BRPI1014571B1 - Composições de combinação de lactona macrocíclica, vacinas e métodos para produção das mesmas - Google Patents

Abstract

composições de combinação de lactona macrocíclica, vacinas e processos para produzir as mesmas uma composição injetável, capaz de prevenir ou controlar infecções parasitárias, virais ou bacterianas ou doenças, por exemplo, disenteria, em vacas gestantes e infecções virais ou doenças em bezerros recém-nascidos por por administração via parental a cada vaca em um rebanho de vacas prenhes, uma dose de uma composição de combinação compreendendo: (a) pelo menos um componente viral inativadoderivado do rotavírus e/ou coronavírus; (b) um composto ativo de lactona macrocíclica, e (c) um veículo parenteral e conservante farmaceuticamente aceitável. as composições injetáveis que incluem eprinomectina resultam em resíduos de leite extremamente baixos.

Description

REFERÊNCIA CRUZADA AOS PEDIDOS RELACIONADOS

Este pedido reivindica o beneficio do pedido provisório NZ N°. de Série 576201, depositado no dia 14 de abril de 2009, e do pedido provisório NZ N°. de Série 576391, depositado no dia 20 de abril de 2009.

CAMPO DA INVENÇÃO

Esta invenção se refere às melhorias no campo de medicamentos veterinários e mais particularmente às melhorias em relação às formulações de vacina de combinação que fornecem proteção contra parasitas, bem como os virus e/ou bactérias que são os fatores causadores de diarreia neonatal em bezerros.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

O parto bem sucedido da vaca e sua transição para a lactação são dois pontos criticos para a produtividade de fazenda de criação. Para o fazendeiro alcançar sua meta de produtividade, existem dois desafios de doença criticos que devem ser superados: Parasitismo na vaca - A demanda de energia do bezerro por nascer pode colocar a vaca grávida sob grande estresse. Como resultado, a condição corporal sofre e o sistema imunológico se torna menos eficaz em afastar infecção. Um dos tipos principais de infecção é o parasitism©. Geralmente, o gado adulto tem um alto grau de imunidade à infecção por parasitas, mas este não é o caso durante o periodo de parto. Para ajudar a vaca a superar qualquer ônus de parasitas adquiridos, os fazendeiros podem tratar as vacas durante a gravidez com anti-helminticos. Estes produtos são fármacos desenvolvidos para matar populações de vermes residentes e em alguns casos, evitar novas infecções por um periodo de tempo. Historicamente, fármacos como levamisol, oxfendazol, fenbendazol, albendazol, abamectina e ivermectina foram utilizadas. Estes são administrados na forma oral, injetável ou tópica. No entanto, eles possuem a desvantagem de que existe um risco de residuos desses fármacos anti-helminticos estarem presentes no leite da vaca após o parto ter ocorrido e a lactação ter iniciado. Em alguns paises, tais anti-helminticos não podem ser usados para tratar os animais cujo leite seja usado para consumo humano, enquanto em outros paises, o periodo de tratamento antes do inicio da lactação deve ser superior a 60 dias.

Diarreia nos Bezerros - A causa mais comum de morbidade em bezerros no periodo neonatal é a diarreia. A principal causa desta diarreia é a presença de bactérias e virus causadores de diarreia, incluindo Escherichia coli, Clostridium perfringens, Rotavirus e Coronavirus; geralmente em combinação e/ou com outras bactérias, virus e parasitas intestinais.

Virus - Infecção por rotavirus é a causa virai mais comum de diarreia em bezerros. Os rotavirus dos grupos A e B estão envolvidos, mas o grupo A é mais prevalente e clinicamente importante e contém vários sorotipos de virulência diferentes. Os rotavirus se replicam nos enterócitos absortivos maduros e produtores de enzimas nas vilosidades do intestino delgado, levando à ruptura e degradação dos enterócitos com a liberação do virus para infectar as células adjacentes. 0 rotavirus não infecta as células imaturas das criptas. Com cepas virulentas do rotavirus, a perda de enterócitos excede a capacidade das criptas intestinais de substitui-los; portanto, a altura das vilosidades é reduzida, com conseguente diminuição na área de superfície intestinal de absorção e atividade enzimática intestinal digestiva. Coronavirus também é comumente associado com diarreia em bezerros. Ele se replica no epitélio do trato respiratório superior e nos enterócitos do intestino, onde ele produz lesões semelhantes ao rotavirus, mas também infecta as células epiteliais do intestino grosso para produzir atrofia das rugosidades do cólon.

Bactérias - A infecção por E. coli é a causa bacteriana mais importante de diarreia em bezerros; pelo menos 2 tipos distintos de doenças diarreicas são produzidas por diferentes cepas deste organismo. Um tipo está associado com a E. coli enterotoxigênica, gue tem 2 fatores de virulência associados com a produção de diarreia. Antigenos fimbriais permitem que as bactérias se liguem e colonizem as vilosidades do intestino delgado. As cepas presentes em bezerros possuem mais comumente os antigenos fimbriais K99 (F5) ou F41, ou ambos. Estes antigenos são o foco da proteção imunológica. A E. coli enterotoxigênica também expressa uma enterotoxina termoestável não-antigênica (Sta) que influencia a secreção intestinal de ions e fluido para produzir uma diarreia secretora não-inflamatória. A diarreia em bezerros e cordeiros também tem sido associada com a E. coli enteropatogênica, que se adere ao intestino para produzir uma lesão de fixação e retração, com a dissolução da borda em escova e perda da estrutura de microvilosidades no local de fixação, uma diminuição na atividade enzimática e mudanças no transporte de ions no intestino. Esses enteropatógenos são também chamados de "E. coli. de fixação e retração" Algumas produzem verotoxina, o que pode estar associado com uma diarreia hemorrágica mais severa. A infecção está mais frequentemente no ceco e no cólon, mas o intestino delgado distai também pode ser afetado. 0 dano em infecções severas pode resultar em edema e erosões da mucosa e ulceração, levando à hemorragia no lúmen intestinal.

Clostridium perfringens tipos A, B, C e E produzem uma variedade de toxinas que levam à necrose, que causam uma enterite hemorrágica rapidamente fatal em bezerros. A doença em bezerros é rara e geralmente esporádica.

Atualmente, o tratamento anti-helmintico de vacas grávidas é alcançado com uma formulação anti-helmintica dedicada (oral, tópica e/ou injetável). Estas formulações atualmente não contêm qualquer forma de tratamento de vacina, capaz de proporcionar proteção para o bezerro recém-nascido. No entanto, uma variedade de vacinas apenas para diarreia são atualmente comercializadas para uso em gado. Estas vacinas são geralmente classificadas como inativadas, referindo-se ao fato de que a vacina contém virus mortos ou componentes bacterianos. Normalmente estas vacinas irão conter cepas inativadas que fornecem proteção contra uma série de elementos causadores de diarreia (rotavirus, coronavirus, E. coli, doenças clostridiais). As vacas são tratadas com a vacina normalmente por injeção intramuscular profunda, com uma dose entre 2 e 5 ml. Este tratamento como um reforço anual logo antes do parto proporciona um forte aumento nos anticorpos no colostro disponível para o bezerro imediatamente após o parto. Bezerros alimentados com colostro de vacas vacinadas durante as primeiras duas a quatro semanas de vida demonstraram ter:

Redução da incidência de diarreias causadas por rotavirus e coronavirus; - Redução do espalhamento de virus devido à infecção por rotavirus ou coronavirus; - Redução da gravidade da diarreia causada por E. coll.

