Verfahren zur Herstellung von neuen Alkaloiden mit Karbinolamidstruktur Im Hauptpatent wurde ein neues Verfahren zur Her stellung von Alkaloidderivaten von Lysergsäure bean sprucht, und zwar durch eine gubmerse Kultur von viru lenten Stämmen F-140. F-S 13/1, F-237, F-240 oder ihren Mutanten von Claviceps paspali Stevens und Hall.
Es wurde nun gefunden, dass man, wenn man das Verfahren nach den im Hauptpatent beschriebenen Be dingungen durchführt, eine Mischung von Alkaloiden erhält, welche hauptsächlich aus D-Lysergsäureamidund D-Isolysergsäureamid besteht.
Es wurde nun weiter fest gestellt, dass wenn man nach Abtrennen des Mycels die Extraktion der Kulturbrühe unter besonderen Bedin gungen von Temperatur und pH durchführt, man haupt sächlich zwei neue Alkaloidderivate von D-Lysergsäure und D=Isolysergsäure mit einer Karbinolamidstruktur erhält.
Das vorliegende Zusatzpatent bezieht sich daher auf ein Verfahren zur Herstellung von zwei neuen Deri vaten von D-Lysergs:äure und D-Isolysergsäure und ist dadurch gekennzeichnet, dass eine Submersgärung mit den aus Claviceps paspali Stevens und Hall erhaltenen neuen virulenten Stämmen F-140, F-S- 13/1, F-237, F-240 oder ihren Mutanten hinterlegt im Istituto Su- periore di Santä, Rom,
unter aeroben Bedingungen und in einem anorganische Salze, Stickstoffquellen und Koh lehydrate enthaltenden wässrigen Medium durchgeführt wird, dass das Mycel von der Gährbrühe abgetrennt wird, das Filtrat auf eine Temperatur von 0 bis 10 C und pH von 7 bis 9 eingestellt wird und die Alkaloide daraus mittels eines mit Wasser unmischbaren, auf 0 bis 10 C gekühlten organischen Lösungsmittels extrahiert wer den, und die ausgezogenen Alkaloide durch mehrmali ges Überführen,
bei einer Temperatur zwischen 0 und 10 C aus dem organischen Lösungsmittel in eine wäss- rige saure Phase und umgekehrt aus dieser in das be sagte organische Lösungsmittel, durch Einstellen des pH-Wertes der wässrigen Phase vor der Extraktion mit dem organischen Lösungsmittel zwischen 7 und 9 weiter gereinigt werden, und dass schliesslich die Alkaloide als solche isoliert und abgetrennt werden.
Eine bevorzugte Ausführungsform des erfindungs gemässen Verfahrens wird wie folgt durchgeführt: Die Kulturbrühen, welche ungefähr 500 bis 1500 y/ml Alkaloide (kalorimetrisch als Ergometrin be stimmt) enthalten, die durch Fermentation in submerser Kultur mit virulenten Stämmen F-140, F-S 13/1, F-237, F-240 von Claviceps paspali Stevens et Hall oder ihren Mutanten unter aeroben Bedingungen und in einem anor ganische Salze, Stickstoffquellen und Kohlehydrate enthal tenden wässrigen Medium, wie im Stammpatent beschrie ben, erhalten.
wurden, werden vom Mycel abgetrennt, auf einen Temperaturbereich von 0 bis +10 C, vorzugs weise +5 C abgekühlt und der pH-Wert wird durch Zusatz von Alkalikarbonaten oder -bikarbonaten wie Natrium- oder Kaliumkarbonat oder -bikarbonat, auf einen Wert zwischen 7 und 9, vorzugsweise 8, einge stellt. Die Extraktion der Alkaloide wird mit einem auf 0 bis +10 C gekühlten, mit Wasser unmischbaren orga nischen Lösungsmittel durchgeführt, wie beispielsweise Chloroform oder n-Butanol oder eine Mischung hievon, oder Äther bzw.
Benzol oder Äthylazetat oder Amyl- azetat.
