Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Verbesserung der
Nachweisempfindlichkeit von immunologischen diagnostischen Objektträgern, an denen eine Schicht aus Partikeln eines ersten Proteins adsorbiert ist, die spezifisch immunologisch mit einem zweiten Protein, das nachgewiesen werden soll, reagiert.
Das erfindungsgemässe Verfahren dient zum immunologischen Nachweis von Protein durch den Nachweis von immunologischen Komplexbindungen zwischen einem zur Bildung eines Objekt-Testträgers vorher an einer Oberfläche adsorbierten Protein und dem damit spezifisch immunologisch-reaktiven Protein. Insbesondere betrifft die Erfindung eine Verbesserung des Kontrastes, der bei solchen immunologischen diagnostischen Objektträgern durch die selektive immunologische Bindung von zusätzlichen Proteinschichten daran zu beobachten ist.
In der CH-PS 579 777 ist beispielsweise ausgeführt, dass ein willkürlich ausgewähltes Protein nur in einer monomolekularen Schicht auf einem Substrat haften wird, so dass kein anderes willkürlich ausgewähltes Protein auf dieser Proteinschicht haften wird. Andererseits wird das spezifisch reagierende Protein sich immunologisch mit dem ersten Protein, das an dem Substrat adsorbiert ist, verbinden. Im Einklang mit der Lehre dieser Patentschrift wird diese Feststellung dazu verwendet, medizinischdiagnostische Apparate herzustellen, in denen ein Objektträger an dem eine monomolekulare Schicht eines Proteins adsorbiert ist, verwendet wird, um Lösungen, in denen das damit spezifisch reagierende Protein vermutet wird, zu testen. Wenn das spezifisch reagierende Protein in der Lösung zugegen ist, trägt der Objektträger nach dem Eintauchen in die Lösung eine bimolekulare Proteinschicht.
Wenn das spezifisch reagierende Protein in der Lösung nicht vorhanden ist, weist der Träger nach dem Eintauchen lediglich die ursprüngliche monomolekulare Proteinschicht auf. Optische, elektrische und chemische Vorrichtungen zur Unterscheidung zwischen einer bimolekularen Proteinschicht und einer monomolekularen Proteinschicht werden in der obigen Patentschrift ebenfalls beschrieben.
In zwei Ausführungsformen der diagnostischen Apparate, wie sie in der CH-PS 579 777 beschrieben wurden, wird die optische Unterscheidung zwischen monomolekularen und bimolekularen Proteinschichten durch Beobachtungen der Objektträger mit dem blossen Auge durchgeführt. Der beschriebene chemische Nachweis erfolgt unter Verwendung eines Substrates, das eine Oberfläche eines Materials hat, das mit Quecksilber ein sichtbares Amalgam bildet und hängt, was seine Durchführbarkeit anbetrifft, davon ab, dass ein Quecksilbertropfen, der auf eine bimolekulare Proteinschicht aufgebracht wird, etwa 10mal so viel Zeit braucht, um durch diese Schicht zu diffundieren, wie ein Quecksilbertropfen, der auf eine molekulare Proteinschicht aufgebracht wird.
Der elektrische Nachweis beinhaltet die Verwendung eines elektrisch leitfähigen Substratmaterials und das Aufbringen einer Elektrode auf der Proteinschicht; die Kapazität zwischen den beiden leitfähigen Elementen wird dann gemessen, wobei dessen Wert die Dicke des dielektrischen Proteinfilms, die sie trennt, angibt, und damit aussagt, ob solch ein Film monomolekular oder bimolekular ist. Hieraus ist ersichtlich, dass die in der obigen Patentschrift beschriebenen elektrischen und chemischen Ausführungsformen es erforderlich machen, dass das aufzufindende Protein, wenn es in der Testlösung zugegen ist, eine vollständige zweite monomolekulare Schicht auf dem diagnostischen Träger bildet.
