Verfahren zur Gewinnung eines blutdrucksenkenden Stoffes. Früher ist von Dr. Ernst Wollheim fest gestellt worden, dass aus dem Harn ein blut drucksenkender Stoff - gewonnen werden kann. Es hat sich nun gezeigt, dass dieser Stoff auch aus der Hypophyse, und zwar speziell aus deren Hinterlappen gewonnen werden kann. Gemäss dem Verfahren der Er findung werden, wie bei der Gewinnung des blutdrucksteigernden und des uteruskontra- hierenden Stoffes, mindestens einzelne Teile von Hypophysen mittels Essigsäure, z. B. Eisessig oder verdünnte Essigsäure, extra hiert.
Aus dem Essigsäureextrakt wird das blutdrucksteigernde Hormon mittels Äther, das uteruskontrahierende mittels Petrol- äther gefällt. Das blutdrucksenkende Hor mon bleibt hierbei in der Essigsäure gelöst.
Es gelingt deshalb, den blutdrucksenkenden Stoff von den beiden andern genannten Hor monen erfindungsgemäss dadurch zu trennen, dass man den essigsauren Extrakt aus Hypo physe einer Behandlung mit Äther und Pe- troläther unterwirft. Der essigsaure Extrakt kann entweder gleichzeitig mit Äther und Petroläther behandelt werden oder zunächst mit dem einen und nachher mit dem andern dieser Lösungsmittel.
Besteht. kein Interesse für die gleichzeitige Gewinnung und Tren nung des blutdrucksteigernden und uterus- kontrahierenden Hormons, so behandelt man den essigsauren Extrakt zweckmässig unmit- telbar mit einem Gemisch von Äther und Pe- troläther, während im andern Falle die an sich bekannte Fällung der beiden genannten Hormone vorteilhaft nacheinander vorgenom men wird.
Erfindungsgemäss wird die nach der Fäl lung mit Äther und Petroläther verbleibende saure Flüssigkeit neutralisiert. Hierbei ent steht, wie Versuche ergaben, ein Nieder schlag, der den blutdrucksenkenden Wirk stoff enthält. Dieser kann entweder für sich, gegebenenfalls in wässriger Lösung, verwen det oder noch einer weiteren Reinigung unterzogen werden.
Zum Zwecke solcher Reinigung kann die durch die Neutralisation erhaltene Fällung zu nächst mit wenig Wasser behandelt werden, wodurch das essigsaure Alkalisalz in Lösung gebracht und so entfernt werden kann. Der verbleibende Bodensatz kann dann unter An wendung grösserer Wassermengen extrahiert werden, wobei der blutdrucksenkende Stoff in den Extrakt geht. Der so erhaltene Ex trakt kann dann noch einer weiteren Reini gung, beispielsweise durch Deaminierung, in an sich bekannter Weise unterworfen werden.
Der blutdrucksenkende Stoff, der in der angegebenen Weise aus Hypophysenhinter- lappen bezw. durch Verarbeitung ganzer Hypophyse gewonnen werden kann, zeichnet sich ebenso wie der aus dem Harn gewonnene durch seine Kochbeständigkeit aus. Diese er möglicht es auch, ihn gegebenenfalls von an dern Wirkstoffen, wie z. B. dem blutdruck steigernden Hormon, zu trennen, welches be kanntlich in saurer Lösung nicht koch beständig ist. Dieses Kochen kann in jedem Stadium des Verfahrens vorgenommen wer den.
<I>Ausführungsbeispiel:</I> 100 g Hypophysenhinterlappen vom Rind oder Schwein werden mehrmals mit Eisessig extrahiert und die erhaltenen Extrakte wer den alsdann mit einer Mischung von Äther und Petroläther gefällt. Die von der Fällung abfiltrierte dicke, syrupartige, starksaure Flüssigkeit wird nun mit der auf die zur Neutralisation der angewandten Menge Eis essig berechnete Menge Atznatron, zweck mässig in fester, gepulverter Form, geschüt telt. Der sich hierbei bildende Bodensatz ent hält den gesuchten blutdrucksenkenden Stoff.
Er wird zwecks Herauslösung des gebildeten Natriumacetates mit möglichst wenig, für dessen Lösung gerade ausreichenden Mengen Wasser versetzt. Der nach der Entfernung der Salzlösung verbleibende Rückstand wird nun mit grösseren Mengen Wasser, z. B. mit einem Liter Wasser, extrahiert. Dabei geht der blutdrucksenkende Stoff in Lösung. Die ser Extrakt kann nun, gegebenenfalls nach Einengung, entweder so wie er ist, benutzt werden, oder er kann auch durch Deaminie- rung mit Natriumnitrit und Schwefelsäure oder dergl. noch weiter gereinigt werden. Auch kann man diese Lösung auf Wunsch kochen, um so etwa noch vorhandene koch unbeständige Begleitstoffe zu zerstören.
