CH634352A5 - Test set - Google Patents

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CH634352A5
CH634352A5 CH1341676A CH1341676A CH634352A5 CH 634352 A5 CH634352 A5 CH 634352A5 CH 1341676 A CH1341676 A CH 1341676A CH 1341676 A CH1341676 A CH 1341676A CH 634352 A5 CH634352 A5 CH 634352A5
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CH
Switzerland
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agar
sodium
growth
pimaricin
chloride
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Application number
CH1341676A
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English (en)
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Mohamed Dr Abdou
Original Assignee
Boehringer Sohn Ingelheim
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Publication of CH634352A5 publication Critical patent/CH634352A5/de

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    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor

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Description

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PATENTANSPRUCH Test-Set aus 8 selektiven Nährmedien zur Bestimmung der Erregergattungen bei Entzündungen des Urogenitaltrakts, dadurch gekennzeichnet, dass er als N ährmedien modifizierten Lactose-Natriumheptadecylsulfat-P-Agar, Citrat-G-Agar,
modifizierten Ampholyt-Cadmiumsulfat-Glycerin-Agar, Phenyl-alanin-Lithiumchlorid-G-Agar,
modifizierten DNase-Ampholyt-Agar, Mannit-Kochsalz-Thio-cyanat-Agar,
modifizierten T.T.G-Azid-P-Agar und Pepton-Leberhydrolysat-Thiocyanat-Agar enthält, wobei der Citrat-G-Agar pro Liter Wasser 5 g Trinatri-umcitratdihydrat, 1 g Gallesalzgemisch, 0,1 g Pimaricin, 0,05 g Glucose, 0,25 g Hefeextrakt, 5 g Natriumchlorid, 0,2 g Magnesi-umsulfatheptahydrat, 0,2 g Ammoniumdihydrogenphosphat, 0,8 g Natriumammoniumhydrogenphosphat(tetrahydrat) 0,02 Phenolrot und 15 g Agar-Agar, der Phenylalanin-Lithiumchlo-rid-G-Agar pro Liter Wasser 10 g Proteose Pepton, 3 g Hefeextrakt, 5 g Natriumchlorid, 5,6 g Dinatriumhydrogenphosphat, 0,2 g Kaliumdihydrogenphosphat, 2 g L-Phenylalanin, 1 g Gallesalzmischung, 3 g Lithiumchlorid, 0,2 g Pimaricin und 16 g Agar-Agar, der Mannit-Kochsalz-Thiocyanat-Agar pro Liter Wasser 10 g Caseinpepton, 5 g Fleischextrakt, 5 g Gelatine, 10 g D-Mannit, 5 g Hefeextrakt, 10 g Natriumpyruvat, 6 g Dinatriumhydrogenphosphat, 5 g Lithiumchlorid, 5 g Natriumchlorid, 30 g Kaliumthiocyanat, 0,02 g Phenolrot, 0,2 g Pimaricin und 16 g Agar-Agar und der Pepton-Leberhydrolysat-Thiocyanat-Agar pro Liter Wasser 15 g Mykopepton-B, 1 g Leberhydroly-sat, 5 g Glucose, 3 g Hefeextrakt, 3 g Natriumchlorid, 0,25 g Magnesiumsulfat-heptahydrat, 0,001 g Mangan(II)chloridtetra-hydrat, 0,05 g Natriumheptadecylsulfat, 20 g Kaliumthiocyanat und 22 g Agar-Agar enthält, der Lactose-Natriumheptadecyl-sulfat-P-Agar zusammengesetzt ist aus Lactose 10,0g
Polypepton 5,0 g
Hefeextrakt 3,0 g
Natriumheptadecylsulfat 0,15 g
Pimaricin 0,1 g
Bromthymolblau 0,025 g
Agar-Agar 18,0 g und
Aquadest. 1 Liter und einen End-pH-Wert von 6,9 + 0,1 aufweist, der Ampholyt-Cadmiumsulfat-Glycerin-Agar zusammengesetzt ist aus
Proteose Pepton 20,0 g
N atriumchlorid 1,2 g
Dikaliumhydrogenphosphat 0,8 g
Kaliumnitrat 0,6 g
Calciumnitrat-tetrahydrat 0,4 g
Magnesiumsulfat-heptahydrat 0,6 g
Cadmiumsulfat-octahydrat 0,005 g
Glycerin 8,0 ml
N-Alkyl-aminocrotonsäure 0,5 g
Agar-Agar 15,0 g und
Aqua dest. 1 Liter und einen End-pH-Wert von 7,2 ± 0,1 aufweist, der DNase-Ampholyt-Agar zusammengesetzt ist aus Tryptose 16,0g
Desoxyribonucleinsäure 1,6 g
Natriumchlorid 4,0 g
N-alkyl-Aminocrotonsäure 0,15 g
Agar-Agar 12,0 g und
Aqua dest. 1 Liter und einen End-pH-Wert von 7,3 ± 0,1 aufweist und der T.T.C.-Azid-P-Agar zusammengesetzt ist aus Tryptose 20,0 g .
