CH637628A5 - Peptide having therapeutic activity - Google Patents

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CH637628A5
CH637628A5 CH76178A CH76178A CH637628A5 CH 637628 A5 CH637628 A5 CH 637628A5 CH 76178 A CH76178 A CH 76178A CH 76178 A CH76178 A CH 76178A CH 637628 A5 CH637628 A5 CH 637628A5
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leu
ala
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Bruce W Erickson
Tony E Hugli
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Research Corp
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Description

Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf neue, therapeutisch wertvolle Peptide sowie Säurehalogenide, gegebenenfalls N-substituierte Säureamide, Ester und N-Acylate, pharmazeutisch annehmbare Säureadditionssalze und basische Salze dieser Peptide.
Die therapeutisch nützlichen Peptide der vorliegenden Erfindung enthalten mindestens vier Aminosäurereste und können zwölf, dreizehn oder mehr derartige Reste enthalten.
Die erfindungsgemässen Produkte sind nützliche therapeutische Mittel infolge ihrer Fähigkeit, die glatte Muskulatur zu kontrahieren, Histamin aus Mast-Zellen (mast cells) freizusetzen und die Permeabilität der Gefässe zu erhöhen. Gewisse erfindungsgemässe Verbindungen sind, wie im folgenden näher erläutert, nützlich, infolge ihrer gegenteiligen Wirkung. Insbesondere sind gewisse Peptide der vorliegenden Erfindung Agonisten oder Promotoren, andere hingegen Antagonisten oder Inhibitoren. Einige sind nützlich für die Behandlung von Herzarrhythmie.
Das Carboxylende des Peptides wird durch eine amidinosubstituierte a-Aminosäure, wie Arginin oder Canavanin gebildet. Zur Vereinfachung wird dieses Endglied im folgenden mit Arginin bezeichnet. Das Arginin ist mit einer Peptidbindung über seine a-Aminogruppe an die Carboxylgruppe einer niederen aliphatischen Aminosäure gebunden, welche zweckmässigerweise bis zu vier Aminosäureglieder enthält. Die gegenwärtig bevorzugte zweite Aminosäure ist Glycin oder Alanin.
Die dritte Aminosäure im Peptid ist über ihre Carboxylgruppe an die Aminogruppe der zweiten Aminosäure gebun-
40 den. Diese dritte Aminosäure ist eine hydrophobe Aminosäure, wie z.B. Isoleucin, Leucin, Valin, Methionin, Phenylalanin, Tyrosin oder Tryptophan. Leucin wird gegenwärtig bevorzugt, weil es sowohl in D- wie L-Form leicht erhältlich ist und zur Wirksamkeit des Peptides auf befriedigende Wei-45 se beiträgt.
Die Identität der vierten Aminosäure scheint nicht kritisch zu sein, doch muss eine vierte Aminosäure vorhanden sein, um die nützliche Aktivität zu erzielen. Praktisch jede der 20 allgemein auftretenden Aminosäuren scheint für diese so Gruppierung verwendbar zu sein. Verbindungen mit der höchsten Aktivität sind jene, in welchen die vierte Aminosäure Glycin oder Glutamin ist. Andere Aminosäuren, wie Alanin, Aspargin, Serin, Tyrosin oder Phenylalanin können jedoch ohne weiteres als vierte Aminosäure verwendet wer-55 den.
Die Gegenwart einer fünften vorzugsweise hydrophoben Aminosäure, wie z. B. Leucin, erhöht die Aktivität des Peptides merklich. Andere hydrophobe Aminosäuren, wie z.B. die oben erwähnten, sind ebenfalls nützlich.
6o Es wurde beobachtet, dass die Aktivität mit zunehmender Länge der Peptidkette bis zu einer Länge von dreizehn Aminosäuren zunimmt. Die Kosten der Herstellung von Polypeptiden mit wesentlich mehr Aminosäuregliedern scheint jedoch durch die erzielbaren bescheidenen Verbes-65 serungen nicht gerechtfertigt.
Jene Verbindungen der vorliegenden Erfindung, bei welchen die erste Aminosäure Arginin ist, sind Agonisten.
