CH339620A

CH339620A - Process for the preparation of oxypregnans

Info

Publication number: CH339620A
Authority: CH
Inventors: Albert Dr Wettstein; Ernst Dr Vischer; Charles Dr Meystre
Original assignee: Ciba Geigy
Priority date: 1955-09-30
Filing date: 1955-09-30
Publication date: 1959-07-15
Also published as: FR1165061A; NL95691C

Description

  

  Verfahren zur Herstellung von     Oxypregnanen       Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein  Verfahren zur Herstellung von gesättigten und un  gesättigten, in     13-Stellung    durch eine freie oder  funktionell abgewandelte     Carbinol-,        Formyl-    ' oder       Carboxylgruppe    substituierten     14-Oxy-pregnanen.     Die neuen     14-Oxy-pregnane    und ihre Derivate, wie  z. B. das     14-Oxy-aldosteron,    zeigen gegenüber den  in     14-Stellung    nicht     hydroxylierten    Verbindungen  eine gesteigerte Wirksamkeit.  



  Die neuen     14-Oxy-pregnane    werden erhalten,  wenn man die entsprechenden, in     14-Stellung        unsub-          stituierten    Verbindungen der Einwirkung von Kul  turen von Pilzen der Gattungen     Mucor,        Helicostylum,          Pleospora    oder     Curvularia    oder von entsprechenden  Enzymen unterwirft.  



  Die Ausgangsstoffe weisen vorzugsweise ausser  dem in 3- und     20-Stellung,    vor allem aber in     11-          Stellung,    eine freie oder funktionell abgewandelte       Oxy-    oder     Oxogruppe    auf. Sie können gesättigt sein  oder Doppelbindungen enthalten, z.

   B. in 1- und/oder       4-Stellung,    ferner in 5-, 6-, 7-, 8-, 9 : 11-, 11 :     12-          oder        16-Stellung,    oder zusätzliche     Substituenten    be  sitzen, wie freie oder abgewandelte     Oxy-    oder     Oxo-          gruppen,    ferner     Epoxygruppen    oder Halogenatome,  beispielsweise in 2-, 4-, 5-, 6-, 7-, 8-, 9-, 12-, 15-,  16-, 17- oder     21-Stellung,    oder     Methylgruppen,    z. B.

    in     17a-Stellung.    Die Ausgangsstoffe können, was die       Substituenten    anbelangt, von beliebiger     sterischer     Konfiguration sein und auch als     Racemate    vorlie  gen. Sie können auch den sogenannten     Nor-    und/oder  Homo-Reihen, insbesondere der     19-Nor-    und     D-          Homo-Reihe,    angehören. Besonders wichtige Aus  gangsstoffe sind z.

   B.     18-Oxy-    und     18-Oxo-proge-          steron,        17a,18-Dioxy-    und     17a-Oxy-18-progesteron,          18-Oxy-    und     18-Oxo-cortexon,        17a,18-Dioxy-    und       17a-Oxy-18-oxo-cortexon,        Aldosteron,        18-Oxy-cor-          ticosteron    und     -11-dehydro-corticosteron,    11-Epi-18-         oxy-    und     11-Epi-18-oxo-corticosteron,        17a-Oxy-          aldosteron,

          18-Oxyhydrocortison,        18-Oxy-    und     18-          Oxo-cortison,    entsprechende     1-Dehydro-    und     21-          Oxo-verbindungen    und bzw. oder     9a-Fluor-,    9a  Chlor- oder     12a-Fluor-    und     12a-Chlor-derivate,    bei  spielsweise     9a-Fluor-aldosteron    und     -1-dehydro-          aldosteron,        9a-Fluor-18-oxy-corticosteron    und -1  dehydro-corticosteron, Als funktionell abgewandelte       Oxygruppen    kommen z.

   B. mit einer     aliphatischen,     aromatischen oder     heterocyclischen        Carbonsäure,     beispielsweise Essigsäure,     Propionsäure,        Benzoesäure     oder     Furancarbonsäure    veresterte oder eine     ver-          ätherte        Oxygruppen,    z.

