CH643820A5 - Peptidyl-arginin-aldehyd-derivate sowie verfahren zur herstellung dieser verbindungen. - Google Patents

Peptidyl-arginin-aldehyd-derivate sowie verfahren zur herstellung dieser verbindungen. Download PDF

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CH643820A5
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Eva Dr Barabas
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Description

Die Erfindung betrifft neue Peptidyl-arginin-aldehyd-Derivate der allgemeinen Formeln I oder Ia
X-Y-Pro-NH-H
X
NH
'N-C ^ (l)
NH-COOH
■NH
-Y-Pro-NH-nb ' NH-C^ (Ia)
CHO ^NH-COOH
worin
X Wasserstoff oder eine Benzoylgruppe oder tert.-Butyl-oxycarbonylgruppe und
Y einen D-Phenylalanin-, ß-Phenyl-D-milchsäure- oder s D-Allo-isoleucinrest bedeuten, sowie von Salzen dieser Verbindungen.
Es ist bekannt, dass Peptid-aldehyde von geeigneter Struktur die proteolytischen Reaktionen der Serin- bzw. Cy-stein-enzyme hemmen können. Diese Enzymhemmung wird io dadurch erklärt, dass die -CH=O Gruppe der Peptidalde-hyde in Additionsreaktion mit der reaktiven -OH bzw. -SH Gruppe der proteolytischen Enzyme treten kann; das durch diese Additionsreaktion entstehende Hemiacetal tritt nämlich wie ein «unproduktives» Analogon des bei der Enzym-15 Substrat-Wechselwirkung sonst entstehenden tetrahedri-schen Übergangskomplexes auf [vgl. Westerik u. Wolfenden, J. Biol. Chem. 247, 8195 (1972)].
Die ersten bekannten Vertreter dieser enzymhemmenden Verbindungen waren die Leupeptine natürlichen Ursprungs, 20 das Acetyl-L-leucyl-L-leucyl-arginin-aldehyd-hydrochlorid und das Propionyl-L-leucyl-L-leucyl-arginin-aldehyd-hydro-chlorid, welche zur Hemmung von Plasmin, Trypsin und Papain fähig sind [vgl. Kawamura u. Mitarb., Chem. Pharm. Bull. 17,1902 (1969); H. Umezava: Enzyme Inhibitors of 25 Microbial Origin, University Park Press, Baltimore-London-Tokyo, 1972, S. 17-29]. Weitere Peptidyl-arginin-aldehyde, z.B. das Benzoyl-D-allo-isoleucyl-L-prolyl-L-arginin-alde-hyd-p-toluolsulfonat und das D-Phenylalanyl-L-prolyl-L-arginin-aldehyd-acetat zeigen erhebliche Antithrombin-Wir-30 kungen[vgl.: ungarische Patentschrift Nr. 169 870],
Auf Grund von NMR-Untersuchungen der Leupeptide wurden diese Acyl-arginin-aldehyd-hydrochloride als Gemische von schwankender Zusammensetzung betrachtet [vgl. Maeda u. Mitarb., J. Antibiotics (Toyko), 24,402 (1971); 35 Kawamura u. Mitarb., Chem. Pharm. Bull. 17,1902 (1969)], in welchen neben dem Acyl-arginin-aldehyd-hydrochlorid das entsprechende Aldehyd-hydrat und das cyclische Carbi-nol-amin-Derivat als weitere Komponenten anwesend sind. Von diesen beiden Komponenten kann das Aldehyd-hydrat 40 nicht unmittelbar in der zur Enzymhemmung führenden Hemiacetalbildung mitwirken [vgl. Westerik und Wolfenden, J. Biol. Chem. 247, 8195 (1972)]. Gerade dadurch, d.h. durch das ungewisse bzw. schwankende Mass der Bildung von Aldehyd-hydrat, kann unsere neuere Beobachtung er-45 klärt werden, dass die enzymhemmende Wirkung der erwähnten synthetischen Produkte, wie z.B. die Antithrombin-Aktivität von D-Phenylalanyl-L-prolyl-L-arginin-aldehyd-acetat oder -hydrochlorid, ziemlich schwankend ist und dass die Wirksamkeit dieser Verbindungen beim Stehen in geloso stem Zustand [z.B. in Lösung in Tris-(hydroxymethyl)-methylamin-hydrochlorid-Puffer, pH = 7,4] mit der Zeit abnimmt.
Die Zielsetzung der vorliegenden Erfindung war deshalb die Herstellung von neuen, im Vergleich zu den bekannten 55 derartigen Produkten stabilere und/oder höhere enzymhemmende Aktivität aufweisenden Peptidyl-arginin-aldehyd-De-rivaten.
Es wurde nun gefunden, dass, wenn man von geschützten Peptidyl-arginin-aldehyden, welche an den Guanidino-6o gruppen Schutzgruppen vom Urethan-Typ, z.B. Benzyloxy-carbonyl-Schutzgruppen, und an den N- bzw. O-terminalen Gruppen eine Schutzgruppe vom Urethan-Typ oder eine Benzoylgruppe aufweisen, diese Schutzgruppen in neutralen Medien abspaltet, Verbindungen der Formel I entstehen. So 65 wird z.B. bei der in Abwesenheit von Säuren oder Basen durchgeführten Hydrogenolyse von Benzyloxycarbonyl-D-phenylalanyl-L-prolyl-NG-benzyloxycarbonyl-L-arginin-aldehyd
643 820
(worin NG für das œ-Stickstoffatom der Arginin-Seitenkette steht) D-Phenylalanyl-L-prolyl-NG-carboxy-L-arginin-alde-hyd (also eine Verbindung der allgemeinen Formel I, worin X Wasserstoff und Y einen D-Phenylalanin-Rest bedeuten) erhalten. Demgegenüber führt bekanntlich die in basischem Medium durchgeführte Hydrogenolyse von mit Benzyloxy-carbonylgruppe geschützten Peptidyl-arginin-aldehyden und die nachfolgende Salzbildung zu freien Peptidyl-arginin-aldehyd-salzen. So wurden z.B. aus Z-D-Phe-Pro-Arg(Z)-H auf diesem Weg H-D-Phe-Pro-Arg-H-acetat und -hydro-chlorid erhalten (vgl. ungarische Patentschrift Nr. 169 870).