Wenn das Arginin über seine Carboxylgruppe an die Amino-
3
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gruppe einer niederen aliphatischen Aminosäure, wie z. B. Glycin, Prolin, Alanin oder Serin, gebunden ist, sind die entstandenen Produkte Antagonisten. Sie verhindern in niedriger Dosis die Kontraktion der glatten Muskulatur, die Freisetzung von Histamin und die Permeabilität der Gefässe. Die Aminosäure, an welche das Arginin verbunden ist, könnte als eine Inhibitor-Aminosäure bezeichnet werden. Die gegenwärtig bevorzugte Inhibitor-Aminosäure ist Glycin, weil sie leicht erhältlich ist und ohne Einführung eines neuen Asymmetrie-Zentrums in das Molekül eingebaut werden kann.
Es ist ferner möglich, die Aktivität der Peptide der vorliegenden Erfindung auf andere Weise zu modifizieren, z.B. unter Verwendung einer D-Aminosäure als Bestandteil des Peptides anstelle der natürlich auftretenden L-Aminosäuren. Verschiedene Produkte, in welchen L-Arginin durch D-Ar-ginin ersetzt ist, widerstehen der hydrolytischen Wirksamkeit von Carboxypeptidase-B. Das Produkt ist daher stabil über eine ausgedehnte Zeitspanne und kann verwendet werden, um Langzeit-Dosierungsformen herzustellen. Dasselbe Resultat kann auch durch Substituierung von Prolin in der zweiten Position erzielt werden.
Infolge ihrer amphoteren Natur können die erfindungs-gemässen Verbindungen in Form von pharmazeutisch annehmbaren Salzen verwendet werden, welche entweder Metallsalze oder Säureadditionssalze sein können. Diese Salze weisen den Vorteil der Wasserlöslichkeit auf und sind besonders nützlich für die parenterale Verabreichung. Die Metallsalze, insbesondere die Alkalimetallsalze, sind verhältnismässig stabil und werden aus diesem Grund oft den Säureadditionssalzen vorgezogen. Die Natriumsalze werden besonders bevorzugt, weil sie leicht herzustellen sind.
Die Säuren, welche zur Herstellung der Säureadditionssalze der erfindungsgemässen Peptide verwendet werden können, sind jene Säuren, welche nichttoxische Anionen enthalten, wie z. B. Salz-, Schwefel-, Phosphor-, Essig-, Milch-, Zitronen-, Wein-, Oxal-, Bernstein-, Malein-, Glucon-, Saccharinsäure und ähnliche Säuren. Eine grosse Vielzahl nichttoxischer Derivate der errfindungsgemässen Polypeptide kann somit verwendet werden. Beispielsweise können die Produkte, insbesondere jene Inhibitoren mit einer endständigen Glycincarboxylgruppe, mit Thionylchlorid umgesetzt werden, um das Säurechlorid zu bilden, und das letztere kann mit Ammoniak zu einem Amid umgesetzt werden. Amine bilden selbstverständlich N-substituierte Amide.
Andere nützliche Derivate können erhalten werden durch Modifikation der freien funktionellen Gruppen am Peptidgerüst. Beispielsweise können freie Hydroxylgruppen und freie Aminogruppen leicht umgesetzt werden. Eine bequem herzustellende Klasse von Derivaten ist diejenige, in welchen eine freie Hydroxylgruppe, welche aliphatischer oder aromatischer Natur sein kann, mit einer Alkanoyl-oder Alkenoylgruppe verestert wird, welche bis zu 18 Kohlenstoffatomen oder mehr enthalten kann. Anderseits kann eine freie Aminogruppe mit Alkanoyl- oder Alkenoylgrup-pen, welche bis zu etwa 18 Kohlenstoffatome enthalten, acy-liert werden. In beiden Fällen sind die bevorzugten Derivate jene, in welchen die Alkanoyl- bzw. Alkenoylgruppen 11 bis 18 Kohlenstoffatome enthalten, weil längere Kohlenwasserstoffketten den Molekülen eine erhöhte Lipidlöslichkeit verleihen und dadurch ihren Transport durch Zell-Schranken erhöhen.
