BRPI1004808A2 - composiÇÕes baseadas em nanopartÍculas de pràpolis, processos de obtenÇço e uso - Google Patents

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Luiz Henrique Capparelli Mattoso
Oliveira Caue Ribeiro De
Maria Aparecida Vasconcelos Paiva E Brito
Carla Christine Lange
Marcela De Mello Brandao Vinholis
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Embrapa Pesquisa Agropecuaria
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Abstract

COMPOSIÇÕES BASEADAS EM NANOPARTÍCULAS DE PRàPOLIS, PROCESSOS DE OBTENÇÂO E USO. A presente invenção refere-se a processo de obtenção e uso de composições constituídas de nanopartículas de própolis, opcionalmente, associadas a uma ou mais substâncias de interesse, tais como princípios ativos, bem como, opcionalmente, substâncias de efeito secundário, tais como sinergistas e adjuvantes, O processo de obtenção das nanopartículas compreende as seguintes etapas de: i) preparo de: uma fração A, que consiste em extrato de própolis dissolvido em solvente orgânico à qual pode ser adicionado um ou mais estabilizantes e/ou emulsificantes, bem como adicionada de, opcionalmente, uma ou mais substâncias de interesse e/ou de efeito secundário; ii) preparo de uma fração B, fase aquosa, constituída de: (ii. 1) água; ou (ii.2) de uma solução ou dispersão aquosa, à qual pode ser adicionado um ou mais estabilizantes e/ou emulsificantes; iii) gotejamento da fração A sobre a fração B ou da fração B na fração A; iv) homogeneização da mistura por meio de agitação mecânica e formação espontânea de nanopartículas com tamanho médio de 1 a 1000 nm em uma dispersão; v) opcionalmente, podem-se envolver as seguintes etapas adicionais: (v- 1) remoção do solvente orgânico; e/ou (v-2) secagem da nanodispersão. As composições desenvolvidas têm aplicações em campos tais como agroquímico, farmacêutico cosmético ou químico.

Description

Relatorio Descritivo de Patente de Inven9ao: “COMPOSITES BASEADAS EM NANOPARTICULAS DE PROPOLIS, PROCESSOS DE OBTENCAO E USO，，.
ΓAMPO DAINVENCAO
A presente ΐηνεηφδο refere-se a processo de οΜεηςδο e uso de composites constituidas de nanoparticulas de propolis, opcionalmente, associadas a uma ou mais substancias de interesse, tais como principios ativos, bem como, opcionalmente, substancias de efeito secundario, tais como sinergistas e adjuvantes.
FITNDAMENTOS DA INVENCAO
Propolis apresenta caracteristicas farmacologicas, tais como bactericida, com a9ao contra Staphylococcus aureus, Staphylococcus aureus metacilina resistente, Escherichia coli, Clostridium perfringens, Actinomyces israelii, Prevotella nigrescens, Fusobacterium nucleatum, Bacillus subtilis, dentre outras (FERREIRA, B. A. et al, Antimicrobial effect of propolis and other substances against selected endodontic pathogens, Oral Surgery, Oral Medicine, Oral Pathology, Oral Radiology & Endodontics, v. 16, p. 104-709, 2007); anticarcinogenicas (FU, J.; XIA, Y.; ZHENG, Y. Antimutagenicity of propolis against some mutagens in vivo and in vitro, Biomedical and Environmental Sciences, v. 17，p. 469-475，2004.); antioxidante (CONEAC, G.; et al. Flavonoid contents of propolis from the west side of Romania and correlation with the antioxidant activity, Chemical Bulletin of "Politechnica", v. 53, n. 67’ p. 1-2， 2008.)； antiinflamatoria (PAULINO, N. et al, Anti-inflammatory effects of a bioavailable compound, Artepillin C, in Brazilian propolis, European Journal of Pharmacology, v. 587, p. 296-301, 2008), bem como elevada adesividade a pele humana decorrente de sua intera9ao com oleos e proteinas tegumentares (BURDOCK, G.A., Review of the biological properties and toxicity of bee propolis (propolis). Food and Chemical Toxicology, v. 36, p. 347-363, 1998).
Existe sinergia entre os componentes de extrato bruto de propolis e outros compostos como revelado em SCHELLER et al. (1999) (SCHELLER, S. et al. Synergism between ethanolic extract of propolis (EEP) and anti-tuberculosis drugs on growth of mycobacteria. Journal of Biosciences, v. 54, n. 7-8, p. 549-53，1999), FERN ANDES JUNIOR (2005) (FERN ANDES JUNIOR, A. Propolis: anti- Staphylococcus aureus activity and synergism with antimicrobial drugs. Mem Inst Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro, v. 100, n. 5, p. 563-566, aug 2005) e em CN1864661 ou de nanoparticulas de propolis associadas com ions de prata para desinfec?ao de superficies, tal como revelado no documento CN1286373.
A propolis e utilizada em formula(?oes terapeuticas, cosmeticas e em produtos para higiene, entre outras. E disponivel comercialmente como extrato, tablete ou encapsulado. Esta ultima forma de apresenta块ο permite tambem a libera9ao controlada e algumas vezes direcionada da propria propolis. Mas, nos produtos conhecidos funciona unicamente como principio ativo.
A produ9ao de nanoparticulas apresenta-se como uma tecnologia vantajosa para encapsula9ao visando a IiberaySo controlada ou direcionada de composipSes ativas ou possibilitar ο uso de novas vias de aplica?So dessas composiQoes.
Tecnicas convencionais de produ9ao de micro ou nanoparticulas de propolis tais como aquelas reveladas nos documentos BR PIO106564-5, US5133908 e CNl406588, visam somente modificar algumas de suas propriedades, como por exemplo, a solubilidade, conforme visto no documento de Kim et al em 2008 (KIM, D. et al. Preparation of propolis nanofood and application to human cancer. Biological Pharmaceutical Bulletim, v. 31, n. 9’ p.1704-1710, 2008), e para que sejam em seguida ou concomitantemente incorporadas em material de cobertura. Quando encapsulada em nanoparticulas, a propolis assume parte das caracteristicas das substancias que compoem a matriz, como exemplo deste efeito podemos citar a redu9ao do gosto da propolis nanoencapsulada, uma vez que quem entra em contato direto com a papila gustativa e ο polimero que reveste a propolis, como ο citado no documento US 20090202635.
Contudo, se a propolis e utilizada como matriz para confec^So da nanoparticula (agente encapsulante) ela e quem passa a reger as caracteristicas de tais particulas, apresentando assim, novas caracteristicas. Para exemplificar, a azitromicina, em sua forma pura, encontra-se como pequenos cristais que possuem pouca ou nenhuma adesao a derme humana. Contudo, quando nanoencapsulada com a propolis, a azitromicina passa a ser recoberta pela propolis, que faz ο contato direto com a derme. Nesta condi?So, fazendo uso da propriedade de adesividade da propolis a pele humana (BURDOCK, G.A., Review of the biological properties and toxicity of bee propolis (propolis). Food and Chemical Toxicology, v. 36, p. 347-363，1998)，a azitromicina
acaba por ficar aderida a pele.