Die in den obigen und in den nachfolgenden chemischen Benennungen von Aminosäureresten bzw. Peptidderivaten verwendeten Abkürzungen entsprechen den in der Fachliteratur üblichen Abkürzungen, vgl. z. B. J. Biol. Chem. 247, 977 (1972); es bedeuten ferner:
Z Benzyloxycarbonylgruppe, Boc tert.-Butyloxycarbo-nylgruppe, Bz Benzoylgruppe, Arg(Z) NG-Benzyloxycarbo-nyl-L-arginin- und Arg(COOH) NG-Carboxy-L-Argininrest.
Es wurde ferner gefunden, dass die enzymhemmende Wirkung der Tripeptid-aldehydderivate der allgemeinen Formel I in überraschender Weise stabiler und stärker ist als die Wirkung der entsprechende Aminosäuresequenzen enthaltenden freien Tripeptid-aldehydsalze. So zeigt z.B. das H-D-Phe-Pro-Arg(COOH)-H eine höhere Antithrombin-Ak-tivität, d.h. eine stärkere hemmende Wirkung, auf die Reaktion von Thrombin + Fibrinogen als das H-D-Phe-Pro-Arg-H-hydrochlorid bzw. -acetat, welche schwächere und in Abhängigkeit von den Synthesebedingungen schwankende enzymhemmende Wirkungen zeigen. Die Antithrombin-Ak-tivität von NG-Carboxy-tripeptid-aldehyden der allgemeinen Formel I bleibt nach 20 Stunden Stehen in einer Pufferlösung von pH = 7,4 praktisch unverändert, während die
Aktivität von entsprechenden freien Tripeptid-aldehyd-sal-zen unter den gleichen Bedingungen auf 10 bis 20% des Anfangswertes sinkt.
Eine weitere überraschende Eigenschaft der NG-Carb-s oxy-tripeptid-aldehyde der allgemeinen Formel I besteht darin, dass ihre enzymhemmende Wirkung durch partielle Pro-tonierung (Salzbildung) weiter erhöht wird. So ist z, B. das Hemihydrochlorid von D-Phenylalanyl-L-prolyl-NG-carboxy-L-arginin-aldehyd fünfmal wirksamer als die ent-io sprechende, aber keine Salzsäure enthaltende Verbindung. Die Stabilität der NG-Carboxy-tripeptidaldehyde nimmt zwar mit der Protonierung der Verbindungen ab, die Stabilität der protonierten Verbindungen ist aber nach 20stün-digem Stehen in Pufferlösungen noch immer höher als die i5 Stabilität der entsprechende Aminosäuresequenzen enthaltenden freien Tripeptid-aldehydsalze unter den gleichen Bedingungen.
Zur Veranschaulichung der oben geschilderten Wirksam-keits- und Stabilitätsverhältnisse sind in der nachstehenden 20 Tabelle I die Antithrombin-Aktivitäten von D-Phenylalanyl-L-prolyl-NG-carboxy-L-arginin-aldehyd (Formel I, X = H, Y = D-Phenylalaninrest) und von dessen Hemihydrochlorid, ferner von zwei Salzen von die gleichen Aminosäuresequenzen enthaltenden freien Tripeptid-aldehyden 25 und die Änderungen dieser Aktivitäten nach 20stündigem Stehen in Tris/HCl Puffer (pH = 7,4) sowie die auf H-D-Phe-Pro-Arg(COOH)-H (Aktivität = 100) bezogenen relativen Aktivitäten dieser Verbindungen zusammengestellt. Die Antithrombin-Aktivitäten der einzelnen Verbindungen wur-30 den durch diejenigen Substanzmengen gekennzeichnet, welche zu der zehnfachen Verlängerung der Gerinnungszeit von mit Thrombin induziertem Fibrinogen erforderlich sind.
Tabelle I
Antithrombin-Aktivität von Tripeptid-aldehyd-Derivaten
Peptidderivat
Die zur zehnfachen Verlängerung der Gerinnungszeit erforderliche Substanzmenge unmittelbar nach der Lösung des nach 20 Stunden Peptids
Hg/ml relative Aktivität
Hg/ml relative Aktivität
H-D-Phe-Pro-Arg(COOH)-H 0,275 (100) 0,300 (92)
H-D-Phe-Pro-Arg(COOH)-H • 0,5 HCl 0,050 (550) 0,350 (79)
H-D-Phe-Pro-Arg-H • 2 HCl <a> 0,35-0,95 (97-29) 6,0 (5)
H-D-Phe-Pro-Arg-H • 2 CH3COOHW 0,37-1,25 (73-22) 6,2 (4)
<a) Ein durch die Hydrogenolyse von Z-D-Phe-Pro-Arg(Z)-H in basischem Medium und anschliessende Salzbildung hergestelltes Produkt.
Die Antithrombin-Aktivitäten der einzelnen Verbindungen wurden im folgenden System ermittelt:
0,2 ml 0,5%iges Rinder-Fibrinogen in 0,9%iger Kochsalzlösung,
0,1 ml Tris/HCl Pufferlösung (pH = 7,4), welche auch das zu prüfende Peptid enthielt und
0,1 ml 5 E/ml Lösung von US Standard Human Thrombin (NIH, Bethesda, Maryland, USA).
Die Gerinnungszeit dieses Systems ohne Peptidzusatz betrug 15 sec.
Die Ergebnisse der in vivo Untersuchungen sind am Beispiel von D-Phenylalanyl-L-prolyl-NG-carboxy-L-arginin-aldehyd (Formel I, X = H, Y = D-Phenylalaninrest) veranschaulicht. Die an fünf verschiedenen Tierarten (Maus, Ratte, Haase, Hund, Affe) durchgeführten Untersuchungen ha-55 ben gezeigt, dass sich die erhöhte Antithrombin-Aktivität der genannten Verbindung auch in vivo manifestiert. Diese Wirkung ist nicht nur bei intravenöser, intramusculärer und subcutaner, sondern auch bei oraler Verabreichung sehr erheblich. Es ist für die in vivo Antithrombin-Aktivität von H-60 D-Phe-Pro-Arg(COOH)-H charakteristisch, dass diese Verbindung in oralen Dosen von 50 mg/kg an Hunden die Gerinnungszeit des Blutes - im Thrombelastograph (Hellige, Wien, Österreich) gemessen - auf die 4- bis 6fache erhöht; die Zeitdauer der Wirkung ist etwa 2 Stunden. Die Salze des 65 entsprechenden freien Tripeptid-aldehyds, z.B. des D-Phenylalanyl-L-prolyl-L-arginin-aldehyd-hydrochlorids bzw. -acetats, zeigen in oralen Dosen von 50 mg/kg praktisch keinen Einfluss auf die Gerinnungszeit des Blutes.