Einige Partikel, deren Nachweis äusserst wichtig ist, sind in physiologischen Proben jedoch nur in sehr verdünnten Konzentrationen enthalten. In einem solchen Falle wird nur eine kleine Anzahl solcher Teilchen an dem diagnostischen Träger gebunden, so dass ihre Nachweisbarkeit nur in begrenztem Umfange erfolgen kann.
In der immunologischen Literatur ist es bekannt, dass Antikörpermoleküle als Antigene funktionieren, wenn sie in das System eines Wirbeltieres, für welches sie artfremde Proteine darstellen, eingegeben werden. Dementsprechend können spezifisch reagierende Antikörper für einen gegebenen Antikörper leicht hergestellt werden. Diese Fähigkeit wurde in der Literatur ausgenutzt, um fluoreszierende Moleküle an den immunologisch komplexen Proteinen anzubringen, als Hilfsmassnahme zum Nachweis bestimmter Arten von Mikroorganismen. Beispielsweise können Antikörper zu menschlichen Immunglobulinen hergestellt und chemisch mit fluoreszierenden organischen Molekülen, wie beispielsweise Isothiocyanaten, kombiniert werden. Dieser sogenannte markierte Antikörper wird dann verwendet, um eine immunologische Reaktion unter einem UV-Mikroskop sichtbar zu machen.
Einer der wichtigsten Verwendungszwecke für solche Antikörper gegenüber Antikörpern, die in der Literatur bekannt sind, ist der serologische Test für Syphilis gemäss dem Verfahren von Coons, das als FTA-STS-Verfahren in der Literatur bekannt ist. In dem FTS STS-Verfahren wird eine bestimmte Menge von Treponema pallidum (T. pallidum) auf einem Objektträger getrocknet.
Der Objektträger wird dann in eine Blutprobe eingetaucht.
Der Objektträger wird anschliessend in eine Lösung von markiertem Immunglobulin eingetaucht. Das Anti-Menschen-Immunglobulin verbindet sich nicht mit dem T. pallidum; entsprechend wird der Objektträger, wenn er unter einem W-Mikroskop beobachtet wird, nur dann fluoreszieren, wenn die Probe Antikörper für T. pallidum enthielt.
Somit kann gesagt werden, dass bisher ein Gebrauch für zwei Stadien der immunologischen Reaktion gefunden wurde.
Es ist jedoch kein Verwendungszweck für weitere Stadien der immunologischen Reaktion bekannt.
Es ist die Hauptaufgabe der vorliegenden Erfindung, die Nachweissensitivität immunologischer diagnostischer Objektträger zu verbessern. Dies soll insbesondere durch Aufbau von multimolekularen Schichten von spezifisch reagierenden Proteinen auf solchen Objektträgern geschehen.
Es ist eine weitere Aufgabe der vorliegenden Erfindung, die Nachweisempfindlichkeit solcher Objektträger dadurch zu verbessern, dass zusätzliche Proteinschichten in ausreichender Menge gefunden werden, um die Gegenwart von wenigstens zwei vollständigen monomolekularen Proteinschichten auf der Oberfläche des Trägers sicherzustellen.
Das erfindungsgemässe Verfahren zur Verbesserung der Nachweisempfindlichkeit von immunologischen diagnostischen Objektträgern, an denen eine Schicht aus Partiklen eines ersten Proteins adsorbiert ist, die spezifisch immunologisch mit einem zweiten Protein, das nachgewiesen werden soll, reagiert, ist dadurch gekennzeichnet, dass a) der Objektträger mit einer Flüssigkeit, von der vermutet wird, dass sie das nachzuweisende Protein enthält, in Kontakt gebracht wird, um eine Vielzahl von Partikeln des zweiten Proteins an die Partikel des ersten Proteins zu binden, und dass b) der Objektträger mit einer Lösung in Kontakt gebracht wird, die ein drittes Protein enthält, das immunologisch mit dem nachzuweisenden Protein reagieren kann, wobei das erste, das zweite und das dritte Protein verschieden voneinander sind.