Hefeextrakt 5,0 g
Glucose
2,0 g
Dinatriumhydrogenphosphat
4,0 g
N atriumthiosulf at
0,3 g a-Liponsäure
0,001 g
Agar-Agar
15,0g
Pimaricin
0,1 g
2,3,5-Triphenyltetrazoliumchlorid
0,1 g
Natriumazid
0,8 g und
Aqua dest.
1 Liter und einen End-pH-Wert von 7,2 ± 0,1 aufweist.
Die Erfindung betrifft ein Test-Set aus 8 selektiven Nährmedien zur Bestimmung der Erregergattungen bei Entzündungen des Urogenitaltrakts.
Test-Sets zur Bestimmung von Mikroorganismen in ver-20 schiedenem Untersuchungsmaterial sind bereits beschrieben worden, beispielsweise in der deutschen Offenlegungsschrift 2 408 167. Die dort angegebenen Kombinationen bestehen jedoch aus bekannten Nährmedien, deren Selektivität nicht ausreicht, um die gewünschte Bestimmung der Erregergattun-25 gen zu ermöglichen.
Das erfindungsgemässe Test-Set vermeidet den Nachteil der unzureichenden Selektivität; es umfasst folgende Nährmedien:
1. Lactose-Natriumhaeptadecylsulfat-P-Agar (modifiziert) 30 2. Citrat-G-Agar (neu)
3. Ampholyt-Cadmiumsulfat-Glycerin-Agar (modifiziert)
4. Phenylalanin-Lithiumchlorid-G-Agar (neu)
5. DNase-Ampholyt-Agar (modifiziert)
6. Mannit-Kochsalz-Thiocyanat-Agar (neu) 35 7. T.T.C.-Azid-P-Agar (modifiziert)
8. Pepton-Leberhydrolysat-Thiocyanat-Agar (neu)
Bei den mit «neu» gekennzeichneten Nährböden handelt es sich um solche, die in gleicher oder ähnlicher Zusammensetzung bisher nicht beschrieben wurden. Als «modifiziert» wur-40 den diejenigen Nährböden gekennzeichnet, die von bekannten Nährmedien durch Veränderung der Mengen der Bestandteile und/oder Zugabe zusätzlicher Stoffe für den erfindungsgemäs-sen Zweck abgewandelt wurden.
Mit dem erfindungsgemässen Test-Set werden diejenigen 45 Erregergattungen schnell und qualitativ sicher erfasst, die für einen sehr hohen Prozentsatz von Harnwegsinfekten ursächlich sind (Escherichia, Proteus, Klebsiella, Enterobacter, Pseudomonas, Serratia, Providencia, Citrobacter, Staphylococcus, Streptococcus, Candida). In Verbindung mit der Sensibilitätsso bestimmung gemäss der DE-OS 2 301 211 schafft das erfindungsgemässe Test-Set die Grundlage für eine erfolgreiche Therapie.
Im folgenden werden Zusammensetzung, Zubereitung und Charakteristika der 8 Nährböden beschrieben. Abweichungen 55 von der angegebenen Zusammensetzung sind möglich, sofern sie die Selektivität und das Wachstum der Mikroorganismen nicht beeinträchtigen, was gegebenenfalls durch einfache Versuche zu überprüfen ist.
