Verfahren zur Herstellung eines neuen Salzes von Penicillin G Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung eines neuen Salzes von Penicillin G (d. h. Benzylpenicillin).
Bekanntlich ist Penicillin G eine Säure, die unbeständig ist und in handelsfähiger Form schwer herzustellen ist. Die Salze von Penicillin sind stabiler und leichter herzu stellen; deshalb wird Penicillin G üblicher weise in der Form eines Salzes verkauft, ob wohl für spezielle Zwecke andere Derivate verwendet werden.
Die Salze von Penicillin G, die gewöhnlich verwendet werden, sind die Metallsalze, wie das Natrium-, Cälcium- und Kaliumsalz;
diese Salze haben jedoch den Nachteil, dass sie zwar eine starke antibiotische Wirkung besitzen, jedoch, rasch aus dem Körper aus geschieden werden und dass deshalb eine häufige Verabreichung notwendig ist, um eine therapeutische Konzentration von Penicillin G im Blut aufrechtzuerhalten. Diese rasche Ausscheidung der Metallsalze von Penicillin G ist häufig ein ernsthafter Nachteil; die Me tallsalze von Penicilin G haben auch einen ekelerregenden Geschmack.
Umfangreiche Forschungen sind in vielen Ländern durchgeführt worden, mit dem Ziel, Salze von Penicillin G zu finden, die nicht so rasch aus dem Körper ausgeschieden werden und trotzdem die Aufrechterhaltung einer therapeutischen. Konzentration von Penicillin im Körper für eine längere Zeit nach der Verabreichung möglich machen.
So wurde das Procainsalz von Penicillin G für diesen Zweck vorgeschlagen, welches eine weitverbreitete Anwendung für Injektionszwecke gefunden hat; es ist jedoch, wenn es zur oralen Ver abreichung verwendet wird, sehr widerlich im Geschmack. Es wurden auch viele andere Salze vorgeschlagen, die aber aus dem einen oder andern Grunde weniger in Frage kom men.
Ein Penicillin-G-Salz, das anhaltende Konzentrationen von Penicillin G im Blut ergibt, sollte unter anderem folgende Eigen schaften haben: 1. Verhältnismässige Unlöslichkeit und dadurch eine lang anhaltende Wirkung.
2. Niedrige Toxizität. _ 3. Keine Reizwirkungen beim Injizieren. 4. Keinen. -widerlichen Beigeschmack bei oraler Verabreichung.
5. Essoll verhältnismässig billig und leicht herstellbar sein.
Es wurde nun gefunden, dass ein neues Salz von Penicillin G, nämlich das N-Benzyl- ss-phenyl-äthylaminsalz, von den vorher er wähnten Gesichtspunkten aus wertvoller ist als das bisher im allgemeinen verwendete Procainpenicillin-G-Salz. Dieses neue Salz ergibt bei Injektion einen länger anhaltenden Penicillinspiegel im Blut als einige unlösliche Penicillinsalze, die bisher vorgeschlagen wur den, z.
B. Procainpenicillin, ebenso auch bei oraler Verabreichung. Das neue Salz hat ausserdem die wertvolle Eigenschaft, dass es vom geschmacklichen Standpunkt aus an nehmbarer ist als das Natrium-, Kalium- oder Procainpenicillin, die ekelerregend und sehr unangenehm sind, wenn sie durch den Mund eingenommen werden. Die Toxizität des neuen Salzes ist gering und etwas niedriger als die von Procainpenicillin G. Die Base N-Benzyl-ss-phenyl-äthylamin ist verhältnis mässig leicht erhältlich.
Ausserdem ermög licht die Stabilität des neuen Salzes seine Verwendung als Zusatz zu tierischem Futter.
Das Verfahren gemäss der Erfindung zur Herstellung des N-Benzyl-ss-phenyl-äthyl- aminsalzes von Penicillin G ist dadurch ge kennzeichnet, dass man Penicillin G oder ein Salz -desselben mit N-Benzyl-ss-phenyl-ä;thyl- amin oder einem Salz desselben in Gegenwart eines Lösungsmittels umsetzt, in welchem das neue ,Salz schwerer löslich ist als die Aus gangsstoffe, derart, dass das neue Salz aus fällt.
Die neue Verbindung ist ein weisser kri stalliner Feststoff, F. = 146 , [a] +122 (Konz. = 1,0 in Chloroform),. theore tische Stärke 1,090 E/mg. E bedeutet überall in der Beschreibung die Anzahl internationale Einheiten Penicillin (6 - 10-4 mg Reinpeni- cillin). Stärke im biologischen Versuch (unter Verwendung von Sarcina lntea als Test organismus) 1,020 E/mg. Löslichkeit bei<B>20-25'</B> in Wasser:
0,107 (Gewicht/Volumen).
Es wurden Versuche an Kaninchen aus geführt, wobei der Penicillinspiegel im Blut nach verschiedenen Zeiten von der Injektion weg bestimmt wurde. Jedes der verwendeten Kaninchen wog etwa 2,5 kg und in jedem Fall wurden 100 mg des neuen Salzes in -1 ml wässriger Suspension intramuskulär injiziert. Die Ergebnisse sind in der Tabelle A wieder gegeben und die Ergebnisse von Vergleichs versuchen unter Verwendung von wässriger Suspension von Procainpenicillin G (100 mg/ml) in Tabelle B.
EMI0002.0049
<I>Tabelle <SEP> A</I>
<tb> N-Benzyl-ss phenyl-äthyl- <SEP> Penicillinblutspiegel <SEP> (E/ml)
<tb> aminsalz
<tb> Kaninchen <SEP> Nr. <SEP> 8 <SEP> 24 <SEP> 32 <SEP> 48 <SEP> 56 <SEP> Stunden
<tb> 1 <SEP> 0,78 <SEP> 0,25 <SEP> 0,25 <SEP> 0,1 <SEP> 0,06
<tb> 2 <SEP> 1,04 <SEP> 0,12 <SEP> 0,12 <SEP> 0,060 <SEP> 0
<tb> 3 <SEP> 0,85 <SEP> 0,2 <SEP> 0,12 <SEP> 0,030 <SEP> 0,03
<tb> 4 <SEP> 0,61 <SEP> 0,12 <SEP> 0,25 <SEP> 0,060 <SEP> 0,03
<tb> 5 <SEP> 0,86 <SEP> 0,06 <SEP> 0,06 <SEP> 0,060 <SEP> 0,06
<tb> 6 <SEP> 1,02 <SEP> 0,25 <SEP> 0,12 <SEP> 0,120 <SEP> 0,06
EMI0002.0050
<I>Tabelle <SEP> B</I>
<tb> Procainsalz <SEP> Penicillinblutapiegel <SEP> (E/ml)
<tb> Kaninchen <SEP> Nr.
<SEP> 8 <SEP> 12 <SEP> 15 <SEP> <B>1711,</B> <SEP> 20 <SEP> 24 <SEP> 32 <SEP> 48 <SEP> 56 <SEP> Stunden
<tb> 1 <SEP> 0,6 <SEP> 0,25 <SEP> 0,1 <SEP> 0,06 <SEP> 0 <SEP> 0
<tb> 2 <SEP> 1,0 <SEP> 0,25 <SEP> 0,03 <SEP> 0,03 <SEP> 0 <SEP> 0
<tb> 3 <SEP> <B>-1,0</B> <SEP> 1,0 <SEP> 0,5 <SEP> 0,5 <SEP> 0,2 <SEP> 0,03
<tb> 4 <SEP> 0,5 <SEP> 0,4 <SEP> 0,03 <SEP> 0,03 <SEP> 0 <SEP> 0
<tb> 2 Bei einem andern Versuch wurden 100 mg des neuen Salzes einer Anzahl von Kaninchen, die 2,5 kg wogen, intramuskulär injiziert; das Salz (100 mg) wurde in 1 ml destilliertem. Wasser unter Zusatz von i/2ooo-Polyoxyäthy- lenmonoleat suspendiert.
In Zeitabständen entnommene Blutproben wurden im biolo gischen Panicillinversuch bestimmt. Die Er gebnisse sind in Tabelle C wiedergegeben.