Die erfindungsgemässen Verbindungen können auf verschiedenen Wegen hergestellt werden, wie sie für die Synthese einfacher und komplexer Polypeptide und sogar von Proteinen mit verhältnismässig niederem Molekulargewicht bekannt sind. Im allgemeinen umfassen diese Verfahren die stufenweise Synthese durch sukzessive Addition der Aminosäuren, um allmählich grössere Moleküle zu erzeugen. Die Aminosäuren werden hierbei durch Kondensation zwischen der Carboxylgruppe der einen Aminosäure und der Aminogruppe einer anderen Aminosäure unter Bildung einer Peptidbindung aneinander gebunden. Um diese Reaktionen zu steuern ist es zweckmässig, die Aminogruppe der einen Säure und die Carboxylgruppe der anderen Säure zu blockieren. Die blockierenden Gruppen sollten derart gewählt werden, dass sie leicht entfernt werden können, ohne das Polypeptid durch Racemisierung oder durch Hydrolyse der gebildeten Peptidbindungen zu beeinträchtigen. Gewisse Aminosäuren weisen zusätzliche funktionelle Gruppen auf, z. B. die Hydroxylgruppe von Tyrosin oder von Threonin. Im allgemeinen ist es notwendig, diese zusätzlichen Gruppen ebenfalls durch ein leicht entfernbares Blockierungsmittel zu blockieren, so dass sie die zur Bildung von Peptidbindungen gewünschte Kondensation nicht stören.
Eine grosse Anzahl von Verfahren zur Synthese von Polypeptiden und eine Vielzahl von Blockierungsmitteln sind in Fachkreisen bekannt. Die meisten dieser Verfahren können für die Polypeptide, welche Gegenstand der vorliegenden Erfindung bilden, angewandt werden. Es hätte keinen Sinn, die Anwendung aller dieser Verfahren hier zu beschreiben. Bevorzugte Verfahren sind in den folgenden Beispielen genannt.
Das gegenwärtig bevorzugte Verfahren zur Synthese der erfindungsgemässen Produkte ist die Merrifield-Methode. In dieser Methode wird eine Aminosäure an ein Harzpartikel in Form einer Esterbindung gebunden, und das Peptid wird stufenweise durch sukzessive Addition von geschützten Aminosäuren an die wachsende Kette erzeugt. Das Verfahren ist gut bekannt und wurde in zahlreichen Artikeln beschrieben; siehe z.B. B.W. Erikson und R.B. Merrifield (1976) Fest-phasen-Peptidsynthese in «The Proteins», Neurath und Hill, Academic Press, New York, Seiten 255 bis 527.
Zur Vereinfachung werden in der folgenden Beschreibung die üblichen Abkürzungen für die verschiedenen Aminosäuren verwendet. Sie sind dem Fachmann alle bekannt, doch sollen einige der wichtigen Aminosäuren im folgenden zur Sicherheit aufgezählt werden:
Arginin - Arg
Alanin - Ala
Leucin - Leu
Glycin - Gly
Histidin - His
Serin - Ser
Glutamin - Gin
Wie oben angegeben, erhöhen die Agonisten der vorliegenden Erfindung die Kontraktion der glatten Muskulatur, erhöhen die Freisetzung von Histamin und verstärken -die Permeabilität der Gefässe. Sie sind therapeutisch nützlich zur Induktion der Reaktion auf Entzündungen bei Menschen und Säugetieren, welche in dieser Beziehung einen Mangel aufweisen. So können sie verwendet werden, um den Körper bei der Erzeugung seines Abwehrmechanismus gegen das Eindringen von schädlichen Mikroorganismen oder anderen Überbeanspruchungen (stress) zu unterstützen. Die Antagonisten sind klinisch nützlich für die lokale oder systemische episodische oder traumatische Kontraktion der glatten Muskulatur, die Freisetzung von Histamin oder die erhöhte Permeabilität der Gefässe. Sie können beispielsweise in Nasen-Aerosolen während Asthma-Anfällen oder bronchialer Allergie verwendet werden. Sie können als Pro-phylactica für solche Syndrome wie Schock bei Dengue-Fie-ber verwendet werden.
Die erfindungsgemässen Verbindungen sind nützliche therapeutische Mittel für Menschen und Säugetiere und sind bereits in extrem niederen Mengen wirksam zur Stimulie5
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40
45
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rung oder Hemmung. Der Arzt oder Tierarzt wird die Dosierung bestimmen, welche jeweils für eine besondere Anwendung die günstigste ist. Diese Dosierung kann von einem Patienten zum anderen variieren je nach der Grösse des Patienten, dem zu behandelnden Zustand und anderen Faktoren, welche vom Fachmann leicht zu beurteilen sind. Die Produkte können in sehr hohen Mengen verabreicht werden,-selbst bis zu 2 oder mehr Gramm pro Tag. Üblicherweise werden sie in Dosierungseinheiten geliefert, welche bis zu etwa 250 mg des aktiven Bestandteiles enthalten. Die täglich zu verabreichende Anzahl Einheiten kann durch Rezept festgehalten werden und variiert je nach dem zu behandelnden Zustand.