A agita<?ao supersonica e uma das tecnicas utilizadas para a obten<?ao de nanoparticulas de propolis, como expresso em documentos de patente tais como TW200637500, CN1413598, CN1685928. Sao tecnicas de homogeneiza9ao que requerem elevado consumo de energia e uso de equipamentos de alto custo, mais apropriados para ο uso laboratorial do que industrial. Alem disso, podem ocasionar altera9oes na funcionalidade de principios ativos pela elevado de temperatura causada pelo fenomeno de cavita^So ou ainda a degrada^So de compostos ativos do extrato de propolis por radicals livres (ROS - reactive oxygen species) formados durante esta opera9ao (STANISAVLJEV et al. Antioxidant and antimicrobial activities of echinacea {Echinacea purpurea L.) extracts obtained by classical and ultrasound extraction. Biotechnology and Bioengineering. Chinese Journal of Chemical Engineering, v. 17, n. 3, p. 478-483, 2009). sumario da invencao
A presente invencao se refere a composites constituidas de nanoparticulas de propolis, opcionalmente, associadas a uma ou mais substancias de interesse, tais como principios ativos, bem como, opcionalmente, substancias de efeito secundario.
Refere-se tambem a presente inver^So ao processo de obten9ao de composi^Ses constituidas de nanoparticulas de propolis, opcionalmente, associadas a uma ou mais substancias de interesse.
A presente invencao se refere ainda aos usos de composites constituidas de nanoparticulas de propolis, opcionalmente, associadas a uma ou mais substancias de interesse.
O processo de obten^So de composites constituidas de nanoparticulas de
propolis utiliza as tecnicas de: (i) deslocamento de solvente e, opcionalmente, posterior remo^ao de solvente; ou (ii) a tecnica de forma?§o de emulsao com subsequente remo9ao do solvente. A tecnica de forma9ao de emulsao e utilizada quando ο solvente e imiscivel em agua.
O processo de obten。5o das nanoparticulas consiste nas seguintes etapas:
i) prepare de: uma fra?2o A, que consiste em extrato de propolis dissolvido em solvente organico em urna propor<?So massa-volume de 0,001 a 40%, a qual pode ser adicionado um ou mais estabilizantes e/ou emulsificantes, na concentra^ao de 0,01 a 20% (m/v), bem como adicionada de, opcionalmente, uma ou mais substancias de interesse e/ou de efeito secundario; ϋ) prepare de uma fra^So B, fase aquosa, constituida de: (ii. 1) agua; ou (ii.2) de
uma solu9ao ou dispersao aquosa na concentra^So de 0,01 a 20% (m/v), a qual pode ser adicionado um ou mais estabilizantes e/ou emulsificantes, na concentra?ao de 0,01 a 20% (m/v);
iii) gotejamento da fra?ao A sobre a fra<?So B ou da fra?So B na fra^ao A; iv) homogeneiza^ao da mistura a temperatura de -2 0C a 90 0C e forma9ao
espontanea de nanoparticulas com tamanho medio de 1 a 1000 nm em uma dispersao, sendo que tal homogeneiza^o ocorre por meio de agitato mecanica, que consiste na rota9ao de 1 (um) a 40000 rpm, quando ο solvente organico for soliivel ou parcialmente soliivel em agua, e de 5000 a 25000 rpm quando ο solvente organico for imiscivel em agua;
ν) opcionalmente, podem-se envolver as seguintes etapas adicionais: (v-1) remo9ao do solvente organico; e/ou (v-2) secagem da nanodispersao e obten9ao de produto em ρό.
O produto obtido possui tamanho de particula que pode ser modulado pela varia9ao nas concentra9des dos componentes e das condipoes de processamento.
A propolis pode ser utilizada como material que compoe as nanoparticulas, e pode ter ίυηςδο de carreador de substancias de interesse, sendo suas propriedades biologicas, por exemplo, acrescentadas ao produto final. Opcionalmente, essas propriedades podem ser potencializadas por se tratar de um sistema nanoestruturado. Alem disso, a propolis e considerada materia-prima de baixo custo e conhecida pela popula^ao.
As nanoparticulas formadas podem ser utilizadas para aplica9ao em composi^ao farmaceutica, agroquimica, cosmetica ou quimica em geral, em combina9ao ou nao com uma ou mais substancias de interesse. BREVE DESCRICAO DAS FIGURAS
Figura 1: Distribui^So do tamanho de particula (diametro), em nanometros, em ήιηςείο do niimero de nanoparticulas de propolis contend。oleo de Eucalyptus globulus. Figura 2: Distribui<?So do tamanho de particula (diametro), em nanometros, em funQao do niimero de nanoparticulas de propolis. NP (naxioparticulas) maiores sao particulas com diametro medio de 380,4 nm. NP (nanoparticulas) menores sao particulas com
diametro medio de 250,0 nm.
Figura 3: Curva de IiberaqSo de tetraciclina encapsulada e nao encapsulada.
Figura 4: Distribui?ao do tamanho de particula (diametro), em nanometros, em fun?ao do niimero de nanoparticulas de propolis.
DESCRICAO DETALHADA DAINVENCAO
O objeto da presente inven^So sao composites constituidas de nanoparticulas de propolis, opcionalmente, associadas a uma ou mais substancias de interesse, tais como principios ativos, bem como，opcionalmente, substancias de efeito secundario, tais como sinergistas e adjuvantes.
Considera-se, para efeito desta inven^ao, que "substancia de interesse" compreende substancia com efeito, mas nao se limitando a esta rela^ao, terapeutico, cosmetico, protetor (protepao de materials ou seres vivos contra agentes bioticos ou abioticos), antimicrobiano ou quimico.
Refere-se tambem a presente invenfao ao processo de obten^ao de composites constituidas de nanoparticulas de propolis, opcionalmente, associadas a uma ou mais substancias de interesse, como principios ativos, bem como, opcionalmente, substancias de efeito secundario, tais como sinergistas e adjuvantes.
A presente inven?ao se refere ainda aos usos de composites constituidas de nanoparticulas de propolis, opcionalmente, associadas a uma ou mais substancias de interesse e/ou uma ou mais substancias de efeito secxmdario.
Adicionalmente5 a presente inven9ao refere-se ao uso da propolis como nanocarreador para libera^o controlada ou direcionada de substancias de interesse e/ou substancias de efeito secundario.
O processo de obten^ao de composites constituidas de nanoparticulas de propolis utiliza as tecnicas de: (i) deslocamento de solvente e，opcionalmente，posterior remo9ao de solvente; ou (ii) a tecnica de forma?3o de emulsao com subsequente remo^ao do solvente. A tecnica de forma^ao de emulsao e utilizada quando ο solvente e imiscivel em agua. Pr0polis e um material biodegradavel que contem entre seus constituintes tanto substancias hidrofobicas quanto anfifilicas. As dltimas contribuem para a Confec9So das nanoparticulas, pela tendencia a se auto-organizarem. Estas nanoparticulas de propolis possuem propriedades que podem ser agregadas as de substancias de interesse ou ainda pode haver sinergia entre os componentes. Estes consistem de uma ou mais substancias hidrofobicas ou anfifilicas ou conjunto destas substancias.
Nenhum dos documentos disponiveis no estado da tecnica apresenta composi^So constituida de nanoparticulas com a mesma funcionalidade que a desta ΐηνεηφδο. A saber, as "substancias de interesse" incluem, mas nao se limitam a: proteinas, antibioticos, anti-inflamatorios, hormonios, aminoacidos, antivirais, antifungicos, herbicidas, inseticidas, acaricidas, anti-helminticos, vitaminas, minerals, acidos graxos, carboidratos, compostos nitrogenados, antioxidantes, anticorrosivos, fotoprotetores, catalizadores, lubrificantes, enzimas, extratos naturais (tais como, oleos essenciais, corantes, xaropes e aromatizantes), pigmentos ou corantes. A saber, as substancias de efeito secundario incluem, mas nao se limitam a:
farmacos, agroquimicos, extratos naturais, cosmeticos ou quimicos em geral.
