CA2000254A1

CA2000254A1 - Composition stabilisee a base de facteurs de croissance de la famille fgf et de dextrane sulfate, et ses applications

Info

Publication number: CA2000254A1
Application number: CA 2000254
Authority: CA
Inventors: Denis Barritault; Jean-Pierre Caruelle; Jose Courty
Original assignee: Universite Paris Est Creteil Val de Marne
Current assignee: Individual
Priority date: 1988-10-07
Filing date: 1989-10-06
Publication date: 1990-04-07
Also published as: WO1990003797A1; FR2637501A1

Abstract

PRECIS DE LA DIVULGATION
"Composition stabilisée à base de facteurs de croissance de la famille FGF et de dextrane sulfate, et ses applications"
Invention de : BARRITAULT Denis CARUELLE Jean-Pierre COURTY José
INSTITUT DE DEVELOPPEMENT
ET DE VALORISATION BIOTECHNOLOGIQUE
Cette composition comprend l'association d'au moins une forme active d'un facteur de croissance de la famille FGF et d'au moins un dextrane sulfate stabilisant l'activité biologique du FGF. Elle est applicable dans les domaines de la médecine, de la chirurgie, de la cosmétologie, de la biotechnologie et de la biologie cellulaire, et plus particulièrement, dans les domaines où
les facteurs de croissance peuvent être utilisés comme agents thérapeutiques, notamment en cicatrisation et régénération tissulaire, ainsi que comme agents cosmétiques.
Pas de figure pour l'abrégé.

Description

~ J V D J ~ r u x l ~ li U ~ r I U ~ U I U ~ J I ~ ~ * ;~ ' ~ n, * I
., ~f,~.`j5~ t~
I

;P~SIl'~ STAeILI~EI~ A ~/~5E ~E FACS~U~ : ~E CROIS~ANCE ~1~
LQ l;'/~MI LLE l:~F ~T kE ~EXTRANE ~ULF~Al'~, E 8E~; ~PPLICATI4t~J~.
L~ pré~ent~ inventlon se! roppe~ t~ ~ Un~
compo~ltlvn ~to~ b~e d' ~1 mo~n~ u~ f~e~eur d~
crols~nc~ dc 1~ femllle FGI~ et do d~xt:~ l~aa ~ul.fot~, ~ln~l c~u~ ~u,~ ~ppllcc~tior,~ de cett0 compo~tlon z~to~ e d~n3 ~e~!s domolne:3 de l~ m~decine, d~ l~ ch~rurlsio d~ 1~ co~méto-lo~ le, d~ 1~ blc~technoloF~e et de l~ blo v~ c~llul~lr~r et, plus partl~llLère:ment, clQns lo~ do~c .n~e ot~ les ~qCteL~rg l~J de CfOl5 ~nce peuvent etre l~t~lls~ com~ ~ ~g~-nts~ th~rsp~u-tlque~, not~ nt er~ clc~trla4tion et f~ 5~ r~t~on ti~ul~ir~, ~in~i que comme ~ent8 cosm~ :lqu~-~ 4 d~couv~rt~ d~ l~ f~m1 llo ~ B factaur i ~e cr~ anç~ des flbroblsste3 ~courc~@nt ds~5n~ P~
l'~ l' ~br~Yiatlon (~FGF~ - Fibrobln~t Orowth 4ctor~ a ~t~ f~lt~
ulte des e~.ttld~ de~ ~tlvlt~ ble:~ ~glq~u~o f~cte~r3 d~
crol$snnc~ obtenues dons lea extr~lts d' n tr~ rond nomorq~
d~ tis~u:s ou ~' or~s~n~s ~c~veau. hypovhj s~, r~t~n~. hunn6!u vitr~e, ehoroïd~, lrl~ ortil~e, re~n, ~oi~, pll~cents, or~ ut~ m. pl"oste~t~ o~ n~ e, et ). L~ dlv~r~it~
m~m,~ dl~3 tlss~s ~tudi~3 4t d~s c~lul~ tlmul~-sJ p~r ~:~3:~
t'e-::tl~lJrs ~'n v~ro Ct ln ~iYC~, ~ln~l que l~ ~r~ d n~b d' .~.~u1p~ ~ls rech~rche qu~ ont ~nd~pen~ mm~nt contsq~b~
c~rnc~ ti-on, b l' l:~o).~m~nt ~t ~ l' 1 ~n~ ti~n

2 compl~te to ce~ fsctcurs, expllq~2nt ll~ a~ultltu~e de;; non~
at de~ 51gle~ donn~ por ce~ ~il f ~ nlt~ ~utqur~ pour l~:~
d~31~ner. Il ~ppar6~t ~ln~ nten~lnt tl- f~on cl~lre qu~3 :
tou~s ce~ ~xtt~ait~ cont L~3nne!nt d~!~ faet~ r~ll d~ ~rol~snnce do la f~mlll~ des FQF3 et que cott~a f~ ll p~ut ~tre

3~ r~pr~nt~e por d~u:c br4n~he~3 pr~nclpal~ ~:
L~ premi~r br~nch~ t~ d~C It- ~ousl l~fi noms de F&F bQsiq~, de f~ct~ur de Cr~Oi~S~nCQ b oiqu~ Ou d- typ~ 2 a~ n po~r l~ h~p4rln~ ou ~ 3porln ~ind~ ~ O~c~th l~octoro (~UCI: II ), dG! f~ctel~r d~ ~rol~ nc-3 çl~r v~ du ~rvotau ou 3.5 ~r~ln~ lv~sd Crowth ~actor II 5~F X~ , d~ ~nct~3ut~ de crol~G~nce d~rlv~ de l' o~ll ou E;re-D~l ~ Ct~owth ~tor I
,, . . . . . .. . . . . . . . .

Z~ S~ l i'~T ' ~3 P ac t e~lr c~e c roi ~ nc~ d~3 ~ t r~Cyt o~ I X
A~F II, d~ fnctel~r de croiS~nCe d4rlv~ ~u co~ei1 t c ., D I o~ u~ l o deux~ a b 4r.che cl~ t om1 1 1 ~0~ t~ d~crlt~ sou~ les nom$ tle FCF ~1'd~ ou f~ctc\Jr 'j af f ln po~lr l' hépar1ne do ~ype I Ha~;F I , f~ctour d~rlv~ du cerve~u ou B~OF X, de fc~ctour de crolu~ nl;~ d~rive d~ 1' o~ll ou E~)CI; II, ~e f~ctollr d~ crol~s:3rln~ lo I~$trocytc~ u ACF I, de f~ct~ur de cro~ nco d~rlv~ u cart~lnEse ~CDCF I), etc. A tlt~ e r~r~nc~ b bllo~r~phiqu~
concerna~t le~ f~teur de crois~3~nce, n ~lt~r4 y R. L.obb, d~o~3 ~An~lytic~l Bloch~mLo .ry ~ a4 ~Ig~>o, et J. Courty ~t coll, dc~n~ ~h~m~ Blophy~. Re~.
Comtnu~ 10~-10~ ~98G~.
Ces ~u~taur~ ort donc et~ norn ~o, soit solon le ~yp~ d~ cellule~ clble$ utili~s ~f~ct ur3 cl~ ~oio~nc:~
dc:s fiDrobl~3t~ trocyt~s ou ~llule endoth~ , eve~
lq3 ~lgll93 r~pe~tlvem~nt FCF, AC~, ECO ~, oo~t 5elon lo .~OI,II~C~3 d' o~ ce fuct~ur ~:~t extrQit ~p~r e~compl~, f~ct~ur d~
croi~ ce d~r~v0 du cerv~u, t~ d~ 1~ r~ln~ s~u d~:3 ) yeu~ o~l-til~3, d' h~p~tocyt~ en cu ture, ~ lc;
s1~1eo r~_:3p~ctlv6~ment B~..F, RClCF, Ft~P', C3GE~, HI~GF, ~:t~. ).
s~lt encor~ ~ulon un~ proprl~t~ b~o~him c~u~ ou b~ olo~;Lque (facteur,~ ~ c~ol~u~ ce ~f~ p~ulr 1I h porl~ 0~ ~u î nct~r tumor~l ~n~;lo~ nlq~R ~TI~ ~au;c prin~:lp~ r, ,:'i-~ br~ncl-e~ d~ l~ t~emllle l~tAllt ~lor~ nomn ~ lon co~ æl~lo~ :
pr~c~ s ou 3ulvls d~ l~ mentis~n ~4c1dl~ ou ~b~iquQ--, ou :lo la m~ntlon l~typ~ - ou ntyps II~.
C' ~:3t ~n ~llv~nt l' ~t~ ~lt~ b o~oE~ u~ ~ur de~
C~llu~ n cultl.lre qu~ ee~ f~ct~ur~ on pll ~tr~a p~rlf~
L~ prem1~r~ cor~ct~rLot~qu~ phy~l~o- hlmique~ ~poldo n~ol~eulolre et point l~o~lectr~qu~) orlt ~t~6 pub~ s p~r Co~ipocl~rowlcz, ,r, Biol. Chem. ~EQ. 2~lY C147Y~ po~Jr ln ~orm~3 b~3Lqu,3,. ~t p~r ~i~rrlt~ult et coll., J. N~3uroscl. I9L 47~ 0 ( 19~z> pour lcl form~ ~c1de.
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' ' ' ' ' ' ' ' j ' '.'.

