Procédé de préparation du sel sodique de pénicilline cristallisé. La présente invention se rapporte<B>à</B> un procédé de préparation du sel sodique de péni- eilline cristallisé<B>à</B> partir d'un bouillon de culture contenant la pénicilline<B>à</B> Fétat rela tivement impur.
On retire la pénicilline du bouillon de fer mentation en soumettant ce dernier, après J'avoir acidifié,<B>à</B> un certain nombre d'extrac tions et<B>à</B> d'autres traitements de purification, comme il est bien connu dans la pratique, le dernier stade consistant<B>à</B> sécher<B>à</B> basse tem pérature une solution aqueuse du sel sodique de pénicilline, obtenue par adjonction<B>à</B> l'ex trait organique d'un composé alcalin du so dium en solution aqueuse, pour obtenir le sel sodique de pénicilline sous forme amorphe, coloré et d'une pureté relative, la pureté et la coloration dépendant du degré de purification atteint.
Le sel sodique de pénicilline amorphe ainsi obtenu est non seulement moins pur et plus fortement coloré qu'il n'est désirable, mais il est relativement hydroscopique et ins table, de sorte qu'il est nécessaire de le con- -erver et de le transporter<B>à</B> des températures réduites pour éviter une perte notable d'acti vité.
On sait cependant que le sel sodique de pénicilline pur cristallisé est, beaucoup moins bydroscopique et beaucoup plus stable que le produit amorphe relativement impur et qu'il peut être conservé pendant de longues<B>pé-</B> riodes dans des récipients fermés<B>à</B> la tempé rature ordinaire sans perte appréciable de son aetivité. On a trouvé en outre que ce corps est beaucoup moins douloureux quand il est injecté et qu'il est par conséquent préférable pour les emplois cliniques.
De nombreuses méthodes (le cristallisation des sels de pénicilline ont été décrites. Ces méthodes consistent<B>à</B> dissoudre un sel solide de pénicilline dans un solvant organique, puis <B>à</B> refroidir la solution jusqu'à ce que la cris tallisation se produise. Les procédés de cristal lisation des sels de pénicilline utilisés jusqu'ici se caractérisent par le fait que la dissolution du sel solide de pénicilline dans un solvant se fait approximativement<B>à</B> la température ordi naire et, que la cristallisation<B>à</B> partir de la solution résultante se fait toujours<B>à</B> une tem pérature inférieure<B>à</B> la température de pré paration de la solution, par exemple en lais sant la solution pendant une nuit dans un réfrigérateur.
On a trouvé maintenant que l'emploi de température élevées pour la cristallisation du sel sodique de pénicilline augmente notable ment le rendement en sel cristallisé et, en outre, réduit le temps nécessaire<B>à,</B> la cristalli sation.
Le procédé selon l'invention, pour la pré paration du sel sodique de pénicilline cristal lisé, est caractérisé en ce qu'on extrait,<B>à</B> Faide d'un solvant organique, la pénicilline libre contenue dans un bouillon de culture acidifié, en ce qu'on transforme la pénicilline libre en le sel sodique de pénicilline par adjonction, d'un composé alcalin du sodium, en ce qu'on recueille le sel sodique de pénicilline impur sous forme solide et amorphe, en<B>ce</B> qu'on mé lange ensuite, sous agitation, ce sel amorphe avec au moins un solvant organique,<B>à</B> une température ne dépassant pas<B>70" C,</B> en ce qu'on maintient le mélange<B>à</B> une température comprise entre 40 et<B>701> C,</B> tout en poursui vant l'agitation pendant la cristallisation du sel sodique de pénicilline,
et en ce qu'on sé pare ledit sel cristallisé formé. Le solvant or ganique peut être un alcool aliphatique mono valent ayant de<B>3 à 6</B> atomes de carbone, l'acétone, la méthyl-éthyl-cétone, des mélanges de ces solvants, et des mélanges de ces sol vants avec des esters carboxyliques alipha tiques.
Le rapport des poids de sel solide amorphe et de solvant organique -utilisés peut être compris entre 2:10 et<B>7:10,</B> la tempéra ture de mélange peut être comprise entre 20 et 601, <B>C,</B> le mélange pouvant être amené en suite<B>à</B> une température comprise de préfé- renee entre 40 et<B>600 C.</B> Parmi les solvants organiques qui peuvent être utilisés, on peut citer, outre l'acétone et la méthyl-éthyl-cétone, <B>le</B> propanol normal et l'isopropanol, le butanol. normal, l'alcool amylique,
l'hexanol normal et les mélanges tels que le mélange butanol-acétate d'éthyle, le mélange acétone-acétate d'éthyle et le mélange butanol normal-acétate de butyle.
Il est préférable que le solvant utilisé soit pratiquement anhydre, la présence d'eau pen dant la cristallisation réduisant le rendement en sel sodique de pénicilline cristallisé.
Le sel sodique amorphe de pénicilline peut être recueilli par dessiccation<B>à</B> basse tempé rature ou par pulvérisation de sa solution aqueuse. Quand l'activité de ce sel est infé rieure<B>à 600</B> imitésimg, la cristallisation peut être inhibée par les impuretés présentés, et il est préférable que le sel ait une activité d'au moins<B>800</B> unités/mg.
Le rapport du sel sodique amorphe de pénicilline au solvant organique utilisé est compris de préférence entre 20 et<B>70 g</B> de sel pour<B>100</B> millilitres de solvant. On obtient le rendement maximum en général avec une pro portion de 40<B>g</B> de sel pour<B>100</B> millilitres-de solvant. Quand on utilise une plus forte pro portion de sel sodique amorphe par rapport au solvant, par exemple de 4:<B>10 à 7: 10</B> en poids, il est préférable de diluer le mélange avec un solvant organique approprié frais pour que le rapport soit inférieur<B>à</B> 4<B>à 10,</B> avant de séparer le sel cristallisé de la liqueur- mère, pour éviter des difficultés lors de la filtration.
Quand un rapport supérieur<B>à 7: 10</B> est -utilisé, le mélange tend<B>à</B> devenir trop vis queux pour permettre un brassage efficace, et il est nécessaire de diluer le mélange avec un solvant organique.
Les cristaux de sel sodique de pénicilline peuvent être séparés du solvant organique sans refroidissement, par toute méthode appropriée telle qu'une filtration ordinaire ou au vide, ou une centrifugation, bien que la séparation des cristaux puissent se faire aussi après refroidissement. La masse cristalline sé parée peut être débarrassée de la liqueur-nière par lavage au moyen de petites quantités du solvant organique utilisé primitivement.
