CH518922A

CH518922A - Procédé de synthèse de stéroïdes

Info

Publication number: CH518922A
Application number: CH1053670A
Authority: CH
Inventors: David Seymour; Andrew Diassi Patrick; Anthony Principe Pacifico
Original assignee: Squibb & Sons Inc
Priority date: 1970-07-10
Filing date: 1970-07-10
Publication date: 1972-02-15

Description


  
 



  Procédé de synthèse de stéroïdes
 La présente invention a pour objet un procédé de préparation de nouvelles   9a-halogéno-l lp-hydroxy-A8-A-      norandrostène-2,17-diones    de formule
EMI1.1     
 dans laquelle X est un atome d'halogène, caractérisé en ce qu'on soumet une   9a-halogéno-l l-hydroxy-A-nor-    progestérone à l'action   d'un    micro-organisme du genre fusarium ou de ses enzymes.



   Les composés de formule ci-dessus peuvent être utilisés pour la préparation, par traitement avec un agent réducteur, des 9a   -      halogéno -ss3 -A-      norandrostène-2ss, 11      ss,   
   17P-triols    correspondants.



   En outre, les composés de formule ci-dessus, ainsi que leurs produits de réduction, peuvent être transformés en leurs dérivés. 11ss-acyloxy, repsectivement 11ss-hydroxy2ss,17ss-diacyloxy ou 2ss,11ss,17ss-triacyloxy, par réaction avec un agent acylant.



   Les groupes acyles et acyloxy préférés sont ceux des acides hydrocarbonocarboxyliques ayant moins que 12 atomes de carbone, par exemple les acides alca   niques    inférieurs (par exemple l'acide acétique, propionique, butyrique ou tert.-pentanoïque), les acides alcé   noïques    inférieurs, les acides arylcarboxyliques monocycliques (par exemple l'acide benzoïque ou toluique), les acides arylalcanoïques inférieurs monocycliques (par exemple l'acide phénacétique ou   B-phénylpropionique),    les acides cycloalcanes carboxyliques et les acides cycloalcènes carboxyliques.



   Les nouveaux composés de la présente invention sont des substances pharmacologiquement actives qui possèdent une activité anti-androgène (c'est-à-dire qu'ils inhibent l'action des androgènes), et qu'on peut utiliser pour le traitement d'états tels que l'acné hyperandrogène.



   On peut mettre en composition les composés pour une telle administration, la concentration et/ou le dosage étant basés sur l'activité du composé particulier et les besoins du patient.



   Pour mettre en   oeuvre    le procédé selon la présente invention, on soumet la matière de départ à l'action des enzymes d'un micro-organisme du genre fusarium dans des conditions d'oxydation. La meilleure manière de conduire cette oxydation est soit d'introduire le réactif de départ dans une culture aérobie du micro-organisme, soit en réunissant dans un milieu aqueux les composés, l'air et des enzymes de cellule du micro-organisme qui ne sont pas en voie de prolifération.



   En général, les conditions de culture du micro-organisme pour les buts de la présente invention sont (à part l'inclusion du réactif de départ à convertir) les mêmes que celles pour la culture de divers autres micro-organismes pour la préparation d'antibiotiques et substances analogues. On cultive le micro-organisme dans un milieu aérobie, en contact avec (dans ou sur) un milieu de fermentation approprié. Un milieu approprié comprend essentiellement une source de carbone et d'énergie. Cette dernière peut être un hydrate de carbone, par exemple la mélasse, le glucose, le maltose, l'amidon ou la dextrine, un acide gras, une graisse et/ou le composé luimème. Cependant, de préférence, le milieu inclut une source de carbone assimilable et d'énergie en plus du stéroïde.

  Parmi les graisses qu'on peut utiliser pour le  but de la présente invention, on peut citer l'huile de saindoux, l'huile de soya, l'huile de lin, l'huile de graines de coton, l'huile d'arachide, I'huile de noix - de coco, l'huile de mais, l'huile de ricin, l'huile de sésame, I'huile de palme brute, le suif de mouton   fantaisie   (fancy),
I'huile de baleine, l'huile d'olive, la tristéarine, la tripalmitine, la tri-oléine et la trilaurine. Parmi les acides gras qu'on peut utiliser pour le but de la présente invention, on peut citer l'acide stéarique, l'acide palmitique, l'acide oléique, l'acide linoléique et l'acide myristique.