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Der Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist demnach ein Verfahren zur Herstellung von neuen Peptidyl-arginin-aldehyd-Derivaten der Formel I oder Ia
I ^NH (I)
X-Y —Pro-NH-HCL N-C .
\ NH-COOH
OH
1 oder
X-Y-Pro-NH-HC NH-C " (ia)
^HO ^ NH-COOH
worin
X Wasserstoff oder eine Benzoylgruppe oder tert.-Butyloxycarbonylgruppe und
Y einen D-Phenylalanin-, ß-Phenyl-D-milchsäure- oder D-Allo-isoleucinrest bedeuten, sowie von Salzen dieser Verbindungen aus an den Guanidinogruppen durch Schutzgruppen vom Urethan-Typ und an den N- bzw. O-termina-len Gruppen durch eine Schutzgruppe vom Urethan-Typ oder eine Benzoylgruppe, vorteilhaft durch Benzyloxycarbo-nylgruppen, geschützten Peptidyl-arginin-aldehyden. Erfin-dungsgemäss geht man derart vor, dass man die Schutzgruppe durch Hydrogenolyse im Gemischen von einem niederen Alkanol mit Wasser abspaltet und gewünschtenfalls das erhaltene Produkt in ein Salz überführt.
Bei einer vorteilhaften Ausführungsweise des erfindungs-gemässen Verfahrens wird das an der Guanidinogruppe durch Benzyloxycarbonylgruppe geschützte L-Arginin-lac-tam mit dem entsprechenden N-Acyl-dipeptid kondensiert, das erhaltene geschützte Tripeptid-lactam reduziert, das erhaltene geschützte Tripeptid-aldehyd von den an der Guanidinogruppe oder gegebenenfalls an der N-terminalen Gruppe und an der Guanidinogruppe anwesenden Benzyloxy-carbonylgruppen durch im Gemisch von Äthanol und Wasser durchgeführte Hydrogenolyse befreit, dann wird aus dem Reaktionsgemisch das Äthanol unter vermindertem Druck abdestilliert und die zurückbleibende wässrige Lösung lyophilisiert. Gewünschtenfalls wird das erhaltene Lyophilisat in Wasser gelöst und nach der Zugabe von einer weniger als äquivalenten Menge einer Säure wieder lyophilisiert.
Die praktische Durchführung des erfindungsgemässen Verfahrens wird durch die nachstehenden Beispiele näher veranschaulicht.
Die im Beispiel angegebenen Rf-Werte wurden durch Schichtchromatographie an Silicagel («Kieselgel G», Produkt der Fa. Reanal, Budapest) in den folgenden Lösungsmittelgemischen ermittelt:
1. Äthylacetat - Pyridin - Essigsäure - Wasser 480 : 20 : 6 : 11
1. Äthylacetat - Pyridin - Essigsäure - Wasser 240 : 20: 6 : 11
3. Äthylacetat - Pyridin - Essigsäure - Wasser 60:20:6: 11
4. Äthylacetat - Pyridin - Essigsäure - Wasser 30 : 20 : 6 : 11
Beispiel 1
D-Phenylalanyl-L-prolyl-NG-carboxy-L-arginin-aldehyd (Formel I, X = H, Y = D-Phenylalaninrest) Schritt 1: tert.-Butyloxycarbonyl-N°-benzyloxycarbonyl-L-arginin-lactam 41,1 g (125 mMol) tert.-Butyloxycarbonyl-L-arginin-hy-drochlorid-hydrat [Yamashiro u. Mitarb., J. Am. Chem. Soc. 94, 2855 (1972)] werden in 125 ml 4N Natriumhy-droxydlösung gelöst, die Lösung auf — 5 °C bis 0 °C abgekühlt und unter lebhaftem Rühren mit 75 ml (500 mMol) Chlorkohlensäure-benzylester und 125 ml 4N Natriumhydroxydlösung versetzt, wodurch der pH-Wert des Gemisches über 10 steigt.
Das Rühren wird bei etwa 0 °C 1,5 Stunden fortgesetzt, dann wird das Gemisch mit 100 ml Wasser verdünnt und mit je 100 ml Diäthyläther dreimal ausgeschüttelt und anschliessend mit auf 4 bis 6 °C abgekühlter 3N Schwefelsäure unter Eiswasser-Kühlung bis pH = 3 angesäuert (wozu etwa 130 ml 3N Schwefelsäure erforderlich sind). Das sich abscheidende Produkt wird mit je 250 ml Äthylacetat dreimal extrahiert, die Äthylacetatphasen werden vereinigt, mit je 125 ml 15%iger Natriumchloridlösung zweimal ausgeschüttelt, mit wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck eingedampft. Der Verdampfungsrückstand wird mit Diäthyläther verrieben, abfiltriert, mit Diäthyläther gewaschen und an der Luft getrocknet. Es werden auf diese Weise 37,5 g tert.-Butyloxycarbonyl-N°-benzyl-oxycarbonyl-L-arginin (76% d.Th.) erhalten; Rf(2) : 0,17-0,27.
Das auf obige Weise erhaltene Produkt wird in 130 ml .Tetrahydrofuran gelöst, die Lösung mit 13,58 ml (97 mMol) Triäthylamin versetzt und auf —10 °C abgekühlt. Bei dieser Temperatur werden 12,8 ml (97 mMol) Chlorkohlensäure-isobutylester und anschliessend, nach 5 Minuten Rühren, 13,6 ml (97,8 mMol) Triäthylamin zugegeben. Das Reaktionsgemisch wird bei 0 °C eine Stunde, dann ohne Kühlung noch eine Stunde weiter gerührt und dann auf 600 ml Eiswasser gegossen. Das ausgeschiedene Produkt wird abfiltriert, mit Wasser gewaschen und dann im Vakuum-Exsik-kator über Phosphorpentoxyd getrocknet. Es werden auf diese Weise 32,7 g tert.-Butyloxycarbonyl-NG-benzyloxy-carbonyl-L-arginin-lactam (91% d.Th.; die auf Boc-Arg-(HCl)-OH • H20 berechnete Ausbeute beträgt 70%) erhalten; RfW : 0,85-0,95; F. 162-164 °C.