   B. die     Tetrahydropyranyl-          oxy-,        Benzyloxy-    oder     Triphenylmethoxygruppe,    in  Betracht und als funktionell abgewandelte     Oxogrup-          pen    vorteilhaft     ketalisierte    bzw.

       acetalisierte        Oxo-          gruppen,    abgeleitet insbesondere von einem zwei  wertigen Alkohol, wie die     Äthylendioxygruppe.    Die  Ausgangsstoffe können auch, hauptsächlich in     13-          Stellung,    eine freie oder funktionell abgewandelte       Carboxylgruppe    aufweisen, in erster     Linie    eine     ver-          esterte    oder     laktonisierte        Carboxylgruppe.     



  Gute Resultate werden vor allen mit folgenden  Pilzarten bzw. den entsprechenden     Enzymen    erzielt:       Pleospora        gaeumanni,        Mucor        griseocyanus,        Mucor          parasiticus,        Helicostylum        piriforme    und     Curvularia          pallescens.    Für die Kultivierung dieser Pilze eignen  sich die an sich hierfür bekannten Medien, z. B.

    solche mit Zuckern, wie Glukose oder     Lactose,    mit       Peptonen,    Maisquellwasser, Sojaprodukten und der  gleichen, sowie mit Mineralsalzen, oder aber syn  thetische Nährlösungen. Man arbeitet insbesondere  unter     aeroben    Bedingungen, beispielsweise in Schüt  telkultur, oder     submers    unter Rühren und Luft  zufuhr. Die genannten Pilze unterscheiden sich von  andern Mikroorganismen, z. B. den Bakterien, durch  gutes Wachstum unter verhältnismässig einfachen      Zuchtbedingungen. Die Reaktion kann wie gesagt in  den genannten     Pilzkulturen    selbst oder aber mit Hilfe  der     angereicherten    oder abgetrennten Enzyme statt  finden, also z.

   B. in einer     Aufschwemmung    des ab  getrennten     Pilzmycels,    des homogenisierten     Pilz-          mycels    oder in Filtraten bzw. wasserhaltigen Extrak  ten davon.  



  Die Isolierung der Verfahrensprodukte lässt sich  nach bekannten Methoden vornehmen. Ihre Abtren  nung kann z. B. durch Extraktion des Reaktions  gemisches mit einem organischen Lösungsmittel, z. B.       Methylenchlorid    oder Essigester, erfolgen. Für die  weitere Reinigung des so erhaltenen Extraktes eignen  sich besonders     Chromatographie,        z.B.    an Aluminium  oxyd oder     Silicagel,    Anwendung von Verteilungs  methoden, z.

   B. dem Gegenstromverfahren, oder die  Trennung mittels     Girard-Reagentien,    wie     Trimethyl-          ammonium-    oder     Pyridinium-essigsäurehydrazid.    An  schliessend an diese Reinigungsmethoden oder an  ihrer Stelle kann schliesslich aus organischen oder       wässrib    organischen Lösungsmitteln umkristallisiert  werden.  



  Die erfindungsgemäss erhältlichen     14-Oxy-steroide     und ihre Derivate zeichnen sich, verglichen mit den  in     14-Stellung    nicht     hydroxylierten    therapeutisch  wirksamen Verbindungen, durch eine gesteigerte  Wirksamkeit aus. Die Verbindungen weisen wie  gesagt in     13-Stellung    eine freie oder funktionell "  abgewandelte     Carbinol-,        Formyl-    oder     Carboxyl-          gruppe    und vorzugsweise in     11-Stellung    eine freie  oder funktionell abgewandelte     Oxy-    oder     Oxogruppe     auf; es kann sich also z.

   B. um Ester, Äther,     Thio-          ester,        Thioäther,        Thiol-    und     Thionester,        Acetale,          Mercaptale,        Ketale,        Enolderivate,    wie     Enolester,          Enoläther    oder     Enamine,    Hydrazone,     Semicarbazone     und dergleichen handeln.

