BRPI1014922B1 - Uso de uma composição tópica, emplastro para pele e kit para tratar o distúrbio da pele - Google Patents

Abstract

MÉTODOS E COMPOSIÇÕES PARA TRATAMENTO DAS CONDIÇÕES DA PELE ASSOCIADAS À HIPER-REATIVIDADE VASCULAR. A presente invenção fornece um método e composições para tratar um paciente apresentando uma condição na pele tendo como característica a hiper-reatividade vascular, tal como, rubor ou vermelhidão e/ou rosácea. O método compreende aplicaC ao de uma composição tópica às áreas afetadas da pele do paciente. A composição tópica compreende uma quantidade eficaz de uma neurotoxina botulínica de modo a diminuir a vasodilatação na microvasculatura cutânea e um veiculo para transportar eficazmente a toxina botulínica para a microvasculatura cutânea. A invenção desta forma provê um modo seguro, eficaz, confortável e/ou conveniente de se tratar a hiper-reatividade vascular na pele.

Description

REFERÊNCIA CRUZADA AOS PEDIDOS CORRELATOS

[001] Este pedido reivindica o beneficio do Pedido Provisório US número 61/165.701, depositado em Io de abril de 2009, que é incorporado ao presente documento como referência em sua totalidade.

DESCRIÇÃO DO ARQUIVO DE TEXTO APRESENTADO ELETRONICAMENTE

[002] O conteúdo do arquivo de texto apresentado eletronicamente com o presente documento é incorporado como referência em sua totalidade: uma cópia em formato que pode ser lido por computador da Listagem de Sequência (nome do arquivo REVA 003_01WO SeqList_ST25.txt, data de gravação: 30 de março de 2010, tamanho 4 kb).

CAMPO DA INVENÇÃO

[003] A presente invenção se refere ao tratamento de doenças da pele caracterizadas por hiper-reatividade vascular, ou dilatação vascular hiper-reativa. Em particular, a presente invenção se refere ao uso de uma formulação tópica de neurotoxina botulinica para o tratamento de doenças, tais como, rosácea ou para prevenir ou retardar a progressão da rosácea.

HISTÓRICO

[004] A rosácea é uma condição crônica caracterizada por vermelhidão facial, que pode evoluir para dilatação dos vasos sanguineos superficiais no rosto, pápulas de cúpula vermelha, sensações de ardência e coceira e um nariz vermelho, bulboso. A rosácea afeta mais de 14 milhões de americanos (National Rosacea Society, 2009), e a idade de pico de início se encontra entre 30 e 60 anos.

[005] A rosácea pode ser classificada em pelo menos quatro subtipos com sintomas variados, e um paciente pode ser atingido simultaneamente com um ou mais subtipos (Wilkin e outros (2004), J. Am. Acad. Dermatol., Vol 50 (6) : 907-12) . Rosásea eritemato-telangiectática é caracterizada por um eritema permanente (isto é, vermelhidão) das bochechas, testa, nariz e que o paciente tem uma tendência ao rubor fácil e vermelhidão. Normalmente, pequenos vasos sanguíneos são visíveis perto da superfície da pele (por exemplo, telangiectasias) e o indivíduo pode experimentar sensação de queimação ou coceira. Rosácea papulopustular pode ser facilmente confundida com acne, devido à presença de alguma vermelhidão permanente em toda a face central, com pápulas vermelhas, algumas das quais são preenchidas pus (pústulas). Rosácea fimatosa é o subtipo mais comumente associado à rinofima e ao alargamento do nariz devido à hiperplasia das glândulas sebáceas. Os sintomas da rosácea fimatosa podem incluir espessamento da pele, nodularidades de superfície irregular e alargamento, que também pode afetar o queixo, testa, bochechas, pálpebras e orelhas (Jansen e Piewig G (1998), Facial Plast Surg, vol. 14 (4):241-53). Um quarto subtipo, conhecido como rosácea ocular, afeta principalmente os olhos sendo caracterizada por olhos vermelhos, irritados, pálpebras inchadas, terçóis recorrentes, e sensações de ardor e prurido.

[006] Os sintomas da rosácea são socialmente incapacitantes para muitos pacientes e a condição pode durar anos e raramente inverte-se sem tratamento. Os tratamentos são normalmente adaptados individualmente, devido à natureza e gravidade distinta dos sintomas. Vários medicamentos orais e tópicos, incluindo antibióticos, retinóides, peróxido de benzoila e bloqueadores beta, são inicialmente prescritos para trazer a condição sob controle, o que pode levar de um a dois anos. 0 tratamento a longo prazo é muitas vezes necessário para manter a remissão da condição. Os estágios mais avançados da rosácea podem requerer laser, fonte de luz intensa, ou o tratamento cirúrgico para remover vasos sanguíneos superficiais visiveis, reduzir a vermelhidão extensa ou melhorar desfigurações do nariz.

[007] Os tratamentos atualmente disponíveis para a rosácea e os sintomas associados não são rentáveis e podem carregar um risco médico substancial. Além disso, enquanto tratamentos tópicos apresentam a vantagem de evitar toxicidade sistêmica indesejada, a eficácia dos tratamentos tópicos pode ser limitada, por exemplo, grandes áreas de pele afetada, as profundidades variadas da microvasculatura da pele, e as variações individuais na pele do paciente.

[008] Tratamentos mais eficazes para doenças de pele associadas à hiper-reatividade vascular são necessários, incluindo tratamentos eficazes para a rosácea, bem como tratamentos eficazes para prevenir a progressão da rosácea.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

[009] A presente invenção fornece métodos e composições para tratamento, redução ou melhora da vasodilatação na microvasculatura cutânea. Assim, a presente invenção é útil para tratar ou melhorar a hiper-reatividade vascular que caracteriza condições, tais como, rosácea. Além disso, os métodos e composições da invenção podem aliviar sintomas, tais como, vermelhidão crônica ou episódica e rubor, e impedir a sua progressão para a rosácea.

[0010] Em um aspecto, a presente invenção fornece um método para tratar um paciente portando uma doença de pele caracterizada por hiper-reatividade vascular cutânea, tal como, vermelhidão, rubor crônico, episódico ou rosácea. O método compreende a aplicação de uma composição tópica para a(s) área(s) afetada (s) da pele do paciente. A composição tópica compreende uma quantidade eficaz de uma neurotoxina botulinica para diminuir a vasodilatação na microvasculatura cutânea, e um veiculo para transportar de forma eficaz a toxina botulinica para a microvasculatura cutânea. Por exemplo, em determinadas concretizações, a neurotoxina botulinica é formulada com um transportador de peptideos com carga positiva (por exemplo, polilisina) tendo um ou mais dominios da proteina de transdução (ou dominios de transporte), tais como HIV-TAT ou sequências de aminoácido HIV-TAT inversas. O método pode envolver uma única aplicação de toxina botulinica tópica nas regiões afetadas, ou em determinadas concretizações, pode envolver a aplicação repetida.

[0011] A invenção permite que quantidades eficazes de toxina botulinica sejam aplicadas de forma controlada às regiões afetadas da pele e liberadas de forma controlada para a microvasculatura subjacente. A invenção, portanto, provê uma maneira segura, eficaz e confortável de tratar hiper-reatividade vascular na pele, de modo a tratar, aliviar ou prevenir a progressão da rosácea e/ou para evitar progressão da hiper-reatividade vascular crônica ou episódica para uma condição tal como rosácea.

[0012] Em um segundo aspecto, a presente invenção fornece composições, formulações, kits e/ou outros veiculos ou dispositivos para administração tópica de neurotoxina botulínica para o tratamento de hiper-reatividade vascular cutânea. Por exemplo, a invenção provê cremes, loções, géis, e emplastros que permitem que a neurotoxina botulínica e veiculo sejam conveniente, segura, confortável e/ou controladamente aplicados à(s) área(s) afetada(s) da pele do paciente.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

[0013] A presente invenção provê métodos e composições para o tratamento, redução, ou melhora da vasodilatação na microvasculatura cutânea. Assim, a presente invenção é útil para tratar ou melhorar a hiper-reatividade vascular que caracteriza condições, tais como, rosácea. A invenção envolve a aplicação de uma composição tópica à(s) área(s) afetada(s) da pele do paciente. A composição tópica compreende uma quantidade efetiva de uma neurotoxina botulínica para diminuir a vasodilatação na microvasculatura cutânea e um veiculo para transportar de forma eficaz a toxina botulínica para a microvasculatura cutânea.