Die sterilisierten Nährböden werden zweckmässig in den 60 Unterteil steriler Tiefziehpackungen gefüllt, die einen gut schliessenden Deckel besitzen. Der Unterteil besitzt 8 in zwei Viererreihen angeordnete quadratische Vertiefungen von etwa 8-10 cm2 Grundfläche und 1,5—1 cm Tiefe. In jede Vertiefung gibt man einige ml, vorzugsweise etwa 5 bis 6 ml, der oben 65 genannten Nährböden. Die Packung wird dann mit dem Deckel verschlossen und in sterile Kunststoffolie eingesiegelt.
Die Bestandteile der Nährböden sind handelsübliche Produkte.
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1. Lactose-Natriumheptadecylsulfat Zusammensetzung
Lactose 10,0g
Polypepton 5,0 g
Hefeextrakt 3,0 g
N atriumheptadecylsulfat (T ergitol 7) 0,15 g
Pimaricin 0,1 g
Bromthymolblau 0,025 g
Agar-Agar 18,0g
Aqua dest. 1 Liter End-pH-Wert: 6,9 ± 0,1
Zubereitung
36,18 g der genannten Mischung, jedoch ohne Pimaricin, werden in 900 ml Aqua dest. suspendiert, eingeweicht, mit Hilfe eines Magnetrührers gut durchgemischt und anschliessend ca. 10-15 Minuten auf dem siedenden Wasserbad erhitzt. Die Suspension wird auf 50 °C abgekühlt und der pH-Wert gemessen (6,8 ± 0,1). Danach wird der Nährboden 15 Minuten bei 121 °C im Autoklav sterilisiert, auf 55 °C abgekühlt und mit 100 ml einer 0,l%igen sterilfiltrierten Pimaricinlösung versetzt, mit Hilfe eines Magnetrührers gut durchgemischt und zu 5,5-6,0 ml in Tiefziehpackungen verteilt.
Charakteristika
Natriumheptadecylsulfat in der angegebenen Konzentration hemmt das Wachstum der gram-positiven Erreger, nämlich Staphylococcus und Streptococcus.
Pimaricin in der genannten Konzentration hemmt das Wachstum von Candida und anderen Hefen und Schimmelpilzen.
In Kombination mit Citrat-G-Agar und Beweglichkeitstest können die Gattungen Citrobacter, Enterobacter, Escherichia und Klebsiella voneinander unterschieden werden.
2. Citrat-G-Agar Zusammensetzung
Trinatriumcitrat-dihydrat 5,0 g
Gallesalzmischung 1,0 g
Pimaricin 0,1 g
Glucose 0,05 g
Hefeextrakt 0,25 g
Natriumchlorid 5,0 g
Magnesiumsulfat-heptahydrat 0,2 g
Ammoniumdihydrogenphosphat 0,2 g Natrium-ammoniumhydrogenphosphat-tetra- 0,8 g hydrat
Phenolrot 0,02 g
Agar-Agar 15,0g
Aqua dest. 1 Liter End-pH-Wert: 7,1 ±0,1
Zubereitung
27,52 g der genannten Mischung, jedoch ohne Pimaricin, werden in 900 ml Aqua dest. suspendiert, eingeweicht und mit Hilfe eines Magnetrührers gut durchgemischt und anschliessend ca. 10-15 Minuten auf dem siedenden Wasserbad erhitzt. Die Suspension wird auf 50 °C abgekühlt und der pH-Wert gemessen (7,3 ±0,1). Danach wird der Nährboden 15 Minuten bei 121 °C im Autoklav sterilisiert, auf 55 °C abgekühlt und mit 100 ml einer 0,l%igen Pimaricinlösung versetzt, mit Hilfe eines Magnetrührers gut durchgemischt und zu 5,5-6,0 ml in Tiefziehpackungen verteilt.
Charakteristika
Gallesalzmischung in der genannten Konzentration hemmt das Wachstum der gram-positiven Erreger, nämlich Staphylococcus und Streptococcus.
Pimaricin in der genannten Konzentration hemmt das Wachstum von Candida und anderen Hefen und Schimmelpilzen. Glucose + Hefeextrakt in der genannten Konzentration verkürzen die Wachstums-Lag-Phase, ermöglichen eine schnellere Citratspaltung und Ablesung innerhalb von 24 Stunden.