Die Verbindungen können allein verwendet werden,
doch werden sie im allgemeinen zusammen mit pharmazeutisch annehmbaren, nichttoxischen Trägern verabreicht, deren Menge durch die Eignung und die chemische Natur des jeweiligen Trägers, die gewählte Art der Verabreichung und die übliche pharmazeutische Praxis bestimmt wird. Für intravenöse und intramuskuläre Verabreichung können sie in Form einer sterilen Lösung verwendet werden, welche andere gelöste Stoffe enthält, z. B. genügend Kochsalz oder Glukose, um die Lösung isotonisch zu gestalten. Für örtliche Verabreichung können sie mit geeigneten Trägern vereint werden, wie z.B. Petrolatum oder andere inerte semiviskose Materialien. Dosierungseinheiten für die orale Verabreichung können in Form von Tabletten oder Kapseln verwendet werden, welche Excipienten, wie z.B. Stärke, Milchzuk-ker, gewisse Tonarten usw. enthalten.
Obwohl Arginin gegenwärtig die bevorzugte erste Aminosäure darstellt, sind andere a-Aminosäuren, wie z.B. Ca-navanin, ebenfalls nützlich. Infolge der Gegenwart der Q-Amidinogruppe [-C(=NH)-NH2] können alle als Analoge von Arginin betrachtet werden. Sie können eine grössere oder kleinere Anzahl Methylen- oder Iminogruppen in der an das a-Kohlenstoffatom gebundenen Seitenkette aufweisen. Eine oder mehrere dieser Gruppen kann durch eine andere Gruppe ersetzt sein, wie eine Oxi-, Thio-, Imino- oder Carbonylgruppe. Ein oder mehrere an Kohlenstoff oder Stickstoff gebundene Wasserstoffatome können durch eine Alkylgruppe, welche typischerweise bis zu 6 Kohlenstoffatomen enthält, vorzugsweise jedoch Methyl oder Äthyl, ersetzt sein. Wie oben erwähnt, kann die Säure in der D- oder L-Form vorliegen.
Die folgenden Beispiele dienen der Illustrierung der vorliegenden Erfindung.
Beispiel 1
Synthese von L-Alanyl-L-seryl-L-histidyl-L-leucyl-glycyl-L-leucyl-L-alanyl-L-arginin
Herstellung von Na-tert.-Butyloxycarbonyl-Ns-(4-toluol-sulfonyl)-L-arginyl-oxymethyl-(styrol-copoly-l%-divinyl-benzol)-(II). Eine Lösung von Na-tert.-Butyloxycarbonyl-Ng-(4-toluolsulfonyl)-L-arginin (1,3 g) in Äthanol (15 ml) und Wasser (1,35 ml) wurde durch Zusatz einer Lösung von Cäsiumbicarbonat (0,43 g) in Wasser (1,35 ml) auf pH 7,1 gebracht. Die erhaltene Lösung wurde unter vermindertem Druck bei 40 ;C zur Trockene verdampft. Benzol (25 ml) wurde zugesetzt und das Gemisch unter denselben Bedingungen zur Trockene verdampft; dieses Vorgehen wurde noch viermal wiederholt. Der erhaltene Feststoff wurde während 2,5 Stunden bei einem Druck von 1 Torr getrocknet, um das Cäsiumsalz von Boc-Arg(Tos) (I) als weissen Feststoff (1,7 g) zu ergeben. Chlormethyl-(styrol-copoly-l%-di-vinylbenzol) (3,5 g; 0,23 Millimol Cl pro Gramm Polystyrol) wurde in N,N-Dimethylformamid (DMF; 15 ml) gequollen und mit einer Lösung des Salzes I (1,7 g) in DMF (10 ml) vermischt. Das Gemisch wurde während 75 Stunden mechanisch gerührt und auf 50 °C gehalten. Eine Lösung des Salzes I (3,7 g) in DMF (25 ml) wurde zugesetzt und das Gemisch während 95 Stunden gerührt und auf 50 °C gehalten. Das Harz wurde auf einem Sinterglasfilter gesammelt und nacheinander mit DMF (drei 25-mI-Portionen), absolutem Alkohol (drei 25-ml-Portionen) und Dichlormethan (drei 25-ml-Portionen) gewaschen. Nach dem Trocknen während 2 Stunden bei 1 Torr enthielt das Harz II (3,3 g) 0,17 Millimol Arginin pro Gramm Polystyrol, wie durch Behandlung von 10-mg-Portionen mit 10% Anisol in flüssigem HF während 30 Minuten bei 0 °C, Hydrolyse des säurelöslichen Materials mit 6N HCl während 24 Stunden bei 110 °C und Aminosäureanalyse des Hydrolysates bestimmt wurde.
