoog, 1962) e colocado no mesmo meio de indução de SH sem acetosiringinona mas con um agente de seleção adequado e antibiótico adequado para inibir e desenvolvimento de Agrobacterium. Após várias semanas, os embriõe: somáticos são transferidos ao meio de desenvolvimento de BOÍ2Y nã( contendo reguladores de desenvolvimento, nenhum antibiótico e 50 g/L di sacarose. Os embriões somáticos são subsequentemente germinados em meio de Murashige-Skoog de concentração média. As mudas enraizadas são transplantadas em vasos e desenvolvidas em uma estufa.

As plantas de sementes de geração TI ou T2 são produzidas e submetidas a experimentos similares como descrito acima para determinar seu teor químico fino ao material de controle respectivo.

Exemplo 6 Projeto de plantas de azevém com produção de produto químico fino aumentado pela expressão de ácidos nucleicos da invenção de Saccharomyces cerevisiae, E. coli ou outros organismos.

As sementes de diversas variedades de azevém diferentes podem ser usadas como fontes de explantes para a transformação, incluindo a variedade comercial Gunne disponível da companhia de semente Svalõi Weibull ou a variedade Affiníty. As sementes são esterilizadas na superfície sequencialmente com 1 % de Tween-20 por 1 minuto, 100 % de alvejante poi 60 minutos, 3 enxágues com 5 minutos cada um com H20 desionizada e destilada e depois germinado por 3 a 4 dias em umidade, o papel, de filtre estéril no escuro. As mudas são ainda esterilizadas por 1 minuto com 1 % de Tween-20, 5 minutos com 75 % de alvejante e enxaguado 3 vezes com dc H20, 5 minutos cada.

As sementes esterilizadas na superfície são colocadas no meie de indução de calo contendo os sais basais Murashige and Skoog e vitaminas 20 g/L de sacarose, 150 mg/L de asparagina, 500 mg/L hidrolisato de caseína 3 g/L de Phytagel, 10 mg/L BAP e 5 mg/L de dicamba. As placas sãc incubadas no escuro a 25° C por 4 semanas para a germinação de semente í indução de calo embriogênico.

Após 4 semanas no meio de indução de calo, os brotos e a; raízes das mudas são removidos, o calo é transferido ao meio fresco, mantide em cultura por outras 4 semanas e depois transferido ao meio MSO na luz po: 2 semanas. Diversos pedaços do calo (11 a 17 semanas de idade) são forçados através de uma peneira de trama 10 e colocados no meio de indução de calo ou cultivados em 100 ml de meio de indução de calo de azevém líquido (mesmo meio como para a indução de calo com ágar) em um frasco de 250 ml. O frasco é enrolado em folha e agitado a 175 rpm no escuro a 23° C por 1 semana. A peneiração da cultra líquida com uma peneira de trama 40coletou as células. A fração coletada na peneira é plantada e cultivada em meio de indução de calo de azevém por 1 semana no escuro a 25° C. O calo é depois transferido e cultivado em meio MS contendo 1 % de sacarose por 2 semanas. A transformação pode ser realizada com Agrobacterium ou com métodos de bombardeamento de partícula. Um vetor de expressão é criado contendo um promotor de pinta constitutivo e o cDNA do gene em uni vetor pUC. O DNA de plasmídeo é reparado a partir de células de E. coli usando-se o kit Qiagen de acordo com a instrução do fabricante. Aproximadamente 2 g de calo embriogênico é espalhado no centro do papel de filtro estéril em uma placa de Petri. Uma alíquota de MSO líquido com 1C g/L de sacarose é adicionada ao papel de filtro. Partículas de ouro (1,0 μπι de tamanho) são revestidas com DNA de plasmídeo de acordo com o método de Sanford et al., 1993 e liberado ao calo embriogênico com os seguinte.4 parâmetros: 500 pg de partículas e 2 pg DNA per broto, 1300 psi e ume distância do alvo de 8,5 cm para parar a placa de calo e um broto 1 por place de calo.

Após o bombardeio, os calos são transferidos novamente ae meio de desenvolvimento de calo fresco e mantido no escuro em temperatur; ambiente por um período de 1 semana. O calo é depois transferido à: condições de desenvolvimento na luz a 25° C para iniciar a diferenciação d< embrião com o agente de seleção apropriado, por exemplo 250 nM d< Arsenal, 5 rng/L de PPT ou 50 mg/L de canamicina. Os brotos resistentes a< agente de seleção estão aparentes e uma vez enraizados são transferidos a< solo.

As amostras das plantas transgênicas primárias (TO) são analisadas por PCR para confirmar a presença de T-DNA. Estes resultados são conformados por hibridização Southern em que o DNA é submetido à eletroforese em um gel de agarose a 1 % e transferido a uma membrana de náilon positivamente carregada (Roche Diagnostics). O kit PCR DIG Probe Synthesis (Roche Diagnostics) é usado para a preparação de uma sonda rotulada por digoxigenina por PCR e usado como recomendado pelo fabricante.

As plantas de azevém TO transgênicas são propagadas vegetativamente cortando-se os brotos. Os brotos transplantados são mantidos na estufa por 2 meses até serem bem estabelecidos. Os brotos são desfolhados e deixados desenvolver por 2 semanas.

As plantas de sementes de geração TI ou T2 são produzidas e submetidas a experimentos similares como descrito acima para determinar set teror de produto químico fino em comparação com o material de controle respectivo.

Exemplo 7 Projeto de plantas de soja com produção de produção dc produto químico fino pela expressão de ácidos micleícos da invenção a parti de Saccharomyces cerevisiae, E. coli ou outros organismos. A soja é transformada de acordo com a seguinte modificaçã( do método descrito na Texas A&M patente US 5,164,310. Diversa variedades de soja comerciais são responsáveis pela transformação por est método. O cultivar Jack (disponível de the Illinois Seed Foundation) comumente usado para a transformação. As sementes são esterilizadas po imersão em etanol a 70 % (v/v) por 6 minutos e em 25 % de alvejant comercial (NaOCl) suplementado com 0,1 % (v/v) de Tween por 20 minutoí seguido pelo enxágue 4 vezes com água destilada dupla estéril. As mudas d sete dias são propagadas pela χ-emoção da radícula, hipocotila e um cotilédone de cada muda. Então, a epicotila com um cotilédone é transferido ao meio de germinação fresco em placas de petri e incubado a 25° C sob um fotoperíodo de 16 horas (aprox. 100 pE/m2s) por três semanas. Os nodos axilares (aprox. 4 mm de comprimento) foram cortados de plantas de 3 a 4 semanas de idade. Os nodos axilares são cortados e incubados na cultura de Agrobacterium LBA4404.

