CH555889A - Procede et dispositif d'ensemencement de milieux nutritifs solides avec des bacteries. - Google Patents

Description

  
 



   La présente invention a pour objet un procédé et un dispositif d'ensemencement de milieux nutritifs solides avec des bactéries en vue de réaliser des gradients de concentration bactérienne sur la surface nutritive, ces gradients ou concentration décroissante de bactéries permettant l'isolement de colonies bactériennes.



   On connaît divers procédés d'ensemencement de milieux nutritifs avec des bactéries.



   L'un de ces procédés consiste à prélever un liquide infecté, puis à tremper dans ce liquide un support recouvert d'un milieu nutritif solide favorisant la prolifération bactérienne. Le film résiduel de liquide infecté, rapidement absorbé dans le milieu solide, est suffisamment constant pour que le nombre des colonies qui se développeront sur le milieu nutritif pendant l'incubation soit proportionnel à la concentration bactérienne dans le liquide infecté. Le support est réintroduit dans son réceptable protecteur qui est lui-meme obturé au moyen d'un couvercle et incubé à une température favorable pendant une durée suffisante. Du nombre des colonies apparues sur le milieu nutritif   aprés    incubation, on déduira le nombre des bactéries présentes par unité de volume du liquide infecté. Lorsque ce nombre est grand, les colonies sont confluentes, donc indistinctes.



   L'un des principaux avantages de ce procédé est qu'il peut   etre    appliqué par du personnel non qualifié au chevet même du malade. Il permet à ce personnel de se rendre compte si le liquide était infecté en observant les colonies sur le milieu nutritif ainsi que de la densité de cette infection en estimant le nombre de ces colonies selon des tables de comparaison.



   Par contre, pour observer des colonies de bactéries, on achemine le support au laboratoire pour l'identification des bactéries ainsi que pour la détermination de leur sensibilité aux antibiotiques. L'identification des bactéries requiert des cultures pures que   l'on    ne peut obtenir qu'à partir de colonies bien séparées isolées.



   L'un des principaux inconvénients de ce procédé réside dans l'absence de séparation des colonies chaque fois que la concentration des bactéries dans le liquide infecté a déterminé un nombre élevé de colonies dans la culture. C'est aussi dans ce cas que l'état du patient exige des résultats rapides qui sont compromis par l'obligation, pour le laboratoire, de refaire une séparation, ce qui exige au moins 24 heures supplémentaires. Cette perte de temps, dans ces cas urgents, peut être lourde de conséquences. Une précaution ordinaire consiste à envoyer d'emblée au laboratoire une partie de l'échantillon de liquide infecté soumis au procédé décrit afin que le laboratoire, procédant selon des méthodes avérées, puisse isoler des cultures pures. Ceci présente toutefois l'inconvénient de supprimer l'avantage gagné par l'application du procédé décrit.

  En outre, certaines bactéries ne supportent pas le séjour dans les liquides infectés après que ce dernier a quitté l'organisme du malade.



   Pour obtenir des-colonies isolées, plusieurs procédés sont connus, mais tous reposent sur la dilution, donc sur un appauvrissement progressif en bactéries.



   L'un de ces procédés consiste à effectuer une dilution en série du liquide infecté et prélever des quantités aliquotes de chaque dilution pour les étaler à la surface de milieux nutritifs solides au moyen d'un organe racleur déplacé dans le sens de la longueur puis dans le sens de la largeur. On trouvera des colonies isolées chaque fois que la quantité aliquote contiendra moins de quelques centaines de bactéries.



   Dans un autre procédé connu effectué au moyen d'une anse platine tenue à la main, on épuise progressivement le contenu de l'anse préalablement chargée de bactéries de la manière suivante:   ranse    chargée est conduite par un mouvement de va-et-vient sur toute une portion de la surface d'un milieu nutritif solide contenu dans une boîte circulaire (boîte de Petri) afin de répartir le contenu de l'anse sur toute cette portion également. L'anse est alors stérilisée à la flamme et refroidie, puis elle est tirée à travers la surface ensemencée jusqu'à une portion vierge où le mouvement de vaet-vient permettra de répartir les bactéries retirées de la première portion sur toute la surface de la deuxième. On recommence cette opération à partir de la deuxième portion vers une troisième, puis vers une quatrième.

