CH411870A

CH411870A - Verfahren zur Herstellung von 6a-Methyl-16-methylen-steroiden

Info

Publication number: CH411870A
Application number: CH1053562A
Authority: CH
Inventors: Harald Dr Metz; Klaus Dr Brueckner; Karl-Heinz Dr Bork; Werder Fritz Dr Von
Original assignee: Merck Ag E
Priority date: 1961-09-15
Filing date: 1962-09-05
Publication date: 1966-04-30
Also published as: DE1213403B; NL282638A; SE302122B; NL140222B

Description

Verfahren zur Herstellung von 6a-Methyl-16-methylen-steroiden Es wurde gefunden, dass 6a-Methyl-16-methylen- steroide der Formel 1
EMI0001.0005
R,=H oder Acyl R2=aH, ssOH oder =O und Y =H oder F über interessante glucocorticoide und entzündungs hemmende Eigenschaften verfügen.

Die Verbindun gen eignen sich insbesondere als Therapeutica für die Behandlung rheumatischer Erkrankungen und zeich nen sich durch eine besonders gute Magenverträg lichkeit sowie das Fehlen jeder Natriumretention aus.

Gegenstand der Erfindung ist ein Verfahren zur Herstellung von 6a-Methyl-16-methylen-steroidender eingangs genannten Formel 1, das dadurch gekenn zeichnet ist, dass man das entsprechende, in 1,2-Stel- lung gesättigte Steroid durch Behandlung mit mikro biologischen Dehydrierungsmitteln dehydriert.

Für die mikrobiologische 1,2-Dehydrierung kön nen Mikroorganismen verwendet werden, die z. B. den folgenden Gattungen angehören: Alternaria, Caloneetria, Colletotrichum, Cylindrocarpon, Di- dymella, Fusarium, Ophiobolus, Septomyxa, Vermi- cularia; Micromonospora, Nocardia, Streptomyces;

Alcaligenes, Bacillus, Corynebacterium, Mycobac- terium, Protaminobacter, Pseudomonas.

Besonders geeignet sind Bacillus sphaericus var. fusiformis, Corynebacterium simpler und Fusarium solani.

Zur Dehydrierung wird das Ausgangsmaterial am besten einer Submerskultur des betreffenden Mikro organismus zugesetzt, die in einer geeigneten Nähr lösung bei optimaler Temperatur und starker Belüf tung nach den üblichen Methoden der Fermentations- technik wächst. Statt wachsender Kulturen sind bei sonst gleicher Technik auch Aufschwemmungen der Mikroorganismen in Pufferlösung brauchbar. Die Umsetzung kann chromatographisch verfolgt und die Fermentationslösung nach restloser Umsetzung des Ausgangsmaterials z.

B. mit Chloroform extrahiert werden.

Die als Ausgangsmaterial erforderlichen 6a-Me- thyl-16-methylen-steroide können erhalten werden aus den zugrunde liegenden 16a, 17a-Oxido-16ss- methyl-steroiden durch Behandlung mit starken Säuren.

Die neuen Verbindungen können im Gemisch mit üblichen Arzneimittelträgern in der Human- oder Ve terinärmedizin eingesetzt werden. Als Trägersubstan zen kommen organische oder anorganische Stoffe in Frage, die für parenterale, enterale oder topikale Applikation geeignet sind und mit den neuen Ver bindungen nicht reagieren, wie Wasser, pflanzliche Öle, Polyäthylenglykole, Gelatine, Milchzucker, Stärke, Magnesiumstearat,Talk, Vaseline, Cholesterin usw.

Zur parenteralen Applikation dienen insbeson dere ölige oder wässrige Lösungen sowie Suspen- sionen, Emulsionen oder Implantate. Für enterale Applikation können Tabletten oder Dragees, für topi- kale Anwendung Salben oder Cremes angewendet werden, die sterilisiert oder mit Konservierungs-, Stabilisierungs- oder Netzmitteln oder Salzen zur Be einflussung des osmotischen Druckes oder Puffer substanzen versetzt sein können.

Beispiele 1. 6a-Methyl-16-methylen-prednisolon Zu einer 6 Stunden alten Schüttelkultur von Ba- cillus sphaericus, die in 2000 ml einer Nährlösung aus 1 % Basamin Bush bei 28 C gewachsen war, werden 700 mg 6a-Methyl-16-methyl-hydrocortison oder dessen 21-Acetat in 40 ml Methanol zugesetzt.

Nach weiteren 24 Stunden Schütteln bei 28 wird die Kul tur dreimal mit dem gleichen Volumen Chloroform ausgeschüttelt, die vereinigten Extrakte werden zur Trockne eingedampft. Dünnschichtchromatographisch ist kein Ausgangsmaterial mehr nachzuweisen, es liegt ausschliesslich 6a-Methyl-16-methyien-prednisolon vor.