Nach dem Eintauchen in die Lösung, die vermutlich das Protein enthält, trägt der Objektträger eine bimolekulare Proteinschicht, die aus der ursprünglichen monomolekularen Proteinschicht und der darüberliegenden monomolekularen Schicht des nachzuweisenden Proteins besteht, wenn das nachzuweisende Protein in der Lösung zugegen war. Andererseits, wenn die Lösung, in der man das Protein vermutete, dieses nicht enthielt, weist der Objektträger nach dem Eintauchen darin nur die ursprüngliche monomolekulare Proteinschicht auf.Der Objektträger wird dann in eine Proteinlösung eingetaucht, die immunologisch mit dem Protein der zweiten monomolekularen Schicht reagiert.
Der Objektträger trägt dann eine trimolekulare Proteinschicht, wenn die untersuchte Lösung das interessierende Protein enthielt, oder eine monomolekulare Schicht, wenn die untersuchte Lösung das interessante Protein nicht enthielt. Die Nachweisempfindlichkeit des Objektträgers wurde verbessert aufgrund des vergrösserten Kontrastes zwischen einer monomolekularen und einer trimolekularen Proteinschicht, verglichen mit dem Kontrast zwischen einer monomolekularen und einer bimolekularen Proteinschicht.
Nachfolgend wird die Erfindung sowie weitere Aufgaben und Vorzüge unter Bezugnahme auf die Zeichnungen näher erläutert: Im einzelnen zeigen:
Figur 1 eine schematische Darstellung des Haftens einer Vielzahl von Proteinschichten auf einem Substrat,
Figur 2 ein Querschnitt eines Aufrisses eines Objektträgers, der vier monomolekulare Proteinschichten trägt, und
Figur 3 eine Schnittansicht eines Aufrissen eines Objektträgers, der gemäss einer Ausführungsform der Erfindung hergestellt wurde und die Vervollständigung einer monomolekularen Schicht auf einem Objektträger zeigt.
Figur 1 zeigt ein Substrat 10, das eine Oberfläche eines diagnostischen Objektträgers bildet, an der eine Vielzahl von willkürlich ausgewählten Proteinmolekülen oder anderen Partikeln, wie beispielsweise Viren oder Hepatitis assoziierte Antigenpartikel 11, adsorbiert ist. Eine Vielzahl von Molekülen oder anderen Partikeln 11 sind immunologisch mit ihren spezifisch reagierenden Antikörpermolekülen, wie allgemein bei 21, 22 gezeigt, komplexiert, Die Antikörpermoleküle 21 und 22 sind schematisch dargestellt, um eine Erklärung ihrer Struktur zu erleichtern. Die ursprüngliche Partikelschicht wird im Anschluss hieran der Einfachheit halber mit Moleküle bezeichnet, es sei, denn, dass dies durch den spezifischen Zusammenhang anders erforderlich ist, wobei es sich versteht, dass andere Partikel auch mit in den Umfang der vorliegenden Erfindung eingeschlossen sind.
Die fünf Hauptklassen von Antikörpern enthalten die Immunoglobuline, die mit IgG, IgM, IgA, IgD und IgE bezeichnet wurden. Der überwiegende Anteil an Immunglobulin ist IgG, welches etwa 85 % der Immunglobuline im normalen menschlichen Serum darstellt und das auch in einem, überschlagsmässig geschätzt, ähnlichen Überschuss im normalen Serum anderer Wirbeltiere gefunden wurde. Ein IgG Partikel enthält zwei schwere (lange) Peptidketten und zwei leichte (kurze) Peptidketten, die mittels Disulfidbindungen miteinander so verbunden sind, dass sie ein allgemein wie ein Y gestaltetes Antikörpermolekül bilden. Die IgG-Antikörpermoleküle sind immunologisch zweiwertig, d. h. jedes Molekül hat zwei aktive Antikörperstellen.
