CH648855A5

CH648855A5 - Aminoglycoside antibiotics and process for their preparation

Info

Publication number: CH648855A5
Application number: CH5618/80A
Authority: CH
Inventors: Tadashiro Fujii; Shuzo Satoi; Naoki Muto; Mitsuo Hayashi; Akira Kodama; Masaru Otani
Original assignee: Toyo Jozo Kk
Priority date: 1979-04-04
Filing date: 1980-07-23
Publication date: 1985-04-15
Also published as: JPS55133394A; JPS6126914B2; BE884925A; DE3013210A1

Description

Die Erfindung betrifft die neuen Aminoglykosid-Antibiotika G-367-1 und G-367-2 und ihre nicht-toxischen Salze sowie ein Verfahren zu ihrer Herstellung.

Das neue Aminoglykosid-Antibiotikum G-367-1 (nachstehend 65 als G-367-1 bezeichnet) und das neue Aminoglykosid-Antibiotikum G-367-2 (nachfolgend als G-367-2 bezeichnet) haben die folgenden physikalisch-chemischen Eigenschaften:

2. G-367-2:

Schmelzpunkt: 151 bis 155°C,

[ct]ö4: +159,8°, c = 1,0, H20 Elementaranalyse:

gefunden: C 50,41 H 7,92 N 15,16

berechnet: C 50,99 H 8,33 N 15,64 Molekulargewicht: 447, (bestimmt durch Massenspektrum) Summenformel: Q9H37N5O7;

UV-Absorptionsspektrum: kein charakteristisches Absorptionsmaximum bei 220 bis 360 nm, zeigt nur Endabsorption

3

648 855

IR-Absorptionsspektrum (KBr): wie in Fig. 3 dargestellt, Absorptionsbanden bei 3350,2920,1650,1540,1470,1350,1140, 1100,1050, 1020,950 cm"1

NMR-Spektrum (Wasserstoff): wie in Fig. 4 dargestellt (D20,100 MHz, innerer Standard: DSS)

NMR-Spektrum (Kohlenstoff): (D20, 25 MHz,

innerer Standard: Dioxan)

Nr.

ppm

Nr.

ppm

1

149,5

11

67,4 (Dioxan)

2

101,4

12

64,2

3"

98,7

13

51,6

4

97,5

14

50.1

5

87,9

15

47,2

6

85,1

16

43,0

7

75,2

17

37,7

8

73,1

18

36,2

9

70,0

19

23,9

10

68,6

20

22,5

Löslichkeit: löslich in Wasser und Methanol; unlöslich in Aceton, Benzol, Äthylacetat und Chloroform

Farbreaktion:

positiv: Ninhydrin, Entfärbung von Kaliumpermanganat; negativ: Elson-Morgan, Biuret;

Farbe: weisses Pulver

Beschaffenheit: basisch

Dünnschichtchromatographie (Silikagel): untere Schicht von Chloroform:Methanol:28%ig wässrigem Ammoniak (1:1:1): Rf = 0,28; 10%iges Ammoniumacetat:Methanol (1:1): Rf = 0,10.

Die oben angegebenen physikalisch-chemischen Eigenschaften von G-367-2 wie die Elementaranalyse, das Molekulargewicht und die Summenformel sind ähnlich dem bekannten Antibiotikum Sisomicin. Der Rf-Wert von Sisomicin bei Dünnschichtchromatographie mit Chloroform:Methanol:28 %ig wässrigem Ammoniak (1:1:1) ist aber 0,38, also von dem des G-367-2 verschieden. Andere physikalisch-chemische Eigenschaften von G-367-2 zeigen an, dass es sich um ein neues Aminoglykosid-Antibiotikum handelt, für das die folgende planare Struktur angenommen wird, wobei es sich vermutlich um ein Stereoisomeres von Sisomicin handelt.