  La surface du milieu nutritif a donc été ensemencée de nombres progressivement décroissants de bactéries.



   Enfin, dans un autre procédé connu, on dépose des bactéries sur une portion radiale de la surface d'un milieu nutritif contenu dans une boite de Petri soutenue par une platine. Les bactéries sont alors réparties à partir de la zone inoculée au moyen d'une anse de platine portée par un bras se mouvant horizontalement autour d'un axe à la manière d'un bras de gramophone pendant que la platine entraîne la boite de Petri dans un mouvement rotatif. L'anse décrit donc, sur la surface du milieu nutritif, une trace hélicoïdale et reprend, à chaque tour, une partie des bactéries déposées initialement. La trace est d'une longueur différente à chaque tour. Comme les bactéries s'épuisent tout au long de la trace, leur concentration s'affaiblira jusqu'à un minimum proportionnel à la longueur de la trace. Ceci permettra d'obtenir des colonies isolées sur au moins certaines portions de la trace.



   Les inconvénients des procédés décrits ci-dessus proviennent de ce qu'ils ne peuvent être exécutés, pour les deux premiers cités que par du personnel qualifié et, pour le troisième, qu'à l'aide d'un appareillage coûteux et encombrant. En aucun cas donc, ces procédés ne peuvent normalement être mis en oeuvre au chevet même du malade.



   Le but de la présente invention est de remédier à ces inconvénients et de foumir un dispositif simple et peu coûteux qui permette d'effectuer un ensemencement sous forme de gradients sur un milieu nutritif au chevet même du malade, sans faire appel à du personnel technique qualifié.



   Le procédé selon la présente invention est caractérisé par le fait qu'on dépose des bactéries dont on veut obtenir la culture sous la forme de colonies isolées, sur une portion de la surface du milieu nutritif puis qu'on déplace des organes de transport au travers de la portion de la surface comprenant ces bactéries puis au travers du reste de la surface nutritive pour former des traces présentant une concentration décroissante de bactéries.



   L'invention a également pour objet un dispositif pour la mise en oeuvre du procédé décrit qui est caractérisé par le fait qu'il comprend un support dont une partie de la surface au moins comporte au moins un milieu nutritif, et des organes de transport susceptibles d'entrer en contact avec ce milieu nutritif et dépla   çables    par rapport au support pour balayer au moins une partie de la surface du milieu nutritif.



   Le dessin annexé illustre schématiquement et à titre d'exemple plusieurs formes d'exécution d'un dispositif pour la mise en oeuvre du procédé selon l'invention.



   La fig. 1 est une vue en perspective d'un support comportant un milieu nutritif selon une première forme d'exécution du dispositif.

 

   La fig. 2 est une vue en perspective d'une boîte avec son couvercle qui est destiné à recevoir le support de la fig. 1.



   La fig. 3 est une vue en plan d'un support comportant un milieu nutritif selon une seconde forme d'exécution du dispositif.



   La fig. 4 est une vue de dessous d'un couvercle du dispositif selon la fig. 3.



   La fig. 5 est une vue en élévation et en coupe du dispositif des fig.   3et4.   



   La fig. 6 est une vue en perspective d'une boîte avec son couvercle selon une troisième forme d'exécution.



   La fig. 7 est une vue en plan d'un support destiné à être reçu par la boite de la fig. 6.



   La fig. 8 est une vue en élévation et en coupe d'une boîte avec son couvercle selon une quatrième forme d'exécution.



   La fig. 9 est une vue en plan d'un support placé dans la boîte de la fig. 8.  



   Une première forme d'exécution du dispositif est illustrée par les fig. 1 et 2 et comprend un support 1 de forme rectangulaire qui comporte sur chacune de ses faces un milieu nutritif 2 utilisé en bactériologie. Ces milieux nutritifs 2 favorisent la prolifération des cellules   bactériques.   



   Ce support 1 est destiné à être reçu par un réceptacle ou boîte 3 de forme cylindrique pouvant constituer une enceinte stérile.