3. Ampholyt-Cadmiumsulfat-Glycerin-Agar
Zusammensetzung
Proteose Pepton 20,0 g
Natriumchlorid 1,2 g
Dikaliumhydrogenphosphat 0,8 g
Kaliumnitrat 0,6 g
Calciumnitrat-tetrahydrat 0,4 g
Magnesiumsulfat-heptahydrat 0,6 g
Cadmiumsulfat-octahydrat 0,005 g
Glycerin 8,0 ml
Ampholyt KKPK 55 0,5 g (N-Alkyl-Aminocrotonsäure)
Agar-Agar 15,0 g
Aqua dest. 1 Liter End-pH-Wert: 7,2 ±0,1
Zubereitung
0,5 g Ampholyt + 8 ml Glycerin werden in 1000 ml Aqua dest. mit Hilfe eines Magnetrührers gut suspendiert und dann mit 38,6 g der restlichen Nährbodenbestandteile versetzt und anschliessend etwa 10-15 Minuten auf dem siedenden Wasserbad erhitzt. Die Suspension wird auf 50 °C abgekühlt und der pH-Wert gemessen (6,9 ±0,1). Danach wird der Nährboden 15 Minuten bei 121 °C im Autoklav sterilisiert, auf 50 °C abgekühlt und zu 5,5-6,0 ml in Tiefziehpackungen verteilt.
Charakteristika
Ampholyt und Cadmiumsulfat in den genannten Konzentrationen werden sowohl die gram-positiven als auch die meisten gram-negativen Bakterien sowie Candida und andere Hefen und Schimmelpilze hemmen. Unter den gram-negativen Bakterien, die auf diesem Nährboden wachsen können, ist nur Pseudomonas in der Lage, Pyoverdin (fluoreszierende Pigmente) zu bilden.
Die genannte Zusammensetzung des Nährbodens fördert die Pyoverdinbildung und ermöglicht den Nachweis von Pseudomonas aeruginosa innerhalb von 24 Stunden.
4. Phenylalanin-Lithiumchlorid-g-Agar
Zusammensetzung
Proteose Pepton 10,0 g
Hefeextrakt 3,0 g
Natriumchlorid 5,0 g
Dinatriumhydrogenphosphat 5,6 g'
Kaliumdihydrogenphosphat 0,2 g
L-Phenylalanin 2,0 g
Gallesalzmischung 1,0 g
Lithiumchlorid 3,0 g
Pimaricin 0,2 g
Agar-Agar 16,0g
Aqua dest. 1 Liter End-pH-Wert: 7,2 ± 0,1
Zubereitung
45,8 g der genannten Mischung, jedoch ohne Pimaricin, werden in 900 ml Aqua dest. mit Hilfe eines Magnetrührers gut suspendiert und etwa 10-15 Minuten auf dem siedenden Wasserbad erhitzt. Die Suspension wird auf 50 °C abgekühlt und der pH-Wert gemessen (7,3 ± 0,1). Danach wird der Nährboden 15 Minuten bei 121 °C im Autoklav sterilisiert, auf 55 °C abgekühlt und mit 100 ml einer 0,2%igen sterilfiltrierten Pimaricinlösung versetzt, mit Hilfe eines Magnetrührers gut durchgemischt und zu 5,5-6,0 ml in Tiefziehpackungen verteilt.
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Charakteristika
Gallesalzmischung in der genannten Konzentration hemmt das Wachstum der gram-positiven Erreger.
Pimaricin in der genannten Konzentration hemmt das Wachstum von Candida und anderen Hefen und Schimmelpilzen. Lithiumchlorid reduziert das Wachstum der meisten gramnegativen Enterobacteriaceen, ausser Proteus und Providen-cia.
Lediglich Proteus und Providencia sind in der Lage, Phenylalanin in Phenylbrenztraubensäure zu verwandeln. Nach Zusatz einiger Tropfen einer 10%igen Eisen(III)-chlorid-Lösung tritt eine grüne Farbe in Erscheinung (Phenylalanin-desami-nase-Test).
5. DNase-Ampholyt-Agar
Zusammensetzung
Tryptose
Desoxyribonucleinsäure
Natriumchlorid
Ampholyt KKPK 55
[Methylgrün
Agar-Agar
Aqua dest.
End-pH-Wert: 7,3 ± 0,1
16,0 g 1,6 g 4,0 g 0,15 g 0,04 g] 12,0 g 1 Liter
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Als Indikator können 0,04 g/Liter Methylgrün zugesetzt werden. Bei der Auswertung kann dann auf die Salzsäurezugabe verzichtet werden.