HO

OH

NH

Das antimikrobielle Wirkungsspektrum (minimale Hemmkonzentration, MIC) von G-367-1 und G-367-2, bestimmt nach der Agar-Verdünnungsmethode, zeigt die folgende Tabelle:

MIC (mug/ml)

Testorganismus

G-367-1

G-367-2

Staphylococcus aureus ATCC 6538P

6,3

12,5

Staphylococcus aureus MS27

6,3

12,5

Staphylococcus aureus 0119

12,5

Staphylococcus epidermidis sp-al-1

1,6

Streptococcus pyogenes N.Y.5

6,3

M)C' (niiiç mil

'I i »iiij-giinNnuis G-367-2

Bacillus subtilis ATCC 6633 0,8 1,6

Escherichia coli NIHJ-JC2 1,6 3,1

Escherichia coli NIHJ-W3630 1,6 1,6

Escherichia coli NIHJ-W3630 RGN14 1,6 1,6

Citrobacter freundii GN346 1,6 3,1

Klebsiella pneumonia ATCC 10031 1,6 1,6

Salmonella enteritidis Gärtner 1,6 3,1

Shigella sonnei E33 1,6 3,1

Proteus morganii 0239 3,1 6,3

Proteus rettgeri ACR 3,1 3,1

Enterobacter aerogenes 0655 1,6 1,6

Enterobacter cloacae GN336 1,6 1,6

Serratia marcescens 25 50

Pseudomonas aerugenosa IAM1095 25 25

Pseudomonas aerugenosa ML4561 25 125

Pseudomonas aerugenosa ^^f^66 > > ^0

Pseudomonas aerugenosa ^^4561 ^ 50 50

Pseudomonas aerugenosa T?P4 12,5 12,5

Pseudomonas aerugenosa 1946 > 100 > 100

Pseudomonas aerugenosa 2512 > 100 > 100

Pseudomonas putida 1842 > 100 > 100

Pseudomonas maltophilia 1850 > 100 > 100

Die Antibiotika G-367-1 und G-367-2 der vorliegenden Erfindung haben einen starken antibakteriellen Effekt gegen Gramnegative Bakterien, und können in Form ihrer nicht toxischen Säureadditionssalze von organischen oder anorganischen Säuren, wie z. B. als Hydrochlorid, Hydrobromid, Sulfat, Phosphat, Carbonat, Acetat, Fumarat, Malat, Citrat, Mandelat, Succinat, Ascorbat, Aspartat oder Glutamat, verwendet werden.

Die Antibiotika G-367-1 und G-367-2 oder ihre nicht-toxi-schen Säureadditionssalze können als injizierbare Zubereitungen, z. B. in Form von 20- bis 40-mg-Fläschchen oder -Ampullen, verwendet werden.

Der G-367-1 und G-367-2 produzierende Actinomycetes-Stamm G-367 wurde aus einer Bodenprobe in Fuji-shi, Shizuokaken, Japan isoliert, und mit Dactylosporangium thailandense G-367 bezeichnet. Dieser Stamm wurde im Fementation Research Institute 8-1 Inage-Jagashi s-chrome, Chiba City, Japan, als FERM-P- Nr. 4840 am 28. Februar 1979 hinterlegt.

Die taxonomischen Eigenschaften (taxonomical properties) des Stammes sind die folgenden:

I Morphologische Eigenschaften:

Auf Calciummalat-Agar (Bact. Rev. 21,1 (1957) wurden bei 30° C, und einer Kultivierung von 3 bis 7 Tagen folgende Beobachtungen gemacht:

Das Substrat-Mycel ist gekrümmt oder webartig, von verzweigtem Wuchs, und ohne Fragmentierung, 0,5-0,8 nim Durchmesser und zeigt keine Bildung von «Luft-Hyphae» (aerial hyphae).

Auf dem Substrat-Mycel wird, eingebettet im Agar, ein kugelförmiger oder ellipsoider Körper mit den Dimensionen 1,5 bis 2,0 x 2,0 bis 2,5 |i festgestellt.

