CH720269B1

CH720269B1 - Utilisation d'un composé peptide antibactérien DM80Bu20 dans la préparation d'un dentifrice bactériostatique

Info

Publication number: CH720269B1
Application number: CH000226/2024A
Authority: CH
Inventors: Li Yiping; Liu Runhui; Chu Fujiang; Geng Shuaifeng
Original assignee: Haoyikang Biological Tech Guangzhou Co Ltd
Priority date: 2021-09-01
Filing date: 2021-09-28
Publication date: 2025-06-13
Also published as: CN113679632B; WO2023029137A1; CN113679632A

Abstract

La présente invention fournit l'application du composé peptide antibactérien DM80Bu20 dans la préparation d'un dentifrice bactériostatique et son dentifrice bactériostatique. L'étude de la présente invention révèle que ledit composé peptidique antimicrobien DM80Bu20 peut inhiber sélectivement l'activité de la plupart des bactéries pathogènes buccales, tout en n'ayant aucun effet inhibiteur sur les probiotiques buccaux, qu'il possède une faible activité hémolytique et une faible cytotoxicité, qu'il présente une sécurité élevée et une bonne stabilité, et qu'il peut être utilisé dans la préparation des produits dentifrices pour les soins buccaux ; de plus, le dentifrice antimicrobien préparé dans lequel le composé DM80Bu20 est utilisé présente de la même manière l'effet d'inhibition sélective sur l'activité des bactéries pathogènes buccales, et en outre, l'effet bactériostatique synergique avec le composé peptidique antimicrobien DM80Bu20 peut être obtenu par la composition des ingrédients d'efficacité spécifiques, qui réduit la formation de tartre dentaire et de plaque, réduit les saignements gingivaux, prévient les caries dentaires et les ulcères buccaux, et réduit l'halitose, etc. et la stabilité bactériostatique du dentifrice préparé est bonne.

Description

DOMAINETECHNIQUE

[0001] La présente invention concerne le domaine de la technologie des soins buccaux. En particulier, elle concerne une utilisation d'un composé peptidique antimicrobien DM80Bu20 dans la préparation d'un dentifrice bactériostatique.

CONTEXTE TECHNIQUE

[0002] La santé bucco-dentaire est un élément important de la santé générale. Les maladies buccales telles que les caries, les maladies parodontales, etc. détruiraient les tissus durs des dents et les tissus de soutien autour des dents, en plus d'affecter les fonctions de mastication, d'élocution, d'esthétique, etc., elles provoqueraient également des difficultés sociales et des troubles psychologiques. La principale cause de ces maladies buccales est la formation de la plaque dentaire. Résoudre efficacement la formation de la plaque dentaire est la tâche principale de la recherche et du développement de produits dentifrices efficaces pour les soins buccaux. Les problèmes de santé dentaire préoccupant de plus en plus les gens, près de 50 % d'entre eux pensent que les dentifrices à base des herbes médicales chinoises sont plus sûrs que les dentifrices chimiques traditionnels, de sorte que les dentifrices à base des herbes médicales chinoises deviennent de plus en plus populaires. Toutefois, l'évaluation par des chercheurs du potentiel antimicrobien des dentifrices à base des herbes médicales chinoises courants sur le marché contre les bactéries buccales courantes a révélé que les effets inhibiteurs et destructeurs des ingrédients à base des herbes médicales chinoises des dentifrices sur une variété de bactéries buccales ne sont pas sélectifs et que l'intensité de leurs effets sur les bactéries dépend généralement de la concentration des médicaments à les tuer. En outre, la sensibilité du Candida albicans à divers dentifrices à base des herbes médicales chinoises est généralement faible, et selon l'hypothèse, l'utilisation à long terme de ces dentifrices présenterait un risque d'infection au Candida albicans [Chen Hong, Ding Xi, et Zhang Xiuhua, Comparaison du potentiel antibactérien de cinq dentifrices à base des herbes médicales chinoises contre des bactéries buccales courantes. Journal chinois de microécologie, 2007. 19(4) : p. 351-353]. En outre, la plupart des extraits actifs antibactériens contenus dans les dentifrices à base des herbes médicales chinoises existants constituent des composants instables dans les matrices des dentifrices acides, ce qui rend difficile de garantir une stabilisation et un maintien de l'activité à long terme ; en plus, les dentifrices à base de médicaments antibactériens existants ont une activité bactériostatique à large spectre, sans spécificité sélective pour les bactéries pathogènes et les bactéries probiotiques.

[0003] Les peptides antibactériens (antibacterial peptides) sont largement répandus dans la nature ; il s'agit d'une classe de petites molécules peptidiques produites par l'hôte pour résister à l'infection par des agents pathogènes ; c'est également un élément important du système immunitaire naturel des organismes ; à stade présent, ils sont également utilisés comme une classe de composants de médicaments antimicrobiens de nouveau type ayant un potentiel de développement, le brevet CN201910047525.3 divulgue une composition buccale contenant des bactéries probiotiques et des peptides antimicrobiens, qui peuvent améliorer le problème de l'inflammation buccale, avec des propriétés antibactériennes et anti-inflammatoires, des effets de soulagement de la douleur et de l'enflure, ce qui montre que les peptides antimicrobiens ont une valeur d'application importante dans le traitement des maladies buccales. Par conséquent, il est urgent de trouver de nouveaux types de substances actives peptidiques antimicrobiennes pour pallier les insuffisances des dentifrices traditionnels à base des herbes médicales chinoises qui n'inhibent pas sélectivement une variété de bactéries pathogènes et de bactéries probiotiques buccaux, et pour fournir une base matérielle pour le développement des produits dentifrices bactériostatiques buccaux.

DIVULGATION DE L'INVENTION

[0004] La présente invention, pour résoudre les lacunes de l'art antérieur, vise à fournir une utilisation d'un nouveau type de composé peptide antibactérien DM80Bu20 dans un dentifrice bactériostatique pour l'inhibition des bactéries buccales nocives et un dentifrice bactériostatique préparé à partir dudit composé. La présente invention révèle que ledit composé peptidique antimicrobien DM80Bu20 peut inhiber sélectivement l'activité de la plupart des bactéries pathogènes buccales, tout en n'ayant aucun effet inhibiteur sur les bactéries probiotiques buccaux, qu'il possède une faible activité hémolytique et une faible cytotoxicité, qu'il présente une sécurité élevée et une bonne stabilité ; de plus, ledit composé DM80Bu20 est utilisé dans la préparation d'un dentifrice composé avec des ingrédients d'efficacité spécifiques, les produits de dentifrice bactériostatique obtenus présentent une bonne stabilité bactériostatique.

[0005] L'un des principaux objectifs de la présente invention est de fournir une utilisation dudit composé peptidique antimicrobien DM80Bu20 dans un dentifrice bactériostatique pour l'inhibition des bactéries buccales nocives.

[0006] Un autre objet de la présente invention est de fournir une utilisation dudit composé peptidique antimicrobien DM80Bu20 dans la préparation d'un dentifrice bactériostatique.

[0007] Un autre objet de la présente invention est de fournir un dentifrice bactériostatique comprenant ledit composé peptidique antibactérien DM80Bu20.

[0008] Les solutions techniques suivantes permettent d'atteindre les objectifs susmentionnés de la présente invention : La présente invention fournit l'utilisation dudit composé peptidique antimicrobien DM80Bu20 dans un dentifrice bactériostatique pour l'inhibition des bactéries buccales nocives.

[0009] La formule structurelle dudit composé peptidique antimicrobien DM80Bu20 est la suivante :

[0010] De préférence, lesdites bactéries buccales nocives comprennent un ou une pluralité de bactéries parmi le Candida albicans, le Staphylococcus aureus, le Staphylococcus aureus résistant à la méthicilline, le Streptococcus mutans, le Porphyromonas gingivalis.