Zubereitung
0,15 g Ampholyt werden mit Hilfe eines Magnetrührers in 1000 ml Aqua dest. gut suspendiert und dann mit 33,6 g der restlichen Substanzen versetzt und anschliessend etwa 10 bis 15 Minuten auf dem siedenden Wasserbad erhitzt. Die Suspension wird auf 50 °C abgekühlt und der pH-Wert gemessen (7,0 ± 0,1). Danach wird der Nährboden 15 Minuten bei 121 °C im Autoklav sterilisiert, auf 50 °C abgekühlt und zu 5,5-6,0 ml in Tiefziehpackungen verteilt.
Charakteristika
Ampholyt in der genannten Konzentration hemmt das Wachstum der gram-positiven Erreger, aber auch das der Hefen und Schimmelpilze.
Unter den Erregern von Harnwegsinfektionen, die auf diesem Nährboden wachsen können, ist lediglich Serratia in der Lage, DNase anzugreifen und die trübe Ausfällung nach Zusatz von 1-n-Salzsäure hervorzurufen.
Aqua dest. mit Hilfe eines Magnetrührers gut suspendiert und etwa 10-15 Minuten auf dem siedenden Wasserbad erhitzt. Die Suspension wird auf 50 °C abgekühlt und der pH-Wert mittels einer 10%igen Natriumhydroxid-Lösung auf 7,4 eingestellt. Danach wird der Nährboden 15 Minuten bei 121 °C im Autoklav sterilisiert, auf 50 °C abgekühlt, mit 100 ml 0,2proz. wässri-ger Pimaricinlösung vermischt und zu 5,5-6,0 ml in Tiefziehpak-kungen verteilt.
Charakteristika
Lithiumchlorid + Kaliumchlorid + Kaliumthiocyanat in den genannten Konzentrationen hemmen das Wachstum der ganzen Begleitflora, ohne negative Beeinflussung des Staphylo-coccus-Wachtums.
Die Mannit-positiven Staphylokokken wachsen innerhalb von 24 Stunden. Der Mannitabbau zur Säure wird durch Umschlag des pH-Indikators (Phenolrot) angezeigt. Der Nährboden wird rötlichgelb bis gelb. Die Mannit-negativen Staphylokokken wachsen in kleineren Kolonien und der Nährboden zeigt keinen Farbumschlag. Demnach ist eine primäre Differenzierung zwischen den Staphylokokken möglich. Die patho-gene Spezies Staphylococcus aureus ist Mannit-positiv, während die Biotypen der meistens nicht pathogenen Spezies Staphylococcus epidermidis und Staphylococcus saprophyticus Mannit-negativ sind.
Der gebrauchsfertige, vorgegossene Nährboden ist im Gegensatz zu bekannten Nährböden frei von schnell verderblichen bzw. nur kurzfristig lagerfähigen Substanzen.
30 7. T.T.C.-Azid-P-Agar Zusammensetzung
Tryptose 20,0 g
Hefeextrakt 5,0 g
Glucose 2,0 g
35 Dinatriumhydrogenphosphat 4,0 g
Natriumthiosulfat 0,3 g *
a-Liponsäure 0,001 g
Agar-Agar 15,0 g
Pimaricin 0,1 g
40 2,3,5-Triphenyltetrazoliumchlorid (T.T.C) 0,1 g
Natriumazid 0,8 g
Aqua dest. 1 Liter End-pH-Wert: 7,2 + 0,1
6. Mannit-Kochsalz-Thiocyanat-Agar Zusammensetzung
Caseinpepton 10,0g
Fleischextrakt 5,0 g
Gelatine 5,0 g
D-Mannit 10,0g
Hefeextrakt 5,0 g
Natriumpyruvat 10,0 g
Dinatriumhydrogenphosphat 6,0 g
Lithiumchlorid 5,0 g
Natriumchlorid 5,0 g
Kaliumthiocyanat 30,0 g
Phenolrot 0,02 g
Pimaricin 0,2 g
Agar-Agar 16,0g
Aqua dest. 1 Liter End-pH-Wert: 7,2 ± 0,1
Zubereitung
125,02 g des dehydrierten Nährbodens werden in 900 ml
45 Zubereitung
46,3 g der genannten Mischung, jedoch ohne Pimaricin, 2,3,5-Triphenyltetrazoliumchlorid und Natriumazid werden in 890 ml Aqua dest. suspendiert, eingeweicht und mit Hilfe eines Magnetrührers gut durchgemischt und anschliessend etwa so 10-15 Minuten auf dem siedenden Wasserbad erhitzt. Die Suspension wird auf 50 °C abgekühlt und der pH-Wert auf 7,2 eingestellt. Anschliessend wird das Medium 15 Minuten bei 121 °C im Autoklav sterilisiert und auf 50 °C abgekühlt. Danach werden folgende Lösungen (sterilfiltriert) zugegeben: 100 ml 55 einer 0,l%igen Pimaricinlösung, 2,5 ml einer 4%igen T.T.C.-Lösung und 10 ml einer 4%igen Natriumazidlösung. Alle Lösungen sollten höchstens 30 Minuten vor Beginn des Giessens angesetzt und lichtgeschützt aufbewahrt werden. Mit dem Magnetrührer wird gut durchgemischt und zu 5,5-6,0 ml in die 60 Tiefziehpackungen verteilt.
