CH720403B1 - PROCESSO PER LA PREPARAZIONE DI (15alpha,16alpha,17beta)-ESTRA-1,3,5(10)-TRIENE-3,15,16,17-TETROLO (ESTETROLO) MONOIDRATO - Google Patents

Abstract

La presente invenzione riguarda un processo per la preparazione di (15α,16α,17β)-estra-1,3,5(10)-triene-3,15,16,17-tetrolo, anche noto come Estetrolo, ed Estetrolo monoidrato, aventi le formule mostrate di seguito:

Description

CAMPO DELL'INVENZIONE

[0001] La presente invenzione si referisce al settore dei processi per la sintesi di ingredienti attivi per uso farmaceutico, e in particolare a un processo per la preparazione su scala industriale del composto (15α,16α,17β)-estra-1,3,5(10)-triene-3,15,16,17-tetrolo, anche noto come Estetrolo e in forma monoidrata.

STATO DELL'ARTE

[0002] Il composto Estetrolo è un ingrediente attivo con attività farmacologica che lo rende utile per la Terapia Ormonale Sostitutiva (TOS), nella contraccezione femminile, o nella terapia delle disfunzioni autoimmuni legate a squilibri ormonali.

[0003] La formula strutturale dell'Estetrolo è riportata di seguito:

[0004] Le posizioni 15, 16 e 17 dello scheletro steroideo (evidenziati nella formula sopra riportata) recano ciascuna un ossidrile che, come indicato nella formula di struttura, ha una disposizione spaziale definita.

[0005] L'Estetrolo è un prodotto naturale isolato dall'urina umana ed è noto da anni; è stato descritto nell'articolo „Synthesis of epimeric 15-hydroxyestriols, new and potential metabolites of estradiol“, J. Fishman et al., JOC Vol. 33, No. 8, August 1968, p. 3133-3135 (composto Ia della figura a pagina 3133).

[0006] Per quanto riguarda l'ottenimento dell'Estetrolo, il processo ottenibile da questo articolo non presenta applicabilità industriale a causa della bassa resa del processo.

[0007] Recentemente sono state pubblicate diverse domande di brevetto relative a nuovi processi di sintesi dell'Estetrolo ma nessuno di essi evita la formazione dell'isomero 15β,16β,17β, avente la formula strutturale sotto riportata, da cui l'Estetrolo deve essere purificato per essere utilizzato in preparazioni farmaceutiche.

[0008] Per esempio, la domanda WO 2004/041839 A2 (pagina 6, righe 5-10) descrive un processo per l'ottenimento di Estetrolo la cui purezza può raggiungere il 99%, con la somma delle singole impurezze non eccedenti 1'1%. L'Esempio 11 a pagina 28 descrive un Estetrolo con purezza HPLC del 99.1% (HPLC-Ms) che tuttavia non fornisce informazioni sul contenuto delle singole impurezze; il limite accettato dalle line guida internazionali per le sostanze farmaceutiche è dello 0.1% per quelle sconosciute e dello 0.15% per quelle identificate.

[0009] Il contenuto di impurezze in un principio attivo (API) è un requisito essenziale e inderogabile per consentirne l'uso in preparazioni farmaceutiche ed è inoltre una caratteristica fondamentale per definire un processo applicabile industrialmente. Qualsiasi processo, indipendentemente dalla resa, che fornisca un API con un contenuto di impurezze che non rispetti i limiti delle linee guida internazionali non è un processo industrialmente utile in quanto l'API, risultato del processo, non è utilizzabile.

[0010] Domande successive relative alla produzione dell'Estetrolo sono, per esempio, WO 2012/164096 A1, WO 2013/050553 A1 e WO 2015/040051 A1.

[0011] In WO 2015/040051 A1 il rapporto Estetrolo/isomero 15β,16β,17β è uguale a 99:1 negli esempi 10 e 15, e uguale a 98:2 negli esempi 11 e 17. In questi esempi, tuttavia, non è fornita alcuna indicazione per ridurre il contenuto di isomero 15β,16β,17β almeno allo 0.15%. Anche la purificazione cromatografica (Esempio 15) non consente di ottenere questo risultato. In questo documento si nota (pagina 9, righe 5-15) che i processi descritti nella tecnica nota discussa (rappresentata nel caso di questo documento dalle domande WO 2012/164096 A1 e WO 2013/050553 A1) forniscono quantità ancora più elevate e inaccettabili di isomero 15β,16β,17β.

[0012] Appare quindi chiaro che nessuno dei processi descritti fornisce una soluzione alla limitazione della formazione dell'isomero 15β,16β,17β né un metodo di purificazione dell'Estetrolo da detto isomero.

SOMMARIO DELL'INVENZIONE

[0013] Lo scopo della presente invenzione è quello di fornire un processo di sintesi di Estetrolo ed Estetrolo monoidrato con un contenuto di isomero 15β,16β,17β inferiore allo 0.15%, senza dover ricorrere a tecniche di purificazione non applicabili industrialmente.