Muitos sistemas de vetores binários diferentes foram descritos para a transformação de planta (por exemplo An G., em Agrobacterium Protocols. Methods in Molecular Bíology Vol. 44, p. 47-62, Gartland K.M.A. and Davey M.R. eds. Humana Press, Totowa, New Jersey). Muitos são fundamentados no vetor pBÍN19 descrito por Bevan (Nucleic A ei d Research. 12, 8711 (1984)) que inclui um cassete de expressão de gene vegeta] flanqueado pelas sequências de fronteira esquerda e direita do plasmídeo T; de Agrobacterium tumefaciens. Um cassete de expressão genética vegeta.' consiste de pelo menos dois genes — um gene marcador de seleção e uix promotor vegetal que regula a transcrição do cDNA ou DNA genômico dc gene característico. Vários genes marcadores de seleção podem ser usado: incluindo o gene de Arabidopsis que codifica uma enzima de acetoidróx ácido sintase (AHAS) mutada (patentes US 5,7673,666 e 6,225,105) Similarmente, vários promotores podem ser usados para regular o gen< característico para fornecer a regulação constitutiva, de desenvolvimento, di tecido ou ambiental da transcrição genética. Neste exemplo, o promotor 34Í (números de acessão GenBank M59930 e XI6673) pode ser usado par fornecer expressão constitutiva do gene característico.

Após o tratamento de co-cultivo, os explantes são lavados transferidos ao meio de seleção suplementado com 500 mg/L de timentina. O brotos são cortados e colocados em um meio de alongamento de broto. Broto mais longos do que 1 cm são colocados em meio de enraizamento por duas quatro semanas antes do transplante ao solo. AS plantas transgênicas primárias (TO) são analisadas por PCR para confirmar a presença de T-DNA. Estes resultados são confirmados pela hibridização Southern em que o DNA é submetido à eletroforese em um gel de agarose a 1 % e transferido a uma membrana de náilon positivamente carregada (Roche Diagnostics). O kit PCR DIG Probe Synthesis (Roche Diagnostics) é usado para a preparação de uma sonda rotulada por digoxigenina por PCR e usado como recomendado pelo fabricante.

As plantas de semente de geração TI ou T2 são produzidas e submetidas aos experimentos similares como descrito acima para determinar seu teor de produto químico fino em comparação com o material de controle respectivo.

Exemplo 8 Projeto de semente de colza/plantas de canola com a produçãc de produto químico fino aumentada pela expressão de ácidos nucleicos ds invenção a partir de Saccharomyces cerevisiae, E. coli ou outros organismos.

Os pecíolos cotiledonares e hipocotilas de mudas jovens de í ou 6 dias de idade são usadas como explantes para a cultura de tecido t transformadas de acordo com Babic et al. (Plant Cell Rep 17, 183 (1998)). C cultivar comercial Westar (Agriculture Canada) é a variedade padrão usad; para a transformação, mas outras variedades podem ser usadas.

Agrobacterium tumefaciens LBA4404 contendo um veto binário pode ser usado para a transformação de canola. Muitos sistemas d< vetor binário diferentes foram descritos para a transformação de planta (po exemplo An G., em Agrobacterium Protocols. Methods in Molecular Biolog; Vol. 44, p. 47-62, Gartland K.M.A. and Davey M.R. eds. Humana Press Totowa, New Jersey). Muitos são fundamentados no vetor pBIN19 descrit pot Bevan (Nucleic Acid Research. 12, 8711(1984)) que inclui um cassete d expressão de gene vegetal flanqueado pelas sequências de fronteira esquerda direita do plasroídeo Ti de Agrobacterium tumefaciens. Um cassete de expressão de gene vegetal consiste de pelo menos dois genes — um gene marcador de seleção e um promotor vegetal que regula a transcrição do cDNA ou DNA genômico do gene característico. Vários genes marcadores de seleção podem ser usados incluindo o gene de Arabidopsis que codifica uma enzima acetoidróxi ácido sintase (AHAS) mutada (Patentes US 5,7673,666 c 6,225,105). Similarmente, vários promotores podem ser usados para regular o gene característico para fornecer regulação constitutiva, de desenvolvimento, de tecido ou ambiental de transcrição genética. Neste exemplo, o promotor 34S (Números de Acessão GenBank M59930 e X16673) podem ser usados para fornecer expressão constitutiva do gene característico.

As sementes de canola são esterilizadas na superfície em etanol a 70 % por 2 minutos e depois em 30 % de Clorox com uma gota de Tween-20 por 10 minutos, seguido por três enxágues com água destilada esterilizada. As sementes são depois germinadas in vitro 5 dias em meio MS de concentração média sem hormônios, 1 % de sacarose, 0,7 % de Phytagar ε 23° C, 16 h de luz. Os explantes de pecíolo de cotilédone com o cotilédom ligado são coitados a partir das mudas in vitro e inoculadas coa Agrobacterium pela imersão da extremidade cortada do explante de pecíolc na suspensão bacteriana. Os explantes são depois cultivados por 2 dias en meio MSBAP-3 contendo 3 mg/L de BAP, 3 % de sacarose, 0,7 % d< Phytagar a 23° C, 16 h de luz. Após 2 dias de cultivo com Agrobacterium, o explantes de pecíolo dão transferidos ao meio MSBAP-3 contendo 3 mg/1 BAP, cefotaxima, carbenicilina ou timentina (300 mg/L) por 7 dias e depoi cultivado em meio MSBAP-3 com cefotaxima, carbenicilina ou timentina agente de seleção até a regneração de broto. Quando os brotos tiveram de 5 10 mm de comprimento, estes foram cortados e transferidos ao meio d alongamento de broto (MSBAP-0,5, contendo 0,5 mg/L de BAP). Os brote de cerca de 2 cm de comprimento são transferidos ao meio de formação c raiz (MSO) para a indução de raiz.

As amostras das plantas transgênicas primárias (TO) são analisadas por PCR para confirmar a presença de T-DNA. Ests resultados são confirmados pela hibridização Southern em que o DNA é submetido à eletroforese em um gel de agarose a 1 % e transferido a uma membrana de náilon positivamente carregada (Roche Diagnostics). O kit PCR DIG Probe Synthesis (Roche Diagnostics) é usado para a preparação de uma sonda rotulada por digoxigenina por PCR e usado como recomendado pelo fabricante.

As plantas de semente de geração de TI ou T2 são produzidas e submetidas a experimentos similares como descrito acima para determinar seu teor de produto químico fino em comparação com o material de controle respectivo.

Exemplo 9 Projetos de plantas de milho com produção de produtc químico fino aumentada pela expressão de ácidos nucleicos da invenção í partir de Saccharomyces cerevisiae, E. coli ou outros organismos. A transformação de milho (Zea Mays L.) é realizada com um; modificação do método descrito por Ishida et al. (Nature Biotech 1474: (1996)). A transfomação é dependente do genotipo em milho e apena genotipos específicos são responsáveis pela transformação e regeneração. / linha inata Al 88 (University of Minnesota) ou híbridos com Al 88 como ur precursor são boas fontes de material doador para a transformação (Dem et a Biotech 8, 833 (1990)), mas outros genotipos também podem ser usados pod ser usados de maneira bem sucedida. As espigas são coletadas a partir c plantas de milho em aproximadamente 11 dias após a polinização (DAI quando o comprimentode embriões imaturos é de cerca de 1 a 1,2 mm. C embriões imaturos são co-cultivados com Agrobacteriuni tumefaciens qi carregam vetores “super binários” e as plantas transgênicas são recuperad através de organogênese. O sistema de vetor super-binário da Japan Tabaco é descrito em patentes WO WO 94/00977 e WO 95/06722. Os vetores foram construídos como descrito. Vários genes marcadores de seleção podem ser usados incluindo o gene de milho que codifica uma enzima acetoidróxi ácido sintase (AHAS) mutada (patente US 6,025,541). Similarmente, vários promotores podem ser usados para regular o gene característico para fornecer regulação constitutiva, de desenvolvimento, de tecido ou ambiental de transcrição genética. Neste exemplo, o promotor 34S (Números de Acessão GenBank M59930 e X16673) foi usado para fornecer a expressão constitutiva do gene característico.