[0011] Parmi eux, le Candida albicans peut provoquer des lésions ou des états précancéreux tels que la stomatite à Candida (xérostomie, stomatite antibiotique, stomatite des prothèses dentaires, leucoplasie Candida), la chéilite Candida, la perlèche Candida, la glossite losangique médiane, la leucoplasie, le lichen plan, le lupus érythémateux, etc., étant donné qu'une partie d'Helicobacter pylori sont latents dans des Candida albicans, la concentration sur le développement de composés actifs efficaces contre le Candida albicans peut également prévenir et bloquer indirectement la latence de l'Helicobacter pylori dans l'environnement microbiologique buccal. Le Staphylococcus aureus et le SARM sont les germes pathogènes des furoncles maxillo-faciaux, des infections des tissus conjonctifs laxistes, des infections des plaies buccales et maxillo-faciales, de la perlèche infantile, de la parodontite et des infections mixtes endodontiques-périapicales. Le Streptococcus mutans est la bactérie pathogène principale des caries et peut entraîner des infections secondaires telles que la bactériémie et l'endocardite. Le Porphyromonas gingivalis est le germe pathogène principal de la maladie parodontale. Le Streptococcus sanguis est l'une des premières bactéries colonisatrices de la cavité buccale, c'est une bactérie résidente de la cavité buccale, qui s'oppose aux agents présumés responsables des caries et des maladies parodontales en produisant du peroxyde d'hydrogène et de l'hémostreptine, et constitue une classe de bactéries bénéfiques de la cavité buccale.

[0012] Ledit composé DM80Bu20 est un polymère d'acide aminé imitant un peptide naturel, qui imite le peptide de défense de l'hôte (PDH) d'un agent antimicrobien naturel, et son mécanisme antimicrobien est similaire à celui du PDH, et sa cible d'action est la membrane cellulaire bactérienne, qui produit un effet bactéricide en détruisant l'intégrité de la membrane cellulaire. La présente invention est réalisée en menant des expériences sur l'activité bactériostatique dudit composé DM80Bu20 contre les bactéries dans la cavité buccale, et les résultats montre que ce composé peptidique antimicrobien DM80Bu20 a une bonne activité bactériostatique contre le Candida albicans, le Staphylococcus aureus, le SARM, le Streptococcus mutans, le Porphyromonas gingivalis, avec une valeur CMI de 12,5 à 25 g/mL ; et qu'il n'avait aucune activité bactériostatique à la concentration testée contre la bactérie probiotique Streptococcus sanguis, avec une valeur CMI supérieure à 200 µg/mL ; ce qui indique que ce composé peut inhiber sélectivement la plupart des bactéries pathogènes buccales tout en n'ayant aucun effet inhibiteur sur les bactéries probiotiques buccales. En outre, ledit composé peptidique antimicrobien DM80Bu20 est soumis à des essais d'hémolyse et de cytotoxicité, dont les résultats montre que ledit composé DM80Bu20 présente une faible activité hémolytique et une faible cytotoxicité, et qu'il a un bon profil de sécurité.

[0013] En outre, le dentifrice développé en utilisant ledit composé DM80Bu20 atteint un taux d'effet bactériostatique de 90 % à 100 % contre le Candida albicans, le Staphylococcus aureus, le SARM (Staphylococcus aureus résistant à la méthicilline), le Streptococcus mutans, le Porphyromonas gingivalis et l'Escherichia coli ; et le taux d'effet bactériostatique contre le Streptococcus sanguis est inférieur à 10 %, ce qui indique que Ledit dentifrice bactériostatique selon la présente invention peut très bien inhiber les bactéries nocives dans la cavité buccale, sans causer des dommages aux bactéries bénéfiques et qu'il peut équilibrer efficacement la flore bactérienne. En outre, après avoir placé Ledit dentifrice bactériostatique selon la présente invention à 45 °C pendant 30 jours et 90 jours, avec la prolongation du cycle de stockage, l'effet bactériostatique est relativement réduit, mais l'effet bactériostatique global reste toujours assez bon, ce qui indique que l'effet bactériostatique du dentifrice de la présente invention est stable, et qu'il est propice au stockage à long terme. Ledit dentifrice bactériostatique selon la présente invention, en complétant de manière exogène les composants de défense des bactéries buccales nocives, peut inhiber la production de bactéries et la formation de tartre dentaire, réduire la plaque dentaire, réduire les saignements gingivaux et inhiber durablement les bactéries.

[0014] Par conséquent, l'utilisation dudit composé peptidique antimicrobien DM80Bu20 dans la préparation d'un dentifrice bactériostatique, et un dentifrice bactériostatique comprenant ledit composé peptidique antimicrobien DM80Bu20 entrent dans le champ de protection de la présente invention. Ledit dentifrice est préparé avec ledit composé peptidique antimicrobien DM80Bu20 comme principal ingrédient actif bactériostatique, complété par d'autres excipients.

[0015] Selon un mode de réalisation de préférence, ledit dentifrice bactériostatique comprend les composants suivants en poids : pour le composé peptidique antibactérien DM80Bu20, 0,001 à 0,1 partie, pour l'agent hydratant 30 à 45 parties, 30 à 45 parties, pour l'agent de frottement, 20 à 25 parties, pour l'adhésif, 0,5 à 2 parties, pour l'agent moussant, 0,5 à 3 parties, pour l'agent aromatisant, 0,5 à 1,5 partie, pour l'édulcorant, 0,1 à 0,5 partie, pour l'agent chélateur, 1 à 3 parties, pour l'agent de conservation, 0,1 à 2 parties et pour l'excipient, 0,1 à 2 parties, pour l'eau désionisée, 20 à 35 parties.

[0016] En outre, ledit dentifrice comprend un ou une pluralité d'éléments parmi le lysozyme, la lactoferrine, les bactéries probiotiques, le silicium régénérant et les fructo-oligosaccharides. Parmi eux, le lysozyme inhibe les germes pathogènes dans la cavité buccale et équilibre la flore buccale ; la lactoferrine renforce l'immunité des muqueuses et réduit l'infection par l'Helicobacter pylori ; les bactéries probiotiques jouent un rôle dans l'équilibre de la flore buccale et inhibent les germes pathogènes ; le silicium régénérant peut jouer un rôle dans la réparation des dommages causés par les caries, l'amélioration de la dureté des dents et la protection de l'émail dentaire; et les fructo-oligosaccharides favorisent principalement la prolifération des bactéries probiotiques et l'équilibre de la flore buccale. Les recherches menées dans le cadre de la présente invention montrent que ledit composé DM80Bu20 composé de lysozyme, de lactoferrine, de probiotiques, de silicium régénérant et de fructo-oligosaccharides peut renforcer de manière synergique l'effet bactériostatique sur les bactéries buccales nocives, mieux inhiber la production de bactéries et la formation de tartre dentaire, réduire la plaque dentaire, réduire les saignements gingivaux et avoir un effet bactériostatique de longue durée.

[0017] De préférence, dans ledit dentifrice, le nombre total de parties d'un ou d'une pluralité des ingrédients parmi le lysozyme, la lactoferrine, les probiotiques, le silicium régénérant, les fructo-oligosaccharides, est compris entre 0,5 et 2 parties.

[0018] De préférence, ledit agent hydratant comprend un ou une pluralité des ingrédients parmi le sorbitol, le propylène glycol, le glycérol et le polyéthanol.

[0019] De préférence, ledit agent de frottement comprend un ou plusieurs éléments parmi la silice, la silice hydratée, l'hydroxyde d'aluminium, le bicarbonate de calcium, l'hydroxyapatite ou l'hydrogénophosphate de calcium.

