CH630807A5 - Verfahren zur herstellung eines antiserums. - Google Patents
Verfahren zur herstellung eines antiserums. Download PDFInfo
- Publication number
- CH630807A5 CH630807A5 CH571377A CH571377A CH630807A5 CH 630807 A5 CH630807 A5 CH 630807A5 CH 571377 A CH571377 A CH 571377A CH 571377 A CH571377 A CH 571377A CH 630807 A5 CH630807 A5 CH 630807A5
- Authority
- CH
- Switzerland
- Prior art keywords
- neuraminidase
- antigen
- adjuvant
- yes
- germs
- Prior art date
Links
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 5
- 108010006232 Neuraminidase Proteins 0.000 claims description 45
- 102000005348 Neuraminidase Human genes 0.000 claims description 44
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 25
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 25
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 25
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 3
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 14
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 11
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 10
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 9
- 241000607626 Vibrio cholerae Species 0.000 description 8
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 8
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 8
- 229940118696 vibrio cholerae Drugs 0.000 description 8
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 7
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 5
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 5
- 241000710799 Rubella virus Species 0.000 description 4
- 241000293869 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium Species 0.000 description 4
- BQINXKOTJQCISL-GRCPKETISA-N keto-neuraminic acid Chemical compound OC(=O)C(=O)C[C@H](O)[C@@H](N)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO BQINXKOTJQCISL-GRCPKETISA-N 0.000 description 4
- CERZMXAJYMMUDR-UHFFFAOYSA-N neuraminic acid Natural products NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO CERZMXAJYMMUDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- SQVRNKJHWKZAKO-PFQGKNLYSA-N N-acetyl-beta-neuraminic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)O[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-PFQGKNLYSA-N 0.000 description 3
- 230000000240 adjuvant effect Effects 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 3
- 241000293871 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhi Species 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N beta-N-Acetyl-D-neuraminic acid Natural products CC(=O)NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 2
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 101001094887 Ambrosia artemisiifolia Pectate lyase 1 Proteins 0.000 description 1
- 101001123576 Ambrosia artemisiifolia Pectate lyase 2 Proteins 0.000 description 1
- 101001123572 Ambrosia artemisiifolia Pectate lyase 3 Proteins 0.000 description 1
- 101000573177 Ambrosia artemisiifolia Pectate lyase 5 Proteins 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 101000583741 Clostridium perfringens Sialidase Proteins 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 102000012404 Orosomucoid Human genes 0.000 description 1
- 108010061952 Orosomucoid Proteins 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 102100028755 Sialidase-2 Human genes 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 description 1
- 150000002338 glycosides Chemical class 0.000 description 1
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 229940124452 immunizing agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003022 immunostimulating agent Substances 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000010534 mechanism of action Effects 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
- A61K38/46—Hydrolases (3)
- A61K38/47—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2), e.g. cellulases, lactases
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55511—Organic adjuvants
- A61K2039/55516—Proteins; Peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Mycology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Description
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung eines Antiserums und Mittel zur Durchführung des Verfahrens.
Es ist lange bekannt, dass die immunologische Antwort von Organismen, die durch die Applikation von Antigenen provoziert wird, durch Zusatz bestimmter Stoffe beeinflusst werden kann. Bei einem fördernden Einfluss derartiger unterstützender Bestandteile von immunologisch wirksamen Substanzen werden diese als Adjuvantien bezeichnet. Ad-juvantien sind sehr verschiedenen Stoffklassen zuzuordnen. Über deren Wirkungsmechanismus bestehen nur Vermutungen. Ihre Güte ist demnach nur durch vergleichende Experimente zu beurteilen, so dass eine Voraussage über die Ad-juvanswirkung einer noch nicht erprobten Substanz nur bedingt möglich ist.
Wegen der grossen wirtschaftlichen Bedeutung von immunisierenden Agentien in der Prophylaxe wie in der Therapie einer Reihe von Erkrankungen ist die Auffindung einer Adjuvanswirkung einer Substanz von grossem wirtschaftlichen Interesse.