A propolis possui propriedades antimicrobianas e antioxidantes e e considerada materia-prima de baixo custo, bastante conhecida pela popula?ao. Em sua forma bruta, a propolis e um material duro e quebradi?。，com Colorado que varia do amarelo ao marram escuro, produzido pelas abelhas com a fun9ao de preencher frestas e contribuir na assepsia de compartimentos que necessitem de elevado grau de higiene, como as celulas de postura de ovos. Para a confecySo deste material, as abelhas utilizam brotos, botoes florais, cascas e exsudatos resinosos de diversas plantas, ο que faz com que a propolis possua composi^ao quimica complexa, e de modo geral, contem concentrates distintas de resinas, ceras, oleos essenciais e uma fraySo soluvel em alcool ou Mlsamo vegetal (BURDOCK, G. A. Review of the biological properties and toxicity of bee propolis (propolis), Food and Chemical Toxicology, v. 36, p. 347-363，1998; PEREIRA, A. S.; SEIXAS, F. R. M. S.; AQUINO NETO F. R. Propolis: 100 anos de pesquisa e suas perspectivas fiituras, Quimica Nova, v. 25, n. 2，p. 321-326, 2002).
A composi^So dos extratos depende do tipo de solvente utilizado e da origem da
propolis. A maioria dos extratos disponiveis comercialmente e obtida utilizando-se alcoois, tais como etanol e metanol. O extrato alcoolico e composto por resinas vegetais, ceras e oleos essenciais, contendo compostos fenolicos tais como os polifenois.
Para efeito desta inven?ao "emulsificante" e uma substancia que torna possivel a forma9ao ou a manutei^So de uma dispersao uniforme de duas ou mais substancias imisciveis. Considera-se "estabilizante" uma substancia que torna possivel a manuten9ao de uma dispersao uniforme de duas ou mais substancias imisciveis.
O nanodimensionamento de propolis modifica as suas caracteristicas fisicas e quimicas. Pode, por exemplo, melhorar a sua solubilidade em agua ou a eficiencia de suas fun^oes terapeuticas, tal como revelado no documento de patente CN1406588. Por outro lado, as nanoparticulas de propolis podem estar associadas a outras nanoparticulas de material de interesse e passar a reger as caracteristicas das particulas, tal como ocorre em um dos aspectos da presente inven9ao.
Considera-se "nanodimensionamento" a redu9ao do tamanho de particula para valores inferiores a 1000 nm em pelo menos uma das dimensdes (SOPPIMATH, K. S. et al. Biodegradable polymeric nanoparticles as drug delivery devices. Journal of Controlled Release, v.70, p. 1-20, 2001; REIS et al. Nanoencapsulation I. Methods for preparation of drug-loaded polymeric nanoparticles. Nanomedicine: Nanotechnology, Biology, and Medicine, v. 2, p. 8 - 21, 2006).
Quando um corpo se encontra em escala nanometrica, a importancia de forpas como gravidade, ο atrito e a inercia diminuem, enquanto outras for^as fisicas passam a predominar, como as eletrostaticas, as de Van der Waals e ο movimento browniano, por exemplo. A altera9ao na intensidade destas for^as pode conferir novas propriedades a nanoparticula em compara9ao com a mesma substancia na escala metrica. Isto e, esta tecnologia pode ser aplicada para atribuir novas propriedades as substancias ou mesmo ο aumento de sua reatividade por meio do nanodimensionamento, que pode se dever ao aumento da rela?So area superficial-volume. Esta alteragSo de relaqiSo conduz a um aumento da area de contato entre as nanoparticulas e outras substancias, favorecendo assim suas intera9oes e rea9oes, tornando-as mais efetivas por unidade de massa.
A modula^ao da relaq^o area superficial-volume da substancia original tambem interfere diretamente na sua eficiencia biologica, ou seja, diminui a dose da substancia administrada necessaria para se atingir ο mesmo efeito, pode-se elevar a dose e reduzir ο risco de toxicidade advinda da composi9ao que contem a substancia ou principio ativo encapsulado ou ainda, aumentar a αςαο efetiva da substancia quando ocorrer ο direcionamento.
Uma das utilidades das nanoparticulas e veicular substancias de interesse, isto e, ter a ήχηφδο de nanocarreadoras para libera?ao controlada ou direcionada dos mesmos. De maneira geral, os materials utilizados para confec^ao de nanocarreadores para libera9ao controlada ou direcionada de substancias sao classificados como biodegradaveis ou nao-biodegradaveis. Entende-se por "biodegradavel" ο material cuja degrada?ao ocorre pela a?ao de um agente biologico, como enzima ou microrganismo.
O padrao de libera9ao do principio ativo veiculado por nanoestruturas biodegradaveis resulta na completa degrada9ao e excre?So ou metaboliza^So dos intermediarios da matriz da nanoparticula, e no caso das nanoparticulas nao- biodegradaveis, ο process。de IiberaySo do principio ativo e decorrente de sua difiisao a partir da nanoparticula, e esta tende a se acumular no organismo ou no meio ambiente. As substancias que compoem as nanoparticulas de propolis sao, preferencialmente, biodegradaveis e biotoleraveis.
A tecnica de deslocamento de solvente e considerada uma ορςείο simples e economica para a obten9ao de nanodispersoes coloidais (US5133908, US7348031) e consiste na forma9ao de uma emulsao oleo-agua entre uma dispersao de polimero em solvente parcialmente sohivel em agua que contem a substancia a ser recoberta e uma fase aquosa contend。um estabilizante. A adi^So posterior de agua causa a difusao do solvente para a fase externa, resultando na forma9ao de nanoesferas (QUINTANAR- GUERRERO, D. et al. Preparation and Characterization of Nanocapsules from Preformed Polymers by a New Process Based on Emulsification-Diffusion Technique. Pharmaceutical Research, v. 5, n. 7, jul, p. 1056-1062，1998). O processo de acordo com a presente ϊηνεηςδο gera composi9oes baseadas em
nanoparticulas de propolis mediante as etapas de:
i) prepare de: uma fra^ao A, que consiste em extrato de propolis dissolvido em solvente organico em uma propor^So massa-volume variando de 0,001 a 40%, preferencialmente de 0,1 a 20%, que permita a forma^So de nanoparticulas, sendo que, opcionalmente, pode ser adicionado um ou mais estabilizantes e/ou
emulsificantes, na concentra9ao de 0,01 a 20% (m/v), preferencialmente de 0,1 a 5% (m/v), bem como adicionada de, opcionalmente, uma ou mais substancias de interesse e/ou de efeito secundario;
ii) prepare de uma fra«?ao B, fase aquosa, constituida de: (ii.l) agua; ou (ii.2) de uma solu9ao ou dispersao aquosa na concentra^ao de 0,01 a 20% (m/v), a qual
pode ser adicionado um ou mais estabilizantes e/ou emulsificantes, na
concentra9ao de 0,01 a 20% (m/v), preferencialmente de 0,1 a 5% (m/v)；
iii) gotejamento da fra?ao A sobre a fra9ao B ou da fra?So B na fra^ao A;
iv) homogeneiza9ao da mistura a temperatura de -2°C a 90°C e forma9ao espontanea de nanoparticulas com tamanho medio de 1 a 1000 nm em uma
dispersao, sendo que tal homogeneizagao ocorre por meio de agita^So mecanica,
que consiste na rota9ao de 1 (um) a 40000 rpm, preferencialmente de 100 a 1000 rpm, quando ο solvente organico for soliivel ou parcialmente soliivel em agua, e de 5000 a 25000 rpm quando ο solvente organico for imiscivel em agua;
ν) opcionalmente, podem-se envolver as seguintes etapas adicionais: (v-1) remofao do solvente organico; e/ou (v-2) secagem da nanodispersao e obten^ao
de produto em ρό.