   Cette boîte 3 comporte des rainures de guidage 4 du support 1 et est obturable par un couvercle 5.



   La distance séparant les deux rainures de guidage 4 correspond à la largeur du support 1.



   L'extrémité ouverte de cette boîte 3 est munie de deux peignes amovibles 6 dont les dents 7 ou organes de transport sont en matière flexible telle que par exemple en matière plastique.



   Les deux dents d'extrémité de chaque peigne 6 présentent une largeur supérieure à la largeur des autres dents.



   Ces peignes 6 sont disposés de manière à permettre l'introduction du support 1 dans la boite 3 par ses rainures de guidage 4.



   ta distance séparant l'extrémité des dents 7 d'un peigne 6 à l'extrémité des dents 7 de l'autre peigne est inférieure à l'épaisseur du support 1.



   L'utilisateur d'un tel dispositif, qui pourrait être une infirmière dans un hôpital, prélève sur le malade une substance favorisant la vie des bactéries dans le corps humain, telle que par exemple le sang ou l'urine. Cette infirmière trempe ensuite l'extrémité 8 du support 1 dans cette substance puis agite ce support de manière à évacuer la substance prélevée et ne laisser sur l'extrémité 8 de celui-ci qu'une forte concentration de bactéries 9 destinées à être cultivées.



   Le support 1 peut ensuite, au chevet même du malade, être introduit par son extrémité 8 dans les rainures du guidage 4 de la boîte 1.



   Lors du passage de ce support 1 entre les deux peignes 6, les dents flexibles 7 des deux peignes 6 entrent en contact avec les bactéries 9 et les transportent dans leur déplacement en formant des traces 10 qui présentent un gradient ou concentration décroissante de bactéries. Cest traces 10 s'étendent sur les deux faces du support 1, depuis l'extrémité 8 en direction de son extrémité opposée.



   Chacune de ces traces 10 forme une colonie de bactéries séparée de la colonie adjacente par une portion du milieu nutritif 2
 Grâce à la largeur différente des dents d'extrémité de chaque peigne, la concentration des traces 10 formées par ces dents est différente de la concentration des traces formées par les autres dents du peigne. Ceci permet d'augmenter le choix d'une zone à concentration déterminée de bactéries pour la culture de celles-ci.



   La boite 3 renfermant le support 1 peut ensuite être obturée par le couvercle 5 et être acheminée vers un laboratoire.



   Dans une seconde forme d'exécution illustrée par les fig. 3 à 5, le dispositif comprend un support 11 de forme cylindrique qui constitue un réceptacle d'un milieu nutritif 2 tel que décrit pour la première forme d'exécution.



   Ce support 11 est muni d'éléments 12 prévus pour sa manutention.



   Une proéminence 13 de ce support 11 constitue une partie haute destinée à obturer une ouverture 14 d'un couvercle amovible 15 (fig. 4) monté pivotant sur un axe 16 du support 11. Ce couvercle est déplaçable angulairement sur le support 11, dans le sens des aiguilles d'une montre.



   Le support 11 comprend encore une partie basse 17 qui constitue un réservoir des bactéries destinées à être ensemencées sur le milieu nutritif 2.



   Un peigne 18 est fixé sur une partie 19 de la périphérie de l'ouverture 14 du couvercle 15. Ce peigne 18 s'étend perpendiculairement au plan du couvercle 15, sur une partie au moins de son rayon, et comporte des dents ou organe de transport 20 en matière flexible telle que par exemple en matière plastique.



   La largeur des dents 20 va en augmentant depuis le centre du couvercle 15 jusqu'à sa périphérie (fig. 5).



   En position de repos du dispositif, l'ouverture 14 du couvercle 15 est placée en superposition de la partie basse 17 du support 11, les dents 20 du peigne 18 s'étendant dans cette partie basse 17.



   La longueur des dents 20 est telle que celles-ci sont en contact par leur extrémité libre avec le milieu nutritif 2, lorsque le peigne 18 est déplacé sur ce milieu nutritif.



   Pour ensemencer le milieu nutritif 2 avec des bactéries en vue d'obtenir des cultures de celles-ci, l'utilisateur introduit ces bactéries, au travers de l'ouverture 14 du couvercle 15, dans la partie basse 17.



