CH718108A2 - Méthode de préparation d'un gel de hyaluronate de sodium réticulé à phase monophasique. - Google Patents
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Abstract
La présente invention concerne une méthode de préparation d'un gel d'hyaluronate de sodium réticulé monophasique, appartenant au domaine de la technologie de préparation des médicaments. Ladite méthode comprend les étapes suivantes : préparation d'une solution mixte de NaOH contenant un agent de réticulation, préparation d'une solution d'hyaluronate de sodium, ajout de la solution mixte de NaOH à la solution d'hyaluronate de sodium pour un mélange homogène et ensuite fabrication d'un gel de hyaluronate de sodium dans un bain-marie à température constante. Le gel d'hyaluronate de sodium est coupé en petits morceaux, ajouter une solution de PBS d'acide chlorhydrique et placer dans une solution de PBS pour la dialyse afin d'obtenir du hyaluronate de sodium en phase réticulée. La solution de hyaluronate de sodium en phase réticulée et la solution de hyaluronate de sodium en phase non réticulée sont mélangées, dégazées, remplies et stérilisées. Le procédé de préparation qui est proposé a le mérite non seulement de réduire efficacement l'intervention humaine pendant le processus de production et de diminuer le risque de contamination au contact, mais aussi évite la génération de sous-produits et réduit efficacement les bulles d'air générées pendant le remplissage, offrant ainsi un gel d'hyaluronate de sodium de grande qualité.
Description
Domaine technique
[0001] La présente invention concerne le domaine technique de la préparation de médicaments, et, plus spécifiquement, est une méthode de préparation d'un gel de hyaluronate de sodium réticulé à phase monophasique.
État de la technique antérieure
[0002] L'acide hyaluronique est un composant important de la peau humaine et animale, du corps vitré, du liquide de lubrification des articulations et du tissu cartilagineux. 11 est constitué d'unités d'acide (1-β-4)D-glucuronique et de disaccharide (1-β-3)N-acétyl-D-aminoglucose liées de manière répétée et est largement utilisé en chirurgie réparatrice, en chirurgie oculaire ou comme produit cosmétique pour combler les rides. L'acide hyaluronique a de bonnes propriétés physico-chimiques et une bonne biocompatibilité. Cependant, il est rapidement dégradé dans l'organisme par l'action enzymatique de l'hyaluronidase et a un temps de rétention court, ce qui nécessite des injections répétées pour en assurer l'efficacité. L'acide hyaluronique réticulé est un gel polymère obtenu par réticulation de l'acide hyaluronique avec des agents de réticulation, qui peut compenser le court temps de rétention de l'acide hyaluronique tout en ayant une bonne biocompatibilité et une bonne efficacité.
[0003] Actuellement, le processus de préparation actuel du hyaluronate de sodium comprend généralement les étapes suivantes : réaction de réticulation - gonflement - dialyse - remplissage - stérilisation. Ce processus présente un certain nombre d'inconvénients. La phase de réticulation produit facilement des sous-produits et celle du remplissage laisse apparître des bulles, ce qui peut facilement affecter la nature du gel et sa qualité, endommageant ainsi sérieusement la qualité du produit.
Exposé de l'invention
[0004] Visant à combler les défaillances de la technique actuelle, la présente invention a pour ambition de fournir une méthode de préparation d'un gel d'hyaluronate de sodium réticulé monophasique, qui peut non seulement réduire efficacement l'intervention humaine dans le processus de production et diminuer le risque de contamination, mais aussi éviter la génération de sous-produits et des bulles d'air lors du remplissage, garantissant ainsi la qualité du gel d'hyaluronate de sodium.
[0005] Afin d'améliorer la technique existante, la solution technique utilisée dans la présente invention est la suivante:
[0006] S1. L'agent de réticulation et la solution de NaOH sont introduits dans le tube de centrifugeuse à un rapport de masse de 1:8-1:10 et de l'azote gazeux y est ajouté et bien mélangé dans la centrifugeuse pour obtenir une solution mixte de NaOH contenant l'agent de réticulation et mise de côté;
[0007] S2. L'hyaluronate de sodium et la solution de NaOH de pH > 13 sont mélangés et dissous sous agitation à un rapport de masse de 1:6-1:8 et placés dans un mélangeur tridimensionnel pendant 1~2h pour obtenir une solution d'hyaluronate de sodium.