Charakteristika
Natriumthiosulfat inaktiviert das wachstumshemmende Wasserstoffperoxid, da die Enterococcen keine Katalase zu sei-65 ner Spaltung besitzen.
a-Liponsäure in dieser Konzentration dient als Wuchsstoff für Streptococcus faecium.
Pimaricin in der genannten Konzentration hemmt das
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Wachstum von Candida und anderen Hefen und Schimmelpilzen. T.T.C, wird durch Streptococcus faecalis zu dem roten bis rotbraunen Farbstoff Formazan reduziert.
Natriumazid in der genannten Konzentration hemmt nur das Wachstum der gram-negativen Begleitflora und lässt die Enterococcen ungehindert wachsen.
8. Pepton-Leberhydrolysat-Thiocyanat-Agar
Zusammensetzung
MykopeptonB 15,0g Leberhydrolysat 1,0 g
Glucose 5,0 g
Hefeextrakt 3,0 g
Natriumchlorid 3,0 g
Magnesiumsulfat-heptahydrat 0,25 g
Mangan(II)chIorid-tetrahydrat 0,001 g
N atriumheptadecylsulf at (T ergitol 7) 0,05 g
Kaliumthiocyanat 20,0 g
Agar-Agar 22,0 g Aqua dest. 1 Liter End-pH-Wert: 5,8 ± 0,1
Zubereitung
69,3 g der genannten Mischung werden in 11 Aqua dest. suspendiert, eingeweicht und mit Hilfe eines Magnetrührers durchgemischt und anschliessend ca. 10-15 Minuten auf dem siedenden Wasserbad erhitzt. Die Lösung wird auf 50 °C abgekühlt und der pH-Wert auf 5,8 ± 0,1 eingestellt. Danach wird das Medium 15 Minuten bei 121 °C im Autoklav sterilisiert, wieder auf 50 °C abgekühlt und in die Tiefziehpackungen zu 5,5-6,0 ml verteilt.
Charakteristika
Mykopepton B fördert hauptsächlich das Wachstum von Candida und anderen Hefestämmen.
Natriumheptadecylsulfat (Tergitol 7) unterdrückt in dieser Konzentration und bei diesem pH-Wert das Wachstum aller gram-positiven Keime.
Kaliumthiocyanat unterdrückt in der genannten Konzentration und bei diesem pH-Wert das Wachstum aller gramnegativen Begleitkeime.
Wie oben ausgeführt wurde, ist das erfindungsgemässe Test-Set zur Bestimmung der Erregergattungen bei Entzündungen des Urogenitaltrakts bestimmt. Das Test-Set kann jedoch auch die Basis bilden für die Untersuchung anderen biologischen Materials. Es kann dann notwendig sein, weitere Nährmedien hinzuzunehmen, beispielsweise bei Stuhluntersuchungen Nährmedien für den Nachweis von Salmonellen und Shigellen. Auch zur Identifizierung auf Spezies-Ebene können weitere Nährmedien hinzugenommen werden.
Um die nötige Variabilität zu erhalten, können statt der oben beschriebenen Tiefziehpackungen mit 8 verschiedenen Nährböden auch entsprechende Portionspackungen der einzelnen Nährmedien vorgesehen werden, aus denen der Benutzer das Test-Set selbst zusammenstellt. Zweckmässig wird ein Magazin vorgesehen, in das eine geeignete Zahl der Nährmedienbehälter mit den verschiedenen Nährmedien eingeschoben werden kann.