   L'utilisateur obture ensuite l'ouverture 14 par la partie haute 13 du support 11, en déplaçant angulairement le couvercle 15 dans le sens des aiguilles d'une montre.



   Cette opération constitue simultanément l'opération d'ensemencement du milieu nutritif 2 avec au moins une partie des bactéries contenues dans le réservoir 17.



   Ces bactéries sont en effet transportées par les dents 20 du peigne 18 entraîné par le couvercle 15, qui forment des traces ou colonies de bactéries 21 présentant un gradient ou concentration décroissante de bactéries.



   Grâce à la largeur différente des dents 20, les traces 21 présentent des gradients différents. Ceci augmente le choix d'une zone de bactéries présentant une concentration déterminée.



   Dans une troisième forme d'exécution illustrée par les fig. 6 et 7, le dispositif comprend un support 1 tel que décrit dans la première forme d'exécution, qui comporte sur chacune de ses faces deux milieux nutritifs 22, 23 de nature différente.



   Ces milieux nutritifs 22, 23 favorisent la prolifération des cellules   bactèriques    de manière différente.



   Comme pour la première forme d'exécution, ce support 1 est destiné à être reçu par un réceptacle ou boîte 3 qui peut constituer une enceinte stérile et peut, par exemple comme illustré par la fig. 6, être, vue en plan, de forme générale rectangulaire.



   Les deux peignes amovibles 6 fixés sur l'extrémité ouverte de cette boîte 3 comprennent des dents 7 agencées de manière à entrer en contact avec les milieux nutritifs 22, 23 pour former des traces de bactéries 10 de largeur différente et présentant un gradient ou concentration décroissante de bactéries.



   Chacun de ces peignes 6 comprend encore une formation 24 destinée à permettre le passage d'une partie de séparation 25 des milieux nutritifs 22, 23 entre les peignes 6.



   Grâce à la nature différente des milieux nutritifs 22, 23, des cultures comparatives de bactéries peuvent être effectuées en laboratoire.



   Enfin, dans une quatrième forme d'exécution illustrée par les fig. 8 et 9, le dispositif comprend un réceptacle ou boîte 26 obturable par un couvercle 27 coulissant selon une direction unique dans des rainures 28 de la boîte 26.



   Cette boîte 26 comprend un support 29 de forme générale rectangulaire   qlli    comporte une pluralité de milieux nutritifs 30 utilisés en bactériologie qui sont de nature différente. La prolifération des bactéries est ainsi favorisée de manière différente sur chacun de ces milieux 30.

 

   Le support 29 comprend une extrémité 31 inclinée qui forme un réservoir avec la paroi interne de la boite 26. Ce réservoir est destiné à recevoir des bactéries en forte concentration.



   Un peigne 32 est fixé sous l'une des extrémités du couvercle, de telle manière que lors de l'obturation de la boite 26 par ce couvercle 27, ce peigne 32 entre en contact, par l'extrémité de ses dents, avec une portion au moins de l'extrémité inclinée 31 et avec les milieux nutritifs 30.



   Cette obturation constitue simultanément une opération de transport d'une partie des bactéries apposées sur l'extrémité 31 du support 29. Ces bactéries sont en effet déplacées par l'action des  dents du peigne 32, chacune de ces dents correspondant à un milieu nutritif.



   Ces bactéries sont ainsi ensemencées sur les milieux nutritifs 30, sous forme de traces 33 présentant un gradient ou concentration décroissante de bactéries.



   Des cultures comparatives peuvent ainsi être effectuées en laboratoire.



   Le support décrit pour la première forme d'exécution ne comporte qu'un seul milieu nutritif sur chacune de ses faces; dans une variante, il est bien évident qu'il pourrait en comporter une pluralité. Dans ce cas, les peignes portés par la boite 3 devraient être agencés de manière à permettre l'introduction de ce support dans cette boîte.