Auf dem Substrat-Mycel erheben sich kurze Sporangiophoren, und fingerartiges Sporangium zeigt sich einzeln oder gebüschelt an der Oberfläche des Agar-Mediums. Die Grösse des Sporangia ist 1,0 bis 1,5 x 4,0 bis 6,5 fi. Jedes Sporangium enthält eine vertikale, einzelne Reihe von drei bis vier Sporen. Die kugelförmigen, ellipsoiden oder birnenförmigen Sporen mit einer Grösse

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

648 855

4

von 1,0 bis 1.5 x 1,5 bis 2,5 (.i sind in Wasser beweglich durch polytrichose, polare Fäden.

II Verhalten mit Diaminopimelinsäure (Zusammensetzung von Diaminopimelinsäure):

Durch Mycel-Analyse (mycelial analysis) wurde ein Rm-Wert vom Meso-Typ (meso-type Rm value) und ein niedrigerer Rm-Wert als der des Meso-Typs (langsam wandernde Diaminopimelinsäure) festgestellt.

III Wachstum auf verschiedenen Medien:

Die an verschiedenen Medien bei 30° C nach 14 Tagen festgestellten Beobachtungen sind in der folgenden Tabelle veranschaulicht. «Luft-Mycel» (aerial mycélium) wird, ausser auf 5 Hafermehl-Agar in einer rudimentären Form, nicht gebildet. Die Bildung von Sporangia ist auf Calciummalat-Agar gut, mässig auf Boden-Agar (J. gen. Microbiol. 50,295 (1968), und gering oder überhaupt nicht auftretend auf den anderen Medien.

10 Die Farbbezeichnung basiert auf dem «Color Harmony

Manual, 4. Ausgabe 1958» (Container Corporation of America).

Wachstum auf verschiedenen Medien

Medium

Wachstum

Farbe des Substrat-Mycels

Lösliches Pigment

Saccharose-Nitrat-Agar (Waksmann medium No. 1)*

mässig bis schwach aprikosenfarbig (4ia) bis staubig-orange (41c) (dusty orange)

keines

Glucose-asparagin-Agar (Waksmann medium No. 2)*

schwach melonengelb (3ia) bis staubig-aprikosenfarbig (4ia)

keines

Glycerin-asparagin-Agar (ISP medium No. 5)**

gering bis schwach farblos bis hellmelonengelb (3ea)

keines

Stärke-Anorganischer Agar (ISP medium No. 4)**

mässig bis gut orangebraun (4nc) bis orange (41c) (dusty orange)

keines

Tyrosin-Agar (ISP medium No. 7)**

gering bis schwach aprikosenfarbig (4ga) bis blass-pastellorange (4ic)

keines

Hafermehl-Agar (ISP medium No. 3)**

mässig bis gut rostorange (4pe) bis orangebraun (4pc)

keines

Hefeextrakt-Malzextrakt-Agar (ISP medium No. 2)**

mässig bis gut ahornfarbig (41e) bis lohfarben (4ne)

ahornfarbig (41e) bis hellbraun (4ng)

Calciummalat-Agar schwach farblos keines

Nähr-Agar

(Waksmann medium No. 14)*

gering farblos keines

Benett-Agar

(Waksmann medium No. 30)*

mässig bis gut ahornfarbig (41e) bis lohfarben (4ne)

ahornfarbig (41e) bis hellbraun (4ng)

Emerson-Agar

(Waksmann medium No. 28)*

mässig pastellorange (4ic) bis arhornfarbig (41e)

ahornfarbig (41e)

Hickey and Tresner-Agar (Waksmann medium No. 32)*

mässig bis gut zimtfarbig (31e) bis ahornfarbig (41e)

ahornfarbig (41e) bis hellgewürzbraun (41g)

Glucose-Hefeextrakt-Agar (Waksmann medium No. 29)*

mässig melonengelb (3ga)

keines

Pepton-Hefeextrakt-eisenhaltiger Agar (IPS medium No. 6)**

gering farblos keines

Boden-Agar gering bis schwach farblos keines

Kartoffelstab (potato stabb) (Waksmann medium No. 40)*

mässig ziegelrot (5ne) bis kupferfarbig (51c)

keines

Kartoffelacker (potato stabb) + Calciumcarbonat mässig ziegelrot (5ne) bis kupferfarbig (51c)

keines

Rübenacker (Carrot stabb)

gering farblos keines

* Waksman. S.A.' The Actinomycetes Vo 12, 1961, P. 327-334, Wiliams & Wilkins Co.