O produto obtido possui tamanho de particula que pode ser modulado pela varia^So nas concentrates dos componentes e das condi^des de operaq;So.
A fase aquosa que compoe a fra^So B e composta por exclusivamente agua ou uma solu9ao ou dispersao aquosa dotada de uma ou mais substancias, embora nao se limite a estas, selecionadas do seguinte grupo: polimero biodegradavel ou nao e biocompativel ou nao, selecionado do grupo que compreende polimeros de acido acrilico, alginatos, gomas biossinteticas, amidos, amidos modificados, esteres de celulose, compostos de celulose, gelatinas, hidrocoloides, acido hialuronico, glicois, gomas naturais, poliacrilatos, oxidos de polietileno, polimeros derivados do vinil, goma de acacia, goma agar, goma arabica, carboximetilcelulose, carboxivinil, carragena, caseina, acetato de celulose, quitosana, quitina, colageno, dextrana, dextrina, ciclodextrinas, levana, etilcelulose, albumina, hidroxietilcelulose, hidroxietilmetilcelulose, hidroxipropilmetilcelulose, hidroxipropilcelulose, homopolissacarideos, heteropolissacarideos, polietilenoglicol e copolimeros, pectina,
polietilenos e copolimeros, alcoois polivinilicos, polivinilpirrolidona, xantana, zeinas, policaprolactona e seus copolimeros, poliacido latico e seus copolimeros, poliacido ghcolico e seus copolimeros, polihidroxibutirato e seus copolimeros, polidroxivalerato e seus copolimeros, polimetilmetacrilato e seus copolimeros, polietilcianoacrilato e seus copolimeros, polibutilcianoacrilato e seus copolimeros, polihexilcianoacrilato e seus copolimeros, poliisohexilcianoacrilato e seus copolimeros, poliacrilamidas, poliuretanos e seus copolimeros, poliestireno e seus copolimeros, polivinilpiridinas e seus copolimeros, poliacroleinas e seus copolimeros, poliamidas, polifenil esteres e poliuretanos, sejam isolados ou combinados em diferentes propoi^Ses.
O solvente utilizado e selecionado do grapo que compreende etanol, isopropanol, n-butanol, alcool sec-butilico, alcool ter-butilico, eter etilico, eter dietilico, eter de petroleo, eter metilico, eter dimetilico, alcool benzilico, propilenoglicol, polipropilenoglicol, dimetilssulfoxido, etilenoglicol, alcool n-propilico, alcool metilico, acetona, propanona, butanona, butanodiona, diclorometano, triclorometano, polietilenoglicol, acido acetico glacial, tetracloreto de carbono, percloretileno, cloreto de metileno, n-hexano, estireno, xileno, tolueno, benzeno, acetato de etila, 1,4-dioxano, tetrahidroforano (THF), acetonitrila, dimetilformamida, n-butanol, n-propanol, acido formico, ciclohexano, ou solutes aquosas de tais solventes ou misturas deles. Preferencialmente, utilizam-se etanol, acetona, diclorometano, triclorometano ou hexano.
O estabilizante ou emulsificante ou conjunto de estabilizantes ou de
emulsificantes, caso seja adicionado a fase aquosa ou fase organica, e utilizado na concentra9ao de 0,01 a 20% (m/v), sendo utilizado, preferencialmente de 0,1 a 5% (m/v), bem como e selecionado do grupo que compreende, mas nao se limita a, acido alginico, alcoois polivinilicos, alginatos, agar agar, carragena, celulose e seus derivados, cetildimeticonas, copoliois, detergentes, dodecil sulfato de sodio, lecitinas, esteres graxos de sacarose, esteres de acidos graxos com poliglicerol, esteres de acido ricinoleico interesterificado com poliglicerol, esteres de acidos graxos com propilenoglicol, fosfolipideos, gomas, pectina, pectina amidada, polietilenoglicol e seus copolimeros, polietilenos e seus copolimeros, polioxietilenos e seus copolimeros, oxido de etileno , polissorbato e seus derivados, polivinilpirrolidona, proteinas anfifilicas, mono e diglicerideos, saboes, monoestearato de glicerol, oleato de sodio, fosfato de amonia, acetato isobutirato de sacarose, homopolissacarideos, heteropolissacarideos, estearoil-2-lactil lactato de sodio, estearoil-2-lactil lactato de calcio, citrato de sodio,
fosfato dissodico, estearilamina, oleilamina, 1 -2dioleoil-3trimetil-am6nio propano,
®
alquil-sulfatos, 2-dodecoxyethanol, carbopol®, polioxietileno lauril eter e SPAN . Preferencialmente sendo utilizado alcool polivinilico, fosfolipideos ou polissorbatos. A homogeneiza^ao ocorre por meio de agita^ao mecanica, simultaneamente ao
gotejamento e a temperatura de -2 0C a 90 °C. As nanoparticulas formadas possuem diametro medio de 1 a 1000 nm em uma dispersao.
A remo^ao do solvente organico ocorre mediante centrifuga?ao seguida ou nao de lavagem das nanoparticulas, simples evapora^So, rota-evapora9ao, liofiliza^So, spray drying, extra^ao liquido-liquido ou carboniza?So do solvente organico com acidos. Preferencialmente sendo realizada por centrifuga9ao, seguida ou nao de lavagem das nanoparticulas, simples evapora^ao ou rota-evaporaQao.
Um aspect。da inven^ao tem-se uma composi9ao de nanoparticulas de propolis que consiste de propolis, solvente organico, agua, opcionalmente estabilizantes e/ou emulsificantes, opcionalmente uma ou mais substancias de interesse, bem como opcionalmente uma ou mais substancias de efeito secundario, compondo uma dispersao constituida de nanoparticulas de tamanho de 1 a 1000 nm de propolis associado aos ditos componentes em meio liquido.
Outro aspecto da ίηνεηςδο tem-se uma composiifao de nanoparticulas de propolis que consiste de propolis, agua, opcionalmente estabilizantes e/ou emulsificantes, opcionalmente uma ou mais substancias de interesse, bem como opcionalmente uma ou mais substancias de efeito secundario, compondo uma dispersao constituida de nanoparticulas de tamanho de 1 a 1000 nm de propolis associado aos ditos componentes em meio liquido. Ainda em outro aspecto da ΐηνεηφδο tem-se uma composi^ao de nanoparticulas
de propolis que consiste de propolis, agua, opcionalmente estabilizantes e/ou emulsificantes, opcionalmente uma ou mais substancias de interesse, bem como opcionalmente uma ou mais substancias de efeito secundario, compondo um produto em ρό constituido de nanoparticulas de tamanho de 1 a 1000 nm de propolis associado a pelo menos um dito componente.