Der so erhaltene blutdrucksenkende Stoff ist in konzentriertem Alkohol, Aceton, sowie ferner in Äther und Chloroform unlöslich, hingegen gut löslich in Wasser, Eisessig und 10%iger Trichloressigsäure; er ist nicht dialysabel und durch Kohle auch nicht ad- sorbierbar und kann daher auch durch Elek trodialyse gut gereinigt werden. Durch Pep sin-Salzsäure wird er verdaut, hingegen wird er durch Trypsin nicht zerstört.
Der blutdrucksenkende Stoff findet sich hauptsächlich im Hypophysenhinterlappen, während, soweit bisher feststellbar, der Vor derlappen nichts oder nur geringe Mengen davon enthält; indessen kann man für dessen Gewinnung natürlich auch die ganze Hypo physe der Verarbeitung unterwerfen.
Process for the production of a blood pressure lowering substance. Dr. Ernst Wollheim found that a blood pressure lowering substance - can be obtained from the urine. It has now been shown that this substance can also be obtained from the pituitary gland, specifically from its posterior lobe. According to the method of the invention, at least individual parts of the pituitary gland by means of acetic acid, eg. B. glacial acetic acid or dilute acetic acid, extra hiert.
The blood pressure-increasing hormone is precipitated from the acetic acid extract using ether, the uterine-contracting hormone using petroleum ether. The blood pressure lowering hormone remains dissolved in the acetic acid.
It is therefore possible, according to the invention, to separate the blood pressure lowering substance from the two other hormones mentioned by subjecting the acetic acid extract from the hypophysis to a treatment with ether and petroleum ether. The acetic acid extract can either be treated with ether and petroleum ether at the same time or first with one and then with the other of these solvents.
Consists. If there is no interest in the simultaneous extraction and separation of the blood pressure-increasing and uterus-contracting hormone, the acetic acid extract is best treated directly with a mixture of ether and petroleum ether, while in the other case the known precipitation of the two hormones mentioned is advantageously carried out one after the other.
According to the invention, the acidic liquid remaining after the precipitation is neutralized with ether and petroleum ether. As tests have shown, this results in a precipitate that contains the antihypertensive agent. This can either be used on its own, if necessary in aqueous solution, or it can be subjected to further purification.
For the purpose of such purification, the precipitate obtained by the neutralization can first be treated with a little water, whereby the acetic acid alkali salt can be brought into solution and thus removed. The remaining sediment can then be extracted using larger amounts of water, with the blood pressure lowering substance going into the extract. The extract obtained in this way can then be subjected to a further purification, for example by deamination, in a manner known per se.
The antihypertensive substance, which in the specified manner from posterior pituitary lobes respectively. can be obtained by processing whole pituitary gland, like that obtained from urine, is characterized by its resistance to boiling. This he also makes it possible, if necessary, of other active ingredients such. B. the blood pressure increasing hormone to separate, which be known to be in acidic solution is not boil-resistant. This cooking can be done at any stage of the process.
<I> Exemplary embodiment: </I> 100 g posterior pituitary lobes from beef or pork are extracted several times with glacial acetic acid and the extracts obtained are then precipitated with a mixture of ether and petroleum ether. The thick, syrupy, strongly acidic liquid filtered off by the precipitation is then shaken with the amount of caustic soda calculated for the neutralization of the amount of glacial acetic acid used, expediently in solid, powdered form. The sediment that forms in the process contains the blood pressure-lowering substance sought.
In order to dissolve the sodium acetate formed, it is mixed with as little water as possible, just enough to dissolve it. The residue remaining after the removal of the salt solution is then mixed with large amounts of water, e.g. B. with one liter of water extracted. The blood pressure lowering substance goes into solution. This extract can now, if necessary after concentration, either be used as it is, or it can also be further purified by deamination with sodium nitrite and sulfuric acid or the like. This solution can also be boiled if desired in order to destroy any accompanying substances that are still unstable.
The hypotensive substance obtained in this way is insoluble in concentrated alcohol, acetone, and also in ether and chloroform, but is readily soluble in water, glacial acetic acid and 10% trichloroacetic acid; it is not dialysable and cannot be adsorbed by charcoal and can therefore be cleaned easily by electri- cal dialysis. It is digested by pepsin hydrochloric acid, but is not destroyed by trypsin.
The antihypertensive substance is found mainly in the posterior lobe of the pituitary gland, while, as far as it has been ascertained so far, the anterior derlappen contains little or nothing of it; however, the entire hypophysis can of course also be subjected to processing in order to obtain it.