Es wurde nun überraschend gefunden, dass das Enzym Neuraminidase (Glycoprotein-N-Acetylneuraminyl-Hydro-lase, klassifiziert unter EC. 3.2.1.18) ein wertvolles immunstimulierendes Agens, ein sogenanntes Adjuvans, darstellt.
Es ist bekannt, dass die Immunogenität von Glyco-proteinen durch die Entfernung der N-Acetylneuraminsäure mit Hilfe des Enzyms Neuraminidase signifikant gesteigert werden kann. Die Steigerung der Immunogenität ist jedoch in diesen Fällen eindeutig durch die Wirksamkeit der Neuraminidase auf das Antigen zu erklären, die durch den enzymatischen Angriff auf den Glycosid-Anteil des Glyco-proteins neue antigene Determinanten freisetzt. Nach der Abspaltung der N-Acetyl-neuraminsäure-Reste kann das Desialo-Glycoprotein von der Neuraminidase getrennt zur Immunisierung eingesetzt werden.
Erfindungsgemäss wurde nun gefunden, dass die Neuraminidase als unterstützender Bestandteil von Antigenen deren Wirkung in Immunsystemen fördert. Gegenstand der Erfindung ist demnach ein Verfahren zur Herstellung eines Antiserums, das dadurch gekennzeichnet ist, dass man ein Mittel, bestehend aus einem Gemisch von Antigen und Neuraminidase einem Tier verabreicht, nach der Bildung von Antikörpern im Blut dieses entnimmt und in üblicher Weise das Serum gewinnt. Gegenstand der Erfindung ist ferner ein Mittel zur Durchführung des Verfahrens.
Die Neuraminidase in diesen Mitteln wird zweckmässig in einer Menge von 0,01-150, vorzugsweise 0,5-50, in vielen Fällen auch 5-50 Einheiten pro immunisierender Dosis, eingesetzt.
Unter der Bezeichnung Neuraminidase wird eine Reihe von bekannten Enzymen zusammengefasst, die aus neuraminsäurehaltigen Glycoproteinen die Neuraminsäure abzuspalten vermögen. Ihre Gewinnung und Reinigung ist aus der Literatur bekannt. Die im Sinne der Erfindung als Adjuvans verwendbaren Neuraminidasen sind gekennzeichnet durch ihre Aktivität, die a-ketosidische Bindung zwi-s sehen der Neuraminsäure und einem Zuckerpartner zu hy-drolisieren. Vorzugsweise werden diejenigen Neuraminidasen verwendet, welche die Bindungen 2-»3,2->4,2->6 und 2 -*■ 8 hydrolisieren. Besonders wirksam ist demzufolge die aus Vibrio Cholerae erhaltene Neuraminidase, von der io bekannt ist, dass sie alle vier Bindungstypen zu hydrolisieren vermag. Eine ähnliche Aktivität zeigt die Neuraminidase von Clostridium perfringens. Es sind jedoch auch virale Neuraminidasen im Sinne der Erfindung wirksam, auch wenn sie nicht die breite Spezifität der bakteriellen Enzyme i5 besitzen. Neben den von Mirkoorganismen zu gewinnenden Neuraminidasen können auch aus dem Plasma oder Organen von Wirbeltieren erhältlichen Neuraminidasen im Sinne der Erfindung verwendet werden.
Zweckmässig werden solche Neuraminidasepräparate als 20 Adjuvans verwendet, welche mit der Sorgfalt üblicher pharmazeutischer Zubereitung hergestellt wurden.