~- Zil~ r~ 5~l l~o purificntlon ~ homog~n~lt~ ~e~ d~UK fqrm~ u r~l ~ permi~ ~' ét~bllr l~urs ~tructure0 prlmolre~; E.~ch r:, ~t .-oll., Pro~. Notl. f\c~d. Sc~. I.JS, ~ ~!!S07 ~15B~), p~u~
1~ ferln~n 4~1qu~a, e~ Oirnenez GÇ~ SO et C411., 5clonc~
l~85~ l'385), po~r la forme ~c1~3. L~ lsol~men~ di~ls d~x forrn~ t~ ~r,~ndement felvorl~! por la dlSeouv~cte ~' un~
forte nfflnlt~ de C06~ fscteur~ pour 1'. h pel~ln~ ~t 1 ' ut 11 i~aS lon subsé~uent e d' un~ chrc~at ~r~phl~ d' ~ f lnl t Gur h~parine lrnlmoblll~e (Shlng et coll , Scl~nc~, .~, 1b 1296~ 9 ~1984) ).
In v~ tro, le33 FOF~ ~ont cnp~b e~ ~e ~ ln prol~ f~rntion ~t 1~ dlff~r~nci~tlon d' u gr4nd nonlbr~ ~e celll~lo~3 prov~R~nt ds tl~sus ~t e~p~c~:~ dlff~rent~. ~n c~ tcr4 les cellule~ flbrobl~.stlques, en oth~
15 ~plt~ la.~ s k~r~tlno~yte3, ehondr ~y~o, myo~l~
~stro~5~tq3, ~t~ n ~ n~lera ~g~ n 10 ~Ole d~ FGr::~
d,3n.s 1.~ survi~ neuron~le. In v~ ~rc?. 1~ propri~e~D
ncurotroph~ue3, anE5lo~énique:P ~t Si~ loonte~ dr~ FC;F.s ol~t c~ n;qnt ~t~ d~montr~-~s d~r\s de nombr~ Ix ~yot~m~
XO L~ r~l~, dqn~ la Yttlmlll4tlon ~ 1~ cl~oL~9d~ d.
1'~pid~trms, d'un extrE~it ~qu~ux de r~tl ~ p4rtl~ m~nt purifl,~ et contenont donc du FGF comm0 ~lnclpe nctlf, e-~t indlqu~ d~n.s 1~ br~vqt fr~n~ 3 n~ 2 4~ , OO~. L~ r~ e C~ ~
m~me ~::tr~it 5U~ cicutrls~tion d' ~pl h~llum d~ c~l-n*~ ~t ~5 indl~ué à~n~ le brev~t ~m~ric~ln n' 4 ~ ~7 435. ~pul~ ic~
de no~rellx br~v~ts ont ~t~ d~llvr~ d~ norn~r~u~ce~ -publlc~tiono s~lentl~lque~ ~3nt poru, ~u ~r~nt lo r~l~ d~:3 I~Crs purlflé~; t~n~3 la r ~nérc~lon ~t 1 ~l e~eh~rl3~ion de 1~ : .
p*~u, dl_$ V~iS~ x, de,s r,erF~, d2~4 09, d-~ muscls:~, ctc.
L~ plup~rt :1~ c~;3 trav~ux r~ult~nt d* 4 tron~pa~tlon de~
obsarvot ian:~ o~tenues t3ur ~s c~lluli~s~ n eulture ~u;~ m~m~4 1 U l ~ v~ ~c7, /~ln~l, 1' ~ppl~ ~ation ~op~quo ~ ~3F ~ul ou 1' utlli.~atlon d~ polyln~r~, t'~pon~ , o ~1A OU ~e pl~mp~:~
,35 p~rmett~nt l~n r~larg~ t de3 FGF~, ~Ut lnduiro urla n~oan~rl o$~n~se ~t url~ r~n4r~t lon n~ ~U~ ou cut~n~e.

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'' ; , ' ~ ,,: ' ' ' ~ ' ' ,' ' , . ' ' '' ' ' ' ' .. , ' . ' . ~: ' ' 2~
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~ pendont, 1' nppllcot lon topl ~o de FGI: ocid~ o~
l)~ ,l~u~ olt :~o~ nt ~tr-~ lt~r~t'Lve pol obter~lr 1~ cffet~
mQ:clm~l.Jx. C~cl 6:3t prob~blement dC~ 4 u ~e ,ln~obll~ t~
ther~n~qll.~ de 1~ rnol~c~le, une protéolyr p~r dlæ3 en~ym~4.
!~ ~lnsl qul ~ IJn~ lnteract~n ~ntre le~ FO c et 1~ lyco4mlno-zlycones, col~une 1' h~p~r~ae sulfate ou p ot~oh~ r~n~
sulf~t~, de9 meml~relne~ eellulslri~a ou ~ ~ mambr~ne~3 balcQle~, e~r~fn~nt une lmmoblll~tlan de~a F~F~ c.uvant emp~cher leur acc~ ~ux r~eepteur~ e~llul~ro~. A c~ propo8, un~ ~b4ence ~e 3tlm~Jlotlon de l~ cl~z~tri~tlon p~r ~ FGF d~ p2,~1e~
profon~-3 ~ ~t~ r~pport*e (J. D~rm~tol. 5urg. Oncol. t;, 6 l 7-~25 ~19~6~ ) lor~que le Fap s~ul ~t elpp ~qu~ d' une m~nlbrq toplqu~, ~lors qu' ur.e pr~l~ f~r~tton fl~ o~lu3t~q~ ~t ~yobl4s~, lqu6~ t obtenuR lor~qu~ de~ ep n~ eonst~tuée~
1!~ d' ~lc~ol polyvlnylique l~nbib~ ~e ~GF ~o t oppllqu~ sou~ 1 paau (J. ~ lol., 1~0, 12~9 C1985).
On ec~nst~te p~r ~llleure qu~ ~ FCF, ~u~ol b~n sous ~ forme ~cl~ F~;F) ~u~ ~OU5~ 9~ orme bz~;lque ~
~ue 1' on conserv~3 h~bltuelle~m~nt ~ -80' , p~r~ d-~J~ ;on ctivite lor~qu' 11 e3t ~m~né t. -20'~ co ~ ~ templ~r~tur-~
bi.3rlr, ~.
~1 ~pp~r~it donc 1~ c~31t~ d~ 3t~blll;~3r 1 f~cteul-~ ds cro~s~4nc~ F~3~ pour p~uvo~ ~nvls~ser r~ mont leur;, ~pplle~tiorl:s. P-~ur le ~ppllent~ no ~n vf ~o L'5 notllmtnent, 1 s~r~lt avt~nt~eu;; qu~ ~odG~ d~ ~t~ t lon l~ulese permettrc~ un relc~r~ lant du P ;~, Cl3 d~rn~qr ~even~nt un aE~3nt mito~;~ne loco.l, r~ntr ~nt d4n~ le8 proces~o n~turq~l~ d~ r~ n~r~tion c~ll lult~.
t~ 1' hol~t e ~ctu~ , compte t~ ~u d~ 1' lmpc~rt~nc~
d~G fnct~urs de cro1 ~s~n~e dor~s lo~ do~ iln-~ pr~c~eé3, on ~lt q~c baAucoup d~ t~nt~lb~ve:~ ~ont ~f ~ctu~a pour 3t~blll~r l~ CFs, m~ eonn~l~ ~nc~ 3 la D~ ent~3, il n'y ~ pQs ~ncoro eLI ~ c~ o~r dl3 propo~tion concl ~t~ ~t 4~t1~fo1~nnt~ pour ~t~b1114 ~r l~o ~ pour :3'j qu' 113 con~e~-v~nt l~ur ~ct1vitS r.on ~- L~ nt ~n ~ ro, mol~3 ,s~ m,~nt l n vi vo.

.~ . : . . . .. . . .
. . . . , , : ~, . , :
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.,, . r r ,'Zi3~

L,~ pr ~sent ~ ~u~vent lon ~ppor~ , quant ~ , un~
t lon ~u pr.~b~ oY.~, cor~ t~nt ~ eoc~,on un ~ t r,:)n.
.,~ulr~J~.~ aux F~i~s, 1~ con~ itlc~n r~ ~r~t~ ~t~nt etclbla ~u ~to~ M~mæ ~ temp~r~tur~ nbl~nte.
L~ pr~nt~ lnventlon ~ ~onc d'abord pqu~ obJ~t une ~o~npo~l t i~n co~npren~nt 1 ' ~3.~0clot ~L n d' ~u molns une rOrme ~ctlv~ ~' un ~cteur d~ c~ol~4n~ d~ la ~ml~l~ FGF ~t d' 31- moin.~ un ~extr~n~ eul r ate st~blll orlt 1' ~Ctlv~t~
blelo~;ique du FC;F.
1~) Le~ de:ct r~n~s 6ul f ~t es ut i l l ~ ~ont d~ 3xt r~n~e .~ulfat~.P t,y:lr4~0lub~ , $n401uble!~ cn i~lou o~u~ux olJ r~-l3 In-'~ 3 IJ ~
L~ tr~r,~;t ;ulf~te4~ ~lub oer qu-t 1' oo peut ~It~llsal- p4ur 1~ mi:3~ en 02uvre ~e 1' ~ Yon~lon, ~nt do~
1~ p,r,~uits ~olJr~nt~, ou~ ~ont r~i-r4:;~nt~ p~r 1~ forrr,ul~:
1 C~l~ . ~

~ n 0~ '.

d~n~ u*lls u~ h trols ~roupe:~ hydro yl~ du n~Ot~r ~onom.~re s~"lt ~ t 1 t U\~!~; p~r cle.,, ~roup~ -0-503 ~forme ~ld~) 0 .5 - C~-.;f~ (f~r~ ;le ~ . Le:; produl~s oo plu~ u~ .,ont d~.~p~ lt.~l~$ sou~3 forn~a d~ :~el:s d~ ~odl ~
L~3:3 produits pr~f~r~ p~Uv~n ~tr~ o polyn~br~3 ~e ~n~ ,tA M~ cul~lr~ cQmpr~se ~nt~^e 1~ 000 ~ ~00 I~ O, nt.~ ntnt nt ,2r~tr~ .~ 000 et 5VO 00~, tol3 ql,l~ 1' on p~ut e.' ~n .~) præc~ kr ~up~ d~ 1~ Socl~t~ ~ICMA ~R t` ~07~, Dl~39~, ~OC~ 7 l 40, ~3~06 du cPt e~ u~ l9~S~) .
L~3~ xtran~ ulfAto~ lnfi~c~l bla~ 40nt ~,e d~:~tranæ~ l3cul~t0~ r~tl~ul~e selon 13i~ proc~d~!~ h4bltu~13 ~e ~t~ 3.,~t,i~n, cn portleull~r ~ ld~ '~pLchlol~hydrlnk, ;~r ~5 .