** Inter. J. Syst. Bact. 16, 313-340 (1966)

*** Antimicro'b. Agents and Chemother., 1963, P. 116-124.

5

648 855

1. Verwertung von Kohlenstoffquellen

Kohlenstoffquelle

P&G*

Lm**

D-Arabinose

+

L-Arabinose

+

D-Fructose

+

D-Galactose

+

D-Glucose

+

Glycerin

—

i-Inosit

—

D-Mannose

+

D-Mannit

+

a-Melibiose

+

ß-Lactose

+

Dulcit

—

D-Toreharose

+

D-Cellobiose

+

Melezitose

+

Raffinose

+

L-Rhamnose

+

D-Ribose

—

L-Sorbose

—

D-Sorbit

—

Sucrose

+

4*

D-Xylose

+

Adonit

—

Salicin

± — +

Stärke

+

Maltose

+

Dextrin

+

Inulin

—

+ : positiv

±: schwach positiv negativ

* Pridham-Gotlieb anorganisches Medium ** Intern. J. Syst. Bact., 21, 240-247 (1971)

2. Wachstumstemperatur: 20 bis 40° C

3. Peptonisierung und Koagulation von entrahmter Milch: positiv

4. Bildung von Melanin-artigem Pigment: negativ auf Tyrosin und Pepton-Hefeextrakt-eisenhaltigem Agar

5. Stärkehydrolyse: positiv

6. Cellulosezersetzung: negativ

7. Kaseinzersetzung: positiv

8. Tyrosinzersetzung: negativ

9. Gelatinverflüssigung: positiv

10. H2S-Bildung: schwach positiv

11. Nitratreduktion: positiv

12. Wachstums-ph-Wert: 5,5 bis 9,0.

Wie oben veranschaulicht, sind die Charakteristika des G-367-Stammes ein auf dem Substrat-Mycel gewachsenes, fingerartiges Sporangia, welches vertikale einzelne Reihen von Sporen enthält, und polytrichose, polare Fäden an den Sporen.

Ein gebildetes Sporangium, welches polytrichose Fäden enthält, ist für den Genus Actinoplanaceae charakteristisch, und unter diesen sind fingerartige Sporangia und vertikale, einzelne Reihen von Sporen für den Genus Dactylosporangium charakteristisch.

Da der Stamm G-367 weiterhin ein orange-braunes bis braunes Substrat-Mycel und ein braunes lösliches Pigment aufweist, wurde der Stamm zu Dactylosporangium thailandense (Arch. Micorobiol. 58,42-52,1967) zugeordnet. Der Stamm wird deshalb als Dactylosporangium thailandense G-367 bezeichnet.

Die Herstellung der neuen Antibiotika G-367-1 und G-367-2 kann durch aerobe Kultivierung eines G-367-1 oder G-367-2

produzierenden Stammes vom Genus Dactylosporangium in einem herkömmlichen Medium bewirkt werden. Es kann ein festes oder flüssiges Medium verwendet werden, wobei für eine Herstellung in grossem Massstab ein flüssiges Medium bevorzugt 5 ist.

Herkömmliche Nährmedien für Mikroorganismen können verwendet werden. Assimilierbare Kohlenstoffquellen wie z.B. Glukose, Sucrose, Maltose, Stärke, Dextrin und Melasse können verwendet werden. Assimilierbare Stickstoffquellen wiez. B. die io bei der Stärkeerzeugung anfallende «Kornaufschlusslauge» (cornsteep liquor), Sojabohnenpulver, Baumwollsamenpulver, Weizenkleber, Pepton, Fleischextrakt, Hefeextrakt, Kasein-hydrolysat, Ammoniumsalze und Nitrate können verwendet werden. Wenn notwendig, können auch Phosphate und Salze 15 von Magnesium, Calcium, Kalium, Natrium, Kobalt, Eisen oder Mangan verwendet werden.