EMI0003.0007
<I>Tabelle <SEP> C</I>
<tb> Penicillinblutspiegel <SEP> (E/lm)
<tb> Kaninchen <SEP> Nr. <SEP> 1 <SEP> 3 <SEP> 5 <SEP> 8 <SEP> 24 <SEP> 32 <SEP> 48 <SEP> 56 <SEP> Stunden
<tb> 1 <SEP> 1,67 <SEP> 5,83 <SEP> 4,46 <SEP> 3,94 <SEP> 0,12 <SEP> 0,12 <SEP> - <SEP> 2.
<SEP> 2,85 <SEP> 2,78 <SEP> 1,17 <SEP> 0,78 <SEP> 0,25 <SEP> 0,25 <SEP> 0,1 <SEP> 0,06
<tb> 3 <SEP> 3,62 <SEP> 2,86 <SEP> 5,34 <SEP> 2,44 <SEP> 0,12 <SEP> 0,12 <SEP> - <SEP> 4 <SEP> nicht <SEP> 2,25 <SEP> 2,25 <SEP> 1,04 <SEP> 0,12 <SEP> 0,12 <SEP> 0,06 <SEP> 0
<tb> 5 <SEP> getestet <SEP> 2,14 <SEP> 1,31 <SEP> 0,85 <SEP> 0,2 <SEP> 0,12 <SEP> 0,03 <SEP> 0,03
<tb> 6 <SEP> <SEP> 0,76 <SEP> 1,02 <SEP> 0,61 <SEP> 0,12 <SEP> 0,25 <SEP> 0,06 <SEP> 0,03
<tb> 7 <SEP> <SEP> 1,90 <SEP> 1,34 <SEP> 0,86 <SEP> 0,06 <SEP> 0,06 <SEP> 0,06 <SEP> 0,06
<tb> 8 <SEP> <SEP> 2,79 <SEP> 3,47 <SEP> 1,02 <SEP> 0,25 <SEP> 0,12 <SEP> 0,12 <SEP> 0,06
<tb> 0 <SEP> bedeutet <SEP> @ <SEP> 0,
03 <SEP> E/ml Die Durchschnittswerte der in Tabellen A und B aufgeführten Ergebnisse bei intra muskulärer Injektion sind im Vergleich zum Natriumsalz des Penicillins G in Fig. 1 gra phisch dargestellt. Bei der intramuskulären Injektion des Natriumsalzes von Penicillin wurde jeweils pro Kaninchen ebenfalls 1 cm3 einer 100 mg enthaltenden wässrigen Lösung verwendet.
,Als nächstes wurden Versuche am Men schen durchgeführt. Jedem Patienten wurde intramuskulär 1 ml einer wässrigen Suspen- sion des neuen Salzes mit<B>300000</B> Einheiten injiziert. Die meisten der behandelten Per sonen klagten nach. der Injektion nicht über Schmerzen und Folgeerscheinungen. Blut proben wurden in verschiedenen Zeitabstän den nach der Injektion durch Fingerstich ent nommen.
Die Bestimmung des Penicillin- gehaltes im Blut wurde im allgemeinen mit einem biologischen Tüpfelversuch unter Ver wendung von Sarcina lutea als Testorganis mus durchgeführt.
Die Ergebnisse sind in Tabelle D wiedergegeben.
EMI0004.0001
<I>- <SEP> Tabelle <SEP> D</I>
<tb> Patient <SEP> Nr. <SEP> Penicillinblutspiegel <SEP> (E/ml)
<tb> 1 <SEP> 6 <SEP> 24 <SEP> 30 <SEP> 48 <SEP> 56 <SEP> 72 <SEP> 96 <SEP> Stunden
<tb> 1 <SEP> 0,23 <SEP> 0,13 <SEP> 0,05 <SEP> 0,04 <SEP> 0,16
<tb> 2 <SEP> 0,15 <SEP> 0,08 <SEP> 0,03 <SEP> 0
<tb> 3 <SEP> 0,34 <SEP> 0,11 <SEP> 0,09 <SEP> 0,05 <SEP> 0 <SEP> 4 <SEP> 0,06 <SEP> 0,05 <SEP> 0,04 <SEP> 0,05 <SEP> 0,04
<tb> 5 <SEP> 0,13 <SEP> 0,17 <SEP> 0,10 <SEP> 0,10 <SEP> 0,07
<tb> 6 <SEP> 0,12 <SEP> 0,13 <SEP> 0,16 <SEP> 0,10
<tb> 7 <SEP> 0,19 <SEP> 0,17 <SEP> 0,09 <SEP> 0,07 <SEP> 0,06
<tb> 8 <SEP> 0,10 <SEP> 0,11 <SEP> <B>0,09</B>
<tb> 9 <SEP> 0,22 <SEP> 0,10 <SEP> 0,13 <SEP> 0,10
<tb> 10 <SEP> 0,22 <SEP> 0,17 <SEP> 0,10 <SEP> 0,05 <SEP> 0
<tb> 11 <SEP> 0,
17 <SEP> 0,17 <SEP> 0,10 <SEP> 0,09 <SEP> 0,05
<tb> 12 <SEP> 0,18 <SEP> 0,19 <SEP> 0,19 <SEP> 0,06 <SEP> 0,03
<tb> 13 <SEP> 0,12 <SEP> 0,08 <SEP> 0,02 <SEP> 0 <SEP> 0
<tb> 14 <SEP> 0,39 <SEP> 0,26 <SEP> 0,24
<tb> 15 <SEP> 0,22 <SEP> 0,18 <SEP> 0,15 <SEP> 0,20
<tb> 16 <SEP> 0,90 <SEP> 0,07 <SEP> 0,06 <SEP> 0;
03 <SEP> 0,02
<tb> 17 <SEP> 0,18 <SEP> 1,6 <SEP> 0,04 <SEP> 0,01 <SEP> 0,03
<tb> 18 <SEP> 0,42 <SEP> 1,1 <SEP> 0,09 <SEP> 0,06 <SEP> 0,05
<tb> 19 <SEP> 0,06 <SEP> 0,08 <SEP> 0,04 <SEP> 0,02 <SEP> 0
<tb> 20 <SEP> 0,08 <SEP> 0,06 <SEP> 0,03 <SEP> 0,02 <SEP> 0,03
<tb> 21 <SEP> 0,50 <SEP> 1,4 <SEP> 0,05 <SEP> 0,05 <SEP> 0,04
<tb> 22 <SEP> 0,08 <SEP> 0,08 <SEP> 0,07 <SEP> 0,04
<tb> 23 <SEP> 0,16 <SEP> 0,06 <SEP> 0,07 <SEP> 0,05 <SEP> 0,02
<tb> 24 <SEP> 0,10 <SEP> 0,04 <SEP> 0,01 <SEP> 0,01 <SEP> 0,02
<tb> 25 <SEP> 0,21 <SEP> 0,16 <SEP> 0,12 <SEP> 0,14 <SEP> 0,15
<tb> 26 <SEP> 0,21 <SEP> 0,15 <SEP> 0,14 <SEP> 0,09- <SEP> 0,03
<tb> 27 <SEP> 0,20 <SEP> 0,08 <SEP> 0,06.