Schritt 2: Benzyloxycarbonyl-D-phenylalanyl-L-prolyl-NG-benzyloxycarbonyl-L-arginin-lactam 8,6 g (22 mMol) tert.-Butyloxycarbonyl-NG-benzyloxy-carbonyl-L-arginin-lactam (Beispiel 1, Schritt 1) werden in 20 ml Äthylacetat suspendiert und unter Rühren bei 5 °C mit 40 ml 4M Salzsäurelösung in Äthylacetat versetzt. Das Reaktionsgemisch wird unter Eiswasser-Kühlung 30 Minuten gerührt, dann mit 100 ml abgekühltem Äthylacetat verdünnt. Der Niederschlag wird abfiltriert, mit Äthylacetat gewaschen und im Vakuum-Exsikkator über Kaliumhydroxyd getrocknet. Das auf diese Weise erhaltene NG-Benzyl-oxycarbonyl-L-arginin-lactam-hydrochlorid wird in 20 ml Dimethylformamid gelöst, die Lösung auf —10 °C abgekühlt und mit 6,2 ml (44 mMol) Triäthylamin versetzt. Es wird eine Suspension erhalten, welche dann mit dem auf die nachstehende Weise hergestellten gemischten Anhydrid umgesetzt wird.
8 g (20 mMol) Benzyloxycarbonyl-D-phenylalanyl-L-prolin [Nikolaides u. Mitarb., J. Med. Chem. 11, 74 (1968)] werden in 25 ml Dimethylformamid gelöst, die Lösung auf —15 °C abgekühlt und unter Rühren bei dieser Temperatur mit 2,22 ml (20 mMol) N-Methyl-morpholin und 2,64 ml (20 mMol) Chlorkohlensäure-isobutylester versetzt. Nach 10 Minuten Rühren wird die obige Suspension zugesetzt und
4
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
der pH-Wert des Reaktionsgemisches nach Bedarf mit Triäthylamin auf 8-9 eingestellt. Das Gemisch wird eine Stunde bei —15 °C und eine weitere Stunde bei 0 °C gerührt, dann mit 50 ml Benzol verdünnt. Die ausgeschiedenen Salze werden abfiltriert und mit je 20 ml Benzol zweimal nachgewaschen. Die Waschflüssigkeiten werden mit dem Filtrat vereinigt, dann werden 50 ml Wasser zugegeben, die Phasen getrennt und die wässrige Phase mit 20 ml Benzol dreimal ausgeschüttelt. Die Benzolphasen werden vereinigt, mit je 30 ml 10%iger wässriger Natriumcarbonatlösung dreimal, dann mit 30 ml Wasser einmal, mit je 30 ml 0,1 N Salzsäurelösung zweimal und schliesslich mit je 30 ml Wasser zweimal gewaschen, mit wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck eingedampft. Der Verdampfungsrückstand wird mit 30 ml Diäthyläther verrieben, der Äther dekantiert, der Rückstand mit Petroläther verrieben, abfiltriert, mit Petroläther gewaschen und an der Luft getrocknet. Es werden auf diese Weise 11,7 g Benzyloxycarbonyl-D-phenyIalanyl-L-prolyl-NG-benzyloxycarbonyl-L-arginin-lac-tam (87% d.Th.) erhalten; Rf(I) = 0,72-0,78.
Schritt 3: Benzyloxycarbonyl-D-phenylalanyl-L-prolyl-NG-benzyloxycarbonyl-L-arginin-aldehyd
10,05 g (15 mMol) Benzyloxycarbonyl-D-phenylalanyl-L-proiyl-NG-benzyloxycarbonyl-L-arginin-lactam (hergestellt nach Beispiel 1, Schritt 2) werden in 45 ml Tetrahydro-furan gelöst, die Lösung auf —20 °C abgekühlt und unter lebhaftem Rühren bei dieser Temperatur mit in Tetrahydro-furan gelöstem 11,25 mMol Lithiumaluminiumhydrid (ca. 28 ml einer 0,4M Lösung) versetzt. Das Stattfinden der Reduktion wird durch Dünnschichtchromatographie kontrolliert (Rf(1)-Wert des Lactams: 0,72-0,78, des Aldehyds: 0,32-0,40); nötigenfalls kann weitere Lithiumaluminiumhydridlösung zugegeben werden. Nach dem Ablauf der Reaktion wird das Reaktionsgemisch mit IN Salzsäure vorsichtig bis pH 2 angesäuert und mit so viel Wasser verdünnt,
dass noch keine Fällung stattfindet (etwa 100 ml). Das Gemisch wird dann mit je 30 ml n-Hexan zweimal und anschliessend mit je 75 ml Dichlormethan dreimal ausgeschüttelt. Die mit Dichlormethan erhaltenen Extrakte werden vereinigt, mit je 10 ml 10%iger wässriger Natriumcarbonatlösung dreimal und anschliessend mit je 10 ml Wasser zweimal gewaschen, mit wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck eingedampft. Der Verdampfungsrückstand wird in 50 ml Benzol gelöst und die Lösung unter vermindertem Druck eingedampft; das Lösen des Rückstands in Benzol und das Verdampfen des Benzols werden noch zweimal wiederholt. Der zuletzt erhaltene Verdampfungsrückstand wird mit Diäthyläther verrieben, abfiltriert, mit Diäthyläther gewaschen und an der Luft getrocknet. Es werden auf diese Weise 7,3 g Benzyloxycarbo-nyl-D-phenylalanyl-L-prolyl-NG-benzyloxycarbonyl-L-argi-nin-aldehyd (72% d.Th.) erhalten; Rf(1) = 0,32-0,40; F. 116-117°C.