.. ,.. . ; ' ,. ,, . ' : ' ' , . ' , ' '. ' ' .'': .' ' ' ~ . thp ~ , C ~ I IX ~;l C! r l~ r mu ~

Q
~1~ O ~ CH

OH ,~O
~H ~ O--j 2 ; 1:! --O~

CH-OH ~)~1 ~-- o OH

;:
1_1 HO ~1 \
O - C H ~ o > ~ 2 :

~2 ~ \-o 1 1~0 ~!~ C)~ ~ ........ 1 0~ 1 ow ~s l.~c~ un~ ~r~ on ~s group~:~ hydl-o~yl,2,~ ~ ,t ; . ub~t 1 t.l~S~ par d~ ,r~up~ 0-503H ou 0-50; 11~ p~ erlt 5~! pr~ ~nt~r ~ou~ form~ d~ poudr~ ou e ~el~.
Colr,me ex~pl~ cl-~ e~E: d~xtrnr~ ~ ~ulf~to3~ on p~l~t clt~r c,~lui commercl~ p~r 1~ ScelA 6 51~ oU~ 1 r~r r.~r~ tal~u~ 19.''tt~ n p~Ut ~ 41~ nt o~e~
tf~l:a d~3;~tr~nH~ ~e1 on lf~ p~otc~colel d~r t p~ Mll~t ld.~ J. ~t cctll, An~l. Blt.?ch8~n. .LQ.~- :304 ~ 0).
~ \u ~ln t~ eompa~iltlon ~ on 1' lnv~ntl~n, 1~.3 t r ct r\ t~ lJ l f 4 t es h y P r o~ o l u~ on t ~ n t s ~ un ~
~ollc~ntr~tlc?n dta ~ FO m,~ p~r m~ 1111tro d~ m~l4r"7,4 n~3l. L~ ~nc,¢rltrat1on ~o~ ~xtr4r~; t~ulf~tfa~3 ln~all bl.
:i~n~ ., m~lf~ t~ t~Rxtrant~s~tF~$ p~ut 11~ , ~ ~æ
,~ lJ:,;t-',l,~' a 50C~ m~ F~ m~ 1 l l l l t ro ou 2 r~ ~ de n~ n~ r l n~ l .
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1.~ eompo~ltlon s~lon 1' ~nvent on contlenS p~r aill~ur.~ ~vanto~eusernellt des qu~ntlt~a; ~fsct~vra ~ O, ~1 r g 3~0 Jl~ t' ~u nlolns une forrn~ ~ctlve do F~ p~r mlllllltre ~u gr~mme de mblan~;e final ~F~dextr~no ~ fAt~.
L~ d~xtr~no~ oul~e~te3 ut~ ~ pour 1~ ml5c en o~uvro ~ prb~nt~ lnv~nt~on ~er~en~ d~ ~upport b 1~
ml~r~tlon ~t QU ropouplem~nt cel~ul~lr~ Ils pouv~nt ~tr~ :
lncorpor~s dan~ tout~s form~ do p~n~o~ nt~, ou ~ncorr sur des fll~ de ~uture utilis~s en chlrurE~ , d~ me~nlbr~ que 1 1~ fact~ur ~56aoci~ ~ c~ dextrcn~ ~ulf4t~ o~ f~ct~ur tout :seul pui~ lf ~u~r Yer~ los ti~ u~ ~l 1 L~3 ~cteur:s d~ c~olss~ncQ F~ utl~ d4n:; cett13 invention p~uv~nt etre d~ prodult4 n~ rolo, ~s prodult3 u:; d~ :;ynth~e~ chl~iqlle.~ ou dc3 pro ~Lt~ obt~nl~3 p4r ~e;:~
I!; techniq~es ds recombln~l~on ~ tlq~lo. Il~ p~uvent ~tr~
a' ol~lgine hum~lne ou prov~nir d' A~tre3 ~rn~lfere~ ~t non n~m~l f ~re:~s. I l n' ~t ~én~r~ler~ent p~ ~e~aslr~ d' ut l l l: 13r 1~ t'~ct~ r ~utologu~. En ~f fet, 1~ hol~ ~~ de conse~
v~tlon de 1~ ~tructllrç de~3 F~F~; ~u C~UF de l'f~olutlon, n!~1 q,~ Q~ ~t~lde~ ur le!~ prop~ t~a ~n ~lero et in ~
ln,~lqu~l~t qu' lL n' y ~ p~ d~e sp~clflclt cl' ~p~c~ pour le;.~ ~
dc~ fOr~lle3 blo~ctive~ da:3 ~ril~ E~ l~nt, orl utlll~a 1~3 ~ ,t` ~oua ~ for~n~ purlfi~e ~el~e, ou ~o ~ 30~ ~orm.3 baalq~le, ou encore un m~l4n~;e dQ:3 d~lux form~, c I ~2neoro un ~rl~5 ~U
;'~ un ~n~loé5u~ u mo~n~ 1' un61 do ~a~ fo~ ~ , L~ ropport ent rc~ s PCF~ 4clde et ~n~l~uo d~n~ ~, form~ n~ p~l~t Atr~ d~ n' lmporto quQlle v~laur ~ntt~ 1 ~ daux for~e~ pur~, Dlff~ront~ proc~d~7 do purlf'l ~lon pau~nt ~tre utll~s~s pour l~lar ce~ dcux f~rm~a~a d ~CJP ~ p~rtlr d~ . -oour~ n~turell~fi Cr~tlno. c~rv~u, h~ ~elphy~, plqlc-3nt4, r~in, ~tc. >, c~ proc~ t~nt eonn~4 t. 4y~nt 4t~ d~crit.
par dc r~ombrollx ~t0ur~. LQ m~thod~ pr ~r2~ t c~llo déçrlto pe7r ~;ou~ty ~t ~oll. d~ns; (~Bloc1r ~G7. Blophyiil, R~3.
Commun., ,~, 102-lOB ~lg~ m C~tto r ~thod~ compr~l7d un~
~5 ~topc ~on~3l~t~nt 0. trc~lt~r, pen~4nt ~n nuit, do l' ~xtr~lt t i61al.1~ ,7n ~ pr~:3t7nc~ d' ~elt~7~1 ~c~tL~ ~ ~ p~t 3, o~ccl~lan~

, !, ~' . ; ,; 1 Z~ 5 ~

~n~l tout rl-~qu~ d~ ~ontomlntlti~n vlral ~, ~t ~ ~ondulra IJne p~o-iflc~tion p~l~ chrom~to~r~phie ~ur h~ 3rlne lmmob~ e p~rlne ~eph~ro.~ HAR~1ACI~. Loo c ~ix f~rm~ oeLde ~t b~slque d~ FCF pe~vent Qln~l etre 1~o7 ~q ~ ~t f~par~4s~ nvec le.~ 4utres prott~lnl~8 OU lnd~vlduell~men , e3ve~ un ~b~r~ d~
plJ~et~ suffl!3~lnt pour atre d~b4rras3~e~ o ~u~ntlt~5*
~lgn-~lcatlv~.s d' autr~ mdt~rl~l~ con~ ~nelnt~.
~es ~nalo~ue~ ~ynth~tf que~ ~u ~0~ p~uvent att~e obtenus pnr synth~ chlmiqu~ ou pnr ds t~chnlquo~
cll333~c3u¢:~ d' ~nz~nl2rle ~n~tlqu3, t~ll 1' oxpr2!4~0n :le g~r,ea synth~tiq~es ou l' ~pr~slon ~ n~o mocl~fl~ pcr t~ z3-3 diri;~ d~ lte~ ~p~ lq ~
To~lt~a 1~ formQ:~ de FGF obt- u~n d' ~xtr~lt a tl~ul4irr~ p~r in~éni~rl~ nétlq~l~ ou p~r synth~
cnlrnlque, qul ell~:~ 41ent ou non ur~e ~tr cture modlflée, ~lr)sl qu~ le~ fr~gmenta en d~r~ t, p~ v~nt ~ro ut11s~e~
~ou- r~'~aerYe qu' elle3 4~o~ent ~ctlve;l~ bl log~uement - un te.~t ln vi~ro cl~;nm~ celui pr~po~ cl-clp ~ p~w4nt etr~
utlli~, 2 ~ 3 as ~ t i on !i~ de FOFc t~ t 4 cl~x ~ r~ 3 ~s~.J l f ~ t d~ nvellt~on p~u~nt ~tne ~ncorpor~e~ dsn~ d~ Uppvrt~
phy~1o1o;31~uem~nt ~c- ~ptab1e~ p~ur d~ ppllc~t~on~ ln v~v~, pl1c~t1on ~st une elppl~catlon loc41 , p~ vo1a e;;tenno ~ur 1~ pa~u ou 1~ co~ e, not~mm~nt pO~I ~ ~cc~l~r~r 1 clcc~trl~s~t~on d' un~ pltlie ~t 4m~}110rsr ~ qu411t~ do cett-~
~lcatri.~tion, ou ~ncc~re p~r v01~2 lnt~r ~ l~ur 1~ t or~n~3 du oorp6~, p~r ~x~mple d~no 1~ t ~ltem~nt d~ 1' uLc~ro ds 1' ~stom~ç. S~lon l~s~ type~ l!t l~u d' c~ppl lc~tlon, l~a coml~o~1tion3 Compr~n~nt 1' ~a~ocla~on ~ ~ F~F~ ~t d~
3(~ d~:;trnn~a oul~a~Q~ ~eront dlf f~r~nt~. . 1~ n~lt~ro ~ d~
3upport~ p-3ut ~trQ c~ctr~ ont v~rl~bl at d4~and ~onc du typa at llcu d' uppl~ccltion, ~t prut pt~ ~Idr~ la forln~ Jn lit~uldl~, d' un /i~,'9s4~ un~ cr~me, d' ~ ~ ~ol, ~ n tl~su ~II)p~ n~ comn~o un~ ~o~o, un tull~ ~oci~t~on:3 ~G~'3-d~xtr~neo ~ulfnt~e ~ lnvention p~R~V~ ~ ~gal~ n~; ~tr~
lncorpor~e~ ~ un~ tln~ eon~tlSu~ ~r un collos~n~, qu~l ., - . . . ~ - ~ . :: ., , :
:.