Hierauf werden die Alkaloide konzentriert und durch mehrmaliges Überführen (3- bis 4mal) aus dem organi; sehen Lösungsmittel in eine wässrige saure Phase wie beispielsweise eine wässrige 0,1-molare Weinsäurelösung gereinigt, und umgekehrt aus der wässrigsauren Phase zum organischen Lösungsmittel; der pH-Wert der wäss- rigen Phase wird vor der Extraktion mit einem organi schen Lösungsmittel auf einen Wert zwischen 7 und 9 eingestellt. Man verfährt dabei immer bei der Tempera tur zwischen 0 und +10 C.
Die neuen Alkaloidderivate von D-Lysergsäure wer den mit Vorteil durch Kristallisation aus dem Extrak tionslösungsmittel erhalten, während das isomere Deri vat D-Isolysergsäure in geringen Mengen aus den Mut terlaugen gewonnen wird. Die neuen Alkaloide können auch durch Herstellung ihrer Maleate in ätherischer Lösung und Ausfällung .und darauffolgende fraktionierte Kristallisation oder durch ein äquivalentes Reinigungs verfahren isoliert werden.
Das erfindungsgemässe Verfahren ist auch insofern günstig, da hauptsächlich das Derivat von D-Lysergsäurc erhalten wird und dabei die Bildung des Derivats von D-Isolysergsäure zurückgedrängt wird, welches bekannt lich vom pharmakologischen Gesichtspunkt aus weniger interessant .ist als. das entsprechende Isomere von D- Lysergsäure.
Die beiden neuen Alkaloide, welche gemäss der vor liegenden Erfindung hergestellt werden, haben die em pirische Formel CigH2tO#_,N3 und bei Umsatz mit Ma leinsäure in Äther haben die entsprechenden Maleate die empirische Formel C32Is5OoNg.
Bei saurer oder alkalischer Hydrolyse wird Acet- aldehyd erhalten, welcher sowohl qualitativ als auch quantitativ durch Bildung des Dinitrophenylhydrazons nachgewiesen werden kann und es werden weiter D- Lysergsäureamid oder D-Isolysergsäureamid gebildet, welche aus der Reaktionsmischung isoliert werden können.
Durch alkalische Hydrolyse nach Smith und Timmis (J. Chem. Soc. 1936, Seite 1440) wird D-Lysergsäure oder D-Isolysergsäure erhalten.
Die neuen Alkaloidderivate von D-Isolysergsäure können auch aus dem isomeren Derivat von D-Isoly- sergsäure und vice versa durch das bekannte Isomerisa- tionsverfahren der Literatur (Smith and Timmis, J. Chem. Soc. 1936, Seite 1166) in saurer Lösung erhal ten werden.
Die UV-Spektren sind identisch mit denen von an deren Derivaten von D-Lysergsäure .und D-Isolyserg- säure bei<I>242</I> m,cc und 312 mu).
In der folgenden Tabelle sind andere physikoche mische Eigenschaften der neuen Produkte, welche gemäss der vorliegenden Erfindung erhalten werden, angeführt.