<SEP> - <SEP> 0,06 <SEP> 0,03 <SEP> 0,01
<tb> 28 <SEP> 0,20 <SEP> 0,12 <SEP> 0,09 <SEP> 0,13 <SEP> 0,09 <SEP> 0,05
<tb> 29 <SEP> 0,38 <SEP> 0,18 <SEP> 0,10 <SEP> 0,09 <SEP> 0,06 <SEP> 0,04
<tb> 30 <SEP> 0,07 <SEP> 0,04 <SEP> 0,04 <SEP> 0,16 <SEP> 0,03 <SEP> 0,04
<tb> 31 <SEP> 0,37 <SEP> 0,25 <SEP> 0,09 <SEP> 0,08 <SEP> 0,04 <SEP> 0,02
<tb> 32 <SEP> 0,22 <SEP> 0,12 <SEP> 0,03 <SEP> 0,07 <SEP> 0,05 <SEP> 0,05
<tb> 33 <SEP> 0,03 <SEP> 0,04
<tb> 34 <SEP> 0,95 <SEP> 0,22 <SEP> 0,07 <SEP> 0,03 <SEP> 0,02 <SEP> 0,01 <SEP> 0
<tb> 35 <SEP> 1,0 <SEP> 0,23 <SEP> 0,10 <SEP> 0,04 <SEP> 0,03 <SEP> 0,01 <SEP> 0
<tb> 36 <SEP> 0,44 <SEP> 0,39 <SEP> 0,19 <SEP> 0,09 <SEP> 0,03 <SEP> 0,05 <SEP> 0,01
<tb> 37 <SEP> 0,11 <SEP> 0,08 <SEP> 0,07 <SEP> 0,06 <SEP> 0,03 <SEP> 0,04 <SEP> 0
<tb> 38 <SEP> 0,14 <SEP> 0,18 <SEP> 0,03 <SEP> 0,03 <SEP> 0,03 <SEP> 0,03 <SEP> 0,01
<tb> 39 <SEP> 0,
32 <SEP> 0,30 <SEP> 0,09 <SEP> 0,07 <SEP> 0,04 <SEP> 0,04 <SEP> 0,01
<tb> 40 <SEP> 0,56 <SEP> 0,06 <SEP> 0,05 <SEP> 0,03 <SEP> 0,03 <SEP> " <SEP> 0,03 <SEP> 0
<tb> 41 <SEP> 0,39 <SEP> 0,06 <SEP> 0,07 <SEP> 0,06 <SEP> 0,07 <SEP> 0,08 <SEP> 0,08
<tb> 42 <SEP> 0;25 <SEP> 0,24 <SEP> 0,11 <SEP> 0,03 <SEP> 0,04 <SEP> 0,03
<tb> 43 <SEP> 0,15 <SEP> 0,19 <SEP> 0,09 <SEP> 0,01 <SEP> 0,04 <SEP> 0,01
EMI0005.0001
Patient <SEP> Nr. <SEP> Penicillinblutspiegel <SEP> (E/ml)
<tb> 1 <SEP> 6 <SEP> 24 <SEP> 30 <SEP> 48 <SEP> 56 <SEP> 72 <SEP> 96 <SEP> Stunden
<tb> 44 <SEP> 0,11 <SEP> 0;
11 <SEP> 0,08 <SEP> 0,01 <SEP> 0,02 <SEP> 0,03
<tb> 45 <SEP> 0,06 <SEP> 0,02 <SEP> 0,01 <SEP> 0,01 <SEP> 0,01
<tb> 46 <SEP> 0,05 <SEP> 0,03 <SEP> 0,01 <SEP> _ <SEP> 0,04 <SEP> 0,01
<tb> 47 <SEP> 0,09 <SEP> 0,04 <SEP> 0,05 <SEP> 0,01 <SEP> 0
<tb> 48 <SEP> 0,11 <SEP> 0,04 <SEP> 0,06 <SEP> 0,05 <SEP> 0,03
<tb> 49 <SEP> 0,12 <SEP> 0,04 <SEP> 0,05 <SEP> 0,02 <SEP> 0
<tb> 50 <SEP> 0,13 <SEP> 0,10 <SEP> 0,10 <SEP> 0,10 <SEP> 0,06
<tb> 51 <SEP> 0,19 <SEP> 0,04 <SEP> 0,02 <SEP> 0,02 <SEP> 0,01
<tb> 52 <SEP> 0,09 <SEP> 0,04 <SEP> 0,05 <SEP> 0,03 <SEP> 0,01
<tb> 53 <SEP> 0,08 <SEP> 0,05 <SEP> 0,03 <SEP> 0,04 <SEP> 0,05 <SEP> 0,03 <SEP> 0,04
<tb> 54 <SEP> 0,06 <SEP> 0,10 <SEP> 0,06 <SEP> 0,05 <SEP> 0,07 <SEP> 0,04 <SEP> 0,05
<tb> 55 <SEP> 0,08 <SEP> 0,09 <SEP> 0,02 <SEP> 0
<tb> 56 <SEP> 0,14 <SEP> 0,07 <SEP> 0,03 <SEP> 0,03
<tb> 57 <SEP> 0,16 <SEP> 0,06 <SEP> 0,
05
<tb> 58 <SEP> <B>0,06</B> <SEP> 0,02 <SEP> 0,02
<tb> 59 <SEP> 0,20 <SEP> 0,16 <SEP> 0,05 <SEP> 0,04
<tb> 60 <SEP> 0,54 <SEP> 0,28 <SEP> 0,14 <SEP> 0,07
<tb> Durchschnitt <SEP> 0,40 <SEP> 0,23 <SEP> 0,19 <SEP> 0,14 <SEP> 0,07 <SEP> 0,06 <SEP> 0,05 <SEP> 0,03
<tb> 0 <SEP> bedeutet <SEP> weniger <SEP> als <SEP> 0,03 <SEP> E/ml Der gleiche Versuch wurde auch mit Procainpenieillin durchgefülut. Es wurde gefunden, dass das neue Salz bei Injektion in Wasser längere Zeit im Blut verbleibt als Procainpenicillin.
Die Durchschnittswerte dieses Verglei ches sind in Fig. 2 graphisch, wiedergegeben. Ferner wurden Versuche mit oraler Ver abreichung bei mehreren Versuchspersonen durchgeführt.
Es wurden zwei getrennte Versuche durch geführt; im ersten wurde eine aromatisierte Mischung, die 400 000 Einheiten in 10 ml ent hielt, verwendet. Der Geschmack war nicht unangenehm und gab nur einen geringen un angenehmen Nachgeschmack. Jede der sieben Versuchspersonen erhielt 10 ml (400000 Ein heiten) mit dem Löffel etwa eine Stunde nach dem Frühstück. Die Penicillinblutspiegel wurden an Blutproben durch biologischen Versuch bestimmt. Der zweite Versuch war ähnlich dem ersten, nur enthielt die Mischung eine Dosis von 400000 Einheiten des neuen Salzes in 12 ml;
der gleiche Versuch wurde ferner mit einer entsprechenden aromatisier ten Mischung von Procainpenicillin durch- geführt. Die Ergebnisse sind in Tabelle E wiedergegeben.
EMI0006.0001
<I>Tabelle <SEP> E</I>
<tb> Penicillinblutspiegel <SEP> bei <SEP> Versuchspersonen <SEP> nach <SEP> oraler <SEP> Verabreichung
<tb> Versuch <SEP> Penicillin <SEP> Versuchs- <SEP> Penicillinblutspiegel <SEP> (E/ml)
<tb> Person <SEP> 1/2 <SEP> - <SEP> 1 <SEP> 2 <SEP> 4 <SEP> 6 <SEP> Stunden
<tb> 1 <SEP> Benzyl-ss-Phenyl- <SEP> 1 <SEP> 1,0 <SEP> 1,0 <SEP> 0,75 <SEP> 0,12 <SEP> 0,03
<tb> äthylaminsalz <SEP> von <SEP> 2 <SEP> <B>0,5 <SEP> 0,5 <SEP> 0,5</B> <SEP> 0,12 <SEP> < <SEP> <B>0,
03</B>
<tb> Penicillin <SEP> <B>0</B> <SEP> 3 <SEP> 0,5 <SEP> 0,5 <SEP> 0,5 <SEP> 0,25 <SEP> 0,03
<tb> 4 <SEP> 1,0 <SEP> 0,75 <SEP> 0,5 <SEP> 0,5 <SEP> 0,06
<tb> 5 <SEP> 0,5 <SEP> 0,5 <SEP> 0,5 <SEP> 0,25 <SEP> 0,03
<tb> <I>6 <SEP> 0,25</I> <SEP> 0,25 <SEP> 0,4 <SEP> 0,06 <SEP> 0,03
<tb> 7 <SEP> 0,5 <SEP> 0,25 <SEP> 0,4 <SEP> 0,1 <SEP> 0,03
<tb> 2 <SEP> Benzyl-ss-phenyl- <SEP> 1 <SEP> 0,03 <SEP> 0,03 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0
<tb> äthylaminsalz <SEP> von <SEP> 2 <SEP> 1,26 <SEP> 0,56 <SEP> 0,28 <SEP> 0,03 <SEP> 0
<tb> Penicillin <SEP> G <SEP> 3 <SEP> 0,82 <SEP> 0,57 <SEP> 0,27 <SEP> 0 <SEP> 0
<tb> '. <SEP> 4 <SEP> 1,00 <SEP> 0,58.