[0020] De préférence, ledit adhésif comprend une ou une pluralité des substances parmi la carboxyméthylcellulose sodique, l'hydroxyéthylcellulose, le carraghénane, le carbomère, la polyvinylpyrrolidone ou la gomme de xanthane.

[0021] De préférence, ledit agent moussant comprend un ou une pluralité des agents parmi le laurylsulfate de sodium, le lauroyl sarcosinate de sodium, le lauroyl glutamate de sodium, l'amidopropyl méthylbétaïne grasse, le cocamidopropyl méthylbétaïne, le cocoyl glutamate de sodium, l'huile de ricin hydrogénée polyoxyéthylénée 40.

[0022] De préférence, ledit agent aromatisant comprend l'arôme de menthe.

[0023] De préférence, ledit édulcorant comprend un ou une pluralité des éléments parmi la saccharine sodique, l'aspartame, le stévia.

[0024] De préférence, ledit agent chélateur comprend un ou plusieurs des éléments suivants : pyrophosphate, phosphate, EDTA disodique.

[0025] De préférence, ledit agent de conservation comprend un ou une pluralité des éléments parmi la sorbate de potassium, la méthylnipagine, la propylnipagine.

[0026] De préférence, lesdites bactéries probiotiques comprennent un ou une pluralité de bactéries parmi le Lactobacillus paracasei, le Lactobacillus rhamnosus, le Lactobacillus plantarum, le Lactobacillus salivarius.

[0027] Les effets bénéfiques de la présente invention par rapport à l'art antérieur sont les suivants : (1) La présente invention fournit une nouvelle utilisation dudit composé peptidique antimicrobien DM80Bu20 dans un dentifrice bactériostatique pour inhiber les bactéries nocives dans la cavité buccale, ledit composé peptidique antimicrobien DM80Bu20 a une bonne activité bactériostatique contre le Candida albicans, le Staphylococcus aureus, le SARM, le Streptococcus mutans, le Porphyromonas gingivalis, avec une valeur CMI de 12,5 à 25 g/mL, et n'a aucune activité inhibitrice contre la bactérie probiotique Streptococcus sanguis à concentration testée, avec une valeur CMI supérieure à 200 µg/mL, il présente l'effet bactériostatique sélectif spécifique, sans danger et non toxique, pouvant être utilisé dans la préparation de divers types de produits d'hygiène bucco-dentaire. (2) La présente invention combine le composé peptidique antimicrobien DM80Bu20 avec d'autres ingrédients efficaces (lysozyme, lactoferrine, bactéries probiotiques, silicium régénérant, fructo-oligosaccharides) pour préparer un dentifrice bactériostatique, et chaque ingrédient inhibe de manière synergique les bactéries nocives dans la cavité buccale, protège les bactéries bénéfiques, maintient efficacement l'équilibre de la flore buccale, réduit la formation de plaque et de tartre dentaires, et réduit les saignements gingivaux, et l'effet bactériostatique du dentifrice préparé est stable, ce qui est propice à un stockage à long terme.

EXPOSÉ DÉTAILLÉ DE MODE DE RÉALISATION

[0028] La présente invention est décrite plus en détail ci-dessous en référant aux modes de réalisation spécifiques, mais les modes de réalisation ne limitent pas la présente invention sous quelque forme que ce soit. Sauf indication contraire, les matières premières réactives utilisées dans les modes de réalisation de la présente invention sont des matières premières réactives achetées de manière conventionnelle.

[0029] Ledit composé DM80Bu20 selon la présente invention se présente sous la forme d'une poudre blanche et contient un squelette structurel similaire à celui des peptides de défense de l'hôte (Host defense peptides, HDP) naturels, qui se distingue par l'introduction d'acides aminés non naturels dans la structure, augmentant ainsi la stabilité dudit composé, et dont la formule structurelle est indiquée comme suit :

[0030] Souches testées : Candida albicans, Candida albicans ATCC SC5314 ; Staphylococcus aureus, Staphylococcus aureus ATCC 6538 ; Staphylococcus aureus résistant à la méthicilline, Methicillin-resistant Staphylococcus aureus 18908 ; Streptococcus mutans, Streptococcus mutans ATCC UA159 ; Porphyromonas gingivalis, Porphyromonas gingivalis ATCC 33277 ; Streptococcus sanguis, Streptococcus sanguis ATCC 10556.

Mode de réalisation 1 Expérience sur l'activité bactériostatique in vitro du DM80Bu20

1. Méthode d'expérience

(1) Culture de souche

[0031] Le Candida albicans, Candida albicans ATCC SC5314, est incubé dans un milieu RPMI 1640 à 37°C avec une humidité de 80 % et à une concentration de CO2 de 5 % ; Le Staphylococcus aureus résistant à la méthicilline, Staphylococcus aureus ATCC 6538, est incubé dans un milieu TSB à 37°C avec une humidité de 80 % et à une concentration de CO2de 5 % ; Le Staphylococcus aureus résistant à la méthicilline, Methicillin-resistant Staphylococcus aureus 18908, est incubé dans un milieu TSB à 37°C à une concentration de CO2de 5 % ; Le Porphyromonas gingivalis, Porphyromonas gingivalis ATCC 33277, est cultivé dans un milieu BHI ajouté du chlorure d'hémoglobine (hémine, 5 µg/mL) avec de la vitamine K (ménadione, 1 µg/mL) à 37°C dans des conditions strictement anaérobies ; Le Streptococcus mutans, Streptococcus mutans Clarke Streptococcus mutans ATCC UA159, est cultivé dans un milieu Brain Heart Infusion Agar/Broth à 37°C à une concentration de CO2de 5 % ;

[0032] Le Streptococcus sanguis, Streptococcus sanguis ATCC 10556, est cultivé dans un milieu Brain Heart Infusion Agar/Broth à 37°C à une concentration de CO2de 5 %.

(2) Préparation du composé

[0033] La poudre dudit composé DM80Bu20 est dissoute dans du DMSO, ajustée à une concentration de 10 mg/mL et conservée au réfrigérateur pour l'utilisation.

(3) Détermination de la concentration minimale inhibitrice (CMI)

[0034] En utilisant comme référence les réglementations du Clinical and Laboratory Standardization Institute (CLSI), la concentration minimale inhibitrice (CMI) des composés contre différents micro-organismes est déterminée en appliquant la méthode de dilution double en micro-bouillon. Cette méthode est reconnue par le Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI) comme une méthode validée, largement et universellement utilisée, qui permet de détecter rapidement les effets des interactions médicamenteuses dans un court laps de temps et de tirer des conclusions fiables à partir d'une analyse plus approfondie des données expérimentales, avec des résultats stables et hautement reproductibles.

[0035] Pour le Candida albicans, Candida albicans ATCC SC5314, la souche testée est ajustée à une concentration de 0,5 à 2,5×10<6>UFC mL<-1>à l'aide d'une solution saline, puis la suspension bactérienne est diluée à une concentration de 0,5 à 2,5×10<4>UFC mL<-1>dans un milieu RPMI 1640 pour être préparée en tant que solution bactérienne à tester. 200 µL de la solution bactérienne à tester est ajoutée au premier puits d'une plaque de 96 puits à fond plat, puis 100 µL de la solution bactérienne à tester est ajoutée à chaque puits. 2 µL de solution de composé à tester réservée (100 µg/mL) est ajoutée au premier puits, est soufflée et mélangée dans ledit premier puits, 100 µL de suspension homogène est prélevée et ajouté au deuxième puits, soufflée et mélangée, il faut répéter ces actions jusqu'au dernier puits, et jeter l'excès de solution bactérienne. La plaque de 96 puits est incubée à 37°C pendant 24 heures. La CMI est définie comme la concentration minimale de médicament pouvant être observée à l'œil nu pour inhiber la croissance bactérienne. L'expérience est réalisée en trois séries de répétitions et l'éconazole est choisi comme contrôle positif.