Die pro-Dosis eines Antigens zuzusetzende Menge des Adjuvans Neuraminidase wird zweckmässig in Einheiten der Aktivität des Enzyms ausgedrückt. Eine Neuraminidase-25 Einheit ist die Menge des Enzyms, die benötigt wird, um 1 Mikrogramm N-Acetylneuraminsäure aus humanem ct!-Glycoprotein (Orosomucoid) in 0,05molarem Natrium-acetatpuffer vom pH-Wert 5,5 mit dem Zusatz von 9 mg/ml Kochsalz und 1 mg/ml Calciumchlorid in 15 Minuten bei 30 73 °C freizusetzen [E. Mohr und G. Schramm, Z. Naturf. 15b, (1960), Seite 568, und Schultze et al. (1959)]. Ein Vergleich der Enzymaktivität nach Schramm und Mohr, und andere Definitionen der enzymatischen Aktivität von Neuraminidase ist von Schick und Zilg (1977) gegeben wor-35 den. Wegen der Möglichkeit, dass Neuraminidase auf neur-aminsäurehaltige Antigene eine antigenändernde Wirksamkeit ausüben kann, sind bei den im Rahmen der Erfindung durchgeführten Versuche zumeist neuraminsäurefreie Antigene verwendet worden. Dies kann jedoch den Erfindungs-40 gegenständ nicht auf derartige Verbindungen einengen, um so mehr, als Neuraminidase bislang nicht gemeinsam mit neuraminsäuretragenden Antigenen zur Immunisierung verwendet wurde. In der Regel wurden die mit Neuraminidase inkubierten Glycoprotein-Antigene nach der Inkubation 45 mehrfach gewaschen und auf diese Weise die Neuraminidase entfernt.
Die Entfernung (Waschen) einer zunächst zu dem Antigen zugegebenen Menge Neuraminidase führt zu keiner nennenswerten Stimulierung der Immunantwort gegen das so Antigen. Eine Keimsuspension von neuraminsäurefreien Escherichia Coli-Keimen verursacht bei Mäusen in Anwesenheit von Neuraminidase einerseits eine frühere Antikörper-Reaktion, anderseits höhere Antikörper-Spiegel im Serum als eine neuraminidasefreie Keimsuspension. 55 Das zeigt der folgende Versuch:
Mäuse wurden mit 2 x 108 Keimen von abgetöteten E. Coli/Maus zusammen mit verschiedenen Mengen Vibrio Cholerae Neuraminidase intraperitonial immunisiert. Bei einem Teil der Mäuse wurde die Neuraminidase zunächst zu 6o den abgetöteten E. Coli-Keimen zugesetzt, danach jedoch wurde die Neuraminidase durch Zentrifugation der Keime von den Keimen entfernt, diese in geeignetem Puffermedium resuspendiert und diese Massnahme 3mal wiederholt. Ein anderer Teil der Mäuse erhielt die E. Coli-Keime zusammen 65 mit Vibrio Cholerae Neuraminidase.
Die Tabelle 1 zeigt die Antikörper-Titer im Blut der verschiedenen Mäusegruppen am 5. und 20. Tag nach erfolgter Immunisierung.
3
630 807
Tabelle 1
Immunisierung von Mäusen mit neuraminsäurefreien E. Coli-Keimen
Antigen E. Coli + Adjuvans Mittlerer Antikörpertiter
2 x 108/Maus Vibrio Cholerae ± Standardabweichung am
Tag
5
20
ja kein
10 +
10
160+120
ja
0,5 E
60+
40
640 + 240
ja
0,5 E gewaschen
10+
10
130+ 60
ja
0,05 E
10+
10
320+140
ja
5 E
160+
120
640 + 320
ja
5 E gewaschen
10+
10
160+100
ja
50 E
80+
40
320+160
ja
50 E gewaschen
10+
10
160+ 80
Die Stimulierung der immunologischen Antwort wird unabhängig von der Art der Verabreichung des Antigens gemeinsam mit der Neuraminidase wirksam, z.B. bei intraperitonealer, subcutaner, intradermaler oder intramuskulärer Gabe. Die angegebennen Antikörper sind im Bakterizidie-test gemessen.