[0008] S3. Ajouter tout le mélange de NaOH réalisé à l'étape S1 à la solution d'hyaluronate de sodium, bien mélanger et faire passer de l'azote gazeux, puis thermostater le bain-marie à 45-55 pendant 2-3h pour obtenir un gel d'hyaluronate de sodium.
[0009] S4. le gel d'hyaluronate de sodium a été coupé en petits morceaux, ajouté à une solution de PBS d'acide chlorhydrique, mélangé dans un mélangeur tridimensionnel pendant 24-36 h, bien agité pour obtenir une pâte à crumble, emballé dans des sacs de dialyse et placé dans une solution de PBS pur coulant à 2-8 pendant 30-36 h pour obtenir du hyaluronate de sodium en phase réticulée.
[0010] S5. La solution de hyaluronate de sodium en phase réticulée et la solution de hyaluronate de sodium en phase non réticulée sont bien mélangées à un rapport de masse de 8:1-9:1, dégazées, remplies et stérilisées.
[0011] L'hyaluronate de sodium utilisé dans l'étape S2 a un poids moléculaire de 2,1 à 2,7 MDa, une spécificité majeure de la présente invention.
[0012] Une autre prouesse majeure de la présente invention, le poids moléculaire de l'hyaluronate de sodium utilisé dans ladite solution d'hyaluronate de sodium en phase non réticulée est de 3,0 MDa.
[0013] Toujours spécifique à la présente invention, ladite solution d'acide chlorhydrique PBS est composée d'acide chlorhydrique et de PBS dans laquelle la quantité d'acide chlorhydrique ajoutée est calculée par la quantité et la concentration d'hydroxyde de sodium ajoutée pour obtenir la quantité théorique requise pour avoir neutralisation ; et le PBS est préparé à partir des hydrates de di-sodium hydrogen phosphate, de sodium hydrogen phosphate et de chlorure de sodium.
[0014] Spécifique aussi à la présente invention, ledit agent de réticulation est le 1,4-Butanediol diglycidyl éther.
[0015] En tant que réalisation phare de la présente invention, les étapes spécifiques de l'étape S2 sont les suivantes : le mélange de hyaluronate de sodium avec une solution de NaOH de pH > 13 dans un rapport de masse de 1:6-1:8 dans un bécher en polytétrafluoroéthylène avec un couvercle est agité pour dissolution, en gardant le couvercle du bécher fermé, et placé dans un mélangeur tridimensionnel pendant 1~2h pour obtenir une solution de hyaluronate de sodium.
[0016] En tant que réalisation clée de la présente invention, l'étape S4 remplace la solution de PBS 5 à 6 fois pendant le processus de dialyse.
[0017] Spécificité de la présente invention, à l'étape S5 : utiliser un réservoir de dégazage en acier inoxydable pour le dégazage, relier le réservoir de dégazage en acier inoxydable et la machine de remplissage par un tuyau en silicone, remplir le gel dans le réservoir de dégazage par la machine de remplissage dans une seringue en verre en utilisant le vacuum, et le place dans une armoire de stérilisation vapeur-air pour la stérilisation en utilisant une montée et une descente rapide de la température.
[0018] Par rapport à la technologie existante, la présente invention a deux avantages majeurs : D'une part, la méthode de préparation prévue par la présente invention prend moins de 1 heure pour toute l'étape d'opération manuelle, ce qui peut effectivement réduire l'intervention humaine dans le processus de production et diminuer le risque de contamination au contact. D'autre part, la décyclisation du BDDE de réticulation est protégée par le passage d'azote gazeux pour éviter les sous-produits dans le processus de réticulation, et le réservoir de dégazage et la machine de remplissage sont reliés par des tuyaux en silicone pour garantir qu'aucune bulle d'air ne soit générée pendant le remplissage. La qualité du gel d'hyaluronate de sodium est efficacement assurée par l'utilisation d'une méthode de montée et de descente en température pour la stérilisation terminale et la compensation de pression pendant la stérilisation afin d'éviter le déplacement du bouchon de gel et de réduire l'effet du processus de stérilisation sur les propriétés du gel. En résumé, la méthode de préparation de la présente invention comporte peu d'étapes de processus, est facile à utiliser, a un temps de cycle court, peut améliorer efficacement la qualité du produit en gel et convient à la production industrielle à grande échelle.