Die Antikörperstellen 21al und 21a2 des Moleküls 21 und 22al und 22a2 des Moleküls 22 sind an den extremen Enden der Arme des Y-förmigen Moleküls angeordnet. Die aktiven Stellen ermöglichen die immunologische Bindung des Antikörpers an ein Molekül von dessen assoziiertem Antigen, wie es beispielsweise in Fig. 1 gezeigt wird, wo die aktiven Stellen 21al, 22al und 22a2 an eine Vielzahl von Proteinmolekülen 11 gebunden sind. Wie schon oben angegeben, wirken Antikörpermoleküle auch als Antigene, wenn sie in das System eines Wirbeltieres eingeführt werden, für welches sie ein artfremdes Protein darstellen.
Dadurch stimulieren sie die Herstellung von Antikörpern, die spezifisch für den Antikörper als Antigen sind. Ein Antikörper zum IgG-Antikörper ist ein weiterer IgG-Antikörper, der deshalb also auch zwei aktive Stellen hat. Diese aktiven Stellen verbinden sich mit spezifischen, immunologisch aktiven Stellen am ersten Antikörper. Die immunologisch aktiven Stellen sind andererseits als immunologische Determinanten oder Epitopen bekannt. Wie oben angegeben, beträgt die Anzahl der aktiven Stellen im Antikörper von einem IgG-Antikörper zwei. Die Anzahl von Epitopen, die mit einem IgG-Molekül assoziiert sind, ist nicht genau bekannt, aber man weiss, dass die Anzahl von Epitopen wenigstens zwei beträgt. Es ist bekannt, dass Epitopen am Schwanz des Y-förmigen Moleküls vorhanden sind und dass sie wahrscheinlich auch an dessen Armen zugegen sind.
Zum Zwecke der Illustration des Prinzips des erfindungsgemässen Verfahrens sind drei Epitope entlang der schweren (langen) Peptidketten jedes Antikörpermoleküls, wie sie in Fig. 1 illustriert werden, gezeigt. Die Epitopen des Antikörpermoleküls 21 sind mit 21el, 21e2 und 21e3 bezeichnet.
Die Epitopen des Antikörpermoleküls 22 sind mit 22el, 22e2 und 22e3 bezeichnet.
Die Adsorption der Moleküle 11 am Objektträger 10 und das Eintauchen des proteinbeschichteten Objektträgers in eine Lösung von Antikörpern gegenüber dem Protein 11, um Mole küle 21 und 22 immunologisch daran zu binden, bildet den Kern der in der CH-PS 579 777 beschriebenen Erfindung.
Gemäss der Praxis der vorliegenden Erfindung wird eine bestimmte Menge einer Lösung von Antikörpern vom Typ, wie sie durch 21 und 22 repräsentiert werden, an ein Wirbeltier verabreicht, um die Produktion von Antikörpern dazu zu stimulieren. Die hergestellten Antikörper werden mit Hilfe von bekannten Verfahren gesammelt und eine Lösung davon wird beim verbesserten diagnostischen Verfahren gemäss der vorliegenden Erfindung verwendet. Der Objektträger wird in eine Lösung von Anti-Antikörpern getaucht und, wenn Moleküle 21 und 22 an Moleküle 11 gebunden werden, wird eine Vielzahl von Molekülen 31, 32, 33, 34 und 35 immunologisch an Moleküle 21 und 22 gebunden.