Em outro aspecto da invenpao a propolis e utilizada como material que compoe as nanoparticulas, sendo suas propriedades acrescentadas a substancia ou substancias de interesse aos quais estao associadas, havendo efeito sinergico entre as nanoparticulas de propolis e a substancia ou substancias de interesse e estas propriedades conhecidas da propolis ainda podem ser potencializadas por se tratar de um sistema nanoestruturado. Tais substancias de interesse consistem em farmacos, agroquimicos, cosmeticos ou
quimicos em geral.
Em outro aspecto da inven^So as propriedades da propolis sao acrescentadas a substancia de interesse que carreia, havendo efeito aditivo entre material carreador e principio ativo ou conjunto de principios ativos e estas propriedades biologicas conhecidas da propolis ainda podem ser potencializadas por se tratar de um sistema nanoestruturado. Adicionalmente, quando agindo como material carreador, as nanoparticulas de propolis podem promover libera^ao sustentada ou mesmo ο direcionamento da substancia de interesse. Tais substancias de interesse consistem em farmacos, agroquimicos, cosmeticos ou quimicos em geral.
Pertencente a familia Myrtaceae, Eucalyptus globulus, Eucalyptus citriodora e Eucalyptus staigeriana sao especies cujo oleo essencial obtido de suas folhas possui conhecido uso farmaceutico, como anti-inflamatorio, analgesico, antioxidante, antimicrobiano, inseticida e larvicida (MACEDO, I. T. F. et al. Atividade ovicida e larvicida in vitro do oleo essencial de Eucalyptus globulus sobre Haemonchus contortus. Rev. Bras. Parasitol. Vet., Jaboticabal, v. 18，n. 3，p. 62-66, jul.-set. 2009). Dentre os componentes do oleo essencial, monoterpenos, metabolitos secundarios tais como ο 1,8-cineol ou eucaliptol, sao potenciais toxicos a insetos e, em sua maioria, atoxicos a mamiferos (CHAGAS, A.C.S.; et al. Efeito acaricida de oleos essenciais e concentrados emulsionaveis de Eucalyptus spp em Boophilus microplus. Braz. J. vet. Res. anim. Sci., Sao Paulo, v. 39, n. 5, p. 247-253, 2002). Macrolideos sao um grapo de antibioticos que inibem a sintese proteica pela
bacteria nos ribossomos 50S caracterizados por conter em sua estrutura um anel macrociclico e uma lactona. Entre os macrolideos tem-se: azitromicina, claritromicina, roxitromicina e eritromicina.
As tetraciclinas, tais como tetraciclina, minociclina e doxiciclina, sao compostos antimicrobianos considerados como de efeito bacteriostatico e aplicados para uso humano ou veterinario. Por possuir em sua estrutura grupos capazes de formar IigapSes de hidrogenio intramoleculares, a tetraciclina tem propriedades quelantes, e forma complexos insoMveis com ions metalicos de ferro, calcio, magnesio e aluminio em pH neutro. Na forma de cloridratos, as tetraciclinas sao sohiveis em agua. Estas moleculas se ligam reversivelmente ao ribossomo 30S e inibem a IigaQao do aminoacil-t-RNA ao
sitio aceptor no ribossomo 70S. EXEMPLO1
ENCAPSULAMENTO DE OLEO ESSENCIAL DE EUCALIPTO EM EXTRATO DE PROPOLIS E SEU EFEITO LARVICIDA SOBRE Amblyomma cajennense.
Preparou-se extrato alcoolico de propolis a 2,75% em materia seca obtido pela dilui9ao de extrato original contendo 13,75% de materia seca. Adicionou-se 0,275 mg de oleo essencial de Eucalyptus globulus ao extrato. Gotejou-se lentamente 1 mL da mistura entre extrato de propolis e oleo essencial em 5 mL de uma solu9ao aquosa de alcool polivinilico (PVA) a 0,3% que estava sendo agitada constantemente a 600 rpm e mantida a 35°C. Formou-se espontaneamente uma emulsao. O extrato alcoolico e a solu9ao aquosa foram previamente filtrados em filtros de nylon de 0,22 micrSmetros. Determinou-se a distribui9ao de tamanho por espalhamento dinamico de luz, conforme observado na Figura 1. O diametro medio das particulas obtidas foi de 438,1 nm, potencial Zeta de -31,5 mV e indice de polidispersao de 0,267. A eficiencia de encapsulamento (E.E.) de 73% foi determinada por analise de cromatografia a gas.
Foram realizados testes in vivo para determinar a eficiencia larvicida do oleo encapsulado em nanoparticulas de propolis contra larvas de Amblyomma cajennense. Foram produzidas emulsoes oleo/agua contendo respectivamente 2,5, 5 e 10% de oleo de Eucalyptus globulus. As emulsoes foram comparadas com suspensoes de nanoparticulas de propolis contendo oleo de Eucalyptus globulus encapsulado, sendo de 1,42, 2,5, 5 e 10% ο teor de oleo em rela9ao ao volume final da suspensao.
Tabela 1: Eficiencia larvicida {Amblyomma cajennense) do oleo de Eucalyptus globulus encapsulado em nanoparticulas de propolis ou misturado em agua. Amostra Concentra9ao de oleo essencial de Eucalyptus globulus na emulsao ou na suspensao de nanoparticulas de propolis (%) Eficiencia larvicida (%) Oleo nao encapsulado 2,5 90 Oleo nao encapsulado 5 100 Oleo nao encapsulado 10 100 Oleo em nanoparticulas de propolis 1,42 100 Oleo em nanoparticulas de propolis 2,5 100 Oleo em nanoparticulas de propolis 5 100 Oleo em nanoparticulas de propolis 10 100
Conforme se observou na Tabela 1, a eficiencia da atividade larvicida do Eucalyptus globulus nas condi^oes testadas come?ou a reduzir em teores de oleo inferiores a 5%, ou seja, esta foi ο minimo teor em que ο oleo apresentou atividade. Para se considerar um produto como de alta eficiencia esta deve ser de no minimo 95%, ο que nao ocorreu para a forma nao encapsulate, No material nanoencapsulado, em concentra9oes tao baixas quanto 1,42% de oleo no volume final, a eficiencia de 100% foi mantida, melhorando, assim, ο efeito do oleo essencial.
EXEMPLO 2
OBTENQAO DE NANOPARTICULAS DE PROPOLIS E SEU EFEITO BACTERICIDA.
Preparou-se extrato alcoolico de propolis a 2,75% e a 0,5% em materia seca obtido pela dilui?ao de extrato original contendo 13,75% de materia seca. Gotejou-se lentamente 1 mL de um dos extratos de propolis em 5 mL de uma solu9ao aquosa de alcool polivinilico (PVA) a 0,3% que estava sendo agitada constantemente a 600 rpm e mantida a 35°C. Em ambos os casos, formou-se espontaneamente uma emulsao. Os extratos de propolis e a solu9ao aquosa foram previamente filtrados em filtros de nylon de 0,22 micrometros. Determinou-se a distribui。So de tamanho por espalhamento dinamico de luz, conforme observado na Figura 2. As particulas obtidas foram divididas em dois grupos, as de diametro medio de 380,4 nm, que apresentaram potencial Zeta = -38,3 mV e indice de polidispersao de 0,065 e as de diametro medio de 250 nm, que tiveram potencial Zeta de - 22,9 mV e indice de polidispersao de 0，197.
As concentra9oes de nanoparticulas de propolis nas duas formula?5es foram ajustadas para 2048 gg/mL e ο efeito bactericida foi determinado in vitro contra amostras de Staphylococcus aureus (estirpe ATCC23273) cultivadas em caldo Mueller Hinton.
