CA3164351A1 - Procede d'obtention d'un extrait aqueux de lavande, compositions comprenant un tel extrait et leurs utilisations cosmetiques - Google Patents

Abstract

L'invention concerne un procédé d'obtention d'un extrait aqueux de lavande enrichi en petits ARN d'une longueur d'au maximum 150 nucléotides, en sucres, en composés phénoliques, en acides organiques et dépourvu d'ADN, obtenu par le procédé suivant: on met en présence les parties aériennes de lavande dans de l'eau; on ajoute de l'acide phytique à un pH compris entre 10 et 11; on ajuste ensuite le pH du mélange obtenu à une valeur comprise entre 6 et 8, on purifie le mélange obtenu. L'invention concerne également des compositions cosmétiques comprenant un tel extrait et leurs utilisations cosmétiques pour protéger la peau des agressions externes et de l'oxydation, lutter contre les signes du vieillissement cutané, augmenter la photoprotection, éclaircir la peau, améliorer l'hydratation, renforcer la fonction barrière, apaiser la peau ou améliorer les mécanismes biologiques associés à la réparation de la peau pendant la nuit.

Description

Description Titre de l'invention : PROCEDE D'OBTENTION D'UN
EXTRAIT AQUEUX DE LAVANDE, COMPOSITIONS
COMPRENANT UN TEL EXTRAIT ET LEURS UTILISATIONS
COSMETIQUES
Domaine technique [1] L'invention concerne le domaine de la cosmétique et plus particulièrement des ingrédients actifs d'origine naturelle entrant dans la préparation de formulation cosmétique pour améliorer l'aspect de la peau ou la protéger.

[2] L'invention concerne un procédé d'obtention d'un extrait aqueux de lavande ainsi que l'extrait enrichi en petits ARN, en sucres, en composés phénoliques, en acides organiques obtenus par le procédé, les compositions cosmétiques comprenant de tels extraits et leurs utilisations cosmétiques pour le soin de la peau, du cuir chevelu et des phanères et plus particulièrement pour protéger la peau des agressions externes et de l'oxydation, lutter contre les signes du vieillissement cutané, augmenter la photoprotection, éclaircir la peau, améliorer l'hydratation de la peau, renforcer la fonction barrière, apaiser la peau ou encore pour améliorer les mécanismes biologiques associés à la réparation de la peau pendant la nuit.
Arrière-plan technique de l'invention

[3] Les plantes du genre Lavandula, communément appelées lavandes, forment un groupe de 47 espèces. Parmi les espèces les plus connues et utilisées on trouve Lavandula angustifolia, aussi appelée lavande vraie, une espèce sauvage originaire de Provence (sud-est de la France), ou encore le lavandin, un hybride issu du croisement de la lavande vraie et de la lavande aspic.

[4] La lavande vraie est largement utilisée pour la production d'huiles essentielles en Europe, en Afrique du Nord, au Moyen-Orient et en Asie, en particulier pour l'industrie du parfum.

[5] L'huile essentielle (HE) est généralement obtenue par hydrodistillation.
Les fleurs préalablement séchées sont soumises à un courant de vapeur d'eau qui entraine les constituant volatils ou solubles puis est ensuite recondensé pour obtenir un hydrolat (ou eau florale) et un surnageant comprenant les parties lipidiques de la plante et constituant l'huile essentielle.

[6] Les HE de lavande sont très parfumées et comprennent majoritairement des monoterpènes volatils comme le linalol et l'acétate de linalyle. Dans l'HE de lavande vraie, tous deux sont présents à environ 30%. L'HE de lavande est particulièrement reconnue pour ses propriétés sédatives, antalgiques, analgésiques, anti-inflammatoires, antiseptiques et antibactériennes. Elle est également antispasmodique et décongestionnante et indiquée pour apaiser les affections cutanées et favoriser la cicatrisation. L'HE de lavande est également indiquée pour améliorer les troubles du sommeil et les tensions diverses (anxiété, stress, etc.).

[7] Les eaux florales de lavande contiennent moins de quelques pour cent de composés volatils organiques semblables à ceux de l'huile essentielle, ainsi que les composés hydrosolubles de la plante. L'eau florale a les mêmes propriétés que l'huile essentielle de lavande, mais plus atténuées à cause des concentrations plus faibles en composés terpéniques.

[8] L'utilisation très limitée en cosmétique des huiles essentielles et eaux florales de lavande est en partie due à la présence majoritaire de molécules terpéniques connues pour leurs effets irritants sur la peau. Le linalol a par exemple été
reconnu comme potentiellement allergisant et l'utilisation d'huile essentielle de lavande est déconseillée aux femmes enceintes et aux enfants de moins de 12 ans.

[9] La plupart des autres méthodes d'extraction de lavande décrites dans l'art antérieur utilisent des solvants organiques de type apolaire qui permettent d'extraire principalement les composés odorants volatiles (CN10338583, JP11199469) ou un fluide supercritique (KR2015042999). Dans ce dernier cas, l'extrait obtenu est riche en polyphénols et flavonoïdes, mais ne contient pas d'autres composés d'intérêt comme les acides aminés, les acides organiques ou les protéines. De plus, les acides phénoliques ne sont pas extraits par ce type de technique, en effet ces molécules sont principalement extraites dans un solvant polaire et idéalement avec de l'eau.

[10] Les consommateurs de produits cosmétiques souhaitent utiliser des formules aussi naturelles que possibles, tout en présentant une efficacité aussi importante voire meilleure que les produits synthétiques.

[11] Malgré les différents produits cosmétiques anti-âge déjà sur le marché, le besoin de nouveaux ingrédients cosmétiques efficaces d'origine naturelle est de plus en plus fort.

[12] Un problème que se propose de résoudre l'invention est de proposer un nouvel extrait aqueux de lavande répondant à l'exigence du marché cosmétique actuel concernant les critères de naturalité et présentant néanmoins une efficacité biologique remarquable.

[13] Un autre problème que se propose de résoudre l'invention est de proposer un nouvel extrait aqueux de lavande ne représentant pas les défauts des extraits actuellement connus, à savoir une forte odeur, une instabilité des HE dans les formules pour application topique, ou encore un caractère irritant ou allergénique due à la présence de molécules terpéniques telles que le linalol.

[14] Un problème que se propose encore de résoudre l'invention est de proposer un nouvel extrait aqueux de lavande enrichi en composés connus pour leur efficacité sur la peau comme les petits ARN, les sucres, les composés phénoliques et les acides organiques.

[15] Les inventeurs ont développé un nouvel extrait de fleur de lavande spécifiquement enrichi en petits ARN, en sucres, en composés phénoliques et en acides organiques, et ne présentant pas les inconvénients des procédés de l'art antérieur cité, comme par exemple l'utilisation de détergents et de solvants potentiellement toxiques en cosmétique.

[16] L'extrait ainsi obtenu peut être utilisé en cosmétique pour le soin de la peau, du cuir chevelu et des phanères et plus particulièrement pour protéger la peau des agressions externes et de l'oxydation, lutter contre les signes du vieillissement cutané, augmenter la photoprotection, éclaircir la peau, améliorer l'hydratation de la peau, renforcer la fonction barrière ou encore apaiser la peau.
Résumé de l'invention

[17] L'invention a pour premier objet un procédé d'obtention d'un extrait aqueux de parties aériennes de lavande, comprenant les étapes suivantes:
a) on met en présence les parties aériennes de lavande avec de l'eau ;
b) on ajoute de l'acide phytique à une concentration comprise entre 1 et 10 mM

dans le mélange obtenu en a) à un pH compris entre 10 et 11 ;
c) on ajuste ensuite le pH du mélange obtenu en b) à une valeur comprise entre 6 et 8;
d) on purifie le mélange obtenu en c) de manière à éliminer la matière végétale solide résiduelle et obtenir un extrait brut aqueux purifié ; et e) on contrôle le pH et on le réajuste si nécessaire à une valeur comprise entre 6 et 8, préférentiellement entre 6 et 6,5.

[18] De plus, l'invention a pour deuxième objet un extrait aqueux de parties aériennes de lavande enrichi en petits ARN d'une longueur d'au maximum 150 nucléotides, en sucres, en composés phénoliques et en acides organiques, dépourvu d'ADN, susceptible d'être obtenu par le procédé de l'une des revendications 1 à 5, caractérisé en ce qu'il comprend en poids du poids total de l'extrait, 10 à 30 g/kg de poids sec, contenant 2 à 10 g/kg de sucres, 100 à

mg/kg d'acides organiques, 500 à 2000 mg/kg de composés phénoliques et 40 à
200 mg/kg d'ARN de petits poids moléculaires d'une longueur d'au maximum 150 nucléotides.

[19] L'invention a pour troisième objet une composition cosmétique comprenant, en tant qu'ingrédient actif, une quantité efficace de l'extrait de l'une des revendications 6 ou 7, et un milieu physiologiquement acceptable.

[20] L'invention a pour quatrième objet l'utilisation cosmétique de la composition de l'invention, pour le soin de la peau, du cuir chevelu et des phanères, plus particulièrement pour protéger la peau des agressions externes et de l'oxydation, lutter contre les signes du vieillissement cutané, augmenter la photoprotection, éclaircir la peau, améliorer l'hydratation de la peau, renforcer la fonction barrière, apaiser la peau, ou encore pour améliorer les mécanismes biologiques associés à la réparation de la peau pendant la nuit.
Brève description des dessins

[21] L'invention et les avantages qui en découlent seront mieux compris à la lecture de la description et des modes de réalisation non limitatifs qui suivent, illustrés au regard des figures annexées dans lesquelles :

[22] [Fig. 1] Caractérisation des acides organiques par analyse HPLC-MS

[23] [Fig. 2] Analyse des ARN de petits poids moléculaires par le Bioanalyseur 2100. A: extrait de lavande obtenu selon le procédé de l'invention - B:
extrait conventionnel de lavande.
Description détaillée de l'invention Définitions

[24] Tous les termes utilisés dans la présente description ont le sens le plus largement connus sauf mention contraire. Pour les besoins de l'invention les termes suivants sont définis comme suit :

[25] On entend par lavande toutes les espèces du genre Lavandula, ainsi que leurs hybrides (tel que le lavandin).