Die Temperatur der Kultivierung hängt vom Wachstum der Mikroorganismen und von der Produktion von Antibiotika ab und beträgt vorzugsweise 25 bis 35° C. Die Zeit der Kultivierung 20 hängt ab von den Bedingungen und beträgt gewöhnlich 100 bis 200 h, wobei die Kultivierung bei der maximalen Wirksamkeit der Antibiotika im Medium beendet wird.

Die Antibiotika werden aus dem Filtrat der Kulturen gewonnen.

25 Die Isolierung von G-367-1 und G-367-2 kann durch herkömmliche Isolierungsmethoden für wasserlösliche, basische Aminozucker-Antibiotika erfolgen.

G-367-1 und G-367-2 können auf einer Agarplatte mit Hilfe von Bacillus subtilis als Testorganismus untersucht werden. 30 Die Ausführungsform der Isolierung und Reinigungsmethode von G-367-1 und G-367-2 wird wie folgt beschrieben.

Das Kulturfiltrat wird erhalten, indem man das Kulturmedium auf einen sauren pH-Wert einstellt, neutralisiert und dann filtriert. Das Kulturfiltrat wird auf eine Kationenaustauschersäule, 35 wie z.B. Amberlite IRC-50 (vom Ammonium-Typ) gebracht, um aktive Stubstanzen zu adsorbieren, die aktiven Substanzen werden durch wässrige 2 N-Ammoniaklösung eluiert, konzentriert, und dann derpH-Wert des Eluats auf I eingestellt. Das Konzentrat wird auf eine Kationenaustauschersäule wie z.B. 40 CM-SephadexC-25 (vom Ammoniumtyp) aufgebracht, mit wässrigem Ammoniak (Konzentrationsgradient 0 bis 0,35 N) eluiert, um die aktiven Fraktionen zu erhalten, welche konzentriert und gefriergetrocknet werden. Man erhält G-367-1 und G-367-2 als gereinigtes weisses Pulver in Form der freien Base. Das 45 so erhaltene G-367-1 und G-367-2 zeigt einen einzelnen Fleck im Dünnschichtchromatogramm.

Die folgenden Beispiele erläutern die Erfindung näher.

so Beispiel 1:

Ein Medium (pH-Wert 7,0,100 ml), welches 1 % Dextrin, 1 % Glukose, 0,5 % Kaseinhydrolysat, 0,5 % Hefeextrakt und 0,1 % Calciumcarbonat enthält, wurde in einem 500-ml-Erlenmeyer-Kolben bei 120° C 20 min lang sterilisiert. 55 Dactylosporangium thailandense G-367 wurde aus einem geneigten Agar-Medium (agar slant medium) mit Hilfe einer Öse eingeimpft und die Kultur bei 30° C120 h lang geschüttelt (shake cultured). Diese Samenkultur wurde einem sterilisierten Medium der gleichen Zusammensetzung (201) in einen 30-1-60 Fermentergefäss eingeimpft und 72 h lang bei 30° C kultiviert (Rührgeschwindigkeit 300 UpM, Luftbegasung 201/min). Dieses kultiverte Medium (101) wurde in einem 250-1-Tank einem sterilisierten Medium eingeimpft, das 5 % Dextrin, 0,5 % Glukose, 3 % entfettetes Sojabohnenpulver, 0,7% Calciumcarbonat f>5 und 1,3 ppm Kobaltchlorid enthält (pH-Wert 7,2,2001) und bei 30° C120 h lang kultivert (Umdrehungsgeschwindigkeit 250 UpM, Luftbegasung 1001/min). Man erhält 1901 des kultivierten Mediums.