De acordo com a Tabela 2’ que mostra os resultados da eficiencia bactericida das
nanoparticulas, a redu?ao do tamanho das nanoparticulas e ο consequente aumento de sua area superficial em ήιηςδο da massa, foram responsaveis pela maior atividade inibitoria da propolis em particulas menores. Isso pode ser confirmado pela ίηΛϊςδο do crescimento bacteriano. Nanoparticulas com diametro medio de 380,4 nm necessitaram de uma concentra^So minima de 512 pg/mL de propolis, enquanto as nanoparticulas menores (com 250 nm) necessitaram de apenas 256 pg/mL·.
Tabela 2: Eficiencia bactericida {Staphylococcus aureus, estirpe ATCC23273) de suspensao aquosa de nanoparticulas de propolis com diametro medio de 380,4 nm e 250 nm.
Fator de diluigSo (pg/mL) Crescimento de Staphylococcus aureus NP 380,4 nm NP 250 nm 32 + + 64 + + 128 + + 256 + - 512 - - 1024 - - 2048 - -
NP 380 mm: nanoparticulas com diametro medio de 380 mm; NP250 mm: nanoparticulas com diametro medio de 250 mm.
EXEMPLO 3
ENCAPSULAMENTO DE TETRACICLINA EM EXTRATO DE PROPOLIS
Preparou-se extrato alcoolico de propolis a 2,75% em materia seca obtido pela dilui9ao de extrato original contendo 13,75% de materia seca. Adicionou-se lmg/mL de tetraciclina ao extrato. Gotejou-se lentamente 1 mL da mistura entre extrato de propolis e tetraciclina em 5 mL de uma solu9ao aquosa de alcool polivinilico (PVA) a 0,3% que estava sendo agitada constantemente a 600 rpm e mantida a 35°C. Formou-se espontaneamente uma emulsao. O extrato alcoolico e a soh^So aquosa foram previamente filtrados em filtros de nylon de 0,22 micrometros. Determinou-se a distribui9ao de tamanho por espalhamento dinamico de luz, a eficiencia de encapsulamento (E.E.) por analise de espectrometria de absor^So ultravioleta-visivel.
O diametro medio das particulas obtidas foi de 371 nm, ο potencial Zeta foi de - 18,6 mV e indice de polidispersao, de 0,335. A eficiencia de encapsulamento (E.E.) foi de 26%.
Determinou-se ο padrao de libera^ao a temperatura de 37°C, com ο auxilio de membranas de dialise em meio PBS, pH 7,2 adicionado de 10% de alcool e observando a condi9ao Sink. Na primeira hora ocorreu a Iibera^So de 54% do antibiotico encapsulado. Na sexta hora de ensaio observou-se uma liberals。de 83% do antibiotico encapsulado, conforme visto na Fig. 3.
EXEMPLO 4
ENCAPSULAMENTO DE AZITROMICINA EM EXTRATO DE PROPOLIS E SEU EFEITO BACTERICIDA.
Preparou-se extrato alcoolico de propolis a 2,75% em materia seca obtido pela dilui^ao de extrato original contendo 13,75% de materia seca. Adicionou-se 0,83 mg/mL de azitromicina ao extrato. Gotejou-se lentamente 1 mL da mistura entre extrato de propolis e azitromicina em 5 mL de uma solu^ao aquosa de alcool polivinilico (PVA) a 0,3% que estava sendo agitada constantemente a 600 rpm e mantida a 35°C. Formou- se espontaneamente uma emulsao. O extrato alcoolico e a solu9ao aquosa foram previamente filtrados em filtros de nylon de 0,22 micrometros. Determinou-se a distribui^ao de tamanho por espalhamento dinamico de luz. O diametro medio das particulas obtidas foi de 322 nm, potencial Zeta de -15,1 mV e indice de polidispersao de 0,26. A eficiencia de encapsulamento (E.E.) de 57% foi determinada por analise de espectrometria de absor^o ultravioleta-visivel.
O efeito bactericida/bacteriostatico das nanoparticulas de propolis, da
azitromicina nanoencapsulada em extrato de propolis e da azitromicina pura foram determinados in vitro contra amostras de Staphylococcus aureus (estirpe ATCC23273) cultivadas em caldo Mueller Hinton, conforme Tabela 3. Por ser a azitromicina um antibiotico bacteriostatico, as amostras das diferentes dilui^oes foram utilizadas para determinar ο niimero de unidades fonnadoras de colonia (UFC) em agar BHI (brain- heart-infusion), e com isso determinar ο efeito bactericida/bacteriostatico mostrado na Tabela 4.
Tabela 3: Eficiencia bactericida/bacteriostatica {Staphylococcus aureus, estirpe ATCC23273) da azitromicina (A), da azitromicina nanoencapsulada em extrato de propolis (AP) e de nanoparticulas de propolis puras (NP) em caldo Mueller Hinton.
Concentra9ao de azitromicina pg/mL 512 256 128 64 32 16 8 4 A - - - - - + + + AP* - - - - - - + + NP - - + + + + + +
A = azitromicina; AP = azitromicina nanoencapsulada em propolis; NP = nanoparticula de propolis
* O valor foi calculado em fungao da concentra9ao de azitromicina nanoencapsulada Tabela 4: Unidades formadoras de colonia (UFC) em agar BHI de amostras de Staphylococcus aureus, estirpe ATCC23273, oriundas de ensaio de eficiencia bactericida/bacteriostatica da azitromicina (A), da azitromicina nanoencapsulada em extrato de propolis (AP) e de nanoparticulas de propolis puras (NP) em caldo Mueller Hinton.
UFC Tubo de origem 512 256 128 64 32 16 8 4 15
A
AP*
NP
O
O
O
O
O
O
O
O
O
O
O
30
28
A= azitromicina; AP = azitromicina nanoencapsulada em propolis; NP = nanoparticula de propolis * O valor foi calculado em fungao da concentra9ao de azitromicina nanoencapsulada i= incontavel
A azitromicina e sabidamente um antibiotico bacteriostatico e em determinadas concentraQoes, bactericida. Nos ensaios realizados, quando utilizada na forma pura e em concentraQSes iguais ou superiores a 128 pg/mL，este antibiotico exerceu um efeito bactericida sobre ο Staphylococcus aureus. Entre as concentra95es de 8 e 64 pg/mL a azitromicina apresentou efeito bacteriostatico. Ja as nanoparticulas de propolis puro, em concentrates iguais ou superiores a 256 pg/mL apresentaram exclusivamente atividade bactericida. Por sua vez, quando a azitromicina foi nanoencapsulada em extrato de propolis, conseguiu-se um efeito bactericida em concentra^oes bem menores, por exemplo, de 16 pg/mL，e bacteriostatico na concentrafao de 8 pg/mL. Tais resultados comprovam ο efeito sinergico do process。de encapsulamento da azitromicina pelas nanoparticulas de propolis.