[26] On entend par parties aériennes les tiges et fleurs de lavande. Les graines sont comprises dans les parties aériennes au sens de l'invention.

[27] Dans le cours de la présente description, les termes parties aériennes et fleurs seront utilisés indifféremment pour désigner les fleurs et les tiges les plus fines portant les fleurs.

[28] Par petits ARN ou ARN de petits poids moléculaires , ou petits ARN
d'une longueur d'au maximum 150 nucléotides on entend des ARN (acides ribonucléiques) non codants, de petit poids moléculaire, d'une longueur d'au maximum 150 nucléotides, tels que tous types de petits ARN non messagers, simples et/ou doubles brins, par exemple les micro-ARN, les ARN interférents, les introns, les petits ARN nucléaires ou encore tout fragment d'ARN.
L'analyse par électrophorèse montre que les petits ARN présents dans l'extrait de lavande de l'invention ont des poids moléculaires variés compris approximativement entre 30 et 150 nucléotides.

[29] Par acides organiques on entend les acides a-hydroxylés (ou AHA), c'est-à-dire des acides carboxyliques dérivés de sucres de fruits ou de plantes, tels que les acides glycolique, malique, citrique, tartrique, succinique et uronique.

[30] Par composés phénoliques (ou polyphénols) on entend les molécules d'origine végétale qui possèdent un cycle aromatique portant un ou plusieurs groupements hydroxyles, tels que les acides phénoliques, les flavonoïdes ou leurs dérivés. Les composés polyphénoliques sont reconnus pour être de puissantes molécules antioxydantes.

[31] Par sucres on entend les monosaccharides et plus particulièrement le glucose et le fructose ainsi que les oligo et polysaccharides.

[32] Par phytomolécules d'intérêt , on entend l'ensemble des molécules présentes dans l'extrait de lavande de l'invention et notamment, les petits ARN
d'une longueur d'au maximum 150 nucléotides, les sucres, les composés phénoliques et les acides organiques.

[33] Quand une gamme de valeur est décrite, les bornes de cette gamme doivent être comprises comme incluant explicitement toutes les valeurs intermédiaires de la gamme. Par exemple, une gamme de valeur comprise entre 1% et 10% doit être comprise comme incluant 1 %, 2 %, 3 A, 4 c>/o, 5 %, 6 A, 7 %, 8 A, 9 A, et %, ainsi que toutes les valeurs décimales entre 1 A et 10 %.

[34] Les valeurs numériques en pourcentage sont des pourcentages en poids, c'est-à-dire le poids d'un composé par rapport au poids total du mélange envisagé, sauf spécifié autrement.

[35] Les compositions décrites dans la présente demande peuvent comprendre , consister en ou consister essentiellement en , les composés essentiels ou les ingrédients optionnels.

[36] Consister essentiellement en signifie que la composition ou le composant peut inclure des ingrédients additionnels, mais seulement si les ingrédients additionnels ne modifient pas les caractéristiques de bases ou les nouvelles caractéristiques de la composition ou de l'utilisation décrite dans la présente demande.

[37] Un milieu physiologiquement acceptable désigne un véhicule adapté
pour une mise en contact avec les couches externes de la peau ou des muqueuses, sans toxicité, irritation, réponse allergique indue et similaire ou réaction d'intolérance, et proportionné à un rapport avantage/risque raisonnable.

[38] Par application topique on désigne le fait d'appliquer ou d'étaler l'extrait aqueux enrichi en petits ARN d'une longueur d'au maximum 150 nucléotides, en sucres, en composés phénoliques et en acides organiques selon l'invention, ou une composition le contenant, à la surface de la peau ou d'une muqueuse.

[39] Peau désigne la peau du visage, notamment le contour des yeux et la bouche, le nez, le front, le cou, les mains, mais aussi la peau de l'ensemble du corps.

[40] Cuir chevelu désigne la peau recouvrant le crâne, incluant les follicules pileux et les espaces cutanés inter-folliculaires.

[41] Phanères désigne chez les produits des follicules pileux (cheveux et poils) ainsi que les ongles, riches en kératine

[42] On entend par renforcer la fonction barrière que les propriétés de protection de la peau vis-à-vis des agressions extérieures (radiations UV, lumière visible ou infrarouge, pollution, microorganismes, etc.) sont améliorées.

[43] On entend par apaiser la peau diminuer les réactions d'irritation qui se manifestent par une sensation d'inconfort, pouvant s'accompagner de rougeurs.

[44] Eclaircir la peau signifie diminuer l'intensité de la couleur de la peau liée au contenu en mélanine de l'épiderme, soit de manière homogène, soit de manière localisée en agissant sur des désordres pigmentaires, tels que les tâches de senescence ou lentigo séniles.

[45] Par quantité efficace on désigne la quantité minimum d'extrait selon l'invention qui est nécessaire pour obtenir au moins une des activités biologiques recherchées, en particulier pour présenter une activité antioxydante vis-à-vis des espèces réactives de l'oxygène, augmenter la mélatonine ou diminuer la mélanine, ou tout autre marqueur biologique étudié, sans que cette quantité
soit toxique.

[46] Par hydratation de la peau , on entend le contenu et la répartition en eau des couches supérieures de l'épiderme.

[47] On entend par amélioration de l'hydratation cutanée , toutes améliorations des modifications de l'aspect extérieur de la peau dues à la déshydratation comme, par exemple, la sécheresse, les tiraillements et l'inconfort, que cet état soit lié à des facteurs internes ou externes, tels que des conditions environnementales défavorables.

[48] Par signes du vieillissement cutané on entend toutes modifications de l'aspect extérieur de la peau dues au vieillissement comme, par exemple, les rides et ridules, les crevasses, les poches sous les yeux, les cernes, le flétrissement, la perte d'élasticité, de fermeté et/ou de tonus de la peau, mais également toutes modifications internes de la peau qui ne se traduisent pas systématiquement par un aspect extérieur modifié comme, par exemple, l'amincissement de la peau, ou toutes dégradations internes de la peau consécutives à des stress environnementaux tels que la pollution et les rayonnements solaires incluant les UV.

[49] Par signes du vieillissement cutané on entend également les désordres pigmentaires tels que le lentigo sénile ou lentigo solaire.

[50] Par agressions externes on entend les rayonnements solaires, incluant la lumière visible, les rayonnements UV et infrarouges, la pollution, pouvant provenir de l'atmosphère ambiante à l'extérieur ou à l'intérieur des habitations et incluant des particules de différentes tailles (10 pm pour les PM10, 2,5 pm pour les PM 2,5, ou inférieur à 100 nm pour les particules ultrafines) ainsi que plusieurs éléments chimiques (composés organiques volatils, hydrocarbures aromatiques polycycliques, métaux lourds...).

[51] On entend par améliorer l'aspect de la peau que le grain de la peau apparaît plus fin, la luminosité plus intense et le teint plus homogène.

[52] II est bien entendu que l'invention concerne les mammifères et plus particulièrement l'être humain.
Procédé d'extraction

[53] Les protocoles d'extraction des acides ribonucléiques (ARN) classiquement décrits utilisent des solvants inadaptés à un usage cosmétique (Zumbo, P. 2014 "Phenol-chloroform Extraction", 2014). Ces méthodes visent à obtenir des acides nucléiques (ARN ou ADN ou petits ARN) complètement purifiés, c'est-à-dire exempts de toute autre molécule d'intérêt tels que les métabolites secondaires, vitamines, sucres, peptides, etc. qui peuvent avoir des effets bénéfiques pour la peau et présentent donc un intérêt cosmétique.

[54] On connait également le document FR2831168 qui décrit un procédé
d'obtention d'un extrait de plante riche en acides nucléiques (ADN et/ou ARN).

Le procédé utilise des enzymes cellulolytiques.

[55] On connait encore de l'art antérieur les documents de brevet EP1723958 et W003101376 qui décrivent une composition pour application topique comprenant un oligonucléotide d'ARN double brins de synthèse d'une longueur de 12 à 40 nucléotides, de séquence connue ayant une fonction de siARN ( short interfering ).

[56] On connait encore le document FR 1502361 (également publié sous le numéro W02017084958) qui décrit un procédé d'obtention d'un extrait aqueux de plantes, enrichi en acides ribonucléiques (ARN) de petit poids moléculaire, pour préparer des compositions cosmétiques. Le procédé utilise de l'EDTA à une concentration comprise entre 2 et 15 mM.

[57] L'utilisation d'acide phytique au lieu de l'EDTA présente les avantages suivants : Contrairement à l'EDTA, l'acide phytique est une molécule naturelle présente dans l'enveloppe des graines, comme les céréales et les légumineuses.

De ce fait, l'utilisation d'acide phytique permet d'obtenir un extrait de lavande 100 `)/0 d'origine naturelle tout en maintenant une bonne efficacité
d'extraction des phytomolécules contenues dans la plante. L'efficacité d'extraction des petits ARN
ainsi que celles des autres composés présents dans les fleurs de lavande tels que les sucres, les composés phénoliques, ou des acides organiques comme l'acide tartrique, malique ou citrique.

[58] L'invention a ainsi pour premier objet un procédé d'extraction mis en oeuvre pour l'obtention d'un extrait aqueux des parties aériennes, séchées ou fraîches de lavande.

[59] Le procédé d'extraction de l'invention permet d'obtenir un extrait riche en phytomolécules d'intérêt cosmétique tels que les petits ARN d'une longueur d'au maximum 150 nucléotides, les sucres, les composés phénoliques et les acides organiques, en évitant l'utilisation de solvants qui ne sont pas considérés comme des solvants cosmétiques.

[60] Le procédé de l'invention présente un impact réduit sur l'environnement.

[61] Dans une première étape a) du procédé selon l'invention, on mélange les parties aériennes de lavande avec de l'eau. L'eau utilisée est une eau distillée, déminéralisée ou encore une eau riche en sels minéraux et/ou oligo-éléments.
L'eau préférentiellement utilisée est de l'eau distillée.

[62] De préférence les parties aériennes de lavande sont les fleurs de lavande et les petites tiges portant les fleurs.

[63] De préférence l'espèce de lavande utilisée est Lavandula angustifolia ou lavande vraie.

[64] De préférence les parties aériennes de lavande sont sous forme sèche.