Dessins
[0019] La figure 1 montre une comparaison du module d'élasticité de la réalisation 1 de la présente invention avec des produits existants.
Mise en œuvre spécifique
[0020] La présente invention est décrite plus en détail ci-dessous en relation avec des réalisations spécifiques.
[0021] Le mode de préparation d'un gel de hyaluronate de sodium réticulé à phase monophasique comprenant les étapes suivantes: Ajouter l'agent de réticulation BDDE et la solution de NaOH dans un tube de centrifugeuse à un rapport de masse de 1:8-1:10, y faire passer de l'azote et bien mélanger dans une centrifugeuse pour obtenir une solution mixte de NaOH contenant l'agent de réticulation BDDE, et mettre de côté.
[0022] S2, Mélange de hyaluronate de sodium avec une solution de NaOH de pH > 13 dans un rapport de masse de 1:6-1:8 dans un bécher en polytétrafluoroéthylène avec un couvercle, et agitation pour dissolution, en gardant le couvercle du bécher fermé et placé dans un mélangeur tridimensionnel pendant 1~2h pour obtenir une solution de hyaluronate de sodium. Dans ladite solution, le poids moléculaire du hyaluronate de sodium est de 2,1-2,7 MDa.
[0023] S3, Ajouter tout le mélange de NaOH réalisé dans l'étape S1 à la solution d'hyaluronate de sodium, bien mélanger et faire passer de l'azote de manière à ce que l'air dans le bécher soit complètement remplacé par de l'azote et couvrir le bécher avec un bain-marie à température constante à 45-55 pendant 2-3h pour obtenir le gel d'hyaluronate de sodium.
[0024] S4, Le gel d'hyaluronate de sodium a été coupé en petits morceaux, ajouter à une solution de PBS d'acide chlorhydrique, mélanger dans un mélangeur tridimensionnel pendant 24-36h, bien agiter pour obtenir une pâte à crumble, emballer dans des sacs de dialyse et placer dans une solution de PBS pure et fluide à 2-8 pendant 30-36h, et la solution PBS doit être remplacée 5-6 fois pendant la dialyse pour obtenir du hyaluronate de sodium en phase réticuléedans laquelle la solution de PBS d'acide chlorhydrique est composée d'acide chlorhydrique et de PBS, la quantité d'acide chlorhydrique ajoutée étant calculée à partir de la quantité et de la concentration d'hydroxyde de sodium ajoutée pour obtenir la quantité théorique nécessaire pour la neutralisation, c'est-à-dire des quantités égales de substance d'acide chlorhydrique et d'hydroxyde de sodium ; le PBS est préparé à partir d'hydrogénophosphate disodique hydraté, de dihydrogénophosphate de sodium hydraté et de chlorure de sodium. De préférence, la composition du PBS est la suivante : Na2HPO4•12H2O 0,555 g, NaH2PO4•H2O 0,039 g, NaCl 9 g avec de l'eau jusqu'à 1000 mL.
[0025] S5, La solution d'hyaluronate de sodium en phase réticulée et la solution d'hyaluronate de sodium en phase non réticulée d'un poids moléculaire de 3,0 MDa ont été mélangées dans un rapport de masse de 8:1-9:1, dégazées à l'aide d'un réservoir de dégazage en acier inoxydable, relié au réservoir de dégazage en acier inoxydable et à la machine de remplissage par un tuyau en silicone, et le gel dans le réservoir de dégazage a été rempli dans une seringue en verre par la machine de remplissage sous vacuum, et placé dans un cabinet de stérilisation vapeur-air à l'aide d'un élévateur rapide. La stérilisation s'effectue dans un cabinet de stérilisation vapeur-air avec une montée et une descente en température rapide.