[0014] L'invenzione riguarda un processo di sintesi dell'Estetrolo che comprende i seguenti passaggi:

[0015] A) Ossidazione del composto (17β)-3-(fenilmetossi)-estra-1,3,5(10),15-tetraen-17-olo (intermedio 1) a dare il composto (17β)-3-(fenilmetossi)-estra-1,3,5(10)-triene-15,16,17-triolo (intermedio 2): in cui Bn = benzile, e in cui la configurazione degli atomi di carbonio 15 e 16 dello scheletro steroideo dell'intermediato 2 non è fissata; B) debenzilazione dell'intermedio 2 a dare il composto (17β)-estra-1,3,5(10)-triene-3,15,16,17-tetrolo (intermedio 3) in cui la configurazione degli atomi di carbonio 15 e 16 dello scheletro steroideo non è fissata:

C) acetilazione dell'intermedio 3 a (17β)-estra-1,3,5(10)-triene-3,15,16,17-tetrolo tetracetato (intermedio 4) in cui la configurazione degli atomi di carbonio 15 e 16 dello scheletro steroideo non è fissata:

D) purificazione dell' intermedio 4 ottenuto nel passaggio C) a (15α,16α,17β)-estra-1,3,5(10)-triene-3,15,16,17-tetrolo tetracetato (intermedio 5) in cui la configurazione degli atomi di carbonio 15 e 16 dello scheletro steroideo è fissata:

E) idrolisi degli acetati presenti nell'intermedio 5 a Estetrolo:

F) reazione dell'Estetrolo prodotto nel passaggio E) e trasformazione in Estetrolo monoidrato:

BREVE DESCRIZIONE DEI DISEGNI

[0016] La Figura 1 mostra il cromatogramma HPLC dell'Estetrolo monoidrato ottenibile con il processo dell'invenzione. La Figura 2 mostra il diffrattogra ààç_mma DRX dell'Estetrolo monoidrato ottenibile con il processo dell'invenzione. La Figura 3 mostra la curva DSC dell'Estetrolo monoidrato ottenibile con il processo dell'invenzione.

DESCRIZIONE DETTAGLIATA DELL'INVENZIONE

[0017] L'invenzione riguarda un processo di sintesi di Estetrolo ed Estetrolo monoidrato che comprende i passaggi sopra definiti.

[0018] Nella descrizione che segue e nelle rivendicazioni quando si utilizza il termine „pressione ridotta“ si intende una pressione inferiore a 0.5 bar; quando si utilizza il termine „a piccolo volume“ con riferimento ad una fase di evaporazione, si intende un volume residuo di una soluzione inferiore al 50% del volume iniziale.

[0019] Il passaggio A) del processo dell'invenzione consiste nell'ossidazione del composto (17β)-3-(fenilmetossi)-estra-1,3,5(10),15-tetraen-17-olo (intermedio 1) a dare il composto (17β)-3-(fenilmetossi)-estra-1,3,5(10)-triene-15,16,17-triolo (intermedio 2): in cui Bn = benzile, e in cui la configurazione degli atomi di carbonio 15 e 16 dello scheletro steroideo non è fissata.

[0020] Il substrato di partenza di questo passaggio, intermedio 1, può essere ottenuto come descritto nella domanda WO 2004/041839 A2.

[0021] Come ossidante nella reazione del passaggio A) è possibile utilizzare tetrossido di osmio (OsO4) supportato su polimero o, preferibilmente, tal quale, oppure osmiato di potassio diidrato K2OSO4.2H2O. Un N-ossido di ammina organica, quale trimetilammina N-ossido diidrato, viene utilizzato come co-ossidante.

[0022] Poiché l'ossidazione con derivati dell'osmio non è stereoselettiva, l'intermedio 2 si ottiene come miscela di isomeri con configurazione 15α,16α,17β and 15β,16β,17β; l'isomero 15α,16α,17β è prodotto in quantità preponderante insieme ad una quantità minoritaria dell'isomero 15β,16β,17β.

[0023] La reazione è condotta in un solvente inerte rispetto ai derivati di osmio, come tetraidrofurano (THF), ad una temperatura compresa tra 20 e 60 °C, preferibilmente tra 30 e 50 °C, e per un tempo di almeno 12 ore, preferibilmente almeno 16 ore.

[0024] La reazione può essere opzionalmente condotta in atmosfera inerte, preferibilmente sotto N2.

[0025] Il prodotto di reazione (intermedio 2) dopo la lavorazione può essere trattato con un prodotto sequestrante le impurezze metalliche in soluzione per eliminare il contenuto residuo di osmio. Tali prodotti, ben noti in chimica, sono generalmente a base di gel di silice funzionalizzato e comunemente indicati nel settore con il termine scavenger, che verrà utilizzato nel resto del testo e nelle rivendicazioni. Lo scavenger è preferibilmente QuadraSil<®>MP.

[0026] Il trattamento con lo scavenger può essere effettuato e ripetuto in ogni passaggio del processo; si effettua preferibilmente nel passaggio F).

[0027] Il passaggio B) consiste nella debenzilazione dell'intermedio 2 a dare il composto (17β)-estra-1,3,5(10)-triene-3,15,16,17-tetrolo (intermedio 3) in cui la configurazione degli atomi di carbonio 15 e 16 dello scheletro steroideo non è fissata:

[0028] La debenzilazione consiste nell'idrogenazione con idrogeno gassoso in presenza di un catalizzatore adatto. Le condizioni preferite per questa reazione sono: – uso di palladio su carbone (Pd/C) al 5% o al 10% in peso, preferibilmente palladio su carbone (Pd/C) al 5% in peso come catalizzatore; – pressione di idrogeno compresa tra 1 e 6 bar, preferibilmente tra 1 e 3 bar; – un alcol C1-C6 alifatico lineare o ramificato, preferibilmente metanolo, come solvente di reazione; – tempo di reazione di almeno 12 ore, preferibilmente almeno 20 ore; – temperatura di idrogenazione compresa tra 10 e 60 °C, preferibilmente tra 15 e 55 °C, ancora più preferibilmente tra 20 e 50 °C.