On petit effectuer un autre lavage en utilisant. de petites quantités d'un solvant inerte<B>à</B> bas point d'ébullition, par exemple de lacétate d'éthyle ou de l'éther de pétrole, et éliminer l'excès de solvant dit sel sodique de pénieil- line en chauffant doucement dans -une étuve <B>à</B> vide.
Le sel sodique de pénicilline cristallisé obtenu dans les meilleures conditions a une couleur jaune pâle et une activité d'au moins <B>1500</B> unitésimg, le rendement de l'opération étant compris entre 60 et 90% selon la pureté du sel amorphe obtenu<B>à</B> partir du bouillon et la nature des impuretés.
Ainsi, en passant par un sel sodique amorphe de pénicilline d'une activité de<B>800</B> unités<B>'</B> /mg seulement, le rende ment atteint approximativement 601/o, tandis qu#-an sel amorphe ayant une activité clé <B>1150</B> -uinitéslmg donne un rendement d'environ 900/0. Le sel cristallisé obtenu petit être facile ment recristallisé pour donner, avec un haut rendement, un sel sodique de pénicilline cris tallisé blanc,
d'une activité de<B>1600</B> unités1mg. La recristallisation peut se faire le plus avan tageusement en dissolvant le sel sodique cris tallisé dans une solution aqueuse de butanol normal et en ajoutant<B>à</B> la solution du buta- nol normal sec, de préférence par deux fois ou plus et<B>à<I>0"</I> C</B> environ, pour amener le butanol normal<B>à</B> une concentration de<B>95 à 99</B> % approximativement, la cristallisation du sel sodique de pénicilline se produisant alors.
On a constaté quesi l'addition de butanol normal sec se poursuit jusqu'à une concentra tion finale en butanol normal de<B>97</B> % en vo lume, et si l'on veille<B>à</B> ce que la cristallisation commence avec une teneur en eau aussi haute que possible et que les cristaux se séparent en aiguilles, on peut obtenir dans ce stade de cristallisation, et avec Lin rendement de<B>72 à</B> <B>77</B> %, des cristaux blancs de sel sodique de pénicilline d'une pureté de 10011/o pratique ment. Ce procédé donne normalement des aiguilles, niais il peut être nécessaire parfois d'amorcer la cristallisation.
Quand on poursuit l'addition de butanol normal, sec jusqu'à une concentration finale de<B>99</B> % en volume, le rendement en substance cristalline peut être augmenté, mais le produit obtenu est plas eo- loré. Comme la liqueur-mère séparée<B>à</B> ce stade de l'opération peut être utilisée<B>à</B> nouveau dans un stade antérieur du procédé d'isole ment de la pénicilline, il n'y a pas d'avantage <B>A,</B> continuer l'addition de butanol normal sec au-delà d'une concentration de<B>97</B> % en vo- ]unie.
La recristallisation peut se faire aussi en dissolvant les cristaux dans une solution aqueuse d'acétone, puis en ajoutant de Faeé- tone sèche jusqu'à ce que la concentration atteigne<B>99</B> 1/o en volume ou s'approche de cette valeur. La substance recristallisée ainsi obtenue n'a cependant pas la blancheur abso lue de celle obtenue quand on utilise le buta- nol normal.
<B>Il</B> faut noter que les solvants organiques utilisés dans le présent procédé ne sont pas, strictement parlant, des solvants du sel sodi que de pénicilline, mais il est probable que le sel cristallisé est pratiquement insoluble dans lesdits solvants organiques, tandis que le sel amorphe est soluble. C'est ainsi que si l'on brasse le sel sodique amorphe de pénicilline avec un de<B>ces</B> solvants organiques, il semble passer en solution, et le sel cristallisé est pré cipité de cette solution. Dans certains cas, on obtient une solution complète du sel amorphe de laquelle précipite le sel cristallisé, tandis que, dans d'autres cas, il n'y a pas de limite nette entre la dissolution du sel amorphe et la précipitation du sel cristallisé, les deux pro cessus s'effectuant apparemment. en même temps.
Quand le sel amorphe est brassé dans le solvant organique<B>à</B> -une température infé rieure<B>à</B> 400<B>C,</B> on obtient ordinairement une solution complète et, en élevant la tempéra ture<B>à</B> une valeur comprise entre 40 et<B>700 C,</B> la cristallisation se produit. Si, par ailleurs, on brasse le sel amorphe dans le solvant<B>à</B> une température supérieure<B>à</B> 40"<B>C</B> et si on con tinue le brassace <B>à</B> cette température, la disso lution du sel amorphe et la précipitation du sel cristallisé se produisent ensemble.
Il n'est pas possible, cependant, de donner une règle générale pour tous les cas et il est bien connu que le comportement de la matière première <B>à</B> base de pénicilline varie d'une charge<B>à</B> l'autre, selon la nature des impuretés pré sentes.<B>Il</B> f aut noter cependant qu'il n'y a au- eune différence significative dans le rende ment obtenu selon que le sel amorphe a donné une solution complète ou non. Il est essentiel de continuer le brassage pendant les stades de dissolution et de cristallisation.
En général, la vitesse de cristallisation augmente avec la tem pérature, et. on a observé qu'il est avantageux de brasser le mélange du sel sodique de péni cilline et du solvant organique pendant un temps minimum de<B>30</B> minutes.
Les exemples suivants se réfèrent<B>à</B> des mises en oeuvre du procédé selon l'invention. L'activité de la pénicilline est donnée en uni tés internationales, et les pourcentages sont donnés en poids, sauf indication contraire. Les expressions parties en poids et parties en volume utilisées dans les exemples ont entre elles la même relation que les termes kilo gramme et elitre . Rxemple <B>1:</B> On prépare le sel sodique de pénicilline amorphe<B>à</B> partir d'un bouillon de culture contenant la pénicilline, selon la technique habituelle.
On ajoute lentement et en brassant <B>1-0</B> parties en poids de ce sel sodique de péni cilline amorphe séché<B>à</B> basse température et de couleur jaune brunâtre,<B>à 25</B> parties en volume dacétone sèche<B>à</B> 200<B>C,</B> et on continue de brasser<B>à</B> cette température pendant <B>1.</B> heure. Pendant ce temps, la dissolution weffectue et il ne se produit pas de cristalli sation. En élevant lentement la température<B>à</B> <B>500 C,</B> les cristaux commencent<B>à</B> se séparer et la cristallisation est complète après une courte période. Les cristaux sont séparés par filtra tion<B>à</B> chaud, lavés avec de petites quantités d'acétone sèche et séchés.
On obtient., avec un rendement de<B>71</B> %, un sel sodique de péni cilline cristallisé jaune, d'une activité de 1420 unités./mg.
