CH433595A - Verfahren zur Herstellung eines Trachom-Schutzimpfstoffes - Google Patents
Verfahren zur Herstellung eines Trachom-SchutzimpfstoffesInfo
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Description
Verfahren zur Herstellung eines Trachom-Schutzimpfstoffes Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf ein Verfahren zur Herstellung eines Trachom-Schutzimpfstoffes. Das Trachom-Virus wurde zum erstenmal im Jahre 1957 von Tang und Mitarbeitern (Chinese Med. J. 75, 1957, S. 429) isoliert, und ein Jahr danach isolierten C. H. Collier und Mitarbeiter (J. Lancet 1958, I, 993) dasselbe Virus nach der von Tang beschriebenen Methode und bestätigten die Indentität desselben, wobei sie die Augen freiwilliger Patienten mit Trachom infizierten. Später wurde das Trachom-Virus von trachomatösen Patienten in verschiedenen Laboratorien isoliert. Das Trachom-Virus wird aus den Bindehautepithelien von trachomatösen Augen isoliert und mittels Dottersackbeimpfung von Hühnerbruteiern gezüchtet; daraufhin werden die infizierten Dottersackgewebe gesam malz. Das Ziel der vorliegenden Erfindung besteht in der Schaffung eines Verfahrens zur Herstellung eines Trachom-Schutzimpfstoffes durch Reinigung der Dottersackgewebe. Es können dadurch die darin enthaltenen unerwünschten Produkte abgetrennt werden, und es wird schliesslich eine wässrige Suspension erhalten. Die besagte wässrige Suspension, und zwar entweder als solche oder nach Zusatz von Hilfsmitteln, wie z. B. Aluminiumhydroxyd oder Mineralölen, die die Wirkung erhöhen, wird als Trachom-Schutzimpfstoff verwendet. Das erfindungsgemässe Verfahren ist dadurch gekennzeichnet, dass infiziertes Dottersackgewebe, welches durch Züchtung des Trachom-Virus im Dottersackgewebe von Huhnembryonen erhalten worden ist, mit einer Suspension von Trypsin in einer Phosphatpufferlösung bei einem pH-Wert von 7,5-8 und bei einer Temperatur zwischen 35 bis 40 C versetzt wird, und dass der durch Zentrifugieren abgetrennte aktive Teil mit Kieselgur behandelt, durch Zentrifugieren abgetrennt und schliesslich mit Äthyläther behandelt wird. Das genannte erfindungsgemässe Reinigungsverfahren gewährleistet einen hohen Reinheitsgrad des Trachom-Schutzimpfstoffes, wobei die Fremdsubstanzen ohne Virus-Verlust und Herabsetzung seiner antigenischen Eigenschaften beseitigt werden. Der erfindungsgemässe Reinigungsprozess besteht aus drei aufeinanderfolgenden Behandlungsschritten, durch welche mit Trachom-Virus infizierte Dottersackgewebe in einen therapeutisch anwendbaren Trachom Schutzimpfstoff umgewandelt werden. Die genannten aufeinanderfolgenden Behandlungsschritte sind: a) Behandlung mit einer Trypsinsuspension, um das Virus von der Proteinfraktion zu befreien; b) Behandlung mit Kieselgur, um die im Impfstoff enthaltenen Fremdsubstanzen zu entfernen; c) Behandlung mit Äther, um Fette und andere in Äther lösliche Fremdsubstanzen zu entfernen. Die Abtrennung des Virus aus der Suspension kann während jeder Behandlung in bekannter Weise durch Zentrifugieren vorgenommen werden. Das mit dem Trachom-Virus infizierte Dottersackgewebe, das in dem erfindungsgemässen Verfahren zur Herstellung des Trachom-Schutzimpfstoffes angewandt wird, wird zum Beispiel in folgender Weise hergestellt: In den Dottersackhohlraum von befruchteten Eiern, die 6 Tage bei 390 C bebrütet wurden, wird der mit einer verdünnten Pufferlösung bei pH 7 vermischte Virus-Stamm injiziert (Puffer Saccharose, Kaliumphosphat und Kaliumglutamat, J. Bact. 59, 1950, S. 509). Wenn eine 500/oige Sterblichkeit der Eier erreicht ist, werden die noch lebenden Eier geöffnet und die betreffenden Gewebe (bei-70 C gehalten) werden zum Animpfen von weiteren Eiern mit dem Virus verwendet. Die infizierten Gewebe werden in 500/oigen Saccharose-, Kaliumphosphat-, Glutamatlösungen aufgeschlämmt und bei niedriger Temperatur bis zum Moment der Impfstoffproduktion aufbewahrt. Beispiel Das infizierte Dottersackgewebe wird unter Rühren homogenisiert und 3 Teile einer Trypsinsuspension in Phosphatpufferlösung (100 mg Trypsin/100 ml Puffer) werden bei einem pH-Wert von 7,5-8 und bei einer Temperatur zwischen 35 und 40 C zu einem Teil einer homogenisierten Suspension hinzugefügt. Die erhaltene Suspension wird während 15 Min. durch Rühren bei einer Temperatur zwischen 35 bis 400 C homogenisiert; während dieser Phase wird das Virus von der Proteinfraktion befreit, die dann durch Zentrifugieren bei einem g-Wert von 125-650 abgeschieden wird. Dann wird der aktive Teil