Wenn andererseits Antikörper vom Typ der Moleküle 21 und 22 nicht in der Lösung vorhanden sind, in welche der Objektträger zuerst eingetaucht wird, werden auch nach dem Eintauchen in die Lösung, die solche Moleküle enthält, keine Moleküle 31 bis 35 auf dem Objektträger vorhanden sein, weil Moleküle 31 bis 35 spezifisch mit Molekülen 21 und 22 reagieren und sich nicht mit den Molekülen 11 verbinden. Zu diesem Zeitpunkt des erfindungsgemässen Verfahrens wird die Nachweisbarkeit der Moleküle 21 und 22 dadurch entsprechend verbessert, dass ihre Gegenwart bestimmt wird, indem man zwischen einer Schicht von Molekülen 11 und einer Schicht von Molekülen 11, 21, 22, 31, 32, 33, 34 und 35 unterscheidet, im Gegensatz zu der Bestimmung, bei welcher man zwischen einer Schicht von Molekülen 11 und einer Schicht von Molekülen 11, 21 und 22 unterscheidet.
Erfindungsgemäss kann das Verfahren wiederholt werden, um zusätzliche Proteinschichten aufzutragen, um die Sensitivität des Nachweises weiter zu steigern, wie beispielsweise durch die selektive Bindung der Moleküle 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52 und 53 an die Moleküle 31, 32, 33, 34 und 35.
Antikörpermoleküle 31, 32, 33, 34 und 35 haben die aktiven Stellen 31al, 31a2 bzw. 32al, 32a2 bzw. 33al, 33a2, bzw.
34al, 34a2 bzw. 35al und 35a2. Antikörper 31 ist durch die Befestigung der aktiven Stellen 31a2 an Epitop 21e2 immunologisch an Antikörper 21 gebunden. Antikörper 32 ist durch die Verbindung der aktiven Stelle 32al an Epitop 21el immunologisch gebunden an Antikörper 21. Antikörper 33 ist durch die Verbindung der aktiven Stelle 33a2 an Epitop 22e2 immunologisch an Antikörper 22 gebunden; Antikörper 34 ist durch die Verbindung der aktiven Stelle 34al an Epitop 22el an Antikörper 22 gebunden; Antikörper 35 ist durch die Verbindung der aktiven Stelle 35al an Epitop 22e3 an Antikörper 32 gebunden.
Wie auf der linken Seite von Fig. 1 im Hinblick auf die Proteinkette, die mit Antikörper 21 beginnt, gezeigt, ist jeder Antikörper mit zwei aktiven Epitopen angegeben. Das bedeutet, dass jeder Antikörper als Antigen zwei Antikörper bindet. Somit hat Antikörper 21 Antikörper 31 und 32 gebunden, die wiederum Antikörper 41, 42, 43 und 44 an sich gebunden haben. Dies stimmt mit der bekannten Minimalzahl von aktiven Epitopen pro IgG-Antikörpermolekül überein.
Auf der rechten Seite von Fig. 1 hat die Proteinkette, die mit Antikörper 22 beginnt, drei aktive Epitopen pro Antikörper.
So ist ersichtlich. dass die Verbesserung der Sensitivität, wie sie in Übereinstimmung mit dieser Erfindung erhalten wird, proportional der Anzahl an aktiven Epitopen pro Antikörper Molekül und der Anzahl von Eintauchvorgängen des Objektträgers in aufeinanderfolgende Lösungen mit Antikörpern ist.
In einem Beispiel von serumimmunologischen Reaktionen, die erfindungsgemäss durchgeführt wurden, wurde eine Schicht von Rinderserum-Albumin an einem Objektträger adsorbiert.
Der Objektträger wurde dann in eine Lösung von Kaninchen Antiserum gegenüber dem Rinderserum-Albumin eingetaucht, wonach der Objektträger die ursprüngliche Rinderserum Albumin-Schicht aufwies, die immunologisch gebunden dazu eine Schicht von Kaninchen-IgG-Immunglobulin-Antikörper zum Rinderserum-Albumin enthielt. Der Objektträger wurde als nächstes in eine Lösung von Ziegen-Antiserum zum Kaninchen-IgG getaucht, wonach der Objektträger eine Schicht von Rinderserum-Albumin, eine Schicht von Kaninchenanti-BSA IgG und eine Schicht von Ziegenanti-Kaninchen-IgG-Antikörpern aufwies. Der nächste Schritt war das Eintauchen des Objektträgers in eine Lösung von Kaninchen-Antiserum zum Ziegen-IgG, um eine vierte Schicht von Kaninchenanti-Ziegen-IgG-Molekülen auf dem Objektrräger hinzuzufügen.