Réalisation 2 de l'invention:
[0026] Le mode de préparation d'un gel de hyaluronate de sodium réticulé à phase monophasique comprenant les étapes suivantes:
[0027] S1. 700 µL d'agent de réticulation BDDE et 5 g de solution de NaOH ont été introduits dans un tube de centrifugeuse, on y fait passer de l'azote et on mélange bien dans une centrifugeuse pour obtenir une solution mixte de NaOH contenant l'agent de réticulation BDDE, et on met de côté.
[0028] S2. Dissoudre 10 g de hyaluronate de sodium en poudre de poids moléculaire 2,1 MDa dans un bécher en PTFE dans 90g de solution d'hydroxyde de sodium 0,3 mol/L, puis agiter et dissoudre sur un mélangeur tridimensionnel à 70 tours/minute.
[0029] S3. Dissoudre en remuant suffisamment puis ajouter le mélange de NaOH, bien remuer et injecter de l'azote dans le bécher et recouvrir immédiatement le bécher et transférer dans un bain-marie à température constante à 45 pendant 3 heures pour obtenir un gel de hyaluronate de sodium.
[0030] S4. Le gel a été coupé en morceaux de 0,5×0,5cm et ajouté à 9g d'acide chlorhydrique 3mol/L et 160g de solution PBS et placé sur un mélangeur 3D à 70rpm pendant 6 heures, après quoi le gel a été finement mélangé avec un tamis de 80 mesh et mis dans des sacs de dialyse de 8000Da-12000Da et placé dans une solution PBS fluide à 20°C pour la dialyse. Et le dialysat est changé et pesé toutes les 6 heures jusqu'à ce que la masse de gel atteigne environ 500g et que la dialyse soit terminée.
[0031] S5. Ajouter 50g de 20mg/ml de solution de hyaluronate de sodium PBS et bien mélanger ; mélanger et remplir dans des seringues en plastique jetables de 60ml avec 2/3 du volume de la seringue et placer dans un dispositif de dégazage pendant 5 minutes, puis remplir dans des seringues de 1ml et placer dans un autoclave pendant 3min à 129°C pour obtenir l'échantillon A.
Réalisation 1 de l'invention:
[0032] La mode de préparation d'un gel de hyaluronate de sodium réticulé à phase monophasique comprenant les étapes suivantes:
[0033] S1. Ajouter 70µL, d'agent de réticulation BDDE et 5g de NaOH solution dans le tube de centrifugeuse, on y ajoute de l'azote et on mélange bien dans une centrifugeuse pour obtenir une solution mixte de NaOH contenant l'agent de réticulation BDDE, et on met de côté.
[0034] S2. Dissoudre 10g de poudre de hyaluronate de sodium de poids moléculaire 2,5 MDa dans un bécher en PTFE dans 90g de solution d'hydroxyde de sodium 0,3 mol/L, puis agiter et dissoudre sur un mélangeur tridimensionnel à 70 tours/minute.
[0035] S3. Dissoudre en remuant suffisamment puis ajouter le NaOH solution mixte, bien remuer et faire passer de l'azote dans le bécher et recouvrir immédiatement le bécher et transférer dans un bain-marie à température constante à 50°C pendant 2 heures pour obtenir un gel de hyaluronate de sodium.
[0036] S4. Couper le gel en morceaux de 0,5×0,5cm et ajouter à 9g d'acide chlorhydrique 3mol/L et 160g de solution PBS et placer sur un mélangeur 3D à 70rpm pendant 6 heures, après quoi le gel est finement mélangé avec un tamis de 80 mailles et rempli dans des sacs de dialyse de 8000Da-12000Da et placé dans une solution PBS courante à 20°C pour la dialyse, et le dialysat est changé et pesé toutes les 6 heures jusqu'à ce que la masse de gel atteigne environ 500 g et que la dialyse soit terminée.
[0037] S5. Ajouter 50g de 20mg/ml de solution de hyaluronate de sodium PBS et bien remuer; mélanger et remplir dans des seringues en plastique jetables de 60ml avec 2/3 du volume de la seringue et placer dans un dispositif de dégazage pendant 5 minutes, puis remplir dans des seringues de 1ml et placer dans un autoclave pendant 3min à 129 pour obtenir l'échantillon B.