Vacinas de diarreia tipicas deste tipo disponíveis nos Estados Unidos incluem: GUARDIAN® (Schering-Plough) . Esta é uma vacina multicomponente que inclui o antigeno K99 de Escherichia coli, dois coronavirus inativados, dois rotavirus inativados de tipo G e bacterina-toxóide de Clostridium perfringens tipos C e D. GUARDIAN é recomendada para uso em gado prenhe como um adjuvante na prevenção de diarreia neonatal de bezerro causada por pili de E. coli enterotoxigênica tipo K99, rotavirus bovinos do Grupo A sorotipo G6, enterotoxemia causada por C. perfringens tipos C e D, e como um adjuvante no controle da diarreia neonatàl de bezerro causada por coronavirus bovino. SCOURBOS 9 (Novartis). Outra vacina multicomponente que inclui quatro diferentes cepas de E. coli, três rotavirus inativados (sorotipos G10, G6 e G8), Coronavirus inativado e bacterina-toxoide tipo C de Clostridium perfringens. SCOURGUARD (Pfizer). Uma combinação de rotavirus bovino inativado (sorotipos GIO, G6), coronavirus inativado e bacterina-toxoide K99 de E. coli. Para todas as três vacinas, uma dose de 2 ml é administrada através de injeção intramuscular profunda. Não há periodo de retenção de leite aplicado a qualquer um dos tratamentos. Os programas de tratamento baseiam-se em um cronograma de tratamento de duas doses no primeiro ano de uso, em seguida uma única dose de reforço anual dada a cada ano antes do parto. O tempo recomendado em que os tratamentos devem ser dados (em semanas antes do parto) é descrito na Tabela 1. Tabela 1.

A diferença nos tempos de tratamento é explicada pela eficácia relativa alegada dos antigenos de vacina utilizados com cada vacina. No entanto, deve-se notar gue o 5 número mais próximo de semanas para o parto em que os três tratamentos são recomendados para serem administrados é de 5 semanas (reforço anual GUARDIAN), 4 semanas (dose de reforço SCOURBOS) e 3 semanas (dose de reforço SCOURGUARD e reforço anual) . No melhor caso, isto é apenas 35 dias do 10 parto, enquanto que no pior caso, é 21 dias do parto.

Alcançar altos niveis de anticorpo no colostro através do uso de vacinas potentes tem se mostrado extremamente eficaz na prevenção de diarreias em bezerros. O programa de vacinação mais eficaz é aquele em que o nivel de anticorpos 15 no sistema de vacas atinge o máximo em ou logo antes do parto, proporcionando máxima proteção ao bezerro através do colostro. Para este propósito, existe uma exigência de que a vacina de reforço anual seja dada razoavelmente perto do parto.

Existe outra razão pela qual os fabricantes de vacinas precisam projetar os seus produtos com a possibilidade de que a vacinação irá ocorrer perto do parto. Esta razão é que, tipicamente, a vacinação irá ocorrer em uma base de rebanho inteiro. As vacas dentro de um rebanho irão parir em datas diferentes ao longo de um periodo de várias semanas ou meses. A amplitude de extensão dos partos e a imprevisibilidade da data do parto efetiva podem tornar muito dificil selecionar o tempo ideal para o tratamento. Para melhor efeito, as vacinas podem ser administradas de 21 a 35 dias (de acordo com a vacina) antes da primeira data de parto esperada no rebanho ou 21 a 35 dias antes da data média de parto esperada no rebanho. Algumas vacas podem parir logo após a vacinação, enquanto outras podem parir muitas semanas depois. Além disso, a imprevisibilidade da data efetiva do parto em comparação com a data esperada de parto pode significar que algumas vacas irão parir em muito menos do que 21 a 35 dias após o tratamento e, potencialmente, tão logo quanto no dia do tratamento. Este tratamento curto para o intervalo entre partos elimina a possibilidade de utilizar muitos compostos prenhes de qualquer combinação de vacina potencial para diarreias.

Vacinas contendo tanto lactonas macrociclicas quanto antigenos, incluindo, por exemplo, peptideos, frações de membrana, patógenos inativados e similares são um desafio para a formulação devido a incompatibilidades de solvente/dispersante. Existem relatos anteriores da combinação de ingredientes ativos mais vacinas, mas poucos deles descrevem a combinação de lactonas macrociclicas mais uma vacina. Uma possivel razão para isto é que é bem conhecido na técnica que lactonas macrociclicas são suscetíveis à degradação na presença de outros ativos ou em certos sistemas de solvente, particularmente em sistemas de solvente aquoso. Por exemplo, GB-A-2030043 descreve combinações injetáveis de um ativo de lactona não- macrociclica (tetramisol) mais uma vacina. De modo importante, o pedido não divulga composições compreendendo agentes dispersantes, que é um importante componente nas composições aquosas injetáveis de lactona macrociclica. Umehara e col. relatam que a combinação de uma lactona macrociclica, doramectina, com uma vacina contra a febre aftosa pode resultar em interferência (Rev. Brasil Parasitol. Vet., 1993, 2 (2) :141-144) . Outros exemplos incluem JP-A-62294623, que divulga composições orais compreendendo antibióticos e Salmonella desativada, e GB-A- 2267707, que descreve lactonas macrociclicas em combinação opcional com vacinação. O US 6,746,677B2, de Cobb (Wyeth, Fort-Dodge Animal Health) descreve em geral composições que compreendem compostos macrolideos ou misturas dos mesmos, um solvente orgânico solúvel em água, um agente dispersante, um adjuvante, pelo menos um antigeno e salina ou água ou uma mistura dos mesmos. Além disso, o pedido de patente US 2005/0118222 Al de Wolff descreve o transporte simultâneo, por meio de uma injeção, de lactona macrociclica e de um antigeno contra carrapatos. Em outro exemplo, US 6,663,879 e US 6,214,367 de Harvey, descrevem composições injetáveis estáveis que incluem um agente parasitico não-aquoso em uma quantidade terapeuticamente eficaz, escolhido a partir do grupo de avermectina, ivermectina, doramectina, abamectina, milbemicina e moxidectina, e um antigeno em combinação com um veiculo liquido que também atua como um adjuvante.

A presente invenção soluciona o problema da combinação de lactonas macrociclicas com vacinas pelo uso de um sistema de solvente novo e não óbvio. Ao contrário dos solventes de base alcoólica ensinados por Cobb, os depositantes descobriram que dimetilacetamida (DMA), combinada com tensoativos específicos, fornece formulações de lactona macrociclica/vacina combinadas excepcionalmente estáveis e de alta concentração. O volume da dose eficaz resultante é desejavelmente inferior do que as composições anteriores. Por conseguinte, existe uma necessidade real e insatisfeita na técnica por um meio conveniente para o tratamento de vacas prenhes que: proteja a vaca dos efeitos do parasitism©, evitando ao mesmo tempo residues anti- helminticos no leite; reduza o risco de diarreia nos bezerros recém-nascidos devido a doenças virais e bacterianas; e forneça ao fazendeiro a capacidade de tratar as vacas razoavelmente próximas do parto.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

Portanto, o problema abordado por esta invenção é a necessidade de proporcionar um tratamento anti- helmintico/vacina conveniente para os fazendeiros que mantêm a saúde das combinações vaca/bezerro assegurando, ao mesmo tempo, que não exista contaminação do leite com residues de fármaco, ou que pelo menos fornecerão ao agricultor uma escolha útil.

Em um aspecto, a invenção fornece um método de prevenção ou controle de doenças parasitárias em vacas prenhas e doenças virais em bezerros neonatos pela administração por via parenteral a uma vaca prenhe de uma quantidade eficaz de uma composição de combinação contendo pelo menos um componente virai, como o rotavirus inativado ou coronavirus inativado, juntamente com um ou mais compostos ativos de lactona macrociclica, por exemplo, eprinomectina, e um veiculo parenteral adequado e conservante. O ativo ou ativos de lactona macrociclica podem incluir, mas de modo algum são limitados a abamectina, dimadectina, doramectina, emamectina, eprinomectina, ivermectina, latidectina, lepimectina, selamectina, milbemectina, milbemicina D, milbemicina oxima, moxidectina ou nemadectina. Outro aspecto da presente invenção proporciona composições de combinação usadas nos ditos métodos.

Em outro aspecto, o método também pode controlar a infecção por bactérias causadoras de doenças, como a E. coli, por inclusão com o componente virai inativado de uma bacterina-toxoide de E. coli e/ou uma bacterina-toxoide produzida por outras bactérias causadoras de doenças. 0 mesmo volume da dose pode ser administrado ao rebanho pesando de 400 Kg a 800 Kg. Isto tem a vantagem de que um rebanho de vacas prenhas pode ser rapidamente tratado pela aplicação do mesmo volume de dose, independentemente do peso de cada vaca, uma vez que um rebanho tipico consiste de vacas dentro daquela faixa de peso. Alternativamente, os grupos de peso para cada dose podem ser restringidos para que a invenção possa fornecer uma dose ativa de lactona macrociclica de 200 μg/Kg a 400 μg/Kg.