   La source de facteur azoté pouvant être utilisée pour les buts de la présente invention peut être organique (par exemple la farine de graines de soya, la liqueur   cornsteep  , l'extrait de levure, l'extrait de viande et/ou des produits solubles de distillerie) ou synthétiques (c'està-dire composés de composés organiques ou inorganiques synthétisables simples, tels que les sels d'ammonium, des nitrates d'alcali, des amino-acides ou l'urée).



   Pendant la fermentation on doit maintenir une source d'air stérile adéquate, par exemple par des méthodes classiques d'exposition d'une grande surface du milieu à l'air ou par l'utilisation d'une culture aérée submergée.



  On peut ajouter le composé à la culture pendant la période d'incubation, ou l'introduire dans le milieu avant la stérilisation ou l'inoculation. La concentration préférée (mais non limitée) du composé dans la culture est d'environ 0,01 % à environ 0,1 %. Le temps de culture (ou plutôt le temps pendant lequel on soumet le composé à l'action de l'enzyme) peut varier beaucoup, la gamme pouvant être de 24 à 96 heures, mais pas forcément dans ces limites.



   On peut utiliser les   9cr-halogéno-11B-hydroxy-113-A-    norandrostène-2,17-diones de l'invention, non seulement pour leur activité anti-androgène, mais comme produits intermédiaires pour la préparation des   9a-halogéno-A8-      A-norandroslène-2B.1Ig,l7B-trioles    qui sont utiles comme agents anaboliques.



   En faisant réagir la   9a-halogéno-llp-hydroxy-A3-A-    norandrostène-2,17-dione avec un agent réducteur, par exemple le   borohydrure    de sodium à haute température, on isole le   9u-halogénotriol.    On peut acyler ce composé en utilisant un anhydride d'acide et une base organique, par exemple l'anhydride acétique et la pyridine pour obtenir les dérivés 2,17-di-acyloxy de l'invention. Lorsqu'on utilise des conditions d'acylation plus fortes, par exemple un anhydride d'acide et l'acide perchlorique, etc., on obtient les dérivés   2,11, 17-triacyloxy.   



   L'exemple suivant illustre l'invention; toutes les températures sont en degrés centigrades sauf indication contraire.



  Exemple:    9 -fluoro-ll p-hydroxy-A3-A-   
 norandrostène-2, 17-dione
 A) Fermentation: la croissance de surface de chacune de deux cultures obliques sur agar-agar de deux semaines de fusarium javanicum var. ensiforme (QM524) (Army Quatermaster, Natick, Mass.). On met en suspension les cultures obliques contenant comme milieu nutritif   A)   
 Glucose . 10 grammes
 Extrait de levure - 2,5 grammes
 K2HPO4 1 gramme
 Eau distillée jusqu'à @ 1 litre dans   5 mi    de solution aqueuse de sulfate de sodiumlauryle à 0,01 %.

  On utilise des portions de 1   ml    de cette suspension pour inoculer six flacons   Erlenmeyer    de 250   ml    contenant chacun   50ml    du milieu stérilisé B):
 Dextrose - 10 grammes
 Liqueur   cornsteep   6 grammes
 NH4H2PO4 - 3 grammes
 Extrait de   levure    2,5 grammes
 CaCO3 2,5 grammes
 Eau distillée   jusqu'à.    1 litre
 Après 72 heures d'incubation à 250 C avec une agitation rotative continue (280 tours/minute; rayon de 51 mm), on effectue des transferts de 10 % (volume/ volume) dans 34 flacons   Erlenmeyer    de 250   ml    contenant 50   ml    du milieu B fraîchement stérilisé plus 300 micro-grammes/ml de   9&alpha;-fluoro-11ss-hydroxy-Ä-nonprogres-    térone.