Réalisation 3 de l'invention:
[0038] Le mode de préparation d'un gel de hyaluronate de sodium réticulé à phase monophasique comprenant les étapes suivantes: :
[0039] S1. Mélanger 750µL d'agent de réticulation BDDE avec 5g de solution de NaOH dans un tube de centrifugeuse et y faire passer de l'azote gazeux, puis le placer dans une centrifugeuse pour obtenir un mélange de NaOH contenant l'agent de réticulation BDDE et le mettre de côté.
[0040] S2. Dissoudre 10g de poudre de hyaluronate de sodium de poids moléculaire 2,5 MDa dans un bécher en PTFE dans 90g de solution d'hydroxyde de sodium 0,3 mol/L, puis agiter et dissoudre sur un mélangeur tridimensionnel à 70 tours/minute.
[0041] S3. Dissoudre en remuant suffisamment puis ajouter le NaOH solution mixte, bien remuer et faire passer de l'azote dans le bécher et recouvrir immédiatement le bécher et transférer dans un bain-marie à température constante à 50°C pendant 2 heures pour obtenir un gel de hyaluronate de sodium.
[0042] S4. Couper le gel en morceaux de 0,5×0,5cm et ajouter à 9g d'acide chlorhydrique 3mol/L et 160g de solution PBS et placer sur un mélangeur 3D à 70rpm pendant 6 heures, après quoi le gel a été finement mélangé avec un tamis de 80 mailles et rempli dans des sacs de dialyse de 8000Da-12000Da et placé dans une solution PBS fluide à 20°C pour la dialyse, et le dialysat est changé et pesé toutes les 6 heures jusqu'à ce que la masse de gel atteigne environ 500 g et que la dialyse soit terminée.
[0043] S5. Ajouter 50g de 20mg/ml de solution de hyaluronate de sodium PBS et bien remuer; mélanger et remplir dans des seringues en plastique jetables de 60ml avec 2/3 du volume de la seringue et placer dans un dispositif de dégazage pendant 5 minutes, puis remplir dans des seringues de 1ml et placer dans un autoclave pendant 3min à 129 pour obtenir l'échantillon C.
Expérience de comparaison des performances :
Comparaison du degré de gonflement et du module d'élasticité
[0044] Le gonflement et le module d'élasticité ont été déterminés pour les échantillons obtenus dans les réalisations 1 à 3, respectivement, et les résultats sont présentés dans le tableau 1.
Tableau 1 : Résultats des tests de dissolution et de module d'élasticité pour les exemples 1 à 3
[0045] Réalisation 1 31 295Pa Réalisation 2 26 353Pa Réalisation 3 21 412Pa
[0046] Plus le degré de gonflement est faible latéralement, plus le degré de réticulation du produit est élevé, plus le module d'élasticité reflète la capacité du produit à résister à l'influence des forces extérieures et meilleur est l'effet de soutien dans le corps, tandis que le module d'élasticité ne doit pas être trop élevé, un module d'élasticité trop élevé affectera le naturel du visage après l'injection. Par conséquent, selon les résultats du tableau 1, on peut voir que la réalisation 2 a un meilleur module d'élasticité et un meilleur degré de gonflement.
Expérience des dégradations in vitro
[0047] La performance de dégradation enzymatique in vitro des échantillons des réalisations 1 à 3 a été comparée en effectuant un test de dégradation enzymatique in vitro à 37 5" wi="3" file="CH00718108-P00009.tif" orientation="portrait" alt="custom character" img-content="character" img-format="tif" inline="yes"/> en utilisant 5U/mL d'hyaluronidase, et en détectant et enregistrant le degré de dégradation enzymatique jusqu'à la dégradation complète à différents moments pour comparer la performance de dégradation in vitro des échantillons des réalisations 1 à 3. Le degré de dégradation enzymatique a été observé en détectant la concentration de glucuronide dans la solution enzymatique à différents moments.