[0036] Pour le Staphylococcus aureus résistant à la méthicilline, Staphylococcus aureus ATCC 6538, et le Staphylococcus aureus résistant à la méthicilline, Methicillin-resistant Staphylococcus aureus 18908, la suspension bactérienne est diluée à une concentration de 0,5 à 2,5×10<5>UFC mL<-1>dans un milieu MH pour être préparée en tant que solution bactérienne à tester. 200 µL de la solution bactérienne à tester est ajoutée au premier puits d'une plaque de 96 puits à fond plat, puis 100 µL de la solution bactérienne à tester est ajoutée à chaque puits. 2 µL de solution de composé à tester réservée (100 µg/mL) est ajoutée au premier puits, est soufflée et mélangée dans ledit premier puits, 100 µL de suspension homogène est prise et ajouté au deuxième puits, soufflée et mélangée, il faut répéter ces actions jusqu'au dernier puits, et jeter l'excès de solution bactérienne. La plaque de 96 puits est incubée à 37°C et à une concentration de CO2de 5 % pendant 24 heures. La CMI est définie comme la concentration minimale de médicament pouvant être observée à l'œil nu pour inhiber la croissance bactérienne. L'expérience est réalisée en trois séries de répétitions et la vancomycine est choisi comme contrôle positif.

[0037] Pour le Streptococcus mutans, Streptococcus mutans Clarke Streptococcus mutans ATCC UA159, et le Streptococcus sanguis ATCC 10556, la suspension bactérienne est diluée à une concentration de 0,5 à 2,5×10<6>UFC mL<-1>dans un milieu BHI pour être préparée en tant que solution bactérienne à tester. 200 µL de la solution bactérienne à tester est ajoutée au premier puits d'une plaque de 96 puits à fond plat, puis 100 µL de la solution bactérienne à tester est ajoutée à chaque puits. 2 µL de solution de composé à tester réservée (100 µg/mL) est ajoutée au premier puits, est soufflée et mélangée dans ledit premier puits, 100 µL de suspension homogène est prise et ajouté au deuxième puits, soufflée et mélangée, il faut répéter ces actions jusqu'au dernier puits, et jeter l'excès de solution bactérienne. La plaque de 96 puits est incubée à 37°C et à une concentration de CO2 de 5 % pendant 24 heures. La CMI est définie comme la concentration minimale de médicament pouvant être observée à l'œil nu pour inhiber la croissance bactérienne. L'expérience est réalisée en trois séries de répétitions et la vancomycine est choisi comme contrôle positif.

[0038] Pour le Porphyromonas gingivalis, Porphyromonas gingivalis ATCC 33277, la suspension bactérienne est diluée à une concentration de 0.5 à 2.5×10<6>UFC mL<-1>dans un milieu BHI ajouté du chlorure d'hémoglobine (hémine, 5 µg/mL) avec de la vitamine K (ménadione, 1 µg/mL) pour être préparée en tant que solution bactérienne à tester. 200 µL de la solution bactérienne à tester est ajoutée au premier puits d'une plaque de 96 puits à fond plat, puis 100 µL de la solution bactérienne à tester est ajoutée à chaque puits. 2 µL de solution de composé à tester réservée (100 µg/mL) est ajoutée au premier puits, est soufflée et mélangée dans ledit premier puits, 100 µL de suspension homogène est prise et ajouté au deuxième puits, soufflée et mélangée, il faut répéter ces actions jusqu'au dernier puits, et jeter l'excès de solution bactérienne. La plaque de 96 puits est incubée à 37°C dans des conditions strictement anaérobies pendant 24 heures. La CMI est définie comme la concentration minimale de médicament pouvant être observée à l'œil nu pour inhiber la croissance bactérienne. L'expérience est réalisée en trois séries de répétitions et la chlorhexidine est choisi comme contrôle positif.

2. Résultats de l'expérience d'inhibition bactérienne

Tableau 1

[0039] DM80Bu20 12,5 25 12,5 25 200 25 Contrôle positif Econazole 4 µg/mL Vancomycine 1 µg/mL Vancomycine 0,5 µg/mL Vancomycine 1 µg/mL Vancomycine 1 µg/mL Chlorhexidine 1 µg/mL

[0040] Le tableau 1 montre les résultats bactériostatiques dudit composé DM80Bu20 contre les bactéries buccales. Les résultats du tableau montrent que ledit composé DM80Bu20 a un effet bactériostatique significatif contre le Candida albicans, le Staphylococcus aureus, le SARM, le Streptococcus mutans, le Porphyromonas gingivalis, et la valeur CMI est comprise entre 12,5 et 25 µg/mL ; il n'y a pas d'activité inhibitrice contre la bactérie probiotique Streptococcus sanguis, à la concentration testée, et les valeurs CMI sont supérieures à 200 µg/mL ; en outre, étant donné qu'une partie d'Helicobacter pylori sont latents dans des Candida albicans, la concentration sur le développement de composés actifs efficaces contre le Candida albicans peut également prévenir et bloquer indirectement la latence de Helicobacter pylori dans l'environnement microbiologique buccal.

Mode de réalisation 2 Expérience sur l'activité hémolytique dudit composé DM80Bu20

1. Méthode d'expérience

[0041] Le sang humain frais est lavé 3 fois avec du tampon Tris (TBS) et les globules rouges humains (GRH) collectés est dilués à 5 % (v/v). Ledit composé DM80Bu20 est dilué à 3,13 à 400 µg/mL dans la plaque de 96 puits en utilisant une dilution en gradient double. Des volumes égaux de suspension de globules rouges humains et de solution dudit composé DM80Bu20 sont mélangés et incubés à 37°C pendant 1 heure. Le TBS est utilisé comme contrôle à blanc, et une solution mélangée des volumes égaux de Triton X-100 (TBS) à 3,2 µg/ml et de globules rouges humains est utilisée comme contrôle positif. Après la centrifugation, 80 µl de surnageant de chaque puits sont transférés dans une autre plaque de 96 puits, et la valeur OD de la solution à tester dans la plaque de 96 puits au niveau de 405 nm est lue avec un marqueur enzymatique pour calculer le pourcentage d'hémolyse selon la formule suivante :

2. Résultats de l'expérience

[0042] L'activité hémolytique (HC50) du DM80Bu20 est de 200 µg/mL, ce qui indique que ledit composé DM80Bu20 est peu hémolysant.

Mode de réalisaton 3 Expérience sur l'activité de cytotoxicité dudit composé DM80Bu20

1. Méthode d'expérience

[0043] Des suspensions cellulaires individuelles sont préparées avec du milieu de culture DMEM contenant 10 % de sérum bovin fœtal à une densité cellulaire de 1×106 UFC/mL et inoculées dans une plaques de 96 puits à raison de 1×104 cellules par puits avec un volume de 100 µL par puits. Les cellules sont incubées à 37 °C pendant 24 heures. Après avoir retiré l'ancien milieu de culture, du milieu de culture contenant de différentes concentrations du composé DM80Bu20 est ajouté et trois puits multiples sont mis en place pour chaque concentration. Après une incubation des cellules à 37 °C pendant 24 heures, 10 µL de solution de MTT (5 mg/mL, préparée dans du PBS) sont ajoutées dans chaque puits, la culture se termine après une incubation pendant 4 heures. Après l'aspiration soigneusement du surnageant de culture dans les puits, il faut ajouter 150 µL de DMSO dans chaque puits, et agiter sur un agitateur pendant 10 min pour dissoudre complètement les cristaux. Sur la même plaque de 96 puits, des cellules sans traitement dudit composé DM80Bu20 sont incluses comme groupe témoin, et un groupe vierge sans inoculation de cellules uniquement avec du DMSO. La valeur OD de la solution à tester dans la plaque de 96 puits au niveau de 570 nm est lue avec un marqueur enzymatique, et la viabilité cellulaire de chaque puits est calculée selon la formule suivante :

2. Résultats de l'expérience

[0044] Le résultat obtenu concernant la cytotoxicité (IC50) dudit composé DM80Bu20 est de 100 µg/mL.