EXEMPLO 5
ΟΒΤΕΝςλΟ DE NANOPARTICULAS DE PROPOLIS
Preparou-se extrato de propolis em triclorometano (cloroformio) a 0,16% em materia seca. Gotejou-se lentamente 1 mL de um dos extratos de propolis em 60 mL de uma solu^ao aquosa de alcool polivinilico (PVA) a 0,3% que estava sendo agitada constantemente a 25000 rpm com ο auxilio de um homogeneizador tipo turrax e mantida a 35°C. Apos a forma^ao de uma emulsao, esta foi mantida sob agita^ao na rota9ao de 600 rpm em temperatura ambiente ate a completa evapora^So do cloroformio. Tanto ο extrato de propolis quanto a solu^ao aquosa foram previamente filtrados em filtros de nylon de 0,22 micrometros. Por espalhamento de Iuz dinamico observou-se que foram formadas particulas
com diametro medio variando entxe 220,2 nm e 342 nm (Figura 4), com potencial Zeta de-l，34nV.

Claims (29)

1. Processo de obteri9ao de nanoparticulas de propolis caracterizado por compreender as etapas de: i) preparo de: uma fra^ao A，que consiste em extrato de propolis dissolvido em solvente organico em uma propor^ao massa-volume de 0,001 a 40%, a qual pode ser adicionado um ou mais estabilizantes e/ou emulsificantes, na concentra9ao de 0,01 a 20% (m/v), bem como adicionada de, opcionalmente, uma ou mais substancias de interesse e/ou de efeito secundario; ii) preparo de uma fra^ao B, fase aquosa, constituida de: (ii.l) agua; ou (ii.2) de uma solu9ao ou dispersao aquosa na concentra9ao de O5Ol a 20% (m/v)，a qual pode ser adicionado um ou mais estabilizantes e/ou emulsificantes, na concentra9ao de 0,01 a 20% (m/v); iii) gotejamento da fra^ao A sobre a fra^So B ou da fragSo B na fra^So A; iv) homogeneiza9ao da mistura a temperatura de _2 0C a 90 0C e forma^So espontanea de nanoparticulas com tamanho medio de 1 a 1000 nm em uma dispersao, sendo que tal homogeneiza9ao ocoire por meio de agitato mecanica, que consiste na rota?ao de 1 (um) a 40000 rpm, quando ο solvente organico for soliivel ou parcialmente soliivel em agua, e de 5000 a 25000 rpm quando ο solvente organico for imiscivel em agua; ν) opcionalmente, podem-se envolver as seguintes etapas adicionais: (v-1) remo9ao do solvente organico; e/ou (v-2) secagem da nanodispersao e obten^ao de produto em ρό.
2. Processo de obten^ao de nanoparticulas de propolis, de acordo com a reivindica^So 1， caracterizado por dita propor?ao massa-volume de extrato de propolis dissolvido em solvente organico variar de 0,1 a 20%.
3. Processo de obten9ao de nanoparticulas de propolis, de acordo com a reivindica?So 1, caracterizado por dita fase aquosa ser composta de exclusivamente agua ou uma solu9ao ou dispersao aquosa dotada de uma ou mais substancias selecionadas do seguinte grupo: polimeros de acido acrilico, alginatos, gomas biossinteticas, amidos, amidos modificados, esteres de celulose, compostos de celulose, gelatinas, hidrocoloides, acido hialuronico, glicois, gomas naturais，poliacrilatos, oxidos de polietileno, polimeros derivados do vinil, goma de acacia, goma agar, goma arabica, carboximetilcelulose, carboxivinil, carragena, caseina, acetato de celulose, quitosana, quitina, colageno, dextrana, dextrina, ciclodextrinas, levana, etilcelulose, albumina, hidroxietilcelulose, hidroxietilmetilcelulose, hidroxipropilmetilcelulose, hidroxipropilcelulose, homopolissacarideos, heteropolissacarideos, polietilenoglicol e copolimeros, pectina, polietilenos e copolimeros, alcoois polivinilicos, polivinilpirrolidona, xantana, zeinas, policaprolactona e seus copolimeros, poliacido latico e seus copolimeros, poliacido glicolico e seus copolimeros, polihidroxibutirato e seus copolimeros, polidroxivalerato e seus copolimeros, polimetilmetacrilato e seus copolimeros, polietilcianoacrilato e seus copolimeros, polibutilcianoacrilato e seus copolimeros, polihexilcianoacrilato e seus copolimeros, poliisohexilcianoacrilato e seus copolimeros, poliacrilamidas, poliuretanos e seus copolimeros, poliestireno e seus copolimeros, polivinilpiridinas e seus copolimeros, poliacroleinas e seus copolimeros, poliamidas ou polifenil esteres e poliuretanos.
4. Processo de obten^So de nanoparticulas de propolis, de acordo com a reivindica9ao 1, caracterizado por um ou mais estabilizantes e/ou emulsificantes empregados nas etapas (i) e/ou (ii), opcionalmente, se apresentarem na concentra9ao de 0,1 a 5% (m/v).
5. Process。de obtenySo de nanoparticulas de propolis, de acordo com as reivindicates 1 e 4, caracterizado por um ou mais estabilizantes e/ou emulsificantes serem selecionados do grapo que compreende acido alginico, alcoois polivinilicos, alginatos, agar agar, carragena, celulose e seus derivados, cetildimeticonas, copoliois, detergentes, dodecil sulfato de sodio, lecitinas, esteres graxos de sacarose, esteres de acidos graxos com poliglicerol, esteres de acido ricinoleico interesterificado com poliglicerol, esteres de acidos graxos com propilenoglicol, fosfolipideos, gomas, pectina, pectina amidada, polietilenoglicol e seus copolimeros, polietilenos e seus copolimeros, polioxietilenos e seus copolimeros, oxido de etileno , polissorbato e seus derivados, polivinilpirrolidona, proteinas anfifilicas, mono e diglicerideos, saboes, monoestearato de glicerol, oleato de sodio, fosfato de amonia, acetato isobutirato de sacarose, homopolissacarideos, heteropolissacarideos, estearoil-2-lactil lactato de sodio, estearoil-2-lactil lactato de calcio, citrato de sodio, fosfato dissodico, estearilamina, oleilamina, l-2dioleoil- 3trimetil-amonio propano, alquil-sulfatos, 2-dodecoxyethanol, carbopol®, polioxietileno lauril eter e SPAN®.
6. Process。de obten9ao de nanoparticulas de propolis, de acordo com as reivindica。5es -1，4 e 5, caracterizado por este dito estabilizante e/ou emulsificante ser preferencialmente compreendido por alcool polivinilico， fosfolipideos e/ou polissorbatos.
7. Processo de obten9ao de nanoparticulas de propolis, de acordo com a reivindica^ao 1， caracterizado pela fase organica (i) e pela fase aquosa (ii) apresentarem, opcionamente, uma concentrafao de um ou mais emulsificantes e/ou estabilizantes na concentra9ao de 0.1 a 5% (m/v).
8. Processo de obten^ao de nanoparticulas de propolis, de acordo com a reivindica9ao 1, caracterizado pelas substancias de interesse consistirem de principios ativos, tais como tetraciclinas e azitromicinas.
9. Processo de obten^ao de nanoparticulas de propolis, de acordo com a reivindicaQao 1, caracterizado pelas substancias de interesse consistirem de quimicos em geral, tais como antioxidantes, anticorrosivos，fotoprotetores, catalisadores, lubrificantes e corantes.
10. Process。de obten^So de nanoparticulas de propolis, de acordo com a reivindica^ao -1，caracterizado pelas substancias de interesse consistirem de extratos naturais, tais como oleos essenciais, corantes, xaropes e aromatizantes.
11. Processo de obten?2o de nanoparticulas de propolis, de acordo com a reivindica^So -1，caracterizado pelas substancias de efeito secundario consistirem de sinergistas.
