BRPI1103966A2

BRPI1103966A2 - processo de obtenÇço de composto anestÉsico de lippia alba, composto anestÉsico obtido e uso de composto como anestÉsico

Info

Publication number: BRPI1103966A2
Application number: BRPI1103966-3A
Authority: BR
Inventors: Maria Heinzmann Berta; Baldisserotto Bernardo; Marlon De Moraes Flores Érico; Schmidt Denise; Otomar Caron Braulio; Queiroz De Souza Velci; Giesel Heldwein Clarissa; Vey Parodi Thaylise; Zago Gai Eduarda; Roman Cassiela
Original assignee: Universidade Federal De Santa Maria
Priority date: 2011-08-11
Filing date: 2011-08-11
Publication date: 2013-07-30

Abstract

PROCESSO DE OBTENÇçO DE COMPOSTO ANESTÉSICO DE LIPPIA ALBA, COMPOSTO ANESTÉSICO OBTIDO E USO DE COMPOSTO COMO ANESTÉSICO. A presente invenção descreve um processo de obtenção de um composto anestésico de Lippia alba, o composto obtido pelo mesmo, e uma composição anestésica à base da substância ativa, obtida do óleo essencíal de Llppia alba Mais especificamente, descreve uma composição para anestesiar animais aquáticos a base de linaloI, composto presente no óleo essencial de Lippla alba.

Description

Relatório Descritivo de Patente de Invenção

Processo de Obtenção de Composto Anestésico de Lippia alba, Composto Anestésico obtido ε Uso de Composto como

Anestésico 5.

Campo da Invenção

A presente invenção descreve um processo de obtenção de um composto anestésico de Lippia alba, o composto obtido pelo mesmo, e o uso do mesmo para a manipulação e/ou tratamento de peixes. Mais especificamente, descreve um composto com propriedades anestésicas compreendendo Iinalol isolado do óleo essencial de Lippia alba. A presente invenção se situa no campo da farmacologia.

Antecedentes da Invenção

A exposição a fatores estressantes pode ocorrer através das práticas

utilizadas na aquacultura, como o manejo de peixes, afetando o desempenho dos mesmos. A fim de evitar a mortalidade dos peixes, procuram-se métodos que permitam intervenções com o mínimo de interferência nas funções vitais e fisiológicas deles. Para resolver esse problema, têm-se utilizado substâncias anestésicas. O uso de substâncias sintéticas, como o metanossulfonato de tricaína (MS-222), a quinaldina, o 2-fenoxietanol e a benzocaína, é comum para anestesiar peixes. Porém, estas são substâncias caras e apresentam muitos efeitos adversos, como irritabilidade nos animais e efeitos deletérios nos manuseadores (humanos), sendo o uso delas cada vez mais evitado. Substâncias isoladas de plantas medicinais estão sendo alvo das pesquisas, uma vez que poderiam baratear os custos do tratamento, além de serem potencialmente mais seguras. Ainda é raro o relato da existência de substâncias naturais isoladas de plantas medicinais que possuem propriedade anestésica geral. O eugenol e o mentol, substâncias isoladas de plantas medicinais, possuem atividade anestésica geral relatada em algumas espécies de peixes. Existe um produto no mercado à base de isoeugenol, utilizado para os mesmos fins (Aqui-S) que é comercializado pela firma Bayer.

Até o momento, ainda são poucos os relatos encontrados na literatura a respeito de constituintes vegetais que possuem potencial anestésico para peixes, especialmente para peixes nativos, como Rhamdia quelen (jundiá). Visando a produção e comercialização de um fitofármaco seguro e eficaz, identificou-se o constituinte ativo do óleo essencial de L alba com atividade anestésica. Este composto foi capaz de reproduzir os efeitos anestésicos observados para o óleo essencial da planta.

No âmbito patentário, foram localizados alguns documentos relevantes que serão descritos a seguir.

O documento JP 11050050 descreve um antioxidante para medicamentos, cosméticos e alimentos compreendendo um ou mais espécies vegetais selecionadas do grupo que compreende Pogostemon viverita L., Pogostemon vivertia L, Bidens piiosa L., Eupatorium triplinerve Vahl., Mikania humilifoilia DC, Lippia alba (MiIIer) Ν. E. Br., Aspidosperma excelsum Benth., Borreria verticillata, Cissus sicyoides L, Leucas martinicensis (Jacq.) R. Br. e Phtirusa pyrifoli (Η. Β. K.) Eichler ou seus extratos como ingredientes ativos. A presente invenção difere deste documento por proporcionar um composto anestésico para possível utilização em piscicultura.