Herstellung von Na-tert.-Butyloxycarbonyl-L-alanyl-Oß -benzyl-L-seryl-Nim-(4-toluolsulfonyl)-L-histidyl-L-leucyl-glycyl-L-leucyl-L-alanyl-NE-(4-toluolsulfonyl)-L-argmyl-oxymethyl-(styren-copoly-l%-divinylbenzol)-(III). Das Boc-Arg(Tos)-Har^-II (2,0 g; 0,34 Millimol Arginin) wurde in Dichlormethan (40 ml) in einem 75-ml-Glasreaktionsgefäss, das mit einer Sinterglasscheibe ausgestattet war, gequollen. Durch Anwendung von Luft- oder Stickstoffdruck auf das Gefass und/oder vermindertem Druck auf die unterhalb der Sinterscheibe angebrachte Auslassöffnung wurde das Harz filtriert, bis der grösste Teil der Lösung entfernt war.
A. Die Entfernung der Schutzgruppen erfolgte durch Zusatz einer Lösung von 1:1 (v/v) Trifluoressigsäure-Dichlor-methan (40 ml) zum Reaktionsgefass, Rühren des Gemisches während 1 Minute und Filtrieren wie zuvor. Dann wurde eine zweite Portion des 1:1 (v/v)-Gemisches von Tri-fluoressigsäure und Dichlormethan (40 ml) zugesetzt und das Gemisch während 30 Minuten gemischt und filtriert.
B. Das Auswaschen erfolgte auf ähnliche Weise durch Waschen des Harzes nacheinander mit Dichlormethan (für 40-ml-Portionen während je 1 Minute), mit 2-Propanol (zwei 40-ml-Portionen während je 1 Minute) und mit Dichlormethan (fünf 40-ml-Portionen während je 1 Minute).
C. Das Neutralisieren erfolgte durch Waschen des Harzes mit 1:19 (v/v) Äthyldiisopropylamin-Dichlormethan (drei 40-ml-Portionen während je 2 Minuten).
D. Die Auswaschstufe B wurde wiederholt.
E. Die Kupplung erfolgte durch Zusatz einer Dichlorme-thanlösung (10 ml) der gewünschten Boc-Aminosäure (4 Millimol pro Millimol des ursprünglichen Arginins) zum Harz, Mischen während 2 Minuten, Zusatz einer Dichlor-methanlosung (10 ml) von N,N'-Dicyclohexylcarbodiimid (3 Millimol pro Millimol ursprüngliches Arginin) zum Gemisch, Vermischen während 30 Minuten und Filtrieren.
F. Die Auswaschstufe B wurde wiederholt.
G. Die Neutralisierungsstufe C wurde wiederholt.
H. Die Auswaschstufe B wurde wiederholt.
I. Die Kupplungsstufe E wurde wiederholt.
J. Die Auswaschstufe B wurde wiederholt.
Die Ausführung der Stufen A bis J stellte einen Zyklus der Synthese dar, während welcher ein geschützter Aminosäurerest zum Peptid zugesetzt wurde. Dieser Zyklus wurde anfänglich mit Boc-L-Alanin durchgeführt und anschliessend nacheinander mit Boc-L-Leucin, Boc-Glycin, Boc-L-Leucin, Boc-Nini-(4-Toluolsulfonyl)-L-histidin, Boc-OP-Ben-zyl-L-serin und Boc-L-Alanin, in welchen «Boc» «Na-tert.-Butyloxycarbonyl» bedeutet.