Em outro aspecto, a invenção fornece uma composição injetável para prevenção ou controle de doenças parasitárias e de doenças virais em gado, a composição contendo (a) uma quantidade eficaz de pelo menos um componente virai selecionado do grupo consistindo de rotavirus inativado e coronavirus inativado, (b) um composto ativo anti-helmintico de lactona macrociclica tal como abamectina, doramectina, eprinomectina, ivermectina, moxidectina (c) um veiculo adequado e (d) um conservante. A composição injetável pode incluir uma bacterina-toxoide de E. coli.

Em outro aspecto, a invenção fornece um método de prevenção ou controle de doenças parasitárias em vacas prenhas e diarreia em bezerros neonatais por administração parenteral a uma vaca prenha de uma quantidade eficaz de uma composição de combinação contendo um composto ativo de lactona macrociclica e um componente virai selecionado do grupo compreendendo rotavirus inativado, coronavirus inativado e bacterina-toxoide de E. coli. Em alguns aspectos, a lactona macrocíclica é eprinomectina. Salvo quando definido de outra forma nos exemplos específicos, o termo "quantidade eficaz", como utilizado neste documento, geralmente significa uma quantidade de componente ativo ou vacina que é suficiente para causar um "efeito biologicamente útil" em um animal. O "efeito biologicamente útil" pode incluir, por exemplo: prevenção ou controle de parasitas nos ou sobre animais, estimulação de uma resposta imune que protege os ditos animais do desafio subsequente com a doença ou agentes causadores de distúrbio ou patógenos, ou qualquer outro efeito que uma pessoa versada irá prontamente perceber como sendo benéfico, protetor e/ou favorável para a manutenção ou melhoria da saúde, bem-estar, produtividade, longevidade, resistência a doenças do animal, e assim por diante.

Estas e outras concretizações são descritas em, ou são óbvias a partir de e englobadas pela Descrição Detalhada a seguir.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

A seguinte descrição detalhada, dada por meio de exemplos, porém não pretendendo limitar a invenção somente às concretizações especificas descritas, pode ser melhor compreendida em conjunto com os desenhos associados, em A Figura 1 é um gráfico de residues de eprinomectina no leite. A Figura 2 é um gráfico de residues de ivermectina no leite. A Figura 3 é um gráfico de residues de moxidectina na gordura do leite. A Figura 4 é um gráfico de residuos de moxidectina no leite integral. A Figura 5 é um gráfico de residuos de doramectina no leite. A Figura 6 é um gráfico de residuos da média do grupo no leite (eprinomectina, ivermectina, doramectina). A Figura 7 é um gráfico dos residuos de moxidectina médios de grupo no leite integral.

DESCRIÇÃO DETALHADA

É observado que nesta divulgação e particularmente nas reivindicações e/ou parágrafos, termos como "compreende", "compreendido", "compreendendo" e similares podem ter o significado que lhes é atribuído na Lei de Patentes Americana; por exemplo, eles podem significar "inclui", "incluido", "incluindo" e similares; e aqueles termos como "consistido essencialmente de" e "consiste essencialmente de" têm o significado atribuído a eles na Lei de Patentes Americana, por exemplo, eles permitem elementos não explicitamente citados, mas excluem os elementos que são encontrados no estado da técnica ou que afetam uma característica básica ou nova da invenção. Deve ser entendido que tanto a descrição geral precedente quanto a descrição detalhada a seguir são apenas exemplares e explicativas e não são restritivas da invenção tal como reivindicada.

A presente invenção fornece composições de combinação que são eficazes para prevenir ou controlar infecções parasitárias, bacterianas ou virais em gado que compreendem (a) uma quantidade eficaz de um componente virai, que compreende pelo menos um rotavirus ou coronavirus inativado, e (b) pelo menos um agente ativo de lactona macrociclica em um veiculo farmaceuticamente aceitável.

O componente virai pode ser uma vacina comercialmente disponível, por exemplo, as vacinas para bovinos RESPISHIELD™ ou RELIANT® da Merial. As vacinas RELIANT® 4, por exemplo, incluem oito combinações de antigenos, permitindo uma flexibilidade significativa para composições de combinação da presente invenção. O componente virai pode compreender qualquer número de adjuvantes bem conhecidos, por exemplo, adjuvante TS6 da Merial descrito, por exemplo, em US 7,371,395 de Parisot e col. O adjuvante TS6 é atualmente utilizado com sucesso, por exemplo, na vacina para suínos contra M. hyopneumoniae sem agulha SWIVAX™-MH da Merial. O adjuvante também pode ser o adjuvante LR4 da Merial, descrito, por exemplo, em US 7,691,368 também de Parisot e col. A invenção é, portanto, tencionada a englobar composições de combinação que podem ser aplicadas de maneira útil para, pelo menos, animais bovinos e suínos. Também são fornecidos métodos para a prevenção ou controle de infecções parasitárias, bacterianas ou virais, que compreendem a administração de uma quantidade eficaz das composições da invenção para o animal em necessidade destas. Os compostos anti-helmínticos de lactona macrocíclica contemplados na presente invenção são bem conhecidos para uma pessoa versada na técnica. Estes compostos incluem avermectinas e milbemicinas, conhecidas coletivamente como a classe de lactona macrocíclica dos compostos ativos anti- helmínticos. Para avermectinas, ivermectina e abamectina, pode ser feita referência, por exemplo, à publicação "Ivermectin and Abamectin", de 1989, por M.H. Fischer e H. Mrozik, William C. Campbell, publicada por Springer Verlag., "Macrocyclic Lactones in Antiparasitic Therapy", 2002, por J Vercruysse e RS Rew, publicado por CABI Publishing ou Albers-Schonberg e col. (1981), "Avermectins Structure Determination", J. Am. Chem. Soc., 103, 4216- 4221. Para doramectina, "Veterinary Parasitology", vol. 49, No. 1, Julho de 1993, 5-15 pode ser consultado. Para milbemicinas, referência pode ser feita, entre outros, a Davies H.G. e col., 1986, "Avermectins and Milbemycins", Nat. Prod. Rep., 3, 87-121, Mrozik H. e col., 1983, Synthesis of Milbemycins from Avermectins, Tetrahedron Lett., 24, 5333-5336, Patente Americana No. 4,134,973 e EP 0 677 054, todas as quais sendo incorporadas neste documento por referência. Lactonas macrociclicas são tanto produtos naturais ou são derivados semissintéticos dos mesmos. As estruturas das avermectinas e milbemicinas estão intimamente relacionadas, por exemplo, através do compartilhamento de um anel lactona macrociclica complexo de 16 membros; milbemicinas não têm a porção glicosidica das avermectinas. As avermectinas de produtos naturais são divulgadas na Patente Americana No. 4,310,519 de Albers-Schõnberg e col., e os compostos de 22,23-diidro-avermectina são divulgados em Chabala e col., Patente Americana No. 4,199,569. Também deve ser feita menção de Kitano, Patente Americana No. 4,468,390, Beuvry e col., Patente Americana No. 5,824,653, EP 0 007 812 Al, Relatório Descritivo da Patente do Reino Unido 1 390 336, EP 0 002 916, e Patente da Nova Zelândia Ancare No. 237 086, entre outros. Milbemicinas de ocorrência natural são descritas em Aoki e col., Patente Americana No. 3,950,360, bem como nas várias referências citadas em "The Merck Index" 12a edição, S. Budavari, Ed. , Merck & Co., Inc. Whitehouse Station, Nova Jersei (1996). Latidectina é descrita em "International Nonproprietary Names for Pharmaceutical Substances (INN)", WHO Drug Information, vol. 17, no. 4, pp. 263-286, (2003). Derivados semissintéticos destas classes de compostos são bem conhecidos na técnica e são descritos, por exemplo, na Patente Americana No. 5,077,308, Patente Americana No. 4,859,657, Patente Americana No. 4,963,582, Patente Americana No. 4,855,317, Patente Americana No. 4,871,719, Patente Americana No. 4,874,749, Patente Americana No. 4,427,663, Patente Americana No. 4,310,519, Patente Americana No. 4,199,569, Patente Americana No. 5,055,596, Patente Americana No. 4,973,711, Patente Americana No. 4,978,677, Patente Americana No. 4,920,148 e EP 0 667 054, todas aqui incorporadas por referência.