<SEP> 0,32 <SEP> 0,03 <SEP> 0
<tb> 5 <SEP> 1,19 <SEP> 1,14 <SEP> 0,20 <SEP> 0,03 <SEP> 0,06
<tb> 6 <SEP> 1,68 <SEP> 0,59 <SEP> 0,23 <SEP> 0 <SEP> 0,03
<tb> 3 <SEP> Procainpenicillin <SEP> G <SEP> 7 <SEP> 0,18 <SEP> 0,3 <SEP> 0,03 <SEP> 0,06 <SEP> 0
<tb> 8 <SEP> 0,13 <SEP> 0,13 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0
<tb> 9 <SEP> 0,63 <SEP> 0,43 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0
<tb> 10 <SEP> 0,91 <SEP> <I>0,55</I> <SEP> 0,06 <SEP> 0 <SEP> 0
<tb> 11 <SEP> 0,03 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0
<tb> 12 <SEP> 1,09 <SEP> 0,38 <SEP> 0,55 <SEP> 0,19 <SEP> 0
<tb> 0 <SEP> bedeutet <SEP> @ <SEP> 0,03 <SEP> E/ml Die Durchschnittswerte der Ergebnisse dieser Versuche sind in Fig.3 graphisch wiedergegeben.
Ferner wurden Toxizitätsversuche durch geführt; die Ergebnisse zeigten, dass das neue Salz etwas weniger toxisch ist als Procain- penicillin G. So betrug die durchschnittliche LD 50 bei Mäusen für das neue Salz nach intravenöser Injektion 170 mg/kg, während die von Procainpenicillin bei gleichen Be dingungen 134 mg/kg betrug.
Zur Herstellung des neuen Penicillin-G- Salzes kann man freies Penicillin G mit N- Benzyl-ss-phenyl-äthylamin in einem Lö sungsmittel der genannten Art umsetzen. Ferner kann das neue Salz auch durch doppelte Umsetzung eines Salzes von Peni- cillin G, z. B. eines Alkalimetallsalzes, mit einem Salz der Base, z. B. dein Hydrochlorid, hergestellt werden.
Weiterhin kann man auch freies Penicillin G mit einem Salz von N- Benzyl-ss-phenyl-äthylamin und einer ali- phatischen Carbonsäure mit nicht mehr als 8 Kohlenstoffatomen in der geraden Kette, die gegebenenfalls Substituenten tragen kann, umsetzen.
Es ist nicht notwendig, reines Penicillin G (oder Salze desselben) für die Herstellung des neuen Salzes zu verwenden, da in vielen Fällen das Herstellungsverfahren selbst etwas zur Reinigung beiträgt. So wurde beispiels weise das neue Salz aus Lösungen von rohem Penicillin G, wie gepufferten wässrig-alkali- schen Extrakten, organischen Extrakten und Penicillin-Kristallisationsmutterlaugen her gestellt.
Beispiele von geeigneten Lösungsmitteln für die Umsetzung von freiem Penicillin. G mit der freien Base sind tert.=Butanol, Aceton und Äthyl-, Butyl- und Amylacetat. Für die doppelte Umsetzung zwischen einem Peni- cillin-G-Salz und einem Salz der Base werden vorzugsweise wasserlösliche Salze als Aus gangsmaterialien und Wasser als Lösungs mittel verwendet.
Das pA liegt vorzugsweise in der Nähe des Neutralpunktes.
Im Falle der Umsetzung von freiem Peni- cillin G mit einem Salz aus einer aliphatischen Carbonsäure und N-Benzyl-ss-phenyl-äthyl- amin sind geeignete Lösungsmittel beispiels weise Diäthyläther, Methylisobutylketon und Äthyl-, Butyl- und Amylacetat.
Die Salze von N-Benzyl-ss-phenyl-äthyl- amin mit den folgenden Säuren sind zur Um setzung mit freiem Penicillin G besonders geeignet: Ameisensäure, Essigsäure, Propion- säure, Buttersäure, Isobuttersäure, Capryl- säu-re, 2-Äthyl-hegansäure, Phenylessigsäure, Glykolsäure und Malonsäure.
_ Beispiel <I>1</I> Eine Lösung von 7,8 g Natriumpenicillin G in 50 c & Wasser wurde mit verdünnter Salzsäure auf px <I>2</I> angesäuert und das in Freiheit gesetzte Penicillin mit 50 cm3 Äthyl- acetat extrahiert.
Die organische Schicht wurde kurze Zeit über Magnesiumsulfat ge trocknet und dann zu einer Lösung von 5 g Benzyl-ss-phenyl-äthylamin in, 20 cm@ Äthyl- acetat zugesetzt. Die Kristallisation des Sal zes erfolgte spontan und ergab 12,1 g farblose Blättchen vom F. = 146-147", [al D +122 (Konz. = 1 in CHC13).
Analyse: C31@I"04N,S berechnet N 7,7% gefanden N 7,8% <I>Beispiel 2</I> Eine Lösung von 2,35 g Benzyl-ss-phenyl- äthylaminhydrochlorid in<B>100</B> ml heissem Wasser wurde rasch gekühlt und auf einmal zu einer Lösung von 3,4g Natriumpenicillin G in 20 ml Wasser zugesetzt.
Anfänglich schied sich ein 01 ab, das beim Kratzen leicht kristallisierte. Der weisse, kristalline Feststoff wurde abfiltriert, mit Wasser gewaschen und im Vakuum getrocknet. Ausbeute 4,9 g (95 %), F. = 149 , [a] 20 _-r120 (Konz. _ 1 in CHCl3).
<I>Beispiel</I> Eine Lösung von 7,1 g Natriumpenicillin G in 25 ems Wasser wurde mit 10 cxn3 2n- Schwefelsäure angesäuert und das freie Peni cillin mit 30 cxn3 Äthylacetat extrahiert.
Diese Lösung wurde nach Waschen mit Was ser und Trocknen über Natriumsulfat einer Lösung von 7,9 g Benzyl-ss-phenyl-äthyl- aminacetat in 30 cm@ Äthylaeetat zugesetzt, worauf das Penicillinsalz nach Kratzen kristallisierte. Ausbeute 8,45 g, F. = 151 bis 152 , .[a ] D \ = -j- 124 (Konz. = 1 in Chloro form).
<I>Beispiel 4</I> 1 cm3 Isocapronsäure wurde zu einer Lösung von 2,1 g Benzyl-ss-phenyl-ätliyl- amin in 20 cm3 Petroläther (60-80 ) zuge setzt und das gebildete kristalline Benzyl- ss-phexiyl-äthylaminisocaproat nach einer Stunde isoliert, Ausbeute 2,35 g, F. = 54 ,.
Analyse: C21H2902,N berechnet N 4,3% gefunden N 4, 5 Eine Lösung von 2,3 g dieses Salzes in 10 cm3 Äthylacetat wurde mit einer Lösung von 2,5 g freiem Penicillin G (aus 2;
5 g Natriumsalz) in 20 cis Äthylacetat behan delt, worauf das Benzyl-ss-phenyl-äthylamin- salz des Penicillins kristallisierte. Ausbeute 3,2 g, F. = 151-152 , [a] D' = 123 (Konz. = 1,0 in CHC13).
Beispiel <I>s</I> (Herstellung aus wässrigen Lösungen:) Eine Lösung des Aminacetates, herge stellt aus 2,53 g (20%iger Überschuss) N- Benzyl-ss-phenyl-äthylamin und 0,75 g Eis essig in 34 ml Wasser, wurde unter Rühren zu 3,56 g Natrium-Penicillin G in 35,4 ml Wasser zugesetzt. Der Niederschlag wurde abfiltriert, mit Wasser und danach mit Ace= ton gewaschen.