Mode de réalisaton 4 Essai d'irritation aiguë des yeux

1. Matériels et méthodes

[0045] 1.1 Substance d'essai : une solution aqueuse de composé DM80Bu20 à 0,1 préparée à l'aide d'eau stérile, liquide incolore et transparent, est adoptée, et des prototypes de substance d'essai sont prélevés pour être testés au cours de l'essai.

1.2 Animaux laboratoires et environnement d'élevage

[0046] Animaux laboratoires : 3 lapins blancs de Nouvelle-Zélande de qualité courante, pesant de 1,80 à 2,20 kg, fournis par Huadong Xinhua Farm of Laboratory Animals, Huadu District, Guangzhou City, Numéro de la Licence de Production des aminaux laboratoires : SCXK (Guangdong) 2019-0023, Numéro du Certificat de qualité : No. 44007600007472, les animaux ont été mis en quarantaine pendant au moins 3 jours avant l'expérience, et sont préparés pour l'utilisation après avoir passé le test.

[0047] Environnement d'alimentation : les animaux sont gardés dans une cage individuelle dans une salle des animaux de la zone générale de l'Institut de supervision et d'essai de la qualité de Guangzhou après l'achat, température : 18 à 26°C, humidité relative : 40% à 70%, Numéro de la Licence d'utilisation des animaux laboratoires : SYXK (Guangdong) 2018-0137.

[0048] Aliments pour animaux : fournis par Beijing Ke'ao Co-operative Feed Co., Ltd, numéro de la Licence de production d'aliments pour animaux : SCXK (Beijing) 2019-0003, numéro du Certificat de conformité des aliments pour animaux : 1112622000019812.

1.3 Méthode d'essai

[0049] 1.3.1 Les deux yeux des lapins laboratoires ont été examinés (notamment à l'aide de fluorescéine sodique) 24 heures avant le début de test, et les lapins qui ont passé l'examen avec succès sont utilisés pour l'essai.

[0050] 1.3.2 Il faut ouvrir doucement la paupière inférieure d'un œil de lapin, déposer 0,1 ml de la substance d'essai dans le sac conjonctival, de sorte que les paupières supérieures et inférieures ferment passivement pendant 1s pour éviter la perte de la substance d'essai. L'autre œil n'est pas traité et sert de contrôle. L'œil n'est pas rincé pendant les 24 heures après l'administration de la goutte de la substance d'essai.

[0051] 1.3.3 Les yeux des animaux sont examinés 1 heure, 24 heures, 48 heures et 72 heures après l'administration de la goutte de la substance d'essai. À la fin des 24 heures d'observation et d'enregistrement, tous les yeux des animaux sont examinés à l'aide de fluorescéine sodique. Le score de la réaction d'irritation oculaire est enregistré à chaque examen selon les critères de notation du Test d'irritation oculaire aiguë/corrosivité - Dommages oculaires de la Technologie de la sécurité cosmétique (édition 2015). L'évaluation est faite à base de score moyen des scores les plus élevés de la réaction d'irritation et le temps de récupération de la cornée, de l'iris ou de la conjonctive des animaux aux temps d'observation à 24h, 48h ou 72h après l'administration des substances d'essai, et l'intensité de l'irritation des substances d'essai sur les yeux est déterminée conformément au Test d'irritation oculaire aiguë/corrosivité - Classement de la réponse à l'irritation des yeux de la Technologie de la sécurité cosmétique (édition 2015).

2. Résultats de l'expérience

Tableau 3 Résultats du test d'irritation oculaire aiguë dudit composé DM80Bu20 sur des lapins

[0052] Lesions de la comee 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Lesions de l'iris 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 Congestion de la conjonctive 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Oedeme de la conjonctive 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Lesions de la comee 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Lesions de l'iris 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 2 Congestion de la conjonctive 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Oedeme de la conjonctive 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Lesions de la cornee 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Lesions de l'iris 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 3 Congestion de la conjonctive 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Oedeme de la conjonctive 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0

[0053] Comme le montre le Tableau 3, les résultats du test d'irritation oculaire aiguë du composé DM80Bu20 sur des lapins montrent tous une absence d'irritation.

Mode de réalisaton 5 Test d'irritation cutanée aiguë

1. Matériels et méthodes

[0054] 1.1 Substance d'essai : une solution aqueuse de composé DM80Bu20 à 0,1 préparée à l'aide d'eau stérile, liquide incolore et transparent, est adoptée, et sert en tant que prototypes de substance d'essai pour le test.

1.2 Animaux laboratoires et environnement d'élevage

[0055] Animaux laboratoires : 3 lapins blancs de Nouvelle-Zélande de qualité courante, pesant de 1,80kg à 2,20 kg, fournis par Huadong Xinhua Farm of Laboratory Animals, Huadu District, Guangzhou City, Numéro de la Licence de Production des aminaux laboratoires : SCXK (Guangdong) 2019-0023, Numéro du Certificat de qualité : No. No.44007600007434, les animaux ont été mis en quarantaine pendant au moins 3 jours avant l'expérience, et sont préparés pour l'utilisation après avoir passé le test.

[0056] Environnement d'alimentation : les animaux sont gardés dans une cage individuelle dans une salle des animaux de la zone générale de l'Institut de supervision et d'essai de la qualité de Guangzhou après l'achat, température : 18°C à 26°C, humidité relative : 40% à 70%, Numéro de la Licence d'utilisation des animaux laboratoires : SYXH (Guangdong) 2018-0137.

[0057] Aliments pour animaux : fournis par Beijing Ke'ao Co-operative Feed Co., Ltd, numéro de la Licence de production d'aliments pour animaux : SCXK (Beijing) 2019-0003, numéro du Certificat de qualité : 112622000019812.

1.3 Méthode d'essai

[0058] 1.3.1 Les poils des deux côtés de la colonne vertébrale du dos des animaux laboratoires ont été coupés 24 heures avant le test, et l'étendue de l'épilation est de 3 cm × 3 cm chacun.

[0059] 1.3.2 0,5 ml de la substance d'essai est prélevée et appliquée sur un côté de la peau sur une surface de 2,5 cm × 2,5 cm, puis il faut recouvrir cette surface de deux couches de gaze (2,5 cm × 2,5 cm) et d'une couche de cellophane, et la fixer avec du ruban adhésif non irritant et un bandage. La peau de l'autre coté n'est pas traité et sert de contrôle. Un test fermé est utilisé avec une durée de pansement de 4 heures. À la fin du test, la substance d'essai résiduel est retiré à l'eau chaude.

[0060] 1.3.3 La réaction cutanée de la partie de peau sur laquelle la substance d'essai est appliquée 1 h, 24 h, 48 h et 72 h après avoir retiré la substance d'essai, et les scores sont donnés conformément au Test d'irritation oculaire aiguë/corrosivité - Classement de la réponse à l'irritation cutanée de la Technologie de la sécurité cosmétique (édition 2015). Pendant le test, il faut observer s'il y a des symptômes autres que l'irritation cutanée.