z~ z~

qu' ~n solk le typ~, ou ~ncore, comme Is~ i~ t Ci-d@~ 3, recou~n lr de~ rlls de ~utur~
~e3 forll~ulQtlons ~qu~u,soR d~ ' $nv~rltlon 1;eront o~nt~eu:~erl~nt d~s conp~sitlon~ conten r.t. d~ t~mpons et sels permettant de m~int~nlr 1~ m~l4ng~ ~u vol~ln~ 'du pl~
physlolog1 qu~ et ~u volslnc~ de 1~ for q~ lon~que~
phy31c>10s:1~ue ~olt pH de 6, ~ t~ 7, 4, ~t foree lonlq,ue ~ O, 1 ~ O, 2 M) . On peut ~Jouter ~ compolsl ~OA dl~8 ~ddlt lf8, comrn~ ~e~ nn~th~lqu~s loc~ux ~p~r ~x~ pl~ a lldoc~Ino)~
d~o 6ub~3t~nce b~ct4ric:~st~tique~ ~par e ~pl~, do~ 6el~s de s~dlum, d' l~rsent, 1QU~S d~rlY~a~ o~ t~Ol~t u~f4~1e3~1n~ e~3 produl~ t ~epti~nts, ~comm~ B~tad~n ~, deJ ~n~lblotlq~t~;
~p~r c:;~m.ple, 1~ streptomyclne), ~e~ pr t~n~ ~t~que~ ~p~r ex~ple, ln ~rum albumin~ ou l~ flbron ctin~, de m~me que de t coll~n~ta hydr~solubl~.
Une tall~ cornposltion ~qu~us~ r~nf~rm~nt ~u mo~rls un f~cteur ~CF ~ssocl~ 9 a~l moln~ un d~ tr~n~ 6ulfat~ . -hy~ro~vluble ou insoluble, p~ut ~tr0 u~ ll~o dlr~oct~n~qnt 0n solutl~n, 6tn 41~ro5tol, ell onction, en lo lon, ~n poud- ~ ou ~n 591, OU ~el~vlr d~ ~;olution pour ~tr~ ln lus~ don~ urt :;upp~rt ph~r~nacel.~tlqu~ment ou co:~;rn~tl4u~3m3nt. ac e~ptoble, t~l ~tl' 4n~1 pomm~ds, un~ crbme, un ~el de re~ n o~ un ~1 d' un~ ~
aut r~ n~t ur~, ou de 1~ t lne ou 1~ ~regn~r un ~ e ~olla~n~, un ~ ' unq ~utr~ n~tUr~, R I d' ~utres ~ul~qt~n~
~5 fol34nt ~on~tion d' éponge, un pQna~e~m~nt un ~uppore d~
p~nsement d~ recouvrement ou un biom~at~ ~ cle~vtlnt fn~orlsor dir~ct~m~nt ou ~ndlre~ement 1~ r~p~rA~ ~on tlo4iulalr2 tp~r ax~mpl~, un fll de ~ut~ro chlrur~Slc~l) ou ~l;ro ~ppllqu~
~ur d0~ flbr~ na~ur~lleo oU rynth~tlq~ ~.
"~O Pour d6!s oppli~t~or~ r 1~ I~U, lo~ ba~ de cr~m~ ou lotlon~ utilis~ trcldltSonnq Llo~r3t p~uvent ~tr~
utlli4i6~s, Comme 1~ l~nolina (Silv~d~n~ ~ M~arlon plu:~
par~t lcull~rl~mant pcur le!.5 bru~,~sJ Aquql ~or Puk~2 L~bor4tor1~0 ~;o~th Norw41k, C:onn~ctleu , l~qu~
~L' Or~l) ). Leo ~rbm~:j peuv~nt cont~n ~ 0 prot~1no~ ~p~r ~:~elnplc, ~oll~ n~ tins2, ~te. ).