<I>Exemple</I><B>29:</B> On ajoute lentement et en brassant<B>10</B> par ties en poids du sel amorphe obtenu comme dans l'exemple<B>1, à 25</B> parties en volume d'un mélange contenant<B>25</B> 11/o en volume de butanol normal et 75% en volume d'acétate de butyle, <B>à</B> 201, <B>C.</B> Après addition totale du sel solide, on élève la température<B>à 60"</B> C et la cristalli-. sation commence presque immédiatement. Les cristaux'sont séparés par filtration, lavés avec de petites quantités du même mélange de sol vants et séchés.
On obtient, avec un rende ment de<B>69</B> 11/o en poids, un sel sodique de pénicilline cristallisé, jaune pâle, d'une acti vité de<B>1500</B> unitésimg. <I>Exemple</I> 3: On ajoute lentement et en brassant<B>10</B> par ties en poids du sel amorphe de l'exemple<B>1,</B> <B>à 25</B> parties en volume de propanol normal sec,<B>à</B> 201, <B>C.</B> On élève lentement la tempéra ture de la solution<B>à</B> 601, C, et la cristallisation est complète après une courte période de bras sage<B>à</B> cette température.
Les cristaux sont séparés par filtration, lavés avec de petites quantités de propanol normal sec, puis avec de petites quantités d'acétate d'éthyle sec, et séchés dans une 'étuve<B>à</B> vide. On obtient, avec un rendement de 67%, un sel sodique de pénicilline cristallisé, jaune très pâle, d'une activité de 1480 unités/mg. <I>Exemple 4:
</I> On ajoute lentement et en brassant<B>10</B> par ties en poids du sel sodique de pénicilline amorphe, obtenu comme dans l'exemple<B>1</B> et séché<B>à</B> basse température, de couleur jaune foncé et d'une activité de<B>1050</B> unités/mg, <B>à</B> <B>25</B> parties en volume de butanol normal sec,, <B>à 60" C.</B> La cristallisation commence immé- diatementet, après une très courte période de brassage, on sépare les cristaux par filtration <B>à</B> chaud, on les lave avec de petites quantités de butanol normal sec et on les sèche.
On ob tient, avec un rendement de<B>60</B> %, un sel so dique de pénicilline cristallisé jaune pâle et d#une activité de<B>1530</B> 1-initéslni,-. <I>Exemple</I> 5: On ajoute lentement et en brassant<B>10</B> par ties en poids dun sel sodique de pénicilline amorphe obtenu selon la technique usuelle et séché<B>à</B> basse température, jaune foncé, deune activité de<B>1100</B> unitéslmo, et contenant 70% de la pénicilline sous forme de pénicilline C' selon une détermination chromatographique,
<B>à</B> <B>25</B> parties en volume de butanol normal sec, <B>à</B> 20"<B>C.</B> Après addition totale du sel, on élève la température<B>à</B> 501, <B>C</B> tout en continuant le brassage. On sépare les cristaux par filtration sur un entonnoir de Buchner et on les lave avec de petites quantités de butanol normal sec, puis avec de petites quantités d'acétone sèche.
Après séchage a-Li vide, on obtient, avec un rendement de<B>70</B> 1/o, un sel sodique de péni cilline cristallisé jaune pâle, d'une activité clé <B>1.550</B> unités/ing et contenant 801/o de la péni- eilline sous forme de pénicilline Cr, selon une détermination chromatographique. En main tenant cette substance<B>à 1000.C</B> dans un flacon ouvert pendant six jours,
Facivité n'est réduite seulement que de 4%.
On recristallise 2 parties en poids du sel obtenu en le dissolvant dans le volume mini- muni d'une solution aqueuse d#aeétone <B>à</B> 901/o en volume,<B>à</B> 200<B>C,</B> et en ajoutant lentement de l'acétone sèche jusqu'à une concentration en acétone de<B>99</B> % en volume. On sépare les cristaux obtenus par filtration, on les lave avec de petites quantités d'acétone sèche et on les sèche.
On obtient, avec un rendement de 681/o basé sur la matière cristalline jaune pâle originale, un sel sodique de pénicilline cris tallisé pratiquement incolore, ayant une aeti- vité de 1600 unités/mg et contenant 90% de la pénicilline sous forme de pénicilline<B>G</B> selon une détermination chromatographique.
<I>Exemple,<B>6:</B></I> On ajoute lentement et en brassant<B>10</B> par ties en poids d'un sel sodique de pénicilline amorphe jaune foncé, obtenu selon la techni que usuelle, d'une activité de<B>100</B> unitésimg, <B>à</B> <B>17</B> parties en vol-Lime de butanol normal sec,<B>à</B> <B>50,<I>C.</I></B> Après cristallisation complète, on ajoute encore<B>33</B> parties en volume de butanol normal sec,<B>à</B> 201, <B>C,</B> pour réduire la viscosité. On sépare les cristaux par filtration, on les lave avec de pe tites, quantités de butanol normal sec, et on les sèche.
On obtient, avec un rendement de 801/o, un sel sodique de pénicilline cristallisé jaune pâle, ayant une activité de<B>1550</B> unitésimg. <I>Exemple<B>7:</B></I> On ajoute lentement et en brassant<B>10</B> par ties en poids d'un sel sodique de pénicilline amorphe jaune foncé, obtenu selon la tech nique usuelle, séché par pulvérisation et ayant une activité de<B>970</B> unités/mg, <B>à 16</B> parties en volume de butanol normal sec,<B>à 550 C.</B> On continue de brasser pendant<B>1</B> heure<B>à</B> cette température pouir achever la cristallisation, et on ajoute<B>32</B> parties en volume de butanol normal sec,
<B>à</B> 201, <B>C.</B> Les cristaux sont séparés par filtration, lavés avec de petites quantités de butanol normal sec, puis avec de petites quantités d'acétate d'éthyle sec, et finalement séchés au vide. On obtient, avec un rendement de 741/o, un sel sodique de pénicilline cristal lisé jaune pâle, ayant une activité de<B>1600</B> uni- tésimg.
On répète le même procédé dans les mêmes conditions, sauf qu'on utilise successivement un mélange sec de niéthyl-éthyl-cétone, et #I d'acétate de butyle et un mélange sec de bu- tanol normal et d'alcool amylique<B>à</B> la place <B>du</B> butanol normal sec utilisé précédemment. Le produit obtenu a -une couleur très pâle.