   Von den Verfahrenspro  dukten sind von besonderem Interesse:         14a,18-Dioxy-    und     14a-Oxy-18-oxo-progesteron,          14a,17a,18-Trioxy-    und     14a,17a-Dioxy-18-          oxo-progesteron,          14a-18-Dioxy-    und     14a-Oxy-18-oxo-cortexon,          14a,17a,18-Trioxy-    und     14a,17a-Dioxy-18-          oxo-cortexon,          14a-Aldosteron,          14a,18-Dioxy-corticosteron    und     -11-dehydro-          corticosteron,          11-Epi-14a,

  18-dioxy-    und     11-Epi-14a#-oxy-18-          oxo-corticosteron,          17a-Oxy-aldosteron,          14a,18-Dioxy-hydrocortison,          14a,18-Diöxy-    und     14a-Oxy-18-oxo-cortison,     die entsprechenden     1-Dehydro    sowie     21-Oxo-verbin-          dungen,    ferner entsprechende funktionelle Derivate,  wie Ester, Äther,     Halogen-Derivate,    z.

   B. 9a- oder       12a-Halogen-,    insbesondere die Fluor- oder Chlor  verbindungen, beispielsweise     14a-Oxy-9a-fluor-aldo-          steron    und     -1-dehydro-aldosteron,        14a,18-Dioxy-9a-          fluor-corticosteron    und     -1-dehydro-corticosteron.     Sofern die Verfahrensprodukte nicht die Konfigura-         tion    und die     Substituenten    von therapeutisch ver  wendbaren Steroiden aufweisen, können sie als Zwi  schenprodukte zu deren Herstellung, z. B. der oben  genannten Verbindungen dienen.  



  Die erfindungsgemäss erhältlichen Umsetzungs  produkte lassen sich in an sich bekannter Weise in  ihre funktionellen Derivate, wie Sauerstoff-, Schwe  fel- oder Stickstoffderivate, beispielsweise Ester,  Äther,     Enolester,        Enoläther,        Ketale,        Thioäther    und       Thioketale,    ferner Hydrazone,     Oxime    und     Enamine     überführen, ferner können     Oxy-    zu     Oxogruppen     dehydriert werden.

   In den Estern und     Enolestern     können die Säurereste solche beliebiger organischer  oder anorganischer Säuren sein, wie     aliphatischer,          alicyclischer,        araliphatischer,    aromatischer oder       heterocyclischer        Carbon-,        Thioncarbon-,        Thiolcarbon-          oder        Sulfonsäuren,    vorzugsweise der Ameisensäure,  Essigsäure,     Chloressigsäuren,        Trifluoressigsäure,        Pro-          pionsäure,    Buttersäuren,

       Valeriansäuren,        Trimethyl-          essigsäure,        Diäthylessigsäure,        Capronsäuren,        Önanth-          säuren,        Caprylsäuren,        Palmitinsäuren,        Crotonsäure,          Undecansäure,        Undecylensäure,        Oxalsäure,    Bern  steinsäure,     Pimelinsäure,        Maleinsäure,    Milchsäure,       Carbaminsäuren,        Alkoxycarbonsäuren,

          ss-Cyclopentyl-          propionsäure,        Hexahydrobenzoesäure,        Benzoesäure,          Phenylessigsäure,        Cyclohexylessigsäure,        Phenylpro-          pionsäuren,        Trimethylgallussäure,        Phthalsäure,          Furan-2-carbonsäure,        Isonicotinsäure,        Methansulfon-          säure,        Toluolsulfonsäure,    Schwefelsäuren, Halogen  wasserstoffsäuren oder Phosphorsäuren.  



  In den erhaltenen Verbindungen lassen sich funk  tionell abgewandelte     Oxy-    oder     Oxogruppen    in freie  Gruppen überführen. Auf diese Weise können ins  besondere in polysubstituierten Derivaten die funk  tionell abgewandelten Gruppen auch teilweise in  Freiheit gesetzt werden, z. B. durch chemische oder  enzymatische Hydrolyse, beispielsweise unter Ver  wendung saurer oder basischer Mittel, durch     Um-          esterung    oder     Umacetalisierung.    Aus den auf diese  Weise oder auch direkt erhaltenen, nur partiell abge  wandelten, wie veresterten bzw.     verätherten    Deriva  ten lassen sich durch anschliessende funktionelle Ab  wandlung, z.