Exemplos não limitantes dos compostos pertencentes a esta classe são representados pela Fórmula (I):

onde a linha tracejada indica uma ligação simples ou uma ligação dupla nas posições 22,23; Ri é hidrogênio ou hidróxi, contanto que Ri esteja presente somente quando a linha tracejada indica uma ligação simples; R2 é alquila de 1 a 6 átomos de carbono ou alquenila de 3 a 6 átomos de carbono ou cicloalquila de 3 a 8 átomos de carbono; R3 é hidróxi, metóxi ou =NOR5 onde R5 é hidrogênio ou alquila inferior; e R4 é hidrogênio, hidróxi ou

em que R6 é hidróxi, amino, mono ou dialquilamino inferior ou alcanoilamino inferior.

Em algumas concretizações, os compostos são avermectina Bla/Blb (abamectina) , 22,23-diidroavermectina Bla/Blb (ivermectina) e o derivado 4"-acetilamino-5- cetoximino de avermectina Bla/Blb. Tanto abamectina quanto ivermectina são aprovados como agentes antiparasitários de amplo espectro. As estruturas da abamectina e ivermectina são representados pela Fórmula (II):

em que Ri e R2 são como definidos acima para a fórmula (I). Para a abamectina, a linha tracejada representa uma ligação dupla e Ri não está presente, e para ivermectina a ligação dupla representa uma ligação simples e Ri é hidrogênio; e R2 é isopropila ou sec-butila.

Os derivados 4"-acetilamino-5-cetoximino de avermection Bla/Blb sao representados pela formula (III) :

em que R2 é isopropila ou sec-butila.

Em algumas concretizações, os produtos avermectina podem ser preparados como uma mistura que compreende pelo menos 80% de um composto de acordo com a fórmula (II ou 5 III) , em que R2 é sec-butila e não mais do que 20% de um composto de acordo com a Fórmula (II ou III) em que R2 é isopropila.

Em outras concretizações, as avermectinas podem incluir emamectina, eprinomectina e doramectina.Dormection tem uma estructure de acordo com a Fórmula (IV) :

Eprinomectina é divulgada na Patente Americana 4,427,663 (aqui incorporada por referência), e tem uma estrutura de acordo com a Fórmula (V):

Em algumas concretizações da presente invencao, a milbemicina é moxidectina, representada pela fórmula (VI);

Algumas concretizações podem incluir os derivados de monossacarideos de avermectina que têm uma substituição de oxima na posição 5 do anel lactona. Outras concretizações incluem milbemicinas, tal como milbemicina cq, que érepresentada pela fórmula (VII).

São também contemplados dentro do escopo da invenção os sais de ácido ou base dos compostos nas composições da invenção, onde aplicável.

O termo "ácido" contempla todos os ácidos inorgânicos ou orgânicos farmaceuticamente aceitáveis. Ácidos inorgânicos incluem ácidos minerais, tais como ácidos halogenidricos como o ácido bromidrico e ácido clorídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico e ácido nitrico. Ácidos 10 orgânicos incluem todos os ácidos carboxilicos, ácidos dicarboxilicos, ácidos tricarboxilicos e ácidos graxos alifáticos, aliciclicos e aromáticos farmaceuticamente aceitáveis. Em uma concretização dos ácidos, os ácidos são ácidos carboxilicos alifáticos Ci-C2o de cadeia linear ou 15 ramificada, saturados ou insaturados, que são opcionalmente substituídos por halogênio ou por grupos hidroxila, ou ácidos carboxilicos aromáticos Cg-C^. Exemplos de tais ácidos são o ácido carbônico, ácido fórmico, ácido acético, ácido propiônico, ácido isopropiônico, ácido valérico, a- hidroxiácidos, como o ácido glicólico e ácido lático, ácido cloroacético, ácido benzoico, ácido metanossulfônico e 5 ácido salicilico. Exemplos de ácidos dicarboxilicos incluem o ácido oxálico, ácido málico, ácido succinico, ácido tartárico, ácido fumárico e ácido maleico. Um exemplo de um ácido tricarboxilico é o ácido citrico. Ácidos graxos incluem todos os ácidos carboxilicos saturados ou 10 insaturados, alifáticos ou aromáticos farmaceuticamente aceitáveis, tendo de 4 a 24 átomos de carbono. Exemplos incluem o ácido butirico, ácido isobutirico, ácido sec- butirico, ácido láurico, ácido palmitico, ácido esteárico, ácido oleico, ácido linoleico, ácido linolênico e ácido 15 fenilestérico. Outros ácidos incluem o ácido glucônico, ácido glicoeptônico e ácido lactobiônico.

O termo "base" contempla todas as bases inorgânicas ou orgânicas farmaceuticamente aceitáveis, incluindo hidróxidos, carbonatos ou bicarbonatos de metais alcalinos 20 ou metais alcalino-terrosos. Sais formados com tais bases incluem, por exemplo, os sais de metais alcalinos e de metais alcalino-terrosos incluindo, mas sem se limitar, aos sais de litio, sódio, potássio, magnésio ou cálcio. Sais formados com bases orgânicas incluem os sais de hidrocarbonetos comuns e de aminas heterociclicas, que incluem, por exemplo, sais de amónio (NH4+) , sais de alquil e dialquilamônio, e sais de aminas ciclicas, como os sais de morfolina e piperidina.

Além disso, os compostos nas composições da invenção podem existir como hidratos ou solvatos, em que uma certa quantidade estequiométrica de água ou um solvente está associado com a molécula na forma cristalina. As composições da invenção podem incluir hidratos e solvatos dos agentes ativos. Termos usados neste documento terão o seu significado habitual na técnica, a menos que seja especificado de outra forma. O termo "alquila" refere-se aos hidrocarbonetos primários, secundários ou terciários lineares, ramificados, cilcicos, saturados, incluindo aqueles que têm de 1 a 12 átomos. Em algumas concretizações, grupos alquila incluirão grupos alquila Ci-Cio, Ci-Cg, Ci-Cθ ou Ci~C4. Exemplos de alquila Ci-Cio incluem, mas não estão limitados, a metila, etila, propila, 1-metiletila, butila, 1-metilpropila, 2- metilpropila, 1,1-dimetiletila, pentila, 1-metilbutila, 2- metilbutila, 3-metilbutila, 2,2-dimetilpropila, 1- etilpropila, hexila, 1, 1-dimetilpropila, 1,2- dimetilpropila, 1-metilpentila, 2-metilpentila, 3- metilpentila, 4-metilpentila, 1,1-dimetilbutila, 1/2- dimetilbutila, 1,3-dimetilbutila, 2,2-dimetilbutila, 2,3- dimetilbutila, 3,3-dimetilbutila, 1-etilbutila, 2- etilbutila, 1,1,2-trimetilpropila, 1,2,2-trimetilpropila, 1-etil-l-metilpropila, l-etila-2-metilpropila, heptila, octila, 2-etilexila, nonila and decila e seus isômeros. Alquila C1-C4 significa, por exemplo, metila, etila, propila, 1-metiletila, butila, 1-metilpropila, 2- metilpropila ou 1,1-dimetiletila. O termo "alquila inferior" refere-se aos grupos alquila como definido acima, que têm de 1 a 3 átomos de carbono.