[65] Préférentiellement, les parties aériennes de lavande sont broyées sous forme de poudre avant d'être mise en présence d'eau dans l'étape a). Le broyage les parties aériennes de lavande est une action mécanique qui permet une meilleure extraction. Le broyage mécanique pour obtenir la matière végétale sous forme de poudre, suivi d'une lyse alcaline en présence d'acide phytique favorise la complète déstructuration des membranes cellulaires et notamment de la membrane nucléaire. Préférentiellement, les parties aériennes de lavande préalablement broyées sous forme de poudre, sont mélangées avec de l'eau, à
l'étape a) dans un rapport matière végétale / eau de 3 à 20 ')/0 en poids/poids, plus préférentiellement dans un rapport entre 3 et 10 %, par exemple dans un rapport de 3 %, 5 % ou 10 % (poids/poids).

[66] On ajoute ensuite dans une étape b) de l'acide phytique dans le mélange obtenu en a). Le pH à cette étape doit être basique, à une valeur comprise entre et 11 et doit donc être ajusté, si besoin, par l'ajout de soude (NaOH). Lors de l'étape b) il est essentiel que le pH soit basique, compris entre 10 et 11. De préférence, le pH est ajusté à une valeur comprise entre 10,5 et 11. En effet, ce niveau de pH, associé à l'action de l'acide phytique, provoque la déstructuration de la membrane cellulaire, y compris la membrane nucléaire, la lyse des cellules et la dénaturation de l'ADN (les 2 brins de la double hélice sont séparés).L'acide phytique fragilise et déstructure les membranes pecto-cellulosiques des cellules végétales en séquestrant par complexation les ions divalents tels que les ions calcium qui forment des ponts ioniques entre les molécules de pectines entourant les microfibrilles de cellulose. Ceci a pour conséquence de favoriser la libération du contenu cellulaire au cours de l'extraction. L'étape de traitement par l'acide phytique est essentielle pour enrichir l'extrait en ARN de petits poids moléculaires et plus généralement assurer un meilleur rendement d'extraction des autres phytomolécules d'intérêt ; à savoir les sucres, les composés phénoliques et les acides organiques.

[67] Le contrôle du pH montre que celui-ci reste basique et se stabilise entre 9 et 11 à la fin de l'étape b).

[68] Le procédé d'extraction permet d'enrichir l'extrait final en ARN de petit poids moléculaires grâce à l'utilisation d'une solution aqueuse d'extraction contenant notamment un agent chélatant naturel tel que l'acide phytique. L'acide phytique est une molécule naturellement présente dans l'enveloppe des graines, comme les céréales et les légumineuses. L'acide phytique est présent sous forme de sels de calcium ou parfois de magnésium, et il joue un important rôle pour la plante, par exemple, c'est la source principale de phosphore.

[69] De manière préférée, l'acide phytique utilisé est une poudre d'acide phytique sous forme de sel de sodium à une concentration préférentiellement comprise entre 1 et 10 mM, préférentiellement entre 1 et 5 mM et plus préférentiellement la concentration est de 3 mM.

[70] L'invention fonctionne particulièrement bien pour une concentration d'acide phytique comprise entre 2 et 3 comme décrit dans le tableau 1 ci-dessous. On observe ainsi que pour seulement 2,25 mM d'acide phytique on obtient les mêmes résultats qu'avec l'EDTA à 10 mM en termes de concentration de petits ARN, ainsi qu'un rendement global d'extraction similaire. Une concentration de mM permet un rendement d'extraction optimum des ARN de petits poids moléculaires. La concentration de 3 mM est également optimale pour avoir un meilleur rendement des autres composés d'intérêt comme les sucres, les composés phénoliques et les acides organiques. Avec une concentration d'acide phytique de 4,5 mM le rendement d'extraction des ARN de petits poids moléculaires est encore plus élevé, mais le rendement d'extraction global baisse.

[71] [Tableau 1]
Concentration Acide Concentration ARN de Rendement Phytique (mM) petits poids d'extraction global (%) moléculaires (mg/L) Acide phytique 4,5 mM 60 35 Acide phytique 3 mM 58 45 Acide phytique 2,25 mM 55 38 EDTA tétrasodique 10 mM 56 40 Tableau 1 : Rendement en ARN de petits poids moléculaire et rendement d'extraction global en fonction de la concentration en acide phytique

[72] L'étape b) de traitement par l'acide phytique dure préférentiellement au moins 1h, à une température comprise entre 20 et 80 C. Pendant cette étape, le mélange obtenu en a) est avantageusement mis sous agitation.

[73] De manière avantageuse, il est possible à la fin de l'étape b) d'ajouter des terres de diatomée afin de faciliter ultérieurement la séparation entre la matière végétale résiduelle solide et l'extrait (fraction soluble) à l'étape suivante.

[74] Dans une étape c), on ajuste ensuite le pH du mélange obtenu en b) à une valeur comprise entre 6 et 8.

[75] Le pH peut être ajusté par ajout d'une solution d'acide chlorhydrique (HCI) ou tout autre acide équivalent, compatible avec une utilisation cosmétique.
L'acidification provoque la renaturation brutale de l'ADN (ré-appariement des brins de la double hélice). Toutefois l'ADN chromosomique, très long, ne parvient pas à se réapparier complètement et forme des enchevêtrements insolubles. Au contraire, les petits ARN restent en solution. L'ADN et les petits ARN sont ainsi séparés en deux phases distinctes ; une phase solide contenant entre autres l'ADN chromosomique, et une phase liquide contenant, entre autres, les petits ARN. L'étape d'ajustement du pH à l'étape d) du procédé selon l'invention est une étape indispensable à l'extraction optimale des ARN de petit poids moléculaire, ainsi que autres phytomolécules d'intérêt ; à savoir les sucres, les composés phénoliques et les acides organiques.

[76] Dans une étape d) on purifie le mélange obtenu en c) de manière à
éliminer les parties aériennes de lavande solide résiduelle et récupérer la partie soluble qui constitue l'extrait brut aqueux selon l'invention. Toute méthode connue par l'homme du métier pourra être utilisée. Par exemple, le mélange obtenu en c) peut être filtré sur des filtres de porosité supérieure à 30 prn de façon à
récolter le filtrât. Préférentiellement le mélange obtenu en c) est centrifugé à faible vitesse, par exemple pendant au moins 10 min à 4000 g, de manière à sédimenter la matière végétale résiduelle dans le culot et récupérer l'extrait brut aqueux dans le surnageant.

[77] Dans une étape e) on contrôle le pH et on le réajuste à une valeur comprise entre 6 et 8. Préférentiellement le pH est réajusté à une valeur comprise entre 6 et 6,5, encore plus préférentiellement à une valeur de 6,5. Le pH est réajusté
par l'ajout d'une solution d'acide chlorhydrique (HCI) ou encore n'importe quel acide équivalent compatible avec une utilisation cosmétique.

[78] En effet, un pH inférieur à 6 peut entraîner la précipitation des acides nucléiques en général, donc celle des ARN de petit poids moléculaire d'une longueur d'au maximum 150 nucléotides. L'étape d'ajustement du pH à l'étape e) du procédé selon l'invention est une étape indispensable pour avoir une stabilité
optimale des ARN de petit poids moléculaire dans l'extrait.

[79] A la fin de l'étape e) on obtient un extrait brut concentré.

[80] Avantageusement le réajustement du pH de l'étape e) est précédé par au moins une filtration de l'extrait brut aqueux obtenu en d). Préférentiellement des filtrations successives seront réalisées en abaissant le seuil de filtration de 20 à
50 pm jusqu'à une filtration stérilisante de 0,1 - 0,3 pm.

[81] L'extrait obtenu à l'étape e) peut ensuite être dilué dans un solvant physiologiquement acceptable pour un usage cosmétique, de telle sorte que le poids sec soit compris entre 4 et 20 g/kg d'extrait sec par rapport au poids total de l'extrait dilué. Cette étape améliore la stabilité de l'extrait dans le temps.

[82] L'invention a pour deuxième objet un extrait aqueux de parties aériennes de lavande enrichi en petits ARN d'une longueur d'au maximum 150 nucléotides, en sucres, en composés phénoliques, en acides organiques et dépourvu d'ADN, susceptible d'être obtenu par le procédé décrit ci-dessus. Cet extrait ne contient pas d'ADN (acide désoxyribonucléique).

[83] L'invention a encore pour objet un extrait aqueux de parties aériennes de lavande enrichi en petits ARN d'une longueur d'au maximum 150 nucléotides, en sucres, en composés phénoliques et en acides organiques, directement obtenu par le procédé décrit ci-dessus. Cet extrait ne contient pas d'ADN (acide désoxyribonucléique).

[84] En utilisant le procédé de l'invention selon les étapes a) à e) on obtient un extrait brut concentré aqueux de lavande de couleur ambre à ambre foncé ayant un poids sec de 10 à 30 g/kg, contenant 2 à 10 g/kg de sucres, 100 à 1500 mg/kg d'acides organiques, 500 à 2000 mg/kg de composés phénoliques et 40 à
200 mg/kg d'ARN de petit poids moléculaire d'une longueur d'au maximum 150 nucléotides. Néanmoins, pour des parties aériennes, en particulier la fleur de lavande de l'espèce Lavandula angustifolia, les extraits obtenus peuvent présenter une variabilité importante en fonction de facteurs tels que le lieu ou l'année de récolte, la saison, les conditions climatiques, le stress biotique, etc.

[85] L'extrait ainsi obtenu peut ensuite être dilué dans un solvant physiologiquement acceptable pour un usage cosmétique, de telle sorte que la concentration de l'extrait est alors ajustée à un poids sec compris entre 4 et g/kg d'extrait sec par rapport au poids total de l'extrait dilué.

[86] A titre d'exemples illustratifs et non limitatifs de solvants physiologiquement acceptables, on peut citer l'eau, le glycérol, l'éthanol, le propanediol ainsi que sa version naturelle appelée Zemea issue du maïs, le butylène glycol, le dipropylène glycol, les diglycols éthoxylés ou propoxylés, les polyols cycliques ou tout mélange de ces solvants.
Ainsi l'extrait obtenu peut être dilué pour obtenir une concentration finale de 50 %
de butylène glycol dérivé de plante, ou 50 % de propanediol dérivé de plante ou encore 30 ')/0 de glycérine dérivée de plante.