Vergleichbare Ergebnisse werden in einem Immunisierungsversuch mit Vibrio Cholerae erhalten. In der indirekten Hämagglutinationstestung mit Hilfe des Vibrio Cholerae Lipopolysaccharids findet man zu der Tabelle 1 analoge Resultate.
Die Adjuvanswirkung von Neuraminidase kann darüber hinaus auch für Virusantigene, z.B. das Röteln-Virus, nachgewiesen werden (s. Tabelle 2).
Tabelle 2
Immunisierung von Mäusen mit Röteln-Virus
Antigen + Adjuvans Mittlerer
Röteln-Virus (Vibrio Cholerae) Hämagglutinations-Neuraminidase) Hemmungs-Titer
± Standard-Abweichung ja 0,0 82+ 98
ja 0,5 E pro Maus 105+ 83
ja 5 E pro Maus 461 + 246
ja 50 E pro Maus 89 ± 47
nein 5 E pro Maus 8
Mit dem gleichen System kann demonstriert werden,
dass eine Zweit-Immunisierung (Boosterung) mit sehr gutem
Erfolg durchführbar ist, wobei ebenfalls die mit Neuraminidase versetzten Virussuspensionen eine erhöhte Immunantwort bewirken.
Statt mit partikulärem Antigenmaterial, wie dies beispiel-5 haft an der Keimsuspension von Escherichia Coli, Vibrio Cholerae und von Röteln-Virus gezeigt worden ist, kann die Adjuvanswirkung auch mit löslichen Antigenen nachgewiesen werden.
Wird beispielsweise eine Immunisierung von Mäusen mit io Rinderserum-Albumin vorgenommen, so findet man ebenfalls in den mit Neuraminidase versetzten Antigen-präparationen eine Steigerung der immunologischen Antwort. Sie ist mit Hilfe der indirekten Hämagglutination von mit Rinderserum-Albumin beladenen Hammelerythrozyten i5 nachweisbar.
Neuraminidase ist zudem geeignet, eine immunologische Toleranz zu durchbrechen. Hierfür haben sich Neuramini-dasemengen pro Dosis von etwa 0,5-5 Einheiten als wirksam erwiesen, wohingegen deutlich höhere Dosen zu weniger 20 ausgeprägten Reaktionen führten.
Mit Neuraminidase als Adjuvans lässt sich ferner experimentell eine Antikörper-Antwort gegen Schaferythrozyten steigern. Dies kann mit der als Jerne-Technik bekannten Methode des Nachweises der «plaque forming cells» aus den 25 Milzen der immunisierten Tiere nachgewiesen werden. Auch mit diesem Versuchsansatz ist belegbar, dass ein nachfolgendes Waschen der mit Neuraminidase inkubierten Erythrozyten die immunologische Antwort nicht zu stimulieren vermag^
30 Über die vorhergehend demonstrierten Versuche zur Steigerung der Antikörperbildung mit Hilfe des Enzyms Neuraminidase hinaus, führt das erfindungsgemässe Adjuvans zu einer verbesserten Infektionsabwehr.
Die Tabelle 3 zeigt das Ergebnis eines Versuchs, in wel-35 chem Mäuse mit S. typhimurium mit und ohne Adjuvans-zugabe immunisiert wurden. Dazu erhielten die Mäuse am 1. und 14. Tag jeweils 4 x 107 abgetötete Keime von S. typhimurium. Am 28. Tag nach der ersten Injektion wurden die Tiere mit 2 x 105 virulenten S. typhimurium intravenös in-40 fiziert. Zur Feststellung des Immunisierungserfolges wurden am 1., 3. und 8. Tag nach der Infektion einige Tiere aus den einzelnen Gruppen getötet, die Leber und die Milz entnommen und die darin enthaltenen Lebendkeime bestimmt. In der folgenden Tabelle sind die Lebendkeimzahlen aufge-45 führt. Die restlichen Tiere der einzelnen Gruppen wurden bis zum 28. Tag beobachtet und die Anzahl der überlebenden Tiere festgestellt. Die prozentuale Überlebensrate der Tiere ist ebenfalls in der Tabelle 3 angegeben.