<I>Exemple<B>8:</B></I> On ajoute lentement et en brassant<B>10</B> par ties en poids d'un sel sodique de pénicilline amorphe obtenu selon la technique usuelle et séché<B>à</B> basse température, jaune foncé, d'une pureté de 561/o, <B>à 25</B> parties en volume d'al cool amylique normal sec,<B>à</B> 200<B>C.</B> Quand tout le sel a été ajouté et s'est dissous dans le sol vant, on élève la température<B>à 600</B> C, tout en continuant<B>à</B> brasser, jusqu'à ce que la cris tallisation se produise. Le sel cristallisé est séparé par filtration de la solution chaude, lavé avec de petites quantités d'alcool amyli- que normal sec, puis avec de l'acétone sèche.
Le produit est séché au vide et donne, avec un rendement de 74%, un sel sodique de péni- cilline cristallisé faiblement coloré, d'une pureté de 94(1/o. Le sel est recristallisé en dis solvant une partie en poids dans 2 parties en volume d'une solution aqueuse de butanol normal contenant 12 1/o d'eau en volume,
et en ajoutant lentement du butanol normal sec, en brassant, jusqu'à une concentration finale de butanol dans le mélange de 97% en volume. Le sel sodique de pénicilline cristallisé ainsi obtenu est séparé par filtration. <I>Exemple<B>9:</B></I> On brasse dans<B>61</B> litres de butanol nor mal sec 24<B>688 g</B> d'un mélange de sels sodi ques amorphes de pénicilline obtenus selon la technique usuelle, mélange comprenant<B>16 589 g</B> d'un sel ayant une activité de 1420 unitéslmg et<B>8099 g</B> d'un sel ayant une activité de <B>1390</B> unitésimg, soit au total 34914 millions d'unités de pénicilline.
On élève la tempéra ture<B>à 500 C.</B> La cristallisation est complète après brassage pendant une heure et demie<B>à</B> cette température, et les cristaux sont séparés par filtration, lavés avec du butanol normal sec, puis avec une petite quantité d'acétate d'éthyle sec, et finalement séchés. On obtient 21540<B>g</B> d'un sel sodique de pénicilline cris tallisé ayant une activité de<B>1551</B> unitésimg, soit un rendement de<B>96</B> %.
On dissout<B>5520 g</B> du-sel cristallisé dans <B>8</B> litres d'-une solution aqueuse d'acétone con tenant 201/o d'eau en vol-Lime. On ajoute<B>à</B> la solution<B>90</B> litres d'acétone sèche, en brassant continuellement, ce qui amène la concentra tion de la solution en acétone<B>à</B> 98% environ en volume. On laisse reposer le mélange pen dant 12 heures, en brassant par intermittence, puis on sépare les cristaux par filtration, on les lave avec de lacétone et on les sèche.
On obtient<B>375,3 g</B> d'un sel sodique de pénicilline cristallisé blanc, ayant une activité de<B>1650</B> unités/mg, et ainsi le rendement en sel sodique de pénicilline recristallisé pur, basé sur le sel amorphe, est de 76%.
La liqueur-mère du stade de recristallisa- tion contient<B>1555</B> millions d'unités de péni cilline, et les eaux de lavage du sel contien nent 344 millions d'unités. On peut en récu- pérer la pénicilline et ainsi le rendement total du procédé est de<B>95</B> Vo. <I>Exemple</I> 10..
<B>On</B> ajoute lentement et en brassant<B>10</B> par ties en poids d'un sel sodique de pénicilline amorphe jaune foncé obtenu selon la techni- que usuelle, d'une pureté de<B>83</B> %, au solvant organique indiqué dans la colonne<B>1</B> de la table, suivante, les parties en volume du sol vant étant indiquées dans la colonne 2 et la température dans la colonne<B>3.</B> Quand tout le sel a été ajouté, la température est maintenue <B>à</B> la valeur indiquée dans la colonne 4, et le mélange est encore brassé pendant une heure. Le sel sodique de pénicilline cristallisé est sé paré par filtration de la solution chaude et lavé avec de petites quantités du solvant orga nique employé, et ensuite avec de l'acétone sèche. Le produit est finalement séché.
On obtient un sel sodique de pénicilline cristallisé de couleur très pâle, d'une pureté indiquée en '/o du poids dans la colonne<B>5,</B> et avec un rendement indiqué en Q/o dans la colonne<B>6.</B>
EMI0006.0018
Colonne <SEP> Colonne <SEP> Colonne <SEP> Colonne <SEP> Colonne <SEP> Colonne
<tb> <B>1</B> <SEP> 2 <SEP> <B>3</B> <SEP> 4 <SEP> <B>5 <SEP> 6</B>
<tb> Solvant <SEP> Parties <SEP> Temp. <SEP> de <SEP> Temp.
<SEP> de <SEP> Pureté <SEP> Rendement
<tb> organique <SEP> en <SEP> <B>vol.</B> <SEP> dissolu <SEP> cristal.
<tb> en <SEP> <B>0 <SEP> C</B> <SEP> en <SEP> <B>0 <SEP> 0</B>
<tb> <B>1</B> <SEP> Butanol <SEP> normal <SEP> <B>100 <SEP> 50 <SEP> 50 <SEP> 88 <SEP> 90</B>
<tb> 2 <SEP> <B> <SEP> 50 <SEP> 50 <SEP> 50 <SEP> 93 <SEP> 97</B>
<tb> <B>3 <SEP> <SEP> 25 <SEP> 50 <SEP> 50 <SEP> 92 <SEP> 96</B>
<tb> 4 <SEP> <B> <SEP> 16* <SEP> 50 <SEP> 50 <SEP> 93 <SEP> 100</B>
<tb> <B>5 <SEP> <SEP> 12,
5' <SEP> 50 <SEP> 50 <SEP> 9c <SEP> 99</B>
<tb> <B>6 <SEP> <SEP> 10* <SEP> 50 <SEP> 50 <SEP> 88</B> <SEP> 94
<tb> <B>7 <SEP> <SEP> 25 <SEP> 60</B> <SEP> 40 <SEP> <B>90</B> <SEP> 94
<tb> <B>8 <SEP> <SEP> 25 <SEP> 35 <SEP> 50 <SEP> 93 <SEP> 100</B>
<tb> <B>9</B> <SEP> Hexanol <SEP> normal <SEP> <B>25 <SEP> 50 <SEP> 50 <SEP> 87 <SEP> 98</B>
<tb> <B>10 <SEP> <SEP> - <SEP> 25 <SEP> 60 <SEP> -10 <SEP> 85 <SEP> 96</B>
<tb> <B>Il</B> <SEP> Alcool <SEP> amylique
<tb> normal <SEP> <B>25 <SEP> 50 <SEP> 50 <SEP> 88 <SEP> 97</B>
<tb> 12 <SEP> Méthyl-éthyl,
<tb> cétone <SEP> <B>25 <SEP> 50 <SEP> 50 <SEP> 90 <SEP> 100</B>
<tb> Le <SEP> mélange <SEP> du <SEP> sel <SEP> sodique <SEP> de <SEP> pénicilline <SEP> cristallisé <SEP> et <SEP> de <SEP> butanol <SEP> normal <SEP> est <SEP> dilué <SEP> encore
<tb> avec <SEP> <B>25</B> <SEP> parties <SEP> en <SEP> volume <SEP> de <SEP> butanol <SEP> normal <SEP> avant <SEP> filtration
EMI0007.0001
No. <SEP> Colonne <SEP> Colonne <SEP> Colonne <SEP> Colonne <SEP> Colonne <SEP> Colonne
<tb> <B>1</B> <SEP> 2 <SEP> <B>8</B> <SEP> 4 <SEP> <B>5 <SEP> 6</B>
<tb> Solvant <SEP> Parties <SEP> Temp. <SEP> de <SEP> Temp. <SEP> de <SEP> Pureté <SEP> Rendement
<tb> organique <SEP> en <SEP> vol. <SEP> dissol.