12. Processo de obtenySo de nanoparticulas de propolis, de acordo com a reivindica^ao -1，caracterizado pelas substancias de efeito secundario consistirem de adjuvantes.
13. Processo de obten^ao de nanoparticulas de propolis, de acordo com a reivindica9ao -1, caracterizado pelas substancias de interesse e de efeito secundario consistirem de farmacos, agroquimicos, extratos naturais, cosmeticos ou quimicos em geral.
14. Processo de obten^ao de nanoparticulas de propolis, de acordo com a reivindicagao -1，caracterizado por dito solvente organico consistir de uma substancia ou de uma mistura, obtida a partir de substancias selecionadas do grupo que compreende, mas nao se limita a: etanol, isopropanol, n-butanol, alcool sec-butilico, alcool ter-butilico, eter etilico, eter dietilico, eter de petroleo, eter metilico，eter dimetilico, alcool benzilico, propileno glicol, dimetilssulfoxido, etilenoglicol, alcool n-propilico, alcool metilico, acetona, propanona, butanona, butanodiona， diclorometano, triclorometano, polietilenoglicol, acido acetico glacial，tetracloreto de carbono, percloretileno, cloreto de metileno，n-hexano，estireno, xileno，tolueno, benzeno, acetato de etila, l,4dioxano， tetrahidroforano (THF)5 acetonitrila, dimetilformamida, n-butanol，n-Propanol, acido formico e ciclohexano.
15. Processo de obten9ao de nanoparticulas de propolis, de acordo com as reivindica9oes 1 e 14，caracterizado por dito solvente organico preferencial ser obtido a partir de uma on mais substancias do grapo do: etanol, acetona，diclorometano, triclorometano e hexano.
16. Composi^ao de nanoparticulas de propolis caracterizada por consistirem de propolis, solvente organico, agua, opcionalmente estabilizantes e/ou emulsificantes, opcionalmente uma ou mais substancias de interesse, bem como opcionalmente uma ou mais substancias de efeito secundario, compondo uma dispersao constituida de nanoparticulas de tamanho de 1 a 1000 nm de propolis associado aos ditos componentes em meio liquido.
17. Composi9ao de nanoparticulas de propolis caracterizada por consistirem de propolis, agua, opcionalmente estabilizantes e/ou emulsificantes, opcionalmente uma ou mais substancias de interesse, bem como opcionalmente uma ou mais substancias de efeito secundario, compondo uma dispersao constituida de nanoparticulas de tamanho de 1 a 1000 nm de propolis associado aos ditos componentes em meio liquido.
18. Composi9ao de nanoparticulas de propolis caracterizada por consistirem de propolis, agua, opcionalmente estabilizantes e/ou emulsificantes, opcionalmente uma ou mais substancias de interesse, bem como opcionalmente uma ou mais substancias de efeito secundario, compondo um produto em po constituido de nanoparticulas de tamanho de 1 a 1000 nm de propolis associado a pelo menos um dito componente.
19. Composi9ao de nanoparticulas de propolis, de acordo com as reivindica9oes 16, 17 e 18，caracterizada por dita um ou mais estabilizantes e/ou emulsificantes serem selecionados do grupo que compreende acido alginico, alcoois polivinilicos，alginatos, agar agar, carragena, celulose e seus derivados，cetildimeticonas, copoliois, detergentes, dodecil sulfato de sodio, lecitinas, esteres graxos de sacarose, esteres de acidos graxos com poliglicerol, esteres de acido ricinoleico interesterificado com poliglicerol，esteres de acidos graxos com propilenoglicol, fosfolipideos, gomas，pectina, pectina amidada, polietilenoglicol e seus copolimeros，polietilenos e seus copolimeros, polioxietilenos e seus copolimeros, oxido de etileno，polissorbato e seus derivados, polivinilpirrolidona, proteinas anfifilicas, mono e diglicerideos, sabSes, monoestearato de glicerol, oleato de sodio, fosfato de amonia, acetato isobutirato de sacarose, homopolissacarideos, heteropolissacarideos, estearoil-2-lactil lactato de sodio, estearoil-2-lactil lactato de calcio, citrato de sodio, fosfato dissodico, estearilamina, oleilamina, l-2dioleoil- -3trimetil-am6nio propano, alquil-sulfatos, 2-dodecoxyethanol, carbopol®, polioxietileno lauril eter e SPAN®.
20. Composi?So de nanoparticulas de propolis, de acordo com as reivindica^oes 16，17 e 18, caracterizada por dito estabilizante e/ou emulsificante ser preferencialmente compreendido por alcool polivinilico, fosfolipideos e/ou polissorbatos.
21. Composi^ao de nanoparticulas de propolis, de acordo com as reivindica^des 16, 17 e 18, caracterizada pelas substancias de interesse consistirem de principios ativos，tais como tetraciclinas, azitromicinas.
22. Composi9ao de nanoparticulas de propolis, de acordo com as reivindica?5es 16, 17 e 18, caracterizada pelas substancias de interesse consistirem de quimicos em geral，tais como antioxidantes, anticorrosivos, fotoprotetores, catalisadores，lubrificantes e corantes.
23. ComposigSo de nanoparticulas de propolis, de acordo com as reivindica95es 16，17 e 18, caracterizada pelas substancias de interesse consistirem de extratos naturais, tais como oleos essenciais，corantes, xaropes e aromatizantes.
24. Composiiao de nanoparticulas de propolis, de acordo com as reivindica^Ses 16，17 e 18, caracterizada pelas substancias de efeito secundario consistirem de sinergistas.
25. Composi?So de nanoparticulas de propolis, de acordo com as reivindica^oes 16，17 e 18，caracterizada pelas substancias de efeito secundario consistirem de adjuvantes.
26. Composi9ao de nanoparticulas de propolis, de acordo com as reivindica^oes 16, 17e 18, caracterizada caracterizado pelas substancias de interesse e de efeito secundario consistirem de farmacos, agroquimicos, extratos naturais, cosmeticos ou quimicos em geral.
27. Composi9ao de nanoparticulas de propolis, de acordo com as reivindica9oes 16，17 e 18, caracterizada por dito solvente organico consistir de uma substancia ou de uma mistura, obtida a partir de substancias selecionadas do grupo que compreende, mas nao se limita a: etanol, isopropanol, n-butanol? alcool sec-butilico, alcool ter-butilico, eter etilico, eter dietilico，eter de petroleo, eter metilico，eter dimetilico, alcool benzilico, propileno glicol, dimetilssulfoxido, etilenoglicol, alcool n-propilico, alcool metilico， acetona, propanona, butanona, butanodiona, diclorometano, triclorometano, polietilenoglicol, acido acetico glacial, tetracloreto de carbono, percloretileno, cloreto de metileno, n-hexano, estireno, xileno, tolueno, benzeno, acetato de etila, l,4dioxano, tetrahidrofurano (THF), acetonitrila, dimetilformamida, n-butanol, n-Propanol, acido formico, ciclohexano.
28. Composi^ao de nanoparticulas de propolis, de acordo com as reivindica^Ses 16, 17 e 18, caracterizada por dito solvente organico preferencial ser obtido a partir de uma ou mais substancias do grupo do: etanol, acetona, diclorometano, triclorometano e hexano.
29. Composi9ao de nanoparticulas de propolis obtidas por meio do processo descrito na reivindica9ao 1 associada a veiculo farmaceutico, agroquimico, cosmetico ou quimicamente aceitavel.
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