2. Résultats de l'expérience

Tableau 4 Résultats du test d'irritation cutanée aiguë dudit composé DM80Bu20 sur des lapins

[0061]

[0062] Les résultats du Tableau 4 montrent que ledit composé peptidique antimicrobien DM80Bu20 n'est pas irritant pour la peau des lapins.

Mode de réalisation 6 Test de toxicité orale aiguë dudit composé DM80Bu20

1. Matériels et méthodes

1.1 Substance d'essai

[0063] Groupe d'essai : une solution aqueuse de composé DM80Bu20 à 0,1 préparée à l'aide d'eau stérile, liquide incolore et transparent, est adoptée, et sert en tant que prototypes de substance d'essai pour le test.

1.2 Animaux et environnement d'élevage

[0064] Méthode de préparation : il faut peser et prélever 5,00 g de l'échantillon, préparer une solution de 10,0 ml avec de l'eau pure et la mettre de côté.

[0065] 10 souris KM de grade SPF, pesant 18g à 22g, sont fournies par le Guangdong Provincial Medical Laboratory Animal Centre, Numéro de la Licence de Production des aminaux laboratoires : SCXK (Guangdong) 2018-0002, Numéro du Certificat de qualité : 44007200074743. Les liments pour animaux sont fournis par le Guangdong Medical Laboratory Animal Centre. Les animaux sont gardés dans une salle des animaux l'Institut de supervision et d'essai de la qualité de Guangzhou après l'achat, ils sont utilisés après avoir passé le contrôle de quarantaine, Numéro de la Licence d'utilisation des animaux laboratoires : SYXK (Guangdong) 2018-0137, salle des animaux. Température : 20°C à 26°C, humidité relative : 40% à 70%.

1.3 Méthode d'essai

[0066] Il s'agit d'un essai maximal unique avec un seul groupe de dose de 5000 mg/kg de poids corporel, c'est-à-dire que 10 souris qualifiées de quarantaine sont prélevées, dont la moitié est des mâles et l'autre moitié des femelles. Les animaux sont mis à jeun pendant la nuit précédant le test, et la consommation d'eau n'est pas limitée. Les animaux sont gavés une fois à jeun à raison de 10,0 ml/kg de poids corporel et restent à jeun pendant 3h à 4h après la contamination de toxicité. Les performances des animaux, le nombre de décès et l'heure des décès sont observés et enregistrés ; la période d'observation est de 14 jours et les animaux qui ne sont pas morts sont pesés à la fin du test. Le classement de la toxicité est déterminé conformément à la réglementation relative aux tests de toxicité orale aiguë.

2. Résultats de l'expérience

[0067] Après la contamination de toxicité, aucune souris n'a été empoisonnée ou n'était morte pendant la période d'observation, et aucune anomalie n'a été observée à l'œil nu lors de l'autopsie des animaux survivants à la fin de l'expérience. Pour les informations détaillées, veuillez voir le Tableau 5.

Tableau 5 Résultats du test de toxicité orale aiguë de la substance d'essai sur des souris

[0068] Femelle 5000 5 19,69±0,67 28,79±1,25 33,44±1,07 0 0 Mâle 5000 5 19,60±0,59 33,93±0,66 40,55±0,70 0 0

[0069] Les résultats montrent que ledit composé DM80Bu20 a une toxicité orale aiguë LD50 > 5000 mg/kg de poids corporel chez les souris KM femelles et mâles, pratiquement non toxique.

Mode de réalisation 7 Préparation de dentifrice bactériostatique

[0070] (1) Ce mode de réalisation fournit une série de dentifrices comprenant ledit composé DM80Bu20, dont la formulation est indiquée dans le Tableau 6.

Tableau 6

[0071] Ingrédi ents actifs Peptide antibactérien DM80Bu20 0,0 01 0,1 0,05 0,001 0,001 0,001 0,001 0,001 0,001 Lysozyme - - - 0,1 0,4 0,5 - 0,2 0,2 Lactoferrine - - - 0,1 0,4 - 0,2 - 0,1 Bactéries probiotiques - - - 0,1 0,4 - 0,2 0,3 - Silicium régénérant - - - 0,1 0,4 - 0,1 - 0,1 Fructo-oligosacc harides - - - 0,1 0,4 - - - 0,1 Agent hydrata nt Sorbitol 10 - - - - 25 - - 25 Propylène glycol - 45 20 45 45 - 45 45 - Glycérol 20 - - - - - - - - Polyéthanol - - 20 - - 20 - - 20 Agent de frottem ent Silice 20 - - - - - - - - Hydroxyde d'aluminium - - 12 - - 15 - - 15 Bicarbonate de calcium - 25 - 25 25 10 25 25 10 Hydroxyapatite - - 10 - - - - - - Adhési f Carboxyméthyle ellulose sodique - - 0,5 - - 1 - - 1 Hydroxyéthylcel lulose - - - - - 1 - - 1 Carraghénane 0,5 - - - - - - - - Carbomère - 2 2 2 - 2 2 - Polyvinylpyrroli done - - 0,5 - - - - - - Agent moussa nt Laurylsulfate de sodium - 1,5 1 1,5 1,5 - 1,5 1,5 - Amidopropyl méthylbétaïne grasse 0,5 - 1 - - 2 - - 2 Cocamidopropyl méthylbétaïne - 1,5 - 1,5 1,5 - 1,5 1,5 - Huile de ricin hydrogénée polyoxyéthyléné e 40 - - - - - 1 - - 1 Agent aromati sant Arôme de menthe poivrée 0,5 - - - - 1,5 - - 1,5 Arôme de menthe verte - 1,5 1 1,5 1,5 - 1,5 1,5 - Édulco rant Saccharine sodique - 0,5 - 0,5 0,5 - 0,5 0,5 - Aspartame 0,1 - 0,3 - - - - - - Sévia - - - - - 0,5 - - 0,5 Agent chélate ur Pyrophosphate 1 - 1 - - 3 - - 3 EDTA disodique - 3 1 3 3 3 3 - Agent de conser vation Sorbate de potassium 0,1 - - - - 1 - - 1 Méthylnipagine - - - - - 1 - - 1 Propylnipagine - 2 1 2 2 - 2 2 - Solvan t Eau désionisée 20 35 30 35 35 35 35 35 35

[0072] Les bactéries probiotiques contenues dans les dentifrices 4, 5, 7 et 8 sont respectivement le Lactobacillus paracasei, le Lactobacillus rhamnosus, le Lactobacillus plantarum, le Lactobacillus acidophilus, le Bifidobacterium bifidum et le Lactobacillus salivarius.

Méthode de préparation du dentifrice

[0073] Le processus de production actuel de l'entreprise adopte une méthode de préparation en une étape pour compléter la préparation du dentifrice

[0074] À l'étape S1, il faut mélanger l'agent hydratant, l'agent moussant (liquide), l'édulcorant, l'agent chélateur, l'agnet de conservation avec de l'eau et agiter pendant 5 à 15 minutes ;

[0075] A l'étape S2, il faut mélanger ensuite l'agent de frottement, l'adhésif, l'agent moussant (solide) avec la solution aqueuse préparée à l'étape S1 ci-dessus, maintenir le degré de vide entre -0,090 Mpa et -0,096 Mpa, et agiter pendant 20 à 50 minutes ;

[0076] A l'étape S3, il faut ajouter ensuite l'agent aromatisant et les ingrédients actifs, maintenir le degré de vide entre -0,090 Mpa et -0,096 Mpa, agiter pendant 10 à 50 minutes, les dentifrices 1 à 9 sont ainsi préparés.