   Dans   d'autre's    variantes, les supports des autres formes d'exécution décrites pourraient comporter un nombre de milieux nutritifs différent de celui décrit, sur chacune de leur face ou sur une seule de celles-ci. Ainsi le support du dispositif illustré par la fig. 3 pourrait comporter deux, trois ou plusieurs milieux nutritifs alors que les supports illustrés par les fig. 7 et 9 pourraient ne comporter qu'un seul milieu nutritif.

 

   Le procédé décrit n'est pas uniquement applicable à un prélèvement effectué sur un malade, mais peut également être prévu pour les cultures de bactéries contenues dans des liquides tels que par exemple le vin, ou dans des aliments.



   Le procédé selon la présente invention permet une rationalisation poussée dans le domaine de l'ensemencement d'un milieu nutritif avec les bactéries, par le fait que le dispositif pour sa mise en oeuvre est simple, peu encombrant, et permet une utilisation au chevet même d'un malade. 

Claims (1)

1. REVENDICATIONS

   I. Procédé d'ensemencement de milieux nutritifs solides avec des bactéries, caractérisé par le fait qu'on dépose des bactéries, dont on veut obtenir la culture sous la forme de colonies isolées, sur une portion de la surface du milieu nutritif solide, puis qu'on déplace des organes de transport au travers de la portion de la surface comprenant ces bactéries puis au travers du reste de la surface nutritive pour former des traces présentant une concentration décroissante de bactéries.

   II. Dispositif pour la mise en oeuvre du procédé selon la revendication I, caractérisé par le fait qu'il comprend un support dont une partie de la surface au moins comporte au moins un milieu nutritif, et des organes de transport susceptibles d'entrer en contact avec ce milieu nutritif et déplaçables par rapport au support pour balayer au moins une partie de la surface du milieu nutritif.

   SOUS-REVENDICATIONS 1. Procédé selon la revendication I, caractérisé par le fait que pour déposer les bactéries dont on veut obtenir la culture sous la forme de colonies isolées, on trempe une partie de ce milieu nutritif dans une substance contenant des bactéries.

   2. Procédé selon la revendication I, ou la sous-revendication 1, caractérisé par le fait que pour former sur le milieu nutritif des traces présentant une concentration décroissante de bactéries on introduit ce milieu nutritif, entre les organes de transport, dans un réceptable.

   3. Procédé selon la revendication I, caractérisé par le fait que, pour déplacer les organes de transport, on obture un réceptacle logeant le milieu nutritif en déplaçant un couvercle sur lequel ces organes de transport sont montés amovibles.

   4. Procédé selon la sous-revendication 2, caractérisé par le fait qu'en laboratoire, avant de retirer le support hors du réceptable, on démonte les organes de transport.

   5. Dispositif selon la revendication II, caractérisé par le fait qu'il comprend encore un réceptacle destiné à recevoir le support.

   6. Dispositif selon la revendication II, caractérisé par le fait qu'il comprend encore un réceptacle comprenant le support.

   7. Dispositif selon l'une des sous-revendications 5 ou 6, caractérisé par le fait que ce réceptacle comporte un couvercle d'obturation.

   8. Dispositif selon la sous-revendication 7, caractérisé par le fait que les organes de transport sont montés sur une extrémité ouverte du réceptacle.

   9. Dispositif selon la sous-revendication 7, caractérisé par le fait que les organes de transport sont montés sur le couvercle.

   10. Dispositif selon l'une des sous-revendications 8 ou 9, caractérisé par le fait que ces organes de transport sont amovibles.

   11. Dispositif selon la revendication II, caractérisé par le fait que les organes de transport sont les dents d'un peigne.

   12. Dispositif selon la revendication II, caractérisé par le fait que le support comporte une pluralité de milieux nutritifs de nature différente.

   13. Dispositif selon la revendication II, caractérisé par le fait que le support comporte au moins un milieu nutritif sur chacune de ses faces.

   14. Dispositif selon la sous-revendication 7, caractérisé par le fait que le réceptacle muni du couvercle constitue une enceinte stérile.

   15. Dispositif selon la revendication II, caractérisé par le fait que les organes de transport présentent différentes largeurs.

   16. Dispositif selon la sous-revendication 15, caractérisé par le fait que ces organes de transport sont calibrés en vue de former des traces présentant des concentrations différentes.