   B.     Veresterung    oder     Verätherung,    poly  substituierte Derivate, insbesondere auch gemischte  Ester oder Äther bzw. Ester-Äther, herstellen. Sind  während der Hydrolyse, insbesondere derjenigen mit  alkalischen Mitteln, 9,11- oder     12,11-Halogenhydrine     in die entsprechenden 9,11- oder     11,12-Oxidover-          bindungen    umgewandelt worden, so lassen sich  letztere durch Einwirkung von Halogenwasserstoff  säuren, insbesondere Fluor- oder Chlorwasserstoff  säure, wieder in die gewünschten 9,11- bzw.     12,11-          Halogenhydrine    verwandeln.

      <I>Beispiel 1</I>  Zu einer bei 28  gut entwickelten, 4 Tage alten       Schüttel-Kultur    von     Pleospora        gaeumanni    in 500     cm3          70proz.    wässriger Bierwürze mit 0,5     em3        Spermöl    gibt  man unter sterilen Bedingungen eine Lösung von  125 mg     Aldosteron    in 10     cm3    Aceton. Die Suspen-           sion    schüttelt man weitere 4 Tage bei der gleichen  Temperatur. Nun wird das     Mycel    abgetrennt und  gut mit Wasser und Essigester gewaschen. Die ver  einigten klaren Lösungen werden mit Essigester aus  geschüttelt.

   Die     Essigester-Lösungen    wäscht man mit  Wasser, trocknet sie und dampft sie im Vakuum ein.  Der Rückstand wird in     80proz.    Methanol gelöst und  mehrmals mit     Petroläther    ausgeschüttelt. Die     Äthanol-          Lösungen    dampft man hierauf im Vakuum voll  ständig ein.

   Das     Papierchromatogramm    des Rück  standes     (Propylenglykol-Toluol)    zeigt neben wenig       Aldosteron    das etwas langsamer laufende     14a-Oxy-          aldosteron.    Der ganze Rückstand wird mittels eines       präparativen        Papierchromatogramms        (Propylenglykol-          Toluol)    aufgetrennt. Die dem     14a-Oxy-aldosteron     entsprechenden Zonen werden ausgeschnitten und  mit     50proz.    Methanol mehrmals extrahiert.

   Das  Methanol entfernt man dann in Vakuum, schüttelt  mehrmals die zurückbleibende     wässrige    Lösung mit  Essigester aus, wäscht die vereinigten     Essigester-          Lösungen    mit Wasser, trocknet sie und dämpft sie  im Vakuum ein, wobei als Rückstand reines     14a-          Oxy-aldosteron    erhalten wird.  



  Die Inkubation des     Aldosterons    kann man auch  in 500     cm3    einer gut entwickelten     wässrigen    Kultur  von     Curvularia        pallescens    ausführen, die folgende  Zusätze enthält:

   5 g Rohrzucker, 5 g     Difco-Trypton,     1 g     Natriumnitrat,    0,5 g sek.     Kaliumorthophosphat,     0,25g     Magnesiumsulfat,    0,25g     Kaliumchlorid,    5 mg       Eisensulfat-heptahydrat,    1,25 g     Calciumcarbonat     und 0,5     cm3        Spermöl.    Die Aufarbeitung geschieht  wie oben angegeben.  



  Das so gewonnene     14a-Oxy-aldosteron    lässt sich  wie folgt verestern: 100 mg werden mit 0,2     cm3          Pyridin    und 0,4     cm3        Acetanhydrid    übergossen. Die  Lösung lässt man 15 Stunden bei 20  stehen und  dampft sie dann auf Wasserzusatz im gewöhnlichen  Vakuum und zuletzt im Hochvakuum bei 35 .