[0029] Il passaggio C) consiste nell'acetilazione dell'intermedio 3 a (17β)-estra-1,3,5(10)-triene-3,15,16,17-tetrolo tetracetato (intermedio 4) in cui la configurazione degli atomi di carbonio 15 e 16 dello scheletro steroideo non è fissata:

[0030] L'acetilazione esaustiva del passaggio C) è condotta in un solvente compatibile con le condizioni di reazione, come, per esempio, isopropil acetato, etil acetato, tetraidrofurano, piridina o toluene. Il solvente preferito è la piridina.

[0031] Per la reazione è utilizzata anidride acetica come reagente in una quantità di almeno 4, preferibilmente 6 moli per mole di intermedio 3, in presenza di una base inorganica o organica e di un catalizzatore.

[0032] Potrebbero essere aggiunte quantità catalitiche di anidride trifluoroacetica.

[0033] Come base organica è utilizzata preferibilmente la piridina e come catalizzatore la 4-dimetilamminopiridina (4-DMAP).

[0034] La temperatura di reazione è compresa tra 5 e 40 °C, preferibilmente tra 20 e 30 °C; il tempo di reazione è di almeno 2 ore, preferibilmente di almeno 3 ore.

[0035] La reazione può essere opzionalmente condotta in atmosfera di N2.

[0036] Il passaggio D) consiste nella purificazione dell'intermedio 4 ottenuto nel passaggio C) a (15α,16α,17β)-estra-1,3,5(10)-triene-3,15,16,17-tetrolo tetracetato (intermedio 5) in cui la configurazione degli atomi di carbonio 15 e 16 dello scheletro steroideo è fissata:

[0037] La purificazione dell'intermedio 4, con l'eliminazione dell'isomero 15β,16β,17β, viene ottenuta con la sequenza di operazioni descritte di seguito: D.1) disciogliere l'intermedio 4 da purificare in DCM a 15-30 °C; D.2) gocciolare la soluzione dell'intermedio 4 in DCM in metanolo puro; D.3) agitare la soluzione a 20-30 °C per almeno 10 minuti; D.4) eliminare il solvente per distillazione a pressione ridotta ottenendo una sospensione; D.5) scaldare a riflusso la sospensione per almeno 30'; D.6) raffreddare a 20-25 °C ed agitare per almeno 1 h; D.7) filtrare l'intermedio 5 ed essiccare a pressione ridotta per almeno 3 h a 40-60 °C.

[0038] Il trattamento di purificazione può essere ripetuto il numero di volte necessario per ottenere il livello di purezza desiderato in funzione del contenuto iniziale dell'isomero 15β,16β,17β.

[0039] Gli inventori hanno effettuato una serie di prove sperimentali ripetendo più volte la sequenza di operazioni D.1-D.7 su campioni di intermedio 4 contenenti tra il 5 e il 10% dell'isomero 15β,16β,17β ottenendo un prodotto finale in cui il contenuto di isomero 15β,16β,17β era inferiore allo 0.15% e in alcuni casi inferiore allo 0.05%.

[0040] Il Passaggio E) consiste nell'idrolisi degli acetati presenti nell'intermedio 5 a dare Estetrolo:

[0041] Le condizioni di idrolisi sono quelle note all'esperto di chimica organica.

[0042] La reazione di idrolisi degli acetati dell'intermedio 4 è stata realizzata utilizzando basi in un solvente come un alcol alifatico C1-C6, lineare o ramificato, o una loro miscela, preferibilmente metanolo. Le condizioni preferite per questa reazione sono: – utilizzo di carbonato di sodio, carbonato di potassio o carbonato di litio come base; preferibilmente viene utilizzato carbonato di potassio; – tempo di reazione di almeno 3 ore, preferibilmente almeno 4 ore; – temperatura di reazione compresa tra 10 e 40 °C, preferibilmente tra 15 e 35 °C, ancora più preferibilmente tra 20 e 30 °C.

[0043] La soluzione contenente il prodotto di reazione (Estetrolo) può opzionalmente essere: • trattata con uno scavenger a base di gel di silice funzionalizzata per eliminare il contenuto residuo di palladio; lo scavenger è preferibilmente QuadraSil<®>MP; e/o • purificata mediante cristallizzazione caldo-freddo in tetraidrofurano (THF), metanolo e acetonitrile, puri o in miscela.

[0044] In una seconda forma di realizzazione, l'invenzione è volta alla preparazione di Estetrolo in forma monoidrata. In questa forma di realizzazione, il processo comprende un ulteriore passaggio F),

[0045] che è condotto dopo il passaggio E) con la seguente sequenza di operazioni: F.1) disciogliere Estetrolo in un solvente organico miscibile con acqua come acetone, metanolo, etanolo, isopropanolo, tetraidrofurano, dimetilformammide o dimetilacetammide fino a completa solubilizzazione; il solvente preferito è il metanolo. In questa operazione, può essere opzionalmente eseguito il riscaldamento a riflusso per raggiungere una completa soluzione. La soluzione può essere opzionalmente trattata con uno scavenger a base di gel di silice funzionalizzata per eliminare il contenuto residuo di palladio. Lo scavenger è preferibilmente QuadraSil<®>MP. La soluzione può essere opzionalmente filtrata su filtro a membrana Millipore; F.2) evaporare la soluzione ottenuta nell'operazione F.1 sotto vuoto fino a piccolo volume; F.3) aggiungere alcol isopropilico (IPA), riscaldando a 50-60 °C ed evaporare sotto vuoto fino a piccolo volume. Il passaggio F.3 (aggiungere IPA ed evaporare il solvente) può essere ripetuto il numero di volte necessario per ottenere l'eliminazione completa del solvente del passaggio F.1; F.4) aggiungere alcol isopropilico e riscaldare a riflusso (temperatura superiore a 75 °C) fino ad ottenere completa dissoluzione; F.5) raffreddare la soluzione a 70-75 °C; F.6) aggiungere acqua (almeno un volume pari al volume del solvente organico) e agitare a 60 < T < 70 °C; F.7) eliminare IPA per distillazione a pressione ridotta a 55 < T < 65 °C; F.8) raffreddare la sospensione a 0 < T < 5 °C; F.9) agitare a 0 < T < 5 °C per almeno 30 minuti; F.10) filtrare il solido ed essiccare a 30 < T < 50 °C per almeno 16 h a pressione ridotta.