[0048] La teneur en glucuronide détectée dans la digestion enzymatique a été uniformément convertie en teneur en hyaluronate de sodium, et l'échantillon G0a été utilisé comme blanc, et l'échantillon avec 24 h de digestion enzymatique a été utilisé comme point de digestion enzymatique complète, et le degré de digestion enzymatique à chaque point temporel a été obtenu en calculant la teneur en hyaluronate de sodium de la digestion enzymatique obtenue à chaque point temporel par rapport à la teneur de la digestion enzymatique pendant 24 h et dans le tube échantillon G0par l'équation suivante, et les résultats sont présentés dans le tableau 2.
[0049] Dans l'équation ci-dessus : p est la valeur de la concentration massique de l'hyaluronate de sodium dans l'échantillon à tester, en mg/ml; C1 est la teneur en glucuronide dans le tube à échantillon, en µg/ml; m est la masse du gel d'hyaluronate de sodium réticulé, en g ; m1 est la quantité de solution enzymatique ajoutée ; ρ1 est la densité du gel d'hyaluronate de sodium réticulé, en 1,01 g/ml.
[0050] Dans ladite équation de gong, p est la valeur de concentration massique de l'hyaluronate de sodium dans l'article à tester, mg/ml ; ρ0 est la valeur de concentration massique de l'hyaluronate de sodium dans le tube à échantillon G0, mg/ml ; ρ24 est la valeur de concentration massique de l'hyaluronate de sodium dans le tube à échantillon après 24 h de digestion enzymatique, mg/ml. 0 0 0 0 1 18.3 11.7 5.6 3 30.6 29.8 26.8 6 58.9 53.1 52.1 12 100 100 90.3 24 100 100 100
[0051] Les résultats du tableau 2 montrent que la réalisation 3 présente la meilleure résistance à la digestion enzymatique, reflétant son meilleur maintien in vivo, et que la réalisation 1 présente la moindre résistance à la digestion enzymatique, reflétant son mauvais maintien in vivo. La réalisation 2 a une meilleure résistance à la digestion enzymatique et a un meilleur module d'élasticité et de gonflement, donc l'échantillon produit par la réalisation 2 est de la meilleure qualité.
Expériences de comparaison avec des produits existants
[0052] En utilisant le produit monophasique Biohyalux, un produit de Bloomage Biotechnology, comme référence 1 et le produit monophasique Voluma, un produit d'Allergan, comme référence 2, une expérience comparative de module élastique a été réalisée avec la réalisation 2 de la présente invention : en utilisant le mode balayage sous le test d'oscillation du rhéomètre rotatif, le module d'élasticité G' a été balayé de 0,08 Hz à 5 Hz et le module d'élasticité correspondant a été enregistré, et les résultats sont présentés sur la figure 1.
[0053] Les résultats de la figure 1 montrent que le module élastique du gel d'hyaluronate de sodium préparé par la réalisation 2 de la présente invention est supérieur à la fois à la substance 1 et à la substance 2, ce qui montre que le gel d'hyaluronate de sodium de la réalisation 2 a des propriétés physiques plus excellentes, et reflète également que le gel préparé par la présente invention a un meilleur effet de mise en forme, d'entretien et de résistance aux forces extérieures.
[0054] En résumé, le gel de hyaluronate de sodium produit par la méthode de préparation fournie par la présente invention a un meilleur module d'élasticité et degré de gonflement, et de bonnes propriétés anti-enzymatiques. La méthode de préparation de la présente invention comporte peu d'étapes dans son processus, est facile à utiliser, a un temps de cycle court, peut améliorer efficacement la qualité du gel produit et convient à la production industrielle à grande échelle.
[0055] Lesdites réalisations ne sont que des réalisations privilégiées de la présente invention et ne peuvent être utilisées pour limiter l'étendue des applications de la présente invention, et toutes les modifications et substitutions non substantielles effectuées par un homme du métier sur la base de la présente invention sont dans l'étendue des propriétés revendiquées par la présente invention.