Os embriões cortados são desenvolvidos em meio de indução de calo, depois meio de regeneração de milho, contendo imidazolinona como um agente de seleção. As placas de petri são incubadas na luz a 25° C por 2 ε 3 semanas ou até os brotos se desenvovlerem. Os brotos verdes sãc transferidos de cada embrião ao meio de formação de raiz de milho e incubados a 25° C por 2 a 3 weeks, até as raízes se desenvolverem. Os broto: enraizados são transplantados ao solo na estufa. As sementes TI sã< produzidas a partir de plantas que apresentam tolerância aos herbicidas d' imidazolinona e que são PCR positivo para os transgenes.

As plantas transgênicas ΊΤ são avaliadas depois por su produção de bíomassa aumentada e/ou NUE de acordo com um métod descrito em Exemplo 3. A geração TI das inserções do local simples do 1 DNA segregará para o transgene em uma razão 3:1. Aquela progêni contendo uma ou duas cópias do transgene são tolerantes com relação ε herbicida de imidazolinona e exibe uma intensificação de NUE e/ou produçÊ de biomassa aumentada do que aquela progênie que necessita dos transgenes As plantas de geração TI ou T2 são produzidas e submetid aos experimentos similares como descrito em WO 2006092449, Exemplo 1, para determinar seu conteúdo de produto químico fino em comparação : material de controle respectivo.

Exemplo 1Q

Projeto de plantas de trigo com produção de produto químico fino pela expressão dos ácidos nucleicos da invenção a partir de Saccharomyces cerevisiae, E. coli ou outros organismos.

Transformação de trigo é realizado com o método descrito por Ishida et al. (Nature Biotech. 14745 (199ó)). O cultivo de Bobwhite (disponível de CYMMIT, México) é comumente usado na transformação. Embriões imaturos são co-cultivados com Agrobacterium tumefaciens que realizam vetores “super binários” e plantas transgênicas são recuperadas através da organogênese. O sistema de vetor super binário de Japan Tabaco é descrito no WO da Patente WO 94/00977 e WO 95/06722. Os vetores foram construídos como descrito. Vários genes marcadores de seleção podem sei usados incluindo o gene de milho que codificam uma enzima do acetoidróx: ácido sintase (/MIAS) mutada (Patente U.S. 6.025.541). Similarmente, vário: promotores podem ser usados para regular o gene característico para fornece regulação constitutiva, de desenvolvimento, de tecido ou ambiental d* transcrição genética. Neste exemplo, o promotor 34S (Números de Acessa* GenBank. M.59930 e X16673) foi usado para fornecer expressão constitutiv do gene característico.

Após incubação com Agrobacterium, os embriões sã desenvolvidos no meio de indução de calo, depois meio de regeneraçãi contendo a imidazolinona como um agente de seleção. As plantas de Petri sã incubadas na luz a 25° C por 2 a 3 semanas, ou até os brotos desenvolverer Os brotos verdes são transferidos de cada embrião ao meio de formação ( raiz e incubados a 25° C por 2-3 semanas, até os brotos desenvolverem. C brotos enraizados são transplantados ao solo na estufa. As sementes TI si produzidas a partir de plantas que exibem a tolerância aos herbicidas * imidazolinona e que são PCR positivos para os transgenes.

As plantas das sementes da geração TI ou T2 são produzidas e submetidas aos experimentos similares como descrito acima para determinar seu conteúdo de produto químico em comparação ao material de controle respectivo.

Exemplo 11 Projeto de plantas de arroz com produção de produto químico fmo aumentada pela expressão dos ácidos nucleicos da invenção a partir de Saccharomyces cerevisiae, E. coli ou outros organismos.

Transformação de arroz: As duas cepas Agrobacterium cada uma contendo um vetor de expressão, são usadas independentemente para transformar as plantas de Oryza sativa. As sementes secas maduras do arroz japonica cultivar Nipponbare são descascadas. A esterilização é realizada pela incubação poi um minuto em 70 % de etanol, seguido por 30 minutos em 0,2 % de HgC12. seguido por 6 vezes de lavagem de 15 minutos com água destilada estéril. As sementes estéreis depois são germinadas no meio contendo 2,4 —D (meio que induz o calo). Após incubação no escuro por quatro semanas, os calo; derivados de escutelo embriônico são taxados e propagados no mesmo meio Após duas semanas, os calos são multiplicados e propagados pela subcultur; no mesmo meio por 2 semanas adicionais, as partes dos calos embriônicos sã< sub-cultivados no meio fresco 3 dias antes do co-cultívo. A cepa de Agrobacterium LB4404 ou outra cep Agrobacterium útil, depende do vetor de expressão de escolha, contendo ur vetor de expressão que é usado para co-cultivo. Agrobacterium é inoculado n meio AB (EXPLAIN) com os antibióticos apropriados e cultivados por 3 dií a 28° C. A bactéria depois é coletada e recolocada em suspensão no meio c co-cultivo líquido em uma densidade OD600 de cerca de 1. A suspensão depois transferida a um disco de Petri e os calos submetidos a imersão i suspensão por 15 minutos. O tecido dos calos foi depois manchado seco e pape] de filtro e transferido ao meio de co-cultivo, solidificado e incubado por 3 dias no escuro a 25° C. Os calos de co-cuítivo são desenvolvidos em meio contendo 2,4-D por 4 semanas no escuro a 28° C na presença de um agente de seleção, que depende do marcador de resistência do vetor usado. Durante este período, rapidamente o desenvolvimento resistente ao desenvolvimento do calo. Após a transferência deste material a um meio de regeneração e incubação na luz, o potencial embriônico é liberado e os brotos desenvolvidos nas próximas quatro a cinco semanas. Os brotos são taxados a partir dos calos e incubados por 2 a 3 semanas em um meio contendo auxina de que estes são transferidos ao solo. Os brotos endurecidos são desenvolvidos sob umidade alta e dias curtos na estufa.

Após uma análise PCR quantitativa para verificar o número da cópia e a inserção de T-DNA, apenas as plantas transgênicas de cópia simples que exibem a tolerância ao agente de seleção são mantidas para coleta dí semente Tl. As sementes depois são coletadas três a cinco meses apó; transplante. As sementes ou plantas de várias linhas independentes depois sã< usadas para análise do conteúdo do produto químico fino.