<SEP> cristal <SEP> <B>* <SEP> % <SEP> %</B>
<tb> en <SEP> en <SEP> <B>0 <SEP> C</B>
<tb> <B>13</B> <SEP> Butanol <SEP> normal méthyl-méthyl cétone <SEP> <B>* <SEP> * <SEP> 25 <SEP> 50 <SEP> 50 <SEP> 93 <SEP> 99</B>
<tb> 14 <SEP> Butanol <SEP> normal acétate <SEP> d'éthyle <SEP> <B>*' <SEP> 25 <SEP> 50 <SEP> 50 <SEP> 92 <SEP> 98</B>
<tb> <B>15</B> <SEP> Butanol <SEP> normal acétate <SEP> d'amyle<B>** <SEP> 25 <SEP> 50 <SEP> 50 <SEP> 89 <SEP> 99</B>
<tb> Le <SEP> mélange <SEP> comprend <SEP> <B>50%</B> <SEP> de <SEP> chaque <SEP> solvant.
Process for preparing the sodium salt of crystallized penicillin. The present invention relates <B> to </B> a process for preparing the sodium salt of penileillin crystallized <B> from </B> from a culture broth containing penicillin <B> to </ B > Relatively impure state.
Penicillin is removed from the fermentation broth by subjecting the latter, after acidification, to <B> </B> a number of extractions and <B> </B> other purification treatments. , as is well known in the art, the last stage consisting in <B> in </B> drying <B> at </B> low temperature an aqueous solution of the sodium salt of penicillin, obtained by adding <B> to </B> the organic extract of an alkaline sodium compound in aqueous solution, to obtain the sodium salt of penicillin in amorphous form, colored and of relative purity, the purity and the coloring depending on the degree of purification achieved.
The amorphous penicillin sodium salt thus obtained is not only less pure and more strongly colored than desirable, but it is relatively hydroscopic and ins table, so it is necessary to preserve and preserve it. transport <B> to </B> reduced temperatures to avoid a noticeable loss of activity.
It is known, however, that the crystallized pure penicillin sodium salt is much less bydroscopic and much more stable than the relatively impure amorphous product and that it can be stored for long <B> periods </B> in closed containers. <B> at </B> ordinary temperature without appreciable loss of activity. It has further been found that this body is much less painful when injected and therefore preferable for clinical uses.
Many methods (crystallization of penicillin salts have been described. These methods consist of <B> </B> dissolving a solid salt of penicillin in an organic solvent, then <B> </B> cooling the solution until crystallization to occur. The methods of crystallizing penicillin salts used heretofore are characterized by the fact that the dissolution of the solid salt of penicillin in a solvent takes place approximately <B> at </B> the ordinary temperature and, that the crystallization <B> from </B> from the resulting solution always takes place <B> at </B> a temperature <B> below </B> the temperature of preparation of the solution, for example by leaving the solution overnight in a refrigerator.
It has now been found that the use of elevated temperatures for crystallization of the sodium salt of penicillin markedly increases the yield of crystallized salt and furthermore reduces the time required for crystallization.
The process according to the invention, for the preparation of the sodium salt of crystallized penicillin, is characterized in that the free penicillin contained in a broth is extracted <B> with </B> using an organic solvent. of acidified culture, in that the free penicillin is converted into the sodium salt of penicillin by addition of an alkaline sodium compound, in that the impure sodium salt of penicillin is collected in solid and amorphous form, in < B> ce </B> which is then mixed, with stirring, this amorphous salt with at least one organic solvent, <B> at </B> a temperature not exceeding <B> 70 "C, </ B > in that the mixture is maintained at <B> at </B> a temperature between 40 and <B> 701> C, </B> while continuing to stir during crystallization of the sodium salt of penicillin,
and in that said crystallized salt formed is separated. The organic solvent can be a mono valent aliphatic alcohol having <B> 3 to 6 </B> carbon atoms, acetone, methyl ethyl ketone, mixtures of these solvents, and mixtures of these sol vants with aliphatic carboxylic esters.
The weight ratio of amorphous solid salt and organic solvent used can be between 2:10 and <B> 7:10, </B> the mixing temperature can be between 20 and 601, <B> C , </B> the mixture being able to be brought subsequently <B> to </B> a temperature preferably between 40 and <B> 600 C. </B> Among the organic solvents which can be used, there is may cite, besides acetone and methyl ethyl ketone, <B> </B> normal propanol and isopropanol, butanol. normal, amyl alcohol,
normal hexanol and mixtures such as butanol-ethyl acetate, acetone-ethyl acetate and normal butanol-butyl acetate.
It is preferable that the solvent used is substantially anhydrous, the presence of water during crystallization reducing the yield of crystallized penicillin sodium salt.
The amorphous sodium salt of penicillin can be collected by drying at <B> at </B> low temperature or by spraying its aqueous solution. When the activity of this salt is less than <B> 600 </B> imitatedimg, crystallization can be inhibited by the impurities presented, and it is preferable that the salt has an activity of at least <B> 800 < / B> units / mg.
The ratio of the amorphous sodium salt of penicillin to the organic solvent used is preferably between 20 and <B> 70 g </B> of salt per <B> 100 </B> milliliters of solvent. The maximum yield is generally obtained with a proportion of 40 <B> g </B> of salt for <B> 100 </B> milliliters of solvent. When using a larger proportion of amorphous sodium salt relative to the solvent, for example 4: <B> 10 to 7:10 </B> by weight, it is preferable to dilute the mixture with a suitable fresh organic solvent. so that the ratio is <B> to </B> 4 <B> to 10, </B> before separating the crystallized salt from the mother liquor, to avoid difficulties during filtration.