Smp. 236-237 C; (a)D+5,3 (Dioxan); AmaX 241 my, Ei "m 393.

Smp. des 6a-Methyl-16-methylen-prednisolon-21- acetats: 238-239 C; (a)D+18 (Dioxan).

2. 6a-Methyl-16-methylen-prednison-21-acetat Zu einer 16 Stunden alten Schüttelkultur von Corynebacterium simplex, die in 2000 ml einer Nähr- lösung aus 0,1 % Hefeextrakt bei 28' C gewaschen war, werden 700 mg 6a-Methyl-16-methylen-corti- son-21-acetat in 4 ml Methanol zugesetzt.

Der Um satz wird dünnschichtchromatographisch verfolgt, bis das Ausgangsmaterial verschwunden und nur 6a-Me- thyl-16-methylen-prednison-acetat nachzuweisen ist. Nach 8 Stunden wird die Kultur dreimal mit dem gleichen Volumen Chloroform ausgeschüttelt, die vereinigten Extrakte werden abgedampft und mit Petroläther gereinigt.

Smp. 195-196 C; Am". 240 mg, EI, Vm 343; (a)D+ 105 (Dioxan).

3. 6a-Methyl-9a-f luor-16-methylen-prednisolon In einem Kleinfermenter werden 12 1 einer Nähr- lösung aus 0,1 % Basamin Bush, mit Sörensen-Phos- phat, auf pH 6,8 gepuffert,

mit 800 ml Submerskul- tur von Corynebacterium simplex beimpft. Die Kul tur wächst unter starker Belüftung und Rühren bei 28 C und erhält nach 6 Stunden einen Zusatz von 6 g 6a-Methyl-9a-fluor-16-methylen-hydrocortison in 200 ml Methanol. Während der weiteren Belüf tung bei 28 wird der Umsatz dünnschichtchromato- graphisch verfolgt.

Nach 9 Stunden ist kein Aus gangsmaterial mehr nachzuweisen. Die Kulturlösung wird dreimal mit dem gleichen Volumen Chloroform ausgerührt, die Extrakte zur Trockne eingedampft und mit Petroläther gereinigt. Nach Umkristallisa tion liegen 3,9 g reines 6a-Methyl-9a-fluor-16-me- thylen-prednisolon vor.

7.m@r 239 mg, EIV- 360. 4. 6a-Methyl-9a-f luor-16-methylen-prednison In einem Kleinfermenter werden 12 1 einer Nähr- lösung aus 1 % Basamin Bush, pH 6,5, mit 800 ml Submerskultur von Bacillus sphaericus beimpft.

Die Kultur wächst unter starker Belüftung und Rühren bei 28 C und erhält nach 10 Stunden einen Zusatz von 6 g 6a-Methyl-9a-fluor-16-methylen-cortison in 200 ml Methanol. Der Umsatz wird während der weiteren Belüftung bei 28 dünnschichtchromatogra- phisch verfolgt. Nach 26 Stunden ist kein Ausgangs material mehr nachzuweisen. Die Kulturlösung wird dreimal mit dem gleichen Volumen Chloroform aus gerührt, die Extrakte zur Trockne eingedampft und mit Petroläther gereinigt. Nach Umkristallisation lie gen 4,2 g reine 6a-Methyl-9a-fluor-16-methylen- prednison vor.

2#max 238 nu, Ei "m 352.

5. 6a-Methyl-16-methylen-prednison In einem Kleinfermenter werden 15 1 einer Nähr- lösung aus 1 % Hefeextrakt, pH 6,8, mit 0,5 1 Schüt- telkultur von Bacillus sphaericus beimpft.

Die Kultur wächst unter ständigem Rühren und starker Belüf tung bei 28 C und erhält nach etwa 10 Stunden einen Zusatz von in 300 ml Methanol gelöstem 7,5 g 6a-Methyl-16-methylen-cortison-21-acetat. Die De hydrierung wird papierchromatographisch verfolgt und ist nach 28-36 Stunden vollständig. Die Kultur lösung wird dreimal mit dem gleichen Volumen Chloroform extrahiert, die vereinigten Chloroform lösungen werden eingedampft. Aus Aceton kristalli siert das 6a-Methyl-16-methylen-prednison.

@m1. 239,5 mu, Eic-m 378.

Claims

PATENTANSPRUCH Verfahren zur Herstellung von 6a-Methyl-16- methylen-stereoiden der Formel 1 EMI0002.0152 dadurch gekennzeichnet, dass man das zugrunde lie gende, in 1,2-Stellung gesättigte Steroid durch Be handlung mit mikrobiologischen Dehydrierungsmit- teln in 1,2-Stellung dehydriert.