Es versteht sich, dass die letzten beiden Schritte, d. h. das Eintauchen in Ziegen-Antiserum zum Kaninchen-IgG gefolgt von Kaninchen-Antiserum zum Ziegen-IgG beliebig oft wiederholt werden kann, um einen Film zu bilden, der eine n-molekulare Proteinschicht enthält.
In einem weiteren Beispiel gemäss dem vorliegenden Verfahren wurde eine bestimmte Menge von Hepatitis-assoziierten Antigenpartikelchen an einen Objektträger adsorbiert. Der Objektträger wurde dann in eine Probe mit menschlichem Serum eingetaucht. Der Objektträger wurde als nächstes in eine Lösung von Kaninchen-Antikörpern gegenüber dem menschlichen Hepatitis-Antikörper eingetaucht. Wenn das menschliche Testserum also Hepatitis-Antikörper enthielt, wies der Objektträger Hepatitis-assoziiertes Antigen auf, an welchem Hepatitis-Antikörper immunologisch gebunden waren und ausserdem Kaninchen-Anti-Menschenhepatitis Antikörper, die immunologisch an die Hepatitis-Antikörper gebunden waren. Wenn andererseits die Serumprobe negativ wäre, würde der Träger lediglich die ursprünglich aufgebrachten Hepatitis-assoziierten Antigenpartikel aufweisen.
Es wurde gefunden, dass dieses Verfahren der vorliegenden Erfindung die Nachweisbarkeit von menschlicher Hepatitis gegenüber dem Verfahren, in welchem der Hepatitis-Antikörper allein an das Hepatitis-assoziierte Antigen gebunden wurde, wesentlich verbesserte. Dieses Beispiel zeigt auch, dass das erfindungsgemässe Verfahren eine besondere Anwendbarkeit in solchen Fällen hat, in denen das ursprüngliche Protein-einschliessende Partikel, das auf dem Objektträger aufgebracht wird, wesentlich grösser ist, als dessen spezifisch reagierendes Protein.
Fig. 2 zeigt einen Schnitt eines Aufrisses, der einen multimolekularen Proteinfilm auf einem Objektträger zeigt. Am Objektträger 60 kann beispielsweise, in Übereinstimmung mit dem ersten, oben angegebenen Beispiel, eine monomolekulare Schicht 61 aus Rinderserum-Albumin adsorbiert sein. Das Eintauchen in Kaninchen-Antiserum zum Rinderserum-Albumin wird eine zweite monomolekulare Schicht 62 über der Schicht 61 durch spezifische immunologische Reaktionen aufbringen. Das anschliessende Eintauchen in Ziegen-Antiserum zum Kaninchen-IgG wird eine monomolekulare Schicht 63 immunologisch an Schicht 62 binden, wenn Schicht 62 vorhanden ist. Auf ähnliche Weise wird Schicht 64, die Kaninchenanti-Ziegen-IgG enthält, gebildet, indem IgG durch Eintauchen in Kaninchen-Antiserum zum Ziegen-IgG an den Träger gebunden wird. Wie oben angegeben, kann dieses Verfahren fortgesetzt werden.