EMI0002.0045
<I>Tabelle</I>
<tb> Eigenschaften <SEP> Derivate <SEP> von <SEP> D-Lysergsäure <SEP> Derivate <SEP> von <SEP> D-Isolysergsäure
<tb> Schmelzpunkt <SEP> 135 <SEP> C <SEP> (beginnende <SEP> Zersetzung) <SEP> 70 <SEP> C <SEP> (beginnende <SEP> Zersetzung)
<tb> Schmelzpunkt <SEP> von <SEP> Maleat <SEP> l50 <SEP> C <SEP> (Zersetzung) <SEP> [a] <SEP> p <SEP> (1 <SEP> 0 <SEP> in <SEP> Dimethylformamid) <SEP> <B>+291</B> <SEP> <SEP> 2 <SEP> Löslichkeit <SEP> löslich <SEP> in <SEP> niederen <SEP> Alkoholen, <SEP> Di- <SEP> löslich <SEP> in <SEP> niederen <SEP> Alkoholen, <SEP> Pyridin,
<tb> methylformamid, <SEP> Pyridin;
<SEP> wenig <SEP> lös- <SEP> Chloroform, <SEP> Aceton, <SEP> Äthylacetat, <SEP> Di lich <SEP> in <SEP> kaltem <SEP> Chloroform, <SEP> Äther, <SEP> methylformamid; <SEP> wenig <SEP> löslich <SEP> in <SEP> Äther,
<tb> Benzol, <SEP> Wasser; <SEP> unlöslich <SEP> in <SEP> Petrol- <SEP> Benzol, <SEP> Wasser
<tb> äther
<tb> Rf <SEP> (Butanol-Essigsäure-Wasser
<tb> 4 <SEP> : <SEP> 1 <SEP> <B><I>:5)</I></B> <SEP> 0,64-0,70 <SEP> 0,73-0,77
<tb> RE <SEP> =
<tb> <U>Rf <SEP> neues <SEP> Alkaloid</U> <SEP> 0,97 <SEP> 1,10
<tb> Rf <SEP> Ergometrin
<tb> I. <SEP> R. <SEP> Spektrum
<tb> deutliche <SEP> Maxima <SEP> (in <SEP> ,u) <SEP> 2,94; <SEP> 3,03; <SEP> 5,99; <SEP> 6,55; <SEP> 6,88; <SEP> 3,05; <SEP> 3,41; <SEP> 6,02; <SEP> 6,52; <SEP> 6,89;
<tb> 8,85; <SEP> 12,76; <SEP> 13,31; <SEP> 7,27; <SEP> 7,44; <SEP> 7,72; <SEP> 7,91; <SEP> 9,22;
<tb> 12,42; <SEP> 12,81;
<SEP> 13,32;
<tb> weniger <SEP> deutliche <SEP> Maxima <SEP> 3,29; <SEP> 3,42; <SEP> 3,52; <SEP> 3,60; <SEP> 7,25; <SEP> 3,28; <SEP> 3,51; <SEP> 3,57; <SEP> 5,81; <SEP> 8,11;
<tb> (in <SEP> ,u) <SEP> 7,43; <SEP> 7,57; <SEP> 7,72; <SEP> 8,10; <SEP> 8,15; <SEP> 8,22; <SEP> 8,58; <SEP> 9,48; <SEP> 9,60; <SEP> 10,12;
<tb> 8,58; <SEP> 9,23; <SEP> 9,56; <SEP> 10,02; <SEP> 10,69; <SEP> 10,78; <SEP> 11,5; <SEP> 11,89; <SEP> 14,39;
<tb> 11,46;
<tb> Wendepunkte <SEP> (in <SEP> ,u) <SEP> 6,08; <SEP> 7,84; <SEP> 8,31; <SEP> 8,98; <SEP> 13,55; <SEP> 6,23; <SEP> 8,77; Auf Grund des chemischen Verhaltens der beiden neuen Produkte, welche gemäss der vorliegenden Erfin dung hergestellt werden können, wird folgende chemi sche Strukturformel dieser Substanzen angenommen:
EMI0002.0046
Dies bedeutet, dass das erste Alkaloid ein Derivat von D-Lysergsäure und das zweite ein Derivat von D-Isolysergs:äure ist.
Die beiden neuen Alkaloide, insbesondere das Deri vat von D -Lysergsäure, zeigen eine gute pharmako@lb,- gische Wirksamkeit als oxytocische Substanzen und sind natürlich, als Zwischensubstanzen für die Herstellung von D-Lysergsäure nach den in der Literatur bekannten Verfahren.
Beispiel 1 illustriert als Vergleich die Verfahrens bedingungen, gemäss welchen die Amide von D-Lyserg- säure erhalten werden, und Beispiel 2 gibt die Einzel- heiten an, um die beiden Alkaloide gemäss der vorlie genden Erfindung zu erhalten.
<I>Beispiel 1</I> 23 1 einer Fermentationsbrühe, erhalten wie im Stammpatent beschrieben ,und mit einem Gehalt von 800 y pro, ml Alkaloide (kolorimetrisch als Ergometrin bestimmt) werden vom Mycel abfiltriert und der pH- Wert wird mit einer wässrigen verdünnten Lösung von Natriumhydroxyd auf 8 eingestellt.