[87] Préférentiellement, l'extrait obtenu par le procédé selon l'invention est dilué
dans du butylène glycol de telle sorte que l'extrait dilué comprenne une concentration finale en butylène glycol de 50 %.

[88] Cet extrait dit dilué comprend en poids du poids total de l'extrait de 4 à 20 g/kg d'extrait sec, 0,5 à 10 g/kg de sucres, 50 à 700 mg/kg d'acides organiques, 50 à 1500 mg/kg de composés phénoliques et 10 à 100 mg/kg d'ARN de petit poids moléculaire d'une longueur d'au maximum 150 nucléotides.

[89] A titre d'exemple non limitatif, on peut citer un extrait dilué de Lavandula angustifolia contenant plus particulièrement des sucres à une concentration de 1,7 g/kg, des acides organiques à un teneur de 570 mg/kg, 620 mg/kg de composés phénoliques et 45 mg/kg d'ARN de petits poids moléculaires d'une longueur d'au maximum 150 nucléotides.

[90] Au contraire, l'eau florale et l'huile essentielle de lavande contiennent principalement des molécules odorantes de nature terpénique et ne contiennent pas d'ARN de petits poids moléculaires d'une longueur d'au maximum 150 nucléotides, ni de sucres, ni de composés phénoliques ou d'acides organiques.

[91] L'extrait de l'invention comprend ainsi une large gamme de phytomolécules pouvant présenter des effets bénéfiques sur la peau, sans présenter de risque d'irritation cutanée ou autre dommage pour la santé.

[92] Par exemple les sucres participent activement à l'hydratation des couches épidermiques, et ce faisant à la résistance aux agressions extérieures, sans présenter aucun effet indésirable. L'extrait de lavande de l'invention contient plus particulièrement des mono- et des polysaccharides, qui ne sont présents ni dans l'eau florale ni dans l'huile essentielle de lavande.

[93] La lavande vraie fait partie de la famille des Lamiaceae qui possède un métabolisme particulier dit CAM pour Crassulacean Acid Metabolism. La plante stocke les acides organiques et plus particulièrement l'acide malique, l'acide citrique et l'acide tartrique à l'intérieur de ses cellules. Le procédé décrit dans l'invention permet d'extraire ces acides organiques ou AHA. Appliqués sur la peau ces AHA diminuent la cohésion cellulaire entre les cornéocytes, provoquent la desquamation des couches cornées et stimulent ainsi le renouvellement cellulaire.

[94] L'extrait de lavande selon l'invention est également enrichi en composés phénoliques, tels que les acides phénoliques. Ces molécules hydrosolubles connues pour leur activité antioxydante contribuent au potentiel antioxydant et protecteur de l'extrait de lavande de l'invention.

[95] Un troisième aspect de l'invention est une composition cosmétique comprenant une quantité efficace d'un extrait aqueux enrichi en petits ARN
d'une longueur d'au maximum 150 nucléotides, en sucres, en composés phénoliques et en acides organiques obtenu selon l'invention, en tant qu'ingrédient actif, et un milieu physiologiquement acceptable.
L'extrait aqueux enrichi en petits ARN d'une longueur d'au maximum 150 nucléotides, en sucres, en composés phénoliques et en acides organiques, obtenu selon l'invention est avantageusement utilisé pour la préparation de compositions cosmétiques, à titre d'ingrédient actif.

[96] Avantageusement, l'extrait de parties aériennes de lavande selon l'invention est ajouté dans la composition à une concentration de 0,05 à 5 % en poids par rapport au poids total de la composition, préférentiellement à une concentration de 0,1 à 2,5 % en poids par rapport au poids total de la composition et encore plus préférentiellement à une concentration de 0,1 à 1,0 (:)/0 en poids par rapport au poids total de la composition.
La composition utilisable selon l'invention pourra être appliquée par toute voie appropriée, notamment orale, ou topique externe, et la formulation des compositions sera adaptée par l'homme du métier.

[97] Préférentiellement, les compositions selon l'invention se présentent sous une forme adaptée à l'application par voie topique. Ces compositions doivent donc contenir un milieu physiologiquement acceptable, c'est-à-dire compatible avec la peau et les phanères, sans risque d'inconfort lors de leur application et couvrent toutes les formes cosmétiques adaptées.

[98] Les compositions pour la mise en oeuvre de l'invention pourront notamment se présenter sous forme d'une solution aqueuse, hydroalcoolique ou huileuse, d'une émulsion huile-dans-eau, eau-dans-huile ou émulsions multiples ; elles peuvent aussi se présenter sous forme de suspensions, ou encore poudres, adaptées à une application sur la peau, les muqueuses, les lèvres et/ou les cheveux.

[99] Ces compositions peuvent être plus ou moins fluides et avoir également l'aspect d'une crème, d'une lotion, d'un lait, d'un sérum, d'une pommade, d'un gel, d'une pâte ou d'une mousse. Elles peuvent aussi se présenter sous forme solide, comme un stick ou être appliquées sur la peau sous forme d'aérosol.
A titre de milieu physiologiquement acceptable communément utilisé dans le domaine d'application envisagé, on peut citer par exemple des adjuvants nécessaires à la formulation, tels que des solvants, des épaississants, des diluants, des antioxydants, des colorants, des filtres solaires, des agents auto-bronzants, des pigments, des charges, des conservateurs, des parfums, des absorbeurs d'odeur, des huiles essentielles, des vitamines, des acides gras essentiels, des tensioactifs, des polymères filmogènes, etc.

[100] Dans tous les cas, l'homme de métier veillera à ce que ces adjuvants ainsi que leurs proportions soient choisis de telle manière à ne pas nuire aux propriétés avantageuses recherchées de la composition selon l'invention. Ces adjuvants peuvent, par exemple, correspondre à 0,01 à 20 % du poids total de la composition. Lorsque la composition selon l'invention est une émulsion, la phase grasse peut représenter de 5 à 80 % en poids et de préférence de 5 à 50 % en poids par rapport au poids total de la composition. Les émulsionnants et co-émulsionnants utilisés dans la composition sont choisis parmi ceux classiquement utilisés dans le domaine considéré. Par exemple, ils peuvent être utilisés en une proportion allant de 0,3 à 30 cYc, en poids par rapport au poids total de la composition.

[101] Selon un autre mode de réalisation avantageux de l'invention, l'extrait aqueux de lavande de l'invention peut être encapsulé ou inclus dans un vecteur cosmétique tels que les liposomes ou toute autre nano capsule ou microcapsule utilisée dans le domaine de la cosmétique ou adsorbé sur des polymères organiques poudreux, des supports minéraux comme les talcs et bentonites.

[102] Avantageusement, la composition selon l'invention peut comprendre, outre l'ingrédient actif selon l'invention, au moins un autre agent actif présentant des effets cosmétiques similaires et/ou complémentaires à ceux de l'invention.

[103] Par exemple, le ou les agents actifs additionnels peuvent être choisis parmi :
les agents anti-âge, raffermissants, éclaircissants, hydratants, drainants, favorisant la microcirculation, exfoliants, desquamants, stimulant la matrice extracellulaire, activant le métabolisme énergétique, antibactériens, antifongiques, apaisants, anti-radicalaires, anti-UV, anti-acné, anti-inflammatoires, anesthésiques, procurant une sensation de chaleur, procurant une sensation de fraicheur, amincissants.

[104] De tels agents actifs additionnels peuvent être choisis dans les groupes comprenant :
- la vitamine A et notamment l'acide rétinoïque, le rétinol, le rétinol propionate, le rétinol palmitate ;
- la vitamine B3 et plus particulièrement le niacinamide, le nicotinate de tocophérol ;
- la vitamine B5, la vitamine B6, la vitamine B12, le panthénol ;
- la vitamine C, notamment l'acide ascorbique, l'ascorbyl glucoside, l'ascorbyl tétrapalmitate, magnésium et sodium ascorbyl phosphate ;
- les vitamines E, F, H, K, PP, le coenzyme Q10;
- les inhibiteurs de métalloprotéinase, ou un activateur des TI MP ;
- la DHEA, ses précurseurs et dérivés ;
- les acides aminés tels que l'arginine, ornithine, hydroxyproline, hydroxyproline dipalmitate, palmitoylglycine, hydroxylysine, méthionine et ses dérivés, composés acides aminés N-acylés ;
- les peptides naturels ou de synthèse, incluant les di-, tri-, tetra-, penta- et hexapeptides et leurs dérivés lipophiles, isomères et complexés avec d'autres espèces telles qu'un ion métal (par exemple cuivre, zinc, manganèse, magnésium, et autres). A titre d'exemples, on peut citer les peptides commercialement connus sous les noms de MATRIXYLO, ARGIRELINEO, CHRONOGENTM, LAMINIXYL ISTM, PEPTIDE Q1OTM, COLLAXYL TM (brevet FR2827170, ASHLANDO), PEPTIDE VINCI 01TM (brevet FR2837098, ASHLANDO), PEPTIDE VINCI O2TM (brevet FR2841781, ASHLANDO), ATPeptide TM (brevet FR2846883, ASHLANDO) ou encore le peptide de synthèse de séquence Arg-Gly-Ser-NH2, commercialisé sous le nom ATPeptide TM par AS HLANDC, ;
- l'extrait d'Artémia sauna, commercialisé sous le nom GP4GTM (FR2817748, AS HLANDO) ;
- les extraits peptidiques végétaux tels que les extraits de lin (Lipigénine TM , brevet FR2956818, ASHLANDO), les extraits de soja, d'épeautre, de vigne, de colza, de lin, de riz, de maïs, de pois ;
- les extraits de levures, par exemple le Dynagen TM (brevet FR2951946, ASHLANDO) ou l'ActopontineTM (brevet FR2944526, ASHLANDO) ;
- l'acide déhydroacétique (DHA) ;
- les phystostérols d'origine synthétique ou naturelle ;
- l'acide salicylique et ses dérivés, les alpha- et bêta-hydroxyacides, les silanols ;
- les sucres aminés, glucosamine, D-glucosamine, N-acetyl glucosamine, N-acetyl-D-glucosamine, mannosamine, N-acetyl mannosamine, galactosamine, N-acetyl galactosamine ;
- les extraits de polyphénols, isoflavones, flavonoïdes, tels que les extraits de raisin, les extraits de pin, les extraits d'olive ;
- les lipides tels que les céramides ou les phospholipides, les huiles d'origine animale, telles que le squalène ou le squalane ; les huiles végétales, telles que l'huile d'amande douce, de coprah, de ricin, de jojoba, d'olive, de colza, d'arachide, de tournesol, de germes de blé, de germes de maïs, de soja, de coton, de luzerne, de pavot, de potiron, d'onagre, de millet, d'orge, de seigle, de carthame, de passiflore, de noisette, de palme, de noyau d'abricot, d'avocat, de calendula ; les huiles végétales éthoxylées, le beurre de karité ;
- tous écrans UV et filtres solaires ;
- l'AMP cyclique et ses dérivés, les agents activateurs de l'enzyme adénylate cyclase et les agents inhibiteurs de l'enzyme phosphodiestérase, l'extrait de Centella asiatica, l'asiaticoside et l'acide asiatique, les méthyls xanthines, la théine, la caféine et ses dérivés, la théophylline, la théobromine, la forskoline, l'esculine et l'esculoside, les inhibiteurs d'ACE, le peptide Val-Trp, l'inhibiteur du neuropeptide Y, l'enkephaline, l'extrait de Ginkgo biloba, l'extrait de dioscorea, la rutine, l'extrait de yerba mate, l'extrait de guarana, les oligosaccharides, les polysaccharides, la carnitine, l'extrait de lierre, l'extrait de fucus, l'extrait hydrolysé de Prunelle vulgaris, l'extrait hydrolysé de Celosia cristata, l'extrait d'Anogeissus leiocarpus, l'extrait de feuilles de Manihot utilissima, la palmitoylcarnitine, la camosine, la taurine, l'extrait de sureau, les extraits d'algue tel que l'extrait de Palmaria Palmata.