durch Zentrifugieren bei 2000-6500 g von dem auf der Oberfläche schwimmenden Teil abgetrennt. Der gewonnene aktive Teil wird bis zum Ausgangsvolumen mit einer Phosphatpufferlösung bei einem pH Wert von 7,5-8 aufgefüllt; dann wird 2 g Kieselgur (Celite, eingetragene Schutzmarke) je 100 ml Suspension zugesetzt, und es werden danach weitere Fremdsubstanzen bei 650 g abzentrifugiert. Der obenstehende Teil wird gesammelt und bei 2000-6500 g zentrifugiert, wobei wieder der aktive Teil abgetrennt wird. Der aktive Teil wird in einer Phosphatpufferlösung, deren Volumen gleich dem der Ausgangssupension der infizierten Gewebe ist, aufgeschlämmt und wird einige Minuten mit dem gleichen Volumen Äthyläther versetzt, um Fette und in Äther lösliche Fremdsubstanzen zu extrahieren. Die ätherische Schicht wird verworfen, der Äther wird vom wässrigen Teil abgedampft, und der aktive Teil wird von der entstehenden Suspension bei 2000 bis 6500 g abzentrifugiert. Der aktive Teil wird in einer Phosphatpufferlösung gesammelt. Die so erhaltene Suspension enthält den Schutzimpfstoff, der als solcher verwendet werden kann; es können auch Hilfsstoffe, wie Aluminiumhydroxyd oder Mineralöle, zugesetzt werden. Die oben erwähnten Hilfsstoffe werden der den Schutzimpfstoff enthaltenden Suspension zugesetzt, um ein homogenes Produkt zu gewinnen. Der Trachom-Schutzimpfstoff, der nach dem erfindungsgemässen Verfahren erhalten wird, kann in verschiedenen therapeutischen Dosen dargereicht werden. Der Impfstoff kann bei einer Temperatur von 4" C sehr lange aufbewahrt werden, ohne seine Wirksamkeit zu verlieren. Auch nach 6 Monaten wird keine Änderung der antigenischen Wirkung bemerkt. Toxizitätsproben, die an 15 Meerschweinchen durch intraperitoneale oder intramuskuläre Injektion des Impfstoffes ausgeführt wurden, zeigten keine schädliche Reaktion. Der Impfstoff, der entsprechend dem erfindungs- gemässen Verfahren gereinigt wurde, zeigt Trachom Schutzwirkung, die in den folgenden Tabellen veranschaulicht wird, wobei die Ergebnisse der am Spital von Asmara ausgeführten klinischen Versuche angegeben sind. Zu diesem Zweck wurden 4 Dörfer ausgewählt und in jedem von diesen wurden 50 Kinder geimpft (25 mit Aluminiumhydroxyd-Vakzine und 25 mit ÖIvakzine) und 50 Kinder unter Kontrolle gehalten, die alle vom Trachom befallen waren. Tabelle 1 Ergebnisse der Trachom-Schutzimpfung 2 Monate nach der Behandlung Fälle geimpft mit geimpft mit nicht geimpft dem ölimpfstoff dem Al (OH) 3- Impfstoff Genesene 58 O/o 20 O/o 0 o/o Gebesserte 16 /o 42 O/o 10 O/o Stationäre 26 o/o 30 o/o 80 O/o Verschlechterte 0 O/o 8 O/o 10 O/o Tabelle 2 Ergebnisse der Trachom-Schutzimpfung 8 Monate nach der Behandlung Fälle geimpft mit geimpft mit nicht geimpft dem Ölimpfstoff dem AI(OH), - Impfstoff Genesene 35 O/o 23 O/o 11 O/o Gebesserte 20 ovo 3 o/o O o/o Stationäre 40 /o 74 O/o 78 o/o Verschlechterte 0 O/o 0 o/o 11 O/o Rückfälle 5 O/o 0 O/o 0 O/o In den vorerwähnten Tabellen sind die Patienten als genesen zu betrachten, bei denen das Verschwinden der intraplasmatischen Bindehaut-Einschlusskörper nachgewiesen werden kann; jene, die eine Abnahme der Anzahl der oben erwähnten Einschlusskörper zeigen, können als Gebesserte betrachtet werden; jene, die eine Zunahme der Einschlusskörperanzahl zeigen, können als Verschlechterte und die anderen als Stationäre betrachtet werden.
Claims (1)
- PATENTANSPRUCH Verfahren zur Herstellung eines Trachom-Schutzimpfstoffes, dadurch gekennzeichnet, dass infiertes Dottersackgewebe, welches durch Züchtung des Trachom-Virus im Dottersackgewebe von Huhnembryonen erhalten worden ist, mit einer Suspension von Trypsin in einer Phosphatpufferlösung bei einem pH-Wert von 7,5 bis 8 und bei einer Temperatur zwischen 35 bis 40 C versetzt wird, und dass der durch Zentrifugieren abgetrennte aktive Teil mit Kieselgur behandelt, durch Zen brifulgieren abgetrennt und schliesslich mit Äthyläther behandelt wird.UNTERANSPRÜCHE 1. Verfahren nach Patentanspruch, dadurch gekennzeichnet, dass ein Teil des infizierten Dottersackgewebes mit 3 Teilen einer Trypsinsuspension von 100 mg Trypsin in 100 ml Pufferlösung bei pH 7,5-8 versetzt wird.2. Verfahren nach Patentanspruch, dadurch gekenn zeichnet, dass Kieselgur in einer Menge von 2in/100 mi infizierten Dottersackgewebes zugefügt wird.3. Verfahren nach Patentanspruch, dadurch gekennzeichnet, dass Äthyläther in der gleichen Menge wie die Suspension vom aktiven Teil zugesetzt wird.
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