Die Alkaloide wer den bei Raumtemperatur mit einer Chloroform n-Buta- nol-Mischiung 4 : 1 extrahiert, dann werden die Alkaloide aus dem organischen Extrakt mittels einer wässrigen Lö sung verdünnter (1 : 100) Schwefelsäure extrahiert. Der saure wässrige Extrakt wird auf einen pH-Wert von 8 alkalisch gemacht und 2mal mit 1500 ml Chloroform extrahiert. Der Chloroformextrakt wird über Natrium sulfat getrocknet und unter Vakuum auf ungefähr 600 ml eingeengt.
Beim Abkühlen werden 3,07 g D-Lyserg- säureamid (Fp. = 240 C aus. wässrigem Azeton) .er halten. Die Mutterlaugen werden weiter konzentriert und der Rückstand wird mit Petroläther behandelt. Der Nie derschlag wird abfiltriert, getrocknet .und mit Chloro form extrahiert. Das D-Isolysergsäureamid wird so er halten (Fp. = 120 bis 130 C unter Zersetzung aus Methanol).
Das in Chloroform unlösliche Produkt be steht aus einer Mischung von D-Lysergsäureamid und geringen Mengen der beiden neuen Alkaloide, herge stellt gemäss der vorliegenden Erfindung, welche nur sehr schwierig durch fraktionierte Kristallisation oder andere Verfahren, wie sie industriell leicht angewandt werden können, als reine Produkte isolierbar sind.
<I>Beispiel 2</I> 460 ml einer vom Mycel abfiltrierten Kulturbrühe erhalten gemäss dem im Stammpatent beschriebenen Verfahren mit einem Gehalt von 450 y pro ml Alka loide (kolorimetrisch als Ergometrin bestimmt) werden auf +5 C abgekühlt .und der pH-Wert wird durch Zusatz von Natriumbikarbonat auf 8 eingestellt. Die Alkaloide werden mit Chloroform, welches auf +2 bis +50c gekühlt wurde (ungefähr 500 ml) extrahiert.
Der Chloroformextrakt wird dann mit 50- ml wässriger 0,1-molarer Weinsäurelösung extrahiert. Hierauf wird das pH der wässrigen Lösung vor der Extraktion mit organischem Lösungsmittel auf einen Wert zwischen 7 und 9 gebracht .und bei einer Temperatur zwischen 0 und + 10 C wiederum mit Chloroform ausgeschüttelt. Dieser Vorgang (Ausschütteln mit Weinsäurelösung ,und Chloroform) wird 3- bis, 4mal wiederholt, wobei schliess- lich ein Chloroformextrakt (ungefähr 20 ml) erhalten wird.
Nach Abkühlen des Extraktes auf 0 C werden 18 mg des neuen. Derivats. von D-Lysergsäure erhalten (Fp. = 135 C unter Zersetzung [a] D = +29 2 (1 in Dimethylformamid) bei 242 m,u und 312 mu. Infrarotspektrum siehe Fig. 1. Empirische Formel Ci3H2,02N3).
Aus der Mutterlauge können durch Konzentrieren un- terVakuum,Filtrieren de:s.Niederschlages, darauffolgende fraktionierte Kristallisation, geringe Mengen des neuen Derivats D-Isolysergsäure erhalten werden (Fp. = 70 C, bei 242 mu und 312 mu, Infrarotspektrum siehe Fig. 2.
Empirische Formel C18H2102N3). Die beiden neuen Alkaloide ergeben, wenn sie in Methanol gelöst und mit Maleinsäure in Äther umge setzt werden, die entsprechenden Maleate mit der em pirischen Formel C22H2506N3.
Die beiden neuen Alkaloide können auch über ihre Maleate, hergestellt mit Malcinsäure in ätherischer Lö sung, und darauffolgende fraktionierte Kristallisation isoliert werden.
Jede der beiden Verbindungen kann in eine Mi schung im Gleichgewicht der beiden isomeren Formen übergeführt werden, aus welcher beide Formen isoliert werden können:, und zwar, wenn man im sauren; Bereich arbeitet, beispielsweise in 10%iger wässriger Essigsäure bei 80 C während 1 Std., worauf bei niedriger Tempera tur alkalisch gemacht, dann mit Chloroform extrahiert, schliesslich fraktioniert kristallisiert wird.