Der Niederschlag wurde schliesslich im Vakuum bei 40-60 getrocknet. <I>Beispiel 6</I> (Herstellung aus gepuffertem alkalischem Extrakt von rohem Penicillin.) Zu 200 ml einer Lösung von rohem Natriumpenicillin G mit einer Stärke von <B>27000</B> IE/ml in einem Phosphatpuffer mit einem p$ von 6,2 wurden 50 g Ammonium sulfat unter Rühren zugesetzt.
Eine Lösung von 4 g aus Essigsäure auskristallisiertem N-Benzyl-ss-phenyl-äthylamindiacetat (Be zeichnung für das mit 1 Mol Essigsäure kristallisierende Monoacetat) in 10 ml Was ser wurde unter Rühren zu der Mischung während einer Stunde zugesetzt. Nach 15 Minuten weiterem Rühren wurde der hell braune, kristalline Feststoff abfiltriert und zweimal mit 15 ml Wasser gewaschen.
Nach Trocknen bei 40 im Vakuum wurde das neue Salz in einer Ausbeute von 6,4 g, einer Stärke von 780IE/mg, was 93% des Einsatzes ent spricht, erhalten. Die Flüssigkeiten (250 ml) hatten eine Stärke von 550IE/ml, entspre chend weiteren 2,5% des Einsatzes.
<I>Beispiel ?</I> (Herstellung aus Penicillinkristallisations- mutterlaugen.) Eine Lösung (41) von Natriumpenicillin G in 99% Aceton (Flüssigkeit aus der Kristalli- sation von rohem Natriumpeniicillin G, 850IE/ml) wurde im Vakuum bei Zimmer temperatur auf annähernd den zweihundert sten Teil eingedampft.
Der Rückstand wurde mit einem Phosphatpuffer mit pg 7 auf 118 ml verdünnt. 33 g Ammoniumsulfat wurden zu gesetzt und die Lösung mit 2,84 g N-Benzyl- ss-phenyl-äthylamindiacetat (Bezeichnung s. Beispiel 6) in 8 ml Wasser, wie oben beschrie ben, umgesetzt. 4,05 g des neuen Salzes mit einer Stärke von 800 IE/mg wurden erhalten, entsprechend 950/, des Einsatzes.
<I>Beispiel 8</I> (Herstellung aus einem organischen Ex trakt von Rohpenicillin.) Zu einer Lösung von 50 ml rohem Peni- cillin G ?n Butylacetat mit einer Stärke von 85000 IE/ml wurde eine Lösung von 2,54 g N-Benzyl-ss-phenyl-äthylamin in 10 ml Butyl- acetat unter Rühren im Verlauf einer Stunde zugesetzt.
Die Mischung wurde weitere 2 Stunden gerührt und der Festkörper ab- filtriert und mit 10<B>ml</B> Butylacetat gewaschen. Nach Trocknen im Vakuum bei 40 betrug die Ausbeute an neuem Salz 3,81 g (906 IE/mg), entsprechend 81 % des Einsatzes.
Process for the preparation of a new salt of penicillin G The present invention relates to a process for the preparation of a new salt of penicillin G (i.e., benzylpenicillin).
As is well known, penicillin G is an acid that is unstable and difficult to manufacture in a marketable form. The salts of penicillin are more stable and easier to produce; therefore penicillin G is usually sold in the form of a salt, although other derivatives are used for specific purposes.
The salts of penicillin G that are commonly used are the metal salts such as the sodium, calcium and potassium salts;
however, these salts have the disadvantage that, although they have a strong antibiotic effect, they are quickly excreted from the body and therefore frequent administration is necessary in order to maintain a therapeutic concentration of penicillin G in the blood. This rapid excretion of the metal salts of penicillin G is often a serious disadvantage; Penicilin G's metal salts also have a nauseating taste.
Extensive research has been carried out in many countries with the aim of finding salts of penicillin G that are not excreted from the body as quickly and still maintain a therapeutic one. Make concentration of penicillin in the body possible for a longer time after administration.
Thus the procaine salt of penicillin G has been proposed for this purpose, which has found widespread use for injection purposes; however, when used for oral administration, it is very obnoxious in taste. Many other salts have also been suggested, but for one reason or another they are less suitable.
A penicillin G salt that results in sustained concentrations of penicillin G in the blood should have the following properties, among others: 1. Relative insolubility and therefore a long-lasting effect.
2. Low toxicity. _ 3. No irritant effects when injecting. 4. None. - Disgusting aftertaste when administered orally.
5. It should be relatively cheap and easy to manufacture.
It has now been found that a new salt of penicillin G, namely the N-benzyl-ss-phenyl-ethylamine salt, is more valuable than the previously generally used procaine penicillin G salt from the points of view mentioned above. This new salt, when injected, gives a longer sustained level of penicillin in the blood than some insoluble penicillin salts that have previously been proposed, e.g.
B. Procaine penicillin, also when administered orally. The new salt also has the valuable property of being more acceptable from a taste standpoint than the sodium, potassium or procaine penicillin, which are nauseating and very unpleasant when ingested by mouth. The toxicity of the new salt is low and somewhat lower than that of procaine penicillin G. The base N-benzyl-ss-phenyl-ethylamine is relatively easy to obtain.
In addition, the stability of the new salt enables it to be used as an additive to animal feed.
The process according to the invention for the preparation of the N-benzyl-ss-phenyl-ethylamine salt of penicillin G is characterized in that penicillin G or a salt of the same with N-benzyl-ss-phenyl-ethylamine or a salt thereof in the presence of a solvent in which the new salt is less soluble than the starting materials, in such a way that the new salt precipitates.
The new compound is a white crystalline solid, m.p. = 146, [a] +122 (conc. = 1.0 in chloroform) ,. theoretical strength 1.090 U / mg. E throughout the description means the number of international units of penicillin (6-10-4 mg pure penicillin). Strength in the biological test (using Sarcina Intea as a test organism) 1.020 U / mg. Solubility at <B> 20-25 '</B> in water:
0.107 (weight / volume).
Experiments were carried out on rabbits, the penicillin level in the blood being determined after various times from the injection. Each of the rabbits used weighed about 2.5 kg and in each case 100 mg of the new salt in -1 ml of aqueous suspension was injected intramuscularly. The results are given in Table A and the results of comparative experiments using an aqueous suspension of procaine penicillin G (100 mg / ml) in Table B.
EMI0002.0049
<I> Table <SEP> A </I>
<tb> N-Benzyl-ss phenyl-ethyl- <SEP> penicillin blood level <SEP> (U / ml)
<tb> amine salt
<tb> Rabbit <SEP> No. <SEP> 8 <SEP> 24 <SEP> 32 <SEP> 48 <SEP> 56 <SEP> hours
<tb> 1 <SEP> 0.78 <SEP> 0.25 <SEP> 0.25 <SEP> 0.1 <SEP> 0.06
<tb> 2 <SEP> 1.04 <SEP> 0.12 <SEP> 0.12 <SEP> 0.060 <SEP> 0
<tb> 3 <SEP> 0.85 <SEP> 0.2 <SEP> 0.12 <SEP> 0.030 <SEP> 0.03
<tb> 4 <SEP> 0.61 <SEP> 0.12 <SEP> 0.25 <SEP> 0.060 <SEP> 0.03
<tb> 5 <SEP> 0.86 <SEP> 0.06 <SEP> 0.06 <SEP> 0.060 <SEP> 0.06
<tb> 6 <SEP> 1.02 <SEP> 0.25 <SEP> 0.12 <SEP> 0.120 <SEP> 0.06
EMI0002.0050
<I> Table <SEP> B </I>
<tb> Procaine salt <SEP> Penicillin blood level <SEP> (U / ml)
<tb> Rabbit <SEP> No.