[105] L'invention a pour quatrième objet l'utilisation cosmétique d'une composition comprenant l'extrait de lavande de l'invention pour le soin de la peau, du cuir chevelu et des phanères, plus particulièrement pour protéger la peau des agressions externes et de l'oxydation, lutter contre les signes du vieillissement cutané, augmenter la photoprotection, éclaircir la peau, améliorer l'hydratation de la peau, renforcer la fonction barrière, apaiser la peau, ou encore pour améliorer les mécanismes biologiques associés à la réparation de la peau pendant la nuit.

[106] La peau est un organe composé de plusieurs couches (derme, épiderme et stratum comeum), qui recouvre toute la surface du corps et assure des fonctions protectrices vis-à-vis des agressions externes, sensitives, immunitaires, métaboliques, thermorégulatrices ou encore de barrière limitant la déshydratation.

[107] En particulier, le stratum comeum assure un rôle de barrière physique protectrice, communément nommé fonction barrière de la peau . Cette fonction revêt une importance majeure dans l'homéostasie tissulaire et dans la protection vis-à-vis de l'environnement extérieur.

[108] L'aspect de la peau peut être modifié par des altérations internes (vieillissement intrinsèque, maladies et changements hormonaux tels que la grossesse) ou externes (facteurs environnementaux, tels que la pollution, la lumière du soleil, les pathogènes, les variations de température, etc.).
Toutes ces altérations affectent non seulement la peau, mais aussi les annexes kératiniques telles que les poils, les cils, les sourcils, les ongles et les cheveux.

[109] L'extrait de parties aériennes de lavande de l'invention a été testé sur les principaux marqueurs biologiques associés aux mécanismes de réparation de la peau pendant la nuit. Les mécanismes qui siègent dans la peau pendant la nuit incluent l'augmentation de la réparation de l'ADN, du taux de prolifération cellulaire, de la température cutanée, du flux sanguin cutané, de l'incidence des démangeaisons, ainsi que de la perméabilité de la barrière cutanée, conduisant à
une perte d'hydratation (Matsui M.S. et al, Biological rhythms in the skin, Int. J.
Mol. Sci. 2016, 17,801). L'extrait de parties aériennes de lavande de l'invention a été en particulier évalué sur le taux de réparation des dimères de pyrimidines (CPD pour Cyclobutane Pyrimidine Dimers). Le rythme jour/nuit perçu au niveau du système nerveux central, comprend la production de mélatonine par la glande pinéale (Slominski A.T. et al, Melatonin : A cutaneous perspective on its production, metabolism, and functions. J Invest Dermatol, 2018 March ;
138(3) :490-499). La mélatonine est également produite localement dans la peau à partir du tryptophane. Ces fonctions contribuent à diminuer le taux d'espèces réactives de l'oxygène et de l'azote (ROS et RNS, pour reactive oxygen species et reactive nitrogen species, respectivement). En effet, en plus de son rôle direct de piégeur de radicaux libres, la mélatonine stimule la production d'enzymes antioxydantes telles que la catalase et la superoxide dismutase et intervient dans la réparation de l'ADN. En optimisant le fonctionnement de la mitochondrie, la mélatonine contribue aussi à augmenter le taux d'ATP produit par la cellule.
L'effet de l'extrait de parties aériennes de lavande de l'invention a été
évalué sur le taux de mélatonine de la peau et sur l'expression de l'enzyme AANAT
(Aralkylamine N-Acetyltransferase ou sérotonine N-acétyl transférase ou timezyme) qui catalyse la N-acétylation de la sérotonine en N-acetylserotonine, ultime étape de la synthèse de la mélatonine. De plus, l'application topique de mélatonine exogène a montré un effet sur la perte des cheveux associée à
l'alopécie androgénétique (Fisher TVV, Topical melatonin for treatment of androgenetic alopecia, Int J Trichology, 2012 Oct-Dec, 4(4) :236-245).

[110] L'extrait de parties aériennes de lavande de l'invention a démontré son efficacité pour augmenter la production de mélatonine dans des biopsies de peau en culture.

[111] Des altérations de la fonction barrière résultent d'agressions externes telles que les UV. Les conséquences sont majeures au niveau de la perte de la cohésion cellulaire et de l'intégrité mécanique. Certaines enzymes impliquées dans les phases terminales de la différenciation kératinocytaire jouent un rôle clé
dans la protection face aux UV. Des modifications de l'expression et/ou de l'activité de ces enzymes ont des conséquences importantes sur l'intégrité de la fonction barrière et l'homéostasie de la peau.

[112] L'extrait de parties aériennes de lavande de l'invention a démontré son efficacité pour renforcer la fonction barrière et ainsi améliorer la protection de la peau vis-à-vis des agressions extérieures (radiations UV, pollution, microorganismes, etc.).

[113] L'extrait de parties aériennes de lavande de l'invention a démontré son efficacité pour diminuer le taux de mélanine dans des biopsies de peau, et ainsi induire un effet éclaircissant.
Exemples

[114] A titre illustratif, des exemples de mode de réalisation du procédé
selon l'invention sont décrits ci-dessous.

[115] Exemple 1: Préparation d'un extrait de lavande (Lavandula angustifolia) de la famille des Lamiaceae, enrichi en petits ARN
Procédé d'extraction

[116] Les fleurs de lavande de l'espèce Lavandula angustifolia sont préalablement séchées dans un endroit ventilé, à l'abri de la lumière. Dans une première étape, 3 % de fleurs séchées de lavande et de tiges portant les fleurs sont broyées sous forme de poudre à une granulométrie allant de 500 pm à 1 mm préférentiellement à 800 pm, soit l'équivalent de 30 g de poudre de fleurs de lavande séchées dans 968 g d'eau distillée. Puis on ajoute 2 g/L soit 3 mM d'acide phytique. Le pH
est ajusté à 10,8 pour un enrichissement optimal de l'extrait en ARN de petits poids moléculaires.

[117] Le mélange est ensuite chauffé 1h à 80 C sous agitation.
Après cette heure d'extraction, on ajoute à ce mélange des terres de diatomée afin de faciliter la séparation ultérieure entre la matière végétale résiduelle solide et l'extrait (fraction soluble).

[118] Le mélange est ensuite filtré à l'aide de filtres de porosité de 30 pm, pour ôter la matière solide. Le pH est ensuite ajusté à pH 7,5 à l'aide d'une solution d'HCI.
Des filtrations séquentielles sur filtres de porosité décroissante sont alors réalisées afin de clarifier l'extrait végétal jusqu'à une filtration stérilisante à 0,2 pm.

[119] A l'issue de cette étape, le pH est contrôlé, puis il est ajusté à 6,3 avec une solution d'HCI. 6 et 6,5 et préserver les petits ARN de l'extrait.
On obtient un extrait aqueux ayant un poids sec de 12,6 g/kg.
Caractérisation de l'extrait de lavande

[120] L'extrait obtenu à un poids sec de 12,6 g/kg.
L'analyse physico-chimique montre que l'extrait obtenu présente une concentration de 3,7 g/kg de sucres totaux, 1160 g/kg d'acides organiques totaux, 1270 mg/kg de composés phénoliques totaux et 118 mg/kg d'ARN de petits poids moléculaires d'une longueur d'au maximum 150 nucléotides.
L'extrait est ensuite dilué avec un solvant cosmétique physiologiquement acceptable et permettant de garantir une meilleure stabilité et une meilleure conservation de l'extrait dans le temps.

[121] La dilution est réalisée avec du butylène glycol dérivé de plante de manière à
obtenir une concentration finale de 50 Vo de butylène glycol et 50 Vo d'extrait de lavande. L'extrait ainsi dilué possède alors un poids sec de 6 g/kg, et présente une concentration de 1,7 g/kg de sucres totaux, 570 mg/kg d'acides organiques totaux, 620 mg/kg de composés phénoliques totaux et 45 mg/kg d'ARN de petits poids moléculaires d'une longueur d'au maximum 150 nucléotides.
Méthodes de dosage utilisées pour déterminer la quantité des différents composés contenus dans l'extrait final de lavande :

[122] La teneur totale en sucres de l'extrait a été déterminée par dosage spectrophotométrique issu d'une adaptation du dosage décrit par Dubois et al.

(1956) (Dubois et al., "Méthode calorimétrique pour la détermination des sucres et des substances apparentées", Anal. Chem., 1956, 28 (3), 350-356). Cette analyse consiste en la dissolution de la matière première dans l'acide sulfurique concentré puis en réagissant avec du phénol pour former un complexe coloré.
L'absorbance du complexe est lue sur le spectrophotomètre à 490 nm. La teneur en sucre est déterminée à l'aide d'une courbe standard de glucose. Une analyse CCM a permis de mettre en évidence que les sucres majoritaires présents dans l'extrait de l'invention sont les molécules de glucose et fructose ainsi que des sucres de hauts poids moléculaires (oligo et polysaccharides).