Anwendung des Test-Sets
Das kühl gelagerte Test-Set wird auf Raumtemperatur gebracht. Von Mittelstrahl-Morgenurin wird der pH-Wert gemessen. Auf jeden Nährboden wird eine Impföse voll der Urinprobe aufgetragen und ausgestrichen, bei Nährboden 5 wird die Probe nur in der Kammermitte strichförmig aufgetupft. Das Test-Set wird dann mit dem Deckel verschlossen und 24 Stunden bei 37 °C bebrütet.
Auswertung
Bei sichtbarem Wachstum auf Phenylalanin-Lithiumchlo-rid-Agar wird der Agar mit 0,3 ml einer 10%igen Eisen(III)-chlo-rid-Lösung überschwemmt.
Bei sichtbarem Wachstum auf DNase-Ampholyt-Agar wird der Agar mit 0,3 ml einer 1-n-Salzsäure überschwemmt.
Die Auswertung erfolgt mit Hilfe der beigefügten Tabelle. Zur Identifizierung der Erregergattungen sind folgende Kriterien für die einzelnen Gattungen ausschlaggebend:
Citrobacter a) Im Lactose-Natriumheptadexylsulfat-P-Agar wird Lactose meistens nur langsam fermentiert; der Nährboden wird innerhalb von 24 Stunden blau bis blau-grün.
b) Im Citrat-G-Agar wird Citrat angegriffen; der Agar wird himbeerrot.
Enterobacter a) Im Lactose-Natriumheptadecylsulfat-P-Agar wird Lactose schnell fermentiert; der Agar wird gelb-grünlich; die Kolonien sind gross und schleimig.
b) Im Citrat-G-Agar wird Citrat angegriffen; der Agar wird himbeerrot.
Escherichia a) Im Lactose-Natriumheptadecylsulfat-P-Agar wird Lactose sehr schnell fermentiert; der Nährboden wird mandarinengelb; die Kolonien sind nicht schleimig.
b) Im Citrat-G-Agar wird Citrat nicht angegriffen. Hefeextrakt + Glucose (0,25 + 0,05 g/1) können ein sehr schwaches Wachstum zulassen. Der Agar wird hellrosa bis orangenfarbig.
Klebsiella a) Im Lactose-Natriumheptadecylsulfat-P-Agar wird Lactose wie von Enterobacter schnell fermentiert; der Nährboden wird gelb-grünlich wie bei Enterobacter oder manchmal mandarinengelb wie bei Escherichia; die Kolonien sind gross und schleimig wie bei Enterobacter. Im Gegensatz zu Enterobacter und Escherichia ist Klebsiella nicht beweglich. Die Beweglichkeit ist daher zu prüfen, z.B. in hängenden Tropfen.
b) Im Citrat-G-Agar wird Citrat angegriffen; der Nährboden wird himbeerrot.
PseudomonasDer Ampholyt-Cadmiumsulfat-Glycerin-Agar wird grünlich bis gelb; fluoreszierende Pigmente (Pyoverdin) werden gebildet.
Proteus
Bei gutem Wachstum auf Phenylalanin-Lithiumchlorid-Agar und spätestens 3 Minuten nach Zugabe von ca. 0,3 ml einer Eisen(III)-chlorid-Lösung zeigt Proteus die typische grüne Verfärbung des Nährbodens.
Alle Arten der Gattung Proteus erzeugen das Enzym Urease, das den Harnstoff spaltet. Dadurch wird Ammoniak gebildet, welcher den pH-Wert nach der alkalischen Seite (8,2-9,0) verlagert. Daher ist der pH-Wert der Urinprobe zu messen.
Providencia
Bei gutem Wachstum auf Phenylalanin-Lithiumchlorid-Agar und spätestens 3 Minuten nach Zugabe von ca. 0,31 einer Eisen(III)-chlorid-Lösung zeigt auch Providencia die gleiche typische Farbreaktion wie Proteus. Im Gegensatz zu Proteus wird der pH-Wert des Urins nur geringfügig verlagert.