<SEP> 8 <SEP> 12 <SEP> 15 <SEP> <B> 1711, </B> <SEP> 20 <SEP> 24 <SEP> 32 <SEP> 48 <SEP> 56 <SEP> hours
<tb> 1 <SEP> 0.6 <SEP> 0.25 <SEP> 0.1 <SEP> 0.06 <SEP> 0 <SEP> 0
<tb> 2 <SEP> 1.0 <SEP> 0.25 <SEP> 0.03 <SEP> 0.03 <SEP> 0 <SEP> 0
<tb> 3 <SEP> <B> -1.0 </B> <SEP> 1.0 <SEP> 0.5 <SEP> 0.5 <SEP> 0.2 <SEP> 0.03
<tb> 4 <SEP> 0.5 <SEP> 0.4 <SEP> 0.03 <SEP> 0.03 <SEP> 0 <SEP> 0
<tb> 2 In another experiment, 100 mg of the new salt was injected intramuscularly into a number of rabbits weighing 2.5 kg; the salt (100 mg) was distilled in 1 ml. Suspended water with the addition of 1/2000 polyoxyethylene monoleate.
Blood samples taken at intervals were determined in the biological panicillin test. The results are shown in Table C.
EMI0003.0007
<I> Table <SEP> C </I>
<tb> Penicillin blood level <SEP> (E / lm)
<tb> Rabbit <SEP> No. <SEP> 1 <SEP> 3 <SEP> 5 <SEP> 8 <SEP> 24 <SEP> 32 <SEP> 48 <SEP> 56 <SEP> hours
<tb> 1 <SEP> 1.67 <SEP> 5.83 <SEP> 4.46 <SEP> 3.94 <SEP> 0.12 <SEP> 0.12 <SEP> - <SEP> 2.
<SEP> 2.85 <SEP> 2.78 <SEP> 1.17 <SEP> 0.78 <SEP> 0.25 <SEP> 0.25 <SEP> 0.1 <SEP> 0.06
<tb> 3 <SEP> 3.62 <SEP> 2.86 <SEP> 5.34 <SEP> 2.44 <SEP> 0.12 <SEP> 0.12 <SEP> - <SEP> 4 <SEP > not <SEP> 2.25 <SEP> 2.25 <SEP> 1.04 <SEP> 0.12 <SEP> 0.12 <SEP> 0.06 <SEP> 0
<tb> 5 <SEP> tested <SEP> 2.14 <SEP> 1.31 <SEP> 0.85 <SEP> 0.2 <SEP> 0.12 <SEP> 0.03 <SEP> 0.03
<tb> 6 <SEP> <SEP> 0.76 <SEP> 1.02 <SEP> 0.61 <SEP> 0.12 <SEP> 0.25 <SEP> 0.06 <SEP> 0.03
<tb> 7 <SEP> <SEP> 1.90 <SEP> 1.34 <SEP> 0.86 <SEP> 0.06 <SEP> 0.06 <SEP> 0.06 <SEP> 0.06
<tb> 8 <SEP> <SEP> 2.79 <SEP> 3.47 <SEP> 1.02 <SEP> 0.25 <SEP> 0.12 <SEP> 0.12 <SEP> 0.06
<tb> 0 <SEP> means <SEP> @ <SEP> 0,
03 <SEP> U / ml The average values of the results listed in Tables A and B for intramuscular injection are shown graphically in FIG. 1 in comparison with the sodium salt of penicillin G. In the intramuscular injection of the sodium salt of penicillin, 1 cm3 of an aqueous solution containing 100 mg was also used per rabbit.
Next, human experiments were carried out. Each patient was injected intramuscularly with 1 ml of an aqueous suspension of the new salt containing <B> 300,000 </B> units. Most of the people treated complained. the injection does not have pain and sequelae. Blood samples were taken at various intervals after the injection by pricking the finger.
The determination of the penicillin content in the blood was generally carried out with a biological spot test using Sarcina lutea as the test organism.
The results are shown in Table D.
EMI0004.0001
<I> - <SEP> table <SEP> D </I>
<tb> Patient <SEP> No. <SEP> Penicillin blood level <SEP> (U / ml)
<tb> 1 <SEP> 6 <SEP> 24 <SEP> 30 <SEP> 48 <SEP> 56 <SEP> 72 <SEP> 96 <SEP> hours
<tb> 1 <SEP> 0.23 <SEP> 0.13 <SEP> 0.05 <SEP> 0.04 <SEP> 0.16
<tb> 2 <SEP> 0.15 <SEP> 0.08 <SEP> 0.03 <SEP> 0
<tb> 3 <SEP> 0.34 <SEP> 0.11 <SEP> 0.09 <SEP> 0.05 <SEP> 0 <SEP> 4 <SEP> 0.06 <SEP> 0.05 <SEP > 0.04 <SEP> 0.05 <SEP> 0.04
<tb> 5 <SEP> 0.13 <SEP> 0.17 <SEP> 0.10 <SEP> 0.10 <SEP> 0.07
<tb> 6 <SEP> 0.12 <SEP> 0.13 <SEP> 0.16 <SEP> 0.10
<tb> 7 <SEP> 0.19 <SEP> 0.17 <SEP> 0.09 <SEP> 0.07 <SEP> 0.06
<tb> 8 <SEP> 0.10 <SEP> 0.11 <SEP> <B> 0.09 </B>
<tb> 9 <SEP> 0.22 <SEP> 0.10 <SEP> 0.13 <SEP> 0.10
<tb> 10 <SEP> 0.22 <SEP> 0.17 <SEP> 0.10 <SEP> 0.05 <SEP> 0
<tb> 11 <SEP> 0,
17 <SEP> 0.17 <SEP> 0.10 <SEP> 0.09 <SEP> 0.05
<tb> 12 <SEP> 0.18 <SEP> 0.19 <SEP> 0.19 <SEP> 0.06 <SEP> 0.03
<tb> 13 <SEP> 0.12 <SEP> 0.08 <SEP> 0.02 <SEP> 0 <SEP> 0
<tb> 14 <SEP> 0.39 <SEP> 0.26 <SEP> 0.24
<tb> 15 <SEP> 0.22 <SEP> 0.18 <SEP> 0.15 <SEP> 0.20
<tb> 16 <SEP> 0.90 <SEP> 0.07 <SEP> 0.06 <SEP> 0;
03 <SEP> 0.02
<tb> 17 <SEP> 0.18 <SEP> 1.6 <SEP> 0.04 <SEP> 0.01 <SEP> 0.03
<tb> 18 <SEP> 0.42 <SEP> 1.1 <SEP> 0.09 <SEP> 0.06 <SEP> 0.05
<tb> 19 <SEP> 0.06 <SEP> 0.08 <SEP> 0.04 <SEP> 0.02 <SEP> 0
<tb> 20 <SEP> 0.08 <SEP> 0.06 <SEP> 0.03 <SEP> 0.02 <SEP> 0.03
<tb> 21 <SEP> 0.50 <SEP> 1.4 <SEP> 0.05 <SEP> 0.05 <SEP> 0.04
<tb> 22 <SEP> 0.08 <SEP> 0.08 <SEP> 0.07 <SEP> 0.04
<tb> 23 <SEP> 0.16 <SEP> 0.06 <SEP> 0.07 <SEP> 0.05 <SEP> 0.02
<tb> 24 <SEP> 0.10 <SEP> 0.04 <SEP> 0.01 <SEP> 0.01 <SEP> 0.02
<tb> 25 <SEP> 0.21 <SEP> 0.16 <SEP> 0.12 <SEP> 0.14 <SEP> 0.15
<tb> 26 <SEP> 0.21 <SEP> 0.15 <SEP> 0.14 <SEP> 0.09- <SEP> 0.03
<tb> 27 <SEP> 0.20 <SEP> 0.08 <SEP> 0.06.