STRUMENTI, METODI E CONDIZIONI SPERIMENTALI

NMR:

[0046] Spettrometro NMR JEOL 400 YH (400 MHz); JEOL Delta software v5.1.1; Spettri registrati in DMSO-d6.

MS:

[0047] Strumento: DSQ-trace Thermofisher Introduzione campione - sonda a esposizione diretta (dep) Ionizzazione chimica (CI) con metano Pressione metano: 2.2 psi Temperatura sorgente: 200 °C

HPLC:

[0048] Sistema cromatografico Agilent Model 1260 Infinity; Rivelatore UV MODELLO G1315C DAD VL+

Metodo HPLC 1:

[0049] Condizioni cromatografiche: - Colonna: Supelco ascentis express C18 250x4.6 mm, 5µm - Flusso: 1 ml/min - Rivelatore: UV 280 nm - Volume di iniezione: 5 µl - Temperatura: 25 °C - Fase mobile A: acqua - Fase mobile B: acetonitrile 0 80 20 0-5 80 20 5-45 20 80 45-55 20 80 55-56 80 20 56-66 80 20

Metodo HPLC 2:

[0050] Condizioni cromatografiche: - Colonna: Supelco discovery C18 150x4.6 mm, 5µm - Flusso: 1 ml/min - Rivelatore: UV 280 nm - Volume di iniezione: 25 µl - Temperature: 22 °C - Fase mobile A: 4.29 g/L soluzione di CH3COONH4in acqua/metanolo/acetonitrile 90/6/4 -Fase mobile B: 38.6 g/L soluzione di CH3COONH4in acqua/metanolo/acetonitrile 10/54/36 0 70 30 0-5 70 30 5-15 10 90 15-30 10 90 30-31 70 30 31-40 70 30

UPLC:

[0051] Waters Acquity UPLC; Rivelatore: Acquity UPLC PDA e Rivelatore λ

Metodo UPLC:

[0052] Conditions cromatografiche: - Colonna: Acquity UPLC BEH C18 1.7 µm, 2.1 x 50 mm - Flusso: 0.5 ml/min - Rivelatore: UV 225 nm - Volume di iniezione: 1 µl - Temperatura: 35 °C - Fase mobile A: acqua + 0.01% acido formico - Fase mobile B: acetonitrile + 0.01% acido formico 0 70 30 4-10 10 90 10-11 10 90 11-11.5 70 30 11.5-12 70 30

[0053] Sistema UPLC-MS: Waters Acquity UPLC con rivelatore Acquity UPLC PDA collegato al rivelatore Waters Acquity UPLC QDa (ESI)

TLC:

[0054] MERCK: TLC silica gel 60 F254Fogli di alluminio 20 x 20 cm, codice 1.0554.0001.

Rivelatore TLC:

[0055] Fosfomolibdato di cerio: 25 g di acido fosfomolibdico e 10 g di solfato di cerio (IV) vengono sciolti in 600 mL di H2O. Vengono aggiunti 60 mL di H2SO4al 98% e la miscela risultante viene portata a 1 L con H2O. La piastra viene impregnata con la soluzione e poi riscaldata fino a rivelazione dei composti.

XRPD:

[0056] L'analisi XRPD è stata eseguita utilizzando un diffrattometro per polveri Bruker D2 Phaser (2a edizione) operante in geometria Bragg-Brentano, dotato di un multicampionatore rotante e rivelatore lineare di tipo SSD (Lynxeye). La sorgente di raggi X è un tubo radiogeno con anodo di rame funzionante a 30 KV e 10 mA. Per l'analisi viene utilizzata la radiazione X avente una lunghezza d'onda corrispondente alla Kα media del rame (λ = 1.54184 Å). La radiazione Kβ viene filtrata attraverso un filtro al nichel.

[0057] Sono stati utilizzati portacampioni in silicio „zero background“ con superficie piana su cui è stato spalmato il campione fino a formare uno strato sottile. Durante l'analisi il portacampione viene fatto ruotare ad una velocità di 60 giri al minuto.

[0058] La scansione viene eseguita nell'intervallo 4-40° 20 con incrementi di 0.016° 20 e un tempo di acquisizione di 1.0 s per ciascun incremento.

[0059] I diffrattogrammi sono stati elaborati utilizzando il software Bruker DIFFRAC.EVA.

DSC:

[0060] L'analisi DSC è stata condotta in un'atmosfera inerte (azoto) utilizzando un calorimetro a scansione differenziale DSC Perkin Elmer Diamond. I campioni sono stati preparati pesando la polvere in crogioli di alluminio da 40 µL, che sono stati poi sigillati prima dell'analisi. L'analisi è stata condotta nell'intervallo di temperatura 25-300 °C utilizzando una velocità di riscaldamento di 10 °C/min.