Schritt 4: D-Phenylalanyl-L-prolyl-NG-carboxy-L-arginin-aldehyd
6,7 g (10 mMol) Benzyloxycarbonyl-D-phenylalanyl-L-prolyl-NG-benzyloxycarbonyl-L-arginin-aldehyd (hergestellt nach Beispiel 1, Schritt 3) werden in 100 ml 75%igem wäss-rigem Äthanol gelöst, die Lösung mit 1 g 10%igem Palladium-Aktivkohle-Katalysator versetzt und bei Normaldruck mit Wasserstoff behandelt. Das Fortschreiten der Hydrierung wird durch Dünnschichtchromatographie kontrolliert (Rf(4) - Wert des geschützten Tripeptid-aldehyds: 0,90-0,95, des freien N°-Carboxyderivats: 0,35-0,40). Nach der Beendigung der Reaktion wird der Katalysator abfiltriert, mit 30 ml Wasser nachgewaschen und das mit der Waschflüssigkeit vereinigte Filtrat zum Entfernen des Äthanols unter vermindertem Druck auf etwa 30-40 ml einge5 643 820
engt. Der wässrige Rückstand wird mit 100 ml Wasser verdünnt, mit 30 ml Dichlormethan ausgeschüttelt, dann zum Gefrieren gebracht und lyophilisiert. Es werden auf diese Weise 4,3 g D-Phenylalanyl-L-prolyl-NG-carboxy-L-argmin-s aldehyd erhalten; Rf(4) = 0,35-0,40; [a]D20 = -123 ± 1° (c = 1, in Wasser).
Aminosäure-Analyse: Phe = 1,02, Arg-H = 0,97 (gemessen als NH3), Pro = 1,00 (Beziehungsgrundlage). Molekulargewicht auf Grund der Aminosäure-Analyse berechnet: io 471.
Mit Schwefelsäure freisetzbares C02: 10,9%; als BaC03 fällbares C02:2,1%.
Beispiel 2
i5 D-Phenylalanyl-L-prolyl-NG-carboxy-L-arginin-aldehyd-hemihydrochlorid 0,48 g D-Phenylalanyl-L-prolyl-NG-carboxy-L-arginin-aldehyd (hergestellt nach Beispiel 1) werden in 5 ml Wasser gelöst, die Lösung auf 3-5 °C abgekühlt und bei dieser Tem-20 peratur mit 5 ml 0,1N Salzsäure versetzt. Das Gemisch wird zum Gefrieren gebracht und lyophilisiert. Es werden auf diese Weise 0,45 g D-Phenylalanyl-L-prolyl-NG-carboxy-L-arginin-aldehyd-hemihydrochlorid erhalten; Rf(4) = 0,35-0,40; [a]D20 = -120° (c = 1, in Wasser).
25
Beispiel 3
tert.-Butyloxycarbonyl-D-phenylalanyl-L-prolyl-NG-carboxy-L-arginin-aldehyd (Formel I, X = tert.-Butyloxycarbonyl, Y = D-Phenylalaninrest) 30 Schritt 1: tert.-Butyloxycarbonyl-D-phenylalanyl-L-prolyl-NG-benzyloxycarbonyl-L-arginin-lactam 8,6 g (22 mMol) tert.-Butyloxycarbonyl-N°-ben-zyloxycarbonyl-L-arginin-lactam werden nach Beispiel 1, Schritt 2, in NG-Benzyloxycarbonyl-L-arginin-lactam über-35 geführt und die erhaltene, in Dimethylformamid suspendierte Verbindung mit dem auf nachstehende Weise hergestellten gemischten Anhydrid umgesetzt.
7,25 g (20 mMol) tert.-Butyloxycarbonyl-D-phenyl-ala-nyl-L-prolin [U. Ludescher und R. Schwyzer: Helv. Chim. 40 Acta 55, 2052 (1972)] und 2,22 ml (20 mMol) N-Methylmor-pholin werden in 20 ml Dimethylformamid gelöst, die Lösung auf —15 °C abgekühlt und bei dieser Temperatur unter Rühren mit 2,64 ml (20 mMol) Chlorkohlensäure-isobutyl-ester versetzt; nach 5 Minuten wird dann die oben genannte 45 Suspension zugegeben. Das Reaktionsgemisch wird bei — 15 °C eine Stunde lang weiter gerührt, dann auf 0 °C gebracht und noch eine Stunde gerührt und anschliessend mit 30 ml Benzol verdünnt. Die gefällten Salze werden abfiltriert und mit je 10 ml Benzol zweimal nachgewaschen. Die so Waschflüssigkeiten werden mit dem Filtrat vereinigt, das Gemisch mit 50 ml Wasser versetzt und die Phasen getrennt. Die wässrige Phase wird mit je 10 ml Benzol zweimal ausgeschüttelt, die Benzolphasen werden vereinigt und mit je 30 ml 10%iger Natriumcarbonatlösung dreimal, mit 30 ml 55 Wasser einmal, dann mit je 30 ml 0,5N Schwefelsäure dreimal und zuletzt mit je 30 ml Wasser zweimal gewaschen. Die organische Phase wird dann mit wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck eingedampft. Der Rückstand wird mit Petroläther verrieben, abfiltriert, mit 60 Petroläther gewaschen und an der Luft getrocknet. Es werden auf diese Weise 9,65 g tert.-Butyloxycarbonyl-D-phenyl-alanyl-L-prolyl-N°-benzyloxycarbonyl-L-arginin-lactam (76% d.Th.) erhalten; Rf(1) = 0,81-0,89.
Schritt 2: tert.-Butyloxycarbonyl-D-phenylalanyl-L-prolyl-65 NG-benzyloxycarbonyl-L-arginin-aldehyd
9,52 g (15 mMol) tert.-Butyloxycarbonyl-D-phenylala-nyl-L-prolyl-N°-benzyloxycarbonyl-L-arginin-lactam (hër-gestellt nach Beispiel 3, Schritt 1) werden auf die im Beispiel
643 820
1, Schritt 3 beschriebene Weise weiter umgesetzt, mit dem Unterschied, dass nach der Reduktion mit Lithiumaluminiumhydrid das Reaktionsgemisch mit 0,5N Schwefelsäure angesäuert wird. Es werden 6,9 g tert.-Butyloxycarbo-nyl-D-phenylalanyl-L-prolyl-NG-benzyloxycarbonyl-L-argi-nin-aldehyd (72% d.Th.) erhalten; Rf(2) = 0,46-0,56.