O documento US PP13110 revela uma mutação da planta Lippia alba chamada "BhurakshaK', compreendendo um novo aroma de óleo constituindo de 7,2% de 1,8 cineol, 42,3% de linalol, 12,9% de citral a e 14,2% de citral b como terpenóides principais e um perfil RAPD único. A presente invenção difere deste documento por descrever o isolamento do composto linalol, descartando outros compostos do extrato de Lippia alba, para possível utilização em piscicultura.

O documento JP2001322941 revela uma preparação para cuidados com a pele compreendendo extratos de variadas plantas, incluindo Lippia alba. A presente invenção difere deste documento por não se tratar de um cosmético, mas sim de um agente anestésico. O documento Pl 0706182-0 revela composições para anestesiar peixes e método de anestesia de peixes, compreendendo a dissolução de preparação à base do óleo essencial de Lippia alba em água. A presente invenção difere deste documento por não se tratar de um óleo essencial e sim de um composto isolado.

O documento Pl 0904832-4 descreve composições à base de extrato vegetal para animais aquáticos e método de sedação e/ou anestesia de animais aquáticos compreendendo as mesmas, onde é descrita a utilização de preparações à base de óleo essencial de espécies de Ocimum para anestesiar e sedar animais aquáticos. A presente invenção difere deste documento por tratar- se de um composto isolado, obtido de Lippia alba.

O documento Pl 09004839-1 revela composições anestésicas para animais aquáticos e método de anestesia de animais aquáticos compreendendo as mesmas e descreve a utilização de preparação à base do óleo essencial de espécies do gênero Aloysia. A presente invenção difere deste documento por não se tratar de um óleo essencial de espécies de Aloysia e sim de uma substância pura obtida do óleo essencial de Lippia alba.

Do que se depreende da literatura pesquisada, não foram encontrados documentos antecipando ou sugerindo os ensinamentos da presente invenção, de forma que a solução aqui proposta possui novidade e atividade inventiva frente ao estado da técnica.

Sumário da Invenção

A presente invenção descreve um processo de obtenção de composto anestésico de Lippia alba, o composto obtido pelo mesmo, e o uso do mesmo para anestesiar peixes.

Esta invenção relaciona-se à adição de um único produto, isolado de um óleo essencial, na água dos aquários ou tanques de criação tanto para transporte quanto para manejo de peixes sem estressá-los, evitando-se assim alterações do seu comportamento ou até mesmo patologias decorrentes deste tipo de manipulação. É, portanto, um objeto da presente invenção o processo de obtenção de composto anestésico compreendendo as etapas de:

a) coleta do material vegetal relacionado à espécie vegetal Lippia

alba]

b) extração do óleo essencial da referida planta; e

c) isolamento do Iinalol contido no referido óleo essencial.

Em uma realização preferencial, o referido material vegetal relacionado à planta Lippia aiba compreende as folhas de Lippia alba.

Em uma realização preferencial, a extração do óleo essencial se dá através da hidrodestilação, podendo esta ocorrer em aparelho clevenger.

Em uma realização preferencial, o isolamento do Iinalol do óleo essencial se dá através de cromatografia, preferencialmente utilizando gel de sílica. Em uma realização preferencial, é utilizado como eluente hexano e acetona, ou uma combinação dos mesmos, preferivelmente em uma concentração 95:5 (hexano:acetona).

E um objeto adicional da presente invenção o composto anestésico compreendendo Iinalol isolado de óleos essenciais da espécie vegetal Lippia alba.

É um objeto adicional da presente invenção o uso do composto anestésico descrito acima para anestesiar peixes.

Em uma realização preferencial, o uso do referido composto anestésico se dá através da adição do referido composto à água na qual os peixes se encontram, preferencialmente em uma concentração de cerca de 100 μίΑ (composto diluído em etanol na proporção 1:1 O/água).

Estes e outros objetos da invenção serão imediatamente valorizados pelos versados na arte e pelas empresas com interesses no segmento, e serão descritos em detalhes suficientes para sua reprodução na descrição a seguir.

Descrição Detalhada da Invenção Os exemplos aqui mostrados têm o intuito somente de exemplificar uma das inúmeras maneiras de se realizar a invenção, contudo, sem limitar o escopo da mesma.

Processo de Obtenção de Composto Anestésico de Lippia alba O processo de obtenção de composto anestésico de acordo com a

presente invenção, compreende:

a) coleta do material vegetal relacionado à espécie vegetal Lippia

alba;

b) extração do óleo essencial da referida planta; e

c) isolamento do Iinalol contido no referido óleo essencial.