Process for the production of new alkaloids with carbinolamide structure In the main patent, a new process for the production of alkaloid derivatives of lysergic acid was claimed, through a gubmer culture of virulent strains F-140. F-S 13/1, F-237, F-240 or their mutants from Claviceps paspali Stevens and Hall.
It has now been found that if the process is carried out according to the conditions described in the main patent, a mixture of alkaloids is obtained which consists mainly of D-lysergic acid amide and D-isolysergic acid amide.
It has now also been found that if, after separating the mycelium, the extraction of the culture broth is carried out under special conditions of temperature and pH, two new alkaloid derivatives of D-lysergic acid and D = isolysergic acid with a carbinolamide structure are mainly obtained.
The present additional patent therefore relates to a process for the production of two new derivatives of D-lysergic acid: acid and D-isolysergic acid and is characterized in that a submerged fermentation with the new virulent strains F-140 obtained from Claviceps paspali Stevens and Hall, FS- 13/1, F-237, F-240 or their mutants deposited in the Istituto Superiore di Santä, Rome,
under aerobic conditions and in an aqueous medium containing inorganic salts, nitrogen sources and carbon hydrates, the mycelium is separated from the fermentation broth, the filtrate is adjusted to a temperature of 0 to 10 C and pH of 7 to 9 and the alkaloids are removed from it extracted by means of a water-immiscible organic solvent cooled to 0 to 10 C, and the extracted alkaloids by repeated transfer,
at a temperature between 0 and 10 C from the organic solvent into an aqueous acidic phase and vice versa from this into the said organic solvent, by adjusting the pH of the aqueous phase to between 7 and 9 before extraction with the organic solvent are further purified, and that finally the alkaloids are isolated and separated as such.
A preferred embodiment of the process according to the invention is carried out as follows: The culture broths, which contain approximately 500 to 1500 y / ml alkaloids (calorimetrically determined as ergometrine), which are obtained by fermentation in submerged culture with virulent strains F-140, FS 13/1 , F-237, F-240 from Claviceps paspali Stevens et Hall or their mutants under aerobic conditions and in an aqueous medium containing inorganic salts, nitrogen sources and carbohydrates, as described in the parent patent.
are separated from the mycelium, cooled to a temperature range of 0 to +10 C, preferably +5 C, and the pH is adjusted to a value between 7 by adding alkali carbonates or bicarbonates such as sodium or potassium carbonate or bicarbonate and 9, preferably 8, is set. The extraction of the alkaloids is carried out with a water-immiscible organic solvent, cooled to 0 to +10 C, such as chloroform or n-butanol or a mixture thereof, or ether or
Benzene or ethyl acetate or amyl acetate.
Then the alkaloids are concentrated and by repeated transfer (3 to 4 times) from the organi; see solvents in an aqueous acidic phase such as an aqueous 0.1 molar tartaric acid solution purified, and vice versa from the aqueous acidic phase to the organic solvent; the pH of the aqueous phase is adjusted to a value between 7 and 9 with an organic solvent prior to extraction. You always work at a temperature between 0 and +10 C.
The new alkaloid derivatives of D-lysergic acid who advantageously obtained by crystallization from the extraction solvent, while the isomeric derivative D-isolysergic acid is obtained in small amounts from the mother liquors. The new alkaloids can also be isolated by producing their maleates in an ethereal solution and by precipitation and subsequent fractional crystallization or by an equivalent purification process.
The process according to the invention is also advantageous in that it is mainly the derivative of D-lysergic acid that is obtained and the formation of the derivative of D-isolysergic acid is suppressed, which is known to be less interesting from the pharmacological point of view than. the corresponding isomer of D-lysergic acid.
The two new alkaloids, which are produced according to the present invention, have the empirical formula CigH2tO #_, N3 and when converted with maleic acid in ether, the corresponding maleates have the empirical formula C32Is5OoNg.
Acetic or alkaline hydrolysis gives acetaldehyde, which can be detected both qualitatively and quantitatively by the formation of dinitrophenylhydrazone, and D-lysergic acid amide or D-isolysergic acid amide are also formed, which can be isolated from the reaction mixture.