Em algumas concretizações, a presente invenção pode incluir composições que são eficazes no tratamento e/ou prevenção de infestações por endoparasitas. Os ditos endoparasitas podem incluir helmintos, tais como Anaplocephala, Ancylostoma, Anecator, Ascaris, Capillaria, Cooperia, Dipylidium, Dirofilaria, Echinococcus, Enterobius, Fasciola, Haemonchus, Oesophagostumum, Ostertagia , Toxocara, Strongyloides, Toxascaris, Trichinella, Trichuris e Trichostrongylus. Helmintos também incluem Anaplocephala, Ancylostoma, Anecator, Ascaris, Capillaria, Cooperia, Dipylidium, Dirofilaria, Echinococcus, Enterobius, Fasciola, Haemonchus, Oesophagostumum, Ostertagia, Toxocara, Strongyloides, Toxascaris, Trichinella, Trichuris e Trichostrongylus. Ou outros da classe de helmintos, tais como, por exemplo, Ancylostoma duodenale, Ancylostoma ceylanicum, Acylostoma braziliensis, Ancylostoma spp. , Ascaris lubricoides, Ascaris spp., Brugia malayi, Brugia timori, Bunostomum spp., Chabertia spp., Clonorchis spp., Cooperia spp., Dicrocoelium spp, Dictyocaulus filaria, Diphyllobothrium latum, Dracunculus medinensis, Echinococcus granulosus, Echinococcus multilocularis, Enterobius vermicularis, Faciola spp., Haemonchus spp., Heterakis spp., Hymenolepis nana, Hyostrongulus spp., Loa Loa, Nematodirus spp., Oesophagostomum spp., Opisthorchis spp., Onchocerca volvulus, Ostertagia spp., Paragonimus spp., Schistosomen spp., Strongyloides fuelleborni, Strongyloides stercoralis, Stronyloides spp., Taenia saginata, Taenia solium, Trichinella spiralis, Trichinella nativa, Trichinella britovi, Trichinella nelsoni, Trichinella pseudopsiralis, Trichostrongulus spp., Trichuris trichuria, e Wuchereria bancrofti.

Quando administrada topicamente ao gado, Eprinomectina não é metabolizada extensivamente e o composto original compõe 90% de residuos nos tecidos e mais de 85% nas fezes. Eprinomectina também tem um coeficiente de leite-plasma relativamente baixo 0,2), indicando uma maior partição do composto do leite e no plasma. Em contrapartida, muitos outros compostos de lactona macrociclica podem ter coeficientes leite-plasma de cerca de 1,0. Compostos ativos que têm um coeficiente leite-plasma igual a 1,0 são aqui definidos (e serão compreendidos por uma pessoa versada na técnica) em não terem tendência alguma a partição para ou fora do leite. Alvinerie e col. (1999) examinaram a farmacocinética de eprinomectina nos rebanhos em lactação e concluiram que apenas 0,1% da dose total foi eliminada no leite, que foi 50 vezes menor do que aquela observada para ivermectina ou moxidectina.

Quando administrada por via tópica, eprinomectina ou outros compostos ativos de lactona macrociclica podem ser administrados em uma dose de cerca de 500 μg/Kg de peso corporal. Quando administrado via injeção subcutânea, os tratamentos com lactona macrociclica são tipicamente administrados em uma dose de cerca de 100 μg/Kg a cerca de 400 μg/Kg. Estas doses parecem ser suficientes para alcançar eficácia contra uma ampla gama de parasitas com diferentes niveis de susceptibilidade aos diversos compostos ativos de lactona macrociclica.

Em algumas concretizações, as formulações ou composições de acordo com a presente invenção podem conter de aproximadamente 0,5% p/v a aproximadamente 10% p/v de eprinomectina ou outro composto ativo de lactona macrociclica; a dose pode ser distribuída para o animal de cerca de 100 μg/Kg a cerca de 400 μg/Kg, ou de cerca de 200 μg/Kg a cerca de 300 μg/Kg.

Em outra concretização, uma dose e volume padrão das formulações de acordo com a presente invenção serão eficazes na prevenção e/ou tratamento de indisposições, doença, distúrbios ou infestações em animais com peso de 400 Kg a 800 Kg. Em outras concretizações, os animais pesando 600 Kg e acima receberão uma dose e volume padrão, enquanto os animais com peso de 599 Kg a 400 Kg receberão uma dose de aproximadamente 7 5% do tamanho da dita dose padrão. A Tabela 2 fornece tamanhos de dose de amostra quando as composições de acordo com a presente invenção compreendem Eprinomectina.

Em uma concretização, as composições de acordo com a presente invenção compreendem uma lactona macrociclica, por exemplo, eprinomectina, um sistema de solvente de eprinomectina, pelo menos um componente virai e tensoativos adequados para permitir que a lactona macrociclica e o componente virai formem uma composição estável, farmaceuticamente aceitável.

Em uma concretização, a composição compreende eprinomectina, o sistema solvente compreende DMA (dimetilacetamida) e MYGLYOL 840 (diésteres de propilenoglicol dos ácidos caprilico e cáprico), e o 5 componente virai é derivado de rotavirus ou coronavirus.

Em outra concretização, a composição compreende adicionalmente tensoativos, como Span 20 (monolaurato de sorbitano), Span 80 (monooleato de sorbitano) ou TWEEN (tensoativos de polissorbato) , como Tween 80 (monoleato de 10 polioxietileno (20) sorbitano), cujos tensoativos funcionam para facilitar a formação de uma emulsão múltipla estável entre eprinomectina completamente dissolvida, tensoativos e pelo menos um componente viral. Em algumas concretizações, quantidades eficazes de dose são indicadas pela Tabela 2. Tabela 2. Doses distribuídas da composição de eprinomectina por peso do animal.

A Tabela 3 fornece tamanhos de dose de amostra quando as composições de acordo com a presente invenção compreendem Ivermectina. Tabela 3. Doses distribuídas da composição de ivermectina 5 por peso do animal.

Em outra concretização, as composições de acordo com a presente invenção podem ser preparadas usando as etapas que compreendem: (a) preparação de um componente da solução de lactona macrociclica; (b) preparação de um componente de vacina que seja adequado para o tratamento de neonatos; e (c) mistura dos componentes (a) e (b) para produzir as composições. Em ainda outra concretização, as composições são emulsões estáveis e adequadas para injeção em um animal, por exemplo, um animal bovino, suino, caprino, ovino ou equino.

Em algumas concretizações onde a eprinomectina é usada, o componente da solução de lactona macrociclica pode compreender DMA (dimetilacetamida) e MIGLIOL (diésteres de propileno glicol dos ácidos caprilico e cáprico), os 5 tensoativos podem incluir lecitina e SPAN, e o componente virai pode ser derivado de rotavirus ou coronavirus. As composições ainda podem compreender opcionalmente componentes de bactérias ou protistas causadores de doenças, por exemplo, a bacterina-toxoide de E. coli.

As composições de acordo com a presente invenção podem compreender componentes de acordo com as Tabelas 4 a 8. Tabela 4.

Tabela 5.

Tabela 6.

Tabela 7.

Tabela 8.

Em uma concretização, um componente da vacina neonatal de acordo com a presente invenção compreende os ingredientes conforme estabelecido na Tabela 9. Tabela 9. Componente da vacina neonatal

Em uma concretização, um componente da solução de eprinomectina de acordo com a presente invenção pode compreender os ingredientes conforme es tabelecidos na Tabela 10 ou Tabela 11. Tabela 10. Componente da Solução de Eprinomectina

Tabela 11. Componente da Solução de Eprinomectina

As composições de acordo com a presente invenção podem ser produzidas por vários métodos utilizando vários sistemas de solvente e tensoativos. Além disso, a identificação de um sistema carreador adequado para produzir uma composição estável compreendendo lactonas macrociclicas e outros ativos é um desafio e não óbvio. É bem sabido na técnica que é muito dificil formular agentes ativos de lactona macrocíclica junto com certos outros ativos devido a diferentes requisitos de veiculo e à suscetibilidade de lactonas macrociclicas à degradação em certos solventes. Avermectinas e milbemicinas, por exemplo, são pouco solúveis em água e não compatíveis com as condições ácidas, enquanto alguns agentes anti-helminticos, como levamisol, são mais solúveis em água e exigem condições de pH ácido para ótima estabilidade (ver US 2006/0128641 Al). Por exemplo, a Patente norte-americana No. 6,489,303 de Jancys e col. descreve que misturas de uma lactona macrocíclica e um agente anti-helmintico insolúvel resultaram em uma taxa aumentada de degradação do agente ativo de lactona macrocíclica, exigindo a adição de antioxidante em excesso para estabilizar a mistura. Portanto, a combinação de uma vacina neonatal multicomponente complexa e uma lactona macrociclica, em uma composição liquida única que é tanto estável quanto eficaz contra um amplo espectro de endoparasitas, e ao mesmo tempo provoca respostas imunes especificas ao patógeno, representa uma conquista significativa no campo da medicina veterinária que não é nem previsível e nem óbvia. Foi de desafio experimental particular o estabelecimento de um sistema de solvente que poderia adequadamente dissolver as concentrações relativamente altas de eprinomectina que são necessárias para as composições para distribuir uma dose eficaz aos animais. De fato, somente através dos métodos inventivos divulgados neste documento, a alta concentração de eprinomectina poderia ser misturada com componentes imunogênicos, como os componentes da vacina neonatal discutidos acima. Experimentação rigorosa estabeleceu que eprinomectina não podia ser adicionada aos componentes imunogênicos, a menos que a eprinomectina fosse primeiramente dissolvida no componente solvente e, então, combinada com os componentes imunogênicos, resultando em emulsões de acordo com a presente invenção.