[0014] A toxina botulínica é conhecida por mediar os efeitos da acetilcolina nos tecidos moles (geralmente através de injeção) e vem sendo utilizada de forma eficaz para diminuir a transpiração e inibir o espasmo muscular. No entanto, de acordo com a presente invenção, a toxina botulínica é administrada topicamente para diminuir a vasodilatação na microvasculatura cutânea, para assim reduzir a hiper-reatividade vascular na pele. A invenção diminui ou elimina o rubor, descarga crônica ou episódica ou vermelhidão como condições solitárias, e/ou retardos ou impede a progressão da doença de rosácea, por exemplo, rubor, pápulas e rinofima eventual.

[0015] A vasoconstrição pode ser mediada por inibição da liberação do peptideo intestinal vasoativo (VIP), peptideo relacionado ao gene da calcitonina (CGRP) ou outros peptideos contidos nas vesiculas pré-sinápticas. Os neuropeptideos vasodilatadores estão envolvidos no tônus vascular da circulação periférica melhorando a formação de óxido nitrico na microvasculatura da derme humana. Sem vinculação a qualguer teoria, a neurotoxina botulinica pode diminuir a vasodilatação na microvasculatura cutânea, bloqueando a liberação de neuropeptideos vasodilatadores, tais como CGRP e VIP que são coliberados com acetilcolina a partir dos terminais nervosos sudomotores. Portanto, a inibição da liberação dos vasodilatadores com neurotoxina botulinica pode levar à vasoconstrição ou evitar a vasodilatação e eliminando o rubor ou vermelhidão da pele e, assim, o desenvolvimento subsequente da doença progressiva da rosácea.

[0016] Os tratamentos existentes para a rosácea incluem antibióticos tópicos e orais, peróxido de benzoila, retinóides, bloqueadores beta, creme de cortisona, e tratamentos a laser ou luz de pulsos intensos. Todos esses tratamentos estão associados a uma ou mais desvantagens. Os antibióticos tópicos e orais apresentam risco de promover a resistência bacteriana a múltiplos medicamentos e reações alérgicas, que podem resultar em morte. O peróxido de benzoila, e os retinóides podem irritar a pele e os cremes de cortisona são limitados aos usos de curta duração e podem causar um surto de rebote quando interrompidos. Os bloqueadores beta podem produzir efeitos colaterais indesejados, tais como, disfunção sexual e fadiga. Os riscos associados aos tratamentos a laser e luz de pulsos intensos incluem cicatrizes, hematomas recuperação mais longa, sendo mais caros e doloridos.

[0017] As composições tópicas da neurotoxina botulinica e tratamentos associados, tais como os descritos no presente documento superam as desvantagens associadas aos tratamentos existentes para a rosácea. As composições podem ser aplicadas em uma grande área, não causam dor, proporcionam um periodo prolongado de alivio, e eliminam o risco de uso excessivo de antibióticos em uma condição crônica. Além disso, a formulação tópica supera algumas das dificuldades técnicas da utilização da neurotoxina botulinica injetável. Por exemplo, a administração da neurotoxina botulinica injetável depende do operador e pode ser injetada muito profundamente nos nervos faciais e os músculos, resultando em uma lesão funcional e assimetria facial. A injeção da neurotoxina botulinica em uma área extensa da superfície do rosto, pescoço e peito é uma tarefa extremamente desafiante, o que é necessário para tratar adequadamente as condições de hiper-reatividade da pele. As injeções não são contíguas e, portanto, dependem de difusão para a aplicação uniforme. Injeções de neurotoxina botulinica na pele de pacientes com hiper- reatividade vascular tendem a tornar a pele mais sensivel, vermelha e machucada, assim, irritando a condição da pele especifica a ser tratada. As composições da invenção oferecem uma forma tópica de diluição da toxina botulinica que é projetada para alvejar as camadas superficiais da pele, e que pode ser aplicada de forma uniforme ao longo de áreas extensas.

[0018] A invenção, portanto, oferece uma maneira segura, eficaz, confortável e/ou conveniente para o tratamento de hiper-reatividade vascular da pele, incluindo hiper-reatividade vascular crônica ou episódica, de modo a tratar ou amenizar a rosácea, e/ou para evitar a progressão da hiper-reatividade vascular crônica ou episódica para uma condição como a rosácea.

Condições caracterizadas por hiper-reatividadade vascular cutânea

[0019] O paciente a ser tratado apresenta uma doença de pele associada à hiper-reatividade vascular cutânea, tal como, sem limitação, rubor, vermelhidão e rosácea.

[0020] O rubor é um ataque episódico de vermelhidão da pele, juntamente com uma sensação de calor ou queimação no rosto, pescoço, e, menos frequentemente, no tronco superior e abdômen. É a natureza transitória dos ataques que distingue o rubor do eritema persistente de fotossensibilidade, reações agudas ao contato, ou elastose solar (Greaves (1998) Flushing e flushing syndromes, rosacea and perioral dermatitis. Em: Champion RH, e outros eds. Rook/Wilkinson/Ebling textbook of dermatology, 6a ed, Vol 3: 2099-2104).

[0021] A vermelhidão está relacionada ao rubor, porém normalmente é menos intensa e limitada à vermelhidão do rosto ou bochechas. O rubor repetido durante um periodo de tempo prolongado pode levar à telangiectasia e à rosácea da face (Greaves (1998) Flushing e flushing syndromes, rosacea and perioral dermatitis. Em: Champion RH, e outros eds. Rook/Wilkinson/Ebling textbook of dermatology, 6a ed, Vol 3: 2099-2104) . A vermelhidão inicial e rubor da rosácea podem levar aos estágios avançados ou subtipos de rosácea caracterizados por vermelhidão persistente, pápulas, cistos e eventual rinofima.

[0022] O rubor ou vermelhidão pode resultar de uma condição ou doença subjacente, incluindo, porém não limitado a fobia social (por exemplo, transtorno de ansiedade generalizada, transtorno do pânico), alcoolismo, menopausa e sindrome pré-menstrual, diabetes, doenças pulmonares ou doenças (por exemplo, enfisema, bronquite crônica), alergia a picadas de insetos, gravidez, mastocitose, sindrome de Soto, sindrome de Zollinger- Ellison, sindrome de Cushing, doença de Hodgkin, septicemia, febre amarela, derivados de niacina, acipimox, transtorno de estresse agudo, câncer adrenal, sindrome anticolinérgica, febre hemorrágica, sindrome de disreflexia autônoma, sindrome carcinóide, hiperadrenalismo, hiperemia, hiperglicemia, insuficiência ovariana hipergonadotrófica, tumor neuroendócrino gastroenteropancreático, hipermagnesemia, hipertireoidismo, carcinoma medular da tiróide, doença da válvula mitral, abstinência dos opióides, neuroblastoma, toxicidade por niacina, sindromes paraneoplásticas autoimunes, doenças da glândula pituitária, disreflexia autônoma da coluna vertebral, câncer do timo e câncer da tireoide.

[0023] Em determinadas concretizações, o paciente apresenta (por exemplo, foi diagnosticado com) rosácea, tal como uma ou mais dentre rosácea eritemato-telangiectática, rosácea papulopustular, rosácea fimatosa e/ou rosácea ocular. Nestas ou outras concretizações o paciente apresenta um ou mais sintomas da rosácea. Um ou mais sintomas de rosácea incluem eritema, rubor, vermelhidão, telangiectasias, pápulas, pústulas, rinofima, sensações de ardência, coceira. Um ou mais sintomas são melhorados ou amenizados de acordo com a invenção.

[0024] Em determinadas concretizações, o paciente apresenta rosácea, mas ainda não apresenta rinofima, que frequentemente ocorre com rosácea fimatosa ou em estágios avançados da rosácea. Rinofima é um tumor benigno de crescimento lento no nariz causado pela hipertrofia das glândulas sebáceas na ponta do nariz. De acordo com estas concretizações, as composições e os métodos da presente invenção podem impedir o desenvolvimento de rinofima.

Toxina Botulinica

[0025] Os métodos e composições da invenção envolvem neurotoxina botulinica formulada para liberação tópica como descrito no presente documento. As toxinas botulinicas ou neurotoxinas botulinicas são neurotoxinas produzidas pelas bactérias gram-positivas Clostridium botulinum e é uma das substâncias mais letais conhecidas pelo homem. As neurotoxinas são bem conhecidas por produzirem paralisia dos músculos, impedindo liberação de acetilcolina dos terminais nervosos pré-sinápticos na junção neuromuscular. As neurotoxinas também podem inibir a transmissão sináptica nas sinapses colinérgicas do sistema nervoso autônomo.