[123] La teneur totale en polyphénols de l'extrait de lavande a été déterminée par la méthode de dosage spectrophotométrique de Folin-Ciocalteu (Singleton et al., Analyse des phénols totaux et d'autres substrats d'oxydation et antioxydants au moyen du réactif Folin-Ciocalteu, 1999, 299: 152). Les composés de type polyphénols présents dans l'échantillon réagissent avec le réactif de Folin-Ciocalteu, l'oxydation du réactif donne une couleur bleue. L'absorbance de l'échantillon est lue sur le spectrophotomètre à 760 nm. Le contenu est exprimé
en équivalents d'acide gallique à l'aide d'une courbe standard d'acide gallique.

[124] La caractérisation des acides organiques a été effectuée sur l'extrait de Lavande de l'exemple 1, une eau florale et une huile essentielle de référence.

Une analyse chromatographique liquide haute performance, couplée à un détecteur de masse a été utilisée. Tous les échantillons ont été séparés sur une colonne EC 150 /4,6 Nucleoshell RP 18plus-5pm (150x4,6 mm) (Macherey Nagel: 763236.46) par un système HPLC Agilent 1260 (Agilent Technologies). Le débit était de 0,3 ml / min. La phase mobile consistait en une solution d'acide formique (HCOOH) à 0,01 % (A) et d'acétonitrile (B). Le programme de gradient a facilité l'élution tel que décrit dans le tableau 2.

[125] [Tableau 2]
A
Temps 0,01 %
Acetonitrile (min) HCOOH
(ACN) (%) (%)

[126] La température de la colonne a été maintenue à 25 C et le volume d'injection était de 5 pL. La détection a été effectuée par un détecteur de spectromètre de masse ACQUITY Qda (WATERS) avec une source d'ions électrospray en mode négatif. La source a été réglée à une tension capillaire de 0,8 kV et à une température de sonde de 600 C.
M/z et la tension au cône ont été ciblés pour chaque composé tel que décrit dans le tableau 3.

[127] [Tableau 3]
Masse Cone Composés (m/z) voltage (V) Acide tartrique 149,0 10 Acide malique 132,9 3 Acide citrique 191,0 10 Acide lactique 88,9 5 Acide succinique 116,95 15 Acide uronique 193 10

[128] L'identification des acides organiques a été réalisée en comparant les temps de rétention et les pics spectraux de masse de l'échantillon avec un étalon.
L'estimation quantitative des acides organiques a été réalisée sur la base de la surface maximale des concentrations de l'échantillon comparée à la surface maximale des étalons.

[129] L'analyse HPLC-MS qui permet de quantifier et d'identifier les acides organiques contenus dans l'extrait, montre que seul l'extrait de lavande contient différents types d'acides organiques, principalement acide citrique, malique et tartrique, tels que présentés sur la figure 1. L'analyse HPLC-MS montre que ces acides organiques ne sont présents ni dans l'eau florale de lavande vraie ni dans l'huile essentielle de lavande vraie.

[130] La quantification des ARN de bas poids moléculaires a été réalisée par une technique d'électrophorèse miniaturisée sur des puces microfluidiques spécifiques de l'analyse des acides nucléiques telle que celle des ARN de petits poids moléculaires (Bioanalyseur 21000, Agilent). Cette méthode permet de déterminer la taille et la concentration d'acides nucléiques contenues dans un extrait à partir de quelques microlitres. Le résultat se présente sous forme d'un graphique avec en ordonnée une unité arbitraire de fluorescence (FU) et en abscisse le nombre de nucléotides (nt). Un marqueur interne est ajouté à
chaque analyse (pic à 25 nt sur la figure 2), et sert de contrôle interne pour valider le bon déroulement de l'analyse.

[131] La figure 2 représente l'analyse des ARN de petits poids moléculaire par le Bioanalyseur 2100. A: extrait de lavande selon l'exemple 1. B : extrait conventionnel de lavande selon exemple 2.

[132] L'analyse par bioanalyseur montre que le procédé décrit dans la présente invention permet d'extraire les ARN de petits poids moléculaires de la lavande, tel qu'illustré sur la figure 2A. La figure 2A montre que les ARN présents dans l'extrait de lavande de l'invention ont des poids moléculaires répartis entre plus de 25 et environ 150 nucléotides.

[133] Un procédé d'extraction conventionnelle telle que la macération décrit ci-dessous dans l'exemple 2 ne permet pas d'extraire les ARN de petits poids moléculaires (figure 2B). L'analyse a permis également de démontrer qu'il n'y a pas non plus ces molécules ni dans l'eau florale ni dans l'huile essentielle.
De plus cette analyse permet de démontrer l'absence d'ADN dans l'extrait.

[134] L'analyse des composés volatiles odorants (VOC) a été effectuée sur l'extrait de Lavande selon l'invention, l'eau florale et l'huile essentielle par GO-FI
D. Tous les échantillons ont été séparés sur une colonne GO OPTIMA 5HT de 30 mx 250 pm x 0,25 pm (Macherey-Nagel 726106.30) par une chromatographie gazeuse Agilent GO / FID 7890A (Agilent Technologies). 3 pL de produits échantillons ont été injectés sur la colonne à un flux de 1,3 ml / min, en utilisant de l'hélium comme gaz vecteur sur un four programmé qui monte de 75 C à 320 C en 40 min.

[135] Les molécules ont été détectées sur un détecteur à ionisation de flamme à
230 C, en utilisant de l'hydrogène (30 ml! min) et de l'air (400 ml! min) pour la flamme. L'identification des VOC se fait par comparaison des temps de rétention des composés.

[136] Pour les échantillons aqueux une extraction liquide/liquide dans l'hexane (1 :1) est réalisée préalablement à l'injection. Du sulfate de magnésium est ajouté
à la phase organique afin d'éliminer toute trace d'eau.

[137] [Tableau 4]
Molécules odorantes volatiles (VOC) LD (ppm) Extrait de lavande Eucalyptol 5 <LD
Thujones 3 <LD
Linalol 4 <LD
Camphre 2 <LD
Borneol 3 <LD
Acétate de lynalyle 3 <LD
Tableau 4: Détermination des composés volatils odorants dans l'extrait de lavande

[138] Les résultats de l'analyse par GC-FID du tableau 4 permettent de mettre en évidence que l'extrait de lavande de l'exemple 1 ne contient aucune molécule odorante, de nature terpénique, contrairement à l'eau florale et l'huile essentielle de lavande connues pour contenir majoritairement ces molécules.

[139] Exemple 2 préparation d'un macérat de lavande

[140] Afin de comparer une extraction dite classique à l'extrait de l'invention, un macérat de lavande a été réalisé, en engageant la même quantité de fleurs séchées de lavande de l'espèce Lavandula angustifolia que dans l'exemple 1 soit 3 A de fleurs de lavande séchées broyées mises dans de l'eau distillée. Le mélange est ensuite chauffé 1 h à 8000, puis le mélange est filtré par une première filtration à large porosité de 30 pm afin d'ôter la matière végétale résiduelle solide de la partie liquide puis par filtration séquentielle de porosité
décroissante jusqu' à 0,2 pm. Ce procédé a pour but de préparer un extrait contrôle pour obtenir des données analytiques comparatives par rapport à
l'extrait de lavande obtenu par le procédé de l'invention. Les résultats obtenus sont illustrés dans la figure 2B et dans le texte de la demande.

[141] Exemple 3 : Evaluation de l'extrait de Lavandula angustifolia de l'exemple 1 sur les espèces oxygénées réactives après application d'un stress de lumière visible sur des kératinocytes humains normaux :

[142] Principe :
Le but de cette étude est de montrer l'effet de l'extrait de lavande préparé
selon l'exemple 1 sur la diminution des espèces oxygénées réactives générées par un stress de lumière visible. Ce type de lumière entre 400 et 700 nm a pour but de mimer la lumière du jour. Les espèces oxygénées réactives sont impliquées dans différents mécanismes d'altération des protéines et de l'ADN, en lien avec le vieillissement cutané.

[143] Protocole :
Des kératinocytes humains normaux sont traités par l'extrait de l'exemple 1 pendant une nuit. Les cellules sont ensuite exposées à la lumière visible générée par un spot de 24 Watt et de 5000 Kelvin, permettant de mimer la lumière du jour. Cette exposition est répétée 4 fois pendant 10 minutes, au cours de la journée. Le traitement est de nouveau appliqué pendant la nuit, puis les cellules sont de nouveau soumises au même stress de lumière visible. A l'issue de ce stress, les espèces réactives de l'oxygène sont détectées par la sonde mitochondriale MitoSOXTM Red (ThermoFisher scientific).

[144] Résultats :
L'application du stress de lumière du jour a entrainé une augmentation des espèces réactives de l'oxygène (ER0s) de +43 % par rapport aux cellules non exposées. Lorsque les cellules ont été traitées par l'extrait de l'exemple 1 à
0,1 A
(dilution volume/volume), les EROs sont diminuées de façon hautement significative de -12 A par rapport aux cellules non traitées. Un macérat de lavande obtenu selon l'exemple 2 est testé dans les mêmes conditions a permis une diminution plus faible de -5 %.

[145] Conclusion :
L'extrait de lavande a montré une activité antioxydante, dirigée contre les espèces réactives de l'oxygène au niveau mitochondrial. Cette activité s'est révélée supérieure à celle obtenue avec un extrait de lavande issu d'une macération classique.