Exemplo 12 Identificação dos Genes idênticos ou heterólogos As sequências do gene podem ser usadas para identificar gene heterólogos ou idênticos a partir de cDNA ou bibliotecas genômicas. C genes idênticos (por exemplo clones de cDNA de comprimento total) pode s< isolado por intermédio do ácido nucleico pela hibridização usando p< exemplo as bibliotecas de cDNA. Dependendo da abundância do gene ( interesse, 100.000 até 1.000.000 bacteriofagos recombinantes são colocados transferidos as membranas de náilon. Após desnaturação com alcalino, DNA é imobilizado na membrana por exemplo ligação de reticulação U Hibridização é realizada nas condições de estringência alta. Na soluç aquosa, a hibridização e lavagem é realizada em uma força iônica de 1 M

NaCl e uma temperatura de 68° C. As sondas de hibridização são geradas por exemplo rotulação de transcrição de níquel (32P) (High Prime, Roche, Mannlieim, Germany). Os sinais são detectados pela autoradíografia.

Os genes parcialmente heterólogos ou idênticos que são relacionados mas não idênticos podem ser identificados em uma maneira análoga ao procedimento descrito acima usando a hibridização de estringência baixa e condições de lavagem. Para a hibridização aquosa, a força iônica é normalmente mantida a 1 M de NaCl enquanto a temperatura é progressivamente inferior de 68° C a 42° C. 0 isolamento das sequências do gene com homologia (ou identidade/similaridade de sequência) apenas em um domínio distinto de (por exemplo 10-20 aminoácidos) podem ser realizados pelo uso de sondas de oligonucleotídeo radiorotulado sintético. Os olignonucleotídeo; radiorotulados são preparados pela fosforilação da extremidade final 5-prime de dois oligonucleotídeos complementares com cinase de polinucleotídeo T4 Os oligonucleotídeos complementares são anelados e ligados para forma concatêmeros. Os concatêmeros li lamentados duplos são entã' radiorotulados, por exemplo, pela transcrição de níquel. A hibridização normalmente realizada nas condições de estringência baixa usand concentrações de oligonucleotídeos altos.

Solução de hibridização de oligonucleotídeo: 6 x SSC 0,1 M de fosfato de sódio 1 mM de EDTA (pH 8) 0,5 % de SDS 100 pg/ml de DNA de esperma de salmão desnaturado 0,1 % de leito em pó não gorduroso Durante a hibridização, temperatura é diminuída gradualmer a 5-10° C abaixo do oligonucleotídeo estimado Tm ou abaixo da temperati ambiente seguida pelas etapas de lavagem e autor adi ografia. A lavagem é realizada com a esíringêneia baixa tal como 3 etapas de lavagem usando 4 x SSC. Os detalhes adicionais são descritos por Sambrook J. et al., 1989, “Molecular Cloning: A Laboratory Manual,” Cold Spring Harbor Laboratory Press or Ausubel F.M. et al., 1994, “Current Protocols in Molecular Biology,” John Wiley & Sons.

Exemplo 13 Identificação dos genes idênticos pela avaliação das bibliotecas de expressão com os anticorpos Os clones de cDNA. podem ser usados para produzir polipeptídeo recombinante por exemplo em E. coli (por exemplo sistema Qiagen QIAexpress pQE). Os polipeptídeos recombinantes são depois normalmente afinidade purificada por intermédio da cromatografxa por afinidade Ni-NTA (Qiagen). Os polipeptídeos recombinantes são depois usados para produzir anticorpos específicos por exemplo pelo uso de técnicas padrão para a. imunização de coelho. Os anticorpos são afinidade purificadc usando uma coluna Ni-NTA saturada com o antígeno recombinante comc descrito por Gu et al., BioTechmques 17, 257 (1994). O anticorpo pode entã( ser usado para avaliar as bibliotecas de cDNA da expressão para identificar o genes heterólogos ou idênticos por intermédio de uma avaliação imunológic (Sambrook, J. et al., 1989, “Molecular Cloning: A Laboratory Manual,” Col Spring Harbor Laboratory Press or Ausubel, F.M. et al., 1994, “Currei Protocols in Molecular Biology”, John Wiley & Sons).

Exemplo 14 Mutagênese in vivo A mutagênese in vivo de microorganismos pode ser realiza» pela passagem de plasmídeo (ou oixtro vetor) DNA através de E. coli < outros microorganismos (por exemplo Bacillus spp. ou levedura tal con Saccharomyces cerevisiae) que são prejudicados por sua capacidade manter a integridade da informação genética. As cepas mutantes típicas tem as mutações nos genes para o sistema de reparo de DNA (por exemplo, mutHLS, mutD, mutT, etc.; por referência, ver Rupp W.D., DNA repair mechanisms, in: Escherichia coli and Salmonella, p. 2277-2294, ASM, 1996, Washington). Tais cepas são bem conhecidas aquela pessoa habilitada na técnica. O uso de tais cepas é ilustrado, por exemplo, em Greener A. and Callahan M., Strategies 7, 32 (1994). A transferência das moléculas de DNA mutadas em plantas é preferivelmente feita após seleção e testar nos microorganismos. As plantas transgênicas são geradas de acordo com vários exemplos dentro da exemplificação deste documento.

Avaliação da planta (Arábidopsis) para o desenvolvimento sob o fornecimento de nitrogênio limitado As plantas com uma atividade aumentada de um polipeptídec mencionado na tabela IX e X sob a coluna da SEQ ID N°: ou local foram usados.

Dois procedimento diferentes foram usados pela avaliação: Procedimento 1: Produção de biomassa nas placas de ágar: Para a avaliação das plantas transgênicas uma facilidade d cultura específica foi usada. Para as plantas de propósito da produtividade alt foram avaliadas pela produção de biomassa nas placas de ágar coí fornecimento limitado de nitrogênio (adaptado de Estelle and Somervill 1987). Esta tubulação de avaliação consiste de dois níveis. As linh; transgênicas foram submetidas ao nível subsequente se a produção < biomassa for significantemente melhorada em comparação as plantas de ti] selvagem. Com cada nível o número de replicados e estringência estatísti foi aumentado, Para a semeadura, as sementes foram removidas a partir ó tubos de Eppendorf cora a ajuda de um palito de dente e transferidas nas placas de ágar mencionadas acima, com o fornecimento limitado de nitrogênio (0,05 mM de KN03). No total, aproximadamente 1 5 a 30 sementes foram destruídas horizontalmente em cada placa (12 x 12 cm).

Após as sementes serem semeadas, as placas foram submetidas a estratificação por 2-4 dias no escuro a 4o C. Após a estratificação, as plantas testadas foram desenvolvidas por 22 a 25 dias no ritmo de 16 horas de luz, 8 horas de escuro a 20° C, em uma umidade atmosférica de 60 % e uma concentração de Cü2 de aproximadamente 400 ppm. As fontes de luz usadas para gerar uma luz parecida com o espectro de cor solar com uma intensidade de luz de aproximadamente 100 pE/m2s. Após 10 a 11 dias as plantas sãc individualizadas. O desenvolvimento melhorado sob condições limitadas de nitrogênio foi avaliada pela produção de biomassa de brotos e raízes da; plantas transgênicas em comparação as plantas de controle de tipo selvagen após 20 a 25 dias de desenvolvimento.