, .

``` z~ 2S4 - .
L~ p~ns~m~nt. peuvent ~tre d e pono~mento cl~
toxtll~.i, tls~u~ .~ynth~tiques ou ~pong~ , o~l ~ttr~3 ~ 3 protluits n~t~rels s~rvant de r~couvrem8 t de pl~ Sp~r e~ rnple, de3 ~els de coll~ ne, cleR del~ e4~. d' orl~lne ~ni7~1a), L~ compos~.tion FGP`-doxtr~n~ ulfot~ on ~olutlon do~t pouvolr lmpr~n~r ces dlf~ n~ orma~ d~ pon)3~nts, de monl~re que le fQ~t~Jr F~F pul~ t ~ on contaet ou dlf f~lser s~ul ou e~3 o-;ie c~u d~xtt-~n~ 6u fat0 ~squ' nu:c tls~u~ clbleo. L~ co7npo91tlon ~lon l~ n ~ ntlon ~3t lo ~ppl~qu~e ~lem~nt de m~ni~ro ~ pouvol ~tr~ ~slnt4n~0 .~ur le ~ite de 1~ bl~s~ure et :sur le~ b~e r~o o~l~art~ Y~
m~lntlen de 1' hyclr~tatlon ~lon lo~ ~ee ngq~os ~e 1~ ho~m~ du m~tier, p~rt~u~l~rem~nt ~l~bo~ d~n~ le dom~ln~ d~s greff~ ~c ~ pe,~u. I.e:; p~næ~ment~ ~ec u~lf~ peuvont ~tro lr/~pr~n~ d~ 1A m-~me m~niere, ~dsorb~o u recouvrlr un ~upport n~t ul~el ou :3ynth~t lqu2.
Pou~ le~ ~ppllc~tlon~ sur 1~0 cvrn~o, 1~ v~h~cule dvlt ~trR compo.tlbl~ av~ t.ol~ranc~ cul41re~ on c~t6~r~
co~nrne ~ mp~ d' un tel v~lllcul~ pro ult commc~-cl~
:;OU 3 l e nom de ~ L~er l bu l e ~J ), l e~ t on~ l l n~
solut iVI- lsotonlq~ue:3 ~p~l~ e:;~mpl~ 40c~dron ~1~1erc~
5h~rp-Dohm~) ou de~ quivalents), ou on oro ~ou~ form~
gel forrnant un ~cran p~t~ct~ur d~ 1A c rn~. C~3 v-~h~culo.s p~uv~nt cont ~n~r ~3alomen~ dw ~e ont~ c n~orv~t*ur~ comn~,~
3 ;:hlorur~s ~ ben~yldim~thyl 41kyl ~ mol lu~ ou l' f~thyl~nQ
di~mine t~tr~ac~t~t~3 dl: sodium ~DTA).
Il peut é~ ra~nt ~r61 ~ouh~1 tlble d' lnclur~, ion~
de~ llposom~, une ~s~oclclt~on Ft;F-dox~ An~ 4Ulf~t~
hy~rosolubl~ dc 1' lnv~ntlon. C~3 llpo~ ,n~ pauve~t dtr~
qlorEs lncorpor~ d~ns le~ compo~ltlono ~:rita:~ cl~e~u,3, p~r ~x~rnpl~, cr~m~:a, pc)mm~d~o, utll~3~ ,~ llo~ qu~ s ou pour 1' iMp~ ;n~tion d~ ,~upport~, ~omm~ ~:~ pan~m~nt~.
n~ la c~i3 o~ l' on ut~ lloo d la d~ctr~neo ~ulf~te:;
lni~ol~ ~; les, '~eu~-cl p~uvont ~itro s1mpl~ ~nt a~o~ i3 a ou bicr ~ talleo 4~0clatloao p~uvont ~ro lnelusoi3 ~qn~
deo i3upporti3, ~omme d~ cr~m~, de~ ~4J ~tln~o ou d~,3 gel:3 de .~: , ' `''' ` '"'' ''' '' . .

,, '' . :. . .. ~ : , '' ;. , ,:~

;Z'lJ ~;~q.'D2(5 collr.~z~ s, ~1~ etre ~ppltgu,'~,s fii~ fl~r~ ~ynth~tlqu~
ou rlatu~ e~ ~f~ls cl~ ture?, ou l~iF ~n~r ~ upp-~rts habl.u~ls ~-~e p~n~e.~ent~ recouvr~m~n . L' lnclu~lcn de ~ s de:~tranes sulfata3 ln.~ lubles peut ~iQ ~lro p~r l~blbltlon ~/ou ~dc~lti~n d~ un~: solutlon de coll~ e~n~ ~t ~llfl~ ~tLon.
On p;:ut notamm~nt ~!ti~l~er le ~ot~3 op~ e~t31re d~crlt 4~n~; le tre-~t U5-A-4 0~0 0.~ ;u~v4nt lsquel n r~llse ~In~
co~nposltion ~,t~ lflé* ~omp~slt~ d~ns ~u~llo l~ p~rtl~ an CC`t')tACt nvec la ble~ure a~t couvert~ ~ coll~n~ r~tlcul~
~0 ~\Vf~ n ~lyco~mln~gly~n~ SI~n~ 4tant o~teflu par ,~ d 1,11 t 1 on d ud 1 t g l yc oo~ ~1 no~ 1 ye anh ~ u c 1 1 Qs~n~ ~Oa ub ~nslhmbl~ ~tant pr~ Iplt~ ou r~t1cul~ p~t~ du ~lut~.~rolddhydt~. ' Par 0111~ , co~nme ~ndlqu~ ~-dos~ll3~ le:~
;!~ C~ !rlpO~ n~ :3~1~n 1' In~nt1on p~uv~nt ~;3ol~9e~t p~ ,:s.~nt,:l ~4u~ un~ f~r~e appl$cable lc ~letn~nt p~r ~ol~
Interr*, por exemple c~.~m~ pl~tr~ ,n ~4tro-ont~rlqu~6 cu pO~ b~; lyophll15~.e.a ~nclusas ~u nan d no das z~lule3.
LA pr~pdr~tlon de~ co~po~ltl ns de tr~lt~merlt ,~
ic,~trl.~4t~0n :3e10n Ll LnV~rlt10n ~:3t, d Un~ ~n~ g~n~r41~, r ~ e ~elon de3 m~thodQra cla:3~.;lqu~ blan co~nu~3 ~n nl4u~e. L~:~ dos~$ ~ ~d~nlnl~tre~ o l~ur fr~ql~ence .sont or1~ 3 not~mtner~t :se10n 11ImpDrt~t.~ d~ l~ pl~lC.
Enflrll ~ COi~tpOi31t10lll~ 5~310 ~,' ln~/entLon kl~ou.~ent lert~ent ,3pplic~t lot~t dah~ l~ dom~lno o~m~tl~ue, pour ~m~IIor~r~ t4t d~ l~ p~au. L' ln~ttnt on ~ nc ~o~ m~n~ s ~mpo3~tlon~ co~t~tn~nt, n~ un ~uppt~ t cosm-~tlq~emerlt ~c~lpt~ , une a6~io~;14 lon pr~clt~ FCF--tran~ ~ultat~:, c~tte c~poGlt~on s~ pr~s~rltAnt not~mrnent, i~; form~ cl¢ l~tlor, ~al ou cr~t. .. ....
On d~crlr~ molnt~nortt l~;~ of ~t~ d~ d~tl-~tn~
6ulr~t~ UI~ la prot~ct~ot~ 3 1' ~itl~l ~t bLolo~l~ue d~3 r t~ ;.
L~ h,~ v~l u~ n ~1 Y~ t ~ c t l -~ t -~
h~ ue l~ 'CF3 s~2nt d4c~1te,3 d4n~ dc no~nbreuo~.
~IL>lic.~tlor~ t ~lle.3 ~ont tout~ ba- ~ olt ~r un ' , ,, ' , ' ", ' . i ' ' .1 , , , ' Z~

l~
m~.lsuro (.!e l' b~lgrrlent4t l4n ,lu n~br~ da C l~u1~3 ~nd~ p4 rl~:, d-~..e:, crol3is4nte~ C1~3 farteur6 4~10ut 4 ~u ~lieu de cultl~r~ d~ llule~, ~olt ~ur un ~ 'nt~t~on do 1' lnl:orpo~ tlon de thymldine t~ltl~e d~ ~ DIl de~ cellul~J
3t Irnul~r:~3 p~r lr~ f~cte~r d~ crol6$~ne~. D~ns 1~ u:c protocolc, ces ~u~ent~tl~n~ on~ d~p~ ,d~nt~ de 1~ d~ d~
f~ct~ur ~ jo-lté~, ~t 1' on peut ~onc et4t Lr de~ ef~ots d~e ~t cl~.~ cour~e,~ do~ r ~pon~e ~voc un 4f~ It ~xl~l dQ
~klrn~l~tl~n. P~r ~irnpllflc~tlon, on d~ lnlt IJr,e unlt~ de 1~ st in;ll~t lon conune 14 do~3e d~ f ~ct2~r d cro~3~ nc~ qui, ~,~ out ~ n ~ r~ d~ u do e~ t ur~ ~ur d~r~
cell~ cLble~, ~st cop~blo d' indulrs n~ nug~n~cSlor, du no~,br~ df~ c~llule~ c~u d~ lnco~por~tlt I d~3 thymldln0 trlt11 ~ corre6por~ nt ~ molt1~ 0%) d~ ln v~l~ur r; m~3 ~ lm~ 3 dl3 Cl5 !~ u~t.~ nt~t lon m~jur~ ~na; 1~ ~ourb~ d,~s,~
r~pOI-~;3~ C~3ttQ ,i;!~flnl~lon ~t lo r~pr~c l~tlblllt~ d~ c~:~
m~sur~s .sont expo~ 3 notan~m~nt p~ Plc l~t ~t ~oll., ~n3 ~C~lIul~r ~nd Mole~ r Blology, ;~, p~ ,~ 5-I I0 (1994~)).
A1A~1~ plu3 1~ unl~ 3t m~ntenue ~ un v41~ur ~lbl~, plu3 f~c~eur con~r~ une ~c~iYlt~ blc>lo~ q~e lmport~nt,3.

A - ~ f~ k r~ ~ d ~ u c t l ~. d,1~:3 EF.~ .d~ t ~ !~
S~ ~ e t P~ ,n s .
. . .j l~n:~ c~: ~xp~rlence~, on utl 1~8 de~ Golutlonr~-m,`-res da F:GFo, c4ntennnt 1~ FGF~ ~n :~ ILlt~on ~ un~
onr r~t~ ~ r~ t l ~n ~ ~S~ p~ r rnl l l l l l t r~, ~lno un t ~mp,~n r!h~ p~l~ta lsotoniqu~ t~B~ t ~ont~n~ e ~u p~s ~u d~xtr~no ."l~l î dL ~ tDS) 1~. 63~;3 ~Ju cdtdlogu~ SI~ ~, Jl 400 J~ ml. 1.
dc1~ u ~a~lqu~ utlll ~ vr~t ~1'Q ~ n~ bovin6 et tr~lts du c~r~ de bo~ut, aclorl 1~ p~lblIc~t~on d~ Court~
~t uol l. IiQnJ ~BlvchlM1~, 69, p~$~ '~$I I ~ 87)~.
10 ,ul ~1~ c~t t C ~iol u~ lon sont pr~ v~s ~t nl~l4n~
.3~it ~ 1 ml ~ te-~pon ~EiS ~pH 7), ~ lt ~ C~
;J~kti~ll* ~4u¢n ~Ju~t~ 4 pH ~ ~nrlron iN~, ~olt b I ~
:~o~lt~ ~N;~O~ 11ul~*, ~3u.st~e ~ pll ~), G'. C~s ~ch4ntll1t)l~ s(~nt . j ;. ' ; ' ','' ~' ` ' ';

~"'' ''' ~ ,,' , ~ ;li, ~., :; ~;,;, ~ '~,",,",~"""

Z1, ~, ~,?~`.54 lncub~e ù 2~ 'C p~nd~nt 2 h~ure~ et un 1: ~ v~m~nt d~