When a higher <B> than 7:10 </B> ratio is used, the mixture tends <B> to </B> become too viscous to allow efficient mixing, and it is necessary to dilute the mixture with a organic solvent.
The penicillin sodium salt crystals can be separated from the organic solvent without cooling, by any suitable method such as ordinary or vacuum filtration, or centrifugation, although the separation of the crystals can also be done after cooling. The separated crystalline mass can be freed from the liquor-niere by washing with small amounts of the organic solvent originally used.
We can do another wash using. small amounts of an inert, low-boiling <B> </B> solvent, for example ethyl acetate or petroleum ether, and remove the excess solvent called sodium salt of penieil- line by heating gently in an empty <B> </B> oven.
The crystallized sodium salt of penicillin obtained under the best conditions has a pale yellow color and an activity of at least <B> 1500 </B> img units, the yield of the operation being between 60 and 90% depending on the purity of the product. amorphous salt obtained <B> from </B> from the broth and the nature of the impurities.
Thus, passing through an amorphous sodium salt of penicillin with an activity of <B> 800 </B> units <B> '</B> / mg only, the yield is approximately 601 / o, while # - An amorphous salt having a key <B> 1150 </B> -uinitieslmg activity gives a yield of about 900/0. The crystallized salt obtained can be easily recrystallized to give, with a high yield, a sodium salt of white crystallized penicillin,
an activity of <B> 1600 </B> 1mg units. Recrystallization can most advantageously be done by dissolving the crystallized sodium salt in an aqueous solution of normal butanol and adding <B> to </B> the solution of dry normal butanol, preferably two or more times. and <B> to approximately <I> 0 "</I> C </B>, to bring the normal butanol <B> to </B> a concentration of approximately <B> 95 to 99 </B>%, crystallization of the sodium salt of penicillin then taking place.
It has been found that if the addition of dry normal butanol is continued up to a final normal butanol concentration of <B> 97 </B>% by volume, and if care is taken <B> to </ B > that the crystallization begins with a water content as high as possible and that the crystals separate in needles, one can obtain in this stage of crystallization, and with the yield of <B> 72 to </B> <B> 77 </B>%, white crystals of sodium penicillin salt with a purity of practically 10011 / o. This process normally produces needles, but sometimes it may be necessary to initiate crystallization.
When the addition of normal, dry butanol is continued to a final concentration of <B> 99 </B>% by volume, the yield of crystalline substance may be increased, but the product obtained is more colored. As the mother liquor separated <B> at </B> this stage of the operation can be used <B> again </B> in an earlier stage of the penicillin isolation process, there is no has no advantage <B> A, </B> continue the addition of normal dry butanol beyond a concentration of <B> 97 </B>% in total.
Recrystallization can also be done by dissolving the crystals in an aqueous solution of acetone, then adding dry faecone until the concentration reaches <B> 99 </B> 1 / o by volume or s'. approaching this value. The recrystallized substance thus obtained, however, does not have the absolute whiteness of that obtained when normal butanol is used.
<B> It </B> should be noted that the organic solvents used in the present process are not, strictly speaking, solvents for the sodium salt of penicillin, but it is probable that the crystallized salt is practically insoluble in said organic solvents. , while the amorphous salt is soluble. Thus, if the amorphous sodium salt of penicillin is stirred with one of these organic solvents, it appears to go into solution, and the crystallized salt is precipitated from this solution. In some cases, a complete solution of the amorphous salt is obtained from which the crystallized salt precipitates, while in other cases there is no clear limit between the dissolution of the amorphous salt and the precipitation of the crystallized salt, both processes apparently taking place. at the same time.
When the amorphous salt is stirred in the organic solvent <B> at </B> -a temperature below <B> </B> 400 <B> C, </B> a complete solution is usually obtained and, in raising the temperature <B> to </B> a value between 40 and <B> 700 C, </B> crystallization occurs. If, on the other hand, the amorphous salt is stirred in the solvent <B> at </B> a temperature greater than <B> than </B> 40 "<B> C </B> and if the brewing is continued < At </B> this temperature, the dissolution of the amorphous salt and the precipitation of the crystallized salt occur together.
It is not possible, however, to give a general rule for all cases and it is well known that the behavior of the penicillin base <B> to </B> raw material varies from load <B> to </B> the other, depending on the nature of the impurities present. <B> It </B> should be noted, however, that there is no significant difference in the yield obtained depending on whether the amorphous salt gave a complete solution or not. It is essential to continue stirring during the dissolution and crystallization stages.
In general, the rate of crystallization increases with temperature, and. it has been observed that it is advantageous to stir the mixture of the sodium salt of penicillin and the organic solvent for a minimum time of <B> 30 </B> minutes.
The following examples refer <B> to </B> implementations of the method according to the invention. The activity of penicillin is given in international units, and the percentages are given by weight, unless otherwise indicated. The expressions parts by weight and parts by volume used in the examples have the same relationship to each other as the terms kilogram and liter. Example <B> 1: </B> Amorphous penicillin sodium salt is prepared <B> from </B> from a culture broth containing penicillin, according to the usual technique.
Add slowly and with stirring <B> 1-0 </B> parts by weight of this sodium salt of amorphous penicillin dried <B> at </B> low temperature and brownish yellow in color, <B> to 25 < / B> parts by volume of acetone dry <B> at </B> 200 <B> C, </B> and stirring <B> at </B> that temperature for <B> 1. </ B > hour. During this time, dissolution takes place and no crystallization occurs. By slowly raising the temperature <B> to </B> <B> 500 C, </B> the crystals begin <B> to </B> separate and crystallization is complete after a short time. The crystals are separated by hot <B> </B> filtration, washed with small amounts of dry acetone and dried.
A yellow crystalline sodium salt of penicillin with an activity of 1420 units / mg is obtained with a yield of <B> 71 </B>%.
<I>Example</I> <B> 29: </B> One adds slowly and while stirring <B> 10 </B> parts by weight of the amorphous salt obtained as in example <B> 1, to 25 </B> parts by volume of a mixture containing <B> 25 </B> 11 / o by volume of normal butanol and 75% by volume of butyl acetate, <B> to </B> 201, <B> C. </B> After total addition of the solid salt, the temperature is raised to <B> 60 "</B> C and crystallization begins almost immediately. The crystals are separated by filtration, washed. with small amounts of the same mixture of early and dried soil.