Mode de réalisation 8 Test de la propriété bactériostatique du dentifrice

1. Méthode d'expérience

[0077] Conformément au point 7.3 de la norme QB 2738-2012 Méthode d'évaluation sur l'effet antibactérien et bactériostatique des produits chimiques quotidiens, les taux d'inhibition de Candida albicans, de Staphylococcus aureus, de SARM (Staphylococcus aureus résistant à la méthicilline), de Streptococcus mutans, de Porphyromonas gingivalis, d'Escherichia coli, de Streptococcus sanguis, etc. sont utilisés comme indices d'investigation, et les dentifrices 1 à 9 préparés selon le mode de réalisation 7 ont été laissés à température ambiante pendant 24 h avant le test concernant ses propriétés bactériostatiques. Les résultats des détermnations sont présentés dans le Tableau 7.

2. Résultats de l'expérience

Tableau 7 Taux bactériostatiques (%) des dentifrices 1 à 9

[0078] Candida albicans 93,92 99,99 99,97 96,38 99,74 99,41 95,72 96,47 96,83 Staphylococcus aureus 92,84 100,00 99,99 97,23 98,39 98,72 94,24 96,92 97,29 SARM 91,36 99,99 99,98 95,14 99,91 98,03 93,96 96,34 96,12 Streptococcus 92,51 100,00 99,99 97,30 99,32 98,69 95,63 98,13 97,91 mutans Porphyromonas gingivalis 91,97 100,00 100,00 96,19 99,97 99,31 94,28 96,42 96,81 Escherichia coli 94,63 99,99 99,99 95,18 100,00 99,75 96,38 95,64 95,57 Streptococcus sanguis 4,59 4,21 4,57 4,82 4,97 4,63 4,58 4,46 4,76

[0079] Comme le montre le Tableau 7, les dentifrices préparés selon la présente invention et comprenant ledit composé peptidique antimicrobien DM80Bu20 atteint un taux d'inhibition supérieur à 90 % contre le Candida albicans, le Staphylococcus aureus, le SARM (Staphylococcus aureus résistant à la méthicilline), le Streptococcus mutans, le Porphyromonas gingivalis et l'Escherichia coli, parmi lesquels, les dentifrices 2 et 3 atteignent un taux d'inhibition de 99 à 100 % contre chacune des bactéries buccales nocives ; outre ledit composé peptidique antimicrobien DM80Bu20, d'autres ingrédients efficaces (lysozyme, lactoferrine, bactéries probiotiques, silicium régénérant, fructo-oligosaccharides) sont ajoutés aux dentifrices 4 à 9, et leurs effets bactériostatiques sont tous améliorés, ce qui indique que les effets bactériostatique du lysozyme, de la lactoferrine, des probiotiques, du silicium régénérant et des fructo-oligosaccharides peuvent être efficacement améliorés en les combinant, par conséquent, compte tenu du coût élevé dudit composé peptidique antimicrobien DM80Bu20, il est possible d'utiliser la combinaison d'autres ingrédients efficaces pour améliorer ses effets d'inhibation contre les bactéries.

[0080] En outre, le taux bactériostatique des dentifrices des formulations contre le Streptococcus haematobium est inférieur à 5 %, ce qui est principalement dû à l'effet bactériostatique d'autres ingrédients auxiliaires dans les dentifrices. Dans l'ensemble, le dentifrice bactériostatique selon la présente invention peut bien inhiber les bactéries nocives dans la cavité buccale sans nuire aux bactéries bénéfiques et peut équilibrer efficacement la flore des bactéries.

Mode de réalisation 9 Test de stabilité bactériostatique du dentifrice

1. Méthode d'expérience

[0081] En référence à la norme QB 2738-2012 Méthode d'évaluation sur l'effet antibactérien et bactériostatique des produits chimiques quotidiens, les effets inhibiteurs des dentifrices 1 à 9 préparés selon le mode de réalisation 7 sur le Candida albicans, le Staphylococcus aureus, le SARM (Staphylococcus aureus résistant à la méthicilline), le Streptococcus mutans, le Porphyromonas gingivalis, l'Escherichia coli, le Streptococcus sanguis, sont déterminés. Les dentifrices 1 à 9 ont été placés à 45°C pendant 30 et 90 jours avant d'effectuer le test bactériostatique du dentifrice, respectivement. Les résultats des mesures sont présentés dans le Tableau 8.

2. Résultats de l'expérience

Tableau 8 Taux bactériostatiques des dentifrices 1 à 9 placés à 45°C pendant 30 et 90 jours

[0082] Candida albicans 30 93,72 100,00 99,81 95,94 99,36 99,43 95,61 96,51 96,72 90 91,87 99,99 99,72 94,38 97,42 98,15 93,18 94,54 93,77 Staphylococcus aureus 30 92,83 99,94 99,81 97,32 97,82 98,61 94,16 96,27 96,64 90 90,34 98,71 99,17 95,98 96,38 96,89 93,29 94,38 94,57 SARM 30 91,45 99,67 99,82 94,32 98,75 97,51 91,28 95,64 96,21 90 91,55 99,36 99,28 92,81 98,34 95,49 90,88 94,60 96,13 Streptococcus mutans 30 92,37 99,86 99,72 97,18 98,94 98,26 95,42 98,17 96,83 90 91,11 98,45 98,52 96,38 97,15 97,34 94,81 96,37 96,25 Porphyromonas gingivalis 30 91,31 100,00 99,98 96,31 98,94 98,12 93,58 96,51 96,18 90 91,33 99,14 98,51 96,27 97,62 96,33 93,14 95,49 95,82 Escherichia coli 30 93,89 99,87 99,34 95,23 99,81 98,17 96,24 95,34 95,15 90 93,77 98,16 99,21 94,21 97,38 96,35 96,11 95,18 94,35 Streptococcus sanguis 30 4,82 4,34 4,61 5,02 5,15 4,77 4,63 4,42 4,63 90 4,74 4,42 4,65 5,12 5,01 4,65 4,32 4,51 4,55

[0083] Comme le montrent les résultats du Tableau 8, après que les dentifrices de chaque formulation ont été placés à 45°C pendant 30 jours et 90 jours, l'effet bactériostatique est relativement réduit avec la prolongation du cycle de stockage, mais l'effet bactériostatique global reste très bon, ce qui indique que l'effet bactériostatique des dentifrices selon la présente invention est stable et qu'il est propice à un stockage à long terme.

Mode de réalisation 10 Effet de l'utilisation du dentifrice (détermination de l'indice de pigmentation)

1. Méthode d'essai

(1) Population et groupe de sujets

[0084] 80 sujets présentant tous les indicateurs normaux après l'examen physique ; 12 dents antérieures naturelles dans la population des sujets et sans restauration importante telle que des obturations d'une grande surface ou des couronnes ; dents présentant une pigmentation exogène.

[0085] Ils sont répartis au hasard en groupes de test 1, 2, 3 et 4, avec 20 personnes par groupe, dont le nombre est égal du point de vue de sexe ; l'échantillon utilisé dans le groupe de test 1 est le dentifrice 1, l'échantillon utilisé dans le groupe de test 2 est le dentifrice 3, l'échantillon utilisé dans le groupe de test 3 est le dentifrice 4, et l'échantillon utilisé dans le groupe de test 4 est le dentifrice 6.

(2) Méthode de brossage des dents

[0086] Les sujets ont reçu uniformément du dentifrice et des brosses à dents et se sont brossé les dents une fois par jour le matin et une fois le soir selon la méthode de brossage BASS pour un total de 2 fois, 1 minute à chaque fois.

(3) Étapes d'expérience

[0087] Les sujets ont été soumis à un test d'indice de pigmentation avant l'utilisation (base), puis après 3 mois d'utilisation continue, afin de comparer les changements de l'indice de pigmentation avant et après l'utilisation du dentifrice 1, du dentifrice 3, du dentifrice 4 et du dentifrice 6.