   Als  Rückstand erhält man das     14a-Oxy-aldosteron-          18,21-diacetat.       <I>Beispiel 2</I>  Zu einer bei 28  gut entwickelten, 4 Tage alten       Schüttel-Kultur    von     Pleospora        gaeumanni    in 500     cm3          70proz.    wässriger Bierwürze mit 0,

  5     cm3        Spermöl     gibt man unter sterilen Bedingungen eine Lösung  von 125 mg     1-Dehydro-aldosteron    (erhältlich aus       Aldosteron    durch mikrobiologische     Dehydrierung    in       1-Stellung    mittels des Pilzes     Colo        nectria        decora)     in 10     cm3    Aceton. Die Suspension schüttelt man  weitere 4 Tage bei der gleichen Temperatur.

   Das  Reaktionsgemisch wird dann wie im Beispiel 1  angegeben aufgearbeitet und das     gebildete        1-De-          hydro-14a-oxy-aldosteron    ebenfalls wie angegeben  mittels eines     präparativen        Papierchromatogramms          (Propylenglykol-Toluol)    isoliert, wobei. es etwas lang  samer läuft als das     1-Dehydro-aldosteron.     



  Wenn man das so gewonnene     1-Dehydro-14a-          oxy-aldosteron    mit 0,2     cm3        Pyridin    und 0,4     cm3          Acetanhydrid    übergiesst, die Lösung 15 Stunden bei  20  stehenlässt und dann im gewöhnlichen Vakuum    und schliesslich im Hochvakuum bei 35  eindampft,  so     erhält    man als Rückstand das     1-Dehydro-14a-          oxy-aldosteron-18,21-diacetat.     



  <I>Beispiel 3</I>  125 mg (18     ->    l     lss)-Lakton    der     44-3,20-Dioxo-          llss-oxy-pregnen-18-säure    werden wie in Beispiel 1  und 2 mit einer Kultur von     Pleospora        gaeumanni     umgesetzt. Das Umsetzungsprodukt wird ebenfalls  wie dort aufgearbeitet und das entstandene (18<B>--></B>     11ss)-          Lakton    der     44-3,20-Dioxo-llss,l4a-dioxy-pregnen-          18-säure    wie angegeben isoliert.



  Process for the preparation of oxypregnanes The present invention relates to a process for the preparation of saturated and unsaturated 14-oxy-pregnanes substituted in the 13-position by a free or functionally modified carbinol, formyl or carboxyl group. The new 14-oxy-pregnane and their derivatives, such as B. 14-oxy-aldosterone, show an increased effectiveness compared to the compounds not hydroxylated in the 14-position.



  The new 14-oxy-pregnanes are obtained when the corresponding compounds, unsubstituted in the 14-position, are subjected to the action of cultures of fungi of the genera Mucor, Helicostylum, Pleospora or Curvularia or of corresponding enzymes.



  In addition to those in the 3- and 20-positions, but especially in the 11-position, the starting materials preferably have a free or functionally modified oxy or oxo group. They can be saturated or contain double bonds, e.g.

   B. 1- and / or 4-position, also in 5-, 6-, 7-, 8-, 9:11, 11:12 or 16-position, or additional substituents be seated, such as free or modified Oxy or oxo groups, and also epoxy groups or halogen atoms, for example in the 2-, 4-, 5-, 6-, 7-, 8-, 9-, 12-, 15-, 16-, 17- or 21-position , or methyl groups, e.g. B.

    in 17a position. As far as the substituents are concerned, the starting materials can be of any steric configuration and can also be present as racemates. They can also belong to the so-called Nor and / or Homo series, in particular the 19-Nor and D-Homo series. Particularly important starting materials are z.

