CH628087A5

CH628087A5 - Vorrichtung zur bestimmung der influenz-neuraminidase.

Info

Publication number: CH628087A5
Application number: CH1465276A
Authority: CH
Inventors: Gyula Dr Takatsy; Katalin Dr Barb; Istvan Dipl Ing Murany; Gabriella Dipl In Burda-Fixmer
Original assignee: Mueszeripari Muevek Lab
Priority date: 1975-12-30
Filing date: 1976-11-22
Publication date: 1982-02-15
Also published as: HU171609B; DE2653267A1; US4116777A

Description

Die Erfindung betrifft eine Vorrichtung, mit welcher die Influenz-Neuraminidase bestimmt werden kann.

Eine der wichtigsten laboratoriumsmässigen Aufgaben im Kampf gegen die Influenz (Grippe) besteht darin, die ständigen Veränderungen des Oberflächeneiweisses (der Hülle) des Virus so schnell wie möglich und so genau wie möglich zu bestimmen, da nur in Kenntnis dieser Veränderungen wirksame Impfstoffe hergestellt werden können beziehungsweise Informationen darüber erhalten werden können, in welchem Masse die Bevölkerung gegen Grippe geschützt ist.

Für die laboratoriumsmässige Untersuchung des einen der beiden Oberflächeneiweisse beziehungsweise Antigene des Grippe-Virus, und zwar des sogenannten Haemagglutinins, steht eine Mikromethode zur Verfügung. Die Untersuchung des zweiten Oberflächenantigens, des sogenannten Neurami-nidase-Enzyms, kann jedoch gegenwärtig nur mit Hilfe der ausserordentlich umständlichen und komplizierten Epruvet-tenmethode vorgenommen werden.

Diese Methode beruht auf der Grundlage, dass das Ober-flächenantigen des Virus in seiner Eigenschaft als Enzym imstande ist, aus einem geeigneten Mucoprotein-Substrat N-Ace-tylneuraminsäure (NANA) freizusetzen. Diese kann durch Zugabe geeigneter Reagentien kolorimetrisch bestimmt werden. Aus der Aktivität des Enzyms kann einesteils auf die Eigenschaften der Oberflächenantigene des Virus, zum anderen durch die Hemmung der Enzyme mittels spezifischer Antikörper auf die Verwandschaftsverhältnisse der Viren beziehungsweise die Spezifität der Antikörper geschlossen werden.

Die gegenwärtig angewendete Epruvettenmethode ist daher schwierig und kompliziert, weil die Farbreaktion lediglich in einem bestimmten engen Temperaturbereich (90-95°C) vor sich geht beziehungsweise nur in diesem Temperaturbereich stabil ist. Da die Farbsubstanz unter diesen Bedingungen für kolorimetrische Messungen ungeeignet ist, muss sie aus dem Gemisch mit Butanol ausgeschüttelt und zentrifugiert werden. Auch dabei muss jedoch schnell gearbeitet werden, da sich die Farbreaktion zwischenzeitlich ändern kann. Die Epruvetten müssen einzeln behandelt werden, die Farbintensität muss mit einem Spektrophotometer bestimmt werden, und dies macht die Reaktion derart umständlich, dass Massenuntersuchungen mit dieser Methode beinahe unmöglich sind. Gerade durch Massenuntersuchungen könnte jedoch nicht nur ein Vergleich der Viren durchgeführt werden, sondern sie wäre auch für den Erhalt von Informationen über die Geschütztheit der Bevölkerung von hoher Wichtigkeit.

Ziel der Erfindung ist es, die genannten Nachteile zu beseitigen und eine Vorrichtung auszuarbeiten, mit der die Messungen an einer grossen Zahl von Objekten ohne Schwierigkeiten innerhalb kurzer Zeit kontinuierlich mit geringem Arbeitsaufwand durchgeführt werden können.

Die Erfindung beruht auf der Erkenntnis, dass obiges Ziel erreicht werden kann, wenn unter Anwendimg des Mikroprin-zips die Reaktion nicht in Epruvetten, sondern in den Vertiefungen einer speziell für diesen Zweck ausgebildeten Titrierplatte vorgenommen wird. Das Aufheizen des Reaktionsgemisches geschieht vorteilhafterweise mit einem speziellen Heizeinsatz.

Gegenstand der Erfindung ist demnach eine Vorrichtung zur Bestimmung der Influenz-Neuraminidase. Das Wesen der erfindungsgemässen Vorrichtung besteht darin, dass sie über eine mit das Reaktionsgemisch aufnehmenden Bohrungen versehene Titrierplatte, eine mit in die Bohrungen der Titrierplatte einsenkbaren Heizelementen versehene Heizauflage und über die Heizauflage in bezug auf die Titrierplatte positionierende Elemente verfügt. Die Heizelemente können zweckmässig einen wärmeisolierenden Schaft und eine Heizspitze haben.