[0026] A toxina botulinica é classificada em oito neurotoxinas que são sorologicamente relacionadas, porém distintos. Destas, sete podem causar paralisia, ou seja, os sorotipos da neurotoxina botulinica A, B, C, D, E, F e G. Cada um desses sorotipos distingue-se pela neutralização com os anticorpos de específicos. Cada sorotipo pode ser isolado a partir de bactérias ou produzidos recombinantemente. 0 peso molecular da molécula de proteina toxina botulinica ativa para todos os sete sorotipos de toxina é cerca de 150 kDa, que inclui uma cadeia pesada de 100 kDa e uma cadeia leve de 50 kDa. Conforme liberadas pela bactéria, as toxinas botulinicas são complexos compreendendo a molécula de proteina da toxina botulinica de 150 kDa, juntamente com as proteínas não tóxicas associadas. O complexo do tipo A da toxina botulinica pode ser produzido por Clostridia como formas de 900 kDa, 500 kDa e 300 kDa. As toxinas botulinicas dos tipos B e C podem ser produzidas como um complexo de 700 kDa ou 500 kDa. A toxina botulinica do tipo D é produzida tanto como complexos de 300 kDa e 500 kDa, embora os tipos E e F da toxina botulinica sejam produzidos apenas como complexos de aproximadamente 300 kDa. Acredita-se que as proteínas não- tóxicas associadas à toxina botulinica de 150 kDa proporcionem estabilidade contra desnaturação e forneça proteção contra ácidos digestivos quando a toxina é ingerida. Embora as formas complexas das neurotoxinas botulinicas descritas acima possam ser usadas em conexão com as composições e métodos descritos no presente documento, em determinadas concretizações da invenção a toxina botulinica é purificada (por exemplo, não associada às proteínas acessórias) e apresenta um peso molecular de cerca de 150 kDa.

[0027] A toxina botulinica pode ser selecionada a partir dos sorotipos A, B, C, D, E, F e G da toxina botulinica. Em determinadas concretizações a toxina botulinica é sorotipo A da toxina botulinica, incluindo os tipos Al, A2 e/ou A3. As cepas que produzem o Tipo A exemplares incluem a Cepa Hall (Tipo Al), Kyoto F (Tipo A2) e NCTC 2916 (tipo Al). Vide Jacobson e outros, Analysis of Neurotoxin Cluster Genes in Clostridium bolutinum Strains Producing Botulinum Neurotoxin Serotype A Subtypes. Appl . Environ. Microbiol. 74 (9) :2778-2786 (2008) . A toxina botulinica adequada para uso nos métodos e composições da invenção pode ser produzida pelas bactérias Clostridia e purificada, ou, alternativamente, produzida por técnicas recombinantes ou sintéticas. Por exemplo, a toxina pode ser um peptideo recombinante, uma proteina de fusão, ou uma neurotoxina hibrida, conforme preparada a partir de subunidades ou dominios de diferentes sorotipos da toxina botulinica (vide, por exemplo, Patente US número 6.444.209, que é aqui incorporada ao presente documento por referência).

[0028] Todos os sete sorotipos de toxina botulinica (A, B, C, D, E, F e G) estão disponíveis comercialmente da Sigma-Aldrich e de Metabiologics, Inc. (Madison, Wisconsin), bem como de outras fontes. Pelo menos dois tipos de toxina botulinica, os tipos A e B, estão disponíveis comercialmente em formulações para tratamento de determinadas condições humanas. O tipo A, por exemplo, está contido no BOTOX® (Allergan) e DYSPORT® (Ipsen), e o tipo B está contido em MYOBLOC® (Elan).

[0029] A toxina botulinica pode, alternativamente, ser um derivado da toxina botulinica, por exemplo, um composto que tem atividade da toxina botulinica, porém contém uma ou mais alterações quimicas ou funcionais em relação às toxinas botulinicas nativas recombinantes ou ocorrendo naturalmente. Por exemplo, a toxina botulinica pode ser uma neurotoxina modificada, por exemplo, uma neurotoxina que apresenta pelo menos um de seus aminoácidos deletado, modificado ou substituído, em comparação com uma neurotoxina nativa, ou produzida de forma recombinante. Por exemplo, a toxina botulinica pode ser uma toxina do tipo A (incluindo tipo A2 ou A3) ou toxina do tipo B apresentando 1 a cerca de 20 ou de 1 a cerca de 10 ou de 1 a cerca de 5 substituições de aminoácidos, deleções e/ou inserções (coletivamente). A toxina botulinica pode fazer parte da molécula integral que possui a atividade da toxina botulinica necessária, e em tal caso pode ser usada propriamente ou como parte de uma molécula de combinação ou conjugada, por exemplo, uma proteina de fusão.

[0030] Em algumas concretizações, a toxina botulinica é uma combinação de sorotipos de toxina botulinica. Por exemplo, a invenção pode empregar uma combinação do sorotipo da toxina botulinica A e B.

Moléculas Transportadoras

[0031] Em conformidade com a presente invenção, a toxina botulinica é formulada com um veiculo que transporta de forma eficaz a toxina botulinica para a microvasculatura cutânea. A invenção permite que quantidades eficazes de toxina botulinica sejam aplicadas de forma controlável às regiões afetadas da pele (que podem ser áreas extensas), e liberadas de forma controlada para a microvasculatura subjacente. De acordo com a invenção, o veiculo é um veiculo peptidico ou um veiculo polimérico não peptidico, e de modo geral carregado positivamente.

[0032] O veiculo pode incluir, pelo menos, um dominio de transdução de proteina ou dominio de transporte, tal como uma sequência de aminoácido HIV-TAT ou HIV-TAT inversa, conforme descrito no WO 2008/082885, que é incorporado ao presente documento como referência. Dominios de transporte exemplares apresentam uma sequência de aminoácidos que corresponde à sequência inversa da região básica de HIV-TAT (aminoácidos 49-57 da proteina de HIV-TAT ocorrendo naturalmente). A sequência inversa da região básica de HIV-TAT (RRRQRRKKR (SEQ ID NO: 1)) é a seguir denominada como HIV-TAT inversa".

[0033] Veiculos exemplares assim incluem os peptideos descritos no WO 2009/015385, que é incorporado ao presente documento como referência em sua totalidade. Por exemplo, o veiculo pode ser um peptideo catiônico que compreende uma sequência de HIV-TAT ou sequência inversa de HIV-TAT no término N ou C ou ambos o término N e término C. Por exemplo, o peptideo veiculo pode apresentar uma sequência de HIV-TAT, tal como, Arg-Lys-Lys-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Arg (SEQ ID NO: 2), ou uma sequência inversa de HIV TAT, tal como Arg-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Lys-Lys-Arg (SEQ ID NO: 1), no término N ou C ou ambos o término N e o término C.

[0034] Em uma concretização, o veiculo compreende uma porção de término N que é uma sequência de HIV-TAT ou sequência inversa de HIV-TAT, uma porção de término C que é uma sequência de HIV-TAT ou sequência inversa de HIV-TAT, e um ou mais resíduos catiônicos (por exemplo, Lys ou Arg) entre a porção de término N e a porção de término C. Por exemplo, o peptideo pode apresentar de 5 a 20 resíduos catiônicos, tais como, Lys entre a porção de término N e a porção de término C, tal como, cerca de 12, cerca de 15 ou cerca de 17 resíduos catiônicos. Veículos exemplares incluem assim Arg-Lys-Lys-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Arg-Gly- (Lys)n-Gly-Arg-Lys-Lys-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Arg (SEQ ID NO: 3) ou Arg-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Lys-Lys-Arg-Gly-(Lys) n-Gly- Arg-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Lys-Lys- Arg (SEQ ID NO: 4), onde n representa cerca de 5 a cerca de 20, tal como, cerca de 10 a cerca de 20. Em uma concretização, a porção de término N do peptideo é uma sequência de HIV-TAT e a porção de término C do peptideo é uma sequência de HIV-TAT. Alternativa ou adicionalmente, o veículo pode incluir peptídeos onde a porção de término N é uma sequência inversa de HIV-TAT da porção de término C é uma sequência inversa de HIV-TAT. Por exemplo, o peptideo pode apresentar a seguinte sequência de aminoácidos: Arg-Lys-Lys-Arg-Arg- Gln-Arg-Arg-Arg-Gly-(Lys)15-Gly-Arg-Lys-Lys-Arg-Arg-Gln- Arg-Arg-Arg (SEQ ID NO: 5).