   B. 18-Oxy- and 18-Oxo-progesterone, 17a, 18-Dioxy- and 17a-Oxy-18-progesterone, 18-Oxy- and 18-Oxo-cortexon, 17a, 18-Dioxy- and 17a- Oxy-18-oxo-cortexon, aldosterone, 18-oxy-corticosterone and -11-dehydro-corticosterone, 11-epi-18-oxy- and 11-epi-18-oxo-corticosterone, 17a-oxy-aldosterone,

          18-oxyhydrocortisone, 18-oxy- and 18- oxo-cortisone, corresponding 1-dehydro and 21-oxo compounds and / or 9a-fluorine, 9a-chlorine or 12a-fluorine and 12a-chlorine derivatives, for example 9a-fluoro-aldosterone and -1-dehydro- aldosterone, 9a-fluoro-18-oxy-corticosterone and -1-dehydro-corticosterone, as functionally modified oxy groups come e.g.

   B. with an aliphatic, aromatic or heterocyclic carboxylic acid, for example acetic acid, propionic acid, benzoic acid or furancarboxylic acid or an etherified oxy groups, z.

   B. the tetrahydropyranyl-oxy, benzyloxy or triphenylmethoxy group, into consideration and as functionally modified oxo groups advantageously ketalized or

       acetalized oxo groups, derived in particular from a dihydric alcohol, such as the ethylenedioxy group. The starting materials can also have a free or functionally modified carboxyl group, mainly in the 13-position, primarily an esterified or lactonized carboxyl group.



  Good results are achieved above all with the following types of fungus and the corresponding enzymes: Pleospora gaeumanni, Mucor griseocyanus, Mucor parasiticus, Helicostylum piriforme and Curvularia pallescens. The media known per se are suitable for the cultivation of these fungi, e.g. B.

    those with sugars, such as glucose or lactose, with peptones, corn steep liquor, soy products and the like, and with mineral salts, or synthetic nutrient solutions. One works in particular under aerobic conditions, for example in shaking telkultur, or submerged with stirring and air supply. The fungi mentioned differ from other microorganisms, e.g. B. the bacteria, through good growth under relatively simple cultivation conditions. As I said, the reaction can take place in the mentioned fungal cultures themselves or with the help of the enriched or separated enzymes, so z.

   B. in a suspension of the separated mushroom mycelium, the homogenized mushroom mycelium or in filtrates or water-containing extracts th thereof.



  The process products can be isolated by known methods. Your separation can z. B. by extracting the reaction mixture with an organic solvent, e.g. B. methylene chloride or ethyl acetate. Chromatography is particularly suitable for the further purification of the extract obtained in this way, e.g. on alumina or silica gel, application of distribution methods, z.

   B. the countercurrent process, or the separation using Girard reagents, such as trimethylammonium or pyridinium acetic acid hydrazide. Following these cleaning methods or instead of them, recrystallization can finally be carried out from organic or aqueous organic solvents.



  The 14-oxy-steroids obtainable according to the invention and their derivatives are distinguished by an increased effectiveness compared with the therapeutically active compounds which are not hydroxylated in the 14-position. As mentioned, the compounds have a free or functionally modified carbinol, formyl or carboxyl group in the 13-position and preferably a free or functionally modified oxy or oxo group in the 11-position;

   B. to be esters, ethers, thioesters, thioethers, thiol and thione esters, acetals, mercaptals, ketals, enol derivatives such as enol esters, enol ethers or enamines, hydrazones, semicarbazones and the like.

   Of the process products of particular interest are: 14a, 18-dioxy- and 14a-oxy-18-oxo-progesterone, 14a, 17a, 18-trioxy- and 14a, 17a-dioxy-18-oxo-progesterone, 14a-18 -Dioxy- and 14a-oxy-18-oxo-cortexon, 14a, 17a, 18-trioxy- and 14a, 17a-Dioxy-18- oxo-cortexon, 14a-aldosterone, 14a, 18-dioxy-corticosterone and -11- dehydrocorticosterone, 11-Epi-14a,

  18-dioxy- and 11-epi-14a # -oxy-18-oxo-corticosterone, 17a-oxy-aldosterone, 14a, 18-dioxy-hydrocortisone, 14a, 18-diöxy- and 14a-oxy-18-oxo-cortisone , the corresponding 1-dehydro and 21-oxo compounds, also corresponding functional derivatives, such as esters, ethers, halogen derivatives, eg.