Die Entfernung der Schutzgruppen und die Reinigung des L-Alanyl-L-seryl-L-histidyl-L-leucyl-glycyl-L-leucyl-L-alanyl-L-arginins (IV). Ein Teil des geschützten Octapeptid-harzes III (0,26 g) wurde mit 10% Anisol in flüssigem HF (6 ml) während 1 Stunde bei 0 °C behandelt. Nach dem Verdampfen der HF mit einer Wasserstrahlpumpe und anschliessend mit einer Vakuumpumpe wurde das Harz mit Äther (drei 2-ml-Portionen) gewaschen, um das restliche
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Anisol zu entfernen und mit Trifluoressigsäure (fünf 2-ml-Portionen), um das Peptid IV zu entfernen. Nach dem Verdampfen der Trifluoressigsäure wurde der Rückstand in 5%iger wässriger Essigsäure gelöst und lyophilisiert, um das Peptid zu ergeben, welches in lprozentiger wässeriger Essigsäure (2 ml) gelöst und der Gelfiltration auf einer 2,5 x 100 cm-Säule aus «Bio-Gel P-2» (100 bis 200 Mesh, Bio-Rad) unterworfen, welche mit lprozentiger Essigsäure in einer Menge von 23 ml pro Stunde durchpumpt wurde. Die ninhy-drinpositive Hauptfraktion (175 bis 300 ml) wurde gesammelt und lyophilisiert. Ein Teil des Rückstandes (19 mg) wurde in 0,01 M NaCl, 0,01 M NaH2P04 (ph 4,5; 1,5 ml) gelöst und auf eine 1 x 50-cm-Säule aus Carboxymethylcel-lulose («Cellex CM», Bio-Rad) gebracht, durch welche ein linearer Salzgradient von 0,01 bis 0,20 M NaCl (beide Lösungen 100 ml, 0,01 M NaH2P04, pH 4,5) in einer Menge von 30 ml pro Stunde gepumpt wurde. Die Peptid-Haupt-fraktionen (130 bis 170 ml), welche durch Ultraviolett-Ab-sorbierung bei 206 nm bestimmt worden war, wurde gesammelt und lyophilisiert. Das restliche Gemisch von Salz und Peptid wurde in lprozentiger Essigsäure (2 ml) gelöst und auf einer 1,5 x 85-cm-Säule aus «Bio-Gel P-2», durch welche lprozentige Essigsäure in einer Menge von 15 ml pro Stunde durchgepumpt wurde, entsalzen. Die Peptid-Haupt-fraktion (50 bis 75 ml), bestimmt durch Absorbierung bei s 206 nm, wurde gesammelt und lyophilisiert, um das reine Octypeptid IV (10 mg) zu erhalten. Dieses Material ergab die erwartete Aminosäureanalyse (siehe Tabelle I) und Aminosäurensequenz, wie durch automatisierten Edman-Abbau bestimmt wurde. Es weist ferner einen einzelnen nin-io hydrinpositiven und Pauly-positiven Flock in der Dünnschichtchromatographie (Rf 0,73 gegen Valin bei Rf 0,64) in 15:12:10:3 (Volumen) 1-Butanol-Wasser-Pyridin-Essig-säure und in der Hochspannungselektrophorese (RArg 0,76 bei pH 5,0 und RArg 0,58 bei pH 6,4, wobei RArg die Distanz i5 zwischen den Mittelpunkten des Peptides IV- und des Valin-Flecks dividiert durch die Distanz zwischen den Mittelpunkten der Arginin-und Valinflecken bedeutet) auf.
Jedes der übrigen in den Tabellen I oder II erwähnten 20 Peptide wurde im wesentlichen auf dieselbe Weise hergestellt.
Tabelle I
Nr. Aminosäuresequenz
Aminosäure-Zusammensetzung (Molare Verhältnisse) His Arg Ser Glu Gly Ala
Leu
TIC (Rr)
Wirksamkeitb (nmol)
1
Gly-Leu-Ala-Arg
0
1,04
0
0
1,08
10,9
1,00
0,73
1200-1400
2
Leu-Gly-Leu-Ala-Arg
0
0,87
0
0
1,12
1,12
2,0
0,80
150-300
3
His-Leu-Gly-Leu-Ala-Arg
0,98
0,97
0
0
1,18
1,09
1,00
0,79
10-20
4
Ser-His-Leu-Gly-Leu-
Ala-Arg
0,99
1,00
0,93
0
1,06
1,05
2,00
0,77
6-10
5
Ala-Ser-His-Leu-Gly-
Leu-Ala-Arg
0,95
1,00
0,97
0
1,13
1,94
1,94
0,73
5-8
6
CH3CO-Ala-Ser-His-Leu-
Gly-Leu-Ala-Arg
0,90
1,00
0,98
0
1,32
2,00
2,33
0,81
8-12
7
Arg-Gln-His-Ala-Arg-Ala-Ser-His-Leu-Gly-
Leu-Ala-Arg
1,97
3,00
1,04
1,10
1,11
3,30
2,18
0,71
4-7
8.