[0035] De modo geral, o veículo é caracterizado como apresentando um conteúdo particularmente elevado de resíduos de Arg e Lys. Por exemplo, o veículo pode conter, pelo menos, cerca de 50%, coletivamente, de resíduos de aminoácidos Arg e Lys, porém, pode conter, pelo menos, cerca de 75%, ou pelo menos cerca de 80%, de resíduos de Arg e Lys. Nestas e em outras concretizações, tais derivados podem apresentar a sequência de aminoácidos das SEQ ID NOs: 3, 4 ou 5 com 1 a 5 substituições de aminoácidos, inserções ou exclusões (coletivamente)r incluindo 1, 2, 3 ou 4 substituições de aminoácido, inserções ou exclusões com relação às SEQ ID NOs: 3, 4 ou 5. Em determinadas concretizações, tais substituições, inserções ou exclusões, estão localizadas na sequência de HIV-TAT ou sequência inversa de HIV-TAT.

[0036] O veiculo pode ser um peptideo que apresenta um comprimento de cerca de 15 aminoácidos a cerca de 100 aminoácidos. Em determinadas concretizações, o veiculo apresenta cerca de 25 a cerca de 50, ou a partir de cerca de 25 a cerca de 40 aminoácidos de comprimento. Em uma concretização exemplar da invenção, o peptideo veiculo apresenta cerca de 35 aminoácidos de comprimento. O comprimento do veiculo pode ser projetado para transportar a neurotoxina botulinica para diferentes profundidades de penetração na pele, variando o comprimento do veiculo. Por exemplo, veiculos poliméricos mais longos penetrarão em camadas mais profundas da pele.

[0037] Outros veiculos adequados para uso em conexão com a invenção incluem um veiculo polimérico carregado positivamente para liberação da toxina botulinica através da barreira da pele a uma profundidade desejada da derme subjacente. Tais veiculos incluem os veiculos poliméricos revelados na Publicação de Patente US número 2005/084410 e WO 2004/0220100, ambos sendo incorporados ao presente documento em sua totalidade como referência. Nessas concretizações, o veiculo polimérico carregado positivamente compreende grupos de ramificação carregados positivamente anexados a uma estrutura polimérica. Conforme empregado no presente documento "carregado positivamente" significa que o veiculo possui uma carga positiva sob condições fisiologicamente compatíveis".

[0038] Geralmente, o veiculo polimérico carregado positivamente é uma cadeia linear de átomos, tanto com grupos na cadeia carregando uma carga positiva em pH fisiológico, quanto com grupos carregando uma carga positiva anexada às cadeias laterais que se estendem da estrutura. A estrutura carregada positiva e propriamente não precisa apresentar uma atividade biológica enzimática ou terapêutica definida. A estrutura linear é uma estrutura de hidrocarboneto que, em algumas concretizações, é interrompida por heteroátomos selecionados de nitrogênio, oxigênio, enxofre, silicio e fósforo. A maioria dos átomos da cadeia da estrutura se constitui em carbono. Além disso, a estrutura pode ser um polimero de unidades de repetição (por exemplo, aminoácidos, poli (etilenóxi), poli (propilenoamina), polialquilenoimina e semelhantes), porém pode ser alternativamente um heteropolimero. Em algumas concretizações, a estrutura polimérica é um polipeptideo carregado positivamente (por exemplo, polilisina). Em outras concretizações, a estrutura carregada positivamente é uma polipropilenoamina, onde um número de átomos de nitrogênio de amina está presente como grupos de amónio (tetra-substituido) carregando uma carga positiva.

[0039] A estrutura de carga positiva pode ser um polimero não peptidico, que pode ser um hetero ou homopolimero, tal como, uma polialquilenoimina, por exemplo, uma polietilenoimina ou polipropilenoimina, com um peso molecular de cerca de 10.000 a cerca de 2.500.000 ou de cerca de 100.000 a cerca de 1.800.000, ou a partir de cerca de 500.000 a cerca de 1.400.000. O comprimento do veículo polimérico pode ser projetado para transporte da neurotoxina botulinica para diferentes profundidades de penetração na pele, variando o comprimento do veículo. Por exemplo, veículos poliméricos mais longos penetrarão em camadas mais profundas da pele.

[0040] Em determinadas concretizações, a estrutura apresenta anexadas várias frações de cadeia lateral que incluem grupos carregados positivamente (por exemplo, grupos amónio, grupos piridínio, grupos fosfônio, grupos sulfônio, grupos guanidino ou grupos amidino). As frações de cadeia lateral podem ser espaçadas ao longo da estrutura de uma forma consistente ou variável. Além disso, o comprimento das cadeias laterais pode ser semelhante ou diferente. Por exemplo, em algumas concretizações, as cadeias laterais podem ser cadeias de hidrocarbonetos lineares ou ramificadas com 1 a 20 átomos de carbono e terminando na extremidade distai (longe da estrutura) em um dos grupos mencionados acima carregados positivamente.

[0041] A associação entre o veículo e o agente biologicamente ativo (por exemplo, a toxina botulinica) é geralmente por interação não-covalente, tal como por interações iônicas, pontes de hidrogênio, forças van der Waals, ou suas combinações.

[0042] Em algumas concretizações, a estrutura carregada positivamente é um polipeptídeo apresentando grupos de cadeia lateral carregados positivamente (por exemplo, lisina, arginina, ornitina, homoarginina e assim por diante). De preferência, o polipeptídeo apresenta um peso molecular de cerca de 10.000 a cerca de 1.500.000, ou a partir de cerca de 25.000 para cerca de 1.200.000, ou a partir de cerca de 100.000 para cerca de 1.000.000. Um versado na técnica apreciará que, quando os aminoácidos são usados no veiculo, as cadeias laterais podem apresentar tanto a forma D- quanto L- (configuração R ou S) no centro da anexação. Alternativamente, a estrutura pode ser um análogo a um polipeptideo, tal como um peptóide. Vide, por exemplo, Kessler, Angew. Chem. Int. Ed. Engl., Vol. 32:543 (1993); Zuckermann e outros, Chemtracts-Macromol. Chem.,Vol. 4:80 (1992) e Simon e outros, Proc. Nat ' 1. Acad. Sei, USA, vol. 89:9367 (1992). Resumidamente, um peptóide é uma poliglicina onde a cadeia lateral é anexada aos átomos de nitrogênio da estrutura ao invés dos átomos de a-carbono. Uma parte das cadeias laterais pode terminar em um grupo carregado positivamente para fornecer um componente de estrutura carregado positivamente. A sintese dos Peptóides é descrita, por exemplo, na Patente US número 5.877.278, que é incorporada ao presente documento como referência em sua totalidade. Conforme empregado no presente documento, o termo referente as estruturas carregadas positivamente, que apresentam uma construção de estrutura peptóide, são consideradas "não-peptideo", uma vez que não são compostas de aminoácidos possuindo cadeias laterais ocorrendo naturalmente nos locais de a-carbono

[0043] Várias outras estruturas podem ser usadas empregando, por exemplo, miméticos esféricos ou eletrônicos de polipeptideos, nos quais as ligações amida do peptideo são substituídas por substitutos, tais como ligações éster, tioamidas (-CSNH-), tioamida invertida (-NHCS-) aminometileno, (-NHCH2-) ou os grupos metilenoamino invertidos (-CH2NH) , grupos ceto metileno (-COCH2-) , fosfinato (-PO2RCH2-), fosfonamidato e éster fosfonamidato (-PO2RNH-), peptideo inverso (-NHCO-), trans-alceno (- CR=CH-), fluoralceno (-CF=CH-), dimetilmercúrio, (-CH2CH2- ), tioéter (-CH2S-) , hidroxietileno (-CH(OH)CH2-) , metilenóxi (-CH2O-) , tetrazol (CN4) , sulfonamido (-SO2NH-) , metilenossulfonamido (-CHRSO2NH) , sulfonamida invertida (- NHSO2-) , e estruturas com malonato e/ou subunidades de gem- diamino-alquila, por exemplo, como revisto por Fletcher e outros ((1998) Chem. Rev. , vol. 98:763) e detalhado por referências citadas no mesmo. Muitas das substituições precedentes resultam em estruturas poliméricas aproximadamente isoestéricas com relação às estruturas formadas dos ot-aminoácidos.