Claims (8)
1. Le mode de préparation d'un gel de hyaluronate de sodium réticulé monophasique est spécifique en ce qu'il comprend les étapes suivantes :
S1, L'agent de réticulation et la solution de NaOH sont introduits dans un tube de centrifugeuse à un rapport de masse de 1:8-1:10 et de l'azote y est ajouté, puis placé dans une centrifugeuse et bien mélangé pour obtenir une solution mixte de NaOH contenant l'agent de réticulation et mise de côté.
S2, L'hyaluronate de sodium et une solution de NaOH de pH > 13 sont mélangés et dissouts sous agitation à un rapport de masse de 1:6-1:8 et placés dans un mélangeur tridimensionnel pendant 1~2h pour obtenir une solution d'hyaluronate de sodium.
S3, Ajouter tout le mélange de NaOH réalisé à l'étape S1 à la solution d'hyaluronate de sodium, bien mélanger et faire passer de l'azote gazeux, puis thermostater le bain-marie à 45-55 pendant 2-3h pour obtenir un gel d'hyaluronate de sodium.
S4, Le gel d'hyaluronate de sodium est coupé en petits morceaux, ajouté à une solution de PBS d'acide chlorhydrique, mélangé dans un mélangeur tridimensionnel pendant 24-36h, bien agité pour obtenir une pâte à crumble, emballé dans des sacs de dialyse et placé dans une solution de PBS pure courante à 2-8 pendant 30-36h pour obtenir de l'hyaluronate de sodium en phase réticulée.
S5, La solution de hyaluronate de sodium en phase réticulée et la solution de hyaluronate de sodium en phase non réticulée sont bien mélangées à un rapport de masse de 8:1-9:1, dégazées, remplies et stérilisées.
2. Le mode de préparation d'un gel de hyaluronate de sodium réticulé monophasique selon la revendication lest particularisé par: le poids moléculaire du hyaluronate de sodium utilisé l'étape S2 est 2,1 ~ 2,7 MDa.
3. Le mode de préparation d'un gel de hyaluronate de sodium réticulé à phase monophasique selon la revendication 1 est caractérisé par le poids moléculaire du hyaluronate de sodium utilisé dans ladite solution de hyaluronate de sodium à phase non réticulée qui est de 3,0 MDa.
4. Le mode de préparation d'un gel d'hyaluronate de sodium réticulé monophasique selon la revendication 1; la particularité réside dans le fait que la solution de PBS d'acide chlorhydrique est composée d'acide chlorhydrique et de PBS dans laquelle le PBS est préparé à partir des hydrates de di-sodium hydrogen phosphate, de sodium hydrogen phosphate et de chlorure de sodium.
5. Le mode de préparation d'un gel de hyaluronate de sodium réticulé monophasique selon la revendication 1; la spécificité réside dans le fait que : ledit agent de réticulation est le 1,4-Butanediol diglycidyl éther.
6. Le mode de préparation d'un gel de hyaluronate de sodium réticulé monophasique selon la revendication 1 la particularité se justifie en ce que les phases spécifiques de l'étape S2 sont: mélange de hyaluronate de sodium avec une solution de NaOH de pH > 13 dans un rapport massique de 1:6-1:8 dans un bécher en polytétrafluoroéthylène avec un couvercle, et agitation pour dissolution avec le couvercle fermé, puis placement dans un mélangeur tridimensionnel pendant 1~2h pour obtenir la solution de hyaluronate de sodium.
7. Le mode de préparation d'un gel de hyaluronate de sodium réticulé monophasique selon les Revendications 1, est caractérisé en ce que àl'étape S4 on remplace la solution de PBS 5 à 6 fois pendant le processus de dialyse.
8. Le mode de préparation d'un gel d'hyaluronate de sodium réticulé monophasique selon les Revendications 1, caractérisé en ce que l'étape S5 est réalisée par dégazage en utilisant un réservoir de dégazage en acier inoxydable, en reliant le réservoir de dégazage en acier inoxydable et la machine de remplissage par un tuyau en silicone, en remplissant le gel dans le réservoir de dégazage par la machine de remplissage dans une seringue en verre en utilisant le vacuum, et en le plaçant dans un cabinet de stérilisation vapeur-air pour la stérilisation en utilisant une montée et une descente de température rapide.
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