Material Vegetal

O material vegetal útil na presente invenção inclui, mas não se limita aos elementos inteiros ou parciais encontrados em células e/ou tecidos e/ou órgãos da espécie vegetal Lippia alba. Em especial, o material biológico utilizado na presente invenção inclui folhas de Lippia alba. Extração

A extração dos óleos essenciais do material vegetal coletado de acordo com a presente invenção pode ocorrer de diversas maneiras, tais como os métodos enfleurage, arraste por vapor d'água, extração com solventes voláteis, prensagem a frio, CO2 supercrítico, entre outras. Em uma realização preferencial, a etapa de extração dos óleos essenciais se dá por hidrodestilação, podendo esta ocorrer em aparelho clevenger. Isolamento do Linalol

De acordo com a presente invenção, o isolamento do linalol, composto majoritário do óleo essencial de Lippia alba quimiotipo linalol e com propriedades anestésicas, se dá através de quaisquer técnicas de isolamento de compostos conhecida no estado da técnica. Em uma realização preferencial, o isolamento do linalol é realizado através de cromatografia, preferencialmente utilizando gel de sílica. Em uma realização preferencial, é utilizado como eluente hexano e acetona, ou uma combinação dos mesmos, preferivelmente em uma concentração 95:5 (hexano:acetona). Armazenamento

O armazenamento do Iinalol da presente invenção pode ser feito em qualquer recipiente capaz de manter o referido composto isolado do óleo essencial de Lippia alba, de forma que seja possível utilizá-lo ou consumi-lo posteriormente. Em uma realização preferencial, o armazenamento é feito em frasco hermeticamente fechado. Composto isolado

E um objeto adicional da presente invenção o composto isolado do óleo essencial obtido a partir da espécie vegetal Lippia alba. Uso de Composto Anestésico

Em uma realização preferencial, o uso do referido composto anestésico se dá através da adição do referido composto à água na qual os peixes se encontram, preferencialmente em uma concentração de cerca de 100 μ L/L (composto diluído em etanol na proporção 1:1 O/água).

Exemplo 1. Realização Preferencial

A obtenção de um novo produto (fitofármaco) para anestesiar peixes (Rhamdia quelerí), de acordo com a presente invenção, seguiu a seguinte ordem de processo:

1) Coleta do material vegetal (folhas de Lippia alba Ν. E. Brown);

2) Extração do óleo essencial a partir do material vegetal fresco pelo método da hidrodestilação em aparelho clevenger por 2 h;

3) Armazenamento do óleo essencial extraído em frasco âmbar de pequeno volume, hermeticamente fechado, no congelador (-4SC).

4) Análise qualitativa e quantitativa do óleo por cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas (CG-EM) seguido do cálculo dos índices de retenção de Kovats (IK) para cada substância constituinte do óleo essencial (Tabelai). 5) Conservação do produto em frasco âmbar de pequeno volume, hermeticamente fechado no congelador (-4SC).

6) Isolamento do constituinte majoritário do óleo essencial de L. alba (5 g) através do método de cromatografia em coluna, utilizando-se 70 g de gel de

sílica. Como eluente, foi utilizada mistura de hexanoracetona (95:5), com fluxo máximo da coluna (22,5cm χ 3,2cm), sendo coletadas frações de 50 m!_.

7) Monitoramento das frações obtidas através do método de cromatografia em camada delgada.

8) Unificação das frações semelhantes e subseqüente concentração em rotaevaporador.

9) Identificação da substância isolada através de cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas (CG-EM) seguido do cálculo dos índices de retenção de Kovats (IK), bem como por ressonância magnética nuclear protônica (1H-RMN).

10) Avaliação da atividade anestésica geral in vivo do Iinalol (constituinte majoritário do óleo essencial): juvenis de jundiá sadios foram submetidos a jejum de 24 h antes do experimento.

11) Posologia do produto: Utilização de 100 μΙ_/Ι_ de água. Essa concentração, assim como as demais testadas (50 e 150 μΙ_/Ι_ de água), foi

definida visando manter a proporção da mesma no óleo essencial testado previamente.

12) Em todas as concentrações testadas, observou-se efeitos semelhantes aos observados com o uso do óleo essencial em doses proporcionais.

13) Efeitos adversos: Não foi verificado nenhum efeito adverso nos

exemplares de Rhamdia quelen (jundiá) testados.

Tabela 1: Composição química do óleo essencial de Lippia alba Ν. E. Brown.

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Componente

% relativa IKcalculado IKreforência cif-tujona 0,04 925 930 opineno 0,23 931 939 canfeno 0,50 947 954 sabineno 1,90 972 975 z^-pineno 0,17 975 979 mirceno 1,37 990 991 Iimoneno 1,11 1029 1029 1,8-cineol 8,59 1034 1031 Z-v&ocimeno 0,13 1038 1037 E-^ocimeno 0,62 1048 1050 Herpineno 0,04 1059 1060 5-óxido de Iinalol 0,47 1073 1073 isoterpinoleno 0,48 1085 1088 Z-óxido de Iinalol 0,16 1089 1087 Iinalol 37,47 1111 1097 3-Z-isobutanoato de hexenila 0,03 1143 1147 cânfora 6,87 1152 1146 pinocarvona 0,66 1165 1165 Borneol 1,06 1176 1169 mirtenal 0,09 1198 1196 oí-terpineol 0,88 1199 1189 verbenona 0,36 1211 1205 £-carveol 2,00 1215 1217 Acetato de isobornila 0,16 1285 1286 acetato de mirtenila 0,03 1325 1327 £elemeno 0,03 1335 1338 «f-cubebeno 0,02 1346 1351 ciclosativeno 0,04 1368 1371 «f-copaeno 0,38 1375 1377 /?-burboneno y^-cubebeno