With a yield of <B> 69 </B> 11% by weight, a pale yellow crystalline sodium salt of penicillin is obtained with an activity of <B> 1500 </B> img units. <I> Example </I> 3: Add slowly and while stirring <B> 10 </B> parts by weight of the amorphous salt of example <B> 1, </B> <B> to 25 < / B> parts by volume of normal dry propanol, <B> to </B> 201, <B> C. </B> The temperature of the solution is slowly raised <B> to </B> 601, C , and crystallization is complete after a short period of gentle arming <B> at </B> this temperature.
The crystals are separated by filtration, washed with small amounts of dry normal propanol, then with small amounts of dry ethyl acetate, and dried in a vacuum oven. A very pale yellow crystalline sodium salt of penicillin with an activity of 1480 units / mg is obtained with a yield of 67%. <I> Example 4:
</I> Add slowly and with stirring <B> 10 </B> parts by weight of the sodium salt of amorphous penicillin, obtained as in Example <B> 1 </B> and dried <B> to < / B> low temperature, dark yellow in color and with an activity of <B> 1050 </B> units / mg, <B> to </B> <B> 25 </B> parts by volume of normal butanol dry ,, <B> at 60 "C. </B> Crystallization begins immediately and, after a very short period of stirring, the crystals are separated by hot filtration <B> </B>, washed with small amounts of dry normal butanol and dried.
A pale yellow crystallized penicillin sodium salt with <B> 1530 </B> 1-initéslni, - activity is obtained with a yield of <B> 60 </B>%. <I> Example </I> 5: Add slowly and while stirring <B> 10 </B> parts by weight of an amorphous penicillin sodium salt obtained according to the usual technique and dried <B> at </B> low temperature, dark yellow, with an activity of <B> 1100 </B> unitslmo, and containing 70% of the penicillin as penicillin C 'according to chromatographic determination,
<B> to </B> <B> 25 </B> parts by volume of normal dry butanol, <B> to </B> 20 "<B> C. </B> After total addition of the salt, one raise the temperature to <B> to </B> 501, <B> C </B> while continuing to stir. The crystals are separated by filtration through a Buchner funnel and washed with small amounts of dry normal butanol , then with small amounts of dry acetone.
After drying a-Li empty, with a yield of <B> 70 </B> 1 / o, a pale yellow crystalline sodium salt of penicillin is obtained, with a key activity of <B> 1.550 </B> units / ing and containing 801 / o of penileillin as Cr penicillin, according to chromatographic determination. By hand holding this substance <B> at 1000.C </B> in an open bottle for six days,
Ease is reduced only by 4%.
2 parts by weight of the salt obtained are recrystallized by dissolving it in the minimum volume provided with an aqueous solution of <B> to </B> 901 / o by volume, <B> to </B> 200 < B> C, </B> and slowly adding dry acetone to an acetone concentration of <B> 99 </B>% by volume. The resulting crystals were filtered off, washed with small amounts of dry acetone and dried.
In a yield of 681% based on the original pale yellow crystalline material, a practically colorless crystallized sodium salt of penicillin was obtained having a potency of 1600 units / mg and containing 90% of the penicillin as penicillin. <B> G </B> according to chromatographic determination.
<I>Example,<B>6:</B> </I> Add slowly and with stirring <B> 10 </B> parts by weight of a dark yellow amorphous penicillin sodium salt, obtained according to usual technique, with an activity of <B> 100 </B> img units, <B> to </B> <B> 17 </B> parts in flight-Normal dry butanol lime, <B> to < / B> <B>50,<I>C.</I> </B> After complete crystallization, a further <B> 33 </B> parts by volume of dry normal butanol are added, <B> to </ B> 201, <B> C, </B> to reduce viscosity. The crystals are filtered off, washed with small amounts of dry normal butanol, and dried.
A pale yellow crystalline sodium salt of penicillin is obtained with a yield of 801%, having an activity of <B> 1550 </B> img units. <I>Example<B>7:</B> </I> One adds slowly and while stirring <B> 10 </B> parts by weight of a dark yellow amorphous penicillin sodium salt, obtained according to the technique Usual, spray-dried, having an activity of <B> 970 </B> units / mg, <B> to 16 </B> parts by volume of normal dry butanol, <B> to 550 C. </ B > Stir for <B> 1 </B> hour <B> at </B> this temperature to complete crystallization, and add <B> 32 </B> parts by volume of normal dry butanol,
<B> to </B> 201, <B> C. </B> The crystals are separated by filtration, washed with small amounts of dry normal butanol, then with small amounts of dry ethyl acetate, and finally vacuum dried. A pale yellow crystallized penicillin sodium salt with an activity of <B> 1600 </B> unitsimg is obtained in a yield of 741%.
The same process is repeated under the same conditions, except that a dry mixture of niethyl-ethyl-ketone, and #I of butyl acetate and a dry mixture of normal butanol and amyl alcohol <B > to </B> instead of <B> </B> normal dry butanol used previously. The product obtained has a very pale color.
<I>Example<B>8:</B> </I> One adds slowly and while stirring <B> 10 </B> parts by weight of an amorphous sodium salt of penicillin obtained according to the usual technique and dried <B> at </B> low temperature, dark yellow, of a purity of 561 / o, <B> to 25 </B> parts by volume of normal amyl alcohol, dry, <B> to </ B > 200 <B> C. </B> When all the salt has been added and has dissolved in the previous soil, the temperature is raised to <B> to 600 </B> C, while continuing <B> at </B> stir, until crystallization occurs. The crystallized salt is filtered off from the hot solution, washed with small amounts of dry normal amyl alcohol, then with dry acetone.
The product is dried in vacuo and gives, in a yield of 74%, a weakly colored crystallized sodium salt of penicillin, of a purity of 94 (1 / o. The salt is recrystallized in dissolving one part by weight in. 2 parts by volume of an aqueous solution of normal butanol containing 12 1 / o of water by volume,
and slowly adding dry normal butanol, with stirring, to a final butanol concentration in the mixture of 97% by volume. The crystallized penicillin sodium salt thus obtained is separated by filtration. <I>Example<B>9:</B> </I> One brews in <B> 61 </B> liters of nor mal dry 24 <B> 688 g </B> butanol of a mixture of salts Amorphous sodi cs of penicillin obtained according to the usual technique, mixture comprising <B> 16,589 g </B> of a salt having an activity of 1420 mg units and <B> 8099 g </B> of a salt having an activity of <B> 1390 </B> img units, for a total of 34914 million units of penicillin.