Tabelle 3
Antigen
Adjuvans
Lebendkeime in Leber und Milz am Tag + Standard-Abweichung 1 3
8
Über lebende
8 x 103
6 x 104
4 x 107
kein kein
+ 1 x 103
+2x 104
+3 x 107
30%
8x 103
2,5 x 105
6 x 105
S. typhi.
kein
+ 3x 103
+ 1 x 105
+ 3 x 105
45%
1,5 x 104
2,5 x 104
2,4 x 104
S. typhi.
Neuraminidase
+0,2 xlO4
+ 2,2 x 104
+2,3 x 104
70%
5 E pro Dosis
Das Neuraminidase enthaltende Antigen S. typhimurium führt zu einer deutlich verringerten Lebendkeimzahl in den Organen und einer verbesserten Überlebensrate der Tiere.
Wie in den Versuchsbeispielen gezeigt, ist die Neuraminidase als Adjuvans für verschiedenste Antigenpräparationen brauchbar. Es liegt demnach im Sinne der Erfindung, die 65 Neuraminidase sowohl löslich als partikulären, lebenden wie toten, von Mikroorganismen und von höheren Tieren gewinnbaren Antigenen einzusetzen. Erfindungswesentlich ist, dass die Neuraminidase gleichzeitig mit dem Antigen ap-
630807
pliziert wird, gegen das eine spezifisch gesteigerte immunologische Antwort des behandelten Wertes erreicht werden soll. Eine besondere praktische Bedeutung hat das Adjuvans ausser der erfindungsgemässen Verwendung unter anderem bei der Infektionsabwehr, aber auch in der Erhöhung der immunologischen Antwort bei der Verabreichung von Gewebezellen, beispielsweise aus Tumorgewebe. Erfindungsge-
mäss wird Neuraminidase als Adjuvans bei der Herstellung von Antiseren gegen definierte Antigene eingesetzt, da hierbei mit der gleichen Menge des erforderlichen Antigens eine bedeutende Erhöhung der Ausbeute des zu gewinnenden s Antikörpers aus dem Serum der immunisierten Tiere erreicht . werden kann.
Claims (3)
1. Verfahren zur Herstellung eines Antiserums, dadurch gekennzeichnet, dass man ein Mittel, bestehend aus einem Gemisch von Antigen und Neuraminidase einem Tier verabreicht, nach der Bildung von Antikörpern im Blut dieses entnimmt und das Serum gewinnt.
2. Mittel zur Durchführung des Verfahrens nach Anspruch 1.
3. Mittel nach Anspruch 2, enthaltend 0,01 bis 150 Einheiten Neuraminidase pro Antigendosis.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE2620649A DE2620649C3 (de) | 1976-05-11 | 1976-05-11 | Immunologisches Adjuvans |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CH630807A5 true CH630807A5 (de) | 1982-07-15 |
Family
ID=5977559
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CH571377A CH630807A5 (de) | 1976-05-11 | 1977-05-06 | Verfahren zur herstellung eines antiserums. |
Country Status (17)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4510129A (de) |
| JP (1) | JPS52136914A (de) |
| AT (1) | AT363590B (de) |
| AU (1) | AU512240B2 (de) |
| BE (1) | BE854512A (de) |
| CA (1) | CA1077841A (de) |
| CH (1) | CH630807A5 (de) |
| DE (1) | DE2620649C3 (de) |
| DK (1) | DK204277A (de) |
| FR (1) | FR2350847A1 (de) |
| GB (1) | GB1569003A (de) |
| IE (1) | IE45145B1 (de) |
| IL (1) | IL52048A (de) |
| IT (1) | IT1075545B (de) |
| LU (1) | LU77295A1 (de) |
| NL (1) | NL7704998A (de) |