[0044] Em cada uma das estruturas fornecidas acima, grupos de cadeia lateral podem ser anexados, os quais transportam um grupo carregado positivamente. Por exemplo, as estruturas ligadas à sulfonamida (-SO2NH- e -NHSO2) podem apresentar grupos de cadeia lateral ligados aos átomos de nitrogênio. Da mesma forma, a ligação de hidroxietileno (-CH(OH)CH2-) pode suportar um grupo de cadeia lateral anexado ao substituinte hidróxi. Um versado na técnica pode facilmente adaptar as outras quimicas de ligação para fornecer grupos de carga positiva grupos usando métodos sintéticos padrão.

[0045] Em uma concretização, o veiculo polimérico de carga positiva é um polipeptideo apresentando grupos de ramificação (também chamados de grupos de eficiência). Como usado no presente documento, um grupo de eficiência ou grupo de ramificação é qualquer agente que apresenta o efeito de promover a translocação do veículo carregado positivamente através de uma membrana celular ou de tecido. Exemplos não limitantes de grupos de ramificação ou de eficiência incluem HIV-TAT ou HIV-TAT inversa (conforme descrito) ou seus fragmentos, o domínio de transdução de proteína de Antennapedia, ou um seu fragmento, ou (gly) ni] - (arg) n2, onde m é um inteiro de cerca de 0 a cerca de 20, ou 0 a cerca de 8, ou 2 a cerca de 5. N2 é independentemente um número inteiro ímpar de cerca de 5 a cerca de 25, ou cerca de 7 a cerca de 17, ou cerca de 7 a cerca de 13.

[0046] Outras concretizações empregam fragmento de HIV- TAT ou HIV-TAT inversa apresentando a fórmula (Gly)p- RGRDDRRQRRR-(gly) q (SEQ ID NO: 6), (gly) P-YGRKKRRQRRR (gly)q (SEQ ID NO: 7), ou (gly) p-RKKRRQRRR (gly) q (SEQ ID: 8) onde p e q são independentemente um número inteiro de 0 a 20 e o fragmento está anexado à estrutura, quer através do término C ou o término N do fragmento. Os fragmentos HIV-TAT incluem aqueles em que p e q são independentemente números inteiros de 0 a cerca de 8, tais como de 2 a cerca de 5.

[0047] A cadeia lateral carregada positivamente ou grupo de ramificação pode ser um domínio de transdução da proteína Antennapedia (Antp) (PTD) ou seu fragmento que retém atividade. Estes são conhecidos na técnica, por exemplo, do Console e outros, J. Biol. Chem., Vol. 278:35109 (2003) .

[0048] O veículo polimérico carregado positivamente pode incluir grupos de ramificação carregados positivamente em uma quantidade de pelo menos cerca de 0,05%, como uma percentagem do peso do veículo total, tal como de cerca de 0,05 a cerca de 45%, ou cerca de 0,1 a cerca de 30%. Para grupos de ramificação carregados positivamente a fórmula (giy) ni— (arg)n2, a guantidade pode ser de cerca de 0,1 a cerca de 25%.

[0049] Em determinadas concretizações, a porção da estrutura do veiculo é uma polilisina e grupos de ramificação carregados positivamente (conforme descrito acima) que são anexados aos grupos amino de cadeia lateral de lisina. A polilisina pode apresentar um peso molecular de aproximadamente 10.000 a cerca de 1.500.000, tal como de cerca de 25.000 a cerca de 1.200.000, ou cerca de 100.000 a cerca de 1.000.000. A mesma pode ser qualquer uma das polilisinas disponíveis comercialmente (Sigma Chemical Company, St. Louis, Missouri, USA), tal como, por exemplo, polilisina apresentando MW> 70.000, polilisina apresentando MW de 70.000 a 150.000, polilisina apresentando MW de 150.000 a 300.000 e polilisina apresentando MW> 300.000. A seleção de uma polilisina apropriada dependerá dos componentes remanescentes da composição e será suficiente para fornecer uma carga liquida, positiva total para a composição e fornecer um comprimento que é de preferência 1-4 vezes o comprimento combinado dos componentes carregados negativamente.

[0050] Em outras concretizações, o veiculo é uma polilisina relativamente curta ou estrutura de polietilenoimina (PEI) (que pode ser linear ou ramificada) e que apresenta grupos de ramificação carregados positivamente. Tais veiculos podem ser úteis para minimizar a agregação descontrolada das estruturas e toxina botulinica em uma composição terapêutica, o que faz com que a eficiência do transporte diminua drasticamente. Quando o veiculo é uma polilisina linear relativamente curta ou estrutura de PEI, a estrutura terá um peso molecular inferior a cerca de 75.000, ou inferior a cerca de 30.000, ou inferior a cerca de 25.000. Quando o veiculo for uma polilisina ramificada relativamente curta ou estrutura de PEI, contudo, a estrutura terá um peso molecular inferior a cerca de 60.000 ou inferior a cerca de 55.000, ou inferior a cerca de 50.000. Se, no entanto, os agentes de divisão conforme descritos no presente documento forem incluidos na composição, o peso molecular da polilisina ramificada e estruturas de PEI pode ser de até cerca de 75.000, enquanto o peso molecular da polilisina linear e estruturas de PEI pode ser de até cerca de 150.000.

Composições e Formulações

[0051] As composições utilizadas nos métodos da invenção compreendem, de preferência, uma quantidade eficaz de uma toxina botulinica. Uma "quantidade eficaz" é uma quantidade suficiente para afetar um resultado benéfico ou clinico desejado, por exemplo, uma quantidade suficiente para reduzir a hiper-reatividade vascular da pele. Uma quantidade eficaz em cada concretização terá como base o sorotipo da toxina botulinica, a forma da toxina utilizada (por exemplo, cadeias di-, complexas ou purificadas) e em algumas concretizações, fatores individuais do paciente incluindo idade, condição a ser tratada (por exemplo, rubor, vermelhidão, subtipo especifico de rosácea), extensão da área da pele a ser tratada e gravidade dos sintomas.

[0052] Em algumas concretizações, uma quantidade eficaz é de cerca de 0,1 ng para cerca de 2,0 ng da neurotoxina botulínica purificada (por exemplo, sorotipo A) . A quantidade eficaz pode ser de cerca de 0,2 ng a cerca de 1,5 ng, ou a partir de cerca de 0,5 ng a cerca de 1,0 ng de neurotoxina botulinica purificada (por exemplo, sorotipo A ou completo Tipo A da neurotoxina botulinica). A quantidade eficaz pode ser combinada em cerca de 0,5 mL a cerca de 10 mL de creme ou gel, como descrito no presente documento, dependendo da extensão da área que necessita de tratamento.

[0053] As composições para uso nos métodos da invenção são formuladas para aplicação na pele ou epitélio de indivíduos ou pacientes, ou seja, seres humanos ou outros mamíferos que necessitem de tratamento especifico. Em geral, as composições são preparadas pela mistura de toxina botulinica com o veiculo (descrito acima) e, opcionalmente, com um ou mais diluentes ou excipientes adicionais farmaceuticamente aceitáveis. A razão do veiculo para a toxina botulinica pode estar na faixa de cerca de 10:1 a cerca de 1:10 em peso (por exemplo, cerca de 1:1) . A razão pode ser de cerca de 6:1 a cerca de 1,5:1, respectivamente. Em tais concretizações, o veiculo pode ser o peptideo da SEQ ID NO: 3, 4 ou 5.

[0054] As composições podem conter outros ingredientes tipicos nas composições farmacêuticas tópicas, ou cosméticas incluindo um veiculo ou meio dermatologicamente ou farmaceuticamente aceitável (isto é, um veiculo, transportador ou meio que é compatível com os tecidos ao qual será aplicado). O termo "dermatológica ou farmaceuticamente aceitável", como empregado no presente documento, significa que as composições ou componentes assim descritos são adequados para uso em contacto com esses tecidos ou para uso em pacientes em geral, sem toxicidade indevida, incompatibilidade, instabilidade de resposta alérgica, e assim por diante. Conforme o caso, as composições adequadas para uso nos métodos da invenção podem compreender qualquer ingrediente convencionalmente utilizado nos dominios em análise, e particularmente em cosméticos e dermatologia. As composições também podem incluir uma quantidade de um ânion pequeno, de preferência um ânion polivalente, por exemplo, fosfato, aspartato ou citrato.