Em uma concretização, as composições de combinação de acordo com a presente invenção podem ser produzidas através da combinação de volumes iguais de componentes da solução de eprinomectina com componentes imunogênicos ou da vacina neonatal. Em uma concretização, cerca de 2 ml de componente da vacina neonatal é combinado com cerca de 2 ml de solução de eprinomectina para produzir cerca de 4 ml de uma composição de combinação, que também será aqui referida como um "produto final".

Em outra concretização, uma fase aquosa para um componente imunogênico ou de vacina neonatal da presente invenção pode ser preparada de acordo com as etapas que compreendem: (a) adição de água para injetáveis; (b) adição de TIMEROSAL; (c) mistura até ficar limpido; (d) adição de tiossulfato de sódio; (e) mistura até ficar limpido; (f) adição de cloreto de sódio; (g) mistura até ficar limpido; (h) adição de formaldeido; (i) mistura até ficar limpido; (j) adição de concentrados de antigeno, que podem ser derivados de rotavirus e coronavirus; (k) avolumar com água para injetáveis para formar a fase aquosa. Em outra concretização, a fase aquosa é combinada com uma fase oleosa, formando uma emulsão, que é o componente imunogênico ou de vacina neonatal da presente invenção. A emulsão pode ser preparada utilizando óleo mineral leve ou outro emulsif icante adequado, e pode ter uma aparência esbranquiçada.

Em uma concretização, as composições de acordo com a presente invenção podem ser emulsões liquidas branco suave ou esbranquiçadas com aceitável seringabilidade. Qualquer separação pode ser facilmente ressuspensa com agitação suave, mesmo quando as composições estejam em cerca de 2 a 8°C. Em uma concretização, o componente da vacina pode ser preparado a partir de virus e/ou bactérias originalmente obtidos no campo, e mais especificamente, pode ser preparado a partir de várias combinações de coronavirus bovino, rotavirus bovino e E. coli originalmente obtidos no campo. Uma pessoa versada na técnica pode prontamente obter outras cepas adequadas de depositários apropriados, fontes acadêmicas ou comerciais adequadas.

Em outra concretização, frações virais da invenção, os virus foram cultivadas em cultura de células de cerca de 35°C a cerca de 39°C, ou cerca de 37°C. O virus foi então coletado e inativado com um agente de inativação que não destrói as partículas virais ou a antigenicidade, de acordo com os métodos padrão conhecidos na técnica.

A produção das frações bacterianas similarmente envolveu um processo de crescimento do organismo bacteriano em um meio de crescimento para produzir grandes quantidades de toxinas. Estas são, então, coletadas e inativadas com um agente de inativação. Quando injetados no animal, esses "toxoides" tornam-se antigenos que o sistema imunológico reconhece como estranhos, desencadeando assim a produção de anticorpos. Composições em formas para várias vias de administração são previstas pela invenção. E mais uma vez, a dose eficaz e a via de administração são determinadas por fatores conhecidos, como idade, sexo, peso e outros procedimentos de triagem que são conhecidos e não necessitam de experimentação demasiada. Dosagens de cada agente ativo podem ser como nos documentos aqui citados (ou documentos referenciados ou citados nos documentos aqui citados). Tendo, assim, descrito em detalhes as concretizações preferidas da presente invenção, deve ser entendido que a invenção definida pelos parágrafos acima não deve ser limitada aos detalhes particulares definidos na descrição acima, uma vez que muitas variações dos mesmos são possiveis sem se afastar do espirito ou do escopo da presente invenção.

A invenção será agora adicionalmente descrita a titulo dos seguintes exemplos não limitantes.

EXEMPLOS

Sem elaboração adicional, acredita-se que uma pessoa versada na técnica possa, usando as descrições anteriores, praticar a presente invenção em toda a sua extensão. Os exemplos a seguir detalhados devem ser interpretados como sendo meramente ilustrativos, e não como limitações da descrição anterior de qualquer forma. As pessoas versadas na técnica irão prontamente reconhecer variações apropriadas dos procedimentos tanto para os reagentes quanto para as condições e técnicas reacionais.

Exemplo 1 - Produção e qualidade de várias composições de combinação de vacina/lactona macrociclica

Várias combinações de componentes de solvente de lactona macrociclica e tensoativos foram testadas para identificar ingredientes e métodos que poderiam dar origem a composições de combinação estáveis de acordo com a presente invenção. Para a fase inicial de desenvolvimento, a vacina comercialmente preparada (ROTAVEC Corona, Intervet) foi usada como o componente da vacina neonatal para a formulação acabada/composição da combinação. O componente da solução de eprinomectina foi preparado de acordo com as seguintes etapas: (a) adição de DMA e MIGLIOL; (b) adição de- eprinomectina; (c) mistura até a solução ficar limpida; (d) adição de lecitina; (e) mistura até a solução ficar limpida; (f) adição de SPAN; (g) mistura até a solução ficar limpida; (h) adição de MIGLIOL para levar a solução entre 85% e 95% do volume da solução final; (i) aquecimento da solução de DMA/MIGLIOL/eprinomectina/lecitina/SPAN entre 50°C e 60°C; (j) resfriamento da solução até abaixo de 30°C e, em seguida, misturar até a solução ficar limpida; (k) ajuste do volume ao volume da solução final pela adição de MIGLIOL; e (1) filtração asséptica através de um filtro de 0,22 μm.

O desenvolvimento do componente da solução de eprinomectina apresentou desafios experimentais significativos devido à necessidade de incorporar uma carga relativamente alta do ativo. Uma variedade de excipientes foi testada para chegar à formulação preferida. As Tabelas 12 a 15 resumem os componentes e resultados (por exemplo, inspeção visual das composições de emulsão) para as fórmulas de lote de laboratório séries A e B. Tabela 12. Componente da Solução de Eprinomectina da Série de Lote A

Tabela 13. Composição da Série de Lote A e Aspecto Visual

Tabela 14. Componente da Solução de Eprinomectina da Série

Tabela 15. Composição da Série do Lote B e Aparência Visual

Além disso, DMA está presente na maioria das formulações que tiveram pelo menos uma aparência de "boa" após 2 dias, mas várias formulações "boas" não possuiam DMA 5 (ver, por exemplo, números 27 e 28 do lote B) . A lecitina por si só não pareceu suficiente para produzir "boas" formulações (ver, por exemplo, os números 9 a 19 de lote B, e a adição de TWEEN à composição contendo lecitina não pareceu aliviar o problema (ver o número 20 de lote B) . A 10 lecitina e o SPAN estavam presentes em todas as formulações que foram avaliadas como sendo pelo menos "boas" depois de 2 dias. Das combinações testadas de ingredientes testados, o número 32 de lote B foi a melhor formulação com base na observação fisica.

Exemplo 2 - Residues de lactona macrocíclica (ML) no leite e tecidos de vacas leiteiras em lactação após a administração de dose única de formulações de levamisol/eprinomectina

Objetivos do estudo: 1) Para medir os residues de ML no leite e nos tecidos das vacas leiteiras em lactação após uma dose única de uma formulação experimental de eprinomectina, ivermectina, moxidectina ou doramectina combinada com uma vacina de rotavirus inativado, coronavirus e Escherichia coli foi administrada por injeção intramuscular em 0,3 e 0,4 mg de lactona macrociclica/Kg de peso corporal. 2) Para avaliar a irritação tecidual local das formulações experimentais quando administradas ao gado por injeção intramuscular.