   B. 9a- or 12a-halogen, especially the fluorine or chlorine compounds, for example 14a-oxy-9a-fluoro-aldo- steron and -1-dehydro-aldosterone, 14a, 18-dioxy-9a-fluoro-corticosterone and -1-dehydro-corticosterone. If the process products do not have the configuration and the substituents of therapeutically ver usable steroids, they can be used as inter mediate products for their preparation, eg. B. serve the above compounds.



  The reaction products obtainable according to the invention can be converted in a manner known per se into their functional derivatives, such as oxygen, sulfur or nitrogen derivatives, for example esters, ethers, enol esters, enol ethers, ketals, thioethers and thioketals, and also hydrazones, oximes and enamines, furthermore, oxy groups can be dehydrogenated to oxo groups.

   In the esters and enol esters, the acid radicals can be those of any organic or inorganic acids, such as aliphatic, alicyclic, araliphatic, aromatic or heterocyclic carboxylic, thionic carboxylic, thiol carboxylic or sulphonic acids, preferably of formic acid, acetic acid, chloroacetic acids, trifluoroacetic acid, propionic acid , Butyric acids,

       Valeric acids, trimethyl acetic acid, diethylacetic acid, caproic acids, enanthanic acids, caprylic acids, palmitic acids, crotonic acid, undecanoic acid, undecylenic acid, oxalic acid, succinic acid, pimelic acid, maleic acid, lactic acid, carbamic acids, alkoxycarboxylic acids,

          β-Cyclopentylpropionic acid, hexahydrobenzoic acid, benzoic acid, phenylacetic acid, cyclohexylacetic acid, phenylpropionic acids, trimethylgallic acid, phthalic acid, furan-2-carboxylic acid, isonicotinic acid, methanesulphonic acid, toluenesulphonic acid, sulfuric acids, halogenated hydrogens.



  In the compounds obtained, functionally modified oxy or oxo groups can be converted into free groups. In this way, the func tionally modified groups in particular in polysubstituted derivatives can also be partially set free, eg. B. by chemical or enzymatic hydrolysis, for example using acidic or basic agents, by transesterification or transacetalization. From the in this way or directly obtained, only partially abge converted, such as esterified or etherified Deriva th can be converted by subsequent functional Ab, z.

   B. esterification or etherification, poly-substituted derivatives, especially mixed esters or ethers or ester-ethers, produce. If during the hydrolysis, in particular that with alkaline agents, 9,11- or 12,11-halohydrins have been converted into the corresponding 9,11- or 11,12-oxo compounds, the latter can be converted into the latter by the action of hydrohalic acids, in particular Convert fluoric or hydrochloric acid back into the desired 9,11 or 12,11 halohydrins.

      <I> Example 1 </I> For a shaking culture of Pleospora gaeumanni well developed at 28 and 4 days old in 500 cm3 70 percent. aqueous beer wort with 0.5 em3 sperm oil is given a solution of 125 mg aldosterone in 10 cm3 acetone under sterile conditions. The suspension is shaken for a further 4 days at the same temperature. The mycelium is then separated off and washed well with water and ethyl acetate. The united clear solutions are shaken out with ethyl acetate.

   The ethyl acetate solutions are washed with water, dried and evaporated in vacuo. The residue is in 80 per cent. Dissolved methanol and extracted several times with petroleum ether. The ethanol solutions are then completely evaporated in a vacuum.

   The paper chromatogram of the residue (propylene glycol-toluene) shows, in addition to a little aldosterone, the somewhat slower 14a-oxyaldosterone. The entire residue is separated by means of a preparative paper chromatogram (propylene glycol-toluene). The zones corresponding to 14a-oxy-aldosterone are cut out and treated with 50%. Methanol extracted several times.

   The methanol is then removed in vacuo, the remaining aqueous solution is shaken out several times with ethyl acetate, the combined ethyl acetate solutions are washed with water, dried and evaporated in vacuo, pure 14a-oxyaldosterone being obtained as residue.