NOTE

[0061] L'acqua utilizzata nelle descrizioni sperimentali è da intendersi acqua pura, salvo diversa indicazione.

[0062] I solventi organici utilizzati nelle descrizioni sperimentali sono da intendersi di grado „tecnico“, salvo diversa indicazione.

[0063] I reagenti e i catalizzatori utilizzati nelle descrizioni sperimentali sono da intendersi di qualità commerciale, salvo diversa indicazione.

[0064] Il prodotto QuadraSil<®>MP è disponibile da Johnson Matthey.

ESEMPIO 1

[0065] Questo esempio si riferisce al passaggio A) del processo dell'invenzione, da intermedio 1 a intermedio 2.

[0066] In un pallone sotto azoto sono stati caricati 32.4 g di intermedio 1 (89.87 mmol, 1 eq) e 356 mL di tetraidrofurano. Alla soluzione sono stati aggiunti, in questo ordine, 0.324 g di tetrossido di osmio (1.28 mmol, 1% in peso) e 17.9 g di trimetilammina N-ossido diidrato (161.26 mmol, 1.8 eq). Il sistema è stato riscaldato a 50 °C e mantenuto sotto agitazione per 16 ore.

[0067] La reazione è stata monitorata mediante analisi TLC nelle seguenti condizioni: piastra TLC: gel di silice su allumina; substrato di partenza (intermedio 1) sciolto in diclorometano; miscela di reazione diluita in diclorometano; eluente: etil acetato (EtOAc); rivelatore: fosfomolibdato di cerio.

[0068] Alla fine della reazione, la soluzione è stata raffreddata a 25 °C ed è stata aggiunta per gocciolamento una soluzione di metabisolfito di sodio (18.3 g) in water (162 mL). Il solvente è stato concentrato a pressione ridotta e al residuo sono stati aggiunti 193 mL di isopropil acetato e 290 mL di acido cloridrico 1M.

[0069] Le fasi sono state separate, e la fase acquosa è stata estratta con 160 mL di etil acetato. Il solvente organico è stato lavato con una soluzione di NaCl in acqua e la soluzione è stata gocciolata in 324 ml di n-eptano puro ed agitata a 25 °C per 10 minuti (soluzione).

[0070] L'etil acetato è stato rimosso a pressione ridotta e la sospensione ottenuta è stata agitata a 25 °C per 1 h.

[0071] Il solido è stato filtrato su Büchner lavando con n-eptano ed essiccato a pressione ridotta a 50 °C per 4 ore.

[0072] Sono stati ottenuti 30 g di intermedio 2 che è stato utilizzato tal quale per il passaggio successivo.

[0073] Una piccola porzione di intermedio 2 è stata purificata a fini analitici, ottenendo i seguenti dati: <1>H-NMR (400MHz, DMSO-d H-NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 7.31-7.43 (m, 5H); 7.15 (d, 1H, J = 8.8 Hz); 6.72-6.75 (m, 1H); 6.69 (s, 1H); 5.04 (s, 2H); 4.86 (d, 1H, J = 5.0 Hz); 4.61 (d, 1H, J = 6,0 Hz); 4.27 (d, 1H, J = 6,0 Hz); 3.67-3.73 (m, 2H); 3.25 (t, 1H); 2.74-2.77 (m, 2H); 1.03-2.22 (m, 9H); 0.67 (s, 3H). Massa (ESI+): m/z = 395 [M<+>+1], 377 [M<+>+1-H2O.

ESEMPIO 2

[0074] Questo esempio si riferisce al passaggio B) del processo dell'invenzione.

[0075] L'intermedio 2 (8 g), ottenuto come descritto nell'esempio precedente, è stato disciolto con 120 ml di metanolo e caricato in un reattore di idrogenazione. Alla soluzione sono stati aggiunti 800 mg di palladio su carbone al 5% e l'idrogenazione è stata condotta a 25 °C e 1 bar per 20 ore.

[0076] La reazione è stata monitorata mediante analisi TLC nelle seguenti condizioni: piastra TLC: gel di silice su allumina; substrato di partenza (intermedio 2) disciolto in diclorometano (DCM); miscela di reazione diluita con metanolo (MeOH); eluente: DCM/MeOH 9/1; rivelatore: fosfomolibdato di cerio. Alla fine della reazione, il sistema è stato filtrato su uno strato di dicalite lavando con metanolo.

[0077] Il solvente è stato concentrato a pressione ridotta fino a un volume residuale di 20 mL e sono stati aggiunti 60 ml di acqua (è stata rilevata la precipitazione di un solido).

[0078] La sospensione è stata concentrata a pressione ridotta per rimuovere il metanolo residuale.

[0079] La sospensione è stata agitata per 30 minuti a 20-25 °C. Il solido è stato filtrato su Biichner lavando con acqua ed essiccato a pressione ridotta a 50 °C per 6 ore.

[0080] Sono stati ottenuti 5.65 g di intermedio 3 (solido bianco).

[0081] La quantità di isomero 15β,16β,17β presente nel prodotto di reazione è stata determinata mediante analisi HPLC ed è il 7.8% dell'isomero desiderato 15α,16α,17β.

ESEMPIO 3

[0082] Questo esempio si riferisce all'implementazione del passaggio C) del processo dell'invenzione.

[0083] 5 g di intermedio 3 ottenuto come descritto nell'esempio precedente e 35 mL di piridina sono stati caricati in un pallone e si è agitato a 20-25 °C (soluzione limpida).