Antecedentes: As formulações de acordo com a presente descrição são destinadas a serem administradas às vacas via injeção intramuscular até 3 semanas antes do parto. Foi, portanto, necessário determinar se o tratamento com tal produto sob o regime proposto resulta em residues de ML no leite após o parto.

Modelo Experimental: Vacas leiteiras foram selecionadas de acordo com as informações resumidas fornecidas na Tabela 16. As formulações experimentais de cada uma das quatro lactonas macrociclicas foram 5 separadamente combinadas com partes iguais de uma vacina registrada, Rotavec® Corona (Schering-Plough). A dose recomendada de Rotavec® Corona é de 2 ml por animal, que foi diluida para produzir 4 ml de combinação de ML/vacina. Cada combinação de ML/vacina continha 40mg/ml de lactona 10 macrociclica. A quantidade de ML nas formulações está resumida na Tabela 17. Tabela 16. Informação resumida das vacas leiteiras experimentais

Tabela 17. Informação resumida das vacas leiteiras experimentais

Métodos: No dia -5, cinquenta e quatro animais foram identificados por triagem e foram verificados para mastite por apalpação da glândula mamária, visualização das secreções mamárias e Teste Rápido de Mastite (RMT, Immucell, Portland, Maine). Amostras de leite individuais foram coletadas para a contagem de células somáticas (SCC) e trinta e três animais que atenderam aos critérios de inclusão foram selecionados para o estudo. Dos trinta e três animais, a vaca com o mais alto rendimento médio diário de leite, conforme avaliado durante um periodo de sete dias, foi alocada como controle. Os trinta e dois animais restantes foram classificados do maior para o menor no rendimento médio diário de leite, no mesmo periodo de tempo, e divididos em quatro blocos de oito animais cada. Um número aleatório foi gerado para cada animal utilizando a função geradora de número aleatório do Microsoft Excel. Dentro de cada bloco, o menor número aleatório foi alocado no Grupo 1, o segundo mais baixo para o Grupo 2 e sequencialmente até o Grupo 8, criando oito grupos de quatro animais cada (Tabela 18) . No dia 0, as vacas foram pesadas e amostras de sangue foram coletadas de todos os animais nos Grupos 1 e 2 para uso em um ensaio de eprinomectina plasmática subsequente. As amostras de sangue foram armazenadas congeladas em ou abaixo de -18°C até a análise laboratorial. Cada animal foi tratado com a formulação indicada na taxa de dose apropriada. As doses foram calculadas com base no peso corporal do animal no Dia 0 para fornecer aproximadamente 40mg de ML/ml. As doses calculadas foram arredondadas até próximo de 0,2 ml.

As formulações foram administradas por injeção intramuscular profunda na região anterior do pescoço. Os locais de injeção foram limpos e secos e inspecionados para lesões antes da injeção. Injeções foram administradas com 5 uma seringa de 10 ml diferente para cada produto. Uma agulha estéril de 1^ polegada de calibre 18 foi usada para cada injeção. O tempo de tratamento foi registrado. A evidência de dor na injeção foi avaliada. As vacas foram observadas em relação às reações adversas para as 10 formulações em aproximadamente 30 minutos, 2 e 4 horas após o tratamento. Tabela 18. Grupos de tratamento

As amostras de sangue foram coletadas de todos os animais dos Grupos 1 e 2 para o ensaio de eprinomectina no plasma nos Dias 1, 3 e 7 e armazenadas sob congelamento como descrito. O tempo de coleta de sangue foi registrado. O equipamento de teste de rebanho (De Lavai) foi usado para coletar uma amostra de aproximadamente 2% representativa de toda a ordenha para cada vaca individualmente na ordenha da manhã em cada um dos Dias 1 a 10 após o tratamento, e na ordenha da manhã nos Dias 14, 21 e 35. Subamostras em duplicata foram decantadas para cada vaca nos Grupos 1 a 4 e 7 a 9 e subamostras em triplicata foram decantadas para cada vaca nos Grupos 5 a 6. Cada amostra dos animais tratados media aproximadamente 30 ml. Os tempos de inicio e fim para cada ordenha dos 33 animais de estudo foram registrados para fornecer uma estimativa do tempo real de coleta de amostra de leite.

Os animais do estudo foram ordenhados depois do rebanho principal. A linha de leite foi completamente lavada com água fria antes da ordenha dos animais do estudo. O equipamento de teste de rebanho foi limpo entre as amostragens. Ele foi lavado "em linha" com a lavagem da planta de ordenha. Os recipientes de amostra foram, então, adicionalmente limpos através de uma máquina de lavar louça. As conexões do amostrador foram adicionalmente limpas por imersão em ácido quente, depois rinsadas. Os rendimentos de leite em cada ordenha em que as amostras foram coletadas foram medidos e registados.

Observações: Os animais foram observados em relação ao comportamento geral e conduta nos Dias 1 a 10. Os locais de injeção foram examinados por inspeção e apalpação na ordenha da manhã, nos Dias 1, 3, 7 e 14. Quaisquer reações visiveis ou apalpáveis foram descritas e medidas (comprimento, largura e profundidade). As reações que persistiram após o Dia 14 foram reavaliadas no Dia 21.

O leite foi retido a partir da cuba até o Dia 35.

Análise: Uma amostra de leite de cada vaca nos Grupos 5 e 6 em cada instante foi refrigerada em 2 a 8 °C e enviada por correio (fresca, refrigerada) para o laboratório Livestock Improvement Corporation Testlink, Hamilton, Nova Zelândia, para a quantificação de gordura do leite usando um método fluorimétrico (Fossomatic). Duas amostras de cada vaca em cada instante foram congeladas em ou abaixo de - 18 °C. As amostras primárias foram enviadas por correio para o Hill Laboratory, Ruakura, Nova Zelândia, em estado congelado e avaliadas para os residues de ML relevantes utilizando um método validado (extração com acetonitrila, limpeza com SPE e análise por LC-MS/MS) . As amostras das ordenhas dos dias 7, 14 e 21 foram analisadas primeiro. Os resultados são apresentados na Tabela 21 e nas Figuras 1 a 7. As amostras de leite reserva foram retidas até que os ensaios fossem concluídos. As amostras de sangue foram centrifugadas e o plasma decantado e armazenado congelado em ou abaixo de -18°C. As amostras do animal controle mediram aproximadamente 90 ml. As amostras de controle foram analisadas para os residuos de ML para fornecer uma comparação de linha de base aos grupos tratados. O leite excedente do animal controle foi utilizado pelo laboratório para criar amostras de QC marcadas.

Resultados: As contagens de células somáticas realizadas nas amostras coletadas no Dia 5 tinham em média 76.500 células/ml em todos os animais do estudo e variaram de 18.000 a 144.000 células/ml. O rendimento médio diário de leite da vaca individual no periodo de sete dias pré- estudo teve em média 17,6 1/dia em todos os animais do estudo e variou de 16,1 a 19,7 1/vaca/dia. Os pesos corporais medidos no Dia 0 tinham em média 482,1 Kg em todos os animais do estudo e variaram de 415 a 576 Kg. As taxas de dose foram calculadas em 0,3 mg/Kg ou 0,4 mg/Kg com base em uma concentração de ML de 40mg/ml. As taxas de dose efetivas (ajustado para a concentração de ML real conforme determinado pelo Certificado de Análises) são mostradas na Tabela 19. Tabela 19: Taxas de dose efetivas (mg/Kg)

Os animais foram tratados entre 8:55 e 10:03 na manhã do Dia 0. A ordenha da manhã começou em ou após as 07:30 h 5 e terminou em ou antes de 08:09 a cada dia que as amostras foram coletadas durante o periodo de até o Dia 21. Nenhum animal apresentou sinais de dor durante a injeção com qualquer uma das formulações. Nenhum evento adverso foi observado após o tratamento. As medições da reação no local 10 da injeção nos Dias 1, 3, 7, 14 e 21 são apresentadas na Tabela 22. As reações foram inchaços discretos e firmes do tecido muscular que não pareciam ser dolorosos com leve apalpação. Um animal em cada um dentre o Grupo 1 (eprinomectina 0,3 mg/Kg), Grupo 2 (eprinomectina 0,4 mg/Kg) e Grupo 6 (moxidectina 0,3 mg/kg) tiveram reações no local da injeção que persistiram pelo menos até 21 dias após o tratamento.