Schritt 3: tert.-Butyloxycarbonyl-D-phenylalanyl-L-prolyl-NG-carboxyl-L-arginin-aldehyd
6,4 g (10 mMol) tert.-Butyloxycarbonyl-D-phenylalanyl-L-prolyl-NG-benzyloxycarbonyl-L-arginin-aldehyd (hergestellt nach Beispiel 3, Schritt 2) werden nach Beispiel 1, Schritt 4 hydriert und aufgearbeitet. Es werden 5,1 g tert.-Butyloxy-D-phenylalanyl-L-prolyl-NG-carboxy-L-arginin-aldehyd (85% d.Th.) erhalten; Rf(3) = 0,46-0,56; [a]D20 = —64 ± 1° (c = 1, in mit Salzsäure auf pH = 7 eingestellter wässriger Lösung).
Aminosäure-Analyse: Phe = 0,96; Arg-H = 0,97 (gemessen als NH3); Pro = 1,00 (Beziehungsgrundlage). Auf Grund der Aminosäure-Analyse berechnetes Molekulargewicht: 570.
Mit Schwefelsäure freisetzbares C02:10,1%; als BaC03 fällbares C02: 3,1%.
Beispiel 4
Benzoyl-D-allo-isoleucyl-L-prolyl-NG-carboxy-L-arginin-aldehyd (Formel I, X = Benzoyl, Y = D-Allo-isoleucinrest)
Schritt 1: Benzoyl-D-allo-isoleucyl-L-prolin-dicyclo-hexyl-ammoniumsalz 19,2 g (81,5 mMol) Benzoyl-L-isoleucin [vgl. F. Ehrlich: Ber. 37,1809 (1904)] und 16,5 g (80 mMol) Dicyclohexyl-carbodiimid werden in 150 ml auf 5-10 °C abgekühltem Dichlormethan gelöst. Die Lösung wird unter Kühlung mit Eiswasser zwei Stunden gerührt und anschliessend mit 2 ml Triäthylamin und 100 ml Petroläther versetzt. Der gefällte Dicyclohexyl-harnstoff wird abfiltriert und mit je 20 ml Petroläther zweimal nachgewaschen. Das mit den Waschflüssigkeiten vereinigte Filtrat wird zweimal mit je 50 ml Wasser, dann zweimal mit je 50 ml 5%iger Natriumhydro-gencarbonatlösung und zuletzt wieder mit Wasser ausgeschüttelt, mit wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck eingedampft. Der Rückstand wird in 80 ml Pyridin gelöst, mit 9,2 g (80 mMol) L-Prolin und 22,4 ml (160 mMol) Triäthylamin versetzt, das Gemisch bei Raumtemperatur 6 Stunden gerührt und unter vermindertem Druck eingedampft. Der Rückstand wird im Gemisch von 100 ml Wasser und 50 ml Äther gelöst, die abgetrennte wässrige Phase mit je 20 ml Äther zweimal gewaschen, dann werden die Ätherphasen vereinigt und mit je 20 ml Wasser zweimal ausgeschüttelt. Die wässrigen Phasen werden vereinigt und mit 5N Schwefelsäure bis pH = 2 angesäuert. Das sich ausscheidende ölige Produkt wird mit je 50 ml Äthylacetat dreimal extrahiert, die Äthylacetat-Ex-trakte werden vereinigt, mit je 20 ml Wasser zweimal gewaschen, mit wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck eingedampft. Der Verdampfungsrückstand wird in 100 ml Äther gelöst und die Lösung mit 16 ml Dicyclohexylamin versetzt. Die gefällten Kristalle werden abfiltriert, mit je 20 ml Äther dreimal gewaschen und im Va-kuum-Exsikkator über konzentrierter Schwefelsäure getrocknet. Es werden auf diese Weise 26,3 g Benzoyl-D-allo-isoleucyl-L-prolin-dicyclohexylammoniumsalz (64% d.Th.) erhalten; F. 117-118 °C;
Rf(1) = 0,36-0,46 und 0,13-0,23 (Dicyclohexylamin). Aminosäure-Analyse: Allo-isoleucin: 0,92; Isoleucin: 0,02; Prolin: 1,00 (Beziehungsgrundlage).
Schritt 2: Benzoyl-D-allo-isoleucyl-L-prolyl-NG-benzyloxy-carbonyl-L-arginin-lactam Aus 8,6 g (22 mMol) tert.-Butyloxycarbonyl-NG-ben-zyloxycarbonyl-L-arginin-lactam wird nach Beispiel 1, s Schritt 2 das NG-Benzyloxycarbonyl-L-arginin-lactam hergestellt und das in Dimethylformamid suspendierte Produkt mit dem auf die nachstehende Weise hergestellten gemischten Anhydrid umgesetzt.
10,3 g (20 mMol) Benzoyl-D-allo-isoleucyl-L-prolin-lo dicyclohexylammoniumsalz (hergestellt nach Beispiel 4, Schritt 1) und 0,23 ml (2 mMol) N-Methyl-morpholin werden in 20 ml Dimethylformamid gelöst. Die Lösung wird auf —15 °C abgekühlt, unter Rühren mit 2,64 ml (20 mMol) Chlorkohlensäure-isobutylester und nach 5 Minuten mit der 15 obigen Lactam-Suspension versetzt. Das Reaktionsgemisch wird bei —15 °C eine Stunde und anschliessend bei 0 °C noch eine Stunde gerührt, dann werden die gefällten Salze abfiltriert und mit je 5 ml Dimethylformamid zweimal nachgewaschen. Das mit der Waschflüssigkeit vereinigte Filtrat 20 wird mit 100 ml Benzol verdünnt, mit je 30 ml Wasser dreimal, anschliessend mit je 20 ml IN Natriumhydroxydlösung zweimal, mit je 30 ml Wasser dreimal, mit je 20 ml 0,5N Schwefelsäure zweimal und zuletzt mit je 20 ml Wasser zweimal gewaschen, mit wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet 25 und unter vermindertem Druck eingedampft. Der Verdampfungsrückstand wird mit Petroläther verrieben, abfiltriert, mit Petroläther gewaschen und an der Luft getrocknet. Es werden auf diese Weise 9,3 g Benzoyl-D-allo-isoleucyl-L-prolyl-NG-benzyloxycarbonyl-L-arginin-lactam (76% d.Th.) 30 erhalten; Rf(1) = 0,52-0,62.