| NZ (1) | NZ184039A (de) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1992003164A1 (en) * | 1990-08-17 | 1992-03-05 | The Wellcome Foundation Limited | Neuraminidase and galactose oxidase as vaccine adjuvant |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FI790483A7 (fi) * | 1978-02-16 | 1979-08-17 | Science Union & Cie | Foerfarande foer framstaellning av ett enzym av bakteriellt ursprung och farmaceutiska kompositioner innehaollande detsamma |
| US4729893A (en) * | 1984-12-26 | 1988-03-08 | Robert L. Letcher | Enteric encapsulation of ancrod for oral administration |
| US20030108927A1 (en) * | 2000-04-03 | 2003-06-12 | Kathryn Leishman | Compositions and methods for the prevention, treatment and detection of tuberculosis and other diseases |
| US7078165B2 (en) * | 2003-03-27 | 2006-07-18 | Institut Pasteur | Method for modulating Nod1 activity, use of a MTP related molecule for modulating Nod1 activity, and therapeutic applications thereof |
| GB0307989D0 (en) * | 2003-04-07 | 2003-05-14 | Mcewen Lab Ltd | Therapeutic composition |
| EP2900259B1 (de) * | 2012-09-28 | 2020-04-15 | Kline, Ellis | Glycosidase-dosierungsplan zur behandlung von infektionserkrankungen |
| ES2947312T3 (es) | 2016-07-01 | 2023-08-04 | Univ Leland Stanford Junior | Conjugados para la edición dirigida de la superficie celular |
| JP7462560B2 (ja) | 2018-01-03 | 2024-04-05 | パレオン ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド | 組換えヒトシアリダーゼ、シアリダーゼ融合タンパク質およびそれらの使用方法 |
-
1976
- 1976-05-11 DE DE2620649A patent/DE2620649C3/de not_active Expired
-
1977
- 1977-05-06 CH CH571377A patent/CH630807A5/de not_active IP Right Cessation
- 1977-05-06 NL NL7704998A patent/NL7704998A/xx not_active Application Discontinuation
- 1977-05-09 IL IL52048A patent/IL52048A/xx unknown
- 1977-05-09 GB GB19294/77A patent/GB1569003A/en not_active Expired
- 1977-05-09 NZ NZ184039A patent/NZ184039A/xx unknown
- 1977-05-09 IT IT23350/77A patent/IT1075545B/it active
- 1977-05-09 LU LU77295A patent/LU77295A1/xx unknown
- 1977-05-10 DK DK204277A patent/DK204277A/da not_active Application Discontinuation
- 1977-05-10 AU AU25033/77A patent/AU512240B2/en not_active Expired
- 1977-05-10 FR FR7714243A patent/FR2350847A1/fr active Granted
- 1977-05-10 CA CA278,034A patent/CA1077841A/en not_active Expired
- 1977-05-10 IE IE951/77A patent/IE45145B1/en not_active IP Right Cessation
- 1977-05-10 AT AT0332577A patent/AT363590B/de not_active IP Right Cessation
- 1977-05-11 BE BE177483A patent/BE854512A/xx not_active IP Right Cessation
- 1977-05-11 JP JP5416377A patent/JPS52136914A/ja active Granted
-
1982
- 1982-08-09 US US06/406,531 patent/US4510129A/en not_active Expired - Lifetime
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1992003164A1 (en) * | 1990-08-17 | 1992-03-05 | The Wellcome Foundation Limited | Neuraminidase and galactose oxidase as vaccine adjuvant |
| US6383498B1 (en) | 1990-08-17 | 2002-05-07 | Glaxo Wellcome Inc. | Compositions for vaccines |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| DK204277A (da) | 1977-11-12 |
| FR2350847A1 (fr) | 1977-12-09 |
| NZ184039A (en) | 1980-04-28 |
| BE854512A (fr) | 1977-11-14 |