Discussão: A injeção intramuscular com Rotavec® Corona causou reações no local de injeção em vários animais. A reação no local de injeção desta natureza é reconhecida nos encartes da embalagem e rótulo para Rotavec® Corona e é sugerido que seja devido ao óleo na vacina. Assim, o componente Rotavec® Corona da formulação da invenção provavelmente contribuiu para as reações observadas no estudo. Os limites Máximos de Residue (MRL) para MLs em leite bovino são apresentados na Tabela 20. A Agência Europeia de Medicamentos (EMEA) atualmente proibe o uso de doramectina e ivermectina em bovinos produtores de leite para consumo humano - nenhum residue destes ativos são permitidos. O Codex Alimentarius estabelece um MRL para eprinomectina, doramectina e ivermectina em leite bovino, mas não estabelece um MRL para moxidectina no leite bovino. ACVM da Nova Zelândia fixou MRLs para todos os quatro ativos no leite bovino, que refletem os MRLs internacionais, quando disponíveis. 0 MRL da ACVM para moxidectina define o resíduo como moxidectina na gordura do leite, enquanto que o MRL da EMEA para a moxidectina define o resíduo como moxidectina no leite integral. Tabela 20: MRLs de leite bovino (mg/Kg)

* Não utilizar em bovinos produtores de leite para consume humano (isto é, <LOQ) * Não utilizar em bovinos produtores de leite para consumo humano (isto é, <LOQ) Conclusão: os resíduos de eprinomectina para todos os animais do estudo estavam abaixo do MRL de 0,02mg/Kg (por um fator de dez) em 7 dias após o tratamento e abaixo do limite de quantificação (LOQ) em 14 dias após o tratamento. As medições de resíduo próximas ou acima dos MRLs da ACVM foram detectados em 7 dias após o tratamento com doramectina, moxidectina e ivermectina. As medições de resíduo acima do LOQ (e, portanto, acima da tolerância da EMEA para doramectina e ivermectina) foram detectadas em 21 dias após o tratamento com doramectina, moxidectina e ivermectina. Com base nesses dados, e em relação aos MRLs 5 que se aplicam na Europa, o período de retenção para a formulação de eprinomectina é estimado em 7 dias. Espera-se que o período de retenção para as variantes contendo moxidectina, ivermectina e doramectina seja maior que 21 dias e, possivelmente, até 28 dias para a moxidectina. Tabela 21. Resíduo de ML por vaca para os dias 7, 14 e 21 (em mg/Kg)

Tabela 22. Medições de reação no local da injeção

Todos os documentos citados ou referenciados neste documento ("documentos aqui citados"), e todos os documentos citados ou referenciados nos documentos aqui citados, juntamente com quaisquer instruções, descrições, especificações de produtos e encartes de produtos do fabricante para quaisquer produtos mencionados neste documento ou em qualquer documento incorporado por referência neste documento, são aqui incorporados por referência neste documento, e podem ser empregados na prática da invenção. Como os exemplos não limitativos acima demonstram, as composições da invenção compreendendo pelo menos um agente ativo de lactona macrociclica e pelo menos um componente de vacina neonatal apresentam estabilidade superior. A invenção é adicionalmente descrita pelas reivindicações a seguir.

Claims (14)

1. Composição injetável para prevenção ou controle de infecções parasitárias, bacterianas ou virais ou doenças em gado caracterizada pelo fato de compreender: (a) uma quantidade eficaz de pelo menos um rotavírus inativado ou componente viral de coronavírus; (b) uma quantidade eficaz de pelo menos um composto ativo de lactona macrocíclica, em que a lactona macrocíclica é abamectina, doramectina, eprinomectina, ivermectina ou moxidectina; (c) veículo adequado, o qual compreende um sistema solvente farmaceuticamente aceitável para o composto de lactona macrocíclica, o referido sistema solvente compreendendo dimetilacetamida (DMA), Myglyol 840 (diésteres de propilenoglicol de ácidos cáprico e crapílico), Span 20 (monolaurato de sorbitano) e lecitina; e (d) um conservante.

2. Composição, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que a lactona macrocíclica é eprinomectina.

3. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 2, caracterizada pelo fato de compreender ainda um toxóide bacteriano de E. coli.

4. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizada pelo fato de que um volume de dose única é eficaz para o tratamento de vacas com peso de 400 Kg até 800 Kg.

5. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizada pelo fato de que um volume de dose é capaz de fornecer pelo menos 200 μg/Kg de lactona macrocíclica para vacas com peso de 400 Kg até 800 Kg e, em que a composição compreende eprinomectina ou ivermectina.

6. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizada pelo fato de que a composição compreende abamectina, doramectina, ivermectina, eprinomectina ou moxidectina em uma concentração entre 2% a 6% p/v da composição.

7. Composição, de acordo com a reivindicação 6, caracterizada pelo fato de que a concentração é de 3% até 5%.

8. Composição, de acordo com a reivindicação 7, caracterizada pelo fato de que a concentração é de 3,5% até 4,5% ou 4%.

9. Composição, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, caracterizada pelo fato de que o volume da dose previne que o composto ativo de lactona macrocíclica exceda uma dose de 400 μg/Kg.

10. Processo para preparar a composição conforme definida na reivindicação 1 caracterizado pelo fato de compreender as etapas de: a) preparar um componente da solução de lactona macrocíclica dissolvendo completamente a lactona macrocíclica em um sistema de solvente farmaceuticamente aceitável; b) preparar um componente de vacina neonatal; e c) misturar os componentes de (a) e (b) em conjunto para produzir a composição da reivindicação 1, em que a lactona macrocíclica, em que a lactona macrocíclica é abamectina, doramectina, eprinomectina, ivermectina ou moxidectina, e em que o referido sistema solvente compreende dimetil acetamida (DMA), Myglyol 840 (diésteres de propileno glicol de ácidos caprílico e cáprico), Span 20 (monolaurato de sorbitano) e lecitina.

11. Processo, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que a preparação do componente solução de lactona macrocíclica compreende as etapas de: a. adicionar DMA e MIGLIOL 840; b. acrescentar eprinomectina; c. misturar até a solução ficar límpida; d. adicionar lecitina; e. misturar até a solução ficar límpida; f. adicionar Span 20; g. misturar até a solução ficar límpida; h. adicionar MIGLIOL 840 para trazer a solução até entre 85% e 95% de volume de solução final; i. aquecer a solução de DMA/MIGLIOL 840/Eprinomectina/ Lecitina/Span entre 45°C e 65°C; j. resfriar a solução até abaixo de 35°C ou abaixo de 30°C e depois misturar até a solução ficar límpida; k. ajustar o volume ao volume de solução final pela adição de MIGLIOL 840; e l. filtrar assepticamente através de um filtro de 0,22μM para preparar o componente da solução de eprinomectina.

12. Uso de uma quantidade eficaz de uma composição de combinação contendo pelo menos um componente viral inativado compreendendo rotavírus, ou coronavírus em conjunto com uma quantidade eficaz de pelo menos um composto ativo de lactona macrocíclica, um veículo farmaceuticamente aceitável e conservante caracterizado pelo fato de ser para fabricação de um medicamento para prevenir ou controlar disenteria causada por doenças parasitárias em vacas prenhas e rotavirose ou coronavirose em bezerros recém-nascidos, em que a lactona macrocíclica é abamectina, doramectina, eprinomectina, ivermectina ou moxidectina, e em que o veículo farmaceuticamente aceitável compreende um sistema solvente farmaceuticamente aceitável para a lactona macrocíclica, o sistema solvente compreendendo dimetil acetamida (DMA), Miglyol 840 (diésteres de propileno glicol de ácidos caprílico e caprico), Span 20 (monolaurato de sorbitano) e lecitina, e em que a composição é para administração parentérica a uma vaca prenha.

13. Uso, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que o componente viral inativado compreende ainda toxoide bacteriano de E. coli.

14. Uso, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que cada vaca recebe uma dose que contém entre 200 μg/Kg a 400 μg/Kg do composto ativo de lactona macrocíclica.

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