The temperature is raised to <B> 500 C. </B> Crystallization is complete after stirring for an hour and a half <B> at </B> this temperature, and the crystals are separated by filtration, washed with butanol normal dry, then with a small amount of dry ethyl acetate, and finally dried. 21540 <B> g </B> of a sodium salt of crystallized penicillin is obtained having an activity of <B> 1551 </B> img units, ie a yield of <B> 96 </B>%.
<B> 5520 g </B> of crystallized salt is dissolved in <B> 8 </B> liters of an aqueous solution of acetone containing 201% of water in vol-Lime. Add <B> to </B> the solution <B> 90 </B> liters of dry acetone, with continuous stirring, which brings the concentration of the acetone solution <B> to </B> 98 approximately% by volume. The mixture is allowed to stand for 12 hours, with intermittent stirring, then the crystals are filtered off, washed with acetone and dried.
Obtained <B> 375.3 g </B> of a white crystallized penicillin sodium salt, having an activity of <B> 1650 </B> units / mg, and thus the yield of pure recrystallized penicillin sodium salt. , based on the amorphous salt, is 76%.
The mother liquor from the recrystallization stage contains <B> 1555 </B> million units of penicillin, and the salt wash water contains 344 million units. The penicillin can be recovered therefrom and thus the total process yield is <B> 95 </B> Vo. <I> Example </I> 10 ..
<B> One </B> is added slowly and while stirring <B> 10 </B> parts by weight of a dark yellow amorphous penicillin sodium salt obtained according to the usual technique, with a purity of <B > 83 </B>%, with an organic solvent indicated in column <B> 1 </B> of the following table, the parts by volume of the preceding soil being indicated in column 2 and the temperature in column <B > 3. </B> When all the salt has been added, the temperature is kept <B> at </B> the value shown in column 4, and the mixture is stirred for another hour. The crystallized penicillin sodium salt is filtered off from the hot solution and washed with small amounts of the organic solvent employed, and then with dry acetone. The product is finally dried.
A very pale-colored crystalline sodium salt of penicillin is obtained, with a purity indicated in '/ o by weight in column <B> 5, </B> and with a yield indicated in Q / o in column <B > 6. </B>
EMI0006.0018
Column <SEP> Column <SEP> Column <SEP> Column <SEP> Column <SEP> Column
<tb> <B> 1 </B> <SEP> 2 <SEP> <B> 3 </B> <SEP> 4 <SEP> <B> 5 <SEP> 6 </B>
<tb> Solvent <SEP> Parts <SEP> Temp. <SEP> of <SEP> Temp.
<SEP> of <SEP> Purity <SEP> Yield
<tb> organic <SEP> in <SEP> <B> vol. </B> <SEP> dissolved <SEP> crystal.
<tb> in <SEP> <B> 0 <SEP> C </B> <SEP> in <SEP> <B> 0 <SEP> 0 </B>
<tb> <B> 1 </B> <SEP> Butanol <SEP> normal <SEP> <B> 100 <SEP> 50 <SEP> 50 <SEP> 88 <SEP> 90 </B>
<tb> 2 <SEP> <B> <SEP> 50 <SEP> 50 <SEP> 50 <SEP> 93 <SEP> 97 </B>
<tb> <B> 3 <SEP> <SEP> 25 <SEP> 50 <SEP> 50 <SEP> 92 <SEP> 96 </B>
<tb> 4 <SEP> <B> <SEP> 16 * <SEP> 50 <SEP> 50 <SEP> 93 <SEP> 100 </B>
<tb> <B> 5 <SEP> <SEP> 12,
5 '<SEP> 50 <SEP> 50 <SEP> 9c <SEP> 99 </B>
<tb> <B> 6 <SEP> <SEP> 10 * <SEP> 50 <SEP> 50 <SEP> 88 </B> <SEP> 94
<tb> <B> 7 <SEP> <SEP> 25 <SEP> 60 </B> <SEP> 40 <SEP> <B> 90 </B> <SEP> 94
<tb> <B> 8 <SEP> <SEP> 25 <SEP> 35 <SEP> 50 <SEP> 93 <SEP> 100 </B>
<tb> <B> 9 </B> <SEP> Hexanol <SEP> normal <SEP> <B> 25 <SEP> 50 <SEP> 50 <SEP> 87 <SEP> 98 </B>
<tb> <B> 10 <SEP> <SEP> - <SEP> 25 <SEP> 60 <SEP> -10 <SEP> 85 <SEP> 96 </B>
<tb> <B> It </B> <SEP> Amyl alcohol <SEP>
<tb> normal <SEP> <B> 25 <SEP> 50 <SEP> 50 <SEP> 88 <SEP> 97 </B>
<tb> 12 <SEP> Methyl-ethyl,
<tb> ketone <SEP> <B> 25 <SEP> 50 <SEP> 50 <SEP> 90 <SEP> 100 </B>
<tb> The <SEP> mixture <SEP> of <SEP> sodium salt <SEP> <SEP> of <SEP> penicillin <SEP> crystallized <SEP> and <SEP> of <SEP> butanol <SEP> normal <SEP > is <SEP> diluted <SEP> again
<tb> with <SEP> <B> 25 </B> <SEP> parts <SEP> in <SEP> volume <SEP> of <SEP> butanol <SEP> normal <SEP> before <SEP> filtration
EMI0007.0001
No. <SEP> Column <SEP> Column <SEP> Column <SEP> Column <SEP> Column <SEP> Column
<tb> <B> 1 </B> <SEP> 2 <SEP> <B> 8 </B> <SEP> 4 <SEP> <B> 5 <SEP> 6 </B>
<tb> Solvent <SEP> Parts <SEP> Temp. <SEP> of <SEP> Temp. <SEP> of <SEP> Purity <SEP> Yield
<tb> organic <SEP> in <SEP> vol. <SEP> dissolved.
<SEP> crystal <SEP> <B> * <SEP>% <SEP>% </B>
<tb> in <SEP> in <SEP> <B> 0 <SEP> C </B>
<tb> <B> 13 </B> <SEP> Butanol <SEP> normal methyl-methyl ketone <SEP> <B> * <SEP> * <SEP> 25 <SEP> 50 <SEP> 50 <SEP> 93 <SEP> 99 </B>
<tb> 14 <SEP> Butanol <SEP> normal ethyl acetate <SEP> <SEP> <B> * '<SEP> 25 <SEP> 50 <SEP> 50 <SEP> 92 <SEP> 98 </ B >
<tb> <B> 15 </B> <SEP> Butanol <SEP> normal acetate <SEP> amyl <B> ** <SEP> 25 <SEP> 50 <SEP> 50 <SEP> 89 <SEP> 99 </B>
<tb> The <SEP> mixture <SEP> consists of <SEP> <B> 50% </B> <SEP> of <SEP> each <SEP> solvent.