D-lysergic acid or D-isolysergic acid is obtained by alkaline hydrolysis according to Smith and Timmis (J. Chem. Soc. 1936, page 1440).
The new alkaloid derivatives of D-isolysergic acid can also be obtained in acidic solution from the isomeric derivative of D-isolysergic acid and vice versa by the known isomerization process in the literature (Smith and Timmis, J. Chem. Soc. 1936, page 1166) will be.
The UV spectra are identical to those of other derivatives of D-lysergic acid and D-isolysergic acid at <I> 242 </I> m, cc and 312 mu).
In the following table, other physico-chemical properties of the new products obtained according to the present invention are listed.
EMI0002.0045
<I> table </I>
<tb> Properties <SEP> derivatives <SEP> of <SEP> D-lysergic acid <SEP> derivatives <SEP> of <SEP> D-isolysergic acid
<tb> Melting point <SEP> 135 <SEP> C <SEP> (beginning <SEP> decomposition) <SEP> 70 <SEP> C <SEP> (beginning <SEP> decomposition)
<tb> Melting point <SEP> of <SEP> maleate <SEP> l50 <SEP> C <SEP> (decomposition) <SEP> [a] <SEP> p <SEP> (1 <SEP> 0 <SEP> in < SEP> dimethylformamide) <SEP> <B> +291 </B> <SEP> <SEP> 2 <SEP> Solubility <SEP> soluble <SEP> in <SEP> lower <SEP> alcohols, <SEP> di- < SEP> soluble <SEP> in <SEP> lower <SEP> alcohols, <SEP> pyridine,
<tb> methylformamide, <SEP> pyridine;
<SEP> little <SEP> soluble <SEP> chloroform, <SEP> acetone, <SEP> ethyl acetate, <SEP> di little <SEP> in <SEP> cold <SEP> chloroform, <SEP> ether, <SEP> methylformamide; <SEP> little <SEP> soluble <SEP> in <SEP> ether,
<tb> benzene, <SEP> water; <SEP> insoluble <SEP> in <SEP> petrol- <SEP> benzene, <SEP> water
<tb> ether
<tb> Rf <SEP> (butanol-acetic acid-water
<tb> 4 <SEP>: <SEP> 1 <SEP> <B><I>:5)</I> </B> <SEP> 0.64-0.70 <SEP> 0.73-0 , 77
<tb> RE <SEP> =
<tb> <U> Rf <SEP> new <SEP> alkaloid </U> <SEP> 0.97 <SEP> 1.10
<tb> Rf <SEP> Ergometer
<tb> I. <SEP> R. <SEP> spectrum
<tb> clear <SEP> maxima <SEP> (in <SEP>, u) <SEP> 2.94; <SEP> 3.03; <SEP> 5.99; <SEP> 6.55; <SEP> 6.88; <SEP> 3.05; <SEP> 3.41; <SEP> 6.02; <SEP> 6.52; <SEP> 6.89;
<tb> 8.85; <SEP> 12.76; <SEP> 13.31; <SEP> 7.27; <SEP> 7.44; <SEP> 7.72; <SEP> 7.91; <SEP> 9.22;
<tb> 12.42; <SEP> 12.81;
<SEP> 13.32;
<tb> less <SEP> clear <SEP> maxima <SEP> 3.29; <SEP> 3.42; <SEP> 3.52; <SEP> 3.60; <SEP> 7.25; <SEP> 3.28; <SEP> 3.51; <SEP> 3.57; <SEP> 5.81; <SEP> 8.11;
<tb> (in <SEP>, u) <SEP> 7.43; <SEP> 7.57; <SEP> 7.72; <SEP> 8.10; <SEP> 8.15; <SEP> 8.22; <SEP> 8.58; <SEP> 9.48; <SEP> 9.60; <SEP> 10.12;
<tb> 8.58; <SEP> 9.23; <SEP> 9.56; <SEP> 10.02; <SEP> 10.69; <SEP> 10.78; <SEP> 11.5; <SEP> 11.89; <SEP> 14.39;
<tb> 11.46;
<tb> Turning points <SEP> (in <SEP>, u) <SEP> 6.08; <SEP> 7.84; <SEP> 8.31; <SEP> 8.98; <SEP> 13.55; <SEP> 6.23; <SEP> 8.77; Due to the chemical behavior of the two new products, which can be manufactured according to the present invention, the following chemical structural formula of these substances is assumed:
EMI0002.0046
This means that the first alkaloid is a derivative of D-lysergic acid and the second is a derivative of D-isolysergic acid.