[0055] Em termos da sua forma, as composições tópicas de toxina botulinica podem incluir soluções, emulsões (incluindo microemulsões), suspensões, cremes, loções, géis, pós, pomadas, unguentos ou outras composições tipicas sólidas ou liquidas utilizadas para aplicação na pele e outros tecidos onde as composições podem ser empregadas. Tais composições podem conter, além da toxina botulinica e veiculo, outros ingredientes normalmente utilizados em tais produtos, tais como, antimicrobianos, umectantes e agentes hidratantes, agentes de penetração, conservantes, emulsionantes, óleos naturais ou sintéticos, solventes, agentes tensoativos, detergentes, emolientes, antioxidantes, fragrâncias, cargas, espessantes, ceras, absorventes de odor, pigmentos, corantes, pós, e opcionalmente incluem anestésicos, aditivos antiirritação, extratos botânicos, agentes condicionadores, agentes escurecedores ou iluminadores, gliter, umectantes, mica, minerais, polifenóis, silicones ou seus derivados, bloqueadores solares, vitaminas e agentes fitomedicinais.

[0056] Em determinadas concretizações, as composições incluem agentes de gelificação e/ou agentes modificadores de viscosidade. Estes agentes são geralmente adicionados para aumentar a viscosidade da composição, de modo a tornar a aplicação da composição mais fácil e precisa. Além disso, esses agentes ajudam a impedir a solução aquosa da toxina botulinica/veiculo seque, o que tende a causar uma diminuição na atividade da toxina botulinica. Agentes exemplares são aqueles que são descarregados e não interferem com a atividade da toxina botulinica ou a eficiência dos complexos de toxina-veiculo na travessia da pele. Os agentes gelificantes podem ser determinados agentes gelificantes à base de celulose, tais como, hidroxipropilcelulose (HPC), por exemplo. Em algumas concretizações, o complexo de toxina botulinica/veiculo é formulado em uma composição apresentando 2-4% de HPC. Alternativamente, a viscosidade de uma solução contendo um complexo de toxina botulinica/veiculo pode ser alterada pela adição de polietileno glicol (PEG). Em outras concretizações, a solução de toxina botulinica/veiculo é combinada com os agentes viscosos pré-misturados, tais como, o umectante Cetaphil®.

[0057] Em determinadas concretizações, a composição ainda compreende um diluente à base de poloxâmero. O diluente poloxâmero é um agente tensoativo copolimérico passivel de diluição de proteina liofilizada, e depois de gelificação a uma viscosidade suficiente para ser aplicado e permanecer em uma área cutânea definida. O poloxâmero pode estar presente em cerca de 10% a 20%, por exemplo, em solução salina a 0,9%. Em cerca de 15%, o poloxâmero é termicamente sensível. Ou seja, a composição permanecerá líquida em temperaturas de 20°C ou menos, com um produto gel se formando em temperaturas na faixa de 20-35°C para aplicação local.

[0058] As composições de toxina botulínica podem incluir, opcionalmente, agentes de divisão. Como usado no presente documento, um "agente de divisão" é qualquer substância ou aditivo que apresente a propriedade de prevenir ou minimizar a agregação indesejada ou descontrolada da toxina botulínica com os veículos poliméricos carregados positivamente. Os agentes de divisão são especificamente úteis, por exemplo, exemplo, quando uma solução de toxina botulínica concentrada é empregada devido às restrições de volume. Em tais concretizações, o agente de divisão mantém a toxina botulínica dispersa, evitando assim a agregação da toxina que ocorreria sem o agente de divisão. De modo geral, um agente de divisão é (1) não- irritante, (2) não destrói a toxina botulínica (3) , não confere qualquer aumento de permeabilidade, (4) proporciona tamanhos de partículas confiáveis e estáveis, (5) não é descarregada e (6) não interfere com complexos da toxina e veículo polimérico.

[0059] Um exemplo de um agente de divisão adequado é o etanol (EtOH). Por exemplo, o etanol pode estar presente em menos de 20% da composição, tal como menos de cerca de 5% da composição. A título de exemplo, se as restrições de volume requererem reconstituição de 100 U de toxina botulínica em 0,5 mL de solução, ao invés de 2,5 mL, pode ser tipicamente observado que a botulínica exibirá agregação indesejável, e, portanto, redução das atividades. No entanto, pela adição de EtOH a 1% como um agente de dispersão, plena atividade é mantida mesmo após 24 horas nesta concentração. Como outro exemplo, em Botox® a 1,0 mL, a reconstituição de NaCl a 0,9% apresenta plena atividade, embora a reconstituição em 0,5 mL em EtOH em 1% e 5% mais NaCl a 0,9% produza soluções com plena atividade.

[0060] Em determinadas concretizações da invenção, pontes oligo ou poliânion são adicionadas às composições de toxina botulinica para melhorar a complexação da toxina com um veiculo carregado positivamente. Tais pontes são especificamente úteis quando os complexos da toxina botulinica são usados nas composições. Algumas das proteinas complexas são carregadas positivamente, e outras são carregadas negativamente. Uma vez que a distribuição exata dos componentes da toxina varia de acordo com a fonte da toxina, pode ser que a toxina botulinica de determinadas fontes apresente uma menor propensão à complexação com os veiculos poliméricos carregados positivamente descritos no presente documento. No entanto, adicionando-se uma ponte oligo ou poliânion aos complexos da toxina botulinica, a eficiência e eficácia da administração tópica são aumentadas dramaticamente. Exemplos adequados de tais pontes oligo-/poliânion incluem fosfato de sódio (5%), PBS ou poli-L-aspartato a 5% (por exemplo, com um MW de 3.000).

[0061] Composições de acordo com esta invenção podem estar na forma de composições de liberação controlada ou sustentada, onde a toxina botulinica e o veiculo são encapsulados ou de outra forma contidos dentro de um material de tal forma que eles são liberados na pele de uma maneira controlada ao longo do tempo. A toxina botulinica e o veículo podem ser contidos dentro de matrizes, lipossomas, vesículas, microcápsulas, microesferas e similares, ou dentro de um material particulado sólido, todos os quais sendo selecionados e/ou construídos para fornecer liberação da toxina botulinica com o tempo. A toxina botulinica e o veículo podem ser encapsulados em conjunto (por exemplo, na mesma cápsula) ou separadamente (em cápsulas separadas).

Aplicação da composição tópica

[0062] As composições são administradas de acordo com os métodos da invenção por ou sob a direção de um médico ou outro profissional de saúde. As composições podem ser administradas em um tratamento único ou em uma série de tratamentos periódicos ao longo do tempo. Espera-se que o efeito do tratamento dure cerca de 3, 4, 5 ou 6 meses. Assim, a composição tópica pode ser administrada uma vez, ou pode ser administrada repetidamente, ou rotineiramente. A frequência do tratamento pode variar, porém pode ser, por exemplo, uma vez por mês, duas a dez vezes por ano, tais como, duas a cinco vezes por ano. Uma vez que o tratamento não é irritante e não agrava a condição subjacente, é possível o tratamento a longo prazo por 1, 2, 3 ou 4 anos ou mais, se necessário.

[0063] Para a liberação tópica de toxina botulinica de acordo com os métodos da invenção descrita no presente documento, uma composição como descrita acima é aplicada topicamente na pele em um local ou locais aonde o efeito seja desejado (por exemplo, áreas afetadas da pele). Nas concretizações onde uma toxina botulinica aquosa/solução de veículo é aplicada diretamente sobre a pele, é preferível cobrir a área tratada (por exemplo, com umectante Cetaphil®) ou tampar a área tratada com uma barreira (por exemplo, Telia), a fim de impedir que a solução seque, o que levaria a uma diminuição na atividade da toxina. Devido à sua natureza, mais preferivelmente, a quantidade de toxina botulinica aplicada deve ser empregada com cuidado, a uma taxa de aplicação e frequência que produzam o resultado desejado, sem proporcionar qualquer resultado adverso ou indesejado. Consequentemente, por exemplo, composições tópicas da invenção devem ser aplicadas a uma taxa de cerca 1U a cerca de 20.000U, de preferência de cerca de 1U a cerca de 10.000U de toxina botulinica por cm2 de superfície da pele. Doses mais elevadas dentro destes limites podem preferivelmente ser empregadas em conjunto com os materiais de liberação controlada (por exemplo, emplastros e outros), por exemplo, ou que permitam um menor tempo de permanência sobre a pele antes da remoção.