Ala-Ser-His-Leu-Gly-
Leu-Ala-Arg-Gly
0,90
1,00
0,97
0
2,20
1,92
2,09
0,73
280-560
9
Arg-Gln-His-Ala-Arg-Ala-Ser-His-Leu-Gly-
Leu-Ala-Arg-Gly
1,90
3,00
0,94
0,96
2,30
3,09
2,20
0,71
240-360
" Verhältnis von Peptid-Beweglichkeit zu Lösungsmittelfront-Migration auf Silicagel-Dünnschichtplatten in 15:12:10:3 (Volumen) 1-Butanol-Wasser-Pyridin-Essigsäure.
b Peptidmenge pro 100 ml Lösung, die benötigt wird, um Streifen von Meerschweinchen-Ileum mit Tyrode-Lösung vollständig zu kontrahieren.
Tabelle II
Nr. Aminosäuresequenz Aminosäure-Zusammensetzung Dünnschicht-Dataa Ileum
(Molare Verhältnisse) (Rfxl00) Wirksamkeitb
Gly Leu Ala Arg A B C D (nmol)
10 Ala-Ala-Ala-Leu-Gly-Leu-
Ala-Arg
1,03
2,00
4,04
1,06
16
45
56
-
6-8
11
Ala-Ala-Leu-Gly-Leu-Ala-Arg
1,02
2,00
3,06
1,08
16
45
60
-
10-14
12
Ala-Leu-Gly-Leu-Ala-Arg
1,03
2,00
1,99
1,05
22
50
65
—
5-11
13
Asn-Lys-Pro-Leu-Gly-Leu-
Ala-Arg
1,03
2,00
1,01
l,03d
-
17
30
-
14-27
14
CHjCO-Leu-Gly-Leu-Ala-Arg
1,03
2,00
1,02
1.03
-
66
66
-
36-45
637 628
6
Tabelle Ii (Fortsetzung)
Nr. Ammosäuresequen/ Aminosäure-Zusammensetzung Dünnschicht-Data" lleum
(Molare Verhältnisse) (Rfxl00) Wirksamkeit"
Gly Leu Ala Arg A B C D (nmol)
15 CH3CO-His-Leu-Gly-Leu-
Ala-Arg
1,05
2,00
1,01
1,03e
63 4:
8 13
8-17
CH3CO-Ala-Leu-Gly-Leu-
Ala-Arg
0,98
2,00
1,98
0,91
42
18
19-38
CH3CO-Ala-Leu-Gly-Leu-
Ala-Cane
0,99
2,00
1,98
45
21
86-170
CH3CO-Ala-Ala-Ala-Leu-
Gly-Leu-Ala-Arg
1,21
2,00
4,27
1,02
39
10
7-13
a Verhältnis von Peptid-Beweglichkeit zu Lösungsmittelfront-Migration auf Silicagel-Dünnschichtplatten in den folgenden Lösungsmittelsystemen (Volumverhältnis): A: 4:1:1 1-Butanol-Essigsäure-Wasser; B: 1:1:1:1 1-Butanol-Äthylacetaf-Essigsäure-Wasser; C: 5:5:1:3 Äthyl-acetat-Pyridin-Essigsäure-Wasser; D: 16:2:1:1 1-Butanol-Pyridin-Essigsäure-Wasser.
b Benötigte Menge Peptid/100 ml Tyrode-Lösung zur vollständigen Kontraktion eines Streifens Meerschweinchen-Ileum.
Q Auch: His, 0,96.
d Auch: Asn, 1,00; Lys, 1,02; Pro, 1,01.
c L-Canavanin (Can) weist eine Seitenkette [CH2-CH2-0-NH-C(=NH)-NH2] auf, ähnlich derjenigen von Arginin (Arg), ausser dass ein Sauerstoffatom die Delta-Methylengruppe ersetzt.