[0084] Alla soluzione sono stati aggiunti 160 mg di 4-dimetilamminopiridina (4-DMAP) e, dopo 10' di agitazione a 20-25 °C, sono stati aggiunti 9.3 ml di anidride acetica.

[0085] La reazione è stata controllata dopo 4 h di agitazione a 25 °C mediante analisi TLC nelle seguenti condizioni: piastra TLC: gel di silice su allumina; substrato di partenza (intermedio 3) disciolto in diclorometano; miscela di reazione diluita con HCl 1M and etil acetato (EtOAc); eluente: eptano/EtOAc 2/8; rivelatore: fosfomolibdato di cerio.

[0086] Alla fine della reazione il solvente è stato concentrato a pressione ridotta e sono stati aggiunti 35 ml di DCM e 18 ml di acqua.

[0087] Il sistema bifasico è stato mantenuto sotto agitazione a 25 °C per 10' e quindi neutralizzato con acido cloridrico 12M con raffreddamento, ed agitato per 30 minuti.

[0088] Il solvente organico del sistema bifasico è stato lavato con una soluzione acquosa di NaHCO3seguita da un lavaggio con acqua e, alla fine, da un lavaggio con una soluzione acquosa di NaCl.

[0089] Il solvente è stato completamente eliminato per distillazione a pressione ridotta fornendo 7.4 g di intermedio 4 grezzo (solido).

[0090] L'isomero 15β,16β,17β presente nell'intermedio 4 grezzo è stato determinato mediante analisi HPLC (metodo 1) ed è il 7.5% dell'isomero desiderato 15α,16α,17β.

ESEMPIO 4

[0091] Questo esempio si riferisce all'implementazione del passaggio D) del processo dell'invenzione.

[0092] L'intermedio 4 grezzo (7.4 g), ottenuto come descritto nell'esempio precedente, è stato disciolto in 29.6 mL di DCM (soluzione).

[0093] La soluzione in DCM soluzione dell'intermedio 4 è stata gocciolata in 74 ml di metanolo puro e si è agitato a 25 °C for 10' (soluzione).

[0094] La soluzione organica è stata concentrata a 45 °C a pressione ridotta fino a un volume finale di 44 ml (sospensione).

[0095] La sospensione è stata scaldata a riflusso (65 °C) per 30' (sospensione) quindi raffreddata a 25 °C sotto agitazione per almeno 1 h.

[0096] Il solido è stato filtrato su Büchner lavando con metanolo, ed essiccato a pressione ridotta per 3 ore a 45 °C.

[0097] L'intermedio 4 grezzo (5.5 g; isomero 15β,16β,17β = 0.17%) è stato disciolto in 22 mL di DCM (soluzione).

[0098] La soluzione in DCM dell'intermedio 4 è stata gocciolata in 55 ml di metanolo puro e si è agitato a 25 °C per 10' (soluzione).

[0099] La soluzione organica è stata concentrata a 45 °C a pressione ridotta fino a un volume finale di 44 ml (sospensione).

[0100] La sospensione è stata riscaldata a riflusso (65 °C) per 30' (sospensione) quindi raffreddata a 25 °C sotto agitazione per almeno 1 h.

[0101] Il solido è stato filtrato su Büchner lavando con metanolo, ed essiccato a pressione ridotta per 3 ore a 45 °C.

[0102] Sono stati ottenuti 5.2 g di intermedio 5 puro, che è stato analizzato mediante HPLC.

[0103] L'intermedio 5 puro aveva una purezza HPLC (metodo 1) = 98.9%, co l'isomero 15β,16β,17β non rilevabile.

[0104] <1>H-NMR (400MHz, CDCl3): δ 7.27-7.26 (m, 1H); 6,83-7.86 (m, 1H); 6,79 (s, 1H); 5.39 (t, 1H); 5.16 (t, 1H); 5.01 (d, 1H, J = 6,4 Hz); 2.83-2.87 (m, 2H); 2.28-2.23 (m, 2H); 2.28 (s, 3H); 2.09 (s, 3H); 2.05 (s, 6H); 1.50-1.85 (m, 7H); 0.94 (s, 3H).

[0105] Massa (ESI+): m/z = 473 [M<+>+1], 413 [M<+>+1-AcOH], 353 [M<+>+1-2AcOH], 293 [M<+>+1-3AcOH].

ESEMPIO 5

[0106] Questo esempio si riferisce all'implementazione del passaggio E) del processo dell'invenzione.

[0107] 2.5 g di intermedio 5 ottenuti nell'Esempio 4 sono stati disciolti in 50 mL di metanolo e sono stati aggiunti 650 mg di carbonato di potassio.

[0108] La miscela è stata mantenuta sotto agitazione a 25 °C per 4 ore (soluzione).

[0109] La reazione è stata monitorata mediante analisi TLC nelle seguenti condizioni: piastra TLC: gel di silice su allumina; prodotto intermedio 5 disciolto in diclorometano; miscela di reazione spenta in HCl 1M ed estratta con EtOAc, la fase organica è stata depositata; eluente: eptano/EtOAc 2/8; rivelatore: fosfomolibdato di cerio.

[0110] La soluzione è stata concentrata a pressione ridotta fino a un volume residuale di 5 mL, sono stati aggiunti 18.5 mL di acqua, e il metanolo residuale è stato rimosso a pressione ridotta.

[0111] La sospensione ottenuta è stata neutralizzata con acido cloridrico 1M (pH ~ 7) e raffreddata a 10 °C sotto agitazione per 60 minuti. Il solido è stato filtrato su Büchner lavando con acqua ed essiccato a pressione ridotta a 50 °C per 6 ore.