e~t ~t'f~l-tu~ pour le dos~ge de l~actl~ ~ blolo~l~u~.
La f l~sure 1 pr~sel~te 1~ co~ b ~os~-r~pon ~ tu ~FI,~ s~r d~ flbrobl~te.Y d~ ~ertn~ hun7~ n .tA¢1523) nde de 1~ f~ r~ I
Ab6cl~3~es: do~es ~e f~ct~ur de cr l~s~n~e (p~/ml~
~r~onn~ polJrcent4~e d~ 3tl~ulo lon 1~ : bFCP ~ DS ~ pH 7 ~ : bFGF ~ p~ 7 V : bF 5F ~ ~S ~ p~ ~
A~. ; b~OF ~ pH 9 o : bFGF I ~5 ~ p~l 2 : bFGr: ~ pl 1 2 .
~5 L' ~ugment~t~on ~' incorpor~tlo d~ thym~tlr~e tr~t~ r~pré~ent~ 1~ v~leur du nombre 9 eoupo p~r mlnute ~cprn~ obt~nue au plate~u de 1~ ceurbo d *~-r~pon~e ~u ~I:G~' selll m~lns la v~ r en epln ds thymld~ trlt~ lncorporee don6 le,3 cellule~ en ~b:~-an::e ~e FG~ et ~rmlné~ d~n3 l~
~) m~me eXp~riqnee~
Le T~ble~u l r~3ume 1~$ r~Ssull ~t8 obt~nlJ~ ~ve~
al:~t' ~t bt'GF, L' unlt~i de ~tlmulation ~ t ai~bltralr~ment dorIn~ ~ L pour 1~ 4~GI: ou le bF~F ~o c~d p~rt ln~ub~ pendont 2 ~ur~3 ~ Z~ . . . .

Tqk~
_____ ~ _____._____~___ ____________~_ ~
~_____.___.___ ___ bl;'~F ~O'C) . 9 ~1:0~ (2 ~ 0-~) S:~ 13 3~ b~qF ~ DS ~2 Ii, 20 ~) 1 ~, 5 ~FCr~
o~'OI;' ~ ) ' C ) ~ G
cl'OI~ + C~S ~2 I~, 2~)'C) ~, 5 , ~ 2 ~ _ ~
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', Z7)~ ' {~ - Etf.~t !~ ;t~n/~ f~te !!~ ~
p. ,~ u r e ~.t~i~ ~ ~ h~ ,C~' Dat)3 c~t t ~ p~rlenc6~, le ~0 pr~p~re Comm~ ~u poi.nt A ci-~e~slls, pour la forrne ~cid~, at pÆr~ recctmb~ ;on ~r~tlque pour la form~ ba~iquçl d' orl~ In~ hu~ln~, ~chet~
~upr~ de 1~ 5~clét~ A~n,~rs~hsn~ ~u Cllnl ~c~nc~ ~ P,~rl~), C'S4 Lncub~ b 4'C, ~) C, 37'C ou ~O'C p~ ~d~nt d~ érent~s p~rloul~s, en 1' Qb~C~ ou en pr~:~enc0 c ~ ~,00 ,l~z; ~e d~xtr.~ns u~. f ~ t ~, p~ d~ D~.

~L~
_~ _~__________-_____,_______________ ~

4'C 0- 37'CGO'C
___________.____________________ _ .__. ~
. 'j bFCF t ~ 4 .~nn 1 I~F~iF t = 3~ r.nn 1 1 3, 5~ ;:)O
b~'Of: ~ DS t - 30 Ir.n 1 ! I
aFGF t Y ~ ml~ l ,~FCl': k ~ 30 n~n I I ~ ~ l os~
,'O ~F~F 1- [~S t = 30 rR~ O. 4 O, ~ O, 4 bFGF t - ~4 h~Ilre:3 l I
bl;OF t DS ; ~ ~4 h@ures I 1 ~CI: I 1 ~:;F ~ , 4 t:), 4 O, ~S bFGF t ~ 7 ~ours Z !3 ~ lOO
bFCF ~ D~ t = 7 J our ~ I 1 aFGF t ~ 7 ,~ ouI~ , 5 ~ ~ lOO
~r:~F ~ ~s t - 7 ~our~ 0, 4 O, 4 3 . _ __ ~______________ Lo~ donn~ r~pport~$ d~n~e ~ tobl~oux I ~t ~
lllu.ctr~t1t l'~ff~t protectBur tr~ procur~ p~r le ~ sùr le F~t:. Aln~;l, toutQ l~ octlYSt6 blolo Iqu~ du bFGF ~t corl~e~rv~ ctpr~$ 7 Jours d' ln~uba~tlon ~ 37'C, ~l~rs~ qu' ~.n 1' ~b;s~ncr: de t)S, aucune ~ct~ t~ n~ ~t~iL d~t~ctobl~.
3~ ', , :. . . : :
. ... . .
?
.. . ... .
~, . , E~ EI~PLI~ r~' APPL~ TION IN VIVO:
p~l- l men t o l. ;
Les op~ro~lons aont réoll~e~ ~ur dt~:s r~ts W~:,t~r m~le~3 de 300 t~ 400 ~r~mme.~. Ch~qu~ exp ri~nco t3~ f fect~e sllr ~Jne st~rl~ d~ 5 ~nim~u~.

~e p~s;
On prstlq~e deux typo~ dt~ pll- e~ cut~ et~ ~ur 1 It:~ ft~ce d~rs~le, p~ol~blem~nt r4s~e, t~ r~lmt~u~.
1) I.e:~; pr~l~vements ~t~nt ef~ectu~3 p~a emportQ-p~4ce o-~punch (0,6 crnl de di~m4tl~> 3usqu'~ plsncht r rnu~culalr~.
2~ DQ3 ~C srlflc4tion.~ d~ 1 c m de long 00nt prt~tlqu~e~ eu calpel. Elle.~ n' ~f fc~cte~t que~ 1~ rt~Slon dor ~o-Spl~t rmiqu~. .
.j . . .
L~ t~t?l~et:
S~lon 1~ typ~ d~ pl41~s, le3 le~ur~3 .s~nt tr~ltee~ p~r dlff~rent~ m~lan ~ dl3 pro ~lts en ~olutioll ~l~ns du :3lrum phy~iolo~ ue t~lnponn~ ~ 5 p~ 71 4~ ~t~rllls~.
Ce~ 301utioll~ 30nt d~p-~k~ p ur 1~9 pl~ a p~r punch d~n~ un t~mpon d~ eoll~sèn~ n~; ~tc~t~ pr-~d~bcoup~ ~u:~.
"j rn~urc~ e:c~etes de 1' ~xcl~ion ~l~3ul~1r .
D~n6 le ca~ de~ ~c~rlflcation , ~ 8 pl-oduit~ ~ont d~pos~l3 dlrrCte!mqnt ;i3CUei form@ llqulda ur la pl~
I..e~ effcto de ~ 9ocl~tlc;\n F ~ <b~lqua ou ~clcl~
au un m~l~n~ ~3n ~olutlon d~ I n~ ~ ~0 ~ml~ ~t ~
d-3xtrane4 ~ulf~t6~ n ~olutlon sl~ lO0 ~ ~ I m~/nil~ 30nt ~v~lu~ et eomparlSo ~ l' actlon te ch~cu I ds~s ~on~tltu~n~s, ct)nsld~r~3 ccmn~ témoirl3 d~ r~ction ~C llh~ Olutlon de d~o:301ul:~0~, FGF, dextr4ne r~ulfut-). L DS l~te~lt ~QlU
~i~ponlbl~ chc~ S~ÇMA ~0~5 1~ r~f~r~nc e~s~3.
.i?S
., '.'.

, .. ,.

., '', ', ' . , ' ' . ' ' ' ' ' .

~l Z ~ r5 ~
, "

~ h~que s~rl~ expérlment~le d' s lm~ux ~3t ~1~c~l f L~-3 b lnt~rv~lles d~ t~mp~ d4flnls p~r p~rlo ~ de ~4 i-eurQs, ~t 1~ re~ions 1~6Se3 ~ont p~elev~e~ pour cl I~X t~p~3 d' ~tudes:
1~ un~ ~n~ly~e morphologlq~le ext~-n~ ~ ~e pl4r~ ri~ de 1~ pl~
2) ~no 6tude hlcto~oglque.

Résult~t~;
. ~1~ ~, vlyo Ç~. ~ ~ ~
bu F~F m~rqu~ rnt~o~ctlven~en~ l' ls~de I 125 ~st dépo.s~ en p~ nce ou ~n ~' 4b~ence d~ Il;tr~na~ aulf~t~a cl~ns ~n t~mpen d~ coll~ ne ~selon l~ p ~otoeol~ d~crl t par l~o~nner 1~1. et coll, d~ns ~Proc. Natl. J~C ~d. Sc (US~
pOZ~-5 'jo~-502s ~ ~9B~> )~.
L4 v~ri~tlon de l~ rodlooctlvl :1~ d~n~a le coll~g~n~
`~ irnprlSy;n~ e~t ~ppr~cl~e ~n fonct~on tu te 3np~ <f~su~rs 2).
717~L~ d~ 1~ f~, J~e Abc ls~ t emp:3 en h~3ur~
~rdonn~eY ~ 18 ra~oe~ct 1 ~t~ m~ uré~ p~
rapport ~ l~ r~dio~ctlvlt~ el' C ~lgln~
bFOF ~ DS
.,~5 coll~g~na x--- x bFO~
bF~3F
2 cm ~o l~l plol~ {
bFOI~ ~ ~S
Ln r ~dlt~ctlvlt~ ~st me~ur~ ~n~ 1 cla collt~ n~ e~ d~n6 de~ pr~l~v~DleAtl3 ~ff~ t~t41~ ~n p~ph~rle do l~ pl~c, h ~ crn de ~cllc-el, p~r un pun~h Ibquivol~nt celu~ d' c~rl~slne.

;~

2l~0~ 4 I I - E ~ ~ orp.~Qls~ SI ues ~ ~1 ~3n~ L5U~.

A) ~oie~. phr emp.~r~ pi~,; .
~) Etude morphologique t L~ ob~ervl~tlor d~ volut~on ~ ~ pl~o~ ~ 1' oeil nu perm~t de c~n~t~t~r une actlor t~ r att~ ~
1'~s~o~l~tion FG~ ~ cloxtr~n~ ~ulfQt~ ~u 14 vlt~ et la qu~l~t~ de 1~ c~c~trls~tlon super~lc~el~ ~pldcro~ tl~n lys~ du ~lllot ).
1~3 , 1 ) Apras 24 heur~s, le~ tAmpono de co3 l~n~ ~rnpr~n~
p~r e~tte ~socl~tlon ont tot~lamær ~ ~dhkr~ aux p~rols d~ 1~ pl~ie, et ne peuvent ~tr~ pr 1QV~ que p~r 1~310n des tls~u~ r~ r~s. Le3 exp~r~e ~t~tlon3 t~oin~ n~
m~nlfe~t~rlt uno ~h~r2nc~ tot~le d ~ co~ n~ qu' ~u bout d~ 3~ ~ 48 h~ur~.
2) Le~ r~plthéllo~tlon ~:~t vl~l'ole ~ ' o~ll nu ~u bout a 3~ml3 jour en pré ence de l'~ssocl~ lon FC~ ~ de:;tr~ne :iulfate, ~lo~-~ q~' ur~e Im~a~e i~enti ~le Igu~ le~ m,~ln~
d~mand~ de:3 t~mp~ d' exp~^lment~tlo ~ 7 ~.~ur~.
3) /~n~ly~ pl~nl~n~trlg~ In4~lySl~t l~nim~trlqu~ ao 1~
~urf~cc extel-n~ de~ pl~ moil~rQ ' Qbsenc~ t~,gole de r~tr~ction ~o~ t~su:~ ~n r~ n~r~l: on.
2~ L~ t~bl~aux 3 et 4 r~pp~r~on l~o moyen~e~ de cinq e~pérlencasl ln~éporldant~ conc~rn~ t:
~: L.e r~appor~ ~xprlbnb ~n pou c~rlt~ge~, d~ la 3urfacc de 1~ clc~trlco t~l ~ln ~ de L~- surf~ce de la cic~trlec tru~t~ p~a dlff~rent~
3v o~$~ci~t lons.
.Q~,: Le roppol-t du ptlrLmbtr~t ~ ~h~gu~ cic4trlc~
~ec la ~urf ace de c~3 m~m~ ~ ci~trlca~.
., ~!j '~.
.' 2i~ .54 1~
L' ~s~ocl~tlon FCF ~ dextr~n~ 8 lf~te d~n.~ le 3~pport coll~ ne ~T~ble~u 3) permee un0 clc~trl~tlon plus h~rmo~leuse, pr~,3entnnt une fo~ble r~tr~ tl.on ~es t~6suo ~102, 58'~, ~u Jour B, c~ntre 49, 27 % ~V~I: 0~ ~-Yl).
~ï De plu~ ' a~p~act clrc~lolr~ ~ la pl~le ~e eons~rv~ d' ~ut~nt ml~ux ,~u COUI~ de l~ c ~trl~otl4n que le r~pport p~rlr~tre P t~ 1~ pl~le ~ ~urf4c ~ d~ plDle exprl~ dQn~ læ T4b~e~u 4 ~ot plu~ f~Lbl . LA Y~ r dl3 C~
r~pport perm~t de cQr4ct~r~ser lel confor ~tlon ~e 1/~ pl~le 1~ en cour3 ~a cic~trl3l~t lon. L~:3 vQl6~uro o~ plU~ f~ ble~s sont enre~l st r~:3 p~r 1 ' 4~socL~t lon F~P d~xt r~ ul ~t e dan~ l¢q E;81~ de ooll~z~ne. ~in31, ~1~ J ur 8, le rCIpport P/S ~t d~ 0, 22, ~lor~ que, pou~ le FG~ ~ul, la v~eu~ e.~t de 0, 3!i~, ~en~l~lem~nt l~enti~ue ~ c~llo bt~r~u~ dor~- 193 l~ témolns sans colla~s~n~. Les ple~ t~m~ ,h~ clc~trl~en~ p~r r~pprochement de~ re~ et prennoAt w ~p~ct ov~ î orme.
Ce~l est ~3;ule~ent lllu~l:r~ d~n~ 1~3 phC :o~r~phle~ de~ f~ce4 dora~l~3 ~ nln)~u~ t r~lt~

~O~q~ B le t~
5urf~c~ d~ la pl41e t~n~oin (- ~3olutlon F lyololoP:lqlle) ~ ___ ___ .__ _ ____ Produit~ ~oll~;~nq Col~ ~3~n~! Collu~ne Col laé;~sne + I~S ~ ~ F~F ~ b~F ~ ~S
~ul 50~ g~ml I ~ sOm~ t Jours 500 ~6~ml ~ - -2 80, 7~ 1;1, 43 7 , C~ 0 3 ~0, 43 9'~, 54 1~ , 127 174, 42 g~, 79 77, 08 ~5 , I I 1 l 7, 24 3V 8 92, 409~, 14 ~ , a7:lO~, 51g ___ ________~________ _ _ .__~__ _ ~ ~ _ _ _____ _ __ 3g '..' -~: ~

,~, T~ ~.

R~ppGrt F~/~ du p~ tr~ ~e 1~ pl~le :~u 14 ~urf~c~ ~ c~,t~
pl a l ~ .
~rodult~ Gc~ g~n~ Coll~no c~ bn~
T~oln Col~ e~ b~O~ ~ ~S ~ FOF
~ns I t~i 000 ~5 5C10 ,~lg ~t ~v~r~; coll~nQ~ I ~g . -, ~ ~__ ____ _ _ _ _ O, 1~ O, Z2V,~5 C~,20 0, 19 2 ~ 0, ~10, ~5 0~ Z~ C~, t~
.~ 0, 22 0, 360, 16 0, ~'6 0, 1 4 0, 3~ 0, 20t~, t7 ~ Cl, t~
6 0, :~7 ~ 8 0, ~5 C~, 15 ~,7~ ~,4~0,39 C~,4 I .5 b L~s r~lonc~ tr-~lt~e:3 ~30nt pr l~v~o, flY~r~
lMr~rt!3n,$~ n p~f f l rl~. L' ~t ud~ hio olo~ st r~
'- ~u;~ Ollpii~ia d-~ 7 Jlm. Les; color~tlo s utL11~3 p~rM~tt~nt d~ tud~3.s topo~r~ph1qu~ hl~tochL~lque~.
l.e~ fig~ s ~, 4 7 sont d~ p oto~r~phle~ ~ro~.
d~ up~ h.~tolo~qu~3, obtenu~ ~ 4 o~r~i pour 1~
î i,~5ur~ 3, 4 5 ,Jour~ pour 1~ flsur~ 4 ~ ~ 3 Jour~ pour le,, '5 f i~,u~5 ~ 7-Flg. 3 ~ 0) r~prb~nt~ r oult~t~ ~bt~nu4 ~ rc u c411~ n~ ul ~ t ~ol n ~ ~ t ~Pl~. 4 t.; 25~) r~pr~ r~t~ le~ r ~U1~4t~ $1m~1~1res avec 1' ~ ocl~t ~or~ ~)S t PGP ~an 1~ ~o~ n~ t ~- ~F~S. 5 SX S003 repr~ nt~ un d~l 411 d~o ~ u;a ~n r~n,~r~t lon col-r~l~pord~nt 3 14 ~l~ur~t 4.
Fl~$~ 6 et 7 ~7~ 2gO) reprbsentan cl-~ r~.~ul~4t~
~:lc,~t~ tlon.~ d~ pl~le:~ obt~n~J re,~p~:tlv~m~nt ovec un~ ~Otl.Jt lon phy;ilûlozlqu~ t~o n ~t ~v~ un oc l ~ t l c,n ~FCiF~ t r~n~ sul f ~ ~.
',.'' .. . . . . . . . . ............................ ..
: . . . ` ~ .

~CV aY'X~rox T~l~copl~r 702U ,10- 4-89; 11:49 ;33 1 874 51 37 ~ , ~, S & H;~ 1 . . .
" ' 2q~.. 3¢'~i5 CO
V~n3 1~, ~xp~rler~cec ropport~ ~ n r~f~r~anc~ au;;
s 3 ~ S, on a utllls~ ~es m~e~ o~pos~tlons qu~
c~lle~ lndl~u~ u t~ble~u 4.
L~ an~ly,~ h~stolc,gique d4D~on~ r~ q~e 1' ~sl~ocLatlon ~ + VS accélbre les ét~p~!a tr~dlt10n~ lleQ de 1 elcatrlsotion d,~rrn~-~plderD~ ue et eua: Dnte 1~ qu~ de.
t~:3us reconstl~u~-~ p~r rapport ~x o~ ~ nt~tlons t,~ oin.s (~oll~3~ne sf~ul~. A~nsl, en pl S~-lnc6 du F~F +
~e:~trane, un~ colonl~t lon tr~s rapld~ ~I Jour~ de~a c~t~gorleO c~ lalre~ ~n~lronnante$ ~ 1l~obl4s~eo, sru~cul~LrC3 lls~ ;) e:,~ o~s~rv~e ~ por Sr d~s t ~ssUs ~ ln3 ;.~Lns, et, ~n partlcull~r, ~ p~rt~r du con,~onet1~ ~u pl anc h e r mus,: u l o 1 r e~ s t r ~ 3~ c ~nt .
~ an~ m~ k~mps ~f l~ure 5 , une n~o4n~iea~en~sQ
1~ perMet ~u tLss~- en f~r.~atlen d' ~tre co on~ p~r une d~.nslt~
t~ for.,~ de capill~ire;; ~an~sulns ~d~ l~n~ p~r le ~hlffre ct~ r~fbrence 10 ~ur cett~ fl~re), d~ll 1~; t~s.su:~ en r.~ n~r~Slon dk~ign~s par le ehlffr~l d r~fkrenc~ 11. /~u L~ou~ dc ~ ~our:~ ~contr~ 5 h ~ pour le~ t~oin~
.0 r~plth~l ~6~t ~on cngagke ~ partlr t~ 1 ~pldeeme d~ re~
J~ 1~ pl~lc arrive ~ affronte~ent. L' p~der~n~ est S,;,~t,31em~nt réor~an~s~ ~3t il pr~entQ u ~ d~nslt~ norm~l~
~f.3u~-e ~, 4~1ne J~r~ cor~.p~otlveo~ent ~,IX tg3toln~t 4 1 d~n~lt~ c~llul~ b,~uco~p plu~ f~l ~ re 3 ~,5 5~.ne ~our~. Ce~ meme3 l~lu~tr~tlor~ts r ~ nt 1' ~b~nce d~
r~tr~t~on d~s bor~s dQ 1~ plzL~ powr ~t8 punchs ~t-~lt~:7 p~r l'assocl4tlon F~F ~ D5, contr~lrem~ne ux t~olns qul C~th~ 3nt pat- r~tr~ctlon le.~ tls~u3 exc 8~.
La clc~tr~sation d~ plala~ b~onue~ p~r scarlflcatlon ~t ~valu~e p~r u~e ~tud hlotclo~lqu~
.3ffe~tu~ 5 Jour3 ~pr~s ~'op0ratlon. ct traltQmer,tt con~l3te 2n un~ ~eule ~ppllc~t ion top~ue ~tJ nl ~o~t d~ 1~ le~lon l~a - m~m~ de l'opkt~~tlon. L~s r~sult~ .o ~ont pr~ent~r~ ~u~
1~5 tl3ur~.~ 6 et 7 c~u$ mont~nt le:a tl ~iiu~ de 1~ p~ y~nt ;~5 recu un~ s-~lutlon phyJ.lolo~lqu~ t~mo~ ~ r~ t 1~ aJo~ t Ivn d~ b~GF re,:om~1n~nt ~ de~ ;r~n~ ~ulf~e <~ n,~

, .

R~V ~r:x~rox -lel~copler ~lu~u ilU~ 51 ;33 1 ~74 51 37 ~ q, S & H:#

Xl .r:ri~ ~t 5~ e cle:~tr~n~ ,ulf~te pD ~ ) pour 1 r L ~r u ~ ~l '.' .
' 1 e ~ t ~ n-~t er .~ ue l a présenc de 1 ' a~scc S ~ t l Gn lndui~ 1 ' er.clench~ment de:a mkcarilsme3 c cntrlciel~ qui ~etnblent totnlem~nt t~rminé3 au 3~n~e Jo r ~uiv~nt 14 bl~:3sur~ ure ~). L.' ~plder~e p4r~P:i ~aent recoR~t ltu~
~,urn~ont e un ~erme ~ns~, prS~nt~n~ W~l~ orgMnl~t lon 1r~dl:,cerna~1e des tlssu3 envlronnDnt . ~n r~v~nch~
cl-~atri~tlor~ ~u té~l~oln Cflgur~ 6~ t ~r3 las o~s t~ 6 'a de t~mp~ n~chevee. L' ~pld~r~ plu3 1~ ~ ot p~r~tlell~-ment r~con~tltu~ t le denP~ s~u~;-Joc~ t pr~ente un~
.,lt~ ~r~3 ldche et un~ ~r~nl ~t~or no~hlclu~ c de., c e11~ n~c l~os~s.
L' ~ocidtton ~SF + dextrun~ ulf~t~ pr~nt~
: t ca~.r,rn~r un pui.;~ t a~,r~nt c~ trls~nt In I ~ cc;~l~r~n- .~' une ~,3r; ~ r,~r~sus nutllr~l~ rt~ r~tlf , ~t per.~-3~t4nt ~' outr~ p~rt une qur31Lt~ accru~ d~ 1~ C cotrl~otlon p~r ,s~n- a ;3-~ tout F,h~n~m~n~ de r~trac~l I~ b unq It~obili:~atlon r~pld~ -J~, dlffér~nte3 c~t ~orl~s c~liull~lr~:, n~-c;~ .;,1r~ ~ la r~st~ur~t'on ti~sul~lr ~.