0,12

1383

1388

0,19

1387

1388

y^-elemeno

o-gurjeneno

E-yff-cariofileno

^■copaeno

0,69

1389

0,07

1406

4,09

1420

0,15

1429

1391

1410

1419

1432

Qf-humuleno

0,89

1456

1455

a/o-aromadendreno ^muroleno

0,28

1460

0,16

1476

1480

germacreno D biciclogermacreno

5,40

1483

1485

0,27

1495

1500

ci^muroleno

0,58

1498

1500

germacreno A

0,88

1508

1509

TiCadineno

0,06

1513

1514

£cadineno

germacreno B

1,16

3,65

1518 1561

1523 1561

E-nerolidol

0,58

1564

1563

germacreno D-4-ol

oxido de cariofileno

2,56

0,91

1580 1584

1576 1583

epóxido de humuleno 1,10-di-epi-cubenol

0,15

1612

1608

r-cadinol r-murolol cif-murolol «2-cadinol Σ

0,12 0,17 0,53 0,18 0,62 90,35

1617 1645 1647 1650 1659

1619 7640" 1642 1646 1654 IK referência: ADAMS, R. P. Identification of essential oil components by gas chromatography/quadrupole mass spectroscopy. Allured Publishing Corporation: USA, 2001

Conforme relatado no presente exemplo, o composto isolado do óleo

essencial das folhas de Lippia alba se mostrou eficaz como anestésico para peixes.

Por ser um composto isolado do óleo essencial extraído de plantas, este produto é biodegradável, tem menor potencial agressor frente à natureza nem produz irritações ou danos aos manipuladores ou animais nas concentrações testadas. A viabilidade econômica também é um fator positivo de nosso produto, pois sendo de fonte renovável, derivado da biodiversidade brasileira, e proveniente de espécie nativa, é de fácil cultivo e, certamente, sua comercialização será de baixo custo. Os versados na arte valorizarão os conhecimentos aqui apresentados e

poderão reproduzir a invenção nas modalidades apresentadas e em outros variantes, abrangidos no escopo das reivindicações anexas.

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Claims

Processo de Obtenção de Composto Anestésico de Lippia alba, Composto Anestésico obtido ε Uso de Composto como Anestésico

1. Processo de obtenção de composto anestésico caracterizado por compreender as etapas de: a) coleta do material vegetal relacionado à espécie vegetal Lippia alba; b) extração do óleo essencial da referida planta; e c) isolamento do Iinalol contido no referido óleo essencial.

2. Processo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo material vegetal relacionado à espécie vegetal Lippia alba compreender as folhas de Lippia alba.

3. Processo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pela extração do óleo essencial se dar através da hidrodestilação, podendo esta ocorrer em aparelho clevenger.

4. Processo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo isolamento do Iinalol do óleo essencial se dar através de cromatografia.

5. Processo, de acordo com a reivindicação 4, caracterizado pelo isolamento do Iinalol do óleo essencial se dar através de cromatografia utilizando gel de sílica.

6. Processo, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por ser utilizado como eluente hexano e/ou acetona, ou uma combinação dos mesmos.

7. Processo, de acordo com a reivindicação 6, caracterizado por ser utilizado como eluente hexano e/ou acetona, ou uma combinação dos mesmos.em uma concentração 95:5 (hexano.-acetona).

8. Composto anestésico caracterizado por compreender Iinalol isolado de óleos essenciais da espécie vegetal Lippia alba.

9. Composto anestésico caracterizado por ser obtido de acordo com as reivindicações 1 a 7.

10. Uso de composto compreendendo Iinalol isolado de óleos essenciais da espécie vegetal Lippia alba ou qualquer outra espécie vegetal que produza o Iinalol1 caracterizado por ser para a preparação de medicamento para anestesiar animais.

11. Uso, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelos animais anestesiados serem peixes.

12. Uso, de acordo com a reivindicação 10, caracterizado pelo referido io composto anestésico atuar através da adição do referido composto, diluído em etanol na proporção 1:10, à água na qual os peixes se encontram.

13. Uso, de acordo com a reivindicação 11, caracterizado pelo referido composto anestésico atuar através da adição do referido composto, diluído em etanol na proporção 1:1.0, à água na qual os peixes se encontram, em uma concentração de cerca de 100 pL/L (composto diluído em etanol/água).