Schritt 3: enzoyl-D-allo-isoleucyl-L-prolyl-NG-benzyl-oxycarbonyl-L-arginin-aldehyd 9,2 g (15 mMol) nach Beispiel 4, Schritt 2 hergestelltes geschütztes Tripeptid-lactam werden in 40 ml Tetrahydro-35 furan gelöst, die Lösung auf —20 °C abgekühlt und unter Rühren bei dieser Temperatur mit der Lösung von 0,427 g (11,25 mMol) Lithiumaluminiumhydrid in Tetrahydrofuran versetzt. Das Gemisch wird mit IN Salzsäure bis pH = 2 angesäuert und anschliessend mit 80 ml Wasser verdünnt. Die 40 auf diese Weise erhaltene Lösung wird mit 30 ml n-Hexan gewaschen und dann mit je 50 ml Dichlormethan dreimal extrahiert. Die Dichlormethanextrakte werden vereinigt, mit je 10 ml 10%iger Natriumcarbonatlösung zweimal und anschliessend mit je 10 ml Wasser ebenfalls zweimal gewa-45 sehen, mit wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck eingedampft. Der Verdampfungsrückstand wird in 30 ml Benzol gelöst, die Lösung eingedampft, der Rückstand wieder in 30 ml Benzol gelöst und eingedampft, der Rückstand mit Diäthyläther verrieben, abfil-50 triert, mit Diäthyläther gewaschen und im Vakuum-Exsik-kator über konzentrierter Schwefelsäure getrocknet. Es werden auf diese Weise 6,7 g Benzoyl-D-allo-isoleucyl-L-prolyl-N°-benzyloxycarbonyl-L-arginin-aldehyd (72% d.Th.) erhalten; Rf<» = 0,47-0,57.
55 Schritt 4: Benzoyl-D-allo-isoleucyl-L-prolyl-NG-carboxy-L-arginin-aldehyd 6,2 g (10 mMol) nach Beispiel 4, Schritt 3 hergestelltes geschütztes Tripeptid-aldehyd werden auf die im Beispiel 1, Schritt 4 beschriebene Weise hydriert, das Produkt isoliert 60 und lyophilisiert. Es werden 4,05 g Benzoyl-D-allo-isoIeucyl-L-prolyl-NG-carboxy-L-arginin-aldehyd (68,7% d.Th.) erhalten; Rf(3) = 0,4-0,5; [a]D20 = —42,6 ± 1° (c = I, in mit Salzsäure auf pH = 7 eingestellter wässriger Lösung).
65 Aminosäure-Analyse: Allo-Ile = 0,97; Ile = 0,02; Arg-H = 0,95 (gemessen als NH3); Pro = 1,00 (Beziehungsgrundlage). Molekulargewicht auf Grund der Aminosäure-Analy-se: 590.
Mit Schwefelsäure freisetzbares C02: 9,5%; als BaC03 fällbares C02: 2,0%.
Beispiel 5
ß-Phenyl-D-lactyl-L-prolyl-NG-carboxy-L-arginin-aldehyd (Formel I, X = H, Y = ß-Phenyl--D-milchsäurerest)
Schritt 1: O-tert.-Butyloxycarbonylamido-ß-phenyl-D-lac-tyl-L-prolin
15,1 g (40 mMol) O-tert.-Butyloxycarbonylamido-ß-phenyl-D-milchsäure-N-hydroxy-succinimidester [vgl. Kisfaludy u. Mitarb.: Acta Biochim. Biophys. Acad. Sei. Hung, 6, 393 (1972)] werden in 50 ml Pyridin gelöst, die Lösung mit 4,7 g (40 mMol) L-Prolin und 5,6 ml (40 mMol) Triäthylamin versetzt, bis zur Auflösung der zugesetzten Stoffe gerührt und unter vermindertem Druck eingedampft. Der Rückstand wird im Gemisch von 100 ml Wasser und 100 ml Diäthyläther gelöst, die wässrige Phase abgetrennt, mit 30 ml Diäthyläther ausgeschüttelt, die Ätherphasen werden vereinigt und mit 30 ml Wasser ausgeschüttelt. Die wässrige Phase wird mit der ursprünglichen wässrigen Lösung vereinigt, mit 3N Salzsäure bis pH = 2 angesäuert und mit je 50 ml Äthylacetat dreimal extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen werden mit je 20 ml Wasser zweimal gewaschen, mit wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck eingedampft. Es werden auf diese Weise 9,85 g O-tert.-Butyloxycarbonylamido-ß-phenyl-D-lactyl-L-prolin (65% d.Th.) erhalten; Rf(2) = 0,4-0,5.
Schritt 2: O-tert.-Butyloxycarbonylamido-ß-phenyl-D-lac-tyl-L-prolyl-NG-benzyloxycarbonyl-L-arginin-lac-tam
11,2 g (28,6 mMol) tert.-Butyloxycarbonyl-NG-benzyloxycarbonyl-L-arginin-lactam (hergestellt nach Beispiel 1, Schritt 1) werden in 25 ml Äthylacetat suspendiert, die Suspension auf 5 °C abgekühlt und unter Rühren bei dieser Temperatur mit 50 ml 4M Salzsäurelösung in Äthylacetat versetzt. Das Gemisch wird unter Kühlung mit Eiswasser 30 Minuten gerührt, dann mit 130 ml abgekühltem Äthylacetat verdünnt. Der erhaltene Niederschlag wird abfiltriert, mit Äthylacetat gewaschen und im Vakuum-Exsikkator über wasserfreiem Kaliumhydroxyd getrocknet. Das auf diese Weise erhaltene NG-Benzyloxycarbonyl-L-arginin-lactam-hydrochlorid wird in 25 ml Dimethylformamid gelöst, die Lösung auf —10 °C abgekühlt und bei dieser Temperatur mit 8,1 ml (57,8 mMol) Triäthylamin versetzt. Die erhaltene Suspension wird dann dem auf nachstehende Weise hergestellten gemischten Anhydrid zugesetzt.