[0064] Em algumas concretizações, o método para o tratamento de um paciente apresentando uma doença de pele caracterizada por hiper-reatividade vascular inclui ainda a preparação da superfície da pele antes da aplicação da composição tópica da toxina botulinica. Em determinadas concretizações, a preparação da superfície da pele antes da aplicação da composição de toxina botulinica/veiculo promove a eficácia da solução. Por exemplo, a introdução de agentes tensoativos na superfície da pele com a finalidade de retirar a gordura da superfície da pele antes da aplicação pode ser contraproducente, porque os agentes tensoativos parecem destruir a atividade da toxina botulinica. Isso ocorre, mesmo se a pele for posteriormente lavada com água várias vezes antes da aplicação da solução da toxina botulinica/veiculo. Os agentes tensoativos mesmo extremamente delicados, tais como, aqueles encontrados em lenços umedecidos parecem causar esse fenômeno. Consequentemente, em determinadas concretizações, a pele é pré-limpa apenas com água. A lavagem apenas com água parece aperfeiçoar, moderadamente, o transporte transdérmico da toxina botulinica.

Kits e Dispositivos de Liberação

[0065] A presente invenção proporciona dispositivos transdérmicos para o tratamento de um paciente apresentando uma doença de pele caracterizada por hiper-reatividade vascular. Tais dispositivos contêm toxina botulinica e um veiculo como descrito no presente documento. Esses dispositivos podem ser tão simples em sua construção como um emplastro para pele ou podem ser dispositivos mais complicados que incluem meios para distribuição e monitoramento da distribuição da composição e, opcionalmente, meios para monitoramento da condição do individuo (por exemplo, monitoramento da reação do individuo às substâncias que estão sendo dispensadas). Em uma concretização, a presente invenção fornece um emplastro para pele compreendendo uma quantidade eficaz de uma toxina botulinica e um veiculo, tal como descrito.

[0066] Os materiais para a construção de tais dispositivos de administração podem ser aqueles que não levam a uma perda de atividade da solução de toxina botulinica/veiculo, seja através da degradação ou adsorção indesejada da toxina botulinica em uma superfície do dispositivo. Tal comportamento indesejado foi observado, por exemplo, quando a toxina botulinica/veiculo em uma solução aquosa contata as superficies de polipropileno, porém não quando a solução da toxina botulinica/veiculo contata as superficies de cloreto de polivinila (PVC).

[0067] De modo geral, as composições podem ser pré- formuladas e/ou pré-instaladas em um dispositivo ou podem ser preparadas posteriormente, por exemplo, usando um kit com os dois ingredientes (toxina botulinica e veiculo) separadamente, porém fornecendo um mecanismo que combine os mesmos em ou antes do momento da aplicação. "Em conjunto com" significa que os dois componentes (toxina botulinica e veiculo) são administrados em um procedimento de combinação, que pode envolver tanto a combinação dos mesmos em uma composição, que posteriormente será administrada ao individuo quanto a administração dos mesmos separadamente, porém de forma que eles atuem em conjunto para prover a liberação necessária de uma quantidade eficaz da toxina botulinica.

[0068] Por exemplo, uma composição contendo o veiculo pode ser primeiramente aplicada à pele do paciente seguido por aplicação à pele de um emplastro ou outro dispositivo que contenha a toxina botulinica. A toxina botulinica pode ser incorporada na forma seca em um emplastro para pele ou outro dispositivo de distribuição, embora o veiculo polimérico carregado positivamente possa ser aplicado à superfície da pele em creme ou loção antes da aplicação do emplastro, de modo que os dois atuem em conjunto, resultando na liberação transdérmica desejada. Assim, as duas substâncias (veiculo e toxina botulinica) agem em combinação ou podem interagir para formar uma composição ou combinação in situ.

[0069] Assim, a presente invenção também fornece um kit para o tratamento de uma doença de pele caracterizada por hiper-reatividade vascular. O kit compreende uma quantidade eficaz de uma toxina botulinica, um veiculo e um diluente, tal como, um diluente poloxâmero conforme descrito no presente documento. Em uma concretização, a condição da pele é rosácea. Em algumas concretizações, a toxina botulinica é embalada separadamente dos outros componentes do kit. Por exemplo, a toxina botulinica pode ser liofilizada e armazenada em um frasco separado do veiculo e/ou diluente. Em outra concretização, a toxina botulinica é embalada dentro de um dispositivo, por exemplo, um emplastro para pele.

[0070] Ainda em outra concretização, o veiculo polimérico carregado positivamente é pré-formulado em um liquido, gel, creme ou semelhante para a aplicação na pele ou epitélio de um paciente. Em determinadas concretizações, o kit pode ainda compreender utensílios e/ou um aplicador para misturar a toxina botulinica com o veiculo polimérico carregado positivamente e diluente e aplicação da mistura tópica a uma área afetada da pele do paciente.

[0071] Em outras concretizações, o kit pode compreender componentes para manutenção da área tratada entre ou após tratamentos com neurotoxina. Por exemplo, o kit pode compreender um limpador(s) brando(s) para a pele que remove(m) o excesso da composição de toxina botulinica seguindo-se o tratamento, uma loção para reduzir a vermelhidão, um ou mais tratamentos tópicos adicionais para a rosácea, e/ou protetores solares apresentando EPS de 15 ou mais alto.

[0072] Por exemplo, entre as seções de tratamento no consultório, os pacientes podem receber o sistema de pós- tratamento com neurotoxina tópica ou kit para manutenção da área tratada. O kit compreende um limpador brando para pele (o mesmo podendo ser aplicado pelo paciente de manhã e/ou à noite), uma loção tópica para redução da vermelhidão (por exemplo, Sistema Antivermelhidão Eucerin® ou outras loções contendo alcaçuz) que podem ser aplicados após a limpeza de pele suave e um protetor solar de amplo espectro de FPS 15 ou superior (para proteger a área tratada durante o dia). À noite, o paciente pode lavar novamente com o limpador brando e em seguida administrar topicamente um ou mais tratamentos para rosácea, tais como, por exemplo, metronidazol gel (USP variando entre 0,75% a 1,0%).

[0073] Os exemplos que se seguem são incluidos para ilustrar adicionalmente vários aspectos da invenção.

EXEMPLOS Exemplo 1: Formulação tópica da neurotoxina botulinica

[0074] Uma formulação exemplar compreende: 150 kDa de toxina botulinica purificada tipo A, que é minimamente imunogênica e isenta de componentes animais ou humanos; o peptideo veiculo (R-K-K-R-R-Q-R-R-R-G- (K) 15-G-R-K-K-R-R-Q- R-R-R SEQ ID NO: 5), que permite a liberação transcutânea da toxina botulinica para a derme subjacente, e um diluente à base de poloxâmero, que atua como um veiculo para o veiculo.

[0075] A toxina botulinica é produzida por Clostridium botulinum (sorotipo A - cepa Hall) em uma cultura de fermentação e a cadeia di, totalmente ativa e compreendida de uma cadeia pesada de 100 kDa e uma cadeia leve de 50 kDa é purificada a partir do meio de cultura. Diferente do cosmético BOTOX® (Allergan) disponível comercialmente, a neurotoxina purificada de 150 kDA não está associada a qualquer uma das proteínas acessórias derivadas de bactérias ou é formulada em albumina de soro humano, hemaglutinina ou outros componentes derivados ou agrupados de seres humanos.

[0076] A neurotoxina botulinica purificada é combinada com o veiculo peptidico em uma razão de cerca de 1:1 em peso e diluida com salmoura tamponada com fosfato para 200 μL. A mistura resultante é combinada com 1,8 mL de poloxâmero com base em diluente (por exemplo, PLURONIC® F127, Classificação NF, BASF Corp) . O diluente de poloxâmero é um agente tensoativo copolimérico capaz de diluir a proteína liofilizada, e então gelificar a uma viscosidade suficiente para ser aplicado e permanecer em uma área cutânea definida. O poloxâmero a 15% (qs com 0,9% de solução salina) é sensivel termicamente. Isto é, a composição permanecerá liquida em temperaturas de 20°C ou menos, com um produto gel se formando em temperaturas na faixa de 20-35°C para aplicação local.