As linhas transgênicas mostraram uma produção de biomass melhorada em comparação as plantas de tipo selvagem foram submetidas a< seguinte experimento do nível subsequente;

As sementes Arabidopsis thaliana foram semeadas em pote contendo uma mistura de 1:1 (v/v) solo desprovido de nutrienl (“Einheítserde Typ 0”, 30 % clay, Tantau, Wansdorf Germany) e areia. . germinação foi induzida por um. período de quatro dias a 4o C, no escur Subsequentemente as plantas foram desenvolvidas sob condições ( desenvolvimento padrão (fotoperíodo de 16 horas de luz e 8 horas de escur 20° C, 60 % de umidade relativa e uma densidade de fluxo de fóton de 2( μΕ/m s). As plantas foram desenvolvidas e cultivadas, inter alia estes fora submetidas à água a cada segundo dia com uma solução desprovida nutriente N solution. A solução desprovida de nutriente N por exemp contém água inferior Nutriente mineral____Concentração final ] Após 9 a 10 dias as plantas foram individualizadas. Após um período total de 29 a 31 dias as plantas foram coletadas e taxadas pelo peso fresco das partes aéreas das plantas. Os resultados destes são resumidos na tabela IX. O aumento da biomassa foi medido como a razão do peso fresco das partes aéreas da planta de transgene respectivo e a planta de tipo selvagem não transgênico.

Tabela IX: Produção de biomassa do desenvolvimento Arabidopsis thaliana transgênico sob o fornecimento de nitrogênio limitado NUK aumentado): Procedimento 2: O Procedimento 2 foi realizado semelhante ao procedimento 1 entretanto, a avaliação das placas de ágar foi omitido e a avaliação de un nível no solo foi realizada. Para a construção transgênica 4 linhas transgênica independentes (^eventos) foram testadas (16 plantas por construção). O resultados destes são resumidos na tabela X.

Tabela X: Produção de biomassa do desenvolvimení Arabidopsis thaliana transgênico sob o fornecimento de nitrogênio limitad (NUE aumentado). O aumento de biomassa foi medido como razão do per fresco das partes aéreas das plantas transgênicas respectivas e as plantas c tipo selvagem não transgênicas: Exemplo 16 Avaliação vegetal para aumento do rendimento sob condições de desenvolvimento padronizadas Neste experimento, a avaliação vegetal para o aumento do rendimento (neste caso: aumento da produção de biomassa) sob condições de desenvolvimento padronizadas na ausência da tensão abiótica substancial foi realizada. Em um solo de experimento padrão é preparado como a mistura 3,5:1 (v/v) do solo rico de nutriente (GS90, Tantau, Wansdorf, Germany) e areia de quartzo. Altemativamente, as plantas foram semeadas no solo rico em nutriente (GS90, Tantau, Germany). Os potes foram preenchidos com a mistura e colocados nas bandejas. A água foi adicionada as bandejas para permitir a mistura do solo absorvida na quantidade apropriada de água para c procedimento de semeadura. As sementes para as plantas A. thaliam transgênicas e seus controles de tipo selvagem não transgênicos foran semeados em potes (6cm de diâmetro). Então a bandeja enchida foi cobert: com uma tampa transparente e transferida em uma câmara d< desenvolvimento pré-esfriada (4o C a 5o C) e escurecida. A estratifícação fo estabelecida por um período de 3-4 dias no escuro a 4° C-5° C. A germinação das sementes e desenvolvimento foi iniciada em uma condição d desenvolvimento de 20° C, aproximadamente 60 % de umidade relativa, 1 horas de fotoperíodo e iluminação a aproximadamente 200 pmol/m2s. A tampas fora removidas 7-8 dias após a semeadura. A seleção BASTA foi feit no dia 10 ou dia 11 (9 ou 10 dias após semeadura) pelos potes de pulverizaçã com plantinhas a partir da parte superior. No experimento padrão, um solução a 0,07 % (v/v) do concentrado de BASTA (183 g/1 de glufosinato c amônio) em água de torneira foi pulverizado uma vez ou, altemativament uma solução a 0,02 % (v/v) de BASTA foi pulverizado três vezes. As plant; de controle de tipo selvagem foram pulverizadas com apenas água de tomei (em vez da pulverização com BASTA dissolvido em água de torneira) mas foram de outra maneira tratados identicamente. As plantas foram individualizadas 13-15 dias após semeadura pela remoção do excesso das mudas e resíduos dc mudas no solo. A irrigação foi realizada a cada dois dias após a remoção da tampa em um experimento padrão ou, altemativamente, a cada dia. Para a medição do desempenho de biomassa, o peso fresco vegetal foi determinado no período de coleta (24-29 dias após semeadura; 20-26 dias após estratificação) pelo corte dos brotos e pesagem destes. Usualmente, as plantas estão no estágio anterior à florescência e anterior ao desenvolvimento de inflorescência quando coletado. As plantas transgênicas foram comparadas as plantas de controle de tipo selvagem não transgênica da mesma idade, desenvolvimento na mesma facilidade de cultura e coletada no mesmo dia.

Tabela XI: Produção de biomassa de desenvolvimento A tlialiana transgênico sob condições de desenvolvimento padronizado. A produção de biomassa foi medida pela pesagem das roseta: das plantas. O aumento de biomassa foi calculado como razão do peso médi< das plantas transgênicas comparados ao peso médio das plantas controle d< tipo selvagem a partir do mesmo experimento. Alternativamente, o aumenti de biomassa foi calculado como razão do peso médio das plantas transgênica comparado ao peso médio das plantas controle de tipo sel vagem.