<SEP> - <SEP> 0.06 <SEP> 0.03 <SEP> 0.01
<tb> 28 <SEP> 0.20 <SEP> 0.12 <SEP> 0.09 <SEP> 0.13 <SEP> 0.09 <SEP> 0.05
<tb> 29 <SEP> 0.38 <SEP> 0.18 <SEP> 0.10 <SEP> 0.09 <SEP> 0.06 <SEP> 0.04
<tb> 30 <SEP> 0.07 <SEP> 0.04 <SEP> 0.04 <SEP> 0.16 <SEP> 0.03 <SEP> 0.04
<tb> 31 <SEP> 0.37 <SEP> 0.25 <SEP> 0.09 <SEP> 0.08 <SEP> 0.04 <SEP> 0.02
<tb> 32 <SEP> 0.22 <SEP> 0.12 <SEP> 0.03 <SEP> 0.07 <SEP> 0.05 <SEP> 0.05
<tb> 33 <SEP> 0.03 <SEP> 0.04
<tb> 34 <SEP> 0.95 <SEP> 0.22 <SEP> 0.07 <SEP> 0.03 <SEP> 0.02 <SEP> 0.01 <SEP> 0
<tb> 35 <SEP> 1.0 <SEP> 0.23 <SEP> 0.10 <SEP> 0.04 <SEP> 0.03 <SEP> 0.01 <SEP> 0
<tb> 36 <SEP> 0.44 <SEP> 0.39 <SEP> 0.19 <SEP> 0.09 <SEP> 0.03 <SEP> 0.05 <SEP> 0.01
<tb> 37 <SEP> 0.11 <SEP> 0.08 <SEP> 0.07 <SEP> 0.06 <SEP> 0.03 <SEP> 0.04 <SEP> 0
<tb> 38 <SEP> 0.14 <SEP> 0.18 <SEP> 0.03 <SEP> 0.03 <SEP> 0.03 <SEP> 0.03 <SEP> 0.01
<tb> 39 <SEP> 0,
32 <SEP> 0.30 <SEP> 0.09 <SEP> 0.07 <SEP> 0.04 <SEP> 0.04 <SEP> 0.01
<tb> 40 <SEP> 0.56 <SEP> 0.06 <SEP> 0.05 <SEP> 0.03 <SEP> 0.03 <SEP> "<SEP> 0.03 <SEP> 0
<tb> 41 <SEP> 0.39 <SEP> 0.06 <SEP> 0.07 <SEP> 0.06 <SEP> 0.07 <SEP> 0.08 <SEP> 0.08
<tb> 42 <SEP> 0; 25 <SEP> 0.24 <SEP> 0.11 <SEP> 0.03 <SEP> 0.04 <SEP> 0.03
<tb> 43 <SEP> 0.15 <SEP> 0.19 <SEP> 0.09 <SEP> 0.01 <SEP> 0.04 <SEP> 0.01
EMI0005.0001
Patient <SEP> No. <SEP> Penicillin blood level <SEP> (U / ml)
<tb> 1 <SEP> 6 <SEP> 24 <SEP> 30 <SEP> 48 <SEP> 56 <SEP> 72 <SEP> 96 <SEP> hours
<tb> 44 <SEP> 0.11 <SEP> 0;
11 <SEP> 0.08 <SEP> 0.01 <SEP> 0.02 <SEP> 0.03
<tb> 45 <SEP> 0.06 <SEP> 0.02 <SEP> 0.01 <SEP> 0.01 <SEP> 0.01
<tb> 46 <SEP> 0.05 <SEP> 0.03 <SEP> 0.01 <SEP> _ <SEP> 0.04 <SEP> 0.01
<tb> 47 <SEP> 0.09 <SEP> 0.04 <SEP> 0.05 <SEP> 0.01 <SEP> 0
<tb> 48 <SEP> 0.11 <SEP> 0.04 <SEP> 0.06 <SEP> 0.05 <SEP> 0.03
<tb> 49 <SEP> 0.12 <SEP> 0.04 <SEP> 0.05 <SEP> 0.02 <SEP> 0
<tb> 50 <SEP> 0.13 <SEP> 0.10 <SEP> 0.10 <SEP> 0.10 <SEP> 0.06
<tb> 51 <SEP> 0.19 <SEP> 0.04 <SEP> 0.02 <SEP> 0.02 <SEP> 0.01
<tb> 52 <SEP> 0.09 <SEP> 0.04 <SEP> 0.05 <SEP> 0.03 <SEP> 0.01
<tb> 53 <SEP> 0.08 <SEP> 0.05 <SEP> 0.03 <SEP> 0.04 <SEP> 0.05 <SEP> 0.03 <SEP> 0.04
<tb> 54 <SEP> 0.06 <SEP> 0.10 <SEP> 0.06 <SEP> 0.05 <SEP> 0.07 <SEP> 0.04 <SEP> 0.05
<tb> 55 <SEP> 0.08 <SEP> 0.09 <SEP> 0.02 <SEP> 0
<tb> 56 <SEP> 0.14 <SEP> 0.07 <SEP> 0.03 <SEP> 0.03
<tb> 57 <SEP> 0.16 <SEP> 0.06 <SEP> 0,
05
<tb> 58 <SEP> <B> 0.06 </B> <SEP> 0.02 <SEP> 0.02
<tb> 59 <SEP> 0.20 <SEP> 0.16 <SEP> 0.05 <SEP> 0.04
<tb> 60 <SEP> 0.54 <SEP> 0.28 <SEP> 0.14 <SEP> 0.07
<tb> Average <SEP> 0.40 <SEP> 0.23 <SEP> 0.19 <SEP> 0.14 <SEP> 0.07 <SEP> 0.06 <SEP> 0.05 <SEP> 0 , 03
<tb> 0 <SEP> means <SEP> less <SEP> than <SEP> 0.03 <SEP> U / ml The same experiment was also carried out with procainpeneillin. It has been found that the new salt, when injected into water, remains in the blood for a longer time than procaine penicillin.
The average values of this comparison are shown graphically in FIG. In addition, trials with oral administration were carried out on several test subjects.
Two separate experiments were carried out; in the first, a flavored mixture containing 400,000 units in 10 ml was used. The taste was not unpleasant and gave only a slight unpleasant aftertaste. Each of the seven test persons received 10 ml (400,000 units) with the spoon about one hour after breakfast. The penicillin blood levels were determined on blood samples by biological tests. The second experiment was similar to the first, only the mixture contained a dose of 400,000 units of the new salt in 12 ml;
the same experiment was also carried out with a corresponding flavored mixture of procaine penicillin. The results are shown in Table E.
EMI0006.0001
<I> Table <SEP> E </I>
<tb> Penicillin blood level <SEP> in <SEP> test persons <SEP> after <SEP> oral <SEP> administration
<tb> trial <SEP> penicillin <SEP> trial <SEP> penicillin blood level <SEP> (U / ml)
<tb> Person <SEP> 1/2 <SEP> - <SEP> 1 <SEP> 2 <SEP> 4 <SEP> 6 <SEP> hours
<tb> 1 <SEP> Benzyl-ss-phenyl- <SEP> 1 <SEP> 1.0 <SEP> 1.0 <SEP> 0.75 <SEP> 0.12 <SEP> 0.03
<tb> Ethylamine salt <SEP> from <SEP> 2 <SEP> <B> 0.5 <SEP> 0.5 <SEP> 0.5 </B> <SEP> 0.12 <SEP> <<SEP> <B> 0,
03 </B>
<tb> Penicillin <SEP> <B> 0 </B> <SEP> 3 <SEP> 0.5 <SEP> 0.5 <SEP> 0.5 <SEP> 0.25 <SEP> 0.03
<tb> 4 <SEP> 1.0 <SEP> 0.75 <SEP> 0.5 <SEP> 0.5 <SEP> 0.06
<tb> 5 <SEP> 0.5 <SEP> 0.5 <SEP> 0.5 <SEP> 0.25 <SEP> 0.03
<tb> <I> 6 <SEP> 0.25 </I> <SEP> 0.25 <SEP> 0.4 <SEP> 0.06 <SEP> 0.03
<tb> 7 <SEP> 0.5 <SEP> 0.25 <SEP> 0.4 <SEP> 0.1 <SEP> 0.03
<tb> 2 <SEP> Benzyl-ss-phenyl- <SEP> 1 <SEP> 0.03 <SEP> 0.03 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0
<tb> Ethylamine salt <SEP> from <SEP> 2 <SEP> 1.26 <SEP> 0.56 <SEP> 0.28 <SEP> 0.03 <SEP> 0
<tb> Penicillin <SEP> G <SEP> 3 <SEP> 0.82 <SEP> 0.57 <SEP> 0.27 <SEP> 0 <SEP> 0
<tb> '. <SEP> 4 <SEP> 1.00 <SEP> 0.58.