  On ajoute le stéroïde en ajoutant à chaque flacon   0,25 mi    d'une solution stérile   (60 mg/ml)    du stéroïde dans le   N,N-diméthylformamide.    On fermente au total 510 mg.



   Après encore 72 heures d'incubation, en utilisant les conditions décrites ci-dessus, on réunit les contenus des flacons et filtre le bouillon à travers un tampon clarificateur   Seitz  . On lave les flacons, le mycélium et le tampon avec des portions successives de   50ml    d'eau chaude. Le filtrat et les eaux de lavage réunis ont un volume de   2000 mi.   



   B) Isolement: on extrait le filtrat ainsi obtenu trois fois avec des portions de 600   ml    de chloroforme. On lave les extraits chloroformiques trois fois avec des portions de 600   ml    d'eau, les sèche sur du sulfate de sodium et les évapore à sec. Après avoir cristallisé le résidu dans un mélange d'acétone et d'isopropyléther, on obtient 254 mg de   9 -fluoro-ll,8-hydroxy-A3-A-norandrostène-2,17-dione    qui fond à 243-2440 C.



   On décrit dans les préparations ci-après comment les composés obtenus par le procédé selon l'invention peuvent être acylés et réduits.



  A.   9&alpha;-fluoro-11ss-acétoxy-# -A-norandrostène-   
 2,17-dione
 On ajoute une solution de 0,0033   ml    d'acide perchlorique dans 0,3   ml    d'anhydride acétique à 450 mg de   9 -      fluoro- l l ,3-hydroxy-A3-A-norandrostène-2,17-dione dans      10ml    d'anhydride acétique. On agite le mélange réactionnel à la température ordinaire pendant 0,5 heure puis le verse dans un mélange de glace et d'eau et l'extrait au chloroforme. On lave les extraits chloroformiques avec une solution saturée de bicarbonate de sodium, une solution de sel à 8    /o,    les sèche sir du sulfate de sodium et les évapore à sec pour obtenir la   9&alpha;-fluoro-11ss-acé-      toxy-A3-A-norandrostène-2,17-dione.   

 

  B.   9&alpha;-bromo-11ss-acétoxy-# -A-norandrostène-   
 2,17-dione;    9&alpha;-chloro-11ss-acétoxy-# -A-norandrostène-   
 2,17-dione
 En procédant comme dans A mais en substituant la   9 -bromo-1 lss-hydroxy-A3-A-norandrostène-2,17-dione    et la   9 -chloro-11,3-hydroxy-A3-A-norandrostène-2,17-    dione à la   9&alpha;-fluoro-11ss-hydroxy-# -A-norandrostène-      2, 17-dione,    on obtient la   9&alpha;-bromo-11ss-acétoxy-# -A-    norandrostène-2,17-dione et la   9a- chloro -11(3 -acétoxy-      # -A-norandrostène-2,17-dione.     



  C.   9&alpha;-fluoro-# -A-norandrostène-2ss,11ss,17ss-triol   
 On chauffe au reflux pendant 16 heures un mélange de 100 mg de   9&alpha;-fluoro-11ss-hydroxy-# -A-norandrostène-    2,17-dione et   150mg    de borohydrure de sodium dans 2   ml    d'une solution d'hydroxyde de sodium 2 N et 25   ml    de méthanol, le verse dans l'eau, l'acidifie et l'extrait au chloroforme. On lave les extraits chloroformiques avec une solution de sel à 8    /o,    les sèche sur du sulfate de sodium et les évapore à sec. Après avoir cristallisé le résidu dans de l'acétate d'éthyle, on obtient   20mg    de   9&alpha;-fluoro-# -A-norandrostène-2ss,11ss,17ss-triol    qui fond à 200-2010 C.

  On obtient l'échantillon analytique par recristallisation dans de l'acétate d'éthyle, il fond à 2072080 C et a un   #d2DMSOTMS    = 9,13 (s, 18-Me), 8,63 (s, 19-Me) et 4,72 (s, 3-H).