9,85 g (26 mMol) O-tert.-Butyloxycarbonylamido-ß-phe-nyl-D-lactyl-L-prolin (hergestellt nach Beispiel 5, Schritt 1) werden in 33 ml Dimethylformamid gelöst, die Lösung auf -15 °C abgekühlt und unter Rühren bei dieser Temperatur mit 2,89 ml (26 mMol) N-Methyl-morpholin und 3,43 ml (26 mMol) Chlorkohlensäure-isobutylester versetzt. Das Gemisch wird 10 Minuten gerührt, dann wird die obige Lac-tam-Suspension zugegeben, der pH-Wert des Gemisches nach Bedarf mit Triäthylamin auf 8 bis 9 eingestellt und das
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Gemisch bei —15 °C eine Stunde, dann bei 0 C noch eine Stunde gerührt. Das Reaktionsgemisch wird dann mit 60 ml Benzol verdünnt, die gefällten Salze werden abfiltriert und mit je 30 ml Benzol zweimal nachgewaschen. Das mit den Waschflüssigkeiten vereinigte Filtrat wird mit 70 ml Wasser vermischt, dann werden die Phasen getrennt und die wässrige Phase mit je 30 ml Benzol dreimal extrahiert. Die Benzolphasen werden vereinigt, mit je 40 ml 10%iger Natriumcarbonatlösung dreimal, dann mit je 40 ml Wasser dreimal, anschliessend mit je 40 ml 0,1 N Salzsäurelösung zweimal und zuletzt mit je 40 ml Wasser zweimal gewaschen, mit wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck eingedampft. Der Verdampfungsrückstand wird mit Petroläther verrieben, abfiltriert, mit Petroläther gewaschen und an der Luft getrocknet. Es werden auf diese Weise 10,3 gO-tert.-Butyloxycarbonylamido-ß-phe-nyl-D-lactyl-L-propyl-NG-benzyloxycarbonyl-L-arginin-lac-tam (60% d.Th.) erhalten; Rf(2) = 0,65-0,70.
Schritt 3: O-tert.-Butyloxycarbonylamido-ß-phenyl-D-lac-tyl-L-prolyl-NG-benzyloxycarbonyl-L-arginin-aldehyd
Aus 10,2 g (15 mMol) nach Beispiel 5, Schritt 2 erhaltenem geschütztem Tripeptid-lactam wird nach der im Beispiel 1, Schritt 3 beschriebenen Methode der im Titel genannte Aldehyd hergestellt, mit dem Unterschied, dass der nach dem Aufarbeiten erhaltene Verdampfungsrückstand mit einem 1 : 1 Gemisch von Diäthyläther und Petroläther verrieben und das abfiltrierte Produkt ebenfalls mit einem solchen Gemisch gewaschen wird. Es werden auf diese Weise 6,4 g O-tert.-Butyloxycarbonylamido-ß-phenyl-D-lactyl-L-prolyl-NG-benzyloxycarbonyl-L-arginin-aldehyd (62 % d.Th.) erhalten; Rf<2> = 0,32-0,42
Schritt 4: ß-Phenyl-D-lactyl-L-prolyl-NG-carboxy-L-argi-nin-aldehyd
6,2 g (9 mMol) nach Beispiel 5, Schritt 3 hergestellter geschützter Tripeptid-aldehyd werden in 100 ml 75%igem wässrigem Äthanol gelöst, die Lösung mit 1 g 10%igem Palladium-Aktivkohle Katalysator versetzt und unter normalem Druck mit Wasserstoff behandelt. Das Fortschreiten der Reaktion wird durch Dünnschichtchromatographie verfolgt (Rf(4)-Wert des geschützten Tripeptid-aldehyds: 0,92-0,97, des N°-Carboxylderivats: 0,56-0,66). Nach der Beendigung der Reaktion wird der Katalysator abfiltriert, mit 30 ml Wasser gewaschen, das mit der Waschflüssigkeit vereinigte Filtrat wird unter vermindertem Druck auf 30-40 ml eingeengt und der Rückstand mit 100 ml Wasser verdünnt. Die wässrige Lösung wird mit 30 ml Dichlormethan ausgeschüttelt, dann zum Gefrieren gebracht und lyophilisiert. Es werden auf diese Weise 3,8 g ß-Phenyl-D-lactyl-L-prolyl-NG-carboxy-L-arginin-aldehyd erhalten; Rf(4) = 0,56-0,66; [a]D20 = —81 ± l°(c= 1, in Wasser).
Aminosäure-Analyse: Arg-H = 0,96 (gemessen als NH3); Pro = 1,00 (Beziehungsgrundlage). Auf Grund der Aminosäure-Analyse berechnetes Molekulargewicht: 470.
Mit Schwefelsäure freisetzbares C02: 9,6%; als BaC03 fällbares C02:1,3%.
7
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55

Claims (4)

  1. 643 820
    PATENTANSPRÜCHE 1. Peptidyl-arginin-aldehyde der Formel I oder Ia
    X-Y-Pro
    X-Y-Pro r\
    -NH-HC N-(
    Y
    OH
    9
    LNH
    (I)
    *CHO
    NH-COOH
    oder
    . NH
    CT
    NH-COOH
    worin
    X Wasserstoff oder eine Benzoylgruppe oder tert.-Butyloxycarbonylgruppe und
    Y eine D-Phenylalanin-, ß-Phenyl-D-milchsäure- oder D-AlIo-isoleucylgruppe bedeuten, sowie Salze dieser Verbindungen.
  2. 2. Verfahren zur Herstellung von neuen Peptidyl-argi-ninaldehyden der Formel I oder Ia, worin X und Y die im Anspruch 1 angegebenen Bedeutungen haben, sowie von Salzen dieser Verbindungen aus an den Guanidinogruppen durch Schutzgruppen vom Urethan-Typ und an den N- bzw. O-terminalen Gruppen durch eine Schutzgruppe vom Ure-than-Typ oder eine Benzoylgruppe geschützten Peptidyl-argininaldehyden, dadurch gekennzeichnet, dass man die Schutzgruppen durch Hydrogenolyse in Gemischen von einem niederen Alkanol mit Wasser abspaltet und gewünsch-tenfalls das erhaltene Produkt in ein Salz überführt.
  3. 3. Verfahren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, dass man als Ausgangsmaterial mit Benzyloxycarbonyl-gruppen geschützte Verbindungen verwendet.
  4. 4. Arzneimittelpräparate mit blutgerinnungshemmender Wirkung, gekennzeichnet durch einen Gehalt an Peptidyl-argininaldehyden der Formel I oder Ia, worin X und Y die im Anspruch 1 angegebenen Bedeutungen haben, und/oder Salzen dieser Verbindungen.
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