Aber da das Binden von Schichten eine spezifische, immunologische Reaktion ist, wird das Verfahren unwiderruflich unterbrochen, wenn eine der Schichten nicht gebildet wird. Die Struktur von Fig. 2 hat eine spezifische Verwendbarkeit zum hochempfindlichen Nachweis des Proteins, das in Schicht 62 enthalten ist. Schicht 61 ist durch Adsorption, das ein nicht spezifisches Verfahren ist, auf Träger 60 aufgetragen. Alle nachfolgenden Verfahren sind jedoch spezifisch. Wenn also eine Testprobe das spezifisch reagierende Protein zu dem Protein von Schicht 61 enthält, wird Schicht 62 gebildet und entsprechend der vorliegenden Erfindung kann eine Proteinschicht in n-molekularer Ausführung darauf gebildet werden.
Wenn andererseits die Testprobe kein immunologisch reaktionsfähiges Protein zu dem Protein von Schicht 61 enthält, wird Schicht 62 nicht gebildet und weitere Schichten können deshalb auch nicht gebildet werden. Deshalb kann ein Protein, das von besonderem Interesse in einer Probe ist, mit jedem beliebigen Grad von Sensitivität nachgewiesen werden, indem man zwischen einer monomolekularen Proteinschicht auf einem Objektträger und einer Schicht von irgendeiner beliebigen Dicke unterscheidet.
Fig. 3 zeigt einen Querschnitt eines Aufrissen eines Trägers, der eine weitere Verwendbarkeit für das erfindungsgemässe Verfahren illustriert. Fig. 3 illustriert die Verwendbarkeit der vorliegenden Erfindung zum Nachweis von Proteinen, die in physiologischen Proben in Konzentrationen vorhanden sind, die zu verdünnt sind, um eine vollständige Schicht auf einem Träger zu bilden. Als ein Beispiel für die Verwendung spezifischer Proteine, ohne dieses Beispiel auf diese Proteine zu begrenzen, hat Objektträger 70 eine monomolekulare Schicht von menschlichen Hepatitis-Antikörpern 71 adsorbiert. Dieser Objektträger wird in eine Blutprobe eingetaucht und eine Vielzahl von Hepatitis-assoziierten Antigenpartikeln 77 werden immunologisch daran gebunden, wenn sie in der Probe zugegen sind.
Der Objektträger wird dann in eine Lösung von Affen-Hepatitis-Antikörpern getaucht, um eine Schicht von Molekülen 72 daraus an die Hepatitis-assoziierten Antigenpartikel zu binden, so dass eine weitere Schicht auf dem Objektträgeraufgebracht wird. Der Objektträger wird als nächstes in eine Lösung von Kaninchen-Antiserum zum Affen-IgG getaucht, um eine Schicht von Molekülen 73 über den Affen Hepatitis-Antikörpermolekülen zu binden. Es versteht sich, dass die Schicht von Molekülen 72 auch aus menschlichen Hepatitis-Antikörpern 71 gebildet werden könnte.
Wenn dies jedoch getan würde, müsste die nächste Schicht aus Anti Menschen-IgG-Molekülen bestehen, die jedoch nicht nur mit jenen Antikörpern, die die Hepatitis-assoziierten Antigenpartikel 77 umgeben, sondern auch mit der ursprünglichen Schicht von Molekülen 71 reagieren würden, wodurch der Zweck des erfindungsgemässen Verfahrens verfehlt wäre. Das nächste Eintauchen des Objektträgers könnte beispielsweise in Ziegen Antiserum zum Kaninchen-IgG erfolgen, um eine Schicht von Molekülen 74 daran zu bilden. Dieses Verfahren wird mehrfach wiederholt, wie allgemein durch das Volumen 75 angegeben ist, bis ein Punkt erreicht wird, bei welchem eine letzte monomolekulare Proteinschicht 76 alle freien Räume zwischen den Partikeln 77 auf dem Objektträger ausfüllt.
Diese Ausführungsform der vorliegenden Erfindung zeigt die Bildung einer Proteinschicht von wenigstens bimolekularer Dicke auf der Gesamtoberfläche des Objektträgers und ist insbesondere verwendbar für chemische und elektrische Nachweismethoden, wie sie in der CH-PS 579 777 beschrieben sind.