[146] Exemple 4: Evaluation de l'extrait de l'exemple 1 sur les dommages de l'ADN dans des mélanocytes humains normaux exposés à un stress UVB:

[147] Principe :
L'instabilité génomique peut être définie comme l'ensemble des modifications chimiques de l'ADN, intervenant lors de différents processus et pouvant s'accumuler au cours du temps. Les altérations de l'ADN représentent une composante majeure du photo-vieillissement. Dans la présente étude, nous nous sommes intéressés aux dommages créés par les UVB dans les mélanocytes.
Les dimères de pyrimidine résultent d'un effet direct des UVB sur les bases pyrimidiques de l'ADN. Il y a formation de dimères cyclobutaniques de pyrimidine (ou CPD pour Cyclobutane Pyrimidine Dimer) qui sont les dommages de l'ADN
les plus fréquemment induits par les UVB. Dans les mélanocytes, les CPDs continuent à être générés plus de 3 heures après l'exposition aux UVB. Ils sont appelés dark CPDs et sont dus à la chemiexcitation de la mélanine, conduisant à un transfert d'énergie à l'ADN.
Dans cette étude, la capacité de l'extrait de l'exemple 1 à réduire la formation des dark CPDs dans les mélanocytes a été évaluée.

[148] Protocole :
Des mélanocytes extraits de l'épiderme humain sont traités par l'extrait de l'exemple 1 à 0,1 % (dilution volume/volume) pendant la nuit, puis irradiés par des UVB à 60 mJ/cm2 et de nouveau traités une nuit par l'extrait de lavande.
Le lendemain matin, les dimères de pyrimidines sont détectés par immunomarquage avec un anticorps dirigé contre les CPDs (Cyclobutane Pyrimidine Dimers Mouse Monoclonal, Euromedex). Après une heure et demie d'incubation suivie de rinçages, les cellules sont incubées en présence de l'anticorps secondaire anti-souris couplé à un fluorophore (Alexa Fluor 488, Invitrogen). Les cellules sont ensuite examinées au microscope à Epi-fluorescence (Zeiss Axiovert 200M
microscope). La présence des CPDs est alors observée et quantifiée par analyse d'image (Volocity image analysis software, Improvision).

[149] Résultats :
Dans les conditions non irradiées, les mélanocytes ne présentent pas de CPDs.
Leur formation est induite à la suite du stress UVB. L'application de l'extrait de l'exemple 1 sur les mélanocytes a permis de réduire l'induction des dark CPDs par les UVB de ¨37 % (hautement significatif d'après le test t de Student par rapport aux cellules irradiées non traitées). Dans les mêmes conditions et à
la concentration égale de 0,1 %, le macérat de lavande obtenu selon l'exemple n'a pas eu d'effet significatif.

[150] Conclusion :
L'extrait de l'exemple 1 a diminué les dark CPDs produits dans les mélanocytes par un stress UVB. Par cette activité, l'extrait de lavande a montré
un bénéfice sur la réduction des dommages de l'ADN, contribuant aux mécanismes de réparation de la peau pendant la nuit.

[151] Exemple 5 : Evaluation de l'extrait de l'exemple 1 sur la voie de synthèse de la mélatonine dans des biopsies de peau ex vivo et des follicules pileux humains :

[152] Principe :
Le but de cette expérience est de démontrer un effet de l'extrait de de l'exemple 1 sur la synthèse de mélatonine dans des biopsies de peau humaine en culture.
Cette évaluation inclut deux marqueurs : 1 - l'enzyme AANAT (Aralkylamine N-Acetyltransferase ou sérotonine N-acétyl transférase ou timezyme) qui catalyse la N-acétylation de la sérotonine en N-acetylserotonine, ultime étape de la synthèse de la mélatonine, 2 - l'évaluation de la mélatonine elle-même.
L'enzyme AANAT contrôle le rythme jour/nuit de production de la mélatonine au niveau de la glande pinéale. La mélatonine étant aussi synthétisée localement au niveau de la peau, nous avons voulu suivre sa synthèse en réponse à l'application de l'extrait de lavande.

[153] Protocole :
L'enzyme AANAT et la mélatonine sont évaluées par immunofluorescence indirecte sur des biopsies de peau, traitées au préalable par application topique de l'extrait de lavande pendant 48 heures (2 fois par jour). De plus, l'extrait de l'exemple 1 dilué à 0,5 % (dilution volume/volume) dans le milieu de culture a été
mis au contact de follicules pileux humains, isolés à partir de biopsies de cuir chevelu. Des biopsies contrôles incubées en parallèle dans les mêmes conditions, ainsi que des follicules pileux contrôles sans addition de l'extrait de lavande, reçoivent le placebo (Phosphate Buffer Saline, PBS). Au terme de l'incubation, les biopsies et les follicules pileux sont fixés et inclus en paraffine pour la réalisation de coupes histologiques. La détection de l'enzyme AANAT et de la mélatonine est réalisée par incubation avec les anticorps respectifs :
anti-AANAT (Invitrogen) et anti-mélatonine (Abnova, Cliniscience). Après une heure et demie d'incubation suivie de rinçages, les coupes sont incubées en présence de l'anticorps secondaire anti-lapin couplé à un fluorophore (Alexa Fluor 488, Invitrogen). Les coupes sont ensuite examinées au microscope à Epi-fluorescence (Zeiss Axiovert 200M microscope). L'expression de collagène I est alors observée et quantifiée par analyse d'image (Volocity image analysis software, Improvision).

[154] Résultat :
L'évaluation de l'enzyme AANAT et de la mélatonine a montré une augmentation de +20 % et de +51 %, respectivement dans les biopsies de peau traitées avec l'extrait de l'exemple 1 à 0,5% (hautement significatif d'après le test t de Student, comparé aux biopsies recevant le placebo). Le macérat de lavande obtenu selon l'exemple 2 a donné un résultat équivalent en ce qui concerne l'AANAT, mais a conduit à une plus faible augmentation pour la mélatonine (+34 %, hautement significatif d'après le test t de Student, comparé aux biopsies recevant le placebo). Dans les follicules pileux en culture, l'extrait de l'exemple 1 à
0,5 % a entraîné une augmentation de la production de mélatonine de l'ordre de +23 %, observée dans la gaine épithéliale externe des follicules.

[155] Conclusion :
L'extrait de l'exemple 1 a montré une activité sur la production de la mélatonine dans les biopsies de peau ex vivo et dans les follicules pileux. Cette augmentation est liée à une augmentation de l'enzyme AANAT, dont l'expression est augmentée dans la glande pinéale au cours de la transition du jour à la nuit.
Les propriétés de la mélatonine sont liées à des activités de réparation des dommages cellulaires, notamment au niveau de l'ADN et en raison de son activité antioxydante. L'augmentation de la mélatonine dans la peau par l'extrait de lavande apparait donc bénéfique pour les processus de réparation des dommages de la peau pendant la nuit. L'augmentation de la mélatonine dans le follicule pileux indique un effet bénéfique sur la physiologie du follicule pileux, la mélatonine étant associée à la phase de croissance du cheveu.

[156] Exemple 6 : Evaluation du potentiel éclaircissant de l'extrait de l'exemple 1 sur des biopsies de peau ex vivo :

[157] Principe :
Le but de cette étude est d'évaluer le potentiel éclaircissant de l'extrait de l'exemple 1 sur des biopsies de peau ex vivo, en utilisant la coloration histologique de la mélanine Fontana-Masson, basée sur la réduction d'une solution de nitrate d'argent ammoniacal en argent métallique. La coloration obtenue révèle le contenu en mélanine et est quantifiée par analyse d'images.

[158] Protocole :
Des biopsies de peau humaine ex vivo sont mises en culture et traitées par l'extrait de l'exemple 1 à 0,5 `)/0 (dilution volume/volume) et 1 `)/0 (dilution volume/volume) pendant 48 heures. Après traitement, les biopsies sont fixées pour analyse histologique et incluses en paraffine. Après déparaffinage, les coupes sont incubées avec la solution de nitrate d'argent ammoniacal, à 60 C
pendant 10 minutes. Après rinçage, elles sont traitées par le Sodium Thiosulfate A pendant 2 minutes, puis rincées à nouveau et montées pour l'examen au microscope Eclipse E600 (Nikon). Les photos sont prises avec la camera Qlmaging Retiga 2000R Fast1394 et analysées par le logiciel Q-Capture Pro 7 (Qlmaging).

[159] Résultats et conclusion :
Sur des biopsies de peau ex vivo, une diminution du contenu en mélanine de moins 551% et de moins 721%, a été observée après application de l'extrait de l'exemple 1 à 0,5 % (dilution volume/volume) et 1 % (dilution volume/volume) respectivement (hautement significatif par le test t de Student par rapport aux biopsies placebos), tandis que le macérat de lavande obtenu selon l'exemple 2 n'a pas montré de diminution à 0,5 %, et une diminution plus faible (de -47 %) à
1%.

[160] Ce test a donc permis de conclure à un potentiel effet éclaircissant de l'extrait de l'exemple 1 de Lavandula angustifolia sur les biopsies de peau ex vivo.

[161] Exemple 7 : Formule d'une crème riche

[162] [Tableau 5]
Ingrédients (Nom de marque) INCI c/o w/w Phase A
Eau purifiée Aqua Qsp 100 OptiphenTM Plus preservative Phenoxyethanol (and) Caprylyl Glycol (and) 1,50 1Sorbic Acid Phase B
StabilezeTM QM polymer PVM/MA Decadiene Crosspolymer 0,15 Phase C
Glyceryl Stearate (and) Behenyl Alcohol (and) Palmitic Acid (and) Stearic Acid (and) Lecithin ProLipidTM 141 lamellar gel 5,00 (and) Lauryl Alcohol (and) Myristyl Alcohol (and) Cetyl Alcohol CeraphylTM 494 ester Isocetyl Stearate 4,00 CeraphylTM SLK ester Isodecyl Neopentanoate 4,00 DC 580 Wax Stearoxytrimethylsilane (and) Stearyl Alcohol 2,00 EmulsyntTM GDL ester Glyceryl Dilaurate 3,00 Phase D
Gransil DM-5 Dimethicone (and) Polysilicone-11 3,00 Phase E
Hydroxyde de sodium I Sodium Hydroxide 0,04 Eau purifiée I Aqua 0,50 Phase F
PF Bois Précieux Parfum/Fragrance 0,30 Cl 77491 (Iran oxides) (and) Isopropyl Unipure* Red LC 381 ADT-C Titanium Triisostearate (and) Bis- 0,03 Hydroxyethoxypropyl Dimethicone (and) PEG-2-Soyamine (and) Isophorone Phase G
Extrait selon l'exemple 1 Butylen glycol (and) Lavandula Angustifolia 3,00 Flower Extract Ronaflair Balance Gold Cl 77891 (Titanium Dioxide) (and) Mica (and) 0,30 Tin Oxide Covabead Velvet 10 Polymethyl Methacrylate 1,00 Ronaflair Balance Red Cl 77891 (Titanium Dioxide) (and) Mica (and) 1,20 Tin Oxide Phase H
Eau purifiée Aqua 15,00 NatrosolTM Plus 330 OS Cetyl Hydroxyethylcellulose 0,50