Serratia
Serratia marcescens bildet auf DNase-Ampholyt-Agar oft rosa bis kirschrote Pigmente. Beim sichtbaren Wachstum auf
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DNase-Ampholyt-Agar und Zugabe von ca. 0,3 ml einer 1-n-Salzsäure bildet sich um das Wachstum innerhalb von einigen Minuten eine deutliche klare Zone, die von trüber Ausfällung umgeben ist. Serratia marcescens ist zu 96,7% DNase-posi-tiv. Serratia liquefaciens, die bei Harnwegsinfektionen lediglich eine untergeordnete Rolle spielt, ist zu 69,4% DNase-positiv. Weitere gram-negative Stäbchen, die bei Harnwegsinfektionen vorkommen, können zwar auf diesem Nährboden wachsen, sind jedoch DNase-negativ.
Beim methylgrünhaltigen Nährboden ist eine positive DNase-Reaktion dadurch zu erkennen, dass die grüne Farbe des Indikators - auch ohne HCl-Zugabe - merklich verblasst.
Staphylococcus
Im Mannit-Natriumchlorid-Kaliumthiocyanat-Agar wird Mannit von Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermi-dis Biotyp 4 und einigen Staphylococcus saprophyticus-Stäm-men abgebaut. Es entsteht Säure, die einen Farbumschlag des pH-Indikators hervorruft. Der Nährboden wird rötlich-gelb. Bei Verlängerung der Bebrütung auf 36 Stunden werden die Kolonien leuchtend gelb.
In verdächtigen Fällen empfiehlt es sich den Koagulase-
Schnelltest durchzuführen. Staphylococcus aureus ist im Gegensatz zu den anderen Staphylokokken Koagulase-positiv.
Streptococcus (Enterococcus)
s Streptococcus faecalis der serologischen Gruppe D reduziert T.T.C, zu Formazan und wächst in roten bis rotbraunen, ganz flachen und kleinen Kolonien mit Metallglanz auf dem T.T.C.-Azid-P-Agar.
Streptococcus faecium der serologischen Gruppe D - von io der Unterart casseliflavus abgesehen - ist nicht in der Lage, T.T.C, zu Formazan zu reduzieren. Die Kolonien sind farblos, ganz flach und klein.
Es gibt Arten der Gattungen Proteus und Serratia, die gelegentlich auf T.T.C.-Azid-P-Agar in einzelnen grösseren, erhabe-i5 nen und roten Kolonien ohne Metallglanz wachsen. Diese sind im Gegensatz zu den vorgenannten Enterokokken beweglich. Deshalb empfiehlt es sich, in verdächtigen Fällen auf Beweglichkeit, z.B. in hängenden Tropfen, zu prüfen.
20 Candida
Auf Pepton-Leberhydrolysat-Kaliumthiocyanat-Agar wächst Candida in schmutzig-weissen Kolonien.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5648897A (en) * 1979-09-25 1981-05-02 Nitsusui Seiyaku Kk Selective isolation medium for cholera bacillus
DE2942286A1 (de) * 1979-10-19 1981-04-30 Hetal-Werke Franz Hettich Gmbh & Co, 7297 Alpirsbach Scharnier
JPS60234598A (ja) * 1984-05-09 1985-11-21 Terumo Corp クエン酸分解試験用培地
FR2587722B1 (fr) * 1985-09-25 1988-05-20 Rhone Poulenc Agrochimie Procede de diagnostic des maladies fongiques des plantes et dispositif pour la mise en oeuvre de ce procede
IL87533A0 (en) * 1988-08-23 1989-01-31 Hy Lab Ltd Assay system for fish pathogens
FR2700778B1 (fr) * 1993-01-27 1995-04-14 Agronomique Inst Nat Rech Milieu sélectif et procédé pour le dénombrement des bactéries propioniques.
FR2834998B1 (fr) * 2002-01-18 2004-04-02 Millipore Sas Procede de controle de la presence de micro-organismes dans un milieu gazeux comprenant du peroxyde d'hydrogene
FR2845097B1 (fr) * 2002-10-01 2006-06-16 Metis Biotechnologies Procede de detection et de comptage de microorganismes dans un echantillon
ITUA20162034A1 (it) * 2016-03-25 2017-09-25 Mbd Diagnostics Ltd Dispositivo e relativa composizione reagente per la diagnosi delle infezioni alle vie urinarie

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