| AT363590B (de) | 1981-08-10 |
| IE45145L (en) | 1977-11-11 |
| FR2350847B1 (de) | 1980-02-29 |
| DE2620649A1 (de) | 1977-11-17 |
| CA1077841A (en) | 1980-05-20 |
| IE45145B1 (en) | 1982-06-30 |
| US4510129A (en) | 1985-04-09 |
| JPS52136914A (en) | 1977-11-16 |
| AU2503377A (en) | 1978-11-16 |
| GB1569003A (en) | 1980-06-11 |
| AU512240B2 (en) | 1980-10-02 |
| DE2620649C3 (de) | 1980-11-06 |
| ATA332577A (de) | 1981-01-15 |
| DE2620649B2 (de) | 1980-03-13 |
| NL7704998A (nl) | 1977-11-15 |
| LU77295A1 (de) | 1977-12-13 |
| IL52048A0 (en) | 1977-07-31 |
| IT1075545B (it) | 1985-04-22 |
| IL52048A (en) | 1980-11-30 |
| JPS624371B2 (de) | 1987-01-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DE69128782T2 (de) | Oraler an der oberfläche von erythrozyten gebundene antigene beinhaltender impfstoff | |
| AT408615B (de) | Neue influenzavirus-impfstoffzusammensetzung | |
| DE69620001T2 (de) | Impfstoffe gegen grippe | |
| AT407958B (de) | Inaktivierte influenza-virus-vakzine zur nasalen oder oralen applikation | |
| DE68911019T2 (de) | Kombiniertes Hepatitis A- und B-Vakzin mit Adjuvans. | |
| EP0331102B1 (de) | Virusmodifizierte Tumorvakzinen für die Immuntherapie von Tumormetastasen | |
| DE3200813A1 (de) | "synthetischer impfstoff gegen virusinfektionen" | |
| DE3911442A1 (de) | Impfstoff-praeparation | |
| EP0304786A2 (de) | Intranasale Impfung von Pferden mit inaktivierten Mikroorganismen oder antigenem Material | |
| DE69528074T2 (de) | Chitosan induzierte verstärkung | |
| DE69232969T2 (de) | Methode zur herstellung von gram-negativen bakteriellen vakzinen | |
| DE2620649C3 (de) | Immunologisches Adjuvans | |
| DE3882781T2 (de) | Impfstoff gegen Pasteurella. | |
| DE3587681T2 (de) | Vakzine und Serum für Endotoxin assoziierte Krankheit und Verfahren zur Herstellung derselben sowie Verfahren zur Immunisierung und Behandlung solcher Krankheiten, enttoxifierte Endotoxine und bakterielle Mutante. | |
| DE2547105A1 (de) | N-acetyl-muramyl-l-alanyl-d-isoglutamin enthaltende oelfreie adjuvanzien | |
| DE3786301T2 (de) | Kombinierter Impfstoff. | |
| DE1617545C2 (de) | Verwendung von informatorischer Ribonucleinsäure als Vaccine | |
| DE3122669A1 (de) | "verfahren zur herstellung von neuen mutanten von herpes simplex-viren typ 1 und typ 2" | |
| DE1792256C3 (de) | Oral applizierbare, polyvalente Impfstoffe gegen lokale Darminfektionen | |
| DE1492243C3 (de) | Injizierbare Impfstoffe | |
| DE69116155T2 (de) | Neuramidase und glulaktoseoxidase als vaccinadjuvans | |
| DE1902590C2 (de) | Verwendung einer Immunribonucleinsäure (IRNS) zum Immunisieren lebender Tiere | |
| CH660125A5 (de) | Gereinigtes, entgiftetes endotoxin enthaltende zusammensetzung. | |
| DE2034118A1 (en) | Xenogenic nucleic acids for enhancing antigenicity - of peptides and proteins | |
| EP0271447B1 (de) | Vorbeugende Massnahmen zur Verhinderung der "Komplexen Respiratorischen Erkrankung bei Rindern" durch Verabreichung von Interferon |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PL | Patent ceased | ||
| PL | Patent ceased |