As plantas transgênicas contendo um SeqlDs indicado mostro um aumento de biomassa de 10 % ou mais em comparação as plantas control com um valor p de um teste T de dois lados abaixo de 0,‘ Exemplo 17 Avaliação vegetal para o desenvolvimento sob condições de aridez cíclica Na tensão repetitiva do ensaio de aridez cíclica é aplicado as plantas sem levar a dessecação. Em um solo de experimento padrão é preparado como a mistura 1:1 (v/v) do solo rico em nutriente (GS90, Tantau. Wansdorf, Germany) e areia de quartzo. Os potes (6cm de diâmetro) forarr preenchidos com esta mistura e colocados em bandejas. A água foi adicionadt as bandejas para permitir a absorção da mistura do solo de uma quantidade apropriada de água para o procedimento de semeadura (dia 1) < subsequentemente as sementes das plantas A. thaliana transgênicas e seu; controles de tipo selvagem foram semeados em potes. Então a bandej; enchida foi coberta com uma tampa transparente e transferida em uma câmar de desenvolvimento pré-esfriada (4o C-5° C) e escurecida. A estratificação fc estabelecida por um período de 3 dias no escuro a 4o C-5° C or altemativamente, por 4 dias no escuro a 4o C. A germinação das sementes desenvolvimento foi iniciado em uma condição de desenvolvimento de 20° C 60 % de umidade relativa, 16 horas de fotoperíodo e iluminação com lu fluorescente em aproximadamente 200 pmol/m2s. As tampas forai removidas 7 a 8 dias após semeadura. A seleção BASTA foi feita no dia 10 o dia 11 (9 ou 10 dias após semeadura) pela pulverização dos potes coi plantinhas na parte superior. No experimento padrão, uma solução 0,07 c (v/v) de concentrado de BASTA (183 g/1 de glufosinato de amônio) em ági de torneira foi pulverizado uma vez ou, altemativamente, uma solução a 0,( % (v/v) de BASTA foi pulverizado três vezes. As plantas controle de tipo selvagem foram pulverizadas com apenas água de torneira (em vez de pulverizada com BASTA dissolvida em água de torneira) mas foram de outra maneira tratadas identicamente. As plantas foram individualizadas 13-14 dias após a semeadura pela remoção do excesso das mudas e resíduos das mudas no solo. Os eventos transgênicos e plantas de controle de tipo selvagem foram eventualmente distribuídos na câmara. A produtividade do fornecimento de água do experimento foi limitada e as plantas foram submetidas aos ciclos de aridez e irrigação. A irrigação foi realizada no dia 1 (antes da semeadura), dia 14 ou dia 15, dia 21 ou dia 22, e, finalmente, dia 27 ou dia 28. Para a medição da produção de biomassa, o peso fresco vegetal foi determinado uma vez após a irrigaçãc final (dia 28 ou dia 29) pelo corte dos brotos e pesagem dos mesmos. Aí plantas estão no estágio anterior de florescência antes do desenvolvimento dí inflorescência quando coletadas. Os valores da importância para £ importância estatística das mudanças de biomassa foram calculadas pel; aplicação do teste t ‘studentV (parâmetros: dois lados, diferença desigual).

Até cinco linhas (eventos) para a construção genética foran testadas nos níveis experimentais sucessivos. As linhas transgências mostrau a produção de biomassa aumentada comparado as plantas de tipo selvagcr que foram submetidas ao próximo nível experimental. Usualmente n primeiro nível cinco plantas por construção foram testadas nos nívei subsequente 14 a 40 plantas foram testadas. O desempenho da biomassa fc avaliado como descrito acima. Os dados a partir do nível 3 são mostrados n tabela XII.

Tabela XII: Produção de biomassa de A. thaliana transgênic desenvolvido sob condições de desenvolvimento de aridez cíclica. Λ produção de biomassa foi medida pela pesagem das rosetas das plantas. O aumento da biomassa foi calculada como razão do peso médio para as plantas transgênicas comparadas ao peso médio das plantas de controle de tipo selvagem a partir do mesmo experimento. O aumento da biomassa médio das construções transgênicas é dado (valor da importância < 0,05).

Exemplo 18 Avaliação da planta para o desenvolvimento sob condições de temperatura inferiores No solo do experimento padrão foi preparado como a mistura 3,5:1 (v/v) do solo rico em nutriente (GS90, Tantau, Wansdorf, Germany) e areia. Os potes foram preenchidos com mistura do solo e colocados ne bandeja. A água foi adicionada as bandejas para permitir a absorção áí mistura do solo de uma quantidade apropriada de água para o procedimentc de semeadura. As sementes para as plantas A. thaliana transgênicas foran semeadas em potes (6cm de diâmetro). A estratifícação foi estabelecida po um período de 3 dias no escuro a 4o C-5° C. A germinação das sementes i desenvolvimento foi iniciado em uma condição de desenvolvimento de 20° C aproximadamente 60 % de umidade relativa, 16 horas de fotoperíodo iluminação com luz fluorescente a 150 - 200 pmol/m2s. A seleção BASTV foi feita no dia 9 após semeadura pela pulverização em potes com plantinha na parte superior. Portanto, uma solução 0,07 % (v/v) de concentrado BAST7 (183 g/1 de glufosinato de amônio) em água de torneira foi pulverizado. A plantas de controle de tipo selvagem foram pulverizadas com água de tomeh apenas (em vez de pulverização com BASTA dissolvidas em água d torneira) mas foram de outra maneira tratadas identicamente. A irrigação f< realizada a cada dois dias após cobertura e foi removida a partir da bandej As plantas foram individualizadas 12 a 13 dias após semeadura pela remoçê do excesso das mudas e resíduos de muda em um pote. Frio (esfriamento 11° C-12° C) foi aplicado 14-16 dias após semeadura até o final do experimento. Para a medição do desempenho de biomassa, o peso fresco da planta foi determinado no período de coleta (35-37 dias após semeadura) pelo corte de brotos e pesagem destes. As plantas estão no estágio anterior da florescência e anterior o desenvolvimento da inflorescência quando coletadas. As plantas transgênicas foram comparadas as plantas controle de tipo selvagem não transgênico no mesmo dia. Os valores de importância para a importância estatística das mudanças de biomassa foram calculados pela aplicação do teste t ‘studentV (parâmetros: dois lados, diferença desigual).

Até cinco plantas por construção transgênica foram testadas em 2 a 3 níveis experimentais sucessivos. Apenas as construções que apresentam o desempenham positivo foram submetidas ao próximo nível experimental. No primeiro nível experimental 20-28 plantas foram testadas. O desempenho de biomassa foi avaliado como descrito acima. Os dados são mostrados para as construções que apresentam o desempenho de biomassa aumentada em pelo menos dois níveis experimentais sucessivos.

Tabela XIII: Produção de biomassa de A. thaliana transgênicc após a imposição de tensão ao frio. A produção de biomassa foi medida pela pesagem das roseta: das plantas. O aumento da biomassa foi calculado como razão do peso médic das plantas transgênicas comparado ao peso médio das plantas controle dc tipo selvagem a partir do mesmo experimento. O aumento da biomassa médi; das construções transgênicas é dado (valor de importância < 0,3 e aumento d; biomassa > 5 % (razão > 1,05)).

Figuras Fig. 1 Vetor VC-MME220-lqcz (SEQ ID N°: 35) usado para clonagem do gene de interesse para expressão não alvejada.

Fig. 2 Vetor VC-MME221-1 qcz (SEQ TD N°: 38) usado para clonagem do gene de interesse para expressão não alvejada.

Fig. 3 Vetor VC-MME354-1 QCZ (SEQ ID N°: 31) usado para clonagem do gene de interesse para expressão alvejada do plastídeo.

Fig. 4 Vetor VC-MME432-lqcz (SEQ ID N°: 36) usado para clonagem do gene de interesse para expressão alvejada do plastídeo.

Fig. 5 Vetor pMTX155 (SEQ ID N°: 30) usado para uso para clonagem do gene de interesse para expressão não alvejada.

Fig. 6 Vetor pMTX447korr (SEQ ID N°: 39) usado para expressão alvejada do plastídeo.