Exemplo 2: Tratamento de rubor facial com uma composição tópica de neurotoxina botulinica

[0077] Para o tratamento do rubor facial, um frasco contendo 1 nanograma de neurotoxina botulinica tipo A liofilizada é misturado com um segundo frasco contendo um diluente liquido que apresenta veiculo peptidico e o diluente à base de poloxâmero (vide Exemplo 1). Os componentes são misturados para formar um gel viscoso liso que é aplicado topicamente às áreas afetadas (por exemplo, as bochechas do paciente e áreas das dobras nasais).

[0078] Espera-se que dentro de 2 semanas de tratamento, o paciente note uma melhoria significativa, por exemplo, do eritema facial em repouso e em exercido. Por exemplo, após o tratamento, o rubor será apenas ligeiramente perceptível nas áreas de tratamento em geral. Pequenas telangiectasias serão apenas levemente perceptíveis após o tratamento com o gel tópico de neurotoxina botulinica. Espera-se também que não existam sinais visíveis de queda da bochecha, que é um evento adverso relatado quando se utiliza neurotoxina botulinica injetável. Espera-se que os resultados persistam por dois meses ou mais.

Exemplo 3: Tratamento da rosácea com uma composição tópica de neurotoxina botulinica

[0079] Para o tratamento da rosácea, inclusive com intumescimento moderado, eritema e pápulas da parte central da face são misturados 1,2 nanogramas de neurotoxina botulinica, do tipo A, liofilizada com o veiculo peptidico e o diluente à base de poloxâmero (Exemplo 1). A composição é aplicada topicamente a todas as áreas afetadas da face central do paciente.

[0080] Espera-se que cerca de 3 dias após o tratamento, a condição da pele melhore rapidamente. A segunda aplicação tópica da neurotoxina botulinica em gel pode realizada em cerca de quatro semanas, quando a condição da pele continuará a melhorar. Quatro meses após o segundo tratamento, espera-se que o paciente permaneça quase livre dos sintomas da rosácea (dilatação dos vasos sanguíneos, pápulas).

[0081] Todas as publicações, patentes e pedidos de patentes discutidos e citados neste documento, incluindo os listados a seguir são aqui incorporados como referência em sua totalidade.REFERÊNCIAS(1) Jacobson MJ, Guangyun L, Raphael B, Andreadis J, Johnson EA, Analysis of Neurotoxin Cluster Genes in Clostridium botulinum Strains Producing Botulinum Neurotoxin Serotype A Subtypes, Appl. Environ. Microbiol. 74 (9) :2778-2786 (2008) .(2) Alexandroff AB, Sinclair SA, Langtry JA, Successful use of botulinum toxin type A for the treatment of neck and anterior chest wall flushing. Derm. Surg. 32 (12) : 1536-1536 (2006) .(3) Bull HA, Hothersall J, Chowdhury N, Cohen J, Dowd P, Neuropeptides induce release of nitric oxide from human dermal microvascular endothelial cells. Journal of Invest. Dermatol. 106:655-660 (1996).(4) Carruthers J, Carruthers A, The effect of fullface broadband light treatments alone and in combination with bilateral crow's feet botulinum toxin type a chemodenevation. Dermagol Surg 30:355-366 (2004).(5) Cohen-Arad A, Blitzer A, Botulinum toxin treatment for symptomatic Frey's syndrome. Otolaryngology - Head and Neck Surg 122: 237-240 (2000).(6) Jacob CI. Dermatologic Surgery. 31(4): 492-492 (March 2006).(7) Kranendonk, SK, Re: Botulinum Toxin for the Treatment of Facial Flushing. Dermatologic Surgery. 31(4):491-491 (March 2006). (8) Lowe N, Campanati A, Bodokh I, Cliff S, Jaen P, Kreyden 0, Naumann M, Offidani A, Vadoud J, and Hamm H, The place of botulinum toxin type A in the treatment of focal hyperhidrosis. British Journal of Dermatology 151: 1115- 1122 (2004).(9) Sato K, Kang WH, Saga K and Sato KT, Biology of sweat glands and their disorders. II Disorders of sweat gland function. J Am Acad Dermatol 20:713-726 (1989).

Claims (20)

1. Uso de uma composição tópica compreendendo uma quantidade eficaz de uma neurotoxina botulinica associada não covalentemente com um veiculo carregado positivamente selecionado a partir de Arg-Lys-Lys-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Arg- Gly-(Lys)n-Gly-Arg-Lys-Lys-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Arg (SEQ ID NO:3); Arg-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Lys-Lys-Arg-Gly-(Lys)n-Gly- Arg-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Lys-Lys-Arg (SEQ ID N0:4), em que n é um número inteiro de 5 e 20; e Arg-Lys-Lys-Arg-Arg-Gln- Arg-Arg-Arg-Gly-(Lys)15-Gly-Arg-Lys-Lys-Arg-Arg-Gln-Arg- Arg-Arg (SEQ ID NO:5) caracterizado por ser na fabricação de um medicamento para tratar um paciente sofrendo de distúrbio da pele por hiper-reatividade vascular cutânea.

2. Uso da composição tópica, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o distúrbio da pele é um ou mais selecionados a partir de rubor ou vermelhidão e rosácea.

3. Uso da composição tópica, de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que a rosácea é uma ou mais dentre rosácea eritemato-telangiectática, rosácea papulopustular, rosácea fimatosa, e/ou rosácea ocular.

4. Uso da composição tópica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado em que a neurotoxina botulinica é um sorotipo selecionado a partir de sorotipos A, B, C, D, E, F, ou G de neurotoxina botulinica.

5. Uso da composição tópica, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado em que a neurotoxina botulinica é do sorotipo A.

6. Uso da composição tópica, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que a neurotoxina botulinica é derivada da cepa Hall.

7. Uso da composição tópica, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a neurotoxina botulinica é parte de um complexo tendo um peso molecular variando de 450 kDa a 900 kDa.

8. Uso da composição tópica, de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que a neurotoxina botulinica é purificada e tem um peso molecular de 150 kDa.

9. Uso da composição tópica, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que a quantidade eficaz da neurotoxina botulinica é de 0,1 ng a 2,0 ng de neurotoxina botulinica purificada por 0,5 mL a lOmL de creme ou gel.

10. Uso da composição tópica, de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que a quantidade eficaz da neurotoxina botulinica é de 1 U a 20.000 U de toxina botulinica por cm2 da superfície da pele.

11. Uso da composição tópica, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo fato de que a quantidade eficaz da neurotoxina botulinica é de 1 U a 10.000 U de toxina botulinica por cm2 da superfície da pele.

12. Uso da composição tópica, de acordo com a reivindicação 7 ou 8, caracterizado pelo fato de que o veiculo carregado positivamente é selecionado a partir de Arg-Lys-Lys-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Arg-Gly-(Lys)n-Gly-Arg-Lys- Lys-Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Arg (SEQ ID NO:3); e Arg-Arg-Arg- Gln-Arg-Arg-Lys-Lys-Arg-Gly-(Lys)n-Gly-Arg-Arg-Arg-Gln-Arg- Arg-Lys-Lys-Arg (SEQ ID NO:4), em que n é um número inteiro de 10 e 20.

13. Uso da composição tópica, de acordo com a reivindicação 7 ou 8, caracterizado pelo fato de que o veiculo carregado positivamente é Arg-Lys-Lys-Arg-Arg-Gln- Arg-Arg-Arg-Gly-(Lys)15-Gly-Arg-Lys-Lys-Arg-Arg-Gln-Arg- Arg-Arg (SEQ ID NO: 5).

14. Uso da composição tópica, de acordo com areivindicação 12 ou 13, caracterizado pelo fato de que acomposição ainda compreende um diluente à base de poloxâmero.

15. Uso da composição tópica, de acordo com areivindicação 14, caracterizado pelo fato de que o diluente à base de poloxâmero está presente em 10% a 20% em volume.

16. Uso da composição tópica, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que o diluente à base de poloxâmero está presente em 15% em volume.

17. Uso da composição tópica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 16, caracterizado pelo fato de que a neurotoxina botulinica na composição é produzida por técnica recombinante.

18. Uso da composição tópica, de acordo com qualquer uma das reivindicações 3 a 17, caracterizado pelo fato de que o paciente tem rosácea, mas não rinofima.

19. Emplastro para pele, caracterizado por compreender a composição tópica como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 18 e um emplastro para a pele.

20. Kit para tratar o distúrbio da pele, caracterizado por compreender uma composição tópica como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 18, um ou mais componentes selecionados de um limpador brando de pele, uma loção de redução de vermelhidão, um ou mais tratamentos tópicos adicionais para rosácea, e produtos de filtro solar com SFP 15 ou superior.