[0088] La méthode de notation de l'indice de pigmentation, les règles spécifiques de notation sont les suivantes : 0 point - pas de pigmentation ; 1 point - il y a une pigmentation, la taille de la pigmentation ne dépasse pas 1/3 de la surface de la dent et le degré de pigmentation est léger (jaune ou jaune-brun) ; 2 points - il y a une pigmentation, la taille de la pigmentation dépasse 1/3 de la surface de la dent et ne dépasse pas 2/3 de la surface de la dent, le degré de pigmentation est modéré (brun moyen) ; 3 points - il y a une pigmentation, la taille de la pigmentation dépasse les 2/3 de la surface de la dent et le degré de pigmentation est sévère (brun foncé ou noir).

[0089] Les dents examinées étaient les surfaces labiales et linguales des dents antérieures mandibulaires et les surfaces labiales des dents antérieures maxillaires. Le score de comptage d'indice de pigmentation pour chaque surface dentaire est le produit de la note de la surface de pigmentation et de la note du degré de pigmentation pour cette surface dentaire. Le score de comptage d'indice de pigmentation pour chaque sujet est la moyenne des scores de comptage d'indice de pigmentation pour chaque surface dentaire, soit : Indice de pigmentation = Σ (score de comptage de la surface score de comptage du degré)/nombre total de surfaces dentaires examinées.

2. Résultats du test

Tableau 9

[0090] Groupe d'essai 1 (dentifrice 1) 3,18 2,81 11,64 Groupe d'essai 2 3,27 2,73 16,51 (dentifrice 3) Groupe d'essai 3 (dentifrice 4) 3,21 2,78 13,40 Groupe d'essai 4 (dentifrice 6) 3,33 2,75 17,42

[0091] Remarque : taux de réduction de l'indice de pigmentation = (valeur moyenne de l'indice de pigmentation avant l'utilisation - valeur moyenne de l'indice de pigmentation après l'utilisation)/valeur moyenne de l'indice de pigmentation avant l'utilisation ×100%.

[0092] Les résultats du tableau 9 montrent que : les dentifrices selon la présente invention ont tous un effet de réduction sur la pigmentation des dents et que leur effet d'élimination de la pigmentation améliore avec l'augmentation de la teneur en DM80Bu20 ; en outre, les dentifrices 4 et 6 ont un taux de réduction de l'indice de pigmentation du sujet plus élevé que le dentifrice 1, ce qui montre que l'ajout de lysozyme, de lactoferrine, de bactéries probiotiques, de silicium régénérant et de fructo-oligosaccharides aux dentifrices selon la présente invention peut améliorer efficacement l'effet d'élimination de la pigmentation des dents et de l'indice de pigmentation. L'effet de la pigmentation exogène peut donc être obtenu en ajoutant d'autres ingrédients actifs pour obtenir un bon effet d'élimination de la pigmentation sur la surface dentaire tout en réduisant le coût d'utilisation dudit DM80Bu20, dont le dentifrice 6 ayant le taux le plus élevé de réduction de l'indice de pigmentation, ce qui montre que l'ajout de lysozyme en combinaison avec ledit DM80Bu20 est le plus efficace.

[0093] En outre, les sujets, après l'utilisant des dentifrices ci-dessus, ont obtenu des améliorations en matière de tartre dentaire, de saignement des gencives, des aphtes, de mauvaise haleine et d'autres problèmes d'une manière efficace, dont les dentifrices 4 et 6 présentent des améliorations plus plus évidentes par rapport au groupe de test utilisant le dentifrice 1.

[0094] De toute évidence, les modes de réalisation précédents de la présente invention ne sont que des exemples destinés à illustrer clairement la présente invention et ne sont pas destinées à limiter les ùodes de réalisations de la présente invention. Pour une personne ayant des compétences ordinaires dans le domaine auquel elle appartient, d'autres variations ou modifications de formes différentes peuvent être apportées sur la base de la description qui précède. Il n'est ni nécessaire ni possible d'épuiser tous les modes de réalisation décrits dans le présent document. Toutes les modifications, substitutions équivalentes et améliorations apportées dans l'esprit et selon les principes de la présente invention sont incluses dans le champ de protection des revendications de la présente invention.

Claims

1. Utilisation d'un composé peptide antibactérien DM80Bu20 dans la préparation d'un dentifrice bactériostatique.

2. Dentifrice bactériostatique, caractérisé en ce que, ledit dentifrice comprend un composé peptide antibactérien DM80Bu20.

3. Dentifrice bactériostatique selon la revendication 2, caractérisé en ce que, ledit dentifrice bactériostatique comprend les composants suivants en poids : pour le composé peptidique antibactérien DM80Bu20, 0,001 à 0,1 partie, pour l'agent hydratant 30 à 45 parties, 30 à 45 parties, pour l'agent de frottement, 20 à 25 parties, pour l'adhésif, 0,5 à 2 parties, pour l'agent moussant, 0,5 à 3 parties, pour l'agent aromatisant, 0,5 à 1,5 partie, pour l'édulcorant, 0,1 à 0,5 partie, pour l'agent chélateur, 1 à 3 parties, pour l'agent de conservation, 0,1 à 2 parties et pour l'excipient, 0,1 à 2 parties, pour l'eau désionisée, 20 à 35 parties.

4. Dentifrice bactériostatique selon la revendication 3, caractérisé en ce que, ledit dentifrice comprend un ou une pluralité d'éléments parmi le lysozyme, la lactoferrine, les bactéries probiotiques, le silicium régénérant et les fructo-oligosaccharides.

5. Dentifrice bactériostatique selon la revendication 4, caractérisé en ce que, dans ledit dentifrice, le nombre total de parties d'un ou d'une pluralité d'éléments parmi le lysozyme, la lactoferrine, les bactéries probiotiques, le silicium régénérant et les fructo-oligosaccharides est compris entre 0,5 et 2.

6. Dentifrice bactériostatique selon la revendication 4, caractérisé en ce que, ledit agent hydratant comprend un ou une pluralité des ingrédients parmi le sorbitol, le propylène glycol, le glycérol et le polyéthanol ; ledit agent de frottement comprend un ou plusieurs éléments parmi la silice, la silice hydratée, l'hydroxyde d'aluminium, le bicarbonate de calcium, l'hydroxyapatite ou l'hydrogénophosphate de calcium ; ledit adhésif comprend une ou une pluralité des substances parmi la carboxyméthylcellulose sodique, l'hydroxyéthylcellulose, le carraghénane, le carbomère, la polyvinylpyrrolidone ou la gomme de xanthane ; ledit agent moussant comprend un ou une pluralité des agents parmi le laurylsulfate de sodium, le lauroyl sarcosinate de sodium, le lauroyl glutamate de sodium, l'amidopropyl méthylbétaïne grasse, le cocamidopropyl méthylbétaïne, le cocoyl glutamate de sodium, l'huile de ricin hydrogénée polyoxyéthylénée 40.

7. Dentifrice bactériostatique selon l'une quelconque des revendications 3 à 5, caractérisé en ce que, ledit agent aromatisant comprend l'arôme de menthe ; ledit édulcorant comprend un ou une pluralité des éléments parmi la saccharine sodique, l'aspartame, le stévia ; ledit agent chélateur comprend un ou plusieurs des éléments suivants : pyrophosphate, phosphate, EDTA disodique ; ledit agent de conservation comprend un ou une pluralité des éléments parmi le sorbate de potassium, la méthylnipagine, la propylnipagine.

8. Dentifrice bactériostatique selon la revendication 4 ou 5, caractérisé en ce que, lesdites bactéries probiotiques comprennent un ou une pluralité de bactéries parmi le Lactobacillus paracasei, le Lactobacillus rhamnosus, le Lactobacillus plantarum, le Lactobacillus salivarius.