Claims

1. Método para produzir uma célula transgênica com teor de ácido gama-aminobutírico (GABA) aumentado em comparação com uma célula do tipo selvagem não transformada correspondente, caracterizado pelo fato de ser pelo aumento ou geração de atividade de fator de resposta de auxina, e preferivelmente compreender pelo menos uma das etapas selecionadas do grupo que consiste de: (i) aumentar ou gerar a atividade de SEQ ID NO: 1685 ou de um polipeptídeo que compreende um polipeptídeo, uma sequência de consenso ou pelo menos um motivo de polipeptídeo como descrito na coluna 5 ou 7, Hit 8 da tabela II ou da tabela IV, respectivamente; (ii) aumentar ou gerar a atividade de um produto de expressão de SEQ ID NO: 1684 ou uma molécula de ácido nucleico que compreende um polinucleotídeo como descrito na coluna 5 ou 7, Hit 8 da tabela I e (iii) aumentar ou gerar a atividade de um equivalente funcional de (i) ou (ii).

2. Método de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a expressão de pelo menos uma molécula de ácido nucleico que compreende uma molécula de ácido nucleico selecionadas do grupo que consiste de: a) uma molécula de ácido nucleico que codifica o polipeptídeo mostrado na SEQ ID NO: 1685 ou na coluna 5 ou 7, Hit 8 da tabela II; b) uma molécula de ácido nucleico mostrada na SEQ ID NO: 1684 ou na coluna 5 ou 7, Hit 8 da tabela I; c) uma molécula de ácido nucleico, que, como um resultado da degeneração do código genético, pode ser derivada de uma sequência de polipeptídeo descrita na SEQ ID NO: 1685 ou na coluna 5 ou 7, Hit 8 da tabela II e confere um teor de GABA aumentado em comparação com uma célula vegetal, uma planta ou uma parte da mesma do tipo selvagem não transformada correspondente; d) uma molécula de ácido nuclelco tendo pelo menos 30 % de identidade com a sequência de molécula de ácido nucleico de um polinucleotídeo que compreende uma molécula de ácido nucleico mostrada na SEQ ID NO: 1684 ou na coluna 5 ou 7, Hit 8 da tabela I e confere um teor de GABA aumentado em comparação com uma célula vegetal, uma planta ou uma parte da mesma do tipo selvagem não transformada correspondente; e) uma molécula de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo tendo pelo menos 30 % de identidade com a sequência de aminoácido do polipeptídeo codificado pela molécula de ácido nucleico de (a) a (c) e tendo a atividade representada por uma molécula de ácido nucleico que compreende um polinucleotídeo como descrito na SEQ ID NO: 1684 ou na coluna 5, Ilit 8 da tabela I c confere um teor de GABA aumentado em comparação com um célula vegetal, uma planta ou parte da mesma do tipo selvagem não transformada correspondente; f) molécula de ácido nucleico que hibridiza com uma molécula de ácido nucleico de (a) a (c) sob condições de hibridização estringent.es e confere um teor de GABA aumentado em comparação com uma célula vegetal, uma planta ou parte da mesma do tipo selvagem não transformada correspondente; g) uma molécula de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo que pode ser isolado com o auxílio de anticorpos monoclonais e policlonais feitos contra um polipeptídeo codificado por uma das moléculas de ácido nucleico de (a) a (e) e tendo a atividade representada pela molécula de ácido nucleico que compreende um polinucleotídeo como descrito na SEQ ID NO: 1684 ou na coluna 5, Hit 8 da tabela I; h) uma molécula de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo que compreende a sequência de consenso ou um ou mais motivos de polipeptídeo como mostrado na coluna 7, Hit 8 da tabela IV e preferivelmente tendo a atividade representada por uma molécula de ácido nucleico que compreende um polinucleotídeo como descrito na SEQ ID NO: 1684 ou na coluna 5, Hit 8 da tabela II ou IV; i) uma molécula de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo tendo a atividade representada por uma proteína como descrito na SEQ ID NO: 1685 ou na coluna 5, Hit 8 da tabela II e confere um teor de GABA aumentado em comparação com um célula vegetal, uma planta ou parte da mesma do tipo selvagem não transformada correspondente; j) molécula de ácido nucleico que compreende um polinucleotídeo, que é obtido pela amplificação de uma biblioteca de cDNA ou uma biblioteca genômica usando-se os iniciadores na coluna 7, Hit 8 da tabela III e preferivelmente tendo a atividade representada por uma molécula de ácido nucleico que compreende um polinucleotídeo como descrito na SEQ ID NO: 1684 ou na coluna 5,Hit 8 da tabela II ou IV; e k) uma molécula de ácido nucleico que é obtenível pela avaliação de uma biblioteca de ácido nucleico adequada sob condições de hibridização estringentes com uma sonda que compreende uma sequência complementar de uma molécula de ácido nucleico de (a) ou (b) ou com um fragmento deste, tendo pelo menos 15 nt, preferivelmente 20 nt, 30 nt, 50 nt, 100 nt, 200 nt ou 500 nt de uma molécula de ácido nucleico complementar a uma sequência de molécula de ácido nucleico caracterizada em (a) a (e) e que codifica um polipeptídeo tendo a atividade representada por uma proteína que compreende um polipeptídeo como descrito na SEQ ID NO: 1685 ou na coluna 5, Hit 8 da tabela II; é aumentado ou gerado.

3. Método de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 2, caracterizado pelo fato de que a célula transgênica é uma célula vegetal, uma planta ou uma parte da mesma com teor de ácido gama-aminobutírico (GABA) aumentado em comparação com um tipo selvagem não transformado correspondente.

4. Método de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que a célula vegetal transgênica, uma planta transgênica ou uma parte da mesma é derivada de uma planta monocotiledônea, uma planta dicotiledônea ou uma planta gimnosperma.

5. Método para aumentar o rendimento em uma planta transgênica ou uma parte da mesma em comparação com uma célula do tipo selvagem não transformada, caracterizado pelo fato de compreender pelo menos uma das etapas selecionadas do grupo que consiste de: (i) aumentar ou gerar a atividade de um polipeptídeo que compreende um polipeptídeo, uma sequência de consenso ou pelo menos um motivo de polipeptídeo como descrito na SEQ ID NO: 1685 ou na coluna 5 ou 7, Hit 8 da tabela II ou da tabela IV, respectivamente; (ii) aumentar ou gerar a atividade de um produto de expressão de uma molécula de ácido nucleico que compreende um polinucleotídeo como descrito na SEQ ID NO: 1684 ou na coluna 5 ou 7, Hit 8 da tabela I e (iii) aumentai* ou gerar a atividade de um equivalente funcional de (i) ou (ii).

6. Método de acordo com as reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que a planta transgênica é selecionada do grupo que consiste de milho, trigo, centeio, aveia, triticale, arroz, cevada, soja, amendoim, algodão, nabo de semente oleosa, incluindo canola e nabo de semente oleosa do inverno, milho, mandioca, pimenta, girassol, linho, borragem, cártamo, linhaça, prímula, semente de colza, nabo silvestre, tagetes, plantas solanáceas, batata, tabaco, berinjela, tomate, espécies Vicia, ervilha, alfafa, café, cacau, chá, espécies Salix, palma oleosa, coco, grama perene, lavouras de forragem,/!rabidopsis thaliana, Beta vulgaris, Beta vulgaris var. altíssima, Beta vulgaris var. vulgaris, Beta marítima, Beta vulgaris var. perennis, Beta vulgaris var. conditiva, Beta vulgaris var. esculenta, beterraba de açúcar, família Poaceae, gênero Saccharum, Saccharum officinarum e cana-de-açúcar.