  The incubation of aldosterone can also be carried out in 500 cm3 of a well-developed aqueous culture of Curvularia pallescens containing the following additives:

   5 g cane sugar, 5 g Difco tryptone, 1 g sodium nitrate, 0.5 g sec. Potassium orthophosphate, 0.25 g magnesium sulfate, 0.25 g potassium chloride, 5 mg iron sulfate heptahydrate, 1.25 g calcium carbonate and 0.5 cm3 sperm oil. The work-up is carried out as indicated above.



  The 14a-oxy-aldosterone obtained in this way can be esterified as follows: 0.2 cm3 of pyridine and 0.4 cm3 of acetic anhydride are poured over 100 mg. The solution is left to stand for 15 hours at 20 and then evaporated with the addition of water in a normal vacuum and finally in a high vacuum at 35.

   The residue obtained is 14a-oxy-aldosterone-18,21-diacetate. <I> Example 2 </I> For a shaking culture of Pleospora gaeumanni well developed at 28 and 4 days old in 500 cm3 70 percent. watery wort with 0,

  5 cm3 of sperm oil is given under sterile conditions a solution of 125 mg of 1-dehydro-aldosterone (obtainable from aldosterone by microbiological dehydration in 1-position using the fungus Colo nectria decora) in 10 cm3 of acetone. The suspension is shaken for a further 4 days at the same temperature.

   The reaction mixture is then worked up as indicated in Example 1 and the 1-dehydro-14a-oxy-aldosterone formed is also isolated as indicated by means of a preparative paper chromatogram (propylene glycol-toluene), with. it runs a little slower than the 1-dehydro-aldosterone.



  If the 1-dehydro-14aoxy-aldosterone obtained in this way is poured over with 0.2 cm3 of pyridine and 0.4 cm3 of acetic anhydride, the solution is left to stand for 15 hours at 20 and then evaporated in a normal vacuum and finally in a high vacuum at 35, this gives 1-dehydro-14a-oxy-aldosterone-18,21-diacetate is the residue.



  <I> Example 3 </I> 125 mg (18 -> lss) lactone of 44-3,20-dioxolss-oxy-pregnen-18-acid are obtained as in Examples 1 and 2 with a culture of Pleospora gaeumanni implemented. The reaction product is also worked up as there and the resulting (18 <B> -> </B> 11ss) lactone of 44-3,20-dioxo-llss, 14a-dioxy-pregnene-18-acid isolated as indicated.

Claims

PATENT CLAIM A process for the preparation of new saturated or unsaturated 14-oxy-pregna- new substituted in the 13-position by a free or functionally modified carbinol, formyl or carboxyl group, characterized in that the corresponding 14-position unsubstituted Compounds of the action of cultures of fungi of the genera Mucor, Helicostylum,

Pleospora or Curvularia or by corresponding enzymes. SUBClaims 1. The method according to claim, characterized in that cultures of Pleospora gaeumanni or Curvularia pallescens or the enzymes contained therein are used. 2.

Process according to patent claim and sub-claim 1, characterized in that d4-3,20-dioxo-14-H-pregnene substituted in the aforementioned manner in the 13-position is used as starting materials. 3., The method according to claim and the dependent claims 1 and 2, characterized in that aldosterone is used as the starting material. 4. The method according to claim and the sub-claims 1 and 2, characterized in that 18-oxy-hydrocortisone is used as the starting material. 5.

Method according to claim and the sub-claims 1 and 2, characterized in that the (18 <B> -> </B> 11) lactone of 44-3,20-Dioxo-11ss- oxy-pregnen-18- acid used as a starting material. 6. The method according to claim and sub-claim 1, characterized in that 1-dehydro derivatives of the compounds mentioned in sub-claims 2-5 are used as starting materials. 7. The method according to claim and sub-claim 1, characterized in that the starting materials used are 9a- or 12a-fluorine or chlorine derivatives of the compounds mentioned in sub-claims 2-6. B.

Process according to patent claim and the dependent claims 1-7, characterized in that free oxy groups present in the 14-oxy-pregnanes obtained are esterified.