The two new alkaloids, in particular the derivative of D-lysergic acid, show good pharmacological effectiveness as oxytocic substances and are natural as intermediate substances for the production of D-lysergic acid according to the processes known in the literature.
Example 1 illustrates, as a comparison, the process conditions according to which the amides of D-lysergic acid are obtained, and example 2 gives the details to obtain the two alkaloids according to the present invention.
<I> Example 1 </I> 23 1 of a fermentation broth, obtained as described in the parent patent, and with a content of 800 y per, ml of alkaloids (determined colorimetrically as ergometrine) are filtered off from the mycelium and the pH is adjusted with an aqueous diluted solution of sodium hydroxide adjusted to 8.
The alkaloids are extracted at room temperature with a 4: 1 chloroform-n-butanol mixture, then the alkaloids are extracted from the organic extract using an aqueous solution of dilute (1: 100) sulfuric acid. The acidic aqueous extract is made alkaline to pH 8 and extracted twice with 1500 ml of chloroform. The chloroform extract is dried over sodium sulfate and concentrated in vacuo to approximately 600 ml.
On cooling, 3.07 g of D-lysergic acid amide (melting point = 240 ° C. from aqueous acetone) are retained. The mother liquors are concentrated further and the residue is treated with petroleum ether. The precipitate is filtered off, dried and extracted with chloroform. The D-isolysergic acid amide is kept in this way (melting point = 120 to 130 ° C. with decomposition from methanol).
The product, which is insoluble in chloroform, consists of a mixture of D-lysergic acid amide and small amounts of the two new alkaloids, produced according to the present invention, which are very difficult to obtain pure by fractional crystallization or other processes that can easily be used industrially Products are isolatable.
<I> Example 2 </I> 460 ml of a culture broth filtered off from the mycelium obtained according to the method described in the parent patent with a content of 450 y per ml of alkaloids (determined colorimetrically as ergometrine) are cooled to +5 C. and the pH The value is adjusted to 8 by adding sodium bicarbonate. The alkaloids are extracted with chloroform which has been cooled to +2 to + 50c (approx. 500 ml).
The chloroform extract is then extracted with 50 ml of 0.1 molar aqueous tartaric acid solution. The pH of the aqueous solution is then brought to a value between 7 and 9 with organic solvent before the extraction and again extracted with chloroform at a temperature between 0 and + 10 ° C. This process (shaking with tartaric acid solution and chloroform) is repeated 3 to 4 times, a chloroform extract (approx. 20 ml) being finally obtained.
After cooling the extract to 0 C, 18 mg of the new. Derivative. obtained from D-lysergic acid (melting point = 135 C with decomposition [a] D = +29 2 (1 in dimethylformamide) at 242 m, u and 312 mu. For infrared spectrum, see FIG. 1. Empirical formula Ci3H2,02N3).
Small amounts of the new derivative D-isolysergic acid can be obtained from the mother liquor by concentrating under vacuum, filtering the precipitate, subsequent fractional crystallization (melting point = 70 ° C., at 242 μm and 312 μm, infrared spectrum see FIG. 2 .
Empirical formula C18H2102N3). The two new alkaloids, when dissolved in methanol and reacted with maleic acid in ether, produce the corresponding maleates with the empirical formula C22H2506N3.
The two new alkaloids can also be isolated via their maleates, produced with malcic acid in an ethereal solution, and subsequent fractional crystallization.
Each of the two compounds can be converted into a mixture in equilibrium of the two isomeric forms, from which both forms can be isolated:, namely, if one in the acidic; Range works, for example, in 10% aqueous acetic acid at 80 C for 1 hour, whereupon it is made alkaline at low tempera ture, then extracted with chloroform, and finally fractionally crystallized.