<SEP> 0.32 <SEP> 0.03 <SEP> 0
<tb> 5 <SEP> 1.19 <SEP> 1.14 <SEP> 0.20 <SEP> 0.03 <SEP> 0.06
<tb> 6 <SEP> 1.68 <SEP> 0.59 <SEP> 0.23 <SEP> 0 <SEP> 0.03
<tb> 3 <SEP> Procaine penicillin <SEP> G <SEP> 7 <SEP> 0.18 <SEP> 0.3 <SEP> 0.03 <SEP> 0.06 <SEP> 0
<tb> 8 <SEP> 0.13 <SEP> 0.13 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0
<tb> 9 <SEP> 0.63 <SEP> 0.43 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0
<tb> 10 <SEP> 0.91 <SEP> <I> 0.55 </I> <SEP> 0.06 <SEP> 0 <SEP> 0
<tb> 11 <SEP> 0.03 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0 <SEP> 0
<tb> 12 <SEP> 1.09 <SEP> 0.38 <SEP> 0.55 <SEP> 0.19 <SEP> 0
<tb> 0 <SEP> means <SEP> @ <SEP> 0.03 <SEP> U / ml The average values of the results of these experiments are shown graphically in FIG.
Toxicity tests were also carried out; the results showed that the new salt is slightly less toxic than procaine penicillin G. The average LD 50 in mice for the new salt after intravenous injection was 170 mg / kg, while that of procaine penicillin under the same conditions was 134 mg / kg amounted to.
To prepare the new penicillin G salt you can implement free penicillin G with N-benzyl-ss-phenyl-ethylamine in a solvent of the type mentioned. Furthermore, the new salt can also be obtained by double conversion of a salt of penicillin G, e.g. B. an alkali metal salt, with a salt of the base, e.g. B. your hydrochloride.
In addition, free penicillin G can also be reacted with a salt of N-benzyl-ss-phenyl-ethylamine and an aliphatic carboxylic acid with not more than 8 carbon atoms in the straight chain, which can optionally carry substituents.
It is not necessary to use pure penicillin G (or salts thereof) for the manufacture of the new salt, as in many cases the manufacturing process itself contributes something to the purification. For example, the new salt was made from solutions of crude penicillin G, such as buffered aqueous-alkaline extracts, organic extracts and penicillin crystallization mother liquors.
Examples of suitable solvents for the conversion of free penicillin. G with the free base are tert. = Butanol, acetone and ethyl, butyl and amyl acetate. For the double reaction between a penicillin G salt and a salt of the base, water-soluble salts are preferably used as starting materials and water as the solvent.
The pA is preferably close to the neutral point.
In the case of the reaction of free penicillin G with a salt of an aliphatic carboxylic acid and N-benzyl-ss-phenyl-ethyl amine, suitable solvents are, for example, diethyl ether, methyl isobutyl ketone and ethyl, butyl and amyl acetate.
The salts of N-benzyl-ss-phenyl-ethylamine with the following acids are particularly suitable for reaction with free penicillin G: formic acid, acetic acid, propionic acid, butyric acid, isobutyric acid, caprylic acid, 2-ethyl -heganic acid, phenylacetic acid, glycolic acid and malonic acid.
_ Example <I> 1 </I> A solution of 7.8 g of sodium penicillin G in 50 c & water was acidified to px <I> 2 </I> with dilute hydrochloric acid and the released penicillin with 50 cm3 of ethyl acetate extracted.
The organic layer was dried over magnesium sulfate for a short time and then added to a solution of 5 g of benzyl-ss-phenyl-ethylamine in 20 cm of ethyl acetate. The crystallization of the salt took place spontaneously and yielded 12.1 g of colorless leaflets of F. = 146-147 ", [al D +122 (conc. = 1 in CHC13).
Analysis: C31 @ I "04N, S calculated N 7.7% found N 7.8% <I> Example 2 </I> A solution of 2.35 g of benzyl-ss-phenylethylamine hydrochloride in <B> 100 < / B> ml of hot water was rapidly cooled and added all at once to a solution of 3.4 g of sodium penicillin G in 20 ml of water.
Initially, an 01 deposited, which crystallized slightly when scratched. The white, crystalline solid was filtered off, washed with water and dried in vacuo. Yield 4.9 g (95%), m.p. = 149, [a] 20-r120 (conc. _ 1 in CHCl3).
<I> Example </I> A solution of 7.1 g of sodium penicillin G in 25 ems of water was acidified with 10 cxn3 2N sulfuric acid and the free penicillin was extracted with 30 cxn3 ethyl acetate.
After washing with water and drying over sodium sulfate, this solution was added to a solution of 7.9 g of benzyl-ss-phenyl-ethylamine acetate in 30 cm @ ethyl acetate, whereupon the penicillin salt crystallized after scratching. Yield 8.45 g, m.p. = 151 to 152,. [A] D \ = -j- 124 (conc. = 1 in chloro form).
<I> Example 4 </I> 1 cm3 of isocaproic acid was added to a solution of 2.1 g of benzyl-ss-phenyl-ethylamine in 20 cm3 of petroleum ether (60-80) and the crystalline benzyl-ss-phexiyl formed -äthylaminisocaproate isolated after one hour, yield 2.35 g, F. = 54,.
Analysis: C21H2902, N calculated, N 4.3%, found N 4, 5 A solution of 2.3 g of this salt in 10 cm3 of ethyl acetate was mixed with a solution of 2.5 g of free penicillin G (from 2;
5 g sodium salt) in 20 cis ethyl acetate treated, whereupon the benzyl-ss-phenyl-ethylamine salt of penicillin crystallized. Yield 3.2 g, m.p. = 151-152, [a] D '= 123 (conc. = 1.0 in CHCl3).
Example <I> s </I> (preparation from aqueous solutions :) A solution of the amine acetate, made from 2.53 g (20% excess) of N-benzyl-ss-phenyl-ethylamine and 0.75 g of glacial acetic acid in 34 ml of water, was added to 3.56 g of sodium penicillin G in 35.4 ml of water with stirring. The precipitate was filtered off, washed with water and then with acetone.
The precipitate was finally dried in vacuo at 40-60. <I> Example 6 </I> (Preparation from buffered alkaline extract of crude penicillin.) To 200 ml of a solution of crude sodium penicillin G with a strength of <B> 27000 </B> IU / ml in a phosphate buffer with ap Of 6.2, 50 g of ammonium sulfate were added with stirring.
A solution of 4 g of N-benzyl-ss-phenyl-ethylamine diacetate crystallized from acetic acid (Be the designation for the monoacetate crystallizing with 1 mol of acetic acid) in 10 ml of water was added to the mixture over the course of one hour while stirring. After stirring for a further 15 minutes, the light brown, crystalline solid was filtered off and washed twice with 15 ml of water.
After drying at 40 in vacuo, the new salt was obtained in a yield of 6.4 g, a strength of 780 IU / mg, which corresponds to 93% of the input. The liquids (250 ml) had a strength of 550 IU / ml, corresponding to a further 2.5% of the use.
<I> Example? </I> (Manufactured from penicillin crystallization mother liquors.) A solution (41) of sodium penicillin G in 99% acetone (liquid from the crystallization of crude sodium penicillin G, 850 IU / ml) was made in a vacuum at Zimmer temperature evaporated to approximately the two hundredth part.
The residue was diluted to 118 ml with a phosphate buffer with pg 7. 33 g of ammonium sulfate were added and the solution was reacted with 2.84 g of N-benzyl-ss-phenyl-ethylamine diacetate (for the designation, see Example 6) in 8 ml of water, as described above. 4.05 g of the new salt with a strength of 800 IU / mg were obtained, corresponding to 950% of the insert.
<I> Example 8 </I> (Production from an organic extract of crude penicillin.) A solution of 2.54 g was added to a solution of 50 ml of crude penicillin in butyl acetate with a strength of 85,000 IU / ml N-benzyl-ss-phenyl-ethylamine in 10 ml of butyl acetate was added over the course of one hour with stirring.
The mixture was stirred for a further 2 hours and the solid was filtered off and washed with 10 ml butyl acetate. After drying in vacuo at 40, the yield of new salt was 3.81 g (906 IU / mg), corresponding to 81% of the input.