[0112] Sono stati ottenuti 1.5 g di Estetrolo (solido bianco).

[0113] Purezza HPLC (metodo 2) = 99.4%, isomero 15β,16β,17β non rilevabile.

[0114] Massa (ESI+): m/z = 305 [M<+>+1], 287 [M<+>+1-H2O], 269 [M<+>+1-2H2O], 251 [M<+>+1-3H2O].

ESEMPIO 6

[0115] Questo esempio si riferisce all'implementazione del passaggio F) del processo dell'invenzione.

[0116] 3.5 g di Estetrolo ottenuto seguendo le procedure sperimentali descritte negli esempi precedenti sono stati sospesi, sotto agitazione, in 63 mL di metanolo.

[0117] La sospensione è stata riscaldata alla temperatura di riflusso fino a completa dissoluzione.

[0118] La soluzione è stata raffreddata a 20-25 °C ed è stato aggiunto QuadraSil<®>MP mantenendo la soluzione sotto agitazione per 16 h.

[0119] La sospensione (soluzione di Estetrolo - metanolo e QuadraSil<®>MP) è stata filtrata.

[0120] La soluzione (Estetrolo e metanolo) è stata riscaldata a 45 °C e filtrata su filtro a membrana Millipore, lavando con MeOH.

[0121] La soluzione è stata evaporata a pressione ridotta e al volume residuale di 28 ml sono stati aggiunti 14 ml di alcol isopropilico (IPA), mantenendo T ≥ 50 °C.

[0122] Quest'ultimo passaggio è stato ripetuto due altre volte (volume finale 28 ml).

[0123] Infine, sono stati aggiunti 17.5 mL di IPA e il tutto è stato scaldato a riflusso fino a completa dissoluzione dei solidi.

[0124] La soluzione è stata raffreddata a T = 70 °C e sono stati aggiunti 45.5 mL di acqua mantenendo T ≥ 60 °C sotto agitazione.

[0125] La sospensione è stata lentamente distillata a pressione ridotta mantenendo T = 55-65 °C fino a un volume residuale di 35 mL.

[0126] La sospensione è stata lentamente raffreddata a 5 °C, agitata per almeno 30 minuti a questa temperatura e filtrata su un filtro Búchner.

[0127] La torta d filtrazione è stata lavata con acqua e il solido è stato essiccato in stufa sotto vuoto a 35 °C per circa 18 h.

[0128] È stato ottenuto Estetrolo monoidrato (solido bianco) (3.50 g; KF = 5.72%)

[0129] L'Estetrolo monoidrato è stato analizzato mediante HPLC (metodo 2).

[0130] I risultati del test sono mostrati in Fig. 1: il prodotto è risultato essere Estetrolo monoidrato di purezza HPLC = 100%.

[0131] <1>H-NMR (400MHz, DMSO-d6): δ 9.0 (s, 1H); 7.05 (d, 1H, J = 8.4 Hz); 6.51-6.48 (m, 1H); 6.41 (d, 1H, J = 2.4 Hz); 4.85 (d, 1H, J = 4.8 Hz); 4.60 (d, 1H, J = 5.6 Hz); 4.27 (d, 1H, J = 6 Hz); 3.66-3.71 (m, 2H); 3.23-3.26 (t, 1H, J = 5.6 Hz); 2.68-2.73 (m, 2H); 2.18-2.22 (m, 2H); 2.05-2.10 (m, 1H); 1.73-1.76 (d, 1H, 12Hz); 1.02-1.45 (m, 5H); 0.66 (s, 3H).

[0132] Massa (ESI+): m/z = 305 [M<+>+1], 287 [M<+>+1-H2O], 269 [M<+>+1-2H2O], 251 [M<+>+1-3H2O].

[0133] Un campione del prodotto è stato sottoposto ad analisi XRPD; il risultato del test è il diffrattogramma mostrato in Fig. 2.

[0134] La lista seguente riporta le posizioni (come valori degli angoli 20 ± 0.2 °) e le intensità relative dei principali picchi del diffrattogramma: 6.889, 28.6%; 12.087, 13.2%; 12.567, 60.7%; 13.259, 8.7%; 13.619, 63.3%;14.983, 6.6%; 17.533, 10.6%; 18.621, 9.1%; 20.871, 100.0%; 21.757, 11.8%; 23.139, 17.2%; 25.399, 7.2%; 30.736, 6.8%; 34.642, 6.0%; 38.359, 7.9%.

[0135] Un altro campione del prodotto ottenuto, di peso 3.4 mg, è stato sottoposto a test DSC; il risultato del test è mostrato in Fig. 3, che mostra un primo picco allargato attribuito alla disidratazione di Estetrolo monoidrato, e un secondo picco a circa 244-245 °C, ovvero ad una temperatura essenzialmente corrispondente alla temperatura di fusione dell'Estetrolo.