P.~ur mie~ 1 l l ust r~r 1 ' obJ~2t o prb~ent o irr~nt, ~ n, ,~n ~ en ~cl~lr~ m~l~t~n4nt u,21q~ n)pl~ e : .
l:r~ tL;~.rl~ Ji r:e siont en ~uc~no f4~; i~ de$tlnS3 ~ ~n llrnltsr 1~ p~r;~.
;~.'i G, '.~"r~ i p l~ r ~ p~ r a ~on p '~ c r em~
~n pr~por~ la composit~on su v-nte:
F~F ., ., ................ , ..... .. ,, .. ,, .. , 10 )I~, ~O !::ax~r4ne ~ul~t~ ~n' P5660 .~u c~4 42~u~ 51~ns) . ~O m~
C~rl~oxy~,~th)~l c~ lo~ .. ............. '`. 5 ~,~
ED U PUr 1fi~ :st~r11* ~t ~pyr~ n~a ...... 1~ ml ~n ot~tlent .~insl un~ ~r~ma q e 1' on ~ppllqu~ rT~rl~lt) ,. ct ~iolr ~,ur ur~3 pl~l~ dq Syp~: sci~r~Lc tLon, our un r4t. ~n t ;~ ur.e~ trl~ ,3tlc.~n ~pr~3 3 ~OUI~ c~ traltornl~nt.

`: . , ', , ' ~ ,,.' ,;,. , ', ' ,. .,. ,, ' :~, .

RCV B':Xerox T~l~copi~r 7~20 ;10- 4-as, 11:52 .33 1 ~74 51 37 ~ C., S ~ H:# 3 r 2;1;

6.~
r,,~!~r~ r. ?. P~ ~.p.~ ,r~ Jr~ n~m.~
~ ~ s~pp~rt ue~ c,t un fll ~ coll~ne ~:~.~ti.: te rlU~ S (i~ S.~cl~t~ "F~ t~C~ L~n) t;~ rllm ~t, i:n~rC3rl~ par ~dsorptlerl pa~s~v~3 du m~ll ~se FGF-d~xtr;~ne !i 3ulf~t~w dPwn~ prepol tlons s~lv~n~
Fr,F .... ~ ,,,,, ....................... , .. 10 ,u, ~e,;tran~ ~ulfat~ ~n- ~5~50 ~u catal 3aSu~ 51zm~ O
~al~2. 1~ J.~l de s~ru~ physlologlqu~ ~t~ lo ~t ~pyr~g~
r~ fblt lr~cuber p~n~nt 3~ ~lnute.a ~ 4~C. I.e p~n~ nt obtenu, d~,eupabl~ ~ ' a forn~e ~ l a pl~ t nsu1,t~a sc~ eu~
v~ d.~ empaqu~e.
Il p~t ~Sr~ elppl1q~ a.~ ce:~ ' yl~r4~ion~
L,rOlur~3s, d* c~upure.~ et de plal~, prol ~nd~.
F.~ t,~l ,r. ~~ r~ n f ll ~ ~
L~ rr.~ e pr~par~t lon qu~ cl-~ s$u~, 41n~: oua le tnr5;n~ me:!~ op~ratoire, p~u~nt servir ~ impr~gner un utur~ c~lrur31ce~1 ~t~;F~ ~ehlcon - V1cl yl E~VZ). L~ fll .
~7 iutrul-L ot~tenu e:jt utilis~bl~ ~n chtru~ ~o.

15l~l.E ,4: Fl ~ r~tl~n, ,~' un .411~r~
On pr~p~r~e 13 compos' ~ I~n su vunte;
Y~.~` .. , .,,,,, .,,,,,,,,,,,, .............. ~ 0 r.3 D~:~tran~ 6ulfi~t~ ~n' D5650 cu C~ltA c13ue S~.sm~) . 150 L~rrn~3 ~rtlfici~ oe .......... ............. 3 ml 011 ~ff~ctu~ In rn~l~nge p~ r~ lyophlll~tiorl, pu~ n 4Jol~tr: 3 ml d' e~u purl~i~e :~t~ llo apyr~ ou cnt d~ I'em7p1ci.
Le coll.~ri3 a.;.t 4ppliqu~ ~nx lcts c~$ d' ul~ær,~L ion ~-7 1~l .orn~e, 4 rals,~n de ~euY. ln~tlll tl~n$ p~r ~our.

'~5

Claims

1 - Composition comprenant l'association d'au moins une forme active d'un facteur de croissance de la famille FGF et d'au moins un dextrane sulfate stabilisant l'activité biologique de FGF.

2 - Composition selon la revendication 1, caractérisée par le fait que le dextrane sulfate utilisé est un dextrane sulfate hydrosoluble, un dextrane sulfate insoluble en milieu aqueux, ou un mélange des deux.

3 - Composition selon la revendication 2, renfermant au moins un dextrane sulfate hydrosoluble, caractérisée par le fait que le ou les dextranes sulfates sont présents à une concentration de 0,1 µg à 50 mg par millilitre de mélange final.

4 - Composition selon la revendication 2, renferment au moins un dextrane sulfate insoluble en milieu aqueux, caractérisée par le fait que le ou les dextranes sulfates sont présente à une concentration de 0,1 µg à
500 mg par millilitre ou gramme de mélange final.

5 - Composition selon l'une des revendications 1 à
4, caractérisée par le fait qu'elle renferme de 0,01 ng à
300 µg d'au moins une forme active de FGF, par millilitre ou gramme de mélange final FGF/dextrane sulfate.

6 - Composition selon l'une des revendications 1 à
5, caractérisée par le fait que le FGF est un FGF purifié
sous ses formes acide ou basique, ou un mélange des deux, ou encore un dérivé ou un analogue d'au moins l'une de ces formes.

7 - Composition selon l'une des revendications 1 à
6, caractérisée par le fait que l'association FGF/dextrane sulfate est incorporée dans des supports physiologiquement acceptables pour des applications in vivo.

8 - Composition selon la revendication 7, caractérisée par le fait qu'elle constitue une formulation aqueuse, contenant des tampons et sels permettant de maintenir l'association FGF/dextrane sulfate au voisinage des pH physiologiques et au voisinage de la force ionique physiologique.

9 - Composition selon l'une des revendications 7 et 8, caractérisée par le fait qu'elle renferme des additifs, comme des anesthésiques locaux, des substances bactériostatiques, des produits aseptisants, des produits sériques, ou un collagène hydrosoluble.

10 - Composition selon l'une des revendications 8 et 9, caractérisée par le fait qu'elle est placée sous une forme directement utilisable pour une application sur la peau, comme en solution, aérosol, onction, lotion, poudre, gel.

11 - Composition selon l'une des revendications 8 et 9, caractérisée par le fait qu'elle est incluse dans un support pharmaceutiquement ou cosmétiquement acceptable, tel qu'une pommade, une crème, un gel de collagène, un gel d'une autre nature, ou de la gélatine ; qu'elle imprègne un gel de collagène, un gel d'une autre nature, ou une autre substance faisant fonction d'éponge, un pansement, un support de pansement de recouvrement, ou un biomateriau devant favoriser directement ou indirectement la réparation tissulaire, tel qu'un fil de suture chirurgical ; ou qu'elle est appliquée sur des fibres naturelles ou synthétiques.

12 - Composition selon l'une des revendications 8 et 9, caractérisée par le fait qu'elle se présente sous une forme applicable sur la cornée, en collyre ou en gel destiné
à former un écran protecteur de la cornée.

13 - Composition selon l'une des revendications 8 et 9, caractérisée par le fait qu'elle est incluse dans des liposomes.

14 - Composition selon l'une des revendications 8 et 9, caractérisée par le fait qu'elle se présente sous une forme applicable localement par voie interne sur les tissus et organes du corps, par exemple comme emplâtre gastro-entérique ou poudres lyophilisées, incluses ou non dans des gélules.

15 - Utilisation de la composition telle que définie à l'une des revendications 1 à 14, comme agent thérapeutique, en cicatrisation et régénération tissulaire.

16 - Utilisation de la composition telle que définie à l'une des revendications 1 à 14, comme agent cosmétique, pour améliorer l'état de la peau.