   Analyse:
 Calculé pour C18H27O3F (310,40):
 C = 69,65; H = 8,77
 Trouvé:   C = 69,69;    H = 8,79
D. 2,17-diacétate de   9 -fluoro-A3-A-norandrostène-   
 2ss,11ss,17ss-triol
 En procédant comme dans A mais en substituant le   9&alpha;-fluoro-# -A-norandrostène-2ss,11ss,17ss-triol    à la 9a   fluoro-11ss-hydroxy-# -A-norandrostène-2,17-dione,    on obtient le 2,17-diacétate de   9&alpha;-fluoro-# -A-norandro-    stène-2ss,11ss,17ss-triol.

 

  E.   2,11,17-triacétate    de   9a-fluoro-A3-A-norandrostène-   
 2ss,11ss,17ss-triol
 En procédant comme dans A mais en substituant le   9&alpha;-fluoro-# -A-norandrostène-2ss,11ss,17ss-triol    ou le 2,17-diacétate de   9&alpha;-fluoro-# -A-norandrostène-2ss,11ss,    17ss-triol à la   9&alpha;-fluoro-# -A-norandrostène-    2,17-dione, on obtient le 2,11,17-triacétate de 9 -fluoro   # -A-norandrostène-2ss,11ss,17ss-triol.

Claims

REVENDICATIONS

I. Procédé de préparation de 9α-halogéno-11ss-hy- droxy-# -A-norandrostène-2,17-diones de formule EMI3.1 dans laquelle X est un atome d'halogène, caractérisé en ce qu'on soumet une 9 -halogéno-llss-hydroxy-A-nor- progestérone à l'action d'un micro-organisme du genre fusarium ou de ses enzymes.

II. Utilisation des composés préparés conformément au procédé selon la revendication I pour la préparation, par réduction, des 9α-halogéno-# -A-norandrostène-2ss, 11ss,17ss-triols correspondants.

SOUS-REVENDICATIONS 1. Procédé selon la revendication I, caractérisé en ce que le micro-organisme est fusarium javanicum var. ensiforme.

2. Procédé selon la revendication I ou la sous-revendication I, caractérisé en ce que le produit obtenu est la 9α-bromo-11ss-hydroxy-# -A-norandrostène-2,17-dione.

3. Procédé selon la revendication I ou la sous-revendication 1, caractérisé en ce que le produit obtenu est la 9α-fluoro-11ss-hydroxy-# -A-norandrostène-2,17-dione.

4. Procédé selon la revendication I ou la sous-revendication 1, caractérisé en ce que le produit obtenu est la 9α-chloro-11ss-hydroxy-# -A-norandrostène-2,17-dione.

5. Procédé selon la revendication I ou la sous-revendication 1, caractérisé en ce que l'on transforme le com posé obtenu en son dérivé il lss-acyloxy en le faisant réagir avec un agent acylant.

6. Procédé selon la sous-revendication 5, caractérisé en ce que le produit obtenu est la 9α-fluoro-11ss-acétoxy- A3-A-norandrostène-2,17-dione.

7. Procédé selon la sous-revendication 5, caractérisé en ce que le produit obtenu est la 9α-bromo-11ss-acétoxy- # -A-norandrostène-2,17-dione ou la 9a- chloro-11(3- acétoxy-# -A-norandrostène-2,17-dione.

8. Utilisation selon la revendication II, caractérisée en ce que le produit obtenu est le 9-fαluoro-# -A-nor- androsteine-2ss,11ss,17ss-triol.

9. Utilisation selon la revendication II, caractérisée en ce que l'on transforme le composé obtenu en son dérivé 2ss,17ss-diacyloxy ou 2ss,11ss,17ss-triacyloxy en le faisant réagir avec un agent acylant.

10. Utilisation selon la sous-revendication 9, caractérisée en ce que le produit obtenu est le 2,17-diacétate de 9α-fluoro-# -A-norandrostène-2ss,11ss,17ss-triol.

11. Utilisation selon la sous-revendication 9, caractérisée en ce que le produit obtenu est le 2,11,17-triacétate de 9α-fluoro-# -A-norandrostène-2ss,11ss,17ss-triol.