S

Claims (18)

  1. 637 628
    2
    PATENTANSPRÜCHE
    1. Peptid mit therapeutischer Wirksamkeit, welches mindestens vier Aminosäuren enthält, gekennzeichnet durch die Gegenwart einer amidinosubstituierten a-Aminosäure als erste Aminosäure am Carboxylende, wobei diese erste Aminosäure mit einer Peptidverbindung über ihre Aminogruppe an die Carboxylgruppe einer zweiten Aminosäure gebunden ist, welche aus Glycin oder Alanin besteht, und welche zweite Aminosäure mit einer Peptidbindung über ihre Aminogruppe an die Carboxylgruppe einer dritten hydrophoben Aminosäure gebunden ist, welche dritte Aminosäure ihrerseits mit einer Peptidbindung über ihre Aminogruppe an die Carboxylgruppe einer vierten Aminosäure gebunden ist, sowie die Säurehalogenide, gegebenenfalls N-substituierte Säu-reamide, Ester und N-Acylate, pharmazeutisch annehmbaren Säureadditionssalze und basischen Salze dieser Peptide.
  2. 2. Peptid nach Patentanspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die vierte Aminosäure aus Glycin, Glutamin, Alanin, Asparagin, Serin, Tyrosin oder Phenylalanin besteht.
  3. 3. Peptid nach Patentanspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, dass die amidinosubstituierte a-Aminosäure Argi-nin ist und das Peptid gegebenenfalls eine fünfte, vorzugsweise hydrophobe Aminosäure, enthält.
  4. 4. Peptid nach Patentanspruch 3, dadurch gekennzeichnet, dass die zweite Aminosäure Alanin ist und die vierte Aminosäure Glycin ist.
  5. 5. Peptid nach Patentanspruch 3, dadurch gekennzeichnet, dass die zweite und vierte Aminosäure beide Glycin sind.
  6. 6. Peptid nach Patentanspruch 3, dadurch gekennzeichnet, dass die zweite Aminosäure Glycin ist und die vierte Aminosäure Glutamin ist.
  7. 7. Peptid nach Patentanspruch 3, dadurch gekennzeichnet, dass die zweite Aminosäure Alanin ist und die vierte Aminosäure Glutamin ist.
  8. 8. Peptid nach Patentanspruch 3, dadurch gekennzeich-
    5 net, dass das Arginin D-Arginin ist.
  9. 9. Gly-Leu-Ala-Arg nach Patentanspruch 1.
  10. 10. Leu-Gly-Leu-Ala-Arg nach Patentanspruch 1.
  11. 11. His-Leu-Gly-Leu-Ala-Arg nach Patentanspruch 1.
  12. 12. Ser-His-Leu-Gly-Leu-Ala-Argnach Patentanspruch 1.
    10 13. Ala-Ser-His-Leu-Gly-Leu-Ala-Arg nach Patentanspruch 1.
  13. 14. CH3CO-Ala-Ser-His-Leu-Gly-Leu-Ala-Arg nach Patentanspruch 1.
  14. 15. Arg-Gln-His-Ala-Arg-Ala-Ser-His-Leu-Gly-Leu-
    15 Ala-Arg nach Patentanspruch 1.
  15. 16. Peptid nach Patentanspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die amidinosubstituierte a-Aminosäure mit einer Peptidbindung über ihre Carboxylgruppe an die Amino-
    20 gruppe einer Aminosäure gebunden ist, welche aus Glycin, Prolin, Alanin oder Serin besteht.
  16. 17. Peptid nach Patentanspruch 2, dadurch gekennzeichnet, dass die amidinosubstituierte a-Aminosäure mit einer Peptidbindung über ihre Carboxylgruppe an die Amino-
    25 gruppe einer Aminosäure gebunden ist, welche aus Glycin, Prolin, Alanin oder Serin besteht.
  17. 18. Peptid nach Patentanspruch 17, dadurch gekennzeichnet, dass die Aminosäure Glycin ist.
    30 19. Ala-Ser-His-Leu-Gly-Leu-Ala- Arg-Gly nach Patentanspruch 16.
  18. 20. Arg-Gln-His-Ala-Arg-Ala-Ser-His-Leu-Gly-Leu-Ala-Arg-Gly nach Patentanspruch 16.
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