Claims (11)

1. Processo per la sintesi di Estetrolo ed Estetrolo monoidrato comprendente i seguenti passaggi: A) ossidazione del composto (17β)-3-(fenilmetossi)-estra-1,3,5(10),15-tetraen-17-olo „intermedio 1“ a dare il composto (17β)-3-(fenilmetossi)-estra-1,3,5(10)-triene-15,16,17-triolo „intermedio 2“: in cui Bn = benzile, e in cui la configurazione degli atomi di carbonio 15 e 16 dello scheletro steroideo dell'intermedio 2 non è fissata; B) debenzilazione dell'intermedio 2 a dare il composto (17β)-estra-1,3,5(10)-triene-3,15,16,17-tetrolo „intermedio 3“ in cui la configurazione degli atomi di carbonio 15 e 16 dello scheletro steroideo non è fissata:

C) acetilazione dell'intermedio 3 a (17β)-estra-1,3,5(10)-triene-3,15,16,17-tetrolo tetracetato „intermedio 4“ in cui la configurazione degli atomi di carbonio 15 e 16 dello scheletro steroideo non è fissata:

D) purificazione dell'intermedio 4 ottenuto nel passaggio C) a (15α,16α,17β)-estra-1,3,5(10)-triene-3,15,16,17-tetrolo tetracetato „intermedio 5“ in cui la configurazione degli atomi di carbonio 15 e 16 dello scheletro steroideo è fissata:

E) idrolisi degli acetati presenti nell'intermedio 5 a Estetrolo

F) l'Estetrolo prodotto nel passaggio E) è trasformato in Estetrolo monoidrato

2. Processo secondo la rivendicazione 1, in cui il passaggio A) è condotto utilizzando un composto di osmio come tale o supportato su un polimero come ossidante e un N-ossido di un'ammina organica come co-ossidante, operando in un solvente inerte ai derivati di osmio, a una temperatura compresa tra 20 e 60 °C, e per un tempo di almeno 12 ore.

3. Processo secondo una qualsiasi delle rivendicazioni precedenti, in cui il passaggio B), la reazione di debenzilazione, è condotto nelle seguenti condizioni: – uso di palladio su carbone „Pd/C“ al 5% o al 10% in peso come catalizzatore; – pressione di idrogeno compresa tra 1 e 3 bar; – un alcol alifatico C1-C6, lineare o ramificato, come solvente di reazione; – tempo di reazione di almeno 12 ore; – temperatura di idrogenazione compresa tra 10 e 60 °C.

4. Processo secondo una qualsiasi delle rivendicazioni precedenti, in cui il passaggio C), l'acetilazione esaustiva da intermedio 3 a intermedio 4, è condotto utilizzando come reagente anidride acetica in un solvente scelto tra isopropil acetato, etil acetato, tetraidrofurano, piridina e toluene, in presenza di una base inorganica o organica, con anidride trifluoroacetica o 4-dimetilamminopiridina „4-DMAP“ come catalizzatore e operando ad una temperatura compresa tra 5 e 40 °C per un tempo di almeno 2 ore.

5. Processo secondo una qualsiasi delle rivendicazioni precedenti in cui il passaggio D), purificazione dell'intermedio 4 a dare l'intermedio 5, è condotto con la seguente sequenza di operazioni: D.1) disciogliere l'intermedio 4 da purificare in DCM a 15-30 °C; D.2) gocciolare la soluzione di intermedio 4 in DCM in metanolo puro; D.3) agitare la soluzione dell'operazione D.2) a 20-30 °C per almeno 10 minuti; D.4) eliminare il solvente per distillazione a pressione ridotta fino a piccolo volume ottenendo una sospensione; D.5) scaldare a riflusso la sospensione per almeno 30'; D.6) raffreddare la sospensione a 20-25 °C e agitare per almeno 1 h; D.7) filtrare l'intermedio 4 ed essiccare a pressione ridotta per almeno 3 h a 40-60 °C.

6. Processo secondo una qualsiasi delle rivendicazioni precedenti, in cui il passaggio D) di purificazione è ripetuto il numero di volte necessario per ottenere il livello di purezza desiderato in funzione del contenuto iniziale dell'isomero 15β,16β,17β.

7. Processo secondo la rivendicazione 6, in cui detto livello di purezza corrisponde a un contenuto dell'isomero 15β,16β,17β ≤ 0.15%.

8. Processo secondo una qualsiasi delle rivendicazioni precedenti, in cui la reazione di idrolisi del passaggio E), da intermedio 5 a Estetrolo, è condotta nelle seguenti condizioni: – uso di carbonato di sodio, carbonato di potassio o carbonato di litio come base in un solvente scelto tra alcoli alifatici C1-C6, lineari o ramificati, o una loro miscela; – tempo di reazione di almeno 3 ore; – temperatura di reazione compresa tra 10 e 40 °C.

9. Processo secondo una qualsiasi delle rivendicazioni precedenti, in cui nel passaggio F) l'Estetrolo è trasformato in Estetrolo monoidrato con la seguente sequenza di operazioni: F.1) disciogliere l'Estetrolo in un solvente organico miscibile con l'acqua; F.2) evaporare sotto vuoto il solvente organico fino a piccolo volume; F.3) aggiungere alcol isopropilico „IPA“, riscaldando a 50-60 °C, ed evaporare sotto vuoto il solvente organico fino a piccolo volume; F.4) aggiungere alcol isopropilico e riscaldare a riflusso fino ad ottenere una completa dissoluzione; F.5) raffreddare la soluzione a 70-75 °C; F.6) aggiungere acqua ed agitare a 60 < T < 70 °C; F.7) eliminare IPA per distillazione a pressione ridotta a 55 < T < 65 °C ottenendo una sospensione; F.8) raffreddare la sospensione a 0 < T < 5 °C; F.9) agitare a 0 < T < 5 °C per almeno 30 minuti; F.10) filtrare il solido ed essiccare a 30 < T < 50 °C per almeno 16 h a pressione ridotta.

10. Processo secondo la rivendicazione 9, in cui la soluzione dell'operazione F.1) è riscaldata a riflusso fino al raggiungimento della completa dissoluzione.

11. Processo secondo la rivendicazione 10, in cui detta soluzione è trattata con uno scavenger a base di gel di silice funzionalizzata per eliminare il contenuto residuo di palladio.