Die Erfindung wird anhand der Zeichnung in Zusammenhang mit einer konkreten Ausführungsform der erfindungsgemässen Vorrichtung näher erläutert. Die Abbildung zeigt die erfindungsgemässe Vorrichtung in zum Teil geschnittener Seitenansicht.

Die Vorrichtung besteht aus einer Titrierplatte 1 und einer Heizauflage 2. In der Titrierplatte 1 sind zur Aufnahme des Reaktionsgemisches dienende Bohrungen 4 ausgebildet. Auf der Heizauflage 2 sind in einer der Verteilung der Bohrungen 4 der Titrierplatte 1 entsprechenden Weise Heizelemente 7 angeordnet. Der Schaft 5 der Heizelemente 7 ist aus wärmeisolierendem Material gefertigt, ihre Spitzen 3 sind als Heizspitzen ausgebildet. Für die Führung (Positionierung) der Titrierplatte 1 und der Heizauflage 2 zueinander sind Positionierelemente 6 vorgesehen, welche im Falle der als Beispiel gewählten Ausführungsform aus einem sich an die Heizauflage 2 anschliessenden Zapfen und den in der Titrierplatte 1 ausgebildeten Bohrungen bestehen.

Bei der erfindungsgemässen Vorrichtung wird die Reaktion in den Bohrungen 4 der Titrierplatte 1 vorgenommen. Die Verdünnungen der Antikörper für die Enzym- beziehungsweise Enzymhemmreaktion werden mit der Verdünnungsvorrichtung eines Mikrotitrators vorgenommen. Das Vorlegen der Verdünnungsflüssigkeit beziehungsweise der Reagentien geschieht mit auf 25 [im beziehungsweise 50 (im kalibrierten Pipetten. Zwecks Aufheizung des Reaktionsgemisches werden die Heizelemente 7 der Heizauflage 2 in die Bohrungen 4 der Titrierplatte 1 eingeführt. Da das Aufheizen lediglich durch die Heizspitzen 3 der Heizelemente 7 geschieht, kommt in dem Reaktionsgemisch eine konvektive Strömung zustande, und dadurch wird das Reaktionsgemisch gleichzeitig beheizt und vermischt.

Dadurch geht die Farbreaktion schnell vor sich. Nach dem Abheben der Heizauflage kann die Farbintensität sofort abgelesen und die den Titer repräsentierende 50%ige Farbreaktion bei jeder Titerreihe durch Vergleich bestimmt werden.

Die Heizauflage kann durch eine Stromquelle veränderlicher Spannung oder durch einen mit Temperaturfühlern versehenen Temperaturschalter mit Energie versorgt werden.

Die erfindungsgemässe Vorrichtung verfügt über sämtliche Vorteile des Mikrotitrators. Der Materialbedarf sinkt bei Anwendung der erfindungsgemässen Vorrichtung auf ein Zehntel, die für die Reihenverdünnungen notwendige Zeit sinkt ebenfalls auf ein Zehntel. Das Abmessen der Reagentien geschieht schneller und genauer, wodurch die Stabilität der Reaktion ebenfalls gesteigert wird. Das Aufheizen des Reaktionsgemisches geht schneller und gleichmässiger vor sich, und es sind dazu keine komplizierten, schwer handhabbaren Wasser5

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bäder erforderlich. Die Auswertung der Ergebnisse kann um Grössenordnungen schneller vorgenommen werden, als dies bei den bekannten Methoden der Fall ist.

Der bedeutendste Vorteil der Vorrichtung besteht jedoch darin, dass bei Vorhandensein einer entsprechenden Anzahl

Titrierplatten eine beinahe unbeschränkte Anzahl von Untersuchungen kontinuierlich durchgeführt werden kann. Aus diesem Grunde ist die erfindungsgemässe Vorrichtung auch für Massen- und Reihenuntersuchungen geeignet, welche bislang 5 mit den bekannten Methoden undurchführbar waren.

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1 Blatt Zeichnungen

Claims

628 087 2 PATENTANSPRÜCHE

1. Vorrichtung zur Bestimmung der Influenz-Neuramini-dase, dadurch gekennzeichnet, dass sie über eine mit das Reaktionsgemisch aufnehmenden Bohrungen (4) versehene Titrierplatte (1), eine mit in die Bohrungen (4) der Titrierplatte (1) einsenkbaren Heizelementen (7) versehene Heizauflage (2) und über die Heizauflage (2) in bezug auf die Titrierplatte (1) positionierende Elemente (6) verfügt.

2. Vorrichtung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die Heizelemente (7) wärmeisolierende Schäfte (5) und Heizspitzen (3) aufweisen.