7. Método de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que o rendimento da planta é selecionado do grupo de produção de alimento, produção nutricional, produção de alimento processado, produção de biocombustível, biogás, e álcool.

8. Molécula de ácido nucleico isolada, caracterizada pelo fato de que compreende uma molécula de ácido nucleico selecionada do grupo que consiste de: a) uma molécula de ácido nucleico que codifica o polipeptídeo mostrado na coluna 5 ou 7, Hit 8 da tabela II B; b) uma molécula de ácido nucleico mostrada na coluna 5 ou 7, Hit 8 da tabela I B; c) uma molécula de ácido nucleico, que, como um resultado da degeneração do código genético, pode ser derivada de uma sequência de polipeptídeo descrita na coluna 5 ou 7, Hit 8 da tabela II e confere um rendimento aumentado sob condições de tensão em comparação com uma célula vegetal, uma planta ou uma parte da mesma do tipo selvagem não transformada correspondente; d) uma molécula de ácido nucleico tendo pelo menos 30 % de identidade com a sequência de molécula de ácido nucleico de um polinucleotídeo que compreende uma molécula de ácido nucleico mostrada na coluna 5 ou 7, Hit 8 da tabela I e confere um teor de GABA aumentado em comparação com uma célula vegetal, uma planta ou uma parte da mesma do tipo selvagem não transformada correspondente; e) uma molécula de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo tendo pelo menos 30 % de identidade com a sequência de aminoácido do polipeptídeo codificado pela molécula de ácido nucleico de (a) a (c) e tendo a atividade representada por uma molécula de ácido nucleico que compreende um polinucleotídeo como descrito na coluna 5, Hit 8 da tabela I e confere um teor de GABA aumentado em comparação com uma célula vegetal, uma planta ou parte da mesma do tipo selvagem não transformada correspondente; f) molécula de ácido nucleico que hibridiza com uma molécula de ácido nucleico de (a) a (c) sob condições de hibridização estringentes e confere teor de GABA aumentado em comparação com uma célula vegetal, uma planta ou parte da mesma do tipo selvagem não transformada correspondente; g) uma molécula de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo que pode ser isolado com o auxílio de anticorpos monoclonais e policlonais feitos contra um polipeptídeo codificado por uma das moléculas de ácido nucleico de (a) a (e) e tendo a atividade representada pela molécula de ácido nucleico que compreende um polinucleotídeo como descrito na coluna 5, Hit 8 da tabela I; h) uma molécula de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo que compreende a sequência de consenso ou um ou mais motivos de polipeptídeo como mostrado na coluna 7, Hit 8 da tabela IV e preferivelmente tendo a atividade representada por uma molécula de ácido nucleico que compreende um polinucleotídeo como descrito na coluna 5, Hit 8 da tabela II ou IV; i) uma molécula de ácido nucleico que codifica um polipeptídeo tendo a atividade representada por uma proteína como descrita na coluna 5, Hit 8 da tabela II e confere um rendimento aumentado sob condição de tensão abiótica transitória e repetitiva em comparação com uma célula vegetal, uma planta ou parte da mesma do tipo selvagem não transfonnada correspondente; j) molécula de ácido nucleico que compreende um polínucleotídeo, que é obtido pela amplificação de uma biblioteca de cDNA ou uma biblioteca genômica usando-se os iniciadores na coluna 7, Hit 8 da tabela III que não inicia em sua extremidade 5' com os nucleotídeos ATA e preferivelmente tendo a atividade representada por uma molécula de ácido nucleico que compreende um polinucleotídeo como descrito na coluna 5, Hit 8 da tabela II ou IV; e k) uma molécula de ácido nucleico que é obtenível pela avaliação de uma biblioteca de ácido nucleico adequada sob condições de hibridização estringentes com uma sonda que compreende uma sequência complementar de uma molécula de ácido nucleico de (a) ou (b) ou com um fragmento deste, tendo pelo menos 15 nt, preferivelmente 20 nt, 30 nt, 50 nt, 100 nt, 200 nt ou 500 nt de uma molécula de ácido nucleico complementar a uma sequência de molécula de ácido nucleico caracterizada em (a) a (e) e que codifica um polipeptídeo tendo a atividade representada por uma proteína que compreende um polipeptídeo como descrito na coluna 5, Hit 8 da tabela II; ou um ácido nucleico de (a) a (k), em que o ácido nucleico é diferente em pelo menos em um ou mais nucleotídeos da sequência como descrita na coluna 5 ou 7, Hit 8 da tabela I A e preferivelmente codifica uma proteína que difere em pelo menos um ou mais aminoácidos das sequências de proteínas como descritas na coluna 5 ou 7, Hit 8 da tabela II A tendo atividade de fator de resposta de auxina e/ou a atividade representada por uma proteína como descrita na SEQ ID NO: 1685 ou na coluna 5, Hit 8 da tabela II e conferindo um conteúdo de GABA aumentado em comparação com uma célula vegetal, uma planta ou parte da mesma do tipo selvagem não transfonnada correspondente.

9. Construção de ácido nucleico que confere a expressão da dita molécula de ácido nucleico como definida na reivindicação 8, caracterizada pelo fato de que compreende um ou mais elementos reguladores.

10. Vetor, caracterizado pelo fato de que compreende uma molécula de ácido nucleico como definida na reivindicação 8 ou a construção de ácido nucleico como definida na reivindicação 9.

11. Célula hospedeira, caracterizada pelo fato de que foi transformada estável ou transitoriamente com o vetor como definido na reivindicação 10 ou a molécula de ácido nucleico como definida na reivindicação 8 ou a construção de ácido nucleico como definida na reivindicação 9 e que mostra devido à transformação um teor de ácido gama-aminobutírico (GABA) aumentado em comparação com um tipo selvagem não transformado correspondente.

12. Processo para produzir um polipeptídeo, caracterizado pelo fato de que o polipeptídeo é expresso no núcleo hospedeiro ou na célula hospedeira como definida na reivindicação 11.

13. Polipeptídeo produzido pelo processo como definido na reivindicação 12 ou codificado por urna molécula de ácido nucleico como definida na reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que o polipeptídeo distingue-se da sequência como mostrado na tabela II A por um ou mais aminoácidos.

14. Anticorpo, caracterizado pelo fato de que se liga especificamente ao polipeptídeo como definido na reivindicação 13.

15. Núcleo de célula, célula, núcleo de célula vegetal, célula vegetal, tecido vegetal, material de propagação, pólen, progênie, material coletado ou uma planta, caracterizados pelo fato de que compreendem a molécula de ácido nucleico como definida na reivindicação 8 ou o núcleo hospedeiro ou a célula hospedeira como definida na reivindicação 11.