648 855

Beispiel 2:

Das nach Beispiel 1 erhaltene kultivierte Medium wurde durch Zugabe von 12 N Schwefelsäure auf einen pH-Wert von 2 eingestellt. 30 min lang gerührt, dann durch Zugabe von konzentriertem wässrigem Ammoniak auf einen pH-Wert von 7,0 eingestellt, und nach Zugabe des Filterhilfsmittels «Perlite» (4 kg, Handelsname) filtriert. Das Filtrat wird auf eine Amberlite IRC-50-Säule (Rohm & Haas Co., Ammoniumtyp, 101) aufgebracht und nach dem Waschen mit Wasser mit 2 N wässriger Ammoniaklösung (201) eluiert. Das Eluat wurde im Vakuum auf ein Volumen von 100 ml konzentriert.

Das Konzentrat wurde durch Zugabe von 6 N Schwefelsäure auf einen pH-Wert von 7,0 eingestellt und auf eine Säule von CM-Sephadex G-25 (Pharmacia Fine Chemical Corporation, Ammoniumtyp, 500 ml, 4 cm Durchmesser) aufgebracht. Nach dem Waschen mit Wasser wurde die aktive Substanz durch Gradientenelution mit wässrigem Ammoniak (51, Konzentrationsgradient 0 bis 0,35 N) eluiert. Jede Fraktion wurde durch Dünnschichtchromatographie geprüft (unter Phase eines Gemisches aus Chloroform:Methanol:28 %ig wässrigem Ammoniak im Verhältnis 1:1:1), und die aktive Substanz durch Ninhy-drin-Farbreaktion festgestellt. G-367-1 wurde in den Fraktionen 175 bis 185 gefunden. Die aktiven Fraktionen wurden vereinigt, 5 im Vakuum konzentriert und nach Gefriertrocknung ein weisses Pulver erhalten. Das Pulver wurde bei 40°C 48 h lang über Phosphorpentoxid bei reduziertem Druck getrocknet und ergab das gereinigte G-367-1 als weisses Pulver (freie Base, 750 mg).

G-367-2 wurde in den Fraktionen Nr. 190-205 gefunden. Die io aktiven Fraktionen wurden vereinigt, im Vakuum konzentriert und nach dem Gefriertrocknen das weisse Pulver erhalten. Das Pulver wurde bei 40° C 48 h lang unter reduziertem Druck getrocknet und das gereinigte G-367-2 als weisses Pulver erhalten (freie Base, 680 mg).

15 In den nachstehenden Zeichnungen bedeuten:

Figur 1: IR-Spektrum von G-367-1 Figur 2: NMR-Spektrum (Wasserstoff) von G-367-1 Figur 3: IR-Spektrum von G-367-2 Figur 4: NMR-Spektrum (Wasserstoff) von G-367-2

M

1 Blatt Zeichnungen

Claims

648 855

2

PATENTANSPRÜCHE

1. Aminoglycosid-Antibiotikum G-367-1 gekennzeichnet durch die folgenden Parameter:

Schmelzpunkt: 130 bis 133° C;

[a]ö4: +188,9°, c= 1,0, H20;

Elementaranalyse :

gefunden: C 50,14 H 7,60 N 14,42 berechnet: C 50,51 H 7,84 N 14,73 Molekulargewicht: 475, bestimmt durch Massenspektro-metrie;

Summenformel: C2oH37Nj08; Ultraviolett-Absorptionsspektrum:

kein charakteristisches Absorptionsmaximum bei 220 bis 360 nm, zeigt nur Endabsorption;

IR-Absorptionsspektrum: wie in Fig. 1 dargestellt; NMR-Spektrum: wie in Fig. 2 dargestellt;

Löslichkeit:

löslich in Wasser und Methanol; unlöslich in Aceton, Benzol, Äthylacetat und Chloroform;

Farbreaktionen:

positiv: Ninhydrin, Entfärbung von Kaliumpermanganat; negativ: Elson-Morgan, Biuret;