[163] Procédé de préparation :
1. Homogénéiser la phase A dans le récipient principal et commencer à chauffer à 75-80 C;
2. A 30 C, saupoudrer dans la Phase B et homogénéiser tout en chauffant ;
3. Dans un bécher à part, préparer la phase C, chauffer à 75-80 C jusqu'à
homogénéité ;
4. A 75 C, ajouter la phase C dans le récipient principal et homogénéiser pendant 10 minutes ;
5. Laisser refroidir la température et ajouter la phase D à 65 C. Bien mélanger pour homogénéiser pendant 10 minutes ;
6. Prémélanger la phase E avant de l'ajouter dans le récipient principal ;
7. Ajouter la phase E à 60 C. Bien mélanger pour homogénéiser pendant 10 minutes ;
8. A 35 C, prémélanger la phase F avant de l'ajouter et de bien mélanger ;
9. Prémélanger la phase G avant de l'ajouter dans le récipient principal ;
10. Ajouter la phase G à 35 C. Bien mélanger pour homogénéiser ;
11. Dans un bécher à part, préparer la phase H : saupoudrer NatrosolTM dans l'eau à température ambiante et homogénéiser tout en chauffant à 60 C;
12. Ajouter la phase H à 30 C. Bien mélanger pour homogénéiser ;
13. Arrêter à 25 C.

[164] La composition se présente ainsi sous forme d'une crème beurre rose, avec un pH compris entre 4,90 et 5,40 et une viscosité (DO) de 160000 ¨ 210000 cps (Brookfield RVT/Spindle D/5 RPM/1 minute/25 C).

[165] Exemple 8 : Formule d'un masque anti-âge

[166] [Tableau 6]
Ingrédients (Nom de marque) INCI %
w/w Phase A
Qsp Eau purifiée Aqua EDTA tétrasodique Tetrasodium EDTA
0,05 Phase B
N-HanceTM HP4OS guar Hydroxypropyl Guar 0,10 Phase C
Glycerin (and) Glyceryl Acrylate/Acrylic Acid LubrajelTM DV Free hydrogel 6,00 Copolymer Phase D
Si-TecTm GF 3096 silicone Dimethicone (and) Dimethiconol 12,00 Sodium Polyacrylate (and) Hydrogenated RapiThixTm A-60 polymer 2,40 Polydecene (and) Trideceth-6 Phase E
Phenoxyethanol (and) Caprylyl Glycol (and) Optiphen TM Plus preservative 1,50 Sorbic Acid Phase F
Surfin* 96 Alcohol Denat.
3,50 PF Cucumber & Aloe Parfum/Fragrance 0,50 Phase G
Extrait selon l'exemple 1 Butylen glycol (and) Lavandula Angustifolia 1,00 Flower Extract Achromaxyl TM ISR VVater/Aqua (and) Glycerin (and) Hydrolyzed biofunctional 3,00 Brassica Napus Seedcake Extract Mica (and) Cl 77891 (Titanium Dioxide) (and) Xirona Carribean Blue 1,00 Silica (and) Tin Oxide

[167] Procédé de préparation :
1. A 25 C, homogénéiser la phase A dans le récipient principal ;
2. A 25 C, saupoudrer dans la phase B et bien mélanger jusqu'à homogénéité ;
3. A 25 C, ajouter la phase C et bien mélanger jusqu'à homogénéité ;
4. Prémélanger la phase D dans un bécher à part et ajouter dans le récipient principal à 25 C;
5. A 25 C, ajouter la phase E dans le récipient principal et bien mélanger ;
6. Prémélanger la phase F et l'ajouter lentement. Bien mélanger jusqu'à
homogénéité ;
7. Prémélanger la phase G dans un bécher à part et ajouter dans le récipient principal jusqu'à homogénéité ;
8. Arrêter à 25 C.

[168] La composition se présente ainsi sous forme d'un gel crème avec des effets vert scintillant, avec un pH compris entre 5,30 et 5,80 et une viscosité (DO) de 70000- 100000 cps (Brookfield RVT/Spindle C/5 RPM/1 minute/25 C).

[169] Exemple 9 : Formule d'un Sérum

[170] [Tableau 7]
Ingrédients (Nom de marque) INCI (:)/0 w/w Phase A
Eau déminéralisée Aqua 87,40 Sodium Hyaluronate Sodium Hyaluronate 0,20 Sodium Polyacrylate (and) RapiThix¨ A-60 polymer Hydrogenated Polydecene (and) 0,40 Trideceth-6 Glycerin (and) Glyceryl Lubrajel¨ DV hydrogel Acrylate/Acrylic Acid Copolymer 6,00 (and) Propylene Glycol Glycerin (and) Glyceryl Acrylate/Acrylic Acid Copolymer Lubrajel¨ Oil hydrogel 1 00 (and) Propylene Glycol (and) ' PVM/MA Copolymer VVacker-Belsil* DM 100 Dimethicone -2,00 Cyclopentasiloxane NF Cyclopentasiloxane 0,50 Extrait selon l'exemple 1 Butylen glycol (and) Lavandula 1,00 Angustifolia Flower Extract Phenoxyethanol (and) Caprylyl Optiphen TM preservative 1,50 Glycol [1711 Procédé de préparation :
1. Ajouter de l'eau dans le récipient principal et commencer le mélange avec une pale d'hélice hi-10;
2. Ajouter le reste des ingrédients, l'un après l'autre tout en mélangeant entre chaque addition.
[172] La composition se présente ainsi sous forme d'un sérum lisse, semi-opaque, avec un pH compris entre 5,75 et 6,25 et une viscosité (DO) de 1,100 ¨ 1,400 cps (Brookfield RVT/spindle 3/20 rpm/25 C/1 minute).

Claims

Revendications [Revendication 1] Procédé d'obtention d'un extrait aqueux de parties aériennes de lavande, comprenant les étapes suivantes :
a) on met en présence les parties aériennes de lavande avec de l'eau ;
b) on ajoute de l'acide phytique à une concentration comprise entre 1 et 10 mM dans le mélange obtenu en a) à un pH compris entre 10 et 11 ;
c) on ajuste ensuite le pH du mélange obtenu en b) à une valeur comprise entre 6 et 8 ;
d) on purifie le mélange obtenu en c) de manière à éliminer la matière végétale solide résiduelle et obtenir un extrait brut aqueux purifié ; et e) on contrôle le pH et on le réajuste si nécessaire à une valeur comprise entre 6 et 8, préférentiellement entre 6 et 6,5.
[Revendication 2] Procédé selon la revendication 1 caractérisé en ce que dans l'étape a) on met en présence les parties aériennes de lavande, préalablement séchées puis broyées, avec de l'eau dans un rapport matière végétale / eau compris entre 3 et 20 % (poids/poids).
[Revendication 3] Procédé selon l'une des revendications 1 ou 2 caractérisé en ce que l'étape b) de traitement par l'acide phytique à une concentration de 3 mM et est réalisé sous agitation pendant un temps d'au moins lh et à une température comprise entre 20 et 80 C.
[Revendication 4] Procédé selon l'une des revendications 1 à 3 caractérisé
en ce que l'étape e) est précédée par au moins une filtration de l'extrait brut aqueux obtenu en d) et préférentiellement par des filtrations successives de l'extrait brut aqueux en abaissant le seuil de filtration de 20-50 pm à 0,10-0,30 pm.
[Revendication 5] Procédé selon l'une des revendications 1 à 4 caractérisé
en ce que les parties aériennes de lavande sont de l'espèce Lavandula angustifolia.
[Revendication 6] Extrait aqueux de parties aériennes de lavande enrichi en petits ARN d'une longueur d'au maximum 150 nucléotides, en sucres, en composés phénoliques et en acides organiques, dépourvu d'ADN, susceptible d'être obtenu par le procédé de l'une des revendications 1 à 5, caractérisé en ce qu'il comprend en poids du poids total de l'extrait, 10 à 30 g/kg de poids sec, contenant 2 à 10 g/kg de sucres, 100 à 1500 mg/kg d'acides organiques, 500 à 2000 mg/kg de composés phénoliques et 40 à 200 mg/kg d'ARN de petits poids moléculaires d'une longueur d'au maximum 150 nucléotides.
[Revendication 7] Extrait selon la revendication 6, caractérisé en ce qu'il est ultérieurement dilué dans un solvant et comprend en poids du poids total de l'extrait, 4 à 20 g/kg d'extrait sec, 0,5 à 10 g/kg de sucres, 50 à 700 mg/kg d'acides organiques, 50 à 1500 mg/kg de composés phénoliques et 10 à 100 mg/kg d'ARN de petits poids moléculaires d'une longueur d'au maximum 150 nucléotides.
[Revendication 8] Composition comprenant, en tant qu'ingrédient actif, une quantité efficace de l'extrait de l'une des revendications 6 ou 7, et un milieu physiologiquement acceptable.
[Revendication 9] Composition selon la revendication 8, caractérisée en ce que l'extrait est présent à une concentration comprise entre 0,05 et 5 % en poids du poids total de la composition et préférentiellement entre 0,1 à 1,0 %

en poids du poids total de la composition.
[Revendication 10] Composition selon l'une des revendications 8 ou 9, caractérisée en ce qu'elle est formulée pour être appliquée topiquement sur la peau, les phanères et le cuir chevelu.
[Revendication 11] Utilisation cosmétique de la composition de l'une des revendications 8 à 10 pour le soin de la peau, du cuir chevelu et des phanères et plus particulièrement pour protéger la peau des agressions externes et de l'oxydation, lutter contre les signes du vieillissement cutané, augmenter la photoprotection, éclaircir la peau, améliorer l'hydratation de la peau, renforcer la fonction barrière ou encore apaiser la peau.
[Revendication 12] Utilisation cosmétique de la composition de l'une des revendications 8 à 10 pour améliorer les mécanismes biologiques associés à
la réparation de la peau pendant la nuit.