Farbe: weiss Beschaffenheit: basisch sowie dessen nicht-toxischen Säureadditionssalze und Aminoglycosid-Antibiotikum G-367-2, gekennzeichnet durch folgenden Parameter:

Schmelzpunkt: 151 bis 155° C;

[cc]d4: +159,8°, c = 1,0, H20;

Elementaranalyse:

gefunden: C 50,41 H 7,92 N 15,16 berechnet: C 50,99 H 8,33 N 15,64 Molekulargewicht: 447, bestimmt durch Massenspektro-metrie;

Summenformel: Q9H37N5O7; Ultraviolett-Absorptionsspektrum:

kein charakteristisches Absorptionsmaximum bei 220 bis 360 nm, zeigt nur Endabsorption;

IR-Absorptionsspektrum: wie in Fig. 3 dargestellt; NMR-Spektrum: wie in Fig. 4 dargestellt;

Löslichkeit:

löslich in Wasser und Methanol; unlöslich in Aceton, Benzol, Äthylacetat und Chloroform;

Farbreaktionen:

positiv: Ninhydrin, Entfärbung einer

Kaliumpermanganatlösung;

negativ: Elson-Morgan, Biuret;

Farbe: weiss Beschaffenheit: basisch sowie dessen nicht-toxischen Säureadditionssalze.
2. Verfahren zur Herstellung von Aminoglycosid-Antibiotika G-367-1 oder G-367-2 nach Patentanspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass man einen Mikroorganismus vom Stamm Dactylo-sporangium thailandense G-367, FERM-P- No. 4840, in einem Nährboden kultiviertund die gebildeten Antibiotika daraus isoliert.

10

15

20

25

30

1. G-367-1:

Schmelzpunkt: 130 bis 133° C,

[a]ö4: +188,9°, c = 1,0, H20 Elementaranalyse :

gefunden: C 50,14 H 7,60 N 14,42 berechnet: C 50,51 H 7,84 N 14,73

Molekulargewicht: 475, (bestimmt durch Massenspektrum) Summenformel: CjoH^NsOg;

UV-Absorptionsspektrum: kein charakteristisches Absorptionsmaximum bei 220 bis 360 nm, zeigt nur Endabsorption

IR-Absorptionsspektrum (KBr): wie in Fig. 1 dargestellt, Absorptionsbanden bei 3350,2920,1660,1590,1380,1140,1100, 1050,1000, 950 cnT1

NMR-Spektrum (Wasserstoff): wie in Fig. 2 gezeigt (D20,100 MHz, innerer Standard: DSS)

NMR-Spektrum (Kohlenstoff): (D20, 25 MHz,

innerer Standard: Dioxan)
Nr.-

PPm
Nr.

ppm

1

164,8

11

68,6

2

150,6

12

67,4 (Dioxan)

3

101,4

13

64,2

4

98,1

14

51,7

5

96,3

15

50,1

6

87,8

16

45,5

7

85,3

17

43,3

8

75,3

18

37,8

9

73,2

19

36,3

10

70,2

20

23,4

21

22,5

Löslichkeit: löslich in Wasser und Methanol; unlöslich in 33 Aceton, Benzol, Äthylacetat und Chloroform Farbreaktion:

positiv: Ninhydrin, Entfärbung von Kaliumpermanganat; negativ: Elson-Morgan, Biuret;

Farbe: weisses Pulver 40 Beschaffenheit: basisch

Dünnschichtchromatographie (Silikagel): untere Schicht eines Chloroform:Methanol:28%ig wässrigem Ammoniak (1:1:1): Rf = 0,36; 10%iges Ammoniumacetat:Methanol (1:1): Rf = 0,13.

45 Aufgrund der oben angegebenen physikalisch-chemischen Eigenschaften ist G-367-1 eine neue Aminoglykosid-Verbin-dung, für die folgende planare Struktur vermutet wird:

NHCH-,

ch2nh2

50

55

CHO

60